KR20210087810A

KR20210087810A - 신규한 아프리카돼지열병의 예방 및 치료를 위한 바이러스 백신조성물

Info

Publication number: KR20210087810A
Application number: KR1020200000986A
Authority: KR
Inventors: 윤인중; 이주용; 유성식; 이승철; 권혁일; 김민호
Original assignee: 주식회사 중앙백신연구소
Priority date: 2020-01-03
Filing date: 2020-01-03
Publication date: 2021-07-13

Abstract

본 발명은 숙주 방어면역 기전을 조절하는 유전자의 발현을 억제하거나 불활성화 한 약독화 ASFV 및 이를 포함하는 백신 조성물에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 숙주의 방어면역과 관련되는 염증성 사이토카인으로서 인터페론에 의한 방어기전이 억제된 약독화 ASFV를 제공한다.

Description

신규한 아프리카돼지열병의 예방 및 치료를 위한 바이러스 백신조성물 {A novel vaccine composition for preventing and treating african swine fever virus}

본 발명은 아프리카돼지열병을 예방 및 치료하기 위한 바이러스 백신조성물에 관한 것이다.

아프리카돼지열병 (African Swine Fever, ASF)은 바이러스성 출혈성 돼지 전염병으로서,1920년대 아프리카에서 발병한 이후, 사하라 남부 아프리카 지역, 다수의 동유럽 및 러시아 연방의 일부 지역에서 풍토병으로 존재하여 왔다. ASFV 분리 균주는 병독성이 다양하며, 특히 독성이 높은 유전자형은 100%의 사망률을 초래하는 것으로 보고되었다. ASF 바이러스 (ASFV)는 아스파바이러스과 (Asfarviridae family) 및 아스피바이러스속 (Asfivirus)에 속하는 약 200 nm, 190 kDa의 이중가닥 DNA 바이러스이며, 23개의 유전형 (genotype)을 갖는 것으로 알려졌다.

아프라카돼지열병을 예방 또는 치료하기 위한 백신을 개발하고자 다양한 연구, 예를 들어, 혈액 백혈구, 정제 및 불활성화된 비리온, 감염된 글루타르알데히드-고정 대식세포, 세제-처리된 감염된 폐포 대식세포의 배양 상등액, DNA 백신, 약독화 생바이러스 백신 (live attenuated ASF virus), 불활화 백신 또는 바이러스 벡터 등을 이용한 백신 개발이 다양한 연구 그룹에 의해 수행되어 왔다. 그러나, ASFV는 유전자형이 다양하고 구조가 복잡하며, 일반적인 세포에 대한 감염이 어려워, 백신 제조를 위한 바이러스를 배양하거나 분리하는 것이 매우 어려운 실정이다. ASFV 조지아주 (Georgia stains) 베로 세포주 (Vero cell line)에서 적응 (adaptation)되어 증식하는 것으로 알려졌으나, 백신으로서의 방어능은 현저히 떨어지는 것으로 알려졌다. 마찬가지로 ASFV 스페인주 (Spanish strains) 또한 백신으로서 제조하기에는 적합하지 않은 것으로 확인되었다.

