KR20210012119A - 방광암 진단 또는 예후 분석용 바이오마커 조성물, 키트 및 이를 이용한 진단 방법 - Google Patents

방광암 진단 또는 예후 분석용 바이오마커 조성물, 키트 및 이를 이용한 진단 방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 방광암 진단 또는 예후 분석용 바이오마커 조성물, 키트 및 이를 이용한 진단 방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 아포리포프로틴 A1(Apolipoprotein A1)의 단백질의 발현 수준을 측정하는 제제; 및 MMP9(Matrix metallopeptidase 9)의 단백질의 발현 수준을 측정하는 제제를 유효성분으로 포함하는 방광암 진단 또는 예후 분석용 바이오마커 조성물, 키트 및 이를 이용한 진단 방법에 관한 것이다.

Description

방광암 진단 또는 예후 분석용 바이오마커 조성물, 키트 및 이를 이용한 진단 방법{Biomarker composition for diagnosing or prognostic analysis of bladder cancer, kit comprising the same and method for diagnosing bladder cancer using the same}
본 발명은 방광암 진단 또는 예후 분석용 바이오마커 조성물, 키트 및 이를 이용한 진단 방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 아포리포프로틴 A1(Apolipoprotein A1)과 MMP9(Matrix metallopeptidase 9)의 2종 조합의 다중 진단으로 방광암의 진단 및 예후를 예측하는 용도에 관한 것이다.
방광암은 비뇨기계 영역에서 가장 빈번하게 발생하는 암으로서, 서양에서는 매년 인구 10만 명당 16.5명이 발병하는데 비하여 한국에서는 4.5명이 발생하는 것으로 보고되고 있다. 이처럼 서양에 비하여는 발생률이 낮으나, 해마다 발생률이 높아지고 있으며, 우리나라에서는 비뇨기계 암 중 가장 발생빈도가 높은 암으로 알려져 있다.
방광암은 침윤정도에 따라 크게 비침윤성(non-muscle invasive) 방광암과 침윤성(invasive) 방광암으로 구분된다. 비침윤성 방광암은 암이 근육층의 침범 없이 점막에 국한된 병변으로써 경요도 방광절제술(transurethral resection of bladder tumor) 시행 후 위험 인자 유무에 따라 방광내 항암제 또는 BCG를 주입함으로써 비교적 간단하게 치료가 가능하나, 암의 재발과 침윤성 암으로의 진행이 문제가 된다. 한편, 침윤성 방광암은 암이 근육층까지 침투한 상태를 말하는 것으로서, 이의 치료를 위하여는 근치적 방광적출술과 함께 복잡한 요로전환(urinary diversion)을 수행하여야 할 뿐 아니라, 환자에게 치명적인 결과를 초래할 수도 있다. 따라서, 일차 치료 후 재발과 진행에 대한 예측과 조기발견 및 예방이 매우 중요하다. 따라서, 이러한 잦은 재발과 병기의 진행은 방광암에서 자주 제기되는 문제점이며 방광암의 재발 및 침윤성으로 진행되는 것을 효과적으로 예측할 수 있는 지표의 발견이나 치료법의 개발이 필요한 실정이다(한국특허 제10-1557183호, 방광암 예후 진단 마커).
방광암은 다른 암에 비교하여 치료 후 재발 가능성이 높으므로 수술 후 정기적인 재검사가 필요하다(J.B. Shah, D.J. McConkey, C.P. Dinney, New strategies in muscle-invasive bladder cancer: on the road to personalized medicine, Clin. Cancer Res. 17 (9) (2011) 2608-2612. K.N. Rayn, G.R. Hale, G.P. Grave, P.K. Agarwal, New therapies in nonmuscle invasive bladder cancer treatment, Indian J. Urol. 34 (1) (2018) 11-19.). 현재 사용되고 있는 방광경 검사는 시술 비용이 비싸며, 방법이 침습적이어서 환자에게 고통을 줄 수 있다는 한계가 있다(A.S. Brems-Eskildsen, K. Zieger, H. Toldbod, C. Holcomb, R. Higuchi, F. Mansilla, L. Dyrskjot, Prediction and diagnosis of bladder cancer recurrence based on urinary content of hTERT, SENP1, PPP1CA, and MCM5 transcripts, BMC Cancer 10 (2010) 646. S.F. Shariat, J.A. Karam, Y. Lotan, P.I. Karakiewizc, Critical evaluation of urinary markers for bladder cancer detection and monitoring, Rev. Urol. 10 (2) (2008) 120-135).
