KR20210132664A - 항pd-l1 항체 및 그의 용도 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 항PD-L1 항체 및 그 항원 결합 프래그먼트와 그의 용도를 제공한다. 본 발명은 상기 항PD-L1 항체 및 그 항원 결합 프래그먼트를 포함하는 다중특이성 항체, 예를 들어 이중특이성 항체, 결착물과 조성물, 및 이들의 암과 같은 질병을 치료하는데 있어서의 용도를 더 제공한다.
Description
본 발명은 생체의료 분야에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은 항PD-L1 항체 및 그의 용도, 특히 암 치료에 있어서의 용도에 관한 것이다.
암은 현재 인류 사망률이 가장 높은 질병 중의 하나이다. 세계보건기구의 통계에 따르면, 2012년 전 세계의 악성 종양 발병 및 사망 사례는 1400만과 820만에 달하고, 중국의 신규 암 진단 사례는 307만, 사망자 수는 220만에 달한다. 최근 몇 년간 면역관문(immune checkpoint)이 각종 암을 치료하기 위한 유효 잠재적 표적으로 간주되면서 면역관문의 항체 약물에 대한 연구가 갈수록 많은 관심을 받고 있다.
PD-1과 PD-L1의 완전한 명칭은 각각 프로그램화 세포 사멸1(programmed cell death-1)과 프로그램화 세포 사멸 리간드1(programmed cell death-ligand 1)이며, 이는 면역글로불린 슈퍼패밀리 공동 자극 분자의 중요 구성원으로서, 주로 자가 면역, 종양 면역 등 유기체의 면역 조절 과정에 관여한다. PD-1 크기가 40 kDa인 Ⅰ형 막관통 단백질은 주로 활성화된 T 세포에서 발현되는 억제성 수용체이며, 이는 리간드 PD-L1과 결합한 후, T 세포의 활성화 및 증식을 현저히 억제할 수 있다. 현재 기지의 PD-1의 리간드는 두 개가 있으며, 각각 PD-L1(B7-H1이라고도 칭한다)과 PD-L2(B7-DC라고도 칭한다)이다. 인간 PD-L1 유전자는 염색체 9p24에 위치하며, 290개의 아미노산을 부호화하는 Ⅰ형 막관통 단백질로서, 세포외 영역 IgV, IgC 도메인, 소수성 막관통 도메인 및 30개의 아미노산의 세포내 도메인으로 구성된다. PD-L1은 다양한 면역 세포, 상피세포와 종양세포 표면에 광범위하게 발현되고, PD-L2는 주로 면역세포 표면에 발현된다. 현재 연구 결과, 종양 세포는 PD-L1 분자의 고발현을 통해, T 세포 표면의 수용체 PD-1과 결합하여, 음성 조절 신호를 전달함으로써, 종양 항원 특이성 T 세포의 활성화와 증식을 억제하며, 이에 따라 유기체의 면역 감시와 살상으로부터 도피하는 것으로 밝혀졌다.
최근 몇 년간, PD-1/PD-L1 단백질을 표적으로 하는 단일클론 항체 약물을 이용하여, PD-1/PD-L1의 결합을 차단함으로써, 체내 T 세포의 활성화와 증식을 촉진시켜 종양 세포를 살상하는 목적을 달성하였으며, 이미 흑색종, 림프종, 방광암, 비소세포폐암, 두경부암, 대장암 등과 같은 다양한 암에 응용되어 일정 정도의 치료 효과를 얻고 있다. 종양 면역 치료는 이미 세계적인 연구 이슈와 신약 개발 방향 중의 하나가 되었다.
현재 3개의 PD-L1 항체 약물이 이미 FDA에 의해 승인되었으며, 각각 로쉐가 개발한 PD-L1 항체인 Atezolizumab(방광암, 국소 말기 또는 전이성 요로상피암, 전이성 비소세포폐암에 사용된다), 머크/화이자가 합작 개발한 항PD-L1 단일클론 항체인 Avelumab(드문 피부암, 메르켈 세포암 등에 사용된다) 및 아스트라제네카가 개발한 Durvalumab(말기 또는 전이성 요로상피암에 사용된다)이다. 단일 약물 이외에도, PD-L1 항체는 복합하여 시도되기도 한다. 예를 들어 Durvalumab은 현재 OX40, MEK, CTLA4 등을 포함하는 13개의 상이한 기제를 갖는 약물과 복합 사용된다. PD-L1을 표적점으로 하는 시판 단일클론 항체 약물은 암을 치료하는 측면에서 각자의 장점과 단점이 있으나, 판매가격이 비싸기 때문에 아직 광범위하게 응용 및 보급될 수가 없으며, 따라서, 적용 범위가 넓고, PD-1/PD-L1 신호 통로를 더욱 효과적으로 차단할 수 있는 항체 약물의 연구 개발은 다양한 종양과 면역체계 관련 질병의 치료에 가능성을 제공할 것이며, 응용 잠재력과 시장 가치가 매우 크다.
본문에서 별도로 정의하지 않는 한, 본 발명과 결합하여 사용되는 과학 및 기술 용어와 그 약자는 본 발명의 소속 분야의 보통 기술자가 통상적으로 이해하는 의미를 갖는다. 이하 본문에서 사용되는 일부 용어와 약어를 열거한다.
항체: antibody, Ab
면역글로불린: immunoglobulin, Ig;
중쇄: heavy chain, HC;
경쇄: light chain, LC;
중쇄 가변영역: heavy chain variable domain, VH;
중쇄 불변영역: heavy chain constant domain, CH;
경쇄 가변영역: light chain variable domain, VL;
경쇄 불변영역: light chain constant domain, CL;
상보성 결정영역: complementarity determining region, CDR, 항체 항원의 상보성 결합 영역을 말한다.
Fab 프래그먼트: antigen binding fragment, Fab;
fc 프래그먼트: fragment crystallizable region, Fc;
단일클론 항체: monoclonal antibodies, mAbs;
항체 의존적 세포 매개 세포 독성 작용: antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity, ADCC;
보체 의존적 세포 독성 작용: complement dependent cytotoxicity, CDC;
이중특이성 항체: bispecific antibody, BsAb.
본문에서 사용된 바와 같이, "항체"라는 용어는 적어도 하나의 항원 인식 부위를 포함하고, 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 면역글로불린 분자를 의미한다. 본 발명에서 언급하는 "항체"라는 용어는 가장 광범위한 의미로 이해되며, 또한 단일클론 항체, 다중클론 항체, 항체 프래그먼트, 적어도 2개의 상이한 항원 결합 도메인을 포함하는 다중 특이성 항체(예컨대 이중특이성 항체)를 포함한다. 항체는 또한 뮤린 항체, 키메라 항체, 인간화 항체, 인간 항체 및 기타 유래의 항체를 더 포함한다. 본 발명의 항체는 인간, 비인간 영장류 동물, 마우스 또는 래트 등을 포함하되 이에 한정되지 않는 어떤 동물의 면역글로불린 단백질 분자로부터 유래될 수 있다. 항체는 예를 들어 비천연 아미노산(Unnatural AminoAcids), Fc 이펙터 기능의 돌연변이와 글리코실화 부위의 돌연변이 같은 추가적인 변화를 포함할 수 있다. 항체는 또한 이러한 항체가 희망하는 생물 활성을 나타내는 한, 번역 후 변형된(post-translationally modified) 항체, 항체의 항원 결정기(antigenic determinant)를 갖는 융합 단백질, 및 항원 인식 부위에 대한 어떠한 다른 변형을 포함하는 면역글로불린 단백질 분자를 더 포함한다.
항체의 중쇄 불변영역의 아미노산 서열에 따라, 면역글로불린을 IgA, IgD, IgE, IgG와 IgM의 다섯 종류로 분류할 수 있으며, 이는 또한 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IGA1, IGA2 등과 같이 각기 다른 아류(동종형)로 더 분류할 수도 있다. 경쇄 아미노산 서열에 따라, 경쇄는 λ쇄 또는 κ쇄로 분류할 수 있다. 본 발명의 항체는 임의의 종류(예를 들어 IgA, IgD, IgE, IgG와 IgM) 또는 아류(예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 또는 IgA2)일 수 있다.
"항원 결합 프래그먼트"라는 용어는 VL, CL, VH와 CH1 도메인을 갖는 Fab 프래그먼트; CH1 도메인의 C 말단에 하나 또는 다수의 시스테인 잔기를 갖는 Fab 프래그먼트인 Fab'프래그먼트; VH와 CH1 도메인을 갖는 Fd 프래그먼트; VH와 CH1 도메인 및 CH1 도메인의 C 말단에 하나 또는 다수의 시스테인 잔기를 갖는 Fd'프래그먼트; 항체의 단일 암(arm)의 VL과 VH 도메인을 갖는 Fv 프래그먼트; VH 도메인 또는 VL 도메인으로 구성되는 dAb 프래그먼트; 분리된 CDR 영역; 힌지 영역의 다이설파이드 브릿지(disulfide bridge)로 결합된 2개의 Fab' 프래그먼트를 포함하는 2가 프래그먼트인 F(ab')2 프래그먼트; 단쇄 항체 분자(예를 들어 단쇄 Fv; scFv); 동일한 폴리펩타이드 사슬 중 경쇄 가변영역(VL)과 연결된 중쇄 가변영역(VH)을 포함하는 2개의 항원 결합 부위를 갖는 "이중 항체"; 한 쌍의 직렬 Fd 구간(VH-CH1-VH-CH1)을 포함하여, 상기 구간이 상보성 경쇄 폴리펩타이드와 함께 한 쌍의 항원 결합 영역을 형성하는 "선형 항체"; 및 항원 결합 활성을 보유한 어떠한 전술한 물질의 변형된 형식을 포함하나 이에 한정되지 않는다.
본문에서 사용된 바와 같이, "CDR"이라는 용어는 항체 가변 서열 내의 상보성 결정 영역을 의미한다. 각각의 가변 영역에 대해 설명하면, 중쇄와 경쇄의 각 가변 영역에는 CDR1, CDR2와 CDR3라고 칭하는 3개의 CDR이 있으며, 이러한 CDR의 확실한 경계는 시스템마다 다르게 정의된다. Kabat 등(Kabat et al, Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1987) 및 (1991))이 기술한 체계는 항체 가변영역에 적용되는 명확한 잔기 번호부여 체계를 제공하였을 뿐만 아니라, 3개의 CDR을 한정하는 잔기 경계를 더 제공하였다. 이러한 CDR은 Kabat CDR이라고 칭할 수 있다. 각각의 상보성 결정 영역은 Kabat이 정의한 "상보성 결정 영역"으로부터의 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. Chothia 등(Chothia & Lesk, J. Mol. Biol, 196:901-917 (1987) 및 Chothia et al., Nature 342:877-883 (-1989))은, 비록 아미노산 서열 수준에서 큰 다양성을 가지고 있으나, Kabat CDR 내의 어떤 하위 부분은 거의 동일한 펩타이드 뼈대의 형태를 채택한다는 것을 발견하였다. 이러한 하위 부분은 각각 L1, L2와 L3 또는 H1, H2 및 H3로 칭하며, 여기서 "L"과 "H"는 각각 경쇄와 중쇄 영역을 나타낸다. 이러한 영역은 Chothia CDR이라 칭할 수 있으며, Kabat CDR과 중첩되는 경계를 갖는다. 또한 상기 체계 중의 하나를 엄격하게 따르지는 않으나, 단 여전히 Kabat CDR과 중첩되는 다른 CDR 경계의 정의가 더 있으며, 본문에서 사용하는 방법은 비록 바람직한 실시방안에서 Kabat 또는 Chothia가 정의한 CDR을 사용하지만 임의의 이러한 체계에 따라 정의된 CDR을 이용할 수 있다. 본문에서 사용된 바와 같이, "항체 가변영역"이란 항체 분자의 경쇄와 중쇄에 상보성 결정 영역(CDR, 즉 CDR1, CDR2와 CDR3) 및 프레임 영역(FR)의 아미노산 서열을 포함하는 부분을 의미한다. VH란 중쇄의 가변 도메인을 의미하고, VL은 경쇄의 가변 도메인을 의미한다.
본문에서 사용된 바와 같이 "키메라 항체"란 그 중 가변영역이 비인간종(예를 들어 설치동물에서 파생됨)으로부터 유래되고, 불변 영역이 상이한 종(예를 들어 인간)으로부터 유래된 항체를 말한다. 키메라 항체는 항체 엔지니어링을 통해 생성될 수 있다. "항체 엔지니어링"은 일반적으로 항체의 각기 다른 종류의 변형에 사용되는 용어이며, 또한 항체 엔지니어링에 사용되는 방법은 당업자가 공지하는 것이다. 따라서, 키메라 항체는 유전 또는 엔지니어링된 재조합 항체일 수 있다. 키메라 항체의 생성 방법은 당업자가 이미 알고 있는 것이며, 따라서, 키메라 항체는 본문 이외의 다른 방법을 통해 생성될 수 있다. 인류의 치료에 응용되는 키메라 단일클론 항체를 개발함으로써, 비인간 항체(예를 들어 설치동물 항체)의 기대하는 항체 면역원성을 감소시킬 수 있으며, 통상적으로 관심 항원에 대해 특이성을 갖는 비인간(예컨대 쥐 또는 토끼) 가변 영역, 및 인간 불변 항체 중쇄와 경쇄 도메인을 포함할 수 있다. 키메라 항체의 본문에서 사용된 용어인 "가변 영역" 또는 "가변 도메인"이란 하기와 같이, 면역글로불린의 중쇄와 경쇄의 CDR과 프레임 영역을 포함하는 영역을 의미한다.
본문에서 사용된 "인간화 항체"란 인간 가변 도메인과 높은 수준의 서열 상동성을 갖도록 변형을 거친 인간 항체 불변 도메인과 비인간 가변 도메인을 포함하는 유전공학적으로 변형된 비인간 항체를 의미한다. 이는 6개의 비인간 항체 CDR(함께 항원 결합 부위를 형성한다)을 상동 인간 수용체 프레임워크 영역(FR)에 이식함으로써 구현될 수 있다. 모항체의 결합 친화력과 특이성을 완전히 재구축하기 위해서는 프레임워크 잔기를 모항체(즉 비인간 항체)로부터 인간 프레임워크 영역(복귀 돌연변이)으로 치환해야 할 가능성이 있다. 따라서, 인간화 항체는 주로 비인간 아미노산 서열에 대한 하나 또는 다수의 아미노산 복귀 돌연변이를 선택적으로 포함하는 인간 프레임워크 영역, 및 완전 인간 불변 영역인 비인간 CDR 서열을 포함할 수 있다. 선택적으로, 별도의 아미노산 변형(반드시 복귀 돌연변이인 것은 아니다)을 응용하여, 친화력과 생물화학적 특성 및/또는 불변 영역에서 별도의 아미노산 돌연변이를 도입할 수 있는 것과 같은 바람직한 특징을 지니는 인간화 항체를 획득할 수 있다.
본문에서 사용된 바와 같이, "단일클론 항체"란 기본적으로 균질한 항체 군체로부터 획득되는 항체를 의미하며, 즉 소량으로 존재할 가능성이 있는 천연적으로 존재하는 돌연변이를 제외하고, 군체를 구성하는 각 항체는 동일하다. 단일클론 항체는 단일한 항원에 대하여 고도로 특이적이다. 또한, 통상적으로 상이한 결정기(에피토프)에 대한 상이한 항체를 포함하는 다중클론 항체 제제와 반대로, 단일클론 제제 중의 모든 항체는 항원의 동일한 단일 결정기를 대상으로 한다. 본문에서 사용한 바와 같이, "모노클론 항체"라는 용어는 하이브리도마 기술을 통해 생성되는 항체에 한정되지 않으며, 또한"모노클론 항체"라는 수식어는 어떠한 특정 방법을 통해 항체를 생성해야 하는 것으로 해석되어서는 안 된다.
본 발명에서, 본 발명인은 신규한 항PD-L1의 항체를 생성하고, 이에 대해 인간화 변형을 실시하였다. 상기 항체 및 그 인간화 형식은 PD-1/PD-L1의 결합을 효과적으로 차단할 수 있으며, 또한 암 질환 동물모델에서 현저한 치료 효과를 나타내었다.
