KR20210047301A - 암을 치료하는 방법에서 사용하기 위한 접합체 - Google Patents

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KR20210047301A
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마리앤 애시포드
스리비드야 발라찬더
데이비드 오웬
크리스토퍼 존 해밀턴 포터
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아스트라제네카 아베
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Abstract

개체에서 암을 치료하는 방법이 개시되어 있으며, 이때 이 방법은 개체에 화학식 I의 덴드리머 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효량으로 피하 투여하는 단계를 포함한다:
[화학식 I]

Description

암을 치료하는 방법에서 사용하기 위한 접합체
관련 출원
본 출원은 2018년 8월 17일자로 출원된 미국 특허 가출원 제62/719,314호에 대한 35 U.S.C. §119(e) 하의 우선권의 이익을 주장하며, 이의 내용은 그 전체가 본원에서 참고로 포함된다.
Bcl-2 및 Bcl-XL은 BCL-2 단백질 패밀리의 중요한 항-세포자멸성 멤버이고 세포 생존의 주요 조절자이다(문헌[Chipuk JE et al., The BCL-2 family reunion, Mol.Cell 2010 Feb 12; 37(3): 299~310]). 이들 중요한 생존 인자의 유전자 전좌, 증폭 및/또는 단백질 과발현은 다수의 암 유형에서 관측되었으며, 암의 발생 및 진행에 광범위하게 연관되어 있다(문헌[Yip et al., Bcl-2 family proteins and cancer, Oncogene 2008 27, 6398~6406]; 및 문헌[Beroukhim R. et al., The landscape of somatic copy-number alteration across human cancers, Nature 2010 Feb 18; 463 (7283): 899~905]). 다수의 악성 종양에서, BCL-2 및/또는 BCL-XL은 또한 약물 내성 및 재발을 매개하는 것으로 나타나 있으며, 좋지 않은 예후와 강하게 연관되어 있다(문헌[Robertson LE et al. Bcl-2 expression in chronic lymphocytic leukemia and its correlation with the induction of apoptosis and clinical outcome, Leukemia 1996 Mar; 10(3): 456~459]; 및 문헌[Ilievska Poposka B. et al., Bcl-2 as a prognostic factor for survival in small-cell lung cancer, Makedonska Akademija na Naukite i Umetnostite Oddelenie Za Bioloshki i Meditsinski Nauki Prilozi 2008 Dec; 29(2): 281~293]).
항-세포자멸성 BCL2 패밀리 단백질은 BIM, PUMA, BAK 및 BAX와 같은 전세포자멸성 단백질에 결합하고 이들의 세포사멸 유도 활성을 중화시킴으로써 암 세포의 생존을 용이하게 한다(문헌[Chipuk JE et al., infra; and Yip et al, infra]). 따라서 BCL-2 및 BCL-XL만을 치료학적으로 표적화하거나, 세포 독성 화학 요법제, 프로테아좀 억제제 또는 키나아제 억제제와 같은 단백질의 BCL-2 패밀리 주축에 영향을 미치는 기타 요법을 병용하여 치료학적으로 표적화하는 것이 암을 치료할 수 있고 다수의 인간 암에서 약물 내성을 극복할 수 있는 매력적인 전략이다(문헌[Delbridge, ARD et al., The BCL-2 protein family, BH3-mimetics and cancer therapy, Cell Death & Differentiation 2015 22, 1071~1080]).
세포 능력(cell potency)뿐 아니라 후보 화합물을 적절히 허용 가능한 약품으로 개발하기 위해, 화합물은 다수의 부가적인 물성을 갖고 이를 나타내야 한다. 이들 물성으로는 적절한 투여 형태로 제형화하기 위한 적절한 물리 화학적 물성(예를 들어, 용해성, 안정성, 제조 가능성), 적절한 생명 약학 물성(예를 들어, 투과성, 용해성, 흡수, 생물학적 이용 가능성, 생물학적 조건 하의 안정성, 약동학적 및 약력학적 거동) 및 허용 가능한 치료 지수를 제공하기 위한 적절한 안전성 프로파일을 들 수 있다. 이 같은 물성의 일부 또는 전체를 나타내는 화합물, 예를 들어 Bcl-2 및/또는 Bcl-XL의 억제제를 확인하는데 어려움이 있다.
Bcl-2 및/또는 Bcl-XL의 특정 N-아실설폰아미드계 억제제 및 이를 제조하는 방법은 미국 특허 제9,018,381호에 개시되어 있다. 세포에서 Bcl-2에 결합하여 Bcl-2 기능을 억제하는 화합물의 활성 및 특이성은 시험관 내 결합 및 세포 검정에 의하여 미국 특허 제9,018,381호에 또한 개시되어 있다. 그러나, 예를 들어, 낮은 용해성 및 표적 관련 부작용으로 인해 이들 Bcl-2 및/또는 Bcl-XL의 N-아실설폰아미드계 억제제를 전달하는 것은 어려운 것으로 증명되었다. 본 출원인은 접합되지 않은 Bcl 억제제가 직면하고 있는 전달 문제를 극복할 수 있는, 특정 Bcl-2/XL 억제제(화합물 A; 이의 합성은 미국 특허 제9,018,381호에 기술되어 있음)에 연결된 덴드리머를 개발하였다:
[화합물 A]
Figure pct00001
본원에는 암을 치료하는 방법이 기술되어 있으며, 이때 이 방법은 Bcl 억제제에 공유 부착(예를 들어, 접합 또는 연결)된 덴드리머를 피하 투여하는 단계를 포함한다. 덴드리머는 접합되지 않은 Bcl 억제제와 비교하여 높은 용해성을 나타내며, 임상전 데이터에 따르면 Bcl 억제제와 접합된 덴드리머는 생체 내에서 내약성을 개선시키는 잠재력을 가지며, 이는 정맥 내 투약의 감소와 함께 치료 지수를 개선시킬 수 있고 부작용을 줄일 수 있는 것으로 제안되어 있다. 피하 투여는 유사한 효능 및 감소된 간 흡수를 유지하면서 덴드리머 접합체의 생물학적 이용 가능성을 감소시키는 것으로 보이며, 이는 덴드리머 접합체의 치료 지수의 증가를 초래할 수 있다.
따라서, 하나의 실시형태에서, 개체에서 암을 치료하는 방법이 개시되어 있으며, 이때 이 방법은 개체에 화학식 I의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효량으로 피하 투여하는 단계를 포함한다:
[화학식 I]
Figure pct00002
(상기 식에서,
코어는
Figure pct00003
이고;
*는 (BU1)의 카르보닐 모이어티(carbonyl moiety)에 대한 공유 부착을 나타내고;
b는 2이고;
BU는 구성 단위이고;
BUx는 x 세대의 구성 단위이며, 이때 화학식 I의 덴드리머의 x 세대 내의 구성 단위의 총 개수는 2(x)와 같고, 화학식 I의 덴드리머 내의 BU의 총 개수는 (2x-1)b와 같고; BU는 하기 구조를 갖고:
Figure pct00004
#은 코어의 아민 모이어티 또는 BU의 아미노 모이어티에 대한 공유 부착을 나타내고;
+는 BU의 카르보닐 모이어티에 대한 공유 부착 또는 W 또는 Z에 대한 공유 부착을 나타내고;
W는 독립적으로 (PM)c 또는 (H)e이고;
Z는 독립적으로 (L-AA)d 또는 (H)e이고;
PM은 PEG1800-2400이고;
L-AA는 활성제에 공유 부착되는 링커이며; 이때 L-AA는 하기 화학식을 갖고:
Figure pct00005
(상기 식에서,
A는 -N(CH3)이고;
Figure pct00006
는 BUx의 아민 모이어티에 대한 부착점임);
단 (c + d)는 (2x)b 이하이고, d는 1 이상이고;
단 (c + d)가 (2x)b 미만인 경우 임의의 나머지 W 및 Z 기는 (H)e이며, 이때 e는 [(2x)b] - (c + d)임).
하나의 실시형태에서, 개체에서 암을 치료하는 방법이 개시되어 있으며, 이때 이 방법은 개체에 화학식 II의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 피하 투여하는 단계를 포함한다:
[화학식 II]
Figure pct00007
(상기 식에서,
b는 2이고;
코어는
Figure pct00008
이고;
*는 (BU1)의 카르보닐 모이어티에 대한 공유 부착을 나타내고;
BU는 구성 단위이고, BU의 개수는 62와 같으며; 이때 BU는 하기 구조를 갖고:
Figure pct00009
#은 코어의 아민 모이어티 또는 BU의 아미노 모이어티에 대한 공유 부착을 나타내고, +는 BU의 카르보닐 모이어티에 대한 공유 부착 또는 W 또는 Z에 대한 공유 부착을 나타내고;
W는 독립적으로 (PM)c 또는 (H)e이고;
Z는 독립적으로 (L-AA)d 또는 (H)e이고;
PM은 PEG1800-2400이고;
L-AA는 활성제에 공유 부착되는 링커이며; 이때 L-AA는 하기 화학식을 갖고:
Figure pct00010
(상기 식에서,
A는 -N(CH3), -O-, -S- 또는 -CH2-이고;
Figure pct00011
는 BU5의 아민 모이어티에 대한 공유 부착을 나타냄);
단 (c + d)는 64 이하이고, d는 1 이상이고;
단 (c + d)가 64 미만인 경우 임의의 나머지 W 및 Z 기는 (H)e이며, 이때 e는 64 - (c + d)임).
일부 실시형태에서, 개체에서 암을 치료하는 방법이 개시되어 있으며, 이때 이 방법은 개체에 화학식 III의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 피하 투여하는 단계를 포함한다:
[화학식 III]
Figure pct00012
(상기 식에서,
코어는
Figure pct00013
이고;
D는
Figure pct00014
이고;
AP는 다른 구성 단위에 대한 부착점이고;
W는 독립적으로 (PM)c 또는 (H)e이고;
Z는 독립적으로 (L-AA)d 또는 (H)e이고;
PM은 PEG1800-2400이고;
L-AA는 활성제에 공유 부착되는 링커이며; 이때 L-AA는 하기 화학식을 갖고:
Figure pct00015
(상기 식에서,
A는 -N(CH3)임);
단 (c + d)가 64 미만인 경우 임의의 나머지 W 및 Z 기는 (H)e이며, 이때 e는 64 - (c + d)이고; d는 1 이상임).
일부 실시형태에서, 개체에서 암을 치료하는 방법이 개시되어 있으며, 이때 이 방법은 개체에 화학식 IV의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효량으로 피하 투여하는 단계를 포함한다:
[화학식 IV]
Figure pct00016
(상기 식에서,
Y는 PEG1800-2400 또는 H이고; Q는 H 또는 L-AA이며, 이때 L-AA는 하기 구조를 갖고:
Figure pct00017
A는 -N(CH3)이며, 단 PEG1800-2400과 L-AA의 합이 64 미만인 경우 나머지 Q 및 Y 모이어티는 H이며, 단 적어도 하나의 Q는 L-AA임).
일부 실시형태에서, 개체에서 암을 치료하는 방법이 개시되어 있으며, 이때 이 방법은 개체에 화학식 V의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효량으로 피하 투여하는 단계를 포함한다:
[화학식 V]
Figure pct00018
(상기 식에서,
Y는 PEG1800-2400 또는 H이고;
Q는 H 또는 L-AA이며, 이때 L-AA는 하기 구조를 갖고:
Figure pct00019
A는 -N(CH3)이며, 단 PEG1800-2400과 L-AA의 합이 64 미만인 경우 나머지 Q 및 Y 모이어티는 H이며, 단 적어도 하나의 Q는 L-AA임).
일부 실시형태에서, 화학식 VI의 동결 건조된 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 약학 조성물이 개시되어 있다:
[화학식 VI]
Figure pct00020
(상기 식에서,
Y1은 -C(=O)CH2-(OCH2CH2)x-OCH3 또는 H이고;
x는 39와 53 사이의 정수이고;
Q는 H 또는 L-AA이며, 이때 L-AA는 하기 구조를 갖고:
Figure pct00021
A는 -N(CH3)이며, 단 Y1과 L-AA의 합이 64 미만인 경우 나머지 Q 및 Y1 모이어티는 H이며, 단 적어도 하나의 Q는 L-AA임).
일부 실시형태에서, 화학식 VII의 동결 건조된 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 약학 조성물이 개시되어 있다:
[화학식 VII]
Figure pct00022
(상기 식에서,
Y2는 -C(=O)CH2-(OCH2CH2)y-OCH3 또는 H이고;
y는 39와 53 사이의 정수이고;
Q는 H 또는 L-AA이며, 이때 L-AA는 하기 구조를 갖고:
Figure pct00023
A는 -N(CH3)이며, 단 Y2와 L-AA의 합이 64 미만인 경우 나머지 Q 및 Y2 모이어티는 H이며, 단 적어도 하나의 Q는 L-AA임).
일부 실시형태에서, 암의 피하 치료를 위한 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 개시되어 있다.
일부 실시형태에서, 암의 피하 치료를 위한 약제의 제조에 있어서의 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 용도가 개시되어 있으며, 이때 약제는 피하 투여된다.
일부 실시형태에서, 암의 피하 치료를 위한 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 약학 조성물이 개시되어 있다.
도 1은 화학식 IV의 덴드리머를 보여준다.
도 2는 화학식 V의 덴드리머를 보여준다.
도 3은 비히클(인산염 완충 식염수), 30% HP-β-CD 중의 화합물 A(5 ㎎/㎏ 및 10 ㎎/㎏)의 제형 및 PBS 중의 화합물 1의 덴드리머(10 ㎎/㎏의 화합물 A 당량)의 단일 투여 이후의 다양한 시점에서의 세포사멸(세포자멸)을 나타낸다. 개열된 폴리 ADP 리보오스 폴리머라아제(PARP) 반응은 세포사멸의 척도로서 사용되었다.
도 4는 mTOR 억제제인 AZD2014와 함께 화합물 1에 의해 나타나는 인간 소세포 폐암 종양 모델에서의 생체 내 항종양 활성을 보여준다.
도 5는 아칼라브루티닙(acalabrutinib)과 함께 화합물 1에 의해 나타나는 인간 DLBCL 종양 모델에서의 생체 내 항종양 활성을 보여준다.
도 6은 피하 및 정맥 내 투여에 의해 화합물 1의 투여 시에 RS4:11 마우스 이종이식 모델에서의 종양 퇴화를 보여준다.
도 7은 RS4:11 마우스 이종이식 모델에서 피하 및 정맥 내 투여 이후의 화합물 1의 혈장 농도를 보여준다.
도 8은 RS4:11 마우스 이종이식 모델에서 피하 및 정맥 내 투여 이후의 화합물 1의 종양 농도를 보여준다.
도 9는 RS4:11 마우스 이종이식 모델에서 피하 및 정맥 내 투여 이후의 개열된 카스파아제의 비율(%)을 보여준다.
일부 실시형태에서, 개체에서 암을 치료하는 방법이 개시되어 있으며, 이때 이 방법은 개체에 화학식 I의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 피하 투여하는 단계를 포함한다:
[화학식 I]
Figure pct00024
(상기 식에서,
코어는
Figure pct00025
이고;
*는 (BU1)의 카르보닐 모이어티에 대한 공유 부착을 나타내고;
b는 2이고;
BU는 구성 단위이고;
BUx는 x 세대의 구성 단위이며, 이때 화학식 I의 덴드리머의 x 세대 내의 구성 단위의 총 개수는 2(x)와 같고, 화학식 I의 덴드리머 내의 BU의 총 개수는 (2x-1)b와 같고; BU는 하기 구조를 갖고:
Figure pct00026
#은 코어의 아민 모이어티 또는 BU의 아미노 모이어티에 대한 공유 부착을 나타내고;
+는 BU의 카르보닐 모이어티에 대한 공유 부착 또는 W 또는 Z에 대한 공유 부착을 나타내고;
W는 독립적으로 (PM)c 또는 (H)e이고;
Z는 독립적으로 (L-AA)d 또는 (H)e이고;
PM은 PEG1800-2400이고;
L-AA는 활성제에 공유 부착되는 링커이며; 이때 L-AA는 하기 화학식을 갖고:
Figure pct00027
(상기 식에서,
A는 -N(CH3)이고;
Figure pct00028
는 BUx의 아민 모이어티에 대한 부착점임);
단 (c + d)는 (2x)b 이하이고, d는 1 이상이고;
단 (c + d)가 (2x)b 미만인 경우 임의의 나머지 W 및 Z 기는 (H)e이며, 이때 e는 [(2x)b] - (c + d)임).
덴드리머의 코어는 덴드리머가 구축되는 중심 단위를 나타내는 것으로 인지될 것이다. 이와 관련하여, 코어는 구성 단위의 제1 세대 및 후속 세대가 '분기 성장'하는 중심 단위를 나타낸다. 일 실시형태에서, 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 중 임의의 것의 코어는 하기와 같다:
Figure pct00029
(상기 식에서, *는 덴드리머의 구성 단위에 대한 공유 부착을 나타냄). 일부 실시형태에서, 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 중 임의의 것의 코어는 하기와 같다:
Figure pct00030
(상기 식에서, *는 덴드리머의 구성 단위에 대한 공유 부착을 나타냄).
"구성 단위" 또는 "BU"란 용어는 적어도 3개의 작용기, 즉 코어 또는 구성 단위의 이전 세대(또는 층) 내의 구성 단위에 부착을 위한 하나의 작용기 및 구성 단위의 다음 세대(또는 층) 내의 구성 단위에 부착을 위한 2개 이상의 작용기를 갖는 분자를 포함한다. 구성 단위는 코어 또는 구성 단위의 이전 층에 부가함으로써 덴드리머 층을 구축하기 위해 사용된다. 일부 실시형태에서, 구성 단위는 3개의 작용기를 갖는다.
"세대"란 용어는 덴드론(dendron) 또는 덴드리머를 구성하는 구성 단위 층의 개수를 포함한다. 예를 들어, 하나의 세대로 구성된 덴드리머는 코어에 부착된 하나의 구성 단위 층, 예를 들어, 코어-[[구성 단위]b(여기서, b는 코어에 부착된 덴드론의 개수이며 코어의 원자가임)를 가질 것이다. 2개의 세대로 구성된 덴드리머는 코어에 부착된 각각의 덴드론 내에 2개의 구성 단위 층을 갖는다. 예를 들어, 구성 단위가 하나의 2가의 분기점을 갖는 경우, 덴드리머는 코어[[구성 단위][구성 단위]2]b일 수 있고, 3개의 세대로 구성된 덴드리머는 코어에 부착된 각각의 덴드론 내에 3개의 구성 단위 층, 예를 들어 코어-[[구성 단위][구성 단위]2[구성 단위]4]b를 갖고, 5개의 세대로 구성된 덴드리머는 코어에 부착된 각각의 덴드론 내에 5개의 구성 단위 층, 예를 들어 코어-[[구성 단위][구성 단위]2[구성 단위]4[구성 단위]8[구성 단위]16]b를 갖고, 6개의 세대로 구성된 덴드리머는 코어에 부착된 각각의 덴드론 내에 6개의 구성 단위 층, 예를 들어 코어-[[구성 단위][구성 단위]2[구성 단위]4[구성 단위]8[구성 단위]16[구성 단위]32]b 등을 갖는다. 구성 단위의 마지막 세대(최외각 세대)는 덴드리머의 표면 작용화를 제공하며, 약동학적 변형기(PM) 및/또는 링커 및 활성제(L-AA)와의 결합이 가능한 개수의 표면 작용기를 제공한다.
"표면 작용기"란 용어는 구성 단위의 최종 세대에서 발견되는 미반응 작용기를 지칭한다. 일부 실시형태에서, 표면 작용기의 개수는 (2x)b와 같으며, 여기서 x는 덴드리머 내의 세대의 개수이고, b는 덴드론의 개수이다. 일부 실시형태에서, 표면 작용기는 1차 아미노 작용기이다.
3개의 작용기(예를 들어, 하나의 분기점)를 갖는 구성 단위로 구성된 덴드리머 내의 구성 단위의 총 개수는 (2x-1)b와 같으며, 여기서 x는 세대 번호와 같고, b는 덴드론의 개수와 같다. 예를 들어, 2개의 덴드론이 부착된 코어(b = 2)를 갖는 덴드리머에서, 각각의 구성 단위는 하나의 분기점을 갖고 5개의 세대가 존재하는 경우, 62개의 구성 단위가 존재할 것이며, 최외각 세대는 64개의 표면 작용기를 갖는 16개의 구성 단위를 가질 것이다. 일부 실시형태에서, 표면 작용기는 아미노 모이어티, 예를 들어 1차 또는 2차 아민이다. 일부 실시형태에서, 덴드리머는 2가의 코어, 62개의 구성 단위 및 64개의 1차 아미노 작용기를 갖는 5세대 덴드리머이다.
일부 실시형태에서, 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 중 임의의 것 내의 구성 단위는 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00031
(상기 식에서, #은 코어의 아민 모이어티 또는 구성 단위의 아미노 모이어티에 대한 공유 부착을 나타내고, +는 구성 단위의 카르보닐 모이어티에 대한 공유 부착 또는 약동학적 변형기, 활성제에 부착된 링커 또는 수소에 대한 공유 부착을 나타냄). 일부 실시형태에서, 덴드리머는 64개의 1차 아미노 작용기를 갖는 62개의 구성 단위를 갖는다.
일부 실시형태에서, 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 중 임의의 것 내의 구성 단위는 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00032
(상기 식에서, #은 코어의 아민 모이어티 또는 구성 단위의 아미노 모이어티에 대한 공유 부착을 나타내고, +는 구성 단위의 카르보닐 모이어티에 대한 공유 부착 또는 약동학적 변형기, 활성제에 부착된 링커 또는 수소에 대한 공유 부착을 나타냄).
"약동학적 변형기" 또는 "PM"이란 용어는 덴드리머의 약동학적 프로파일 또는 덴드리머가 전달하는 활성제의 약동학적 프로파일을 변경 또는 조정할 수 있는 모이어티를 포함한다. 일부 실시형태에서, PM은 덴드리머 또는 활성제의 분포, 대사 및/또는 배출을 조정할 수 있다. 일부 실시형태에서, PM은 화학적 분해 경로(예를 들어, 가수분해) 또는 효소적 분해 경로 중 하나에 의해 활성제가 덴드리머로부터 방출되는 속도를 감속 또는 증가시킴으로써 활성제의 방출 속도에 영향을 미칠 수 있다. 일부 실시형태에서, PM은 약학적으로 허용 가능한 담체에서의 용해성을 증가 또는 감소시킴으로써 덴드리머의 용해성 프로파일을 변경할 수 있다. 일부 실시형태에서, PM은 덴드리머가 특정 조직(예를 들어, 종양)에 활성제를 전달하는 것을 도울 수 있다.
일부 실시형태에서, 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV 및 화학식 V의 덴드리머 중 임의의 것에서, PM은 폴리에틸렌글리콜(PEG)이다. 일부 실시형태에서, PEG는 약 1,800 Da와 약 2,400 Da의 분자량을 갖는다. 일부 실시형태에서, PEG는 약 2,150의 평균 분자량을 갖는다. 당업자라면 "PEG1800-2400"이란 용어가 약 1,800 Da와 약 2,400 Da 사이의 평균 분자량을 갖는 PEG를 포함한다는 것을 쉽게 이해할 수 있다.
일부 실시형태에서, PEG는 약 1.00과 약 2.00 사이, 약 1.00과 1.50 사이의 다분산 지수(PDI), 예를 들어 약 1.00과 약 1.25 사이, 약 1.00과 약 1.10 사이 또는 약 1.00과 약 1.10 사이의 PDI를 갖는다. 일부 실시형태에서, PEG의 PDI는 약 1.05이다. "다분산 지수"란 용어는 소정의 중합체 샘플에서 분자 질량의 분포에 대한 척도를 지칭한다. PDI는 수평균 분자량(Mn)으로 나눈 중량 평균 분자량(Mw)과 같으며, 중합체의 배치(batch) 중의 개개의 분자 질량의 분포를 나타낸다. PDI는 1 이상의 값을 갖지만, 중합체가 균일한 사슬 길이 및 평균 분자량에 근접할수록 PD1은 1에 더 가까울 것이다.
일부 실시형태에서, 덴드리머는 (2x)b개 미만의 PEG 기를 가지며, 이때 x는 덴드리머의 세대의 개수이고, b는 덴드론의 개수이다. 일부 실시형태에서, 표면 작용기는 모두 PEG 기에 공유 부착되어 있다. 일부 실시형태에서, x가 5인 경우 덴드리머는 약 25개와 약 60개 사이의 PEG 기를 갖는다. 일부 실시형태에서, 덴드리머는 2x개 이하의 PEG 기를 갖는다. 일부 실시형태에서, 덴드리머는 2x개의 PEG 기를 갖는다. 예를 들어, 덴드리머의 구성 단위가 하나의 2가 분기점을 갖는 경우, 2세대 덴드리머는 4개 이하의 PEG 기를 가질 수 있고, 3세대 덴드리머는 8개 이하의 PEG 기를 가질 수 있고, 4세대 덴드리머는 16개 이하의 PEG 기를 가질 수 있으며, 5세대 덴드리머는 32개 이하의 PEG 기를 가질 수 있다. 일부 실시형태에서, 덴드리머는 2x개 미만의 PEG 기를 갖는다. 일부 실시형태에서, 덴드리머는 약 25개와 약 64개 사이의 PEG 기를 갖는다. 일부 실시형태에서, 덴드리머는 약 25개와 약 40개 사이의 PEG 기를 갖는다. 일부 실시형태에서, 덴드리머는 32개 이하의 PEG 기를 갖는다. 일부 실시형태에서, 덴드리머는 약 25개와 약 32개 사이의 PEG 기를 갖는다. 일부 실시형태에서, 덴드리머는 약 28개와 약 32개 사이의 PEG 기를 갖는다. 일부 실시형태에서, 덴드리머는 29개의 PEG 기, 30개의 PEG 기, 31개의 PEG 기 또는 32개의 PEG 기를 갖는다.
화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 및 화학식 VII의 개시된 덴드리머는 활성제에 공유 부착된 링커(L-AA)를 포함하며, 이때 링커(L)는 링커의 일 말단 상의 구성 단위의 최종 세대 상의 표면 작용기 및 링커의 다른 말단 상의 활성제(AA)에 공유 부착되어 있다. 일부 실시형태에서, 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 및 화학식 VII의 덴드리머 중 임의의 것 내의 링커는 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00033
(상기 식에서,
Figure pct00034
는 구성 단위의 최종 세대 상의 아미노 작용기에 공유 부착되어 있고,
Figure pct00035
는 활성제(AA)에 대한 공유 부착점이고, A는 -N(CH3)임).
