KR20210067834A

KR20210067834A - 아토피 증상 완화를 위한 와송 기반 제재의 제조방법 및 와송 기반 제재, 이를 이용한 제품

Info

Publication number: KR20210067834A
Application number: KR1020200042286A
Authority: KR
Inventors: 현지연
Original assignee: 현지연
Priority date: 2019-11-29
Filing date: 2020-04-07
Publication date: 2021-06-08

Abstract

본 발명의 일 실시예에 따르면, 말린 와송을 갈아서 에탄올 내에 투입하여 상기 와송의 성분을 추출하는 단계; 및 상기 와송 성분 추출물을 감압건조하여 분말상으로 형성하는 단계;를 포함하는, 와송 기반 제재의 제조 방법을 제공한다.

Description

아토피 증상 완화를 위한 와송 기반 제재의 제조방법 및 와송 기반 제재, 이를 이용한 제품{METHOD FOR MAKING ANTI-ATOPY COMPOSITION BASED ON OROSTACHYS JAPHONICUS AND COMPOSITION BASED ON OROSTACHYS JAPHONICUS, AND PRODUCT USING SAME}

본 발명의 일 실시예는 아토피 증상 완화를 위한 와송 기반 제재의 제조방법 및 와송 기반 제재, 이를 이용한 제품에 관한 것이다.

일반적으로 피부질환은 각종 오염물질, 및 포도상구균 등의 세균에 의해 피부가 과민 반응을 일으켜서 발생하는 질환으로 아토피 피부염(atopic dermatitis)은 그 발생 원인이 명확하게 밝혀지지는 않았지만, 아토피의 소인을 가진 개인에서 피부, 호흡기점막, 안점막, 장잠막 등에 나타나는 알레르기 증상으로 이해되고 있으며, 특히 피부의 과민 반응을 일으키는 원인물질인 각종 오염물질, 세균과 대기 중의 휘발성 유기화합물, 오존이 서로 상승 작용을 일으켜서 아토피 피부질환의 증상을 악화시키는 특성을 지니고 있다.

현재 아토피 피부염은 가장 흔한 피부질환 중 하나로 세계적으로 유병률이 증가 추세에 있다. 특히 산업화된 나라에서 높은 유병률을 보이며, 어린이의 약 10~20%, 성인의 약 1~3%에서 아토피 피부염을 앓고 있는 것으로 알려져 있다. 대부분의 아토피 피부염 환자들은 생후 첫해에 유발하며 이중 80%는 생후 5년내에 증상이 눈으로 보인다. 또한 많은 어린이 환자가 초기 청소년기에 증세가 소실되지만 이후에도 가려움증을 동반하는 습진성 병변이 악화되는 경우가 매우 흔하다.

아토피 피부염은 건조한 피부로부터 가려움증을 유발시키고 긁게 되면 습진성 피부병변이 생거 더 심한 가려움증을 유발시키는 만성적, 재발성 피부질환이다. 이에 대한 원인으로는 알러지를 일으키는 원인물질의 증가 및 환경공해와 같은 환경적인 요인뿐 아니라 유전적인 요인, 면역학적 이상반응 등을 들 수 있다.

최근 산업발달에 따른 도시인들의 생활환경의 변화에 의해 면역 과민반응을 유발하는 다양한 원인물질에 노출될 기회가 점차 커지고 있으며, 이중 천식과 함께 아토피 피부염이 최근 크게 증가하여 사회적인 문제로 대두됨에 따라 많은 연구자들이 천연물로부터 면역과민반응을 완화시켜 줄 수 있는 물질의 탐색에 관심을 집중하고 있다.