상응하게, 일 측면에서, 본 발명은 항PD-L1 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트에 관한 것으로서, 상기 항PD-L1 항체는 이하 중쇄 상보성 결정 영역(CDR H)을 구비한다:
SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 76 및 SEQ ID NO: 82에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR H1;
SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 71, SEQ ID NO: 77 및 SEQ ID NO: 83에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 CDR H2; 및
SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 78 및 SEQ ID NO: 84에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 CDR H3.
일부 실시방안에서, 상기 항PD-L1 항체는 이하 CDR H를 구비한다:
a) 각각 SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8 및 SEQ ID NO: 9를 포함하는 CDR H1, CDR H2와 CDR H3;
b) 각각 SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14 및 SEQ ID NO: 15를 포함하는 CDR H1, CDR H2와 CDR H3;
c) 각각 SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20 및 SEQ ID NO: 21을 포함하는 CDR H1, CDR H2와 CDR H3;
d) 각각 SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65 및 SEQ ID NO: 66을 포함하는 CDR H1, CDR H2와 CDR H3;
e) 각각 SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 71 및 SEQ ID NO: 72를 포함하는 CDR H1, CDR H2와 CDR H3;
f) 각각 SEQ ID NO: 76, SEQ ID NO: 77 및 SEQ ID NO: 78을 포함하는 CDR H1, CDR H2와 CDR H3;
g) 각각 SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 83 및 SEQ ID NO: 84를 포함하는 CDR H1, CDR H2와 CDR H3.
일부 실시방안에서, 상기 항PD-L1 항체는 이하 경쇄 상보성 결정영역(CDR L)을 더 구비한다:
SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 79 및 SEQ ID NO: 85에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR L1;
SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 80 및 SEQ ID NO: 86에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR L2; 및
SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 69, SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO: 81 및 SEQ ID NO: 87에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR L3.
일부 실시방안에서, 상기 항PD-L1 항체는 이하 CDR L을 구비한다:
a) 각각 SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11과 SEQ ID NO: 12를 포함하는 CDR L1, CDR L2과 CDR L3;
b) 각각 SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17 및 SEQ ID NO: 18을 포함하는 CDR L1, CDR L2과 CDR L3;
c) 각각 SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23 및 SEQ ID NO: 24를 포함하는 CDR L1, CDR L2과 CDR L3;
d) SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68 및 SEQ ID NO: 69를 포함하는 CDR L1, CDR L2과 CDR L3;
e) 각각 SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 74 및 SEQ ID NO: 75를 포함하는 CDR L1, CDR L2과 CDR L3;
f) 각각 SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 80 및 SEQ ID NO: 81을 포함하는 CDR L1, CDR L2과 CDR L3; 또는
g) 각각 SEQ ID NO: 85, SEQ ID NO: 86 및 SEQ ID NO: 87을 포함하는 CDR L1, CDR L2과 CDR L3.
바람직한 실시방안에서, 상기 항PD-L1 항체는 이하 CDR H와 CDR L을 구비한다:
a) 각각 SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8 및 SEQ ID NO: 9를 포함하는 CDR H1, CDR H2와 CDR H3, 및 각각 SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 및 SEQ ID NO: 12를 포함하는 CDR L1, CDR L2과 CDR L3;
b) 각각 SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14 및 SEQ ID NO: 15를 포함하는 CDR H1, CDR H2와 CDR H3, 및 각각 SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17 및 SEQ ID NO: 18을 포함하는 CDR L1, CDR L2과 CDR L3;
c) 각각 SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20 및 SEQ ID NO: 21을 포함하는 CDR H1, CDR H2와 CDR H3, 및 각각 SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23 및 SEQ ID NO: 24를 포함하는 CDR L1, CDR L2과 CDR L3;
d) 각각 SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65 및 SEQ ID NO: 66을 포함하는 CDR H1, CDR H2와 CDR H3, 및 각각 SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68 및 SEQ ID NO: 69를 포함하는 CDR L1, CDR L2과 CDR L3;
e) 각각 SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 71 및 SEQ ID NO: 72를 포함하는 CDR H1, CDR H2와 CDR H3, 및 각각 SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 74 및 SEQ ID NO: 75를 포함하는 CDR L1, CDR L2과 CDR L3;
f) 각각 SEQ ID NO: 76, SEQ ID NO: 77 및 SEQ ID NO: 78을 포함하는 CDR H1, CDR H2와 CDR H3, 및 각각 SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 80 및 SEQ ID NO: 81을 포함하는 CDR L1, CDR L2과 CDR L3; 또는
g) 각각 SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 83 및 SEQ ID NO: 84를 포함하는 CDR H1, CDR H2와 CDR H3, 및 각각 SEQ ID NO: 85, SEQ ID NO: 86 및 SEQ ID NO: 87을 포함하는 CDR L1, CDR L2과 CDR L3.
또 다른 측면으로, 본 발명은 항PD-L1 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트에 관한 것으로서, 여기서 상기 항PD-L1 항체는 이하 서열을 포함하는 중쇄 가변영역(VH)을 구비한다:
a) SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 60 및 SEQ ID NO: 62에서 선택된 아미노산 서열;
b) a)의 아미노산 서열과 적어도 60%의 서열 동일성, 예를 들어 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열; 또는
c) a)의 아미노산 서열 중 하나 또는 다수의 아미노산 변형(amino acid modification), 예를 들어, 1-5개, 5-10개, 10-20개, 20-30개 또는 30-40개의 아미노산 변형, 예를 들어 1-40개, 1-30개, 1-20개, 1-10개 또는 1-5개의 아미노산 변형이 수행된 아미노산 서열.
본문에서 사용된 "아미노산 변형"이란 폴리펩타이드 사슬에 하나 또는 다수의 아미노산을 첨가, 치환, 삽입 및/또는 삭제하는 것을 말한다.
일부 실시방안에서, 상기 항PD-L1 항체는 이하 서열을 포함하는 경쇄 가변영역(VL)을 더 구비한다:
a) SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 57, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 61 및 SEQ ID NO: 63에서 선택된 아미노산 서열;
b) a)의 아미노산 서열과 적어도 60%의 서열 동일성, 예를 들어 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열; 또는
c) a)의 아미노산 서열 중 하나 또는 다수의 아미노산 변형, 예를 들어, 1-5개, 5-10개 또는 10-20개의 아미노산 변형, 예를 들어 1-20개, 1-10개 또는 1-5개의 아미노산 변형이 수행된 아미노산 서열.
일부 실시방안에서, 상기 항PD-L1 항체는 이하 VH와 VL을 구비한다:
a) 각각 SEQ ID NO: 1 및 SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열을 포함하는 VH와 VL;
b) 각각 SEQ ID NO: 1 및 SEQ ID NO: 2와 적어도 60%의 서열 동일성, 예를 들어 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH와 VL; 또는
c) 각각 SEQ ID NO: 1 및 SEQ ID NO: 2 중 하나 또는 다수의 아미노산 변형이 수행된 아미노산 서열을 포함하는 VH와 VL.
또 다른 일부 실시방안에서, 상기 항PD-L1 항체는 이하 VH와 VL을 구비한다:
a) 각각 SEQ ID NO: 3 및 SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열을 포함하는 VH와 VL;
b) 각각 SEQ ID NO: 3 및 SEQ ID NO: 4와 적어도 60%의 서열 동일성, 예를 들어 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH와 VL; 또는
c) 각각 SEQ ID NO: 3 및 SEQ ID NO: 4 중 하나 또는 다수의 아미노산 변형이 수행된 아미노산 서열을 포함하는 VH와 VL.
일부 실시방안에서, 상기 항PD-L1 항체는 이하 VH와 VL을 갖는다:
a) 각각 SEQ ID NO: 5 및 SEQ ID NO: 6의 아미노산 서열을 포함하는 VH와 VL;
b) 각각 SEQ ID NO: 5 및 SEQ ID NO: 6와 적어도 60%의 서열 동일성, 예를 들어 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH와 VL; 또는
c) 각각 SEQ ID NO: 5 및 SEQ ID NO: 6 중 하나 또는 다수의 아미노산 변형이 수행된 아미노산 서열을 포함하는 VH와 VL.
일부 실시방안에서, 상기 항PD-L1 항체는 이하 VH와 VL을 구비한다:
a) 각각 SEQ ID NO: 56 및 SEQ ID NO: 57의 아미노산 서열을 포함하는 VH와 VL;
b) 각각 SEQ ID NO: 56 및 SEQ ID NO: 57와 적어도 60%의 서열 동일성, 예를 들어 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH와 VL; 또는
c) 각각 SEQ ID NO: 56 및 SEQ ID NO: 57 중 하나 또는 다수의 아미노산 변형이 수행된 아미노산 서열을 포함하는 VH와 VL.
또 다른 일부 실시방안에서, 상기 항PD-L1 항체는 이하 VH와 VL을 구비한다:
a) 각각 SEQ ID NO: 58 및 SEQ ID NO: 59의 아미노산 서열을 포함하는 VH와 VL;
b) 각각 SEQ ID NO: 58 및 SEQ ID NO: 59와 적어도 60%의 서열 동일성, 예를 들어 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH와 VL; 또는
c) 각각 SEQ ID NO: 58 및 SEQ ID NO: 59 중 하나 또는 다수의 아미노산 변형이 수행된 아미노산 서열을 포함하는 VH와 VL.
일부 실시방안에서, 상기 항PD-L1 항체는 이하 VH와 VL을 구비한다:
a) 각각 SEQ ID NO: 60 및 SEQ ID NO: 61의 아미노산 서열을 포함하는 VH와 VL;
b) 각각 SEQ ID NO: 60 및 SEQ ID NO: 61과 적어도 60%의 서열 동일성, 예를 들어 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH와 VL; 또는
c) 각각 SEQ ID NO: 60 및 SEQ ID NO: 61 중 하나 또는 다수의 아미노산 변형이 수행된 아미노산 서열을 포함하는 VH와 VL.
일부 실시방안에서, 상기 항PD-L1 항체는 이하 VH와 VL을 구비한다:
a) 각각 SEQ ID NO: 62 및 SEQ ID NO: 63의 아미노산 서열을 포함하는 VH와 VL;
b) 각각 SEQ ID NO: 62 및 SEQ ID NO: 63와 적어도 60%의 서열 동일성, 예를 들어 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH와 VL; 또는
c) 각각 SEQ ID NO: 62 및 SEQ ID NO: 63 중 하나 또는 다수의 아미노산 변형이 수행된 아미노산 서열을 포함하는 VH와 VL.
상기 항PD-L1 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트의 임의의 실시 방안에서, 상기 항PD-L1 항체는 뮤린 항체, 키메라 항체, 인간화 항체 또는 완전 인간 항체일 수 있다.
상기 항PD-L1 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트의 임의의 실시방안에서, 아미노산 변형과 관련된 경우, 상기 아미노산 변형은 가변 영역의 프레임워크 영역에서 수행될 수 있다. 일부 실시방안에서, 상기 아미노산 변형은 인간화 변형(humanized modification)이다.
일 측면에서, 본 발명은 인간화 변형을 거친 본 발명의 항PD-L1 항체에 관한 것이다.
일부 실시방안에서, 상기 인간화 변형을 거친 항PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41 및 SEQ ID NO: 42에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44 및 SEQ ID NO: 45에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 구비한다.
또 다른 일부 실시방안에서, 상기 인간화 변형을 거친 항PD-L1 항체는 SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33 및 SEQ ID NO: 34에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 37 및 SEQ ID NO: 38에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 구비한다.
일부 실시방안에서, 상기 항체는 SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 및 SEQ ID NO: 48에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50 및 SEQ ID NO: 51에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 구비한다.
상기 항PD-L1 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트의 일부 실시방안에서, 상기 항체는 Fc 영역의 변형을 더 포함할 수 있으며, 상기 Fc 영역의 변형은 상기 항체의 항체 의존적인 세포 매개 세포독성 작용(ADCC) 및/또는 보체 의존적 세포독성 작용(CDC)을 감소시킨다. 일부 실시방안에서, 상기 변형은 치환 N297A를 포함한다.
상기 항PD-L1 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트의 어느 실시방안에서, 상기 항체는 IgG, IgA, IgM, IgE 와 IgD 동종형에서 선택될 수 있다. 일부 실시방안에서, 상기 항체는 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4 아형에서 선택된다.
상기 항PD-L1 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트의 어느 실시 방안에서, 상기 항원 결합 프래그먼트는 Fab 프래그먼트, Fab'프래그먼트, Fd 프래그먼트, Fd'프래그먼트, Fv 프래그먼트, dAb 프래그먼트, F(ab')2 프래그먼트, 단쇄 프래그먼트, 이중 항체, 및 선형 항체에서 선택될 수 있다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 이중특이성 항체에 관한 것이다. 본문에서 사용되는 "이중특이성 항체"란 인공적으로 설계된 항체를 말하며, 이는 2개의 상이한 항원 결합 부위의 성분으로 구성되어, 동시에 2종의 상이한 항원 결합 부위와 결합될 수 있다.
일부 실시방안에서, 상기 이중특이성 항체는 PD-L1에 결합되는 제1 항원 결합 영역, 및 다른 항원에 결합되는 제2 항원 결합 영역을 포함하고, 상기 제1 항원 결합 영역은 본 발명의 항PD-L1 항체의 CDRH1, CDRH2와 CDRH3, 및/또는 CDRL1, CDRL2와 CDRL3, 본 발명의 항PD-L1 항체의 VH 및/또는 VL을 포함한다. 일부 실시방안에서, 상기 다른 항원은 종양과 관련된 항원 및 면역관문 분자에서 선택될 수 있다.
본 분야에서는 이미 특정 암과 관련된 많은 종양 관련 항원을 감정해내었다. 본문에서 사용된 바와 같이, "종양 관련 항원"이란 암세포에 의해 차별적으로 발현되어, 암세포를 표적화하는 데 사용될 수 있는 항원을 의미한다. 종양 관련 항원은 잠재적으로 뚜렷한 종양 특이성 면역 응답을 자극할 수 있는 항원이다. 이러한 항원 중의 일부는 정상 세포에 의해 부호화되나, 단 반드시 정상세포에 의해 발현되는 것은 아니다. 이러한 항원은 정상 세포에서 통상적으로 침묵하는(즉 발현되지 않는) 항원, 일부 분화 단계에서만 발현되는 항원 및 배아 및 태아 항원과 같이 시간적으로 발현되는 항원들로 특징지어질 수 있다. 기타 암 항원은 암 유전자(예를 들어 활성화된 ras 암 유전자), 억제 유전자(예를 들어 돌연변이형 p53) 및 내부 결실 또는 염색체 전위(translocation)에 의해 생성되는 융합 단백질과 같은 돌연변이 세포 유전자에 의해 부호화된다. 다른 암 항원은 RNA와 DNA 종양 바이러스가 옮기는 유전자와 같은 바이러스 유전자에 의해 부호화될 수 있다. 많은 다른 종양 관련 항원 및 이를 대상으로 하는 항체는 이미 알려져 있거나 및/또는 제품화되어 있으며, 또한 당업자에 의해 생산되는 것일 수도 있다.
면역관문 단백질 수용체 및 그 리간드(본문에서는 면역관문 분자로 통칭함)는 T 세포가 매개하는 세포 독성의 억제를 매개하며, 또한 통상적으로 종양 또는 종양 미세환경의 종양 또는 비반응성 T 세포에 주로 발현되어, 종양이 면역 공격을 피하도록 허용한다. 면역 억제 관문 단백질 수용체 및 그 리간드의 활성 억제제는 면역 억제성 종양 환경을 극복하여, 종양의 세포 독성 T 세포 공격을 허용할 수 있다. 면역 관문 단백질의 실례는 PD-1, PD-L1, PD-L2, CTLA4, OX40, LAG3, TIM3, TIGIT 및 CD103을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 이러한 단백질의 활성 조절(억제 포함)은 예를 들어 관문 단백질을 표적으로 하는 항체, 압타머, 소분자 및 관문 수용체 단백질의 가용성 형식을 포함할 수 있는 면역 관문 조절제를 통해 완수될 수 있으며, PD-1, PD-L2, CTLA4, OX40, LAG3, TIM3, TIGIT와 CD103에 대해 특이적인 항체는 이미 알려진 것이거나 및/또는 제품화된 것이고, 또한 당업자에 의해 생산되는 것일 수도 있다.