병원체 노출에 대응하는 숙주의 면역체계는 선천면역과 적응면역으로 구분된다. 감염 초기에 기여하는 선천면역은 병원체의 공통적으로 존재하는 구조인 병원성-관련 분자구조 (pathogen-associated molecular patterns) (PAMPs)를 숙주세포의 패턴인식수용체 (pattern recognition receptors) (PRRs)가 인식함에 의해 시작된다. 이러한 선천면역은 대식세포 (macrophages), 모노사이트 (monocytes), 호중구 (neutrophnils) 또는 수지상세포 (dendritic cells)와 같은 면역세포에서 활발하게 이루어지며, 이후 이들 세포들의 자극에 의해 분비 되는 사이토카인들을 통해 유도되는 다른 면역세포들의 케모카인 (chemokines)과 사이토카인 (cytokines)을 포함하는 염증 매개체 (mediators)의 분비, 항원제시능의 활성화, 보체의 활성화, 및 면역세포들의 호출 등 일련의 국소염증 활성화가 유도된다. 이와 같은 신속한 선천적 면역반응에 기여하는 세포의 특정 패턴인식수용체 (PRRs)의 주요 수용체로서, TLRs (toll-like receptors), NLRs (NOD-like receptors), RLRs (RIG-I-like receptors), 또는 CLRs (C-type lectin receptors)이 알려져 있으며, 이들은 주로 세포막이나 세포질에 분포한다. 특히, 바이러스 감염의 경우, 바이러스의 DNA는 TLR9에 의해 인식되며, 단일가닥 (single strand (ss)) RNA 또는 dsRNA는 TLR3, TLR7 또는 TLR9에 의해 인식 된다. 또한 세포질 내 dsRNA와 바이러스 RNA의 특이적 구조인 5'-트리포스페이트-dsRNA (5'-triphosphates-dsRNA)는 세포질 내 수용체인 RIG-I (retinoic acid-inducible gene I) 또는 MDA-5 (melanoma differentiation-associated gene-5)에 의해 인식되는 것으로 알려졌다. 이 밖에, NLRP3, NOD의 NLR이나 바이러스 DNA를 인식하는 IFI16, cGAS 또는 AIM2 등이 세포질 내 센서 (sensor)로 작용한다. 병원체의 특정 특이성분들과 직접적으로 결합한 숙주의 수용체들은 하부의 신호전달체계 내 신호전달물질을 통해 최종적으로 다양한 사이토카인 유전자를 발현시키는데, 대표적인 것이 타입 I (Type I) 인터페론 (Interferons) (IFNs)과 염증성 사이토카인 이다. 특히, 타입 I IFNs은 IFN α와 β를 포함하며, 세포 밖으로 분비되어 주변의 다른 면역 세포들의 수용체와 결합하여 다양한 항바이러스 유전자들을 생성한다. 이런 물질들은 NK 세포을 활성화시켜, 감염된 세포를 사멸시키거나, 세포 내부의 바이러스 복제 기작을 차단하는 등의 활성을 가지며, 이러한 초기의 방어면역 반응들은 세포성 면역이나 체액성 면역과 같은 후천성 면역을 극대화 한다. 즉, 선천면역에 의해 분비되는 다양한 사이토카인들에 의한 항바이러스 상태 (antiviral state)로의 전환이 바이러스 감염에 대한 초기의 성공적인 방어 여부를 결정한다. 이와 같은 숙주 내 방어면역에 대응하여 바이러스는 숙주 세포 내의 정상적인 선천면역 반응을 방해하고 사이토카인 분비를 막는 기전을 발전시켜 왔다. 이러한 역할을 하는 바이러스 단백질들은 크게 두 가지 그룹으로 구분된다, 첫 번째는 선천면역에 의해 바이러스가 인식된 이후 사이토카인이 분비되는 일련의 과정 중 특정 부분을 막는 것이며, 두 번째는 분비된 인터페론을 인터페론 수용체로 신호를 받아 세포 내로 전달하여 항바이러스 상태로의 전환을 막는 것이다. 예를 들어, RNA 바이러스의 경우, 홍역 바이러스 (measles virus)의 V 단백질이 MDA-5에 관련된 PP1α/γ를, 콕사키바이러스 (coxsackievirus) B3, 폴리오바이러스 (poliovirus), 엔테로바이러스 (enterovirus) 71의 3C 프로테아제 (protease)가 직접 MDA5와 RIG-I를, 인플루엔자 바이러스 (influenza virus)의 NS1 단백질과 C형 간염 바이러스의 NS3-4A이 RIG-I 활성화에 관여하는 TRIM25 및 RIPLET을 각각 타겟으로 하여 선천면역을 억제한다. ASFV는 적은 수의 바이러스 만으로도 돼지의 체내 감염을 유도하며, 이는 ASFV가 감염시 효율적인 숙주 방어면역 회피 기전을 갖는다는 것을 뒷받침 한다.

이에, 본 발명자들은 이러한 ASFV의 숙주 방어면역 회피 기전을 이용하여 백신을 개발하고자 하였다. 본 발명자들은 그 기능이 구체적으로 연구되거나 알려진 바 없는 ASFV의 유전자들로부터, 숙주의 방어면역 회피 기전의 하나인 인터페론 분비 기전을 억제하는 유전자들을 선별하고 그 기능을 확인하였다. 이어서, 상기 선별된 특정 유전자가 결실 또는 치환되어 숙주의 방어면역 회피 기전을 억제를 할 수 없는 약독화된 ASFV 변이주를 개발하고, 이를 백신 제조에 이용함으로써 본 발명을 완성하였다.