특히, 아토피 피부염은 사람 뿐만 아니라 반려동물에게도 완치가 어려운 난치성 질병이다. 아토피 피부염은 전체 개체의 약 10% 정도에서 발생하는데 대부분 1~3세에 증상이 발현되며 나이가 들어감에 따라 증상을 더욱 심하게 나타낸다. 어릴 때 발병하기 때문에 거의 평생을 아토피 피부염으로 고통받아야 하며 나이가 들어가면서 증상은 더 심해지기 때문에 시간이 갈수록 관리가 어려운 질병이다. 또한 아토피 피부염은 대부분 집안에서 생활하는 동물에게서 나타나며 집먼지 또는 집먼지 진드기가 아토피를 유발하는 allergen으로 작용하기 때문에 산업화, 도시화 되어가고 1인 가구가 늘어나서 집안에서 주로 반려동물을 사육하는 사회 환경에서는 점점 발병률이 증가하게 된다.

현재까지 국내에서 아토피 피부염으로 고통받고 있는 반려동물은 다른 근본적인 치료방법 없이 스테로이드와 같은 약물로 관리받고 있다. 스테로이드와 같은 약물은 효과적이며 빠른 임상증상의 개선을 기대할 수 있으나 장기 투약에 따른 부작용이 매우 크기 때문에 스테로이드와 약물의 장기 복용을 통하여 아토피 환자를 관리하는 것은 최선의 방법은 아니다. 따라서 부작용이 적고 아토피 관리에 효과적인 제품에 대한 연구는 꾸준히 요구되고 있다.

와송의 경우 한방에서 염증성 질환이나 암 치료에 주로 사용하고 있다. 그리고, 최근 연구에 따르면 와송에 뛰어난 항염증효과와 항암효과이 있음이 밝혀지고 있다. 이에 따라 와송의 성분이 아토피 피부염에도 효과가 있을지에 대해서 연구가 필요한 실정이다.

유럽공개특허공보 EP2736444 (2014.06.04)

본 발명의 실시예들은 와송을 이용하여 아토피 피부염과 같은 질병을 완화할 수 있는 와송 기반 제재를 제공하고자 한다.

상기 와송 성분 추출물을 용매를 통해 분류(分溜)하여 상기 용매에 녹는 성분을 분리하는 단계를 더 포함할 수 있다.

상기 용매는 헥산(hexane), 디클로로메탄(dichloromethane), 에틸아세테이트(ethylacetate), 부탄올(butanol) 중 선택되는 1종일 수 있다.

상기 분류는 44 내지 52 시간 중 2회 실시될 수 있다.

본 발명의 다른 실시예에 따르면, 와송 기반 제제의 제조 방법에 의해 제조된 와송 기반 제재를 제공한다.

또한, 본 발명의 또 다른 실시예에 따르면, 와송 에탄올 추출물을 유효성분으로 함유하는 와송 기반 제재를 포함하는 아토피 피부염 완화용 화장품 조성물에 있어서, 상기 와송 기반 제재는 와송을 에탄올 내에 투입하여 와송 성분을 추출하여 형성된, 아토피 피부염 완화용 화장품 조성물을 제공한다.

상기 와송 기반 제재는 상기 와송 에탄올 추출물을 헥산, 디클로로메탄, 에틸아세테이트 및 부탄올 중 선택된 1종의 용매로 분류(fraction)하여 형성될 수 있다.

상기 아토피 피부염 완화용 화장품 조성물은 클렌징 샴프, 연고, 크림 및 미스트 중 적어도 1종의 제품에 사용될 수 있다.

또한, 본 발명의 또 다른 실시예에 따르면, 와송 에탄올 추출물을 유효성분으로 함유하는 와송 기반 제재를 포함하는 아토피 피부염 완화용 건강 보조 식품에 있어서, 상기 와송 기반 제재는 와송을 에탄올 내에 투입하여 와송 성분을 추출하여 형성된, 아토피 피부염 완화용 건강 보조 식품을 제공한다.

또한, 본 발명의 또 다른 실시예에 따르면, 와송 에탄올 추출물을 유효성분으로 함유하는 와송 기반 제재를 포함하는 아토피 피부염 완화용 반려동물 용품에 있어서, 상기 와송 기반 제재는 와송을 에탄올 내에 투입하여 와송 성분을 추출하여 형성된, 아토피 피부염 완화용 반려동물 용품을 제공한다.

