KR20210109953A - 에피갈로카테킨 갈레이트 및 녹차씨 추출물을 포함하는 알코올성 위염 예방 또는 치료용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 에피갈로카테킨 갈레이트 및 녹차씨 추출물을 포함하는 알코올성 위염 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다. 더욱 상세하게는 에탄올에 의해 유도된 위 조직의 염증을 완화시키는 효과를 나타내는 에피갈로카테킨 갈레이트와 녹차씨 추출물을 혼합하여 제조한 조성물로, 알코올성 위염 치료 효능이 안정적으로 나타날 수 있는 알코올성 위염의 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.

Description

에피갈로카테킨 갈레이트 및 녹차씨 추출물을 포함하는 알코올성 위염 예방 또는 치료용 조성물{Composition for preventing or treating alcoholic gastritis comprising epigallocatechin gallate and green tea seed extracts}

본 발명은 에피갈로카테킨 갈레이트 및 녹차씨 추출물을 포함하는 알코올성 위염 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다. 더욱 상세하게는, 에피갈로카테킨 갈레이트와 녹차씨 추출물의 조합을 통해 에탄올에 의해 유도된 위 조직의 염증을 완화시키는 시너지 효과를 나타내는 조성물로, 특히 투여 대상에 따른 알코올성 위염 치료 효능의 표준오차가 매우 낮아 효능이 안정적으로 나타날 수 있는 알코올성 위염의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.

위염은 위의 염증을 의미하며 보통 위점막에 현미경적 염증이 있는 경우를 위염이라고 하며, 급성 위염과 만성 위염으로 구분된다. 위염의 원인으로는 진통소염제, 알코올, 스트레스, 커피, 자극적인 음식 등에 의해 발생할 수 있으며, 특히 커피와 매운맛을 좋아하고 음식을 나눠 먹는 문화를 가진 한국인의 위염 발병률이 매우 높다.

그러나 위염 증상에 제대로 대처하지 않으면 만성화하여 위 점막이 얇아지는 위축성 위염으로 이어질 수 있고, 위장 점막이 장 점막 형태로 바뀌는 장상피화생을 동반할 수 있으며, 장상피화생은 위암의 전 단계로 알려져 있다.

이처럼 위암의 씨앗이 될 수 있는 위염은 한국인 대다수가 갖고 있으며, 2012년 대한상부위장관헬리코박터학회가 전국 40개 병원에서 위내시경 검사를 받은 2만 5536명을 분석한 결과 85.9%가 한 종류 이상의 위염을 앓고 있었으며, 위염이 없는 사람은 14.1%에 불과했다.

하지만, 영국의 의학잡지 ‘Gut’에 발표된 논문에 따르면 외국의 22개 연구들을 분석한 결과, 내시경 상 위염이 없는 정상인의 비율이 51%였다. 즉, 한국인의 위염 비율이 외국에 비해서 매우 높은 수치이다(The Korean Journal of Helicobacter and Upper Gastrointestinal Research, 2012, 12(4), 237~243).

위염의 치료를 위해서는 위산분비억제제, 위장 운동 활성제, 위 점막 보호제 등을 사용한다. 근래에는 위산 중화제보다는 위산 자체의 분비를 억제하는 위산분비억제제를 주로 사용한다. 이외에도 헬리코박터균에 의한 위염이 동반된 경우에는 항생제를 복용하여 치료한다.

특히, 알콜성 위염은 반응성 위병증(급성 미란성 위염)의 한 형태로 알코올에 의해 위점막이 손상된 상태이며, 대부분 증상이 없으나, 간혹 명치 부위 또는 상복부 통증, 오심, 구토 등을 유발하기도 한다. 알코올은 구강과 식도를 통과해 위장에 도달하는데, 20~30%는 위에서 흡수되고 나머지는 대부분 소장 및 대장에서 흡수된다.

한국인을 비롯한 동양인의 75%는 위염 또는 위궤양을 일으키는 헬리코박터를 보균하고 있으며, 헬리코박터균을 갖고 있는 사람이 음주를 하면 알코올성 위염에 걸릴 확률이 높다. 건강보험심사평가원의 2008~2012년 건강 보험 및 의료 급여 심사결정자료를 바탕으로한 분석 결과, 2012년 기준 진료 인원은 1만 5천명이었고, 총진료비는 약 7억원이었으며, 2012년 기준 남성이 72.2%, 여성이 27.8%로 남성 진료 인원이 여성에 비해 2.6배 더 많았으며, 연령별 점유율은 50대가 25.7%로 가장 높았고, 40대가 22.1%, 30대가 15.4% 순으로 나타났다.

