KR20210134890A - 올리고사카라이드 제제 및 조성물 - Google Patents

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KR20210134890A
KR20210134890A KR1020217017150A KR20217017150A KR20210134890A KR 20210134890 A KR20210134890 A KR 20210134890A KR 1020217017150 A KR1020217017150 A KR 1020217017150A KR 20217017150 A KR20217017150 A KR 20217017150A KR 20210134890 A KR20210134890 A KR 20210134890A
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oligosaccharide
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존 엠 제레미아
울리히 횔러
이안 탐부리니
마누엘라 바우어
아나스타샤 브이 리우보미로브
에스텔 카네트-마르티네즈
크리스토퍼 매튜 리우
리사 안 라프라데
기슬라인 스힌스
맥스웰 비 헥트
루디거 하인즈
마델린 하트만
미첼 타일러 안탈렉
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미도리 유에스에이 인코퍼레이티드
디에스엠 아이피 어셋츠 비.브이.
칼레이도 바이오사이언시즈, 인크.
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Abstract

본 발명은 동물 사료와 같은 영양 조성물, 및 기술된 올리고사카라이드 제제의 제조 방법에 사용하는 데 적합한 올리고사카라이드 제제에 관한 것이다. 본 발명은 또한 올리고사카라이드 제제를 포함하는 영양 조성물에 관한 것이다. 개시된 올리고사카라이드 제제는, 적어도 부분적으로, 이의 프리바이오틱 유용성, 및 영양 조성물의 개시된 올리고사카라이드 제제의 존재 및 함량을 검출하고/거나 측정하는 데 사용될 수 있는 무수-아단위-함유 올리고사카라이드의 존재에 기인하여, 동물 사료로서 이로울 수 있다.

Description

올리고사카라이드 제제 및 조성물
관련 출원
본원은 둘 다 2018년 11월 8일자 출원된 미국 가출원 제62/757,233호 및 미국 가출원 제62/757,486호(이들 각각의 개시내용은 이들의 전문이 본원에 참조로 혼입됨)를 우선권 주장한다.
올리고사카라이드는 다양한 중합도를 갖는 탄수화물의 이종 기이다. 올리고사카라이드 조성물은, 예컨대, 유즙에서 천연적으로 생산될 수 있거나, 효소 또는 화학적 공정을 통해 합성될 수 있다. 제조 방법에 따라서, 생성된 올리고사카라이드 조성물은 상이한 화학적 및/또는 물리적 특성을 가질 수 있다. 장쇄 올리고사카라이드 및 폴리사카라이드의 효소적 가수분해는 온화한 반응 조건 하에 특정 분열을 통해 올리고사카라이드를 생산할 수 있다. 그러나, 산업적인 방법에서 효소의 사용은 이의 열 안정성에 의해 제한되고, 효소적 방법은 가금류, 돼지, 및 다른 가축에 의해 소비될 때 대사 문제를 야기하는 분해 부산물을 생성할 수 있다. 반면에, 장쇄 올리고사카라이드 및 폴리사카라이드의 화학적 가수분해는 격렬한 반응 조건을 필요로 할 수 있고, 화학적 가수분해 공정을 통해 생산된 올리고사카라이드의 화학적 및/또는 물리적 특성을 제어하기 어렵다. 따라서, 바람직한 특성을 갖는 올리고사카라이드 조성물의 제조를 위한 요구가 존재한다.
일반적으로 모노사카라이드, 올리고사카라이드, 폴리사카라이드, 작용화된 올리고사카라이드 또는 이들의 조합을 포함할 수 있는 올리고사카라이드 제제는 동물 사료와 같은 영양 조성물에서 첨가제로서 사용된다. 올리고사카라이드 제제의 첨가는 동물의 건강 및 성능을 개선할 수 있다. 그러나, 영양 조성물이 올리고사카라이드 제제와 구조적 유사성을 갖는 다른 탄수화물 공급원을 통상적으로 함유하므로, 영양 조성물 중 올리고사카라이드 제제를 검출하거나 정량분석하는 것은 도전이다. 따라서, 영양 조성물 중 올리고사카라이드 제제를 선택적으로 검출하거나 정량분석하는 방법에 대한 요구가 존재한다.
무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함하는 합성 올리고사카라이드 제제가 본원에 제공된다. 개시된 올리고사카라이드 제제는, 예컨대, 이의 프리바이오틱 유용성 및 무수-아단위-함유 올리고사카라이드의 존재에 기인하여 동물 사료용 영양 조성물 중 첨가제로서 이로울 수 있고, 동물 영양 조성물 중 개시된 올리고사카라이드 제제의 존재 및 함량을 검출 및/또는 측정하는 데 사용될 수 있다. 따라서, 기술된 올리고사카라이드 제제를 포함하는 동물 영양 조성물이 본원에 제공되고, 영양 조성물 중 올리고사카라이드 제제의 존재 및 함량은, 예컨대, 무수-아단위-함유 올리고사카라이드, 예컨대 무수-아단위-함유 모노사카라이드 및/또는 무수-아단위-함유 다이사카라이드에 의해 검출되거나 측정될 수 있다. 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함하는 올리고사카라이드 제제의 제조 방법이 본원에 추가로 개시된다. 일부 양태에서, 상기 제조 방법은 당 중합 및/또는 축합 반응 중에 수함량, 반응 시간, 및 반응 온도를 제어하는 단계를 포함한다.
한 양상에서, 각각 1 내지 n의 별개의 중합도를 갖는 올리고사카라이드의 적어도 n개의 분획(DP1 내지 DPn 분획)을 포함하는 합성 올리고사카라이드 제제가 본원에 개시되고, 이때 n은 3 초과의 정수이고; DP1 및 DP2 분획은 각각 독립적으로 약 0.5 내지 약 15%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(질량 분광법에 의해 측정된 상대적 빈도를 기준으로 함). 한 양상에서, 각각 1 내지 n의 별개의 중합도를 갖는 올리고사카라이드의 적어도 n개의 분획(DP1 내지 DPn 분획)을 포함하는 합성 올리고사카라이드 제제가 본원에 개시되고, 이때 n은 3 초과의 정수이고; DP1 및 DP2 분획은 각각 독립적으로 약 0.1 내지 약 15%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(질량 분광법에 의해 측정된 상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 5개, 10개, 20개 또는 30개 이상의 DP 분획 중 올리고사카라이드의 상대적 빈도는 중합도에 따라 단조 감소된다. 일부 양태에서, 각각의 n개의 분획 중 올리고사카라이드의 상대적 빈도는 중합도에 따라 단조 감소된다. 일부 양태에서, n은 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100 이상이다. 일부 양태에서, DP2 분획은 12% 미만, 11% 미만, 10% 미만, 9% 미만, 8% 미만, 7% 미만, 6% 미만, 5% 미만, 4% 미만, 3% 미만, 2% 미만 또는 1% 미만의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, DP2 분획은 약 5 내지 약 10%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, DP2 분획은 약 1 내지 약 10%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, DP2 분획은 약 0.1 내지 약 15%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, DP2 분획은 약 2 내지 약 12%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, DP1 분획은 12% 미만, 11% 미만, 10% 미만, 9% 미만, 8% 미만, 7% 미만, 6% 미만, 5% 미만, 4% 미만, 3% 미만, 2% 미만 또는 1% 미만의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, DP1 분획은 약 2 내지 약 12%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, DP1 분획은 약 1 내지 약 10%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, DP1 분획은 약 0.1 내지 약 15%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, DP1 분획은 약 5 내지 약 10%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, DP3 분획은 15% 미만, 12% 미만, 11% 미만, 10% 미만, 9% 미만, 8% 미만, 7% 미만, 6% 미만, 5% 미만, 4% 미만, 3% 미만, 2% 미만 또는 1% 미만의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, DP3 분획은 약 2 내지 약 12%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, DP3 분획은 약 1 내지 약 10%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, DP3 분획은 약 0.1 내지 약 15%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, DP3 분획은 약 5 내지 약 10%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 15% 미만, 14% 미만, 13% 미만, 12% 미만, 11% 미만, 10% 미만, 9% 미만, 8% 미만, 7% 미만, 6% 미만, 5% 미만, 4% 미만, 3% 미만, 2% 미만 또는 1% 미만의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 약 1 내지 약 10%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 약 0.1 또는 0.5% 내지 약 10 또는 15%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 약 2 내지 약 12%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 약 5 내지 약 10%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 올리고사카라이드의 적어도 n개의 분획의 각각의 분획은 15% 미만, 14% 미만, 13% 미만, 12% 미만, 11% 미만, 10% 미만, 9% 미만, 8% 미만, 7% 미만, 6% 미만, 5% 미만, 4% 미만, 3% 미만, 2% 미만 또는 1% 미만의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, DP2 분획은 0.1% 초과, 0.5% 초과, 0.6% 초과, 0.8% 초과, 1.0% 초과, 1.5% 초과, 2% 초과, 3% 초과, 4% 초과, 5% 초과, 6% 초과, 7% 초과, 8% 초과, 9% 초과, 10% 초과, 11% 초과 또는 12% 초과의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, DP1 분획은 0.1% 초과, 0.5% 초과, 0.6% 초과, 0.8% 초과, 1.0% 초과, 1.5% 초과, 2% 초과, 3% 초과, 4% 초과, 5% 초과, 6% 초과, 7% 초과, 8% 초과, 9% 초과, 10% 초과, 11% 초과 또는 12% 초과의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, DP3 분획은 0.1% 초과, 0.5% 초과, 0.6% 초과, 0.8% 초과, 1.0% 초과, 1.5% 초과, 2% 초과, 3% 초과, 4% 초과, 5% 초과, 6% 초과, 7% 초과, 8% 초과, 9% 초과, 10% 초과, 11% 초과 또는 12% 초과의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 0.6% 초과, 0.8% 초과, 1.0% 초과, 1.5% 초과, 2% 초과, 3% 초과, 4% 초과, 5% 초과, 6% 초과, 7% 초과, 8% 초과, 9% 초과, 10% 초과, 11% 초과 또는 12% 초과의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 올리고사카라이드의 적어도 n개의 분획의 각각의 분획은 0.1% 초과, 0.5% 초과, 0.6% 초과, 0.8% 초과, 1.0% 초과, 1.5% 초과, 2% 초과, 3% 초과, 4% 초과, 5% 초과, 6% 초과, 7% 초과, 8% 초과, 9% 초과, 10% 초과, 11% 초과 또는 12% 초과의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 무수-아단위-함유 올리고사카라이드의 90% 초과는 단지 하나의 무수-아단위를 갖는다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 액체 크로마토그래피에 의해 측정된 약 1 내지 약 40 중량%의 DP1 분획 함량을 갖는다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 액체 크로마토그래피에 의해 측정된 약 1 내지 약 35 중량%의 DP2 분획 함량을 갖는다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 액체 크로마토그래피에 의해 측정된 약 1 내지 약 30 중량%의 DP3 분획 함량을 갖는다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 액체 크로마토그래피에 의해 측정된 약 0.1 내지 약 20 중량%의 DP4 분획 함량을 갖는다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 액체 크로마토그래피에 의해 측정된 약 0.1 내지 약 15 중량%의 DP5 분획 함량을 갖는다. 일부 양태에서, DP1 분획에 대한 DP2 분획의 비는 약 0.02 내지 약 0.40이다(액체 크로마토그래피에 의해 측정된 중량을 기준으로 함). 일부 양태에서, DP2 분획에 대한 DP3 분획의 비는 약 0.01 내지 약 0.30이다(액체 크로마토그래피에 의해 측정된 중량을 기준으로 함). 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제 중 DP1 및 DP2 분획의 응집체 함량은 액체 크로마토그래피에 의해 측정된 50 중량% 미만, 40 중량% 미만 또는 30 중량% 미만이다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 103개 이상, 104개 이상, 105개 이상, 106개 이상 또는 109개 이상의 상이한 올리고사카라이드 종을 포함한다. 일부 양태에서, 2개 이상의 독립적인 올리고사카라이드는 상이한 무수-아단위를 포함한다. 일부 양태에서, 각각의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드는 모노사카라이드의 열적 탈수의 생성물인 하나 이상의 무수-아단위를 포함한다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 무수-글루코스, 무수-갈락토스, 무수-만노스, 무수-알로스, 무수-알트로스, 무수-굴로스, 무수-인도스, 무수-탈로스, 무수-프럭토스, 무수-리보스, 무수-아라비노스, 무수-람노스, 무수-릭소스 및 무수-자일로스로부터 선택되는 하나 이상의 무수-아단위를 포함한다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 하나 이상의 무수-글루코스, 무수-갈락토스, 무수-만노스 또는 무수-프럭토스 아단위를 포함한다. 일부 양태에서, DP1 분획은 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 또는 1,6-무수-β-D-글루코피라노스 무수-아단위를 포함한다. 일부 양태에서, DP1 분획은 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 및 1,6-무수-β-D-글루코피라노스 무수-아단위를 둘 다 포함한다. 일부 양태에서, 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 대 1,6-무수-β-D-글루코피라노스의 비는 올리고사카라이드 제제에서 약 10:1 내지 1:10, 약 9:1 내지 약 1:10, 약 8:1 내지 약 1:10, 약 7:1 내지 약 1:10, 약 6:1 내지 약 1:10, 약 5:1 내지 약 1:10, 약 4:1 내지 약 1:10, 약 3:1 내지 약 1:10, 약 2:1 내지 약 1:10, 약 10:1 내지 약 1:9, 약 10:1 내지 약 1:8, 약 10:1 내지 약 1:7, 약 10:1 내지 약 1:6, 약 10:1 내지 약 1:5, 약 10:1 내지 약 1:4, 약 10:1 내지 약 1:3, 약 10:1 내지 약 1:2, 또는 약 1:1 내지 약 3:1이다. 일부 양태에서, 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 대 1,6-무수-β-D-글루코피라노스의 비는 올리고사카라이드 제제에서 약 10:1, 약 9:1, 약 8:1, 약 7:1, 약 6:1, 약 5:1, 약 4:1, 약 3:1, 약 2:1, 약 1:1, 약 1:2, 약 1:3, 약 1:4, 약 1:5, 약 1:6, 약 1:7, 약 1:8, 약 1:9 또는 약 1:10이다. 일부 양태에서, 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 대 1,6-무수-β-D-글루코피라노스의 비는 올리고사카라이드 제제에서 약 2:1이다. 일부 양태에서, DP2 분획은 5종 이상의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다. 일부 양태에서, DP2 분획은 약 5 내지 10종의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다. 일부 양태에서, DP2 분획은 약 2 내지 20개 종의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다. 일부 양태에서, DP2 분획은 셀로비오산을 HPLC-MS에 의해 측정된 검출가능한 수준으로 포함하지 않는다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 하나 이상의 당 카라멜화 생성물을 포함한다. 일부 양태에서, 당 카라멜화 생성물은 메탄올; 에탄올; 퓨란; 메틸 글리옥살; 2-메틸 퓨란; 비닐 아세테이트; 글리콜알데하이드; 아세트산; 아세톨; 퓨르퓨르알; 2-퓨란메탄올; 3-퓨란메탄올; 2-하이드록시 사이클로펜트-2-엔-1-온; 5-메틸 퓨르퓨르알; 2(5H)-퓨란온; 2 메틸 사이클로펜텐올론; 레보글루코센온; 고리 하이드록실 락톤; 1,4,3,6-2무수-α-D-글루코피라노스; 2무수 글루코피라노스; 및 5-하이드록시 메틸 퓨르퓨르알(5-hmf)으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 양태에서, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 99% 초과의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드는 쇄-말단 무수-아단위를 포함한다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 고-성능 액체 크로마토그래피(HPLC)에 의해 측정된 약 300 내지 약 5,000 g/mol, 약 500 내지 약 5,000 g/mol, 약 700 내지 약 5,000 g/mol, 약 500 내지 약 2,000 g/mol, 약 700 내지 약 2,000 g/mol, 약 700 내지 약 1,500 g/mol, 약 300 내지 약 1,500 g/mol, 약 300 내지 약 2,000 g/mol, 약 400 내지 약 1,300 g/mol, 약 400 내지 약 1,200 g/mol, 약 400 내지 약 1,100 g/mol, 약 500 내지 약 1,300 g/mol, 약 500 내지 약 1,200 g/mol, 약 500 내지 약 1,100 g/mol, 약 600 내지 약 1,300 g/mol, 약 600 내지 약 1,200 g/mol, 또는 약 600 내지 약 1,100 g/mol의 중량 평균 분자량을 갖는다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 HPLC에 의해 측정된 약 300 내지 약 2,500 g/mol의 중량 평균 분자량을 갖는다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 HPLC에 의해 측정된 약 500 내지 약 2,000 g/mol의 중량 평균 분자량을 갖는다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 HPLC에 의해 측정된 약 500 내지 약 1,500 g/mol의 중량 평균 분자량을 갖는다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 HPLC에 의해 측정된 약 300 내지 약 5,000 g/mol, 약 500 내지 약 5,000 g/mol, 약 700 내지 약 5,000 g/mol, 약 500 내지 약 2,000 g/mol, 약 700 내지 약 2,000 g/mol, 약 700 내지 약 1,500 g/mol, 약 300 내지 약 1,500 g/mol, 약 300 내지 약 2,000 g/mol, 약 400 내지 약 1,000 g/mol, 약 400 내지 약 900 g/mol, 약 400 내지 약 800 g/mol, 약 500 내지 약 900 g/mol, 또는 약 500 내지 약 800 g/mol의 수 평균 분자량을 갖는다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 HPLC에 의해 측정된 약 300 내지 약 2,500 g/mol의 수 평균 분자량을 갖는다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 HPLC에 의해 측정된 약 500 내지 약 2,000 g/mol의 수 평균 분자량을 갖는다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 HPLC에 의해 측정된 약 500 내지 약 1,500 g/mol의 수 평균 분자량을 갖는다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 약 2,000 내지 약 2,800 g/mol, 약 2,100 내지 약 2,700 g/mol, 약 2,200 내지 약 2,600 g/mol, 약 2,300 내지 약 2,500 g/mol, 또는 약 2,320 내지 약 2,420 g/mol의 중량 평균 분자량을 갖는다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 약 1,000 내지 약 2,000 g/mol, 약 1,100 내지 약 1,900 g/mol, 약 1,200 내지 약 1,800 g/mol, 약 1,300 내지 약 1,700 g/mol, 약 1,400 내지 약 1,600 g/mol, 또는 약 1,450 내지 약 1,550 g/mol의 수 평균 분자량을 갖는다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 아라비노스, 릭소스, 리보스, 자일로스, 알로스, 알트로스, 만노스, 굴로스, 이도스, 갈락토스, 탈로스, 프시코스, 프럭토스, 소르보스, 및 타가토스로 이루어진 군으로부터 선택되는 모노사카라이드 아단위를 포함한다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 자일로스, 만노스, 갈락토스 및 프럭토스로부터 선택되는 모노사카라이드 아단위를 포함한다.
한 양상에서, 본원에 개시된 올리고사카라이드 제제를 포함하는 영양 조성물이 본원에 제공된다. 일부 양태에서, 영양 조성물은 베이스 영양 조성물을 포함한다. 일부 양태에서, 영양 조성물은 동물 사료 조성물이다.
한 양상에서, 베이스 영양 조성물 및 본원에 개시된 올리고사카라이드 제제를 포함하는 영양 조성물을 동물에게 투여함을 포함하는 방법이 본원에 제공된다.
각각 1 내지 n의 별개의 중합도를 갖는 올리고사카라이드의 적어도 n개의 분획(DP1 내지 DPn 분획)을 포함하는 합성 올리고사카라이드 제제가 본원에 제공되고, 이때 n은 2 초과의 정수이고; 각각의 분획은 질량 분광계에 의해 측정된 상대적 빈도를 기준으로 1 내지 90%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다. 각각 1 내지 n의 별개의 중합도를 갖는 올리고사카라이드의 적어도 n개의 분획(DP1 내지 DPn 분획)을 포함하는 합성 올리고사카라이드 제제가 본원에 제공되고, 이때 n은 3 초과의 정수이고; 각각의 분획은 0.1 내지 15%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(질량 분광법에 의해 측정된 상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 5개, 10개, 20개 또는 30개 이상의 DP 분획 중 올리고사카라이드의 상대적 빈도는 중합도에 따라 단조 감소된다. 일부 양태에서, 각각의 n개의 분획 중 올리고사카라이드의 상대적 빈도는 중합도에 따라 단조 감소된다. 일부 양태에서, n은 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100 이상이다. 일부 양태에서, 하나 이상의 분획은 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3% 또는 2% 미만의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3% 또는 2% 미만의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 각각의 분획은 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3% 또는 2% 미만의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 하나 이상의 분획은 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3% 또는 2% 미만의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3% 또는 2% 미만의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 각각의 분획은 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3% 또는 2% 미만의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 하나 이상의 분획은 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% 또는 80% 초과의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% 또는 80% 초과의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 각각의 분획은 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% 또는 80% 초과의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 무수-아단위-함유 올리고사카라이드의 99%, 95%, 90%, 85%, 80%, 75%, 70%, 65%, 60%, 55%, 50%, 45%, 40%, 35% 또는 30% 초과는 단지 하나의 무수-아단위를 갖는다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 상대적 빈도를 기준으로 1 내지 40%의 DP1 분획 함량을 갖는다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 상대적 빈도를 기준으로 1 내지 35%의 DP2 분획 함량을 갖는다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 상대적 빈도를 기준으로 1 내지 30%의 DP3 분획 함량을 갖는다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 상대적 빈도를 기준으로 0.1 내지 20%의 DP4 분획 함량을 갖는다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 상대적 빈도를 기준으로 0.1 내지 15%의 DP5 분획 함량을 갖는다. 일부 양태에서, DP1 분획에 대한 DP2 분획의 비는 상대적 빈도를 기준으로 0.02 내지 0.40이다. 일부 양태에서, DP2 분획에 대한 DP3 분획의 비는 상대적 빈도를 기준으로 0.01 내지 0.30이다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제 중 DP1 및 DP2 분획의 응집체 함량은 상대적 빈도를 기준으로 50%, 30% 또는 10% 미만이다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 103개, 104개, 105개, 106개 또는 109개 이상의 상이한 올리고사카라이드 종을 포함한다. 일부 양태에서, 2개 이상의 독립적인 올리고사카라이드는 상이한 무수-아단위를 포함한다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 모노사카라이드의 열적 탈수의 생성물인 하나 이상의 무수-아단위를 포함한다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 하나 이상의 무수-글루코스, 무수-갈락토스, 무수-만노스, 무수-알로스, 무수-알트로스, 무수-굴로스, 무수-인도스, 무수-탈로스, 무수-프럭토스, 무수-리보스, 무수-아라비노스, 무수-람노스, 무수-릭소스 또는 무수-자일로스 아단위를 포함한다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 하나 이상의 무수-글루코스, 무수-갈락토스, 무수-만노스 또는 무수-프럭토스 아단위를 포함한다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 하나 이상의 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 또는 1,6-무수-β-D-글루코피라노스 아단위를 포함한다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 및 1,6-무수-β-D-글루코피라노스 무수-아단위를 둘 다 포함한다. 일부 양태에서, 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 대 1,6-무수-β-D-글루코피라노스의 비는 올리고사카라이드 제제에서 약 10:1 내지 1:10, 9:1 내지 1:10, 8:1 내지 1:10, 7:1 내지 1:10, 6:1 내지 1:10, 5:1 내지 1:10, 4:1 내지 1:10, 3:1 내지 1:10, 2:1 내지 1:10, 10:1 내지 1:9, 10:1 내지 1:8, 10:1 내지 1:7, 10:1 내지 1:6, 10:1 내지 1:5, 10:1 내지 1:4, 10:1 내지 1:3, 10:1 내지 1:2, 또는 1:1 내지 3:1이다. 일부 양태에서, 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 대 1,6-무수-β-D-글루코피라노스의 비는 올리고사카라이드 제제에서 약 10:1, 9:1, 8:1, 7:1, 6:1, 5:1, 4:1, 3:1, 2:1, 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9, 또는 1:10이다. 일부 양태에서, 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 대 1,6-무수-β-D-글루코피라노스의 비는 올리고사카라이드 제제에서 약 2:1이다. 일부 양태에서, 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 대 1,6-무수-β-D-글루코피라노스의 비는 각각의 분획에서 약 10:1 내지 1:10, 9:1 내지 1:10, 8:1 내지 1:10, 7:1 내지 1:10, 6:1 내지 1:10, 5:1 내지 1:10, 4:1 내지 1:10, 3:1 내지 1:10, 2:1 내지 1:10, 10:1 내지 1:9, 10:1 내지 1:8, 10:1 내지 1:7, 10:1 내지 1:6, 10:1 내지 1:5, 10:1 내지 1:4, 10:1 내지 1:3, 10:1 내지 1:2, 또는 1:1 내지 3:1이다. 일부 양태에서, 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 대 1,6-무수-β-D-글루코피라노스의 비는 각각의 분획에서 약 10:1, 9:1, 8:1, 7:1, 6:1, 5:1, 4:1, 3:1, 2:1, 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9, 또는 1:10이다. 일부 양태에서, 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 대 1,6-무수-β-D-글루코피라노스의 비는 각각의 분획에서 약 2:1이다. 일부 양태에서, 1%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90% 이상의 무수-아단위는 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 및 1,6-무수-β-D-글루코피라노스로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 당 카라멜화 생성물인 하나 이상의 무수-아단위를 포함한다. 일부 양태에서, 당 카라멜화 생성물은 메탄올; 에탄올; 퓨란; 메틸 글리옥살; 2-메틸 퓨란; 비닐 아세테이트; 글리콜알데하이드; 아세트산; 아세톨; 퓨르퓨르알; 2-퓨란메탄올; 3-퓨란메탄올; 2-하이드록시 사이클로펜트-2-엔-1-온; 5-메틸 퓨르퓨르알; 2(5H)-퓨란온; 2 메틸 사이클로펜텐올론; 레보글루코센온; 고리 하이드록실 락톤; 1,4,3,6-2무수-α-D-글루코피라노스; 2무수 글루코피라노스; 및 5-하이드록시 메틸 퓨르퓨르알(5-hmf)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 양태에서, 제제 중 약 0.1 내지 5%, 0.1 내지 2% 또는 0.1 내지 1%의 무수-아단위는 카라멜화 생성물이다. 일부 양태에서, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 99% 초과의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드는 쇄-말단 무수-아단위를 포함한다. 일부 양태에서, 제제의 중량 평균 분자량은 약 300 내지 5,000 g/mol, 500 내지 5,000 g/mol, 700 내지 5,000 g/mol, 500 내지 2,000 g/mol, 700 내지 2,000 g/mol, 700 내지 1,500 g/mol, 300 내지 1,500 g/mol, 300 내지 2,000 g/mol, 400 내지 1,300 g/mol, 400 내지 1,200 g/mol, 400 내지 1,100 g/mol, 500 내지 1,300 g/mol, 500 내지 1,200 g/mol, 500 내지 1,100 g/mol, 600 내지 1,300 g/mol, 600 내지 1,200 g/mol, 또는 600 내지 1,100 g/mol이다. 일부 양태에서, 제제의 수 평균 분자량은 약 300 내지 5,000 g/mol, 500 내지 5,000 g/mol, 700 내지 5,000 g/mol, 500 내지 2,000 g/mol, 700 내지 2,000 g/mol, 700 내지 1,500 g/mol, 300 내지 1,500 g/mol, 300 내지 2,000 g/mol, 400 내지 1,000 g/mol, 400 내지 900 g/mol, 400 내지 800 g/mol, 500 내지 900 g/mol, 또는 500 내지 800 g/mol이다. 일부 양태에서, 제제의 중량 평균 분자량은 약 2,000 내지 2,800 g/mol, 2,100 내지 2,700 g/mol, 2,200 내지 2,600 g/mol, 2,300 내지 2,500 g/mol, 또는 2,320 내지 2,420 g/mol이다. 일부 양태에서, 제제의 수 평균 분자량은 약 1,000 내지 2,000 g/mol, 1,100 내지 1,900 g/mol, 1,200 내지 1,800 g/mol, 1,300 내지 1,700 g/mol, 1,400 내지 1,600 g/mol, 또는 1,450 내지 1,550 g/mol이다.
본원에 기술된 올리고사카라이드 제제를 포함하는 영양 조성물이 본원에 제공된다. 일부 양태에서, 영양 조성물은 베이스 영양 조성물을 추가로 포함한다. 베이스 영양 조성물 및 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제를 포함하는 영양 조성물을 동물에게 투여함을 포함하는 방법이 본원에 추가로 제공된다. 하나 이상의 사료용 당 및 촉매를 포함하는 수성 조성물을 중합을 유도하기에 충분한 시간 동안 소정 온도까지 가열하는 단계를 포함하는, 올리고사카라이드 제제의 제조 방법이 본원에 제공되고, 이때 촉매는 에탄다이설폰산; 에탄설폰산; 이세티온산; 호모시스테인산; HEPBS(N-(2-하이드록시에틸)피페라진-N'-(4-부탄설폰산)); HEPES(4-(2-하이드록시에틸)-1-피페라진에탄설폰산); 2-하이드록시-3-모르폴리노프로판설폰산; 2-(N-모르폴리노)에탄설폰산; 메탄설폰산; 메타니아자이드; 나프탈렌-1-설폰산; 나프탈렌-2-설폰산; 퍼플루오로부탄설폰산; 6-설포퀴노보스; 트라이플산; 2-아미노에탄설폰산; 벤조산; 클로로아세트산; 트라이플루오로아세트산; 카프로산; 에난트산; 카프릴산; 펠라르곤산; 라우르산; 팔미트산; 스테아르산; 아라키드산; 아스파르트산; 글루탐산; 세린; 트레오닌; 글루타민; 시스테인; 글리신; 프롤린; 알라닌; 발린; 이소류신; 류신; 메티오닌; 페닐알라닌; 티로신; 및 트립토판으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 올리고사카라이드 제제는 각각 1(DP1 분획) 내지 n(DPn 분획)의 별개의 중합도를 갖는 적어도 n개의 분획의 올리고사카라이드를 포함하고, 이때 n은 2 이상의 정수이다. 일부 양태에서, n은 3 이상의 정수이다. 일부 양태에서, n은 1 내지 100의 정수, 예컨대 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 40, 또는 50이다. 일부 양태에서, 상기 방법은 수성 조성물을 수성 조성물이 평형에 도달하기에 충분한 시간 동안 가열하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 상기 방법은 수성 조성물이 평형(15%, 10% 또는 5% 미만의 일련의 Km의 상대 표준 편차에 의해 측정됨)에 도달하기에 충분한 시간 동안 가열하는 단계를 포함하고, 이때
Figure pct00001
이고, m은 1 초과 내지 n 이하의 정수이고, 일련의 Km은 5개 이상의 Km 수를 포함하고, [H2O]는 물의 몰 농도를 나타내고, [DP1], [DPm-1] 및 [DPm]은 각각 DP1, DPm-1 및 DPm 분획에서 올리고사카라이드의 몰 농도를 나타낸다. 일부 양태에서, 상기 방법은 수성 조성물을 수성 조성물이 평형(1시간의 기간에 걸쳐 15% 미만의 수성 조성물의 중량 평균 분자량의 변화에 의해 측정됨)에 도달하기에 충분한 시간 동안 가열하는 단계를 포함한다.
하나 이상의 사료용 당 및 촉매를 포함하는 수성 조성물을 중합을 유도하고 수성 조성물이 평형에 도달하기에 충분한 시간 동안 이에 충분한 온도까지 가열하는 단계를 포함하는, 올리고사카라이드 제제의 제조 방법이 본원에 제공되고, 이때 올리고사카라이드 제제는 각각 1(DP1 분획) 내지 n(DPn 분획)의 별개의 중합도를 갖는 적어도 n개의 분획의 올리고사카라이드를 포함하고, 이때 n은 2 이상의 정수이다. 일부 양태에서, n은 3 이상의 정수이다. 일부 양태에서, n은 1 내지 100의 정수, 예컨대 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 40, 또는 50이다. 일부 양태에서, 상기 방법은 수성 조성물을 수성 조성물이 평형(1시간의 기간에 걸쳐 15% 미만의 수성 조성물의 중량 평균 분자량의 변화에 의해 측정됨)에 도달하기에 충분한 시간 동안 가열하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 촉매는 에탄다이설폰산; 에탄설폰산; 이세티온산; 호모시스테인산; HEPBS(N-(2-하이드록시에틸)피페라진-N'-(4-부탄설폰산)); HEPES(4-(2-하이드록시에틸)-1-피페라진에탄설폰산); 2-하이드록시-3-모르폴리노프로판설폰산; 2-(N-모르폴리노)에탄설폰산; 메탄설폰산; 메타니아자이드; 나프탈렌-1-설폰산; 나프탈렌-2-설폰산; 퍼플루오로부탄설폰산; 6-설포퀴노보스; 트라이플산; 2-아미노에탄설폰산; 벤조산; 클로로아세트산; 트라이플루오로아세트산; 카프로산; 에난트산; 카프릴산; 펠라르곤산; 라우르산; 팔미트산; 스테아르산; 아라키드산; 아스파르트산; 글루탐산; 세린; 트레오닌; 글루타민; 시스테인; 글리신; 프롤린; 알라닌; 발린; 이소류신; 류신; 메티오닌; 페닐알라닌; 티로신; 및 트립토판으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 양태에서, 상기 방법은 하나 이상의 사료용 당을 1 kg 초과의 양으로 포함하는 수성 조성물을 가열하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 하나 이상의 사료용 당은 모노사카라이드, 다이사카라이드, 트라이사카라이드, 테트라사카라이드, 또는 이들의 조합을 포함하고, 이때 상기 모노사카라이드, 다이사카라이드, 트라이사카라이드, 또는 테트라사카라이드는 각각 독립적으로 이들의 수화물 또는 탈수화물 형태이다. 일부 양태에서, 하나 이상의 사료용 당은 글루코스, 갈락토스, 프럭토스, 만노스 또는 이들의 임의의 조합을 포함하고, 이때 각각의 글루코스, 갈락토스, 프럭토스, 또는 만노스는 독립적으로 이의 1수화물 또는 탈수화물 형태이다. 일부 양태에서, 하나 이상의 사료용 당은 작용화되거나 개질된 당을 포함한다. 일부 양태에서, 작용화되거나 개질된 당은 아미노 당, 당 산, 당 알코올, 당 아미드, 당 에터 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 일부 양태에서, 작용화되거나 개질된 당은 글루코사민, N-아세틸글루코사민, 글루쿠론산, 갈락투론산, 글루시톨, 자일리톨, 만니톨, 소르비톨 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 일부 양태에서, 하나 이상의 사료용 당은 데옥시당을 포함한다. 일부 양태에서, 데옥시당은 푸코스, 람노스, 데옥시리보스, 푸쿨로스 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 일부 양태에서, 촉매는 하나 이상의 사료용 당의 약 0.01 내지 5%, 0.02 내지 4%, 0.03 내지 3% 또는 0.05 내지 2%의 양으로 존재한다(건조 중량을 기준으로 함). 일부 양태에서, 촉매는 하나 이상의 사료용 당의 약 1 내지 2%의 양으로 존재한다(건조 중량을 기준으로 함). 일부 양태에서, 촉매는 수성 조성물에 무수 또는 습윤 형태로 첨가된다. 일부 양태에서, 상기 방법은 물을 첨가하여 수성 조성물을 형성하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 수성 조성물은 약 2 내지 10%, 2 내지 8% 또는 4 내지 8%의 물을 포함한다(총 중량을 기준으로 함). 일부 양태에서, 수성 조성물은 약 4 내지 8%의 물을 포함한다(총 중량을 기준으로 함). 일부 양태에서, 상기 방법은 수성 조성물을 약 100 내지 200℃, 100 내지 180℃, 110 내지 170℃, 120 내지 160℃, 130 내지 150℃, 또는 135 내지 145℃의 온도로 가열하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 상기 방법은 수성 조성물을 약 135 내지 145℃의 온도로 가열하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 상기 방법은, 수성 조성물을 중합을 유도하기에 충분한 시간 동안 이에 충분한 온도까지 가열하는 동안, 수함량을 약 1 내지 20 중량%, 2 내지 10 중량%, 2 내지 8 중량% 또는 4 내지 8 중량%로 유지하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 상기 방법은 대기압 하의 증류에 의해 수함량을 유지하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 상기 방법은 수성 조성물을 수성 조성물이 약 500 내지 2,000 g/mol의 수 평균 분자량에 도달하기에 충분한 시간 동안 가열하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 상기 방법은 수성 조성물을 수성 조성물이 약 700 내지 3,000 g/mol의 중량 평균 분자량에 도달하기에 충분한 시간 동안 가열하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 중합은 중축합에 의해 달성된다. 일부 양태에서, 상기 방법은 수성 조성물이 약 9%의 물을 포함하도록 물을 제거하는 단계를 추가로 포함한다(총 중량을 기준으로 함). 일부 양태에서, 상기 방법은 희석, 탈색, 여과 또는 이들의 임의의 조합을 추가로 포함한다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제의 각각의 n 분획은 1 내지 90%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 5개, 10개, 20개 또는 30개 이상의 DP 분획 중 올리고사카라이드의 상대적 빈도는 중합도에 따라 단조 감소된다. 일부 양태에서, 각각의 n개의 분획 중 올리고사카라이드의 상대적 빈도는 중합도에 따라 단조 감소된다. 일부 양태에서, 영양 조성물은 동물 사료 조성물이다.
하나 이상의 사료용 당 및 촉매를 포함하는 수성 조성물을 중합을 유도하기에 충분한 시간 동안 이에 충분한 온도까지 가열하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조된 합성 올리고사카라이드 제제가 본원에 제공되고, 이때 촉매는 에탄다이설폰산; 에탄설폰산; 이세티온산; 호모시스테인산; HEPBS(N-(2-하이드록시에틸)피페라진-N'-(4-부탄설폰산)); HEPES(4-(2-하이드록시에틸)-1-피페라진에탄설폰산); 2-하이드록시-3-모르폴리노프로판설폰산; 2-(N-모르폴리노)에탄설폰산; 메탄설폰산; 메타니아자이드; 나프탈렌-1-설폰산; 나프탈렌-2-설폰산; 퍼플루오로부탄설폰산; 6-설포퀴노보스; 트라이플산; 2-아미노에탄설폰산; 벤조산; 클로로아세트산; 트라이플루오로아세트산; 카프로산; 에난트산; 카프릴산; 펠라르곤산; 라우르산; 팔미트산; 스테아르산; 아라키드산; 아스파르트산; 글루탐산; 세린; 트레오닌; 글루타민; 시스테인; 글리신; 프롤린; 알라닌; 발린; 이소류신; 류신; 메티오닌; 페닐알라닌; 티로신; 트립토판로 이루어진 군으로부터 선택되고, 이때 올리고사카라이드 제제는 각각 1(DP1 분획) 내지 n(DPn 분획)의 별개의 중합도를 갖는 적어도 n개의 분획의 올리고사카라이드를 포함하고, 이때 n은 2 이상의 정수이고, 각각의 분획은 약 0.1 내지 90%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(질량 분광법에 의해 측정된 상대적 빈도를 기준으로 함).
하나 이상의 사료용 당 및 촉매를 포함하는 수성 조성물 중합을 유도하고 수성 조성물이 평형에 도달하기에 충분한 시간 동안 이에 충분한 온도까지 가열하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조된 합성 올리고사카라이드 제제가 본원에 제공되고, 이때 올리고사카라이드 제제는 각각 1(DP1 분획) 내지 n(DPn 분획)의 별개의 중합도를 갖는 적어도 n개의 분획의 올리고사카라이드를 포함하고, 이때 n은 2 이상의 정수이고, 각각의 분획은 약 0.1 내지 90%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(질량 분광법에 의해 측정된 상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 각각의 분획은 약 0.1 내지 15%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, n은 3 이상의 정수이다. 일부 양태에서, n은 1 내지 100의 정수, 예컨대 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 40, 또는 50이다.