한국특허공개 제10-2019-0018020호 미국특허등록 제9808520B1호

본 발명은 ASFV 숙주 세포의 방어면역 회피 기전과 관련된 신규 유전자 및 이를 이용한 약독화된 ASFV를 제조하는 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 ASFV의 숙주 방어면역 회피 기전이 결실 또는 억제된 약독화된 ASFV를 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 약독화된 ASFV를 포함하는 백신조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 약독화된 ASFV를 이용하여 ASF를 예방, 치료 또는 예방 및 치료하는 방법에 관한 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 약독화된 ASFV를 포함하는 백신조성물을 이용하여, 면역화가 필요한 동물을 면역화하는 방법에 관한 것이다.

본 발명 또 다른 목적은 ASFV의 숙주 방어면역 회피 기전과 관련된 신규 유전자를 이용한 항 ASFV 약물후보를 스크리닝하는 방법에 관한 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 항 ASFV 약물을 포함하는 항 ASFV 약물 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 숙주 (세포)의 방어면역 기전 조절 유전자의 발현을 감소 조절 (down-regulation), 억제/저해, 또는 불활성 하여, 아프리카돼지열병바이러스 (african swine fever virus, ASFV)를 약독화 하는 방법을 제공한다. 이와 관련된 일 실시예에서, 상기 숙주의 방어면역 기전은 염증성 사이토카인, 예를 들어, 인터페론의 분비에 의한 것일 수 있으며, 이 경우 상기 ASFV의 조절 유전자는 B175L, C129R, I73R, B318L, B354L, GACD00190 및 MGF100-1R 로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 유전자 일 수 있다. 그러나, 본 발명이 상기 방어기전 및 유전자에 제한 되는 것은 아님은 물론이다.

본 발명의 일 실시예에서, 본 발명은 숙주의 방어면역 조절 유전자로서, B175L, C129R, I73R, B318L, B354L, GACD00190 및 MGF100-1R 로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 유전자의 발현이, 억제 및/또는 저해, 감소 조절, 또는 불활성화 된, 약독화 ASFV 변이주를 제조하는 방법을 제공한다.

본 발명의 다른 일 실시예에서, 본 발명은 상기 약독화된 ASFV 변이주를 포함하는, ASF의 예방, 치료 또는 예방 및 치료를 위한 백신조성물을 제공하는 것이다. 이와 관련된 일 실시예에서, 상기 백신조성물은 약리학적으로 허용가능 한 담체, 희석제, 보존제 및 면역보조제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 추가로 포함할 수 있다. 이와 관련된 또 다른 일 실시예에서, 본 발명은 상기 백신조성물을 투여하여 면역화가 필요한 동물을 면역화 하는 방법에 관한 것이다. 이와 관련된 또 다른 일 실시예에서 본 발명은 상기 백신조성물을 동물에 투여하여 ASFV를 예방, 치료, 또는 예방 및 치료하는 방법에 관한 것이다.

본 발명은 치사율과 전염성이 매우 높은 바이러스성 감염병인 아프리카돼지열병의 예방 또는 치료를 위한 백신을 제공한다. 본 발명의 백신조성물은 숙주 방어면역 회피 기전과 관련된 ASFV의 유전자의 발현을 억제하거나 불활성화시켜 제조한 약독화 ASFV를 사용하여, 숙주의 체액성 면역 및 세포성 면역을 유도할 수 있다.

