KR20210005553A - Lma-발현 암 및 자가면역 장애를 치료하기 위한 항-람다 골수종 항원(lma) 결합 단백질 - Google Patents

Lma-발현 암 및 자가면역 장애를 치료하기 위한 항-람다 골수종 항원(lma) 결합 단백질 Download PDF

Info

Publication number
KR20210005553A
KR20210005553A KR1020207027033A KR20207027033A KR20210005553A KR 20210005553 A KR20210005553 A KR 20210005553A KR 1020207027033 A KR1020207027033 A KR 1020207027033A KR 20207027033 A KR20207027033 A KR 20207027033A KR 20210005553 A KR20210005553 A KR 20210005553A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
seq
ser
binding protein
lma
leu
Prior art date
Application number
KR1020207027033A
Other languages
English (en)
Inventor
로잔 던
Original Assignee
해마로직스 피티와이. 리미티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from AU2018900534A external-priority patent/AU2018900534A0/en
Application filed by 해마로직스 피티와이. 리미티드 filed Critical 해마로직스 피티와이. 리미티드
Publication of KR20210005553A publication Critical patent/KR20210005553A/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3061—Blood cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/42—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/524—CH2 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/526—CH3 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/734—Complement-dependent cytotoxicity [CDC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

본 출원은 항-람다 골수종 항원(LMA) 결합 단백질에 관한 것으로, 상기 결합 단백질은 항체이다. 이들 항체 및 이들 항체를 인코딩하는 핵산을 포함하는 조성물이 또한 개시된다. 이들 항체, 조성물 및 핵산은 LMA 발현 병리의 치료에 사용될 수 있다.

Description

LMA-발현 암 및 자가면역 장애를 치료하기 위한 항-람다 골수종 항원(LMA) 결합 단백질
본 발명의 개시는 항-LMA 결합 단백질에 관한 것이다. 상기 결합 단백질은 형질 세포 및/또는 이의 전구체의 비정상적인 증식과 관련된 장애를 치료하는 데 유용할 수 있다.
형질 세포 및/또는 이의 전구체의 비정상적인 증식은 다양한 인간 병리의 특징이다. 일 예는 골수 형질 세포의 악성종양인 다발골수종(MM)이다. 상기 질병은 람다 또는 람다 경쇄 제한 모노클로날 파라단백질을 분비하는 악성 형질 세포를 특징으로 한다. 람다 제한은 골수종 환자의 약 40%에서 발생하며, 람다 골수종 항원(LMA)의 발현은 악성 효과기 세포로 매우 제한된다. 최근 치료의 발전에도 불구하고, 다발골수종은 치료 불가능하다. 이의 임상 과정은 치료에 대한 초기 반응과 이후 모든 형태의 치료에 대한 궁극적인 내성과 함께 반복된 재발을 특징으로 한다. 이는 또한 질병 자체 및 이용 가능한 치료의 독성 둘 모두로 인해 유의한 이환율 및 장애와 관련이 있다.
따라서, 형질 세포 및/또는 이의 전구체의 비정상적인 증식을 치료하기 위한 새로운 접근법이 필요하다.
본 발명의 개시의 인간 결합 단백질을 생성하는 경우, 본 발명자는 LMA 양성 세포주에 결합하고 이를 사멸시키는 인간 항체의 선택을 확인하였다. 본 발명자는 또한 유리 람다 경쇄(예를 들어, 혈청 항원)에 비해 LMA(즉, 세포 표면 항원)에 대한 우선적 결합을 지시하는 중쇄 변형을 갖는 인간 항체를 확인하였다. 상기 변형은 LMA를 발현하는 세포를 우선적으로 표적화하기 위해 다양한 결합 단백질에 통합될 수 있다. 상기 결합 단백질은 LMA-발현 암세포와 같은 LMA를 발현하는 세포의 표적화된 사멸을 매개하는 데 특히 효과적일 수 있다.