합성 올리고사카라이드 조성물의 제조 방법이 본원에 제공되고, 상기 방법은 (a) 하나 이상의 사료용 당 및 촉매를 포함하는 수성 조성물을 상기 하나 이상의 사료용 당의 중합을 유도하기에 충분한 시간 동안 소정 온도까지 가열하여, 합성 올리고사카라이드 제제의 회분을 생산하는 단계로서, 상기 회분이 1 kg 이상의 상기 합성 올리고사카라이드 제제를 포함하고; 상기 합성 올리고사카라이드 제제가 각각 1(DP1 분획) 내지 n(DPn 분획)의 별개의 중합도를 갖는 적어도 n개의 분획의 올리고사카라이드를 포함하고, n이 3 이상의 정수이고; 상기 합성 올리고사카라이드 제제의 각각의 분획이 질량 분광법에 의해 측정된 상대적 빈도를 기준으로 약 0.5 내지 약 15%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함하는, 단계; (b) 상기 합성 올리고사카라이드 제제의 상기 생산된 회분 중 상기 촉매의 수준을 측정하는 단계; (c) 상기 수준을 소정 허용 기준과 비교하는 단계; 및 (d) 상기 회분 제제의 상기 촉매의 수준이 상기 소정 허용 기준에 부합할 때만 상기 합성 올리고사카라이드 제제의 상기 회분의 적어도 일부를 제형화시키는 단계를 포함한다. 합성 올리고사카라이드 조성물의 제조 방법이 본원에 제공되고, 상기 방법은 (a) 하나 이상의 사료용 당 및 촉매를 포함하는 수성 조성물을 상기 하나 이상의 사료용 당의 중합을 유도하기에 충분한 시간 동안 소정 온도까지 가열하여, 합성 올리고사카라이드 제제의 회분을 생산하는 단계로서, 이때 상기 회분이 1 kg 이상의 상기 합성 올리고사카라이드 제제를 포함하고; 상기 합성 올리고사카라이드 제제가 각각 1(DP1 분획) 내지 n(DPn 분획)의 별개의 중합도를 갖는 적어도 n개의 분획의 올리고사카라이드를 포함하고, n이 3 이상의 정수이고; 상기 합성 올리고사카라이드 제제의 각각의 분획이 질량 분광법에 의해 측정된 상대적 빈도를 기준으로 0.5 내지 15%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함하는, 단계; (b) 상기 합성 올리고사카라이드 제제의 상기 생산된 회분 중 상기 촉매의 수준을 측정하는 단계; 및 (c) 상기 회분 제제 중 상기 촉매의 수준이 상기 회분의 0.1 중량% 이하일 때만 상기 합성 올리고사카라이드 제제의 상기 회분의 적어도 일부를 제형화시켜, 합성 올리고사카라이드 조성물을 생산하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 상기 제형화는 상기 합성 올리고사카라이드 제제의 pH를 조정하거나, 상기 합성 올리고사카라이드 제제의 분말 형태를 생산하거나, 상기 합성 올리고사카라이드 제제의 고체 형태를 생산하거나, 상기 합성 올리고사카라이드 제제를 포장하거나, 상기 합성 올리고사카라이드 제제를 표지하거나, 상기 합성 올리고사카라이드 제제를 상업적으로 출시하거나, 상기 합성 올리고사카라이드 제제를 판매 제안하거나 판매함을 포함한다. 일부 양태에서, 상기 제형화는 상기 합성 올리고사카라이드 제제의 분말 형태를 생산함을 포함한다. 일부 양태에서, 상기 분말 형태는 유리 분말 제형이다. 일부 양태에서, 상기 분말 형태는 담체-로딩된 분말 제형이다. 일부 양태에서, 상기 제형화는 상기 합성 올리고사카라이드 제제의 고체 형태를 생산함을 포함한다. 일부 양태에서, 상기 제형화는 상기 합성 올리고사카라이드 제제를 압출하여 상기 합성 올리고사카라이드 제제의 압출된 고체 형태를 생산함을 포함한다. 일부 양태에서, 상기 촉매는 (+)-캠퍼-10-설폰산; 2-피리딘설폰산; 3-피리딘설폰산; 8-하이드록시-5-퀴놀린설폰산 수화물; α-하이드록시-2-피리딘메탄설폰산; (β)-캠퍼-10-설폰산; 부틸포스폰산; 다이페닐포스핀산; 헥실포스폰산; 메틸포스폰산; 페닐포스핀산; 페닐포스폰산; tert-부틸포스폰산; SS)-VAPOL 수소포스페이트; 6-퀴놀린설폰산, 3-(1-피리디니오)-1-프로판설포네이트; 2-(2-피리딘일)에탄설폰산; 3-(2-피리딜)-5,6-다이페닐-1,2,4-트라이아진-p,p'-다이설폰산 모노나트륨 염 수화물; 1,1'-바이나프틸-2,2'-다이일-수소포스페이트; 비스(4-메톡시페닐)포스핀산; 페닐(3,5-자일일)포스핀산; L-시스테인산 1수화물; 폴리(스티렌 설폰산-코-다이비닐벤젠); 리신; 에탄다이설폰산; 에탄설폰산; 이세티온산; 호모시스테인산; HEPBS(N-(2-하이드록시에틸)피페라진-N'-(4-부탄설폰산)); HEPES(4-(2-하이드록시에틸)-1-피페라진에탄설폰산); 2-하이드록시-3-모르폴리노프로판설폰산; 2-(N-모르폴리노)에탄설폰산; 메탄설폰산; 메타니아자이드; 나프탈렌-1-설폰산; 나프탈렌-2-설폰산; 퍼플루오로부탄설폰산; 6-설포퀴노보스; 트라이플산; 2-아미노에탄설폰산; 벤조산; 클로로아세트산; 트라이플루오로아세트산; 카프로산; 에난트산; 카프릴산; 펠라르곤산; 라우르산; 팔미트산; 스테아르산; 아라키드산; 아스파르트산; 글루탐산; 세린; 트레오닌; 글루타민; 시스테인; 글리신; 프롤린; 알라닌; 발린; 이소류신; 류신; 메티오닌; 페닐알라닌; 티로신; 및 트립토판으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 양태에서, 상기 촉매는 에탄다이설폰산; 에탄설폰산; 이세티온산; 호모시스테인산; HEPBS(N-(2-하이드록시에틸)피페라진-N'-(4-부탄설폰산)); HEPES(4-(2-하이드록시에틸)-1-피페라진에탄설폰산); 2-하이드록시-3-모르폴리노프로판설폰산; 2-(N-모르폴리노)에탄설폰산; 메탄설폰산; 메타니아자이드; 나프탈렌-1-설폰산; 나프탈렌-2-설폰산; 퍼플루오로부탄설폰산; 6-설포퀴노보스; 트라이플산; 2-아미노에탄설폰산; 벤조산; 클로로아세트산; 트라이플루오로아세트산; 카프로산; 에난트산; 카프릴산; 펠라르곤산; 라우르산; 팔미트산; 스테아르산; 아라키드산; 아스파르트산; 글루탐산; 세린; 트레오닌; 글루타민; 시스테인; 글리신; 프롤린; 알라닌; 발린; 이소류신; 류신; 메티오닌; 페닐알라닌; 티로신; 및 트립토판으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 양태에서, 상기 가열은 상기 수성 조성물을 상기 수성 조성물이 평형에 도달하기에 충분한 시간 동안 가열함을 포함하고, 이때 평형은 15%, 10% 또는 5% 미만의 일련의 Km의 상대적인 표준 편차에 의해 측정되고, m은 1 초과 내지 n 이하의 정수이고, 일련의 Km은 5개 이상의 Km 수를 포함하고, [H2O]는 물의 몰 농도를 나타내고, [DP1], [DPm-1] 및 [DPm]은 각각 DP1, DPm-1, 및 DPm 분획 중 올리고사카라이드의 몰 농도를 나타낸다. 일부 양태에서, 상기 가열은 상기 수성 조성물을 30분, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 또는 10시간 이상 동안 가열함을 포함한다. 일부 양태에서, 상기 가열은 상기 수성 조성물을 6시간 이상 동안 가열함을 포함한다. 일부 양태에서, 상기 가열은 상기 수성 조성물을 10시간 이상 동안 가열함을 포함한다. 일부 양태에서, 상기 가열은 상기 수성 조성물을 1 내지 24시간, 1 내지 16시간, 1 내지 8시간, 1 내지 4시간, 1 내지 3시간, 1 내지 2시간, 2 내지 12시간, 2 내지 10시간, 2 내지 8시간, 2 내지 6시간, 2 내지 4시간, 3 내지 8시간, 3 내지 6시간, 3 내지 5시간, 3 내지 4시간, 4 내지 24시간, 4 내지 16시간, 4 내지 12시간, 4 내지 10시간, 4 내지 8시간, 4 내지 6시간, 5 내지 24시간, 5 내지 16시간, 5 내지 12시간, 5 내지 10시간, 5 내지 8시간, 5 내지 6시간, 6 내지 24시간, 6 내지 16시간, 6 내지 12시간, 6 내지 10시간, 또는 6 내지 8시간 동안 가열함을 포함한다. 일부 양태에서, 상기 가열은 상기 수성 조성물을 5 내지 12시간 동안 가열함을 포함한다. 일부 양태에서, 상기 방법은 상기 가열 중에 상기 수성 조성물의 점도, 수함량, 수 평균 분자량(MWn), 중량 평균 분자량(MWw), 무수-아단위 함량, 중합도 분포, 방출된 축합수, 반응 수함량, 용해된 총 고체 함량, 잔류 단량체 함량, pH, 밀도, 또는 색을 측정하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 상기 측정은 중합을 유도하기에 충분한 시간을 측정하는 데 사용된다. 일부 양태에서, 상기 무수-아단위 함량은 DP1 분획 또는 DP2 분획 중 함량이다. 일부 양태에서, 상기 무수-아단위 함량은 LC-MS-MS에 의해 측정된다. 일부 양태에서, 상기 수 평균 분자량(MWn)은 HPLC/GPC 크로마토그래피에 의해 측정된다. 일부 양태에서, 상기 중량 평균 분자량(MWw)은 HPLC/GPC 크로마토그래피에 의해 측정된다. 일부 양태에서, 상기 용해된 총 고체 함량은 칼 피셔 적정에 의해 측정된다. 일부 양태에서, 상기 점도는 점도계 또는 유동계에 의해 측정된다. 일부 양태에서, 상기 수함량은 증발 방법, 증류 방법 또는 화학적 반응 방법에 의해 측정된다. 일부 양태에서, 상기 화학적 반응 방법은 칼 피셔 적정이다. 일부 양태에서, 상기 수함량은 수분 분석기, IR 분광법 또는 NIR 분광법을 사용하여 측정된다. 일부 양태에서, 상기 회분은 10 kg, 100 kg, 1,000 kg, 5,000 kg, 10,000 kg, 20,000 kg, 30,000 kg, 40,000 kg, 50,000 kg 이상의 상기 합성 올리고사카라이드 제제를 포함한다. 일부 양태에서, 상기 회분은 5,000 kg 이상의 상기 합성 올리고사카라이드 제제를 포함한다. 일부 양태에서, 상기 소정 허용 기준은 상기 회분 중 상기 촉매의 소정 중량%이다. 일부 양태에서, 상기 중량%는 1 중량%, 0.9 중량%, 0.8 중량%, 0.7 중량%, 0.6 중량%, 0.5 중량%, 0.4 중량%, 0.3 중량%, 0.2 중량% 또는 0.1 중량% 미만이다. 일부 양태에서, 상기 소정 허용 기준은 상업적 출시 사양이다. 일부 양태에서, 상기 사료용 당은 작용화되거나 개질된 당을 포함한다. 일부 양태에서, 상기 작용화되거나 개질된 당은 아미노 당, 당 산, 당 아미드, 당 에터 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 일부 양태에서, 상기 작용화되거나 개질된 당은 글루코사민, N-아세틸글루코사민, 글루쿠론산, 갈락투론산 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 일부 양태에서, 상기 사료용 당은 데옥시당을 포함한다. 일부 양태에서, 데옥시당은 푸코스, 람노스, 데옥시리보스, 푸쿨로스 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 일부 양태에서, 상기 사료용 당은 글루코스, 자일로스, 갈락토스, 만노스, 말토-덱스트린, 아라비노스, 락토스, 수크로스, 트레할로스 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 일부 양태에서, 상기 가열은 2개, 3개, 4개 또는 5개 이상의 사료용 당 및 촉매를 포함하는 상기 수성 조성물을 상기 하나 이상의 사료용 당의 중합을 유도하기에 충분한 시간 동안 소정 온도까지 가열함을 포함한다. 일부 양태에서, 상기 가열은 2개 이상의 사료용 당을 포함하는 상기 수성 조성물을 가열함을 포함한다. 일부 양태에서, 각각의 상기 2개 이상의 사료용 당은 글루코스, 자일로스, 갈락토스, 만노스, 말토-덱스트린, 아라비노스, 락토스, 수크로스, 트레할로스 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 일부 양태에서, 각각의 상기 2개, 3개, 4개 또는 5개 이상의 사료용 당은 글루코스, 자일로스, 갈락토스, 만노스, 말토-덱스트린, 아라비노스, 락토스, 수크로스, 트레할로스 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 일부 양태에서, 상기 방법은 대기압 하의 증류에 의해 수함량을 유지하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 상기 방법은 물의 첨가에 의해 수함량을 유지하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 상기 방법은 반응 전후의 평균 수함량에 의해 측정된 약 2%, 3%, 4% 또는 5% 내지 약 6%, 7%, 8% 또는 9%의 범위 내에 수함량을 유지하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 상기 방법은 반응 전후의 평균 수함량에 의해 측정된 약 2 내지 약 8%의 범위 내에 수함량을 유지하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 상기 올리고사카라이드 제제의 5개, 10개, 20개 또는 30개 이상의 DP 분획 중 올리고사카라이드의 상대적 빈도는 중합도에 따라 단조 감소된다. 일부 양태에서, 상기 올리고사카라이드 제제의 각각의 n개의 분획 중 올리고사카라이드의 상대적 빈도는 중합도에 따라 단조 감소된다. 일부 양태에서, n은 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100 이상이다. 일부 양태에서, 상기 올리고사카라이드 제제의 하나 이상의 분획은 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3% 또는 2% 미만의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 상기 올리고사카라이드 제제의 하나 이상의 분획은 약 80 내지 0.5%, 80 내지 1%, 80 내지 2%, 80 내지 3%, 80 내지 4%, 80 내지 5%, 80 내지 10%, 80 내지 20%, 80 내지 30%, 80 내지 40%, 80 내지 50%, 60 내지 1%, 60 내지 2%, 60 내지 3%, 60 내지 4%, 60 내지 5%, 60 내지 10%, 60 내지 20%, 60 내지 30%, 60 내지 40%, 60 내지 50%, 40 내지 1%, 40 내지 2%, 40 내지 3%, 40 내지 4%, 40 내지 5%, 40 내지 10%, 40 내지 20%, 40 내지 30%, 40 내지 50%, 30 내지 1%, 30 내지 2%, 30 내지 3%, 30 내지 4%, 30 내지 5%, 30 내지 10%, 30 내지 20%, 20 내지 1%, 20 내지 2%, 20 내지 3%, 20 내지 4%, 20 내지 5%, 20 내지 10%, 10 내지 1%, 10 내지 2%, 10 내지 3%, 10 내지 4%, 10 내지 5%, 5 내지 1%, 5 내지 2%, 5 내지 3% 또는 5 내지 4%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 상기 올리고사카라이드 제제는 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3% 또는 2% 미만의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 상기 올리고사카라이드 제제는 약 80 내지 0.5%, 80 내지 1%, 80 내지 2%, 80 내지 3%, 80 내지 4%, 80 내지 5%, 80 내지 10%, 80 내지 20%, 80 내지 30%, 80 내지 40%, 80 내지 50%, 60 내지 1%, 60 내지 2%, 60 내지 3%, 60 내지 4%, 60 내지 5%, 60 내지 10%, 60 내지 20%, 60 내지 30%, 60 내지 40%, 60 내지 50%, 40 내지 1%, 40 내지 2%, 40 내지 3%, 40 내지 4%, 40 내지 5%, 40 내지 10%, 40 내지 20%, 40 내지 30%, 40 내지 50%, 30 내지 1%, 30 내지 2%, 30 내지 3%, 30 내지 4%, 30 내지 5%, 30 내지 10%, 30 내지 20%, 20 내지 1%, 20 내지 2%, 20 내지 3%, 20 내지 4%, 20 내지 5%, 20 내지 10%, 10 내지 1%, 10 내지 2%, 10 내지 3%, 10 내지 4%, 10 내지 5%, 5 내지 1%, 5 내지 2%, 5 내지 3% 또는 5 내지 4%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 상기 올리고사카라이드 제제의 각각의 분획은 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3% 또는 2% 미만의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 상기 올리고사카라이드 제제의 각각의 분획은 약 80 내지 1%, 80 내지 2%, 80 내지 3%, 80 내지 4%, 80 내지 5%, 80 내지 10%, 80 내지 20%, 80 내지 30%, 80 내지 40%, 80 내지 50%, 60 내지 1%, 60 내지 2%, 60 내지 3%, 60 내지 4%, 60 내지 5%, 60 내지 10%, 60 내지 20%, 60 내지 30%, 60 내지 40%, 60 내지 50%, 40 내지 1%, 40 내지 2%, 40 내지 3%, 40 내지 4%, 40 내지 5%, 40 내지 10%, 40 내지 20%, 40 내지 30%, 40 내지 50%, 30 내지 1%, 30 내지 2%, 30 내지 3%, 30 내지 4%, 30 내지 5%, 30 내지 10%, 30 내지 20%, 20 내지 1%, 20 내지 2%, 20 내지 3%, 20 내지 4%, 20 내지 5%, 20 내지 10%, 10 내지 1%, 10 내지 2%, 10 내지 3%, 10 내지 4%, 10 내지 5%, 5 내지 1%, 5 내지 2%, 5 내지 3% 또는 5 내지 4%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 상기 올리고사카라이드 제제의 하나 이상의 분획은 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3% 또는 2% 미만의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 상기 올리고사카라이드 제제의 하나 이상의 분획은 약 80 내지 1%, 80 내지 2%, 80 내지 3%, 80 내지 4%, 80 내지 5%, 80 내지 10%, 80 내지 20%, 80 내지 30%, 80 내지 40%, 80 내지 50%, 60 내지 1%, 60 내지 2%, 60 내지 3%, 60 내지 4%, 60 내지 5%, 60 내지 10%, 60 내지 20%, 60 내지 30%, 60 내지 40%, 60 내지 50%, 40 내지 1%, 40 내지 2%, 40 내지 3%, 40 내지 4%, 40 내지 5%, 40 내지 10%, 40 내지 20%, 40 내지 30%, 40 내지 50%, 30 내지 1%, 30 내지 2%, 30 내지 3%, 30 내지 4%, 30 내지 5%, 30 내지 10%, 30 내지 20%, 20 내지 1%, 20 내지 2%, 20 내지 3%, 20 내지 4%, 20 내지 5%, 20 내지 10%, 10 내지 1%, 10 내지 2%, 10 내지 3%, 10 내지 4%, 10 내지 5%, 5 내지 1%, 5 내지 2%, 5 내지 3% 또는 5 내지 4%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 상기 올리고사카라이드 제제는 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3% 또는 2% 미만의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 상기 올리고사카라이드 제제는 약 80 내지 0.5%, 80 내지 1%, 80 내지 2%, 80 내지 3%, 80 내지 4%, 80 내지 5%, 80 내지 10%, 80 내지 20%, 80 내지 30%, 80 내지 40%, 80 내지 50%, 60 내지 1%, 60 내지 2%, 60 내지 3%, 60 내지 4%, 60 내지 5%, 60 내지 10%, 60 내지 20%, 60 내지 30%, 60 내지 40%, 60 내지 50%, 40 내지 1%, 40 내지 2%, 40 내지 3%, 40 내지 4%, 40 내지 5%, 40 내지 10%, 40 내지 20%, 40 내지 30%, 40 내지 50%, 30 내지 1%, 30 내지 2%, 30 내지 3%, 30 내지 4%, 30 내지 5%, 30 내지 10%, 30 내지 20%, 20 내지 1%, 20 내지 2%, 20 내지 3%, 20 내지 4%, 20 내지 5%, 20 내지 10%, 10 내지 1%, 10 내지 2%, 10 내지 3%, 10 내지 4%, 10 내지 5%, 5 내지 1%, 5 내지 2%, 5 내지 3% 또는 5 내지 4%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(MALDI-MS, LC-MS/MS 또는 GC-MS에 의해 측정된 상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 상기 올리고사카라이드 제제의 각각의 분획은 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3% 또는 2% 미만의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 상기 올리고사카라이드 제제의 각각의 분획은 약 80 내지 0.5%, 80 내지 1%, 80 내지 2%, 80 내지 3%, 80 내지 4%, 80 내지 5%, 80 내지 10%, 80 내지 20%, 80 내지 30%, 80 내지 40%, 80 내지 50%, 60 내지 1%, 60 내지 2%, 60 내지 3%, 60 내지 4%, 60 내지 5%, 60 내지 10%, 60 내지 20%, 60 내지 30%, 60 내지 40%, 60 내지 50%, 40 내지 1%, 40 내지 2%, 40 내지 3%, 40 내지 4%, 40 내지 5%, 40 내지 10%, 40 내지 20%, 40 내지 30%, 40 내지 50%, 30 내지 1%, 30 내지 2%, 30 내지 3%, 30 내지 4%, 30 내지 5%, 30 내지 10%, 30 내지 20%, 20 내지 1%, 20 내지 2%, 20 내지 3%, 20 내지 4%, 20 내지 5%, 20 내지 10%, 10 내지 1%, 10 내지 2%, 10 내지 3%, 10 내지 4%, 10 내지 5%, 5 내지 1%, 5 내지 2%, 5 내지 3% 또는 5 내지 4%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 상기 올리고사카라이드의 하나 이상의 분획은 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% 또는 80% 초과의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 상기 올리고사카라이드 제제는 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% 또는 80% 초과의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 상기 올리고사카라이드 제제의 각각의 분획은 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% 또는 80% 초과의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 상기 올리고사카라이드 제제의 하나 이상의 분획은 20%, 21%, 22%, 23%, 24% 또는 25% 초과의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 상기 올리고사카라이드 제제는 20%, 21%, 22%, 23%, 24% 또는 25% 초과의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 상기 올리고사카라이드 제제의 각각의 분획은 20%, 21%, 22%, 23%, 24% 또는 25% 초과의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 99%, 95%, 90%, 85%, 80%, 75%, 70%, 65%, 60%, 55%, 50%, 45%, 40%, 35% 또는 30% 초과의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드는 단지 하나의 무수-아단위를 갖는다. 일부 양태에서, 약 80 내지 1%, 80 내지 2%, 80 내지 3%, 80 내지 4%, 80 내지 5%, 80 내지 10%, 80 내지 20%, 80 내지 30%, 80 내지 40%, 80 내지 50%, 60 내지 1%, 60 내지 2%, 60 내지 3%, 60 내지 4%, 60 내지 5%, 60 내지 10%, 60 내지 20%, 60 내지 30%, 60 내지 40%, 60 내지 50%, 40 내지 1%, 40 내지 2%, 40 내지 3%, 40 내지 4%, 40 내지 5%, 40 내지 10%, 40 내지 20%, 40 내지 30%, 40 내지 50%, 30 내지 1%, 30 내지 2%, 30 내지 3%, 30 내지 4%, 30 내지 5%, 30 내지 10%, 30 내지 20%, 20 내지 1%, 20 내지 2%, 20 내지 3%, 20 내지 4%, 20 내지 5%, 20 내지 10%, 10 내지 1%, 10 내지 2%, 10 내지 3%, 10 내지 4%, 10 내지 5%, 5 내지 1%, 5 내지 2%, 5 내지 3% 또는 5 내지 4%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드는 단지 하나의 무수-아단위를 갖는다. 일부 양태에서, 상기 올리고사카라이드 제제는 상대적 빈도를 기준으로 1 내지 40%의 DP1 분획 함량을 갖는다. 일부 양태에서, 상기 올리고사카라이드 제제는 상대적 빈도를 기준으로 1 내지 35%의 DP2 분획 함량을 갖는다. 일부 양태에서, 상기 올리고사카라이드 제제는 상대적 빈도를 기준으로 1 내지 30%의 DP3 분획 함량을 갖는다. 일부 양태에서, 상기 올리고사카라이드 제제는 상대적 빈도를 기준으로 0.1 내지 20%의 DP4 분획 함량을 갖는다. 일부 양태에서, 상기 올리고사카라이드 제제는 상대적 빈도를 기준으로 0.1 내지 15%의 DP5 분획 함량을 갖는다. 일부 양태에서, 상기 올리고사카라이드 제제는 DP2 분획 및 DP1 분획을 포함하고, 이때 상기 올리고사카라이드 제제에서 상기 DP1 분획에 대한 상기 DP2 분획의 비는 상대적 빈도를 기준으로 0.02 내지 0.40이다. 일부 양태에서, 상기 올리고사카라이드 제제는 DP3 분획 및 DP2 분획을 포함하고, 이때 상기 올리고사카라이드 제제에서 상기 DP2 분획에 대한 상기 DP3 분획의 비는 상대적 빈도를 기준으로 0.01 내지 0.30이다. 일부 양태에서, 상기 올리고사카라이드 제제는 DP1 분획 및 DP2 분획을 포함하고, 이때 상기 올리고사카라이드 제제에서 상기 DP1 및 상기 DP2 분획의 응집체 함량은 상대적 빈도를 기준으로 50%, 30% 또는 10% 미만이다. 일부 양태에서, 상기 올리고사카라이드 제제는 1,000, 5,000, 10,000, 20,000, 30,000, 40,000, 50,000, 또는 100,000개 이상의 상이한 올리고사카라이드 종을 포함한다. 일부 양태에서, 상기 올리고사카라이드 제제의 2개 이상의 독립적인 올리고사카라이드는 상이한 무수-아단위를 포함한다. 일부 양태에서, 상기 올리고사카라이드 제제는 모노사카라이드의 열적 탈수의 생성물이 무수-아단위를 포함하는 하나 이상의 올리고사카라이드를 포함한다. 일부 양태에서, 상기 올리고사카라이드 제제는 무수-글루코스, 무수-갈락토스, 무수-만노스, 무수-알로스, 무수-알트로스, 무수-굴로스, 무수-인도스, 무수-탈로스, 무수-프럭토스, 무수-리보스, 무수-아라비노스, 무수-람노스, 무수-릭소스 또는 무수-자일로스 아단위를 포함하는 하나 이상의 올리고사카라이드를 포함한다. 일부 양태에서, 상기 올리고사카라이드 제제는 하나 이상의 무수-글루코스, 무수-갈락토스, 무수-만노스 또는 무수-프럭토스 아단위를 포함한다. 일부 양태에서, 상기 올리고사카라이드 제제는 하나 이상의 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 또는 1,6-무수-β-D-글루코피라노스 아단위를 포함한다. 일부 양태에서, 상기 올리고사카라이드 제제는 하나 이상의 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 아단위 및 하나 이상의 1,6-무수-β-D-글루코피라노스 무수-아단위를 포함한다. 일부 양태에서, 상기 올리고사카라이드 제제 중 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 대 1,6-무수-β-D-글루코피라노스의 비는 약 10:1 내지 1:10, 9:1 내지 1:10, 8:1 내지 1:10, 7:1 내지 1:10, 6:1 내지 1:10, 5:1 내지 1:10, 4:1 내지 1:10, 3:1 내지 1:10, 2:1 내지 1:10, 10:1 내지 1:9, 10:1 내지 1:8, 10:1 내지 1:7, 10:1 내지 1:6, 10:1 내지 1:5, 10:1 내지 1:4, 10:1 내지 1:3, 10:1 내지 1:2, 또는 1:1 내지 3:1이다. 일부 양태에서, 상기 올리고사카라이드 제제 중 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 대 1,6-무수-β-D-글루코피라노스의 비는 약 10:1, 9:1, 8:1, 7:1, 6:1, 5:1, 4:1, 3:1, 2:1, 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9, 또는 1:10이다. 일부 양태에서, 상기 올리고사카라이드 제제 중 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 대 1,6-무수-β-D-글루코피라노스의 비는 약 2:1이다. 일부 양태에서, 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 대 1,6-무수-β-D-글루코피라노스의 비는 각각의 분획에서 약 10:1 내지 1:10, 9:1 내지 1:10, 8:1 내지 1:10, 7:1 내지 1:10, 6:1 내지 1:10, 5:1 내지 1:10, 4:1 내지 1:10, 3:1 내지 1:10, 2:1 내지 1:10, 10:1 내지 1:9, 10:1 내지 1:8, 10:1 내지 1:7, 10:1 내지 1:6, 10:1 내지 1:5, 10:1 내지 1:4, 10:1 내지 1:3, 10:1 내지 1:2, 또는 1:1 내지 3:1이다. 일부 양태에서, 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 대 1,6-무수-β-D-글루코피라노스의 비는 상기 올리고사카라이드 제제의 각각의 분획에서 약 10:1, 9:1, 8:1, 7:1, 6:1, 5:1, 4:1, 3:1, 2:1, 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9, 또는 1:10이다. 일부 양태에서, 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 대 1,6-무수-β-D-글루코피라노스의 비는 상기 올리고사카라이드 제제의 각각의 분획에서 약 2:1이다. 일부 양태에서, 상기 올리고사카라이드 제제 중 1%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90% 이상의 상기 무수-아단위는 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 및 1,6-무수-β-D-글루코피라노스로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 양태에서, 상기 올리고사카라이드 제제는 당 카라멜화 생성물인 하나 이상의 무수-아단위를 포함한다. 일부 양태에서, 상기 당 카라멜화 생성물은 메탄올; 에탄올; 퓨란; 메틸 글리옥살; 2-메틸 퓨란; 비닐 아세테이트; 글리콜알데하이드; 아세트산; 아세톨; 퓨르퓨르알; 2-퓨란메탄올; 3-퓨란메탄올; 2-하이드록시 사이클로펜트-2-엔-1-온; 5-메틸 퓨르퓨르알; 2(5H)-퓨란온; 2 메틸 사이클로펜텐올론; 레보글루코센온; 고리 하이드록실 락톤; 1,4,3,6-2무수-α-D-글루코피라노스; 2무수 글루코피라노스; 및 5-하이드록시 메틸 퓨르퓨르알(5-hmf)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 양태에서, 상기 올리고사카라이드 제제 중 약 0.1 내지 5%, 0.1 내지 2% 또는 0.1 내지 1%의 상기 무수-아단위는 카라멜화 생성물이다. 일부 양태에서, 상기 올리고사카라이드 제제 중 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 99% 이상의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드는 쇄-말단 무수-아단위를 포함한다. 일부 양태에서, 상기 올리고사카라이드 제제 중 약 1 내지 100%, 1 내지 99%, 1 내지 90%, 1 내지 80%, 1 내지 70%, 1 내지 60%, 1 내지 50%, 1 내지 40%, 1 내지 30%, 1 내지 20%, 1 내지 10%, 1 내지 5%, 1 내지 4%, 1 내지 3%, 1 내지 2%, 10 내지 100%, 10 내지 99%, 10 내지 90%, 10 내지 80%, 10 내지 70%, 10 내지 60%, 10 내지 50%, 10 내지 40%, 10 내지 30%, 10 내지 20%, 20 내지 100%, 20 내지 99%, 20 내지 90%, 20 내지 80%, 20 내지 70%, 20 내지 60%, 20 내지 50%, 20 내지 40% 또는 20 내지 30%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드는 쇄-말단 무수-아단위를 포함한다. 일부 양태에서, 상기 올리고사카라이드 제제의 중량 평균 분자량은 약 300 내지 5,000 g/mol, 500 내지 5,000 g/mol, 700 내지 5,000 g/mol, 500 내지 2,000 g/mol, 700 내지 2,000 g/mol, 700 내지 1,500 g/mol, 300 내지 1,500 g/mol, 300 내지 2,000 g/mol, 400 내지 1,300 g/mol, 400 내지 1,200 g/mol, 400 내지 1,100 g/mol, 500 내지 1,300 g/mol, 500 내지 1,200 g/mol, 500 내지 1,100 g/mol, 600 내지 1,300 g/mol, 600 내지 1,200 g/mol, 또는 600 내지 1,100 g/mol이다. 일부 양태에서, 상기 올리고사카라이드 제제의 수 평균 분자량은 약 300 내지 5,000 g/mol, 500 내지 5,000 g/mol, 700 내지 5,000 g/mol, 500 내지 2,000 g/mol, 700 내지 2,000 g/mol, 700 내지 1,500 g/mol, 300 내지 1,500 g/mol, 300 내지 2,000 g/mol, 400 내지 1,000 g/mol, 400 내지 900 g/mol, 400 내지 800 g/mol, 500 내지 900 g/mol, 또는 500 내지 800 g/mol이다. 일부 양태에서, 상기 올리고사카라이드 제제의 중량 평균 분자량은 약 2,000 내지 2,800 g/mol, 2,100 내지 2,700 g/mol, 2,200 내지 2,600 g/mol, 2,300 내지 2,500 g/mol, 또는 2,320 내지 2,420 g/mol이다. 일부 양태에서, 상기 올리고사카라이드 제제의 수 평균 분자량은 약 1,000 내지 2,000 g/mol, 1,100 내지 1,900 g/mol, 1,200 내지 1,800 g/mol, 1,300 내지 1,700 g/mol, 1,400 내지 1,600 g/mol, 또는 1,450 내지 1,550 g/mol이다.
각각 1 내지 n의 별개의 중합도를 갖는 올리고사카라이드의 적어도 n개의 분획(DP1 내지 DPn 분획)을 포함하는 합성 올리고사카라이드 제제가 본원에 제공되고, 이때 n은 2 초과의 정수이고; 각각의 분획은 질량 분광계에 의해 측정된 상대적 빈도를 기준으로 1 내지 90%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다. 일부 양태에서, 5개, 10개, 20개 또는 30개 이상의 DP 분획 중 올리고사카라이드의 상대적 빈도는 중합도에 따라 단조 감소된다. 일부 양태에서, 각각의 n개의 분획 중 올리고사카라이드의 상대적 빈도는 중합도에 따라 단조 감소된다. 일부 양태에서, n은 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100 이상이다. 일부 양태에서, 하나 이상의 분획은 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3% 또는 2% 미만의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3% 또는 2% 미만의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 각각의 분획은 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3% 또는 2% 미만의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 하나 이상의 분획은 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3% 또는 2% 미만의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3% 또는 2% 미만의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 각각의 분획은 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3% 또는 2% 미만의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 하나 이상의 분획은 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% 또는 80% 초과의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% 또는 80% 초과의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 각각의 분획은 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% 또는 80% 초과의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 하나 이상의 분획은 20%, 21%, 22%, 23%, 24% 또는 25% 초과의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 20%, 21%, 22%, 23%, 24% 또는 25% 초과의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 각각의 분획은 20%, 21%, 22%, 23%, 24% 또는 25% 초과의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 99%, 95%, 90%, 85%, 80%, 75%, 70%, 65%, 60%, 55%, 50%, 45%, 40%, 35% 또는 30% 초과의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드는 단지 하나의 무수-아단위를 갖는다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 상대적 빈도를 기준으로 1 내지 40%의 DP1 분획 함량을 갖는다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 상대적 빈도를 기준으로 1 내지 35%의 DP2 분획 함량을 갖는다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 상대적 빈도를 기준으로 1 내지 30%의 DP3 분획 함량을 갖는다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 상대적 빈도를 기준으로 0.1 내지 20%의 DP4 분획 함량을 갖는다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 상대적 빈도를 기준으로 0.1 내지 15%의 DP5 분획 함량을 갖는다. 일부 양태에서, DP1 분획에 대한 DP2 분획의 비는 상대적 빈도를 기준으로 0.02 내지 0.40이다. 일부 양태에서, DP2 분획에 대한 DP3 분획의 비는 상대적 빈도를 기준으로 0.01 내지 0.30이다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제 중 DP1 및 DP2 분획의 응집체 함량은 상대적 빈도를 기준으로 50%, 30% 또는 10% 미만이다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 103개, 104개, 105개, 106개 또는 109개 이상의 상이한 올리고사카라이드 종을 포함한다. 일부 양태에서, 2개 이상의 독립적인 올리고사카라이드는 상이한 무수-아단위를 포함한다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 모노사카라이드의 가역적 열적 탈수의 생성물인 하나 이상의 무수-아단위를 포함한다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 하나 이상의 무수-글루코스, 무수-갈락토스, 무수-만노스, 무수-알로스, 무수-알트로스, 무수-굴로스, 무수-인도스, 무수-탈로스, 무수-프럭토스, 무수-리보스, 무수-아라비노스, 무수-람노스, 무수-릭소스 또는 무수-자일로스 아단위를 포함한다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 하나 이상의 무수-글루코스, 무수-갈락토스, 무수-만노스 또는 무수-프럭토스 아단위를 포함한다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 하나 이상의 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 또는 1,6-무수-β-D-글루코피라노스 아단위를 포함한다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 및 1,6-무수-β-D-글루코피라노스 무수-아단위를 둘 다 포함한다. 일부 양태에서, 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 대 1,6-무수-β-D-글루코피라노스의 비는 올리고사카라이드 제제에서 약 10:1 내지 1:10, 9:1 내지 1:10, 8:1 내지 1:10, 7:1 내지 1:10, 6:1 내지 1:10, 5:1 내지 1:10, 4:1 내지 1:10, 3:1 내지 1:10, 2:1 내지 1:10, 10:1 내지 1:9, 10:1 내지 1:8, 10:1 내지 1:7, 10:1 내지 1:6, 10:1 내지 1:5, 10:1 내지 1:4, 10:1 내지 1:3, 10:1 내지 1:2, 또는 1:1 내지 3:1이다. 일부 양태에서, 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 대 1,6-무수-β-D-글루코피라노스의 비는 올리고사카라이드 제제에서 약 10:1, 9:1, 8:1, 7:1, 6:1, 5:1, 4:1, 3:1, 2:1, 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9, 또는 1:10이다. 일부 양태에서, 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 대 1,6-무수-β-D-글루코피라노스의 비는 올리고사카라이드 제제에서 약 2:1이다. 일부 양태에서, 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 대 1,6-무수-β-D-글루코피라노스의 비는 각각의 분획에서 약 10:1 내지 1:10, 9:1 내지 1:10, 8:1 내지 1:10, 7:1 내지 1:10, 6:1 내지 1:10, 5:1 내지 1:10, 4:1 내지 1:10, 3:1 내지 1:10, 2:1 내지 1:10, 10:1 내지 1:9, 10:1 내지 1:8, 10:1 내지 1:7, 10:1 내지 1:6, 10:1 내지 1:5, 10:1 내지 1:4, 10:1 내지 1:3, 10:1 내지 1:2, 또는 1:1 내지 3:1이다. 일부 양태에서, 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 대 1,6-무수-β-D-글루코피라노스의 비는 각각의 분획에서 약 10:1, 9:1, 8:1, 7:1, 6:1, 5:1, 4:1, 3:1, 2:1, 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9, 또는 1:10이다. 일부 양태에서, 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 대 1,6-무수-β-D-글루코피라노스의 비는 각각의 분획에서 약 2:1이다. 일부 양태에서, 1%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90% 이상의 무수-아단위는 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 및 1,6-무수-β-D-글루코피라노스로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 당 카라멜화 생성물인 하나 이상의 무수-아단위를 포함한다. 일부 양태에서, 당 카라멜화 생성물은 메탄올; 에탄올; 퓨란; 메틸 글리옥살; 2-메틸 퓨란; 비닐 아세테이트; 글리콜알데하이드; 아세트산; 아세톨; 퓨르퓨르알; 2-퓨란메탄올; 3-퓨란메탄올; 2-하이드록시 사이클로펜트-2-엔-1-온; 5-메틸 퓨르퓨르알; 2(5H)-퓨란온; 2 메틸 사이클로펜텐올론; 레보글루코센온; 고리 하이드록실 락톤; 1,4,3,6-2무수-α-D-글루코피라노스; 2무수 글루코피라노스; 및 5-하이드록시 메틸 퓨르퓨르알(5-hmf)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 5-hmf 아단위를 포함한다. 일부 양태에서, 제제 중 약 0.1 내지 5%, 0.1 내지 2% 또는 0.1 내지 1%의 무수-아단위는 카라멜화 생성물이다. 일부 양태에서, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 99% 초과의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드는 쇄-말단 무수-아단위를 포함한다. 일부 양태에서, 제제의 중량 평균 분자량은 약 300 내지 5,000 g/mol, 500 내지 5,000 g/mol, 700 내지 5,000 g/mol, 500 내지 2,000 g/mol, 700 내지 2,000 g/mol, 700 내지 1,500 g/mol, 300 내지 1,500 g/mol, 300 내지 2,000 g/mol, 400 내지 1,300 g/mol, 400 내지 1,200 g/mol, 400 내지 1,100 g/mol, 500 내지 1,300 g/mol, 500 내지 1,200 g/mol, 500 내지 1,100 g/mol, 600 내지 1,300 g/mol, 600 내지 1,200 g/mol, 또는 600 내지 1,100 g/mol이다. 일부 양태에서, 제제의 수 평균 분자량은 약 300 내지 5,000 g/mol, 500 내지 5,000 g/mol, 700 내지 5,000 g/mol, 500 내지 2,000 g/mol, 700 내지 2,000 g/mol, 700 내지 1,500 g/mol, 300 내지 1,500 g/mol, 300 내지 2,000 g/mol, 400 내지 1,000 g/mol, 400 내지 900 g/mol, 400 내지 800 g/mol, 500 내지 900 g/mol, 또는 500 내지 800 g/mol이다. 일부 양태에서, 제제의 중량 평균 분자량은 약 2,000 내지 2,800 g/mol, 2,100 내지 2,700 g/mol, 2,200 내지 2,600 g/mol, 2,300 내지 2,500 g/mol, 또는 2,320 내지 2,420 g/mol이다. 일부 양태에서, 제제의 수 평균 분자량은 약 1,000 내지 2,000 g/mol, 1,100 내지 1,900 g/mol, 1,200 내지 1,800 g/mol, 1,300 내지 1,700 g/mol, 1,400 내지 1,600 g/mol, 또는 1,450 내지 1,550 g/mol이다. 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제를 포함하는 영양 조성물이 본원에 제공된다. 일부 양태에서, 영양 조성물은 베이스 영양 조성물을 추가로 포함한다. 베이스 영양 조성물 및 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제를 포함하는 영양 조성물을 동물에게 투여함을 포함하는 방법이 또한 본원에 제공된다.
하나 이상의 사료용 당 및 촉매를 포함하는 수성 조성물을, 중합을 유도하기에 충분한 시간 동안 이에 충분한 온도까지 가열하는 단계를 포함하는, 합성 올리고사카라이드 제제의 제조 방법이 본원에 제공되고, 이때 촉매는 에탄다이설폰산; 에탄설폰산; 이세티온산; 호모시스테인산; HEPBS(N-(2-하이드록시에틸)피페라진-N'-(4-부탄설폰산)); HEPES(4-(2-하이드록시에틸)-1-피페라진에탄설폰산); 2-하이드록시-3-모르폴리노프로판설폰산; 2-(N-모르폴리노)에탄설폰산; 메탄설폰산; 메타니아자이드; 나프탈렌-1-설폰산; 나프탈렌-2-설폰산; 퍼플루오로부탄설폰산; 6-설포퀴노보스; 트라이플산; 2-아미노에탄설폰산; 벤조산; 클로로아세트산; 트라이플루오로아세트산; 카프로산; 에난트산; 카프릴산; 펠라르곤산; 라우르산; 팔미트산; 스테아르산; 아라키드산; 아스파르트산; 글루탐산; 세린; 트레오닌; 글루타민; 시스테인; 글리신; 프롤린; 알라닌; 발린; 이소류신; 류신; 메티오닌; 페닐알라닌; 티로신; 및 트립토판으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 상기 올리고사카라이드 제제는 각각 1(DP1 분획) 내지 n(DPn 분획)의 별개의 중합도를 갖는 적어도 n개의 분획의 올리고사카라이드를 포함하고, n은 2 이상의 정수이다. 일부 양태에서, 상기 방법은 수성 조성물을 수성 조성물이 평형에 도달하기에 충분한 시간 동안 가열하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 상기 방법은 수성 조성물을 수성 조성물이 평형(15%, 10% 또는 5% 미만의 일련의 Km의 상대 표준 편차에 의해 측정됨)에 도달하기에 충분한 시간 동안 가열하는 단계를 포함하고, 이때
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이고, m은 1 초과 내지 n 이하의 정수이고, 일련의 Km은 5개 이상의 Km 수를 포함하고, [H2O]는 물의 몰 농도를 나타내고, [DP1], [DPm-1] 및 [DPm]은 각각 DP1, DPm-1, 및 DPm 분획에서 올리고사카라이드의 몰 농도를 나타낸다. 일부 양태에서, 상기 방법은 수성 조성물을 수성 조성물이 평형(1시간의 기간에 걸쳐 15% 미만의 수성 조성물의 중량 평균 분자량의 변화에 의해 측정됨)에 도달하기에 충분한 시간 동안 가열하는 단계를 포함한다. 하나 이상의 사료용 당 및 촉매를 포함하는 수성 조성물을, 중합을 유도하고 수성 조성물이 평형에 도달하기에 충분한 시간 동안 이에 충분한 온도까지 가열하는 단계를 포함하는, 올리고사카라이드 제제의 제조 방법이 본원에 제공되고, 이때 올리고사카라이드 제제는 각각 1(DP1 분획) 내지 n(DPn 분획)의 별개의 중합도를 갖는 적어도 n개의 분획의 올리고사카라이드를 포함하고, 이때 n은 2 이상의 정수이다. 일부 양태에서, 상기 방법은 수성 조성물을 수성 조성물이 평형(1시간의 기간에 걸쳐 15% 미만의 수성 조성물의 중량 평균 분자량의 변화에 의해 측정됨)에 도달하기에 충분한 시간 동안 가열하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 촉매는 에탄다이설폰산; 에탄설폰산; 이세티온산; 호모시스테인산; HEPBS(N-(2-하이드록시에틸)피페라진-N'-(4-부탄설폰산)); HEPES(4-(2-하이드록시에틸)-1-피페라진에탄설폰산); 2-하이드록시-3-모르폴리노프로판설폰산; 2-(N-모르폴리노)에탄설폰산; 메탄설폰산; 메타니아자이드; 나프탈렌-1-설폰산; 나프탈렌-2-설폰산; 퍼플루오로부탄설폰산; 6-설포퀴노보스; 트라이플산; 2-아미노에탄설폰산; 벤조산; 클로로아세트산; 트라이플루오로아세트산; 카프로산; 에난트산; 카프릴산; 펠라르곤산; 라우르산; 팔미트산; 스테아르산; 아라키드산; 아스파르트산; 글루탐산; 세린; 트레오닌; 글루타민; 시스테인; 글리신; 프롤린; 알라닌; 발린; 이소류신; 류신; 메티오닌; 페닐알라닌; 티로신; 및 트립토판으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 양태에서, 상기 방법은 하나 이상의 사료용 당을 1 kg 초과의 양으로 포함하는 수성 조성물을 가열하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 하나 이상의 사료용 당은 모노사카라이드, 다이사카라이드, 트라이사카라이드, 테트라사카라이드, 또는 이들의 조합을 포함하고, 상기 모노사카라이드, 다이사카라이드, 트라이사카라이드, 또는 테트라사카라이드는 각각 독립적으로 이의 수화물 또는 탈수화물 형태이다. 일부 양태에서, 하나 이상의 사료용 당은 글루코스, 갈락토스, 프럭토스, 만노스 또는 이들의 임의의 조합을 포함하고, 각각의 글루코스, 갈락토스, 프럭토스, 또는 만노스는 독립적으로 이의 1수화물 또는 탈수화물 형태이다. 일부 양태에서, 하나 이상의 사료용 당은 작용화되거나 개질된 당이다. 일부 양태에서, 작용화되거나 개질된 당은 아미노 당, 당 산, 당 알코올, 당 아미드, 당 에터 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 일부 양태에서, 작용화되거나 개질된 당은 아미노 당, 당 산, 당 아미드, 당 에터 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 일부 양태에서, 작용화되거나 개질된 당은 글루코사민, N-아세틸글루코사민, 글루쿠론산, 갈락투론산, 글루시톨, 자일리톨, 만니톨, 소르비톨 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 일부 양태에서, 작용화되거나 개질된 당은 글루코사민, N-아세틸글루코사민, 글루쿠론산, 갈락투론산 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 일부 양태에서, 하나 이상의 사료용 당은 데옥시당을 포함한다. 일부 양태에서, 데옥시당은 푸코스, 람노스, 데옥시리보스, 푸쿨로스 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 일부 양태에서, 촉매는 하나 이상의 사료용 당에 약 0.01 내지 5%, 0.02 내지 4%, 0.03 내지 3% 또는 0.05 내지 2%의 양으로 존재한다(건조 중량을 기준으로 함). 일부 양태에서, 촉매는 하나 이상의 사료용 당에 약 1 내지 2%의 양으로 존재한다(건조 중량을 기준으로 함). 일부 양태에서, 촉매는 무수 또는 습윤 형태로 수성 조성물에 첨가된다. 일부 양태에서, 상기 방법은 물을 첨가하여 수성 조성물을 형성하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 수성 조성물은 약 2 내지 10%, 2 내지 8% 또는 4 내지 8%의 물을 포함한다(총 중량을 기준으로 함). 일부 양태에서, 수성 조성물은 약 4 내지 8%의 물을 포함한다(총 중량을 기준으로 함). 일부 양태에서, 상기 방법은 약 100 내지 200℃, 100 내지 180℃, 110 내지 170℃, 120 내지 160℃, 130 내지 150℃, 또는 135 내지 145℃의 온도까지 가열하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 상기 방법은 수성 조성물을 약 135 내지 145℃의 온도까지 가열하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 상기 방법은, 중합을 유도하기에 충분한 시간 동안 이에 충분한 온도까지 가열하면서, 약 1 내지 20%, 2 내지 10%, 2 내지 8% 또는 4 내지 8 중량%의 수함량을 유지하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 상기 방법은 대기압 하의 증류에 의해 수함량을 유지하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 상기 방법은 물의 첨가에 의해 수함량을 유지하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 상기 방법은 수성 조성물을 수성 조성물이 약 500 내지 2,000 g/mol의 수 평균 분자량에 도달하기에 충분한 시간 동안 가열하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 상기 방법은 수성 조성물을 수성 조성물이 약 700 내지 3,000 g/mol의 중량 평균 분자량에 도달하기에 충분한 시간 동안 가열하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 중합은 중축합에 의해 달성된다. 일부 양태에서, 상기 방법은 수성 조성물이 약 9%의 물을 포함하도록 물을 제거하는 단계를 추가로 포함한다(총 중량을 기준으로 함). 일부 양태에서, 상기 방법은 희석, 탈색, 여과 또는 이들의 임의의 조합을 추가로 포함한다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제의 각각의 n개의 분획은 1 내지 90%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다. 일부 양태에서, 5개, 10개, 20개 또는 30개 이상의 DP 분획 중 올리고사카라이드의 상대적 빈도는 중합도에 따라 단조 감소된다. 일부 양태에서, 각각의 n개의 분획 중 올리고사카라이드의 상대적 빈도는 중합도에 따라 단조 감소된다. 일부 양태에서, 영양 조성물은 동물 사료 조성물이다. 하나 이상의 사료용 당 및 촉매를 포함하는 수성 조성물을 중합을 유도하기에 충분한 시간 동안 이에 충분한 온도까지 가열하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조된 합성 올리고사카라이드 제제가 본원에 제공되고, 이때 촉매는 에탄다이설폰산; 에탄설폰산; 이세티온산; 호모시스테인산; HEPBS(N-(2-하이드록시에틸)피페라진-N'-(4-부탄설폰산)); HEPES(4-(2-하이드록시에틸)-1-피페라진에탄설폰산); 2-하이드록시-3-모르폴리노프로판설폰산; 2-(N-모르폴리노)에탄설폰산; 메탄설폰산; 메타니아자이드; 나프탈렌-1-설폰산; 나프탈렌-2-설폰산; 퍼플루오로부탄설폰산; 6-설포퀴노보스; 트라이플산; 2-아미노에탄설폰산; 벤조산; 클로로아세트산; 트라이플루오로아세트산; 카프로산; 에난트산; 카프릴산; 펠라르곤산; 라우르산; 팔미트산; 스테아르산; 아라키드산; 아스파르트산; 글루탐산; 세린; 트레오닌; 글루타민; 시스테인; 글리신; 프롤린; 알라닌; 발린; 이소류신; 류신; 메티오닌; 페닐알라닌; 티로신; 및 트립토판으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 이때 올리고사카라이드 제제는 각각 1(DP1 분획) 내지 n(DPn 분획)의 별개의 중합도를 갖는 적어도 n개의 분획의 올리고사카라이드를 포함하고, 이때 n은 2 이상의 정수이고, 각각의 분획은 질량 분광계에 의해 측정된 상대적 빈도를 기준으로 1 내지 90%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다. 하나 이상의 사료용 당 및 촉매를 포함하는 수성 조성물을, 중합을 유도하고 수성 조성물이 평형에 도달하기에 충분한 시간 동안 이에 충분한 온도까지 가열하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조된 합성 올리고사카라이드 제제가 본원에 제공되고, 이때 올리고사카라이드 제제는 각각 1(DP1 분획) 내지 n(DPn 분획)의 별개의 중합도를 갖는 적어도 n개의 분획의 올리고사카라이드를 포함하고, 이때 n은 2 이상의 정수이고, 각각의 분획은 질량 분광계에 의해 측정된 상대적 빈도를 기준으로 1 내지 90%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다. 하나 이상의 사료용 당 및 촉매를 포함하는 수성 조성물을, 중합을 유도하고 수성 조성물이 평형에 도달하기에 충분한 시간 동안 이에 충분한 온도까지 가열하는 단계를 포함하는, 합성 올리고사카라이드 제제의 제조 방법이 본원에 제공되고, 이때 올리고사카라이드 제제는 각각 1(DP1 분획) 내지 n(DPn 분획)의 별개의 중합도를 갖는 적어도 n개의 분획의 올리고사카라이드를 포함하고, 이때 n은 2 이상의 정수이고, 평형은 15%, 10% 또는 5% 미만의 일련의 Km의 상대적인 표준 편차에 의해 측정되고,
Figure pct00003
이고, m은 1 초과 내지 n 이하의 정수이고, 일련의 Km은 5개 이상의 Km 수를 포함하고, [H2O]는 물의 몰 농도를 나타내고, [DP1], [DPm-1] 및 [DPm]은 각각 DP1, DPm-1, 및 DPm 분획에서 올리고사카라이드의 몰 농도를 나타낸다.
본 발명의 추가적인 양상 및 장점은 하기 상세한 설명으로부터 당업자에게 용이하게 명확해질 것이되, 본 발명의 단지 예시적인 양태가 제시되고 기술된다. 모두 본 발명을 벗어남 없이, 본 발명이 기타 및 상이한 양태를 가능하게 할 수 있고, 이의 몇몇 세부사항이 다양한 명확한 관점에서의 변형을 가능하게 할 것임이 인지될 것이다. 따라서, 도면 및 설명은 당연히 예시적인 것이고, 제한적인 것으로서 간주되어선 안된다.
참조에 의한 혼입
본 명세서에 언급된 모든 공개, 특허 및 특허 출원은 각각의 개별 공개, 특허 또는 특허 출원이 구체적 및 개별적으로 참조로 혼입되는 것으로 지시되는 바와 같이 본원에 참조로 혼입된다. 참조로 혼입되는 공개 및 특허 또는 특허 출원이 본 명세서에 기술된 개시에 상충하는 바에 대해서는, 본 명세서가 임의의 이러한 상충하는 바를 대체하고/거나 우선하도록 의도된다.
본 발명의 신규한 특징은 특히 첨부된 청구범위에 의해 제시된다. 예시적인 양태를 제시하는 본 발명의 원리를 이용하는 하기 발명의 구체적인 내용 및 도면을 참조로 하여 본 발명의 특징 및 장점이 더 잘 이해될 것이다.
도 1은 실시예 7의 올리고사카라이드 제제의 2D 1H, 13C- HSQC NMR 스펙트럼의 일부를 도시한다.
도 2는 무수-아단위의 존재를 증명하는 실시예 9.7의 올리고사카라이드 제제의 MALDI-MS 스펙트럼을 도시한다.
도 3은 실시예 9의 올리고사카라이드로부터 단리된 무수 DP1 분획의 1D 1H- 양성자 NMR 스펙트럼을 도시한다.
도 4는 실시예 9의 올리고사카라이드로부터 단리된 무수 DP1 분획의 1D APT 13C-NMR 스펙트럼을 도시한다.
도 5는 1,6-무수-베타-D-글루코퓨라노스 및 1,6-무수-베타-D-글루코피라노스의 NMR 배치를 도시한다.
도 6은 유도체화 후 실시예 9.7의 올리고사카라이드 제제에 대한 GC-MS 크로마토그램(TIC 및 XIC(m/z 229) 도표)의 확대도를 도시한다.
도 7은 실시예 9로부터의 올리고사카라이드 제제를 통상적인 덱스트란과 비교하는 MALDI-MS 스펙트럼을 도시한다.
도 8은 물 중 1 내지 80 mg/mL의 올리고사카라이드 제제의 농도의 무수 DP2 종의 LC-MS/MS 검출을 도시한다.
도 9는 도 8의 LC-MS/MS 검출로부터 생성된 선형 교정 곡선을 도시한다.
도 10은 크기 배제 크로마토그래피에 의해 측정된 단조 감소하는 DP 분포를 갖는 올리고사카라이드 제제를 도시한다.
도 11은 크기 배제 크로마토그래피에 의해 측정된 비-단조 감소하는 DP 분포를 갖는 올리고사카라이드 제제를 도시한다.
도 12는 2개의 DP1 및 1개의 DP2 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 도시한다.
도 13은 무수-아단위-함유 올리고사카라이드(셀로트리오산)를 도시한다.
도 14a는 무수-아단위의 존재를 증명하는 실시예 2로부터의 올리고사카라이드 제제의 MALDI-MS 스펙트럼을 도시한다. 도 14b는 도 14a에 도시된 MALDI-MS 스펙트럼의 일부의 확대도이다.
도 15a는 실시예 1의 올리고사카라이드 제제의 무수 DP2 종의 LC-MS/MS 검출을 도시한다. 도 15b는 실시예 1의 올리고사카라이드 제제의 무수 DP1 종의 LC-MS/MS 검출을 도시한다. 도 15c는 실시예 1의 올리고사카라이드 제제의 DP2 종의 LC-MS/MS 검출을 도시한다.
도 16a는 실시예 3의 올리고사카라이드 제제의 무수 DP2 종의 LC-MS/MS 검출을 도시한다. 도 16b는 실시예 3의 올리고사카라이드 제제의 무수 DP1 종의 LC-MS/MS 검출을 도시한다. 도 16c는 실시예 3의 올리고사카라이드 제제의 DP2 종의 LC-MS/MS 검출을 도시한다.
도 17a는 실시예 4의 올리고사카라이드 제제의 무수 DP2 종의 LC-MS/MS 검출을 도시한다. 도 17b는 실시예 4의 올리고사카라이드 제제의 무수 DP1 종의 LC-MS/MS 검출을 도시한다. 도 17c는 실시예 4의 올리고사카라이드 제제의 DP2 종의 LC-MS/MS 검출을 도시한다.
도 18a는 실시예 7의 올리고사카라이드 제제의 무수 DP2 종의 LC-MS/MS 검출을 도시한다. 도 18b는 실시예 7의 올리고사카라이드 제제의 무수 DP1 종의 LC-MS/MS 검출을 도시한다. 도 18c는 실시예 7의 올리고사카라이드 제제의 DP2 종의 LC-MS/MS 검출을 도시한다.
도 19a는 실시예 1의 올리고사카라이드 제제의 DP1, 무수 DP1, DP2 및 무수 DP2 분획의 GC-MS 스펙트럼 검출을 도시한다. 도 19b는 도 19a에 도시된 DP2 및 무수 DP 2 분획의 확대도를 도시한다.
도 20a는 실시예 3의 올리고사카라이드 제제의 DP1, 무수 DP1, DP2 및 무수 DP2 분획의 GC-MS 스펙트럼 검출을 도시한다. 도 20b는 도 20a에 도시된 DP2 및 무수 DP 2 분획의 확대도를 도시한다.
도 21a는 실시예 4의 올리고사카라이드 제제의 DP1, 무수 DP1, DP2 및 무수 DP2 분획의 GC-MS 스펙트럼 검출을 도시한다. 도 21b는 도 21a에 도시된 DP2 및 무수 DP 2 분획의 확대도를 도시한다.
도 22a는 실시예 7의 올리고사카라이드 제제의 DP1, 무수 DP1, DP2 및 무수 DP2 분획의 GC-MS 스펙트럼 검출을 도시한다. 도 22b는 도 22a에 도시된 DP2 및 무수 DP 2 분획의 확대도를 도시한다.
도 23는 실시예 2에 따른 올리고사카라이드 제제와 비교되는 올리고사카라이드 제제에서 DP2 무수-아단위-함유 올리고사카라이드의 함량에 대한 반응 온도, 수함량 및 반응 시간을 도시한다.
도 24는 다양한 대조군 및 처리된 식이 조성물의 무수-DP2 함량의 정량분석을 도시한다.
도 25는 무수-아단위-함유 글루코-올리고사카라이드 샘플의 2D-1H JRES NMR 스펙트럼을 도시한다.
도 26은 연결기 분포에 사용된 관련 공명 및 배치를 갖는 무수-아단위-함유 글루코-올리고사카라이드 샘플의 대표적인 1H, 13C- HSQC NMR 스펙트럼을 도시한다.
도 27은 3개의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드의 1H DOSY 스펙트럼의 오버레이를 도시한다.
도 28은 상이한 레이저 에너지에서 실시예 9로부터의 올리고사카라이드 제제를 비교하는 MALDI-MS 스펙트럼을 도시한다.
이러한 올리고사카라이드 제제를 포함하는 올리고사카라이드 제제 및 동물 영양 조성물이 본원에 기술된다. 기술된 올리고사카라이드 제제는 프리바이오틱 유용성, 품질 관리 및 제조 목적에 관해 이롭고; 영양 조성물 중 올리고사카라이드 제제의 존재 및/또는 농도는 선택적으로 측정 및/또는 검출될 수 있다. 올리고사카라이드 제제 및 영양 조성물의 제조 방법, 및 이를 분석하고 정량분석하는 방법이 또한 본원에 기술된다.
하기 설명 및 실시예는 본 발명의 양태를 상세히 예시한다. 본 발명이 본원에 기술된 특정 양태에 한정되지 않고, 이에 따라 다양할 수 있음이 이해되어야 한다. 당업자는 본 발명의 범주에 포함되는 본 발명의 다양한 변경 및 변형이 있음을 인지할 것이다.
모든 용어는 당업자에 의해 이해될 수 있는 바와 같이 이해되도록 의도된 것이다. 달리 정의가 없는 한, 본원에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 당업자에 의해 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다.
본원에 사용된 부문 표제는 단지 구성적 목적을 위한 것이고 기재되는 대상을 한정하지 않는 것으로 보아야 한다.
본원의 다양한 특징이 단일 양태의 맥락에서 기재될 수 있지만, 특징은 별개로 또는 임의의 적합한 조합으로 제시될 수도 있다. 역으로, 본 발명이 본원에서 명료성을 위해 별개 양태의 맥락에 기재되더라도, 본 발명은 단일 양태로도 이행될 수 있다.
하기 정의는 당업자에게 보충설명을 제공하고, 본 출원에 관한 것이고, 임의의 관련 또는 미관련 사건, 예컨대 임의의 통상적으로 소유된 특허 또는 출원에는 귀속되지 않는다. 본원에 기술된 바와 유사하거나 등가인 임의의 방법 및 물질도 본 발명의 시험을 위한 실시에 사용될 수 있지만, 바람직한 물질 및 방법이 본원에 기술된다. 따라서, 본원에 사용된 용어는 단지 특정 양태만을 설명하기 위한 것이고, 한정하는 것으로 의도되지 않는다.
I. 정의
본원에 사용된 용어 "투여함"은 동물이 본원에 기술된 합성 올리고사카라이드 제제, 영양 조성물, 액체, 또는 동물 사료 조성물을 섭취할 수 있도록 상기 동물에게 상기 합성 올리고사카라이드 제제, 영양 조성물, 액체, 또는 동물 사료 조성물을 제공함을 포함한다. 이러한 양태에서, 동물은 합성 올리고사카라이드 제제, 영양 조성물, 또는 동물 사료 조성물의 일부 부분을 섭취한다. 일부 양태에서, 동물은 7일, 14일, 21일, 30일, 45일, 60일, 75일, 90일 또는 120일 이상 동안 매 24-시간 기간 또는 매 24-시간 기간으로 합성 올리고사카라이드 제제, 영양 조성물, 액체 또는 동물 사료 조성물의 일부 부분을 섭취한다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 물 또는 다른 액체에 용해될 수 있고, 동물은 액체를 마심으로써 올리고사카라이드 제제의 일부 부분을 섭취한다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드는 동물의 음용수를 통해 동물에게 제공된다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제, 영양 조성물, 액체 또는 동물 사료 조성물은 마음대로 소비된다. 일부 양태에서, 동물은 합성 올리고사카라이드 제제, 영양 조성물, 액체, 또는 동물 사료 조성물을 매 24시간 주기로, 또는 적어도 7일, 14일, 21일, 30일, 45일, 60일, 75일, 90일 또는 120일 동안 매 24시간 주기로 섭취한다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 물 또는 또 다른 액체 중 용해될 수 있고, 동물은 상기 액체를 음용함으로써 올리고사카라이드 제제의 일부를 섭취한다. 특정 양태에서, 올리고사카라이드는 동물의 음용수를 통해 상기 동물에게 제공된다. 특정 양태에서, 올리고사카라이드 제제, 영양 조성물, 액체, 또는 동물 영양 조성물은 자의적으로 섭취된다.
본원에 사용된, 용어 "포함 수준" 또는 "용량"은 동물에게 제공된 영양 조성물, 액체, 식이, 또는 동물 사료 조성물 중 올리고사카라이드 제제의 농도를 지칭한다. 일부 양태에서, 포함 수준은 최종 영양 조성물, 액체, 식이, 또는 동물 사료 중 올리고사카라이드 제제의 질량 농도로서 측정된다. 예를 들어, 포함 수준은 최종 영양 조성물, 액체, 식이, 또는 동물 사료의 총 중량에 대한 건조 고체 중량 기준으로 올리고사카라이드의 백만 당 부(ppm)의 단위로 측정될 수 있다. 특정 양태에서, 올리고사카라이드 제제의 건조 고체 질량은 DP1+ 종의 건조-기준 질량으로서 측정된다. 다른 양태에서, 올리고사카라이드 제제의 건조 고체 질량은 DP2+ 종의 건조-기준 질량으로서 측정된다.
본원에 사용된, 용어 "특정 용량"은 시간 단위에 대해 이의 체질량을 기준으로, 동물에 의해 소비된 올리고사카라이드 제제의 양을 지칭한다. 일부 양태에서, 특정 용량은 일 당 동물의 kg 체중 당 올리고사카라이드 제제의 mg(건조 고체-기준)의 단위(즉, mg/kg/일)로 측정될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "무수-아단위"는 모노사카라이드(또는 모노사카라이드 아단위)의 열적 탈수의 생성물 또는 당 카라멜화 생성물을 지칭한다. 예컨대, "무수-아단위"는 무수-모노사카라이드, 예컨대 무수-글루코스일 수 있다. 또 다른 예로, "무수-아단위"는 글리코시드 결합을 통해 하나 이상의 전형적- 또는 무수-모노사카라이드 아단위와 결합할 수 있다.
