KR20210006089A - Pharmaceutical composition for preventing or treating vitiligo or canities comprising extract of Mangifera indica L. extract as an active ingredient - Google Patents

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Abstract

The present invention relates to a pharmaceutical composition for preventing or treating leukoplakia or canities containing an apple mango extract as an active component. The apple mango extract of the present invention has no cytotoxicity, promotes differentiation and migration of melanoblasts, and exhibits antioxidant activity, thereby being able to be usefully used for treating leukoplakia or canities.

Description

애플망고 추출물을 유효성분으로 포함하는 백반증 또는 백모증 예방 또는 치료용 약학적 조성물{Pharmaceutical composition for preventing or treating vitiligo or canities comprising extract of Mangifera indica L. extract as an active ingredient}Pharmaceutical composition for preventing or treating vitiligo or canities comprising extract of Mangifera indica L. extract as an active ingredient, comprising apple mango extract as an active ingredient}

본 발명은 애플망고 추출물을 유효성분으로 포함하는 백반증 또는 백모증 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a pharmaceutical composition for preventing or treating vitiligo or leukoplakia comprising an apple mango extract as an active ingredient.

멜라닌(melanin) 색소는 피부색을 결정하며 자외선을 흡수하여 피부를 보호하는 역할을 한다. 멜라닌 색소를 생성하는 멜라닌 세포(melanocyte)는 멜라노블라스트(melanoblast)에서 유래한다. 멜라노블라스트가 자극을 받아 멜라닌 세포로 분화되면, 티로시나아제가 활성화되어 세포 내 함유되어 있는 티로신을 DOPA(3,4-dihydroxy-L-phenyl-alanine)로 변화시키고, 이어서 DOPA는 도파옥시다제(dopaoxidase)라는 효소의 작용으로 도파퀴논(dopaquinone)이라는 물질로 변한 후 이후 일련의 화학반응을 거쳐 멜라닌으로 합성된다. 멜라닌 세포는 멜라닌을 만든 후 피부 상층부의 표피 조직까지 이동하여, 표피 조직에 존재하는 각질 형성 세포(keratinocyte)로 멜라닌을 전달한다. 세포 이동 과정에서 멜라닌 색소는 멜라노좀(melanosome)에 저장되어 운반되는데 생성 초기에는 색이 없다가 점차 상층부로 이동하면서 4-5 단계에 걸쳐 검은 색소로 채워져 마침내 완전한 색소를 띤 성숙한 멜라닌 과립이 된다.The melanin pigment determines the skin color and absorbs ultraviolet rays to protect the skin. Melanocytes that produce melanin pigments are derived from melanoblasts. When melanoblast is stimulated to differentiate into melanocytes, tyrosinase is activated to change the tyrosine contained in the cell to DOPA (3,4-dihydroxy-L-phenyl-alanine), and then DOPA is dopaoxidase ( It is converted into a substance called dopaquinone by the action of an enzyme called dopaoxidase, and then synthesized into melanin through a series of chemical reactions. After making melanin, melanocytes move to the epidermal tissue in the upper layer of the skin, and deliver the melanin to keratinocytes present in the epidermal tissue. During the cell migration process, melanin pigment is stored and transported in melanosomes, but it has no color at the beginning of its production, and then gradually moves to the upper layer, filling with black pigment over 4-5 steps, and finally becoming fully pigmented mature melanin granules.

백반증은 멜라닌 세포의 사멸이나 괴사로 인해 다양한 크기 및 형태의 백색반이 피부에 나타나는 후천성 탈색소 질환이다. 백반증 환자는 표피의 멜라닌 세포의 활성을 잃었지만, 모낭의 외부 모근초의 멜라노블라스트 세포는 영향을 받지 않는다. 전세계적으로 인구의 약 1%에서 나타나는 비교적 흔한 질환으로, 인종이나 지역에 따른 차이는 없다. 발생 연령은 10~30세에 가장 많고, 95%의 경우 40세 이전에 발병하고, 환자의 30%에서 가족력이 있다. 백반증의 임상 양상으로는 다양한 크기의 둥글거나 불규칙한 모양의 흰색 반점이 나타나고, 초기에는 탈색 정도가 뚜렷하지 않으나 시간이 경과하면서 뚜렷해지는 경우가 많으며, 정상피부와의 경계가 뚜렷하지 않을 수도 있으나 정상피부색 보다도 진하면서 뚜렷하게 나타날 수 있다. 드문 경우 가려움을 유발하기도 하며, 털이 있는 부위, 특히 머리카락, 눈썹부위에 흰반점이 나타나는 경우는 흰 털이 자라나는 경우도 있다. 백반증은 피부의 어디에나 발병할 수 있으나, 특히 손가락, 발가락, 무릎, 팔꿈치 등의 뼈가 돌출한 부위, 입주위, 코주위, 눈주위, 겨드랑이, 손목 안쪽 등에 자주 발생한다. 그리고 입술이나 성기 등 점막에도 올 수 있으며, 상처를 자주 받는 부위에 특히 잘 발생한다. 백반증의 분포는 좌우 대칭적이거나, 신경에 따른 분포를 보이기도 한다(Vitiligo Pathogenesis and Treatment, American Journal of Clinical Dermatology June 2001, Volume 2, Issue 3, pp.167-181). Vitiligo is an acquired depigmentation disease in which white spots of various sizes and shapes appear on the skin due to the death or necrosis of melanocytes. Vitiligo patients lost the activity of epidermal melanocytes, but melanoblast cells of the outer follicle sheath of the hair follicle were not affected. It is a relatively common disease that occurs in about 1% of the world's population, and does not differ by race or region. The age of onset is most common between 10 and 30 years of age, 95% of cases develop before 40 years of age, and 30% of patients have a family history. As a clinical manifestation of vitiligo, round or irregular white spots of various sizes appear, the degree of discoloration is not clear at first, but often becomes more pronounced over time, and the boundary with normal skin may not be clear, but normal skin color. It can appear darker and more distinct. In rare cases, it may cause itching, and white spots may appear on hairy areas, especially hair and eyebrows, where white hairs may grow. Vitiligo can occur anywhere on the skin, but especially in areas where bones protrude such as fingers, toes, knees, and elbows, around the mouth, around the nose, around the eyes, underarms, and inside the wrists. It can also come to the mucous membranes such as the lips or genitals, and it occurs particularly well in areas that are frequently hurt. The distribution of vitiligo is symmetrical, or according to nerves (Vitiligo Pathogenesis and Treatment, American Journal of Clinical Dermatology June 2001, Volume 2, Issue 3, pp. 167-181).