도 1은 스팅 단백질에 의한 IFN-β 프로모터의 활성을 억제하는 ASFV 유전자를 스크리닝한 결과를 나타낸 것이다.
도 2는 ASFV 유전자를 발현하는 플라스미드로 PK15 세포를 트랜스펙션 하고, 아데노바이러스-GFP를 감염 시킨 후 아데노바이러스 증식을 확인 결과이다.
도 3은 B175L 단백질이 과발현된 PK15 세포에서 바이러스 증식을 확인한 것이다.
도 4는 B175L 단백질이 과발현된 PAM 세포에서 바이러스 증식과 IL-6의 분비량을 확인한 것이다.
도 5는 C129R 단백질이 과발현된 PK15 세포에서 바이러스 증식을 확인한 것이다.
도 6은 B318L 단백질이 과발현된 PAM 세포에서 바이러스 증식과 IL-6의 분비량을 확인한 것이다.
도 7은 B354L 단백질이 과발현된 PK15 세포에서 바이러스 증식을 확인한 것이다.
도 8은 B354L 단백질이 과발현된 PAM 세포에서 바이러스 증식과 IL-6의 분비량을 확인 한 것이다.
도 9는 GACD00190 단백질이 과발현된 PK15 세포에서 바이러스 증식을 확인한 것이다.
도 10은 MGF100-1R 단백질이 과발현된 PAM 세포에서 바이러스 증식과 IL-6의 분비량을 확인 한 것이다.

이하, 실시예 및 도면에 의거하여 본 발명을 설명한다. 하기 실시예 및 도면은 본 발명을 설명하고 명확하게 하기 위한 것이며, 본 발명의 권리범위가 이에 제한되는 것이 아님을 물론이다. 본 발명의 도면 및 상세한 설명으로부터 당업자에게 자명하게 이해되는 것은 본 발명의 권리범위에 포함되는 것으로 이해될 것이다.

실시예

실시예 1: 숙주 인터페론 관련 기전들을 억제하여 숙주의 방어면역을 회피하는 ASFV 유전자 탐색

(1-1) 바이러스 감염에 대한 숙주의 주요 방어기작인 인터페론 관련 기전들을 저해 또는 억제하여 숙주의 방어면역을 회피하는 ASFV 특이 유전자를 탐색하였다. 먼저, ASFV georgia 2007/1 균주 (NCBI Reference Sequence: NC_044959.1)로 부터의 158개 유전자를 선별하고, 각각을 발현하는 플라스미드들과 DNA 바이러스 감염 또는 인터페론 경로에서 중요한 역할을 하는 세포 내 단백질인 스팅 (sting) 단백질을 발현하는 플라스미드,

유전자를 발현하는 플라즈미드 이름은 pIRES로 실험실에서 제작한 것으로 pIRES의 backbone에는 ampicillin resistance gene과 puromycin resistance gene 그리고 human EF-1α promoter와 multicloning site 등이 존재한다. 따라서 B175L, C129R, I73R, B318L, B354L, GACD00190 및 MGF100-1R 각각을 발현하는 플라즈미드는 pIRES-B175L, pIRES-C129R, pIRES-I73R, pIRES-B318L, pIRES-B354L, pIRES-GACD00190 및 pIRES-MGF100-1R이다. 또한, 스팅 (sting) 단백질을 발현하는 플라스미드는 pIRES-sting이다.

및 IFN-β 프로모터 활성에 필요한 플라스미드를 293T세포 (ATCCⓡ CRL-3216™)에 공동 트랜스펙션하였다. 다음, 상기 스팅 단백질에 의한 IFN-β 프로모터의 활성을 억제하는 ASFV 유전자를 스크리닝하였다. 도 1은 그 결과를 나타낸다.

(1-2) ASFV 특이 유전자를 탐색하기 위해, 상기 제작한 ASFV georgia 2007/1 균주의 158개 유전자를 각각 발현하는 플라스미드와 GFP (green fluorescence protein)를 복제 중에 발현하는 Adenovirus-GFP를 제조하여 이용하였다. 각각의 ASFV 유전자를 발현하는 플라스미드를 제조하고 이를 돼지세포인 PK15 세포 (입수처, ATCCⓡ CCL-33™)에 트랜스펙션 시킨 후, Adenovirus-GFP 1 MOI (multiplicity of infection) 감염시켰다. 감염 24시간 후, 바이러스가 증식하면서 발현하는 GFP 발현량을 흡광도로 측정하여 아데노바이러스 (Adenovirus)의 증식 정도를 확인하였다. 도 2는 그 결과를 나타내다.

