KR20210056283A - 대두 추출물을 포함하는 불면증 예방 또는 치료용 조성물 및 이의 제조방법 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 대두 (Glycine max Merr) 추출물을 포함하는 불면증 예방 및 치료용 약학 조성물 및 개선용 건강기능 식품 조성물 및 그 제조방법에 관한 것으로, 본 발명에 따른 대두(Glycine max Merr) 추출물은 불면증, 수면 개선 효과가 있는 바, 불면증 치료 또는 수면 개선용 조성물로서 약학적 이용이 가능할 뿐 아니라 건강기능식품으로서도 유용하게 이용될 수 있으며, 이를 통해 인체에 안전하여 부작용이 적은 바, 수면 개선 효과 또는 불면증 예방 또는 치료 효과가 우수한 약학 및 식품 조성물을 제공할 수 있다.
Description
본 발명은 대두(Glycine max Merr) 추출물을 포함하는 불면증 예방 또는 치료용 약학 조성물 또는 개선용 식품 조성물 및 건강기능식품에 관한 것이다.
불면증은 수면 상태의 유도 또는 유지에 대한 지속적인 어려움으로 정의된다. 인간의 수면은 비렘 수면(non-rapid eye movement-sleep)과 렘 수면(rapid eye movement-sleep)으로 구분되며, 정상 성인의 밤 수면은 4회 내지 6회의 비렘 수면과 렘 수면의 주기가 반복된다고 보고되고 있다. 수면은 대개 비렘 수면으로 시작하여 점점 깊은 수면으로 들어가며, 이러한 수면 주기가 정상적으로 반복되지 않는 경우에도 수면 장애가 일어나게 된다. 수면이 부족하게 되면 졸리고 짜증이 나거나 활력이 없어져 삶의 질이 손실된다. 경우에 따라서는 생명유지에 중대한 지장을 초래할 수도 있다. 약 성인 12 내지 15%이 만성 불면증에 시달리고 있으며, 신체 또는 정신적 질병을 동반하는 성인에게서 더욱 높은 비율로 나타난다.
현재, 불면증 치료에 흔히 사용되는 약물에는 벤조디아제핀/비-벤조디아제핀(benzodiazepines(BZD)/non-benzodiazepines; GABAA 수용체 작용제), 진정성 항우울제(트리사이클릭 항우울제, 5-하이드록시트립타민 수용체 길항제) 및 항히스타민과 같은 최면성 약제들이 포함된다. 전통적으로, 벤조디아제핀계 약물은 수면 장애 치료에 처방되어 왔으나, 어떤 약제는 진정 효과가 잔류하여 인지 기능, 기억력 및 일반적인 주간 활동을 저해하는 단점을 갖는다. 따라서 수면의 질은 향상시키고 부작용은 감소시키기 위하여 처방 의약을 대체할 천연물 약제에 대한 관심이 높아지고 있다.
서양에 알려진 불면증 처방용 천연 약재로는 고추나물(St John's wort), 서양쥐오줌풀(Valeriana officinalis), 홉(Humulus lupulus), 황금추출물(Scutellaria laterifolia) 등이 있다. 아시아에는 오미자(Schisandra sphenanthera) 및 용안(Euphoria longana)와 같은 약용 식물이 진정 수면 효과를 갖는 것으로 알려져 있고, 한국에서는 수면 장애를 개선하기 위하여 몇 가지 약용 식물들이 더 알려져 있다(선행문헌 1 내지 5). 그러나, 천연 약재의 진정 수면 효과에 대한 보고는 적다.