백반증은 단순히 피부에 흰 반점이 나타나는 경우 외에 눈의 홍채와 망막의 색소이상을 동반할 수 있으며, 당뇨병, 악성 빈혈, 갑상선 기능 저하 또는 항진, 다운 증후군, 담즙성 간경변, 위암, 아디손병, 원형탈모증, 홍반성 낭창 등의 자가 면역질환과 병발할 수 있다. 백반증이 생기는 원인에 대해서 아직 정확히 밝혀진 바는 없으나, 자가면역설, 스트레스, 바이러스 가설, 신경체액설, 멜라닌 세포 자가 파괴설 등 여러 가지 설이 제시되고 있다. 그 외 고유세포 결손(inherent cellular defect), 유전요인, 세포사멸, 칼슘대사 이상 등의 다양한 인자들이 제시되고 있다.Vitiligo can be accompanied by pigmentation abnormalities in the iris and retina of the eye, in addition to simply appearing white spots on the skin, diabetes, pernicious anemia, hypothyroidism or hyperactivity, Down syndrome, biliary cirrhosis, gastric cancer, Adison's disease, alopecia areata. , It can be associated with autoimmune diseases such as lupus erythematosus. Although the cause of vitiligo has not been accurately identified yet, various theories have been suggested, such as autoimmune theory, stress, viral hypothesis, neuronal humoral hypothesis, and melanocyte self-destruction theory. In addition, various factors such as inherited cellular defects, genetic factors, apoptosis, and abnormal calcium metabolism have been suggested.

망고는 세계 30대 주요 작물 중 하나이며 옻나무과(Anacardiaceae) 망고속(Mangifera)에 속하는 다년생의 열대과수로, 학명은 Mangifera indica L.이다(1). 망고는 인도에서 4,000년 전부터 재배되어 귀중하게 여겨졌으며 승려들에 의하여 기원전 4~5세기에 동남아시아로 전래되었다. 10세기 포르투갈인들에 의해서 동아프리카로 전파되었으며 1742년에 서인도제도인 바베이도스에 처음 재식되었다. 이후 1782년 도미니카 공화국에서 자메이카로 그리고 필리핀과 서인도에서 멕시코를 거쳐 미국에 전해졌다. 망고는 기원전부터 인도에서 재배되었으나 원종은 알려져 있지 않다(2). 과일의 여왕이라고 불리는 망고는 세계 과수 생산량 중 오렌지, 바나나, 포도, 사과 다음으로 제5위인 대표적인 아열대과수로 국내에서도 다양한 소비 형태로 수요량이 점차 증대되고 있다. 우리나라에서는 1993년 최초로 필리핀에서 망고 수입이 시작되어 2000년 이후 급증하였다. 2006년부터는 1,000톤 이상이 수입되었으며 2007~2008년에는 평균수입량이 1,725톤(수입액 6,337천 US$)으로 매년 증가하는 추세이다.Mango is one of the top 30 major crops in the world, and is a perennial tropical fruit tree belonging to the mangifera of the Anacardiaceae family, and its scientific name is Mangifera indica L. Mangoes have been cultivated in India for 4,000 years and are considered valuable, and were introduced to Southeast Asia in the 4th-5th century BC by monks. It was spread to East Africa by the Portuguese in the 10th century, and was first planted in Barbados, the West Indies, in 1742. Then, in 1782, it was transmitted from the Dominican Republic to Jamaica and from the Philippines and West Indies through Mexico to the United States. Mango has been cultivated in India since BC, but the original species is unknown (2). Mango, called the queen of fruits, is a representative subtropical fruit that ranks fifth after oranges, bananas, grapes, and apples among the world's fruit tree production, and its demand is gradually increasing in various forms of consumption in Korea. In Korea, mango imports began in the Philippines for the first time in 1993, and the number of mangoes has increased rapidly since 2000. More than 1,000 tons have been imported since 2006, and the average import volume from 2007 to 2008 is 1,725 tons (imported 6,337 thousand US$), which is increasing every year.

시중 유통 중인 망고 품종 중의 하나인 핑크색의 아윈(Irwin)은 애플망고(Apple mango)라고도 불리며, 무게는 대게 300~500 g 정도이다. 애플망고는 형태나 향 그리고 다즙(多汁)이 우수한 특징이 있다. 또한 껍질이 매우 얇은 것이 가장 큰 특징으로 당도가 높고 과육에 섬유질이 전혀 없으며, 강한 향기를 지니고 있다(Park JK, An KW, Ahn YS. 2010. Mango. Chonnam National University Press, Gwangju, Korea. p 7-24.).Pink Irwin, one of the mango varieties in the market, is also called Apple mango, and it usually weighs about 300 to 500 g. Apple mango is characterized by excellent shape, scent, and juicy. In addition, the most distinctive feature is that the skin is very thin. It has high sugar content, no fiber in the flesh, and has a strong scent (Park JK, An KW, Ahn YS. 2010. Mango. Chonnam National University Press, Gwangju, Korea. p 7 -24.).

본 발명자들은 애플망고 추출물의 신규한 용도를 개발하고자 예의 연구 노력한 결과, 애플망고 추출물은 세포 독성이 없을 뿐만 아니라 멜라노블라스트(melanoblast)세포의 분화 및 이동을 촉진시켜 백반증 또는 백모증 치료에 유용하게 사용될 수 있음을 확인하여 본 발명을 완성하였다.As a result of intensive research efforts to develop a novel use of the apple mango extract, the inventors of the present invention have shown that the apple mango extract is not only non-cytotoxic, but also promotes the differentiation and migration of melanoblast cells to be usefully used in the treatment of vitiligo or alopecia. It was confirmed that the present invention was completed.

본 발명의 목적은 애플망고(Mangifera indica L.) 추출물을 유효성분으로 포함하는 백반증 또는 백모증 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다. It is an object of the present invention to provide a pharmaceutical composition for preventing or treating vitiligo or leukoplakia comprising an apple mango ( Mangifera indica L. ) extract as an active ingredient.

본 발명의 다른 목적은 애플망고 추출물을 유효성분으로 포함하는 백반증 또는 백모증 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다. Another object of the present invention is to provide a cosmetic composition for preventing or improving vitiligo or leukoplakia comprising an apple mango extract as an active ingredient.

본 발명의 또 다른 목적은 애플망고 추출물을 유효성분으로 포함하는 백반증 또는 백모증 예방 또는 개선용 피부 외용제를 제공하는 것이다. Another object of the present invention is to provide a skin external preparation for preventing or improving vitiligo or leukoplakia comprising an apple mango extract as an active ingredient.

본 발명의 또 다른 목적은 애플망고 추출물을 유효성분으로 포함하는 백반증 또는 백모증 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공하는 것이다. Another object of the present invention is to provide a health functional food for preventing or improving vitiligo or alopecia, including apple mango extract as an active ingredient.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 애플망고(Mangifera indica L.) 추출물을 유효성분으로 포함하는 백반증 또는 백모증 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다. In order to achieve the above object, the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating vitiligo or leukoplakia comprising an apple mango ( Mangifera indica L. ) extract as an active ingredient.