일부 실시형태에서, AA는 Bcl 억제제이다. 일부 실시형태에서, AA는 Bcl-2 및/또는 Bcl-XL 억제제이다. 일부 실시형태에서, AA는 미국 특허 제9,018,381호에 개시되어 있는 Bcl-2 및/또는 Bcl-XL 억제제이다. 일부 실시형태에서, 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 중 임의의 것 내의 AA는 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00036
(상기 식에서,
Figure pct00037
는 링커에 대한 공유 부착점임). 일부 실시형태에서, 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 중 임의의 것 내의 AA는 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00038
일부 실시형태에서, I, II, III, IV, V, VI 또는 VII의 덴드리머 중 임의의 것 내의 L-AA의 구조는 하기와 같다:
Figure pct00039
(상기 식에서,
Figure pct00040
는 구성 단위의 최종 세대 상의 아미노 작용기에 공유 부착되어 있고, A는 -N(CH3)임).
일부 실시형태에서, 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 중 임의의 것 내의 L-AA의 구조는 하기와 같다:
Figure pct00041
(상기 식에서,
Figure pct00042
는 구성 단위의 최종 세대 상의 아미노 작용기에 공유 부착되어 있고, A는 -N(CH3)임).
일부 실시형태에서, 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 및 화학식 VII 중 임의의 하나의 덴드리머는 (2x)b개 미만의 L-AA 기를 가지며, 이때 x는 덴드리머의 세대의 개수이고, b는 덴드론의 개수이다. 일부 실시형태에서, 표면 작용기는 모두 L-AA 기에 공유 부착되어 있다. 일부 실시형태에서, x가 5인 경우, 덴드리머는 약 25개와 약 64개 사이의 L-AA 기를 갖는다. 일부 실시형태에서, 덴드리머는 2x개 이하의 L-AA 기를 갖는다. 일부 실시형태에서, 덴드리머는 2x개의 L-AA 기를 갖는다. 예를 들어, 덴드리머의 구성 단위가 하나의 이작용성 분기점을 갖는 경우, 2세대 덴드리머는 4개 이하의 L-AA 기를 가질 수 있고, 3세대 덴드리머는 8개 이하의 L-AA 기를 가질 수 있고, 4세대 덴드리머는 16개 이하의 L-AA 기를 가질 수 있고, 5세대 덴드리머는 32개 이하의 L-AA 기를 가질 수 있다. 일부 실시형태에서, 덴드리머는 2x개 미만의 L-AA 기를 갖는다. 일부 실시형태에서, 덴드리머는 약 25개와 약 64개 사이의 L-AA 기를 갖는다. 일부 실시형태에서, 덴드리머는 약 25개와 약 40개 사이의 L-AA 기를 갖는다. 일부 실시형태에서, 덴드리머는 32개 이하의 L-AA 기를 갖는다. 일부 실시형태에서, 덴드리머는 약 25개와 약 32개 사이의 L-AA 기를 갖는다. 일부 실시형태에서, 덴드리머는 약 28개와 약 32개 사이의 L-AA 기를 갖는다. 일부 실시형태에서, 덴드리머는 29개의 L-AA 기, 30개의 L-AA 기, 31개의 L-AA 기 또는 32개의 L-AA 기를 갖는다.
일부 실시형태에서, 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 및 화학식 VII의 덴드리머 중 임의의 것에서 L-AA 기와 PEG 기의 합은 64개 이하와 같을 수 있다. 일부 실시형태에서, L-AA 기와 PEG 기의 합은 64개 미만일 수 있으며, 단 덴드리머는 적어도 하나의 L-AA 기를 갖는다. 일부 실시형태에서, L-AA 기와 PEG 기의 합은 약 50개와 약 64개 사이일 수 있다. L-AA 기와 PEG 기의 합이 64개 미만일 경우, 구성 단위의 최종 세대의 미반응 표면 기능 단위는 1차 아미노기로 남아 있으며, 단 덴드리머는 적어도 하나의 L-AA 기를 갖는다. 예를 들어, 구성 단위의 최종 세대 상의 1차 아미노기의 개수는 64에서 L-AA 기와 PEG 기의 합을 뺀 것과 같으며(예를 들어, 64 - (L-AA + PEG)), 단 덴드리머는 적어도 하나의 L-AA 기를 갖는다. 예를 들어, L-AA 기와 PEG 기의 합이 50이면 14개의 표면 작용기는 1차 아미노 모이어티로 남을 것이고, L-AA 기와 PEG 기의 합이 51이면 표면 작용기 중 13개는 1차 아미노 모이어티로 남을 것이고, L-AA 기와 PEG 기의 합이 52이면 표면 작용기 중 12개는 1차 아미노 모이어티로 남을 것이고, L-AA 기와 PEG 기의 합이 53이면 표면 작용기 중 11개는 1차 아미노 모이어티로 남을 것이다. 일부 실시형태에서, 덴드리머 상의 1차 아미노 모이어티의 개수는 약 0개와 약 14개 사이이다. 일부 실시형태에서, PEG 기의 개수와 L-AA 기의 개수의 합이 (2x)b개(여기서, x는 덴드리머의 세대의 개수이고, b는 덴드론의 개수임) 미만이면 나머지 표면 작용기는 64에서 PEG기와 L-AA 기의 합을 뺀 것과 같으며, 단 덴드리머는 적어도 하나의 L-AA 기를 갖는다.
일부 실시형태에서, W는 (PM)c 또는 (H)e이고; Z는 (L-AA)d 또는 (H)e이며; 단 (c + d)는 (2x)b개 이하이고, 단 d는 1 이상이며; 이때 x는 세대의 개수이고, b는 덴드론의 개수이고; 단 (c + d)가 (2x)b개 미만이면, 임의의 나머지 W 및 Z 기는 (H)e이며, 이때 e는 [2(x+1)] - (c + d)이다. 예를 들어, b가 2이고 x가 5인 경우, (c + d)는 64 이하이다. 일부 실시형태에서, (c + d)는 64이고; 즉 (PM)c와 (L-AA)d의 합은 64와 같다. 일부 실시형태에서, b가 2이고 x가 5인 경우, (c + d)는 64 미만이고; 즉 (PM)c와 (L-AA)d의 합은 64 미만이며, 단 d는 1 이상이다. 일부 실시형태에서, (c + d)는 50과 64 사이의 정수이다. 일부 실시형태에서, (c + d)는 58과 64 사이의 정수이다.
일부 실시형태에서, (c + d)는 (2x)b이며, 이 경우 (H)e는 존재하지 않고, e는 0이다. 예를 들어, b가 2이고 x가 5이고 (PM)c와 (L-AA)d의 합이 64와 같으면, 덴드리머 내의 구성 단위의 5세대 상에 비치환된 표면 작용기가 존재하지 않으며, 따라서 e는 0이다. 그러나 (c + d)는 (2x)b미만인 경우, (H)e는 (2x)b - (c + d)와 같다. 예를 들어, b가 2이고, x가 5이고, (PM)c와 (L-AA)d의 합이 64 미만이면, 구성 블록의 5세대 상의 비치환된 표면 작용기의 개수는 64에서 (PM)c와 (L-AA)d의 합을 뺀 것과 같다. 이 경우, e는 64에서 (PM)c와 (L-AA)d의 합을 뺀 것과 같다. 일부 실시형태에서, (c + d)의 합이 50과 64 사이의 정수인 경우, e는 0과 14 사이의 정수이다. 일부 실시형태에서, (c + d)가 58과 64 사이의 정수인 경우, e는 0과 6 사이의 정수이다. 일부 실시형태에서, (c + d)는 58이고, e는 6이다. 일부 실시형태에서, (c + d)는 59이고, e는 5이다. 일부 실시형태에서, (c + d)는 60이고, e는 4이다. 일부 실시형태에서, (c + d)는 61이고, e는 3이다. 일부 실시형태에서, (c + d)는 62이고, e는 2이다. 일부 실시형태에서, (c + d)는 63이고, e는 1이다. 일부 실시형태에서, (c + d)는 60이고, e는 0이다.
일부 실시형태에서, 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 및 화학식 VII의 덴드리머 중 임의의 것은 약 90 kDa 내지 약 120 kDa의 분자량을 갖는다. 일부 실시형태에서, 덴드리머는 약 100 kDa 및 115 kDa의 분자량을 갖는다. 일부 실시형태에서, 덴드리머는 약 100 kDa 내지 약 110 kDa의 분자량을 갖는다. 일부 실시형태에서, 덴드리머는 약 100 kDa 내지 약 105 kDa의 분자량을 갖는다. 일부 실시형태에서, 덴드리머의 분자량은 약 100 kDa, 약 101 kDa, 약 102 kDa, 약 103 kDa, 약 104 kDa, 약 105 kDa, 약 106 kDa, 약 107 kDa, 약 108 kDa, 약 109 kDa 또는 약 110 kDa이다.
일부 실시형태에서, BU가
Figure pct00043
또는
Figure pct00044
인 경우, PEG는 BU의 ε-위치에서 아미노 작용기에 공유 부착되어 있고, L-AA는 BU의 α-위치에서 아미노 작용기에 공유 부착되어 있다.
일부 실시형태에서, 개체에서 암을 치료하는 방법이 개시되어 있으며, 이때 이 방법은 개체에 화학식 II의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효량으로 피하 투여하는 단계를 포함한다;
[화학식 II]
Figure pct00045
(상기 식에서,
b는 2이고;
코어는
Figure pct00046
이고;
*는 (BU1)의 카르보닐 모이어티에 대한 공유 부착을 나타내고;
BU는 구성 단위이고, BU의 개수는 62와 같으며; 이때 BU는 하기 구조를 갖고:
Figure pct00047
#은 코어의 아민 모이어티 또는 BU의 아미노 모이어티에 대한 공유 부착을 나타내고, +는 BU의 카르보닐 모이어티에 대한 공유 부착 또는 W 또는 Z에 대한 공유 부착을 나타내고;
W는 독립적으로 (PM)c 또는 (H)e이고;
Z는 독립적으로 (L-AA)d 또는 (H)e이고;
PM은 PEG1800-2400이고;
L-AA는 활성제에 공유 부착되는 링커이며; 이때 L-AA는 하기 화학식을 갖고:
Figure pct00048
(상기 식에서,
A는 -N(CH3)이고;
Figure pct00049
는 BU5의 아민 모이어티에 대한 공유 부착을 나타냄);
단 (c + d)는 64 이하이고, d는 1 이상이고;
단 (c + d)가 64 미만인 경우, 임의의 나머지 W 및 Z 기는 (H)e이며, 이때 e는 64 - (c + d)임).
화학식 II의 덴드리머의 일부 실시형태에서, c는 25와 32 사이의 정수이다. 화학식 II의 덴드리머의 일부 실시형태에서, c는 29와 32 사이의 정수이다. 화학식 II의 덴드리머의 일부 실시형태에서, c는 29이다. 화학식 II의 덴드리머의 일부 실시형태에서, c는 30이다. 화학식 II의 덴드리머의 일부 실시형태에서, c는 31이다. 화학식 II의 덴드리머의 일부 실시형태에서, c는 32이다.
화학식 II의 덴드리머의 일부 실시형태에서, d는 25와 32 사이의 정수이다. 화학식 II의 덴드리머의 일부 실시형태에서, d는 29와 32 사이의 정수이다. 화학식 II의 덴드리머의 일부 실시형태에서, d는 29이다. 화학식 II의 덴드리머의 일부 실시형태에서, d는 30이다. 화학식 II의 덴드리머의 일부 실시형태에서, d는 31이다. 화학식 II의 덴드리머의 일부 실시형태에서, d는 32이다.
화학식 II의 덴드리머의 일부 실시형태에서, e는 0과 14 사이의 정수이다. 화학식 II의 덴드리머의 일부 실시형태에서, e는 0과 6 사이의 정수이다. 화학식 II의 덴드리머의 일부 실시형태에서, e는 0이다. 화학식 II의 덴드리머의 일부 실시형태에서, e는 1이다. 화학식 II의 덴드리머의 일부 실시형태에서, e는 2이다. 화학식 II의 덴드리머의 일부 실시형태에서, e는 3이다. 화학식 II의 덴드리머의 일부 실시형태에서, e는 4이다. 화학식 II의 덴드리머의 일부 실시형태에서, e는 5이다. 화학식 II의 덴드리머의 일부 실시형태에서, e는 6이다.
화학식 II의 덴드리머의 일부 실시형태에서, L-AA는 하기와 같다:
Figure pct00050
일부 실시형태에서, 개체에서 암을 치료하는 방법이 개시되어 있으며, 이때 이 방법은 개체에 화학식 III의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효량으로 피하 투여하는 단계를 포함한다:
[화학식 III]
Figure pct00051
(상기 식에서,
코어는
Figure pct00052
이고;
D는
Figure pct00053
이고;
AP는 다른 구성 단위에 대한 부착점이고;
W는 독립적으로 (PM)c 또는 (H)e이고;
Z는 독립적으로 (L-AA)d 또는 (H)e이고;
PM은 PEG1800-2400이고;
L-AA는 활성제에 공유 부착되는 링커이며; 이때 L-AA는 하기 화학식을 갖고:
Figure pct00054
(상기 식에서,
A는 -N(CH3)임);
단 (c + d)가 64 미만인 경우, 임의의 나머지 W 및 Z 기는 (H)e이며, 이때 e는 64 - (c + d)이고; d는 1 이상임).
화학식 III의 덴드리머의 일부 실시형태에서, c는 25와 32 사이의 정수이다. 화학식 III의 덴드리머의 일부 실시형태에서, c는 29와 32 사이의 정수이다. 화학식 III의 덴드리머의 일부 실시형태에서, c는 29이다. 화학식 III의 덴드리머의 일부 실시형태에서, c는 30이다. 화학식 III의 덴드리머의 일부 실시형태에서, c는 31이다. 화학식 III의 덴드리머의 일부 실시형태에서, c는 32이다.
화학식 III의 덴드리머의 일부 실시형태에서, d는 25와 32 사이의 정수이다. 화학식 III의 덴드리머의 일부 실시형태에서, d는 29와 32 사이의 정수이다. 화학식 III의 덴드리머의 일부 실시형태에서, d는 29이다. 화학식 III의 덴드리머의 일부 실시형태에서, d는 30이다. 화학식 III의 덴드리머의 일부 실시형태에서, d는 31이다. 화학식 III의 덴드리머의 일부 실시형태에서, d는 32이다.
화학식 III의 덴드리머의 일부 실시형태에서, e는 0과 14 사이의 정수이다. 화학식 III의 덴드리머의 일부 실시형태에서, e는 0과 6 사이의 정수이다. 화학식 III의 덴드리머의 일부 실시형태에서, e는 0이다. 화학식 III의 덴드리머의 일부 실시형태에서, e는 1이다. 화학식 III의 덴드리머의 일부 실시형태에서, e는 2이다. 화학식 III의 덴드리머의 일부 실시형태에서, e는 3이다. 화학식 III의 덴드리머의 일부 실시형태에서, e는 4이다. 화학식 III의 덴드리머의 일부 실시형태에서, e는 5이다. 화학식 III의 덴드리머의 일부 실시형태에서, e는 6이다.
화학식 III의 덴드리머의 일부 실시형태에서, 화학식 III의 덴드리머의 L-AA는 하기와 같다:
Figure pct00055
일부 실시형태에서, 개체에서 암을 치료하는 방법이 개시되어 있으며, 이때 이 방법은 개체에 화학식 IV의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효량으로 피하 투여하는 단계를 포함한다:
[화학식 IV]
Figure pct00056
(상기 식에서, Y는 PEG1800-2400 또는 H이고; Q는 H 또는 L-AA이며, 이때 L-AA는 하기 구조를 갖고:
Figure pct00057
A는 -N(CH3)이며, 단 PEG1800-2400과 L-AA의 합이 64 미만인 경우 나머지 Q 및 Y 모이어티는 H이며, 단 적어도 하나의 Q는 L-AA임).
일부 실시형태에서, 화학식 IV의 덴드리머는 25개와 32개 사이의 PEG1800-2400을 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 IV의 덴드리머는 29개와 32개 사이의 PEG1800-2400을 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 IV의 덴드리머는 29개의 PEG1800-2400을 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 IV의 덴드리머는 30개의 PEG1800-2400을 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 IV의 덴드리머는 31개의 PEG1800-2400을 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 IV의 덴드리머는 32개의 PEG1800-2400을 갖는다.
일부 실시형태에서, 화학식 IV의 덴드리머는 25개와 32개 사이의 L-AA를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 IV의 덴드리머는 29개와 32개 사이의 L-AA를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 IV의 덴드리머는 29개의 L-AA를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 IV의 덴드리머는 30개의 L-AA를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 IV의 덴드리머는 31개의 L-AA를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 IV의 덴드리머는 32개의 L-AA를 갖는다.
일부 실시형태에서, 화학식 IV의 덴드리머는 Q 및/또는 Y 위치에 0개와 14개 사이의 수소를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 IV의 덴드리머는 Q 및/또는 Y 위치에 0개와 6개 사이의 수소를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 IV의 덴드리머는 Q 및/또는 Y 위치에 1개의 수소를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 IV의 덴드리머는 Q 및/또는 Y 위치에 2개의 수소를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 IV의 덴드리머는 Q 및/또는 Y 위치에 3개의 수소를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 IV의 덴드리머는 Q 및/또는 Y 위치에 4개의 수소를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 IV의 덴드리머는 Q 및/또는 Y 위치에 5개의 수소를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 IV의 덴드리머는 Q 및/또는 Y 위치에 6개의 수소를 갖는다.
일부 실시형태에서, 개체에서 암을 치료하는 방법이 개시되어 있으며, 이때 이 방법은 개체에 화학식 V의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효량으로 투여하는 단계를 포함한다:
[화학식 V]
Figure pct00058
(상기 식에서,
Y는 PEG1800-2400 또는 H이고;
Q는 H 또는 L-AA이며, 이때 L-AA는 하기 구조를 갖고:
Figure pct00059
A는 -N(CH3)이며, 단 PEG1800-2400과 L-AA의 합이 64 미만인 경우 나머지 Q 및 Y 모이어티는 H이며, 단 적어도 하나의 Q는 L-AA임(화합물 1)).
일부 실시형태에서, 화학식 V의 덴드리머는 25개와 32개 사이의 PEG1800-2400을 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 V의 덴드리머는 29개와 32개 사이의 PEG1800-2400을 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 V의 덴드리머는 29개의 PEG1800-2400을 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 V의 덴드리머는 30개의 PEG1800-2400을 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 V의 덴드리머는 31개의 PEG1800-2400을 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 V의 덴드리머는 32개의 PEG1800-2400을 갖는다.
일부 실시형태에서, 화학식 V의 덴드리머는 25개와 32개 사이의 L-AA를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 V의 덴드리머는 29개와 32개 사이의 L-AA를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 V의 덴드리머는 29개의 L-AA를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 V의 덴드리머는 30개의 L-AA를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 V의 덴드리머는 31개의 L-AA를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 V의 덴드리머는 32개의 L-AA를 갖는다.
일부 실시형태에서, 화학식 V의 덴드리머는 Q 및/또는 Y 위치에 0개와 14개 사이의 수소를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 V의 덴드리머는 Q 및/또는 Y 위치에 0개와 6개 사이의 수소를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 V의 덴드리머는 Q 및/또는 Y 위치에 1개의 수소를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 V의 덴드리머는 Q 및/또는 Y 위치에 2개의 수소를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 V의 덴드리머는 Q 및/또는 Y 위치에 3개의 수소를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 V의 덴드리머는 Q 및/또는 Y 위치에 4개의 수소를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 V의 덴드리머는 Q 및/또는 Y 위치에 5개의 수소를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 V의 덴드리머는 Q 및/또는 Y 위치에 6개의 수소를 갖는다.
일부 실시형태에서, 화학식 VI의 동결 건조된 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 약학 조성물이 개시되어 있다:
[화학식 VI]
Figure pct00060
(상기 식에서,
Y1은 -C(=O)CH2-(OCH2CH2)x-OCH3 또는 H이고;
x는 39와 53 사이의 정수이고;
Q는 H 또는 L-AA이며, 이때 L-AA는 하기 구조를 갖고:
Figure pct00061
A는 -N(CH3)이며, 단 Y1과 L-AA의 합이 64 미만인 경우 나머지 Q 및 Y1 모이어티는 H이며, 단 적어도 하나의 Q는 L-AA임).
일부 실시형태에서, 화학식 VI의 덴드리머는 25개와 32개 사이의 Y1 모이어티를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 VI의 덴드리머는 29개와 32개 사이의 Y1 모이어티를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 VI의 덴드리머는 29개의 Y1 모이어티를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 VI의 덴드리머는 30개의 Y1 모이어티를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 VI의 덴드리머는 31개의 Y1 모이어티를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 VI의 덴드리머는 32개의 Y1 모이어티를 갖는다.
일부 실시형태에서, 화학식 VI의 덴드리머는 25개와 32개 사이의 L-AA 모이어티를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 VI의 덴드리머는 29개와 32개 사이의 L-AA 모이어티를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 VI의 덴드리머는 29개의 L-AA 모이어티를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 VI의 덴드리머는 30개의 L-AA 모이어티를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 VI의 덴드리머는 31개의 L-AA 모이어티를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 VI의 덴드리머는 32개의 L-AA 모이어티를 갖는다.
일부 실시형태에서, 화학식 VI의 덴드리머는 Q 및/또는 Y1 위치에 0개와 14개의 수소를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 VI의 덴드리머는 Q 및/또는 Y1 위치에 0개와 6개 사이의 수소를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 VI의 덴드리머는 Q 및/또는 Y1 위치에 1개의 수소를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 VI의 덴드리머는 Q 및/또는 Y1 위치에 2개의 수소를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 VI의 덴드리머는 Q 및/또는 Y1 위치에 3개의 수소를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 VI의 덴드리머는 Q 및/또는 Y1 위치에 4개의 수소를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 VI의 덴드리머는 Q 및/또는 Y1 위치에 5개의 수소를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 VI의 덴드리머는 Q 및/또는 Y1 위치에 6개의 수소를 갖는다.
일부 실시형태에서, x는 39와 53 사이의 정수이다. 일부 실시형태에서, x는 41과 50 사이의 정수이다. 일부 실시형태에서, x는 44와 48 사이의 정수이다. 일부 실시형태에서, x는 45, 46 또는 47로부터 선택되는 정수이다. 일부 실시형태에서, x는 39이다. 일부 실시형태에서, x는 40이다. 일부 실시형태에서, x는 41이다. 일부 실시형태에서, x는 42이다. 일부 실시형태에서, x는 43이다. 일부 실시형태에서, x는 44이다. 일부 실시형태에서, x는 45이다. 일부 실시형태에서, x는 46이다. 일부 실시형태에서, x는 47이다. 일부 실시형태에서, x는 48이다. 일부 실시형태에서, x는 49이다. 일부 실시형태에서, x는 50이다. 일부 실시형태에서, x는 51이다. 일부 실시형태에서, x는 52이다. 일부 실시형태에서, x는 53이다.