진정 수면 작용의 분자적 목표는, 완화, 스트레스 및 수면 조절에 대한 다양한 정신 작용에 관련된 가바성(GABAergic) 및 세로토닌성(serotonergic) 시스템에 주로 맞추어져 있다. 중추신경계 내 주요 억제성 신경전달물질인 가바(GABA, gamma-aminobutyric acid)는 신경 흥분 및 억제의 균형을 유지하는 것으로 보고되었다. 가바성 신경전달은 수면 조절에 중요한 역할을 수행하고, 가바 수용체의 벤조다이제핀 결합 부위는 진정 수면제 개발의 가장 중요한 목표 중 하나로 인식되어 왔다. 벤조다이제핀 성분은 염소 이온의 유입을 통한 세포막의 과분극 현상을 초래하는 가바의 능력을 촉진한다. 그 결과, 신경전달물질이 억제되고, 그에 따라 진정 수면, 불안 완화 및 경련 예방 효과를 가져온다. G 단백질과 결합하는 것으로 알려진 5-하이드록시트립타민2(5-hydroxytryptamine, 5HT2: 5-HT2A, 5-HT2B, 5-HT2C) 수용체는 기분, 수면 및 포만감과 같은 다양한 중추신경계 기능에 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 특히, 5-HT2C 수용체는 진정 수면제 또는 불안완화제의 잠재적인 작용 목표이고, 또한 증가된 칼슘 이온에 매개된 5-HT2C 수용체에 의해 변조되는 것으로 보고되었다.
멜라토닌(N-acetyl-5-methoxytryptamine)은 송과선에서 아릴알킬아민 N-아세틸전환효소(arylalkylamine N-acetyltransferase, AANAT; acetyl coenzyme A; serotonin N-acetyltransferase; EC2.3.1.5) 및 하이드록시인돌-O-메틸전환효소(hydroxyindole-O-methyltransferase)에 의하여 세로토닌으로부터 합성된다. 아릴알킬아민 N-아세틸전환효소는 그 활성을 조절하여 일주기 리듬을 조절하고, 멜라토닌 합성에 중요한 역할을 한다. 멜라토닌은 노인 집단에서 면역 이상, 우울증, 일주기 리듬 수면 장애 및 불면증에 대한 치료법으로 보고되었다.
한편, 대두(Glycine max Merr)의 생리활성 물질로는 콩단백질(protein), 올리고당(Oligosaccharide), 식이섬유(Dietary fiber), 이소플라본(Isoflavone), 사포닌(Saponin), 레시틴(Lecithin), 피틴탄(Phytic acid), 단백질분해효소 억제제(Trypsin inhibitor), 피니톨(Pinitol) 등이 보고되고 있다. 많은 수의 임상 연구들과 실험들에 의하여 이러한 성분들이 항암, 항산화, 항염증 및 중추신경계 억제 효과와 같은 신경보호효과와 같은 다양한 효능이 있음이 보고되고 있다.
이렇듯 불면증을 치료하는 합성 의약품의 단점을 보완할 천연 약용 식물에 대한 연구가 다소 있기는 하나, 진정 수면성 약초에 대한 분석 연구는 그 수가 적다. 따라서 보다 효과적인 천연 진정 수면성 약용식물 개발이 요구된다.
이러한 배경 하에, 본 발명자들은 대두 추출물이 불면증에 효과가 있음을 확인하여, 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 하나의 목적은 대두(Glycine max Merr) 추출물을 유효성분으로 포함하는 불면증 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 하나의 목적은 대두 추출물을 유효성분으로 포함하는 불면증 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 하나의 목적은 상기 식품 조성물을 포함하는 건강기능식품을 제공하는 것이다.
이를 구체적으로 설명하면 다음과 같다. 한편, 본 출원에서 개시된 각각의 설명 및 실시형태는 각각의 다른 설명 및 실시 형태에도 적용될 수 있다. 즉, 본 출원에서 개시된 다양한 요소들의 모든 조합이 본 출원의 범주에 속한다. 또한, 하기 기술된 구체적인 서술에 의하여 본 출원의 범주가 제한된다고 볼 수 없다.
상기 과제를 해결하기 위한 본 발명의 하나의 양태는 대두(Glycine max Merr) 추출물을 유효성분으로 포함하는 불면증 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명에서 용어, "대두(Glycine max Merr)"는 콩의 한 종류로, 국내에선 백태, 메주콩, 콩나물콩 등으로 부른다. 상기 대두는 용도가 다양하여 각종 장류, 콩기름, 두부, 두유, 콩나물 및 대두단백과 같은 기타 식품원료를 만들 때 쓰인다. 대두 자체의 구조상 날대두는 거의 소화되지 않으므로 반드시 가열해서 섭취해야 한다.