상기 아토피 피부염 완화용 반려동물 용품은 반려동물용 샴푸, 반려동물용 연고, 반려동물용 크림 및 반려동물용 미스트 중 선택되는 1종일 수 있다.

본 발명의 실시예들에 따르면, 와송을 이용하여 아토피 피부염과 같은 질병을 효과적으로 완화할 수 있다.

도 1은 본 발명에서 사용되는 와송의 사진이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 와송 기반 제재의 제조 방법을 나타내는 순서도
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따라 제조된 와송 기반 제재의 독성 시험 결과를 나타내는 그래프
도 4는 에탄올 추출물의 RT-PCR 시험결과
도 5는 헥산 분리물 및 디클로로메탄 분리물의 RT-PCR 시험결과
도 6은 에틸아세테이트 분리물 및 부탄올 분리물의 RT-PCR 시험결과
도 7은 IL-8에 대한 ELISA 시험결과를 나타내는 그래프
도 8은 CCL-5에 대한 ELISA 시험결과를 나타내는 그래프
도 9는 CCL-17에 대한 ELISA 시험결과를 나타내는 그래프

이하, 도면을 참조하여 본 발명의 구체적인 실시형태를 설명하기로 한다. 그러나 이는 예시에 불과하며 본 발명은 이에 제한되지 않는다.

본 발명을 설명함에 있어서, 본 발명과 관련된 공지기술에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있다고 판단되는 경우에는 그 상세한 설명을 생략하기로 한다. 그리고, 후술되는 용어들은 본 발명에서의 기능을 고려하여 정의된 용어들로서 이는 사용자, 운용자의 의도 또는 관례 등에 따라 달라질 수 있다. 그러므로 그 정의는 본 명세서 전반에 걸친 내용을 토대로 내려져야 할 것이다.

본 발명의 기술적 사상은 청구범위에 의해 결정되며, 이하의 실시예는 본 발명의 기술적 사상을 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 효율적으로 설명하기 위한 일 수단일 뿐이다.

와송(Orostachys japonicas)은 돌나물과의 다년생 초본 식물로서, 오랫동안 간염, 폐렴, 지혈, 습진, 화상, 부종의 치료를 위한 치료제로 사용하여 왔으며, 약리 작용으로는 혈관 수축작용, 호흡 흥분 작용, 장관의 긴장도 증강 작용, 혈압 강화, 이뇨 작용 및 해열작용이 있다고 알려져 있다.

한편, 본 발명자들은 이러한 와송을 이용한 아토피 피부염 개선용 조성물을 개발하기 연구하던 중, 와송 추출물에 안정성과 안전성이 뛰어나고 아토피 피부염에 의한 염증을 완화시키는 피부 개선 효과가 매우 우수하다는 사실을 알 수 있었다.

본 발명에서 상기 와송(Orostachys japonicas) 추출물은 물 또는 에탄올을 사용하여 본 발명이 속하는 기술 분야의 통상의 기술자에게 알려진 정제 방법을 이용하여 추출 및 정제될 수 있다.

또한, 목적하는 추출물에 대해서 추가로 통상의 분류(fraction) 공정이 수행될 수 있으며, 바람직하게는 본 발명의 와송 기반 제재는 유기용매로서, 헥산, 디클로로메탄, 에틸아세테에트 및 부탄올을 사용하는 분류방법을 사용할 수 있다.

이러한 각종 유기용매를 이용하여 추출물을 분류하는 과정은 추출물(또는 분리물)이 가지고 있는 약리효과를 최대로 나타내는 분리물(fraction)을 찾아내게 하는 바, 필요 없는 물질을 분류과정을 통해 제거하여, 특정 효과를 나타내는 확성물질만이 최대로 농축된 추출물 상태를 만들 수 있게 한다. 이러한 분류 과정을 통해 천연식물의 추출물을 화장료 조성물 또는 건강보조식품의 소재로서의 활용도를 높일 수 있게 된다.