일부 실시형태에서, 화학식 VII의 동결 건조된 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 약학 조성물이 개시되어 있다:
[화학식 VII]
Figure pct00062
(상기 식에서,
Y2는 -C(=O)CH2-(OCH2CH2)y-OCH3 또는 H이고;
y는 39와 53 사이의 정수이고;
Q는 H 또는 L-AA이며, 이때 L-AA는 하기 구조를 갖고:
Figure pct00063
A는 -N(CH3)이며, 단 Y2와 L-AA의 합이 64 미만인 경우 나머지 Q 및 Y2 모이어티는 H이며, 단 적어도 하나의 Q는 L-AA임).
일부 실시형태에서, 화학식 VII의 덴드리머는 25개와 32개 사이의 Y2 모이어티를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 VII의 덴드리머는 29개와 32개 사이의 Y2 모이어티를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 VII의 덴드리머는 29개의 Y2 모이어티를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 VII의 덴드리머는 30개의 Y2 모이어티를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 VII의 덴드리머는 31개의 Y2 모이어티를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 VII의 덴드리머는 32개의 Y2 모이어티를 갖는다.
일부 실시형태에서, 화학식 VII의 덴드리머는 25개와 32개 사이의 L-AA 모이어티를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 VII의 덴드리머는 29개와 32개 사이의 L-AA 모이어티를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 VII의 덴드리머는 29개의 L-AA 모이어티를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 VII의 덴드리머는 30개의 L-AA 모이어티를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 VII의 덴드리머는 31개의 L-AA 모이어티를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 VII의 덴드리머는 32개의 L-AA 모이어티를 갖는다.
일부 실시형태에서, 화학식 VII의 덴드리머는 Q 및/또는 Y2 위치에 0개와 14개 사이의 수소를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 VII의 덴드리머는 Q 및/또는 Y2 위치에 0개와 6개 사이의 수소를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 VII의 덴드리머는 Q 및/또는 Y2 위치에 하나의 수소를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 VII의 덴드리머는 Q 및/또는 Y2 위치에 2개의 수소를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 VII의 덴드리머는 Q 및/또는 Y2 위치에 3개의 수소를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 VII의 덴드리머는 Q 및/또는 Y2 위치에 4개의 수소를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 VII의 덴드리머는 Q 및/또는 Y2 위치에 5개의 수소를 갖는다. 일부 실시형태에서, 화학식 VII의 덴드리머는 Q 및/또는 Y2 위치에 6개의 수소를 갖는다.
일부 실시형태에서, y는 39와 53 사이의 정수이다. 일부 실시형태에서, y는 41과 50 사이의 정수이다. 일부 실시형태에서, y는 44와 48 사이의 정수이다. 일부 실시형태에서, y는 45, 46 또는 47로부터 선택되는 정수이다. 일부 실시형태에서, y는 39이다. 일부 실시형태에서, y는 40이다. 일부 실시형태에서, y는 41이다. 일부 실시형태에서, y는 42이다. 일부 실시형태에서, y는 43이다. 일부 실시형태에서, y는 44이다. 일부 실시형태에서, y는 45이다. 일부 실시형태에서, y는 46이다. 일부 실시형태에서, y는 47이다. 일부 실시형태에서, y는 48이다. 일부 실시형태에서, y는 49이다. 일부 실시형태에서, y는 50이다. 일부 실시형태에서, y는 51이다. 일부 실시형태에서, y는 52이다. 일부 실시형태에서, y는 53이다.
"약학적으로 허용 가능한 염"이란 표현은 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 및 화학식 VII의 덴드리머의 생물학적 효과 및 물성을 보유하고, 전형적으로 생물학적으로 바람직하거나 그 외에 바람직하지 않은 산 부가염 또는 염기 염을 포함한다. 많은 경우, 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 및 화학식 VII의 덴드리머는 염기성 기 및/또는 카르복실기 또는 이와 유사한 기의 존재로 인해 산 및/또는 염기 염을 형성할 수 있다.
화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 및 화학식 VII의 덴드리머의 약학적으로 허용 가능한 염은 통상적인 화학적 방법에 의해 염기성 또는 산성 모이어티로부터 합성될 수 있다. 일반적으로, 이 같은 염은 이들 화합물의 유리 산 형태를 화학 양론적 양의 적당한 염기와 반응시키거나, 이들 화합물의 유리 염기 형태를 화학 양론적 양의 적당한 산과 반응시킴으로써 제조될 수 있다. 이 같은 반응은 전형적으로 물 또는 유기 용매 중에서 수행되거나, 이들 둘의 혼합물 중에서 수행된다. 일반적으로, 에테르, 에틸아세테이트, 에탄올, 이소프로판올, 또는 아세토니트릴과 같은 비수성 매질의 사용은, 실시 가능한 경우에 바람직하다. 부가적인 적당한 염의 목록은, 예를 들어 문헌["Remington's Pharmaceutical Sciences," 20th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., (1985)]; 문헌[Berge et al., "J. Pharm. Sci., 1977, 66, 1~19]; 및 문헌["Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use" by Stahl and Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Germany, 2002)]에서 찾아볼 수 있다.
본원에 주어진 임의의 화학식은 또한 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 및 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염에 대한 표지되지 않은 형태뿐만 아니라 동위원소 표지된 형태를 나타낼 수 있다. 동위원소 표지된 화합물은, 하나 이상의 원자가 원소는 동일하지만 질량수가 다른 원자에 의해 교체된다는 것을 제외하고, 본원에 주어진 화학식으로 나타나 있는 구조를 갖는다. 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 및 화학식 VII의 덴드리머 및 이들의 염 내에 혼입될 수 있는 동위원소의 예로는 수소, 탄소, 질소, 산소, 인, 불소 및 염소의 동위원소, 예를 들어 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 15N, 35S 및 125I를 들 수 있다. 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 및 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 3H, 11C, 14C, 35S 및 36Cl과 같은 방사능 동위원소가 존재하는 다양한 동위원소 표지된 화합물을 포함할 수 있다. 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 및 화학식 VII의 동위원소 표지된 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 일반적으로 당업자에게 알려져 있는 통상적인 기법, 또는 앞서 사용된 표지되지 않은 시약 대신에 적당한 동위원소 표지된 시약을 이용하여 첨부된 실시예에 개시된 바와 유사한 과정에 의해 제조될 수 있다.
화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 및 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 다양한 이성질체 형태를 가질 수 있다. "광학 이성질체" 또는 "입체 이성질체"란 표현은 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 및 화학식 VII의 소정의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염에 대해 존재할 수 있는 다양한 입체 이성질체 배열들 중 임의의 것을 지칭한다. 특히, 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 및 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 키랄성을 가지며, 이로 인해 거울상 이성질체 초과량이 약 0% e.e와 98% e.e 미만 사이인 거울상 이성질체의 혼합물로서 존재할 수 있다. 화합물이 순수한 거울상 이성질체인 경우, 각각의 키랄 중심에서의 입체 화학은 R 또는 S에 의해 특정될 수 있다. 이 같은 지명은 또한 하나의 거울상 이성질체가 풍부한 혼합물용으로 사용될 수 있다. 절대 배열이 알려져 있지 않은 분해된 화합물은 나트륨 D 선의 파장에서 평면 편광을 회전시키는 방향(우선성 또는 좌선성)에 따라 (+) 또는 (-)로 표기된다. 본 개시내용은 라세미 혼합물, 광학적으로 순수한 형태 및 중간체 혼합물을 포함하는 가능한 이성질체 모두를 포함한다는 것을 의미한다. 광학적으로 활성형인 (R)- 및 (S)-이성질체는 키랄 신톤(chiral synthon), 키랄 시약 또는 키랄 촉매를 사용하여 제조될 수 있거나, 키랄 HPLC와 같은 당해 기술분야에 잘 알려진 통상적인 기법을 이용하여 분해될 수 있다.
일부 실시형태에서, 개체에서 암을 치료하는 방법이 개시되어 있으며, 이때 이 방법은 개체에 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 약학적으로 허용 가능한 조성물을 유효량으로 피하 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 개체에서 암을 치료하는 방법이 개시되어 있으며, 이때 이 방법은 개체에 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 동결 건조된 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효량으로 포함하는 약학 조성물(약학적으로 허용 가능한 희석제 내에서 재건됨)을 피하 투여하는 단계를 포함한다.
"약학적으로 허용 가능한 조성물"이란 표현은, 당업자에 의해 확인된 바와 같이, 건전한 의학적 판단 범위 내에서 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응 또는 기타 문제 또는 합병증 없이 인간 및 동물의 조직과의 접촉에 사용하는데 적절한 화합물, 재료, 희석제, 부형제, 조성물 및/또는 투여 형태를 포함한다. 일부 실시형태에서, 약학적으로 허용 가능한 조성물은 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 동결 건조된 조성물이다. 일부 실시형태에서, 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 동결 건조된 조성물은 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 빙초산에 용해하여 용액을 형성하는 단계, 용액을 냉동 건조하는 단계 및 아세트산을 감압 하에 승화시키는 단계를 포함하는 공정에 의해 제조된다.
개시된 조성물은 당해 기술분야에 잘 알려져 있는 통상적인 약학적 부형제, 예를 들어 현탁제, 분산제 또는 습윤제, 보존제, 항산화제, 유화제, 결합제, 붕해제, 유동화제, 윤활제 또는 흡수제를 이용하여 통상적인 절차에 의해 수득될 수 있다.
일부 실시형태에서, 개시된 약학 조성물은 약학적으로 허용 가능한 희석제 중에서 재건되어 하나 이상의 수성 또는 비수성이고 비독성인 경구용으로 허용 가능한 완충 시스템, 희석제, 가용화제, 공용매 또는 담체 중의 멸균된 주사액을 형성한다. 또한, 멸균된 주사 제제는 멸균된 주사용 수성 또는 유성 현탁액 또는 비수성 희석제, 담체 또는 공용매 중의 현탁액일 수 있으며, 이는 적당한 분산제 또는 습윤제 및 현탁제 중 하나 이상을 이용하여 알려져 있는 절차에 따라 제형화될 수 있다. 일부 실시형태에서, 약학적으로 허용 가능한 희석제는 시트르산염 완충 용액을 포함한다. 일부 실시형태에서, 시트르산염 완충제는 pH가 5이다. 일부 실시형태에서, 시트르산염 완충제는 시트르산 일수화물, 시트르산나트륨 이수화물 및 무수 덱스트로오스를 포함한다. 일부 실시형태에서, 희석제는 5%(w/w) 덱스트로오스 중의 50 mM 시트르산염 완충제(pH 5)이다. 일부 실시형태에서, 약학적으로 허용 가능한 희석제는 아세트산염 완충 용액을 포함한다. 일부 실시형태에서, 아세트산염 완충 용액은 pH가 5이다. 일부 실시형태에서, 아세트산염 완충 용액은 아세트산, 무수 아세트산나트륨 및 덱스트로오스를 포함한다. 일부 실시형태에서, 아세트산염 완충제는 2.5%(w/w) 덱스트로오스 중의 100 mM 아세트산염 완충제(pH 5)를 포함한다. 일부 실시형태에서, 희석제는 5%(w/v) 글루코오스와 1:10으로 희석된 시트르산염/인산염 완충제(pH 5)이다.
약학 조성물은 정맥 볼루스(iv bolus)/주입 주사용 용액, 완충 시스템에 의한 재건용 멸균된 덴드리머, 또는 기타 부형제가 존재하거나 존재하지 않은 완충 시스템에 의한 재건용 동결 건조 시스템(덴드리머 단독 또는 부형제 포함)일 수 있다. 동결 건조(냉동 건조)된 물질은 비수성 용매 또는 수성 용매에서 제조될 수 있다. 또한, 투여 형태는 후속적인 주입을 위한 추가 희석용 농축물일 수 있다.
단일 투여 형태를 생성하기 위해 하나 이상의 부형제와 조합될 수 있는 유효 성분의 양은 처리된 숙주 및 특정 투여 경로에 따라 필연적으로 달라질 것이다. 투여 경로 및 복용 용법에 대한 추가적인 정보를 위해 독자는 문헌[Chapter 25.3 in Volume 5 of Comprehensive Medicinal Chemistry (Corwin Hansch; Chairman of Editorial Board), Pergamon Press 1990]을 참고한다.
화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 및 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 치료적 필요에 따라 1일 1회, 2회, 3회 또는 24시간 이내에 수회 투여될 수 있다. 당업자라면 개체에 따라 각각의 개별 투여량을 쉽게 결정할 수 있다. 일부 실시형태에서, 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 및 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 하나의 투여 형태로 투여된다. 일부 실시형태에서, 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 및 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 다중 투여 형태로 투여된다.
일부 실시형태에서, 약학 조성물의 pH는 약 4.0와 약 6.0 사이, 예를 들어 약 4.8과 약 5.6 사이이다.
일부 실시형태에서, 약학 조성물은 순도가 알려져 있는 참고 표준물질에 대해 검정하는 경우에 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 약 90%와 110% 사이로 포함한다.
일부 실시형태에서, 약학 조성물의 순도는 크기 배제 크로마토그래피-UV(SEC-UV) 분석에 의해 측정할 때 약 75% 이상, 약 80% 이상, 약 85% 이상, 약 90% 이상 또는 약 95% 이상이다. 일부 실시형태에서, 약학 조성물의 순도는 SEC-UV 분석에 의해 측정할 때 약 85% 이상이다.
일부 실시형태에서, 약학 조성물은 약 10%(w/w) 미만, 예를 들어 약 9% 미만, 약 8% 미만, 약 7% 미만, 약 6% 미만, 약 5% 미만, 약 4% 미만, 약 3% 미만, 약 2% 미만 또는 약 1% 미만의 총 불순물을 포함한다. 일부 실시형태에서, 약학 조성물은 약 1%와 10%(w/w) 사이의 총 불순물을 포함한다. 일부 실시형태에서, 약학 조성물은 약 1%와 5%(w/w) 사이의 총 불순물을 포함한다. 일부 실시형태에서, 약학 조성물은 약 3%(w/w) 미만의 총 불순물을 포함한다.
일부 실시형태에서, 약학 조성물은 약 10% 미만, 약 9% 미만, 약 8% 미만, 약 7% 미만, 약 6% 미만, 약 5% 미만, 약 4% 미만, 약 3% 미만, 약 2% 미만 또는 약 1%(w/w) 미만의 유리 화합물 A를 포함한다.
일부 실시형태에서, 약학 조성물은 약 10% 미만, 약 9% 미만, 약 8% 미만, 약 7% 미만, 약 6% 미만, 약 5% 미만, 약 4% 미만, 약 3% 미만, 약 2% 미만, 약 1% 미만 또는 약 0.5%(w/w) 미만의 임의의 단일 불특정 불순물을 포함한다. 일부 실시형태에서, 약학 조성물은 약 0.5%(w/w)의 임의의 단일 불특정 불순물을 포함한다.
일부 실시형태에서, 약학 조성물은 약 10% 미만, 약 9% 미만, 약 8% 미만, 약 7% 미만, 약 6% 미만, 약 5% 미만, 약 4% 미만, 약 3% 미만, 약 2% 미만 또는 약 1%(w/w) 미만의 총 유리 불순물을 포함한다.
일부 실시형태에서, 약학 조성물은 약 10% 이하, 약 9% 이하, 약 8% 이하, 약 7% 이하, 약 6% 이하, 약 5% 이하, 약 4% 이하, 약 3% 이하, 약 2% 이하 또는 약 1%(w/w) 이하의 아세트산을 포함한다. 일부 실시형태에서, 약학 조성물은 약 1.5%(w/w) 이하의 아세트산을 포함한다.
일부 실시형태에서, 아세트산은 낮은 수분 함량, 예를 들어 약 1,000 ppm 미만, 약 900 ppm 미만, 약 800 ppm 미만, 약 700 ppm 미만, 약 600 ppm 미만, 약 500 ppm 미만, 약 400 ppm 미만, 약 300 ppm 미만, 약 200 ppm 미만, 약 100 ppm 미만 또는 약 50 ppm 미만의 수분 함량을 갖는다. 일부 실시형태에서, 아세트산은 약 10% 미만, 약 5% 미만, 약 4% 미만, 약 3% 미만, 약 2% 미만, 약 1% 미만, 약 0.5% 미만, 약 0.1% 미만, 약 0.09% 미만, 약 0.08% 미만, 약 0.07% 미만, 약 0.06% 미만, 약 0.05% 미만, 약 0.04% 미만, 약 0.03% 미만, 약 0.02% 미만 또는 약 0.01% 미만의 수분 함량을 갖는다.
일부 실시형태에서, 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 동결 건조된 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 약학 조성물이 개시되어 있으며, 이때 약학 조성물은 약 2% 이하의 아세트산을 포함한다. 일부 실시형태에서, 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V 또는 화학식 VII의 동결 건조된 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 약학 조성물은 약 2% 이하의 아세트산을 포함하며, 이때 아세트산은 약 200 ppm 미만의 물을 포함한다.
일부 실시형태에서, 약학 조성물은 동적 광산란(DLS)에 의해 측정된 약 15 d.㎚과 약 25 d.㎚ 사이, 예를 들어 약 17 d.㎚과 약 19 d.㎚ 사이의 의 평균 입자 크기를 갖는다.
일부 실시형태에서, 약학 조성물은 동적 광산란(DLS)에 의해 측정할 때 약 0.20과 약 0.30 사이의 PDI를 갖는다.
일부 실시형태에서, 약학 조성물은 약학적으로 허용 가능한 희석제 또는 용매 중에서 재건 시 50 ㎖ 컨테이너 당 약 10 ㎛ 이상의 미립자를 약 10,000개 이하, 약 9,000개 이하, 약 8,000개 이하, 약 7,000개 이하, 약 6,000개 이하, 약 5,000개 이하, 약 4,000개 이하, 약 3,000개 이하, 약 2,000개 이하, 약 1,000개 이하 또는 약 500개 이하로 포함한다. 일부 실시형태에서, 약학 조성물은 약학적으로 허용 가능한 희석제 또는 용매 중에서 재건 시 50 ㎖ 컨테이너 당 약 10 ㎛ 이상의 미립자를 약 6,000개 이하로 포함한다.
일부 실시형태에서, 약학 조성물은 약학적으로 허용 가능한 희석제 또는 용매 중에서 재건 시 50 ㎖ 컨테이너 당 약 25 ㎛ 이상의 미립자를 약 1,000개 이하, 약 900개 이하, 약 800개 이하, 약 700개 이하, 약 600개 이하, 약 500개 이하, 약 400개 이하, 약 300개 이하, 약 200개 이하, 약 100개 이하 또는 약 50개 이하로 포함한다. 일부 실시형태에서, 약학 조성물은 약학적으로 허용 가능한 희석제 또는 용매 중에서 재건 시 50 ㎖ 컨테이너 당 약 25 ㎛ 이상의 미립자를 약 600개 이하로 포함한다.
일부 실시형태에서, 약학적으로 허용 가능한 희석제 또는 용매 중에서 재건 시 약학 조성물의 삼투질 농도(osmolality)는 약 200 mOsmol/㎏와 약 400 mOsmol/㎏ 사이, 예를 들어 약 250 mOsmol/㎏와 약 350 mOsol/㎏ 사이, 약 260 mOsmol/㎏와 약 330 mOsmol/㎏ 사이 또는 약 270 mOsmol/㎏와 약 328 mOsmol/㎏ 사이이다.
일부 실시형태에서, 약학 조성물은 약 0.1 EU/㎎ 이하, 약 0.09 EU/㎎ 이하, 약 0.08 EU/㎎ 이하, 약 0.07 EU/㎎ 이하, 약 0.06 EU/㎎ 이하, 약 0.05 EU/㎎ 이하, 약 0.04 EU/㎎ 이하, 약 0.03 EU/㎎ 이하, 약 0.02 EU/㎎ 이하 또는 약 0.01 EU/㎎ 이하의 내독소 한도(endotoxin limit)를 갖는다.
하나의 실시형태에서, 암의 피하 치료를 위한 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 용도가 개시되어 있다.
하나의 실시형태에서, 암의 피하 치료를 위한 약제의 제조에 있어서 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 용도가 개시되어 있다.
하나의 실시형태에서, 암의 피하 치료를 위한 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 개시되어 있다.
하나의 실시형태에서, 암의 피하 치료를 위한 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 약학 조성물이 개시되어 있다.
"치료하기", "치료하는" 및 "치료"란 표현은 개체에서의 Bcl-2 및/또는 Bcl-XL 또는 암과 관련된 효소 또는 단백질 활성의 감소 또는 억제, 개체에서의 암의 하나 이상의 증상의 개선, 또는 개체에서의 암의 진행의 감속 또는 지연을 포함한다. 또한 "치료하기", "치료하는" 및 "치료"란 표현은 개체에서의 종양의 성장 또는 암세포의 증식의 감소 또는 억제를 포함한다.
"암"이란 용어는 혈액성 악성 종양(예를 들어, 림프종, 백혈병) 및 고형 악성 종양을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. "암"이란 용어는, 예를 들어 T-세포 백혈병, T-세포 림프종, 급성 림프모구성 림프종(ALL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 소형 림프구성 림프종(SLL), 만성 골수성 백혈병(CML), 급성 단핵구성 백혈병(AML), 다발성 골수종, 외투 세포 림프종, 미만성 대형 B-세포 림프종(DLBCL), 버키트 림프종(Burkitt's lymphoma), 비호지킨 림프종(Non-Hodgkin's lymphoma), 소포성 림프종 및 고형 종양, 예를 들어 비소세포 폐암(NSCLC, 예를 들어 EGF 돌연변이형 NSCLC, KRAS 돌연변이형 NSCLC), 소세포 폐암(SCLC), 유방암, 신경아세포종, 난소암, 전립선암, 흑색종(예를 들어, BRAF 돌연변이형 흑색종, KRAS 돌연변이형 흑색종), 췌장암, 자궁암, 자궁내막암 및 결장암(예를 들어, KRAS 돌연변이형 결장암, BRAF 돌연변이형 결장암)을 포함한다.
"개체"란 용어는 온혈 포유동물, 예를 들어 영장류, 개, 고양이, 토끼, 래트 및 마우스를 포함한다. 일부 실시형태에서, 개체는 영장류, 예를 들어 인간이다. 일부 실시형태에서, 개체는 암 또는 면역 질환을 앓고 있다. 일부 실시형태에서, 개체는 치료를 필요로 한다(예를 들어, 개체는 치료로부터 생물학적 또는 의학적으로 도움을 받을 수 있음). 일부 실시형태에서, 개체는 암을 앓고 있다. 일부 실시형태에서, 개체는 EGFR-M 양성 암(예를 들어, 비소세포 폐암)을 앓고 있다. 일부 실시형태에서, EGFR-M 양성 암은 주로 T790M 양성 돌연변이를 갖는다. 일부 실시형태에서, EGFR-M 양성 암은 주로 T790M 음성 돌연변이를 갖는다. 일부 실시형태에서, 개체는 혈액성(예를 들어, 림프종, 백혈병) 또는 고형 악성 종양, 예를 들어 급성 림프모구성 림프종(ALL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 소형 림프구성 림프종(SLL), 만성 골수성 백혈병(CML), 급성 단핵구성 백혈병(AMoL), 다발성 골수종, 외투 세포 림프종, 미만성 대형 B-세포 림프종(DLBCL), 버키트 림프종, 비호지킨 림프종, 소포성 림프종 및 고형 종양, 예를 들어, 비소세포 폐암(NSCLC), 소세포 폐암(SCLC), 유방암, 신경아세포종, 전립선암, 흑색종, 췌장암, 자궁암, 자궁내막암 및 결장암을 앓고 있다.