일 측면에서, 본 발명은 뉴클레오티드 서열에 관한 것이다. 일부 실시방안에서, 상기 뉴클레오티드 서열은 본 발명의 항PD-L1 항체의 폴리펩타이드 사슬을 부호화한다. 다른 일부 실시방안에서, 상기 뉴클레오티드 서열은 본 발명의 항PD-L1 항체의 VH 또는 VL을 부호화한다.
다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 벡터에 관한 것이다.
본문에서 사용되는 "벡터"란 폴리뉴클레오티드가 삽입될 수 있는 핵산 운반수단을 의미한다. 벡터가 삽입된 폴리뉴클레오티드에 의해 부호화된 단백질을 발현시킬 수 있을 때, 상기 벡터를 발현 벡터라고 칭한다. 벡터는 형질전환, 형질도입 또는 형질주입 등 방법을 통해 숙주세포에 도입되어, 그것이 운반하는 유전 물질 인자가 숙주세포 내에서 발현되도록 할 수 있다. 벡터는 당업자에게 공인된 것으로서, (1) 플라스미드; (2) 파지미드(phagemid); (3) 코스미드(cosmid); (4) 효모 인공 염색체, 세균 인공 염색체 또는 P1 유래의 인공 염색체와 같은 인공 염색체; (5) λ박테리오파지 또는 M13 박테리오파지와 같은 박테리오파지, 및 (6) 레트로바이러스, 아데노바이러스, 아데노 관련 바이러스, 헤르페스 바이러스, 폭스바이러스, 바큘로바이러스와 같은 동물 바이러스를 포함하나 이에 한정되지 않는다. 벡터는 프로모터 서열, 전사 개시 서열, 인핸서(enhancer) 서열, 선택 인자 및 보고자 유전자를 포함하나 이에 한정되지 않는 발현을 제어하는 다양한 인자가 포함될 수 있으며; 이밖에, 벡터는 복재 개시 부위를 더 포함할 수 있다.
일 측면에서, 본 발명은 본 발명의 뉴클레오티드 서열 또는 벡터를 포함하는 재조합 숙주세포에 관한 것이다.
다른 측면에서, 본 발명은 하이브리도마 세포에 관한 것으로서, 상기 하이브리도마 세포는 본 발명의 항PD-L1 항체 또는 그 항체 결합 프래그먼트를 생성한다.
일 측면에서, 본 발명은 결착물(conjugate)에 관한 것으로서, 상기 결착물은 본 발명의 항PD-L1 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트 또는 이중특이성 항체, 및 그와 결착되는 부분을 포함한다. 일부 실시방안에서, 상기 부분은 사이토톡신, 방사성 동위원소, 형광 마커, 발광물질, 발색물질 또는 효소에서 선택될 수 있다.
다른 측면에서, 본 발명은 조성물에 관한 것으로서, 상기 조성물은 본 발명의 항PD-L1 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트, 이중특이성 항체, 또는 결착물, 및 임의의 하나 또는 다수의 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 및/또는 희석제를 포함한다.
"약학적으로 허용 가능한"이란 단문은 합리적인 의학적 판단 범위 내에서 사람과 동물의 조직과 접촉되어도 과도한 독성, 자극성, 알레르기 반응 또는 기타 문제 또는 합병증이 없으며, 합리적인 이익/위험비(benefit/risk ratio)에 상응하는 화합물, 재료, 조성물 및/또는 제형을 의미한다. 본문에서 사용된 바와 같이, "약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 및/또는 희석제"란 예를 들어, 액체 또는 고체 충전제, 희석제, 부형제, 용제, 매질, 캡슐화 재료, 제조 보조제 또는 용제 캡슐화 재료와 같이 약학적으로 허용 가능한 재료, 조성물 또는 매개물을 의미하며, 이는 본 발명의 항PD-L1 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트의 안정성, 용해도 또는 활성 유지와 관련된다.
일 측면에서, 본 발명은 피험자의 질병을 치료하는 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은 상기 피험자에게 본 발명의 항PD-L1 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트, 이중특이성 항체, 결착물, 또는 조성물을 투여하는 단계를 포함한다.
다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 항PD-L1 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트, 이중특이성 항체, 결착물, 또는 조성물의 피험자의 질병 치료에 있어서의 용도에 관한 것이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 항PD-L1 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트, 이중특이성 항체, 결착물, 또는 조성물의 피험자의 질병을 치료하기 위한 약물 제조에 있어서의 용도에 관한 것이다.
상기 방법과 용도의 일부 실시방안에서, 상기 질병은 암일 수 있다. 암의 구체적인 실례는 기저세포암; 담관암; 방광암; 골암; 유선암; 복막암; 자궁경부암; 담관암; 융모막암; 결장 및 직장암; 결체조직암, 소화기계통암; 자궁내막암; 식도암; 안암; 두경부암; 위암; 교질모세포종; 간암; 신장암; 후두암; 백혈병; 간암; 폐암(예를 들어, 소세포폐암, 비소세포폐암, 폐 선암과 폐 편평세포암); 호지킨 림프종과 비호지킨 림프종을 포함하는 림프종; 흑색종; 골수종; 신경모세포종; 구강암; 난소암; 췌장암; 전립선암; 망막모세포종; 횡문근육종; 대장암; 호흡기계통암; 타액선암; 육종; 피부암; 편평세포암; 고환암; 갑상선암; 자궁 또는 자궁내막암; 비뇨기계통암; B세포 림프종; 만성 림프구 백혈병(CLL); 급성 림프구 백혈병(ALL); 털세포 백혈병; 만성 골수 백혈병 등을 포함하나 이에 한정되지 않는다.
일부 실시방안에서, 상기 암은 흑색종, 림프종, 방광암, 비소세포폐암, 두경부암, 결장암과 피부암에서 선택된다.
상기 방법과 용도의 일부 실시방안에서, 상기 피험자에게 투여되는 하나 이상의 별도의 치료제를 더 포함한다. 일부 실시방안에서, 상기 치료제는 항체, 화학요법 약물과 소분자 화합물에서 선택된다. 일부 실시방안에서, 상기 치료체는 종양관련 항원을 표적으로 한다. 다른 일부 실시방안에서, 상기 치료제는 면역 관문 분자를 표적으로 하며, 상기 면역 관문 분자는 PD-1, PD-L2, CTLA4, OX40, LAG3, TIM3, TIGIT 및 CD103에서 선택될 수 있다.
본문에서 사용된 바와 같이, "화학요법 약물"이란 비정상적인 세포 생장을 특징으로 하는 질병을 치료하는 데에 치료적 유용성을 지니는 임의의 화학 작용제를 의미한다. 본문에서 사용된 화학 치료제는 화학 작용제와 생물 작용제를 포함한다. 이러한 작용제는 암 세포가 지속적인 생존을 위해 의존하는 세포 활동을 억제하는 기능을 발휘한다. 화학요법제의 종류는 알킬화/알칼로이드제, 항대사물, 호르몬 또는 호르몬 유사물, 및 각종 항신생물성(antineoplastic) 약물을 포함한다.
도 1의 유세포분석 결과는 본 발명의 항PD-L1 항체가 비오틴-hPD1와 PD-L1 간의 결합을 차단하는 작용을 나타낸다. 도 1A는 항체 08-3F2와 07-6A11의 결과를 나타낸 것이고; 도 1B는 항체 17-7E4의 결과를 나타낸 것이며; 도 1C는 키메라 항체 24-1F4-mHvKv-IgG1, 33-10C9-mHvKv-IgG1, 23-2A6-mHvKv-IgG1 및 23-4A8-mHvKv-IgG1의 결과를 나타낸 것이다. Atzeolizumab을 양성 대조로 사용하였다.
도 2의 유세포분석 결과는 본 발명의 항PD-1 항체와 상이한 종에서 유래된 PD-L1 단백질 및 키메라 PD-L1 단백질 사이의 교차 반응을 나타낸 것이다. 도 2A는 07-6A11, 17-7E4 및 08-3F2의 결과를 나타낸 것이고; 도 2B는 키메라 항체 24-1F4-mHvKv-IgG1, 33-10C9-mHvKv-IgG1, 23-2A6-mHvKv-IgG1 및 23-4A8-mHvKv-IgG1의 결과를 나타낸 것이다. NC: 음성 대조. Atzeolizumab을 양성 대조로 사용하였다.
도 3은 도시된 항PD-L1 항체를 사용하여 처리 후, 실험동물 체중의 시간에 따른 변화를 나타낸 꺾은선 그래프이다. 도 3A는 실험동물의 체중의 절대값의 시간에 따른 변화이고, 도 3B는 실험동물 체중의 시간에 따른 백분율 변화를 나타낸 것이다. 생리식염수(PS)를 음성 대조로 하고, Atzeolizumab을 양성 대조로 하였다.
도 4는 도시된 항PD-L1 항체를 사용하여 처리 후, 실험동물 체내 종양 부피의 시간에 따른 변화를 나타낸 꺾은선 그래프이다. 생리식염수(PS)를 음성 대조로 하고, Atzeolizumab을 양성 대조로 하였다.
도 5는 도시된 항PD-L1 항체를 사용하여 처리 후, 실험동물 체중의 시간에 따른 변화를 나타낸 꺾은선 그래프이다. 도 5A는 실험동물의 체중의 절대값의 시간에 따른 변화이고, 도 5B는 실험동물 체중의 시간에 따른 백분율 변화를 나타낸 것이다. 생리식염수(PS)를 음성 대조로 하였다.
도 6은 도시된 항PD-L1 항체를 사용하여 처리 후, 실험동물 체내 종양 부피의 시간에 따른 변화를 나타낸 꺾은선 그래프이다. 생리식염수(PS)를 음성 대조로 하였다.
도 7은 도시된 항PD-L1 항체를 사용하여 처리 후, 실험동물 체중의 시간에 따른 변화를 나타낸 꺾은선 그래프이다. 도 7A는 실험동물의 체중의 절대값의 시간에 따른 변화이고, 도 7B는 실험동물 체중의 시간에 따른 백분율 변화를 나타낸 것이다. 생리식염수(PS)를 음성 대조로 하였다.
도 8은 도시된 항PD-L1 항체를 사용하여 처리 후, 실험동물 체내 종양 부피의 시간에 따른 변화를 나타낸 꺾은선 그래프이다. 생리식염수(PS)를 음성 대조로 하였다.
도 9는 상이한 용량의 항PD-L1 항체를 사용하여 처리 후, 실험동물 체중의 시간에 따른 변화를 나타낸 꺾은선 그래프이다. 도 9A는 실험동물의 체중의 절대값의 시간에 따른 변화이고, 도 9B는 실험동물 체중의 시간에 따른 백분율 변화를 나타낸 것이다. 생리식염수(PS)를 음성 대조로 하였다.
도 10은 상이한 용량의 항PD-L1 항체를 사용하여 처리 후, 실험동물 체내 종양 부피의 시간에 따른 변화를 나타낸 꺾은선 그래프이다. 생리식염수(PS)를 음성 대조로 하였다.
도 11은 도시된 항PD-L1 항체, 항CTLA-4 항체, 항OX40 항체 또는 이들의 조합을 사용하여 처리 후, 실험동물 체중의 시간에 따른 변화를 나타낸 꺾은선 그래프이다. 도 11A는 실험동물의 체중의 절대값의 시간에 따른 변화이고, 도 11B는 실험동물 체중의 시간에 따른 백분율 변화를 나타낸 것이다. 생리식염수를 음성 대조로 하였다.
도 12A 내지 도 12C는 도시된 항PD-L1 항체, 항CTLA-4 항체, 항OX40 항체 또는 이들의 조합을 사용하여 처리 후, 실험동물 체내 종양 부피의 시간에 따른 변화를 나타낸 꺾은선 그래프이다. 생리식염수를 음성 대조로 하였다.
도 2의 유세포분석 결과는 본 발명의 항PD-1 항체와 상이한 종에서 유래된 PD-L1 단백질 및 키메라 PD-L1 단백질 사이의 교차 반응을 나타낸 것이다. 도 2A는 07-6A11, 17-7E4 및 08-3F2의 결과를 나타낸 것이고; 도 2B는 키메라 항체 24-1F4-mHvKv-IgG1, 33-10C9-mHvKv-IgG1, 23-2A6-mHvKv-IgG1 및 23-4A8-mHvKv-IgG1의 결과를 나타낸 것이다. NC: 음성 대조. Atzeolizumab을 양성 대조로 사용하였다.
도 3은 도시된 항PD-L1 항체를 사용하여 처리 후, 실험동물 체중의 시간에 따른 변화를 나타낸 꺾은선 그래프이다. 도 3A는 실험동물의 체중의 절대값의 시간에 따른 변화이고, 도 3B는 실험동물 체중의 시간에 따른 백분율 변화를 나타낸 것이다. 생리식염수(PS)를 음성 대조로 하고, Atzeolizumab을 양성 대조로 하였다.
도 4는 도시된 항PD-L1 항체를 사용하여 처리 후, 실험동물 체내 종양 부피의 시간에 따른 변화를 나타낸 꺾은선 그래프이다. 생리식염수(PS)를 음성 대조로 하고, Atzeolizumab을 양성 대조로 하였다.
도 5는 도시된 항PD-L1 항체를 사용하여 처리 후, 실험동물 체중의 시간에 따른 변화를 나타낸 꺾은선 그래프이다. 도 5A는 실험동물의 체중의 절대값의 시간에 따른 변화이고, 도 5B는 실험동물 체중의 시간에 따른 백분율 변화를 나타낸 것이다. 생리식염수(PS)를 음성 대조로 하였다.
도 6은 도시된 항PD-L1 항체를 사용하여 처리 후, 실험동물 체내 종양 부피의 시간에 따른 변화를 나타낸 꺾은선 그래프이다. 생리식염수(PS)를 음성 대조로 하였다.
도 7은 도시된 항PD-L1 항체를 사용하여 처리 후, 실험동물 체중의 시간에 따른 변화를 나타낸 꺾은선 그래프이다. 도 7A는 실험동물의 체중의 절대값의 시간에 따른 변화이고, 도 7B는 실험동물 체중의 시간에 따른 백분율 변화를 나타낸 것이다. 생리식염수(PS)를 음성 대조로 하였다.
도 8은 도시된 항PD-L1 항체를 사용하여 처리 후, 실험동물 체내 종양 부피의 시간에 따른 변화를 나타낸 꺾은선 그래프이다. 생리식염수(PS)를 음성 대조로 하였다.
도 9는 상이한 용량의 항PD-L1 항체를 사용하여 처리 후, 실험동물 체중의 시간에 따른 변화를 나타낸 꺾은선 그래프이다. 도 9A는 실험동물의 체중의 절대값의 시간에 따른 변화이고, 도 9B는 실험동물 체중의 시간에 따른 백분율 변화를 나타낸 것이다. 생리식염수(PS)를 음성 대조로 하였다.
도 10은 상이한 용량의 항PD-L1 항체를 사용하여 처리 후, 실험동물 체내 종양 부피의 시간에 따른 변화를 나타낸 꺾은선 그래프이다. 생리식염수(PS)를 음성 대조로 하였다.
도 11은 도시된 항PD-L1 항체, 항CTLA-4 항체, 항OX40 항체 또는 이들의 조합을 사용하여 처리 후, 실험동물 체중의 시간에 따른 변화를 나타낸 꺾은선 그래프이다. 도 11A는 실험동물의 체중의 절대값의 시간에 따른 변화이고, 도 11B는 실험동물 체중의 시간에 따른 백분율 변화를 나타낸 것이다. 생리식염수를 음성 대조로 하였다.
도 12A 내지 도 12C는 도시된 항PD-L1 항체, 항CTLA-4 항체, 항OX40 항체 또는 이들의 조합을 사용하여 처리 후, 실험동물 체내 종양 부피의 시간에 따른 변화를 나타낸 꺾은선 그래프이다. 생리식염수를 음성 대조로 하였다.