본 발명에서 용어, "추출물"은 상기 대두를 추출 처리하여 얻어지는 추출액, 상기 추출액의 희석액이나 농축액, 상기 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 상기 추출액의 조정제물이나 정제물, 또는 이들의 혼합물 등 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 제조 가능한 모든 제형의 물질을 포함한다.
상기 대두 추출물을 제조하는 방법은 초음파 추출법, 여과법 및 환류추출법 등 당업계의 통상적인 추출방법을 사용할 수 있다. 구체적으로 대두에 알코올을 가하여 환류추출한 추출물일 수 있으며, 보다 구체적으로 탄소수 1 내지 4(C1~C4)의 저급알코올로 추출한 추출물일 수 있고, 더욱 구체적으로 메탄올 또는 에탄올로 추출한 추출물일 수 있다. 이때, 추출용매는 대두의 건조중량의 2~20 배로 하는 것이 바람직하다. 일례로 대두를 세절한 후 추출용기에 넣고 C1~C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매, 바람직하게는 메탄올 또는 에탄올을 넣고 환류추출하여 알코올 추출물을 얻을 수 있다. 이때, 상기 추출한 이후에 농축 또는 동결건조 등의 방법을 추가적으로 거칠 수 있다. 또는 시중에 판매되고 있는 대두 추출물을 구입하여 사용할 수 있다.
상기 추출물은 정제수를 포함한 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 또는 이들의 혼합용매 추출물일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
나아가, 추출 온도는 당업자가 추출 방법에 적절한 다양한 온도 범위를 채택할 수 있으나, 이에 국한되지 않는다. 또한, 추출시간은 추출방법에 따라 상이하므로, 당업자가 적절한 추출시간을 채택할 수 있으며, 단회 또는 복수회로 수행될 수 있다. 상기 1차 추출 용매로 추출을 수행하여 얻어진 추출물은 통상의 방법에 따라 여과하여 불순물을 제거한 액상 형태로 얻거나, 얻어진 액상 형태의 추출물을 통상의 방법에 따라 감압농축 및/또는 건조하여 분말 형태로 얻을 수 있다.
또한, 상기 추출공정은 필요에 따라, 유효성분의 함량이 높은 분획을 얻는 단계를 더 포함할 수 있다. 즉, 상기 1차 추출 용매로 추출하여 얻어진 추출물을 물에 분산시킨 후, 적절한 2차 추출 용매, 예컨대, 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올로 추출하는 단계를 수행하여 유효성분의 함량을 증진시킬 수 있다.
본 발명에 따른 대두 추출물은 제니스틴(Genistein)을 다량 포함하는 것일 수 있다.
본 발명에서 용어, "불면증(insomnia)"은 수면을 이루지 못하는 것을 의미하며, 정신 질환의 종류 및 진행 정도에 따라 그 정도에 차이가 있을 수 있다.
본 발명에서 용어, "수면"은 잠을 자는 일 또는 활동을 쉬는 상태를 비유적으로 이르는 말로, 피로가 누적된 뇌의 활동을 주기적으로 회복하는 생리적인 의식 상실상태를 의미한다. 구체적으로, 수면은 외부 환경을 인식하고 반응하는 능력이 가역적, 반복적, 정상적으로 정지 되어 있는 움직이지 않는 상태를 의미한다.
본 발명에서 용어, "예방"은 상기 조성물의 투여에 의해 불면증을 억제하거나 발병을 지연시키는 모든 행위를 의미하며, "치료"는 상기 조성물의 투여에 의해 불면증에 의한 증세가 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다. 본 발명에 있어서, 상기 불면증의 예방 또는 치료는 수면 개선과 동일한 의미로 사용될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형체 또는 희석제를 추가로 포함할 수 있다. 이때, 상기 약학적 조성물에 포함되는 유효성분의 함량은 특별히 이에 제한되지 않으나, 조성물 총 중량에 대하여 0.0001 중량% 내지 10 중량%로, 바람직하게는 0.001 중량% 내지 1 중량%를 포함할 수 있다.