"유효량"이란 표현은 개체에서의 생물학적 또는 의학적 반응, 예를 들어 Bcl-2 및/또는 Bcl-XL 또는 암과 관련된 효소 또는 단백질 활성의 감소 또는 억제; 암 증상의 개선; 또는 암 진행의 감속 또는 지연을 유발할 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 양을 포함한다. 일부 실시형태에서, "유효량"이란 표현은, 개체에 투여되는 경우에 암을 적어도 부분적으로 완화, 억제 및/또는 개선시키고/시키거나 Bcl-2 및/또는 Bcl-XL을 억제하는데 효과적이고/이거나 개체에서 종양의 성장 또는 암세포의 증식을 감소 또는 억제하는데 효과적인 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 제2 항암제의 양을 포함한다.
일부 실시형태에서, 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 유효량은 약 1 ㎎/㎏과 약 500 ㎎/㎏ 사이일 수 있다. 일부 실시형태에서, 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 유효량은 약 10 ㎎/㎏과 약 300 ㎎/㎏ 사이일 수 있다. 일부 실시형태에서, 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 유효량은 약 10 ㎎/㎏과 약 100 ㎎/㎏ 사이일 수 있다. 일부 실시형태에서, 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 유효량은 약 10 ㎎/㎏과 약 60 ㎎/㎏ 사이일 수 있다. 일부 실시형태에서, 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 유효량은 약 10 ㎎/㎏과 약 30 ㎎/㎏ 사이일 수 있다. 일부 실시형태에서, I, II, III, IV, V, VI 또는 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 유효량은 약 20 ㎎/㎏ 내지 약 100 ㎎/㎏일 수 있다. 일부 실시형태에서, 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 유효량은 약 10 ㎎/㎏, 약 30 ㎎/㎏, 약 40 ㎎/㎏, 약 50 ㎎/㎏, 약 60 ㎎/㎏, 약 70 ㎎/㎏, 약 80 ㎎/㎏, 약 90 ㎎/㎏, 약 100 ㎎/㎏, 약 300 ㎎/㎏ 또는 약 145 ㎎/㎏일 수 있다.
하나의 실시형태에서, 개체에서 암을 치료하는 방법이 개시되어 있으며, 이때 이 방법은 개체에 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효량을 피하 투여하는 단계; 및 별도로, 순차적으로 또는 동시에 유효량의 아칼라브루티닙 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 경구 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 림프종을 치료하는 방법이 개시되어 있으며, 이때 이 방법은 개체에 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효량으로 피하 투여하는 단계, 및 별도로, 순차적으로 또는 동시에 유효량의 아칼라브루티닙 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 경구 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 비호지킨 림프종을 치료하는 방법이 개시되어 있으며, 이때 이 방법은 개체에 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효량으로 피하 투여하는 단계; 및 별도로, 순차적으로 또는 동시에 유효량의 아칼라브루티닙 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 경구 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 DLBCL을 치료하는 방법이 개시되어 있으며, 이때 이 방법은 개체에 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효량으로 피하 투여하는 단계; 및 별도로, 순차적으로 또는 동시에 유효량의 아칼라브루티닙 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 경구 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 활성화된 B-세포 DLBCL(ABC-DLBCL)을 치료하는 방법이 개시되어 있으며, 이때 이 방법은 개체에 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효량을 피하 투여하는 단계; 및 별도로, 순차적으로 또는 동시에 유효량의 아칼라브루티닙 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 경구 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 BTK-민감성 또는 BTK-불감성 DLBCL을 치료하는 방법이 개시되어 있으며, 이때 이 방법은 개체에 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효량을 피하 투여하는 단계; 및 별도로, 순차적으로 또는 동시에 유효량의 아칼라브루티닙 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 경구 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 개체에서 OCI-LY10 DLBCL을 치료하는 방법이 개시되어 있으며, 이때 이 방법은 개체에 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효량으로 피하 투여하는 단계; 및 별도로, 순차적으로 또는 동시에 유효량의 아칼라브루티닙 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 경구 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 MCL을 치료하는 방법이 개시되어 있으며, 이때 이 방법은 개체에 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효량으로 피하 투여하는 단계; 및 별도로, 순차적으로 또는 동시에 유효량의 아칼라브루티닙 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 경구 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 백혈병을 치료하는 방법이 개시되어 있으며, 이때 이 방법은 개체에 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효량으로 피하 투여하는 단계; 및 별도로, 순차적으로 또는 동시에 유효량의 아칼라브루티닙 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 경구 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 CLL을 치료하는 방법이 개시되어 있으며, 이때 이 방법은 개체에 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효량으로 피하 투여하는 단계; 및 별도로, 순차적으로 또는 동시에 유효량의 아칼라브루티닙 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 경구 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 AML을 치료하는 방법이 개시되어 있으며, 이때 이 방법은 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효량으로 피하 투여하는 단계; 및 별도로, 순차적으로 또는 동시에 유효량의 아칼라브루티닙 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 경구 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 암을 치료하기 위한 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 개시되어 있으며, 이때 상기 치료는 상기 개체에 별도로, 순차적으로 또는 동시에 (i) 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 피하 투여하는 단계, 및 (ii) 아칼라브루티닙을 경구 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 비호지킨 림프종을 치료하기 위한 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 개시되어 있으며, 이때 상기 치료는 상기 개체에 별도로, 순차적으로 또는 동시에 (i) 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 피하 투여하는 단계; 및 (ii) 아칼라브루티닙을 경구 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 DLBCL을 치료하기 위한 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 개시되어 있으며, 이때 상기 치료는 상기 개체에 별도로, 순차적으로 또는 동시에 (i) 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 피하 투여하는 단계; 및 (ii) 아칼라브루티닙을 경구 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 활성화된 B-세포 DLBCL(ABC-DLBCL)을 치료하기 위한 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 개시되어 있으며, 이때 상기 치료는 상기 개체에 별도로, 순차적으로 또는 동시에 (i) 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 피하 투여하는 단계; 및 (ii) 아칼라브루티닙을 경구 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 BTK-민감성 또는 BTK-불감성 DLBCL을 치료하기 위한 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 개시되어 있으며, 이때 상기 치료는 상기 개체에 별도로, 순차적으로 또는 동시에 (i) 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 피하 투여하는 단계; 및 (ii) 아칼라브루티닙을 경구 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 OCI-LY10 DLBCL을 치료하기 위한 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 개시되어 있으며, 이때 상기 치료는 상기 개체에 별도로, 순차적으로 또는 동시에 (i) 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 피하 투여하는 단계; 및 (ii) 아칼라브루티닙을 경구 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 MCL을 치료하기 위한 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 개시되어 있으며, 이때 상기 치료는 상기 개체에 별도로, 순차적으로 또는 동시에 (i) 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 피하 투여하는 단계; 및 (ii) 아칼라브루티닙을 경구 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 백혈병을 치료하기 위한 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 개시되어 있으며, 이때 상기 치료는 상기 개체에 별도로, 순차적으로 또는 동시에 (i) 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 피하 투여하는 단계; 및 (ii) 아칼라브루티닙을 경구 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 CLL을 치료하기 위한 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 개시되어 있으며, 이때 상기 치료는 상기 개체에 별도로, 순차적으로 또는 동시에 (i) 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 피하 투여하는 단계; 및 (ii) 아칼라브루티닙을 경구 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 AML을 치료하기 위한 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 개시되어 있으며, 이때 상기 치료는 상기 개체에 별도로, 순차적으로 또는 동시에 (i) 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 피하 투여하는 단계; 및 (ii) 아칼라브루티닙을 경구 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 암을 치료하기 위한 아칼라브루티닙이 개시되어 있으며, 상기 치료는 상기 개체에 별도로, 순차적으로 또는 동시에 (i) 아칼라브루티닙을 경구 투여하는 단계, 및 (ii) 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 피하 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 DLBCL을 치료하기 위한 아칼라브루티닙이 개시되어 있으며, 상기 치료는 상기 개체에 별도로, 순차적으로 또는 동시에 (i) 아칼라브루티닙을 경구 투여하는 단계, 및 (ii) 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 피하 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 활성화된 B-세포 DLBCL(ABC-DLBCL)을 치료하기 위한 아칼라브루티닙이 개시되어 있으며, 상기 치료는 상기 개체에 별도로, 순차적으로 또는 동시에 (i) 아칼라브루티닙을 경구 투여하는 단계, 및 (ii) 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 피하 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 BTK-민감성 또는 BTK-불감성 DLBCL을 치료하기 위한 아칼라브루티닙이 개시되어 있으며, 상기 치료는 상기 개체에 별도로, 순차적으로 또는 동시에 (i) 아칼라브루티닙을 경구 투여하는 단계, 및 (ii) 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 피하 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 OCI-LY10 DLBCL을 치료하기 위한 아칼라브루티닙이 개시되어 있으며, 상기 치료는 상기 개체에 별도로, 순차적으로 또는 동시에 (i) 아칼라브루티닙을 경구 투여하는 단계, 및 (ii) 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 피하 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 MCL을 치료하기 위한 아칼라브루티닙이 개시되어 있으며, 상기 치료는 상기 개체에 별도로, 순차적으로 또는 동시에 (i) 아칼라브루티닙을 경구 투여하는 단계, 및 (ii) 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 피하 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 백혈병을 치료하기 위한 아칼라브루티닙이 개시되어 있으며, 상기 치료는 상기 개체에 별도로, 순차적으로 또는 동시에 (i) 아칼라브루티닙을 경구 투여하는 단계, 및 (ii) 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 피하 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 CLL을 치료하기 위한 아칼라브루티닙이 개시되어 있으며, 상기 치료는 상기 개체에 별도로, 순차적으로 또는 동시에 (i) 아칼라브루티닙을 경구 투여하는 단계, 및 (ii) 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 피하 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 AML을 치료하기 위한 아칼라브루티닙이 개시되어 있으며, 상기 치료는 상기 개체에 별도로, 순차적으로 또는 동시에 (i) 아칼라브루티닙을 경구 투여하는 단계, 및 (ii) 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 피하 투여하는 단계를 포함한다.
하나의 실시형태에서, 개체에서 암을 치료하는 방법이 개시되어 있으며, 이때 이 방법은 상기 개체에 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효량으로 피하 투여하는 단계; 및 별도로, 순차적으로 또는 동시에 유효량의 리툭시맙(rituximab) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 정맥 내 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 림프종을 치료하는 방법이 개시되어 있으며, 이때 이 방법은 상기 개체에 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효량으로 피하 투여하는 단계; 및 별도로, 순차적으로 또는 동시에 유효량의 리툭시맙 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 정맥 내 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 비호지킨 림프종을 치료하는 방법이 개시되어 있으며, 이때 이 방법은 상기 개체에 I, II, III, IV, V, VI 또는 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효량으로 피하 투여하는 단계; 및 별도로, 순차적으로 또는 동시에 유효량의 리툭시맙 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 정맥 내 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 DLBCL을 치료하는 방법이 개시되어 있으며, 이때 이 방법은 상기 개체에 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효량으로 피하 투여하는 단계; 및 별도로, 순차적으로 또는 동시에 유효량의 리툭시맙 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 정맥 내 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 활성화된 생식 중심 B-세포 DLBCL(GCB-DLBCL)을 치료하는 방법이 개시되어 있으며, 이때 이 방법은 개체에 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효량으로 피하 투여하는 단계; 및 별도로, 순차적으로 또는 동시에 유효량의 리툭시맙 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 정맥 내 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 백혈병을 치료하는 방법이 개시되어 있으며, 이때 이 방법은 개체에 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효량으로 피하 투여하는 단계; 및 별도로, 순차적으로 또는 동시에 유효량의 리툭시맙 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 정맥 내 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 CLL을 치료하는 방법이 개시되어 있으며, 이때 이 방법은 개체에 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효량으로 피하 투여하는 단계; 및 별도로, 순차적으로 또는 동시에 유효량의 리툭시맙 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 정맥 내 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 AML을 치료하는 방법이 개시되어 있으며, 이때 이 방법은 개체에 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효량으로 피하 투여하는 단계; 및 별도로, 순차적으로 또는 동시에 유효량의 리툭시맙 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 정맥 내 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 암을 치료하기 위한 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 개시되어 있으며, 이때 상기 치료는 상기 개체에 별도로, 순차적으로 또는 동시에 (i) 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 피하 투여하는 단계; 및 (ii) 리툭시맙을 정맥 내 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 림프종을 치료하기 위한 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 개시되어 있으며, 이때 상기 치료는 상기 개체에 별도로, 순차적으로 또는 동시에 (i) 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 피하 투여하는 단계; 및 (ii) 리툭시맙을 정맥 내 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 비호지킨 림프종을 치료하기 위한 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 개시되어 있으며, 이때 상기 치료는 상기 개체에 별도로, 순차적으로 또는 동시에 (i) 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 피하 투여하는 단계; 및 (ii) 리툭시맙을 정맥 내 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 DLBCL을 치료하기 위한 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 개시되어 있으며, 이때 상기 치료는 상기 개체에 별도로, 순차적으로 또는 동시에 (i) 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 피하 투여하는 단계; 및 (ii) 리툭시맙을 정맥 내 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 생식 세포 B-세포 DLBCL(GCB-DLBCL)을 치료하기 위한 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 개시되어 있으며, 이때 상기 치료는 상기 개체에 별도로, 순차적으로 또는 동시에 (i) 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 피하 투여하는 단계; 및 (ii) 리툭시맙을 정맥 내 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 백혈병을 치료하기 위한 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 개시되어 있으며, 이때 상기 치료는 상기 개체에 별도로, 순차적으로 또는 동시에 (i) 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 피하 투여하는 단계; 및 (ii) 리툭시맙을 정맥 내 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 CLL을 치료하기 위한 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 개시되어 있으며, 이때 상기 치료는 상기 개체에 별도로, 순차적으로 또는 동시에 (i) 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 피하 투여하는 단계; 및 (ii) 리툭시맙을 정맥 내 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 AML을 치료하기 위한 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 개시되어 있으며, 이때 상기 치료는 상기 개체에 별도로, 순차적으로 또는 동시에 (i) 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 피하 투여하는 단계; 및 (ii) 리툭시맙을 정맥 내 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 암을 치료하기 위한 리툭시맙이 개시되어 있으며, 이때 상기 치료는 상기 개체에 별도로, 순차적으로 또는 동시에 (i) 리툭시맙을 정맥 내 투여하는 단계; 및 (ii) 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 피하 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 림프종을 치료하기 위한 리툭시맙이 개시되어 있으며, 이때 상기 치료는 상기 개체에 별도로, 순차적으로 또는 동시에 (i) 리툭시맙을 정맥 내 투여하는 단계; 및 (ii) 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 피하 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 비호지킨 림프종을 치료하기 위한 리툭시맙이 개시되어 있으며, 이때 상기 치료는 상기 개체에 별도로, 순차적으로 또는 동시에 (i) 리툭시맙을 정맥 내 투여하는 단계; 및 (ii) 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 피하 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 DLBCL을 치료하기 위한 리툭시맙이 개시되어 있으며, 이때 상기 치료는 상기 개체에 별도로, 순차적으로 또는 동시에 (i) 리툭시맙을 정맥 내 투여하는 단계; 및 (ii) 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 피하 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 생식 세포 B-세포 DLBCL(GBC-DLBCL)을 치료하기 위한 리툭시맙이 개시되어 있으며, 이때 상기 치료는 상기 개체에 별도로, 순차적으로 또는 동시에 (i) 리툭시맙을 정맥 내 투여하는 단계; 및 (ii) 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 피하 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 백혈병을 치료하기 위한 리툭시맙이 개시되어 있으며, 이때 상기 치료는 상기 개체에 별도로, 순차적으로 또는 동시에 (i) 리툭시맙을 정맥 내 투여하는 단계; 및 (ii) 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 피하 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 CLL을 치료하기 위한 리툭시맙이 개시되어 있으며, 이때 상기 치료는 상기 개체에 별도로, 순차적으로 또는 동시에 (i) 리툭시맙을 정맥 내 투여하는 단계; 및 (ii) 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 피하 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 AML을 치료하기 위한 리툭시맙이 개시되어 있으며, 이때 상기 치료는 상기 개체에 별도로, 순차적으로 또는 동시에 (i) 리툭시맙을 정맥 내 투여하는 단계; 및 (ii) 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 피하 투여하는 단계를 포함한다.