따라서, 제1 양태에서, 본 발명의 개시는 항원 결합 도메인을 갖는 항-람다 골수종 항원(LMA) 결합 단백질에 관한 것이며, 상기 항원 결합 도메인은 유리 람다 경쇄에 비해 LMA에 우선적으로 결합하고, 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하며, 상기 VH는 SEQ ID NO:1에 제시된 바와 같은 상보성 결정 영역(CDR) 1, SEQ ID NO:2에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:3에 제시된 바와 같은 CDR3를 포함한다. 또 다른 예에서, VH는 SEQ ID NO:4에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 예에서, VL은 SEQ ID NO:6에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:7에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:8 또는 SEQ ID NO:13에 제시된 바와 같은 CDR3를 포함한다. 또 다른 예에서, VL은 SEQ ID NO:9 또는 SEQ ID NO:14에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 예에서, VL은 SEQ ID NO:9에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 일 예에서, 상기 언급된 결합 단백질은 람다 아이소형 2 및 3에 결합한다. 일 예에서, 상기 언급된 항체는 람다 아이소형 1에 결합하지 않는다. 또 다른 예에서, 상기 언급된 항체는 표면 플라즈몬 공명(SPR)에 의해 측정시 1 x 1010 미만의 KD로 유리 람다 경쇄에 결합한다. 또 다른 예에서, 상기 언급된 항체는 SPR에 의해 측정시 5 x 109 미만의 KD로 유리 람다 경쇄에 결합한다. 또 다른 예에서, 상기 언급된 항체는 SPR에 의해 측정시 1 x 109 미만의 KD로 유리 람다 경쇄에 결합한다. 또 다른 예에서, 상기 언급된 항체는 SPR에 의해 측정시 5 x 108 미만의 KD로 유리 람다 경쇄에 결합한다. 또 다른 예에서, 상기 언급된 항체는 SPR에 의해 측정시 5 x 107 미만의 KD로 유리 람다 경쇄에 결합한다.
또 다른 예에서, 본 발명의 개시는 항원 결합 도메인을 갖는 항-LMA 결합 단백질을 포함하며, 상기 항원 결합 도메인은 LMA에 결합하고, VH 및 VL을 포함하며, 여기서:
- VH는 SEQ ID NO:31에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:32에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:33에 제시된 바와 같은 CDR3를 포함하고, VL은 SEQ ID NO:36 또는 SEQ ID NO:41에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:37 또는 SEQ ID NO:42에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:38 또는 SEQ ID NO:43에 제시된 바와 같은 CDR3를 포함하거나;
- VH는 SEQ ID NO:61에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:62에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:63에 제시된 바와 같은 CDR3를 포함하고, VL은 SEQ ID NO:66 또는 SEQ ID NO:71에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:67 또는 SEQ ID NO:72에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:68 또는 SEQ ID NO:73에 제시된 바와 같은 CDR3를 포함한다. 일 예에서, VH는 SEQ ID NO:34 또는 SEQ ID NO:64에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 예에서, VL은 SEQ ID NO:39, 44, 69 또는 74 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
또 다른 예에서, 본 발명의 개시는 항원 결합 도메인을 갖는 항-LMA 결합 단백질을 포함하며, 상기 항원 결합 도메인은 LMA에 결합하고, 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하며, 여기서:
- VH는 SEQ ID NO:5에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VL은 SEQ ID NO:10 또는 SEQ ID NO:15에 제시된 아미노산 서열을 포함하고;
- VH는 SEQ ID NO:34에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VL은 SEQ ID NO:40 또는 SEQ ID NO:45에 제시된 아미노산 서열을 포함하고;
- VH는 SEQ ID NO:65에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VL은 SEQ ID NO:70 또는 SEQ ID NO:75에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
또 다른 예에서, 본 발명의 개시는 항원 결합 도메인을 갖는 항-LMA 결합 단백질을 포함하며, 상기 항원 결합 도메인은 LMA에 결합하고, 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하며, 여기서:
- VH는 SEQ ID NO:5에 제시된 아미노산 서열로부터의 CDR1, CDR2 및 CDR3를 포함하고, VL은 SEQ ID NO:10 또는 SEQ ID NO:15에 제시된 아미노산 서열로부터의 CDR1, CDR2 및 CDR3를 포함하고;
- VH는 SEQ ID NO:34에 제시된 아미노산 서열로부터의 CDR1, CDR2 및 CDR3를 포함하고, VL은 SEQ ID NO:40 또는 SEQ ID NO:45에 제시된 아미노산 서열로부터의 CDR1, CDR2 및 CDR3를 포함하고;
- VH는 SEQ ID NO:65에 제시된 아미노산 서열로부터의 CDR1, CDR2 및 CDR3를 포함하고, VL은 SEQ ID NO:70 또는 SEQ ID NO:75에 제시된 아미노산 서열로부터의 CDR1, CDR2 및 CDR3를 포함하고;
여기서, CDR은 카밧(Kabat)을 사용하여 할당된다.