이하 실시예를 결합하여 본 발명의 내용을 좀 더 상세히 설명한다. 아래의 실시예는 단지 설명을 위한 것일 뿐, 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 여겨서는 안 된다는 점을 이해하여야 한다.
본문에 사용된 항체의 명칭에는 항체 유래, 가변 영역과 불변 영역 정보를 포함한다. 예를 들어 키메라 항체 08-3F2-mHvKv-IgG1은 뮤린 항체 08-3F2("3F2")의 VH 및 VL 영역과 인간 IgG1 불변 영역으로 구성된 항체이고; 이와 유사하게, 인간화 항체 3F2-H1K2-IgG1은 뮤린 항체 08-3F2("3F2")의 인간화 중쇄 가변영역 H1 및 경쇄 가변영역 K2와 인간 IgG1 불변 영역으로 구성되는 항체이다. 일부 항체의 Fc 말단은 글리코실화 부위를 통해 Fc 이펙터 기능을 제거하기 위한 N297A 돌연변이(예를 들어, 23-2A6-mHvKv-IgG1-N297A)를 더 구비한다.
실시예 1: 항체 생성
재조합 인간 PD-L1 단백질을 사용하거나 또는 재조합 인간 PD-L1 단백질의 발현 플라스미드를 인코딩하여 마우스를 면역시키고, 이후 하이브리도마 세포를 구축하는 방법을 통해 본 발명의 항PD-L1 단일클론 항체 08-3F2("3F2"), 07-6A11(“6A11”), 17-7E4(“7E4”), 23-2A6(“2A6”), 23-4A8(“4A8”), 33-10C9(“10C9”)와 24-1F4(“1F4”)를 획득하였다. 제조업체의 설명에 따라, GE AKTA 단백질 크로마토그래피 전자동 정제기(GE Healthcare)를 이용하여 항체를 정제하였다. 상기 항체의 중쇄 가변영역(VH), 경쇄 가변영역(VL)과 CDR의 아미노산 서열은 이하 표 1 내지 표 3과 같다.
표 1 : 항체의 VH와 VL 서열
| 08-3F2 ("3F2") 중쇄 가변영역 |
DVQLQESGPDLVKPSQTLSLTCTVTGYSITSGYNWHWIRQFPGNKLEWMGYIHHSSITNYNPSLKSRISITRDTSKNQFFLQLSSVTTEDTATFYCAREGYDYDWFAYWGQGTLVTVSA | SEQ ID NO: 1 |
| 08-3F2 ("3F2") 경쇄 가변영역 |
DIVLAQSPATLSVTPGDSVSLSCRASQSISNNLHWYQQKSHESPRLLIKYASQSISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVETEDFGMYFCQQSKSWPFTFGSGTRLEIK | SEQ ID NO: 2 |
| 07-6A11 ("6A11") 중쇄 가변영역 |
DVQLVESGGGLVQPGGSRKLSCAASGFTFSSFGMHWVRQAPEKGLEWVAYISSGSNTIYYADTVKGRFTISRDNPKNTLFLQMTSLRSEDTAIYYCTRNGYDGWYAMDYWGQGTSVTVSS | SEQ ID NO: 3 |
| 07-6A11 ("6A11") 경쇄 가변영역 |
QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYIHWFQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPARFSGRGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCQQWSTNPFTFGSGTKLEIK | SEQ ID NO: 4 |
| 17-7E4 ("7E4") 중쇄 가변영역 |
QVQLQQSGAELVRPGVSVKISCKGSGFKFTDYAIHWVKQSHAKSLEWIGVISIYYGEASYNQKFKDKATLTVDTSSSTAYMELARLTSEDSAIYYCAREDYYGSSSYFDYWGQGTALTVSS | SEQ ID NO: 5 |
| 17-7E4 ("7E4") 경쇄 가변영역 |
ENVLTQSPAIMAASLGQKVTMTCSASSSVSSSYLHWYQQKSGASPKPLIHRTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSVEAEDDATYYCQQWSGYPYTFGGGTKLEIK | SEQ ID NO: 6 |
| 23-2A6 ("2A6") 중쇄 가변영역 |
QVQLKESGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTSYDISWIRQPPGKGLEWLGAIWTGGGTNYNSAFMSRLSISKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCVRDPYYYAMDYWGQGTSVTVSS | SEQ ID NO: 56 |
| 23-2A6 ("2A6") 경쇄 가변영역 |
DIQMNQSPSSLSASLGDTITITCHASQNLNVWLSWYQQKPGNIPKLLIYKASNLHTGVPSRFSGSGSGTGFTLTISSLQPEDIATYYCQQGQSYPRTFGGGTKLEIK | SEQ ID NO: 57 |
| 23-4A8 ("4A8") 중쇄 가변영역 |
EVQLQESGPSLVKPSQTLSLTCSVTGDSITSGYWNWIRKFPGNKLEYMGYISYTGSTYYNPSLKSRFSITRDTSKNQYFLQLNSVTTEDTATYYCASYEGWLLPFAYWGQGTLVTVSA | SEQ ID NO: 58 |
| 23-4A8 ("4A8") 경쇄 가변영역 |
DIVMSQSPSSLAVSVGEKVPLSCKSSQSLLYSSNQKSSLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVKAEDLAVYYCQQYYGYPFTFGSGTKLEIK | SEQ ID NO: 59 |
| 33-10C9 ("10C9") 중쇄 가변영역 |
QVQLQQPGAELVKPGSSVKLSCKASGYTFTTYYIYWVKQRPGQGLEWIGGINPYNGGTSFNEKFESKATLTVDISSSTAFMQLSSLTSEDSAVYYCTRDGNYVDYWGQGTTLTVSS | SEQ ID NO: 60 |
| 33-10C9 ("10C9") 경쇄 가변영역 |
QIVLTQSPAIMSASPGEKVTITCSASSTVSYVHWLQQKPDTSPKLWIYSTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQRSSSPPTFGSGTKLEIK | SEQ ID NO: 61 |
| 24-1F4 ("1F4") 중쇄 가변영역 |
EVQLRESGPSLVRPSQTLSLTCSVTGDSFTSGYWNWIRKFPGNELESMGYISYSGSTYYNPSLKSRISITRDTSKSQFYLQLSSVTAEDTATYYCARSEGWLLPFAYWGQGTLVTVSA | SEQ ID NO: 62 |
| 24-1F4 ("1F4") 경쇄 가변영역 |
DIVMSQSPSSLPVSVGEKVTMSCKSSQSLLYSSNQKNSLAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLSVYYCQQYYGYPFTFGSGTKLEIK | SEQ ID NO: 63 |
표 2 : Kabat CDR 서열
| 항체 | VH CDR1 | SEQ ID NO: | VH CDR2 | SEQ ID NO: | VH CDR3 | SEQ ID NO: | VL CDR1 | SEQ ID NO: | VL CDR2 | SEQ ID NO: | VL CDR3 | SEQ ID NO: |
| 07-6A11 | SFGMH | 7 | YISSGSNTIYYADTVKG | 8 | NGYDGWYAMDY | 9 | SASSSVSYIH | 10 | DTSKLAS | 11 | QQWSTNPFT | 12 |
| 08-3F2 | SGYNWH | 13 | YIHHSSITNYNPSLKS | 14 | EGYDYDWFAY | 15 | RASQSISNNLH | 16 | YASQSIS | 17 | QQSKSWPFT | 18 |
| 17-7E4 | DYAIH | 19 | VISIYYGEASYNQKFKD | 20 | EDYYGSSSYFDY | 21 | SASSSVSSSYLH | 22 | RTSNLAS | 23 | QQWSGY PYT | 24 |
| 23-2A6 | SYDIS | 64 | AIWTGGGTNYNSAFMS | 65 | DPYYYAMDY | 66 | HASQNLNVWLS | 67 | KASNLHT | 68 | QQGQSYPRT | 69 |
| 23-4A8 | SGYWN | 70 | YISYTGSTYYNPSLKS | 71 | YEGWLLPFAY | 72 | KSSQSLLYSSNQKSSLA | 73 | WASTRES | 74 | QQYYGYPFT | 75 |
| 33-10C9 | TYYIY | 76 | GINPYNGGTSFNEKFES | 77 | DGNYVDY | 78 | SASSTVSYVH | 79 | STSNLAS | 80 | QQRSSSPPT | 81 |
| 24-1F4 | SGYWN | 82 | YISYSGSTYYNPSLKS | 83 | SEGWLLPFAY | 84 | KSSQSLLYSSNQKNSLA | 85 | WASTRES | 86 | QQYYGYPFT | 87 |
표 3 : Chothia CDR 서열
| 항체 | VH CDR1 | SEQ ID NO: | VH CDR2 | SEQ ID NO: | VH CDR3 | SEQ ID NO: | VL CDR1 | SEQ ID NO: | VL CDR2 | SEQ ID NO: | VL CDR3 | SEQ ID NO: |
| 07-6A11 | GFTFSSFGMH | 25 | SSGSNT | 26 | NGYDGWYAMDY | 9 | SASSSVSYIH | 10 | DTSKLAS | 11 | QQWSTNPFT | 12 |
| 08-3F2 | GYSITSGYNWH | 27 | HHSSI | 28 | EGYDYDWFAY | 15 | RASQSISNNLH | 16 | YASQSIS | 17 | QQSKSWPFT | 18 |
| 17-7E4 | GFKFTDYAIH | 29 | SIYYGE | 30 | EDYYGSSSYFDY | 21 | SASSSVSSSYLH | 22 | RTSNLAS | 23 | QQWSGY PYT | 24 |
| 23-2A6 | GFSLTSYDIS | 88 | WTGGG | 89 | DPYYYAMDY | 90 | HASQNLNVWLS | 91 | KASNLHT | 92 | QQGQSYPRT | 93 |
| 23-4A8 | GDSITSGYWN | 94 | SYTGS | 95 | YEGWLLPFAY | 96 | KSSQSLLYSSNQKSSLA | 97 | WASTRES | 98 | QQYYGYPFT | 99 |
| 33-10C9 | GYTFTTYYIY | 100 | NPYNGG | 101 | DGNYVDY | 102 | SASSTVSYVH | 103 | STSNLAS | 104 | QQRSSSPPT | 105 |
| 24-1F4 | GDSFTSGYWN | 106 | SYSGS | 107 | SEGWLLPFAY | 108 | KSSQSLLYSSNQKNSLA | 109 | WASTRES | 110 | QQYYGYPFT | 111 |
실시예 2: 항체 서열의 변형
이어서, 뮤린 항체에 대해 인간화 변형을 실시하였다. 구체적으로 설명하면, 뮤린 항체 6A11, 3F2와 7E4의 중쇄 가변영역과 경쇄 가변영역의 일부 아미노산 서열을 인간 서열로 교체함으로써, 항체와 항원의 친화력을 최적화하여 약물 가능성(druggability)을 높였다. 각종 항체에 대하여, 다수의 인간화 중쇄 가변영역과 경쇄 가변영역 서열을 생성하였으며, 인간화 후의 중쇄 가변영역과 경쇄 가변영역의 아미노산 서열은 이하 표 4에 나타낸 바와 같다.
표 4 : 인간화 항체의 가변영역 서열
|
인간화 항체
가변영역 |
아미노산 서열 | SEQ ID NO: |
| 6A11 인간화 중쇄 가변영역 (H1) |
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFGMHWVRQAPGKGLEWVSYISSGSNTIYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNGYDGWYAMDYWGQGTTVTVSS | 31 |
| 6A11 인간화 중쇄 가변영역 (H2) |
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFGMHWVRQAPGKGLEWVSYISSGSNTIYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRNGYDGWYAMDYWGQGTTVTVSS | 32 |
| 6A11 인간화 중쇄 가변영역 (H3) |
EVQLVESGGGLVQPGGSRRLSCAASGFTFSSFGMHWVRQAPGKGLEWVAYISSGSNTIYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCTRNGYDGWYAMDYWGQGTTVTVSS | 33 |
| 6A11 인간화 중쇄 가변영역 (H4) |
EVQLVESGGGLVQPGGSRRLSCAASGFTFSSFGMHWVRQAPGKGLEWVAYISSGSNTIYYADTVKGRFTISRDNPKNSLYLQMNSLRAEDTAIYYCTRNGYDGWYAMDYWGQGTTVTVSS | 34 |
| 6A11 인간화 경쇄 가변영역 (K1) |
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSASSSVSYIHWYQQKPGQAPRRLIYDTSKLASGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFATYYCQQWSTNPFTFGQGTKLEIKR | 35 |
| 6A11 인간화 경쇄 가변영역 (K2) |
EIVLTQSPATLSASPGERATLSCSASSSVSYIHWYQQKPGQAPRRLIYDTSKLASGIPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDAATYYCQQWSTNPFTFGQGTKLEIKR | 36 |
| 6A11 인간화 경쇄 가변영역 (K3) |
EIVLTQSPATLSASPGERATLSCSASSSVSYIHWFQQKPGQSPRRWIYDTSKLASGIPARFSGSGSGTDYTLTISSMEPEDFATYYCQQWSTNPFTFGQGTKLEIKR | 37 |
| 6A11 인간화 경쇄 가변영역 (K4) |
EIVLTQSPATLSASPGERATLSCSASSSVSYIHWFQQKPGQSPRRWIYDTSKLASGIPARFSGSGSGTSYTLTISSMEPEDAATYYCQQWSTNPFTFGQGTKLEIKR | 38 |
| 3F2 인간화 중쇄 가변영역 (H1) |
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGYSITSGYNWHWIRQFPGNGLEWMGYIHHSSITNYNPSLKSRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTATYYCAREGYDYDWFAYWGQGTLVTVSS | 39 |
| 3F2 인간화 중쇄 가변영역 (H2) |
DVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGYSITSGYNWHWIRQFPGNGLEWMGYIHHSSITNYNPSLKSRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTATFYCAREGYDYDWFAYWGQGTLVTVSS | 40 |
| 3F2 인간화 중쇄 가변영역 (H3) |
DVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGYSITSGYNWHWIRQFPGNGLEWMGYIHHSSITNYNPSLKSRITISRDTSKNQFSLKLSSVTAEDTATFYCAREGYDYDWFAYWGQGTLVTVSS | 41 |
| 3F2 인간화 중쇄 가변영역 (H4) |
DVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGYSITSGYNWHWIRQFPGNKLEWMGYIHHSSITNYNPSLKSRITISRDTSKNQFFLQLSSVTAEDTATFYCAREGYDYDWFAYWGQGTLVTVSS | 42 |
| 3F2 인간화 경쇄 가변영역 (K1) |
DIVLtQSPdfqSVTPkekVtitCRASQSISNNLHWYQQKpdESPkLLIKYASQSISGIPSRFSGSGSGTDFTLtINSVEaEDFaMYFCQQSKSWPFTFGqGTRLEIK | 43 |
| 3F2 인간화 경쇄 가변영역 (K2) |
DIVLTQSPDFQSVTPKEKVTLSCRASQSISNNLHWYQQKPDESPKLLIKYASQSISGIPSRFSGSGSGTDFTLTINSVEAEDFAMYFCQQSKSWPFTFGQGTRLEIK | 44 |
| 3F2 인간화 경쇄 가변영역 (K3) |
DIVLTQSPDTQSVTPKESVTLSCRASQSISNNLHWYQQKSHESPKLLIKYASQSISGIPSRFSGSGSGTDFTLTINSVEAEDFAMYFCQQSKSWPFTFGQGTRLEIK | 45 |
| 7E4 인간화 중쇄 가변영역 (H1) |
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFKFTDYAIHWVRQAPGQSLEWMGVISIYYGEASYNQKFKDRVTLTVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCAREDYYGSSSYFDYWGQGTLVTVSS | 46 |
| 7E4 인간화 중쇄 가변영역 (H2) |
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFKFTDYAIHWVRQAPGKSLEWMGVISIYYGEASYNQKFKDRVTLTVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCAREDYYGSSSYFDYWGQGTLVTVSS | 47 |
| 7E4 인간화 중쇄 가변영역 (H3) |
QVQLVQSGAEVVKPGASVKISCKGSGFKFTDYAIHWVRQAPGKSLEWMGVISIYYGEASYNQKFKDKVTLTVDTSASTAYMELSSLRSEDTAIYYCAREDYYGSSSYFDYWGQGTLLTVSS | 48 |
| 7E4 인간화 경쇄 가변영역 (K1) |
DNQLTQSPSFLSASVGDRVTITCSASSSVSSSYLHWYQQKPGAAPKPLIHRTSNLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQWSGYPYTFGGGTKLEIK | 49 |
| 7E4 인간화 경쇄 가변영역 (K2) |
DNVLTQSPSFLSASVGDRVTMTCSASSSVSSSYLHWYQQKPGASPKPLIHRTSNLASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQWSGYPYTFGGGTKLEIK | 50 |
| 7E4 인간화 경쇄 가변영역 (K3) |
ENVLTQSPSFLSASVGDRVTMTCSASSSVSSSYLHWYQQKSGASPKPLIHRTSNLASGVPSRFSGSGSGTEYTLTISSVQPEDFATYYCQQWSGYPYTFGGGTKLEIK | 51 |
실시예 3: 항체 결합 검출
항체의 PD-L1과 PD-1의 결합에 대한 차단 작용
본 실험은 항PD-L1 항체의 PD-L1과 PD-1의 결합에 대한 차단작용을 검출하기 위한 것이다. 구체적인 실험 조작은 다음과 같다: 96웰의 세포 배양플레이트를 취하여, 각 웰에 인간 PD-L1 단백질을 발현하는 CHO-hPD-L1 세포(25 μl, 2 x 104 세포/웰)를 투입하였다. 정제된 복수(ascite)를 50, 5, 0.5, 0.05, 0.005 μg/ml의 농도로 희석하고, 혈청을 1 : 100으로 희석한 후, 각 웰마다 25 μl씩 투입하여, 4℃에서 30분 동안 정치하였다. Biotin-hPD-1 단백질을 0.4 μg/ml로 희석한 후, 각 웰당 50 μl씩 투입하고, 4℃에서 15분 동안 정치하였다. 96웰의 세포 배양플레이트를 1200 rpm으로 5분 동안 원심분리하고, PBS로 2회 세척하였다. 이후, 각 웰당 50 μl의 1 : 100으로 희석된 항마우스 IgG Fc-FITC와 1 : 100으로 희석된 스트렙타비딘-PE 2차 항체를 투입하고, 4℃에서 30분 동안 정치하였다. 이후, 96웰의 세포 배양플레이트를 1200 rpm으로 5분 동안 원심분리하고, PBS로 1회 세척한 후, 각 웰당 200 μl의 PBS를 투입하고 유세포분석을 실시하였다.