종래의 알코올성 위염 치료제로는 과다 분비된 위산을 중화시키는 제산제(antacid), 산 분비 억제 목적의 히스타민 길항제(histamine antagonist), 양성자 펌프 저해제(proton pump inhibitor), 콜린 억제제, 위내막의 내성을 증가시키고 회복을 돕는 위점막보호제 등이 있다. 다만, 이와 같은 치료제들은 합성 의약품으로 식욕감퇴, 무력감, 알레르기 등의 부작용이 발생하는 문제점이 있어, 천연물로부터 유래되며 알코올성 위염 치료에 효과적인 생리활성물질의 탐색에 관한 연구가 이루어지고 있다.

참고로, 대한민국 등록특허 제10-1152479호(탈지된 녹차씨 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염 또는 항암 조성물), 대한민국 등록특허 제10-1824107호(녹차씨 또는 녹차씨박 추출물을 유효성분으로 포함하는 항효모성 조성물 및 이의 제조방법), 대한민국 등록특허 제10-1263547호(녹차씨 껍질 추출물을 유효성분으로 함유하는 항산화 또는 항염 활성을 갖는 화장료 조성물) 등 녹차씨 추출물의 효능에 대한 관심이 높아지고 있다.

종래, 녹차씨 추출물의 알코올성 위염에 대한 위점막 보호 효과에 대해서는 알려져 있으나, 에피갈로카테킨 갈레이트(epigallocatechin gallate; EGCG)의 알코올성 위염 치료 효능, 특히 에피갈로카테킨 갈레이트와 녹차씨 추출물의 조합에 의한 시너지 효능에 대해서는 전혀 알려진 바가 없다.

이러한 배경 하에, 본 발명자들은 에피갈로카테킨 갈레이트(EGCG)와 녹차씨 추출물의 혼합 조성물이 알코올성 위염을 더욱 개선시키며, 녹차씨 추출물만 처리하였을 때보다 녹차씨 추출물과 에피갈로카테킨 갈레이트(EGCG)를 혼합하여 투여하는 경우 알코올성 위염 치료 효과가 향상되고 투여 대상에 따른 효능의 표준오차가 매우 낮아 효과가 더욱 안정적으로 나타남을 실험적으로 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.

본 발명은 에피갈로카테킨 갈레이트(EGCG)와 녹차씨 추출물의 혼합 조성물을 유효성분으로 함유하는 알코올성 위염의 예방 또는 치료용 조성물을 제공하는데 목적이 있다.

상기 과제를 해결하기 위해, 본 발명은,

에피갈로카테킨 갈레이트(Epigallocatechin gallate; EGCG) 및 녹차씨 추출물을 유효성분으로 포함하는 알코올성 위염의 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.

여기서, 상기 에피갈로카테킨 갈레이트(EGCG)와 상기 녹차씨 추출물을 2:90 내지 12:90의 중량비로 혼합하는 것을 특징으로 하는 알코올성 위염의 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.

또한, 상기 조성물은 투여 대상의 체중을 기준으로 10 내지 50mg/kg로 투여되는 것을 특징으로 하는 알코올성 위염의 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.

그리고, 상기 에피갈로카테킨 갈레이트(Epigallocatechin gallate; EGCG)는 녹차잎 농축액이 포함된 에탄올을 환류 추출하여 획득되는 것을 특징으로 하는 알코올성 위염의 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.

나아가, 상기 녹차씨 추출물은 에탄올로 추출하여 획득되는 것을 특징으로 하는 알코올성 위염의 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 에피갈로카테킨 갈레이트 및 녹차씨 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물은 위 손상을 육안적 또는 조직학적으로 개선 가능하고 투여 대상에 따른 효능의 표준오차가 매우 낮아 효능이 안정적이어서 알코올성 위염을 예방 또는 치료하는데 적합하다.

나아가, 본 발명의 조성물은 천연물 소재의 추출물을 유효성분으로 하여 인체에 안전하고, 부작용이 적어 의약품, 의약외품 및 건강기능식품의 소재로도 적합하다.