또한, 본 발명은 애플망고(Mangifera indica L.) 추출물을 유효성분으로 포함하는 백반증 또는 백모증 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다. In addition, the present invention provides a cosmetic composition for preventing or improving vitiligo or alopecia, comprising an apple mango ( Mangifera indica L. ) extract as an active ingredient.

또한, 본 발명은 애플망고(Mangifera indica L.) 추출물을 유효성분으로 포함하는 백반증 또는 백모증 예방 또는 개선용 피부 외용제를 제공한다. In addition, the present invention provides a skin external preparation for preventing or improving vitiligo or leukoplakia comprising an apple mango ( Mangifera indica L. ) extract as an active ingredient.

또한, 본 발명은 애플망고(Mangifera indica L.) 추출물을 유효성분으로 포함하는 백반증 또는 백모증 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다. In addition, the present invention provides a health functional food for preventing or improving vitiligo or alopecia, including apple mango ( Mangifera indica L. ) extract as an active ingredient.

본 발명의 애플망고 추출물은 세포 독성이 없을 뿐만 아니라, 멜라노블라스트(melanoblast) 세포의 분화 및 이동을 촉진시키므로 백반증 또는 백모증 치료에 유용하게 사용될 수 있다. The apple mango extract of the present invention not only has no cytotoxicity, but also promotes the differentiation and migration of melanoblast cells, so it can be usefully used in the treatment of vitiligo or alopecia.

도 1은 애플망고 (Mangifera indica L.)의 모습을 나타내는 도이다.
도 2는 애플망고 추출물이 처리된 멜라노블라스트(Melb-a)의 세포 생존율을 나타낸 결과이다 (Neg control(음성 대조군): DMSO 처리).
도 3은 애플망고 추출물이 처리된 멜라노블라스트(Melb-a)의 멜라닌 함량을 측정한 결과이다 (Neg control(음성 대조군): DMSO 처리).
도 4는 애플망고 추출물이 처리 후, 막을 통과한 멜라노블라스트(Melb-a) 세포의 모습을 나타낸 도이다 (Neg control(음성 대조군): DMSO 처리).
도 5는 애플망고 추출물이 처리 후, 막을 통과한 멜라노블라스트(Melb-a) 세포의 수를 계수한 결과이다 (Neg control(음성 대조군): DMSO 처리).
1 is a diagram showing the appearance of apple mango ( Mangifera indica L. ).
Figure 2 is a result showing the cell viability of melanoblast (Melb-a) treated with apple mango extract (Neg control (negative control): DMSO treatment).
3 is a result of measuring the melanin content of melanoblast (Melb-a) treated with apple mango extract (Neg control (negative control): DMSO treatment).
Figure 4 is a diagram showing the appearance of melanoblast (Melb-a) cells passing through the membrane after the apple mango extract treatment (Neg control (negative control): DMSO treatment).
Figure 5 is a result of counting the number of melanoblast (Melb-a) cells passed through the membrane after the apple mango extract treatment (Neg control (negative control): DMSO treatment).

이하, 본 발명을 상세히 설명한다. Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명은 애플망고 (Mangifera indica L.) 추출물을 유효성분으로 포함하는 백반증 또는 백모증 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다. The present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating vitiligo or leukoplakia comprising an apple mango ( Mangifera indica L. ) extract as an active ingredient.

상기 애플망고 추출물은 하기의 단계들을 포함하는 제조방법에 의해 제조될 수 있다:The apple mango extract can be prepared by a manufacturing method comprising the following steps:

1) 애플망고에 추출 용매를 가하여 추출하는 단계;1) extracting apple mango by adding an extraction solvent;

2) 단계 1)의 추출물을 여과하는 단계; 및2) filtering the extract of step 1); And

3) 단계 2)의 여과한 추출물을 감압 농축한 후 건조하는 단계.3) A step of drying after concentrating the filtered extract of step 2) under reduced pressure.

상기 방법에 있어서, 단계 1)의 애플망고는 재배한 것 또는 시판되는 것 등 제한없이 사용할 수 있다. In the above method, the apple mango in step 1) can be used without limitation, such as grown or commercially available.

상기 제조방법에서, 애플망고는 대만산 건애플망고를 구입하여 사용할 수 있으며 이에 제한되지 않는다.In the above manufacturing method, apple mango may be used by purchasing dried apple mango made in Taiwan, but is not limited thereto.

또한, 상기 단계 1)의 추출 용매는 물, C1 내지 C2의 저급 알코올 또는 이들의 혼합 용매일 수 있고, 구체적으로 상기 C1 내지 C2의 저급 알코올은 메탄올 또는 에탄올일 수 있다. 본 발명의 구체적인 실시예에 의하면 메탄올로 추출하는 것이 가장 바람직하다.In addition, the extraction solvent of step 1) may be water, a lower alcohol of C 1 to C 2 , or a mixed solvent thereof, and specifically, the lower alcohol of C 1 to C 2 may be methanol or ethanol. According to a specific embodiment of the present invention, it is most preferable to extract with methanol.

상기 단계 1)의 추출 방법은 진탕추출, Soxhlet 추출 또는 환류추출일 수 있다. 이때, 추출 온도는 20 내지 60℃인 것이 바람직하며, 30 내지 50℃인 것이 더욱 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한, 상기 추출 용매는 추출에 사용되는 애플망고의 중량 대비 2 내지 10배로 첨가하여 추출하는 것이 바람직하고, 4 내지 8배로 첨가하여 추출하는 것이 더 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. The extraction method of step 1) may be shaking extraction, Soxhlet extraction, or reflux extraction. At this time, the extraction temperature is preferably 20 to 60 ℃, more preferably 30 to 50 ℃, but is not limited thereto. In addition, the extraction solvent is preferably extracted by adding 2 to 10 times the weight of the apple mango used for extraction, and it is more preferable to extract by adding 4 to 8 times, but is not limited thereto.

또한, 추출 시간은 10 내지 40시간인 것이 바람직하며, 20 내지 30시간이 더욱 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 아울러, 추출 횟수는 1 내지 5회인 것이 바람직하며, 1 내지 3회인 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 추출 온도, 추출 시간 또는 추출 횟수의 조건을 벗어난 범위에서는 추출이 충분히 이루어지지 않아 애플망고 추출물 내에 유효성분의 함량이 미미할 수 있다. 또는 더 이상 추출 수율이 증가하지 않아 추출 작업의 효율이 떨어질 수 있다. In addition, the extraction time is preferably 10 to 40 hours, more preferably 20 to 30 hours, but is not limited thereto. In addition, the number of extractions is preferably 1 to 5 times, more preferably 1 to 3 times, but is not limited thereto. The content of the active ingredient in the apple mango extract may be insignificant because extraction is not sufficiently performed in a range outside the conditions of the extraction temperature, extraction time, or extraction frequency. Alternatively, the extraction yield may no longer increase, so that the efficiency of the extraction operation may decrease.