도 1A, 도 1B와 도 1C에 도시된 결과를 통해, 복수로부터 정제된 항PD-L1 항체(08-3F2, 07-6A11 및 17-7E4)와 키메라 항PD-L1 항체(24-1F4-mHvKv-IgG1, 33-10C9-mHvKv-IgG1, 23-2A6-mHvKv-IgG1, 23-4A8-mHvKv-IgG1) 농도가 증가하고, PE 라벨링된 Biotin-hPD-1의 형광 강도가 점차 약해지는 것을 볼 수 있으며, 이는 본 발명의 항PD-L1 항체가 인간 PD-L1과 PD-1의 결합을 차단할 수 있음을 나타낸다.
항체 교차 반응 검출
각각 붉은털 원숭이 PD-L1 단백질 코딩 서열(rmPD-L1, SEQ ID NO: 54), 마우스 PD-L1 단백질 코딩 서열(mPD-L1, SEQ ID NO: 53)과 인간 마우스 키메라 PD-L1(마우스 PD-L1 단백질의 세포외 영역을 인간 단백질 프래그먼트로 교체) 단백질 코딩 서열(chiPD-L1, SEQ ID NO: 55)을 CHO 세포 내에 형질주입하여, 단백질 발현시키고, 항체 교차 반응의 검출에 사용하였다. 상기 PD-L1 단백질의 아미노산 서열은 이하 표 5에 열거된 바와 같다.
표 5 : 상이한 종의 PD-L1 단백질 서열
| 단백질 | 아미노산 서열 | SEQ ID NO: |
| 인간 PD-L1 (hPD-L1) NP_054862.1 |
MRIFAVFIFM TYWHLLNAFT VTVPKDLYVV EYGSNMTIEC KFPVEKQLDL AALIVYWEME DKNIIQFVHG EEDLKVQHSS YRQRARLLKD QLSLGNAALQ ITDVKLQDAG VYRCMISYGG ADYKRITVKV NAPYNKINQR ILVVDPVTSE HELTCQAEGY PKAEVIWTSS DHQVLSGKTT TTNSKREEKL FNVTSTLRIN TTTNEIFYCT FRRLDPEENH TAELVIPELP LAHPPNERTH LVILGAILLC LGVALTFIFR LRKGRMMDVK KCGIQDTNSK KQSDTHLEET | 52 |
| 마우스 PD-L1 (mPD-L1)NP_068693.1 | MRIFAGIIFT ACCHLLRAFT ITAPKDLYVV EYGSNVTMEC RFPVERELDL LALVVYWEKE DEQVIQFVAG EEDLKPQHSN FRGRASLPKD QLLKGNAALQ ITDVKLQDAG VYCCIISYGG ADYKRITLKV NAPYRKINQR ISVDPATSEH ELICQAEGYP EAEVIWTNSD HQPVSGKRSV TTSRTEGMLL NVTSSLRVNA TANDVFYCTF WRSQPGQNHT AELIIPELPA THPPQNRTHW VLLGSILLFL IVVSTVLLFL RKQVRMLDVE KCGVEDTSSK NRNDTQFEET | 53 |
| 원숭이PD-L1 (rmPD-L1) NP_001077358.1 |
MRIFAVFIFT IYWHLLNAFT VTVPKDLYVV EYGSNMTIEC RFPVEKQLGL TSLIVYWEME DKNIIQFVHG EEDLKVQHSN YRQRAQLLKD QLSLGNAALR ITDVKLQDAG VYRCMISYGG ADYKRITVKV NAPYNKINQR ILVVDPVTSE HELTCQAEGY PKAEVIWTSS DHQVLSGKTT TTNSKREEKL LNVTSTLRIN TTANEIFYCI FRRLGPEENH TAELVIPELP LALPPNERTH LVILGAIFLL LGVALTFIFY LRKGRMMDMK KSGIRVTNSK KQRDTQLEET | 54 |
| 키메라 PD-L1 (chiPD-L1) | MRIFAGIIFTACCHLLRAFTVTVPKDLYVVEYGSNMTIECKFPVEKQLDLAALIVYWEMEDKNIIQFVHGEEDLKVQHSSYRQRARLLKDQLSLGNAALQITDVKLQDAGVYRCMISYGGADYKRITVKVNAPYRKINQRISVDPATSEHELICQAEGYPEAEVIWTNSDHQPVSGKRSVTTSRTEGMLLNVTSSLRVNATANDVFYCTFWRSQPGQNHTAELIIPELPATHPPQNRTHWVLLGSILLFLIVVSTVLLFLRKQVRMLDVEKCGVEDTSSKNRNDTQFEET | 55 |
구체적인 실험 조작은 다음과 같다: 96웰의 세포 배양플레이트를 취하여, 각 웰에 상이한 PD-L1 단백질을 발현하는 CHO 세포(25 μl, 2 x 104 세포/웰)를 투입한 다음, 각각 25 μl의 복수로부터 정제된 항PD-L1 항체(1 μg/ml)를 투입하여, 4℃에서 30분 동안 정치하였다. 96웰의 세포 배양플레이트를 1200 rpm으로 5분 동안 원심분리하고, PBS로 2회 세척하였다. 이후, 각 웰당 50 μl의 1 : 100으로 희석된 항마우스 IgG Fc-FITC를 투입하고, 4℃에서 30분 동안 정치하였다. 이후, 96웰의 세포 배양플레이트를 1200 rpm으로 5분 동안 원심분리하고, PBS로 1회 세척한 후, 각 웰당 200 μl의 PBS를 투입하고 유세포분석을 실시하였다.
도 2A와 도 2B에 도시된 결과를 통해, 3종의 복수로부터 정제된 항PD-L1 항체(08-3F2, 07-6A11와 17-7E4) 및 4종 항PD-L1 키메라 항체(24-1F4-mHvKv-IgG1, 33-10C9-mHvKv-IgG1, 23-2A6-mHvKv-IgG1, 23-4A8-mHvKv-IgG1)와 마우스 PD-L1 단백질에 교차 반응이 없으나, 원숭이 PD-L1 단백질과 인간 마우스 키메라 PD-L1 단백질에는 비교적 강한 교차 반응이 있음을 볼 수 있다.
항체 친화력 검출
이후, Biacore T200(Biacore)의 Protein A 센서 칩으로 항체를 포획하는 방법을 이용하여, 항PD-L1 키메라 항체, 인간화 항체 및 이미 출시된 대조 항체 약물과 hPD-L1-His(Absin 제조)의 결합 친화력을 검출하였다.
구체적인 실험 조작은 다음과 같다: 항PD-L1 키메라 항체(07-6A11-mHvKv-IgG1, 17-7E4-mHvKv-IgG1, 08-3F2-mHvKv-IgG1, 23-2A6-mHvKv-IgG1-N297A, 23-4A8-mHvKv-IgG1-N297A, 24-1F4-mHvKv-IgG1-N297A, 33-10C9-mHvKv-IgG1-N297A, 0.5 ug/ml), 시판 대조 항체 약물(Atezolizumab, Avelumab, Duralumab, 0.5 ug/ml) 및 인간화 항체(6A11-H1K3-IgG1, 6A11-H1K4-IgG1, 6A11-H2K3-IgG1, 6A11-H2K4-IgG1, 6A11-H3K3-IgG1, 6A11-H3K4-IgG1, 6A11-H4K3-IgG1, 6A11-H4K4-IgG1, 7E4-H1K1-IgG1, 7E4-H1K2-IgG1, 7E4-H1K3-IgG1, 7E4-H2K1-IgG1, 7E4-H2K2-IgG1, 7E4-H2K3-IgG1, 7E4-H3K1-IgG1, 7E4-H3K2-IgG1, 7E4-H3K3-IgG1, 3F2-H1K1-IgG1, 3F2-H1K2-IgG1, 3F2-H1K3-IgG1, 3F2-H2K1-IgG1, 3F2-H2K2-IgG1, 3F2-H2K3-IgG1, 3F2-H3K1-IgG1, 3F2-H3K2-IgG1, 3F2-H3K3-IgG1, 3F2-H4K1-IgG1, 3F2-H4K2-IgG1, 3F2-H4K3-IgG1)를 센서 칩(10 μl/min, 25s)에 주입하였으며, 단백질 포획은 45-65RU이다. 이후 hPD-L1-His 단백질을 각각 200, 100, 50, 25, 12.5, 6.25, 3.125, 1.5625 또는 0.78125nM의 농도로 센서 칩(30 μl/min, 100-400 s)에 주입하였으며, 해리 시간은 300-1000s이다. pH 2.0인 글리신(30 μl/min, 10-20 s)을 이용하여 칩을 재생시킨 후 검출 결과를 판독하였다. 동력학적 결합 속도(Kinetic association rates, kon)와 동력학적 해리 속도(Kinetic dissociation rates, koff)는 Bioacore T200 평가 소프트웨어를 통해 1 : 1 랭뮤어 결합 모델 피팅을 수행하여 획득할 수 있다((Karlsson, R. Roos, H. Fagerstam, L. Petersson, B., 1994. Methods Enzymology 6. 99-110). 친화력 속도 상수는 KD = koff/kon이며, 모든 항체의 친화력 검출 피팅 결과는 표 6을 참조한다.
표 6: 항PD-L1 항체 친화력 검출
| 항PD-L1항체 |
결합속도
kon (1/Ms) |
해리속도
koff (1/s) |
친화력
KD (M) |
|
| 키메라 항체 | 07-6A11-mHvKv-IgG1 | 2.519E + 05 | 9.004E-04 | 3.574E-09 |
| 17-7E4-mHvKv-IgG1 | 1.510E + 05 | 8.048E-04 | 5.331E-09 | |
| 08-3F2-mHvKv-IgG1 | 1.621E + 06 | 4.304E-04 | 2.656E-10 | |
| 23-2A6-mHvKv-IgG1-N297A | 5.73E + 05 | 2.66E-03 | 4.64E-09 | |
| 23-4A8-mHvKv-IgG1-N297A | 3.61E + 05 | 5.32E-04 | 1.47E-09 | |
| 24-1F4-mHvKv-IgG1-N297A | 4.61E + 05 | 2.32E-04 | 5.04E-10 | |
| 33-10C9-mHvKv-IgG1-N297A | 1.22E + 05 | 1.96E-04 | 1.60E-09 | |
| 대조 항체 | Atezolizumab | 1.144E + 05 | 2.710E-04 | 2.369E-09 |
| Avelumab | 2.047E + 04 | 5.928E-05 | 2.896E-09 | |
| Durvalumab | 9.891E + 05 | 2.057E-04 | 2.079E-10 | |
| 6A11인간화항체 | 6A11-H1K3-IgG1 | 1.45E + 05 | 1.13E-03 | 7.80E-09 |
| 6A11-H1K4-IgG1 | 1.49E + 05 | 1.24E-03 | 8.29E-09 | |
| 6A11-H2K3-IgG1 | 1.62E + 05 | 1.30E-03 | 8.07E-09 | |
| 6A11-H2K4-IgG1 | 2.18E + 05 | 1.53E-03 | 7.01E-09 | |
| 6A11-H3K3-IgG1 | 2.65E + 05 | 1.30E-03 | 4.91E-09 | |
| 6A11-H3K4-IgG1 | 2.58E + 05 | 1.68E-03 | 6.52E-09 | |
| 6A11-H4K3-IgG1 | 2.33E + 05 | 1.65E-03 | 7.09E-09 | |
| 6A11-H4K4-IgG1 | 2.08E + 05 | 2.00E-03 | 9.59E-09 | |
| 7E4인간화항체 | 7E4-H1K1-IgG1 | 1.18E + 05 | 3.13E-03 | 2.65E-08 |
| 7E4-H1K2-IgG1 | 1.26E + 05 | 2.50E-03 | 1.98E-08 | |
| 7E4-H1K3-IgG1 | 1.28E + 05 | 1.70E-03 | 1.33E-08 | |
| 7E4-H2K1-IgG1 | 1.28E + 05 | 3.44E-03 | 2.70E-08 | |
| 7E4-H2K2-IgG1 | 1.23E + 05 | 2.70E-03 | 2.19E-08 | |
| 7E4-H2K3-IgG1 | 1.28E + 05 | 1.63E-03 | 1.27E-08 | |
| 7E4-H3K1-IgG1 | 1.47E + 05 | 3.52E-03 | 2.39E-08 | |
| 7E4-H3K2-IgG1 | 1.55E + 05 | 2.99E-03 | 1.93E-08 | |
| 7E4-H3K3-IgG1 | 1.50E + 05 | 2.18E-03 | 1.45E-08 | |
| 3F2 인간화항체 | 3F2-H1K1-IgG1 | 9.81E + 05 | 7.72E-04 | 7.87E-10 |
| 3F2-H1K2-IgG1 | 1.06E + 06 | 7.32E-04 | 6.90E-10 | |
| 3F2-H1K3-IgG1 | 1.09E + 06 | 8.74E-04 | 8.05E-10 | |
| 3F2-H2K1-IgG1 | 1.13E + 06 | 7.92E-04 | 7.00E-10 | |
| 3F2-H2K2-IgG1 | 1.17E + 06 | 9.46E-04 | 8.10E-10 | |
| 3F2-H2K3-IgG1 | 1.16E + 06 | 8.81E-04 | 7.58E-10 | |
| 3F2-H3K1-IgG1 | 1.13E + 06 | 7.93E-04 | 6.99E-10 | |
| 3F2-H3K2-IgG1 | 1.21E + 06 | 7.53E-04 | 6.23E-10 | |
| 3F2-H3K3-IgG1 | 1.32E + 06 | 8.27E-04 | 6.25E-10 | |
| 3F2-H4K1-IgG1 | 1.33E + 06 | 6.26E-04 | 4.71E-10 | |
| 3F2-H4K2-IgG1 | 1.30E + 06 | 6.17E-04 | 4.75E-10 | |
| 3F2-H4K3-IgG1 | 1.39E + 06 | 6.96E-04 | 5.02E-10 | |
실시예 4: 항체의 열 안정성 검출
Protein Thermal Shift Dye Kit(Thermo Fisher Scientific)와 QuantStudio?? 5 Real Time PCR Systems (Thermo Fisher Scientific)을 이용하여 항체의 열 안정성 검출을 실시하였다. 항체 단백질을 가열하여 절첩을 제거한 후, 형광 염료를 이용하여 노출된 소수성 영역을 라벨링하고, 형광 강도의 검출을 통해 항체의 열 안정성을 반응시켰다. 제조업체의 설명에 따라, 2 μl의 항체, 10.5 μl의 물, 5 μl의 Protein Thermal Shift 버퍼액과 2.5 μl의 염료를 혼합한 후, 1.6℃/초의 속도로 25℃까지 가열한 다음, 0.05℃/초의 속도로 99℃까지 가열하여, 항체 단백질의 변성 온도 Tm값을 검출하였다(2개의 검출 피크가 있는 경우, 일반적으로 두 번째 피크값 Fab의 Tm을 기준으로 한다).