도 1은 실시예에서 각각의 실험 조건으로 시료가 투여된 에탄올 유도 위염 유발 모델 랫의 위를 적출하여 육안으로 관찰한 것을 도시한 것이다.
도 2는 실시예에서 각각의 실험 조건으로 시료가 투여된 에탄올 유도 위염 유발 모델 랫의 육안적 위염지수의 평균값을 막대그래프로 도시한 것이다.
도 3은 실시예에서 각각의 실험 조건으로 시료가 투여된 에탄올 유도 위염 유발 랫의 위 조직을 광학현미경을 이용하여 검경한 것을 도시한 것이다.

이하, 본 발명의 바람직한 실시예들을 상세히 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명은 여기서 설명된 실시예들에 한정되지 않고 다른 형태로 구체화될 수도 있다. 오히려, 여기서 소개되는 실시예들은 개시된 내용이 철저하고 완전해질 수 있도록, 그리고 당업자에게 본 발명의 사상이 충분히 전달될 수 있도록 하기 위해 제공되어 지는것이다.

본 발명에 따른 알코올성 위염의 예방 및 치료 조성물은 에피갈로카테킨 갈레이트 및 녹차씨 추출물을 유효성분으로 포함한다.

여기서, 상기 에피갈로카테킨 갈레이트는 항산화, 혈압강하, 암 발생 억제, HIV역전사효소 억제, 콜레스테롤 재흡수 억제, 혈당강하, 항균, 충치예방, 구취제거 등의 여러 가지 약리적 효능이 계속적으로 밝혀지고 있는 카테킨류 중 하나로 다른 카테킨류에 비해 효능이 우수하며, 특히 비타민 C 보다 20배, 비타민 E 보다 30배 강한 항산화 효과를 가지고 있어 화장품, 건강기능성식품 등의 항산화제로 사용되고 있다.

또한, 상기 에피갈로카테킨 갈레이트는 세포자멸사(apoptosis, 대한산부회지, 2002, 45(4), 560~568), 종양 침윤 억제, 종양 증식 및 전이 억제, 세포자멸사 효소 활성화, 항암보조제(adjuvant, clinical nutrition, 2013, 32(6), 894~904) 효능 등을 포함하는 항암활성에 대해서 가장 많이 연구되었다. 또한 대표적인 항산화활성 외에도 항염활성에 대해서도 알려져 있다(Food Function, 2011, 2(6), 338~347).

상기 에피갈로카테킨 갈레이트는 녹차잎 추출물로부터 분리 및 정제되어 수득될 수 있다. 녹차잎의 주요 폴리페놀은 페놀릭산과 플라보노이드로 구성되며, 페놀릭산으로 카페인산(caffeic acid)과 갈릭산(gallic acid)이 있으며, 플라보노이드로는 카테킨(catechin, C), 에피카테킨(epicatechin, EC), 갈로카테킨(gallocatechin, GC), 에피갈로카테틴(epigallocatechin, EGC), 카테킨갈레이트(catechin gallate, CG), 에피카테킨갈레이트(epicatechin gallate, ECG), 갈로카테킨갈레이트(gallocatechin gallate, GCG), 에피갈로카테킨갈레이트(epigallocatechin gallate, EGCG)가 포함되며, 이 중에서 에피갈로카테킨갈레이트(EGCG)가 가장 많은 양 함유되어 있다(Global Journal of Pharmacology, 6(2), 52~59, 2012).

여기서, 녹차잎은 동백과(Theaceae), 동백속(Camellia)에 속하는 차나무(Camellia sinensis)의 싹이나 잎을 가공한 것으로서 오랜 역사를 거치면서 각 민족의 기호에 맞게 다양하게 이용되고 있다. 차나무 품종은 중국 소엽종인 Camellia sinensis var. sinensis와 인도 애엽종인 Camellia sinensis var. assamica로 분류되며 우리나라에서는 중국 소엽종의 일종인 재래종과 야부기다, 대차 등이 재배되고 있다.

녹차잎의 품질은 다엽의 채취시기, 성숙도, 재배조건 등에 따라서 크게 영향을 받으며 이와 같은 조건에 의해서 차의 화학성분 들이 변화하여 차의 향미가 달라진다. 차는 발효 방법에 따라서 불 발효차(녹차), 반 발효차(우롱차류), 발효차(홍차류)가 분류되며, 차잎을 따는 시기에 따라서, 우전, 세작, 중작, 대작이 있으며, 가공방법에 따라서, 옥로차, 덖음차, 중제차, 말차로 나뉜다.