상기 단계 3)의 감압 농축은 진공감압농축기 또는 진공회전증발기를 이용할 수 있다. 또한, 상기 건조는 감압건조, 진공건조, 비등건조, 분무건조 또는 동결건조일 수 있다.The vacuum concentration in step 3) may be performed using a vacuum vacuum concentrator or a vacuum rotary evaporator. In addition, the drying may be vacuum drying, vacuum drying, boiling drying, spray drying, or freeze drying.

상기 추출물은 멜라노블라스트의 멜라닌 세포로의 분화를 유도할 수 있다. 또한, 상기 추출물은 멜라노블라스트의 이동을 촉진시킬 수 있다. The extract may induce the differentiation of melanoblast into melanocytes. In addition, the extract can promote the movement of melanoblast.

본 발명의 구체적인 실시예에서, 본 발명자들은 대만산 건애플망고를 구입한 후 메탄올로 추출하여 애플망고 추출물을 제조하였고, 상기 애플망고 추출물은 멜라노블라스트에서 세포 독성을 나타내지 않을 뿐만 아니라(도 2 참조) 멜라닌 함량 및 멜라노블라스트의 분화를 유도하며(도 3 참조), 멜라노블라스트의 이동을 촉진시킴(도4 내지 5참조)을 확인하였다.In a specific embodiment of the present invention, the present inventors purchased dried apple mango from Taiwan and then extracted with methanol to prepare an apple mango extract, and the apple mango extract did not show cytotoxicity in melanoblast, as well as (see FIG. 2 ). ) It was confirmed that the melanin content and differentiation of melanoblast were induced (see FIG. 3), and the movement of melanoblast was promoted (see FIGS. 4 to 5).

따라서, 본 발명의 애플망고 추출물은 백반증 또는 백모증 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 유용하게 사용될 수 있다. Therefore, the apple mango extract of the present invention can be usefully used in a pharmaceutical composition for preventing or treating vitiligo or alopecia.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 조성물 전체 중량에 대하여 유효성분인 애플망고 추출물을 10 내지 95 중량%로 포함할 수 있다. 또한, 본 발명의 약학적 조성물은 상기 유효성분 이외에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 추가로 포함할 수 있다. The pharmaceutical composition according to the present invention may contain 10 to 95% by weight of an active ingredient, apple mango extract, based on the total weight of the composition. In addition, the pharmaceutical composition of the present invention may further include one or more active ingredients exhibiting the same or similar functions in addition to the active ingredients.

본 발명의 약학적 조성물은 생물학적 제제에 통상적으로 사용되는 담체, 희석제, 부형제 또는 이의 혼합물을 포함할 수 있다. 약학적으로 허용가능한 담체는 조성물을 생체 내에 전달하는데 적합한 것이면 모두 사용할 수 있다. 구체적으로, 상기 담체는 Merck Index, 13th ed., Merck & Co. Inc.에 기재된 화합물, 식염수, 멸균수, 링거액, 덱스트로스 용액, 말토덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 또는 이의 혼합물일 수 있다. 또한, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등과 같은 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다.The pharmaceutical composition of the present invention may contain a carrier, a diluent, an excipient, or a mixture thereof commonly used in biological preparations. Any pharmaceutically acceptable carrier can be used as long as it is suitable for delivering the composition in vivo. Specifically, the carrier is Merck Index, 13th ed., Merck & Co. Inc., saline, sterile water, Ringer's solution, dextrose solution, maltodextrin solution, glycerol, ethanol, or a mixture thereof. In addition, conventional additives such as antioxidants, buffers, and bacteriostatic agents may be added as needed.

상기 조성물을 제제화하는 경우, 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 첨가할 수 있다.When formulating the composition, diluents or excipients such as commonly used fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrants, and surfactants may be added.

본 발명의 조성물은 경구용 제제 또는 비경구용 제제로 제형화될 수 있다. 경구용 제제로는 고형 제제 및 액상 제제가 포함될 수 있다. 상기 고형 제제는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 또는 트로키제일 수 있고, 이러한 고형 제제는 상기 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제를 첨가하여 조제할 수 있다. 상기 부형제는 전분, 탄산칼슘, 수크로스, 락토오스, 젤라틴 또는 이의 혼합물일 수 있다. 또한, 상기 고형 제제는 윤활제를 포함할 수 있고, 그 예로는 마그네슘 스티레이트, 탈크등이 있다. 한편, 상기 액상 제제는 현탁제, 내용액제, 유제 또는 시럽제일 수 있다. 이때, 상기 액상 제제에는 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등과 같은 부형제가 포함될 수 있다.The composition of the present invention may be formulated as an oral or parenteral formulation. Oral formulations may include solid formulations and liquid formulations. The solid preparation may be a tablet, a pill, a powder, a granule, a capsule, or a troche, and the solid preparation may be prepared by adding at least one excipient to the composition. The excipient may be starch, calcium carbonate, sucrose, lactose, gelatin, or a mixture thereof. In addition, the solid preparation may contain a lubricant, examples of which include magnesium stearate and talc. On the other hand, the liquid formulation may be a suspension, an inner solution, an emulsion or a syrup. In this case, the liquid formulation may contain excipients such as wetting agents, sweetening agents, fragrances, and preservatives.

상기 비경구용 제제는 주사제, 좌제, 호흡기 흡입용 분말, 스프레이용 에어로졸제, 파우더 및 크림 등을 포함할 수 있다. 상기 주사제는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁용제, 유제 등을 포함할 수 있다. 이때, 비수성용제 또는 현탁용제로서는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름이나, 에틸올레이트와 같이 주사가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다.The parenteral preparations may include injections, suppositories, powders for respiratory inhalation, aerosols for sprays, powders and creams. The injection may include a sterilized aqueous solution, a non-aqueous solvent, a suspension solvent, an emulsion, and the like. At this time, as the non-aqueous solvent or suspension solvent, vegetable oils such as propylene glycol, polyethylene glycol, and olive oil, or injectable esters such as ethyl oleate may be used.

본 발명의 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 또는 비경구로 투여될 수 있다. 비경구 투여는 복강내, 직장내, 피하, 정맥, 근육내 또는 흉부내 주사 방식을 포함할 수 있다.The composition of the present invention may be administered orally or parenterally according to a desired method. Parenteral administration may include intraperitoneal, rectal, subcutaneous, intravenous, intramuscular or intrathoracic injection.

상기 조성물은 약제학적으로 유효한 양으로 투여될 수 있다. 이는 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 환자의 민감도, 투여 시간, 투여 경로, 치료기간, 동시에 사용되는 약물 등에 따라 달라질 수 있다. 그러나, 바람직한 효과를 위해서, 본 발명에 따른 약학 조성물에 포함되는 유효성분의 양은 0.0001 내지 1,000 ㎎/㎏, 구체적으로 0.001 내지 500 ㎎/㎏일 수 있다. 상기 투여는 하루에 1회 수회일 수 있다.The composition may be administered in a pharmaceutically effective amount. This may vary depending on the type of disease, the severity, the activity of the drug, the patient's sensitivity to the drug, the administration time, the administration route, the treatment period, and the drugs used at the same time. However, for a desirable effect, the amount of the active ingredient contained in the pharmaceutical composition according to the present invention may be 0.0001 to 1,000 mg/kg, specifically 0.001 to 500 mg/kg. The administration may be several times a day.