상기 약학적 조성물은 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제, 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제 및 좌제으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형을 가질 수 있으며, 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구 투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용된다. 경구 투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테로 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물은 경구 투여용일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여할 수 있다.
본 발명에서 용어, "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 개체 종류 및 중증도, 연령, 성별, 질병의 종류, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 그리고 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물 형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 조성물은 1일 0.0001 내지 500mg/kg으로, 바람직하게는 0.001 내지 200mg/kg으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 조성물은 렛트, 가축, 인간 등의 다양한 포유동물에 다양한 경로로 투여할 수 있으며, 투여의 방식은 당업계의 통상적인 방법이라면 제한없이 포함하며, 예를 들어, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관 내 주사에 의해 투여될 수 있다. 구체적으로는 경구 투여일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
또한, 본 발명의 약학적 조성물은 인간에 적용되는 의약품뿐만 아니라, 동물 의약품의 형태로도 사용될 수 있다. 여기에서, 동물이란 가축 및 애완동물을 포함하는 개념이다.
본 발명에 따른 불면증 예방 또는 치료는 대두 추출물에 포함된 제니스틴(Genistein)에 의해 달성되는 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 다른 하나의 양태는 대두 추출물을 유효성분으로 포함하는 불면증 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.
상기 대두 추출물 및 불면증에 대해서는 전술한 바와 같다.
상기 추출물은 정제수를 포함한 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 또는 이들의 혼합용매 추출물일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 유효성분은 불면증의 예방 또는 개선을 목적으로 식품 조성물에 첨가할 수 있다. 본 발명의 유효성분을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 유효성분을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효성분의 혼합량은 사용 목적에 따라 적합하게 결정할 수 있으며, 상기 식품 조성물에 포함되는 유효성분의 함량은 특별히 이에 제한되지 않으나, 조성물 총 중량에 대하여 0.0001 중량% 내지 10 중량%로, 바람직하게는 0.001 중량% 내지 1 중량%를 포함할 수 있다.
본 발명의 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 유효성분을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있고, 통상적인 의미에서의 식품을 모두 포함할 수 있으며, 동물을 위한 사료로 이용되는 식품을 포함할 수 있다.
상기 외에 본 발명의 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄 산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 또한, 상기 식품은 공지의 제조방법에 따라 정제, 과립, 분말, 캅셀, 액상의 용액 및 환 등의 제형으로도 제조될 수 있다. 본 발명에 따른 유효성분을 포함하는 것 이외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며, 통상의 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가성분으로 포함할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다.
본 발명에서 상기 건강보조식품은 건강기능식품 및 건강식품 등을 포함할 수 있다.
상기 건강 기능(성) 식품(functional food)이란, 특정보건용 식품(food for special health use, FoSHU)과 동일한 용어로, 영양 공급 외에도 생체조절기능이 효율적으로 나타나도록 가공된 의학, 의료효과가 높은 식품을 의미한다. 여기서 "기능(성)"이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건용도에 유용한 효과를 얻는 것을 의미한다.
본 발명의 식품은 당업계에서 통상적으로 사용되는 방법에 의하여 제조가능하며, 상기 제조시에는 당업계에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한 상기 식품의 제형 또한 식품으로 인정되는 제형이면 제한 없이 제조될 수 있다. 본 발명의 식품 조성물은 다양한 형태의 제형으로 제조될 수 있으며, 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있고, 휴대성이 뛰어날 수 있다.
본 발명의 또 하나의 양태는 상기 식품 조성물을 포함하는 건강기능식품을 제공한다.
상기 식품 조성물 및 건강기능식품은 전술한 바와 같다.
본 발명에 따른 대두(Glycine max Merr) 추출물은 불면증, 수면 개선 효과가 있는 바, 불면증 치료 또는 수면 개선용 조성물로서 약학적 이용이 가능할 뿐 아니라 건강기능식품으로서도 유용하게 이용될 수 있으며, 이를 통해 인체에 안전하여 부작용이 적은 바, 수면 개선 효과 또는 불면증 예방 또는 치료 효과가 우수한 약학 및 식품 조성물을 제공할 수 있다.