녹차잎은 최근 건강 음료 식품으로 많은 주목을 받고 있는 세계 10대 건강식품 중에 하나이며. 세계 음료 중에서 가장 오랜 역사를 가지고 있다. 특히 건강에 대한 관심과 웰빙 문화의 영향으로 그 수요가 꾸준히 증가하는 추세이다. 녹차잎은 다당류, 비타민B, 비타민C, 비타민E 등과 같은 다양한 유용성분을 포함하고 있으며, 최근 녹차의 고유성분들에 의한 여러 가지 약리 효과가 많이 보고되고 있는데 특히 카테킨류의 효과에 의한 보고가 많다. 녹차잎의 카테킨 함량은 차의 품종, 생육시기, 채엽 부위, 피복 유무 등에 따라 달라지나 차엽 중에 10~18 중량%정도 함유되어 있다.

한편, 녹차씨는 속씨를 감싸고 있는 겉껍질상태로 열리는데, 이 속에는 2~4개의 속씨가 들어 있다. 녹차씨는 단백질 함량이 잇꽃종실이나 해바라기씨의 함량과 거의 비슷하며, 조지방의 경우 잇꽃 종실과 유사한 수준으로써 식물유지 자원으로 활용할 수 있는 가능성이 많다, 녹차씨가 함유하고 있는 지방산은 올레익산(oleic acid)이 가장 많으며, 또한 조사포닌은 콩보다 3배 더 많이 함유하고 있어 계면활성제나 항종양제 등으로 사용 가능할 것으로 기대되는 농산 부산물이다(Journal of Korean Agric. Chem. Soc., 1992, 35(4), 272~275).

녹차씨 추출물의 효능으로는 항암 및 항염 활성(특허 제 10-1152479호), 항균 활성(특허 제 10-1824107호), 항염 및 항산화 활성(특허 제 10-1263547호)에 대해서 연구되었다. 또한, 녹차씨에서 분리한 다양한 화합물들의 효능에 대해서도 많은 연구가 이루어졌다.

본 발명에 있어서, 유효성분인 에피갈로카테킨 갈레이트(EGCG)와 녹차씨 추출물의 중량비는 2:90 내지 12:90, 바람직하게는 4:90 내지 6:90일 수 있고, 상기 중량비가 2:90 미만인 경우 에피갈로카테킨 갈레이트(EGCG)와 녹차씨 추출물의 조합에 의한 시너지 효과가 구현되지 않고 투여 대상에 대한 효능의 표준오차가 증가하여 효능 구현의 안정성이 저하될 수 있는 반면, 상기 중량비가 12:90 초과인 경우 상기 시너지 효과가 저하될 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 알코올성 위염 예방 또는 치료용 조성물은 투여 대상의 체중에 따라 10 내지 50 mg/kg, 바람직하게는 10 내지 47 또는 48 mg/kg으로 투여되는 것이 바람직하다. 여기서, 상기 투여량이 10 mg/kg 미만인 경우 알코올성 위염 예방 또는 치료 효능이 구현되지 않을 수 있는 반면, 50 mg/kg 초과인 경우 오히려 에피갈로카테킨 갈레이트(EGCG)와 녹차씨 추출물의 시너지 효과가 저하될 수 있다.

[실시예]

제조예 1. 녹차씨 추출물(Green tea seed extract)의 제조

경상남도 하동 또는 전라남도 보성에서 재배된 유기농 녹차씨를 공급받아 외피를 제거하고, 열풍건조기에서 건조한 후, 속피를 마저 제거하여 얻은 녹차씨를 분쇄하여 녹차씨 분말을 획득하였다. 상기 녹차씨 분말에 60% 에탄올을 1:10 (w/v)의 비율로 첨가하여 혼합한 후 약 30 ℃에서 16시간 동안 교반하여 추출하였다. 다음으로, 8 μm 이하의 기공 크기를 갖는 필터로 여과하고 농축한 이후, 동결 건조 및 분쇄하여 하기 실험에 사용할 녹차씨 분말을 최종적으로 획득하였다.