이러한 한계를 극복하기 위해서 비침습적으로 편리하게 검사할 수 있으면서도 높은 특이도 및 민감도를 갖춘 방광암 진단용 바이오마커 조합을 제공할 필요성이 높아지고 있다.
대한민국 등록특허 제10-1557183호 (2015.09.24)
따라서 본 발명의 목적은 방광암 진단용 바이오마커 조합으로 방광암의 진단 및 예후 검사의 정확도를 개선하여 높은 정확성으로 예측할 수 있는 방광암 진단 또는 예후 분석용 바이오마커 조성물, 키트 및 이를 이용한 진단 방법을 제공하는데 있다.
본 발명의 다른 목적은 비침습적으로 편리하게 검사할 수 있으면서도 높은 특이도 및 민감도를 갖춘 방광암 진단 또는 예후 분석용 바이오마커 조성물, 키트 및 이를 이용한 진단 방법을 제공하는데 있다.
상술한 목적을 달성하기 위한 본 발명의 바람직한 일 실시예에 따른 방광암 진단 또는 예후 분석용 바이오마커 조성물은, 아포리포프로틴 A1(Apolipoprotein A1)의 단백질의 발현 수준을 측정하는 제제; 및 MMP9(Matrix metallopeptidase 9)의 단백질의 발현 수준을 측정하는 제제;를 유효성분으로 포함할 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 방광암 진단 또는 예후 분석용 바이오마커 조성물에 있어서, 상기 단백질의 발현 수준을 측정하는 제제는 항체, 앱타머, 안타고니스트 및 이들의 조합을 포함하는 군에서 선택된 어느 하나일 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 방광암 진단 또는 예후 분석용 바이오마커 조성물에 있어서, 상기 단백질은 포유동물로부터 수득된 조직, 세포, 전혈, 혈청, 혈장, 타액, 객담 및 소변으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인 생물학적 시료에서 유래하고, 상기 방광암 진단은 상기 방광암의 진행(progression) 및 재발(Recurrence)을 포함하여 진단하는 것일 수 있다.
본 발명의 바람직한 일 실시예에 따른 방광암 진단 또는 예후 분석용 키트는 상기 조성물을 포함할 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 방광암 진단 또는 예후 분석용 키트에 있어서, 상기 키트는 마이크로어레이, 앱타머 칩 키트, 엘라이자(ELISA, enzyme linked immunosorbent assay) 키트, 블랏팅(blotting) 키트, 면역침전법 키트, 면역형광검사 키트, 단백질 칩 키트 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 것을 특징으로 한다.
본 발명의 바람직한 일 실시예에 따른 방광암 진단 또는 예후 분석에 필요한 정보를 제공하는 방법은, (a) 생물학적 시료로부터 아포리포프로틴 A1(Apolipoprotein A1) 및 MMP9(Matrix metallopeptidase 9)의 단백질의 발현 수준을 측정하는 단계; (b) 정상 대조군과 대비하여 아포리포프로틴 A1(Apolipoprotein A1) 및 MMP9(Matrix metallopeptidase 9)의 단백질의 발현 수준이 높을 경우 방광암 질환으로 판단하는 단계를 포함할 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 방광암 진단 또는 예후 분석에 필요한 정보를 제공하는 방법에 있어서, 상기 단백질의 발현 수준은 항체, 앱타머, 안타고니스트 및 이들의 조합을 포함하는 군에서 선택된 어느 하나를 이용하여 측정하는 것일 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 방광암 진단 또는 예후 분석에 필요한 정보를 제공하는 방법에 있어서, 상기 수준 측정은, 면역측정법, 리간드 바인딩 어세이, MALDI-TOF (Matrix Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry) 분석, SELDI-TOF (Sulface Enhanced Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry) 분석, 방사선 면역분석, 방사 면역 확산법, 오우크테로니 면역 확산법, 로케트 면역전기영동, 보체 고정 분석법, 2차원 전기영동 분석, 액상 크로마토그래피-질량분석 (liquid chromatography-Mass Spectrometry, LC-MS), LC-MS/MS (liquid chromatography-Mass Spectrometry/Mass Spectrometry), 및 ELISA (enzyme linked immunosorbent assay)로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 방법을 이용하는 것일 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 방광암 진단 또는 예후 분석에 필요한 정보를 제공하는 방법에 있어서, 상기 생물학적 시료는 포유동물로부터 수득된 조직, 세포, 전혈, 혈청, 혈장, 타액, 객담 및 소변으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상이고, 상기 방광암 진단은 상기 방광암의 진행(progression) 및 재발(Recurrence)을 포함하여 진단하는 것일 수 있다.