도 1은 본 발명의 대두(Glycine max Merr) 에탄올 추출물을 투여한 렛트의 활동시간(불면)에 대한 EEG(Electroencephalogram) 조사한 결과를 나타낸 것이다. 각 자료는 평균±표준편차 이다.
도 2는 본 발명의 대두 에탄올 추출물을 투여한 렛트의 렘 수면시간에 대한 EEG 조사한 결과를 나타낸 것이다. 각 자료는 평균±표준편차 이다.
도 3은 본 발명의 대두 에탄올 추출물을 투여한 렛트의 비렘 수면시간에 대한 EEG 조사한 결과를 나타낸 것이다. 각 자료는 평균±표준편차 이다.
도 4는 제니스틴(Genistein)을 투여한 렛트의 활동시간을 확인한 도이다.
도 5는 제니스틴을 투여한 렛트의 렘 수면시간을 확인한 도이다.
도 6은 제니스틴을 투여한 렛트의 비램 수면시간을 확인한 도이다.
도 7은 대두 에탄올 추출물을 투여한 랫트 및 제니스틴을 투여한 랫트의 PVN(paraventricular nucleus)에서의 CRF 면역반응성 뉴런의 수를 나타낸 도이다. (A) PVN에서의 CRF(corticotropin-releasing factor)의 평균(±SEM) 발현. 대표 이미지는 (B) 정상 그룹, (C) 스트레스 그룹, (D) 스트레스+대두 400mg/kg 투여군 및 (E) 스트레스+제니스틴 30 mg/kg 투여군에서의 CRF-면역반응성 뉴런의 수를 보인다. *** P<0.001 vs 정상 그룹, ## P<0.01, #P<0.05 vs 대조군 그룹; one-way ANOVA. 현미경 사진은 x200 배율로 촬영되었다.
도 2는 본 발명의 대두 에탄올 추출물을 투여한 렛트의 렘 수면시간에 대한 EEG 조사한 결과를 나타낸 것이다. 각 자료는 평균±표준편차 이다.
도 3은 본 발명의 대두 에탄올 추출물을 투여한 렛트의 비렘 수면시간에 대한 EEG 조사한 결과를 나타낸 것이다. 각 자료는 평균±표준편차 이다.
도 4는 제니스틴(Genistein)을 투여한 렛트의 활동시간을 확인한 도이다.
도 5는 제니스틴을 투여한 렛트의 렘 수면시간을 확인한 도이다.
도 6은 제니스틴을 투여한 렛트의 비램 수면시간을 확인한 도이다.
도 7은 대두 에탄올 추출물을 투여한 랫트 및 제니스틴을 투여한 랫트의 PVN(paraventricular nucleus)에서의 CRF 면역반응성 뉴런의 수를 나타낸 도이다. (A) PVN에서의 CRF(corticotropin-releasing factor)의 평균(±SEM) 발현. 대표 이미지는 (B) 정상 그룹, (C) 스트레스 그룹, (D) 스트레스+대두 400mg/kg 투여군 및 (E) 스트레스+제니스틴 30 mg/kg 투여군에서의 CRF-면역반응성 뉴런의 수를 보인다. *** P<0.001 vs 정상 그룹, ## P<0.01, #P<0.05 vs 대조군 그룹; one-way ANOVA. 현미경 사진은 x200 배율로 촬영되었다.
이하 본 출원을 실시예에 의해 보다 상세하게 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 출원을 예시적으로 설명하기 위한 것으로, 본 출원의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것은 아니며, 본 출원이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어 명백할 것이다.
실시예 1. 대두 추출물의 제조
대두(Glycine max Merr) 추출물은 다음과 같이 준비하였다. 대두 50g에 1L의 70% 알코올을 가하여 250℃에서 3시간 동안 환류하여 추출하였다. 추출물은 여과지(whatman filter paper No. 6,Whatman, Newton, MA, USA)로 여과한 후, 회전진공농축기로 감압농축 하여 동결건조 한 다음 -20℃에 보관하며 실험에 사용하였다.