표 7은 검출된 키메라 항체와 인간화 항체의 Tm값을 나타낸 것이다. 또한, 항체 의존적인 세포에 의해 매개된 세포 독성 작용(ADCC)과 보체 의존적인 세포 독성 작용(CDC)을 감소시키기 위하여, 획득된 항체에 대해 글리코실화 변형을 실시함으로써, 항체의 치료 효과와 안전성을 높일 수 있다. 일부 항체 Fc 영역의 어느 아미노산을 교체하였으며, 예를 들어, 항체에 대하여 N297A 돌연변이를 실시하였다.
표 7: 항체의 열 안정성
| 항체 유형 | 항체 명칭 | Tm값(℃) |
| 3F2키메라 항체 | 08-3F2-mHvKv-IgG1 | 74.46 |
| 3F2 인간화 항체 | 3F2-H1K1-IgG1 | 79.71 |
| 3F2-H1K2-IgG1 | 80.00 | |
| 3F2-H1K3-IgG1 | 78.38 | |
| 3F2-H2K1-IgG1 | 71.87 | |
| 3F2-H2K2-IgG1 | 71.80 | |
| 3F2-H2K3-IgG1 | 70.47 | |
| 3F2-H3K1-IgG1 | 72.31 | |
| 3F2-H3K2-IgG1 | 72.54 | |
| 3F2-H3K3-IgG1 | 71.21 | |
| 3F2-H4K1-IgG1 | 75.86 | |
| 3F2-H4K2-IgG1 | 76.01 | |
| 3F2-H4K3-IgG1 | 74.46 | |
| 7E4키메라 항체 | 17-7E4-mHvKv-IgG1 | 74.09 |
| 7E4 인간화 항체 | 7E4-H1K1-IgG1 | 81.78 |
| 7E4-H1K2-IgG1 | 82.82 | |
| 7E4-H1K3-IgG1 | 84.3 | |
| 7E4-H2K1-IgG1 | 82.08 | |
| 7E4-H2K2-IgG1 | 82.89 | |
| 7E4-H2K3-IgG1 | 83.41 | |
| 7E4-H3K1-IgG1 | 82.59 | |
| 7E4-H3K2-IgG1 | 83.11 | |
| 7E4-H3K3-IgG1 | 83.63 | |
| 6A11키메라 항체 |
07-6A11-mHvKv-IgG1 | 75.53 |
| 07-6A11-mHvKv-IgG4 | 76.09 | |
| 07-6A11-mHvKv-IgG1-N297A | 76.87 | |
| 6A11인간화 항체 | 6A11-H1K1-IgG1 | 78.05 |
| 6A11-H1K3-IgG1 | 67.25 | |
| 6A11-H1K4-IgG1 | 70.21 | |
| 6A11-H2K1-IgG1 | 76.87 | |
| 6A11-H2K3-IgG1 | 64.81 | |
| 6A11-H2K4-IgG1 | 68.80 | |
| 6A11-H3K1-IgG1 | 77.01 | |
| 6A11-H3K3-IgG1 | 65.10 | |
| 6A11-H3K4-IgG1 | 68.80 | |
| 6A11-H4K1-IgG1 | 75.98 | |
| 6A11-H4K3-IgG1 | 63.25 | |
| 6A11-H4K4-IgG1 | 67.17 |
실시예 5: 항체의 체내 약효 검출
항PD-L1 항체의 체내 약효를 검출하기 위하여, PD-L1 유전자 인간화 마우스를 사용하여 종양 동물 모델을 제조하였다. 상기 마우스는 인간 마우스 키메라 PD-L1 단백질(SEQ ID NO: 55)이 발현된 것으로, 여기서, 마우스 PD-L1 단백질의 세포외 영역은 인간 서열로 교체하여, 마우스 PD-L1 단백질의 21-128번째 부위의 아미노산(SEQ ID NO: 53)이 인간 PD-L1 단백질의 21-128번째 부위의 아미노산(SEQ ID NO: 52)으로 교체되었다. 상기 B-hPD-L1 마우스 모델은 PD-L1 단일클론 약물의 임상 전 동물 실험에 새로운 검출 방법을 제공하였으며, 임상 실험의 예측 가능성을 극대화시켰다(PCT 출원번호 PCT/CN2017/099574와 중국 출원번호 201710757022.6 참조, 상기 문헌은 인용을 통해 전부 본문에 포함시켰다).
종양 동물 모델의 제조과정은 다음과 같다: B-hPD-L1 마우스 체내에 피하주사를 통해 PD-L1 유전자 인간화된 마우스 MC-38 세포(결장암 세포)를 주사하였다. 종양 부피가 150 ± 50 mm3에 이른 후, 마우스를 무작위로 PD-L1 항체 약물 투여군과 대조군(생리식염수)으로 나누어 종양 억제 약효 실험을 진행하였다. 복강주사를 통해 약물을 투여하고, 마우스의 체중과 종양 부피를 일주일에 두 번 정기적으로 측정하였다. 종양 부피(mm3) = 0.5 x 장지름 x 단지름2이다. 마우스의 체중을 기준으로 약물 투여량(0.3 mg/kg 또는 3 mg/kg)을 계산하였다.
종양 생장 억제율(the tumor growth inhibition percentage, TGI) 계산 공식: TGI (%) = [1 - (Ti-T0)/(Vi - V0)] Х 100이며, 여기서 Ti는 치료군의 i일째 평균 종양 부피이고; TO는 치료군의 O일째 평균 종양 부피이며; Vi는 대조군의 i일째 평균 종양 부피이고; VO는 대조군의 O일째 평균 종양 부피이다. T-테스트를 사용하여 통계삭적 분석을 실시하였다. TGI%가 60%보다 큰 경우, 종양 생장에 대해 현저한 억제 효과가 있음을 나타내며, P < 0.05는 통계학적 결과에 유의미한 차이가 있음을 나타낸다.
항PD-L1 뮤린 항체 08-3F2, 17-7E4, 17-8E9 및 07-6A11의 체내 약효 실험
5-6주령의 B-hPD-L1 마우스 30마리를 취하여, MC38-hPD-L1 세포를 피하 접종하고(5 x 105/마리), 종양 부피가 150 ± 50 mm3에 이른 후, 각 그룹당 5마리씩 무작위로 7그룹으로 나누었다. 약물투여군은 각각 항PD-L1 항체 08-3F2, 17-7E4, 17-8E9, 07-6A11과 양성 대조 항체 약물 Atezolizumab을 3 mg/kg의 용량으로 복강 주사를 통해 투여 처리를 하였고, 대조군은 생리식염수를 주사하였다. 매주 1, 3, 5일째 약물을 투여하였다. 매주 두 번 마우스의 체중과 종양 부피를 측정하고, 3주 후 실험을 종료하였다. 도 3A와 도 3B에 도시된 바와 같이, 대조군과 약물투여군 마우스의 평균 체중은 전체 실험 주기에서 모두 안정적으로 증가하였고, 그룹 간에 뚜렷한 차이가 없었으며, 이는 항PD-L1 항체 투여 후 마우스에 대해 뚜렷한 독성을 발생시키지 않음을 나타낸다. 도 4 중의 결과에 나타난 바와 같이(그룹을 나눈 후 21일 동안의 종양 부피 데이터), 대조군과 비교하여, 약물투여군 중 종양의 생장은 모두 각기 다른 정도로 억제되었다. 이하 표 8은 각 그룹의 TGI% 결과를 나타낸 것이다.
표 8 : 종양 생장 억제율
| 군별 | 항체 | 종양 평균 부피(mm 3 ) | TGI% | P값 |
| G1 | 생리식염수 (PS) | 2143 ± 410 | - | - |
| G2 | 08-3F2 (3 mg/kg) | 264 ± 82 | 94.2% | 0.002 |
| G3 | 17-7E4 (3 mg/kg) | 544 ± 232 | 80.2% | 0.009 |
| G4 | 17-8E9 (3 mg/kg) | 1017 ± 302 | 56.4% | 0.058 |
| G5 | 07-6A11 (3 mg/kg) | 345 ± 114 | 90.1% | 0.003 |
| G6 | Atezolizumab (3 mg/kg) | 627 ± 216 | 76.0% | 0.011 |
상기 결과는 본 발명의 항PD-L1 뮤린 항체 08-3F2, 07-6A11, 17-7E4 및 17-8E9가 모두 종양 억제 효과를 보이는 것을 나타내며, 여기서 08-3F2, 07-6A11과 17-7E4 군은 양성 대조 항체 약물인 Atezolizumab보다 양호한 종양 억제 효과를 얻었다.
키메라 항체 07-6A11-mHvKv-IgG1, 07-6A11-mHvKv-IgG4, 07-6A11-mHvKv-IgG1-N297A의 체내 약효 실험
5-6주령의 B-hPD-L1 마우스 35마리를 취하여, MC38-hPD-L1 세포를 피하 접종하고(5 x 105/마리), 종양 부피가 150 ± 50 mm3에 이른 후, 각 그룹당 5마리씩 무작위로 7그룹으로 나누었다. 약물투여군은 각각 항PD-L1 키메라 항체 07-6A11-mHvKv-IgG1, 07-6A11-mHvKv-IgG4와 07-6A11-mHvKv-IgG1-N297A, 및 뮤린 항체 07-6A11을 복강 주사를 통해 투여 처리를 하였고, 대조군은 hIgG로 처리하였으며, 3 mg/kg 용량으로 매주 1, 3, 5일째 약물을 투여하였다. 매주 두 번 마우스의 체중과 종양 부피를 측정하고, 3주 후 실험을 종료하였다. 대조군과 약물투여군 마우스의 평균 체중은 전체 실험 주기에서 모두 안정적으로 증가하였고, 그룹 간에 뚜렷한 차이가 없었으며, 이는 항PD-L1 항체 투여 후 마우스에 대해 뚜렷한 독성을 발생시키지 않음을 나타낸다. 또한, 대조군과 비교하여, 약물투여군 중 종양의 생장은 모두 각기 다른 정도로 억제되었다.
키메라 항체 08-3F2-mHvKv-IgG4, 08-3F2-mHvKv-IgG1-N297A, 17-7E4-mHvKv-IgG4 및 17-7E4-mHvKv-IgG1-N297A의 체내 약효 실험
5-6주령의 B-hPD-L1 마우스 35마리를 취하여, MC38-hPD-L1 세포를 피하 접종하고(5 x 105/마리), 종양 부피가 150 ± 50 mm3에 이른 후, 각 그룹당 5마리씩 무작위로 7그룹으로 나누었다. 약물투여군은 각각 항PD-L1 키메라 항체 08-3F2-mHvKv-IgG4, 08-3F2-mHvKv-IgG1-N297A, 17-7E4-mHvKv-IgG4, 17-7E4-mHvKv-IgG1-N297A, 및 뮤린 항체 07-6A11와 08-3F2를 3 mg/kg 용량으로 복강 주사를 통해 투여 처리를 하였고, 대조군은 생리식염수를 주사하였다. 매주 1, 3, 5일째 약물을 투여하였다. 매주 두 번 마우스의 체중과 종양 부피를 측정하고, 3주 후 실험을 종료하였다. 대조군과 약물투여군 마우스의 평균 체중은 전체 실험 주기에서 모두 안정적으로 증가하였고, 그룹 간에 뚜렷한 차이가 없었으며, 이는 항PD-L1 항체 투여 후 마우스에 대해 뚜렷한 독성을 발생시키지 않음을 나타낸다. 또한, 대조군과 비교하여, 약물투여군 중 종양의 생장은 모두 각기 다른 정도로 억제되었다.
키메라 항체 33-10C9-mHvKv-IgG1, 24-1F4-mHvKv-IgG1, 23-2A6-mHvKv-IgG1, 23-4A8-mHvKv-IgG1, 23-2A5-mHvKv-IgG1 및 24-1C3-mHvKv-IgG1의 체내 약효 실험
5-6주령의 B-hPD-L1 마우스 35마리를 취하여, MC38-hPD-L1 세포를 피하 접종하고(5 x 105/마리), 종양 부피가 150 ± 50 mm3에 이른 후, 각 그룹당 5마리씩 무작위로 7그룹으로 나누었다. 약물투여군은 각각 항PD-L1 키메라 항체 33-10C9-mHvKv-IgG1, 24-1F4-mHvKv-IgG1, 23-2A6-mHvKv-IgG1, 23-4A8-mHvKv-IgG1, 23-2A5-mHvKv-IgG1와 24-1C3-mHvKv-IgG1을 3 mg/kg 용량으로 복강 주사를 통해 투여 처리를 하였고, 대조군은 생리식염수를 주사하였다. 매주 1, 3, 5일째 약물을 투여하였다. 매주 두 번 마우스의 체중과 종양 부피를 측정하고, 3주 후 실험을 종료하였다. 도 5a와 도5b에 도시된 바와 같이, 대조군과 약물투여군 마우스의 평균 체중은 전체 실험 주기에서 모두 안정적으로 증가하였고, 그룹 간에 뚜렷한 차이가 없었으며, 이는 항PD-L1 항체 투여 후 마우스에 대해 뚜렷한 독성을 발생시키지 않음을 나타낸다. 도 6 중의 결과에 나타난 바와 같이(그룹을 나눈 후 25일 동안의 종양 부피 데이터), 대조군과 비교하여, 약물투여군 중 종양의 생장은 모두 각기 다른 정도로 억제되었다. 여기서, 키메라 항체 23-2A6-mHvKv-IgG1의 효과가 가장 우수하고, 그 다음은 33-10C9-mHvKv-IgG1과 23-4A8-mHvKv-IgG1이다. 이하 표 9는 각 그룹의 TGI% 결과를 나타낸 것이다.