제조예 2. 에피갈로카테킨 갈레이트(EGCG)의 제조

건조된 녹차잎에 정제수를 1:10 (w/v)의 비율로 첨가하여 혼합한 후 60 내지 90 ℃에서 2~3시간 동안 가열 및 추출하였다. 이후, 추출된 혼합물을 여과지에 2회 이상 여과한 후 농축하였고, 상기 농축된 혼합물에 40 내지 80% 에탄올을 1:3~1:6 (w/v)의 비율로 첨가하여 환류방식으로 추출하여 다시 여과 및 농축을 수행하였다. 여기서, 상기 농축이 끝난 혼합물을 분무 건조(spray drying)하여 녹차잎 분말을 얻었으며, 상기 녹차잎 분말에 함유된 에피갈로카테킨 갈레이트(EGCG)는 40 내지 60wt%임을 확인하였다.

실험예 1. 에탄올로 유도된 위염 동물모델 선정 및 시료의 투여방법

7주령의 체중 200~250g 정도의 수컷 SD(Sprague-Dawley) 랫 10마리를 하나의 군으로 하여 하기 표 1과 같이 7개의 군(G1~G7)으로 분류하였다.

실험에 사용된 랫들을 7개의 군(group)으로 나누면 아래 표 1에 기재된 바와 같다.

	투여 시료	투여량(mg/kg)
G1	정상대조군	-
G2	음성대조군	-
G3	녹차씨 추출물(TS)	50
G4	녹차씨 추출물(TS)	100
G5	TS + EGCG (TSEG)	50
G6	TS + EGCG (TSEG)	100
G7	Omeprazole	25

실험 랫에 알코올성 급성 위염을 유발하고, 투여된 시료에 따라 위염 정도를 비교 측정하기 위하여 상기 G1(정상대조군)에는 멸균생리식염수를, 상기 G2 내지 G7에는 에탄올(ethanol)이 60vol%가 포함된 150 mM 염산 혼합액(Ethanol-HCl)을 경구투여용 존데가 부착된 일회용 주사기를 이용하여 1 ml/head로 단회 경구투여하였다. 즉, 상기 G1은 알코올성 급성 위염 비유발군, 상기 G2 내지 G7은 알코올성 급성 위염 유발군으로 볼 수 있다.

에탄올(ethanol)은 위점막을 직접적으로 자극하여, 점막하층에 부종을 유발하고, 국소적으로 일시적인 허혈상태를 유발하므로 혈액순환이 정체되어 자유 라디칼(free radical)에 의한 세포손상이 야기되고, 또한 염산(HCl)에 의해 위 운동이 항진되어 급성 위염이 악화된다.

상기 에탄올-염산 혼합액(Ethanol-HCl)을 투여하기 60분 전, 상기 G1 및 상기 G2는 0.5M CMC(Carboxymethyl cellulose)를 투여하였고, 상기 G3 및 G4는 상기 실시예 1에 따라 제조된 녹차씨 추출물(Green tea seed extract; 이하, 'TS'라 함)을 50 mg/kg, 100 mg/kg로 각각 경구투여하였고, 상기 G5 및 G6은 상기 실시예 1로 제조된 녹차씨 추출물(TS) 및 상기 실시예 2에 따라 제조된 에피갈로카테킨 갈레이트(EGCG)를 혼합한 조성물(이하, 'TSEG'라고 함)을 50 mg/kg, 100 mg/kg로 각각 경구투여하였고, 상기 G7은 오메프라졸(Omeprazole)을 25 mg/kg로 경구투여하였다. 여기서, 오메프라졸(Omeprazole)은 양성자 펌프 억제제(proton pump inhibitor)로서 급성 위염과 관련하여 보편적으로 처방되는 약제 중 하나이다.

상기 G2 내지 G7에 속하는 랫들은 상기 에탄올-염산 혼합액(Ethanol-HCl)투여 후, 60분 이내에 이산화탄소 가스 질식으로 희생시킨 후 개복하여 위를 적출하였다. 이후, 위 유문부(pylorus)와 위 분문부(cardia)를 결찰하고, 10% 중성 포르말린 약 10 ml를 위 안에 주입한 후 약 30분간 고정시켜 육안적 및 조직학적 위염지수 검사를 실시하였다.