또 다른 예에서, 본 발명의 개시는 항원 결합 도메인을 갖는 항-LMA 결합 단백질을 포함하며, 상기 항원 결합 도메인은 LMA에 결합하고, 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하며, 여기서:
- VH는 SEQ ID NO:5에 제시된 아미노산 서열로부터의 CDR1, CDR2 및 CDR3를 포함하고, VL은 SEQ ID NO:10 또는 SEQ ID NO:15에 제시된 아미노산 서열로부터의 CDR1, CDR2 및 CDR3를 포함하고;
- VH는 SEQ ID NO:34에 제시된 아미노산 서열로부터의 CDR1, CDR2 및 CDR3를 포함하고, VL은 SEQ ID NO:40 또는 SEQ ID NO:45에 제시된 아미노산 서열로부터의 CDR1, CDR2 및 CDR3를 포함하고;
- VH는 SEQ ID NO:65에 제시된 아미노산 서열로부터의 CDR1, CDR2 및 CDR3를 포함하고, VL은 SEQ ID NO:70 또는 SEQ ID NO:75에 제시된 아미노산 서열로부터의 CDR1, CDR2 및 CDR3를 포함하고;
여기서, CDR은 IMGT를 사용하여 할당된다.
또 다른 예에서, 본원에 개시된 결합 단백질은 LMA에 특이적으로 결합한다. 또 다른 예에서, 본원에 개시된 결합 단백질은 항체이다. 일 예에서, 항체는 LMA에 특이적으로 결합한다. 일 예에서, 항체는 인간 항체이다. 일 예에서, 본원에 개시된 결합 단백질의 VH 및 VL은 단일 폴리펩티드 사슬에 있다. 예를 들어, 결합 단백질은 하기일 수 있다:
(i) 단일 사슬 Fv 단편(scFv);
(ii) 이량체 scFv(di-scFv);
(iii) 삼량체 scFv(tri-scFv);
(iv) 항체의 불변 영역, Fc 또는 중쇄 불변 도메인 CH2 및/또는 CH3에 연결된 (i), (ii) 또는 (iii) 중 어느 하나.
또 다른 예에서, 본원에 개시된 결합 단백질의 VH 및 VL은 별도의 폴리펩티드 사슬에 있다. 예를 들어, 결합 단백질은 하기일 수 있다:
(i) 디아바디(diabody);
(ii) 트리아바디(triabody);
(iii) 테트라바디(tetrabody);
(iv) Fab;
(v) F(ab')2;
(vi) Fv;
(vii) 항체의 불변 영역, Fc 또는 중쇄 불변 도메인 CH2 및/또는 CH3에 연결된 (i) 내지 (vi) 중 어느 하나; 또는
(viii) 온전한 항체.
또 다른 예에서, 본 발명의 개시는 본원에 개시된 결합 단백질을 인코딩하는 핵산을 포함한다. 또 다른 예에서, 본 발명의 개시는 본원에 개시된 결합 단백질을 인코딩하는 핵산을 포함하는 벡터를 포함한다. 일 예에서, 상기 벡터는 핵산의 발현을 위해 숙주 세포에 제공될 수 있다. 따라서, 일 예에서, 본 발명의 개시는 본원에 정의된 결합 단백질을 발현하는 분리된 또는 재조합 세포를 포함한다.