(1-3) 상기 두 가지 스크리닝 방법으로 IFN-β 프로모터의 활성을 억제하면서 동시에 Adenovirus-GFP의 증식을 증가시키는 ASFV 특이 유전자들을 스크리닝하였다. 그 결과, B175L, C129R, I73R, B318L, B354L, GACD00190 및 MGF100-1R 유전자에 의해 발현된 단백질들이 IFN-β 프로모터의 활성을 억제하고 Adenovirus-GFP의 증식을 증가시킨 것을 확인하였다.

실시예 2: 단백질 과발현에 따른 ASFV 증식 및 사이토카인 변화 분석

(1-1) 상기 실시예 1에서 스크리닝한 유전자 중 B175L 단백질 (서열번호: 1)을 발현하는 플라스미드를 제조하고, 이를 돼지 신장상피세포인 PK15 세포에 트랜스펙션 하였다. 다음, 상기 트랜스펙션된 PK15 세포에서 B175L 단백질을 과발현하고 이어서 Adenovirus-GFP를 감염시킨 후 바이러스의 증식을 측정하였다. 그 결과, 도 3에 나타낸 것과 같이, B175L 단백질이 과발현된 세포에서 바이러스의 증식이 현저히 증가한 것으로 나타났다. 또한, B175L 단백질이 과발현된 세포에 Adenovirus-GFP를 감염시킨 후, 염증성 사이토카인인 IL-6와 인터페론-β의 분비량을 측정한 결과, 이들 사이토카인이 현저히 감소된 것을 확인하였다. 이러한 결과는, B175L 단백질이 과발현되면 인터페론과 염증성 사이토카인의 분비가 억제되며, 이는 바이러스 증식에 중요한 기능을 한다는 것을 지지한다. 또한, B175L 단백질을 안정적으로 과발현시키는 대식세포주인 돼지 PAM (Porcine Alveolar Macrophage) 세포주 (입수처: ATCC CRL-2843)에서 Adenovirus-GFP를 감염시킨 후 바이러스의 증식 수준을 측정하였다. 그 결과 도 4에 나타낸 것과 같이, B175L 단백질이 과발현된 PAM 세포에서 바이러스의 증식이 현저히 증가하고, IL-6의 분비량이 현저히 감소된 것이 확인되었다. 이러한 결과는, ASFV B175L 단백질이 숙주세포의 인터페론 신호전달 경로에 대해 음성 조절 (negative regulation) 역할을 하는 것을 뒷받침한다.

(1-2) 상기 실시예 1에서 스크리닝한 유전자 중 C129R (서열번호: 2), I73R (서열번호: 3), B318L (서열번호: 4), B354L (서열번호: 5), GACD00190 (서열번호: 6) 또는 MGF100-1R (서열번호: 7)을 각각 발현하는 플라스미드를 제조하고, 이를 돼지 신장상피세포인 PK15 세포에 각각 트랜스펙션 하였다. 다음, 상기 트랜스펙션된 PK15 세포에서 상기 단백질의 과발현을 확인하고, Adenovirus-GFP를 각각 감염시킨 후 바이러스의 증식 수준을 측정하였다. 그 결과, 도 5 및 도 6에 나타낸 것과 같이, C129R 단백질이 과발현된 세포에서 바이러스의 증식이 현저히 증가하였다. 또한, 이들 단백질이 각각 과발현된 세포에 Adenovirus-GFP를 감염시킨 후, 염증성 사이토카인인 IL-6와 인터페론-β의 변화를 관찰한 결과, 이들 사이토카인이 현저히 감소된 것을 확인하였다. 이러한 결과는, 이들 단백질이 과발현되면 인터페론과 염증성 사이토카인의 분비가 억제되며, 이는 바이러스 증식에 중요한 기능을 하는 것을 지지한다. 또한, 이러한 결과는, 상기 C129R, I73R, B318L, B354L, GACD00190 또는 MGF100-1R 단백질이 숙주세포의 인터페론 신호전달 경로에 대해 음성 조절 (negative regulation) 역할을 하는 것을 뒷받침한다.