표 9: 종양 생장 억제율
| 군별 | 항체 | 종양 평균 부피(mm 3 ) | TGI% | P값 |
| G1 | 생리식염수(PS) | 1878 ± 625 | - | - |
| G2 | 33-10C9-mHvKv-IgG1 (3 mg/kg) | 932 ± 221 | 50.4% | 0.191 |
| G3 | 24-1F4-mHvKv-IgG1(3 mg/kg) | 986 ± 271 | 47.5% | 0.226 |
| G4 | 23-2A6-mHvKv-IgG1 (3 mg/kg) | 745 ± 151 | 60.3% | 0.116 |
| G5 | 23-4A8-mHvKv-IgG1 (3 mg/kg) | 937 ± 314 | 50.1% | 0.215 |
| G6 | 23-2A5-mHvKv-IgG1(3 mg/kg) | 1139 ± 145 | 39.4% | 0.282 |
| G7 | 24-1C3-mHvKv-IgG1 (3 mg/kg) | 1211 ± 193 | 35.5% | 0.337 |
인간화 항체 6A11-H1K3-IgG1-N297A, 6A11-H1K4-IgG1-N297A, 3F2-H1K1-IgG1-N297A, 3F2-H1K2-IgG1-N297A, 7E4-H1K1-IgG1-N297A 및 7E4-H2K1-IgG1-N297A 의 체내 약효 실험
5-6주령의 B-hPD-L1 마우스 56마리를 취하여, MC38-hPD-L1 세포를 피하 접종하고(5 x 105/마리), 종양 부피가 150 ± 50 mm3에 이른 후, 각 그룹당 8마리씩 무작위로 7그룹으로 나누었다. 약물투여군은 각각 항PD-L1 인간화 항체 6A11-H1K3-IgG1-N297A, 6A11-H1K4-IgG1-N297A, 3F2-H1K1-IgG1-N297A, 3F2-H1K2-IgG1-N297A, 7E4-H1K1-IgG1-N297A와 7E4-H2K1-IgG1-N297A를 3 mg/kg의 용량으로 복강 주사를 통해 투여 처리를 하였고, 대조군은 생리식염수를 주사하였다. 매주 2, 5일째 약물을 투여하고, 매주 두 번 마우스의 체중과 종양 부피를 측정하고, 3주 후 실험을 종료하였다. 도 7A와 도 7B에 도시된 바와 같이, 대조군과 약물투여군 마우스의 평균 체중은 전체 실험 주기에서 모두 안정적으로 증가하였고, 그룹 간에 뚜렷한 차이가 없었으며, 이는 항PD-L1 항체 투여 후 마우스에 대해 뚜렷한 독성을 발생시키지 않음을 나타낸다. 도 8 중의 결과에 나타난 바와 같이(그룹을 나눈 후 24일 동안의 종양 부피 데이터), 대조군과 비교하여, 약물투여군 중 종양의 생장은 모두 각기 다른 정도로 억제되었다. 여기서, 인간화 항체 6A11-H1K3-IgG1-N297A의 효과가 가장 우수하고, 그 다음은 3F2-H1K2-IgG1-N297A이다. 이하 표 10는 각 그룹의 TGI% 결과를 나타낸 것이다.
표 10: 종양 생장 억제율
| 군별 | 항체 | 종양 평균 부피(mm 3 ) | TGI% | P값 |
| G1 | 생리식염수(PS) | 2133 ± 210 | - | - |
| G2 | 6A11-H1K3-IgG1-N297A (3 mg/kg) | 1009 ± 225 | 55.7% | 0.003 |
| G3 | 6A11-H1K4-IgG1-N297A(3 mg/kg) | 1154 ± 279 | 48.6% | 0.014 |
| G4 | 3F2-H1K1-IgG1-N297A(3 mg/kg) | 1298 ± 213 | 41.4% | 0.014 |
| G5 | 3F2-H1K2-IgG1-N297A(3 mg/kg) | 1124 ± 242 | 50.0% | 0.007 |
| G6 | 7E4-H1K1-IgG1-N297A(3 mg/kg) | 1530 ± 287 | 29.8% | 0.112 |
| G7 | 7E4-H2K1-IgG1-N297A(3 mg/kg) | 1137 ± 213 | 49.4% | 0.005 |
상이한 용량의 항PD-L1 항체의 체내 약효 실험
5-6주령의 B-hPD-L1 마우스 20마리를 취하여, MC38-hPD-L1 세포를 피하 접종하고(5 x 105/마리), 종양 부피가 150 ± 50 mm3에 이른 후, 각 그룹당 5마리씩 무작위로 4그룹으로 나누었다. 약물투여군은 각각 1 mg/kg, 3 mg/kg 또는 10 mg/kg의 항PD-L1 항체 07-6A11을 복강 주사를 통해 투여 처리를 하였고, 대조군은 생리식염수를 주사하였다. 이틀에 한 번, 총 8회 약물을 투여하고, 매주 두 번 마우스의 체중과 종양 부피를 측정하였으며, 3주 후 실험을 종료하였다. 도 9A와 도 9B에 도시된 바와 같이, 대조군과 약물투여군 마우스의 평균 체중은 전체 실험 주기에서 모두 안정적으로 증가하였고, 그룹 간에 뚜렷한 차이가 없었으며, 이는 항PD-L1 항체 투여 후 마우스에 대해 뚜렷한 독성을 발생시키지 않음을 나타낸다. 도 10 중의 결과에 나타난 바와 같이(그룹을 나눈 후 18일 동안의 종양 부피 데이터), 대조군과 비교하여, 약물투여군 중 종양의 생장은 모두 각기 다른 정도로 억제되었으며, 항체의 용량이 클수록, 종양 억제 효과가 좋았다. 이하 표 11은 각 그룹의 TGI% 결과를 나타낸 것이다.
표 11: 종양 생장 억제율
| 군별 | 항체 | 종양 평균 부피(mm 3 ) | TGI% | P값 |
| G1 | 생리식염수 | 1200 ± 193 | - | - |
| G2 | 07-6A11(10 mg/kg) | 111 ± 66 | 101.2% | 0.001 |
| G3 | 07-6A11(3 mg/kg) | 251 ± 87 | 88.2% | 0.002 |
| G4 | 07-6A11(1 mg/kg) | 448 ± 253 | 69.9% | 0.046 |
항PD-L1 항체와 다른 치료제의 체내 복합 투여 시의 약효 실험
5-6주령의 B-hPD-L1 마우스 35마리를 취하여, MC38-hPD-L1 세포를 피하 접종하고(5 x 105/마리), 종양 부피가 150 ± 50 mm3에 이른 후, 각 그룹당 5마리씩 무작위로 7그룹으로 나누었다. 약물투여군은 각각 항PD-L1 뮤린 항체 07-6A11(0.3 mg/kg), 항CTLA4 항체 mCTLA4(1 mg/kg), 항OX40 항체 mOX40(0.3 mg/kg) 또는 이들의 조합을 복강 주사를 통해 투여 처리를 하였고, 대조군은 생리식염수를 주사하였다. 여기서 항PD-L1 항체는 매주 1, 3, 5일째 투여하였고, 항CTLA4 항체와 항OX40은 매주 1, 4일째 투여하였으며, 매주 두 번 마우스의 체중과 종양 부피를 측정하고, 3주 후 실험을 종료하였다. 도 11a와 도 11b에 도시된 바와 같이, 대조군과 약물투여군 마우스의 평균 체중은 전체 실험 주기에서 모두 안정적으로 증가하였고, 그룹 간에 뚜렷한 차이가 없었으며, 이는 상기 3종의 항체를 단독으로 투여하거나 또는 조합하여 투여 후 마우스에 대해 뚜렷한 독성을 발생시키지 않음을 나타낸다. 도 12a, 도 12b와 도 12c의 결과에 나타난 바와 같이(그룹을 나눈 후 21일 동안의 종양 부피 데이터), 약물투여군은 모두 각기 다른 정도로 종양 생장을 억제하였다. 아래의 표 12는 각 그룹의 TGI% 결과를 나타낸 것이다. 상기 결과를 통해, 항PD-L1 항체와 항 CTLA4 항체 또는 항OX40 항체를 복합 사용한 치료 효과가 상체를 단독으로 사용한 치료 효과보다 뚜렷하게 우수한 것을 볼 수 있으며, 종양 세포의 생장을 더욱 효과적으로 억제할 수 있다. 여기서, 사용된 mCTLA4는 BioXcell로부터 구입하였고, 로트 번호는 BE0164이며; mOX40은 BioXcell로부터 구입하였고, 로트 번호는 BE0031이다.
표 12: 종양 생장 억제율
| 군별 | 항체 | 종양 평균 부피(mm 3 ) | TGI% | P값 |
| G1 | 생리식염수 | 2430 ± 422 | - | - |
| G2 | 07-6A11(0.3 mg/kg) | 1307 ± 248 | 49.2% | 0.051 |
| G3 | mCTLA-4(1 mg/kg) | 2234 ± 598 | 8.6% | 0.796 |
| G4 | 07-6A11(0.3 mg/kg)mCTLA-4(1 mg/kg) | 840 ± 309 | 69.7% | 0.016 |
| G5 | mOX40(0.3 mg/kg) | 1505 ± 492 | 40.6% | 0.192 |
| G6 | 07-6A11(0.3 mg/kg)mOX40(0.3 mg/kg) | 783 ± 194 | 72.3% | 0.008 |
SEQUENCE LISTING
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<400> 51
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<210> 53
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<220>
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290
<210> 54
<211> 290
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Rhesus monkey PD-L1 (rmPD-L1)NP_001077358.1
<400> 54
Met Arg Ile Phe Ala Val Phe Ile Phe Thr Ile Tyr Trp His Leu Leu
1 5 10 15
Asn Ala Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr
20 25 30
Gly Ser Asn Met Thr Ile Glu Cys Arg Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu
35 40 45
Gly Leu Thr Ser Leu Ile Val Tyr Trp Glu Met Glu Asp Lys Asn Ile
50 55 60
Ile Gln Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Asn
65 70 75 80
Tyr Arg Gln Arg Ala Gln Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn
85 90 95
Ala Ala Leu Arg Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr
100 105 110
Arg Cys Met Ile Ser Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val
115 120 125
Lys Val Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val
130 135 140
Asp Pro Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr
145 150 155 160
Pro Lys Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser
165 170 175
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180 185 190
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210 215 220
Val Ile Pro Glu Leu Pro Leu Ala Leu Pro Pro Asn Glu Arg Thr His
225 230 235 240
Leu Val Ile Leu Gly Ala Ile Phe Leu Leu Leu Gly Val Ala Leu Thr
245 250 255
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260 265 270
Gly Ile Arg Val Thr Asn Ser Lys Lys Gln Arg Asp Thr Gln Leu Glu
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Glu Thr
290
<210> 55
<211> 290
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Chimeric PD-L1 (chiPD-L1)
<400> 55
Met Arg Ile Phe Ala Gly Ile Ile Phe Thr Ala Cys Cys His Leu Leu
1 5 10 15
Arg Ala Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr
20 25 30
Gly Ser Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu
35 40 45
Asp Leu Ala Ala Leu Ile Val Tyr Trp Glu Met Glu Asp Lys Asn Ile
50 55 60
Ile Gln Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser
65 70 75 80
Tyr Arg Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn
85 90 95
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100 105 110
Arg Cys Met Ile Ser Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val
115 120 125
Lys Val Asn Ala Pro Tyr Arg Lys Ile Asn Gln Arg Ile Ser Val Asp
130 135 140
Pro Ala Thr Ser Glu His Glu Leu Ile Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro
145 150 155 160
Glu Ala Glu Val Ile Trp Thr Asn Ser Asp His Gln Pro Val Ser Gly
165 170 175
Lys Arg Ser Val Thr Thr Ser Arg Thr Glu Gly Met Leu Leu Asn Val
180 185 190
Thr Ser Ser Leu Arg Val Asn Ala Thr Ala Asn Asp Val Phe Tyr Cys
195 200 205
Thr Phe Trp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asn His Thr Ala Glu Leu Ile
210 215 220
Ile Pro Glu Leu Pro Ala Thr His Pro Pro Gln Asn Arg Thr His Trp
225 230 235 240
Val Leu Leu Gly Ser Ile Leu Leu Phe Leu Ile Val Val Ser Thr Val
245 250 255
Leu Leu Phe Leu Arg Lys Gln Val Arg Met Leu Asp Val Glu Lys Cys
260 265 270
Gly Val Glu Asp Thr Ser Ser Lys Asn Arg Asn Asp Thr Gln Phe Glu
275 280 285
Glu Thr
290
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<213> Artificial Sequence
<220>
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100 105 110
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<213> Artificial Sequence
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35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Tyr Thr Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Phe Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Phe Leu
65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 23-4A8("4A8")VL
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1 5 10 15
Glu Lys Val Pro Leu Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Gln Lys Ser Ser Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Gly Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
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<211> 116
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
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20 25 30
Tyr Ile Tyr Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gly Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Phe Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Glu Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Ile Ser Ser Ser Thr Ala Phe
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Asp Gly Asn Tyr Val Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
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<211> 106
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 33-10C9 ("10C9") VL
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1 5 10 15
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20 25 30
His Trp Leu Gln Gln Lys Pro Asp Thr Ser Pro Lys Leu Trp Ile Tyr
35 40 45
Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Met Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Ser Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
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<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
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<400> 62
Glu Val Gln Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Arg Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Phe Thr Ser Gly
20 25 30
Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Glu Leu Glu Ser Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Ser Gln Phe Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Leu Ser Ser Val Thr Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Ser Glu Gly Trp Leu Leu Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 63
<211> 113
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 24-1F4 ("1F4") VL
<400> 63
Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Pro Val Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Gln Lys Asn Ser Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ser Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Gly Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
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<211> 5
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<213> Artificial Sequence
<220>
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<211> 16
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<213> Artificial Sequence
<220>
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<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
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<211> 11
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<220>
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<213> Artificial Sequence
<220>
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<220>
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<213> Artificial Sequence
<220>
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<211> 17
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<213> Artificial Sequence
<220>
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Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Gln Lys Ser Ser Leu
1 5 10 15
Ala
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<211> 7
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<213> Artificial Sequence
<220>
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<213> Artificial Sequence
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<213> Artificial Sequence
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<213> Artificial Sequence
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<213> Artificial Sequence
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<213> Artificial Sequence
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<213> Artificial Sequence
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Ala
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<213> Artificial Sequence
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<213> Artificial Sequence
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<211> 10
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<213> Artificial Sequence
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<213> Artificial Sequence
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<213> Artificial Sequence
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<211> 17
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<213> Artificial Sequence
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Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Gln Lys Ser Ser Leu
1 5 10 15
Ala
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<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
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<400> 98
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
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<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
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<400> 99
Gln Gln Tyr Tyr Gly Tyr Pro Phe Thr
1 5
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<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr Tyr Ile Tyr
1 5 10
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<211> 6
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<400> 101
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1 5
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<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 33-10C9 VH-CDR3
<400> 102
Asp Gly Asn Tyr Val Asp Tyr
1 5
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<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 33-10C9 VL-CDR1
<400> 103
Ser Ala Ser Ser Thr Val Ser Tyr Val His
1 5 10
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<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 33-10C9 VL-CDR2