또 다른 예에서, 본 발명의 개시는 약학적 담체 및 본원에 정의된 결합 단백질을 포함하는 조성물을 포함한다.
또 다른 예에서, 본 발명의 개시는 대상체에서 LMA-발현 암을 치료하는 방법을 포함하며, 상기 방법은 대상체에 유효량의 본원에 정의된 결합 단백질을 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 예에서, 본 발명의 개시는 LMA-발현 암을 치료하기 위한 약제의 제조에서 본원에 정의된 결합 단백질의 용도를 포함한다. 또 다른 예에서, 본 발명의 개시는 LMA-발현 암을 치료하는 데 사용하기 위한 본원에 정의된 결합 단백질을 포함한다. 일 예에서, LMA-발현 암은 다발골수종, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), POEMS 증후군 또는 아밀로이드증이다.
또 다른 예에서, 본 발명의 개시는 대상체에서 자가면역 장애를 치료하는 방법을 포함하며, 상기 방법은 대상체에 유효량의 본원에 정의된 결합 단백질을 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 예에서, 본 발명의 개시는 자가면역 장애를 치료하기 위한 약제의 제조에서 본원에 정의된 결합 단백질의 용도를 포함한다. 또 다른 예에서, 본 발명의 개시는 자가면역 장애를 치료하는 데 사용하기 위한 본원에 정의된 결합 단백질을 포함한다. 일 예에서, 자가면역 장애는 류마티스 관절염, 전신 홍반 루푸스, 당뇨병 및 다발경화증으로 구성된 군으로부터 선택된다.
본원의 임의의 예는 달리 구체적으로 언급되지 않는 한 임의의 다른 예에 준용되도록 적용되어야 한다.
본 발명의 개시는 본원에 기재된 특정 예에 의해 범위가 제한되지 않으며, 이는 단지 예시의 목적을 위한 것이다. 기능적으로 동등한 제품, 조성물 및 방법은 본원에 기재된 바와 같이 본 발명의 개시의 범위 내에서 명확하다.
본 명세서 전체에 걸쳐, 달리 구체적으로 언급되지 않거나 문맥상 달리 요구되지 않는 한, 단일한 단계, 물질의 조성, 단계의 집단 또는 물질의 조성의 집단에 대한 언급은 하나 또는 복수(즉, 하나 이상)의 이들 단계, 물질의 조성, 단계의 그룹 또는 물질의 조성의 그룹을 포함하는 것으로 간주되어야 한다.
본 발명의 개시는 하기의 비제한적인 실시예에 의해 그리고 첨부 도면을 참조로 하여 이하에 설명된다.
도 1. 람다 유리 경쇄 상의 4G7 모노클로날 항체 에피토프. 좌측의 패널은 람다 유리 경쇄 1, 2 및 3 아이소형의 아미노산 서열의 정렬을 제시하며, 이에 따라 람다 아이소형 2 및 3은 발현된 람다 경쇄 레퍼토리의 95%를 구성한다. 별표는 서열 동일성을 나타낸다. 다양한 아미노산이 강조된다. 우측 패널은 람다 경쇄 이량체(MCG 이량체) 및 MCG Ig의 3D 구조에서 확인된 펩티드를 제시하며, 이는 폴딩된 경쇄 단백질 내에서, 2개의 펩티드는 컨태젼(contagion)을 형성하여 비-이디오타입 입체형태 에피토프를 생성함을 입증한다.