실험예 2. 육안적 위염지수 평가

증상	병변 심각성	점수
충혈	양호	1
	보통	2
	심각	3
출혈	점상 출혈	1
	선상 출혈	2
궤양	크기가 1 mm 미만인 궤양	1
	크기가 1 mm 이상 5 mm 미만인 궤양	2
	크기가 5 mm 이상 10 mm 미만인 궤양	3
	크기가 10 mm 이상인 궤양	4
천공	복막강 내의 위액	5

알코올성 위염에 의한 손상의 억제 정도를 파악하기 위하여 상기 실험 랫 각각의 고정된 위 조직을 대만(Greater curvature)을 따라 절개한 후, 육안적으로 관찰했을 때 위염 증상이 나타나는 부위마다 상기 표 2와 같은 평가 기준에 따라 점수를 합산하여 육안적 위염지수(Ulcerative Lesion Index; ULI)를 평가하였다. 실험에서 얻어진 육안적 위염지수의 데이터는 SAS(Version 903, SAS Institute Inc., USA)에 의거하여 획득 및 검정하였다.

[수학식 1]

위염 억제율(%) = {1-(상기 G2 내지 G7 중 어느 하나의 군의 위염 지수 / 상기 G1의 위염 지수)} × 100 (%)

한편, 상기 표 2에 의거한 육안적 위염지수에 따라, 상기 수학식 1을 이용하여 위염 억제율을 산정할 수 있다. 전술한 바와 같이, 상기 G1은 에탄올-염산 혼합액(Ethanol-HCl)을 투여하지 않아 알코올성 급성 위염이 발생하지 않은 상태의 랫이고, 상기 G2 내지 G7에 속하는 랫은 알코올성 급성 위염이 발생 후 각각 0.5M CMC, TS 50 mg/kg, TS 100 mg/kg, TSEG 50 mg/kg, TSEG 100 mg/kg 및 Omeprazole 25 mg/kg를 투여한 상태로, 상기 수학식 1을 이용하면 알코올성 급성 위염이 발생하지 않은 건강한 상태의 랫에 대하여 상기 G2 내지 G7에 속하는 랫의 위 상태의 육안적 위염 억제율을 수치화하여 하기 표 3과 같이 나타낼 수 있다.

	육안적 위염지수(ULI)		위염 억제율(%)
	평균값	표준오차	평균값	표준오차
G1	1.6	0.2	-	-
G2	46.5	3.9	0	8.4
G3	9.3	3.5	80.0	7.4
G4	9.9	2.3	78.7	4.9
G5	5.9	0.6	87.3	1.2
G6	8.7	3.1	81.3	6.7
G7	20.2	3.9	56.6	8.4

상기 표 3은 상기 G1 내지 G7의 군을 각각 이루는 실험 랫 10마리의 육안적 위염지수(ULI)와 위염 억제율(%)의 평균값(mean data)과 표준오차(standard error)를 측정하여 나타낸 것이다. 여기서, 상기 G2의 표준오차는 상기 G1(정상대조군)과의 유의차를 Student's t-test 방법으로 구한 것이고, 상기 G3 내지 G7의 표준오차는 상기 G2(음성대조군)과의 유의차를 Steel's t-test 방법으로 구한 것이다.

도 1은 상기 G1 내지 G7의 실험 랫으로부터 적출한 위의 상태를 육안적으로 관찰한 것을 도시한 것이고, 도 2는 상기 G1 내지 G7의 육안적 위염지수(Ulcerative Lesion Index)의 평균값을 막대 그래프로 나타낸 것이다.

도 1에 도시된 바와 같이, 상기 G1(정상대조군)는 위의 절식으로 약간의 충혈이 육안으로 관찰되었으며, 육안적 위염지수(ULI)는 1.6±0.2로 나타났다. 상기 G2(음성대조군)는 위체부와 위저부 등에 선명한 위점막 손상과 띠모양의 출혈이 관찰되었으며, 육안적 위염지수(ULI)는 46.5±3.9로 나타났다. 또한, 상기 G2와 비교하여 상기 G3 내지 G7에서 육안적으로 관찰되는 출혈 및 검붉은 위염 증상이 개선되었다.