용어 "올리고사카라이드"는 모노사카라이드 또는 글리코시드 결합에 의해 결합된 2개 이상의 모노사카라이드를 함유하는 화합물을 지칭한다. 이에 따라, 올리고사카리이드는 전형적인 모노사카라이드, 무수-모노사카라이드, 또는 2개 이상의 모노사카라이드 아단위를 함유하는 화합물을 포함하되, 하나 이상의 모노사카라이드 아단위는 임의적으로 및 독립적으로 하나 이상의 무수-아단위로 대체될 수 있다. 올리고사카라이드는 작용화될 수 있다. 본원에 사용된 용어 올리고사카라이드는 모든 종의 올리고사카라이드를 포괄하되, 올리고사카라이드에서 각각의 모노사카라이드 아단위는 독립적으로 및 임의적으로 작용화되고/거나 이의 상응하는 무수-모노사카라이드 아단위로 대체될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "올리고사카라이드 제제"는 하나 이상의 올리고사카라이드를 포함하는 제제를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "글루코-올리고사카라이드"는 글루코스, 또는 글리코시드 결합에 의해 결합된 2개 이상의 모노사카라이드 아단위를 함유하는 화합물을 지칭한다. 이에 따라, 글루코-올리고사카라이드는 글루코스; 무수-글루코스; 또는 글리코시드 결합에 의해 결합된 2개 이상의 모노사카라이드 아단위를 함유하는 화합물을 포함하되, 전술한 글루코스 모노사카라이드 아단위 중 하나 이상은 각각 임의적으로 및 독립적으로 무수-글루코스 아단위로 대체된다.
본원에 사용된 용어 "갈락토-올리고사카라이드"는 갈락토스, 글리코시드 결합에 의해 결합된 2개 이상의 갈락토스 모노사카라이드 아단위를 함유하는 화합물을 지칭한다. 이에 따라, 갈락토-올리고사카라이드 갈락토스; 무수-갈락토스; 또는 글리코시드 결합에 의해 결합된 2개 이상의 갈락토스 모노사카라이드 아단위를 함유하는 화합물을 포함하되, 하나 이상의 갈락토스 모노사카라이드 아단위는 각각 임의적으로 및 독립적으로 무수-갈락토스 아단위로 대체된다.
본원에 사용된 용어 "글루코-갈락토-올리고사카라이드 제제"는 글루코스 및 갈락토스의 완전 또는 불완전 당 축합 반응으로부터 생성된 조성물을 지칭한다. 따라서, 일부 양태에서, 글루코-갈락토스-올리고사카라이드 제제는 글루코-올리고사카라이드, 갈락토-올리고사카라이드, 글리코시드 결합에 의해 결합된 하나 이상의 글루코스 모노사카라이드 아단위와 하나 이상의 갈락토스 모노사카라이드 아단위를 포함하는 화합물, 및 이들의 조합을 포함한다. 일부 양태에서, 글루코-갈락토스-올리고사카라이드 제제는 글루코-올리고사카라이드, 및 글리코시드 결합에 의해 결합된 하나 이상의 글루코스 모노사카라이드 아단위와 하나 이상의 갈락토스 모노사카라이드 아단위를 함유하는 화합물을 포함한다. 일부 양태에서, 글루코-갈락토스-올리고사카라이드 제제는 갈락토-올리고사카라이드, 및 글리코시드 결합에 의해 결합된 하나 이상의 글루코스 모노사카라이드 아단위와 하나 이상의 갈락토스 모노사카라이드 아단위를 함유하는 화합물을 포함한다. 일부 양태에서, 글루코-갈락토스-올리고사카라이드 제제는 글리코시드 결합에 의해 결합한 하나 이상의 글루코스 모노사카라이드 아단위와 하나 이상의 갈락토스 모노사카라이드 아단위를 함유하는 화합물을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "모노사카라이드 단위" 및 "모노사카라이드 아단위"는 상호대체가능하게 사용된다. "모노사카라이드 아단위"는 올리고사카라이드에서 모노사카라이드 단량체를 지칭한다. 1의 중합도를 갖는 올리고사카라이드의 경우, 올리고사카라이드는 모노사카라이드 아단위 또는 모노사카라이드로서 지칭될 수 있다. 2 이상의 중합도를 갖는 올리고사카라이드의 경우, 이의 모노사카라이드 아단위는 글리코시드 결합을 통해 결합된다.
본원에 사용된 용어 "전형적인 모노사카라이드"는 무수-아단위를 함유하지 않는 모노사카라이드를 지칭한다. 용어 "전형적인 다이사카라이드"는 무수-아단위를 함유하지 않는 다이사카라이드를 지칭한다. 따라서, 용어 "전형적-아단위"는 무수-아단위가 아닌 아단위를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "상대적 빈도" 또는 "빈도"는 종이 통상 또는 희귀하게 존재함에 대한 종의 빈도를 지칭한다. 예컨대, 10% 무수-아단위-함유 올리고사카라이드(상대적 빈도를 기준으로 함)를 포함하는 DP1 분획은 10%의 DP1 올리고사카라이드가 무수-모노사카라이드인 다수의 DP1 올리고사카라이드를 지칭할 수 있다. 상대적 빈도는, 예컨대 올리고사카라이드의 특정 DP 분획의 경우, 적합한 분석 계측, 예컨대 질량 스펙트럼 분석 및 액체 크로마토그래피, 예컨대 LC-MS/MS, GC-MS, HPLC-MS, 및 MALDI-MS에 의해 측정될 수 있다. 일부 양태에서, 상대적 빈도는 관심 분획에 상응하는 크로마토그래프(예컨대, LC-MS/MS, GC-MS, 및 HPLC-MS)의 피크 아래의 면적을 적분함으로써 측정된다. 일부 양태에서, 상대적 빈도는 피크 강도(예컨대, MALDI-MS)에 의해 측정된다. 일부 양태에서, 상대적 빈도는 분석 방법의 조합, 예컨대 액체 크로마토그래피에 의한 분리 후 중량 측정에 의해 측정된다.
본원에 사용된 단수형은 맥락에 달리 명시되지 않는 한 다수의 지시 대상을 포함한다. 따라서, "제제"에 대한 지시는 다수의 이러한 제제를 포함하고, "올리고사카라이드"에 대한 지시는 하나 이상의 올리고사카라이드(또는 다수의 올리고사카라이드) 및 당업자에게 공지된 이의 등가물 등에 대한 지시를 포함한다.
범위가 물리적 특성, 예컨대 분자량, 또는 화학적 특성, 예컨대 화학식에 대해 본원에서 사용될 때, 본원의 범위 및 특정 양태의 모든 조합 및 하위조합이 포합되는 것으로 의도된다. 수 또는 수치 범위를 지칭할 때 용어 "약"은 상기 수 또는 수 범위가 실험적 가변성 내(또는 통계 실험 오차 내) 근사값임을 의미하고, 따라서 수 또는 수 범위는 일부 경우 언급되는 수 또는 수 범위의 1 내지 15%로 달라질 것이다. 일부 양태에서, 용어 "약"은 제시된 값 또는 범위의 15%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5%, 0.1% 또는 0.05% 이내를 의미한다.
용어 "포함하는"(및 관련 용어, 예컨대 "포함하다" 또는 "함유하다" 또는 "갖는" 또는 "포함하는")은 포함하지만 이렇게 기술된 것들로 필수적으로 제한되지는 않도록 의도된다.
II. 올리고사카라이드 제제의 조성물
영양 조성물에 사용하는 데 적합한 올리고사카라이드 제제가 본원에 개시된다. 한 양상에서, 각각 1 내지 n의 별개의 중합도를 갖는 올리고사카라이드의 적어도 n개의 분획(DP1 내지 DPn 분획)을 포함하는 올리고사카라이드 제제가 본원에 기술되고, 이때 n은 2 이상의 정수이다. 일부 양태에서, n은 2 초과의 정수, 예컨대 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및 10이다. 일부 양태에서, n은 3 이상의 정수이다. 일부 양태에서, n은 1 내지 100의 정수, 예컨대 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 40, 또는 50이다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제의 각각의 1 내지 n개의 분획은 독립적으로 0.1 내지 90%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(질량 분광법 또는 LC-MS/MS 또는 GC-MS에 의해 측정된 상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제의 각각의 1 내지 n개의 분획은 독립적으로 약 0.1 내지 약 15%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제의 각각의 1 내지 n개의 분획은 독립적으로 약 0.5 내지 약 15%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다. 일부 양태에서, DP1 및 DP2 분획은 각각 독립적으로 약 0.1 내지 약 15%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(MALDI-MS와 같은 질량 분광법 또는 LC-MS/MS 또는 GC-MS에 의해 측정된 상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, DP1 및 DP2 분획은 각각 독립적으로 약 0.5 내지 약 15%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다. 일부 양태에서, DP1 및 DP2 분획은 각각 독립적으로 약 0.1%, 0.2%, 0.3%, 0.4%, 0.5%, 0.8%, 1%, 2% 또는 3% 내지 약 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14% 또는 15%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(질량 분광법, LC-MS/MS 또는 GC-MS에 의해 측정된 상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 각각의 분획 중 올리고사카라이드의 상대적 빈도는 중합도에 따라 단조 감소된다.
한 양상에서, 기술된 올리고사카라이드 제제는 합성 올리고사카라이드 제제이다. 일부 양태에서, 합성 올리고사카라이드 제제는 살아있는 개체를 요하지 않는 방법에 의해 제조된 다수의 올리고사카라이드를 지칭한다. 일부 양태에서, 합성 올리고사카라이드 제제는 효소를 요하지 않는 방법에 의해 제조된 다수의 올리고사카라이드를 지칭한다. 일부 양태에서, 합성 올리고사카라이드 제제는 화학적 방법에 의해 제조된 다수의 올리고사카라이드를 지칭한다. 특정 양태에서, 합성 올리고사카라이드 제제는 당의 축합에 의해 제조된 다수의 올리고사카라이드를 지칭한다.
올리고사카라이드의 프리바이오틱 유용성
미생물 집단, 예컨대 동물 장내 미생물군집의 복잡한 기능적 조절을 나타내는 무수-당 성분 및/또는 당 탈수 생성물 성분을 포함하는 올리고사카라이드 제제가 본원에 개시된다. 올리고사카라이드 제제는 미생물상에 의한 발효성 탄소의 유용성 및 이로운 종으로의 직접적인 대사 플럭스를 조절하는 유용성을 제공하여, 이에 따라 미생물군집-매개된 건강 또는 영양 이익을 제공한다.
소화되지 않는 탄수화물은 미생물 집단에 발효성 탄소 공급원을 제공함으로써 프리바이오틱스로서 작용할 수 있다. 예를 들어, 기용성 식물 섬유가 풍부한 식이는 장내 미생물상에 영양분을 주는 이의 능력이 확인되었다. 추가적으로, 피피도게닉 프리바이오틱스는 비피더스균의 성장을 지원하고(예컨대, 비피도박테리움(Bifidobacterium) 속의 구성원), 락토게닉 프리바이오틱스는 락토바실러스 종의 성장을 지원한다.
프리바이오틱 섬유는 단쇄 지방산(SCFA)과 같은 이로운 화학 종으로 발효될 수 있다. 프리바이오틱 섬유는 내성 전분; 셀룰로스; 펙틴, 예컨대 람노갈락탄, 라라비노갈락탄, 아라비난; 헤미셀룰로스, 예컨대 아라비녹실란, 자일로글루칸, 글루코말난, 갈락토만난 및 b-글루칸; 폴리프럭탄, 예컨대 이눌린 및 레반; 및 검, 예컨대 알기네이트를 포함한다. 이눌린은 통상적인 비피게닉 프리바이오틱 섬유이다.
다른 경우에, 프리바이오틱스는 세포 표면 수용체 부위의 경쟁적인 결합과 같은 항-부착 기전을 통해 숙주 유기체에 이식되고, 이에 따라 감염시키는 병원균성 세균의 능력을 방해함으로써 작용한다. 특정 갈락토-올리고사카라이드는 다양한 장병원균성 유기체, 예컨대 에스케리치아 종의 효과적인 항-부착을 제공한다.
프리바이오틱스는 전형적으로 식이로의 혼입에 의해 숙주 동물에 제공되고, 이때 용량-의존적 반응을 나타낸다(적어도 포화 역치까지). 예를 들어, 더 높은 용량의 비피게닉 프리바이오틱, 예컨대 이눌린의 제공은 비피도박테리움 종의 집단에서 더 큰 증가를 제공하는 경향이 있다. 이눌린의 더 높은 용량은 발효를 통한 SCFA의 더 높은 생산에 상응한다. 이는 프리바이오틱가 대사 탄소 공급원을 제공하고, 더 많은 탄소가 더 많은 발효된 생성물로 번역되기 때문이다. 유사하게, 항-부착 프리바이오틱의 더 높은 용량은 경쟁적인 결합 표면 수용체 부위의 가능성을 제공한다.
개질된 단량체 아단위를 포함하는 특정 탄수화물 종은 미생물 시스템이 프리바이오틱 공급원으로 달리 이용가능한 다른 탄수화물을 이용하는 방식에 영향을 줄 수 있다. 예를 들어, 이러한 탄수화물 종은 세균 전분 이용 시스템(SUS), 즉, 세포-표면 인식, 글리코시드 절단 및 전분 대사물질의 수입을 나타내는 단백질을 조절하는 개질된 탄수화물 종일 수 있다.
동물의 미생물총의 복잡한 조절을 할 수 있는 탄수화물 조성물은 동물 미생물군집에 대한 이의 영향을 통해 동물 건강 및 영양을 개선하는 사료 첨가제로서 유용성을 갖는다. 예를 들어, 장내 미생물상에 의한 부티레이트 생산의 조절은 건강한 장내 점막, 장벽 기능 및 항-염증성 효과를 촉진함으로써 동물에게 건강 이익을 부여한다. 프로피온산 생산의 조절은 증가된 포도당생성을 통해 동물의 식이로부터 추출된 대사 에너지에 영향을 준다. 관련 미생물 집단은, 예를 들어, 가금류, 돼지, 개, 고양이, 말의 회장, 공장 및 맹장 및/또는 대변 미생물총, 또는 축우, 암소, 양 등의 반추동물 미생물총을 포함한다. 다른 미생물 집단은 피부 미생물상, 코 미생물상 등을 포함한다.
또한, 올리고사카라이드 제제가 무수-아단위의 존재에 기인하여 복잡한 영양 조성물, 완전한 동물 사료에서 선택적으로 분석되고 정량분석될 수 있다는 점에서 유리함이 본원에 개시된다. 올리고사카라이드 제제와 같은 사료 첨가제의 존재 및/또는 농도에 대해 검정할 수 있는 상업적이 유용성이 존재한다. 이러한 검정은 첨가제가 베이스 영양 조성물과 일관되게 배합되어 의도되는 용량 또는 포함 수준으로 첨가제를 포함하는 최종 영양 조성물을 제공하는지를 측정하는 품질 관리의 목적으로 수행될 수 있다.
그러나, 영양 조성물 자체는 다량의 다양한 탄수화물 구조(예컨대, 전분, 식물 섬유 및 펙틴)를 포함한다. 따라서, 소량의 올리고사카라이드-기반 사료 첨가제를 영양 조성물의 베이스로서 존재하는 다른 탄수화물의 광활한 바다에서 구별하는 것은 특히 도전이다. 따라서, 올리고사카라이드 제제가 무수-아단위를 통해 영양 조성물 중 다른 탄수화물 공급원과 구별하는 수단을 제공함이 본원에 개시된다.
중합도(DP) 분포
일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제는 1 내지 n으로부터 선택되는 구별되는 중합도를 갖는 올리고사카라이드의 적어도 n개의 분획(DP1 내지 DPn 분획)을 포함한다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 각각의 분획이 1 내지 n의 구별되는 중합도를 갖는 올리고사카라이드의 n개의 분획(DP1 내지 DPn 분획)을 포함한다. 일부 양태에서, DP1 분획은 하나 이상의 모노사카라이드 및/또는 하나 이상의 무수-모노사카라이드를 포함한다. 예를 들어, 일부 양태에서, DP1 분획은 글루코스, 갈락토스, 프럭토스, 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스, 1,6-무수-β-D-글루코피라노스, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 일부 양태에서, DP2 분획은 하나 이상의 전형적인 다이사카라이드 및 하나 이상의 무수-아단위-함유 다이사카라이드를 포함한다. 일부 양태에서, DP2 분획은 락토스를 포함한다.
일부 양태에서, n은 2 이상, 3 이상, 5 이상, 6 이상, 7 이상, 8 이상, 9 이상, 10 이상, 11 이상, 12 이상, 13 이상, 14 이상, 15 이상, 16 이상, 17 이상, 18 이상, 19 이상, 20 이상, 21 이상, 22 이상, 23 이상, 24 이상, 25 이상, 26 이상, 27 이상, 28 이상, 29 이상, 30 이상, 31 이상, 32 이상, 33 이상, 34 이상, 35 이상, 36 이상, 37 이상, 38 이상, 39 이상, 40 이상, 41 이상, 42 이상, 43 이상, 44 이상, 45 이상, 46 이상, 47 이상, 48 이상, 49 이상, 50 이상, 51 이상, 52 이상, 53 이상, 54 이상, 55 이상, 56 이상, 57 이상, 58 이상, 59 이상, 60 이상, 61 이상, 62 이상, 63 이상, 64 이상, 65 이상, 66 이상, 67 이상, 68 이상, 69 이상, 70 이상, 71 이상, 72 이상, 73 이상, 74 이상, 75 이상, 76 이상, 77 이상, 78 이상, 79 이상, 80 이상, 81 이상, 82 이상, 83 이상, 84 이상, 85 이상, 86 이상, 87 이상, 88 이상, 89 이상, 90 이상, 91 이상, 92 이상, 93 이상, 94 이상, 95 이상, 96 이상, 97 이상, 98 이상, 99 이상, 또는 100 이상이다. 일부 양태에서, n은 2, 3, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 또는 100이다. 일부 양태에서, n은 10 미만, 11 미만, 12 미만, 13 미만, 14 미만, 15 미만, 16 미만, 17 미만, 18 미만, 19 미만, 20 미만, 21 미만, 22 미만, 23 미만, 24 미만, 25 미만, 26 미만, 27 미만, 28 미만, 29 미만, 30 미만, 31 미만, 32 미만, 33 미만, 34 미만, 35 미만, 36 미만, 37 미만, 38 미만, 39 미만, 40 미만, 41 미만, 42 미만, 43 미만, 44 미만, 45 미만, 46 미만, 47 미만, 48 미만, 49 미만, 50 미만, 51 미만, 52 미만, 53 미만, 54 미만, 55 미만, 56 미만, 57 미만, 58 미만, 59 미만, 60 미만, 61 미만, 62 미만, 63 미만, 64 미만, 65 미만, 66 미만, 67 미만, 68 미만, 69 미만, 70 미만, 71 미만, 72 미만, 73 미만, 74 미만, 75 미만, 76 미만, 77 미만, 78 미만, 79 미만, 80 미만, 81 미만, 82 미만, 83 미만, 84 미만, 85 미만, 86 미만, 87 미만, 88 미만, 89 미만, 90 미만, 91 미만, 92 미만, 93 미만, 94 미만, 95 미만, 96 미만, 97 미만, 98 미만, 99 미만, 또는 100 미만이다. 일부 양태에서, n은 2 내지 100, 5 내지 90, 10 내지 90, 10 내지 80, 10 내지 70, 10 내지 60, 10 내지 50, 10 내지 40, 10 내지 30, 15 내지 60, 15 내지 50, 15 내지 45, 15 내지 40, 15 내지 35, 또는 15 내지 30이다.
올리고사카라이드 제제의 중합도의 분포는 임의의 적합한 분석 방법 및 계측, 예컨대 비제한적으로 말단기 방법, 삼투압(삼투측정), 초원심분리, 점도 측정, 광 산란법, 크기 배제 크로마토그래피(SEC), SEC-MALLS, 장 흐름 분획법(FFF), 비대칭 흐름 장 흐름 분획법(A4F), 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC), 및 질량 스펙트럼 분석(MS)에 의해 측정될 수 있다. 예컨대, 중합도의 분포는 질량 스펙트럼 분석, 예컨대 매트릭스-보조 레이저 탈착/이온화(MALDI)-MS, 액체 크로마토그래피(LC)-MS, 또는 기체 크로마토그래피(GC)-MS에 의해 측정 및/또는 검출될 수 있다. 또 다른 예로, 중합도의 분포는 SEC, 예컨대 겔 투과 크로마토그래피(GPC)에 의해 측정 및/또는 검출될 수 있다. 또 다른 예로, 중합도의 분포는 HPLC, FFF, 또는 A4F에 의해 측정 및/또는 검출될 수 있다. 일부 양태에서, 중합도의 분포는 MALDI-MS에 의해 측정 및/또는 검출된다. 일부 양태에서, 중합도의 분포는 GC-MS 또는 LC-MS에 의해 측정 및/또는 검출된다. 일부 양태에서, 중합도의 분포는 SEC에 의해 측정 및/또는 검출된다. 일부 양태에서, 중합도의 분포는 HPLC에 의해 측정 및/또는 검출된다. 일부 양태에서, 중합도의 분포는 분석 계측의 조합, 예컨대 MALDI-MS 및 SEC에 의해 측정 및/또는 검출된다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제의 중합도는 이의 분자량 및 분자량 분포에 근거하여 측정될 수 있다. 예컨대, 도 2는 다양한 분획의 중합도 및 관찰된 분획 모두에서 무수-아단위-함유 올리고사카라이드의 존재를 나타내는 MALDI-MS 스펙트럼을 도시한 것이다(-18 g/mol 분자량 오프셋(offset) 피크).
일부 양태에서, 대다수의 분획 중 올리고사카라이드의 상대적 빈도는 이의 중합도에 따라 단조 감소된다. 일부 양태에서, 6 미만, 5 미만, 4 미만, 3 미만, 또는 2 미만의 올리고사카라이드의 상대적 빈도의 올리고사카라이드의 분획은 이의 중합도에 따라 단조 감소하지 않는다.
일부 양태에서, 5 이상, 10 이상, 15 이상, 20 이상, 25 이상, 30 이상, 35 이상, 40 이상, 45 이상, 또는 50 이상의 올리고사카라이드의 상대적 빈도의 DP 분획은 이의 중합도에 따라 단조 감소된다. 일부 양태에서, 5 이상, 10 이상, 15 이상, 20 이상, 25 이상, 30 이상, 35 이상, 40 이상, 45 이상, 또는 50 이상의 개수의 연속적인 DP 분획에서 올리고사카라이드의 상대적 빈도는 이의 중합도에 따라 단조 감소된다. 일부 양태에서, 5 이상, 10 이상, 20 이상, 또는 30 이상의 올리고사카라이드의 상대적 빈도의 DP 분획은 이의 중합도에 따라 단조 감소된다. 일부 양태에서, 5 이상, 10 이상, 20 이상, 또는 30 이상의 올리고사카라이드의 상대적 빈도의 연속적인 DP 분획은 이의 중합도에 따라 단조 감소된다.
일부 양태에서, 각각의 n개의 분획에서 올리고사카라이드의 상대적 빈도는 이의 중합도에 따라 단조 감소된다. 예컨대, 도 10은 각각의 n개의 분획에서 올리고사카라이드의 상대적 빈도가 이의 DP에 따라 단조 감소하는 DP 분포의 예를 제시한다. 예컨대, 일부 양태에서, DP3 분획 중 올리고사카라이드의 상대적 빈도는 이의 중합도에 따라 단조 감소하지 않는데, 즉 DP3 분획 중 올리고사카라이드의 상대적 빈도는 DP4 분획 중 올리고사카라이드의 상대적 빈도보다 낮다. 일부 양태에서, DP2 분획 중 올리고사카라이드의 상대적 빈도는 DP3 분획 중 올리고사카라이드의 상대적 빈도보다 낮다. 예를 들어, 도 11은 DP2 분획 중 올리고사카라이드의 상대적 빈도가 이의 중합도에 따라 단조 감소되지 않는 중합도 분포를 도시한다.
일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제는 약 1 내지 약 50%, 약 1 내지 약 40%, 약 1 내지 약 35%, 약 1 내지 약 30%, 약 1 내지 약 25%, 약 1 내지 약 20%, 약 1 내지 약 15%, 약 5 내지 약 50%, 약 5 내지 약 40%, 약 5 내지 약 35%, 약 5 내지 약 30%, 약 5 내지 약 25%, 약 5 내지 약 20%, 약 5 내지 약 15%, 약 10 내지 약 50%, 약 10 내지 약 40%, 약 10 내지 약 35%, 약 10 내지 약 30%, 약 10 내지 약 25%, 약 10 내지 약 20%, 또는 약 10 내지 약 15%의 DP1 분획 함량을 갖는다(중량 또는 상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 약 10 내지 약 35%, 약 10 내지 약 20%, 또는 약 10 내지 약 15%의 DP1 분획 함량을 갖는다(중량 또는 상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, DP1 분획 함량은 MALDI-MS에 의해 측정된다. 일부 양태에서, DP1 분획 함량은 HPLC에 의해 측정된다. 일부 양태에서, DP1 분획 함량은 LC-MS/MS 또는 GC-MS에 의해 측정된다.
일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제는 약 1 내지 약 35%, 약 1 내지 약 30%, 약 1 내지 약 25%, 약 1 내지 약 20%, 약 1 내지 약 15%, 약 1 내지 약 10%, 약 5 내지 약 30%, 약 5 내지 약 25%, 약 5 내지 약 20%, 약 5 내지 약 15%, 또는 약 5 내지 약 10%의 DP2 분획 함량을 갖는다(중량 또는 상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 약 5 내지 약 25%, 약 5 내지 약 20%, 약 5 내지 약 15%, 또는 약 5 내지 약 10%의 DP2 분획 함량을 갖는다(중량 또는 상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, DP2 분획 함량은 MALDI-MS에 의해 측정된다. 일부 양태에서, DP2 분획 함량은 HPLC에 의해 측정된다. 일부 양태에서, DP2 분획 함량은 LC-MS/MS 또는 GC-MS에 의해 측정된다.
일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제는 약 1 내지 약 30%, 약 1 내지 약 25%, 약 1 내지 약 20%, 약 1 내지 약 15%, 약 1 내지 약 10%, 약 5 내지 약 30%, 약 5 내지 약 25%, 약 5 내지 약 20%, 약 5 내지 약 15%, 또는 약 5 내지 약 10%의 DP3 분획 함량을 갖는다(중량 또는 상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 약 1 내지 약 15%, 약 1 내지 약 10%, 약 5 내지 약 15%, 또는 약 5 내지 약 10%의 DP3 분획 함량을 갖는다(중량 또는 상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, DP3 분획 함량은 MALDI-MS에 의해 측정된다. 일부 양태에서, DP3 분획 함량은 HPLC에 의해 측정된다. 일부 양태에서, DP3 분획 함량은 LC-MS/MS 또는 GC-MS에 의해 측정된다.
일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제는 약 0.1 내지 약 20%, 약 0.1 내지 약 15%, 약 0.1 내지 약 10%, 약 0.1 내지 약 5%, 약 1 내지 약 20%, 약 1 내지 약 15%, 약 1 내지 약 10%, 또는 약 1 내지 약 5%의 DP4 분획 함량을 갖는다(중량 또는 상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 약 1 내지 약 15%, 약 1 내지 약 10%, 또는 약 1 내지 약 5%의 DP4 분획 함량을 갖는다(중량 또는 상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제는 약 0.1 내지 약 15%, 약 0.1 내지 약 10%, 약 0.1 내지 약 5%, 약 1 내지 약 15%, 약 1 내지 약 10%, 또는 약 1 내지 약 5%의 DP5 분획 함량을 갖는다(중량 또는 상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 약 1 내지 약 10% 또는 약 1 내지 약 5%의 DP5 분획 함량을 갖는다(중량 또는 상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, DP4 및/또는 DP5 분획 함량은 MALDI-MS에 의해 측정된다. 일부 양태에서, DP4 및/또는 DP5 분획 함량은 HPLC에 의해 측정된다. 일부 양태에서, DP4 및/또는 DP5 분획 함량은 LC-MS/MS 또는 GC-MS에 의해 측정된다.
일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제에서 DP1 분획에 대한 DP2 분획의 비는 약 0.01 내지 약 0.8, 약 0.02 내지 약 0.7, 약 0.02 내지 약 0.6, 약 0.02 내지 약 0.5, 약 0.02 내지 약 0.4, 약 0.02 내지 약 0.3, 약 0.02 내지 약 0.2, 약 0.1 내지 약 0.6, 약 0.1 내지 약 0.5, 약 0.1 내지 약 0.4, 또는 약 0.1 내지 약 0.3이다(이의 중량 또는 상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제에서 DP1 분획에 대한 DP2 분획의 비는 약 0.02 내지 약 0.4이다(이의 중량 또는 상대적 빈도를 기준으로 함).
일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제에서 DP2 분획에 대한 DP3 분획의 비는 약 0.01 내지 약 0.7, 약 0.01 내지 약 0.6, 약 0.01 내지 약 0.5, 약 0.01 내지 약 0.4, 약 0.01 내지 약 0.3, 또는 약 0.01 내지 약 0.2이다(중량 또는 상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제에서 DP2 분획에 대한 DP3 분획의 비는 약 0.01 내지 약 0.3이다(중량 또는 상대적 빈도를 기준으로 함).
일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제에서 DP1 및 DP2 분획의 응집체 함량은 70% 미만, 60% 미만, 50% 미만, 40% 미만, 30% 미만, 20% 미만, 또는 10% 미만이다(중량 또는 상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제에서 DP1 및 DP2 분획의 응집체 함량은 50% 미만, 30% 미만, 또는 10% 미만이다(중량 또는 상대적 빈도를 기준으로 함).
일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제는 2 내지 10의 범위 내의 평균 DP 값을 갖는다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 약 2 내지 약 8, 약 2 내지 약 5, 또는 약 2 내지 약 4의 평균 DP 값을 갖는다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 약 3.5의 평균 DP 값을 갖는다. 평균 DP 값은 SEC 또는 원소 분석에 의해 측정될 수 있다.
무수-아단위 수준
일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제 중 올리고사카라이드의 각각의 n개의 분획은 독립적으로 무수-아단위 수준을 포함한다. 예를 들어, 일부 양태에서, DP1 분획은 상대적 빈도를 기준으로 약 10%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함하고, DP2 분획은 상대적 빈도를 기준으로 약 15%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다. 다른 예의 경우, 일부 양태에서, DP1, DP2, 및 DP3 분획은 각각 상대적 빈도를 기준으로 각각 약 5%, 약 10%, 및 약 2%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드의 2개 이상의 분획은 유사한 수준의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다. 예를 들어, 일부 양태에서, DP1 및 DP3 분획은 각각 약 5%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다.
일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제에서 각각의 1 내지 n개의 분획은 독립적으로 약 0.1 내지 15%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(질량 분광법, LC-MS/MS 또는 GC-MS에 의해 측정된 상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제의 각각의 1 내지 n개의 분획은 독립적으로 약 0.5 내지 15%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드롤 포함한다(질량 분광법, LC-MS/MS 또는 GC-MS에 의해 측정된 상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, LC-MS/MS는 DP1, DP2, 및/또는 DP3 분획 중 올리고사카라이드의 상대적 빈도를 측정하는 데 사용된다. 일부 양태에서, GC-MS 또는 LC-MS/MS는 DP1, DP2, 및/또는 DP3 분획 중 올리고사카라이드의 상대적 빈도를 측정하는 데 사용된다. 일부 양태에서, MALDI-MS는 DP3 분획, DP4 분획 또는 더 고차의 DP 분획 중 올리고사카라이드의 상대적 빈도를 측정하는 데 사용된다. 일부 양태에서, 특정 분획의 상대적 빈도는 상기 분획에 상응하게 설계된 LC-MS/MS 크로마토그램의 피크 아래의 면적을 적분함으로써 측정될 수 있다.
무수-아단위의 수준은 임의의 적합한 분석 방법, 예컨대 핵 자기 공명(NMR) 분광법, 질량 분광법, HPLC, FFF, A4F 또는 이들의 임의의 조합에 의해 측정될 수 있다. 일부 양태에서, 무수-아단위의 수준은, 적어도 부분적으로, MALDI-MS와 같은 질량 분광법에 의해 측정된다. 일부 양태에서, 무수-아단위의 수준은, 적어도 부분적으로, NMR에 의해 측정된다. 일부 양태에서, 무수-아단위-함유 올리고사카라이드의 수준은, 적어도 부분적으로, HPLC에 의해 측정된다. 일부 양태에서, 무수-아단위-함유 올리고사카라이드의 수준은, 도 2의 -18 g/mol MW 오프셋 피크에 의해 설명된 바와 같이, MALDI-MS에 의해 측정된다. 일부 양태에서, 무수-아단위 종의 존재 및 유형은, 실시예 11, 도 3 및 도 4에 의해 설명된 바와 같이, NMR에 의해 측정 및/또는 검출될 수 있다. 일부 양태에서, 무수-아단위-함유 올리고사카라이드의 상대적 빈도는 MALDI-MS에 의해 측정된다. 일부 양태에서, 무수-아단위-함유 올리고사카라이드의 상대적 빈도는 도 15a 내지 15c, 16a 내지 16c, 17a 내지 17Cc 및 18a 내지 18c에 도시된 봐와 같이 LC-MS/MS에 의해 측정된다. 일부 양태에서, 무수-아단위-함유 올리고사카라이드의 상대적 빈도는 도 19a 및 19b, 20a 및 20b, 21a 및 21b 및 22a 및 22b에 도시된 바와 같이 GC-MS에 의해 측정된다.
일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제의 하나 이상의 분획은 80% 미만, 70% 미만, 60% 미만, 50% 미만, 40% 미만, 30% 미만, 20% 미만, 19% 미만, 18% 미만, 17% 미만, 16% 미만, 15% 미만, 14% 미만, 13% 미만, 12% 미만, 11% 미만, 10% 미만, 9% 미만, 8% 미만, 7% 미만, 6% 미만, 5% 미만, 4% 미만, 3% 미만, 2% 미만, 또는 1% 미만의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제의 하나 이상의 분획은 10% 미만, 9% 미만, 8% 미만, 7% 미만, 6% 미만, 5% 미만, 4% 미만, 3% 미만, 또는 2% 미만의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 다른 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제의 하나 이상의 분획은 0.5% 초과, 0.8% 초과, 1% 초과, 2% 초과, 3% 초과, 4% 초과, 5% 초과, 6% 초과, 7% 초과, 8% 초과, 9% 초과, 10% 초과, 11% 초과, 12% 초과, 13% 초과, 14% 초과, 15% 초과, 16% 초과, 17% 초과, 18% 초과, 19% 초과, 20% 초과, 30% 초과, 40% 초과, 50% 초과, 60% 초과, 70% 초과, 또는 80% 초과의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 다른 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제의 하나 이상의 분획은 20% 초과, 21% 초과, 22% 초과, 23% 초과, 24% 초과, 25% 초과, 26% 초과, 27% 초과, 28% 초과, 29% 초과, 또는 30% 초과의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제의 하나 이상의 분획(예컨대, DP1, DP2, 및/또는 DP3)은 약 0.1%, 약 0.2%, 약 0.3%, 약 0.4%, 약 0.5%, 약 0.6%, 약 0.7%, 약 0.8%, 약 0.9%, 약 1%, 약 1.5%, 약 2%, 약 3%, 약 4%, 약 5%, 약 6%, 약 7%, 약 8%, 약 9%, 약 10%, 약 11%, 약 12%, 약 13%, 약 14%, 약 15%, 약 16%, 약 17%, 약 18%, 약 19%, 약 20%, 약 21%, 약 22%, 약 23%, 약 24%, 약 25%, 또는 약 30%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제의 하나 이상의 분획(예컨대, DP1, DP2, 및/또는 DP3)은 약 0.1%, 약 0.2%, 약 0.3%, 약 0.4%, 약 0.5%, 약 0.6%, 약 0.7%, 약 0,8%, 약 0.9%, 약 1%, 약 2%, 약 3%, 약 4%, 약 5%, 약 6%, 약 7%, 약 8%, 약 9%, 또는 약 10%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제의 하나 이상의 분획(예컨대, DP1, DP2, 및/또는 DP3)은 약 0.1 내지 약 90%, 약 0.5 내지 약 90%, 약 0.5 내지 약 80%, 약 0.5 내지 약 70%, 약 0.5 내지 약 60%, 약 0.5 내지 약 50%, 약 0.5 내지 약 40%, 약 0.5 내지 약 30%, 약 0.5 내지 약 20%, 약 0.5 내지 약 10%, 약 0.5 내지 약 9%, 약 0.5 내지 약 8%, 약 0.5 내지 약 7%, 약 0.5 내지 약 6%, 약 0.5 내지 약 5%, 약 0.5 내지 약 4%, 약 0.5 내지 약 3%, 약 0.5 내지 약 2%, 약 1 내지 약 10%, 약 2 내지 약 9%, 약 2 내지 약 8%, 약 2 내지 약 7%, 약 2 내지 약 6%, 약 2 내지 약 5%, 약 2 내지 약 4%, 약 2 내지 약 3%, 또는 약 5 내지 약 10%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제의 DP1 및 DP2 분획은 각각 독립적으로 약 0.1%, 0.5%, 0.6%, 0.7%, 0.8%, 0.9%, 1%, 1.1%, 1.2%, 1.3%, 1.4% 또는 1.5% 내지 약 8%, 9%, 10%, 11%, 12% 또는 15%의 범위 내의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(질량 분광법, LC-MS/MS 또는 GC-MS에 의해 측정된 상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, DP1 및 DP2 분획은 각각 독립적으로 질량 스펙트럼 분석, LC-MS/MS 또는 GC-MS에 의해 측정시 상대적 빈도를 기준으로 약 0.5 내지 약 15%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다.
일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제의 각각의 분획은 80% 미만, 70% 미만, 60% 미만, 50% 미만, 40% 미만, 30% 미만, 20% 미만, 19% 미만, 18% 미만, 17% 미만, 16% 미만, 15% 미만, 14% 미만, 13% 미만, 12% 미만, 11% 미만, 10% 미만, 9% 미만, 8% 미만, 7% 미만, 6% 미만, 5% 미만, 4% 미만, 3% 미만 또는 2% 미만의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제의 각각의 분획은 10% 미만, 9% 미만, 8% 미만, 7% 미만, 6% 미만, 5% 미만, 4% 미만, 3% 미만, 또는 2% 미만의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 다른 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제의 각각의 분획은 2% 초과, 3% 초과, 4% 초과, 5% 초과, 6% 초과, 7% 초과, 8% 초과, 9% 초과, 10% 초과, 11% 초과, 12% 초과, 13% 초과, 14% 초과, 15% 초과, 16% 초과, 17% 초과, 18% 초과, 19% 초과, 20% 초과, 30% 초과, 40% 초과, 50% 초과, 60% 초과, 70% 초과, 또는 80% 초과의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 다른 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제의 각각의 분획은 20% 초과, 21% 초과, 22% 초과, 23% 초과, 24% 초과, 25% 초과, 26% 초과, 27% 초과, 28% 초과, 29% 초과, 또는 30% 초과의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제의 각각의 분획은 약 0.1%, 약 0.2%, 약 0.3%, 약 0.4%, 약 0.5%, 약 0.6%, 약 0.7%, 약 0.8%, 약 0.9%, 약 1%, 약 2%, 약 3%, 약 4%, 약 5%, 약 6%, 약 7%, 약 8%, 약 9%, 약 10%, 약 11%, 약 12%, 약 13%, 약 14%, 약 15%, 약 16%, 약 17%, 약 18%, 약 19%, 약 20%, 약 21%, 약 22%, 약 23%, 약 24%, 약 25%, 또는 약 30%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제의 각각의 분획은 약 0.1%, 약 0.2%, 약 0.3%, 약 0.4%, 약 0.5%, 약 0.6%, 약 0.7%, 약 0,8%, 약 0.9%, 약 1%, 약 2%, 약 3%, 약 4%, 약 5%, 약 6%, 약 7%, 약 8%, 약 9%, 또는 약 10%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제의 각각의 분획은 약 0.1 내지 약 90%, 약 0.1 내지 약 15%, 약 0.5 내지 약 90%, 약 0.5 내지 약 80%, 약 0.5 내지 약 70%, 약 0.5 내지 약 60%, 약 0.5 내지 약 50%, 약 0.5 내지 약 40%, 약 0.5 내지 약 30%, 약 0.5 내지 약 20%, 약 0.5 내지 약 10%, 약 0.5 내지 약 9%, 약 0.5 내지 약 8%, 약 0.5 내지 약 7%, 약 0.5 내지 약 6%, 약 0.5 내지 약 5%, 약 0.5 내지 약 4%, 약 0.5 내지 약 3%, 약 0.5 내지 약 2%, 약 2 내지 약 9%, 약 2 내지 약 8%, 약 2 내지 약 7%, 약 2 내지 약 6%, 약 2 내지 약 5%, 약 2 내지 약 4%, 약 2 내지 약 3%, 또는 약 5 내지 약 10%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함).
일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제는 80% 미만, 70% 미만, 60% 미만, 50% 미만, 40% 미만, 30% 미만, 20% 미만, 19% 미만, 18% 미만, 17% 미만, 16% 미만, 15% 미만, 14% 미만, 13% 미만, 12% 미만, 11% 미만, 10% 미만, 9% 미만, 8% 미만, 7% 미만, 6% 미만, 5% 미만, 4% 미만, 3% 미만, 2% 미만, 또는 1% 미만의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 10% 미만, 9% 미만, 8% 미만, 7% 미만, 6% 미만, 5% 미만, 4% 미만, 3% 미만, 또는 2% 미만의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 다른 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 0.5% 초과, 0.8% 초과, 1% 초과, 2% 초과, 3% 초과, 4% 초과, 5% 초과, 6% 초과, 7% 초과, 8% 초과, 9% 초과, 10% 초과, 11% 초과, 12% 초과, 13% 초과, 14% 초과, 15% 초과, 16% 초과, 17% 초과, 18% 초과, 19% 초과, 20% 초과, 30% 초과, 40% 초과, 50% 초과, 60% 초과, 70% 초과, 또는 80% 초과의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 다른 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 20% 초과, 21% 초과, 22% 초과, 23% 초과, 24% 초과, 25% 초과, 26% 초과, 27% 초과, 28% 초과, 29% 초과, 또는 30% 초과 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 약 0.1%, 약 0.2%, 약 0.3%, 약 0.4%, 약 0.5%, 약 0.6%, 약 0.7%, 약 0.8%, 약 0.9%, 약 1%, 약 2%, 약 3%, 약 4%, 약 5%, 약 6%, 약 7%, 약 8%, 약 9%, 약 10%, 약 11%, 약 12%, 약 13%, 약 14%, 약 15%, 약 16%, 약 17%, 약 18%, 약 19%, 약 20%, 약 21%, 약 22%, 약 23%, 약 24%, 약 25%, 또는 약 30%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 약 0.1%, 약 0.2%, 약 0.3%, 약 0.4%, 약 0.5%, 약 0.6%, 약 0.7%, 약 0.8%, 약 0.9%, 약 1%, 약 2%, 약 3%, 약 4%, 약 5%, 약 6%, 약 7%, 약 8%, 약 9%, 또는 약 10%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 약 0.1 내지 약 90%, 약 0.1 내지 약 15%, 약 0.5 내지 약 90%, 약 0.5 내지 약 80%, 약 0.5 내지 약 70%, 약 0.5 내지 약 60%, 약 0.5 내지 약 50%, 약 0.5 내지 약 40%, 약 0.5 내지 약 30%, 약 0.5 내지 약 20%, 약 0.5 내지 약 10%, 약 0.5 내지 약 9%, 약 0.5 내지 약 8%, 약 0.5 내지 약 7%, 약 0.5 내지 약 6%, 약 0.5 내지 약 5%, 약 0.5 내지 약 4%, 약 0.5 내지 약 3%, 약 0.5 내지 약 2%, 약 2 내지 약 9%, 약 2 내지 약 8%, 약 2 내지 약 7%, 약 2 내지 약 6%, 약 2 내지 약 5%, 약 2 내지 약 4%, 약 2 내지 약 3%, 또는 약 5 내지 약 10%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함).
일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제의 DP1 분획은 30% 미만, 20% 미만, 19% 미만, 18% 미만, 17% 미만, 16% 미만, 15% 미만, 14% 미만, 13% 미만, 12% 미만, 11% 미만, 10% 미만, 9% 미만, 8% 미만, 7% 미만, 6% 미만, 5% 미만, 4% 미만, 3% 미만, 2% 미만, 또는 1% 미만의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제의 DP1 분획은 0.1% 초과, 0.5% 초과, 0.8% 초과, 1% 초과, 1.5% 초과, 2% 초과, 3% 초과, 4% 초과, 5% 초과, 6% 초과, 7% 초과, 8% 초과, 9% 초과, 10% 초과, 11% 초과, 12% 초과, 13% 초과, 14% 초과, 또는 15% 초과의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제의 DP1 분획은 약 0.5%, 약 1%, 약 2%, 약 3%, 약 4%, 약 5%, 약 6%, 약 7%, 약 8%, 약 9%, 약 10%, 약 11%, 약 12%, 약 13%, 약 14%, 약 15%, 약 16%, 약 17%, 약 18%, 약 19%, 또는 약 20%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제의 DP1 분획은 약 0.1 내지 약 15%, 약 0.1 내지 약 20%, 약 0.5 내지 약 20%, 0.5 내지 약 10%, 약 0.5 내지 약 15%, 약 1 내지 약 20%, 약 1 내지 약 15%, 약 1 내지 약 10%, 약 2 내지 약 14%, 약 3 내지 약 13%, 약 4 내지 약 12%, 약 5 내지 약 11%, 약 5 내지 약 10%, 약 6 내지 약 9%, 또는 약 7 내지 약 8%, 또는 이 사이의 임의의 범위의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제의 DP1 분획은 약 0.5 내지 약 10%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 무수-아단위-함유 올리고사카라이드의 상대적 빈도는 질량 분광법, 예컨대 MALDI-MS에 의해 측정된다. 일부 양태에서, 무수-아단위-함유 올리고사카라이드의 상대적 빈도는 LC-MS/MS에 의해 측정된다. 일부 양태에서, 무수-아단위-함유 올리고사카라이드의 상대적 빈도는 GC-MS에 의해 측정된다.
일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제의 DP2 분획은 30% 미만, 20% 미만, 19% 미만, 18% 미만, 17% 미만, 16% 미만, 15% 미만, 14% 미만, 13% 미만, 12% 미만, 11% 미만, 10% 미만, 9% 미만, 8% 미만, 7% 미만, 6% 미만, 5% 미만, 4% 미만, 3% 미만, 2% 미만, 또는 1% 미만의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제의 DP2 분획은 0.1% 초과, 0.5% 초과, 0.8% 초과, 1% 초과, 1.5% 초과, 2% 초과, 3% 초과, 4% 초과, 5% 초과, 6% 초과, 7% 초과, 8% 초과, 9% 초과, 10% 초과, 11% 초과, 12% 초과, 13% 초과, 14% 초과, 또는 15% 초과의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제의 DP2 분획은 약 0.5%, 약 1%, 약 2%, 약 3%, 약 4%, 약 5%, 약 6%, 약 7%, 약 8%, 약 9%, 약 10%, 약 11%, 약 12%, 약 13%, 약 14%, 약 15%, 약 16%, 약 17%, 약 18%, 약 19%, 또는 약 20%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제의 DP2 분획은 약 0.1 내지 약 15%, 약 0.1 내지 약 20%, 약 0.5 내지 약 20%, 0.5 내지 약 10%, 약 0.5 내지 약 15%, 약 1 내지 약 20%, 약 1 내지 약 15%, 약 1 내지 약 10%, 약 2 내지 약 14%, 약 3 내지 약 13%, 약 4 내지 약 12%, 약 5 내지 약 11%, 약 5 내지 약 10%, 약 6 내지 약 9%, 또는 약 7 내지 약 8%, 또는 이 사이의 임의의 범위의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제의 DP2 분획은 약 5 내지 약 10%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 무수-아단위-함유 올리고사카라이드의 상대적 빈도는 질량 분광법, 예컨대 MALDI-MS에 의해 측정된다. 일부 양태에서, 무수-아단위-함유 올리고사카라이드의 상대적 빈도는 LC-MS/MS에 의해 측정된다. 일부 양태에서, 무수-아단위-함유 올리고사카라이드의 상대적 빈도는 GC-MS에 의해 측정된다.
일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제의 DP3 분획은 30% 미만, 20% 미만, 19% 미만, 18% 미만, 17% 미만, 16% 미만, 15% 미만, 14% 미만, 13% 미만, 12% 미만, 11% 미만, 10% 미만, 9% 미만, 8% 미만, 7% 미만, 6% 미만, 5% 미만, 4% 미만, 3% 미만, 2% 미만, 또는 1% 미만의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제의 DP3 분획은 0.1% 초과, 0.5% 초과, 0.8% 초과, 1% 초과, 1.5% 초과, 2% 초과, 3% 초과, 4% 초과, 5% 초과, 6% 초과, 7% 초과, 8% 초과, 9% 초과, 10% 초과, 11% 초과, 12% 초과, 13% 초과, 14% 초과, 또는 15% 초과의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제의 DP3 분획은 약 0.5%, 약 1%, 약 2%, 약 3%, 약 4%, 약 5%, 약 6%, 약 7%, 약 8%, 약 9%, 약 10%, 약 11%, 약 12%, 약 13%, 약 14%, 약 15%, 약 16%, 약 17%, 약 18%, 약 19%, 또는 약 20%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제의 DP3 분획은 약 0.1 내지 약 15%, 약 0.1 내지 약 20%, 약 0.5 내지 약 20%, 0.5 내지 약 10%, 약 0.5 내지 약 15%, 약 1 내지 약 20%, 약 1 내지 약 15%, 약 1 내지 약 10%, 약 2 내지 약 14%, 약 3 내지 약 13%, 약 4 내지 약 12%, 약 5 내지 약 11%, 약 5 내지 약 10%, 약 6 내지 약 9%, 또는 약 7 내지 약 8%, 또는 이 사이의 임의의 범위의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제의 DP3 분획은 약 5 내지 약 10%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다(상대적 빈도를 기준으로 함). 일부 양태에서, 무수-아단위-함유 올리고사카라이드의 상대적 빈도는 질량 분광법, 예컨대 MALDI-MS에 의해 측정된다. 일부 양태에서, 무수-아단위-함유 올리고사카라이드의 상대적 빈도는 LC-MS/MS에 의해 측정된다. 일부 양태에서, 무수-아단위-함유 올리고사카라이드의 상대적 빈도는 GC-MS에 의해 측정된다.
일부 양태에서, 무수-아단위-함유 올리고사카라이드는 하나 이상의 무수-아단위를 포함한다. 예컨대, DP1 무수-아단위-함유 올리고사카라이드는 하나의 무수-아단위를 포함한다. 일부 양태에서, DPn개의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드는 1 내지 n개의 무수-아단위를 포함할 수 있다. 예컨대, 일부 양태에서, DP2 무수-아단위-함유 올리고사카라이드는 1 또는 2개의 무수-아단위를 포함한다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제 중 각각의 올리고사카라이드는 독립적으로 0, 1 또는 2개의 무수-아단위를 포함한다. 일부 양태에서, 99% 초과, 95% 초과, 90% 초과, 85% 초과, 80% 초과, 75% 초과, 70% 초과, 65% 초과, 60% 초과, 55% 초과, 50% 초과, 45% 초과, 40% 초과, 35% 초과, 또는 30% 초과의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드는 단지 하나의 무수-아단위만을 갖는다. 일부 양태에서, 99% 초과, 95% 초과, 90% 초과, 85% 초과, 또는 80% 초과의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드는 단지 하나의 무수-아단위만을 갖는다.
일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제 중 또는 올리고사카라이드 제제의 각각의 분획 중 하나 이상의 올리고사카라이드는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 무수-아단위(각각 글리코시드 결합을 통해 결합됨)를 포함하되, 각각의 무수-아단위를 결합하는 글리코시드 결합은 독립적으로 선택된다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제 중 또는 올리고사카라이드 제제의 각각의 분획 중 하나 이상의 올리고사카라이드는 1, 2, 또는 3개의 무수-아단위(각각 글리코시드 결합을 통해 결합됨)를 포함하되, 각각의 무수-아단위를 결합하는 글리코시드 결합은 독립적으로 선택된다. 일부 양태에서, 50% 초과, 60% 초과, 70% 초과, 80% 초과, 90% 초과, 또는 99% 초과의 올리고사카라이드 제제 중 또는 각각의 분획 중 올리고사카라이드는 1, 2, 또는 3개의 무수-아단위(각각 글리코시드 결합을 통해 결합됨)를 포함하되, 각각의 무수-아단위를 결합하는 글리코시드 결합은 독립적으로 선택된다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제 중 또는 각각의 분획 중 하나 이상의 올리고사카라이드는 글리코시드 결합을 통해 결합된 1개 무수-아단위를 포함한다. 일부 양태에서, 50% 초과, 60% 초과, 70% 초과, 80% 초과, 90% 초과, 또는 99% 초과의 올리고사카라이드 제제 중 또는 각각의 분획 중 올리고사카라이드는 글리코시드 결합을 통해 결합된 1개 무수-아단위를 포함한다.
무수-아단위 종
일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 상이한 종의 무수-아단위를 포함한다. 일부 양태에서, 예시적인 무수-아단위-함유 올리고사카라이드는 도 5, 도 12, 및 도 13에 제시된다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 모노사카라이드의 열적 탈수의 생성물인 하나 이상의 무수-아단위, 즉 무수-모노사카라이드 아단위를 포함한다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 모노사카라이드의 가역적 열적 탈수의 생성물인 하나 이상의 무수-아단위를 포함한다.
무수-모노사카라이드(또는 무수-모노사카라이드 아단위)가 모노사카라이드의 열적 탈수 생성물의 하나 이상의 종을 지칭함이 이해되어야 한다. 예컨대, 일부 양태에서, 무수-글루코스는 1,6-무수-β-D-글루코피라노스(레보글루코산) 또는 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스를 지칭한다. 일부 양태에서, 다수의 무수-글루코스는 다수의 1,6-무수-β-D-글루코피라노스(레보글루코산), 다수의 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스, 글루코스의 다수의 기타 열적 탈수 생성물, 또는 이들의 임의의 조합을 지칭한다. 유사하게, 일부 양태에서, 다수의 무수-갈락토스는 갈락토스, 또는 이들의 임의의 조합의 다수의 열적 탈수 생성물을 지칭한다.