본 발명에 따르면, 본 발명의 방광암 진단 또는 예후 분석용 바이오마커 조성물, 키트 및 이를 이용한 진단 방법은 아포리포프로틴 A1(Apolipoprotein A1)과 MMP9(Matrix metallopeptidase 9)의 2종 조합의 다중 진단으로 방광암의 진단 및 예후 검사의 정확도를 개선하여 높은 정확성으로 예측할 수 있다.
또한, 종래기술은 방광암 진단을 위해서 침습적인 방광경 검사와 혈액 중 바이오마커를 사용하고 있으나, 본 발명은 비침습적으로 소변 샘플에서 검사하는 방법을 제공할 수 있다.
특히, 재발성이 높은 방광암의 치료후 예후 관리를 위한 POCT(현장진단)나 홈헬스케어(자가진단)에 적합한 소변 바이오마커를 제공할 수 있다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 MMP9의 임상연구에 따른 농도 측정 결과를 나타내는 그래프이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 아포리포프로틴 A1(Apolipoprotein A1)의 임상연구에 따른 농도 측정 결과를 나타내는 그래프이다.
도 3은 민감도 및 특이도에 대한 아포리포프로틴 A1과 MMP9의 2종 조합 바이오마커의 ROC 커브(Curve) 분석을 수행한 결과를 나타내는 그래프이다.
본 발명은 다양한 변환을 가할 수 있고 여러 가지 실시 예를 가질 수 있는 바, 특정 실시 예들을 상세한 설명에서 상세하게 설명하고자 한다. 그러나, 이는 본 발명을 특정한 실시 형태에 대해 한정하려는 것이 아니며, 본 발명의 사상 및 기술 범위에 포함되는 모든 변환, 균등물 내지 대체물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 본 발명을 설명함에 있어서 관련된 공지 기술에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 흐릴 수 있다고 판단되는 경우 그 상세한 설명을 생략한다.
본 출원에서 사용한 용어는 단지 특정한 실시예를 설명하기 위해 사용된 것으로, 본 발명을 한정하려는 의도가 아니다. 단수의 표현은 문맥상 명백하게 다르게 뜻하지 않는 한, 복수의 표현을 포함한다. 본 출원에서, "포함하다" 또는 "가지다" 등의 용어는 명세서상에 기재된 특징, 숫자, 단계, 동작, 구성요소, 부품 또는 이들을 조합한 것이 존재함을 지정하려는 것이지, 하나 또는 그 이상의 다른 특징들이나 숫자, 단계, 동작, 구성요소, 부품 또는 이들을 조합한 것들의 존재 또는 부가 가능성을 미리 배제하지 않는 것으로 이해되어야 한다.
제1, 제2 등의 용어는 다양한 구성요소들을 설명하는데 사용될 수 있지만, 상기 구성요소들은 상기 용어들에 의해 한정되어서는 안 된다. 상기 용어들은 하나의 구성요소를 다른 구성요소로부터 구별하는 목적으로만 사용된다.
이하, 도면들을 참조하여 본 발명의 실시예에 대해 상세히 설명하기로 한다. 본 발명은 본 발명의 정신 및 필수적 특징을 벗어나지 않는 범위에서 다른 특정한 형태로 구체화될 수 있음은 당업자에게 자명하다.
본 발명의 일 실시예에 따른 방광암 진단 또는 예후 분석용 바이오마커 조성물은, 아포리포프로틴 A1(Apolipoprotein A1)의 단백질의 발현 수준을 측정하는 제제; 및 MMP9(Matrix metallopeptidase 9)의 단백질의 발현 수준을 측정하는 제제를 유효성분으로 포함할 수 있다.