본 발명의 조성물은 단독 또는 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있다. 병용 투여시, 투여는 순차적 또는 동시일 수 있다.The composition of the present invention may be administered alone or in combination with other therapeutic agents. When administered in combination, administration may be sequential or simultaneous.

또한, 본 발명은 애플망고 추출물을 유효성분으로 포함하는 백반증 또는 백모증 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a cosmetic composition for preventing or improving vitiligo or leukoplakia comprising an apple mango extract as an active ingredient.

본 발명에 따른 애플망고 추출물의 특징은 상기 서술한 바와 같다. 일례로, 상기 애플망고 추출물은 물, C1 내지 C2의 저급 알코올 또는 이들의 혼합 용매로 추출될 수 있고, 구체적으로 상기 C1 내지 C2의 저급 알코올은 메탄올 또는 에탄올일 수 있다. 상기 추출물은 멜라노블라스트의 멜라닌 세포로의 분화를 유도할 수 있다. 또한 상기 추출물은 멜라노블라스트의 이동을 촉진시킬 수 있다. The characteristics of the apple mango extract according to the present invention are as described above. For example, the apple mango extract may be extracted with water, C 1 to C 2 lower alcohol or a mixed solvent thereof, and specifically, the C 1 to C 2 lower alcohol may be methanol or ethanol. The extract may induce the differentiation of melanoblast into melanocytes. In addition, the extract can promote the movement of melanoblast.

본 발명의 구체적인 실시예에서, 본 발명자들은 대만산 건애플망고를 구입하고, 이를 메탄올로 추출하여 애플망고 추출물을 제조하였고, 상기 애플망고 추출물은 멜라노블라스트에서 세포 독성을 나타내지 않을 뿐만 아니라(도 2 참조) 멜라닌 함량 및 멜라노블라스트의 분화를 유도하며(도 3 참조), 멜라노블라스트의 이동을 촉진시킴(도4 내지 5참조)을 확인하였다.In a specific embodiment of the present invention, the present inventors purchased Taiwan-made dried apple mango, and extracted it with methanol to prepare an apple mango extract, and the apple mango extract did not show cytotoxicity in melanoblast (Fig. 2). See) It was confirmed that melanin content and differentiation of melanoblast are induced (see FIG. 3), and movement of melanoblast is promoted (see FIGS. 4 to 5).

따라서, 본 발명의 애플망고 추출물은 백반증 또는 백모증 예방 또는 개선용 화장료 조성물에 유용하게 사용될 수 있다.Therefore, the apple mango extract of the present invention can be usefully used in a cosmetic composition for preventing or improving vitiligo or alopecia.

본 발명의 조성물은 상기 추출물에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종이상 포함할 수 있다.The composition of the present invention may further include one or more active ingredients exhibiting the same or similar function to the extract.

또한, 본 발명의 화장료 조성물의 구체적인 제형으로서는 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 프레스파우더, 루스파우더, 아이섀도 등의 제형을 포함한다.In addition, specific formulations of the cosmetic composition of the present invention include skin lotion, skin softener, skin toner, astringent, lotion, milk lotion, moisture lotion, nutrition lotion, massage cream, nutrition cream, moisture cream, hand cream, essence, nutrition essence, It includes formulations such as packs, soaps, shampoos, cleansing foams, cleansing lotions, cleansing creams, body lotions, body cleansers, emulsions, press powders, loose powders, and eye shadows.

또한, 상기 화장료 조성물은 본 발명의 혼합 추출물에 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(forming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다.In addition, the cosmetic composition may include fatty substances, organic solvents, solubilizers, thickening and gelling agents, emollients, antioxidants, suspending agents, stabilizers, forming agents, fragrances, surfactants, in addition to the mixed extract of the present invention. Water, ionic or nonionic emulsifiers, fillers, sequestering and chelating agents, preservatives, vitamins, blockers, wetting agents, essential oils, dyes, pigments, hydrophilic or lipophilic activators, lipid vesicles or commonly used in cosmetics It may contain adjuvants commonly used in the cosmetic field, such as any other ingredients that are used.

본 발명의 조성물에서 상기 추출물은 조성물 총 중량에 대하여 0.005 내지 90 중량% 함유되는 것이 바람직하지만, 백반증 또는 백모증 예방 또는 개선 효과가 있고 독성이 나타나지 않는 범위에서 사용 용도에 따라서 상기 범위 이상 또는 이하로도 사용될 수 있다.In the composition of the present invention, the extract is preferably contained in an amount of 0.005 to 90% by weight based on the total weight of the composition, but it has an effect of preventing or improving vitiligo or alopecia and does not show toxicity. Can also be used.

또한, 본 발명은 애플망고 추출물을 유효성분으로 포함하는 백반증 또는 백모증 예방 또는 개선용 피부 외용제를 제공한다.In addition, the present invention provides a skin external preparation for preventing or improving vitiligo or leukoplakia comprising an apple mango extract as an active ingredient.

본 발명에 따른 애플망고 추출물은 상기 서술한 바와 같다. 일례로, 상기 애플망고 추출물은 물, C1 내지 C2의 저급 알코올 또는 이들의 혼합 용매로 추출될 수 있고, 구체적으로 상기 C1 내지 C2의 저급 알코올은 메탄올 또는 에탄올일 수 있다. 상기 추출물은 멜라노블라스트의 멜라닌 세포로의 분화를 유도할 수 있다. 또한 상기 추출물은 멜라노블라스트의 이동을 촉진시킬 수 있다. Apple mango extract according to the present invention is as described above. For example, the apple mango extract may be extracted with water, C 1 to C 2 lower alcohol or a mixed solvent thereof, and specifically, the C 1 to C 2 lower alcohol may be methanol or ethanol. The extract may induce the differentiation of melanoblast into melanocytes. In addition, the extract can promote the movement of melanoblast.

상기 추출물을 피부 외용제로 사용하는 경우, 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(forming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 또한, 상기 성분들은 피부 과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.When using the extract as an external preparation for skin, additionally fatty substances, organic solvents, solubilizers, thickening and gelling agents, emollients, antioxidants, suspending agents, stabilizers, forming agents, fragrances, surfactants, water, Ionic or nonionic emulsifiers, fillers, sequestering and chelating agents, preservatives, vitamins, blockers, wetting agents, essential oils, dyes, pigments, hydrophilic or lipophilic activators, lipid vesicles or any commonly used in cosmetics It may contain adjuvants commonly used in the cosmetic field, such as other ingredients of. In addition, the ingredients may be introduced in an amount generally used in the field of dermatology.