도 2. 정제된 람다-경쇄에 대한 인간 항-LMA 항체의 친화성. (a) 그래프는 정제된 람다-경쇄 BJP(LAM034MD, LAM134MD, MAL788MD, LAM885D, LAM893D)(20 ng/㎖)에 대한 인간 항-LMA 항체 클론(1A11, 7F11, 10B3, 18E8, 18E11 및 18F9)(20 ㎍/㎖)의 SPR 값 4G7을 도시한다. 항-κBJP 모노클로날 항체 MDX-1097 및 κBJP(20 ng/㎖)(KAP960M)를 음성 대조군으로 사용하였다. 7F11과는 별개로 인간 항-LMA 항체 클론은 정제된 람다-경쇄 BJP에 대해 높고 동등한 선택적 친화성을 나타내었고; 7F11은 낮은 친화성을 나타내었다. 람다-경쇄 BJP 말단의 약어: M: 단량체; MD: 단량체 및 이량체 형태의 혼합물; D: 이량체. (b) 그래프는 상업적 람다-경쇄(Bethyl)에 대한 인간 항-LMA 항체 클론(18E8, 7F11 및 18F9)(700 ng/㎖)의 SPR 값을 도시한다. 인간 항-LMA 항체 7F11은 클론 18E8 및 18F9에 비해 상업적 람다-경쇄(Bethyl)에 약하게 결합한다.
도 3. HEK 세포로부터의 재조합 람다-경쇄 분리물에 대한 인간 항-LMA 항체의 친화성. 그래프는 시노몰구스(cynomologus) 원숭이 람다-경쇄(CYNO1, CYNO3), 람다-경쇄 형질감염된 HEK 세포로부터의 상층액, LP-1 람다-경쇄 분리물(LP-1 ISO) 및 RPMI-8226 람다-경쇄 분리물(RPMI-8226 ISO)에 대한 인간 항-LMA 항체 후보(1A11, 7F11, 10B3, 18E8, 18E11, 18F9)(20 ㎍/㎖)의 SPR 값을 도시한다. 항-κBJP 모노클로날 항체 MDX-1097이 음성 대조군으로 사용되었다. 7F11과는 별개로 인간 항-LMA 항체 클론은 시노몰구스 원숭이 람다-경쇄 및 HEK, LP-1 및 RPMI-8226으로부터의 람다-경쇄 분리물에 대한 높고 동등한 선택적 친화성을 나타내었고; 7F11은 낮은 친화성을 나타내었다.
도 4. 상층액 인간 다발골수종 세포주에 대한 인간 항-LMA 항체의 친화성. 그래프는 인간 다발골수종 세포주(RPMI-8226(람다 아이소형 2), LP-1(람다 아이소형 1), JJN3(카파), OPM-2(람다 아이소형 3)로부터의 상층액에 대한 인간 항-LMA 항체 후보(6A1, 13H3 및 4A1)(20 ㎍/㎖)의 SPR 값을 도시한다. 인간 항-LMA 항체 클론은 인간 다발골수종 세포주에 의해 발현되는 가용성 람다 경쇄 아이소형에 대해 높고 선택적인 친화성을 나타내었고, JJN3 세포주에 의해 발현되는 카파-경쇄에 대해서는 그렇지 않았다.
도 5. LMA 양성 인간 골수종 세포주에 대한 인간 항-LMA 항체의 결합. (a) 그래프는 흐름세포측정법 분석에 의해 결정된 바와 같이 일차 항체가 없는 대조군에 비한 인간 항-LMA 항체 후보(1A11, 7F11, 10B3, 18E8, 18E11 및 18F9)에 의한 LMA 양성 인간 골수종 세포주(RPMI-8226(람다 아이소형 2), U266(람다 아이소형 2), JJN3(카파), OPM-2(람다 아이소형 3))의 상대 염색(기하 평균)을 도시한다. 인간 항-LMA 항체는 모든 시험된 인간 골수종 세포주의 선택적 염색을 나타내었으나, JJN3(카파) 세포주는 염색되지 않았다(또는 약하게 염색되었다). (b) 그래프는 흐름세포측정법 분석에 의해 결정된 바와 같이 일차 항체가 없는 대조군에 비한 인간 항-LMA 항체 후보(1A11, 7F11, 10B3, 18E8, 18E11, 18F9, 6A1, 4A1 및 13H3)에 의한 LMA 양성 인간 골수종 세포주(U266(람다 아이소형 2), OPM-2(람다 아이소형 3) 및 KMS-18(람다 아이소형 1)의 상대 염색(기하 평균)을 도시한다.