일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제는 하나 이상의 무수-글루코스, 무수-갈락토스, 무수-만노스, 무수-알로스, 무수-알트로스, 무수-굴로스, 무수-인도스, 무수-탈로스, 무수-프럭토스, 무수-리보스, 무수-아라비노스, 무수-람노스, 무수-릭소스, 무수-자일로스, 또는 상기 아단위의 임의의 조합을 포함한다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 하나 이상의 무수-글루코스, 무수-갈락토스, 무수-만노스, 또는 무수-프럭토스 아단위를 포함한다. 일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제는 하기 중 하나 이상을 포함한다: 1,6-무수-3-O-β-D-글루코피라노실-β-D-글루코피라노스, 1,6-무수-3-O-α-D-글루코피라노실-β-D-글루코피라노스, 1,6-무수-2-O-β-D-글루코피라노실-β-D-글루코피라노스, 1,6-무수-2-O-α-D-글루코피라노실-β-D-글루코피라노스, 1,6-무수-β-D-셀로바이오스(셀로바이오산), 1,6-무수-β-D-셀로트라이오스(셀로트라이오산), 1,6-무수-β-D-셀로테트라오스(셀로테트라오산), 1,6-무수-β-D-셀로펜타오스(셀로펜타오산), 및 1,6-무수-β-D-말토스(말토산).
일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 하나 이상의 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 아단위를 포함한다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 하나 이상의 1,6-무수-β-D-글루코피라노스(레보글루코산) 아단위를 포함한다. 예컨대, 도 12는 2개의 DP1 무수-아단위-함유 올리고사카라이드(레보글루코산 및 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스) 및 DP2 무수-아단위-함유 올리고사카라이드(무수-셀로바이오스)를 제시한다.
무수-아단위의 종의 존재 및 수준은 올리고사카라이드의 제조에 사용되는 사료용 당에 따라 달라질 수 있다. 예컨대, 일부 양태에서, 글루코-올리고사카라이드는 무수-글루코스 아단위를 포함하고, 갈락토-올리고사카라이드는 무수-갈락토스 아단위를 포함하고, 글루코-갈락토-올리고사카라이드는 무수-글루코스 및 무수-갈락토스 아단위를 포함한다.
일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 및 1,6-무수-β-D-글루코피라노스 둘 다의 무수-아단위를 포함한다. 일부 양태에서, 0.1% 이상, 1% 이상, 5% 이상, 10% 이상, 20% 이상, 30% 이상, 40% 이상, 50% 이상, 60% 이상, 70% 이상, 80% 이상, 90% 이상, 또는 99% 이상의 무수-아단위는 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 및 1,6-무수-β-D-글루코피라노스로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 양태에서, 1% 이상, 5% 이상, 10% 이상, 20% 이상, 30% 이상, 40% 이상, 50% 이상, 60% 이상, 70% 이상, 80% 이상, 또는 90% 이상의 무수-아단위는 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스이다. 일부 양태에서, 1% 이상, 5% 이상, 10% 이상, 20% 이상, 30% 이상, 40% 이상, 50% 이상, 또는 60% 이상의 무수-아단위는 1,6-무수-β-D-글루코피라노스이다.
일부 양태에서, 제제 중 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 대 1,6-무수-β-D-글루코피라노스의 비는 약 10:1 내지 1:10, 9:1 내지 1:10, 8:1 내지 1:10, 7:1 내지 1:10, 6:1 내지 1:10, 5:1 내지 1:10, 4:1 내지 1:10, 3:1 내지 1:10, 2:1 내지 1:10, 10:1 내지 1:9, 10:1 내지 1:8, 10:1 내지 1:7, 10:1 내지 1:6, 10:1 내지 1:5, 10:1 내지 1:4, 10:1 내지 1:3, 10:1 내지 1:2, 또는 1:1 내지 3:1이다. 일부 양태에서, 제제 중 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 대 1,6-무수-β-D-글루코피라노스의 비는 약 10:1, 9:1, 8:1, 7:1, 6:1, 5:1, 4:1, 3:1, 2:1, 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9, 또는 1:10이다. 일부 양태에서, 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 대 1,6-무수-β-D-글루코피라노스의 비는 약 2:1이다.
일부 양태에서, 각각의 분획 중 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 대 1,6-무수-β-D-글루코피라노스의 비는 약 10:1 내지 1:10, 9:1 내지 1:10, 8:1 내지 1:10, 7:1 내지 1:10, 6:1 내지 1:10, 5:1 내지 1:10, 4:1 내지 1:10, 3:1 내지 1:10, 2:1 내지 1:10, 10:1 내지 1:9, 10:1 내지 1:8, 10:1 내지 1:7, 10:1 내지 1:6, 10:1 내지 1:5, 10:1 내지 1:4, 10:1 내지 1:3, 10:1 내지 1:2, 또는 1:1 내지 3:1이다. 일부 양태에서, 각각의 분획 중 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 대 1,6-무수-β-D-글루코피라노스의 비는 약 10:1, 9:1, 8:1, 7:1, 6:1, 5:1, 4:1, 3:1, 2:1, 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9, 또는 1:10이다. 일부 양태에서, 각각의 분획 중 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 대 1,6-무수-β-D-글루코피라노스의 비는 약 2:1이다.
일부 양태에서, 하나 이상의 분획 중 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 대 1,6-무수-β-D-글루코피라노스의 비는 약 10:1 내지 1:10, 9:1 내지 1:10, 8:1 내지 1:10, 7:1 내지 1:10, 6:1 내지 1:10, 5:1 내지 1:10, 4:1 내지 1:10, 3:1 내지 1:10, 2:1 내지 1:10, 10:1 내지 1:9, 10:1 내지 1:8, 10:1 내지 1:7, 10:1 내지 1:6, 10:1 내지 1:5, 10:1 내지 1:4, 10:1 내지 1:3, 10:1 내지 1:2, 또는 1:1 내지 3:1이다. 일부 양태에서, 하나 이상의 분획 중 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 대 1,6-무수-β-D-글루코피라노스의 비는 약 10:1, 9:1, 8:1, 7:1, 6:1, 5:1, 4:1, 3:1, 2:1, 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9, 또는 1:10이다. 일부 양태에서, 하나 이상의 분획 중 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 대 1,6-무수-β-D-글루코피라노스의 비는 약 2:1이다.
일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제는 무수-아단위-함유 DP2 올리고사카라이드를 포함한다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 무수-락토스, 무수-수크로스, 무수-셀로바이오스, 또는 이들의 조합을 포함한다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 약 2 내지 20, 2 내지 15, 5 내지 20, 5 내지 15, 또는 5 내지 10 종의 DP2 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다. 일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제는 셀로바이오산을 포함하지 않거나, 검출가능한 수준의 셀로바이오산을 포함하지 않는다.
일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제는 당 카라멜화 생성물인 하나 이상의 무수-아단위를 포함한다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 당 카라멜화 생성물인 하나 이상의 무수-아단위를 포함한다: 메탄올; 에탄올; 퓨란; 메틸 글리옥살; 2-메틸 퓨란; 비닐 아세테이트; 글리코알데히드; 아세트산; 아세트올; 퓨르퓨르알; 2-퓨란메탄올; 3-퓨란메탄올; 2-하이드록시 사이클로펜트-2-엔-1-온; 5-메틸 퓨르퓨르알; 2(5H)-퓨란온; 2 메틸 사이클로펜텐올론; 레보글루코센온; 고리 하이드록시 락톤; 1,4,3,6-2무수-α-D-글루코피라노스; 2무수 글루코피라노스; 및 5-하이드록시 메틸 퓨르퓨르알(5-hmf). 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 5-hmf 무수-아단위를 포함한다.
일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제 또는 하나 이상의 DP 분획에서, 카라멜화 생성물인 무수-아단위는 모노사카라이드의 열적 탈수의 생성물인 무수-아단위보다 빈도가 낮다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제 또는 하나 이상의 분획에서, 카라멜화 생성물인 무수-아단위는 모노사카라이드의 열적 탈수의 생성물인 무수-아단위보다 빈도가 높다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제 또는 하나 이상의 분획에서, 카라멜화 생성물인 무수-아단위 및 모노사카라이드의 열적 탈수의 생성물인 무수-아단위는 유사한 빈도를 갖는다.
일부 양태에서, 약 0.01 내지 약 50%, 약 0.01 내지 약 40%, 약 0.01 내지 약 30%, 약 0.01 내지 약 20%, 약 0.01 내지 약 10%, 약 0.01 내지 약 5%, 약 0.01 내지 약 4%, 약 0.01 내지 약 3%, 약 0.01 내지 약 2%, 약 0.01 내지 약 1%, 약 0.01 내지 약 0.5%, 약 0.1 내지 약 50%, 약 0.1 내지 약 40%, 약 0.1 내지 약 30%, 약 0.1 내지 약 20%, 약 0.1 내지 약 10%, 약 0.1 내지 약 5%, 약 0.1 내지 약 4%, 약 0.1 내지 약 3%, 약 0.1 내지 약 2%, 약 0.1 내지 약 1%, 또는 약 0.1 내지 약 0.5%의 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제 중 무수-아단위는 카라멜화 생성물이다. 일부 양태에서, 약 0.1 내지 약 5%, 약 0.1 내지 약 2%, 또는 약 0.1 내지 약 1%의 올리고사카라이드 제제 중 무수-아단위는 카라멜화 생성물이다. 일부 양태에서, 50% 미만, 40% 미만, 30% 미만, 25% 미만, 20% 미만, 15% 미만, 14% 미만, 13% 미만, 12% 미만, 11% 미만, 10% 미만, 9% 미만, 8% 미만, 7% 미만, 6% 미만, 5% 미만, 4% 미만, 3% 미만, 2% 미만, 또는 1% 미만의 올리고사카라이드 제제 중 무수-아단위는 카라멜화 생성물이다.
일부 양태에서, 약 0.01 내지 약 50%, 약 0.01 내지 약 40%, 약 0.01 내지 약 30%, 약 0.01 내지 약 20%, 약 0.01 내지 약 10%, 약 0.01 내지 약 5%, 약 0.01 내지 약 4%, 약 0.01 내지 약 3%, 약 0.01 내지 약 2%, 약 0.01 내지 약 1%, 약 0.01 내지 약 0.5%, 약 0.1 내지 약 50%, 약 0.1 내지 약 40%, 약 0.1 내지 약 30%, 약 0.1 내지 약 20%, 약 0.1 내지 약 10%, 약 0.1 내지 약 5%, 약 0.1 내지 약 4%, 약 0.1 내지 약 3%, 약 0.1 내지 약 2%, 약 0.1 내지 약 1%, 또는 약 0.1 내지 약 0.5%의 본원에 기술된 제제의 하나 이상의 분획(예컨대, DP1, DP2 및/또는 DP3) 중 무수-아단위는 카라멜화 생성물이다. 일부 양태에서, 약 0.1 내지 약 5%, 약 0.1 내지 약 2%, 또는 약 0.1 내지 약 1%의 제제의 하나 이상의 분획(예컨대, DP1, DP2 및/또는 DP3) 중 무수-아단위는 카라멜화 생성물이다. 일부 양태에서, 50% 미만, 40% 미만, 30% 미만, 25% 미만, 20% 미만, 15% 미만, 14% 미만, 13% 미만, 12% 미만, 11% 미만, 10% 미만, 9% 미만, 8% 미만, 7% 미만, 6% 미만, 5% 미만, 4% 미만, 3% 미만, 2% 미만, 또는 1% 미만의 제제의 하나 이상의 분획 중 무수-아단위는 카라멜화 생성물이다. 일부 양태에서, 20% 미만, 15% 미만, 14% 미만, 13% 미만, 12% 미만, 11% 미만, 10% 미만, 9% 미만, 8% 미만, 7% 미만, 6% 미만, 5% 미만, 4% 미만, 3% 미만, 2% 미만, 또는 1% 미만의 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제의 DP1, DP2, 및/또는 DP3 분획 중 무수-아단위는 카라멜화 생성물이다.
일부 양태에서, 약 0.01 내지 약 50%, 약 0.01 내지 약 40%, 약 0.01 내지 약 30%, 약 0.01 내지 약 20%, 약 0.01 내지 약 10%, 약 0.01 내지 약 5%, 약 0.01 내지 약 4%, 약 0.01 내지 약 3%, 약 0.01 내지 약 2%, 약 0.01 내지 약 1%, 약 0.01 내지 약 0.5%, 약 0.1 내지 약 50%, 약 0.1 내지 약 40%, 약 0.1 내지 약 30%, 약 0.1 내지 약 20%, 약 0.1 내지 약 10%, 약 0.1 내지 약 5%, 약 0.1 내지 약 4%, 약 0.1 내지 약 3%, 약 0.1 내지 약 2%, 약 0.1 내지 약 1%, 또는 약 0.1 내지 약 0.5%의 올리고사카라이드 제제의 각각의 분획 중 무수-아단위는 카라멜화 생성물이다. 일부 양태에서, 약 0.1 내지 약 5%, 약 0.1 내지 약 2%, 또는 약 0.1 내지 약 1%의 제제의 각각의 분획 중 무수-아단위는 카라멜화 생성물이다. 일부 양태에서, 50% 미만, 40% 미만, 30% 미만, 20% 미만, 25% 미만, 20% 미만, 15% 미만, 14% 미만, 13% 미만, 12% 미만, 11% 미만, 10% 미만, 9% 미만, 8% 미만, 7% 미만, 6% 미만, 5% 미만, 4% 미만, 3% 미만, 2% 미만, 또는 1% 미만의 제제의 각각의 분획 중 무수-아단위는 카라멜화 생성물이다.
일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제 중 각각의 올리고사카라이드는 독립적으로 및 임의적으로 무수-아단위를 포함한다. 일부 양태에서, 2개 이상의 독립적인 올리고사카라이드는 동일하거나 상이한 무수-아단위를 포함한다. 일부 양태에서, 2개 이상의 독립적인 올리고사카라이드는 상이한 무수-아단위를 포함한다. 예컨대, 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 1,6-무수-β-D-글루코피라노스 아단위를 포함하는 DP1 무수-아단위-함유 올리고사카라이드, 및 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 아단위를 포함하는 DP2 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제 중 하나 이상의 올리고사카라이드는 2개 이상의 동일하거나 상이한 무수-아단위를 포함한다.
일부 양태에서, 2 이상의 중합도를 갖는 올리고사카라이드 제제의 임의의 분획(즉, DP2 내지 DPn 분획)에서, 무수-아단위는 하나 이상의 전형적- 또는 무수-아단위에 결합될 수 있다. 일부 양태에서, DP2 내지 DPn 분획에서, 하나 이상의 무수-아단위는 1, 2, 또는 3개의 기타 전형적- 또는 무수-아단위에 결합된다. 일부 양태에서, DP2 내지 DPn 분획에서, 하나 이상의 무수-아단위는 1 또는 2개의 전형적-아단위에 결합된다. 일부 양태에서, DP2 내지 DPn 분획에서, 하나 이상의 무수-아단위는 하나의 전형적-아단위에 결합된다. 일부 양태에서, DP2 내지 DPn 분획 중 임의의 분획에서, 99% 초과, 90% 초과, 80% 초과, 70% 초과, 60% 초과, 50% 초과, 40% 초과, 또는 30% 초과의 무수-아단위는 하나의 전형적-아단위에 결합된다. 일부 양태에서, 각각의 DP2 내지 DPn 분획에서, 99% 초과, 90% 초과, 80% 초과, 70% 초과, 60% 초과, 50% 초과, 40% 초과, 또는 30% 초과의 무수-아단위는 하나의 전형적-아단위에 결합된다.
일부 양태에서, 2 이상의 중합도를 갖는 올리고사카라이드 제제의 임의의 분획(즉, DP2 내지 DPn 분획)에서, 무수-아단위는 올리고사카라이드의 쇄 말단에 위치될 수 있다. 일부 양태에서, 3 이상의 중합도를 갖는 올리고사카라이드 제제의 임의의 분획(즉, DP3 내지 DPn 분획)에서, 무수-아단위는 올리고사카라이드의 쇄-말단이 아닌 위치에 위치될 수 있다. 일부 양태에서, DP2 내지 DPn 분획에서, 하나 이상의 무수-아단위는 올리고사카라이드의 쇄-말단에 위치된다. 일부 양태에서, DP2 내지 DPn 분획에서 99%, 95%, 90%, 85%, 80%, 75%, 70%, 65%, 60%, 55%, 50%, 45%, 40%, 35% 또는 30% 초과의 무수-아단위는 올리고사카라이드의 쇄-말단에 위치된다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제에서 95%, 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20% 또는 10% 초과의 무수-아단위는 올리고사카라이드의 쇄-말단에 위치된다. 일부 양태에서, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 99% 초과의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드는 쇄-말단 무수-아단위를 포함한다. 일부 양태에서, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 초과의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드는 쇄-말단 무수-아단위를 포함한다.
글리코시드 결합
일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제는 다양한 글리코시드 결합을 포함한다. 글리코시드 결합의 유형 및 분포는 올리고사카라이드 제제의 공급원 및 제조 방법에 따를 수 있다. 일부 양태에서, 다양한 글리코시드 결합의 유형 및 분포는 당업계에 공지된 적합한 방법, 예컨대 NMR에 의해 측정 및/또는 검출될 수 있다. 예컨대, 일부 양태에서, 글리코시드 결합은 1H NMR, 13C NMR, 2D NMR, 예컨대 2D JRES, HSQC, HMBC, DOSY, COSY, ECOSY, TOCSY, NOESY, 또는 ROESY, 또는 이들의 임의의 조합에 의해 측정 또는 검출된다. 일부 양태에서, 글리코시드 결합은 1H NMR에 의해 적어도 부분적으로 측정 및/또는 검출된다. 일부 양태에서, 글리코시드 결합은 13C NMR에 의해 적어도 부분적으로 측정 및/또는 검출된다. 일부 양태에서, 글리코시드 결합은 2D 1H, 13C-HSQC NMR에 의해 적어도 부분적으로 측정 및/또는 검출된다.
일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제는 하나 이상의 α-(1,2) 글리코시드 결합, α-(1,3) 글리코시드 결합, α-(1,4) 글리코시드 결합, α-(1,6) 글리코시드 결합, β-(1,2) 글리코시드 결합, β-(1,3) 글리코시드 결합, β-(1,4) 글리코시드 결합, β-(1,6) 글리코시드 결합, α-(1,1)-α 글리코시드 결합, α-(1,1)-β 글리코시드 결합, β-(1,1)-β 글리코시드 결합, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 약 0 내지 약 60 mol%, 약 5 내지 약 55 mol%, 약 5 내지 약 50 mol%, 약 5 내지 약 45 mol%, 약 5 내지 약 40 mol%, 약 5 내지 약 35 mol%, 약 5 내지 약 30 mol%, 약 5 내지 약 25 mol%, 약 10 내지 약 60 mol%, 약 10 내지 약 55 mol%, 약 10 내지 약 50 mol%, 약 10 내지 약 45 mol%, 약 10 내지 약 40 mol%, 약 10 내지 약 35 mol%, 약 15 내지 약 60 mol%, 약 15 내지 약 55 mol%, 약 15 내지 약 50 mol%, 약 15 내지 약 45 mol%, 약 15 내지 약 40 mol%, 약 15 내지 약 35 mol%, 약 20 내지 약 60 mol%, 약 20 내지 약 55 mol%, 약 20 내지 약 50 mol%, 약 20 내지 약 45 mol%, 약 20 내지 약 40 mol%, 약 20 내지 약 35 mol%, 약 25 내지 약 60 mol%, 약 25 내지 약 55 mol%, 약 25 내지 약 50 mol%, 약 25 내지 약 45 mol%, 약 25 내지 약 40 mol% 또는 약 25 내지 약 35 mol%의 α-(1,6) 글리코시드 결합의 글리코시드 결합 유형 분포를 갖는다.
일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 약 0 내지 약 50 mol%, 약 0 내지 약 40 mol%, 약 0 내지 약 35 mol%, 약 0 내지 약 30 mol%, 약 0 내지 약 25 mol%, 약 0 내지 약 20 mol%, 약 5 내지 약 40 mol%, 약 5 내지 약 35 mol%, 약 5 내지 약 30 mol%, 약 5 내지 약 25 mol%, 약 5 내지 약 20 mol%, 약 10 내지 약 40 mol%, 약 10 내지 약 35 mol%, 약 10 내지 약 20 mol%, 약 15 내지 약 40 mol%, 약 15 내지 약 35 mol%, 약 15 내지 약 30 mol%, 약 15 내지 약 25 mol% 또는 약 15 내지 약 20 mol%의 α-(1,3) 글리코시드 결합의 글리코시드 결합 유형 분포를 갖는다.
일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 약 0 내지 약 40 mol%, 약 0 내지 약 35 mol%, 약 0 내지 약 30 mol%, 약 0 내지 약 25 mol%, 약 0 내지 약 20 mol%, 약 0 내지 약 15 mol%, 약 0 내지 약 10 mol%, 약 2 내지 약 30 mol%, 약 2 내지 약 25 mol%, 약 2 내지 약 20 mol%, 약 2 내지 약 15 mol%, 약 2 내지 약 10 mol%, 약 3 내지 약 30 mol%, 약 3 내지 약 25 mol%, 약 3 내지 약 20 mol%, 약 3 내지 약 15 mol%, 약 3 내지 약 10 mol%, 약 5 내지 약 30 mol%, 약 5 내지 약 25 mol%, 약 5 내지 약 20 mol%, 약 5 내지 약 15 mol% 또는 약 5 내지 약 10 mol%의 α-(1,2) 글리코시드 결합의 글리코시드 결합 유형 분포를 갖는다.
일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 약 0 내지 약 40 mol%, 약 0 내지 약 30 mol%, 약 0 내지 약 25 mol%, 약 0 내지 약 20 mol%, 약 0 내지 약 15 mol%, 약 0 내지 약 10 mol% 또는 약 0 내지 약 5 mol%의 α-(1,4) 글리코시드 결합의 글리코시드 결합 유형 분포를 갖는다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 40 mol% 미만, 30 mol% 미만, 20 mol% 미만, 15 mol% 미만, 10 mol% 미만, 9 mol% 미만, 8 mol% 미만, 7 mol% 미만, 6 mol% 미만, 5 mol% 미만, 4 mol% 미만, 3 mol% 미만 또는 2 mol% 미만의 α-(1,4) 글리코시드 결합의 글리코시드 결합 유형 분포를 갖는다.
일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 약 0 내지 약 40 mol%, 약 0 내지 약 35 mol%, 약 0 내지 약 30 mol%, 약 0 내지 약 25 mol%, 약 0 내지 약 20 mol%, 약 0 내지 약 15 mol%, 약 0 내지 약 10 mol%, 약 2 내지 약 30 mol%, 약 2 내지 약 25 mol%, 약 2 내지 약 20 mol%, 약 2 내지 약 15 mol%, 약 2 내지 약 10 mol%, 약 5 내지 약 30 mol%, 약 5 내지 약 25 mol%, 약 5 내지 약 20 mol%, 약 5 내지 약 15 mol%, 약 5 내지 약 10 mol%, 약 8 내지 약 30 mol%, 약 8 내지 약 25 mol%, 약 8 내지 약 20 mol%, 약 8 내지 약 15 mol% 또는 약 10 내지 약 15 mol%의 β-(1,6) 글리코시드 결합의 글리코시드 결합 유형 분포를 갖는다.
일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 약 0 내지 약 40 mol%, 약 0 내지 약 35 mol%, 약 0 내지 약 30 mol%, 약 0 내지 약 25 mol%, 약 0 내지 약 20 mol%, 약 0 내지 약 15 mol%, 약 0 내지 약 10 mol%, 약 2 내지 약 30 mol%, 약 2 내지 약 25 mol%, 약 2 내지 약 20 mol%, 약 2 내지 약 15 mol%, 약 2 내지 약 10 mol%, 약 3 내지 약 30 mol%, 약 3 내지 약 25 mol%, 약 3 내지 약 20 mol%, 약 3 내지 약 15 mol%, 약 3 내지 약 10 mol%, 약 5 내지 약 30 mol%, 약 5 내지 약 25 mol%, 약 5 내지 약 20 mol%, 약 5 내지 약 15 mol% 또는 약 5 내지 약 10 mol%의 β-(1,4) 글리코시드 결합의 글리코시드 결합 유형 분포를 갖는다.
일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 약 0 내지 약 40 mol%, 약 0 내지 약 30 mol%, 약 0 내지 약 25 mol%, 약 0 내지 약 20 mol%, 약 0 내지 약 15 mol%, 약 0 내지 약 10 mol%, 약 0 내지 약 5 mol%, 약 1 내지 약 20 mol%, 약 1 내지 약 15 mol%, 약 1 내지 약 10 mol%, 약 1 내지 약 5 mol%, 약 2 내지 약 20 mol%, 약 2 내지 약 15 mol%, 약 2 내지 약 10 mol%, 또는 약 2 내지 약 5 mol%의 β-(1,2) 글리코시드 결합의 글리코시드 결합 유형 분포를 갖는다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 40 mol% 미만, 30 mol% 미만, 20 mol% 미만, 15 mol% 미만, 10 mol% 미만, 9 mol% 미만, 8 mol% 미만, 7 mol% 미만, 6 mol% 미만, 5 mol% 미만, 4 mol% 미만, 3 mol% 미만, 또는 2 mol% 미만의 β-(1,2) 글리코시드 결합의 글리코시드 결합 유형 분포를 갖는다.
일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 약 0 내지 약 40 mol%, 약 0 내지 약 30 mol%, 약 0 내지 약 25 mol%, 약 0 내지 약 20 mol%, 약 0 내지 약 15 mol%, 약 0 내지 약 10 mol%, 약 0 내지 약 5 mol%, 약 1 내지 약 20 mol%, 약 1 내지 약 15 mol%, 약 1 내지 약 10 mol%, 약 1 내지 약 5 mol%, 약 2 내지 약 20 mol%, 약 2 내지 약 15 mol%, 약 2 내지 약 10 mol%, 또는 약 2 내지 약 5 mol%의 β-(1,3) 글리코시드 결합의 글리코시드 결합 유형 분포를 갖는다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 40 mol% 미만, 30 mol% 미만, 20 mol% 미만, 15 mol% 미만, 10 mol% 미만, 9 mol% 미만, 8 mol% 미만, 7 mol% 미만, 6 mol% 미만, 5 mol% 미만, 4 mol% 미만, 3 mol% 미만, 또는 2 mol% 미만의 β-(1,3) 글리코시드 결합의 글리코시드 결합 유형 분포를 갖는다.
일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 비합성 올리고사카라이드 제제의 글리코시드 결합 유형 분포와는 상이한 글리코시드 결합 유형 분포를 갖는다. 예컨대, 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 베이스 영양 조성물과는 상이한 글리코시드 결합 유형 분포를 갖는다. 일부 양태에서, 베이스 영양 조성물은 천연 탄수화물 공급원, 예컨대 전분 및 식물 섬유를 포함한다. 천연 탄수화물 공급원 중 일부는 높은 %의 α-(1,4), α-(1,6), 및/또는 β-(1,6) 글리코시드 결합을 갖는다. 따라서, 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 베이스 영양 조성물보다 낮은 %의 α-(1,4) 글리코시드 결합을 갖는다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 베이스 영양 조성물보다 낮은 %의 α-(1,6) 글리코시드 결합을 갖는다. 다른 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 베이스 영양 조성물보다 높은 %의 α-(1,6) 글리코시드 결합을 갖는다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 베이스 영양 조성물보다 낮은 %의 β-(1,6) 글리코시드 결합을 갖는다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 효소에 의해 용이하거 소화가능하거나 가수분해가능하지 않은 글리코시드 결합을 포함한다.
구체적으로, 일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제의 글리코시드 결합 유형 분포 중 α-(1,2), α-(1,3), α-(1,4), α-(1,6), β-(1,2), β-(1,3), β-(1,4), 및/또는 β-(1,6) 글리코시드 결합은 베이스 영양 조성물의 상기 결합보다 50 mol% 이상, 40 mol% 이상, 30 mol% 이상, 20 mol% 이상, 15 mol% 이상, 10 mol% 이상, 5 mol% 이상, 2 mol% 이상, 또는 mol% 이상 더 적다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제의 글리코시드 결합 유형 분포 중 α-(1,2), α-(1,3), α-(1,4), α-(1,6), β-(1,2), β-(1,3), β-(1,4), 및/또는 β-(1,6) 글리코시드 결합은 베이스 영양 조성물의 상기 결합보다 50 mol% 이상, 40 mol% 이상, 30 mol% 이상, 20 mol% 이상, 15 mol% 이상, 10 mol% 이상, 5 mol% 이상, 2 mol% 이상, 또는 1 mol% 이상 더 많다.
특정 유형의 글리코시드 결합이 특정 유형의 모노사카라이드를 포함하는 올리고사카라이드에 적용불가할 수 있음을 당업자는 이해하여야 한다. 예컨대, 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 α-(1,2) 글리코시드 결합 및 α-(1,6) 글리코시드 결합을 포함한다. 다른 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 α-(1,2) 글리코시드 결합 및 β-(1,3) 글리코시드 결합을 포함한다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 α-(1,2) 글리코시드 결합, α-(1,3) 글리코시드 결합, 및 β-(1,6) 글리코시드 결합을 포함한다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 α-(1,2) 글리코시드 결합, α-(1,3) 글리코시드 결합, α-(1,4) 글리코시드 결합, α-(1,6) 글리코시드 결합, β-(1,2) 글리코시드 결합, β-(1,3) 글리코시드 결합, β-(1,4) 글리코시드 결합, 및 β-(1,6) 글리코시드 결합을 포함한다.
분자량
본원에 기술된 올리고사카라이드 제제의 분자량 및 분자량 분포는 임의의 적합한 분석 수단 및 계측, 예컨대 말단기 방법, 삼투압(삼투측정), 초원심분리, 점도 측정, 광 산란법, SEC, SEC-MALLS, FFF, A4F, HPLC, 및 질량 분광법에 의해 측정될 수 있다. 일부 양태에서, 분자량 및 분자량 분포는 질량 분광법, 예컨대 MALDI-MS, LC-MS, 또는 GC-MS에 의해 측정된다. 일부 양태에서, 분자량 및 분자량 분포는 크기 배제 크로마토그래피(SEC), 예컨대 겔 투과 크로마토그래피(GPC)에 의해 측정된다. 다른 양태에서, 분자량 및 분자량 분포는 HPLC에 의해 측정된다. 일부 양태에서, 분자량 및 분자량 분포는 MALDI-MS에 의해 측정된다.
일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제는 약 100 내지 약 10,000 g/mol, 약 200 내지 약 8,000 g/mol, 약 300 내지 약 5,000 g/mol, 약 500 내지 약 5,000 g/mol, 약 700 내지 약 5,000 g/mol, 약 900 내지 약 5,000 g/mol, 약 1,100 내지 약 5,000 g/mol, 약 1,300 내지 약 5,000 g/mol, 약 1,500 내지 약 5,000 g/mol, 약 1,700 내지 약 5,000 g/mol, 약 300 내지 약 4,500 g/mol, 약 500 내지 약 4,500 g/mol, 약 700 내지 약 4,500 g/mol, 약 900 내지 약 4,500 g/mol, 약 1,100 내지 약 4,500 g/mol, 약 1,300 내지 약 4,500 g/mol, 약 1,500 내지 약 4,500 g/mol, 약 1,700 내지 약 4,500 g/mol, 약 1,900 내지 약 4,500 g/mol, 약 300 내지 약 4,000 g/mol, 약 500 내지 약 4,000 g/mol, 약 700 내지 약 4,000 g/mol, 약 900 내지 약 4,000 g/mol, 약 1,100 내지 약 4,000 g/mol, 약 1,300 내지 약 4,000 g/mol, 약 1,500 내지 약 4,000 g/mol, 약 1,700 내지 약 4,000 g/mol, 약 1,900 내지 약 4,000 g/mol, 약 300 내지 약 3,000 g/mol, 약 500 내지 약 3,000 g/mol, 약 700 내지 약 3,000 g/mol, 약 900 내지 약 3,000 g/mol, 약 1,100 내지 약 3,000 g/mol, 약 1,300 내지 약 3,000 g/mol, 약 1,500 내지 약 3,000 g/mol, 약 1,700 내지 약 3,000 g/mol, 약 1,900 내지 약 3,000 g/mol, 약 2,100 내지 약 3,000 g/mol, 약 300 내지 약 2,500 g/mol, 약 500 내지 약 2,500 g/mol, 약 700 내지 약 2,500 g/mol, 약 900 내지 약 2,500 g/mol, 약 1,100 내지 약 2,500 g/mol, 약 1,300 내지 약 2,500 g/mol, 약 1,500 내지 약 2,500 g/mol, 약 1,700 내지 약 2,500 g/mol, 약 1,900 내지 약 2,500 g/mol, 약 2,100 내지 약 2,500 g/mol, 약 300 내지 약 1,500 g/mol, 약 500 내지 약 1,500 g/mol, 약 700 내지 약 1,500 g/mol, 약 900 내지 약 1,500 g/mol, 약 1,100 내지 약 1,500 g/mol, 약 1,300 내지 약 1,500 g/mol, 약 2,000 내지 약 2,800 g/mol, 약 2,100 내지 약 2,700 g/mol, 약 2,200 내지 약 2,600 g/mol, 약 2,300 내지 약 2,500 g/mol, 또는 약 2,320 내지 약 2,420 g/mol의 중량 평균 분자량을 갖는다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제의 중량 평균 분자량은 약 2,000 내지 약 2,800 g/mol, 약 2,100 내지 약 2,700 g/mol, 약 2,200 내지 약 2,600 g/mol, 약 2,300 내지 약 2,500 g/mol, 또는 약 2,320 내지 약 2,420 g/mol이다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 500 g/mol 이상, 750 g/mol 이상, 1,000 g/mol 이상, 또는 1,500 g/mol 이상 내지 1,750 g/mol 이하, 2,000 g/mol 이하, 2,250 g/mol 이하, 2,500 g/mol 이하, 또는 3,000 g/mol 이하의 중량 평균 분자량을 갖는다. 일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제의 중량 평균 분자량은 실시예 9에 따른 HPLC에 의해 측정된다.
일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제는 약 100 내지 약 10,000 g/mol, 약 200 내지 약 8,000 g/mol, 약 300 내지 약 5,000 g/mol, 약 500 내지 약 5,000 g/mol, 약 700 내지 약 5,000 g/mol, 약 900 내지 약 5,000 g/mol, 약 1,100 내지 약 5,000 g/mol, 약 1,300 내지 약 5,000 g/mol, 약 1,500 내지 약 5,000 g/mol, 약 1,700 내지 약 5,000 g/mol, 약 300 내지 약 4,500 g/mol, 약 500 내지 약 4,500 g/mol, 약 700 내지 약 4,500 g/mol, 약 900 내지 약 4,500 g/mol, 약 1,100 내지 약 4,500 g/mol, 약 1,300 내지 약 4,500 g/mol, 약 1,500 내지 약 4,500 g/mol, 약 1,700 내지 약 4,500 g/mol, 약 1,900 내지 약 4,500 g/mol, 약 300 내지 약 4,000 g/mol, 약 500 내지 약 4,000 g/mol, 약 700 내지 약 4,000 g/mol, 약 900 내지 약 4,000 g/mol, 약 1,100 내지 약 4,000 g/mol, 약 1,300 내지 약 4,000 g/mol, 약 1,500 내지 약 4,000 g/mol, 약 1,700 내지 약 4,000 g/mol, 약 1,900 내지 약 4,000 g/mol, 약 300 내지 약 3,000 g/mol, 약 500 내지 약 3,000 g/mol, 약 700 내지 약 3,000 g/mol, 약 900 내지 약 3,000 g/mol, 약 1,100 내지 약 3,000 g/mol, 약 1,300 내지 약 3,000 g/mol, 약 1,500 내지 약 3,000 g/mol, 약 1,700 내지 약 3,000 g/mol, 약 1,900 내지 약 3,000 g/mol, 약 2,100 내지 약 3,000 g/mol, 약 300 내지 약 2,500 g/mol, 약 500 내지 약 2,500 g/mol, 약 700 내지 약 2,500 g/mol, 약 900 내지 약 2,500 g/mol, 약 1,100 내지 약 2,500 g/mol, 약 1,300 내지 약 2,500 g/mol, 약 1,500 내지 약 2,500 g/mol, 약 1,700 내지 약 2,500 g/mol, 약 1,900 내지 약 2,500 g/mol, 약 2,100 내지 약 2,500 g/mol, 약 300 내지 약 2,000 g/mol, 약 500 내지 약 2,000 g/mol, 약 700 내지 약 2,000 g/mol, 약 900 내지 약 2,000 g/mol, 약 1,100 내지 약 2,000 g/mol, 약 300 내지 약 1,500 g/mol, 약 500 내지 약 1,500 g/mol, 약 700 내지 약 1,500 g/mol, 약 900 내지 약 1,500 g/mol, 약 1,100 내지 약 1,500 g/mol, 약 1,300 내지 약 1,500 g/mol, 약 1,000 내지 약 2,000 g/mol, 약 1,100 내지 약 1,900 g/mol, 약 1,200 내지 약 1,800 g/mol, 약 1,300 내지 약 1,700 g/mol, 약 1,400 내지 약 1,600 g/mol, 또는 약 1,450 내지 약 1,550 g/mol의 수 평균 분자량을 갖는다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제의 수 평균 분자량은 약 1,000 내지 약 2,000 g/mol, 약 1,100 내지 약 1,900 g/mol, 약 1,200 내지 약 1,800 g/mol, 약 1,300 내지 약 1,700 g/mol, 1,400 내지 1,600 g/mol, 또는 1,450 내지 1,550 g/mol이다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 500 g/mol 이상, 750 g/mol 이상, 1,000 g/mol 이상, 또는 1,500 g/mol 이상 내지 1,750 g/mol 이하, 2,000 g/mol 이하, 2,250 g/mol 이하, 2,500 g/mol 이하, 이하 3,000 g/mol 이하의 수 평균 분자량을 갖는다. 일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제의 수 평균 분자량은 실시예 9에 따른 HPLC에 의해 측정된다.
올리고사카라이드의 유형
올리고사카라이드 제제에 존재하는 올리고사카라이드의 종은 하나 이상의 사료용 당의 유형에 의존할 수 있다. 예를 들어, 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 사료용 당이 글루코스를 포함할 때 글루코-올리코사카라이드를 포함한다. 예를 들어, 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 사료용 당이 갈락토스를 포함할 때 갈락토-올리코사카라이드를 포함한다. 다른 예의 경우, 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 갈락토스 및 글루코스를 포함할 때 글루코-갈락토-올리고사카라이드를 포함한다.
일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제는 하나 이상의 종의 모노사카라이드 아단위를 포함한다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20종, 또는 그 이상의 상이한 종의 모노사카라이드 아단위를 갖는 올리고사카라이드를 포함한다.
일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 1, 2, 3 또는 4개의 상이한 종의 모노사카라이드 아단위를 갖는 올리고사카라이드를 포함한다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 1, 2 또는 3개의 상이한 종의 모노사카라이드 아단위를 갖는 올리고사카라이드를 포함한다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 3개의 상이한 종의 모노사카라이드 아단위를 갖는 올리고사카라이드를 포함한다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 2개의 상이한 종의 모노사카라이드 아단위를 갖는 올리고사카라이드를 포함한다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 1개의 종의 모노사카라이드 아단위를 갖는 올리고사카라이드를 포함한다.
일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 각각의 올리고사카라이드 분자가 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 상이한 종의 모노사카라이드 아단위를 포함하는 상이한 종의 올리고사카라이드를 포함한다. 일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제는 102, 103, 104 또는 105개 이상의 상이한 종의 올리고사카라이드를 포함한다. 일부 양태에서, 제제 중 일부 올리고사카라이드는 1개의 종의 모노사카라이드 아단위를 포함하고, 동일한 제제 중 일부 다른 올리고사카라이드는 2개 이상의 종의 모노사카라이드 아단위를 포함한다. 예를 들어, 일부 양태에서, 사료용 당이 글루코스 및 갈락토스일 때, 올리고사카라이드 제제는 글루코스 아단위만을 포함하는 올리고사카라이드, 갈락토스 아단위만을 포함하는 올리고사카라이드, 글루코스 및 갈락토스 아단위 둘 다를 다양한 비로 포함하는 올리고사카라이드, 또는 이들의 임의의 조합을 포함할 수 있다.
일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제의 n개의 분획 모두 또는 어느 하나는 각각의 올리고사카라이드가 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 상이한 종의 모노사카라이드 아단위를 포함하는 상이한 종의 올리고사카라이드 아단위를 포함한다. 일부 양태에서, 제제의 분획 중 일부 올리고사카라이드는 1개의 종의 모노사카라이드 아단위를 포함하고, 제제의 동일한 분획 중 일부 다른 올리고사카라이드는 2개 이상의 종의 모노사카라이드 아단위를 포함한다.
일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제는 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 모노사카라이드 아단위를 포함한다: 트라이오스, 테트로스, 펜토스, 헥소스, 헵토스, 및 이들의 임의의 조합(각각의 전술한 트라이오스, 테트로스, 펜토스, 헥소스, 또는 헵토스 아단위는 독립적으로 및 임의적으로 이의 상응하는 1개의 무수-아단위에 의해 작용화 및/또는 대체됨). 일부 양태에서, 상응하는 무수-아단위는 모노사카라이드 아단위의 열적 탈수의 생성물이다. 일부 양태에서, 상응하는 무수-아단위는 모노사카라이드 아단위의 카라멜화 생성물이다.
일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제는 펜토스 아단위, 헥소스 아단위, 또는 이들의 임의의 조합을 포함하되, 각각의 전술한 펜토스 또는 헥소스 아단위는 독립적으로 및 임의적으로 이의 상응하는 1개의 무수-아단위에 의해 작용화 및/또는 대체된다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 헥소스 아단위를 포함하되, 각각의 전술한 헥소스 아단위는 독립적으로 및 임의적으로 이의 상응하는 무수-아단위 중 하나로 대체된다.
본원에 사용된 "테트로스"는 4개의 탄소 원자를 갖는 모노사카라이드, 예컨대 에리트로스, 트레오스, 및 에리트룰로스를 지칭한다. 본원에 사용된 "펜토스"는 5개의 탄소 원자를 갖는 모노사카라이드, 예컨대 아라비노스, 릭소스, 리보스, 및 자일로스를 지칭한다. 본원에 사용된 "헥소스"는 6개의 탄소 원자를 갖는 모노사카라이드, 예컨대 알로스, 알트로스, 글루코스, 만노스, 굴로스, 이도스, 갈락토스, 탈로스, 사이코스, 프럭토스, 솔보스, 및 타가토스를 지칭한다. 본원에 사용된 "헵토스"는 7개의 탄소 원자를 갖는 모노사카라이드, 예컨대 세도헵툴로스 및 만노펩툴로스를 지칭한다.
일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제는 글루코스 아단위를 포함하되, 하나 이상의 글루코스 아단위는 무수-글루코스 아단위로 임의적으로 대체된다. 일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제는 갈락토스 아단위를 포함하되, 하나 이상의 갈락토스 아단위는 무수-갈락토스 아단위로 임의적으로 대체된다. 일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제는 갈락토스 및 글루코스 아단위를 포함하되, 하나 이상의 갈락토스 아단위 또는 하나 이상의 글루코스 아단위는 이의 상응하는 무수-아단위 중 하나로 임의적으로 대체된다. 일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제는 프럭토스 및 글루코스 아단위를 포함하되, 하나 이상의 프럭토스 아단위 또는 하나 이상의 글루코스 아단위는 이의 상응하는 무수-아단위 중 하나로 임의적으로 대체된다. 일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제는 만노스 및 글루코스 아단위를 포함하되, 하나 이상의 만노스 아단위 또는 하나 이상의 글루코스 아단위는 이의 상응하는 무수-아단위 중 하나로 임의적으로 대체된다.
일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제는 글루코-갈락토스-올리고사카라이드 제제, 글루코-올리고사카라이드 제제, 갈락토-올리고사카라이드 제제, 프럭토-올리고사카라이드 제제, 만노-올리고사카라이드 제제, 아라비노-올리고사카라이드 제제, 자일로-올리고사카라이드 제제, 글루코-프럭토-올리고사카라이드 제제, 글루코-만노-올리고사카라이드 제제, 글루코-아라비노-올리고사카라이드 제제, 글루코-자일로-올리고사카라이드 제제, 갈락토-프럭토-올리고사카라이드 제제, 갈락토-만노-올리고사카라이드 제제, 갈락토-아라비노-올리고사카라이드 제제, 갈락토-자일로-올리고사카라이드 제제, 프럭토-만노-올리고사카라이드 제제, 프럭토-아라비노-올리고사카라이드 제제, 프럭토-자일로-올리고사카라이드 제제, 만노-아라비노-올리고사카라이드 제제, 만노-자일로-올리고사카라이드 제제, 아라비노-자일로-올리고사카라이드 제제, 갈락토-아라비노-자일로-올리고사카라이드 제제, 프럭토-갈락토-자일로-올리고사카라이드 제제, 아라비노-프럭토-만노-자일로-올리고사카라이드 제제, 글루코-프럭토-갈락토-아라비노-올리고사카라이드 제제, 프럭토-글루코-아라비노-만노-자일로-올리고사카라이드 제제, 글루코-갈락토-프럭토-만노-아라비노자일로-올리고사카라이드 제제, 또는 이들의 임의의 조합을 포함하되, 상기 제제 내의 각각의 모노사카라이드 아단위는 독립적으로 및 임의적으로 이의 상응하는 1개의 무수-아단위에 의해 작용화 및/또는 대체된다.
특정 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제는 99%의 글루코스 아단위를 포함한다(중량을 기준으로 함). 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 글루코스 아단위만을 포함한다.
일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제는 약 45 내지 55%의 글루코스 아단위 및 약 55 내지 45%의 갈락토스 아단위를 포함한다(중량을 기준으로 함). 일부 특정 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 약 50% 글루코스 및 50% 갈락토스 아단위를 포함한다(중량을 기준으로 함).
일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제는 약 80 내지 95%의 글루코스 아단위 및 약 20 내지 5%의 만노스 아단위를 포함한다(중량을 기준으로 함). 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 약 85 내지 90%의 글루코스 아단위 및 약 15 내지 10%의 만노스 아단위를 포함한다(중량을 기준으로 함).
일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제는 약 80 내지 95%의 글루코스 아단위 및 약 20 내지 5%의 갈락토스 아단위를 포함한다(중량을 기준으로 함). 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 약 85 내지 90%의 글루코스 아단위 및 약 15 내지 10%의 갈락토스 아단위를 포함한다(중량을 기준으로 함).
일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제는 약 80 내지 95%의 글루코스 아단위, 0 내지 8%의 갈락토스 아단위, 및 5 내지 20%의 만노스 아단위를 포함한다(중량을 기준으로 함). 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 약 80 내지 90%의 글루코스 아단위, 1 내지 5%의 갈락토스 아단위, 및 10 내지 15%의 만노스 아단위를 포함한다(중량을 기준으로 함).
일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제는 약 1 내지 약 100 중량%, 약 50 내지 약 100 중량%, 약 80 내지 약 98 중량%, 또는 약 85 내지 약 95 중량%, 또는 이 사이의 임의의 범위의 글루코스 아단위를 포함한다. 일부 양태에서, 갈락토스 아단위는 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제 중 약 0 내지 약 90 중량%, 약 1 내지 약 50 중량%, 약 2 내지 약 20 중량%, 또는 약 5 내지 약 15 중량%, 또는 이 사이의 임의의 범위로 존재한다. 일부 양태에서, 만노스 아단위는 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제 중 약 0 내지 약 90 중량%, 약 1 내지 약 50 중량%, 약 2 내지 약 20 중량%, 또는 약 5 내지 약 15 중량%, 또는 이 사이의 임의의 범위로 존재한다.
일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제는 표 1에 제시된 모노사카라이드 아단위의 조성물을 갖는다.
[표 1]
올리고사카라이드 제제의 예시적인 조성물
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D- 대 L-형태
일부 양태에서, 올리고사카라이드에서 하나 이상의 모노사카라이드 아단위는 L-형태이다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드에서 하나 이상의 모노사카라이드 아단위는 D-형태이다. 일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제 중 모노사카라이드 아단위는 이의 자연적으로 빈도 높은 형태, 예컨대 D-글루코스, D-자일로스, 및 L-아라비노스이다.
일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제는 모노사카라이드 아단위의 L-형태와 D-형태의 혼합물을 포함한다. 일부 양태에서, L- 대 D- 또는 D- 대 L-의 형태의 모노사카라이드 아단위의 비는 약 1:1, 약 1:2, 약 1:3, 약 1:4, 약 1:5, 약 1:6, 약 1:7, 약 1:8, 약 1:9, 약 1:10, 약 1:12, 약 1:14, 약 1:16, 약 1:18, 약 1:20, 약 1:25, 약 1:30, 약 1:35, 약 1:40, 약 1:45, 약 1:50, 약 1:55, 약 1:60, 약 1:65, 약 1:70, 약 1:75, 약 1:80, 약 1:85, 약 1:90, 약 1:100 또는 약 1:150이다.
작용화된 올리고사카라이드
일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제 중 하나 이상의 올리고사카라이드는 독립적으로 작용화된다. 작용화된 올리고사카라이드는 촉매의 존재하에 하나 이상의 당과 하나 이상의 작용화 화합물을 조합함으로써 제조될 수 있다. 작용화된 올리고사카라이드의 제조 방법은 WO 2012/118767, WO 2014/031956, 및 WO 2016/122887에 기재되어 있고, 이는 이의 전체로 및 이의 개시에 대해 본원에 참조로 혼입된다.
일부 양태에서, 작용화 화합물은 하나 이상의 산 기(예컨대, -COOH), 하이드록시 기, 또는 N-함유 기(예컨대, -CN, -NO2, 및 -N(Ra)2, 여기서 Ra는 수소, 알킬, 알켄일, 알킨일, 할로알킬, 헤테로알킬, 사이클로알킬, 아릴, 헤테로사이클로알킬, 또는 헤테로아릴 기), S-함유 기(예컨대, 티올 및 설페이트), 할라이드(예컨대, -Cl), P-함유 기(예컨대, 포스페이트), 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 일부 양태에서, 작용화 화합물은 에터, 에스터, 산소-황, 아민, 또는 산소-인 결합을 통해 하나 이상의 모노사카라이드 아단위에 결합된다. 일부 양태에서, 하나 이상의 작용화 화합물은 단일 결합을 통해 모노사카라이드 아단위에 결합된다. 일부 양태에서, 하나 이상의 작용화 화합물은 2개 이상의 결합을 통해 1 또는 2개의 올리고사카라이드에 결합된다.
올리고사카라이드 제제 중 각각의 올리고사카라이드의 경우, 각각의 기술된 양태는 독립적이고 각각의 및 매 조합이 별개로 제시되는 바와 같이 조합될 수 있고, 이에 따라, 양태의 임의의 조합은 본 발명에 의해 포괄된다. 예컨대, 다양한 양태는 몇몇 분류로 분류될 수 있는데, 이는 비제한적으로 (i) 무수-아단위의 존재 또는 부재; (ii) 무수-아단위의 개수 및 수준, (iii) 무수-아단위 종의 유형, (iv) 무수-아단위의 위치, (v) 중합도, (vi) 분자량, (vii) 작용기의 존재 또는 부재기, (viii) 올리고사카라이드의 유형, (ix) 글리코시드 결합의 유형, 및 (x) L-형태 대 D-형태를 포함한다. 따라서, 기술된 올리고사카라이드 제제는 상이한 종의 다수의 올리고사카라이드를 포함한다. 일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제는 10, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 또는 1010개 이상의 상이한 올리고사카라이드 종을 포함한다. 일부 양태에서, 제제는 103개 이상, 104개 이상, 105개 이상, 106개 이상 또는 109개 이상의 상이한 올리고사카라이드 종을 포함한다. 일부 양태에서, 제제는 103개 이상의 상이한 올리고사카라이드 종을 포함한다.
III. 올리고사카라이드 제제의 제조 방법
하나의 양상에서, 올리고사카라이드 제제의 제조 방법이 본원에 제시된다. 일부 양태에서, 영양 조성물, 예컨대 동물 사료 조성물에 사용하기에 또는 동물에게 직접 공급하기에 적합한 올리고사카라이드 제제의 제조 방법이 본원에 제시된다. 하나의 양상에서, 하나 이상의 사료용 당 및 촉매를 포함하는 수성 조성물을 중합을 유도하기에 충분한 온도 및 시간으로 가열하는 단계를 포함하는, 올리고사카라이드 제제의 제조 방법이 본원에 제시되되, 상기 촉매는 (+)-캠퍼-10-설폰산; 2-피리딘설폰산; 3-피리딘설폰산; 8-하이드록시-5-퀴놀린설폰산 수화물; α-하이드록시-2-피리딘메탄설폰산; (β)-캠퍼-10-설폰산; 부틸설폰산; 다이페닐포스핀산; 헥실포스핀산; 메틸포스핀산; 페닐포스핀산; 페닐포스핀산; tert-부틸설폰산; SS)-VAPOL 수소포스페이트; 6-퀴놀린설폰산, 3-(1-피리디니오)-1-프로판설포네이트; 2-(2-피리딘일)에탄설폰산; 3-(2-피리딜)-5,6-다이페닐-1,2,4-트라이아진-p,p'-다이설폰산 모노나트륨 염 수화물; 1,1'-바이나프틸-2,2'-다이일-수소포스페이트; 비스(4-메톡시페닐)포스핀산; 페닐(3,5-실릴)포스핀산; L-시스테인산 1수화물; 폴리(스티렌 설폰산-코-다이비닐벤젠); 리신; 에탄다이설폰산; 에탄설폰산; 이세티온산; 호모시스테인산; HEPBS(N-(2-하이드록시에틸)피페라진-N'-(4-부탄설폰산)); HEPES(4-(2-하이드록시에틸)-1-피페라진에탄설폰산); 2-하이드록시-3-모르폴리노프로판설폰산; 2-(N-모르폴리노)에탄설폰산; 메탄설폰산; 메타니아자이드; 나프탈렌-1-설폰산; 나프탈렌-2-설폰산; 퍼플루오로부탄설폰산; 6-설포퀴노보스; 트라이플산; 2-아미노에탄설폰산; 벤조산; 클로로아세트산; 트라이플루오로아세트산; 카프로산; 에난트산; 카프릴산; 펠라곤산; 라우르산; 파미트산; 스테아르산; 아라키드산; 아스파트산; 글루탐산; 세린; 트레오닌; 글루타민; 시스테인; 글리신; 프롤린; 알라닌; 발린; 이소류신; 류신; 메티오닌; 페닐알라닌; 티로신; 및 트립토판으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 상기 올리고사카라이드 제제는 각각 1(DP1 분획) 내지 n(DPn 분획, n은 2 이상의 정수임)으로부터 선택되는 구별되는 중합도를 갖는 적어도 n개의 올리고사카라라이드 분획을 포함한다. 일부 양태에서, n은 3 이상의 정수이다. 일부 양태에서, n은 1 내지 100의 정수, 예컨대 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 40, 또는 50이다. 일부 양태에서, 사료용 당의 중합은 단계-성장 중합에 의해 달성된다. 일부 양태에서, 사료용 당의 중합은 중축합에 의해 달성된다.