"아포리포프로틴"은, 지질에 결합하여 지단백질을 형성한 단백질이다. 이 단백질은 효소 조인자, 수용체 리간드 및 단백질의 대사와 조직내 흡수를 조절하는 지질 이송 캐리어로서 작용할 수 있다.
"아포리포프로틴 A1(Apolipoprotein A1)"은, 혈장내 고밀도 지단백질 (HDL)의 주 단백질 구성 요소인 단백질이다. 아포리포프로틴 A1(Apolipoprotein A1)은 대부분의 혈장 콜레스테릴 에스테르의 형성을 담당하는 레시틴 콜레스테롤아실트랜스퍼라제 (LCAT)의 조인자이다. 인간에서, 아포리포프로틴 A1(Apolipoprotein A1)은 APOAI 유전자에 의해 코딩되고, 임의 기원, 예를 들어, 인간, 소, 뮤라인, 말, 개 등으로부터 유래될 수 있다.
MMP9(Matrix metallopeptidase 9)는 세포외기질 금속함유 단백분해효소(matrix metalloproteinase,MMP)의 일종으로서, MMP는 기질 선호도에 따라 type IV collagenase (MMP2, 9), stromelysin(MMP-3) 및 interstitial collagenase (MMP-1)로 구분하며, type IV collagenase는 gelatinase A (MMP-2,분자량 72 kD)와 gelatinase B (MMP-9, 분자량 92 kD)로 나누고, MMP-9은 정상세포와 암세포 모두에서 생성되며 종양세포의 악성도와 밀접한 관련이 있는 것으로 알려져 있다.
본 발명에 따른 방광암 진단 또는 예후 분석용 바이오마커 조성물을 이용하면, 아포리포프로틴 A1 및 MMP9의 발현 수준 변화의 측정에 따라 아포리포프로틴 A1 및 MMP9의 단일마커 대비 현저히 높은 정확성으로 방광암을 진단할 수 있다.
본 발명에서 용어 "진단"은 병리 상태의 존재 또는 특징을 확인하는 것을 의미한다. 본 발명의 목적상 상기 진단은 방광암의 예후를 예측 또는 확인하는 것을 의미하는 것으로, 본 발명의 방광암 진단은 상기 방광암의 진행(progression) 및 재발(Recurrence)을 포함하여 진단하는 것일 수 있다. "예후(Prognosis)"란 질병의 경과와 결과의 예측을 의미하는 것으로, 본 발명에서는 방광암의 재발(Recurrence) 및 진행(progression)을 예측하는 것을 포함한다.
본 발명에서 "바이오 마커", "마커" 또는 "진단용 마커"란 정상이나 병적인 상태를 구분할 수 있거나 치료반응을 예측할 수 있고 객관적으로 측정할 수 있는 표지자를 의미한다. 특히, 본 발명에서 방광암과 관련해서는, 정상 대조군에 비해 방광암 질환을 갖거나 발병 가능성 (위험성)이 있는 개체에서 단백질 발현 수준 또는 유전자 발현 수준이 유의적으로 증가하거나 감소하는 양상을 보이는 것을 의미한다.
본 발명에서 "단백질의 발현 수준 측정"이란 방광암을 진단하기 위하여 생물학적 시료에서 방광암 진단용 마커 (단백질) 또는 이를 암호화하는 유전자의 존재 여부와 발현 정도를 확인하는 과정을 의미한다. 위와 같은 단백질의 발현 수준을 측정하는 제제는항체, 앱타머, 안타고니스트 및 이들의 조합을 포함하는 군에서 선택된 어느 하나일 수 있다. 구체적으로 상기 제제는 유전자가 코딩하는 단백질에 특이적인 항체를 포함하며, 이는 항원성 부위에 대해서 지시되는 특이적인 단백질 분자를 의미하며, 다클론 항체, 단클론 항체 및 재조합 항체 등을 모두 포함한다.