<400> 104
Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
<210> 105
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 33-10C9 VL-CDR3
<400> 105
Gln Gln Arg Ser Ser Ser Pro Pro Thr
1 5
<210> 106
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
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<400> 106
Gly Asp Ser Phe Thr Ser Gly Tyr Trp Asn
1 5 10
<210> 107
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 24-1F4 VH-CDR2
<400> 107
Ser Tyr Ser Gly Ser
1 5
<210> 108
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 24-1F4 VH-CDR3
<400> 108
Ser Glu Gly Trp Leu Leu Pro Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 109
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 24-1F4 VL-CDR1
<400> 109
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Gln Lys Asn Ser Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 110
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 24-1F4 VL-CDR2
<400> 110
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 111
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 24-1F4 VL-CDR3
<400> 111
Gln Gln Tyr Tyr Gly Tyr Pro Phe Thr
1 5
Claims (45)
- 항PD-L1 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트에 있어서,
상기 항PD-L1 항체는 이하 중쇄 상보성 결정 영역(CDR H):
SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 76 및 SEQ ID NO: 82에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR H1;
SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 71, SEQ ID NO: 77 및 SEQ ID NO: 83에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 CDR H2; 및
SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 78 및 SEQ ID NO: 84에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 CDR H3;을 구비하는, 항PD-L1 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트. - 제1항에 있어서,
상기 항PD-L1 항체는 이하 CDR H:
a) 각각 SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8 및 SEQ ID NO: 9를 포함하는 CDR H1, CDR H2와 CDR H3;
b) 각각 SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14 및 SEQ ID NO: 15를 포함하는 CDR H1, CDR H2와 CDR H3;
c) 각각 SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20 및 SEQ ID NO: 21을 포함하는 CDR H1, CDR H2와 CDR H3;
d) 각각 SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65 및 SEQ ID NO: 66을 포함하는 CDR H1, CDR H2와 CDR H3;
e) 각각 SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 71 및 SEQ ID NO: 72를 포함하는 CDR H1, CDR H2와 CDR H3;
f) 각각 SEQ ID NO: 76, SEQ ID NO: 77 및 SEQ ID NO: 78을 포함하는 CDR H1, CDR H2와 CDR H3;
g) 각각 SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 83 및 SEQ ID NO: 84를 포함하는 CDR H1, CDR H2와 CDR H3;을 구비하는, 항PD-L1 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트. - 제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 항PD-L1 항체는 이하 경쇄 상보성 결정영역(CDR L):
SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 79 및 SEQ ID NO: 85에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR L1;
SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 80 및 SEQ ID NO: 86에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR L2; 및
SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 69, SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO: 81 및 SEQ ID NO: 87에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR L3;을 더 구비하는, 항PD-L1 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트. - 제3항에 있어서,
상기 항PD-L1 항체는 이하 CDR L:
a) 각각 SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11과 SEQ ID NO: 12를 포함하는 CDR L1, CDR L2과 CDR L3;
b) 각각 SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17 및 SEQ ID NO: 18을 포함하는 CDR L1, CDR L2과 CDR L3;
c) 각각 SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23 및 SEQ ID NO: 24를 포함하는 CDR L1, CDR L2과 CDR L3;
d) SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68 및 SEQ ID NO: 69를 포함하는 CDR L1, CDR L2과 CDR L3;
e) 각각 SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 74 및 SEQ ID NO: 75를 포함하는 CDR L1, CDR L2과 CDR L3;
f) 각각 SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 80 및 SEQ ID NO: 81을 포함하는 CDR L1, CDR L2과 CDR L3; 또는
g) 각각 SEQ ID NO: 85, SEQ ID NO: 86 및 SEQ ID NO: 87을 포함하는 CDR L1, CDR L2과 CDR L3;을 구비하는, 항PD-L1 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트. - 제4항에 있어서,
상기 항PD-L1 항체는 이하 CDR H와 CDR L:
a) 각각 SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8 및 SEQ ID NO: 9를 포함하는 CDR H1, CDR H2와 CDR H3, 및 각각 SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11 및 SEQ ID NO: 12를 포함하는 CDR L1, CDR L2과 CDR L3;
b) 각각 SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14 및 SEQ ID NO: 15를 포함하는 CDR H1, CDR H2와 CDR H3, 및 각각 SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17 및 SEQ ID NO: 18을 포함하는 CDR L1, CDR L2과 CDR L3;
c) 각각 SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20 및 SEQ ID NO: 21을 포함하는 CDR H1, CDR H2와 CDR H3, 및 각각 SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23 및 SEQ ID NO: 24를 포함하는 CDR L1, CDR L2과 CDR L3;
d) 각각 SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65 및 SEQ ID NO: 66을 포함하는 CDR H1, CDR H2와 CDR H3, 및 각각 SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68 및 SEQ ID NO: 69를 포함하는 CDR L1, CDR L2과 CDR L3;
e) 각각 SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 71 및 SEQ ID NO: 72를 포함하는 CDR H1, CDR H2와 CDR H3, 및 각각 SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 74 및 SEQ ID NO: 75를 포함하는 CDR L1, CDR L2과 CDR L3;
f) 각각 SEQ ID NO: 76, SEQ ID NO: 77 및 SEQ ID NO: 78을 포함하는 CDR H1, CDR H2와 CDR H3, 및 각각 SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 80 및 SEQ ID NO: 81을 포함하는 CDR L1, CDR L2과 CDR L3; 또는
g) 각각 SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 83 및 SEQ ID NO: 84를 포함하는 CDR H1, CDR H2와 CDR H3, 및 각각 SEQ ID NO: 85, SEQ ID NO: 86 및 SEQ ID NO: 87을 포함하는 CDR L1, CDR L2과 CDR L3;을 구비하는, 항PD-L1 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트. - 항PD-L1 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트에 있어서,
상기 항PD-L1 항체는
a) SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 60 및 SEQ ID NO: 62에서 선택된 아미노산 서열;
b) a)의 아미노산 서열과 적어도 80%의 서열 동일성, 예를 들어 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열; 또는
c) a)의 아미노산 서열 중 하나 또는 다수의 아미노산 변형이 수행된 아미노산 서열;을 포함하는 중쇄 가변영역(VH)을 구비하는, 항PD-L1 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트. - 제6항에 있어서,
상기 항PD-L1 항체는
a) SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 57, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 61 및 SEQ ID NO: 63에서 선택된 아미노산 서열;
b) a)의 아미노산 서열과 적어도 80%의 서열 동일성, 예를 들어 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열; 또는
c) a)의 아미노산 서열 중 하나 또는 다수의 아미노산 변형이 수행된 아미노산 서열;을 포함하는 경쇄 가변영역(VL)을 더 구비하는, 항PD-L1 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트. - 제7항에 있어서,
상기 항PD-L1 항체는 이하 VH와 VL:
a) 각각 SEQ ID NO: 1 및 SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열을 포함하는 VH와 VL;
b) 각각 SEQ ID NO: 1 및 SEQ ID NO: 2와 적어도 80%의 서열 동일성, 예를 들어 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH와 VL; 또는
c) 각각 SEQ ID NO: 1 및 SEQ ID NO: 2 중 하나 또는 다수의 아미노산 변형이 수행된 아미노산 서열을 포함하는 VH와 VL;을 구비하는, 항PD-L1 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트. - 제7항에 있어서,
상기 항PD-L1 항체는 이하 VH와 VL:
a) 각각 SEQ ID NO: 3 및 SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열을 포함하는 VH와 VL;
b) 각각 SEQ ID NO: 3 및 SEQ ID NO: 4와 적어도 80%의 서열 동일성, 예를 들어 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH와 VL; 또는
c) 각각 SEQ ID NO: 3 및 SEQ ID NO: 4 중 하나 또는 다수의 아미노산 변형이 수행된 아미노산 서열을 포함하는 VH와 VL;을 구비하는, 항PD-L1 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트. - 제7항에 있어서,
상기 항PD-L1 항체는 이하 VH와 VL:
a) 각각 SEQ ID NO: 5 및 SEQ ID NO: 6의 아미노산 서열을 포함하는 VH와 VL;
b) 각각 SEQ ID NO: 5 및 SEQ ID NO: 6와 적어도 80%의 서열 동일성, 예를 들어 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH와 VL; 또는
c) 각각 SEQ ID NO: 5 및 SEQ ID NO: 6 중 하나 또는 다수의 아미노산 변형이 수행된 아미노산 서열을 포함하는 VH와 VL;을 구비하는, 항PD-L1 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트. - 제7항에 있어서,
상기 항PD-L1 항체는 이하 VH와 VL:
a) 각각 SEQ ID NO: 56 및 SEQ ID NO: 57의 아미노산 서열을 포함하는 VH와 VL;
b) 각각 SEQ ID NO: 56 및 SEQ ID NO: 57와 적어도 80%의 서열 동일성, 예를 들어 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH와 VL; 또는
c) 각각 SEQ ID NO: 56 및 SEQ ID NO: 57 중 하나 또는 다수의 아미노산 변형이 수행된 아미노산 서열을 포함하는 VH와 VL;을 구비하는, 항PD-L1 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트. - 제7항에 있어서,
상기 항PD-L1 항체는 이하 VH와 VL:
a) 각각 SEQ ID NO: 58 및 SEQ ID NO: 59의 아미노산 서열을 포함하는 VH와 VL;
b) 각각 SEQ ID NO: 58 및 SEQ ID NO: 59와 적어도 80%의 서열 동일성, 예를 들어 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH와 VL; 또는
c) 각각 SEQ ID NO: 58 및 SEQ ID NO: 59 중 하나 또는 다수의 아미노산 변형이 수행된 아미노산 서열을 포함하는 VH와 VL;을 구비하는, 항PD-L1 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트. - 제7항에 있어서,
상기 항PD-L1 항체는 이하 VH와 VL:
a) 각각 SEQ ID NO: 60 및 SEQ ID NO: 61의 아미노산 서열을 포함하는 VH와 VL;
b) 각각 SEQ ID NO: 60 및 SEQ ID NO: 61과 적어도 80%의 서열 동일성, 예를 들어 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH와 VL; 또는
c) 각각 SEQ ID NO: 60 및 SEQ ID NO: 61 중 하나 또는 다수의 아미노산 변형이 수행된 아미노산 서열을 포함하는 VH와 VL;을 구비하는, 항PD-L1 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트. - 제7항에 있어서,
상기 항PD-L1 항체는 이하 VH와 VL:
a) 각각 SEQ ID NO: 62 및 SEQ ID NO: 63의 아미노산 서열을 포함하는 VH와 VL;
b) 각각 SEQ ID NO: 62 및 SEQ ID NO: 63와 적어도 80%의 서열 동일성, 예를 들어 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH와 VL; 또는
c) 각각 SEQ ID NO: 62 및 SEQ ID NO: 63 중 하나 또는 다수의 아미노산 변형이 수행된 아미노산 서열을 포함하는 VH와 VL;을 구비하는, 항PD-L1 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트. - 제1항 내지 제14항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 항PD-L1 항체는 뮤린 항체, 키메라 항체, 인간화 항체 또는 완전 인간 항체인, 항PD-L1 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트. - 제6항 내지 제14항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 아미노산 변형은 가변 영역의 프레임워크 영역에서 수행되는, 항PD-L1 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트. - 제6항 내지 제14항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 아미노산 변형은 인간화 변형인, 항PD-L1 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트. - 제8항에 있어서,
상기 항체는 SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41 및 SEQ ID NO: 42에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44 및 SEQ ID NO: 45에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 구비하는, 항PD-L1 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트. - 제9항에 있어서,
상기 항체는 SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33 및 SEQ ID NO: 34에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 37 및 SEQ ID NO: 38에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 구비하는, 항PD-L1 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트. - 제10항에 있어서,
상기 항체는 SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 및 SEQ ID NO: 48에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50 및 SEQ ID NO: 51에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 구비하는, 항PD-L1 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트. - 제1항 내지 제20항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 항체는 Fc 영역의 변형을 더 포함하며, 상기 Fc 영역의 변형은 상기 항체의 항체 의존적인 세포 매개 세포독성 작용(ADCC) 및/또는 보체 의존적 세포독성 작용(CDC)을 감소시키는, 항PD-L1 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트. - 제21항에 있어서,
상기 변형은 치환 N297A를 포함하는, 항PD-L1 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트. - 제1항 내지 제22항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 항체는 IgG, IgA, IgM, IgE와 IgD 동종형에서 선택되는, 항PD-L1 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트. - 제1항 내지 제23항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 항체는 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4 아형에서 선택되는, 항PD-L1 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트. - 제1항 내지 제24항 중의 어느 한 항에 있어서,
상기 항원 결합 프래그먼트는 Fab 프래그먼트, Fab'프래그먼트, Fd 프래그먼트, Fd'프래그먼트, Fv 프래그먼트, dAb 프래그먼트, F(ab')2 프래그먼트, 단쇄 프래그먼트, 이중 항체(diabody), 및 선형 항체에서 선택되는, 항PD-L1 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트. - 이중특이성 항체에 있어서,
상기 이중특이성 항체는 PD-L1에 결합되는 제1 항원 결합 영역, 및 다른 항원에 결합되는 제2 항원 결합 영역을 포함하고, 상기 제1 항원 결합 영역은 제1항 내지 제5항 중의 어느 한 항에 따른 항PD-L1 항체의 CDRH1, CDRH2와 CDRH3, 및/또는 CDRL1, CDRL2와 CDRL3, 또는 제6항 내지 제20항 중의 어느 한 항에 따른 항PD-L1 항체의 VH 및/또는 VL을 포함하는, 이중특이성 항체. - 제26항에 있어서,
상기 다른 항원은 종양과 관련된 항원 및 면역관문 분자에서 선택되는, 이중특이성 항체. - 뉴클레오티드 서열에 있어서,
상기 뉴클레오티드 서열은 제1항 내지 제25항 중의 어느 한 항에 따른 항PD-L1 항체의 폴리펩타이드 사슬을 부호화하는, 뉴클레오티드 서열. - 뉴클레오티드 서열에 있어서,
상기 뉴클레오티드 서열은 제6항 내지 제20항 중의 어느 한 항에 따른 항PD-L1 항체의 VH 또는 VL을 부호화하는, 뉴클레오티드 서열. - 벡터에 있어서,
제28항 또는 제29항에 따른 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 벡터. - 재조합 숙주세포에 있어서,
제28항 또는 제29항에 따른 뉴클레오티드 서열, 또는 제30항에 따른 벡터를 포함하는, 재조합 숙주세포. - 하이브리도마 세포에 있어서,
제1항 내지 제25항 중의 어느 한 항에 따른 항PD-L1 항체 또는 그 항체 결합 프래그먼트를 생성하는, 하이브리도마 세포. - 결착물에 있어서,
제1항 내지 제25항 중의 어느 한 항에 따른 항PD-L1 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트 또는 제26항 또는 제27항에 따른 이중특이성 항체, 및 그와 결착되는 부분을 포함하며, 상기 부분은 사이토톡신, 방사성 동위원소, 형광 마커, 발광물질, 발색물질 또는 효소에서 선택되는, 결착물. - 조성물에 있어서,
제1항 내지 제25항 중의 어느 한 항에 따른 항PD-L1 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트, 제26항 또는 제27항에 따른 이중특이성 항체, 또는 제33항에 따른 결착물, 및 임의의 하나 또는 다수의 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 및/또는 희석제를 포함하는, 조성물. - 피험자의 암 치료 방법에 있어서,
상기 방법은 상기 피험자에게 제1항 내지 제25항 중의 어느 한 항에 따른 항PD-L1 항체 또는 그 항원 결합 프래그먼트, 제26항 또는 제27항에 따른 이중특이성 항체, 제33항에 따른 결착물, 또는 제34항에 따른 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 피험자의 암 치료 방법. - 제35항에 있어서,
상기 암은 흑색종, 림프종, 방광암, 비소세포폐암, 두경부암, 결장암과 피부암에서 선택되는, 방법. - 제35항 또는 제36항에 있어서,
상기 방법은 상기 피험자에게 하나 이상의 별도의 치료제를 투여하는 단계를 더 포함하는, 방법. - 제37항에 있어서,
상기 치료제는 항체, 화학요법 약물과 소분자 화합물에서 선택되는, 방법. - 제37항 또는 제38항에 있어서,
상기 치료제는 면역 관문 분자를 표적으로 하며, 상기 면역 관문 분자는 PD-1, PD-L2, CTLA4, OX40, LAG3, TIM3, TIGIT 및 CD103에서 선택되는, 방법. - 제1항 내지 제25항 중의 어느 한 항에 따른 항PD-L1 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트, 제26항 또는 제27항에 따른 이중특이성 항체, 제33항에 따른 결착물, 또는 제34항에 따른 조성물의 피험자의 암 치료에 있어서의 용도.
- 제1항 내지 제25항 중의 어느 한 항에 따른 항PD-L1 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트, 제26항 또는 제27항에 따른 이중특이성 항체, 제33항에 따른 결착물, 또는 제34항에 따른 조성물의 피험자의 암 치료를 위한 약물 제조에 있어서의 용도.
- 제40항 또는 제41항에 있어서,
상기 암은 흑색종, 림프종, 방광암, 비소세포폐암, 두경부암, 결장암과 피부암에서 선택되는, 용도. - 제40항 또는 제42항에 있어서,
상기 항PD-L1 항체 또는 그의 항원 결합 프래그먼트, 결착물 또는 조성물은 하나 또는 다수의 별도의 치료제와 복합 사용되는, 용도. - 제43항에 있어서,
상기 치료제는 항체, 화학요법 약물과 소분자 화합물에서 선택되는, 용도. - 제43항 또는 제44항에 있어서,
상기 치료제는 면역 관문 분자를 표적으로 하며, 상기 면역 관문 분자는 PD-1, PD-L2, CTLA4, OX40, LAG3, TIM3, TIGIT 및 CD103에서 선택되는, 용도.
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