또한, 본 발명은 애플망고 추출물을 유효성분으로 포함하는 백반증 또는 백모증 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다. In addition, the present invention provides a health functional food for preventing or improving vitiligo or alopecia, including apple mango extract as an active ingredient.

본 발명에 따른 애플망고 추출물은 상기 서술한 바와 같다. 일례로, 상기 애플망고 추출물은 물, C1 내지 C2의 저급 알코올 또는 이들의 혼합 용매로 추출될 수 있고, 구체적으로 상기 C1 내지 C2의 저급 알코올은 메탄올 또는 에탄올일 수 있다. 상기 추출물은 멜라노블라스트의 멜라닌 세포로의 분화를 유도할 수 있다. 또한 상기 추출물은 멜라노블라스트의 이동을 촉진시킬 수 있다. Apple mango extract according to the present invention is as described above. For example, the apple mango extract may be extracted with water, C 1 to C 2 lower alcohol or a mixed solvent thereof, and specifically, the C 1 to C 2 lower alcohol may be methanol or ethanol. The extract may induce the differentiation of melanoblast into melanocytes. In addition, the extract can promote the movement of melanoblast.

본 명세서의 "건강기능식품"이란 일상 식사에서 결핍되기 쉬운 영양소나 인체에 유용한 기능을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조한 식품으로, 인체의 건강을 유지하는데 도움을 주는 식품을 의미하나 이에 한정되지 않으며 통상적인 의미의 건강식품을 모두 포함하는 의미로 사용한다.The term "health functional food" as used herein refers to a food manufactured using nutrients that are easily deficient in daily meals or raw materials or ingredients having useful functions for the human body, and refers to foods that help maintain human health, but is not limited thereto. It is used as a meaning that includes all health foods in the usual meaning.

건강기능식품의 형태 및 종류는 특별히 제한되지 않는다. 구체적으로, 상기 건강기능식품은 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상 및 환의 형태일 수 있다. 상기 건강기능식품은 추가성분으로서 여러 가지 향미제, 감미제 또는 천연 탄수화물을 포함할 수 있다. 상기 감미제는 천연 또는 합성 감미제일 수 있고, 천연 감미제의 예로는 타우마틴, 스테비아 추출물 등이 있다. 한편, 합성 감미제의 예로는 사카린, 아스파르탐 등이 있다. 또한, 상기 천연 탄수화물은 모노사카라이드, 디사카라이드, 폴리사카라이드, 올리고당 및 당알코올 등일 수 있다.The form and type of the health functional food is not particularly limited. Specifically, the health functional food may be in the form of tablets, capsules, powders, granules, liquids, and pills. The health functional food may contain various flavoring agents, sweetening agents, or natural carbohydrates as additional ingredients. The sweetener may be a natural or synthetic sweetener, and examples of the natural sweetener include taumatin and stevia extract. Meanwhile, examples of synthetic sweeteners include saccharin and aspartame. In addition, the natural carbohydrates may be monosaccharides, disaccharides, polysaccharides, oligosaccharides and sugar alcohols.

본 발명의 건강기능식품은 상기 서술한 추가성분 외에, 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙스탄 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올 등을 더 포함할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합으로 사용될 수 있다. 상기 첨가제의 비율은 본 발명의 조성물의 100 중량부당 0.01 내지 0.1 중량부의 범위에서 선택될 수 있다.In addition to the above-described additional ingredients, the health functional food of the present invention includes nutrients, vitamins, electrolytes, flavoring agents, coloring agents, pexane and salts thereof, alginic acid and salts thereof, organic acids, protective colloidal thickeners, pH adjusters, stabilizers, preservatives. , Glycerin, alcohol, and the like may be further included. These ingredients can be used independently or in combination. The proportion of the additive may be selected in the range of 0.01 to 0.1 parts by weight per 100 parts by weight of the composition of the present invention.

본 발명의 애플망고 추출물은 식품에 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있다. 이때, 첨가되는 유효성분의 함량은 목적에 따라 결정될 수 있다. 일반적으로, 건강기능식품 중의 함량은 전체 식품 중량의 0.01 내지 90 중량부일 수 있다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없다면 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.The apple mango extract of the present invention may be added to food as it is or used with other foods or food ingredients. At this time, the content of the added active ingredient may be determined according to the purpose. In general, the content of the health functional food may be 0.01 to 90 parts by weight of the total food weight. However, in the case of long-term intake for the purpose of health and hygiene or for health control purposes, the amount may be less than the above range, and if there is no problem in terms of safety, the active ingredient may be used in an amount greater than the above range.

이하, 본 발명을 하기 실시예에 의해 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail by the following examples.

단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.However, the following examples are only illustrative of the present invention, and the contents of the present invention are not limited by the following examples.

<실시예 1> 애플망고 추출물의 제조<Example 1> Preparation of apple mango extract

대만산 건애플망고(Mangifera indica L.)를 구입하여 사용하였다. 애플망고 샘플 대비 메탄올 5배를 가하여 40℃에서 24시간 동안 추출하였다. 상기 추출 과정을 2회 수행한 후, 여과지(Whatman filter paper No.1)를 이용해 추출물을 여과한 후 감압하여 농축물인 애플망고 메탄올 추출물을 얻었다.Taiwan-made dried apple mango ( Mangifera indica L. ) was purchased and used. Five times the amount of methanol compared to the apple mango sample was added and extracted at 40° C. for 24 hours. After performing the extraction process twice, the extract was filtered using a filter paper (Whatman filter paper No. 1) and then reduced pressure to obtain a methanol extract of apple mango as a concentrate.