상기 단백질의 발현 수준 측정으로는 당업계에 알려진 단백질의 정량적 및 정성적 분석방법을 사용할 수 있으며, 예를 들어, 효소면역분석법 (ELISA), 방사능면역분석법 (radioimmnoassay; RIA), 샌드위치 측정법(sandwich assay), 웨스턴 블롯팅, 면역침강법, 면역조직화학염색법 (immnohistochemical staining), 형광면역법, 효소기질발색법, 항원-항체 응집법, 유세포분석 (Fluorescence Activated Cell Sorter, FACS), 질량분석(Mass spectrometry) 방법, MRM (Multiple Reaction Monitoring) 분석, 다중적 아민 특이형 안정 동위원소 실험법 (iTRAQ,Isobaric tags for relative and absolute quantitation) 또는 단백질 칩 (protein chip) 등의 방법이 있으며, 이에 제한되는 것은 아니다.
이때, 상기 단백질은 포유동물로부터 수득된 조직, 세포, 전혈, 혈청, 혈장, 타액, 객담 및 소변으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인 생물학적 시료에서 유래한다.
본 발명의 일 실시예에 따른 방광암 진단 또는 예후 분석용 키트는 상기 아포리포프로틴 A1(Apolipoprotein A1)의 단백질의 발현 수준을 측정하는 제제; 및 MMP9(Matrix metallopeptidase 9)의 단백질의 발현 수준을 측정하는 제제를 유효성분으로 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 키트는 단백질을 정량 또는 정성적으로 분석함으로써 방광암관련 질환을 진단할 수 있으며, 단백질 측정방법으로는 효소면역분석법 (ELISA), 방사능면역분석법(radioimmnoassay; RIA), 샌드위치 측정법 (sandwich assay), 웨스턴 블롯팅, 면역침강법, 면역조직화학염색법(immnohistochemical staining), 형광면역법, 효소기질발색법, 항원-항체 응집법, 유세포분석 (Fluorescence Activated Cell Sorter, FACS), 질량분석 (Mass spectrometry) 방법, MRM (Multiple Reaction Monitoring) 분석, 다중적 아민 특이형 안정 동위원소 실험법 (iTRAQ,Isobaric tags for relative and absolute quantitation) 또는 단백질 칩 (protein chip) 등의 방법을 이용하여 측정할 수 있다.
예를 들어, 본 발명의 진단용 키트는 ELISA를 수행하기 위해 필요한 필수 요소를 포함할 수 있다. ELISA 키트는 상기 단백질들에 대해 특이적인 항체를 포함한다. 항체는 마커 단백질에 대한 특이도 및 친화성이 높고 다른 단백질에 대한 교차 반응성이 거의 없는 항체로, 단클론 항체, 다클론 항체 또는 재조합 항체이다. 또한 ELISA 키트는 대조군 단백질에 특이적인 항체를 포함할 수 있다. 그 외 ELISA 키트는 결합된 항체를 검출할 수 있는 시약, 예를 들면, 표지된 2차 항체, 발색단 (chromophores), 효소 (예: 항체와 컨주게이트됨) 및 그의 기질 또는 항체와 결합할 수 있는 다른 물질 등을 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 키트는 이에 제한되지 않으며, 마이크로어레이, 앱타머 칩 키트, 엘라이자(ELISA, enzyme linked immunosorbent assay) 키트, 블랏팅(blotting) 키트, 면역침전법 키트, 면역형광검사 키트, 단백질 칩 키트 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따른 방광암 진단 또는 예후 분석에 필요한 정보를 제공하는 방법은, (a) 생물학적 시료로부터 아포리포프로틴 A1(Apolipoprotein A1) 및 MMP9(Matrix metallopeptidase 9)의 단백질의 발현 수준을 측정하는 단계; 및 (b) 정상 대조군과 대비하여 아포리포프로틴 A1(Apolipoprotein A1) 및 MMP9(Matrix metallopeptidase 9)의 단백질의 발현 수준이 높을 경우 방광암 질환으로 판단하는 단계를 포함할 수 있다.
본 발명에서 상기 (a) 단계의 "생물학적 시료(biological sample)"란 방광암 관련 질환에 따라 단백질 발현 수준 또는 유전자 발현 수준이 차이가 나는 시료를 포함하며, 구체적으로 포유동물로부터 수득된 조직, 세포, 전혈, 혈청, 혈장, 타액, 객담 및 소변으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인 것을 의미하며, 상기 생물학적 시료는 인체에서 분리된 것일 수 있다.