본 발명이 조성물이 화장료 조성물로 제조되는 경우, 본 발명의 조성물은 상술한 와송 추출물 뿐만 아니라 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨데 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함할 수 있다.

본 발명의 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로 플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸카보네이트, 에틸 아세테에트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면활성제-함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

아울러 본 발명은 와송 추출물, 이의 분리물을 유효성분으로 함유하는 아토피 피부염 완화용 건강 보조 식품을 제공한다.

본 발명의 건강 보조 식품은 와송 추출물, 이의 분리물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다.

상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없으며, 특히 반려동물에 이용될 수 있는 사료 및 이와 유사한 식품을 포함할 수 있다. 그 밖에 반려동물용이 아닌 사람을 위해서 사용될 수도 있으므로, 상기 식품에는 빵, 초콜릿, 캔디류 스낵류 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 낙농제품, 음료수, 차, 드링크제, 비타민 복합제 등이 있다.

본 발명의 건강 음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다.

상기 외에 본 발명의 와송 추출물, 이의 분리물은 여러가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다.

그 밖에 본 발명의 와송 추출물, 이의 분리물은 천연 과일 주스, 과일주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.

이하 본 발명을 실시예에 의하여 더욱 상세하게 설명한다. 하기 실시예는 단지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시에에 국한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 기술자에게 있어서 자명할 것이다.

와송 기반 제재의 제조 방법

<실시예 1>

도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 와송 기반 제재의 제조 방법을 나타내는 순서도이다.

도 2를 참조하면, 와송 기반 제재를 제조하는 방법은 다음의 단계에 따를 수 있다.

우선, 말린 와송(dried OJ)을 분말상으로 곱게 갈아서 75~85% 에탄올에 와송과 에탄올의 질량비를 1:10의 비율이 되도록 넣고, 40℃에서 24시간 동안 와송 내의 성분을 추출(EtOH extraction)할 수 있다(S10).

그리고, 상기 단계(S10)에서 추출하여 얻어진 와송 추출물을 감압건조(reduced pressure drying)하여 분말상으로 건조할 수 있다(S20).

<실시예 2>

다만, 와송 추출물에서 아토피 피부염의 완화에 보다 효과적인 성분을 분류(分溜, fraction)하기 위하여, 건조된 분말상의 와송 추출물을 증류수에 분산한 후 헥산(hexane)을 넣어서 44 내지 52 시간 중 2회 분류를 실시하여 헥산 용액에 녹는 와송 추출물 내의 물질을 분리할 수 있다(S30-1). 상기 용매인 헥산을 통해 와송 추출물 내에서 분리된 분리물을 감압건조를 하여 건조하여 각각 헥산 분리물(hexane fraction)을 획득할 수 있다.

<실시예 3>

또는, 와송 추출물을 디클로로메탄(dichloromethane)에 넣어서 44 내지 52 시간 중 2회 분류를 실시하여 디클로로메탄에 녹는 와송 추출물 내의 물질을 분리할 수 있다(S30-2). 상기 용매인 디클로로메탄을 통해 와송 추출물 내에서 분리된 분리물을 감압건조를 하여 건조하여 각각 디클로로메탄 분리물(dicholoromethane fraction)을 획득할 수 있다.

<실시예 4>

또는, 와송 추출물을 에틸아세테이트(ethylacetate)에 넣어서 44 내지 52 시간 중 2회 분류를 실시하여 에틸아세테이트에 녹는 와송 추출물 내의 물질을 분리할 수 있다(S30-3). 상기 용매인 에틸아세테에트를 통해 와송 추출물 내에서 분리된 분리물을 감압건조를 하여 건조하여 각각 에틸아세테에트 분리물(ethylacetate fraction)을 획득할 수 있다.