사료용 당
일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제의 제조 방법은 하나 이상의 유형의 사료용 당을 가열하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 하나 이상의 유형의 사료용 당은 모노사카라이드, 다이사카라이드, 트라이사카라이드, 테트라사카라이드, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
일부 양태에서, 하나 이상의 사료용 당은 글루코스를 포함한다. 일부 양태에서, 하나 이상의 사료용 당은 글루코스 및 갈락토스를 포함한다. 일부 양태에서, 하나 이상의 사료용 당은 글루코스, 자일로스, 및 갈락토스를 포함한다. 일부 양태에서, 하나 이상의 사료용 당은 글루코스 및 만노스를 포함한다. 일부 양태에서, 하나 이상의 사료용 당은 글루코스 및 프럭토스를 포함한다. 일부 양태에서, 하나 이상의 사료용 당은 글루코스, 프럭토스, 및 갈락토스를 포함한다. 일부 양태에서, 하나 이상의 사료용 당은 글루코스, 갈락토스, 및 만노스를 포함한다.
일부 양태에서, 하나 이상의 사료용 당은 다이사카라이드, 예컨대 락토스, 수크로스 및 셀로바이오스를 포함한다. 일부 양태에서, 하나 이상의 사료용 당은 트라이사카라이드, 예컨대 말토트라이오스 또는 라피노스를 포함한다. 특정 양태에서, 하나 이상의 사료용 당은 글루코스, 만노스, 갈락토스, 자일로스, 말토-덱스트린, 아라비노스, 또는 갈락토스, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 특정 양태에서, 하나 이상의 사료용 당은 당 시럽, 예컨대 옥수수 시럽을 포함한다. 일부 양태에서, 하나 이상의 사료용 당은 글루코스 및 락토스를 포함한다. 일부 양태에서, 하나 이상의 사료용 당은 글루코스 및 수크로스를 포함한다.
일부 양태에서, 사료용 당의 유형은 결과적으로 제조되는 올리고사카라이드 제제에 영향을 줄 수 있다. 예컨대, 하나 이상의 사료용 당이 모두 글루코스인 일부 변경에서, 결과적인 올리고사카라이드 제제는 글루코-올리고사카라이드 제제를 포함한다. 다른 양태에서, 하나 이상의 사료용 당이 모두 만노스인 경우, 결과적인 올리고사카라이드 제제는 만노-올리고사카라이드 제제를 포함한다. 일부 양태에서, 하나 이상의 사료용 당이 글루코스 및 갈락토스를 포함하는 경우, 결과적인 올리고사카라이드 제제는 글루코-갈락토-올리고사카라이드 제제를 포함한다. 또 다른 양태에서, 하나 이상의 사료용 당이 자일로스인 경우, 글루코스 및 갈락토스, 결과적인 올리고사카라이드 제제는 글루코-갈락토-자일로-올리고사카라이드 제제를 포함한다.
일부 양태에서, 각각의 하나 이상의 사료용 당은 독립적으로 이의 탈수화물 또는 수화물 형태일 수 있다. 일부 양태에서, 하나 이상의 사료용 당은 글루코스, 갈락토스, 프럭토스, 만노스, 또는 이들의 임의의 조합을 포함하고, 각각의 상기 글루코스, 갈락토스, 프럭토스, 또는 만노스는 독립적으로 이의 1수화물 또는 탈수화물 형태이다. 일부 양태에서, 하나 이상의 사료용 당은 모노사카라이드 1수화물, 예컨대 글루코스 1수화물을 포함한다. 일부 양태에서, 하나 이상의 사료용 당은 사카라이드 2수화물, 예컨대 트레할로스 2수화물을 포함한다. 일부 양태에서, 하나 이상의 사료용 당은 하나 이상의 당의 탈수화물 형태 및 하나 이상의 당의 수화물 형태를 포함한다.
일부 양태에서, 하나 이상의 사료용 당은 당이 물과 조합되고 반응기로 공급되는 당 용액으로서 제공될 수 있다. 일부 양태에서, 당은 고체 형태로 반응기에 공급될 수 있고, 반응기에서 물과 조합될 수 있다. 일부 양태에서 하나 이상의 사료용 당은 물의 첨가 전에 조합 및 혼합된다. 다른 양태에서, 하나 이상의 사료용 당은 물에 조합된 후에 혼합된다.
일부 양태에서, 방법은 2개 이상의 사료용 당을 촉매와 조합하여 올리고사카라이드 제제를 생성하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 2개 이상의 사료용 당은 글루코스, 갈락토스, 프럭토스, 만노스, 락토스, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 일부 양태에서, 방법은 당(예컨대, 모노사카라이드, 다이사카라이드, 및/또는 트라이사카라이드)의 혼합물과 촉매를 조합하여 올리고사카라이드 제제를 생성하는 단계를 포함한다. 다른 양태에서, 방법은 당과 당 알코올의 혼합물을 촉매와 조합하여 올리고사카라이드 제제를 생성하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 하나 이상의 사료용 당은 작용화되거나 개질된 당을 포함한다. 작용화되거나 개질된 당은 아미노 당, 당 산, 당 알코올, 당 아미드, 당 에터, 또는 이들의 임의의 조합을 포함할 수 있다. 일부 양태에서, 아미노 당은 하이드록시 기가 아민 기로 대체된 당 분자를 지칭한다. 예시적인 아미노 당은, 예컨대 비제한적으로 N-아세틸-d-글루코사민, 만노사민, 뉴라민산, 무람산, N-아세틸-뉴라민, N-아세틸-무라믹, N-아세틸-갈락토사민, N-아세틸-만노사, N-글리콜릴뉴람, 아카르비오신(acarviosin), D-글루코사민, 및 D-갈락토사민을 포함한다.
일부 양태에서, 당 산은 카복시 기를 갖는 당을 지칭한다. 예시적인 당 산은, 예컨대 비제한적으로 알돈산(예컨대, 글리세르산, 자일론산, 글루콘산, 및 아스코르브산), 울로소산(예컨대, 뉴라민산 및 케토데옥시옥툴로손산), 우론산(예컨대, 글루쿠론산, 갈락투론산, 및 인듀론산), 및 알다르산(예컨대, 타르타르산, 무크산, 및 사카르산)을 포함한다.
일부 양태에서, 당 알코올은 당-유도 폴리올을 지칭한다. 예시적인 당 알코올은, 예컨대 비제한적으로 에틸렌 글리콜, 아라비톨, 글리세롤, 에리트리톨, 트레이톨, 자일리톨, 리비톨, 만니톨, 솔비톨, 갈락티톨, 푸시톨, 이디톨, 이노시톨, 및 볼레미톨을 포함한다.
일부 양태에서, 당 아미드는 -C(=O)-N- 기를 함유하는 당 분자를 지칭한다. 일부 양태에서, 당 에터는 에터 결합을 함유하는 당 분자, 예컨대 글루코시드를 지칭한다.
일부 양태에서, 작용화되거나 개질된 당은 글루코사민, N-아세틸글루코사민, 글루쿠론산, 갈락투론산, 글루시톨, 자일리톨, 만니톨, 및 솔비톨을 포함한다. 일부 양태에서, 사료용 당 중 하나 이상은 데옥시 당, 예컨대 푸코스, 람노스, 데옥시리보스, 또는 푸쿨로스를 포함한다.
일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제의 제조 방법은 g 규모로 수행된다. 일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제의 제조 방법은 kg 또는 더 큰 규모로 수행된다. 따라서, 일부 양태에서, 방법은 0.5 kg 초과, 1 kg 초과, 2 kg 초과, 3 kg 초과, 4 kg 초과, 5 kg 초과, 6 kg 초과, 7 kg 초과, 9 kg 초과, 10 kg 초과, 100 kg 초과, 또는 1,000 kg 초과의 정량으로 하나 이상의 사료용 당을 포함하는 수성 조성물을 가열하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 방법은 0.5 kg 이하, 1 kg 이하, 2 kg 이하, 3 kg 이하, 4 kg 이하, 5 kg 이하, 6 kg 이하, 7 kg 이하, 9 kg 이하, 10 kg 이하, 100 kg 이하, 1,000 kg 이하, 또는 1,500 kg 이하 초과의 정량으로 하나 이상의 사료용 당을 포함하는 수성 조성물을 가열하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 방법은 1 kg 초과의 정량으로 하나 이상의 사료용 당을 포함하는 수성 조성물을 가열하는 단계를 포함한다.
촉매
일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제의 제조 방법은 하나 이상의 촉매의 첨가를 포함한다. 일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제의 제조 방법은 하나 이상의 촉매의 첨가를 포함한다. 일부 양태에서, 본원에 제시된 촉매는 하나 이상의 산을 포함한다. 일부 양태에서, 본원에 제시된 촉매는 미네랄 산, 카복실산; 아미노산; 설폰산; 보론산; 포스핀산; 포스핀산; 황산; 인산; 폴리(스티렌 설폰산-코-비닐벤질-이미다졸륨 설페이트-코-다이비닐벤젠); 폴리(스티렌 설폰산-코-다이비닐벤젠); (+)-캠퍼-10-설폰산; 2-피리딘설폰산; 3-피리딘설폰산; 8-하이드록시-5-퀴놀린설폰산 수화물; α-하이드록시-2-피리딘메탄설폰산; (β)-캠퍼-10-설폰산; 부틸설폰산; 다이페닐포스핀산; 헥실포스핀산; 메틸포스핀산; 페닐포스핀산; 페닐포스핀산; tert-부틸설폰산; SS)-VAPOL 수소포스페이트; 6-퀴놀린설폰산; 3-(1-피리디니오)-1-프로판설포네이트; 2-(2-피리딘일)에탄설폰산; 3-(2-피리딜)-5,6-다이페닐-1,2,4-트라이아진-p,p'-다이설폰산 모노나트륨 염 수화물; 1,1'-바이나프틸-2,2'-다이일-수소포스페이트; 비스(4-메톡시페닐)포스핀산; 페닐(3,5-실릴)포스핀산; L-시스테인산 1수화물; 아세트산; 프로피온산; 부탄산; 글루탐산; 리신; 에탄다이설폰산; 에탄설폰산; 이세티온산; 호모시스테인산; HEPBS(N-(2-하이드록시에틸)피페라진-N'-(4-부탄설폰산)); HEPES(4-(2-하이드록시에틸)-1-피페라진에탄설폰산); 2-하이드록시-3-모르폴리노프로판설폰산; 2-(N-모르폴리노)에탄설폰산; 메탄설폰산; 메타니아자이드; 나프탈렌-1-설폰산; 나프탈렌-2-설폰산; 퍼플루오로부탄설폰산; 6-설포퀴노보스; 트라이플산; 2-아미노에탄설폰산; 벤조산; 클로로아세트산; 트라이플루오로아세트산; 카프로산; 에난트산; 카프릴산; 펠라곤산; 라우르산; 파미트산; 스테아르산; 아라키드산; 아스파트산; 글루탐산; 세린; 트레오닌; 글루타민; 시스테인; 글리신; 프롤린; 알라닌; 발린; 이소류신; 류신; 메티오닌; 페닐알라닌; 티로신; 트립토판; 중합체성 산; 탄소-지지된 산; 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
일부 양태에서, 본원에 제시된 촉매는 하기를 포함한다: (+)-캠퍼-10-설폰산; 2-피리딘설폰산; 3-피리딘설폰산; 8-하이드록시-5-퀴놀린설폰산 수화물; α-하이드록시-2-피리딘메탄설폰산; (β)-캠퍼-10-설폰산; 부틸설폰산; 다이페닐포스핀산; 헥실포스핀산; 메틸포스핀산; 페닐포스핀산; 페닐포스핀산; tert-부틸설폰산; (S)-베이폴(VAPOL) 수소포스페이트; 6-퀴놀린설폰산, 3-(1-피리디니오)-1-프로판설포네이트; 2-(2-피리딘일)에탄설폰산; 3-(2-피리딜)-5,6-다이페닐-1,2,4-트라이아진-p,p'-다이설폰산 모노나트륨 염 수화물; 1,1'-바이나프틸-2,2'-다이일-수소포스페이트; 비스(4-메톡시페닐)포스핀산; 페닐(3,5-실릴)포스핀산; L-시스테인산 1수화물; 폴리(스티렌 설폰산-코-다이비닐벤젠); 리신; 에탄다이설폰산; 에탄설폰산; 이세티온산; 호모시스테인산; HEPBS(N-(2-하이드록시에틸)피페라진-N'-(4-부탄설폰산)); HEPES(4-(2-하이드록시에틸)-1-피페라진에탄설폰산); 2-하이드록시-3-모르폴리노프로판설폰산; 2-(N-모르폴리노)에탄설폰산; 메탄설폰산; 메타니아자이드; 나프탈렌-1-설폰산; 나프탈렌-2-설폰산; 퍼플루오로부탄설폰산; 6-설포퀴노보스; 트라이플산; 2-아미노에탄설폰산; 벤조산; 클로로아세트산; 트라이플루오로아세트산; 카프로산; 에난트산; 카프릴산; 펠라곤산; 라우르산; 파미트산; 스테아르산; 아라키드산; 아스파트산; 글루탐산; 세린; 트레오닌; 글루타민; 시스테인; 글리신; 프롤린; 알라닌; 발린; 이소류신; 류신; 메티오닌; 페닐알라닌; 티로신; 트립토판; 또는 이들의 임의의 조합.
일부 양태에서, 본원에 제시되는 촉매는 (+)-캠퍼-10-설폰산이다. 일부 양태에서, 본원에 제시되는 촉매는 2-피리딘설폰산이다. 일부 양태에서, 본원에 제시되는 촉매는 3-피리딘설폰산이다. 일부 양태에서, 본원에 제시되는 촉매는 8-하이드록시-5-퀴놀린설폰산 수화물이다. 일부 양태에서, 본원에 제시되는 촉매는 α-하이드록시-2-피리딘메탄설폰산이다. 일부 양태에서, 본원에 제시되는 촉매는 (β)-캠퍼-10-설폰산이다. 일부 양태에서, 본원에 제시되는 촉매는 부틸설폰산이다. 일부 양태에서, 본원에 제시되는 촉매는 다이페닐포스핀산이다. 일부 양태에서, 본원에 제시되는 촉매는 헥실포스핀산이다. 일부 양태에서, 본원에 제시되는 촉매는 메틸포스핀산이다. 일부 양태에서, 본원에 제시되는 촉매는 페닐포스핀산이다. 일부 양태에서, 본원에 제시되는 촉매는 페닐포스핀산이다. 일부 양태에서, 본원에 제시되는 촉매는 tert-부틸설폰산이다. 일부 양태에서, 본원에 제시되는 촉매는 SS)-VAPOL 수소포스페이트이다. 일부 양태에서, 본원에 제시되는 촉매는 6-퀴놀린설폰산이다. 일부 양태에서, 본원에 제시되는 촉매는 3-(1-피리디니오)-1-프로판설포네이트이다. 일부 양태에서, 본원에 제시되는 촉매는 2-(2-피리딘일)에탄설폰산이다. 일부 양태에서, 본원에 제시되는 촉매는 3-(2-피리딜)-5,6-다이페닐-1,2,4-트라이아진-p,p'-다이설폰산 모노나트륨 염 수화물이다. 일부 양태에서, 본원에 제시되는 촉매는 1,1'-바이나프틸-2,2'-다이일-수소포스페이트. 일부 양태에서, 본원에 제시되는 촉매는 비스(4-메톡시페닐)포스핀산이다. 일부 양태에서, 본원에 제시되는 촉매는 페닐(3,5-실릴)포스핀산이다. 일부 양태에서, 본원에 제시되는 촉매는 L-시스테인산 1수화물이다. 일부 양태에서, 본원에 제시되는 촉매는 폴리(스티렌 설폰산-코-다이비닐벤젠)이다. 일부 양태에서, 본원에 제시되는 촉매는 리신이다.
일부 양태에서, 촉매는 에탄다이설폰산이다. 일부 양태에서, 촉매는 에탄설폰산이다. 일부 양태에서, 촉매는 이세티온산이다. 일부 양태에서, 촉매는 호모시스테인산이다. 일부 양태에서, 촉매는 HEPBS(N-(2-하이드록시에틸)피페라진-N'-(4-부탄설폰산))이다. 일부 양태에서, 촉매는 HEPES(4-(2-하이드록시에틸)-1-피페라진에탄설폰산)이다. 일부 양태에서, 촉매는 2-하이드록시-3-모르폴리노프로판설폰산이다. 일부 양태에서, 촉매는 2-(N-모르폴리노)에탄설폰산이다. 일부 양태에서, 촉매는 메탄설폰산이다. 일부 양태에서, 촉매는 나프탈렌-1-설폰산이다. 일부 양태에서, 촉매는 메타니아자이드이다. 일부 양태에서, 나프탈렌-2-설폰산이다. 일부 양태에서, 촉매는 퍼플루오로부탄설폰산이다. 일부 양태에서, 촉매는 6-설포퀴노보스이다. 일부 양태에서, 촉매는 트라이플산이다. 일부 양태에서, 촉매는 2-아미노에탄설폰산이다. 일부 양태에서, 촉매는 벤조산이다. 일부 양태에서, 촉매는 클로로아세트산이다. 일부 양태에서, 촉매는 트라이플루오로아세트산이다. 일부 양태에서, 촉매는 카프로산이다. 일부 양태에서, 촉매는 에난트산이다. 일부 양태에서, 촉매는 카프릴산이다. 일부 양태에서, 촉매는 펠라곤산이다. 일부 양태에서, 촉매는 라우르산이다. 일부 양태에서, 촉매는 파미트산이다. 일부 양태에서, 촉매는 스테아르산이다. 일부 양태에서, 촉매는 아라키드산이다. 일부 양태에서, 촉매는 아스파트산이다. 일부 양태에서, 촉매는 글루탐산이다. 일부 양태에서, 촉매는 세린이다. 일부 양태에서, 촉매는 트레오닌이다. 일부 양태에서, 촉매는 글루타민이다. 일부 양태에서, 촉매는 시스테인이다. 일부 양태에서, 촉매는 글리신이다. 일부 양태에서, 촉매는 프롤린이다. 일부 양태에서, 촉매는 알라닌이다. 일부 양태에서, 촉매는 발린이다. 일부 양태에서, 촉매는 이소류신이다. 일부 양태에서, 촉매는 류신이다. 일부 양태에서, 촉매는 메티오닌이다. 일부 양태에서, 촉매는 페닐알라닌이다. 일부 양태에서, 촉매는 티로신이다. 일부 양태에서, 촉매는 트립토판이다. 일부 양태에서, 본원에 제시되는 촉매는 WO 2016/122887(이의 전체 및 이의 개시에 대한 것은 본원에 참조로 혼입됨)에 개시된 중합체 촉매 또는 탄소-지지된 촉매이다.
일부 양태에서, 본원에 제시되는 촉매는 약 0.01 내지 약 5%, 약 0.02 내지 약 4%, 약 0.03 내지 약 3%, 또는 약 0.05 내지 약 2%의 하나 이상의 사료용 당의 양으로 존재한다(건조 중량을 기준으로 함). 일부 양태에서, 본원에 제시되는 촉매는 약 1 내지 2%의 하나 이상의 사료용 당의 양으로 존재한다(건조 중량을 기준으로 함). 일부 양태에서, 본원에 제시되는 촉매는 약 0.5%, 약 0.6%, 약 0.7%, 약 0.8%, 약 0.9%, 약 1.0%, 약 1.1%, 약 1.2%, 약 1.3%, 약 1.4%, 약 1.5%, 약 1.6%, 약 1.7%, 약 1.8%, 약 1.9%, 약 2.0%, 약 2.1%, 약 2.2%, 약 2.3%, 약 2.4%, 약 2.5%, 약 2.6%, 약 2.7%, 약 2.8%, 약 2.9%, 또는 약 3.0%의 하나 이상의 사료용 당의 양으로 존재한다(건조 중량을 기준으로 함).
일부 양태에서, 본원에 제시되는 촉매는 약 0.01 내지 약 5%, 약 0.02 내지 약 4%, 약 0.03 내지 약 3%, 또는 약 0.05 내지 약 2%의 수성 조성물의 양으로 존재한다(건조 중량을 기준으로 함). 일부 양태에서, 본원에 제시되는 촉매는 약 1 내지 2%의 수성 조성물의 양으로 존재한다(건조 중량을 기준으로 함). 일부 양태에서, 본원에 제시되는 촉매는 약 0.8%, 약 0.9%, 약 1.0%, 약 1.1%, 약 1.2%, 약 1.3%, 약 1.4%, 약 1.5%, 약 1.6%, 약 1.7%, 약 1.8%, 약 1.9%, 약 2.0%, 약 2.1%, 약 2.2%, 약 2.3%, 약 2.4%, 약 2.5%, 약 2.6%, 약 2.7%, 약 2.8%, 약 2.9%, 또는 약 3.0%의 수성 조성물의 양으로 존재한다(건조 중량을 기준으로 함).
일부 양태에서, 본원에 제시되는 촉매는 2개 이상의 상이한 촉매의 조합이다. 일부 양태에서, 촉매는 재생 촉매, 예컨대 수지 및 중합체 촉매, 및 비재생 촉매를 포함한다. 일부 양태에서, 촉매가 2개 이상의 상이한 촉매를 포함하는 경우, 각각의 촉매는 본원에 제시된 양으로 존재한다. 다른 양태에서, 촉매가 2개 이상의 상이한 촉매를 포함하는 경우, 2개 이상의 상이한 촉매는 본원에 제시된 양으로 응집체에 존재한다.
일부 양태에서, 촉매는 수성 조성물에 건조 형태로 첨가된다. 다른 양태에서, 촉매는 수성 조성물에 습윤 형태, 예컨대 수용액으로 첨가된다. 일부 양태에서, 촉매는 물의 첨가 전 하나 이상의 사료용 당과 조합된다. 다른 양태에서, 촉매는 하나 이상의 사료용 당과 조합되기 전 물에 용해된다. 일부 양태에서, 본원에 제시된 방법은 탈수화물 형태의 하나 이상의 사료용 당을 습윤 형태(예컨대, 수용액)의 촉매와 조합함으로써 수성 조성물을 생성하는 단계를 포함한다.
물의 첨가
일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제의 제조 방법을 물을 첨가하여 수성 조성물을 형성하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 수성 조성물 중 물 전부 또는 부분의 자유수(free water)로서 첨가된다. 다른 양태에서, 수성 조성물 중 물 전부는, 예컨대 사카라이드 1수화물 또는 2수화물에 결정수로서 첨가된다. 일부 양태에서, 수성 조성물 중 물 전부는 모노사카라이드 1수화물, 예컨대 글루코스 1수화물 중 결정수로서 첨가된다. 특정 양태에서, 수성 조성물 중 물 전부 또는 일부는 촉매, 즉 촉매 용액에 의해 첨가된다.
수함량
올리고사카라이드 제제의 제조 방법이 진행됨에 따라, 물이 반응을 통해 생성될 수 있다. 예컨대, 일부 양태에서, 물은 (i) 글리코시드 결합의 형성에 의하거나, (ii) 무수-아단위의 형성에 의하거나, (iii) 기타 메커니즘 또는 공급원을 통해 생성된다. 당 축합 및 탈수 반응 둘 다가 물을 수반함에 기인하여, 일부 양태에서, 수함량은 올리고사카라이드 제제의 조성에 영향을 준다.
또한, 일부 양태에서, 수함량은 수성 조성물의 점도에 영향을 주고, 결과적으로, 수성 조성물의 혼합의 효율성에 영향을 줄 수 있다. 예컨대, 일부 양태에서, 과도한 점성의 수성 조성물은 수성 조성물 중 바람직하지 않은 불균질 촉매 분포를 야기할 수 있다. 또한, 일부 양태에서, 매우 낮은 수함량은 수성 조성물의 고화를 야기할 수 있는데, 이는 효과적인 혼합을 방해한다. 한편, 일부 다른 양태에서, 과도하게 높은 수함량은 당 축합 반응을 방해하고 무수-아단위의 수준을 감소시킬 수 있다. 따라서, 본 개시는 올리고사카라이드 제제의 제조에 적합한 수함량을 기재한다.
일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제의 제조 방법을 수성 조성물을 생성 및/또는 가열하는 단게를 포함한다. 일부 양태에서, 수성 조성물은 약 0 내지 약 80%, 약 0 내지 약 70%, 약 0 내지 약 60%, 약 0 내지 약 50%, 약 0 내지 약 40%, 약 0 내지 약 35%, 약 0 내지 약 30%, 약 0 내지 약 25%, 약 0 내지 약 20%, 약 0 내지 약 19%, 약 0 내지 약 18%, 약 0 내지 약 17%, 약 0 내지 약 16%, 약 0 내지 약 15%, 약 0 내지 약 14%, 약 0 내지 약 13%, 약 0 내지 약 12%, 약 0 내지 약 11%, 약 0 내지 약 10%, 약 0 내지 약 9%, 약 0 내지 약 8%, 약 0 내지 약 7%, 약 0 내지 약 6%, 약 0 내지 약 5%, 약 0 내지 약 4%, 약 0 내지 약 3%, 약 0 내지 약 2%, 또는 약 0 내지 약 1%의 물을 포함한다(총 중량을 기준으로 함). 일부 양태에서, 수성 조성물은 약 1 내지 약 20%, 약 1 내지 약 18%, 약 1 내지 약 16%, 약 1 내지 약 14%, 약 1 내지 약 12%, 약 1 내지 약 10%, 약 1 내지 약 8%, 약 1 내지 약 6%, 또는 약 1 내지 약 4%의 물을 포함한다(총 중량을 기준으로 함). 일부 양태에서, 수성 조성물은 약 3 내지 약 16%, 약 3 내지 약 14%, 약 3 내지 약 12%, 약 3 내지 약 10%, 약 3 내지 약 8%, 약 3 내지 약 6%, 약 5 내지 약 16%, 약 5 내지 약 14%, 약 5 내지 약 12%, 약 5 내지 약 10%, 약 7 내지 약 16%, 약 7 내지 약 14%, 약 7 내지 약 12%, 약 7 내지 약 10%, 또는 약 8 내지 약 10%의 물을 포함한다(총 중량을 기준으로 함). 일부 양태에서, 수성 조성물은 약 1%, 약 2%, 약 3%, 약 4%, 약 5%, 약 6%, 약 7%, 약 8%, 약 9%, 약 10%, 약 11%, 약 12%, 약 13%, 약 14%, 또는 약 15%의 물을 포함한다(총 중량을 기준으로 함). 일부 양태에서, 수성 조성물은 약 9% 물을 포함한다(총 중량을 기준으로 함). 그러나, 수성 조성물 중 물의 양이 사용되는 반응 조건 및 특정 촉매에 근거하여 조정될 수 있음이 이해되어야 한다. 일부 양태에서, 상기 개시된 수성 조성물 중 수함량은 반응의 시작시, 예컨대 사료용 당의 가열 전 측정된다. 일부 양태에서, 상기 개시된 수성 조성물 중 수함량은 중합 또는 축합 반응의 종료시 측정된다. 일부 양태에서, 상기 개시된 수성 조성물 중 수함량은 반응의 시작 및 반응의 종료의 평균 수함량으로서 측정된다.
특정 양태에서, 본원에 기술된 방법은 시간에 따른 수성 조성물 중 존재하는 수함량 및/또는 물 대 당의 비를 모니터링함을 추가로 포함할 수 있다. 일부 양태에서, 방법은 수성 조성물 중 물의 적어도 일부를, 예컨대 증류에 의해 제거함을 추가로 포함한다. 당업계에 공지된 임의의 방법, 예컨대 진공 여과, 진공 증류, 가열, 증기, 열기 및/또는 증발이 물을 제거하는 데 사용될 수 있다.
일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제는 흡습성이다. 따라서, 일부 양태에서, 사료용 당 및 중합에서 생성된 올리고사카라이드의 흡습성은 물이 수성 조성물로부터 제거되는 속도에 영향을 줄 수 있다.
일부 양태에서, 본원에 기술된 방법은 수성 조성물 중 수함량이 약 1 내지 약 20%, 약 1 내지 약 18%, 약 1 내지 약 16%, 약 1 내지 약 14%, 약 1 내지 약 12%, 약 1 내지 약 10%, 약 1 내지 약 8%, 약 2 내지 약 16%, 약 2 내지 약 14%, 약 2 내지 약 12%, 약 2 내지 약 10%, 약 2 내지 약 8%, 약 2 내지 약 6%, 약 4 내지 약 16%, 약 4 내지 약 14%, 약 4 내지 약 12%, 약 4 내지 약 10%, 약 4 내지 약 8%, 약 6 내지 약 16%, 약 6 내지 약 12%, 약 6 내지 약 10%, 또는 약 6 내지 약 8%가 되도록(총 중량을 기준으로 함), 수성 조성물 중 적어도 일부의 물을 제거하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 방법은 수성 조성물 중 수함량이 약 2 내지 약 10%, 약 2 내지 약 8%, 또는 약 4 내지 약 8%가 되도록(총 중량을 기준으로 함), 수성 조성물 중 적어도 일부의 물을 제거하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 방법은 수성 조성물 중 수함량이 약 2%, 약 3%, 약 4%, 약 5%, 약 6%, 약 7%, 약 8%, 약 9%, 또는 약 10%가 되도록(총 중량을 기준으로 함), 수성 조성물 중 적어도 일부의 물을 제거하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 방법은 수성 조성물 중 수함량이 약 4 내지 약 8%가 되도록(총 중량을 기준으로 함), 수성 조성물 중 적어도 일부의 물을 제거하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 방법은, 중합 및/또는 축합 반응의 종료시, 수성 조성물 중 수함량이 상기 개시된 수함량이 되도록 적어도 일부의 물을 제거하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 방법은, 중합 및/또는 축합 반응의 시작시, 수성 조성물 중 수함량이 상기 개시된 수함량이 되도록 적어도 일부의 물을 제거하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 방법은, 중합 및/또는 축합 반응의 시작 및 종료시 수성 조성물 중 평균 수함량은 상기 개시된 범위 이내이도록 수성 조성물 중 적어도 일부의 물을 제거하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 방법은, 중합 및/또는 축합 반응 전반에 걸쳐, 수성 조성물 중 수함량이 상기 개시된 범위 이내이도록 수성 조성물 중 적어도 일부의 물을 제거하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 본원에 기술된 방법은 수성 조성물 중 수함량이 약 1 내지 약 20%, 약 1 내지 약 18%, 약 1 내지 약 16%, 약 1 내지 약 14%, 약 1 내지 약 12%, 약 1 내지 약 10%, 약 1 내지 약 8%, 약 2 내지 약 16%, 약 2 내지 약 14%, 약 2 내지 약 12%, 약 2 내지 약 10%, 약 2 내지 약 8%, 약 2 내지 약 6%, 약 4 내지 약 16%, 약 4 내지 약 14%, 약 4 내지 약 12%, 약 4 내지 약 10%, 약 4 내지 약 8%, 약 6 내지 약 16%, 약 6 내지 약 12%, 약 6 내지 약 10%, 또는 약 6 내지 약 8%가 되도록(총 중량을 기준으로 함), 수성 조성물 중 적어도 일부의 물을 첨가하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 방법은 수성 조성물 중 수함량이 약 2 내지 약 10%, 약 2 내지 약 8%, 또는 약 4 내지 약 8%가 되도록(총 중량을 기준으로 함), 수성 조성물 중 적어도 일부의 물을 첨가하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 방법은 수성 조성물 중 수함량이 약 2%, 약 3%, 약 4%, 약 5%, 약 6%, 약 7%, 약 8%, 약 9%, 또는 약 10%가 되도록(총 중량을 기준으로 함), 수성 조성물 중 적어도 일부의 물을 첨가하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 방법은 수성 조성물 중 수함량이 약 4 내지 약 8%가 되도록(총 중량을 기준으로 함), 수성 조성물 중 적어도 일부의 물을 첨가하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 방법은, 중합 및/또는 축합 반응의 종료시, 수성 조성물 중 수함량이 상기 개시된 수함량이 되도록 적어도 일부의 물을 첨가하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 방법은, 중합 및/또는 축합 반응의 시작시, 수성 조성물 중 수함량이 상기 개시된 수함량이 되도록 적어도 일부의 물을 첨가하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 방법은, 중합 및/또는 축합 반응의 시작 및 종료시, 수성 조성물 중 평균 수함량이 상기 개시된 범위 이내가 되도록 적어도 일부의 물을 첨가하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 방법은, 중합 및/또는 축합 반응 전반에 걸쳐, 수성 조성물 중 평균 수함량이 상기 개시된 범위 이내가 되도록 적어도 일부의 물을 첨가하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 올리고사카라이드의 중합도 및/또는 올리고사라카라이드 제제 내의 무수-아단위의 양 및 유형은 제조 방법 전반에 걸쳐 수성 조성물 중 존재하는 물의 함량을 조정 또는 제어함에 의해 조절될 수 있다. 예컨대, 일부 양태에서, 올리고사카라이드의 중합도 및 무수-아단위의 양은 수함량이 감소함에 따라 증가한다.
따라서, 일부 양태에서, 본원에 기술된 방법은 수함량의 방법-내 제어(IPC)를 포함하는 데, 이는 수함량의 모니터링, 수함량의 유지, 수함량의 증가, 수함량의 감소, 또는 이들의 임의의 조합을 포함할 수 있다. 일부 양태에서, IPC 방법은 수성 조성물을 본원에 기술된 온도로 가열하는 동안 수함량을 유지시키는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 방법은 중합을 유도하기 충준한 시간 동안 수함량을 유지시키는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 방법은 물을 첨가하거나 수성 조성물로부터 물을 제거하거나 둘 다에 의해 수함량을 개시된 범위 내로 유지시키는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 방법은 수함량을 개시된 범위 내로 증류에 의해 유지시키는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 방법은 수함량을 개시된 범위 내로 진공 증류에 의해 유지시키는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 방법은 수함량을 개시된 범위 내로 감압하 증류에 의해 유지시키는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 수성 조성물의 수함량은 약 1 내지 약 20%, 약 1 내지 약 18%, 약 1 내지 약 16%, 약 1 내지 약 14%, 약 1 내지 약 12%, 약 1 내지 약 10%, 약 1 내지 약 8%, 약 2 내지 약 16%, 약 2 내지 약 14%, 약 2 내지 약 12%, 약 2 내지 약 10%, 약 2 내지 약 8%, 약 2 내지 약 6%, 약 4 내지 약 16%, 약 4 내지 약 14%, 약 4 내지 약 12%, 약 4 내지 약 10%, 약 4 내지 약 8%, 약 6 내지 약 16%, 약 6 내지 약 12%, 약 6 내지 약 10%, 또는 약 6 내지 약 8%의 범위로 유지된다(총 중량을 기준으로 함). 일부 양태에서, 수성 조성물의 수함량은 약 2 내지 약 10%, 약 2 내지 약 8%, 또는 약 4 내지 약 8%의 범위로 유지된다(총 중량을 기준으로 함). 일부 양태에서, 수성 조성물의 수함량은 약 2 내지 약 8%의 범위로 유지된다(총 중량을 기준으로 함).
일부 양태에서, 적합한 수함량은 반응 온도 및 사료용 당의 유형에 따라 변한다. 일부 양태에서, 수함량은 120℃에서 약 8 내지 약 9%이다. 일부 양태에서, 수함량은 130℃에서 약 5 내지 약 7%이다. 일부 양태에서, 글루코-올리코사카라이드 제제의 제조를 위한 수함량은 130℃에서 약 5 내지 약 7%이다. 일부 양태에서, 글루코-갈락토-올리코사카라이드 제제의 제조를 위한 수함량을 130℃에서 약 5 내지 약 6%이다.
수성 조성물의 수함량은 다양한 분석 방법 및 계측에 의해 측정될 수 있다. 일부 양태에서, 수함량은 증발 방법(예컨대, 건조 기법에서의 손실), 증류 방법, 또는 화학반응 방법(예컨대, 칼 피셔 적정(Karl Fischer titration))에 의해 측정된다. 일부 양태에서, 수함량은 분석 계측, 예컨대 습도 분석기에 의해 측정된다. 일부 양태에서, 수함량은 칼 피셔 적정에 의해 측정된다.
일부 양태에서, 수성 조성물의 수함량은 반응 동안 측정되고 수함량의 방법-내 제어(IPC)를 수행하는 데 사용된다. 특정 양태에서, 반응의 수함량은 칼-피셔 적정, IR 스펙트럼 분석, NIR 스펙트럼 분석, 전도도, 점도, 밀도, 혼합 토크, 또는 혼합 에너지에 의해 측정된다. 일부 양태에서, 수함량의 측정은 반응의 수함량을 능동적으로 조정하는 장치, 예컨대 물 첨가 펌프 또는 유동 밸브를 제어하는 데 사용된다.
이론에 얽매이려는 것은 아니되, 당 중합 및/또는 축합 반응 동안의 수함량이 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제 중 무수-아단위의 수준에 영향을 줄 수 있는 것으로 여겨진다. 예컨대, 도 23에 도시된 바와 같이, 일부 양태에서, 더 높은 수함량은 무수-아단위의 더 낮은 수준과 상관관계가 있다. 일부 양태에서, 더 낮은 반응 온도는 무수-아단위의 더 낮은 수준과 상관관계가 있다.
온도
일부 양태에서, 올리고사카라이드의 중합도 및/또는 올리고사라카라이드 제제 내의 무수-아단위의 양 및 유형은 수성 조성물이 가열되는 온도를 조정함으로써 조절될 수 있다. 일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제의 제조 방법은 수성 조성물을 약 80 내지 약 250℃, 약 90 내지 약 200℃, 약 100 내지 약 200℃, 약 100 내지 약 180℃, 약 110 내지 약 170℃, 약 120 내지 약 160℃, 약 130 내지 약 150℃, 또는 약 135 내지 약 145℃의 온도로 가열하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제의 제조 방법은 수성 조성물을 약 100 내지 약 200℃, 약 100 내지 약 180℃, 약 110 내지 약 170℃, 약 120 내지 약 160℃, 약 130 내지 약 150℃, 또는 약 135 내지 약 145℃의 온도로 가열하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제의 제조 방법은 수성 조성물을 약 135 내지 약 145℃의 온도로 가열하는 단계를 포함한다. 다른 양태에서, 올리고사카라이드 제제의 제조 방법은 수성 조성물을 약 125 내지 약 135℃의 온도로 가열하는 단계를 포함한다.
반응 시간
일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제의 제조 방법은 수성 조성물을 충분한 시간 동안 가열하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 본원에 기술된 방법에 따라 제조된 올리고사카라이드의 중합도는 반응 시간에 의해 조절될 수 있다.
일부 양태에서, 충분한 시간은 다수의 시간에 의해 규정된다. 예컨대, 일부 양태에서, 충분한 시간은 30분 이상, 1시간 이상, 2시간 이상, 3시간 이상, 4시간 이상, 5시간 이상, 6시간 이상, 7시간 이상, 8시간 이상, 9시간 이상, 또는 10시간 이상이다. 일부 양태에서, 충분한 시간은 약 1 내지 약 24시간, 약 1 내지 약 16시간, 약 1 내지 약 8시간, 약 1 내지 약 4시간, 약 1 내지 약 3시간, 약 1 내지 약 2시간, 약 2 내지 약 12시간, 약 2 내지 약 10시간, 약 2 내지 약 8시간, 약 2 내지 약 6시간, 약 2 내지 약 4시간, 약 3 내지 약 8시간, 약 3 내지 약 6시간, 약 3 내지 약 5시간, 또는 약 3 내지 약 4시간 이상이다.
다른 양태에서, 충분한 시간은 올리고사카라이드 제제의 하나 이상의 화학적 또는 물리적 특성, 예를 들어, 수함량, 점도, 분자량, 무수-아단위 함량, 중합도 분포, 방출된 축합수, 반응 수함량, 밀도, 또는 색을 측정함으로써 측정된다.
일부 양태에서, 반응 중단 시간은 실시간으로 측정된 하나 이상의 공정 제어(IPC)에 의해 측정된다. 일부 양태에서, IPC는 수함량, 점도, 분자량, 무수-아단위 함량, 중합도 분포, 방출된 축합수, 반응 수함량, 밀도, 또는 색을 측정한다.
일부 양태에서, 공정 제어는 연속 점도를 측정한다. 일부 양태에서, 공정 제어는 방출된 축합수를 측정한다. 일부 양태에서, 공정 제어는 동일 반응계 IR 측정(예컨대, 칼 피셔)이다. 일부 양태에서, 공정 제어는 실시간 HPLC 측정이다. 일부 양태에서, 공정 제어는 GC 측정이다. 일부 양태에서, 공정 제어는 밀도를 측정한다. 일부 양태에서, 공정 제어는 색을 측정한다(예컨대, UV/Vis에 의해 측정됨).
일부 양태에서, 공정 제어 측정은 소정 기준과 비교되고; 일부 양태에서, 상기 소정 기준에 도달할 때, 반응은 중단된다. 일부 양태에서, 공정 제어 측정은 소정 기준과 비교되고; 일부 양태에서, 상기 공정 제어 측정이 상기 소정 기준의 0.1%, 0.2%, 0.3%, 0.4%, 0.5%, 0.6%, 0.7%, 0.8%, 0.9% 또는 1% 이내일 때, 반응은 중단된다.
일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제 분자량은 중합 동안 모니터링된다. 일부 양태에서, 방법은 수성 조성물이 본원에 기술된 수 평균 분자량 또는 중량 평균 분자량에 도달하기에 충분한 시간 동안 상기 조성물을 가열하는 단계를 포함한다. 특정 양태에서, 방법은 수성 조성물이 약 300 내지 약 5,000 g/mol, 약 500 내지 약 5,000 g/mol, 약 700 내지 약 5,000 g/mol, 약 500 내지 약 2,000 g/mol, 약 700 내지 약 2,000 g/mol, 약 700 내지 약 1,500 g/mol, 약 300 내지 약 1,500 g/mol, 약 300 내지 약 2,000 g/mol, 약 400 내지 약 1,000 g/mol, 약 400 내지 약 900 g/mol, 약 400 내지 약 800 g/mol, 약 500 내지 약 900 g/mol, 또는 약 500 내지 약 800 g/mol의 수 평균 분자량에 도달하기에 충분한 시간 동안 상기 조성물을 가열하는 단계를 포함한다. 특정 양태에서, 방법은 수성 조성물이 약 500 내지 약 2,000 g/mol의 수 평균 분자량에 도달하기에 충분한 시간 동안 상기 조성물을 가열하는 단계를 포함한다. 특정 양태에서, 방법은 수성 조성물이 약 300 내지 약 5,000 g/mol, 약 500 내지 약 5,000 g/mol, 약 700 내지 약 5,000 g/mol, 약 500 내지 약 2,000 g/mol, 약 700 내지 약 2,000 g/mol, 약 700 내지 약 1,500 g/mol, 약 300 내지 약 1,500 g/mol, 약 300 내지 약 2,000 g/mol, 약 400 내지 약 1,300 g/mol, 약 400 내지 약 1,200 g/mol, 약 400 내지 약 1,100 g/mol, 약 500 내지 약 1,300 g/mol, 약 500 내지 약 1,200 g/mol, 약 500 내지 약 1,100 g/mol, 약 600 내지 약 1,300 g/mol, 약 600 내지 약 1,200 g/mol, 또는 약 600 내지 약 1,100 g/mol의 중량 평균 분자량에 도달하기에 충분한 시간 동안 상기 조성물을 가열하는 단계를 포함한다. 특정 양태에서, 방법은 수성 조성물이 약 700 내지 약 3,000 g/mol의 중량 평균 분자량에 도달하기에 충분한 시간 동안 상기 조성물을 가열하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 충분한 시간은 해당 반응 온도에서 수성 조성물이 반응 평형에 도달하는 데 요하는 시간이다. 따라서, 일부 양태에서, 방법은 수성 조성물이 평형에 도달하기에 충분한 시간 동안 상기 수성 조성물을 가열하는 단계를 포함한다. 예컨대, 일부 양태에서, 평형은 수성 조성물의 분자량, 점도, 또는 DP 분포를 측정함으로써 측정된다.
특정 양태에서, 평형은 수성 조성물의 수 평균 분자량 또는 중량 평균 분자량을 측정함으로써 측정된다. 일부 양태에서, 평형은 시간 경과에도 본질적으로 유지되는 수성 조성물의 수 평균 분자량 또는 중량 평균 분자량을 측정함으로써 측정된다. 일부 양태에서, 평형은 시간 경과에 따라 특정 % 미만이 되는 수성 조성물의 수 평균 분자량 또는 중량 평균 분자량의 변화에 의해 측정된다. 일부 양태에서, 수성 조성물의 분자량은 HPLC 또는 SEC에 의해 측정된다.
일부 양태에서, 평형은 시간 경과에 따라 25% 미만, 20% 미만, 15% 미만, 10% 미만, 또는 5% 미만의 수성 조성물의 수 평균 분자량 또는 중량 평균 분자량의 변화에 의해 측정된다. 일부 양태에서, 평형은 3시간, 2시간, 1시간, 30분, 20분, 또는 10분 경과에 따른 수성 조성물의 수 평균 분자량 또는 중량 평균 분자량의 변화에 의해 측정된다. 일부 양태에서, 평형은 1시간 경과에 따른 15% 미만의 수성 조성물의 중량 평균 분자량의 변화에 의해 측정된다.
특정 양태에서, 평형은 수성 조성물의 점도를 측정함으로써 측정된다. 일부 양태에서, 평형은 시간 경과에도 본질적으로 유지되는 수성 조성물의 점도에 의해 측정된다. 일부 양태에서, 평형은 시간 경과에 따라 특정 % 미만이 되는 수성 조성물의 점도의 변화에 의해 측정된다. 일부 양태에서, 수성 조성물의 점도는 점도계 또는 유동계에 의해 측정된다.
일부 양태에서, 평형은 시간 경과에 따른 25% 미만, 20% 미만, 15% 미만, 10% 미만, 또는 5% 미만의 수성 조성물의 점도의 변화에 의해 측정된다. 일부 양태에서, 평형은 3시간, 2시간, 1시간, 30분, 20분, 또는 10분 경과에 따른 수성 조성물의 점도의 변화에 의해 측정된다. 일부 양태에서, 평형은 1시간 경과에 따른 15% 미만의 수성 조성물의 점도의 변화에 의해 측정된다.
특정 양태에서, 평형은 수성 조성물의 DP 분포에 의해 측정된다. 일부 양태에서, 평형은 시간 경과에도 본질적으로 유지되는 수성 조성물의 DP 분포에 의해 측정된다. 일부 양태에서, 수성 조성물의 DP 분포의 변화는 일련의 Km(
Figure pct00005
, 상기 식에서 [H2O]는 물의 몰농도(mol/L)이고, [DP1], [DPm-1] 및 [DPm]은 각각 분획 DP1, DPm-1 및 DPm 중 올리고사카라이드(mol/L)의 몰농도임)을 계산함으로써 측정된다. 예컨대, K2는 상기 식에 따라 [DP2][H2O]/[DP1][DP1]이다. 일부 양태에서, m은 1 초과이고 n 미만인 정수이다. 일부 양태에서, m은 1 초과이고 n 이하인 정수이다. 일부 양태에서, m은 n이다. 일부 양태에서, m은 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10이다.
일부 양태에서, DP1, DPm-1 및 DPm 분획 중 올리고사카라이드의 농도는 SEC, HPLC, FFF, A4F, 질량 분광법, 또는 임의의 적합한 방법에 의해 측정된다. 일부 양태에서, DP1, DPm-1 및 DPm 분획 중 올리고사카라이드의 농도는 SEC, 예컨대 GPC에 의해 측정된다. 일부 양태에서, DP1, DPm-1 및 DPm 분획 중 올리고사카라이드의 농도는 질량 분광법, 예컨대 GC-MS, LC-MS/MS, 및 MALDI-MS에 의해 측정된다. 일부 양태에서, DP1, DPm-1 및 DPm 분획 중 올리고사카라이드의 농도는 HPLC에 의해 측정된다. 일부 양태에서, 물의 농도 증발 방법(예컨대, 건조 기법에서의 손실), 증류 방법, 또는 화학반응 방법(예컨대, 칼 피셔 적정)에 의해 측정된다. 일부 양태에서, 물의 농도는 임의의 적합한 분석 계측, 예컨대 습도 분석기에 의해 측정된다.
일부 양태에서, 방법은 3 이상, 4 이상, 5 이상, 6 이상, 7 이상, 8 이상, 9 이상, 10 이상, 15 이상, 20 이상, 30 이상, 40 이상, 또는 50개 이상의 Km 수를 계산하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 방법은 3 이상, 4 이상, 5 이상, 6 이상, 7 이상, 8 이상, 9 이상, 10 이상, 또는 15개 이상의 Km 수를 계산하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 방법은 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 또는 15개의 Km 수를 계산하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 방법은 K2 내지 K4, K2 내지 K5, K2 내지 K6, K2 내지 K7, K2 내지 K8, K2 내지 K9, K2 내지 K10, K2 내지 K11, K2 내지 K12, K2 내지 K13, K2 내지 K14, K2 내지 K15, K3 내지 K5, K3 내지 K6, K3 내지 K7, K3 내지 K8, K3 내지 K9, K3 내지 K10, K3 내지 K11, K3 내지 K12, K3 내지 K13, K3 내지 K14, 또는 K3 내지 K15를 계산하는 단계를 포함한다. 특정 양태에서, 방법은 K2 내지 K4, 또는 K3 내지 K5를 계산하는 단계를 포함한다.
일부 양태에서, Km의 값은 온도, 몰 농도, 및/또는 사료용 당의 양 및 유형에 의존한다. 일부 양태에서, Km은 약 0.1 내지 약 100, 약 0.1 내지 약 90, 약 0.1 내지 약 80, 약 0.1 내지 약 70, 약 0.1 내지 약 60, 약 0.1 내지 약 50, 약 0.1 내지 약 40, 약 0.1 내지 약 30, 약 0.1 내지 약 25, 약 0.1 내지 약 20, 또는 약 0.1 내지 약 15이다. 일부 양태에서, Km은 약 1 내지 약 100, 약 1 내지 약 90, 약 1 내지 약 80, 약 1 내지 약 70, 약 1 내지 약 60, 약 1 내지 약 50, 약 1 내지 약 40, 약 1 내지 약 30, 약 1 내지 약 25, 약 1 내지 약 20, 약 1 내지 약 15, 약 1 내지 약 10, 약 5 내지 약 50, 약 5 내지 약 40, 약 5 내지 약 30, 약 5 내지 약 20, 약 5 내지 약 15, 또는 약 5 내지 약 10이다. 일부 특정 양태에서, Km은 약 1 내지 약 15, 또는 약 5 내지 약 15이다.
일부 양태에서, 평균, 표준 편차, 및/또는 상대 표준 편차는 계산된 일련의 Km에 대해 결정된다. 본원에 사용된 상대 표준 편차는 %로 표시되고, 표준 편차에 100을 곱한 값을 평균으로 나눔으로써 얻어진다.
일부 양태에서, 평형은 30% 미만, 25% 미만, 20% 미만, 15% 미만, 10% 미만, 9% 미만, 8% 미만, 7% 미만, 6% 미만, 5% 미만, 4% 미만, 3% 미만, 2% 미만, 또는 1% 미만의 일련의 Km의 상대 표준 편차에 의해 측정된다. 일부 양태에서, 평형은 15% 미만, 10% 미만, 또는 5% 미만의 일련의 Km의 상대 표준 편차에 의해 측정된다.
반응후 단계
일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제의 제조 방법은 수성 조성물을 충분한 온도 및 시간으로 가열한 후 하나 이상의 추가 가공 단계를 추가로 포함한다. 일부 양태에서, 추가 가공 단계는, 예컨대 분리(예컨대, 크로마토그래피 분리), 희석, 농축, 건조, 여과, 탈염, 추출, 탈색, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 예컨대, 일부 양태에서, 방법은 희석 단계 및 탈색 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 방법은 여과 단계 및 건조 단계를 포함한다.
일부 양태에서, 방법은 희석 단계를 포함하되, 물이 올리고사카라이드 제제에 첨가되어 올리고사카라이드 제제의 시럽이 제조된다. 일부 양태에서, 상기 시럽 중 올리고사카라이드 제제의 농도는 약 5 내지 약 80%, 약 10 내지 약 70%, 약 10 내지 약 60%, 약 10 내지 약 50%, 약 10 내지 약 40%, 약 10 내지 약 30%, 또는 약 15 내지 약 25%이다. 다른 양태에서, 방법은 희석 단계를 포함하지 않고, 올리고사카라이드 제제는 고화된다. 일부 양태에서, 방법은 여과 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 방법은 여과에 의한 촉매의 재생을 포함한다.
일부 양태에서, 본원에 기술된 방법은 탈색 단계를 추가로 포함한다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 당업계에 공지된 임의의 방법, 예컨대 흡착제, 활성화된 탄소, 크로마토그래피(예컨대, 이온 교환 수지를 사용함), 수소화, 및/또는 여과(예컨대, 마이크로여과)를 사용하여 탈색 단계를 거칠 수 있다.