상기 (a) 단계의 상기 단백질의 발현 수준은 항체, 앱타머, 안타고니스트 및 이들의 조합을 포함하는 군에서 선택된 어느 하나를 이용하여 측정할 수 있다. 또한, 단백질 발현 수준 측정으로는 면역측정법, 리간드 바인딩 어세이, MALDI-TOF (Matrix Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry) 분석, SELDI-TOF (Sulface Enhanced Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry) 분석, 방사선 면역분석, 방사 면역 확산법, 오우크테로니 면역 확산법, 로케트 면역전기영동, 보체 고정 분석법, 2차원 전기영동 분석, 액상 크로마토그래피-질량분석 (liquid chromatography-Mass Spectrometry, LC-MS), LC-MS/MS (liquid chromatography-Mass Spectrometry/Mass Spectrometry), 및 ELISA (enzyme linked immunosorbent assay)로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 방법을 이용할 수 있으며, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 (b) 단계에서 "정상 대조군"이란 방광암을 가지고 있지 않는 정상 집단 또는 방광암이 발병되지 않거나 회복된 집단을 포함한다. 본 발명에 따르면, 정상 대조군과 대비하여 아포리포프로틴 A1(Apolipoprotein A1) 및 MMP9(Matrix metallopeptidase 9)의 단백질 발현 수준이 높은 경우에 방광암 질환을 가지고 있는 환자군으로 분류될 수 있다.
본 발명에 따르면, 본 발명은 아포리포프로틴 A1(Apolipoprotein A1)과 MMP9(Matrix metallopeptidase 9)의 2종 조합의 다중 진단으로 방광암의 진단 및 예후 검사의 정확도를 개선하여 높은 정확성으로 예측할 수 있다.
또한, 종래기술은 방광암 진단을 위해서 침습적인 방광경 검사와 혈액 중 바이오마커를 사용하고 있으나, 본 발명은 비침습적으로 소변 샘플에서 검사하는 방법을 제공할 수 있다.
특히, 재발성이 높은 방광암의 치료후 예후 관리를 위한 POCT(현장진단)나 홈헬스케어(자가진단)에 적합한 소변 바이오마커를 제공할 수 있다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 하나, 하기의 실시예는 단지 설명의 목적을 위한 것이며, 본 발명의 범위를 한정하고자 하는 것은 아니다.
< 실시예 1>
방광암 환자군은 TURB(Transurethral Resection of Bladder Tumor, 경요도 방광종양 절제 수술), 근치적 방광적출술(Radical cystectomy)을 포함한 47명과 정상 대조군인 신장 기증자 19명 대상으로 수술 전 소변 검체를 획득하였다.
소변 중 MMP9과 Apolipoprotein A1의 농도를 측정을 하기 위해 ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)를 사용하였다. 발색의 정도를 측정하여 표준곡선을 구한 후 농도를 측정하였다(도 1 및 도 2 참조).
Apolipoprotein A1 과 MMP9의 농도는 정상 대조군과 환자군 간에 큰 차이를 보이며, 이것은 유의미한 통계 결과값에 해당한다. 따라서, Apolipoprotein A1 과 MMP9은 방광암 바이오 마커 후보로써 의미를 갖는다. 이 정상 대조군과 환자군에서 유의미한 차이를 보이는 Apolipoprotein A1과 MMP9의 두 바이오마커를 조합한 패널에 대해서 방광암의 진단 및 예후 예측에 대한 우수성을 다음과 같이 분석하였다.
방광암 바이오 마커 후보로 선택된 MMP9과 Apolipoprotein A1 각각의 농도 값을 한 패널로 하여 ROC커브를 확인했다(도 3 참조). ROC 커브는 민감도와 특이도가 서로 어떤 관계를 갖고 변하는지를 이차원 평면상에 표현한 것으로, ROC커브 아래의 면적에 해당하는 AUC(area under curve) 값이 클수록 좋은 진단 방법이다. 곡선상 0.66로 설정하였을 때 가장 적정한 민감도(84%)와 특이도(93%)를 보였으며, AUC는 0.94이다.