구체적으로, 녹차씨추출물(TS) 50 mg/kg 및 100 mg/kg 투여한 상기 G3 및 G4의 육안적 위염지수는 각각 9.3±3.5 및 9.9±2.3으로 나타났으며, 녹차씨추출물 및 EGCG 혼합조성물(TSEG) 50 mg/kg 및 100 mg/kg 투여한 상기 G5 및 G6의 육안적 위염지수는 각각 5.9±0.6 및 8.7±3.1으로 나타났으며, 이는 모두 상기 G2(음성대조군)과 비교하여 감소한 수치이며 TSEG를 투여한 경우 위염지수가 더욱 감소하였다.

또한, 위염 억제율(%)은 상기 G2(음성대조군)에 대하여 TS 투여군인 상기 G3 및 G4에서 각각 80.0% 및 78.8%로 나타났으며, TSEG 투여군인 상기 G5 및 G6에서 각각 87.3% 및 81.3%로 나타난 것으로 보아, TS 또는 TSEG 투여 시 상기 G2보다 위염에 의한 손상을 억제 또는 예방 가능하고, 특히, TS 단독 투여시보다 TSEG 투여 시 위염 억제율(%)이 다소 상승되었다.

그리고, TS 또는 TSEG를 투여하는 경우에, 50 mg/kg로 투여하는 것이 100 mg/kg로 투여할 때보다 공통적으로 위염 지수가 감소하고 위염 억제율이 상승한다는 점에서 위염의 개선 또는 치료 효과면에서 더 우수했음을 확인할 수 있다.

한편, 상기 G7(양성대조군)의 육안적 위염지수는 20.2±3.9이고, 상기 G2와 비교하여 위염 억제율이 56.6%인 것으로 나타나, omeprazole 투여 시 양성자 펌프 억제제로서 위염 치료 효과가 있음을 확인할 수 있으나 TS 또는 TSEG 투여 시보다는 그 효과가 작았다.

더욱이, 녹차씨추출물과 EGCG의 혼합 조성물(TSEG)을 50 mg/kg로 투여한 상기 G5에서 위염 억제율(%)이 87.3%으로 가장 높게 나타나 위염 예방 효과가 가장 우수할 뿐만 아니라, 위염 억제율의 표준오차(%)는 1.2%로, 상기 G5를 제외한 다른 군에서의 표준오차가 4.9 내지 8.4% 수준임을 볼 때 매우 낮은 수준임을 알 수 있다. 즉, 상기 G5에 속하는 10마리의 실험 랫에서 위염 억제율이 균일하게 나타난 것으로, 녹차씨추출물과 EGCG의 혼합 투여 시 위염 예방 효능이 안정적으로 발현될 수 있음을 판단 가능하다.

실험예 3. 조직학적 위염지수 평가

육안적 위염 지수 평가 (실험예 2) 이후, 상기 G1 내지 G7의 실험 랫의 잔여 위 조직으로 삭정, 탈수 및 파라핀 포매 등 조직처리 과정을 순차적으로 거쳐 블록시료를 제작하였고, Hematoxylin & Eosin(H&E) 염색을 실시한 후, 상기 염색된 G1 내지 G7의 위 조직 슬라이스 각각을 광학현미경(Olympus, Japan)을 사용하여 검경하였다(도 3).

증상	병변 심각성	Score
상피세포 손상	양호	1
	보통	2
	심각	3
점막하부종	양호	1
	보통	2
	심각	3
출혈	양호	1
	보통	2
	심각	3
염증세포 침입	양호	1
	보통	2
	심각	3

알코올성 위염에 의한 손상 정도를 조직학적으로 분석하기 위하여 상기 G1 내지 G7로부터 획득한 위 조직 슬라이스의 상피세포손상(Epithelial cell loss), 점막하부종(Edema in the upper mucosa), 출혈(Hemorrhage) 및 염증세포 침입(Infiltration of inflammatory cells)의 정도를 상기 표 4와 같은 평가 기준에 따라 점수를 합산하여 조직학적 위염지수(Histologic gastris index; HGI)를 평가하였다. 상기 육안적 육안적 위염지수(ULI)와 동일하게, 조직학적 위염지수의 데이터는 SAS(Version 903, SAS Institute Inc., USA)에 의거하여 획득 및 검정하였다.