일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 염, 미네랄, 및/또는 기타 이온 종의 제거를 위한 물질과 접촉된다. 특정 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 음이온/양이온 교환 컬럼 쌍을 통해 유동한다. 하나의 양태에서, 음이온 교환 컬럼은 수산화물 형태의 약산 교환 수지를 함유하고, 양이온 교환 수컬럼은 양성자화된 형태의 강산 교환 수지를 함유한다.
일부 양태에서, 방법은 농축 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 농축 단계는 증가된 농도의 올리고사카라이드 제제를 생성한다. 예컨대, 일부 양태에서, 농축 단계는 증발(예컨대, 진공 증발), 건조(예컨대, 동결건조 및 분무 건조) 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
일부 양태에서, 방법은 단리 단계를 포함하되, 여기서 올리고사카라이드의 적어도 일부가 분리된다. 일부 양태에서, 단리 단계는 결정화, 침전, 여과(예컨대, 진공 여과), 및 원심분리, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
일부 양태에서, 방법은 분리 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 분리 단계는 촉매의 적어도 일부, 미반응 사료용 당의 적어도 일부, 또는 둘 다로부터 올리고사카라이드 제제의 적어도 일부를 분리함을 포함한다. 일부 양태에서, 분리 단계는 여과, 크로마토그래피, 용해도 차이, 침전, 추출, 또는 원심분리를 포함한다.
반응기
본원에 기술된 방법은 반응 온도, pH, 압력 및 기타 요인들을 고려하여 당 축합에 적합한 하나 이상의 반응기의 사용을 포함할 수 있다. 일부 양태에서, 하나 이상의 적합한 반응기는 유가(fed-batch) 교반 반응기, 배치 교반 반응기, 연속식 유동 교반 반응기, 연속식 플러그(plug)-유동 컬럼 반응기, 마멸식(attrition) 반응기, 또는 자기장에 의해 유도되는 교반에 의한 반응기를 포함한다. 일부 양태에서, 하나 이상의 적합한 반응기는 문헌[Ryu, S. K., and Lee, J. M., Bioconversion of waste cellulose by using an attrition bioreactor, Biotechnol. Bioeng. 25: 53-65(1983); [Gusakov, A. V., and Sinitsyn, A. P., Kinetics of the enzymatic hydrolysis of cellulose: 1. A mathematical model for a batch reactor process, Enz. Microb. TechnoL, 7: 346-352 (1985)]; [Gusakov, A. V., Sinitsyn, A. P., Davydkin, I. Y., Davydkin, V. Y., Protas, O. V., Enhancement of enzymatic cellulose hydrolysis using a novel type of bioreactor with intensive stirring induced by electromagnetic field, Appl. Biochem. Biotechnol., 56: 141-153(1996)]; 또는 [Fernanda de Castilhos Corazza, Flavio Faria de Moraes, Gisella Maria Zanin and Ivo Neitzel, Optimal control in fed-batch reactor for the cellobiose hydrolysis, Acta Scientiarum. Technology, 25: 33-38 (2003)]에 기술된 반응기를 포함한다.
일부 양태에서, 하나 이상의 적합한 반응기는 가수분해 및/또는 발효를 위한 유동층, 업플로우 블랭킷(upflow blanket), 부동화, 또는 압출기 형 반응기를 포함한다 일부 양태에서, 하나 이상의 적합한 반응기는 개방형 반응기, 폐쇄형 반응기, 또는 둘 다를 포함한다. 일부 양태에서, 방법이 연속 공정을 포함하는 경우 하나 이상의 적합한 반응기는 연속식 믹서, 예컨대 스크류 믹서를 포함할 수 있다.
공정
일부 양태에서, 본원에 기술된 올리고사카라이드 제제의 제조 방법은 배치 공정, 연속 공정, 또는 둘 다를 포함한다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제의 제조 방법은 배치 공정을 포함한다. 예컨대, 배치 공정의 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제의 후속 배치의 제조는 현재 배치의 완성까지 시작되지 않는다. 일부 양태에서, 배치 공정 동안, 올리고사카라이드 제제의 전량 또는 상당량은 반응기로부터 제거된다. 일부 양태에서, 배치 공정 동안, 모든 사료용 당 및 촉매는 수성 조성물이 기술된 온도로 가열되기 전 또는 중합이 유도되기 전 반응기에서 조합된다. 일부 양태에서, 배치 공정 동안, 사료용 당은 촉매의 첨가 전, 촉매의 첨가 후, 또는 촉매의 첨가와 동시에 첨가된다.
일부 양태에서, 배치 공정은 유가 공정이되, 모든 사료용 당이 반응기에 동시에 첨가되지는 않는다. 유가 공정의 일부 양태에서, 일부의 사료용 당은 중합 동안 또는 수성 조성물이 기술된 온도로 가열된 후 반응기에 첨가된다. 유가 공정의 일부 양태에서, 유가 공정의 일부 양태에서, 10% 이상, 20% 이상, 30% 이상, 40% 이상, 50% 이상, 또는 60% 이상의 사료용 당이 중합 동안 또는 수성 조성물이 기술된 온도로 가열된 후 첨가된다(중량을 기준으로 함).
일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제의 제조 방법은 연속 공정을 포함한다. 예컨대, 연속 공정의 일부 양태에서, 반응기의 내용물은 상기 반응기를 통해 연속적으로 유동한다. 일부 양태에서, 사료용 당과 촉매의 조합 및 올리고사카라이드 제제의 적어도 일부의 제거는 동시에 수행된다.
일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제의 제조 방법은 단일-포트(single-pot) 또는 다수-포트 공정을 포함한다. 예컨대, 단일-포트 공정의 일부 양태에서, 중합은 단일 반응기에서 수행된다. 또 다른 예로, 다수-포트 공정의 일부 양태에서, 중합은 1개 초과의 반응기에서 수행된다. 다수-포트 공정의 일부 양태에서, 공정은 2, 3개 또는 그 이상의 반응기를 포함한다. 다수-포트 공정의 일부 양태에서, 공정은 2개 이상의 반응기로부터의 중합 생성물이 조합되는 조합 단계를 포함한다.
IV. 올리고사카라이드 제제를 포함하는 영양 조성물
올리고사카라이드 제제를 포함하는 영양 조성물이 본원에 제시된다. 특정 양태에서, 기술된 올리고사카라이드 제제를 포함하는 영양 조성물이 본원에 제시되되, 영양 조성물 내의 올리고사카라이드 제제의 존재 및/또는 농도는 선택적으로 측정 및/또는 검출된다. 미생물 군집의 복합적인 기능성 조절을 나타내는 올리고사카라이드 제제는 영양 조성물의 중요 성분일 수 있다. 따라서, 영양 조성물 내의 올리고사카라이드 제제의 존재 및/또는 농도는 영양 조성물의 품질 관리 및 제조 방법에서 측정을 요하는 요인들 중 하나일 수 있다. 따라서, 제시되는 영양 조성물은 올리고사카라이드 제제의 존재 및/또는 농도가 선택적으로 측정 및/또는 검출될 수 있기에 품질 관리 및 제조 목적에 있어서 유리하다. 예컨대, 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제의 존재 및 농도는 무수-아단위-함유 올리고사카라이드와 회합된 신호를 측정함으로써 측정 및/또는 검출될 수 있다.
일부 양태에서, 영양 조성물은 동물 사료 조성물이다. 일부 양태에서, 영양 조성물은 베이스 영양 조성물을 포함한다.
베이스 영양 조성물
일부 양태에서, 본원에 기술된 영양 조성물은 베이스 영양 조성물 및 개시된 올리고사카라이드 제제를 포함한다. 일부 양태에서, 베이스 영양 조성물은 올리고사카라이드 제제와는 상이한 탄수화물 공급원을 포함한다. 예컨대, 일부 양태에서, 베이스 영양 조성물은 자연 발생 탄수화물 공급원, 예컨대 전분 및 식물 섬유를 포함한다. 일부 양태에서, 베이스 영양 조성물은 전분을 포함한다. 일부 양태에서, 베이스 영양 조성물은 식물 섬유를 포함한다.
일부 양태에서, 베이스 영양 조성물은 하기로 유래하는 하나 이상의 탄수화물 공급원을 포함한다: 씨앗, 뿌리, 덩이줄기, 옥수수, 타피오카, 애로우루트(arrowroot), 밀, 쌀, 감자, 고구마, 사고(sago), 콩(예컨대, 파바(fava), 렌틸, 멍(mung) 콩, 완두콩, 및 병아리콩), 메이즈(maize), 카사바, 또는 기타 전분질 식품(예컨대, 아콘, 애로우루트, 아라카챠(arracacha), 바나나, 보리, 빵나무, 메밀, 칸나, 콜라카시아(colacasia), 카타쿠리(katakuri), 쿠드주(kudzu), 말란가(malanga), 기장, 귀리, 오카(oca), 폴리네시아 애로우루트, 수수, 호밀, 타로, 밤나무, 마름(water chestnut), 및 얌(yam)).
일부 양태에서, 베이스 영양 조성물은 하기로부터 유래하는 하나 이상의 탄수화물 공급원을 포함한다: 협과 식물(예컨대, 완두콩, 대두, 루핀, 녹색 콩(green bean), 및 기타 콩), 귀리, 호밀, 치아(chia), 보리, 과일(예컨대, 무화과, 아보카도, 플럼(plum), 프룬, 베리, 바나나, 사과 껍질, 마르멜로(quince), 및 배), 채소(예컨대, 브로콜리, 당근, 콜리플라워, 주키니(zucchini), 샐러리, 노팔(nopal), 및 예루살람 아티초크(Jerusalem artichoke)), 뿌리 덩이 줄기, 뿌리 채소(예컨대, 고구마 및 양파), 사일륨(psyllium) 씨앗 겉껍질, 씨앗(예컨대, 아마씨), 견과(아몬드), 전곡 식품, 밀, 옥수수 겨, 리그난, 또는 이들의 임의의 조합. 일부 양태에서, 베이스 영양 조성물은 밀 겨, 사탕무 과육, 솜 목화씨(fuzzy cottonseed), 대두 껍질, 또는 이들의 임의의 조합으로부터 유래하는 하나 이상의 식물성 섬유를 포함한다.
일부 양태에서, 베이스 영양 조성물은 500 ppm 미만, 400 ppm 미만, 300 ppm 미만, 200 ppm 미만, 100 ppm 미만, 50 ppm 미만, 10 ppm 미만, 5 ppm 미만, 또는 1 ppm 미만의 무수-아단위 또는 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다. 일부 양태에서, 베이스 영양 조성물은 50 ppm 미만, 10 ppm 미만, 5 ppm 미만, 또는 1 ppm 미만의 무수-아단위 또는 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다. 일부 양태에서, 베이스 영양 조성물은 무수-아단위를 본질적으로 미함유한다.
일부 양태에서, 베이스 영양 조성물은 검출가능한 수준의 무수-아단위를 결여한다. 검출 또는 측정의 방법에 따라, 특정 임계치 미만의 무수-아단위 수준은 검출불가할 수 있다. 예컨대, 일부 양태에서, 무수-아단위의 검출가능한 수준은 베이스 영양 조성물 중 1,000 ppm 이상, 500 ppm 이상, 400 ppm 이상, 300 ppm 이상, 200 ppm 이상, 100 ppm 이상, 50 ppm 이상, 10 ppm 이상, 5 ppm 이상, 또는 1 ppm 이상의 무수-아단위 또는 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 지칭한다.
일부 양태에서, 베이스 영양 조성물은 다수의 올리고사카라이드를 포함한다. 일부 양태에서, 베이스 영양 조성물은 올리고사카라이드 제제와는 상이한 글리코시드 결합 유형 분포를 포함한다. 예컨대, 일부 양태에서, 베이스 영양 조성물은 올리고사카라이드 제제보다 더 높은 %의 α-(1,4) 글리코시드 결합을 포함한다. 일부 양태에서, 베이스 영양 조성물 중 글리코시드 결합, 예컨대 α-(1,4) 글리코시드 결합은 하나 이상의 효소에 의해 소화가능하다. 일부 양태에서, 베이스 영양 조성물 중 글리코시드 결합은 올리고사카라이드 제제 중 글리코시드 결합보다 용이하게 소화가능 및/또는 가부분해가능하다.
일부 양태에서, 베이스 영양 조성물 중 α-(1,2) 글리코시드 결합, α-(1,3) 글리코시드 결합, α-(1,6) 글리코시드 결합, β-(1,2) 글리코시드 결합, β-(1,3) 글리코시드 결합, β-(1,4) 글리코시드 결합, 또는 β-(1,6) 글리코시드 결합의 수준은 올리고사카라이드 제제 중 각각의 글리코시드 결합의 수준보다 2% 이상, 3% 이상, 4% 이상, 5% 이상, 6% 이상, 7% 이상, 8% 이상, 9% 이상, 10% 이상, 11% 이상, 12% 이상, 13% 이상, 14% 이상, 또는 15% 이상 더 낮다. 일부 양태에서, 베이스 영양 조성물 중 α-(1,2) 글리코시드 결합, α-(1,3) 글리코시드 결합, α-(1,6) 글리코시드 결합, β-(1,2) 글리코시드 결합, β-(1,3) 글리코시드 결합, β-(1,4) 글리코시드 결합, 또는 β-(1,6) 글리코시드 결합의 수준은 올리고사카라이드 제제 중 각각의 글리코시드 결합의 수준보다 10% 이상 더 낮다.
일부 양태에서, 베이스 영양 조성물 중 α-(1,4) 글리코시드 결합의 수준은 올리고사카라이드 제제 중 α-(1,4) 글리코시드 결합의 수준보다 50% 이상, 40% 이상, 35% 이상, 30% 이상, 25% 이상, 20% 이상, 15% 이상, 10% 이상, 5% 이상, 또는 2% 이상 더 높다. 일부 양태에서, 베이스 영양 조성물 중 α-(1,4) 글리코시드 결합의 수준은 올리고사카라이드 제제 중 α-(1,4) 글리코시드 결합의 수준보다 10% 이상 더 높다.
동물 사료 조성물
동물의 유형 및 연령에 따라, 영양 조성물은 올리고사카라이드 제제 및 베이스 영양 조성물을 상이한 비로 포함할 수 있다. 예컨대, 올리고사카라이드 제제는 동물의 유형 및 연령에 적합한 다양한 비로 베이스 영양 조성물과 조합될 수 있다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 영양 조성물 중 약 1 내지 약 10,000 ppm, 약 1 내지 약 5,000 ppm, 약 1 내지 약 3,000 ppm, 약 1 내지 약 2,000 ppm, 약 1 내지 약 1,500 ppm, 약 1 내지 약 1,000 ppm, 약 1 내지 약 500 ppm, 약 1 내지 약 250 ppm, 약 1 내지 약 100 ppm, 약 10 내지 약 5,000 ppm, 약 10 내지 약 3,000 ppm, 약 10 내지 약 2,000 ppm, 약 10 내지 약 1,500 ppm, 약 10 내지 약 1,000 ppm, 약 10 내지 약 500 ppm, 약 10 내지 약 250 ppm, 약 10 내지 약 100 ppm, 약 50 내지 약 5,000 ppm, 약 50 내지 약 3,000 ppm, 약 50 내지 약 2,000 ppm, 약 50 내지 약 1,500 ppm, 약 50 내지 약 1,000 ppm, 약 50 내지 약 500 ppm, 약 50 내지 약 250 ppm, 약 50 내지 약 100 ppm, 약 100 내지 약 5,000 ppm, 약 100 내지 약 3,000 ppm, 약 100 내지 약 2,000 ppm, 약 100 내지 약 1,500 ppm, 약 100 내지 약 1,000 ppm, 약 100 내지 약 500 ppm, 약 100 내지 약 400 ppm, 약 100 내지 약 300 ppm, 약 100 내지 약 200 ppm, 약 200 내지 약 5,000 ppm, 약 200 내지 약 3,000 ppm, 약 200 내지 약 2,500 ppm, 약 200 내지 약 2,000 ppm, 약 200 내지 약 1,500 ppm, 약 200 내지 약 1,000 ppm, 약 200 내지 약 500 ppm, 약 500 내지 약 5,000 ppm, 약 500 내지 약 3,000 ppm, 약 500 내지 약 2,500 ppm, 약 500 내지 약 2,000 ppm, 약 500 내지 약 1,500 ppm, 또는 약 500 내지 약 1,000 ppm의 농도로 존재한다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 영양 조성물 중 약 1 내지 약 5,000 ppm, 약 1 내지 약 1,000 ppm, 약 1 내지 약 500 ppm, 약 10 내지 약 5,000 ppm, 약 10 내지 약 2,000 ppm, 약 10 내지 약 1,000 ppm, 약 10 내지 약 500 ppm, 약 10 내지 약 250 ppm, 약 10 내지 약 100 ppm, 약 50 내지 약 5,000 ppm, 약 50 내지 약 2,000 ppm, 약 50 내지 약 1,000 ppm, 약 50 내지 약 500 ppm, 약 50 내지 약 250 ppm, 또는 약 50 내지 약 100 ppm의 농도로 존재한다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 영양 조성물 중 약 1 내지 약 5,000 ppm, 약 10 내지 약 1,000 ppm, 약 10 내지 약 500 ppm, 또는 약 50 내지 약 500 ppm의 농도로 존재한다.
일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 영양 조성물 중 10 ppm 초과, 50 ppm 초과, 100 ppm 초과, 200 ppm 초과, 300 ppm 초과, 400 ppm 초과, 500 ppm 초과, 600 ppm 초과, 1,000 ppm 초과, 또는 2,000 ppm 초과의 농도로 존재한다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 영양 조성물 중 10 ppm 초과, 50 ppm 초과, 100 ppm 초과, 200 ppm 초과, 또는 500 ppm 초과의 농도로 존재한다.
일부 양태에서, 동물의 유형 및 연령에 따라, 영양 조성물은 단백질, 미네랄(예컨대, 구리, 칼슘, 및 아연), 염, 필수 아미노산, 비타민, 및/또는 항생 물질을 추가로 포함할 수 있다.
일부 양태에서, 베이스 영양 조성물 및 개시된 올리고사카라이드 제제를 포함하는 영양 조성물을 동물에게 투여하는 방법이 또한 본원에 제공되고, 사료용 영양 조성물의 제조 방법이 본원에 기술된다. 일부 양태에서, 동물은 축우(예컨대, 육용 축우 및 유용 축우), 돼지, 수생 동물, 가금류 및 인간으로부터 선택된다. 일부 양태에서, 동물은 돼지, 예컨대 암컷 돼지, 새끼 돼지, 및 거세 수컷 돼지이다. 다른 양태에서, 동물은 가금류, 예컨대 닭, 오리, 칠면조, 거위, 메추라기, 및 암닭이다. 일부 양태에서, 가금류는 비육용, 육종용, 또는 산란용이다. 일부 양태에서, 동물은 수생 동물, 예컨대 연어, 메기, 베스, 뱀장어, 틸라피아, 도다리, 새우, 및 게이다. 일부 양태에서, 영양 조성물은 건조 형태, 액체 형태, 페이스트, 또는 이들의 조합으로 동물에게 투여된다. 일부 양태에서, 투여 형태, 급식 속도, 및 급식 일정은 동물의 유형 및 연령에 따라 다양할 수 있다.
영양 조성물의 제조 방법
올리고사카라이드 제제를 베이스 영양 조성물과 조합하는 단계를 포함하는 영양 조성물의 제조 방법이 본원에 제시된다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 베이스 영양 조성물과는 상이한 글리코시드 결합 유형 분포를 포함한다.
일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제는 합성 올리고사카라이드 제제이다. 일부 양태에서, 합성 올리고사카라이드 제제는 1 내지 n으로부터 선택되는 구별되는 중합도를 갖는 올리고사카라이드의 적어도 n개의 분획(DP1 내지 DPn 분획)을 포함한다. 일부 양태에서, n은 2 이상의 정수이다. 일부 양태에서, n은 2 초과의 정수이다. 일부 양태에서, n은 3 초과의 정수이다. 일부 양태에서, n은 1 내지 100의 정수, 예컨대 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 40, 또는 50이다. 일부 양태에서, 각각의 DP1 내지 DPn 분획은 질량 분광법에 의해 측정시 상대적 빈도를 기준으로 0.1 내지 90% 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제의 DP1 및 DP2 분획은 각각 독립적으로 질량 분광법에 의해 측정시 상대적 빈도를 기준으로 약 0.1 내지 약 15% 또는 약 0.5 내지 약 10%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제의 DP1 및 DP2 분획은 각각 독립적으로 질량 분광법에 의해 측정시 상대적 빈도를 기준으로 약 0.1%, 0.5%, 0.6%, 0.7%, 0.8%, 0.9%, 1%, 1.1%, 1.2%, 1.3%, 1.4%, 또는 1.5 내지 약 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 15%, 또는 20%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함한다. 일부 양태에서, 각각의 n개의 분획에서 올리고사카라이드의 상대적 빈도는 이의 중합도에 따라 단조 감소된다. 일부 양태에서, 5 이상, 10 이상, 20 이상, 또는 30개 이상의 DP 분획 중 올리고사카라이드의 상대적 빈도는 이의 중합도에 따라 단조 감소된다.
일부 양태에서, 영양 조성물의 제조 방법은 올리고사카라이드 제제와 베이스 영양 조성물을 혼합하는 단계를 포함한다. 예컨대, 일부 양태에서, 혼합은 산업용 블렌더 및/또는 믹서, 예컨대 드럼(drum) 블렌더, 더블 콘(double cone) 블렌더, 리본 블렌더, V 블렌더, 전단(shear) 믹서, 및 패들(paddle) 믹서에 의해 수행될 수 있다.
일부 양태에서, 영양 조성물의 제조 방법은 본원에 기술된 품질 관리 단계를 추가로 포함한다. 일부 양태에서, 본원에 기술된 품질 관리 단계는 상기 영양 조성물의 샘플에서 신호의 수준을 측정하는 단계, 및 상기 신호의 수준을 근거로 상기 영양 조성물 중 올리고사카라이드 제제의 농도를 계산하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 본원에 기술된 품질 관리 단계는 분석 계측을 통해 상기 영양 조성물의 샘플에서 신호를 검출하는 단계; 및 영양 조성물의 배치를 상기 신호의 존재 또는 부재에 근거하여 승인 또는 거절하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 본원에 기술된 품질 관리 단계는 분석 계측을 통해 상기 영양 조성물의 제1 샘플에서 제1 신호의 존재 또는 부재를 검출하는 단계; 및 상기 제1 신호와 제2 신호를 비교하는 단계를 포함한다. 일부 양태에서, 신호, 제1 신호, 및/또는 제2 신호는 (i) 하나 이상의 무수-아단위-함유-올리고사카라이드의 지표이거나, (ii) 올리고사카라이드의 중합도(DP) 분포와 관련되거나, (iii) 올리고사카라이드의 α-(1,2) 글리코시드 결합, α-(1,3) 글리코시드 결합, α-(1,6) 글리코시드 결합, β-(1,2) 글리코시드 결합, β-(1,3) 글리코시드 결합, β-(1,4) 글리코시드 결합, β-(1,6) 글리코시드 결합과 관련된다.
추가적으로, 일부 양태에서, 영양 조성물의 제조 방법은 품질 관리 단계 후, 올리고사카라이드 제제와 베이스 영양 조성물을 추가로 혼합하는 단계, 올리고사카라이드 제제의 수준을 조정하는 단계, 또는 이들의 조합을 포함한다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제의 수준을 조정하는 단계는 추가적인 올리고사카라이드 제제를 영양 조성물에 첨가함 또는 영양 조성물로부터 올리고사카라이드의 일부를 제거함을 포함한다. 일부 양태에서, 올리고사카라이드 제제의 수준을 조정하는 단계는 추가적인 베이스 영양 조성물을 영양 조성물에 첨가함 또는 영양 조성물로부터 베이스 영양 조성물을 일부를 제거함을 포함한다. 일부 특정 양태에서, 올리고사카라이드 제제의 수준을 조정하는 단계는 추가적인 올리고사카라이드 제제를 영양 조성물에 첨가함을 포함한다.
실시예
실시예 1: 글루코-갈락토-올리코사카라이드 제제의 합성
글루코-갈락토-올리고사카라이드 제제의 합성을 1 kg 규모에서의 제조에 적합하도록 선택된 촉매 로딩, 반응 시간 및 반응 온도를 사용하여 3 L 반응 용기에서 수행하였다.
D-글루코스 1수화물(825.16 g), D-락토스 1수화물(263.48 g) 및 2-피리딘설폰산(1.0079 g, 시그마-알드리치(Sigma-Aldrich), 미국 미주리주 세인트 루이스 소재)을 3 L 3목 환저 플라스크(1개의 중심 29/42 그라운드 유리 접합부(ground glss joint) 및 2개의 측면 그라운드 유리 접합부를 가짐)에 첨가하였다. 133 mm 테플론 교반 날을 PTFE 테이프를 사용하여 유리 교반 막대에 부착하였다. 상기 교반 막대를 테플론 베어링 어댑터를 사용하여 중심점을 통해 고정시키고 가요성 연결기를 통해 오버헤드 고-토크 기계식 믹서에 부착하였다. 측면 포트 중 하나에서 고무 격벽을 통해 삽입된 J형 막대 열전대을 통해 온도 제어 유닛에 의해 작동하는 반구형 전기 가열 맨틀 내부에 상기 플라스크를 고정하였다. 상기 혼합 요소 위에 수 mm 간격을 두어 반응 혼합물 내에 상기 열전대의 끝부분이 잠기도록 조정하였다. 보조 온도 모니터에 연결된 제2 온도 프로브도 동일한 방법에 의해 삽입 및 고정하였다. 상기 플라스크의 제2 측면 포트에 재순환식 욕 냉각기에 의해 4℃ 미만으로 유지되는 물-글리콜에 의해 냉각되는 환류 응축기를 장착하였다.
반응 혼합물을 80 내지 100 rpm의 교반 속도에 의한 연속 혼합으로 130℃로 점진적으로 가열하였다. 반응 혼합물이 120℃에 도달할 때, 상기 환류 응축기를 증류 구조에 재위치시키고, 증류물을 얼음 욕 내에 위치한 250 mL 환저 플라스크에 채집하였다. 혼합물을 6시간 동안 연속 혼합에 의해 130℃로 유지한 후, 열전대 박스의 전원을 껐다. 상기 증류 장치를 제거하고 390 g의 60℃의 증류된 물을 상기 3목 플라스크에 점진적으로 첨가하였다. 생성된 혼합물을 10시간 동안 40 rpm으로 교반하였다. 약 1,250 g의 점성 연호박색 물질을 채집하고 굴절률을 측정하여 농도는 71.6 브릭스였다.
실시예 2: 글루코-올리코사카라이드 제제의 합성
글루코-올리고사카라이드 제제의 합성을 1 kg 규모에서의 제조에 적합하도록 선택된 촉매 로딩, 반응 시간 및 반응 온도를 사용하여 3 L 반응 용기에서 수행하였다.
D-글루코스 1수화물(1,150 g)을 3 L 3목 환저 플라스크(1개의 29/42 그라운드 유리 접합부 및 2개의 측면 24/40 그라운드 유리 접합부를 가짐)에 첨가하였다. 133 mm 테플론 교반 날을 PTFE 테이프를 사용하여 유리 교반 막대에 부착하였다. 상기 교반 막대를 테플론 베어링 어댑터를 사용하여 플라스크의 중심 포트를 통해 고정시키고 가요성 연결을 통해 오버헤드 고-토크 기계식 믹서에 부착하였다. 측면 포트 중 하나에서 고무 격벽을 통해 삽입된 J형 막대 열전대을 통해 온도 제어 유닛에 의해 작동하는 반구형 전기 가열 맨틀 내부에 상기 플라스크를 고정하였다. 상기 혼합 요소 위에 수 mm 간격을 두어 반응 혼합물 내에 상기 열전대의 끝부분이 잠기도록 조정하였다. 보조 온도 모니터에 연결된 제2 온도 프로브도 동일한 방법에 의해 삽입 및 고정하였다. 상기 플라스크의 제2 측면 포트에 재순환식 욕 냉각기에 의해 4℃ 미만으로 유지되는 물-글리콜에 의해 냉각되는 환류 응축기를 장착하였다.
반응 혼합물을 80 내지 100 rpm의 교반 속도에 의한 연속 혼합으로 130℃로 점진적으로 가열하였다. 온도가 120 내지 130℃로 증가했을 때, (+)-캠퍼-10-설폰산(1.16 g, 시그마-알드리치, 미국 미주리주 세인트 루이스 소재)을 3목 플라스크에 첨가하고, 상기 장치를 환류 응축기로부터, 얼음 욕 내에 위치한 환저 채집 플라스크로 전환하였다. 상기 설정을 1시간 30분 동안 유지한 후, 열전대 박스의 전원을 끄고, 상기 증류 장치를 제거하고, 390 g의 23℃의 증류된 물을 상기 3목 플라스크에 점진적으로 첨가하였다. 생성된 혼합물을 채집시까지 10시간 동안 40 rpm으로 교반하였다. 약 1,300 g의 점성 암호박색 물질을 채집하고 측정하여 농도는 72.6 브릭스였다.
실시예 3: 글루코-갈락토-만노-올리코사카라이드 제제의 합성
글루코-갈락토-만노-올리고사카라이드 제제의 합성을 1 kg 규모에서의 제조에 적합하도록 선택된 촉매 로딩, 반응 시간 및 반응 온도를 사용하여 3 L 반응 용기에서 수행하였다. MH47-32-A/MH46-35-B: 8/10/18
글루코-갈락토-만노-올리고사카라이드 제제를 별개 반응 용기에서 합성된 2개의 별개 성분으로서 제조하고, 이를 독립적으로 채집하였다. 각각의 합성에는 상이한 출발 반응물을 사용하되, 동일한 절차 및 방법을 사용하여 완료하였다. 최종 글루코-갈락토-만노-올리고사카라이드 제제는 둘 다의 합성 생성물의 혼합으로부터 형성된 균질한 시럽였다.
제1 성분의 합성을 위해, 990.54 g의 글루코스 1수화물, 105.58 g의 락토스 1수화물 및 1.00 g의 2-피리딘설폰산을 3 L 3목 환저 플라스크(하나의 중심 29/42 그라운드 접합부 및 그 옆의 2개의 24/43 그라운드 접합부를 가짐)에 첨가하였다. 133 mm 테플론 교반 날을 PTFT 테이프를 사용하여 440 mm 유리 교반 막대에 부착하였다. 상기 교반 막대를 테플론 베어링 어댑터를 사용하여 중심점을 통해 고정시키고 가요성 연결기를 통해 오버헤드 고-토크 기계식 믹서에 부착하였다. 측면 포트 중 하나에서 고무 격벽을 통해 삽입된 J형 막대 열전대을 통해 온도 제어 유닛에 의해 작동하는 반구형 전기 가열 맨틀 내부에 상기 플라스크를 넣었다. 상기 혼합 요소 위에 수 mm 간격을 두어 반응 혼합물 내에 상기 열전대의 끝부분이 잠기도록 조정하였다. 보조 온도 모니터에 연결된 제2 온도 프로브도 동일한 방법에 의해 삽입 및 고정하였다. 상기 플라스크의 제2 측면 포트에 재순환식 욕 냉각기에 의해 4℃ 미만으로 유지되는 물-글리콜에 의해 냉각되는 환류 응축기를 장착하였다.
반응 혼합물을 80 내지 100 rpm의 교반 속도에 의한 연속 혼합으로 130℃로 점진적으로 가열하였다. 120 내지 130℃로 온도 제어 박스 판독이 관찰될 때, 상기 장치를 환류 응축기로부터, 얼음 욕에 위치한 환저 채집 플라스크를 갖는 증류 구조로 전환하였다. 상기 설정을 약 6시간 10분 동안 유지한 후, 가열 맨틀의 전원을 끄고, 상기 증류 장치를 제거하고, 390 g의 60℃의 증류된 물을 상기 3목 플라스크에 점진적으로 첨가하였다. 생성된 혼합물을 채집시까지 10시간 동안 40 rpm으로 교반하였다. 약 1,250 g의 점성 연호박색 물질을 채집하고 굴절률에 의해 측정하여 농도는 73.1 브릭스였다.
제2 성분의 합성을 위해, 825.04 g의 글루코스 1수화물, 251.16 g의 순수 만노스(목재로부터 유래), 25.10 g의 증류수, 및 1.00 g의 2-피리딘설폰산을 3 L 3목 환저 플라스크(하나의 중심 29/42 그라운드 접합부 및 그 옆의 2개의 24/43 그라운드 접합부를 가짐)에 첨가하였다. 제2 성분의 나머지 합성은 채집시까지 제1 성분의 것과 동일한 절차 및 방법을 따랐다. 약 1,250 g의 점성 암호박색 물질을 채집하고 측정하여 농도는 72.3 브릭스였다.
제1 성분 및 제2 성분 전체를 적절한 크기의 HDPE 용기에 옮기고 균질해질 때까지 수작업으로 전체 혼합하였다. 최종 시럽 혼합물은 약 2.5 kg이고 암호박색이고 점성이고 농도는 측정하여 약 72 브릭스였다.
실시예 4: 글루코-만노-올리코사카라이드 제제의 합성
글루코-올리고사카라이드 제제의 합성을 1 kg 규모에서의 제조에 적합하도록 선택된 촉매 로딩, 반응 시간 및 반응 온도를 사용하여 3 L 반응 용기에서 수행하였다.
글루코-만노-올리고사카라이드 제제를 별개 반응 용기에서 합성된 2개의 별개 성분으로서 제조하고, 이를 독립적으로 채집하였다. 각각의 합성에는 상이한 출발 반응물을 사용하되, 동일한 절차 및 방법을 사용하여 완료하였다. 최종 글루코-만노-올리고사카라이드 제제는 둘 다의 합성 생성물의 혼합으로부터 형성된 균질한 시럽였다.
제1 성분의 합성을 위해, 1,264.80 g의 글루코스 1수화물을 3 L 3목 환저 플라스크(하나의 중심 29/42 그라운드 접합부 및 그 옆의 2개의 24/43 그라운드 접합부를 가짐)에 첨가하였다. 133 mm 테플론 교반 날을 PTFT 테이프를 사용하여 440 mm 유리 교반 막대에 부착하였다. 상기 교반 막대를 테플론 베어링 어댑터를 사용하여 중심점을 통해 고정시키고 가요성 연결기를 통해 오버헤드 고-토크 기계식 믹서에 부착하였다. 측면 포트 중 하나에서 고무 격벽을 통해 삽입된 J형 막대 열전대을 통해 온도 제어 유닛에 의해 작동하는 반구형 전기 가열 맨틀 내부에 상기 플라스크를 넣었다. 상기 혼합 요소 위에 수 mm 간격을 두어 반응 혼합물 내에 상기 열전대의 끝부분이 잠기도록 조정하였다. 보조 온도 모니터에 연결된 제2 온도 프로브도 동일한 방법에 의해 삽입 및 고정하였다. 상기 플라스크의 제2 측면 포트에 재순환식 욕 냉각기에 의해 4℃ 미만으로 유지되는 물-글리콜에 의해 냉각되는 환류 응축기를 장착하였다.
반응 혼합물을 80 내지 100 rpm의 교반 속도에 의한 연속 혼합으로 130℃로 점진적으로 가열하였다. 120 내지 130℃로 온도 제어 박스 판독이 관찰될 때, 1.15 g의 (+)-캠퍼-10-설폰산을 3목 플라스크에 첨가하고, 상기 장치를 환류 응축기로부터, 얼음 욕 내에 위치한 환저 채집 플라스크로 전환하였다. 상기 설정을 약 1시간 동안 유지한 후, 열전대 박스의 전원을 끄고, 상기 증류 장치를 제거하고, 390 g의 23℃의 증류수를 상기 3목 플라스크에 점진적으로 첨가하였다. 생성된 혼합물을 채집시까지 10시간 동안 40 rpm으로 교반하였다. 약 1,350 g의 점성 연호박색 물질을 채집하고 농도는 측정하여 71.8 브릭스였다.
제2 성분의 합성을 위해, 949.00 g의 글루코스 1수화물, 288.00 g의 순수 만노스(목재로부터 유래), 27.94 g의 증류수, 및 1.15 g의 2-피리딘설폰산을 3 L 3목 환저 플라스크(하나의 중심 29/42 그라운드 접합부 및 그 옆의 2개의 24/43 그라운드 접합부를 가짐)에 첨가하였다. 제2 성분의 나머지 합성은 채집시까지 제1 성분의 것과 동일한 절차 및 방법을 따르되, (+)-캠퍼-10-설폰산을 첨가하지 않고 상기 환류 응축기를 증류 구조로 전환하고, 결과적인 설정을 약 6시간 동안 유지하였다. 약 1,350 g의 점성 암호박색 물질을 채집하고 측정하여 농도는 72.0 브릭스였다.
제1 성분 및 제2 성분 전체를 적절한 크기의 HDPE 용기에 옮기고 균질해질 때까지 수작업으로 전체 혼합하였다. 최종 시럽 혼합물은 약 2.7 kg이고 암호박색이고 점성이고 굴절률에 의해 측정하여 농도는 약 72 브릭스였다.
실시예 5: 글루코-만노-올리코사카라이드 제제의 합성
올리고사카라이드 제제의 1 kg 규모에서의 제조에 적합하도록 선택된 촉매 로딩, 반응 시간 및 반응 온도를 사용하여 3 L 반응 용기에서 수행하였다.
글루코-만노-올리고사카라이드 제제를 별개 반응 용기에서 합성된 2개의 별개 성분으로서 제조하고, 이를 독립적으로 채집하였다. 각각의 합성에는 상이한 출발 반응물을 사용하되, 동일한 절차 및 방법을 사용하여 완료하였다. 최종 글루코-만노-올리고사카라이드 제제는 둘 다의 합성 생성물의 혼합으로부터 형성된 균질한 시럽였다.
제1 성분의 합성을 위해, 1,261.00 g의 글루코스 1수화물 및 1.15 g의 2-피리딘설폰산을 3 L 3목 환저 플라스크(하나의 중심 29/42 그라운드 접합부 및 그 옆의 2개의 24/43 그라운드 접합부를 가짐)에 첨가하였다. 133 mm 테플론 교반 날을 PTFT 테이프를 사용하여 440 mm 유리 교반 막대에 부착하였다. 상기 교반 막대를 테플론 베어링 어댑터를 사용하여 중심점을 통해 고정시키고 가요성 연결기를 통해 오버헤드 고-토크 기계식 믹서에 부착하였다. 측면 포트 중 하나에서 고무 격벽을 통해 삽입된 J형 막대 열전대을 통해 온도 제어 유닛에 의해 작동하는 반구형 전기 가열 맨틀 내부에 상기 플라스크를 고정하였다. 상기 혼합 요소 위에 수 mm 간격을 두어 반응 혼합물 내에 상기 열전대의 끝부분이 잠기도록 조정하였다. 보조 온도 모니터에 연결된 제2 온도 프로브도 동일한 방법에 의해 삽입 및 고정하였다. 상기 플라스크의 제2 측면 포트에 재순환식 욕 냉각기에 의해 4℃ 미만으로 유지되는 물-글리콜에 의해 냉각되는 환류 응축기를 장착하였다.
반응 혼합물을 80 내지 100 rpm의 교반 속도에 의한 연속 혼합으로 130℃로 점진적으로 가열하였다. 120 내지 130℃의 온도 제어 박스 판독이 관찰될 때, 상기 장치를 환류 응축기로부터, 얼음 욕에 위치한 환저 채집 플라스크를 갖는 증류 구조로 전환하였다. 상기 설정을 약 6시간 동안 유지한 후, 열전대 박스의 전원을 끄고, 상기 증류 장치를 제거하고, 390 g의 23℃의 증류수를 상기 3목 플라스크에 점진적으로 첨가하였다. 생성된 혼합물을 채집시까지 10시간 동안 40 rpm으로 교반하였다. 약 1,250 g의 점성 연호박색 물질을 채집하고 농도는 측정하여 73.5 브릭스였다.
제2 성분의 합성을 위해, 949.00 g의 글루코스 1수화물, 288.00 g의 순수 만노스(목재로부터 유래), 28.94 g의 증류수, 및 1.15 g의 2-피리딘설폰산을 3 L 3목 환저 플라스크(하나의 중심 29/42 그라운드 접합부 및 그 옆의 2개의 24/43 그라운드 접합부를 가짐)에 첨가하였다. 제2 성분의 나머지 합성은 채집시까지 제1 성분의 것과 동일한 절차 및 방법을 따랐다. 약 1,250 g의 점성 암호박색 물질을 채집하고 측정하여 농도는 73.3 브릭스였다.
제1 성분 및 제2 성분 전체를 적절한 크기의 HDPE 용기에 옮기고 균질해질 때까지 수작업으로 전체 혼합하였다. 최종 시럽 혼합물은 약 2.5 kg이고 암호박색이고 점성이고 농도는 측정하여 약 73 브릭스였다.
실시예 6: 글루코-갈락토-올리코사카라이드 제제의 합성
올리고사카라이드 제제의 1 kg 규모에서의 제조에 적합하도록 선택된 촉매 로딩, 반응 시간 및 반응 온도를 사용하여 3 L 반응 용기에서 수행하였다.
3 L 3목 플라스크에 10 mm 직경 유리 교반 막대를 통해 14 cm 초승달형 혼합 요소에 연결된 오버헤드 믹서를 장착하였다. 상기 혼합 요소를 상기 플라스크의 벽으로부터 약 5 mm 간격을 두어 위치시켰다. 반응 플라스크에 삽입된 막대형 열전대 프로브에 연결된 온도 제어 유닛에 의해 전력을 공급받는 반구형 전기 가열 맨틀을 통해 상기 플라스크를 가열하였다. 상기 열전대 프로브를 혼합 요소 위에 5 내지 10 mm 간격이 있도록 위치시켰다. 상기 플라스크에 576 g의 식품등급 덱스트로스 1수화물 및 577 g의 식품등급 D-갈락토스 1수화물을 투입하고 약 115℃로 가열하여 용융된 당 시럽을 수득하였다. 시럽이 수득될 때, 상기 플라스크에 순환 냉각된 글리콜/물에 의해 4℃로 냉각된 재킷 환류 응축기를 장착하였다. 31 g의 다우익스 마라톤 C(Dowex Marathon C)(수분 함량 0.48 g H2O/g 수지)를 혼합물에 첨가하여 교반된 현탁액을 생성하였다. 상기 응축기를 증류 구조로 재위치시키고, 현탁액을 145℃로 가열하였다.
약 80 rpm의 혼합 속도 및 145℃의 온도를 3.8시간 동안 유지한 후, 온도 제어 유닛에서의 설정점을 80℃로 낮추고, 119 mL의 60℃의 탈이온수를 상기 플라스크에 점진적으로 첨가하여 잔류 다우익스 수지를 함유하는 암호박색 시럽을 수득하였다. 생성된 현탁액을 60 브릭스까지 추가 희석하고 실온으로 냉각하고 0.45 미μm 필터를 통해 진공 여과하여 수지를 제거하였다. 1,200 g의 연호박색 시럽을 60 브릭스 농도로 수득하였다.
실시예 7: 글루코-올리코사카라이드 제제의 합성
올리고사카라이드 제제의 1 kg 규모에서의 제조에 적합하도록 선택된 촉매 로딩, 반응 시간 및 반응 온도를 사용하여 3 L 반응 용기에서 수행하였다.
3 L 3목 플라스크에 10 mm 직경 유리 교반 막대를 통해 14 cm 초승달형 혼합 요소에 연결된 오버헤드 믹서를 장착하였다. 상기 혼합 요소를 상기 플라스크의 벽으로부터 약 5 mm 간격을 두어 위치시켰다. 반응 플라스크에 삽입된 막대형 열전대 프로브에 연결된 온도 제어 유닛에 의해 전력을 공급받는 반구형 전기 가열 맨틀을 통해 상기 플라스크를 가열하였다. 상기 열전대 프로브를 혼합 요소 위에 5 내지 10 mm 간격이 있도록 위치시켰다. 상기 플라스크에 1148 g의 식품등급 덱스트로스 1수화물을 점진적으로 투입하고 약 115℃로 가열하여 용융된 당 시럽을 수득하였다. 시럽이 수득될 때, 상기 플라스크에 순환 냉각된 글리콜/물에 의해 4℃로 냉각된 재킷 환류 응축기를 장착하였다. 반응 온도를 145℃로 점진적으로 증가시켰다. 온도에 도달하고 안정해질 때, 31 g의 다우익스 마라톤 C(수분 함량 0.48 g H2O/g 수지)를 혼합물에 첨가하고, 약 80 rpm의 혼합 속도 및 145℃의 온도를 3.8시간 동안 유지하였다.
3.8시간 후, 온도 제어 유닛에서의 설정점을 80℃로 낮추고, 119 mL의 60℃의 탈이온수를 상기 플라스크에 점진적으로 첨가하여 잔류 다우익스 수지를 함유하는 암호박색 시럽을 수득하였다. 생성된 현탁액을 60 브릭스까지 추가 희석하고 실온으로 냉각하고 0.45 μm 필터를 통해 진공 여과하여 수지를 제거하였다. 1,113 g의 암호박색 글루코-올리고사카라이드 시럽을 60 브릭스 농도로 수득하였다.
실시예 8: 올리고사카라이드 제제의 단일-포트 합성
실시예 3으로부터의 올리고사카라이드의 단일-포트(단일 성분) 합성을 단일-포트 반응에 적합한 것으로 밝혀진 촉매 로딩, 반응 시간, 및 반응 온도를 사용하여 1 L 반응 용기에서 300 g 규모로 수행하였다.
272.30 g의 식품등급 D-글루코스 1수화물(옥수수로부터 유래), 37.50 g의 식품등급 D-만노스(목재로부터 유래), 15.60 g의 식품등급 D-락토스 1수화물, 3.96 g의 증류수 및 0.270 g의 2-피리딘설폰산(시그마-알드리치, 미국 미주리주 세인트 루이스 소재)을 1 L 3목 환저 플라스크(1개의 중심 29/42 그라운드 접합부 및 그 옆의 2개의 24/40 그라운드 접합부를 가짐)에 첨가하였다. PTFE 테이프를 사용하여 테플론 교반 날을 220 mm 유리 교반 막대에 부착하였다. 상기 교반 막대를 테플론 베어링 어댑터를 사용하여 중심점을 통해 고정시키고 가요성 연결기를 통해 오버헤드 고-토크 기계식 믹서에 부착하였다. 측면 포트 중 하나에서 고무 격벽을 통해 삽입된 J형 막대 열전대을 통해 온도 제어 유닛에 의해 작동하는 반구형 전기 가열 맨틀 내부에 상기 플라스크를 고정하였다. 상기 혼합 요소 위에 수 mm 간격을 두어 반응 혼합물 내에 상기 열전대의 끝부분이 잠기도록 조정하였다. 보조 온도 모니터에 연결된 제2 온도 프로브도 동일한 방법에 의해 삽입 및 고정하였다. 상기 플라스크의 제2 측면 포트에 재순환식 욕 냉각기에 의해 4℃ 미만으로 유지되는 물-글리콜에 의해 냉각되는 환류 응축기를 장착하였다.
반응 혼합물을 80 내지 100 rpm의 교반 속도에 의한 연속 혼합으로 130℃로 점진적으로 가열하였다. 120 내지 130℃로 온도 제어 박스 판독이 관찰될 때, 상기 장치를 환류 응축기로부터, 얼음 욕에 위치한 환저 채집 플라스크를 갖는 증류 구조로 전환하였다. 혼합물을 130℃에서 약 5시간 40분 동안 연속적인 교반에 의해 유지한 후, 가열 맨틀 및 증류 장치를 제거하였다. 약 40 g의 23℃의 증류된 물을 상기 3목 플라스크에 점진적으로 첨가하였다. 생성된 혼합물을 채집시까지 10시간 동안 40 rpm으로 교반하였다. 약 389 g의 점성 암호박색 물질을 채집하고 측정하여 농도는 67.0 브릭스였다. 실시예 3으로부터의 올리고사카라이드 제제의 일관도를 SEC 크로마토그래피 및 2D 1H, 13C-HSQC NMR 스펙트럼 분석에 의해 검증하였다.
실시예 9: 올리고사카라이드 제제의 특성규명
실시예 1 내지 8로부터의 방법 및 절차를 사용하여 실시예 1 내지 7의 올리고사카라이드의 복제 배치 및 배합물을 제조하였다. 생성된 물질을 HPLC 크기 배제 크로마토그래피(SEC)에 의해 분석하여 분자량 분포를 특성규명하고, LC-MS/MS에 의해 분석하여 DP2 무수-당 함량을 정량분석하고, 2D 1H, 13C-HSQC NMR에 의해 상응하는 올리고사카라이드 제제의 분자 구조를 핑거프린팅(fingerprinting)하였다.
실시예 9.1: 실시예 1로부터의 올리고사카라이드 제제의 11개의 회분을 준비하고, 4개의 개별 로트로 배합하여 올리고사카라이드 제제 9.1을 제조하였다.
실시예 9.2: 실시예 2로부터의 올리고사카라이드 제제의 7개의 회분을 준비하고, 2개의 개별 로트로 배합하여 올리고사카라이드 제제 9.2를 제조하였다.
실시예 9.3: 실시예 3으로부터의 올리고사카라이드 제제의 12개의 회분을 준비하고, 5개의 개별 로트로 배합하여 올리고사카라이드 제제 9.3을 제조하였다.
실시예 9.4: 실시예 4로부터의 올리고사카라이드 제제의 4개의 회분을 준비하고, 단일 로트로 배합하여 올리고사카라이드 제제 9.4를 제조하였다.
실시예 9.5: 실시예 5로부터의 올리고사카라이드 제제의 4개의 회분을 준비하고, 단일 로트로 배합하여 올리고사카라이드 제제 9.5를 제조하였다.
실시예 9.6: 실시예 6으로부터의 올리고사카라이드 제제의 2개의 회분을 준비하고, 단일 로트로 배합하여 올리고사카라이드 제제 9.6을 제조하였다.
실시예 9.7: 실시예 7로부터의 올리고사카라이드 제제의 2개의 회분을 준비하고, 단일 로트로 배합하여 올리고사카라이드 제제 9.7을 제조하였다.
실시예 9.1 내지 9.7의 회분에서, 각각의 합성안의 다중-포트(다중-성분) 및 단일-포트 변형이 둘 다 사용된다.
실시예 1 내지 7의 올리고사카라이드 제제의 추가의 구조적 이형은 실시예 1 내지 7의 방법을 사용하여 300 g 규모로 합성하되, 출발 당 조성물, 산, 산 로딩, 시간, 및 반응 온도를 변경하였다. 올리고사카라이드 제제를 하기와 같이 합성하였다.
실시예 9.8: 300 g의 수크로스, 3 g의 인산, 및 27 g의 물을 125℃에서 약 1시간 동안 반응시켜 암갈색 올리고사카라이드 시럽을 수득한 후, 증류수에 의해 60 브릭스까지 희석하였다.
실시예 9.9: 270 g의 글루코스, 30 g의 수크로스, 0.3 g의 페닐포스핀산, 및 27 g의 물을 130℃에서 1 내지 4시간 동안 반응시켜 암갈색 올리고사카라이드 시럽을 수득한 후, 증류수에 의해 60 브릭스까지 희석하였다.
실시예 9.10: 225 g의 글루코스, 75 g의 락토스, 3 g의 부틸설폰산 및 27 g의 물을 130℃에서 1 내지 4시간 동안 반응시켜 암호박색 올리고사카라이드 시럽을 수득한 후, 증류수에 의해 60 브릭스까지 희석하였다.
실시예 9.11: 225 g의 글루코스, 75 g의 락토스, 3 g의 페닐포스핀산 및 27 g의 물을 130℃에서 1 내지 5시간 동안 반응시켜 암호박색 올리고사카라이드 시럽을 수득한 후, 증류수에 의해 60 브릭스까지 희석하였다.
실시예 9.12: 270 g의 글루코스, 30 g의 락토스, 3 g의 페닐포스핀산 및 27 g의 물을 130℃에서 3 내지 5시간 동안 반응시켜 암갈색 올리고사카라이드 시럽을 수득한 후, 증류수에 의해 60 브릭스까지 희석하였다.
실시예 9.13: 300 g의 글루코스, 3 g의 페닐포스핀산, 및 27 g의 물을 130℃에서 1 내지 3시간 동안 반응시켜 암호박색 올리고사카라이드 시럽을 수득한 후, 증류수에 의해 60 브릭스까지 희석하였다.
실시예 9.14: 300 g의 글루코스, 2 g의 프로피온산, 및 27 g의 물을 130℃에서 1 내지 4시간 동안 반응시켜 호박색 올리고사카라이드 시럽을 수득한 후, 증류수에 의해 60 브릭스까지 희석하였다.
실시예 9.15: 300 g의 글루코스, 0.15 g의 8-하이드록시-5-퀴놀린설폰산 수화물, 및 27 g의 물을 130℃에서 2 내지 4시간 동안 반응시켜 호박색 올리고사카라이드 시럽을 수득한 후, 증류수에 의해 60 브릭스까지 희석하였다.
상기 반응에서, 모든 질량은 순수 성분 질량을 지칭하고, 반응하는 물은 수분 함량 및/또는 반응하는 당의 수화에서의 물에 의해 제공되는 임의의 보유되는 물을 포함한다.
올리고사카라이드 제제의 특성규명 :
생성된 물질을 HPLC 크기 배제 크로마토그래피(SEC)에 의해 분석하여 분자량 분포를 특성규명하고, LC-MS/MS에 의해 분석하여 DP2 무수-당 함량을 정량분석하고, 2D 1H, 13C-HSQC NMR에 의해 상응하는 올리고사카라이드 제제의 분자 구조를 핑거프린팅하였다.