하나의 실시형태에서, 개체에서 암을 치료하는 방법이 개시되어 있으며, 이때 이 방법은 개체에 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효량으로 피하 투여하는 단계; 및 별도로, 순차적으로 또는 동시에 유효량의 비스투세르팁(vistusertib; AZD2014) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 경구 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 소세포 폐암을 치료하는 방법이 개시되어 있으며, 이때 이 방법은 개체에 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효량으로 피하 투여하는 단계; 및 별도로, 순차적으로 또는 동시에 유효량의 비스투세르팁(AZD2014) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 경구 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 암을 치료하기 위한 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 개시되어 있으며, 이때 상기 치료는 상기 개체에 별도로, 순차적으로 또는 동시에 (i) 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 피하 투여하는 단계; 및 (ii) 비스투세르팁(AZD2014)을 경구 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 소세포 폐암을 치료하기 위한 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 개시되어 있으며, 이때 상기 치료는 상기 개체에 별도로, 순차적으로 또는 동시에 (i) 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 피하 투여하는 단계; 및 (ii) 비스투세르팁(AZD2014)을 경구 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 암을 치료하기 위한 비스투세르팁(AZD2014) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 개시되어 있으며, 이때 상기 치료는 상기 개체에 별도로, 순차적으로 또는 동시에 (i) 비스투세르팁(AZD2014)을 경구 투여하는 단계; 및 (ii) 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 피하 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 개체에서 소세포 폐암을 치료하기 위한 비스투세르팁(AZD2014) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 개시되어 있으며, 이때 상기 치료는 상기 개체에 별도로, 순차적으로 또는 동시에 (i) 비스투세르팁 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 경구 투여하는 단계, 및 (ii) 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 피하 투여하는 단계를 포함한다.
하나의 양태에서, Bcl-2 및/또는 Bcl-XL의 억제를 필요로 하는 개체에서 Bcl-2 및/또는 Bcl-XL을 억제하기 위한 방법이 개시되어 있으며, 이때 이 방법은 개체에 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효량으로 피하 투여하는 단계를 포함한다.
하나의 양태에서, Bcl-2 및/또는 Bcl-XL을 피하 억제하는데 사용하기 위한, 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 약학 조성물이 개시되어 있다.
하나의 양태에서, Bcl-2 및/또는 Bcl-XL을 피하 억제하기 위한 약제의 제조에 있어서 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 용도가 개시되어 있다.
하나의 양태에서, Bcl-2 및/또는 Bcl-XL을 피하 억제하는데 사용하기 위한 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 약학 조성물이 개시되어 있다.
"Bcl-2"란 용어는 B-세포 림프종 2를 지칭하고, "Bcl-XL"이란 용어는 BCL-2 단백질 패밀리의 항-세포자멸성 멤버인 특대 B-세포 림프종을 지칭한다.
일부 실시형태에서, 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 하나 이상의 컨테이너 및 피하 사용을 위한 설명서를 포함하는 부품으로 이루어진 키트가 개시되어 있다. 일부 실시형태에서, 키트는 약학적으로 허용 가능한 희석제가 담겨있는 하나 이상의 컨테이너를 추가로 포함한다. "컨테이너"란 용어는 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 및 약학적으로 허용 가능한 희석제를 담기에 적절한 임의의 컨테이너, 예를 들어 바이알, 캐니스터(cannister), 봉투, 병, 주사기 등을 포함한다. 일부 실시형태에서, 키트는 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV, 화학식 V, 화학식 VI 또는 화학식 VII의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 투여하는데 요구되는 성분, 예를 들어 주사바늘, 주사기, 배관 등을 추가로 포함한다.
"약학적으로 허용 가능한 희석제"란 용어는, 당업자에 의해 확인된 바와 같이, 건전한 의학적 판단 범위 내에서 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응 또는 기타 문제 또는 합병증 없이 인간 및 동물의 조직과의 접촉에 사용하는데 적절한 재료 및 희석제를 포함한다. 일부 실시형태에서, 약학적으로 허용 가능한 희석제는 시트르산염 완충 용액을 포함한다. 일부 실시형태에서, 시트르산염 완충제는 pH가 5이다. 일부 실시형태에서, 시트르산염 완충제는 시트르산 일수화물, 시트르산나트륨 이수화물 및 무수 덱스트로오스를 포함한다. 일부 실시형태에서, 희석제는 5%(w/w) 덱스트로오스 중의 50 mM 시트르산염 완충제(pH 5)이다. 일부 실시형태에서, 약학적으로 허용 가능한 희석제는 아세트산염 완충 용액을 포함한다. 일부 실시형태에서, 아세트산염 완충 용액은 pH가 5이다. 일부 실시형태에서, 아세트산염 완충 용액은 아세트산, 무수 아세트산나트륨 및 덱스트로오스를 포함한다. 일부 실시형태에서, 아세트산염 완충제는 2.5%(w/w) 덱스트로오스 중의 100 mM 아세트산염 완충제(pH 5)를 포함한다.
실시예
본 개시내용의 양태는 본 개시내용의 특정 화합물 및 중간체의 제조 및 본 개시내용의 화합물을 이용하기 위한 방법을 상세하게 설명하는 하기 비제한적인 실시예를 참고하여 추가로 한정될 수 있다. 본 개시내용의 범주에서 벗어나지 않는 한, 재료 및 방법 둘 모두에 대한 다양한 변경이 실시될 수 있다는 것이 당업자에게 자명할 것이다.
달리 언급하지 않는 한:
(i) 모든 합성은 달리 언급하지 않는 한 주위 온도, 즉 17℃ 내지 25℃의 범위 내에서 질소와 같은 불활성 기체의 분위기 하에 수행되었고;
(ii) 증발은 뷰키(Buchi) 또는 하이돌프(Heidolph) 기기 이용하여 감압 하에 회전 증발에 의해 수행되었고;
(iii) 동결 건조는 랩콘코 프리존 6 플러스(Labconco FreeZone 6 Plus) 냉동 건조 시스템을 이용하여 수행되었고;
(iv) 크기 배제 크로마토그래피 정제는 세파덱스(Sephadex) LH-20 비드로 채워진 칼럼을 이용하여 실시되었고;
(v) 분취 크로마토그래피는 워터스 엑스브리지(Waters XBridge) BEH C18(5 μM, 30 ㎜ x 150 ㎜) 칼럼을 이용하여 UV-개시 수집 기능이 있는 길슨 프렙(Gilson Prep) GX-271 시스템 상에서 실시되었고;
(vi) 한외여과 정제는 막 카세트에 연결된 콜-파머(Cole-Parmer) 기어 펌프 구동 시스템(메르크 밀리포어 펠리콘(Merck Millipore Pellicon) 3, 0.11 m2, 10 kDa)을 이용하여 실시되었고;
(vii) 분석용 크로마토그래피는 PDA 검출 기능이 있는 워터스 얼라이언스(Waters Alliance) 2695 분리 모듈 상에서 실시되었고;
(viii) 수율이 존재하는 경우에 이는 반드시 수득 가능한 최대치가 아니고;
(ix) 일반적으로, 덴드리머의 최종 산물의 구조는 NMR 분광법에 의해 확인되었으며; 1H 및 19F NMR 화학적 이동값(chemical shift value)은 델타 스케일로 측정되었고[양자 자기 공명 스펙트럼은 브루커 아반스(Bruker Avance) 300(300 MHz) 장비를 이용하여 측정되었음]; 측정은, 달리 명시하지 않는 한, 주위 온도에서 실시되었고; 1HNMR에서는 내부 표준으로서 용매 잔류 피크를 이용하고, 하기 약어가 사용된다: s: 단일선(singlet); d: 이중선(doublet); t: 삼중선(triplet); q: 사중선(quartet); m: 다중선(multiplet); dd: 이중선들 중의 이중선; ddd: 이중선 중의 이중선 중의 이중선; dt: 삼중선 중의 이중선; br s: 넓은 단일선;
(x) 일반적으로, 덴드리머 최종 산물은 또한 워터스 엑스브리지 C8(3.5 ㎛, 3 x 100 ㎜) 또는 페노메넥스 에리스(Phenomenex Aeris) C8(3.6 ㎛, 2.1 x 100 ㎜) 칼럼 중 하나에 연결된, PDA 검출 기능이 있는 워터스 얼라이언스 2695 분리 모듈을 이용하여 HPLC에 의해 특성 분석하였고;
(xi) 중간체 순도는 액체 크로마토그래피(LC-MS) 이후 질량 분광법에 의해 평가되었으며; 1.50분(출발 조건으로 되돌아가서 평형 등이 되는 총 실행 시간: 1.70분) 동안에 97% A + 3% B 내지 3% A + 97% B의 용매 시스템(여기서, A는 수중의 0.1% 포름산 또는 0.05% 트리플루오로아세트산(산성 작업용) 또는 수중의 0.1% 수산화암모늄(염기성 작업용)이고 B는 아세토니트릴임)을 이용하여 1 ㎖/분의 유속으로 워터스 SQ 질량 분광계(칼럼 온도: 40℃, UV: 220~300 ㎚ 또는 190~400 ㎚, 질량 분석: 양성/음성 스위칭에 의한 ESI)가 구비된 워터스 UPLC를 이용하여 평가되었다. 산성 분석을 위해 사용된 칼럼은 워터스 애퀴티(Waters Acquity) HSS T3(1.8 ㎛, 2.1 x 50 ㎜)이었고, 염기성 분석을 위해 사용된 칼럼은 워터스 애퀴티 BEH C18(1.7 ㎛, 2.1 x 50 ㎜)이었다. 대안적으로, UPLC는 1.5분(출발 조건으로 되돌아가서 평형이 되는 총 실행 시간: 2분) 동안에 2% 내지 98% B의 용매 구배(여기서, A는 수중의 0.1% 포름산이고 B는 아세토니트릴 중의 0.1% 포름산이거나(산성 작업용), A는 수중의 0.1% 수산화암모늄이고 B는 아세토니트릴임(염기성 작업용))을 이용하여 1 ㎖/분의 유속으로 워터스 SQ 질량 분광계(칼럼 온도: 30℃, UV: 210~400 ㎚, 질량 분석: 양성/음성 스위칭에 의한 ESI)가 구비된 워터스 UPLC를 사용하여 실시되었다. 산성 분석을 위해 사용된 칼럼은 워터스 애퀴티 HSS T3(1.8 ㎛, 2.1 x 30 ㎜)이었고, 염기성 분석을 위해 사용된 칼럼은 워터스 애퀴티 BEH C18(1.7 ㎛, 2.1 x 30 ㎜)이었으며; 보고된 분자 이온은 달리 명시하지 않는 한 [M+H]+에 상응하고; 다중 동위원소 패턴을 갖는 분자(Br, Cl 등)에 대해 보고된 값은 달리 명시하지 않는 한 최고 강도로 수득되는 것이다.
(xii) 하기 약어가 사용되고 있다:
ACN: 아세토니트릴
BHA: 벤즈하이드릴아민
BOC: tert-부틸옥시카르보닐
CoA: 분석 증명서
DGA: 디글리콜산
DIPEA: 디이소프로필에틸아민
DMF: 디메틸포름아미드
DMSO: 디메틸설폭시드
FBA: 4-플루오로벤조산
Glu: 글루타르산
HP-β-CD: 하이드록시프로필-베타-사이클로덱스트린
MeOH: 메탄올
MIDA: 메틸이미노디아세트산
MSA: 메탄설폰산
MTBE: 메틸 tert-부틸 에테르
MW: 분자량
NMM: N-메틸모르폴린
PBS: 인산염 완충 식염수
PEG: 폴리에틸렌글리콜
PTFE: 폴리테트라플루오로에틸렌
PyBOP: 벤조트리아졸-1-일-옥시트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트
QS/qs: 충분한 양(요구되는 양)
SBE-β-CD: 설포부틸 에테르 베타-사이클로덱스트린(캡티솔®(Captisol®))
TDA: 티오디글리콜산
TFA: 트리플루오로아세트산
WFI: 주사용수
실시예에서 사용되는 바와 같이, "BHALys"란 용어는 리신에 연결되어 있는 2,6-디아미노-N-벤즈하이드릴헥산아미드를 지칭한다. BHA는 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00064
(상기 식에서, *는 리신 구성 블록에 대한 공유 부착을 나타냄). "Lys"란 용어는 덴드리머의 구성 단위를 지칭하고, 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00065
(상기 식에서, #은 BHALys의 아민 모이어티 또는 Lys 구성 단위의 아미노 모이어티에 대한 공유 부착을 나타내고, +는 Lys 구성 단위의 카르보닐 모이어티에 대한 공유 부착 또는 활성제에 부착된 링커 또는 PEG에 대한 공유 부착을 나타냄).
편의상, 실시예의 덴드리머 내의 구성 단위의 표면 세대만이 덴드리머의 명칭에 포함된다. 게다가, 명칭 내의 ‡란 부호는 PEG에 대한 접합에 이용 가능한 ε-아미노기의 이론적 개수를 지칭하고, 명칭 내의 †란 부호는 활성제에 부착된 링커에 대한 접합에 이용 가능한 덴드리머 상의 α-아미노기의 이론적 개수를 지칭한다. 일례로서, "BHALys[Lys]32†[α-TDA-화합물 A]32[ε-PEG2100,2200]32‡"이란 명칭은 BHALys 코어, 표면층(제5 층) 내의 Lys 구성 단위, 티오디아세트산 링커를 갖는 Lys 표면 구성 단위의 α-아미노기에 접합된 대략 32개의 화합물 A, Lys 표면 구성 단위의 ε-아미노기에 접합된 2,100과 2,200 사이의 평균 분자량을 갖는 대략 32 PEG 기를 갖는 5세대 덴드리머를 지칭한다.
실시예 1: 화합물 1의 제조 및 특성분석
1. BHALys[Lys] 32 [α-NH 2 TFA] 32 [ε-PEG ~2000 ] 32‡ 의 제조 및 특성분석
주석: 32‡는 PEG~2000에 의한 치환에 이용 가능한 ε-아미노기의 이론적 개수에 관한 것이다. BHALys[Lys]32에 부착된 PEG~2000 기의 실제 평균 개수는 1H NMR에 의해 실험적으로 측정되었다(BHALys[Lys]32[α-NH2-TFA]32[ε-PEG~2000]32‡의 특성분석'이란 표제의 본 실시예의 하기 단락 참조).
(a) BHALys[Boc] 2
고체 α,ε-(t-Boc)2-(L)-리신 p-니트로페놀 에스테르(2.787 ㎏, 5.96 mol)를 15분에 걸쳐 무수 아세토니트릴(4.0 ℓ), DMF(1.0 ℓ) 및 트리에틸아민(1.09 ㎏) 중의 아미노디페닐메탄(벤즈하이드릴아민) 용액(0.99 ㎏, 5.4 mol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 20℃에서 하룻밤 동안 진탕하였다. 이어서, 반응 혼합물을 35℃까지 가온하고, 수성 수산화나트륨(0.5 N, 10 ℓ)을 30분 동안 천천히 첨가하였다. 혼합물을 추가의 30분 동안 교반한 후, 여과하였다. 고체 케이크를 물로 세척하고, 일정한 중량(2.76 ㎏, 5.4 mol)이 될 때까지 건조하였다(수율: 100%). 1H NMR (CD3OD) δ 7.3 (m, 10H, Ph Calc 10H); 6.2 (s, 1H, CH-Ph2 Calc 1H); 4.08 (m, α-CH, 1H), 3.18 (br, ε-CH2) 및 2.99 (m, ε-CH2 2H); 1.7-1.2 (br, β,γ,δ-CH2) 및 1.43 (s, tBu) β,γ,δ-CH2와 tBu에 대한 합계 25H Calc 24H. MS (ESI 양성) 실측치 534.2 [M+Na]+ C29H41N3O5Na에 대한 산정치 [M+Na]+ 534.7.
(b) BHALys[HCl] 2
메탄올(1.5 ℓ) 중의 진한 HCl(1.5 ℓ) 용액을 과도한 거품 발생(frothing)을 최소화하는 속도로 메탄올(1.5 ℓ) 중의 BHALys[Boc]2(780.5 g, 1.52mol)의 교반 현탁액에 3회 나눠 천천히 첨가하였다. 반응 혼합물을 추가의 30분 동안 교반한 후, 35℃에서 진공 하에 농축하였다. 잔류물을 물(3.4 ℓ)에 용해하고, 35℃에서 진공 하에 2회 농축한 후, 진공 하에 하룻밤 동안 저장하였다. 이어서, 아세토니트릴(3.4 ℓ)을 첨가하고, 잔류물을 35℃에서 진공 하에 다시 농축하여 백색 고체(586 g, 1.52 mol)로서 BHALys[HCl]2를 100%의 수율로 얻었다. 1H NMR (D2O) δ 7.23 (br m, 10H, Ph Calc 10H); 5.99 (s, 1H, CH-Ph2 Calc 1H); 3.92 (t, J = 6.5 Hz, α-CH, 1H, Calc 1H); 2.71 (t, J = 7.8 Hz, ε-CH2, 2H, Calc 2H); 1.78 (m, β,γ,δ-CH2, 2H), 1.47 (m, β,γ,δ-CH2, 2H), 및 1.17 (m, β,γ,δ-CH2, 2H, 총 6H Calc 6H). MS (ESI 양성) 실측치 312 [M+H]+ C19H26N3O에 대한 산정치 [M+H]+ 312.
(c) BHALys[Lys] 2 [Boc] 4
무수 DMF(3.8 ℓ) 중의 BHALys[HCl]2(586 g, 1.52 mmol) 현탁액에 트리에틸아민(1.08 ㎏)을 천천히 첨가하여 반응 온도를 30℃ 미만으로 유지하였다. 고체 α,ε-(t-Boc)2-(L)-리신 p-니트로페놀 에스테르(1.49 ㎏)를 3회 나눠 천천히 첨가하고, 첨가와 첨가 사이에 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 하룻밤 동안 교반하도록 하였다. 수산화나트륨(0.5 M, 17 ℓ) 수용액을 충분히 교반된 혼합물에 천천히 첨가하였으며, 고체 침전물이 자유롭게 움직일 때까지 교반을 유지하였다. 침전물을 여과에 의해 수집하였으며, 고체 케이크를 물(2 x 4 ℓ)로 충분히 세척한 후, 아세톤/물(1:4, 2 x 4 ℓ)로 충분히 세척하였다. 고체를 물로 다시 슬러리화한 후, 여과하고, 진공 하에 하룻밤 동안 건조하여 BHALys[Lys]2[Boc]4(1.51 ㎏)를 100%의 수율로 얻었다. 1H NMR (CD3OD) δ 7.3 (m, 10H, Ph Calc 10H); 6.2 (s, 1H, CH-Ph2 Calc 1H); 4.21 (m, α-CH), 4.02 (m, α-CH) 및 3.93 (m, α-CH, 총 3H, Calc 3H); 3.15 (m, ε-CH2) 및 3.00 (m, ε-CH2 총 6H, Calc 6H); 1.7-1.3 (br, β,γ,δ-CH2) 및 1.43 (s, tBu) β,γ,δ-CH2와 tBu에 대한 합계 57H, Calc 54H. MS (ESI 양성) 실측치 868.6 [M-Boc]+; 990.7 [M+Na]+ C51H81N7O11Na에 대한 산정치 [M+Na]+ 991.1.
(d) BHALys[Lys] 2 [HCl] 4
BHALys[Lys]2[Boc]4(1.41 ㎏, 1.46 mol)를 35℃에서 진탕하면서 메탄올(1.7 ℓ)에 현탁하였다. 염산(1.7 ℓ)을 메탄올(1.7 ℓ)과 혼합하였으며, 얻어진 용액을 4회 나눠 덴드리머 현탁액에 첨가하고, 30분 동안 교반하도록 방치하였다. 용매를 감압 하에 제거하고, 물(3.5 ℓ)로 2회 연속 스트리핑한 후, 아세토니트릴(4 ℓ)로 2회 연속 스트리핑하여 BHALys[Lys]2[HCl]4(1.05 ㎏, 1.46 mmol)를 102%의 수율로 얻었다. 1H NMR (D2O) δ 7.4 (br m, 10H, Ph Calc 10H); 6.14 (s, 1H, CH-Ph2 Calc 1H); 4.47 (t, J = 7.5 Hz, α-CH, 1H), 4.04 (t, J = 6.5 Hz, α-CH, 1H), 3.91 (t, J = 6.8 Hz, α-CH, 1H, 총 3H, Calc 3H); 3.21 (t, J = 7.4 Hz, ε-CH2, 2H), 3.01 (t, J = 7.8 Hz, ε-CH2, 2H) 및 2.74 (t, J = 7.8 Hz, ε-CH2, 2H, 총 6H, Calc 6H); 1.88 (m, β,γ,δ-CH2), 1.71 (m, β,γ,δ-CH2), 1.57 (m, β,γ,δ-CH2) 및 1.35 (m, β,γ,δ-CH2, 총 19H, Calc 18H).
(e) BHALys[Lys] 4 [Boc] 8
BHALys[Lys]2[HCl]4(1.05 ㎏, 1.47 mol)를 DMF(5.6 ℓ) 및 트리에틸아민(2.19 ℓ)에 용해하였다. α,ε-(t-Boc)2-(L)-리신 p-니트로페놀 에스테르(2.35 ㎏, 5.03 mol)를 3회 나눠 첨가하고, 반응물을 25℃에서 하룻밤 동안 교반하였다. NaOH(0.5 M, 22 ℓ) 용액을 첨가하였으며, 얻어진 혼합물을 여과하고, 물(42 ℓ)로 세척한 후, 풍건하였다. 고체를 45℃에서 진공 하에 건조하여 BHALys[Lys]4[Boc]8(2.09 ㎏, 1.11 mol)을 76%의 수율로 얻었다. 1H NMR (CD3OD) δ 7.3 (m, 10H, Ph Calc 10H); 6.2 (s, 1H, CH-Ph2 Calc 1H); 4.43 (m, α-CH), 4.34 (m, α-CH), 4.25 (m, α-CH) 및 3.98 (br, α-CH, 총 7H, Calc 7H); 3.15 (br, ε-CH2) 및 3.02 (br, ε-CH2, 총 14H, Calc 14H); 1.9-1.2 (br, β,γ,δ-CH2) 및 1.44 (br s, tBu) β,γ,δ-CH2와 tBu에 대한 합계 122H, Calc 144H.
(f) BHALys[Lys] 4 [TFA] 8
0℃에서 DCM(18 ㎖) 중의 BHALys[Lys]4[Boc]8(4 g, 2.13 mmol)의 교반 현탁액에 TFA(13 ㎖)를 첨가하였다. 고체를 용해하였으며, 용액을 아르곤 분위기 하에 하룻밤 동안 교반하였다. 용매를 진공 하에 제거하였으며, 잔류 TFA를 디에틸에테르(100 ㎖)로 마쇄함으로써 제거하였다. 생성물을 물에 다시 용해한 후, 냉동 건조하여 회백색 고체(4.27 g, 2.14 mmol)로서 BHALys[Lys]4[TFA]8을 101%의 수율로 얻었다. 1H NMR (D2O) δ 7.21 (br m, 10H, Ph Calc 10H); 5.91 (s, 1H, CH-Ph2 Calc 1H); 4.17 (t, J = 7.4 Hz, α-CH, 1H), 4.09 (t, J = 7.1 Hz, α-CH, 1H), 4.02 (t, J = 7.2 Hz, α-CH, 1H, 3.84 (t, J = 6.5 Hz, α-CH, 2H), 3.73 (t, J = 6.7 Hz, α-CH, 1H), 3.67 (t, J = 6.7 Hz, α-CH, 1H, 총 7H, Calc 7H); 3.0 (m, ε-CH2), 2.93 (m, ε-CH2) 및 2.79 (b, ε-CH2, 총 15H, Calc 14H); 1.7 (br, β,γ,δ-CH2), 1.5 (br, β,γ,δ-CH2), 1.57 (m, β,γ,δ-CH2) 및 1.25 (br, β,γ,δ-CH2, 총 45H, Calc 42H). MS (ESI 양성) 실측치 541.4 [M+2H]2+; C55H99N15O7에 대한 산정치 [M+2H]2+ 541.2.
(g) BHALys[Lys] 8 [Boc] 16