<실시예 2> 멜라노블라스트 세포주 배양<Example 2> Melanoblast cell line culture

멜라노블라스트(Melb-a)는 기능 유전체학 세포주 은행(Functional Genomics Cell Bank (영국), Welcome Trust)에서 분양받아 사용하였다. Melb-a는 완전 RPMI1640 배지 (RPMI 1640 배지(Invitrogen Corp (미국))에 1% 페니실린(penicillin)/스트렙토마이신(streptomycin), 1 ng/㎖ bFGF (Murine FGF(Fibroblast growth factor)-basic; PeproTech), 20 nM PDBu(Phorbol12,13-dibutyrate; Sigma Chemical Co, 미국), 및 5% 우태아 혈청(Fetal bovine serum; Invitrogen Corp, 미국)이 첨가)를 이용하여 37℃, 10% CO2 항온기에서 계대 배양하였다. 계대 배양은 배양된 세포에 트립신-EDTA(trypsin-EDTA; Invitrogen Corp (미국))를 처리하고 원심분리하여 침전시키고, 상등액을 제거한 뒤 완전(complete) RPMI 1640 배지를 첨가하여 세포를 현탁킨 후 1×104 세포수/접시의 농도로 10 cm 세포 배양 접시에 재분주하는 방식으로 수행하였다.Melanoblast (Melb-a) was pre-sold and used from Functional Genomics Cell Bank (UK), Welcome Trust. Melb-a is in complete RPMI1640 medium (RPMI 1640 medium (Invitrogen Corp (USA)) in 1% penicillin/streptomycin, 1 ng/ml bFGF (Murine Fibroblast growth factor (FGF)-basic; PeproTech) , 20 nM PDBu (Phorbol12,13-dibutyrate; Sigma Chemical Co, USA), and 5% fetal bovine serum (added with Fetal bovine serum; Invitrogen Corp, USA) at 37° C., 10% CO 2 passage in an incubator Cultured. In the subculture, trypsin-EDTA (trypsin-EDTA; Invitrogen Corp (USA)) was treated with the cultured cells and precipitated by centrifugation, the supernatant was removed, and complete RPMI 1640 medium was added to suspend the cells. It was carried out by redistributing in a 10 cm cell culture dish at a concentration of x 10 4 cells/dish.

<실험예 1> 애플망고 추출물이 멜라노블라스트 세포 생존율에 미치는 영향 확인<Experimental Example 1> Confirmation of the effect of apple mango extract on the survival rate of melanoblast cells

6×104 개의 멜라노블라스트 세포를 12-웰 플레이트에 접종하고, 37℃, 10% CO2 항온기에 24시간 전배양한 후, 배양액을 제거하고 DMSO에 녹인 실시예 1의 건애플망고(Mangifera indica L.) 추출물이 포함된 배양액을 10 및 50 ㎍/㎖ 농도로 각각 처리하였다. 음성 대조군으로 DMSO를 처리하였고, 양성 대조군으로 α-MSH(alpha-melanocyte stimulating hormone)를 처리하였다. 애플망고 추출물을 처리한 다음, 배지는 4일 동안 이틀마다 교환하였으며 배지를 교환할 때 다시 애플망고 추출물을 처리하였다. 애플망고 추출물을 처음 처리한 시점으로부터 4일 째에 배양된 세포에 MTT 시약(5 ㎎/㎖)을 처리한 후, 형성된 포르마잔(formazan)을 DMSO로 녹이고 ELISA 마이크로플레이트 리더기를 이용하여 540 nm의 파장의 흡광도를 측정하고, 무처리 대조군과 비교하였다. 6×10 4 melanoblast cells were inoculated into a 12-well plate, pre-cultured for 24 hours in a 37°C, 10% CO 2 incubator, and then the culture medium was removed and the dried apple mango of Example 1 dissolved in DMSO ( Mangifera indica L. ) The culture solution containing the extract was treated at concentrations of 10 and 50 μg/ml, respectively. DMSO was treated as a negative control, and α-MSH (alpha-melanocyte stimulating hormone) was treated as a positive control. After treatment with the apple mango extract, the medium was changed every two days for 4 days, and the apple mango extract was treated again when the medium was changed. After treatment with the MTT reagent (5 mg/ml) on the cells cultured on the 4th day from the first treatment with the apple mango extract, the formed formazan was dissolved in DMSO, and 540 nm using an ELISA microplate reader. The absorbance of the wavelength was measured and compared with the untreated control group.

그 결과, 애플망고 추출물은 10-50 ㎍/㎖의 농도로 처리시 멜라노블라스트 세포에서 독성을 나타내지 않음을 확인하였다 (도 2).As a result, it was confirmed that the apple mango extract did not show toxicity in melanoblast cells when treated at a concentration of 10-50 μg/ml (FIG. 2).

<실험예 2> 애플망고 추출물이 멜라노블라스트 분화에 미치는 영향 확인<Experimental Example 2> Confirmation of the effect of apple mango extract on melanoblast differentiation

멜라노블라스트는 타이로시나아제의 촉매 기능이 멈추어 있는 비색소 세포로, 애플망고 추출물이 멜라노블라스트의 분화를 유도하는지 확인하기 위하여, 멜라노블라스트의 멜라닌 함량을 측정하였다. Melanoblast is a non-pigmented cell in which the catalytic function of tyrosinase is stopped. In order to confirm whether the apple mango extract induces the differentiation of melanoblast, the melanin content of melanoblast was measured.

<멜라닌 함량 측정><Melanin content measurement>

6×104 개의 멜라노블라스트 세포를 12-웰 플레이트에 접종하고, 37℃, 10% CO2 항온기에 24시간 전배양한 후, 배양액을 제거하고 DMSO에 녹인 실시예 1의 건애플망고(Mangifera indica L.) 추출물이 포함된 배양액을 10, 25, 50, 및 100 ㎍/㎖ 농도로 각각 처리하였다. 음성 대조군으로 DMSO를 처리하였고, 양성 대조군으로 α-MSH를 처리하였다. 애플망고 추출물을 처리한 다음, 배지는 4일 동안 이틀마다 교환하였으며 배지를 교환할 때 다시 애플망고 추출물을 처리하였다. 애플망고 추출물을 처음 처리한 시점으로부터 4일 째에 배양된 세포의 배양액을 제거하고 PBS 500㎕로 2번 세척한 후, 트립신-EDTA를 처리하여 세포를 수득하였다. 수득된 세포를 1.5 ㎖ 마이크로 튜브에 옮겨 담고 원심분리하여 세포를 침전시키고, 상등액을 제거한 뒤 10% DMSO가 들어있는 1N NaOH 용액 100 ㎕에 현탁시켜 이를 80℃에서 1시간 동안 반응시켰다. 상기 용해된 세포 내의 멜라닌은 플레이트 리더기를 이용하여 405 nm의 파장의 흡광도를 측정하고 무처리 대조군과 비교하였다. 6×10 4 melanoblast cells were inoculated into a 12-well plate, pre-cultured for 24 hours in a 37°C, 10% CO 2 incubator, and then the culture medium was removed and the dried apple mango of Example 1 dissolved in DMSO ( Mangifera indica L. ) The culture solution containing the extract was treated at concentrations of 10, 25, 50, and 100 μg/ml, respectively. DMSO was treated as a negative control, and α-MSH was treated as a positive control. After treatment with the apple mango extract, the medium was changed every two days for 4 days, and the apple mango extract was treated again when the medium was changed. The culture medium of the cells cultured on the 4th day from the time point when the apple mango extract was first treated was removed, washed twice with 500 µl of PBS, and then treated with trypsin-EDTA to obtain cells. The obtained cells were transferred to a 1.5 ml microtube, centrifuged to precipitate the cells, and the supernatant was removed, and then suspended in 100 μl of a 1N NaOH solution containing 10% DMSO and reacted at 80° C. for 1 hour. The melanin in the lysed cells was measured for absorbance at a wavelength of 405 nm using a plate reader and compared with the untreated control group.