도 6. 골수종 세포에 대한 항체 의존적 세포 세포독성(ADCC).
도 7. 골수종 세포에 대한 보체 매개 세포독성(CDC).
도 8. 7F11을 10B3, 18E11 및 18E8과 비교하는 서열 정렬. 중쇄 CDR에는 밑줄이 그어져 있다. 별표는 서열 동일성을 나타낸다.
도 9. 10 ㎍/㎖에서 10B3으로 염색된 인간 편도(HT2449-1)의 냉동절편. 40x 대물렌즈.
도 10. 10 ㎍/㎖에서 7F11로 염색된 인간 편도(HT2449-1)의 냉동절편. 40x 대물렌즈.
서열 목록에 대한 기호 풀이
NB: CDR 및 프레임워크 서열을 할당하는 데 사용되는 케이벳(Kabat) 넘버링 시스템
SEQ ID NO:1 - 7F11 중쇄 CDR1 아미노산 서열
SEQ ID NO:2 - 7F11 중쇄 CDR2 아미노산 서열
SEQ ID NO:3 - 7F11 중쇄 CDR3 아미노산 서열
SEQ ID NO:4 - 7F11 중쇄 프레임워크 아미노산 서열
SEQ ID NO:5 - 7F11 중쇄 전장 아미노산 서열
SEQ ID NO:6 - 7F11 경쇄 1 - CDR1 아미노산 서열
SEQ ID NO:7 - 7F11 경쇄 1 - CDR2 아미노산 서열
SEQ ID NO:8 - 7F11 경쇄 1 - CDR3 아미노산 서열
SEQ ID NO:9 - 7F11 경쇄 1 - 프레임워크 아미노산 서열
SEQ ID NO:10 - 7F11 경쇄 1 - 전장 아미노산 서열
SEQ ID NO:11 - 7F11 경쇄 2 - CDR1 아미노산 서열
SEQ ID NO:12 - 7F11 경쇄 2 - CDR2 아미노산 서열
SEQ ID NO:13 - 7F11 경쇄 2 - CDR3 아미노산 서열
SEQ ID NO:14 - 7F11 경쇄 2 - 프레임워크 아미노산 서열
SEQ ID NO:15 - 7F11 경쇄 2 - 전장 아미노산 서열
SEQ ID NO:16 - 7F11 중쇄 CDR1 DNA 서열
SEQ ID NO:17 - 7F11 중쇄 CDR2 DNA 서열
SEQ ID NO:18 - 7F11 중쇄 CDR3 DNA 서열
SEQ ID NO:19 - 7F11 중쇄 프레임워크 DNA 서열
SEQ ID NO:20 - 7F11 중쇄 전장 DNA 서열
SEQ ID NO:21 - 7F11 경쇄 1 - CDR1 DNA 서열
SEQ ID NO:22 - 7F11 경쇄 1 - CDR2 DNA 서열
SEQ ID NO:23 - 7F11 경쇄 1 - CDR3 DNA 서열
SEQ ID NO:24 - 7F11 경쇄 1 - 프레임워크 DNA 서열
SEQ ID NO:25 - 7F11 경쇄 1 - 전장 DNA 서열
SEQ ID NO:26 - 7F11 경쇄 2 - CDR1 DNA 서열
SEQ ID NO:27 - 7F11 경쇄 2 - CDR2 DNA 서열
SEQ ID NO:28 - 7F11 경쇄 2 - CDR3 DNA 서열
SEQ ID NO:29 - 7F11 경쇄 2 - 프레임워크 DNA 서열
SEQ ID NO:30 - 7F11 경쇄 2 - 전장 DNA 서열
SEQ ID NO:31 - 18E8 중쇄 CDR1 아미노산 서열
SEQ ID NO:32 - 18E8 중쇄 CDR2 아미노산 서열
SEQ ID NO:33 - 18E8 중쇄 CDR3 아미노산 서열
SEQ ID NO:34 - 18E8 중쇄 프레임워크 아미노산 서열