HPLC에 의한 중합체 MW 분석:
실시예 9.1 내지 9.7의 올리고사카라이드 제제의 수 평균 분자량(MWn) 및 중량 평균 분자량(MWw)을 HPLC에 의해 측정하였다. SEC 분석을 어질런트(Agilent) 1,100 시리즈 HPLC에서 어질런트 PL 아쿠아겔-OH 20 컬럼(40℃, 이동상으로서 0.45 mL/분의 증류수)을 사용하여 굴절률 검출에 의해 수행하였다. 공지된 분자량을 갖는 표준 용액 및 당업계의 표준적인 방법을 사용하여 수행한 MW 보정에 대한 체류 시간을 사용하여 SEC 크로마토그램으로부터 다양한 분포 특성을 측정하였다.
[표 2]
다수의 로트를 갖는 올리고사카라이드 제제에 대한 중합체 분자량(MW)
Figure pct00006
LC-MS/MS에 의한 무수-DP2 함량 분석:
올리고사카라이드 제제의 무수 DP2 함량을 LC-MS/MS에 의해 캡셀 팩 NH2(Capcell Pak NH2)(시세이도(Shiseido), 250 x 4, 6 mm, 5 μm) 컬럼(물/아세톤 35/65의 등용매 조건하에 1 mL/분의 유속)을 사용하여 측정하였다. MS에 선행하여, 유동물을 1:4로 분할하고, 50 μL의 0.05% NH4OH의 추가 유동을 첨가하여 이온화를 강화하였다. MS 검출 ESI 프로브를 음의 모드로 사용하고 MRM 방법으로 표적화 분석하였다.
먼저, 올리고사카라이드 제제의 DP2 함량을 기준 조성물로서 실시예 9.7의 올리고사카라이드 제제의 것을 기준으로 측정하였다. 이어서, 실시예 9.7의 기준 올리고사카라이드 제제의 무수 DP2 절대 함량을 HPLC-MS/MS에 의해 약 10%인 것으로 측정한 후, 실시예 9.1 내지 9.6의 올리고사카라이드 제제의 DP2 함량을 계산에 의해 수득하였다. DP2 상대 함량 및 절대 함량은 다음과 같이 측정되었다.
[표 3]
다수의 로트를 갖는 올리고사카라이드 제제에 대한 무수 DP2 함량
Figure pct00007
2D 1 H, 13 C- HSQC NMR에 의한 분자 핑거프린트:
실시예 9의 올리고사카라이드 제제의 분자 구조를 2D 1H, 13C- HSQC NMR 분광법에 의해 특성규명하였다. 40℃에서 125 mg(무수 고체 기준)의 올리고사카라이드 제제를 건조하고 0.1% 아세톤을 함유하는 D2O에 재용해시킴으로써 샘플을 준비하였다. NMR 스펙트럼을 400 MHz의 양성자 주파수에서 작동하는 브루커 아반스 NMR 분광계 또는6 00 MHz의 양성자 주파수에서 작동하는 브루커 아반스 III NMR 분광계(극저온 냉각된 5 mm TCI 프로브가 장착된) 상에서 획득하였다. 도 1은 실시예 9.7의 올리고사카라이드 제제의 설명적인 2D 1H, 13C HSQC NMR 스펙트럼을 제공한다.
1H, 13C-HSQC 스펙트럼의 아노머 영역(F2(δ1H) = 4.2 내지 6.0 ppm 및 F1(δ13C) = 90 내지 120 ppm)을 올리고사카라이드 제제의 결합 분포의 핑커프린팅에 사용하였다. 상기 아노머 영역에서의 각각의 피크를 적분하고 전체 아노머 영역의 상대적 빈도를 기준으로 이의 상대적 빈도를 측정하였다. 실시예 9.1의 올리고사카라이드 제제의 4개의 로트에서 2D 1H, 13C HSQC 핑거프린팅을 수행하여, 하기 표 4에 제공된 상대적 빈도를 야기하였다.
[표 4]
실시예 9.1의 올리고사카라이드 제제의 2D 1H, 13C HSQC NMR 피크의 상대적 빈도
Figure pct00008
실시예 10: 올리고사카라이드 제제의 무수 당 아단위의 측정
실시예 9의 올리고사카라이드 제제 중 무수-당 아단위의 상대적 빈도를 브루커 울트라플렉스 계기(Bruker Ultraflex)에서 MALDI-MS에 의해 측정하였다. 샘플을 10 mg/mL의 농도까지 물에 용해시키고, 이로부터 5 μL를 기질 용액(1:10의 비의 80% 에탄올 및 물 중 30 mg/mL DHB)과 혼합하였다. 표적 플레이트에 1 μL의 분석물 용액을 도포함으로써 플레이트를 제조하고 주위 공기에서 건조시켰다. 일부 경우에서, MS 분석에 선행하여, 1 μL 에탄올을 도포함으로써 샘플을 재결정화시켰다.
도 2는 올리고사카라이드 제제(실시예 9)의 예시적인 MALDI 스펙트럼을 나타낸다. 무수-당 아단위는 이의 각각의 원래 모 DP와 비교하여 -18 g/mol만큼 오프셋 피크가 이동된 것으로 관찰되었다. 오프셋 피크는 모든 값의 DP에서 관찰되었는데, 이는 무수-당 아단위가 모든 올리고사카라이드 크기에서 검출됨을 나타낸다. 무수-아단위 피크의 상대적 강도는 각각의 DP에 대해 약 10%의 총 피크 강도인 것으로 측정되었다.
도 14a 및 도 14b는 실시예 2의 올리고사카라이드 제제의 MALDI 스펙트럼을 도시한다. 무수-당 아단위는 5 내지 10%의 상대적 강도를 갖는 모든 DP 수준에서 관찰된다.
실시예 11: 올리고사카라이드 제제의 무수-아단위의 특성규명
실시예 9의 올리고사카라이드 제제의 무수-당-아단위를 LC-MS, GC-MS, LC-MS/MS, 및 NMR 방법의 조합을 사용하여 특성규명하였다.
무수-DP1 성분의 특성규명:
올리고사카라이드 제제(실시예 9)의 무수 DP1 성분을 분취 액체 크로마토그래피에 의해 단리하였다. 단리된 무수-DP1 성분을 0.75 mL의 D2O 중 용해시킴으로써 NMR을 위해 준비하였다. 도 3은 실시예 9의 올리고사카라이드로부터 단리된 무수 DP1 분획의 예시적인 1D 1H-NMR 스펙트럼을 나타내고, 도 4는 동일한 단리된 무수 DP1 분획의 예시적인 APT 13C-NMR 스펙트럼을 나타낸다. NMR 피크 배치는 표 5 및 도 5에 제공된다.
[표 5]
NMR 피크 배치
Figure pct00009
a Ov는 중첩된 신호를 나타낸다.
1,6-무수-베타-D-글루코퓨라노스 대 1,6-무수-베타-D-글루코피라노스의 비는 NMR에 의해 2:1인 것으로 측정된다.
실시예 12: 올리고사카라이드 제제의 무수-아단위의 특성규명
실시예 9의 올리고사카라이드 제제의 무수-당-아단위를 LC-MS, GC-MS, LC-MS/MS, 및 NMR 방법의 조합을 사용하여 특성규명하였다.
무수-DP2 성분의 특성규명
실시예 9의 올리고사카라이드 제제의 무수 DP2 함량을 GC-MS 및 LC-MS/MS 분석에 의해 측정하였다. 21.57 psi 상압 헬륨을 담체 기체로 사용하여 기체 크로마토그래피(HP-5MS 고정상을 함유하는 30 m x 0.25 mm 융합 실리카 컬럼을 사용함)를 수행하였다. 30분 동안 60℃에서 0.5 mL의 피리딘과 0.5 mL의 아세트산 무수물 중 20 mg의 샘플을 용해시킴으로써 아세틸화에 의해 분취액을 예비-유도체화하였다. 1 μL 샘플을 70℃에서 시작하고 315℃까지 분당 10℃로 증가하는 오븐 온도 프로그램에 투입하였다. 70 eV의 전자 에너지에 의해 어질런트 5975C MSD에서 검출을 수행하였다.
도 6은 실시예 9.7의 올리고사카라이드 제제에 대한 GC-MS 크로마토그램의 확대도를 도시한다. TIC 및 XIC(m/z 229) 도표는 무수-DP2 성분이 DP2 성분 전에 용리됨을 입증한다.
도 19a 및 19b, 20a 및 20b, 21a 및 21b, 및 22a 및 22b는 각각 실시예 1, 실시예 3, 실시예 4, 및 실시예 7의 올리고사카라이드 제제에서 GC-MS에 의해 검출된 DP1, 무수 DP1, DP2 및 무수 DP2 분획의 존재를 도시한다. 도 19a 및 19b, 20a 및 20b, 21a 및 21b, 및 22a 및 22b에 도시된 바와 같이, 무수 DP1 및 DP1 분획은 약 12 내지 17분의 체류 시간을 갖고, 무수 DP2 및 DP2 분획은 약 22 내지 25분의 체류 시간을 갖는다.
도 28은 상이한 레이저 에너지에서 올리고사카라이드 제제(실시예 9)의 MALDI-MS 스펙트럼 비교를 나타낸 것이다. 신호의 상대적 빈도는 거의 변하지 않았는데, 이는 레이저 이온화에 의해 물의 손실이 개시되어 않았음을 나타낸다. 따라서, 이는 올리고사카라이드 제제 중 무수-당-아단위의 존재를 입증한다.
실시예 13: 비교 실시예
시판용 5 kDa 덱스트란을 무수-당-아단위의 존재에 대해 MALDI-MS에 의해 분석하였다. 도 7은 원래 DP 피크로부터 오프셋 피크 이동(-18 g/mol)의 명확한 존재를 나타낸다(851.268 g/mol의 Na+ 부가물). 대조적으로, 덱스트란 샘플은 무수-당-아단위를 본질적으로 미함유함이 밝혀졌다.
실시예 14: LC-MS/MS에 의한 무수 DP 성분의 정량분석
샘플을 물에 용해시키고 분리된 캡셀 팩 NH2(시세이도, 250 x 4.6 mm, 5 μm) 컬럼(물/아세토니트릴 35/65의 등용매 조건하에 1 mL/분의 유속)을 사용하여 분리하였다. 일부 경우에서, 크로마토그래피 분리 후, 50 μL 0.05% NH4OH를 첨가하여 이혼화를 강화하였다. 무수 DP2 함량을 MS/MS 검출에 의해 측정하였다. MS 검출을 위해, ESI 프로브를 음의 모드로 사용하고 MRM 방법으로 표적화 분석하였다. 도 8은 농도에 대한 LC-MS/MS 크로마토그램 하의 면적으로부터 선형 보정 곡선(도 9에 제시됨)으로 물 중 1 내지 80 μg/mL의 농도 범위에 걸친 올리고사카라이드 제제(실시예 9)의 검출을 나타낸다.
도 15a 내지 15c, 16a 내지 16c, 17a 내지 17c, 및 18a 내지 18c는 실시예 1, 실시예 3, 실시예 4, 및 실시예 7 각각의 올리고사카라이드 제제에서 LC-MS에 의해 검출된 무수 DP2, 무수 DP1, 및 DP2 종의 존재를 나타낸다.
실시예 15: 올리고사카라이드 제제를 포함하는 사료의 제조
가금류 및 돼지 식이를 제조하여 상기 식이로 올리고사카라이드 제제가 혼입되게 하였다. 다양한 성분 조성을 나타내는 대조군 사료 및 실시예 9의 올리고사카라이드 제제로 각각의 대조군 사료를 증대시킴으로써 수득된 상응하는 처리 사료를 하기와 같이 제조하였다:
실시예 사료 15.1: 대조군 사료 15.1(CTR)을 62% 옥수수 분말, 및 32% 대두 분말을 사용하여 제조하였다. 처리된 사료 15.1(TRT)은 대조군 사료 15.1(CTR)을 500 mg/kg의 올리고사카라이드 제제(실시예 9)에 의해 증대시킴으로써 제조하였다. 처리된 식이의 경우, 올리고사카라이드 제제를, 올리고사카라이드를 분쇄된 쌀겨(담체)에 분말 형태로 건조시키고, 상기 분말을 마이크로-성분 저울을 사용하여 믹서에 첨가한 후, 펠릿화함으로써, 제공하였다.
실시예 사료 15.2: 대조군 사료 15.2(CTR)를 62% 옥수수 분말, 3% 대두 농축물, 및 26% 대두 분말을 사용하여 제조하였다. 처리된 사료 15.2(TRT)는 대조군 사료 15.2(CTR)를 500 mg/kg의 올리고사카라이드 제제(실시예 9)에 의해 증대시킴으로써 제조하였다. 처리된 식이의 경우, 올리고사카라이드 제제를, 올리고사카라이드를 분쇄된 쌀겨(담체)에 분말 형태로 건조시키고, 상기 분말을 마이크로-성분 저울을 사용하여 믹서에 첨가한 후, 펠릿화함으로써, 제공하였다.
실시예 사료 15.3: 대조군 사료 15.3(CTR)을 52% 옥수수 분말, 6% 옥수수 전분, 5% 대두 농축물, 26% 대두 분말, 및 티타늄 옥사이드 마이크로-트레이서(micro-tracer)를 사용하여 제조하였다. 처리된 사료 15.3(TRT)은 대조군 사료 15.3(CTR)을 500 mg/kg의 올리고사카라이드 제제에 의해 증대시킴으로써 제조하였다. 처리된 식이의 경우, 올리고사카라이드 제제를, 올리고사카라이드를 분쇄된 쌀겨(담체)에 분말 형태로 건조시키고, 상기 분말을 마이크로-성분 저울을 사용하여 믹서에 첨가한 후, 펠릿화함으로써, 제공하였다.
실시예 사료 15.4: 대조군 사료 15.4(CTR)를 55% 옥수수 분말, 및 39% 대두 분말을 사용하여 제조하였다. 처리된 사료 15.4(TRT)는 대조군 사료 15.4(CTR)를 1,000 mg/kg의 올리고사카라이드 제제에 의해 증대시킴으로써 제조하였다. 처리된 식이의 경우, 올리고사카라이드 제제를, 올리고사카라이드를 분쇄된 쌀겨(담체)에 분말 형태로 건조시키고, 상기 분말을 마이크로-성분 저울을 사용하여 믹서에 첨가한 후, 펠릿화함으로써, 제공하였다.
실시예 사료 15.5: 대조군 사료 15.5(CTR)를 62% 옥수수 분말, 3% 대두 농축물, 및 26% 대두 분말을 사용하여 제조하였다. 처리된 사료 15.5(TRT)는 대조군 사료 15.5(CTR)를 500 mg/kg의 올리고사카라이드 제제(실시예 9)에 의해 증대시킴으로써 제조하였다. 처리된 식이의 경우, 올리고사카라이드 제제를 분말 형태로 제조하고, 상기 분말을 마이크로-성분 저울을 사용하여 믹서에 첨가한 후, 펠릿화하였다.
실시예 사료 15.6: 대조군 사료 15.6(CTR)은 시판용 미국 옥수수-대두 스타터(starter) 가금류 사료였다. 처리된 사료 15.6(TRT)은 시판용 미국 옥수수-대두 스타터 가금류 사료(500 ppm의 올리고사카라이드 제제를 함유함)였다. 처리된 식이의 경우, 올리고사카라이드 제제를 분말 형태로 제조하고, 상기 분말을 마이크로-성분 저울을 사용하여 믹서에 첨가한 후, 펠릿화하였다.
실시예 사료 15.7: 대조군 사료 15.7(CTR)은 하기 식이 조성을 갖는 연구용 옥수수-대두 가금류 사료였다: 옥수수 분말 62.39%, 대두 분말 31.80%, 칼슘 카보네이트 0.15%, 바이칼식(bicalcic) 포스페이트 2.2%, 나트륨 클로라이드 0.15%, DL-메티오닌 0.15%, L-리신 0.10%, 대두유 2.00%, 비타민-미네랄 사전혼합물 1.00%, 및 항콕시듐제(cocciodiostat) 0.06%. 처리된 사료 15.7(TRT)은 대조군 사료 15.7(CTR)을 1,000 ppm의 실시예 9.1의 올리고사카라이드 제제로 보충함으로써 수득하였다. 처리된 식이의 경우, 올리고사카라이드 제제를 물 중 60% 시럽으로서 제공하고 펠릿화 후의 사료에 상기 시럽을 분무에 의해 도포하였다.
실시예 사료 15.8: 대조군 사료 15.8(CTR)은 하기 조성을 갖는 연구용 옥수수-대두 가금류 사료였다: 밀 분말 48.45%, 대두 분말 32.00%, 호밀 12%, 칼슘 카보네이트 0.20%, 바이칼식 포스페이트 2.00%, 나트륨 클로라이드 0.20%, DL-메티오닌 0.15%, 대두유 4.00%, 비타민-미네랄 사전혼합물 1.00%. 처리된 사료 15.7(TRT)은 대조군 사료 15.7(CTR)을 1,000 ppm의 실시예 9.3의 올리고사카라이드 제제로 보충함으로써 수득하였다. 처리된 식이의 경우, 올리고사카라이드 제제를 물 중 60% 시럽으로서 제공하고 펠릿화 후의 사료에 상기 시럽을 분무에 의해 도포하였다.
상기 사료 15.1 내지 15.6이 산업적 표준 수준의 지방, 비타민, 미네랄, 아미노산, 기타 마이크로영양소 및 사료 효소도 함유할 수 있음이 당업자에게 이해될 것이다. 일부 경우에서, 사료는 항콕시듐제를 함유하였지만, 모든 경우, 성장 촉진용 항생제는 미함유하였다. 사료를 표준적인 실시에 따라 매시(mash), 펠릿화된, 또는 가루화된 식이로서 제공하였다.
실시예 16: 단조 감소하는 DP 분포를 갖는 올리고사카라이드 제제의 합성
330 g의 D-글루코스 1수화물 및 0.3 g의 (+)-캠퍼-10-설폰산을 1-L 3-목 플라스크에 첨가하고, 고-토크 기계식 믹서에 의해 플렉스 커플링을 통해 오버헤드 기계적 혼합을 제공하였다. 플라스크를 반응 혼합물에 삽입된 막대 열전대를 통해 온도 제어 유닛에 의해 작동하는 반구 전지 가열 맨틀 내에 안전하게 위치시켰다. 열전대의 끝을 조정하여 혼합 요소 위 몇 mm 간격으로 반응 혼합물 내에 두었다. 물-글리콜 혼합물에 의해 냉각된 환류 응축기가 장착된 플라스크를 재순환 욕 냉각기에 의해 4℃ 미만으로 유지하였다.
반응 혼합물을 80 내지 100 rpm의 교반 속도로 연속 혼합하면서 130℃까지 점진적으로 가열하였다. 반응 온도가 120 내지 130℃로 증가될 때, 장치를 환류 응축기에서 빙욕에 위치된 환저 수용 플라스크를 갖는 증류 구성으로 바꿨다. 반응 혼합물을 60 동안 120 RPM 혼합 하에 130℃에서 유지하고, 수용 플라스크에 수집된 축합물 덩어리를 10분 간격의 작용 시간으로서 기록하였다. 증류수를 첨가하고 열을 제거함으로써 반응 혼합물을 급랭시켰다. 생성된 혼합물을 실온으로 냉각한 후, 생성물 시럽의 분취액을 굴절률에 의해 측정된 약 1 브릭스까지 희석하였다. 희석된 분취액을, 0.2 μm 주사기 필터를 사용하여 미세여과하고, HPLC 크기 배제 크로마토그래피(SEC)로 분석하였다. 이동상으로서 0.45 mL/분으로 증류수와 함께 40℃에서 아길런트 PL 아쿠아겔-OH 20 컬럼을 사용하여, 굴절률 검출과 함께 SEC 분석을 아길런트 1100 시리즈 HPLC 상에서 수행하였다. MW 교정에 대한 체류 시간은 공지된 분자량의 표준 용액을 사용하여 수행하였다. DP 평형 상수는 K = 3.3인 것으로 측정되었고, DP 분포는 단조 감소하는 것으로 밝혀졌다. 도 10은 HPLC-SEC에 의해 측정된 DP 분포의 형상을 명백히 도시한다.
실시예 17: 비-단조 DP 분포를 갖는 올리고사카라이드 제제의 합성
330 g의 D-글루코스 1수화물 및 0.3 g의 (+)-캠퍼-10-설폰산을 1-L 3-목 플라스크에 첨가하고, 고-토크 기계식 믹서에 의해 플렉스 커플링을 통해 오버헤드 기계적 혼합을 제공하였다. 플라스크를 반응 혼합물에 삽입된 막대 열전대를 통해 온도 제어 유닛에 의해 작동하는 반구 전지 가열 맨틀 내에 안전하게 위치시켰다. 열전대의 끝을 조정하여 혼합 요소 위 몇 mm 간격으로 반응 혼합물 내에 두었다. 물-글리콜 혼합물에 의해 냉각된 환류 응축기가 장착된 플라스크를 재순환 욕 냉각기에 의해 4℃ 미만으로 유지하였다.
반응 혼합물을 80 내지 100 rpm의 교반 속도로 연속 혼합하면서 135℃까지 점진적으로 가열하였다. 반응 온도가 130℃로 증가될 때, 장치를 환류 응축기에서 빙욕에 위치된 환저 수용 플라스크를 갖는 증류 구성으로 바꿨다. 반응 혼합물을 35분 동안 120 RPM 혼합 하에 135℃에서 유지하였다. 증류수를 첨가하고 열을 제거함으로써 반응 혼합물을 급랭시켰다. 생성된 혼합물을 실온으로 냉각한 후, 생성물 시럽의 분취액을 굴절률에 의해 측정된 약 1 브릭스까지 희석하였다. 희석된 분취액을, 0.2 μm 주사기 필터를 사용하여 미세여과하고, HPLC 크기 배제 크로마토그래피(SEC)로 분석하였다. 이동상으로서 0.45 mL/분으로 증류수와 함께 40℃에서 아길런트 PL 아쿠아겔-OH 20 컬럼을 사용하여, 굴절률 검출과 함께 SEC 분석을 아길런트 1100 시리즈 HPLC 상에서 수행하였다. MW 교정에 대한 체류 시간은 공지된 분자량의 표준 용액을 사용하여 수행하였다. DP 분포는 비-단조 감소하는 것으로 밝혀졌다. 도 11은 DP3 함량이 DP2 함량보다 크고, DP4 및 DP5 함량이 본질적으로 동등함을 명백히 도시한다.
실시예 18: 올리고사카라이드 제제의 유가식 합성
330 g의 D-글루코스 1수화물 및 0.3 g의 피리딘설폰산을 1-L 3-목 플라스크에 첨가하고, 고-토크 기계식 믹서에 의해 플렉스 커플링을 통해 오버헤드 기계적 혼합을 제공하였다. 플라스크를 반응 혼합물에 삽입된 막대 열전대를 통해 온도 제어 유닛에 의해 작동하는 반구 전지 가열 맨틀 내에 안전하게 위치시켰다. 열전대의 끝을 조정하여 혼합 요소 위 몇 mm 간격으로 반응 혼합물 내에 두었다. 물-글리콜 혼합물에 의해 냉각된 환류 응축기가 장착된 플라스크를 재순환 욕 냉각기에 의해 4℃ 미만으로 유지하였다.
반응 혼합물을 80 내지 100 rpm의 교반 속도로 연속 혼합하면서 130℃까지 점진적으로 가열하였다. 반응 온도가 120 내지 130℃로 증가될 때, 장치를 환류 응축기에서 빙욕에 위치된 환저 수용 플라스크를 갖는 증류 구성으로 바꿨다. 반응 혼합물을 120 RPM 혼합 하에 130℃에서 유지하고, 수용 플라스크에 수집된 축합물 덩어리를 20분 간격의 작용 시간으로서 기록하였다. 210분 후, 추가 110 g의 D-글루코스 1수화물을 반응 혼합물에 첨가하였다. 420분 후, 증류수를 첨가하고 열을 제거함으로써 반응 혼합물을 급랭시켰다. 생성된 혼합물을 실온으로 냉각한 후, 생성물 시럽의 분취액을 굴절률에 의해 측정된 약 1 브릭스까지 희석하였다. 희석된 분취액을, 0.2 μm 주사기 필터를 사용하여 미세여과하고, HPLC 크기 배제 크로마토그래피(SEC)로 분석하였다. 이동상으로서 0.45 mL/분으로 증류수와 함께 40℃에서 아길런트 PL 아쿠아겔-OH 20 컬럼을 사용하여, 굴절률 검출과 함께 SEC 분석을 아길런트 1100 시리즈 HPLC 상에서 수행하였다. MW 교정에 대한 체류 시간은 공지된 분자량의 표준 용액을 사용하여 수행하였다. DP 평형 상수는 K = 0.8인 것으로 측정되었고, DP 분포는 단조 감소하는 것으로 밝혀졌다.
실시예 19: 올리고사카라이드 제제를 급식한 시판용 비육계의 성장 성능
비육계를 실시예 15.6의 식이로 육성하여 상기 동물의 성장 성능에 대한 올리고사카라이드의 효과를 측정하였다. 구체적으로, 가용성분을 갖는 건조된 증류 주정박 곡물(dried distillers grains with solubles, DDGS), 항콕시듐제 및 표준 마이크로영양소 배합물을 함유하는 시판용 옥수수-대두분 가금류 사료를 산업적 실시 및 3개의 상의 급식 프로그램에 따라 제조하였다. 근사 분석에 의해, 상기 사료 조성물을 하기 표 6에 제시된 바와 같이 측정하였다.
[표 6]
사료 조성물
Figure pct00010
대조군(CTR) 및 처리된(TRT) 식이를 실시예 15.6에 기술된 바와 같이 각각의 상에 대해 제조하되, 상기 처리 식이는 실시예 9.7의 올리고사카라이드 제제를 사용하여 대조군 식이를 처리되는 톤당 1 파운드로 증대시킴으로써 제조하였다. 전체로, 약 50톤의 각각의 식이를 제조하였다.
당일 부화 허버드(Day-of-hatch Hubbard) M99 Х Cobb 500 직주(straight run) 병아리를 시중 가금류 부화장으로부터 입수하고 터널-환기되는 흙바닥 가금류 집에 설치된 36 피트 x 40 피트 우리에 무작위로 배치하였다. 각 우리에 동일한 수의 병아리이고 총 약 30,000 마리의 병아리를 배치하였다. 상기 집의 잠자리는 신선한 목재 대팻밥이 상단에 깔린 짚단으로 구성되었다. 표준의 상업적 환경 및 조명 프로그램을 사용하였다. 일반적인 건강 상태, 사료 섭취, 물 공급 및 시설 온도를 비롯하여 동물 및 사육 시설을 매일 관찰하였다.
홀수 번째 우리 내의 병아리에게 처리된 식이(즉, 2 파운드/톤 포함으로 사료 첨가제를 함유함)를 급식하고, 짝수 번째 우리 내의 병아리에게 대조군 식이를 급식하였다. 모든 식이는 각각의 우리에서 1일에서 7일차까지 자동 사료 공급기를 통해 사료 공급 트레이에서 원하는 만큼 제공하였다. 물은 꼭지형 음용 라인으로부터 원하는 만큼 공급하였다.
0일에서 13일차까지 스타터 단계, 14일부터 27일까지 그로워 단계, 28일부터 연구 종료(31일)까지 위드로얼 단계가 진행되었다. 우리에 따른 병아리 중량을 0 및 31일에 기록하였다. 섭취된 사료의 총 질량을 각각의 우리에 대해 기록하였다. 이어서, 증체량 및 FCR을 표준적인 산업적 실무에 따라 각각의 우리에 대해 측정하였다.
31일차에, 6마리의 수컷 병아리를 각각의 우리에 대해 혈액 및 맹장 샘플링을 위해 무작위로 선택하였다. 각각의 샘플링된 병아리의 생체중을 기록하였다. 혈액 샘플은 날개 구멍을 통해 진공 채혈관에 채집하고 응고 및 혈청 분리 후 냉동하였다. 이어서, 각각의 샘플링된 병아리를 경부 탈구를 통해 안락사시킨 후, 표준적인 수의학적 방법을 사용하여 맹장을 적출하였다. 절개 후, 맹장 내용물을 15 mL 원추형 관에 옮기고, 맹장 내용물의 중량을 기록하고, 상기 내용물을 -80℃로 급속 냉동하였다.
샘플링된 병아리의 체중으로부터, 처리군은 체중의 11 포인트 증가를 나타냈고, 유의도는 P < 0.05였다(아노바(ANOVA)에 의함).
실시예 20: 제조를 위한 복제 회분 규모확장
올리고사카라이드 제제의 생산 규모는 720 L 오버헤드-교반된 탱크 반응기의 생산 규모로 증가하였다. 실시예 9.2에서 유도된 규모확장 절차를 사용하는 12개의 회분 반응은 720 L 규모에서 수행되었다. 생성된 올리고사카라이드 제제는 배치 정성분석을 수행하고 공정 안정성을 평가하기 위한 소정 QC 허용 기준에 따라 특성규명되었다. 최종 생성물 중 잔류 촉매를 실시예 26의 과정을 사용하여 회분에 대해 측정하였다.
12개의 회분에 대해, 온도, 반응 시간 및 반응 압력과 같은 공정 조건을 실시예 9.2의 공칭 조건 주변의 범위에서 의도적으로 변경하여, 전형적인 제조 환경에서 기대될 수 있는 공정 조건의 합리적인 변화에 대한 생성된 생성물의 민감도를 평가하였다. 선택된 회분의 경우, 반응기 내용물의 점도에 대한 시간 의존성을 모니터링하기 위해 동일 반응계 점도 프로브를 사용하였다. 특정 배치에서, 반응 중지 시간은 연속 점도 측정을 기반으로 하는 공정 중 제어(IPC)를 사용하였다. 반응물, 증류수, 배출된 축합물의 배분된 양을 비롯한 물질 양은 반응기 및 보조 탱크의 로드 셀을 통해 질량 또는 체적 유량 및 시간으로 측정하였다.
모든 회분의 생성된 올리고사카라이드 시럽 외관은 카라멜 시럽으로서 육안 검사에 의해 결정되었다. 총 용해된 고체 함량은 칼 피셔 적정에 의해 측정되었고, 잔류 단량체 함량, MWn 및 MWw는 HPLC/GPC 크로마토그래피에 의해 측정되었고, pH는 교정된 pH 미터에 의해 측정되고, 무수-DP2 함량은 LC-MS/MS에 의해 측정되었다. 표 24에 제시된 바와 같이, 하기 회분 특성규명 데이터가 수득되었다(N/R = "보고되지 않은 데이터").
[표 7]
올리고사카라이드 제제의 특성규명
Figure pct00011
전체적으로 약 6 메트릭 톤의 70 중량% 시럽을 제조하였다. 회분을 QC 분석 전에 분리하고, 하기 허용 기준에 대해 측정하였다: 68 내지 72 중량%의 총 용해된 고체, 총 탄수화물에 대해 18 중량% 이하의 잔류 단량체 함량, 카라멜 시럽 외관, 및 최종 시럽을 기준으로 0.1 중량% 이하의 잔류 촉매. 예를 들어, 회분 27.3, 27.4, 및 27.5는 이러한 기준에 근거하여 허용된 반면, 회분 27.11은재시험 및/또는 폐기되었다.
실시예 21: 올리고사카라이드 제제의 pH 조정
50 중량% 고체 함량에서 실시예 9.2의 올리고사카라이드 제제의 pH는 1.80 ± 0.02 mL의 탈이온수로 올리고사카라이드 제제의 5.00 ± 0.05 g의 분취액을 희석하고 와류 교반에 의해 혼합하여 균일한 농도를 수득함으로써, 3회 측정되었다. 2.4 pH 단위의 평균 판독치를 수득하기 위해 교정된 pH 미터(VWR, 심포니(Symphony) B30PCI)를 사용하여 각각의 분취액의 pH를 측정하였다.
1.2 kg의 실시예 9.2의 올리고사카라이드 제제에 6.53 mL의 1.0 몰 나트륨 하이드록사이드 수용액을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 격렬하게 혼합하여 균일한 pH-조정 시럽을 달성하였다. 50 중량% 고체 함량에서 생성된 조정된 시럽의 pH를 전술된 바와 같이 3회 측정하여 평균 4.1 pH 단위를 수득하였다.
다양한 규모의 복제 회분 합성을 위해 pH 조정 절차를 반복하였지만, 염기가 생성물 올리고사카라이드 조성물에 제공되는 절차에 있어서 특정한 변화가 있었다. 한 회분의 경우, 반응 수의 희석 전에 반응의 최종 단계로서 pH 조정을 수행하였다. 다른 회분에서, pH 조정은 먼저 필요한 양의 염기를 희석수에 용해시킴으로써 희석 단계와 동시에 수행하였고; 따라서, 염기 및 희석수를 함께 첨가하여 반응을 단일 단계로 켄칭하여 원하는 pH에서 최종 시럽을 생성하였다. 다른 회분에서, 염기는 식품-등급 나트륨 하이드록사이드 펠렛으로 제공되었다. 다른 회분에서, 희석 및 pH 조정 전에 10 ppm의 식품-등급 실리콘 에멀젼(다우 시아미터(Dow Xiameter) AFE-0100)을 반응에 첨가하였다.
실시예 22: 올리고사카라이드 제제의 유리 분말 제형의 제조
약 50 g의 실시예 9.1의 올리고사카라이드 제제를 건조 트레이에 배분하고, 60℃에서 강제 공기 대류 가열기에 위치시켜 카라멜 색상의 취성 유리를 생성하였다. 유리를 건조 트레이에서 제거하고, 전단 회전 밀로 분쇄하여 연주황색의 유동성 분말을 수득하였다. 분말의 입자 크기는 체질을 통해 100 내지 2,000 μm이고, 질량의 90%는 1,350 μm 미만으로 측정되었다. 거친 분쇄된 분말의 실제 밀도는 헬리움 핀크노메트리(Helium Pyncnometry)에 의해 1.3063 g/mL로 측정되었다. 생성된 분말은 유동성인 것으로 관찰되었다.
해머 밀을 사용하여 제형화 절차를 반복하여 분말 질량의 90%가 196 μm 미만의 입자 크기를 갖는 미세 분말을 수득하였다. 미세 분쇄된 분말의 실제 밀도는 1.5263 g/mL로 측정되었다. 생성된 분말은 안정하거나 유동성이 없었다.
2개의 온도 순환 프로그램을 사용하여 분말에 대해 DSC 측정을 수행하였다. 첫 번째 프로그램에서, 온도는 5℃/분의 속도로 0℃에서 160℃로 상승하고, 이어서 -5℃/분의 속도로 다시 0℃로 어닐링되고, 이어서 160℃까지 최종 가열된다. 두 번째 프로그램에서, 온도는 5℃/분의 속도로 -50℃에서 50℃로 상승하고, -5℃/분의 속도로 -60℃로 어닐링되고, 이어서 5℃/분의 속도로 60℃로 가열된다. 분말은 5 내지 10 중량% 수분의 고체의 잔류 수함량에 따라 20 내지 40℃의 유리 전이 온도를 나타내는 것으로 관찰되었다.
실시예 9.2, 실시예 9.3, 실시예 9.4 및 실시예 9.5의 올리고사카라이드 제제 각각에 대해 분쇄 제형화 공정을 반복하였다. 분말은 물과 알코올-물 혼합물에 쉽게 다시 용해되었지만, 아세톤, 메탄올 및 무수 에탄올에는 불용성였다.
실시예 23: 담체-로딩된 분말 제형의 제조
실시예 9.2의 올리고사카라이드 제제의 70 중량% 수성 시럽과 규조토의 동일한 질량을 실온에서 조합하여 안정한 유동성 분말을 수득하였다. 생성된 분말은 약 35 중량%의 흡착된 올리고사카라이드(무수 고체 기준) 및 약 50 중량%의 담체를 포함하였다. 분말의 입자 크기 분포를 체질로 측정하였다. 분말의 10 중량%는 290 μm 미만의 입자 크기를 나타냈고, 분말의 50 중량%는 511 μm 미만의 입자 크기를 나타냈고, 분말의 90 중량%는 886 μm 미만의 입자 크기를 나타냈다. 분말은 표준 통기 및 압축성 시험을 사용하여 측정된 바와 같이 분리 및 응집에 안정적였다. 생성된 분말의 실제 밀도는 헬리움 핀크노메트리에 의해 1.8541 g/mL로 측정되었다.
최종 분말에 대해 50 중량% 이상의 올리고사카라이드 제제(무수 고체 기준)의 로딩을 갖는 안정한 유동성 분말을 산출하기 위해 사료-등급 실리카를 사용하여 담체 로딩 제형화를 반복하였다. 생성된 분말의 실제 밀도는 1.5562 g/mL로 측정되었다.
실시예 24: 압출된 고체 형태의 제조
실시예 9.2의 올리고사카라이드 제제의 20%를 세몰리나와 배합하여 고체 압출된 생성물을 제조하고, 재킷형 이축 염료 압출기를 통해 혼합물을 제형화시켜 0.2 내지 3.0 mm의 입자 크기를 갖는 유동성 분말을 형성하고, 질량의 90%는 2 mm 미만의 입자 크기를 가졌다. 생성된 분말은 자유 유동하고 안정한 것으로 관찰되었다.
실시예 25: 안정한 분말 제형의 제조
실시예 22 내지 24의 제형을 비롯한 고체 제형을 평가하여 안정성 및 흡습성을 측정하였다. 실시예 23 및 24의 분말은 분리 및 응집에 안정한 것으로 관찰되었고, 실시예 22의 거친 분쇄된 분말은 분리에 대해 불안정한 것으로 관찰되었다.
시험할 각각의 분말 제형의 샘플을 25℃에서 2주 이하의 노출 동안 50% 상대 습도 및 65% 상대 습도에서 밀봉된 기후 챔버에 위치시켰다. 시험된 형태 중 일부는 습도에 노출되었을 때 질량 증가가 거의 또는 전혀 나타나지 않았고, 2주 노출 기간 후 유동성을 유지하였다. 실시예 22의 미세-분쇄된 분말은 습기에 노출되면 불안정한 것으로 밝혀졌다.
실시예 26: 올리고사카라이드 제제 중 잔류 촉매의 측정
올리고사카라이드 제제의 잔류 산 촉매 함량은 이온 크로마토그래피에 의해 측정되었다. 올리고사카라이드 제제의 분말 제형(예를 들어, 실시예 51에 기술된 바와 같이 수득됨)의 80 내지 100 mg을 정확히 1.00 mL에 용해시키고, 필요에 따라 원심분리하여 미립자를 제거하였다. 생성된 용액은 전도도 검출기, 4 x 250 mm 이온 팩 AS19A 컬럼, 이온 팩 AS19G 50 4 x 50 mm 프리-컬럼 및 연속 재생된 CR-ATC 음이온 트랩 컬럼(용리액으로 물 중 KOH를 사용함)이 장착된 써모 다이오넥스(Thermo Dionex) ICS-3000 시스템을 사용하여 30℃에서 이온 크로마토그래피로 분석하였다. 주입 후 처음 10분 동안 10 mM KOH에서 용리를 수행하고, 이어서 구배 용리를 25분에 55 mM KOH까지 선형으로 증가시키고, 26분에 10 mM KOH로 감소시키고, 프로그램 종료시까지 10 mM KOH로 유지함으로써, 용리를 수행하였다.
실시예 9.2의 올리고사카라이드 제조의 경우, (+)-캠퍼-10-설폰산의 정품 샘플을 사용하여 생성된 표준 교정 곡선을 참조하여 잔류 촉매의 농도를 측정하였다. 실시예 9.2의 올리고사카라이드 제제의 대표적인 회분을 분석하고, 잔류 촉매 농도는 70 중량% 시럽 1 g 당 0.62 mg으로 측정되었다.
실시예 27: 회분 허용을 위한 잔류 촉매 농도의 정량분석
추가 사용을 위한 회분의 적합성을 측정하기 위해 실시예 26의 잔류 촉매 측정을 회분 허용 기준과 비교하였다. 생성물 올리고사카라이드 제제에서 잔류 촉매의 농도에 대한 허용 한계는 생성물 시럽 1 g 당 1.0 mg 미만으로 미리 설정하였다. 잔류 촉매의 측정 값은 생성물 시럽 1 g 당 0.62 mg였다. 따라서, 시험된 회분에 대한 허용 기준이 충족되었고, 회분은 추가 사용을 위해 승인되었다.
실시예 28: 사료 샘플의 추출
실시예 15의 절차에 따라 제조된 식이를 추출에 의해 가공하였다. 사료 샘플을 제분기에 의해 분쇄하였다. 5 g의 생성된 제분된 사료를 50 mL 부피 플라스크에 칭량하여 넣고, 뜨거운 물(약 80℃)을 첨가하였다. 진탕 후, 혼합물을 80℃에서 30분 동안 초음파 욕에서 항온처리하였다. 냉각 후, 용액을 3,000 xg로 20분 동안 원심분리하고, 상청액을 1.2 μm 필터에 이어서 0.45 μm 필터(및 일부 경우 0.22 μm 필터)를 통해 여과하였다. 생성된 여과된 용액을 회전식 증발기에 의해 증발 건조시켰다.
일부 경우에서, 대체 추출 용매로서 물 중 50 중량% 에탄올을 사용하여 추출을 수행하였다. 일부 경우에, 5,000 돌턴 분자량 컷오프 막 필터를 사용하여 여과 단계를 수행하였다.
실시예 29: 사료 추출물의 효소적 가공
실시예 28의 사료 추출물을 하나 이상의 효소적 가수분해 단계에 투입하여 사료에 자연적으로 존재하는 올리고사카라이드를 소화시켰다. α-아밀라제와 아밀로글리코시다제의 혼합물을 사용하여 글루코-올리고사카라이드 및 전분의 α-(1,4) 결합을 소화시켰다. 전화효소 및 α-갈락토시다제를 사용하여 수크로스, 라피노스, 및 기타 공통 섬유 사카라이드를 제거하였다.
효소 용액을 하기와 같이 제조하였다: 암모늄 아세테이트 완충액(암모늄 아세테이트 0.2 M pH 5(0.5 mM MgCl2 및 200 mM CaCl2 함유) 중 아밀로글루코시다제(아스퍼질러스 니제르(Aspergillus niger)) 36,000 U/g 용액(800 U/mL);　α-아밀라제(돼지 췌장(Porcine Pancreas)) 100,000 U/g(메가자임(Megazyme)): 암모늄 아세테이트 중 용액(800 U/mL);　제빵 효모(사카로마이세스 세레비지에(Saccaromyces cerevisiae)로부터의 전화효소(300 U/mg, 시그마(Sigma)): 암모늄 아세테이트 완충액 중 용액(600 U/mL); 및 아스퍼질러스 니제르로부터의 α-갈락토시다제(1,000 U/mL, 메가자임).
실시예 16의 건조 사료 추출물을 10 mL 암모늄 아세테이트 완충액 중에 재현탁시켰다. 50 μL의 α-아밀라제(4 U/mL 최종), 50 μL의 아밀로글루코시다제(4 U/mL 최종), 및 50 μL의 전화효소(3 U/mL 최종)를 첨가하였다. 20 μL α-갈락토시다제(2 U/mL 최종)는 임의적으로 첨가하였다. 용액을 60℃에서 4시간 동안 항온처리한 후, 한외여과 필터(비바스핀 터보 4(Vivaspin Turbo 4), 5000 MWCO, 사르토리우스(Sartorius))를 통해 여과한 후, 질소 증발 시스템에서 증발 건조시켰다. 소화 효소의 변경에서, 상기 효소 중 하나 이상을 조합으로 사용하고, 소화 시간을 4시간 내지 밤새 소화로 변경하였다. 효소 농도를 상기 로딩의 2배까지 변경하고, 동일한 사료에서 완전한 효소적 소화 절차를 순서대로 수회 반복하였다.
[표 8]
추출 및 소화를 위한 사료 샘플의 목록
Figure pct00012
Figure pct00013
무수-올리고머는 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 지칭한다. 미처리 사료는 무수-올리고머가 미첨가 영양 조성물을 지칭한다.
효소 a = 아밀로글루코시다제(아스퍼질러스 니제르) 36,000 U/g, 메가자임.
효소 b = α-아밀라제(돼지 췌장) 100,000 U/g, 메가자임.
효소 c = 제빵 효모로부터의 전화효소(사카로마이세스 세레비지에) 300 U/mg, 시그마.
효소 d = 아스퍼질러스 니제르로부터의 α-갈락토시다제 620 U/mg, 메가자임.
실시예 30: 사료 중 올리고사카라이드 제제의 검출
실시예 15에 따른 처리된 식이 및 대조군을 검정하여 올리고사카라이드 제제의 부재 또는 존재를 검출하였다. 식이 제조 후, 1 kg의 샘플을 최종 사료로부터 취하였다. 사료의 추출가능한 고체 함량은 실시예 28의 과정을 사용하여 물 추출에 의해 수득하였다. 생성된 추출물을 실시예 14의 과정에 따른 LC-MS/MS에 의해 무수-DP 종의 존재에 대해 분석하였다.
도 24는 실시예 15.1(CTR) 내지 15.6(CTR)의 대조군 사료 중 무수-DP2 종의 부재 대 실시예 15.1(TRT) 내지 15.6(TRT)의 처리된 사료 중 무수-DP2 종의 존재를 도시한다. 생성된 LC-MS/MS 크로마토그램의 적분을 사용하여 최종 사료 중 실시예 9의 올리고사카라이드 조성물의 존재를 결정하였다. 구체적으로, 무수-DP2 피크 하 면적이 검출 한계(또는 상기 방법에서 확립된 임의의 다른 적합한 역치)를 초과한 경우, 사료는 각각의 올리고사카라이드 제제를 함유하는 것으로 결정되었다.
실시예 31: 사료 중 올리고사카라이드 제제의 정량분석
실시예 15에 따른 처리된 식이 및 대조군을 검정하여 최종 사료 중 올리고사카라이드 제제의 농도를 측정하였다. 식이 제조 후, 1 kg의 샘플을 최종 사료로부터 취하였다. 사료의 추출가능한 고체 함량은 실시예 28의 과정을 사용하여 물 추출에 의해 수득하였다. 생성된 추출물을 실시예 14의 과정에 따른 LC-MS/MS에 의해 무수-DP 종의 존재에 대해 분석하고, 무수-DP2 피크의 면적을 표준 교정 곡선과 비교하여 사료 중 올리고사카라이드 제제의 농도를 측정하였다(표 9).
[표 9]
사료 중 올리고사카라이드 제제의 농도
Figure pct00014
실시예 32: 무수-아단위-함유 글루코-올리고사카라이드의 NMR 특성규명
무수-아단위를 포함하는 글루코-올리코사카라이드 제제를 글루코스 단위의 i) 중합도, 및 ii) 글루코스 단위의 글리코시드 결합 분포에 의해 특성규명하였다.
α-(1,1)-α, α-(1,1)-β, β-(1,1)-β, α-(1,2), β-(1,2), α-(1,3), β-(1,3), α-(1,4), β-(1,4), α-(1,6), 및 β-(1,6) 결합의 상대적인 몰 빈도를 NMR 분광법에 의해 확인하였다. 아노머성 양성자에 대한 1H NMR 화학적 이동을 다음과 같이 측정하였다: 영역 d = 4.5 내지 5.5 ppm이 고려되었고, C-2 내지 C-6 공유 결합된 클러스터의 공명은 약 d 3.2 및 3.9 ppm이다. C-2에서 H-원자와의 커플링에 기인하여, 아노머성 양성자는 이중선인 것으로 나타났고, 축 위치는 적도 위치보다 높은 필드에서 나타냈다. 당 형태는 이웃 양성자의 커플링 상수로부터 명백하였다: 적도-적도, 적도-축(작은 커플링 상수) 또는 축-축(큰 커플링 상수).
도 25는 용매 사전-포화를 갖는 무수-아단위-함유 글루코-올리코사카라이드 샘플의 대표적인 2D-1H JRES NMR 스펙트럼을 제공한다.
도 26은 무수-아단위-함유 글루코-올리고사카라이드 샘플의 대표적인 1H, 13C-HSQC NMR 스펙트럼을 제공한다.
도 27은 3개의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드의 1H DOSY 스펙트럼의 오버레이를 도시한다. 확산 순서 NMR 분광법(DOSY)을 수행하여 확산 계수에 따른 상이한 종의 NMR 신호 및 이에 따른 MW 동족체를 분리한다. 도 27의 DOSY 스펙트럼의 상부 부분에서의 신호는 느린 확산 종에 상응하는 반면, 빠른 확산 종은 아래에 나타난다.
실시예 33: 시럽 생성물의 제형화
실시예 9.7의 올리고사카라이드 제제를 실시예 21의 절차에 따라 식품등급 나트륨 하이드록사이드에 의해 pH 4.2로 pH 조정하였다. 생성된 시럽을 변형-내성 뚜껑을 사용하여 20 L 카보이(carboy)에 포장하였다. 용기를 밀폐하기 직전, 500 g의 샘플을 취하고 품질 시험하였다. 상기 시럽의 총 고함량은 [미국 식품화학물질 규격집(FCC) 부록 X: 탄수화물(전분, 당, 및 관련 물질): 총 고체]의 방법에 따라 70 중량% 초과인 것으로 확인되었다. 환원당 함량은 [FCC 부록 X: 탄수화물(전분, 당, 및 관련 물질): 환원당 분석]에 따라 건조 중량 기준으로 D-글루코스로서 50% 미만인 것으로 확인되었다. 황산화 회분은 [FCC 부록 II: 물리 시험 및 측정: C. 기타: 점화에서의 잔기(황산화 회분) 방법 II(액체의 경우)]의 방법을 사용하여 건조 중량 기준으로 1% 미만인 것으로 확인되었다. 황 다이옥사이드 함량은 최적화된 모니어 윌리엄스(Monier Williams) 방법을 사용하여 40 mg/kg 미만인 것으로 확인되었다. 납 함량은 AOAC 국제 공식 방법(AOAC International Official Method) 2013.06의 방법을 사용하여 1 mg/kg 미만인 것으로 확인되었다. 총 호기성 플레이트 개체수는 CMMEF 7장의 방법을 사용하여 1,000 cfu/g 미만인 것으로 확인되었다. 총 효모 및 곰팡이 함량은 AACC 국제 승인 방법 42-50의 방법을 사용하여 100 cfu/g 미만인 것으로 확인되었다. 에스케리치아 콜라이 군은 FDA BAM 4장의 방법을 사용하여 10 MPN/g 미만인 것으로 확인되었다. 에스케리치아 콜라이 FDA BAM 4장의 방법을 사용하여 3 MPN/g 미만인 것으로 확인되었다. 살모넬라는 FDA BAM 5장의 방법에 따라 25 g의 샘플 당 미검출되는 것으로 확인되었다. 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus)는 FDA BAM 12장의 방법을 사용하여 10 cfu/g 미만인 것으로 확인되었다. 색상은 육안 관찰에 의해 카라멜 색인 것으로 확인되었다.
상기 용기를 밀폐하고, 나머지 보유 샘플을 냉동하고 장래의 참조를 위해 보관하였고, 결과 로트에 대해 분석의 인증을 청구하였다.
실시예 34: 처리된 음용수의 제조
250 ppm의 실시예 9.7의 올리고사카라이드 제제를 함유하는 음용수를 하기와 같이 제조하였다. 37 mL의 실시예 33의 올리고사카라이드 시럽 및 40 g의 칼륨 솔베이트를 55 갤런 블루-폴리 드럼(blue-poly drum)에 든 50 갤런의 음용가능한 수돗물에 점진적으로 첨가하였다. 실온에서 10분 동안 패들을 사용하여 수동 혼합하였다.
상기 방법을 칼륨 소르베이트의 혼입 없이 반복하였다.
본 발명의 바람직한 양태가 본원에 제시되고 기재되었지만, 이러한 양태는 단지 예로써 제시된 것임이 당업자에게 명확할 것이다. 본 발명은 본 명세서에 제시되는 특정한 예에 의해 한정되지 않음이 의도된다. 본 발명이 전술한 명세서를 참조로 하여 기재되었지만, 본원의 양태의 설명 및 예시는 한정적인 의미로 간주되는 것을 의도한 것이 아니다. 다양한 변경, 변화 및 대체가 본 발명을 벗어남 없이 당업자에 의해 실시될 수 있다. 또한, 본 발명의 모든 양상은 본원에 제시된 특정 서술, 구성 또는 상대적 비율에 한정되지 않고, 다양한 조건 및 변수를 따름이 이해될 것이다. 본원에 기술된 본 발명의 양태에 대한 다양한 대안이 본 발명의 실시에 사용될 수 있음이 이해되어야 한다. 따라서, 본 발명은 임의의 이러한 대안, 변형, 변경 또는 등가물을 포괄하는 것으로 고려되어야 한다.

Claims (168)

  1. 각각 1 내지 n의 별개의 중합도를 갖는 올리고사카라이드의 적어도 n개의 분획(DP1 내지 DPn 분획)을 포함하는 합성 올리고사카라이드 제제로서,
    n이 3 초과의 정수이고;
    DP1 및 DP2 분획이 각각 독립적으로 질량 분광법에 의해 측정된 상대적 빈도를 기준으로 약 0.5 내지 약 15%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함하는,
    올리고사카라이드 제제.
  2. 제1항에 있어서,
    상대적 빈도가 LC-MS/MS에 의해 측정되는, 올리고사카라이드 제제.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    5개, 10개, 20개 또는 30개 이상의 DP 분획 중 올리고사카라이드의 상대적 빈도가 중합도에 따라 단조 감소되는, 올리고사카라이드 제제.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    각각의 n개의 분획 중 올리고사카라이드의 상대적 빈도가 중합도에 따라 단조 감소되는, 올리고사카라이드 제제.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    n이 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100 이상인, 올리고사카라이드 제제.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    DP2 분획이 상대적 빈도를 기준으로 12% 미만, 11% 미만, 10% 미만, 9% 미만, 8% 미만, 7% 미만, 6% 미만, 5% 미만, 4% 미만, 3% 미만, 2% 미만 또는 1% 미만의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함하는, 올리고사카라이드 제제.
  7. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    DP2 분획이 상대적 빈도를 기준으로 약 5 내지 약 10%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함하는, 올리고사카라이드 제제.
  8. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    DP2 분획이 상대적 빈도를 기준으로 약 1 내지 약 10%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함하는, 올리고사카라이드 제제.