멜라노블라스트의 침전물을 육안으로 관찰한 결과, 음성 대조군은 흰색인 반면, 양성 대조군(α-MSH)과 애플망고 추출물을 처리한 실험군에서는 색 변화가 나타나 멜라닌 합성이 유도된 것으로 나타났다. 멜라닌 함량을 측정한 결과, 애플망고 추출물을 처리한 실험군은 멜라닌 함량이 증가한 것으로 나타났으며(50 ppm 애플망고 추출물: 112%), 이는 양성 대조군(114%)과 유사한 수준이었다 (도 3). 상기 결과는 애플망고 추출물이 멜라닌 세포로 멜라노블라스트의 분화를 유도하였음을 보여준다.As a result of visual observation of the melanoblast precipitate, the negative control was white, whereas the positive control (α-MSH) and the experimental group treated with apple mango extract showed a color change, indicating that melanin synthesis was induced. As a result of measuring the melanin content, the experimental group treated with the apple mango extract showed an increase in melanin content (50 ppm apple mango extract: 112%), which was similar to the positive control (114%) (FIG. 3). The above results show that the apple mango extract induced the differentiation of melanoblast into melanocytes.

<실험예 3> 애플망고 추출물이 멜라노블라스트 이동에 미치는 영향 확인<Experimental Example 3> Confirmation of the effect of apple mango extract on melanoblast migration

멜라노블라스트에서 분화된 멜라닌 세포(melanocyte)는 표피 조직으로 이동한 다음, 생성된 멜라닌을 각질 형성 세포(keratinocyte)로 전달하여 피부를 착색시킨다. 따라서, 애플망고 추출물이 멜라노블라스트 세포의 이동을 유도하는지 확인하기 위하여 하기 실험을 수행하였다. Melanocytes differentiated from melanoblast migrate to epidermal tissue, and then transfer the produced melanin to keratinocytes to color the skin. Therefore, the following experiment was performed to confirm whether the apple mango extract induces the migration of melanoblast cells.

구체적으로, 세포의 이동은 트랜스웰 세포 배양 챔버(Transwell cell culture chamber, ostar 3422)를 이용하여 측정하였다. 트랜스웰 세포 배양 챔버 내의 0.8 ㎛ 폴리비닐피롤리돈이 없는 폴리카보네이트(polyvinylpyrroliodone-free polycarbonate) 필터를 1% 젤라틴으로 코팅하였다. 코팅한 필터를 굳힌 후, 챔버의 아랫 부분에 실시예 1의 애플망고 추출물이 첨가된 무혈청 RPMI 배지 600 ㎕를 첨가하고, 챔버의 윗 부분에는 멜라노블라스트 세포(2.5×105 세포수/㎖)를 100 ㎕ 접종하고 24시간 동안 배양하였다. 배양이 완료되면, 필터를 오려내어 메탄올로 고정시키고 헤마톡실린(hematoxylin)과 에오신(eosin)으로 염색한 다음, 면봉을 이용하여 필터 위에 이동되지 않은 세포를 제거하였다. 필터의 아랫 부분으로 이동된 세포를 현미경으로 관찰하였으며, 필터를 4등분한 뒤 현미경으로 40배 확대하여 세포 수를 측정하고 평균값을 산출하였다. 실험은 각각의 조건에서 2번 반복 수행하였다. Specifically, cell migration was measured using a transwell cell culture chamber (ostar 3422). A 0.8 μm polyvinylpyrroliodone-free polycarbonate filter in a transwell cell culture chamber was coated with 1% gelatin. After the coated filter was hardened, 600 µl of serum-free RPMI medium containing the apple mango extract of Example 1 was added to the lower part of the chamber, and melanoblast cells (2.5 × 10 5 cells/ml) were added to the upper part of the chamber. Was inoculated with 100 μl and incubated for 24 hours. When the culture was completed, the filter was cut out, fixed with methanol, stained with hematoxylin and eosin, and then cells that had not migrated on the filter were removed using a cotton swab. The cells moved to the lower part of the filter were observed under a microscope, and the filter was divided into quarters and then enlarged 40 times under a microscope to measure the number of cells and calculate the average value. The experiment was repeated twice under each condition.

그 결과, 애플망고 추출물을 10, 50 ppm 농도로 처리한 필터의 아래 면에서 멜라노블라스트 세포의 수가 무처리 대조군에 비해 각각 146%, 162% 증가한 것으로 나타나, 애플망고 추출물이 멜라노블라스트 세포의 이동을 촉진함을 확인하였다 (도 4 및 도 5).As a result, it was found that the number of melanoblast cells increased by 146% and 162%, respectively, compared to the untreated control, on the lower side of the filter treated with the apple mango extract at concentrations of 10 and 50 ppm. It was confirmed that it was promoted (FIGS. 4 and 5).

Claims (8)

애플망고 추출물을 유효성분으로 포함하는 백반증 또는 백모증 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
A pharmaceutical composition for preventing or treating vitiligo or leukoplakia comprising apple mango extract as an active ingredient.
제1항에 있어서,
상기 애플망고 추출물은 물, C1 내지 C2의 저급 알코올 또는 이들의 혼합 용매로 추출되는, 백반증 또는 백모증 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
The method of claim 1,
The apple mango extract is extracted with water, C 1 to C 2 of lower alcohol or a mixed solvent thereof, a pharmaceutical composition for preventing or treating vitiligo or alopecia.
제2항에 있어서,
상기 C1 내지 C2 의 저급 알코올은 메탄올 또는 에탄올인, 백반증 또는 백모증 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
The method of claim 2,
The lower alcohol of the C 1 to C 2 is methanol or ethanol, a pharmaceutical composition for preventing or treating vitiligo or alopecia.
제1항에 있어서,
상기 추출물은 멜라노블라스트의 멜라닌 세포로의 분화를 유도하는, 백반증 또는 백모증 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
The method of claim 1,
The extract is a pharmaceutical composition for preventing or treating vitiligo or alopecia, which induces the differentiation of melanoblast into melanocytes.
제1항에 있어서,
상기 추출물은 멜라노블라스트의 이동을 촉진시키는, 백반증 또는 백모증 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
The method of claim 1,
The extract is a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of vitiligo or alopecia to promote the movement of melanoblast.
애플망고 추출물을 유효성분으로 포함하는 백반증 또는 백모증 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
A cosmetic composition for preventing or improving vitiligo or leukoplakia comprising apple mango extract as an active ingredient.
애플망고 추출물을 유효성분으로 포함하는 백반증 또는 백모증 예방 또는 개선용 피부 외용제.
Skin external preparation for preventing or improving vitiligo or leukoplakia comprising apple mango extract as an active ingredient.
애플망고 추출물을 유효성분으로 포함하는 백반증 또는 백모증 예방 또는 개선용 건강기능식품.

Health functional food for preventing or improving vitiligo or leukoplakia containing apple mango extract as an active ingredient.

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