DMF(25 ㎖)중의 α,ε-(t-Boc)2-(L)-리신 p-니트로페놀 에스테르(1.89 g, 4.05 mmol) 용액을 DMF(25 ㎖) 중의 BHALys [Lys]4[NH2TFA]8(644 ㎎, 0.32 mmol)과 트리에틸아민(0.72 ㎖, 5.2 mmol)의 용액에 첨가하였으며, 반응물을 아르곤 분위기 하에 하룻밤 동안 교반하도록 방치하였다. 반응 혼합물을 얼음/물(500 ㎖)에 부은 후, 여과하였으며, 수집된 고체를 진공 하에 하룻밤 동안 건조하였다. 건조된 고체를 아세토니트릴로 깨끗하게 세척하여 회백색 고체(0.82 g, 0.22 mmol)로서 BHALys[Lys]8[Boc]16을 68%의 수율로 얻었다. 1H NMR (CD3OD) δ 7.3 (m, 10H, Ph Calc 10H); 6.2 (br s, 1H, CH-Ph2 Calc 1H); 4.48 (br, α-CH), 4.30 (br, α-CH) 및 4.05 (br, α-CH, 총 16H Calc 15H); 3.18 (br, ε-CH2) 및 3.02 (m, ε-CH2, 총 31H, Calc 30H); 1.9-1.4 (br, β,γ,δ-CH2) 및 1.47 (br s, tBu) β,γ,δ-CH2와 tBu에 대한 합계 240H, Calc 234H. MS (ESI 양성) 실측치 3509 [M+H-(Boc)2]+ C173H306N31O43에 대한 산정치 [M+H-(Boc)2]+ 3508.5; 3408 [M+H-(Boc)3]+ C168H298N31O41에 대한 산정치 [M+H-(Boc)3]+ 3408.4.
(h) BHALys[Lys] 8 [TFA] 16
DCM(25 ㎖) 중의 BHALys[Lys]8Boc]16(800 ㎎, 0.22 mmol)의 교반 현탁액에 TFA/DCM(1:1, 19 ㎖) 용액을 천천히 첨가하였다. 고체를 용해하였으며, 용액을 아르곤 분위기 하에 하룻밤 동안 교반하였다. 용매를 진공 하에 제거하였으며, 잔류물을 반복적으로 냉동 건조함으로써 잔류 TFA를 제거하여 회백색 리오필레이트(lyophylate; 848 ㎎, 0.22 mmol)로서 BHALys[Lys]8[TFA]16을 100%의 수율로 얻었다. 1H NMR (D2O) δ 7.3 (br m, 10H, Ph Calc 10H); 6.08 (s, 1H, CH-Ph2 Calc 1H); 4.3 (m, α-CH), 4.18 (m, α-CH), 4.0 (m, α-CH) 및 3.89 (m, α-CH, 총 16H, Calc 15H); 3.18 (br, ε-CH2) 및 2.94 (m, ε-CH2 총 32H, Calc 30H); 1.9 (m, β,γ,δ-CH2), 1.68 (m, β,γ,δ-CH2) 및 1.4 (m, β,γ,δ-CH2 총 99H, Calc 90H). MS (ESI 양성) 실측치 2106 [M+H]+ C103H194N31O15에 대한 산정치 [M+H]+ 2106.9.
(i) BHALys[Lys] 16 [Boc] 32
DMF(25 ㎖) 중의 BHALys [Lys]8[TFA]16(644 ㎎, 0.32 mmol)과 트리에틸아민(0.72 ㎖, 5.2 mmol)의 용액에 DMF(25 ㎖) 중의 α,ε-(t-Boc)2-(L)-리신 p-니트로페놀 에스테르(1.89 g, 4.05 mmol) 용액을 첨가하였으며, 반응물을 아르곤 분위기 하에 하룻밤 동안 교반하도록 방치하였다. 반응물을 얼음/물(500 ㎖)에 부은 후, 여과하였으며, 수집된 고체를 진공 하에 하룻밤 동안 건조하였다. 건조된 고체를 아세토니트릴로 깨끗하게 세척하여 회백색 고체(0.82 g, 0.22 mmol)로서 BHALys[Lys]16[Boc]32를 68%의 수율로 얻었다.
1H NMR (CD3OD) δ 7.28 (m, 9H, Ph Calc 10H); 6.2 (br s, 1H, CH-Ph2 Calc 1H); 4.53 (br, α-CH), 4.32 (br, α-CH) 및 4.05 (br, α-CH, 총 35H, Calc 31H); 3.18 (br, ε-CH2) 및 3.04 (m, ε-CH2 총 67H, Calc 62H); 1.9-1.5 (br, β,γ,δ-CH2) 및 1.47 (br s, tBu) β,γ,δ-CH2와 tBu에 대한 합계 474H Calc, 474H. MS (ESI 양성) 실측치 6963 [M+H-(Boc)4]+ C339H610N63O87에 대한 산정치 [M+H-(Boc)4]+ 6960.9; 6862 [M+H-(Boc)5]+ C334H604N63O85에 대한 산정치 [M+H-(Boc)5]+ 6860.8.
(j) BHALys[Lys] 16 [TFA] 32
DCM(25 ㎖) 중의 BHALys[Lys]16[Boc]32(800 ㎎, 0.11 mmol)의 교반 현탁액에 TFA/DCM(1:1, 19 ㎖) 용액을 천천히 첨가하였다. 고체를 용해하였으며, 용액을 아르곤 분위기 하에 하룻밤 동안 교반하였다. 용매를 진공 하에 제거하였으며, 잔류물을 반복적으로 냉동 건조함으로써 잔류 TFA를 제거하여 회백색 리오필레이트(847 ㎎, 0.11 mmol)로서 BHALys[Lys]16[TFA]32를 100%의 수율로 얻었다. 1H NMR (D2O) δ 7.3 (br m, 11H, Ph Calc 10H); 6.06 (s, 1H, CH-Ph2 Calc 1H); 4.3 (m, α-CH), 4.19 (m, α-CH), 4.0 (m, α-CH) 및 3.88 (m, α-CH, 총 35H, Calc 31H); 3.15 (br, ε-CH2) 및 2.98 (m, ε-CH2 총 69H, Calc 62H); 1.88 (m, β,γ,δ-CH2), 1.7 (m, β,γ,δ-CH2) 및 1.42 (m, β,γ,δ-CH2 총 215H, Calc 186H). MS (ESI 양성) 실측치 4158 [M+H]+ C199H386N63O31에 대한 산정치 [M+H]+ 4157.6.
(k) HO-Lys(α-BOC)(ε-PEG 2100 )
DMF(20 ㎖) 중의 NHS-PEG2100(예를 들어,
Figure pct00066
)(2.29 g, 1.05 mmol)과 N-α-t-BOC-L-리신(0.26 g, 1.05 mmol)의 빙냉 혼합물에 DIPEA(0.37 ㎖, 2.10 mmol)를 첨가하였다. 교반 혼합물을 실온에서 하룻밤 동안 가온하도록 한 후, 진공 속에서 용매를 제거하기 전에 임의의 나머지 고체를 여과하였다(0.45 ㎛ 폴아크로디스크(PALL acrodisc)). 잔류물을 ACN/H2O(1:3, 54 ㎖)에 용해하고, PREP HPLC(워터스 엑스브리지 C18, 5 ㎛, 19 x 150 ㎜, 25% 내지 32% ACN(5분 내지 15분), 32% 내지 60% ACN(15분 내지 20분), 완충제 부재, 8 ㎖/분, RT = 17분)에 의해 정제하여, 1.41 g(56%)의 HO-Lys(BOC)(PEG2100)를 수득하였다. 1H NMR (CD3OD) δ 3.96-4.09 (m, 1H), 3.34-3.87 (m, 188H); 3.32 (s, 3H), 3.15 (q, J = 6.0 Hz, 2H), 2.40 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 1.28-1.88 (m, 6H), 1.41 (s, 9H).
(l) BHALys[Lys] 32 [α-BOC] 32 [ε-PEG 2100 ] 32‡
DMF(20 ㎖) 중의 BHALys[Lys]16[TFA]32(0.19 g, 24 μmol)의 교반 혼합물에 DIPEA(0.86 ㎖, 4.86 mmol)를 첨가하였다. 이어서, DMF(20 ㎖) 중의 PyBOP(0.62 g, 1.20 mmol)와 Lys(BOC)(PEG2100)(2.94 g, 1.20 mmol)의 교반 혼합물에 이러한 혼합물을 실온에서 적가하였다. 반응 혼합물을 하룻밤 동안 교반하도록 방치한 후, 물(200 ㎖)로 희석하였다. 수성 혼합물에 센트라메이트 여과(centramate filtration; 5 k 막, 20 ℓ의 물)를 적용하였다. 여과물을 냉동 건조하여, 1.27 g(73%)의 목적하는 덴드리머를 수득하였다. HPLC (C8 엑스브리지, 3 x 100 ㎜, 구배: 5% ACN(0분 내지 1분), 5% 내지 80% ACN/H2O)(1분 내지 7분), 80% ACN(7분 내지 12분), 80% 내지 5% ACN(12분 내지 13분), 5% ACN(13분 내지 15분), 214 ㎚, 0.1% TFA) Rf(분) = 8.52. 1H-nmr (300 MHz, D2O)δ (ppm): 1.10-2.10 (m, Lys CH2(β, χ, δ) 및 BOC, 666H), 3.02-3.36 (m, Lys CH2(ε), 110H), 3.40 (s, PEG-OMe, 98H), 3.40-4.20 (m, PEG-OCH2, 5750H + Lys CH 표면, 32H), 4.20-4.50 (m, Lys, CH 내부 32H), 7.20-7.54 (m, BHA, 8H). 1HNMR에는 대략 29개의 PEG가 나타나 있다.
(m) BHALys[Lys] 32 [α-TFA] 32 [ε-PEG 2100 ] 32‡
1.27 g(17.4 μmol)의 BHALys[Lys]32[α-BOC]32[ε-PEG2100]32를 실온에서 하룻밤 동안 TFA/DCM(1:1, 20 ㎖) 내에서 교반하였다. 휘발성 물질을 진공 속에서 제거한 후, 잔류물을 물(30 ㎖)에 용해하였다. 이어서, 혼합물을 농축하였다. 냉동 건조하기 전에 이러한 과정을 2회 더 반복하여, 점성의 무색 오일로서 1.35 g(106%)의 목적하는 생성물을 수득하였다. HPLC(C8 엑스브리지, 3 x 100 ㎜, 구배: 5% ACN(0분 내지 1분), 5% 내지 80% ACN/H2O)(1분 내지 7분), 80% ACN(7분 내지 12분), 80% 내지 5% ACN(12분 내지 13분), 5% ACN(13분 내지 15분), 214 ㎚, 0.1% TFA) Rf(분) = 8.51. 1H-nmr (300 MHz, D2O) δ (ppm): 1.22-2.08 (Lys CH2((β, χ, δ), 378H), 3.00-3.26 (Lys CH2(ε), 129H), 3.40 (PEG-OMe, 96H), 3.45-4.18 (PEG-OCH2, 5610H + Lys CH 표면, 32H), 4.20-4.46 (Lys, CH 내부, 33H), 7.24-7.48 (8H, BHA). 1HNMR에는 대략 29개의 PEG가 나타나 있다.
(n) BHALys[Lys] 32 [α-NH 2 TFA] 32 [ε-PEG ~2000 ] 32‡ 의 특성분석
표 1에는 하기 화합물 1 및 화합물 2의 합성에서 BHALys[Lys]32[α-NH2TFA]32[ε-PEG~2000]32#의 다양한 배치가 사용되며, 이들은 약간 상이한 PEG 길이를 갖는 것으로 나타나 있다. 또한, 덴드리머 상의 PEG 사슬의 실제 개수는 양자 NMR로 계산된다.
Figure pct00067
BHALys[Lys]32[α-NH2TFA]32[ε-PEG~2000]32‡의 다양한 배치에 대한 양자 NMR은 표 2에 나타나 있다:
Figure pct00068
2. 화합물 1(BHALys[Lys] 32 [α-MIDA-화합물 A]32† [ε-PEG 2100 ] 32‡ )의 제조
주석: 32†는 MIDA-화합물 A에 의한 치환에 이용 가능한 덴드리머 상의 α-아미노기의 이론적 개수에 관한 것이다. BHALys[Lys]32에 부착된 MIDA-화합물 A 기의 실제 평균 개수는 19F NMR에 의해 실험적으로 측정되었다(실시예 2 참조). 32‡는 PEG2100에 의한 치환에 이용 가능한 덴드리머 상의 ε-아미노기의 이론적 개수에 관한 것이다. BHALys[Lys]32에 부착된 PEG2100 기의 실제 평균 개수는 1H NMR에 의해 실험적으로 측정되었다.
(a) MIDA-화합물 A의 제조
Figure pct00069
실온에서 DCM(5 ㎖) 중의 화합물 A(200 ㎎, 0.21 mmol)의 자기 교반 현탁액에 DIPEA(24 ㎕, 0.14 mmol), NMM(72 ㎕, 0.66 mmol) 및 4-메틸모르폴린-2,6-디온(33 ㎎, 0.26 mmol)을 첨가하였다. 현탁액을 신속하게 용해하였으며, 혼합물을 실온에서 하룻밤 동안 교반하도록 방치하였다. HPLC에 의해 반응이 80% 초과하여 완료되었다고 판단될 때까지 부가적인 4-메틸모르폴린-2,6-디온을 이후 24시간 동안 첨가하였다. 이어서, 휘발성 물질을 진공 속에서 제거하였으며, 잔류물을 분취 HPLC(BEH 300 워터스 엑스브리지 C18, 5 μM, 30 x 150 ㎜, 50% 내지 70% ACN/물(5분 내지 40분), 0.1% TFA, RT = 23분)로 정제하여 백색 고체로서 190 ㎎(84%)의 생성물을 수득하였다. LCMS (C18, 구배: 50% 내지 60% ACN/H2O (1분 내지 10분), 60% ACN(10분 내지 11분), 60% 내지 50% ACN(11분 내지 13분), 50% ACN(13분 내지 15분), 0.1% 포름산, 0.4 ㎖/분, Rf(분) = 2.55. ESI (양성) 관측치 [M + H]+ = 1074. C50H55ClF3N5O10S3에 대한 산정치 = 1073.28 Da. 1H-NMR (300 MHz, CD3OD) δ (ppm): 0.86-1.07 (m, 1H), 1.08-1.37 (m, 2H), 1.72-1.88 (m, 1H), 1.96-2.09 (m, 1H), 2.10-2.24 (m, 1H), 2.24-2.38 (m, 1H), 2.66 (t, J = 12.3 Hz, 1H), 2.79 (t, J = 12.6 Hz, 1H), 2.92 (s, 3H), 3.00 (s, 3H), 3.14-3.28 (m, 2H), 3.33-3.43 (m, 2H), 3.47-3.57 (m, 2H), 3.72 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 3.89 (d, J = 12.6 Hz, 1H), 4.03-4.15 (m, 1H), 4.06 (s, 2H), 4.19 (s, 2H), 4.43 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 4.54-4.64 (m, 2H), 6.88 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 6.93 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 7.01 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.09-7.25 (m, 4H), 7.26-7.47 (m, 8H), 7.61 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 8.07 (dd, J = 9.3, 2.1 Hz, 1H), 8.31 (d, J = 2.1 Hz, 1H).
대안적인 제조 방법
N2 분위기 하에 내부 온도 탐침 및 균압 적하 깔때기가 구비된 3구 반응 용기에 화합물 A(28.00 g, 2.96 x 10-2 mol) 및 4-메틸모르폴린-2,6-디온(7.24 g, 5.33 x 10-2 mol, 1.80 당량)을 넣었다. DCM(250 ㎖, 9 용량)을 도입하였으며, 그 결과 얻어진 현탁액을 0℃까지 냉각하였다. DCM(50 ㎖, 1.8 용량) 중의 TEA(6.25 ㎖, 4.44 x 10-2 mol, 1.5 당량)를 온도를 0℃로 유지하면서 10분의 기간 동안 적가하였다. 매시간 반응에 대한 공정 내 제어를 실시하였다. 화합물 A의 피크 면적이 10% 미만인 경우에 반응은 완료된 것으로 간주하였다(전형적으로 첨가가 끝난 후 4.5시간). 반응 혼합물을 DCM(1.40 ℓ, 50 용량)으로 희석하고, 1.6 M Na2CO3 수용액(1.60 ℓ, 50 용량)으로 2회 세척하였다. 유기층을 MgSO4(90 g, 5%(w/v)) 상에서 건조하고, 소결 유리 깔때기를 통해 여과하고, DCM(100 ㎖, 5 용량)으로 세척하여, 진공 속에서의 농축(0.2 bar, 30℃) 이후에 회백색 고체를 수득하였다(33.07 g, 95%의 수율, HPLC에 의한 수율: 90.6%).
(b) BHALys[Lys] 32 [α-MIDA-화합물 A] 32† [ε-PEG 2100 ] 32‡ 의 제조
소규모 제조 방법
Figure pct00070
실온에서 DMF(10 ㎖) 중의 화합물 A-MIDA(730 ㎎, 0.68 mmol)와 PyBOP(353 ㎎, 0.68 mmol)의 자기 교반 혼합물에 또한 DMF(10 ㎖) 중의 BHALys[Lys]32[α-NH2TFA]32[ε-PEG2100]31(934 ㎎, 12.1 μmol, 실시예 4의 배치 5)과 NMM(255 ㎕, 2.32 mmol)의 혼합물을 첨가하였다. 실온에서 16시간 후, 휘발성 물질을 제거하였으며, 잔류물을 크기 배제 크로마토그래피(세파덱스, LH20, ACN)에 의해 정제하였다. HPLC로 판단할 때, 적절한 분획을 모으고, 농축하였다. 이어서, 잔류물을 물에 용해하고, 여과하고(0.22 ㎛), 동결 건조하여, 연분홍 고체로서 1.19 g(92%)의 목적하는 물질을 수득하였다. HPLC(C8 엑스브리지, 3 x 100 ㎜, 구배: 42% 내지 50% ACN/H2O)(1분 내지 7분), 50% 내지 80% ACN(7분 내지 8분), 80% ACN(8분 내지 11분), 80% 내지 42% ACN(11분 내지 12분), 42% ACN(12분 내지 15분), 214 ㎚, 10 mM 포름산암모늄) Rf(분) = 10.80. 1H-NMR (300 MHz, CD3OD) δ (ppm): 0.45-1.92 (m, 565H), 2.08-2.78 (m, 228H), 2.79-3.00 (m, 96H), 3.01-3.28 (m, 180H), 3.35 (s, 180H), 3.46-4.20 (m, 6164H), 4.20-4.68 (m, 139H), 6.40-8.52 (m, 680H).
대안적인 (대규모) 제조 방법
N2 분위기 하에 BHALys[Lys]32[α-NH2TFA]32[ε-PEG2100]29(13.49 g, 1.72 x 10-4 mol, 실시예 4의 배치 6) 및 화합물 A-MIDA(8.50 g, 6.87 x 10-3 mol, 40.2 당량)에 DMF(225 ㎖, 16.5 용량)를 첨가하였다. NMM(3.60 ㎖, 3.30 x 10-2 mol, 192 당량)을 도입하였으며, 용해에 도움이 되도록 반응 혼합물을 30℃ 내지 35℃까지 가온하였다(대략 5분). 이어서, 혼합물을 다시 20℃까지 냉각시켰으며, PyBOP(4.13 g, 7.56 x 10-3 mol, 44 당량)를 동일하게 나눠 2회 도입하였다. 공정 내 제어 모니터링에 따르면 2시간 후에 반응이 완료된 것으로 나타났다. 반응 혼합물을 ACN(225 ㎖, 16.5 용량)으로 희석하고, 소결 깔때기를 통해 여과하였으며, 여기에 정용부피(200 ㎖, ACN)가 16(일정함)인 한외여과(메르크 밀리포어 펠리콘 3, 0.11 m2 카세트, 10 kDa)를 적용하여, 25 PSI의 막간 압력(TMP) 및 44 ℓ/㎡/시간(LMH)을 유지하였다. 감압 하의 농축(40℃, 0.2 bar; 60분) 및 주위 온도에서의 추가의 16시간 동안의 건조를 통해 밝은 오렌지색 시럽으로서 23.5 g의 정제된 물질을 얻었다. 시럽을 35℃ 내지 40℃에서 THF(235 ㎖, 10 용량)에 용해하고(10분), 47 ㎜의 0.45 ㎛ PTFE 막(메르크-밀리포어 옴니포어(Merck-Millipore Omnipore))을 통해 여과하였다. 여과액을 이의 초기 부피의 절반까지 농축하였으며(100 ㎖, 4.3 용량), 주위 온도로 되돌아갔을 때 이를 균압 적하 깔때기에 넣었다.
내부 온도 탐침이 구비된 3구 RBF에 MTBE(400 ㎖, 19.5 용량)를 넣었으며, 이를 N2 분위기 하에 외부 빙수조의 도움으로 0 ℃까지 냉각시켰다. 0 ℃에 도달했을 때, 덴드리머의 첨가를 개시하고, 15분 동안 지속하였으며(최대 내부 온도: 5 ℃), 반면에 교반을 (0 ℃ 내지 5 ℃에서) 45분 동안 계속하여 침전물이 숙성하도록 하였다. 그 결과로 얻어진 혼합물을 N2 하에 부흐너(Buchner) 진공 필터(160 ㎜의 직경) 로 전달하여 15분 이내에 제1 습식 케이크를 얻었다. 필터 케이크를 5 용량의 MTBE(세척 당 100 ㎖)로 2회 세척하고, (N2 하에) 인출하여 건조하였으며, 이를 총 15분 동안 지속하였다. 필터 케이크를 진공 오븐으로 옮겼으며, 여기서 일정한 질량이 구현될 때(48시간)까지 (25 ℃에서 0.2 bar로) 건조하여, 자유롭게 유동하는 백색 분말을 18.98 g(수율: 102%) 수득하였다. HPLC(C8 페노메넥스 에리스, 2.1 x 100 ㎜, 구배: 5% ACN(0분 내지 1분), 5% 내지 45% ACN/H2O)(1분 내지 2분), 45% 내지 60% ACN(2분 내지 8분), 60% ACN(8분 내지 10분), 60% 내지 90% ACN(10분 내지 10.1분), 90% ACN(10.1분 내지 12분), 90% 내지 5% ACN(12분 내지 15분), 5% ACN(15분 내지 20분), 272 ㎚, 10 mM 포름산암모늄) Rf(분) = 14.94. 1H-NMR (300 MHz, CD3OD) δ (ppm): 0.31-2.84 (m, 953H), 2.86-3.27 (m, 211H), 3.35 (s, 109H), 3.37-4.23 (m, 5734H), 4.24-4.64 (m, 95H), 6.26-8.41 (m, 632H). 19F-NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ: -107.1 ppm (3.64 ㎎, FBA, 100이 되도록 설정된 합계), -79.1 ppm (31.2 ㎎의 덴드리머, 108.82). 이는 8.91 ㎎의 화합물 A(또는 28.6%의 적재량)를 제공한다.
실시예 2: 덴드리머의 화합물 A 약물 적재량
상기에서 제조된 덴드리머 중의 화합물 A의 약물 적재량은 NMR에 의해 측정하였다.
1 H NMR에 의한 화합물 A 적재량(%): 화합물 A의 적재량은 덴드리머 스캐폴드를 대표하는 PEG 영역(3.4 ppm 내지 4.2 ppm)과 비교하여 화합물 A를 대표하는 방향족 영역(6.5 ppm 내지 8.5 ppm)의 적분을 통해 추정되었다.
19 F NMR에 의한 화합물 A 적재량(%): 화합물 A의 적재량은 내부 표준물질(4-플루오로벤조산, FBA)을 이용하여 집합체에 대한 19F NMR을 수행함으로써 계산하였다. 실험은, 전형적으로 덴드리머 및 FBA의 알려진 질량을 정확하게 측정하여 단일 바이알에 넣음으로써 수행하였다. 이어서, 이를 DMSO에 용해하고, 초음파 처리한 후(2분), NMR(100 스캔, 30초의 지연 시간)로 분석하였다. 이어서, FBA 및 덴드리머의 피크를 통합하였으며, 화합물 A의 양(%)은 몰비(FBA(1F)에 대한 화합물(3F)의 3:1 몰비)를 이용하여 계산하였다.
Figure pct00071
실시예 3: 래트 및 마우스 효능 연구
효능 연구에 사용된 제형을 하기와 같이 제조하였다:
RS4:11 효능 연구에서의 투약용 화합물 PBS 제형의 제조 : 적당량의 화합물 1의 무게를 측정하여 용량 플라스크에 넣었다. 10 ㎖의 둘베코(Dulbecco) 인산염 완충 식염수(PBS)를 첨가한 후, 화합물이 완전히 용해될 때까지 제형을 교반하였다.
SuDHL-4 효능 연구용 화합물 1의 제형 : 5% 글루코오스로 1:10 희석되고 1%(w/v) 콜리포어(Kolliphor) HS-15를 함유하는 시트르산염/인산염 완충제(pH 5)에서 화합물 1을 최대 105 ㎎/㎖의 화합물 1의 농도(최대 30 ㎎/㎖의 화합물 A 농도와 같음)로 제형화할 수 있다.
100 ㎖의 McIlvane 시트르산염/인산염 완충제(pH 5)를 제조하였다. 1.02 g의 시트르산 일수화물 및 3.69 g의 인산나트륨 이염기성 12수화물의 무게를 측정하여 바이알에 넣었으며, 95 ㎖의 주사용수를 첨가하였다. 비히클을 교반(또는 초음파 처리)하여 용해하였다. 이어서, pH를 측정하였으며, 필요한 경우 0.1 M HCl 또는 NaOH를 이용하여 pH 5로 조절하였다. 주사용수를 이용하여 비히클을 부피(100 ㎖)에 맞게 만들었다.
이러한 McIlvane 완충제를 이용하여 희석된 완충 비히클(5% 글루코오스로 1:10 희석되고 1%(w/v) 콜리포어 HS-15를 함유하는 시트르산염/인산염 완충제(pH 5))을 제조하였다. 요구되는 양의 McIlvane 시트르산염/인산염 완충제(제조될 총 표적 부피의 10%와 같음)를 적절한 컨테이너에 첨가하였다. 시판 중인 5% 글루코오스 용액을 표적 부피의 대략 90%가 되게 첨가하였다. 1%(w/v)에 상당하는 콜리포어 HS-15를 첨가하였으며, 비히클을 교반하여 콜리포어 HS-15를 용해하였다. pH를 측정하고, (필요한 경우) 0.1 M HCl 또는 NaOH를 이용하여 pH 5.0 ± 0.05로 조절하였다. 이어서, 5%(w/v) 글루코오스를 이용하여 비히클을 부피에 맞게 만들었다. 필요한 경우, 기공 크기가 0.22 ㎛인 시린지 필터를 이용하여 이를 여과 살균하였다.
보다 많은 양의 투여를 위한 화합물 1의 제형(10 ㎎/㎖의 화합물 A 또는 37 ㎎/㎖의 화합물 1 당량)을 제조하기 위해, 370 ㎎의 실시예 9(100 ㎎의 화합물 A와 같음)를 자석 교반기가 구비된 적절한 컨테이너 내로 옮겼다. 자석 교반기를 가동하면서 희석된 완충 비히클(5% 글루코오스로 1:10 희석되고 1%(w/v) 콜리포어 HS-15를 함유하는 시트르산염/인산염 완충제(pH 4))을 표적 부피의 95%(9.5 ㎖)가 되도록 첨가하였다. 투명한 용액이 형성될 때까지, 과도한 거품의 발생을 피하면서, 용해에 도움이 되도록 교반을 계속하였다. 이어서, 희석된 완충 비히클을 이용하여 제형을 부피(0.5 ㎖)에 맞게 만들었으며, pH를 점검하였다. 입자의 존재를 배제하기 위해 제형을 육안으로 평가하였다. 보다 높은 농도로부터 2 ㎎/㎖ 및 6 ㎎/㎖를 제조하였다.
화합물 1의 제형을 실온에서 제조하고, 제조 5분 이내에 투약하였다.
30%(w/v) HP-β-CD 내의 화합물 A의 제형
30%(w/v) HP-β-CD 비히클을 제조하였다. 3 g의 HP-β-CD(로퀘트 클렙토스(Roquette Kleptose), 비경구용 등급)의 무게를 측정하여 10 ㎖ 용량 플라스크에 넣고, 8 ㎖의 WFI를 첨가하고, 교반(또는 초음파 처리)하여 용해하였다. 일단 용해되면, WFI를 사용하여 부피를 10 ㎖가 되게 만들었다.
적당량의 화합물 A의 무게를 측정하여 10 ㎖ 용량 플라스크에 넣었다. 이어서, 8 ㎖의 30%(w/v) HP-β-CD 비히클을 첨가하고, 제형을 교반하였다. pH가 약 2까지 감소할 때까지 1 M MSA를 적가하였다. 이어서, 화합물이 완전히 용해될 때까지 제형을 교반하였다. pH를 측정하고, 1 M MSA 또는 NaOH를 사용하여 적가함으로써 pH 4로 조절하였다. 이어서, 제형을 교반하여 투명한 용액(가능한 헤이즈(haze)를 가짐)이 수득되었다는 것을 확인하였다. 이어서, 30%(w/v) HP-β-CD 비히클을 이용하여 부피를 10 ㎖가 되게 만들고, 이를 교반하였다. 최종 pH를 측정하고 기록하였으며, 투여 이전에 0.22 μM 필터를 통해 제형을 여과하였다. 기타 제형 강도는 적당량의 30%(w/v) HP-β-CD 비히클로 30%(w/v) HP-β-CD 중의 화합물 A를 희석함으로써 준비하였다.