	조직학적 위염 지수(HGI)
	평균값	표준오차
G1	0	0
G2	30.	0.2
G3	0	0
G4	0	0
G5	0	0
G6	0	0
G7	1.3	0.3

이에, 상기 표 4에 의거한 조직학적 위염지수에 따라, 상기 G1 내지 G7에 각각 속하는 랫 10마리에 대한 조직학적 위염지수의 평균값(Mean data of Histologic Gastric Index)을 측정하여 표 5와 같이 나타내었다. 여기서, 상기 G2의 표준오차는 상기 G1(정상대조군)과의 유의차를 Aspin-Welch t-test 방법으로 구한 것이고, 상기 G3 내지 G7의 표준오차는 상기 G2(음성대조군)과의 유의차를 Steel's t-test 방법으로 구한 것이다.

상기 표 4에 나타난 바와 같이, 상기 G1(정상대조군)의 조직학적 위염지수(HGI)는 0으로, 정상적인 위 조직 상태를 나타낸다. 상기 G2(음성대조군)의 조직학적 위염지수(HGI)는 3.0으로, 상기 G1과 비교하여 통계적으로 유의하게 증가되었다.

반면, 녹차씨추출물(TS) 50 mg/kg 및 100 mg/kg 투여한 상기 G3 및 G4, 녹차씨추출물 및 EGCG 혼합조성물(TSEG) 50 mg/kg 및 100 mg/kg 투여한 상기 G5 및 G6의 조직학적 위염지수(HGI)는 모두 0으로 나타나, 상기 G2와 비교하여 통계학적으로 유의하게 감소되었다.

그리고, omeprazole 25 mg/kg 투여한 상기 G(양성대조군)의 경우 조직학적 위염지수(HGI)가 1.3으로 나타나 상기 G2와 비교하여 통계학적으로 유의하게 감소되었다.

여기서, '통계적으로 유의하다'에 대한 정의는 확률적으로 보았을 때 단순한 우연이라고 생각되지 않을 정도로 의미가 있다는 뜻으로, 본 실험은 유의 확률(p-value) 0.01 미만으로 검정되었다.

결론적으로, 에탄올-염산(Ethanol-HCl)으로 유도된 실험 랫의 급성 위염 모델에서 육안적 위염지수 및 조직학적 위염지수를 확인한 결과, 녹차씨추출물(TS) 또는 녹차씨추출물 및 EGCG의 혼합조성물(TSEG) 모두 알코올성 위염에 대한 치료효과가 있는 것으로 확인되었고, 이는 오메프라졸(omeprazole)보다 더 우수한 것으로 확인되었으며, 특히 혼합조성물(TSEG)를 투여한 경우 육안적 위염지수가 더 낮게 측정되었으므로 더욱 효과가 있는 것으로 판단된다.

상기에서는 본 발명의 바람직한 실시예를 참조하여 설명하였지만, 해당 기술분야의 당업자는 이하에서 서술하는 특허청구범위에 기재된 본 발명의 사상 및 영역으로부터 벗어나지 않는 범위 내에서 본 발명을 다양하게 수정 및 변경 실시할 수 있을 것이다. 그러므로 변형된 실시가 기본적으로 본 발명의 특허청구범위의 구성요소를 포함한다면 모두 본 발명의 기술적 범주에 포함된다고 보아야 한다.

Claims (5)

1. 에피갈로카테킨 갈레이트(Epigallocatechin gallate; EGCG) 및 녹차씨 추출물을 유효성분으로 포함하는 알코올성 위염의 예방 또는 치료용 조성물.
2. 제 1항에 있어서,
   상기 에피갈로카테킨 갈레이트(EGCG)와 상기 녹차씨 추출물을 2:90 내지 12:90의 중량비로 혼합하는 것을 특징으로 하는 알코올성 위염의 예방 또는 치료용 조성물.
3. 제 1항 또는 제 2항에 있어서,
   상기 조성물은 투여 대상의 체중을 기준으로 10 내지 50 mg/kg로 투여되는 것을 특징으로 하는 알코올성 위염의 예방 또는 치료용 조성물.
4. 제 1항 또는 제 2항에 있어서,
   상기 에피갈로카테킨 갈레이트(Epigallocatechin gallate; EGCG)는 녹차잎 농축액이 포함된 에탄올을 환류 추출하여 획득되는 것을 특징으로 하는 알코올성 위염의 예방 또는 치료용 조성물.
5. 제 1항 또는 제 2항에 있어서,
   상기 녹차씨 추출물은 에탄올로 추출하여 획득되는 것을 특징으로 하는 알코올성 위염의 예방 또는 치료용 조성물.

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