본 발명에 따른 대두 추출물은 제니스틴(Genistein)을 다량 포함하는 것을 확인하였다.
실시예 2. 동물 모델의 제조
실험동물은 다음과 같이 준비하였다. 성숙한 male Sprague Dawley 흰 렛트(SD Rat-7주령, 200-250g)를 준비하여 1주일간 안정화시킨 후에 시험 목적에 맞게 정상군(스트레스 유발 없음: 생리식염수 경구 투여), 음성대조군(스트레스 유발 및 생리식염수 경구 투여)과 항 스트레스 유발, 항 불안 및 뇌파 촉진 가능성이 있는 것으로 추정되는 대두 추출물을 경구 투여한 대두 추출물 투여군으로 분류하여 하기의 실험들을 시행하였다. 모든 동물은 샘타코(SAMTACO, Osan, Kyungki-Do, Korea)로부터 구입하여, 항온(23-25℃), 항습(45-60%), 조명: 200-300LUX, 12시간/1일, 소음: 40dB 이하, 적정한 식이와 음수 조건, 기타 스트레스 자극이 없는 환경으로 사육하였다. 각 동물들은 물과 식이를 자유 공급 하였고, 실험 수행 최소 7일 이전부터 매일 관리하였다. 모든 동물 관리 및 실험 조건은 경희대학교 의과대학의 동물실험 관련위원회(Institutional Animal Care and Use Committee) 규정을 준수하였다.
실시예 3. EEG(Electroencephalogram) 측정
실시예 2의 정상군, 음성대조군, 대두 추출물 투여군에 각 생리식염수 및 대두 추출물을 투여하고 후 24시간 후에, 펜토바르비탈나트륨(80 mg/kg, i.p.)으로 깊이 마취시켰다. 마취된 렛트를 입체 고정기(stereotaxic instrument, Stoelting CO, USA)에 위치시키고 정수리점(bregma) 및 시옷점(lambda)이 수평이 되게 고정, Paxinos 및 Watson의 해부도에 따라 드릴로 구멍을 내고 전극을 경막에 닿도록 삽입하였다. 근전도 기록을 위해 목 근육에 두 가닥의 은선 전극을 삽입하였다. 뇌파 기록전극 및 근전도 기록전극의 연결된 핀들을 소뇌상부 두개골 위에 위치시키고 치과용 시멘트를 발라서 두개골 상부에 고정하였다. 수술 회복 후, 렛트를 실험 조건에 적응시킨 후, 행동실험을 시행하였다. EEG 레코딩(8:00 pm부터 12시간동안)을 진행한다.
본 실시예에서 EEG는 수면뇌파검사로, 대두 추출물의 수면 개선 효과를 측정하였다. 실험 결과는 도 1 내지 3과 같다.
대두 에탄올 추출물 400mg/kg의 다양한 용량을 적용하고 EEG를 측정한 결과, 도 1과 같이, 총 활동시간(Total wake time)에서 기준선은 440s, 에탄올 추출 400mg/kg에서는 420s의 결과를 나타내었으며, 각 그룹은 기준선과 차이가 없었다.
또한, 도 2 및 도 3과 같이 대두 에탄올 추출물 400mg/kg 투여군에서 렘 수면시간 및 비렘 수면시간이 대조군에 비해 증가한 것을 확인하였다.