<실시예 5>

또는, 와송 추출물을 부탄올(butanol)에 넣어서 2일간 24 내지 52 시간 중 2회 분류를 실시하여 부탄올에 녹는 와송 추출물 내의 물질을 분리할 수 있다(S30-3). 상기 용매인 부탄올을 통해 와송 추출물 내에서 분리된 분리물을 감압건조를 하여 건조하여 각각 부탄올 분리물(butanol fraction)을 획득할 수 있다.

이하에서는, 에탄올 추출물, 헥산 분리물, 디클로로메탄 분리물, 에틸아세테이트 분리물, 부탄올 분리물에 대해서 독성 시험을 행한 결과와 아토피 피부염에 대한 효능을 확인하는 시험을 행한 결과를 설명한다.

제조된 와송 기반 제재의 독성 실험

<실시예 6>

와송으로부터 얻은 에탄올 추출물, 헥산 분리물, 디클로로메탄 분리물, 에틸아세테이트 분리물, 부탄올 분리물의 안전성을 확인하기 위하여 세포 독성 시험(MTT assay)를 행할 수 있다. 여기에서 세포주는 사람 각질형성세포(Human keratinocyte cell)인 HaCat를 사용할 수 있다.

세포 독성 시험은 다음과 같다.

① HaCat cell을 10% FBS가 첨가된 DMEM 배지에 37℃, 5% CO² incubator에서 키운다.

② 키운 세포를 2 × 10⁴ cell/ml 씩 96 웰(well)에 분주 후 24시간 배양을 한다.

③ 50, 100, 150, 200, 300 ug/ml 농도로 희석한 각각 추출물의 시료가 첨가 된 새 배지로 교체하고 24시간 배양한다.

④ 24시간 후 MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diph enyltetrazolium bromide)를 각 웰당 20 μl 첨가한 후 37℃, 5% CO² 인큐베이터(incubator)에서 2시간 배양한다.

⑤ 2시간 배양이 되면 형성된 fomazan을 200μl DMSO(dimethylsulfoxide)로 녹이고, 595nm에서 ELISA reader로 흡광도를 측정하여 세포생존율(cell viability)을 계산하였다.

[수학식 1]

세포생존율(%) = [(실험군-blank)/control] X 100

이러한 세포 독성 시험 결과는 도 3에서 나타난 그래프와 같다.

즉, 헥산 분리물의 경우에는 최고 농도 300 μg/mL 까지도 위험할 정도의 독성이 보이지 않았다. 그리고, 디클로로메탄 분리물의 경우에는 최고 농도 150 μg/mL까지도 위험할 정도의 독성이 보이지 않았다. 에틸아세테이트 분리물의 경우에는 최고 농도 100 μg/mL까지도 큰 독성이 보이지 않았으며, 부탄올 분리물의 경우에는 최고 농도 200 μg/mL 까지도 큰 독성이 보이지 않았다. 뿐만 아니라, 에탄올 추출물 및 물 추출물의 경우에는 최고 농도 300 μg/mL 까지도 큰 독성을 안보였다.

이러한 점을 통해, 어떠한 방식으로 추출·분리하더라도 이를 제재로 사용하였을 경우에 와송 성분에 의한 세포 독성은 없는 것으로 확인할 수 있다.

제조된 와송 기반 제재의 아토피 피부염 억제 시험

<실시예 7>

이하에서는 와송 기반 제재의 아토피 피부염 완화 효과를 측정하기 위하여 람 각질형성세포(Human keratinocyte cell)인 HaCat를 사용하여 시험을 행한 것을 설명한다.

시험은 두 가지로서 유전자레벨에서 측정한 RT-PCR 시험과 단백질레벨에서 측정한 ELISA 시험을 행한다.

측정지표로는 염증성 사이토카인/케모카인(Th2)의 일종인 CCL5 (Chemokine (C-C motif) ligand 5), CCL17 (Chemokine (C-C motif) ligand 17), IL-8 (Interleukin 8) 의 생산량 변화를 확인하였다..

RT-PCR을 이용한 유전자 발현량 평가는 다음과 같이 진행한다.

① HaCaT cell을 6-well plate에 1x10⁶ cell/ml로 분주하여 24시간 배양한다.