RS4:11 이종이식 모델에서의 화합물 1의 효능 : 100 ㎕의 총 부피에 존재하는 5 x 106개의 RS4:11 세포를 마우스 우측 옆구리에 피하 접종하였다. 종양의 부피가 대략 350 ㎣에 도달하면, 종양-보유 마우스를 무작위 분류하여 그룹 당 4마리가 되도록 하고, 대조군 비히클(PBS) 또는 처리제로 처리하였다. 10 ㎎/㎏의 화합물 A에 대해 화합물 1을 1회 정맥 내 투여하면 화합물 A인 HP-β-CD(10 ㎎/㎏)를 1회 정맥 내 투여할 때와 비교하여 유사하거나 약간 양호한 활성을 나타냈다.
Figure pct00072
RS4:11 종양의 부피가 대략 400 ㎣ 내지 600 ㎣에 도달하면, 3마리로 이루어진 종양-보유 마우스 그룹을 10 ㎎/㎏ 및 30 ㎎/㎏의 비히클(PBS) 또는 실시예 6로 정맥 내 1회 투여하여 처리하였다. 종양을 투여 후 다양한 시점에 수집하고, 분석을 위해 가공하였다. 그 결과에 따르면 링커는 개열된 카스파아제 3에 의해 나타나는 바와 같이 유사한 세포자멸성 반응을 유도하며, 반응은 투여 후 16시간 내지 28시간에 절정에 이르는 것으로 나타나 있다. 화합물 A가 20 ㎎/㎏의 당량으로 투약된 화합물 1(78 ㎎/㎏의 화합물 1)은 매주 10 ㎎/㎏로 투약된 HP-β-CD 제형 중의 화합물 A보다 효능이 약간 더 높았다.
또한, 세포사멸(세포자멸)은 개열된 PARP를 사용하여 측정하였다(도 3). HP-β-CD 제형(실시예 2 참조) 중의 화합물 A는 처리 직후(1시간 및 3시간) 개열된 PARP를 유도하는 반면, 실시예 1은 단일 투여 20시간 후에 최대 세포사멸을 유도하였다.
화합물 1는 SCID 마우스 내에서의 SuDHL-4 이종이식 모델에서 리툭시맙에 의한 종양 성장의 억제를 향상시켰다: 종양 성장을 억제하는데 있어서 리툭시맙의 활성을 향상시키기는 화합물 1의 능력을 시험하기 위해 SuDHL-4 이종이식 모델을 이용하였다. 종양이 대략 175 ㎣ 내지 250 ㎣까지 성장하면, 마우스를 하기 그룹으로 무작위 분류하였다:
(1) 비히클 대조군;
(2) 화합물 1 처리군(50 ㎎/㎏의 화합물 A 당량 185 ㎎/㎏의 화합물 1; 5주 동안 매주 1회 정맥 내 주사);
(3) 리툭시맙 그룹(10 ㎎/㎏; 5주 동안 매주 1회 복강 내 주사);
(4) 화합물 1(10 ㎎/㎏의 화합물 A 당량, 37 ㎎/㎏의 화합물 1) + 리툭시맙;
(5) 화합물 1(30 ㎎/㎏의 화합물 A 당량, 111 ㎎/㎏의 화합물 1) + 리툭시맙;
(6) 화합물 1(50 ㎎/㎏의 화합물 A 당량, 185 ㎎/㎏의 화합물 1) + 리툭시맙;
종양의 크기는 매주 2회 측정하였으며, 다음과 같이 계산하였다: 종양의 부피 = (A x B2)/2(여기서, A 및 B는 각각 종양의 길이 및 너비(단위: ㎜)임).
화합물 A 당량이 50 ㎎/㎏인 화합물 1(185 ㎎/㎏의 덴드리머)는 비히클 대조군과 비교할 때 종양의 성장을 유의하게 억제하였다. 표 5에는 억제율(%) 및 퇴화율(%)로서 계산된 종양 성장 억제(TIC) 및 종양 성장 지연(T-C) 값이 요약되어 있다. 이 계산은 각 그룹의 RTV의 기하 평균에 기초하여 이루어진다.
특정한 날에, 각각의 처리군에 대해 하기 식으로 억제값을 계산한다: 억제율(%) = (CG-TG) * 100/(CG-1)(여기서, "CG"는 대조군의 rtv의 기하 평균을 의미하고, "TG"는 처리군의 상대적 종양 부피(rtv)의 기하 평균을 의미함). "CG"를 계산할 때 처리군에 상응하는 대조군을 이용해야 한다. 억제율이 100%를 초과하면, 하기 식으로 퇴화율을 계산하는 것이 필요하다: 퇴화율 = 1 - TG
TIC 값은 50 ㎎/㎏의 화합물 A 당량(185 ㎎/㎏의 화합물 1)의 경우에 40.44%이고, 10 ㎎/㎏의 리툭시맙의 경우에 75.27%이었다. 따라서, 50 ㎎/㎏의 화합물 A 당량으로 투약된 화합물 1은 이러한 모델에서 활성이 매우 높다. 보다 유의하게는,
화합물 A 당량이 10 ㎎/㎏, 30 ㎎/㎏ 및 50 ㎎/㎏인 화합물 1을 리툭시맙(10 ㎎/㎏)과 조합하면 종양의 퇴화가 야기되었다. 또한, 종양의 완전한 퇴화는 이러한 병용 처리 시에 대부분의 동물에서 야기되는 반면, 단일 약물 처리 시에는 어디서도 관찰되지 않았다.
Figure pct00073
실시예 4: 인간 소세포 폐암 종양 모델에서의 단일 약제 및 조합에 의한 생체 내 항종양 활성
화합물 1 및 AZD2014(하기에 나타나 있는 mTOR 억제제인 비스투세르팁)로는 NCI-H1048 종양-보유 마우스에서 단일 약제 및 조합에 의한 항종양 활성을 유도하였다(도 4). 화합물 1을 103 ㎎/㎏(30 ㎎/㎏의 화합물 A와 같음)으로 매주(qw) 정맥 내 투여하면 76% TGI의 유의한 항종양 활성이 야기되었다(p < 0.05). mTOR 억제제인 AZD2014를 15 ㎎/㎏으로 매일(qd) 투여하면 84% TGI의 유의한 항종양 활성이 야기되었다(p < 0.05). AZD2014와 화합물 1의 조합은 91%의 종양 퇴화를 초래하였다(단일 약제 활성 대비 p < 0.05).
4.5%(w/v) 글루코오스를 함유하는 시트르산염/인산염 완충제(pH 5.0)에서 화합물 1을 제형화하였으며 5 ㎖/㎏의 부피로 정맥 내(iv) 투약하였다. AZD2014를 0.5% 하이드록시프로필 메틸셀룰로오스/0.1% 트윈 80에서 제형화하고, 10 ㎖/㎏의 부피로 경구 투약하였다. 5 x 106개의 NCI-H1048 종양 세포를 C.B.-17 SCID 암컷 마우스의 우측 옆구리에 0.1 ㎖의 부피(50% 마트리겔 함유)로 피하 주사하였다. 종양 부피(캘리퍼(caliper)로 측정함)는 하기 식으로 계산하였다: 길이(㎜) x 너비(㎜)2 x 0.52. 효능 연구를 위해, 종양 부피에 기초하여 마우스를 무작위 분류하였으며, 대조군과 처리군 사이에서 종양 부피의 차이를 비교함으로써 성장 억제를 평가하였다. 평균 종양 부피가 대략 124 ㎣에 도달했을 때 투약을 시작하였다.
Figure pct00074
실시예 5: 인간 DLBCL 모델에서의 단일 약제 및 조합에 의한 생체 내 항종양 활성
5 x 106개의 OCI-Ly10 종양 세포를 C.B.-17 SCID 암컷 마우스의 우측 옆구리에 0.1 ㎖의 부피(50% 마트리겔 함유)로 피하 주사하였다. 화합물 1을 5% 글루코오스로 1:10 희석되고 1%(w/v) 콜리포어 HS15를 함유하는 시트르산염/인산염 완충제(pH 5.0)에서 제형화하고, 5 ㎖/㎏의 부피 및 103 ㎎/㎏(30 ㎎/㎏의 API)의 투여량으로 매주 정맥 내(iv) 투여로서 투약하였다. 아칼라브루티닙을 0.5% 하이드록시프로필 메틸 셀룰로오스/0.2% 트윈 80에서 제형화하고, 10 ㎖/㎏의 부피 및 12.5 ㎎/㎏의 투여량으로 경구(po) 투여로서 1일 2회(bid) 투약하였다. 연구 기간 동안 종양 부피(캘리퍼로 측정함), 동물의 체중 및 종양 상태를 매주 2회 기록하였다. 종양의 부피는 하기 식으로 계산하였다: 길이(㎜) x 너비(㎜)2 x 0.52. 효능 연구를 위해, 대조군과 처리군 사이에서 종양 부피의 차이를 비교함으로써 치료를 시작할 때부터 성장 억제를 평가하였다. 평균 종양 크기가 대략 166 ㎣에 도달했을 때 투약을 시작하였다.
도 5에 도시된 바와 같이, 아칼라브루티닙과 화합물 1을 조합하면 OCI-Ly10 DLBCL 이종이식 모델에서의 유의한 생체 내 항종양 활성이 야기되었다. 12.5 ㎎/㎏의 아칼라브루티닙의 1일 2회 경구 투여와 함께 103 ㎎/㎏의 화합물 1(30 ㎎/㎏의 화합물 A)을 매주 정맥 내 투여하면 치료 시작 후 10일째 날에 8마리의 종양-보유 마우스 중 8마리에서 완전한 퇴화가 야기되었다. 완전한 퇴화는 치료가 끝난 이후에도 유지되었다(3주간의 치료와 35일간의 추적 조사(follow-up)). 이에 반해, 화합물 1 또는 아칼라브루티닙의 단일 약제는 상대적으로 적절한 단일 약제 활성을 나타냈으며, 각각 대략 64% 및 58%의 종양 성장 억제(TGI)에 도달하였다.
Figure pct00075
실시예 6: 동결 건조 검사
화합물 1을 가수분해하여 물의 존재 하에 활성 모이어티(화합물 A)를 방출하였으며, 따라서 친액 물질(lyophile)을 제조하는 동안에 대체 용매를 사용하고 온도 및 시간을 제어함으로써 수분 노출 및 가수분해 속도를 최소화하기 위해 대책을 마련해야 한다. 아세톤, 아세트산(빙초산), 아세토니트릴, tert-부틸알코올, 에탄올, n-프로판올, n-부탄올, 이소프로판올, 에틸아세테이트, 디메틸카보네이트, 디클로로메탄, 메틸 에틸 케톤, 메틸 이소부틸 케톤, 1-펜탄올, 메틸아세테이트, 메탄올, 4염화탄소, 디메틸설폭시드, 헥사플루오로아세톤, 클로로부탄올, 디메틸설폰, 아세트산, 사이클로헥산 및 빙초산을 포함하는 몇몇 비수성 용매는 동결 건조에 사용하기 위해 조사하였다.
초기 조사 이후, 빙초산 및 tert-부틸알코올은 잠재적으로 적절한 후보물질인 것으로 밝혀졌다. 이들 2개의 용매가 육안 관찰에 의해 100 ㎎/㎖ 이상의 용액 농도를 구현하기에 충분한 용해성을 갖는지를 결정하기 위해 이 화합물 둘 모두를 추가로 평가하였다. 이러한 방법에서, 대략 20 ㎎의 화합물을 200 ㎕의 각각의 용매에 첨가하고, 용해에 도움이 되도록 샘플에 초음파 처리를 하였다.
화합물 1 둘 모두는 빙초산에서 빠르게 용해되었지만, 장기간의 초음파 처리기 있을 때까지 tert-부틸알코올에서는 용해되지 않았다. 장기간의 초음파 처리로 인해 온도가 증가하였으며, 이는 또한 tert-부틸알코올 중의 화합물 둘 모두의 용해에 기여하였다. 일단 실온까지 냉각되면, tert-부틸알코올 중의 화합물 용액 둘 모두에서 침전이 관찰되었으며, 이는 장기간의 초음파 처리로 인한 가장 가능성이 있는 가열 효과로 인해 실온에서 안정하지 않은 과포화 용액이 초래한다는 것을 보여준다. 따라서, 화합물 1 둘 모두는 빙초산에서 허용 가능한 용해성을 갖는 반면, tert-부틸알코올 중에서는 용해성이 동결 건조 과정에 충분하지 않다는 결론이 내려졌다.
또한, 동결 건조 과정에 사용하기 위한 빙초산과 조합하여 아세톤, 아니솔, 1-부탄올, 2-부탄올, 부틸아세테이트, tert-부틸 메틸에테르, DMSO, 에탄올, 에틸아세테이트, 에틸에테르, 에틸포르메이트, 포름산, 헵탄, 이소부틸아세테이트, 이소프로필아세테이트, 메틸아세테이트, 3-메틸-1-부탄올, 메틸 에틸 케톤, 메틸 이소부틸 케톤, 2-메틸-1-프로판올, 펜탄, 1-펜탄올, 1-프로판올, 2-프로판올, 프로필아세테이트를 비롯한 다양한 용매를 평가하였다. 이들 용매 중 어떠한 것도 빙초산과 조합하여 냉동 건조용으로 적합한 것으로 나타나지 않았다. 따라서, 빙초산만이 화합물 둘 모두에 대한 동결 건조 과정을 진전시키는데 성과가 있었다.
동결 건조 과정의 평가를 위해, 화합물 1을 대략 100 ㎎/㎖의 농도로 빙초산에 용해하고, 동결 건조 뚜껑(lyophilization bung)이 구비된 10 ㎖의 냉동 건조 I형 유리 바이알 내에 채워 넣고, -40℃까지 냉동시켰다. 대략 -40℃ 내지 -35℃의 저장 온도 및 대략 500 mTorr의 압력을 이용하여 이들 샘플을 동결 건조하였다. 6시간에 걸쳐 20℃까지 가열하고 이 온도에서 1시간 동안 대략 500 mTorr로 유지함으로써 2차 건조를 실시하였다. 얻어진 친액 물질은 육안 검사에 의해 양호한 외관을 가졌으며, 물리적 및 화학적 안정성에 대해 추가로 시험하였다.
동결 건조 과정 동안의 친액 물질의 화학적 안정성 이외에도, 빙초산 중의 화합물 1의 화학적 안정성도 또한 UV 검출 기능이 있는 역상 HPLC를 이용하여 동결 건조된 제형 중의 화합물 A의 농도를 측정함으로써 주위 조건 및 냉동 조건에서 하기 매개변수에 따라 시험하였다:
이동상 A: 수중의 0.07% 트리플루오로아세트산
이동상 B: 아세토니트릴 중의 0.07% 트리플루오로아세트산
칼럼: 워터스 엑스브리지 페닐, 2.5 ㎛ 30 x 3.0 ㎜
칼럼 온도: 60℃
유속: 1.0 ㎖/분
구배:
시간 이동상 A(%) 이동상 B(%)
0분 60 40
6.0분 20 80
6.5분 20 80
6.7분 60 40
8.0분 60 40
주사 부피: 4 ㎕
실행 시간: 8.0분
검출기 모드/파장: 332 ㎚에서의 UV
화합물 A의 Rt: 대략 2.5분
화합물 1의 Rt: 대략 5.0분
화합물 A를 사용하여 화합물 1의 동결 건조된 제형 내의 유리 화합물 A의 양을 정량화하였다. 화합물 A를 30 ㎍/㎖로 함유하는 표준 용액을 제조하기 위해, 대략 15 ㎎의 화합물 A의 무게를 정확하게 측정하여 디메틸아세트아미드를 이용하여 부피까지 희석한 50 ㎖ 용량 플라스크에 넣었다. 얻어진 모든 교정 용액을 5 ㎖의 양으로 50 ㎖ 용량 플라스크에 첨가하고, 디메틸아세트아미드를 이용하여 부피까지 희석하였다.
유리 화합물 A(%)의 계산:
Figure pct00076
Figure pct00077
표 6에 나타나 있는 바와 같이, 이 결과를 화합물 A(%(w/w))와 비교하였다.
Figure pct00078
표 6에는 유리 화합물 A(%)가 대략 1.2%까지 증가함에 따라 동결 건조 과정 동안의 분해가 충분하다는 것이 나타나 있다. 이러한 증가는 냉동 용액과 같았으며, 이는 주로 용액 제조 과정에서 분해가 일어났다는 것을 보여준다. 주위 조건에서 보관된 빙초산 중의 화합물 1 용액의 분해는 냉동 조건에서보다 훨씬 높았다. 따라서, 빙초산 중의 화합물 1 용액은 동결 건조 과정 및 냉동 조건(-20℃)에서의 저장 동안에 안정한 것으로 결론이 내려졌다.
목적
연구의 범위에는 화합물 1을 포함하는 벌크 용액의 제형화, 중요한 공정 매개변수의 제어, 물질 상용성 및 동결 건조가 포함되었다. 대략 160개의 바이알의 3개의 실규모 실험실 배치(배치 당 1.77 ㎏)를 제작하였다. 화합물 1을 빙초산 중의 50 ㎎/㎖의 용액으로서 제형화하고, 냉동 건조용 50 ㎖ I형 투명한 유리 바이알 내에 10.0 ㎖의 공칭 표적 부피로 채워 넣어서 50 ㎖ 바이알 내에 500 ㎎의 화합물 1을 함유하지만 기타 부형제는 존재하지 않는 친액 물질로서 약품을 제조하였다.
물질
표 7에는 연구에 사용된 물질이 나열되어 있다. 모든 물질은 지정된 유효 기간 내에 있었다.
Figure pct00079
기기
표 8에 나열된 기기는 개발에서부터 실규모 기술 배치에 이르는 연구에 사용되었다. 대기 중의 수분을 감소시키고 화합물 1로부터 화합물 A의 가수분해를 억제하기 위해 무게 측정, 혼합 및 배합(compounding)을 질소로 퍼징된 분리기에서 실시하였다. 배합 동안에 아세트산 중의 화합물 1로부터 화합물 A의 가수분해를 최소화하기 위해 배합 용기를 18℃ ± 1℃로 제어하였다. 이러한 온도는 아세트산이 냉동될 위험성으로 인해 매우 낮게 설정하지 못하였다. 여과 및 충전은 실험실 벤치탑(bench top) 상에서 주위 온도에서 실시하였다.
Figure pct00080
컨테이너 개폐부
바이알을 손 세척하고, 증류수로 세정하고, 130℃에서 6시간 동안 오븐에서 건조하였다. 이들을 충전하기 전에 주위 온도에서 평형화하였다. 마개(stopper) 및 밀봉부(seal)는 부가적인 처리 없이 있는 그대로 사용하였다(표 9).
Figure pct00081
최종 배치 제작 공정
화합물 1을 포함하는 제형을 표 10의 주요 식에 따라 빙초산 중에서 50 ㎎/㎖의 농도로 배합하였다.
계산
화합물 1의 최종 중량을 분석 증명서(CoA)로부터의 순도(98.9%)에 대해 보정하였다. 보정된 중량은 하기와 같이 계산한다:
(a) 표 10의 주요 식에 따라 배치에 요구되는 화합물 1의 중량을 계산한다.
(b) 100 ㎖의 용액의 경우, 화합물 1의 중량 = 100 ㎖(4.75/100) = 4.75 g
(c) 순도에 대한 보정용 화합물 1의 중량 = 4.75 ÷ (98.9/100) = 4.8028 g.
Figure pct00082
기기 설정
(a) 모든 기기(저울, 용기, 혼합기)를 분리기 내부에 놓여있었다. 질소 탱크로부터의 실리콘 튜브는 분리기 유입구에 연결되었다. 질소 밸브를 돌려서 켜고, 조절기를 조절하여 질소 흐름을 대략 200 SCFH(시간 당 표준 입방 피트)로 유지하였다.
(b) 분리기를 10분 이상 및 바람직하게는 적어도 30분 동안 순수한 질소 기체로 퍼징하고, 배합 기간 동안에 질소의 정상 흐름을 유지하였다.
(c) 유리 재킷형 배합 용기 및 혼합기를 설정하고, 용기의 냉각 유닛에 연결하였다.
(d) 냉각기 온도를 18℃로 설정하고, 충전재는 가공 전에 18℃에 도달하였다.
배합
(a) 무수 빙초산의 배치 중량의 90%를 유리 용기 내에 분배하였다.
(b) 200 rpm과 300 rpm 사이 느린 혼합을 개시하였다.
(c) 아세트산 용액을 18℃의 온도까지 냉각시키고, 용액을 최소 5분 동안 이 온도로 유지하였다.
(d) 무게가 미리 측정된 화합물 1의 보정된 양을 연속적으로 혼합하면서 용기 내에 분배하였다. 이 시점을 영점 시간으로 설정하고, 방출된 유리 화합물 A의 생성을 최소화하기 위해 아세트산에 화합물 1을 첨가하는 것에서부터 냉동 건조기 내에 트레이를 배치하는 것에 이르는 배치용 총 표적 시간은 최대 7시간이었다.
(e) 화합물 1의 완전한 용해를 구현하기 위해 필요에 따라 혼합 속도를 증가시켰다.
(f) 빙초산을 배치 중량에 첨가하고, 용액을 추가의 10분 동안 혼합하였다.
(g) 이 단계에서, 영점 시간의 샘플(2 x 10 ㎖)을 채취하여 외관, 밀도, 삼투질 농도, 검정 및 불순물 시험에 대해 분석하였다. 샘플을 상술한 HPLC 방법에 따라 디메틸아세트아미드(DMA) 중에서 1 ㎎/㎖의 농도까지 희석하였다. 모든 샘플을 마개로 닫고 -20℃에서 보관하였다.
여과
(a) 용액을 제조 직후에 여과하였다.
(b) 0.25" ID 실리콘 튜브를 용기로부터 2개의 밀리팩 20 필터(나란히 연결됨)에 연결하였다. 실리콘 튜브는 연동형 펌프 헤드를 통해 배선하고, 튜브 유출구를 (TK8) 홀딩백 또는 파이렉스(pyrex) 유리병에 연결하였다.
(c) 화합물 1을 포함하는 용액을 펌프로 서서히 여과하여 10 ㎖ 내지 20 ㎖의 초기 부피를 배출하는 수용 용기에 넣었다.
(d) 여과 후 샘플(post-filter sample)을 검정 및 불순물 시험용으로 채취하였다. 샘플을 상술한 HPLC 방법에 따라 디메틸아세트아미드(DMA) 중에서 1 ㎎/㎖의 농도까지 희석하였다. 샘플을 마개로 닫고 -20℃에서 보관하였다.
생성물 충전
(a) 연동형 펌프를 이용하여 주위 온도에서 생성물 충전 정확성을 측정하였다.
(b) 용액의 밀도를 주위 온도에서 측정하고, 공칭 10 ㎖/바이알에 기초하여 충전 중량을 설정하였다.
(c) 바이알을 표적 충전 중량으로 충전하였다. 각각의 바이알을 부분적으로 마개로 닫고, 트레이가 충전되면 즉시 냉동 건조기 상에 적재하였다.
(d) 2개의 10 ㎖ 샘플 바이알을 검정 및 불순물 시험을 위한 충전 말기에 채취하였다. 샘플을 DMA(1 ㎎/㎖)로 즉시 켄칭(quenching)하고, -20℃에서 보관하였다.
냉동 건조
표 11의 최종 냉동 건조 과정이 3개의 기술 배치에 적용되었다. 생성물 바이알을 5℃의 저장 온도에서 적재하였다. 0.2℃/분의 보다 느린 램프 속도(ramp rate)로 냉동을 수행하였다. 30시간에 걸쳐 -30℃에서 -20℃까지 램프를 이용하여 냉동된 아세트산을 승화시킨 후, 100 mTorr의 진공 압력에서의 1차 건조 동안에 55시간 동안 -20℃로 고정하였다. 임의의 나머지 용매를 12시간의 2차 건조 동안에 25℃ 및 20 mTorr의 감압에서의 탈착을 통해 제거하였다. 모든 바이알을 700 Torr의 진공 압력에서 마개로 닫기 전에 질소로 재충전하고, -20℃의 권장 보관 온도에서 보관하였다. 마개로 닫힌 바이알의 컨테이너 개폐부 온전성을 보장하기 위해 재충전 압력(700 Torr)을 근접 대기 수준(760 Torr)으로 유지하여 바이알 내부에 약한 진공 압력을 유지하였다. 표 11에서의 재충전 이전의 진공 압력 설정(20 mTorr)은 재충전 과정을 시작하기 전의 실행되는 진공 압력을 지칭하며, 이는 20 mTorr의 2차 건조의 진공 압력에 상응한다.
Figure pct00083
Figure pct00084
외관, 검정, 불순물, 수분 함량, 잔류 용매(아세트산), 재건(시간, 외관, pH, 입자 계수 및 입자 크기)에 대해 최종 친액 물질을 분석하였다.
결과:
기술 배치 1
배치 크기는 1.770 ㎏ AZD0466이었다. 용액을 여과하고, 충전하고, 동결 건조기에 적재하여(대략 23 ㎏) GMP 배치의 예상 가공 시간을 모방하기 전에 18℃에서 5시간 동안 유지하였다. 화합물 1에 대한 아세트산의 첨가의 시작으로부터의 총 가공 시간은 6시간 38분이었다. 화합물 1은 12분 이내에 완전히 용해하였다. 료 케이크(Lyo cake) 외관은 매끈하고, 조밀하며, 회백색이었다. 표 12 내지 표17에는 기술 배치 1의 특성 분석이 제공된다.
기술 배치 1은 5%(w/w) 덱스트로오스(3.68 ㎎/㎖의 시트르산 일수화물, 9.56 ㎎/㎖의 시트르산나트륨 이수화물 및 50 ㎎/㎖의 무수 덱스트로오스) 중의 50 mM 시트르산염 완충제(pH 5)에서 재건하였다. 대안적인 희석제는 2.5%(w/w) 덱스트로오스(1.76 ㎎/㎖의 아세트산, 5.78㎎/㎖의 무수 아세트산나트륨, 25 ㎎/㎖의 무수 덱스트로오스) 중의 100 mM 아세트산염 완충제(pH 5)이다.
Figure pct00085
Figure pct00086
Figure pct00087
Figure pct00088
Figure pct00089
Figure pct00090
기술 배치 2
기술 배치 1에 대해 상술한 바와 같은 동일한 과정 및 시간을 이용하여 1.681 ℓ(1.77 ㎏) 배치의 화합물 1을 배합, 여과, 충전 및 동결 건조하였다. 화합물 1의 분배에서 동결 건조의 시작까지에 이르는 총 가공 시간은 6시간 53분이었다. 화합물 1의 완전 용해까지의 시간은 15분 이내였다. 배치에 대한 표적 충전량은 10.3 ㎖/바이알(10.85 g/바이알, 밀도: 1.0531)이었다. 료 케이크 외관은 매끈하고, 조밀하며, 회백색이며, 기술 배치 1의 외관 및 사양과 일치하였다. 표18에는 기술 배치 2에서 발견되는 불순물이 요약되어 있다.
Figure pct00091
기술 배치 3
기술 배치 1 및 기술 배치 2에 대해 상술한 바와 같은 동일한 과정 및 시간을 이용하여 1.681 ℓ(1.77 ㎏) 배치 크기의 화합물 1을 배합, 여과, 충전 및 동결 건조하였다. 화합물 1의 분배에서 동결 건조의 시작까지에 이르는 총 가공 시간은 6시간 47분이었다. 화합물 1의 완전 용해까지의 시간은 15분 이내였다. 배치에 대한 표적 충전량은 10.3 ㎖/바이알(10.85 g/바이알, 밀도: 1.0531 g/㎖)이었다. 결과는, 모든 샘플에 대한 검정에 있어서 100%에 근접하였으며, 총 불순물은 0.5% 미만이었다. 기술 배치 3에 대한 료 케이크 외관은 기술 배치 1 및 기술 배치 2의 외관과 일치하는 매끈하고, 조밀하며, 회백색의 케이크였다. 표19에는 기술 배치 3의 불순물이 요약되어 있다.
Figure pct00092
실시예 7: 화합물 1을 이용한 피하 조사
피하 투여 이후에 화합물 1의 약동학을 연구한 예비 연구에서는 화합물 1의 정맥 내 투여와 비교할 때 화합물 A의 생물학적 이용 가능성의 감소가 야기되었다. 하기에 기술되어 있는 바와 같이, RS4:11 마우스 이종이식 모델에서 화합물 1의 피하 투여 경로의 효능을 평가하였다.
5 x 106개의 RS4:11 종양 세포를 C.B.-17 SCID 암컷 마우스의 우측 옆구리에 0.1 ㎖의 부피(50% 마트리겔을 함유함)로 피하 주사하였다. 연구 기간 동안 종양 부피(캘리퍼로 측정함), 동물의 체중 및 종양 상태를 매주 2회 기록하였다. 종양의 부피는 하기 식으로 계산하였다: 길이(㎜) x 너비(㎜)2 x 0.52. 평균 종양 크기가 대략 500 ㎣에 도달했을 때 투약을 시작하였다. 화합물 1을 5%(w/v) 글루코오스로 1:10으로 희석된 시트르산염/인산염 완충제(pH 5)에서 제형화하고, 매주 5 ㎖/㎏로 투약하였다. 화합물 1이 30 ㎎/㎏의 화합물 A(API)를 전달하기에 충분하도록 (i) 화합물 1을 정맥 내 투약하고; 화합물 1이 30 ㎎/㎏ 또는 100 ㎎/㎏의 화합물 A(API)를 전달하기에 충분하도록 2회 피하 투약하였다. 효능 연구를 위해, 대조군과 처리군 사이에서 종양 부피의 차이를 비교함으로써 치료를 시작할 때부터 성장 억제를 평가하였다. 또한, 다양한 시점에 화합물 1이 30 ㎎/㎏의 화합물 A(API)를 정맥 내 전달하기에 충분하고; 화합물 1이 30 ㎎/㎏의 화합물 A(API)를 피하 전달하기에 충분하고; 화합물 1이 100 ㎎/㎏의 화합물 A(API)를 피하 전달하기에 충분하도록 투약된 종양 보유 마우스의 별도의 집단으로부터 1회 투여한 이후에 종양 및 혈장을 수집하고 냉동시켰다. 이어서, 이들 샘플에 대해 약동학적 및 약력학적 분석이 이루어졌다.
정맥 내 경로로 투여된 30 ㎎/㎏의 화합물 A(API)를 전달하는 화합물 1은 종양 퇴화를 초래하였으며, 이는 연구 과정 동안에 유지되었다. 피하 투여된 30 ㎎/㎏ 및 100 ㎎/㎏의 화합물 A(API)를 전달하는 화합물 1을 2회 투여하면 이러한 모델에서 종양 퇴화가 유사한 정도로 야기되었다(도 6). 이들 결과에 따르면 화합물 1의 소정의 투여에 있어서 피하 투여 경로는 정맥 내 경로만큼 효과적인 것으로 나타나 있다.
30 ㎎/㎏의 화합물 A(API)를 전달하는 화합물 1의 피하 투여 이후에 혈장 중의 화합물 A의 수준은 정맥 내 투여 이후보다 낮았다(도 7). 화합물 A의 종양 수준은 초기에는 피하 투여 이후보다 낮았지만, 이후 시점에서의 정맥 내 투여와 유사한 수준에 도달하였다(도 8). 정맥 내 투여를 통해 30 ㎎/㎏의 화합물 A을 전달하는 화합물 1 및 30 ㎎/㎏ 및 100 ㎎/㎏의 화합물 A를 피하 전달하는 화합물 1은 종양에서 개열된 카스파아제 유도를 유도하였다(도 9).
마지막으로, 혈장 농도의 감소에도 불구하고, 피하 전달은 유사한 효능이 정맥 내 경로로서 간주된다는 것을 증명한 것이고, 이들 예비 결과는 피하 경로가 화합물 1의 치료 지수를 증가시킬 수 있다는 것을 암시한 것이다.