유의성 있는 진단 마커의 선택과 적용은 진단 결과의 신뢰도를 결정짓는다. 유의성 있는 진단 마커란, 진단하여 얻은 결과가 정확하여 타당도(validity)가 높고 반복 측정 시에도 일관된 결과를 나타내도록 신뢰도(reliability)가 높은 마커를 의미한다. 본 발명의 Apolipoprotein A1과 MMP9는 발현 수준의 차이가 정상 대조군과 비교할 때 매우 커서 방광암 진단과 예후관리를 위한 신뢰도가 높은 마커 조합이다.
한편, 이상의 상세한 설명은 모든 면에서 제한적으로 해석되어서는 아니되고 예시적인 것으로 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 첨부된 청구항의 합리적 해석에 의해 결정되어야 하고, 본 발명의 등가적 범위 내에서의 모든 변경은 본 발명의 범위에 포함된다.

Claims (9)

  1. 아포리포프로틴 A1(Apolipoprotein A1)의 단백질의 발현 수준을 측정하는 제제; 및
    MMP9(Matrix metallopeptidase 9)의 단백질의 발현 수준을 측정하는 제제;
    를 유효성분으로 포함하는 방광암 진단 또는 예후 분석용 바이오마커 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 단백질의 발현 수준을 측정하는 제제는 항체, 앱타머, 안타고니스트 및 이들의 조합을 포함하는 군에서 선택된 어느 하나인, 방광암 진단 또는 예후 분석용 바이오마커 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 단백질은 포유동물로부터 수득된 조직, 세포, 전혈, 혈청, 혈장, 타액, 객담 및 소변으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인 생물학적 시료에서 유래하고,
    상기 방광암 진단은 상기 방광암의 진행(progression) 및 재발(Recurrence)을 포함하여 진단하는 것인, 방광암 진단 또는 예후 분석용 바이오마커 조성물
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 포함하는, 방광암 진단 또는 예후 분석용 키트.
  5. 제4항에 있어서,
    상기 키트는 마이크로어레이, 앱타머 칩 키트, 엘라이자(ELISA, enzyme linked immunosorbent assay) 키트, 블랏팅(blotting) 키트, 면역침전법 키트, 면역형광검사 키트, 단백질 칩 키트 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 것을 특징으로 하는, 방광암 진단 또는 예후 분석용 키트.
  6. (a) 생물학적 시료로부터 아포리포프로틴 A1(Apolipoprotein A1) 및 MMP9(Matrix metallopeptidase 9)의 단백질의 발현 수준을 측정하는 단계; 및
    (b) 정상 대조군과 대비하여 아포리포프로틴 A1(Apolipoprotein A1) 및 MMP9(Matrix metallopeptidase 9)의 단백질의 발현 수준이 높을 경우 방광암 질환으로 판단하는 단계;를 포함하는 방광암 진단 또는 예후 분석에 필요한 정보를 제공하는 방법.
  7. 제6항에 있어서,
    상기 단백질의 발현 수준은 항체, 앱타머, 안타고니스트 및 이들의 조합을 포함하는 군에서 선택된 어느 하나를 이용하여 측정하는 것인, 방광암 진단 또는 예후 분석에 필요한 정보를 제공하는 방법.
  8. 제6항에 있어서,
    상기 수준 측정은, 면역측정법, 리간드 바인딩 어세이, MALDI-TOF (Matrix Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry) 분석, SELDI-TOF (Sulface Enhanced Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry) 분석, 방사선 면역분석, 방사 면역 확산법, 오우크테로니 면역 확산법, 로케트 면역전기영동, 보체 고정 분석법, 2차원 전기영동 분석, 액상 크로마토그래피-질량분석 (liquid chromatography-Mass Spectrometry, LC-MS), LC-MS/MS (liquid chromatography-Mass Spectrometry/Mass Spectrometry), 및 ELISA (enzyme linked immunosorbent assay)로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 방법을 이용하는 것인, 방광암 진단 또는 예후 분석에 필요한 정보를 제공하는 방법.
  9. 제6항에 있어서,
    상기 생물학적 시료는 포유동물로부터 수득된 조직, 세포, 전혈, 혈청, 혈장, 타액, 객담 및 소변으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상이고,
    상기 방광암 진단은 상기 방광암의 진행(progression) 및 재발(Recurrence)을 포함하여 진단하는 것인, 방광암 진단 또는 예후 분석에 필요한 정보를 제공하는 방법.
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