② 각각 well에 serum-free DMEM에 희석한 추출물, TNF-α(10 ng/ml)와 IFN-γ(10 ng/ml)를 24시간 처리한다.

③ Trizol을 이용하여 세포를 파괴하고 chloroform을 넣어주고 원심분리를 한다.

④ 맑은 층 상등액을 모아서 동량의 isopropyl alcohol을 넣은 후 원심분리를 하고 얻은 pellet을 70% EtOH로 세척한다.

⑤ 이렇게 모인 RNA를 cDNA 합성 kit를 사용하여 얻은 cDNA로 RT-PCR을 이용하여 CCL-5, CCL-17과 IL-8의 mRNA 발현량을 확인하였다. 사용한 primer는 다음과 같다. CCL-5, forward 5'-CTCGCTGTCATCCTCATTGC-3', reverse 5'-GGTTGGAGCACTTGCCAC-3'; CCL-17, forward 5'-CCCACTGAAGATGCTGGC-3' , reverse 5'-AACTGCATTCTTCACTCTCTTG-3'; IL-8, forward 5'-GCTCTCTTGGCAGCCTTC-3', reverse 5-'AACTTCTCCACAACCCTCTG-3'; and glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH), forward 5'-ATCATCAGCAATGCCTCCTG-3', reverse 5'-CCTGCTTCACCACCTTCTTG-3'.

각각의 염증성 사이토카인/케모카인의 분비량은 ELISA를 활용하여 다음과 같이 진행한다.

① HaCaT cell을 48-well plate에 1x10⁶ cell/ml로 분주하여 24시간 배양한다.

③ 각 well의 배양액을 취하여 CCL-5, CCL-17과 IL-8 ELISA kit (R&D system)를 사용하여 각각의 분비량을 측정하였다.

이에 따른 RT-PCR 시험 결과는 도 4 내지 도 6에 나타난 바와 같다. 도 4는 에탄올 추출물의 RT-PCR 시험결과이고, 도 5는 헥산 분리물 및 디클로로메탄 분리물의 RT-PCR 시험결과이며, 도 6은 에틸아세테이트 분리물 및 부탄올 분리물의 RT-PCR 시험결과이다.

IL-8의 경우 특히 에틸아세테이트 분리물 군에서 유전자 레벨에서 확연한 감소를 나타내며, CCL-5의 경우에는 특히 디클로로메탄 분리물 군에서 확연한 감소 효과를 나타낸다. CCL-17의 경우에는 모든 추출·분리물 군에서 감소 효과가 나타난다.

상기 방법에 따른 ELISA 시험 결과는 도 7 내지 도 9에 나타난 바와 같다. 도 7은 IL-8에 대한 ELISA 시험결과를 나타내는 그래프이고, 도 8은 CCL-5에 대한 ELISA 시험결과를 나타내는 그래프이며, 도 9는 CCL-17에 대한 ELISA 시험결과를 나타내는 그래프이다.

도 7 내지 도 9에서 나타내는 바와 같이 IL-8의 경우에는 에틸아세테이트 분리물에서 확연한 감소를 나타내며, CCL-5의 경우에는 디클로로메탄 분리물에서 확연한 감소를 나타낸다. 그리고, CCL-17의 경우에는 모든 추출·분리물 군에서 확연한 감소 효과가 나타난다.

위의 실험결과에서 나타나는 바와 같이, 피부세포의 아토피 피부염 상황에서 증가하는 IL-8, CCL-5, CCL-17이 와송에서 추출·분리된 물질로 처리시 확연히 감소하는 것을 확인할 수 있다.

본 발명의 일 실시에에 의해 제조된 와송 기반 제재는 연고제 또는 스프레이형으로 제조될 수 있다. 여기에서, 연고제는 피부에 직접 도포하는 타입이며, 스프레이는 피부 상에 분사하는 타입으로 사용될 수 있다.