(1-3) 상기 아프리카돼지열병 바이러스 유전자들 중 I73R, B318L, B354L, GACD00190 또는 MGF100-1R 등의 단백질을 발현하는 플라스미드를 각각 돼지의 신장상피세포인 PK15 세포에 트랜스펙션 하여 각 단백질들을 과발현시키고, ASFV와 같은 DNA 바이러스인 Adenovirus-GFP를 감염시킨 후 바이러스 증식을 측정하였다. 그 결과 도 7 및 도 8에 나타낸 것과 같이, I73R, B318L, B354L, GACD00190 및 MGF100-1R 단백질이 각각 과발현된 세포에서는 바이러스의 증식이 현저히 증가하였다. 결과적으로, 숙주세포에 ASFV I73R, B318L, B354L, GACD00190, MGF100-1R 단백질들이 발현되면 바이러스의 증식이 증가 되는 것을 확인하였다.

본 실시예의 결과는, ASFV 유전자들 중 B175L, C129R, I73R, B318L, B354L, GACD00190 및 MGF100-1R가 바이러스에 대한 숙주의 주요 방어기전인 인터페론 분비를 억제하여 숙주의 방어면역 회피에 중요한 역할을 한다고 것을 지지한다. 따라서, 이들 유전자를 결실 또는 치환하거나 단백질 발현을 억제함으로써, 약독화 ASFV를 제조할 수 있을 것이다.

본 발명은 숙주 방어면역 기전을 조절하는 유전자의 발현을 억제하거나 불활성화 한 약독화 ASF 바이러스, ASF 바이러스에 대한 면역화가 필요한 동물에 투여하기 위한 백신 제조에 이용될 수 있다.

Claims

숙주세포 방어면역 조절 유전자의 발현을 억제 또는 감소조절 (down-regulation) 하여, 아프리카돼지열병바이러스 (african swine fever virus, ASFV)를 약독화 하는 방법.
제1항에 있어서, 상기 방어면역이 염증성 사이토카인에 의한 것을 특징으로 하는, ASF 바이러스를 약독화 하는 방법.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 유전자는 B175L, C129R, I73R, B318L, B354L, GACD00190 및 MGF100-1R 로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 유전자인 것인, ASF 바이러스를 약독화 하는 방법.
제3항의 약독화된 ASFV 변이주를 포함하는, 아프리카돼지열병의 예방, 치료 또는 예방 및 치료를 위한 백신조성물.
제4항에 있어서, 상기 백신조성물이 약리학적으로 허용가능 한 담체, 희석제, 보존제 및 면역보조제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 추가로 포함하는 것인, 아프리카돼지열병의 예방, 치료 또는 예방 및 치료를 위한 백신조성물.
제4항 또는 제5항의 백신조성물을 면역화가 필요한 동물에 투여하여 동물을 면역화 하는 방법.
제4항 또는 제5항의 백신조성물을 돼지에 투여하여 ASFV를 예방, 치료, 또는 예방 및 치료하는 방법.
제1항에 있어서, 상기 억제 또는 감소 조절이, 숙주세포 방어면역 조절 유전자의 염기서열의 일부 또는 전부를 결실 또는 치환하여, 불활성화를 포함하는 것인,
아프리카돼지열병 바이러스를 약독화 하는 방법.
i) 세포를 ASF 바이러스의 숙주세포 방어면역 기전을 조절하는 유전자가 작동적으로 결합된 플라스미드로 트랜스펙션 하는 단계;
iii) 상기 세포에 항바이러스 후보물질을 처리하는 단계; 및
iv) 상기 후보물질을 처리한 세포가 상기 후보물질을 처리하지 않은 세포와 비교하여, 상기 유전자의 발현이 감소하거나 억제된 것을 확인되는 경우, 상기 후보물질이 항 ASF 바이러스 활성이 있는 것으로 판별하는 것을 포함하는,
항 ASF 바이러스 약물을 스크리닝하는 방법.
제9항에 있어서, 상기 숙주세포의 방어면역 기전이 선천면역인 것인,
항 ASF 바이러스 약물을 스크리닝하는 방법.
제10항에 있어서, 상기 방어면역 기전이, 인터페론의 분비에 의한 것이고, 상기 유전자가 B175L, C129R, I73R, B318L, B354L, GACD00190 및 MGF100-1R 로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 것인,
항 ASF 바이러스 약물을 스크리닝하는 방법.
제9항 내지 제11항 중 어느 한 항의 방법에 따라 스크리닝된 항 ASF 바이러스 약물을 포함하는, 항ASF 바이러스 조성물.