Claims (56)

  1. 개체에서 암을 치료하는 방법으로서,
    화학식 I의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효량으로 피하 투여하는 단계를 포함하는 것인, 개체에서 암을 치료하는 방법:
    [화학식 I]
    Figure pct00093

    (상기 식에서,
    코어는
    Figure pct00094
    이고;
    *는 (BU1)의 카르보닐 모이어티(carbonyl moiety)에 대한 공유 부착을 나타내고;
    b는 2이고;
    BU는 구성 단위이고;
    BUx는 x 세대의 구성 단위이며, 이때 화학식 I의 덴드리머의 x 세대 내의 구성 단위의 총 개수는 2(x)와 같고, 화학식 I의 덴드리머 내의 BU의 총 개수는 (2x-1)b와 같고; BU는 하기 구조를 갖고:
    Figure pct00095

    #은 코어의 아민 모이어티 또는 BU의 아미노 모이어티에 대한 공유 부착을 나타내고;
    +는 BU의 카르보닐 모이어티에 대한 공유 부착 또는 W 또는 Z에 대한 공유 부착을 나타내고;
    W는 독립적으로 (PM)c 또는 (H)e이고;
    Z는 독립적으로 (L-AA)d 또는 (H)e이고;
    PM은 PEG1800-2400이고;
    L-AA는 활성제에 공유 부착되는 링커이며; 이때 L-AA는 하기 화학식을 갖고:
    Figure pct00096

    (상기 식에서,
    A는 -N(CH3)이고;
    Figure pct00097
    는 BUx의 아민 모이어티에 대한 부착점임);
    단 (c + d)는 (2x)b 이하이고, d는 1 이상이고;
    단 (c + d)가 (2x)b 미만인 경우 임의의 나머지 W 및 Z 기는 (H)e이며, 이때 e는 [(2x)b] - (c + d)임).
  2. 제1항에 있어서, b는 2이고, x는 5인 것인 방법.
  3. 개체에서 암을 치료하는 방법으로서,
    상기 개체에 화학식 II의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 피하 투여하는 단계를 포함하는 것인, 개체에서 암을 치료하는 방법:
    [화학식 II]
    Figure pct00098

    (상기 식에서,
    b는 2이고;
    코어는
    Figure pct00099
    이고;
    *는 (BU1)의 카르보닐 모이어티에 대한 공유 부착을 나타내고;
    BU는 구성 단위이고, BU의 개수는 62와 같으며; 이때 BU는 하기 구조를 갖고:
    Figure pct00100

    #은 코어의 아민 모이어티 또는 BU의 아미노 모이어티에 대한 공유 부착을 나타내고, +는 BU의 카르보닐 모이어티에 대한 공유 부착 또는 W 또는 Z에 대한 공유 부착을 나타내고;
    W는 독립적으로 (PM)c 또는 (H)e이고;
    Z는 독립적으로 (L-AA)d 또는 (H)e이고;
    PM은 PEG1800-2400이고;
    L-AA는 활성제에 공유 부착되는 링커이며; 이때 L-AA는 하기 화학식을 갖고:
    Figure pct00101

    (상기 식에서,
    A는 -N(CH3), -O-, -S- 또는 -CH2-이고;
    Figure pct00102
    는 BU5의 아민 모이어티에 대한 공유 부착을 나타냄);
    단 (c + d)는 64 이하이고, d는 1 이상이고;
    단 (c + d)가 64 미만인 경우 임의의 나머지 W 및 Z 기는 (H)e이며, 이때 e는 64 - (c + d)임).
  4. 개체에서 암을 치료하는 방법으로서,
    상기 개체에 화학식 III의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 피하 투여하는 단계를 포함하는 것인, 개체에서 암을 치료하는 방법:
    [화학식 III]
    Figure pct00103

    (상기 식에서,
    코어는
    Figure pct00104
    이고;

    D는
    Figure pct00105
    이고;
    AP는 다른 구성 단위에 대한 부착점이고;
    W는 독립적으로 (PM)c 또는 (H)e이고;
    Z는 독립적으로 (L-AA)d 또는 (H)e이고;
    PM은 PEG1800-2400이고;
    L-AA는 활성제에 공유 부착되는 링커이며; 이때 L-AA는 하기 화학식을 갖고:
    Figure pct00106

    (상기 식에서,
    A는 -N(CH3)임);
    단 (c + d)가 64 미만인 경우 임의의 나머지 W 및 Z 기는 (H)e이며, 이때 e는 64 - (c + d)이고; d는 1 이상임).
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PEG는 약 2,000 Da과 약 2,200 Da 사이의 평균 분자량을 갖는 것인 방법.
  6. 제5항에 있어서, 상기 PEG는 약 2,150 Da의 평균 분자량을 갖는 것인 방법.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, c는 25와 32 사이의 정수인 것인 방법.
  8. 제7항에 있어서, c는 29와 32 사이의 정수인 것인 방법.
  9. 제8항에 있어서, c는 29 또는 30인 것인 방법.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, d는 25와 32 사이의 정수인 것인 방법.
  11. 제10항에 있어서, d는 29와 32 사이의 정수인 것인 방법.
  12. 제11항에 있어서, d는 32인 것인 방법.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, (c + d)는 50과 64 사이의 정수와 같은 것인 방법.
  14. 제13항에 있어서, (c + d)는 58과 64 사이의 정수와 같은 것인 방법.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, e는 0과 14 사이의 정수인 것인 방법.
  16. 제15항에 있어서, e는 0과 6 사이의 정수인 것인 방법.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, L-AA는
    Figure pct00107
    인 것인 방법.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, BU는
    Figure pct00108
    인 것인 방법.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 코어는
    Figure pct00109
    인 것인 방법.
  20. 개체에서 암을 치료하는 방법으로서,
    개체에게 화학식 IV의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효량으로 피하 투여하는 단계를 포함하는 것인, 개체에서 암을 치료하는 방법:
    [화학식 IV]
    Figure pct00110

    (상기 식에서,
    Y는 PEG1800-2400 또는 H이고; Q는 H 또는 L-AA이며, 이때 L-AA는 하기 구조를 갖고:
    Figure pct00111
    ,
    A는 -N(CH3)이며, 단 PEG1800-2400과 L-AA의 합이 64 미만인 경우 나머지 Q 및 Y 모이어티는 H이며, 단 적어도 하나의 Q는 L-AA임).
  21. 개체에서 암을 치료하는 방법으로서,
    상기 개체에 화학식 V의 덴드리머 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효량으로 투여하는 단계를 포함하는 것인, 개체에서 암을 치료하는 방법:
    [화학식 V]
    Figure pct00112

    (상기 식에서,
    Y는 PEG1800-2400 또는 H이고;
    Q는 H 또는 L-AA이며, 이때 L-AA는 하기 구조를 갖고:
    Figure pct00113

    A는 -N(CH3)이며, 단 PEG1800-2400과 L-AA의 합이 64 미만인 경우 나머지 Q 및 Y 모이어티는 H이며, 단 적어도 하나의 Q는 L-AA임).
  22. 제20항 또는 제21항에 있어서, 상기 PEG1800-2400과 L-AA의 합은 50과 64 사이의 정수인 것인 방법.
  23. 제22항에 있어서, 상기 PEG1800-2400과 L-AA의 합은 58과 64 사이의 정수인 것인 방법.
  24. 제21항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 덴드리머는 25개와 32개 사이의 PEG1800-2400을 갖는 것인 방법.
  25. 제24항에 있어서, 상기 덴드리머는 29개와 32개 사이의 PEG1800-2400을 갖는 것인 방법.
  26. 제21항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 덴드리머는 25개와 32개 사이의 L-AA를 갖는 것인 방법.
  27. 제26항에 있어서, 상기 덴드리머는 29개와 32개 사이의 L-AA를 갖는 것인 방법.
  28. 제21항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 덴드리머는 Q 및/또는 Y 위치에 0개와 14개 사이의 수소를 갖는 것인 방법.
  29. 제28항에 있어서, 상기 덴드리머는 Q 및/또는 Y 위치에 0개와 6개 사이의 수소를 갖는 것인 방법.
  30. 제21항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PEG는 약 2,000 Da과 2,200 Da 사이의 평균 분자량을 갖는 것인 방법.
  31. 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PEG는 약 1.00과 1.10 사이의 PDI를 갖는 것인 방법.
  32. 제31항에 있어서, 상기 PEG는 약 1.05의 PDI를 갖는 것인 방법.
  33. 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 덴드리머는 약 90 kDa과 120 kDa 사이의 분자량을 갖는 것인 방법.
  34. 제33항에 있어서, 상기 덴드리머는 약 103 kDa과 107 kDa 사이의 분자량을 갖는 것인 방법.
  35. 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, AA는 화합물 A인 것인 방법:
    [화합물 A]
    Figure pct00114
  36. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 덴드리머는 재건되고 동결 건조된 약학 조성물로서 투여되는 것인 방법.
  37. 제36항에 있어서, 상기 동결 건조된 약학 조성물은 아세트산으로부터 동결 건조되는 것인 방법.
  38. 제36항 또는 제37항에 있어서, 상기 약학 조성물의 pH는 약 4.0과 약 6.0 사이인 것인 방법.
  39. 제38항에 있어서, 상기 약학 조성물의 pH는 약 4.8과 약 5.6 사이인 것인 방법.
  40. 제36항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 동결 건조된 약학 조성물은 순도가 알려져 있는 참고 표준물질에 대해 검정하는 경우에 상기 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV 또는 화학식 V의 덴드리머를 약 90%와 110% 사이로 포함하는 것인 방법.
  41. 제36항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약학 조성물의 순도는 SEC-UV에 의해 측정할 때 85% 이상인 것인 방법.
  42. 제36항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약학 조성물은 약 3%(w/w) 미만의 총 불순물을 포함하는 것인 방법.
  43. 제42항에 있어서, 상기 약학 조성물은 1.0%(w/w) 이하의 유리 화합물 A를 포함하는 것인 방법.
  44. 제43항에 있어서, 상기 약학 조성물은 0.5%(w/w) 이하의 임의의 단일 불특정 불순물을 포함하는 것인 방법.
  45. 제44항에 있어서, 상기 약학 조성물은 1.2%(w/w) 이하의 총 유리 불순물을 포함하는 것인 방법.
  46. 제36항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약학 조성물은 약 1.5%(w/w) 이하의 아세트산을 포함하는 것인 방법.
  47. 제36항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약학 조성물은 DLS에 의해 측정된 약 15 d.㎚과 약 25 d.㎚ 사이의 평균 입자 크기를 갖는 것인 방법.
  48. 제36항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약학 조성물은 DLS에 의해 측정할 때 약 0.20과 약 0.30 사이의 PDI를 갖는 것인 방법.
  49. 제36항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약학 조성물은 50 ㎖ 컨테이너 당 약 10 ㎛ 이상의 미립자를 약 6,000개 이하로 포함하는 것인 방법.
  50. 제36항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약학 조성물은 50 ㎖ 컨테이너 당 약 25 ㎛ 이상인 미립자를 약 600개 이하로 포함하는 것인 방법.
  51. 제36항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약학 조성물의 삼투질 농도(osmolality)는 약 200 mOsmol/㎏과 약 400 mOsmol/㎏ 사이인 것인 방법.
  52. 제36항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약학 조성물은 약 0.06 EU/㎎ 이하의 내독소 한도(endotoxin limit)를 갖는 것인 방법.
  53. 제36항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약학 조성물은 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 IV 또는 화학식 V의 화합물을 빙초산에서 용해하여 용액을 형성하는 단계, 상기 용액을 냉동 건조하는 단계 및 상기 아세트산을 감압 하에 승화시키는 단계를 포함하는 공정에 의해 제조되는 것인 방법.
  54. 제36항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 동결 건조된 약학 조성물은 시트르산염 완충제 또는 아세트산염 완충제로부터 선택되는 약학적으로 허용 가능한 희석제 내에서 재건되는 것인 방법.
  55. 제36항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 동결 건조된 약학 조성물은 아세트산을 약 5% 이하로 갖는 것인 방법.
  56. 제55항에 있어서, 상기 아세트산은 약 500 ppm 미만의 수분 함량을 갖는 것인 방법.
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