실시예 4. CRF 면역조직화학
실시예 1의 대두 추출물 400mg/kg 또는 제니스틴 30mg/kg을 실시예 2의 방법으로 투여하고 24시간 후에, 모든 렛트를 펜토바르비탈나트륨(80 mg/kg, i.p.)으로 깊이 마취시켰다. 포름알데히드의 4% 용액(Sigma-Aldrich St. Louis, MO, USA)으로 경심 관류(transcardial perfusion)시킨 후 뇌를 제거하고, 그 후 24시간 동안 동일한 고정액으로 후-고정시키고, 72시간 동안 20% 수크로스를 함유하는 PBS 내에 위치시켰다. 저온 유지 장치 마이크로톰(cryostat microtome, CM1850UV, Leica Microsystems Inc., Wetzlar, Germany)을 이용하여 30 μm 두께의 연속적인 관상 절개로 절단하였다. 절단물을 -20℃에서 보관하고 이들 슬라이스를 자유-부유 절단물으로서 조직화학적으로 처리하였다. 뇌 절단물을 0.2% 트리톤(Triton) X-100를 함유하는 PBS (PBST)로 3회 세척하였다. CRF(corticotropin-releasing factor)에 대항하는 일차 염소 모노클로날 항체(10% v/v 일반 염소 혈청과 함께 PBST 내에서 1:2000으로 희석됨, Santa Cruz Biotechnology, Inc., Texas, USA)를 사용하였으며 절단물을 일정하게 교반하면서 4℃에서 72시간 동안 인큐베이션하였다. PBST로 세척한 후, 절단물을 2%v/v 일반 염소 혈청을 갖는 PBST 내에서 1:2000으로 희석된 비오틴화 토끼 항-염소(Vector Laboratories, Inc., Burlingame, CA, USA)와 함께 실온에서 2시간 동안 인큐베이션하였다. 그런 다음 절단물을 실온에서 아비딘-비오틴-퍼옥시다아제 복합 시약(Vector Laboratories, Inc., Burlingame, CA, USA) 내에서 2시간 동안 인큐베이션하였다. PBST로 추가 세척한 후, 조직을 디아미노벤즈아딘 퍼옥사다아제 기질 키트(Vector Laboratories, Inc., Burlingame, CA, USA)를 사용하여 현상시켰다. 절단물을 슬라이드에 올리고 공기건조시킨 후 현미경 관찰을 위해 커버 글래스로 덮었다. PVN(paraventricular nucleus)에서의 면역양성 뉴런의 수를 Paxinos 및 Watson의 방법에 따라 100 x 100 μm를 측정하는 현미경 직사각형 격자(microscope rectangle grid)를 사용하여 200x 배율로 계수하였다.
그 결과, 도 4와 같이 제니스틴 투여군에서는 활동시간이 대조군에 비해 감소하였고, 도 5 및 도 6과 같이 제니스틴 투여군에서는 렘 수면시간 및 비렘 수면시간이 대조군에 비해 증가하였다.
또한, 대두 추출물 투여군 및 제니스틴 투여군에서 CRF 면역반응성을 확인한 결과, PVN에서의 CRF 면역반응성 뉴런의 수가 대두 추출물 투여군 및 제니스틴 투여군에서 더 적은 것을 확인하였다[p<0.05](도 7a).
상기 실시예로부터, 대두(Glycine max Merr) 추출물 및 상기 대두 추출물 내 포함된 제니스틴은 불면증, 수면 개선 효과가 있는 바, 불면증 치료 또는 수면 개선용 조성물로서 약학적 이용이 가능할 뿐 아니라 건강기능식품으로서도 유용하게 이용될 수 있으며, 이를 통해 인체에 안전하여 부작용이 적은 바, 수면 개선 효과 또는 불면증 예방 또는 치료 효과가 우수한 약학 및 식품 조성물을 제공할 수 있다.
이상의 설명으로부터, 본 출원이 속하는 기술분야의 당업자는 본 출원이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 본 출원의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 출원의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.
Claims (5)
- 대두(Glycine max Merr) 추출물을 유효성분으로 포함하는 불면증 예방 또는 치료용 약학 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 추출물은 정제수를 포함한 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 또는 이들의 혼합용매 추출물인, 약학 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 불면증 예방 또는 치료는 대두 추출물에 포함된 제니스틴(Genistein)에 의해 달성되는 것인, 약학 조성물.
- 대두 추출물을 유효성분으로 포함하는 불면증 예방 또는 개선용 식품 조성물.
- 제4항의 식품 조성물을 포함하는 건강기능식품.
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