  9. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    DP2 분획이 상대적 빈도를 기준으로 약 0.5 내지 약 10%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함하는, 올리고사카라이드 제제.
  10. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    DP2 분획이 상대적 빈도를 기준으로 약 2 내지 약 12%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함하는, 올리고사카라이드 제제.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
    DP1 분획이 상대적 빈도를 기준으로 12% 미만, 11% 미만, 10% 미만, 9% 미만, 8% 미만, 7% 미만, 6% 미만, 5% 미만, 4% 미만, 3% 미만, 2% 미만 또는 1% 미만의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함하는, 올리고사카라이드 제제.
  12. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
    DP1 분획이 상대적 빈도를 기준으로 약 2 내지 약 12%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함하는, 올리고사카라이드 제제.
  13. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
    DP1 분획이 상대적 빈도를 기준으로 약 1 내지 약 10%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함하는, 올리고사카라이드 제제.
  14. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
    DP1 분획이 상대적 빈도를 기준으로 약 0.5 내지 약 10%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함하는, 올리고사카라이드 제제.
  15. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
    DP1 분획이 상대적 빈도를 기준으로 약 5 내지 약 10%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함하는, 올리고사카라이드 제제.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서,
    DP3 분획이 상대적 빈도를 기준으로 15% 미만, 12% 미만, 11% 미만, 10% 미만, 9% 미만, 8% 미만, 7% 미만, 6% 미만, 5% 미만, 4% 미만, 3% 미만, 2% 미만 또는 1% 미만의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함하는, 올리고사카라이드 제제.
  17. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서,
    DP3 분획이 상대적 빈도를 기준으로 약 2 내지 약 12%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함하는, 올리고사카라이드 제제.
  18. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서,
    DP3 분획이 상대적 빈도를 기준으로 약 1 내지 약 10%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함하는, 올리고사카라이드 제제.
  19. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서,
    DP3 분획이 상대적 빈도를 기준으로 약 0.5 내지 약 10%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함하는, 올리고사카라이드 제제.
  20. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서,
    DP3 분획이 상대적 빈도를 기준으로 약 5 내지 약 10%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함하는, 올리고사카라이드 제제.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서,
    상대적 빈도를 기준으로 약 2 내지 약 12%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함하는 올리고사카라이드 제제.
  22. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서,
    상대적 빈도를 기준으로 약 0.5 내지 약 10%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함하는 올리고사카라이드 제제.
  23. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서,
    상대적 빈도를 기준으로 약 1 내지 약 10%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함하는 올리고사카라이드 제제.
  24. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서,
    상대적 빈도를 기준으로 약 5 내지 약 10%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함하는 올리고사카라이드 제제.
  25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서,
    DP2 분획이 상대적 빈도를 기준으로 0.6% 초과, 0.8% 초과, 1.0% 초과, 1.5% 초과, 2% 초과, 3% 초과, 4% 초과, 5% 초과, 6% 초과, 7% 초과, 8% 초과, 9% 초과, 10% 초과, 11% 초과 또는 12% 초과의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함하는, 올리고사카라이드 제제.
  26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서,
    DP1 분획이 상대적 빈도를 기준으로 0.6% 초과, 0.8% 초과, 1.0% 초과, 1.5% 초과, 2% 초과, 3% 초과, 4% 초과, 5% 초과, 6% 초과, 7% 초과, 8% 초과, 9% 초과, 10% 초과, 11% 초과 또는 12% 초과의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함하는, 올리고사카라이드 제제.
  27. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서,
    DP3 분획이 상대적 빈도를 기준으로 0.6% 초과, 0.8% 초과, 1.0% 초과, 1.5% 초과, 2% 초과, 3% 초과, 4% 초과, 5% 초과, 6% 초과, 7% 초과, 8% 초과, 9% 초과, 10% 초과, 11% 초과 또는 12% 초과의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함하는, 올리고사카라이드 제제.
  28. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서,
    상대적 빈도를 기준으로 0.5% 초과, 0.6% 초과, 0.8% 초과, 1.0% 초과, 1.5% 초과, 2% 초과, 3% 초과, 4% 초과, 5% 초과, 6% 초과, 7% 초과, 8% 초과, 9% 초과, 10% 초과, 11% 초과 또는 12% 초과의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함하는 올리고사카라이드 제제.
  29. 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서,
    액체 크로마토그래피에 의해 측정된 약 1 내지 약 40 중량%의 DP1 분획 함량을 갖는 올리고사카라이드 제제.
  30. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서,
    액체 크로마토그래피에 의해 측정된 약 1 내지 약 35 중량%의 DP2 분획 함량을 갖는 올리고사카라이드 제제.
  31. 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서,
    액체 크로마토그래피에 의해 측정된 약 1 내지 약 30 중량%의 DP3 분획 함량을 갖는 올리고사카라이드 제제.
  32. 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서,
    액체 크로마토그래피에 의해 측정된 약 0.1 내지 약 20 중량%의 DP4 분획 함량을 갖는 올리고사카라이드 제제.
  33. 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서,
    액체 크로마토그래피에 의해 측정된 약 0.1 내지 약 15 중량%의 DP5 분획 함량을 갖는 올리고사카라이드 제제.
  34. 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서,
    DP1 분획에 대한 DP2 분획의 비가 액체 크로마토그래피에 의해 측정된 약 0.02 내지 약 0.40인, 올리고사카라이드 제제.
  35. 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서,
    DP2 분획에 대한 DP3 분획의 비가 액체 크로마토그래피에 의해 측정된 약 0.01 내지 약 0.30인, 올리고사카라이드 제제.
  36. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서,
    올리고사카라이드 제제에서 DP1 및 DP2 분획의 응집체 함량이 액체 크로마토그래피에 의해 측정된 50% 미만, 40% 미만 또는 30% 미만인, 올리고사카라이드 제제.
  37. 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서,
    103개 이상, 104개 이상, 105개 이상, 106개 이상 또는 109개 이상의 상이한 올리고사카라이드 종을 포함하는 올리고사카라이드 제제.
  38. 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서,
    2개 이상의 독립적인 올리고사카라이드가 상이한 무수-아단위를 포함하는, 올리고사카라이드 제제.
  39. 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서,
    각각의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드가 모노사카라이드의 열적 탈수의 생성물인 하나 이상의 무수-아단위를 포함하는, 올리고사카라이드 제제.
  40. 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서,
    무수-글루코스, 무수-갈락토스, 무수-만노스, 무수-알로스, 무수-알트로스, 무수-굴로스, 무수-인도스, 무수-탈로스, 무수-프럭토스, 무수-리보스, 무수-아라비노스, 무수-람노스, 무수-릭소스 및 무수-자일로스로부터 선택되는 하나 이상의 무수-아단위를 포함하는 올리고사카라이드 제제.
  41. 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서,
    하나 이상의 무수-글루코스, 무수-갈락토스, 무수-만노스 또는 무수-프럭토스 아단위를 포함하는 올리고사카라이드 제제.
  42. 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서,
    DP1 분획이 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 또는 1,6-무수-β-D-글루코피라노스 무수-아단위를 포함하는, 올리고사카라이드 제제.
  43. 제1항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서,
    DP1 분획이 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 및 1,6-무수-β-D-글루코피라노스 무수-아단위를 둘 다 포함하는, 올리고사카라이드 제제.
  44. 제43항에 있어서,
    1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 대 1,6-무수-β-D-글루코피라노스의 비가 올리고사카라이드 제제에서 약 10:1 내지 1:10, 약 9:1 내지 약 1:10, 약 8:1 내지 약 1:10, 약 7:1 내지 약 1:10, 약 6:1 내지 약 1:10, 약 5:1 내지 약 1:10, 약 4:1 내지 약 1:10, 약 3:1 내지 약 1:10, 약 2:1 내지 약 1:10, 약 10:1 내지 약 1:9, 약 10:1 내지 약 1:8, 약 10:1 내지 약 1:7, 약 10:1 내지 약 1:6, 약 10:1 내지 약 1:5, 약 10:1 내지 약 1:4, 약 10:1 내지 약 1:3, 약 10:1 내지 약 1:2 또는 약 1:1 내지 약 3:1인, 올리고사카라이드 제제.
  45. 제43항 또는 제44항에 있어서,
    1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 대 1,6-무수-β-D-글루코피라노스의 비가 올리고사카라이드 제제에서 약 10:1, 약 9:1, 약 8:1, 약 7:1, 약 6:1, 약 5:1, 약 4:1, 약 3:1, 약 2:1, 약 1:1, 약 1:2, 약 1:3, 약 1:4, 약 1:5, 약 1:6, 약 1:7, 약 1:8, 약 1:9 또는 약 1:10인, 올리고사카라이드 제제.
  46. 제43항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서,
    1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 대 1,6-무수-β-D-글루코피라노스의 비가 올리고사카라이드 제제에서 약 2:1인, 올리고사카라이드 제제.
  47. 제1항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서,
    DP2 분획이 5종 이상의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함하는, 올리고사카라이드 제제.
  48. 제1항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서,
    DP2 분획이 약 5 내지 10종의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함하는, 올리고사카라이드 제제.
  49. 제1항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서,
    하나 이상의 당 카라멜화 생성물을 포함하는 올리고사카라이드 제제.
  50. 제49항에 있어서,
    당 카라멜화 생성물이 메탄올; 에탄올; 퓨란; 메틸 글리옥살; 2-메틸 퓨란; 비닐 아세테이트; 글리콜알데하이드; 아세트산; 아세톨; 퓨르퓨르알; 2-퓨란메탄올; 3-퓨란메탄올; 2-하이드록시 사이클로펜트-2-엔-1-온; 5-메틸 퓨르퓨르알; 2(5H)-퓨란온; 2 메틸 사이클로펜텐올론; 레보글루코센온; 고리 하이드록실 락톤; 1,4,3,6-2무수-α-D-글루코피라노스; 2무수 글루코피라노스; 및 5-하이드록시 메틸 퓨르퓨르알(5-hmf)로 이루어진 군으로부터 선택되는, 올리고사카라이드 제제.
  51. 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서,
    50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 99% 초과의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드가 쇄-말단 무수-아단위를 포함하는, 올리고사카라이드 제제.
  52. 제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서,
    고-성능 액체 크로마토그래피(HPLC)에 의해 측정된 약 300 내지 약 5,000 g/mol의 중량 평균 분자량을 갖는 올리고사카라이드 제제.
  53. 제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서,
    HPLC에 의해 측정된 약 300 내지 약 2,500 g/mol의 중량 평균 분자량을 갖는 올리고사카라이드 제제.
  54. 제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서,
    HPLC에 의해 측정된 약 500 내지 약 2,000 g/mol의 중량 평균 분자량을 갖는 올리고사카라이드 제제.
  55. 제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서,
    HPLC에 의해 측정된 약 500 내지 약 1,500 g/mol의 중량 평균 분자량을 갖는 올리고사카라이드 제제.
  56. 제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서,
    HPLC에 의해 측정된 약 300 내지 약 5,000 g/mol의 수 평균 분자량을 갖는 올리고사카라이드 제제.
  57. 제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서,
    HPLC에 의해 측정된 약 300 내지 약 2,500 g/mol의 수 평균 분자량을 갖는 올리고사카라이드 제제.
  58. 제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서,
    HPLC에 의해 측정된 약 500 내지 약 2,000 g/mol의 수 평균 분자량을 갖는 올리고사카라이드 제제.
  59. 제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서,
    HPLC에 의해 측정된 약 500 내지 약 1,500 g/mol의 수 평균 분자량을 갖는 올리고사카라이드 제제.
  60. 제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서,
    약 2,000 내지 약 2,800 g/mol의 중량 평균 분자량을 갖는 올리고사카라이드 제제.
  61. 제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서,
    약 1,000 내지 약 2,000 g/mol의 수 평균 분자량을 갖는 올리고사카라이드 제제.
  62. 제1항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서,
    아라비노스, 릭소스, 리보스, 자일로스, 알로스, 알트로스, 만노스, 굴로스, 이도스, 갈락토스, 탈로스, 프시코스, 프럭토스, 소르보스 및 타가토스로부터 선택되는 모노사카라이드 아단위를 포함하는 올리고사카라이드 제제.
  63. 제1항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서,
    자일로스, 만노스, 갈락토스 및 프럭토스로부터 선택되는 모노사카라이드 아단위를 포함하는 올리고사카라이드 제제.
  64. 제1항 내지 제63항 중 어느 한 항에 따른 올리고사카라이드 제제를 포함하는 영양 조성물.
  65. 제64항에 있어서,
    베이스 영양 조성물을 추가로 포함하는 영양 조성물.
  66. 제64항 또는 제65항에 있어서,
    동물 사료 조성물인 영양 조성물.
  67. 베이스 영양 조성물, 및 제1항 내지 제63항 중 어느 한 항에 따른 올리고사카라이드 제제를 포함하는 영양 조성물을 동물에게 투여함을 포함하는 방법.
  68. (a) 하나 이상의 사료용 당 및 촉매를 포함하는 수성 조성물을 상기 하나 이상의 사료용 당의 중합을 유도하기에 충분한 시간 동안 소정 온도까지 가열하여 합성 올리고사카라이드 제제의 회분을 생산하는 단계로서, 상기 회분이 1 kg 이상의 상기 합성 올리고사카라이드 제제를 포함하고; 상기 합성 올리고사카라이드 제제가 각각 1(DP1 분획) 내지 n(DPn 분획)의 별개의 중합도를 갖는 적어도 n개의 분획의 올리고사카라이드를 포함하고, n이 3 이상의 정수이고; 상기 합성 올리고사카라이드 제제의 각각의 분획이 질량 분광법에 의해 측정된 상대적 빈도를 기준으로 약 0.5 내지 약 15%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함하는, 단계;
    (b) 상기 합성 올리고사카라이드 제제의 상기 생산된 회분 중 상기 촉매의 수준을 측정하는 단계;
    (c) 상기 수준을 소정 허용 기준과 비교하는 단계; 및
    (d) 상기 회분 제제의 상기 촉매의 수준이 상기 소정 허용 기준에 부합할 때만 상기 합성 올리고사카라이드 제제의 상기 회분의 적어도 일부를 제형화시키는 단계
    를 포함하는, 합성 올리고사카라이드 조성물의 제조 방법.
  69. (a) 하나 이상의 사료용 당 및 촉매를 포함하는 수성 조성물을 상기 하나 이상의 사료용 당의 중합을 유도하기에 충분한 시간 동안 소정 온도까지 가열하여 합성 올리고사카라이드 제제의 회분을 생산하는 단계로서, 상기 회분이 1 kg 이상의 상기 합성 올리고사카라이드 제제를 포함하고; 상기 합성 올리고사카라이드 제제가 각각 1(DP1 분획) 내지 n(DPn 분획)의 별개의 중합도를 갖는 적어도 n개의 분획의 올리고사카라이드를 포함하고, n이 3 이상의 정수이고; 상기 합성 올리고사카라이드 제제의 각각의 분획이 질량 분광법에 의해 측정된 상대적 빈도를 기준으로 0.5 내지 15%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함하는, 단계;
    (b) 상기 합성 올리고사카라이드 제제의 상기 생산된 회분 중 상기 촉매의 수준을 측정하는 단계; 및
    (c) 상기 회분 제제 중 상기 촉매의 수준이 상기 회분의 0.1 중량% 이하일 때만 상기 합성 올리고사카라이드 제제의 상기 회분의 적어도 일부를 제형화시켜 합성 올리고사카라이드 조성물을 생산하는 단계
    를 포함하는, 합성 올리고사카라이드 조성물의 제조 방법.
  70. 제68항 또는 제69항에 있어서,
    제형화가 합성 올리고사카라이드 제제의 pH를 조정하거나, 상기 합성 올리고사카라이드 제제의 분말 형태를 생산하거나, 상기 합성 올리고사카라이드 제제의 고체 형태를 생산하거나, 상기 합성 올리고사카라이드 제제를 포장하거나, 상기 합성 올리고사카라이드 제제를 표지하거나, 상기 합성 올리고사카라이드 제제를 상업적으로 출시하거나, 상기 합성 올리고사카라이드 제제를 판매 제안하거나 판매함을 포함하는, 제조 방법.
  71. 제70항에 있어서,
    제형화가 합성 올리고사카라이드 제제의 분말 형태를 생산함을 포함하는, 제조 방법.
  72. 제71항에 있어서,
    분말 형태가 유리 분말 제형인, 제조 방법.
  73. 제71항에 있어서,
    분말 형태가 담체-로딩된 분말 제형인, 제조 방법.
  74. 제70항에 있어서,
    제형화가 합성 올리고사카라이드 제제의 고체 형태를 생산함을 포함하는, 제조 방법.
  75. 제74항에 있어서,
    제형화가 합성 올리고사카라이드 제제를 압출하여 상기 합성 올리고사카라이드 제제의 압출된 고체 형태를 생산함을 포함하는, 제조 방법.
  76. 제68항 내지 제75항 중 어느 한 항에 있어서,
    촉매가 (+)-캠퍼-10-설폰산; 2-피리딘설폰산; 3-피리딘설폰산; 8-하이드록시-5-퀴놀린설폰산 수화물; α-하이드록시-2-피리딘메탄설폰산; (β)-캠퍼-10-설폰산; 부틸포스폰산; 다이페닐포스핀산; 헥실포스폰산; 메틸포스폰산; 페닐포스핀산; 페닐포스폰산; tert-부틸포스폰산; SS)-VAPOL 수소포스페이트; 6-퀴놀린설폰산, 3-(1-피리디니오)-1-프로판설포네이트; 2-(2-피리딘일)에탄설폰산; 3-(2-피리딜)-5,6-다이페닐-1,2,4-트라이아진-p,p'-다이설폰산 모노나트륨 염 수화물; 1,1'-바이나프틸-2,2'-다이일-수소포스페이트; 비스(4-메톡시페닐)포스핀산; 페닐(3,5-자일일)포스핀산; L-시스테인산 1수화물; 폴리(스티렌 설폰산-코-다이비닐벤젠); 리신; 에탄다이설폰산; 에탄설폰산; 이세티온산; 호모시스테인산; HEPBS(N-(2-하이드록시에틸)피페라진-N'-(4-부탄설폰산)); HEPES(4-(2-하이드록시에틸)-1-피페라진에탄설폰산); 2-하이드록시-3-모르폴리노프로판설폰산; 2-(N-모르폴리노)에탄설폰산; 메탄설폰산; 메타니아자이드; 나프탈렌-1-설폰산; 나프탈렌-2-설폰산; 퍼플루오로부탄설폰산; 6-설포퀴노보스; 트라이플산; 2-아미노에탄설폰산; 벤조산; 클로로아세트산; 트라이플루오로아세트산; 카프로산; 에난트산; 카프릴산; 펠라르곤산; 라우르산; 팔미트산; 스테아르산; 아라키드산; 아스파르트산; 글루탐산; 세린; 트레오닌; 글루타민; 시스테인; 글리신; 프롤린; 알라닌; 발린; 이소류신; 류신; 메티오닌; 페닐알라닌; 티로신; 및 트립토판으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 제조 방법.
  77. 제68항 내지 제76항 중 어느 한 항에 있어서,
    촉매가 에탄다이설폰산; 에탄설폰산; 이세티온산; 호모시스테인산; HEPBS(N-(2-하이드록시에틸)피페라진-N'-(4-부탄설폰산)); HEPES(4-(2-하이드록시에틸)-1-피페라진에탄설폰산); 2-하이드록시-3-모르폴리노프로판설폰산; 2-(N-모르폴리노)에탄설폰산; 메탄설폰산; 메타니아자이드; 나프탈렌-1-설폰산; 나프탈렌-2-설폰산; 퍼플루오로부탄설폰산; 6-설포퀴노보스; 트라이플산; 2-아미노에탄설폰산; 벤조산; 클로로아세트산; 트라이플루오로아세트산; 카프로산; 에난트산; 카프릴산; 펠라르곤산; 라우르산; 팔미트산; 스테아르산; 아라키드산; 아스파르트산; 글루탐산; 세린; 트레오닌; 글루타민; 시스테인; 글리신; 프롤린; 알라닌; 발린; 이소류신; 류신; 메티오닌; 페닐알라닌; 티로신; 및 트립토판으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 제조 방법.
  78. 제68항 내지 제77항 중 어느 한 항에 있어서,
    가열이 수성 조성물을 상기 수성 조성물이 평형에 도달하기에 충분한 시간 동안 가열함을 포함하고, 이때 평형이 15%, 10% 또는 5% 미만의 일련의 Km의 상대적인 표준 편차에 의해 측정되고,
    Figure pct00015
    이고, m이 1 초과 내지 n 이하의 정수이고, 일련의 Km이 5개 이상의 Km 수를 포함하고, [H2O]가 물의 몰 농도를 나타내고, [DP1], [DPm-1] 및 [DPm]이 각각 DP1, DPm-1 및 DPm 분획에서 올리고사카라이드의 몰 농도를 나타내는, 제조 방법.
  79. 제68항 내지 제78항 중 어느 한 항에 있어서,
    가열이 수성 조성물을 30분, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간 또는 10시간 이상 동안 가열함을 포함하는, 제조 방법.
  80. 제79항에 있어서,
    가열이 수성 조성물을 6시간 이상 동안 가열함을 포함하는, 제조 방법.
  81. 제79항에 있어서,
    가열이 수성 조성물을 10시간 이상 동안 가열함을 포함하는, 제조 방법.
  82. 제68항 내지 제78항 중 어느 한 항에 있어서,
    가열이 수성 조성물을 1 내지 24시간, 1 내지 16시간, 1 내지 8시간, 1 내지 4시간, 1 내지 3시간, 1 내지 2시간, 2 내지 12시간, 2 내지 10시간, 2 내지 8시간, 2 내지 6시간, 2 내지 4시간, 3 내지 8시간, 3 내지 6시간, 3 내지 5시간, 3 내지 4시간, 4 내지 24시간, 4 내지 16시간, 4 내지 12시간, 4 내지 10시간, 4 내지 8시간, 4 내지 6시간, 5 내지 24시간, 5 내지 16시간, 5 내지 12시간, 5 내지 10시간, 5 내지 8시간, 5 내지 6시간, 6 내지 24시간, 6 내지 16시간, 6 내지 12시간, 6 내지 10시간 또는 6 내지 8시간 동안 가열함을 포함하는, 제조 방법.
  83. 제68항 내지 제78항 중 어느 한 항에 있어서,
    가열이 수성 조성물을 5 내지 12시간 동안 가열함을 포함하는, 제조 방법.
  84. 제68항 내지 제83항 중 어느 한 항에 있어서,
    가열 중 수성 조성물의 점도, 수함량, 수 평균 분자량(MWn), 중량 평균 분자량(MWw), 무수-아단위 함량, 중합도 분포, 방출된 축합수, 반응 수함량, 용해된 총 고체 함량, 잔류 단량체 함량, pH, 밀도 또는 색을 측정하는 단계를 추가로 포함하는 제조 방법.
  85. 제84항에 있어서,
    측정이 중합을 유도하기에 충분한 시간을 측정하는 데 사용되는, 제조 방법.
  86. 제84항에 있어서,
    무수-아단위 함량이 DP1 분획 또는 DP2 분획에서의 함량인, 제조 방법.
  87. 제86항에 있어서,
    무수-아단위 함량이 LC-MS-MS에 의해 측정되는, 제조 방법.
  88. 제84항에 있어서,
    수 평균 분자량(MWn)이 HPLC/GPC 크로마토그래피에 의해 측정되는, 제조 방법.
  89. 제84항에 있어서,
    중량 평균 분자량(MWw)이 HPLC/GPC 크로마토그래피에 의해 측정되는, 제조 방법.
  90. 제84항에 있어서,
    용해된 총 고체 함량이 칼 피셔 적정에 의해 측정되는, 제조 방법.
  91. 제84항에 있어서,
    점도가 점도계 또는 유동계에 의해 측정되는, 제조 방법.
  92. 제84항에 있어서,
    수함량이 증발 방법, 증류 방법 또는 화학적 반응 방법에 의해 측정되는, 제조 방법.
  93. 제92항에 있어서,
    화학적 반응 방법이 칼 피셔 적정인, 제조 방법.
  94. 제84항에 있어서,
    수함량이 수분 분석기, IR 분광법 또는 NIR 분광법을 사용하여 측정되는, 제조 방법.
  95. 제68항 내지 제94항 중 어느 한 항에 있어서,
    회분이 10 kg, 100 kg, 1,000 kg, 5,000 kg, 10,000 kg, 20,000 kg, 30,000 kg, 40,000 kg 또는 50,000 kg 이상의 합성 올리고사카라이드 제제를 포함하는, 제조 방법.
  96. 제68항 내지 제95항 중 어느 한 항에 있어서,
    회분이 5,000 kg 이상의 합성 올리고사카라이드 제제를 포함하는, 제조 방법.
  97. 제68항에 있어서,
    소정 허용 기준이 회분 중 촉매의 소정 중량%인, 제조 방법.
  98. 제97항에 있어서,
    중량%가 1 중량%, 0.9 중량%, 0.8 중량%, 0.7 중량%, 0.6 중량%, 0.5 중량%, 0.4 중량%, 0.3 중량%, 0.2 중량% 또는 0.1 중량% 미만인, 제조 방법.
  99. 제68항, 제97항 및 제98항 중 어느 한 항에 있어서,
    소정 허용 기준이 상업적 출시 사양인, 제조 방법.
  100. 제68항 내지 제99항 중 어느 한 항에 있어서,
    사료용 당이 작용화되거나 개질된 당을 포함하는, 제조 방법.
  101. 제100항에 있어서,
    작용화되거나 개질된 당이 아미노 당, 당 산, 당 아미드, 당 에터 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는, 제조 방법.
  102. 제100항 또는 제101항에 있어서,
    작용화되거나 개질된 당이 글루코사민, N-아세틸글루코사민, 글루쿠론산, 갈락투론산 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는, 제조 방법.
  103. 제68항 내지 제102항 중 어느 한 항에 있어서,
    사료용 당이 데옥시당을 포함하는, 제조 방법.
  104. 제103항에 있어서,
    데옥시당이 푸코스, 람노스, 데옥시리보스, 푸쿨로스 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는, 제조 방법.
  105. 제68항 내지 제104항 중 어느 한 항에 있어서,
    사료용 당이 글루코스, 자일로스, 갈락토스, 만노스, 말토-덱스트린, 아라비노스, 락토스, 수크로스, 트레할로스 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는, 제조 방법.
  106. 제68항 내지 제105항 중 어느 한 항에 있어서,
    가열이 2개, 3개, 4개 또는 5개 이상의 사료용 당, 및 촉매를 포함하는 수성 조성물을 하나 이상의 사료용 당의 중합을 유도하기에 충분한 시간 동안 소정 온도까지 가열함을 포함하는, 제조 방법.
  107. 제106항에 있어서,
    가열이 2개 이상의 사료용 당을 포함하는 수성 조성물을 가열함을 포함하는, 제조 방법.
  108. 제107항에 있어서,
    2개 이상의 사료용 당이 각각 글루코스, 자일로스, 갈락토스, 만노스, 말토-덱스트린, 아라비노스, 락토스, 수크로스, 트레할로스 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는, 제조 방법.
  109. 제106항에 있어서,
    2개, 3개, 4개 또는 5개 이상의 사료용 당이 각각 글루코스, 자일로스, 갈락토스, 만노스, 말토-덱스트린, 아라비노스, 락토스, 수크로스, 트레할로스 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는, 제조 방법.
  110. 제68항 내지 제109항 중 어느 한 항에 있어서,
    대기압 하에 증류에 의해 수함량을 유지하는 단계를 추가로 포함하는 제조 방법.
  111. 제68항 내지 제109항 중 어느 한 항에 있어서,
    물의 첨가에 의해 수함량을 유지하는 단계를 추가로 포함하는 제조 방법.
  112. 제68항 내지 제109항 중 어느 한 항에 있어서,
    수함량을 반응 전후의 평균 수함량에 의해 측정된 약 2%, 3%, 4% 또는 5% 내지 약 6%, 7%, 8% 또는 9%의 범위 내로 유지하는 단계를 추가로 포함하는 제조 방법.
  113. 제68항 내지 제109항 중 어느 한 항에 있어서,
    수함량을 반응 전후의 평균 수함량에 의해 측정된 약 2 내지 약 8%의 범위 내로 유지하는 단계를 추가로 포함하는 제조 방법.
  114. 제68항 내지 제113항 중 어느 한 항에 있어서,
    올리고사카라이드 제제의 5개, 10개, 20개 또는 30개 이상의 DP 분획 중 올리고사카라이드의 상대적 빈도가 중합도에 따라 단조 감소되는, 제조 방법.
  115. 제68항 내지 제114항 중 어느 한 항에 있어서,
    올리고사카라이드 제제의 각각의 n개의 분획 중 올리고사카라이드의 상대적 빈도가 중합도에 따라 단조 감소되는, 제조 방법.
  116. 제68항 내지 제115항 중 어느 한 항에 있어서,
    n이 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100 이상인, 제조 방법.
  117. 제68항 내지 제116항 중 어느 한 항에 있어서,
    올리고사카라이드 제제의 하나 이상의 분획이 상대적 빈도를 기준으로 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3% 또는 2% 미만의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함하는, 제조 방법.
  118. 제68항 내지 제117항 중 어느 한 항에 있어서,
    올리고사카라이드 제제의 하나 이상의 분획이 상대적 빈도를 기준으로 약 80 내지 0.5%, 80 내지 1%, 80 내지 2%, 80 내지 3%, 80 내지 4%, 80 내지 5%, 80 내지 10%, 80 내지 20%, 80 내지 30%, 80 내지 40%, 80 내지 50%, 60 내지 1%, 60 내지 2%, 60 내지 3%, 60 내지 4%, 60 내지 5%, 60 내지 10%, 60 내지 20%, 60 내지 30%, 60 내지 40%, 60 내지 50%, 40 내지 1%, 40 내지 2%, 40 내지 3%, 40 내지 4%, 40 내지 5%, 40 내지 10%, 40 내지 20%, 40 내지 30%, 40 내지 50%, 30 내지 1%, 30 내지 2%, 30 내지 3%, 30 내지 4%, 30 내지 5%, 30 내지 10%, 30 내지 20%, 20 내지 1%, 20 내지 2%, 20 내지 3%, 20 내지 4%, 20 내지 5%, 20 내지 10%, 10 내지 1%, 10 내지 2%, 10 내지 3%, 10 내지 4%, 10 내지 5%, 5 내지 1%, 5 내지 2%, 5 내지 3% 또는 5 내지 4%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함하는, 제조 방법.
  119. 제68항 내지 제118항 중 어느 한 항에 있어서,
    올리고사카라이드 제제가 상대적 빈도를 기준으로 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3% 또는 2% 미만의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함하는, 제조 방법.
  120. 제68항 내지 제119항 중 어느 한 항에 있어서,
    올리고사카라이드 제제가 상대적 빈도를 기준으로 약 80 내지 0.5%, 80 내지 1%, 80 내지 2%, 80 내지 3%, 80 내지 4%, 80 내지 5%, 80 내지 10%, 80 내지 20%, 80 내지 30%, 80 내지 40%, 80 내지 50%, 60 내지 1%, 60 내지 2%, 60 내지 3%, 60 내지 4%, 60 내지 5%, 60 내지 10%, 60 내지 20%, 60 내지 30%, 60 내지 40%, 60 내지 50%, 40 내지 1%, 40 내지 2%, 40 내지 3%, 40 내지 4%, 40 내지 5%, 40 내지 10%, 40 내지 20%, 40 내지 30%, 40 내지 50%, 30 내지 1%, 30 내지 2%, 30 내지 3%, 30 내지 4%, 30 내지 5%, 30 내지 10%, 30 내지 20%, 20 내지 1%, 20 내지 2%, 20 내지 3%, 20 내지 4%, 20 내지 5%, 20 내지 10%, 10 내지 1%, 10 내지 2%, 10 내지 3%, 10 내지 4%, 10 내지 5%, 5 내지 1%, 5 내지 2%, 5 내지 3% 또는 5 내지 4%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함하는, 제조 방법.
  121. 제68항 내지 제120항 중 어느 한 항에 있어서,
    올리고사카라이드 제제의 각각의 분획이 상대적 빈도를 기준으로 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3% 또는 2% 미만의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함하는, 제조 방법.
  122. 제68항 내지 제120항 중 어느 한 항에 있어서,
    올리고사카라이드 제제의 각각의 분획이 상대적 빈도를 기준으로 약 80 내지 1%, 80 내지 2%, 80 내지 3%, 80 내지 4%, 80 내지 5%, 80 내지 10%, 80 내지 20%, 80 내지 30%, 80 내지 40%, 80 내지 50%, 60 내지 1%, 60 내지 2%, 60 내지 3%, 60 내지 4%, 60 내지 5%, 60 내지 10%, 60 내지 20%, 60 내지 30%, 60 내지 40%, 60 내지 50%, 40 내지 1%, 40 내지 2%, 40 내지 3%, 40 내지 4%, 40 내지 5%, 40 내지 10%, 40 내지 20%, 40 내지 30%, 40 내지 50%, 30 내지 1%, 30 내지 2%, 30 내지 3%, 30 내지 4%, 30 내지 5%, 30 내지 10%, 30 내지 20%, 20 내지 1%, 20 내지 2%, 20 내지 3%, 20 내지 4%, 20 내지 5%, 20 내지 10%, 10 내지 1%, 10 내지 2%, 10 내지 3%, 10 내지 4%, 10 내지 5%, 5 내지 1%, 5 내지 2%, 5 내지 3% 또는 5 내지 4%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함하는, 제조 방법.
  123. 제68항 내지 제120항 중 어느 한 항에 있어서,
    올리고사카라이드 제제의 하나 이상의 분획이 상대적 빈도를 기준으로 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3% 또는 2% 미만의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함하는, 제조 방법.
  124. 제68항 내지 제120항 중 어느 한 항에 있어서,
    올리고사카라이드 제제의 하나 이상의 분획이 상대적 빈도를 기준으로 약 80 내지 1%, 80 내지 2%, 80 내지 3%, 80 내지 4%, 80 내지 5%, 80 내지 10%, 80 내지 20%, 80 내지 30%, 80 내지 40%, 80 내지 50%, 60 내지 1%, 60 내지 2%, 60 내지 3%, 60 내지 4%, 60 내지 5%, 60 내지 10%, 60 내지 20%, 60 내지 30%, 60 내지 40%, 60 내지 50%, 40 내지 1%, 40 내지 2%, 40 내지 3%, 40 내지 4%, 40 내지 5%, 40 내지 10%, 40 내지 20%, 40 내지 30%, 40 내지 50%, 30 내지 1%, 30 내지 2%, 30 내지 3%, 30 내지 4%, 30 내지 5%, 30 내지 10%, 30 내지 20%, 20 내지 1%, 20 내지 2%, 20 내지 3%, 20 내지 4%, 20 내지 5%, 20 내지 10%, 10 내지 1%, 10 내지 2%, 10 내지 3%, 10 내지 4%, 10 내지 5%, 5 내지 1%, 5 내지 2%, 5 내지 3% 또는 5 내지 4%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함하는, 제조 방법.
  125. 제68항 내지 제124항 중 어느 한 항에 있어서,
    올리고사카라이드 제제가 상대적 빈도를 기준으로 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3% 또는 2% 미만의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함하는, 제조 방법.
  126. 제68항 내지 제120항 중 어느 한 항에 있어서,
    올리고사카라이드 제제가 MALDI-MS, LC-MS/MS 또는 GC-MS에 의해 측정된 상대적 빈도를 기준으로 약 80 내지 0.5%, 80 내지 1%, 80 내지 2%, 80 내지 3%, 80 내지 4%, 80 내지 5%, 80 내지 10%, 80 내지 20%, 80 내지 30%, 80 내지 40%, 80 내지 50%, 60 내지 1%, 60 내지 2%, 60 내지 3%, 60 내지 4%, 60 내지 5%, 60 내지 10%, 60 내지 20%, 60 내지 30%, 60 내지 40%, 60 내지 50%, 40 내지 1%, 40 내지 2%, 40 내지 3%, 40 내지 4%, 40 내지 5%, 40 내지 10%, 40 내지 20%, 40 내지 30%, 40 내지 50%, 30 내지 1%, 30 내지 2%, 30 내지 3%, 30 내지 4%, 30 내지 5%, 30 내지 10%, 30 내지 20%, 20 내지 1%, 20 내지 2%, 20 내지 3%, 20 내지 4%, 20 내지 5%, 20 내지 10%, 10 내지 1%, 10 내지 2%, 10 내지 3%, 10 내지 4%, 10 내지 5%, 5 내지 1%, 5 내지 2%, 5 내지 3% 또는 5 내지 4%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함하는, 제조 방법.
  127. 제68항 내지 제126항 중 어느 한 항에 있어서,
    올리고사카라이드 제제의 각각의 분획이 상대적 빈도를 기준으로 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3% 또는 2% 미만의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함하는, 제조 방법.
  128. 제68항 내지 제127항 중 어느 한 항에 있어서,
    올리고사카라이드 제제의 각각의 분획이 상대적 빈도를 기준으로 약 80 내지 0.5%, 80 내지 1%, 80 내지 2%, 80 내지 3%, 80 내지 4%, 80 내지 5%, 80 내지 10%, 80 내지 20%, 80 내지 30%, 80 내지 40%, 80 내지 50%, 60 내지 1%, 60 내지 2%, 60 내지 3%, 60 내지 4%, 60 내지 5%, 60 내지 10%, 60 내지 20%, 60 내지 30%, 60 내지 40%, 60 내지 50%, 40 내지 1%, 40 내지 2%, 40 내지 3%, 40 내지 4%, 40 내지 5%, 40 내지 10%, 40 내지 20%, 40 내지 30%, 40 내지 50%, 30 내지 1%, 30 내지 2%, 30 내지 3%, 30 내지 4%, 30 내지 5%, 30 내지 10%, 30 내지 20%, 20 내지 1%, 20 내지 2%, 20 내지 3%, 20 내지 4%, 20 내지 5%, 20 내지 10%, 10 내지 1%, 10 내지 2%, 10 내지 3%, 10 내지 4%, 10 내지 5%, 5 내지 1%, 5 내지 2%, 5 내지 3% 또는 5 내지 4%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함하는, 제조 방법.
  129. 제68항 내지 제128항 중 어느 한 항에 있어서,
    올리고사카라이드의 하나 이상의 분획이 상대적 빈도를 기준으로 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% 또는 80% 초과의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함하는, 제조 방법.
  130. 제68항 내지 제129항 중 어느 한 항에 있어서,
    올리고사카라이드 제제가 상대적 빈도를 기준으로 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% 또는 80% 초과의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함하는, 제조 방법.
  131. 제68항 내지 제130항 중 어느 한 항에 있어서,
    올리고사카라이드 제제의 각각의 분획이 상대적 빈도를 기준으로 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% 또는 80% 초과의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함하는, 제조 방법.
  132. 제68항 내지 제131항 중 어느 한 항에 있어서,
    올리고사카라이드 제제의 하나 이상의 분획이 상대적 빈도를 기준으로 20%, 21%, 22%, 23%, 24% 또는 25% 초과의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함하는, 제조 방법.
  133. 제68항 내지 제132항 중 어느 한 항에 있어서,
    올리고사카라이드 제제가 상대적 빈도를 기준으로 20%, 21%, 22%, 23%, 24% 또는 25% 초과의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함하는, 제조 방법.
  134. 제68항 내지 제133항 중 어느 한 항에 있어서,
    올리고사카라이드 제제의 각각의 분획이 상대적 빈도를 기준으로 20%, 21%, 22%, 23%, 24% 또는 25% 초과의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드를 포함하는, 제조 방법.
  135. 제68항 내지 제134항 중 어느 한 항에 있어서,
    99%, 95%, 90%, 85%, 80%, 75%, 70%, 65%, 60%, 55%, 50%, 45%, 40%, 35% 또는 30% 초과의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드가 단지 하나의 무수-아단위를 갖는, 제조 방법.
  136. 제68항 내지 제135항 중 어느 한 항에 있어서,
    약 80 내지 1%, 80 내지 2%, 80 내지 3%, 80 내지 4%, 80 내지 5%, 80 내지 10%, 80 내지 20%, 80 내지 30%, 80 내지 40%, 80 내지 50%, 60 내지 1%, 60 내지 2%, 60 내지 3%, 60 내지 4%, 60 내지 5%, 60 내지 10%, 60 내지 20%, 60 내지 30%, 60 내지 40%, 60 내지 50%, 40 내지 1%, 40 내지 2%, 40 내지 3%, 40 내지 4%, 40 내지 5%, 40 내지 10%, 40 내지 20%, 40 내지 30%, 40 내지 50%, 30 내지 1%, 30 내지 2%, 30 내지 3%, 30 내지 4%, 30 내지 5%, 30 내지 10%, 30 내지 20%, 20 내지 1%, 20 내지 2%, 20 내지 3%, 20 내지 4%, 20 내지 5%, 20 내지 10%, 10 내지 1%, 10 내지 2%, 10 내지 3%, 10 내지 4%, 10 내지 5%, 5 내지 1%, 5 내지 2%, 5 내지 3% 또는 5 내지 4%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드가 단지 하나의 무수-아단위를 갖는, 제조 방법.
  137. 제68항 내지 제136항 중 어느 한 항에 있어서,
    올리고사카라이드 제제가 상대적 빈도를 기준으로 1 내지 40%의 DP1 분획 함량을 갖는, 제조 방법.
  138. 제68항 내지 제137항 중 어느 한 항에 있어서,
    올리고사카라이드 제제가 상대적 빈도를 기준으로 1 내지 35%의 DP2 분획 함량을 갖는, 제조 방법.
  139. 제68항 내지 제138항 중 어느 한 항에 있어서,
    올리고사카라이드 제제가 상대적 빈도를 기준으로 1 내지 30%의 DP3 분획 함량을 갖는, 제조 방법.
  140. 제68항 내지 제139항 중 어느 한 항에 있어서,
    올리고사카라이드 제제가 상대적 빈도를 기준으로 0.1 내지 20%의 DP4 분획 함량을 갖는, 제조 방법.
  141. 제68항 내지 제140항 중 어느 한 항에 있어서,
    올리고사카라이드 제제가 상대적 빈도를 기준으로 0.1 내지 15%의 DP5 분획 함량을 갖는, 제조 방법.
  142. 제68항 내지 제141항 중 어느 한 항에 있어서,
    올리고사카라이드 제제가 DP2 분획 및 DP1 분획을 포함하고, 상기 DP1 분획에 대한 상기 DP2 분획의 비가 상대적 빈도를 기준으로 0.02 내지 0.40인, 제조 방법.
  143. 제68항 내지 제142항 중 어느 한 항에 있어서,
    올리고사카라이드 제제가 DP3 분획 및 DP2 분획을 포함하고, 상기 올리고사카라이드 제제에서 상기 DP2 분획에 대한 상기 DP3 분획의 비가 상대적 빈도를 기준으로 0.01 내지 0.30인, 제조 방법.
  144. 제68항 내지 제143항 중 어느 한 항에 있어서,
    올리고사카라이드 제제가 DP1 분획 및 DP2 분획을 포함하고, 상기 올리고사카라이드 제제에서 상기 DP1 및 상기 DP2 분획의 응집체 함량이 상대적 빈도를 기준으로 50%, 30% 또는 10% 미만인, 제조 방법.
  145. 제68항 내지 제144항 중 어느 한 항에 있어서,
    올리고사카라이드 제제가 1,000개, 5,000개, 10,000개, 20,000개, 30,000개, 40,000개, 50,000개 또는 100,000개 이상의 상이한 올리고사카라이드 종을 포함하는, 제조 방법.
  146. 제68항 내지 제145항 중 어느 한 항에 있어서,
    올리고사카라이드 제제의 2개 이상의 독립적인 올리고사카라이드가 상이한 무수-아단위를 포함하는, 제조 방법.
  147. 제68항 내지 제146항 중 어느 한 항에 있어서,
    올리고사카라이드 제제가 모노사카라이드의 열적 탈수의 생성물인 무수-아단위를 포함하는 하나 이상의 올리고사카라이드를 포함하는, 제조 방법.
  148. 제68항 내지 제147항 중 어느 한 항에 있어서,
    올리고사카라이드 제제가 무수-글루코스, 무수-갈락토스, 무수-만노스, 무수-알로스, 무수-알트로스, 무수-굴로스, 무수-인도스, 무수-탈로스, 무수-프럭토스, 무수-리보스, 무수-아라비노스, 무수-람노스, 무수-릭소스 또는 무수-자일로스 아단위를 포함하는 하나 이상의 올리고사카라이드를 포함하는, 제조 방법.
  149. 제68항 내지 제148항 중 어느 한 항에 있어서,
    올리고사카라이드 제제가 하나 이상의 무수-글루코스, 무수-갈락토스, 무수-만노스 또는 무수-프럭토스 아단위를 포함하는, 제조 방법.
  150. 제68항 내지 제149항 중 어느 한 항에 있어서,
    올리고사카라이드 제제가 하나 이상의 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 또는 1,6-무수-β-D-글루코피라노스 아단위를 포함하는, 제조 방법.
  151. 제68항 내지 제150항 중 어느 한 항에 있어서,
    올리고사카라이드 제제가 하나 이상의 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 아단위 및 하나 이상의 1,6-무수-β-D-글루코피라노스 무수-아단위를 포함하는, 제조 방법.
  152. 제151항에 있어서,
    올리고사카라이드 제제에서 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 대 1,6-무수-β-D-글루코피라노스의 비가 약 10:1 내지 1:10, 9:1 내지 1:10, 8:1 내지 1:10, 7:1 내지 1:10, 6:1 내지 1:10, 5:1 내지 1:10, 4:1 내지 1:10, 3:1 내지 1:10, 2:1 내지 1:10, 10:1 내지 1:9, 10:1 내지 1:8, 10:1 내지 1:7, 10:1 내지 1:6, 10:1 내지 1:5, 10:1 내지 1:4, 10:1 내지 1:3, 10:1 내지 1:2, 또는 1:1 내지 3:1인, 제조 방법.
  153. 제151항에 있어서,
    올리고사카라이드 제제에서 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 대 1,6-무수-β-D-글루코피라노스의 비가 약 10:1, 9:1, 8:1, 7:1, 6:1, 5:1, 4:1, 3:1, 2:1, 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9 또는 1:10인, 제조 방법.
  154. 제151항에 있어서,
    올리고사카라이드 제제에서 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 대 1,6-무수-β-D-글루코피라노스의 비가 약 2:1인, 제조 방법.
  155. 제151항에 있어서,
    1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 대 1,6-무수-β-D-글루코피라노스의 비가 각각의 분획에서 약 10:1 내지 1:10, 9:1 내지 1:10, 8:1 내지 1:10, 7:1 내지 1:10, 6:1 내지 1:10, 5:1 내지 1:10, 4:1 내지 1:10, 3:1 내지 1:10, 2:1 내지 1:10, 10:1 내지 1:9, 10:1 내지 1:8, 10:1 내지 1:7, 10:1 내지 1:6, 10:1 내지 1:5, 10:1 내지 1:4, 10:1 내지 1:3, 10:1 내지 1:2, 또는 1:1 내지 3:1인, 제조 방법.
  156. 제151항에 있어서,
    1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 대 1,6-무수-β-D-글루코피라노스의 비가 올리고사카라이드 제제의 각각의 분획에서 약 10:1, 9:1, 8:1, 7:1, 6:1, 5:1, 4:1, 3:1, 2:1, 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9 또는 1:10인, 제조 방법.
  157. 제151항에 있어서,
    1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 대 1,6-무수-β-D-글루코피라노스의 비가 올리고사카라이드 제제의 각각의 분획에서 약 2:1인, 제조 방법.
  158. 제151항에 있어서,
    올리고사카라이드 제제 중 1%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90% 이상의 무수-아단위가 1,6-무수-β-D-글루코퓨라노스 및 1,6-무수-β-D-글루코피라노스로 이루어진 군으로부터 선택되는, 제조 방법.
  159. 제68항 내지 제158항 중 어느 한 항에 있어서,
    올리고사카라이드 제제가 당 카라멜화 생성물인 하나 이상의 무수-아단위를 포함하는, 제조 방법.
  160. 제159항에 있어서,
    당 카라멜화 생성물이 메탄올; 에탄올; 퓨란; 메틸 글리옥살; 2-메틸 퓨란; 비닐 아세테이트; 글리콜알데하이드; 아세트산; 아세톨; 퓨르퓨르알; 2-퓨란메탄올; 3-퓨란메탄올; 2-하이드록시 사이클로펜트-2-엔-1-온; 5-메틸 퓨르퓨르알; 2(5H)-퓨란온; 2 메틸 사이클로펜텐올론; 레보글루코센온; 고리 하이드록실 락톤; 1,4,3,6-2무수-α-D-글루코피라노스; 2무수 글루코피라노스; 및 5-하이드록시 메틸 퓨르퓨르알(5-hmf)로 이루어진 군으로부터 선택되는, 제조 방법.
  161. 제68항 내지 제160항 중 어느 한 항에 있어서,
    올리고사카라이드 제제 중 약 0.1 내지 5%, 0.1 내지 2% 또는 0.1 내지 1%의 무수-아단위가 카라멜화 생성물인, 제조 방법.
  162. 제68항 내지 제161항 중 어느 한 항에 있어서,
    올리고사카라이드 제제 중 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 99% 이상의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드가 쇄-말단 무수-아단위를 포함하는, 제조 방법.
  163. 제68항 내지 제162항 중 어느 한 항에 있어서,
    올리고사카라이드 제제 중 약 1 내지 100%, 1 내지 99%, 1 내지 90%, 1 내지 80%, 1 내지 70%, 1 내지 60%, 1 내지 50%, 1 내지 40%, 1 내지 30%, 1 내지 20%, 1 내지 10%, 1 내지 5%, 1 내지 4%, 1 내지 3%, 1 내지 2%, 10 내지 100%, 10 내지 99%, 10 내지 90%, 10 내지 80%, 10 내지 70%, 10 내지 60%, 10 내지 50%, 10 내지 40%, 10 내지 30%, 10 내지 20%, 20 내지 100%, 20 내지 99%, 20 내지 90%, 20 내지 80%, 20 내지 70%, 20 내지 60%, 20 내지 50%, 20 내지 40% 또는 20 내지 30%의 무수-아단위-함유 올리고사카라이드가 쇄-말단 무수-아단위를 포함하는, 제조 방법.
  164. 제68항 내지 제163항 중 어느 한 항에 있어서,
    올리고사카라이드 제제의 중량 평균 분자량이 약 300 내지 5,000 g/mol, 500 내지 5,000 g/mol, 700 내지 5,000 g/mol, 500 내지 2,000 g/mol, 700 내지 2,000 g/mol, 700 내지 1,500 g/mol, 300 내지 1,500 g/mol, 300 내지 2,000 g/mol, 400 내지 1,300 g/mol, 400 내지 1,200 g/mol, 400 내지 1,100 g/mol, 500 내지 1,300 g/mol, 500 내지 1,200 g/mol, 500 내지 1,100 g/mol, 600 내지 1,300 g/mol, 600 내지 1,200 g/mol, 또는 600 내지 1,100 g/mol인, 제조 방법.
  165. 제68항 내지 제163항 중 어느 한 항에 있어서,
    올리고사카라이드 제제의 수 평균 분자량이 약 300 내지 5,000 g/mol, 500 내지 5,000 g/mol, 700 내지 5,000 g/mol, 500 내지 2,000 g/mol, 700 내지 2,000 g/mol, 700 내지 1,500 g/mol, 300 내지 1,500 g/mol, 300 내지 2,000 g/mol, 400 내지 1,000 g/mol, 400 내지 900 g/mol, 400 내지 800 g/mol, 500 내지 900 g/mol 또는 500 내지 800 g/mol인, 제조 방법.
  166. 제68항 내지 제163항 중 어느 한 항에 있어서,
    올리고사카라이드 제제의 중량 평균 분자량이 약 2,000 내지 2,800 g/mol, 2,100 내지 2,700 g/mol, 2,200 내지 2,600 g/mol, 2,300 내지 2,500 g/mol 또는 2,320 내지 2,420 g/mol인, 제조 방법.
  167. 제68항 내지 제163항 중 어느 한 항에 있어서,
    올리고사카라이드 제제의 수 평균 분자량이 약 1,000 내지 2,000 g/mol, 1,100 내지 1,900 g/mol, 1,200 내지 1,800 g/mol, 1,300 내지 1,700 g/mol, 1,400 내지 1,600 g/mol 또는 1,450 내지 1,550 g/mol인, 제조 방법.
  168. 하나 이상의 사료용 당 및 촉매를 포함하는 수성 조성물을 중합을 유도하기에 충분한 시간 동안 소정 온도까지 가열하는 단계를 포함하는, 합성 올리고사카라이드 제제의 제조 방법으로서,
    상기 촉매가 에탄다이설폰산; 에탄설폰산; 이세티온산; 호모시스테인산; HEPBS(N-(2-하이드록시에틸)피페라진-N'-(4-부탄설폰산)); HEPES(4-(2-하이드록시에틸)-1-피페라진에탄설폰산); 2-하이드록시-3-모르폴리노프로판설폰산; 2-(N-모르폴리노)에탄설폰산; 메탄설폰산; 메타니아자이드; 나프탈렌-1-설폰산; 나프탈렌-2-설폰산; 퍼플루오로부탄설폰산; 6-설포퀴노보스; 트라이플산; 2-아미노에탄설폰산; 벤조산; 클로로아세트산; 트라이플루오로아세트산; 카프로산; 에난트산; 카프릴산; 펠라르곤산; 라우르산; 팔미트산; 스테아르산; 아라키드산; 아스파르트산; 글루탐산; 세린; 트레오닌; 글루타민; 시스테인; 글리신; 프롤린; 알라닌; 발린; 이소류신; 류신; 메티오닌; 페닐알라닌; 티로신; 및 트립토판으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 상기 올리고사카라이드 제제가 각각 1(DP1 분획) 내지 n(DPn 분획)의 별개의 중합도를 갖는 적어도 n개의 분획의 올리고사카라이드를 포함하고, n이 2 이상의 정수인, 제조 방법.
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