이상에서 대표적인 실시예를 통하여 본 발명에 대하여 상세하게 설명하였으나, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자는 상술한 실시예에 대하여 본 발명의 범주에서 벗어나지 않는 한도 내에서 다양한 변형이 가능함을 이해할 것이다. 그러므로 본 발명의 권리범위는 설명된 실시예에 국한되어 정해져서는 안 되며, 후술하는 특허청구범위뿐만 아니라 이 특허청구범위와 균등한 것들에 의해 정해져야 한다.

Claims

말린 와송을 갈아서 에탄올 내에 투입하여 상기 와송의 성분을 추출하는 단계;
상기 와송 성분 추출물을 감압건조하여 분말상으로 형성하는 단계;를 포함하는, 와송 기반 제재의 제조 방법.
청구항 1에 있어서,
상기 와송 성분 추출물을 용매를 통해 분류(分溜)하여 상기 용매에 녹는 성분을 분리하는 단계를 더 포함하는, 와송 기반 제재의 제조 방법.
청구항 2에 있어서,
상기 용매는 헥산(hexane), 디클로로메탄(dichloromethane), 에틸아세테이트(ethylacetate), 부탄올(butanol) 중 선택되는 1종인, 와송 기반 제재의 제조 방법.
청구항 2에 있어서,
상기 분류는 44 내지 52 시간 중 2회 실시되는, 와송 기반 제재의 제조 방법.
청구항 1 내지 4 중 한 항의 와송 기반 제제의 제조 방법에 의해 제조된 와송 기반 제재.
와송 에탄올 추출물을 유효성분으로 함유하는 와송 기반 제재를 포함하는 아토피 피부염 완화용 화장품 조성물에 있어서, 상기 와송 기반 제재는 와송을 에탄올 내에 투입하여 와송 성분을 추출하여 형성된, 아토피 피부염 완화용 화장품 조성물.
청구항 6에 있어서,
상기 와송 기반 제재는 상기 와송 에탄올 추출물을 헥산, 디클로로메탄, 에틸아세테이트 및 부탄올 중 선택된 1종의 용매로 분류(fraction)하여 형성되는, 아토피 피부염 완화용 화장품 조성물.
청구항 6 또는 7에 있어서,
상기 아토피 피부염 완화용 화장품 조성물은 클렌징 샴프, 연고, 크림 및 미스트 중 적어도 1종의 제품에 사용되는, 아토피 피부염 완화용 화장품 조성물.
와송 에탄올 추출물을 유효성분으로 함유하는 와송 기반 제재를 포함하는 아토피 피부염 완화용 건강 보조 식품에 있어서, 상기 와송 기반 제재는 와송을 에탄올 내에 투입하여 와송 성분을 추출하여 형성된, 아토피 피부염 완화용 건강 보조 식품.
청구항 9에 있어서,
상기 와송 기반 제재는 상기 와송 에탄올 추출물을 헥산, 디클로로메탄, 에틸아세테이트 및 부탄올 중 선택된 1종의 용매로 분류(fraction)하여 형성되는, 아토피 피부염 완화용 건강 보조 식품.
와송 에탄올 추출물을 유효성분으로 함유하는 와송 기반 제재를 포함하는 아토피 피부염 완화용 반려동물 용품에 있어서, 상기 와송 기반 제재는 와송을 에탄올 내에 투입하여 와송 성분을 추출하여 형성된, 아토피 피부염 완화용 반려동물 용품.
청구항 11에 있어서,
상기 와송 기반 제재는 상기 와송 에탄올 추출물을 헥산, 디클로로메탄, 에틸아세테이트 및 부탄올 중 선택된 1종의 용매로 분류(fraction)하여 형성되는, 아토피 피부염 완화용 반려동물 용품.
청구항 11에 있어서,
상기 아토피 피부염 완화용 반려동물 용품은 반려동물용 샴푸, 반려동물용 연고, 반려동물용 크림 및 반려동물용 미스트 중 선택되는 1종인, 아토피 피부염 완화용 반려동물 용품.