SEQ ID NO:35 - 18E8 중쇄 전장 아미노산 서열
SEQ ID NO:36 - 18E8 경쇄 1 - CDR1 아미노산 서열
SEQ ID NO:37 - 18E8 경쇄 1 - CDR2 아미노산 서열
SEQ ID NO:38 - 18E8 경쇄 1 - CDR3 아미노산 서열
SEQ ID NO:39 - 18E8 경쇄 1 - 프레임워크 아미노산 서열
SEQ ID NO:40 - 18E8 경쇄 1 - 전장 아미노산 서열
SEQ ID NO:41 - 18E8 경쇄 2 - CDR1 아미노산 서열
SEQ ID NO:42 - 18E8 경쇄 2 - CDR2 아미노산 서열
SEQ ID NO:43 - 18E8 경쇄 2 - CDR3 아미노산 서열
SEQ ID NO:44 - 18E8 경쇄 2 - 프레임워크 아미노산 서열
SEQ ID NO:45 - 18E8 경쇄 2 - 전장 아미노산 서열
SEQ ID NO:46 - 18E8 중쇄 CDR1 DNA 서열
SEQ ID NO:47 - 18E8 중쇄 CDR2 DNA 서열
SEQ ID NO:48 - 18E8 중쇄 CDR3 DNA 서열
SEQ ID NO:49 - 18E8 중쇄 프레임워크 DNA 서열
SEQ ID NO:50 - 18E8 중쇄 전장 DNA 서열
SEQ ID NO:51 - 18E8 경쇄 1 - CDR1 DNA 서열
SEQ ID NO:52 - 18E8 경쇄 1 - CDR2 DNA 서열
SEQ ID NO:53 - 18E8 경쇄 1 - CDR3 DNA 서열
SEQ ID NO:54 - 18E8 경쇄 1 - 프레임워크 DNA 서열
SEQ ID NO:55 - 18E8 경쇄 1 - 전장 DNA 서열
SEQ ID NO:56 - 18E8 경쇄 2 - CDR1 DNA 서열
SEQ ID NO:57 - 18E8 경쇄 2 - CDR2 DNA 서열
SEQ ID NO:58 - 18E8 경쇄 2 - CDR3 DNA 서열
SEQ ID NO:59 - 18E8 경쇄 2 - 프레임워크 DNA 서열
SEQ ID NO:60 - 18E8 경쇄 2 - 전장 DNA 서열
SEQ ID NO:61 - 10B3 중쇄 CDR1 아미노산 서열
SEQ ID NO:62 - 10B3 중쇄 CDR2 아미노산 서열
SEQ ID NO:63 - 10B3 중쇄 CDR3 아미노산 서열
SEQ ID NO:64 - 10B3 중쇄 프레임워크 아미노산 서열
SEQ ID NO:65 - 10B3 중쇄 전장 아미노산 서열
SEQ ID NO:66 - 10B3 경쇄 1 - CDR1 아미노산 서열
SEQ ID NO:67 - 10B3 경쇄 1 - CDR2 아미노산 서열
SEQ ID NO:68 - 10B3 경쇄 1 - CDR3 아미노산 서열
SEQ ID NO:69 - 10B3 경쇄 1 - 프레임워크 아미노산 서열
SEQ ID NO:70 - 10B3 경쇄 1 - 전장 아미노산 서열
SEQ ID NO:71 - 10B3 경쇄 2 - CDR1 아미노산 서열
SEQ ID NO:72 - 10B3 경쇄 2 - CDR2 아미노산 서열
SEQ ID NO:73 - 10B3 경쇄 2 - CDR3 아미노산 서열
SEQ ID NO:74 - 10B3 경쇄 2 - 프레임워크 아미노산 서열
SEQ ID NO:75 - 10B3 경쇄 2 - 전장 아미노산 서열
SEQ ID NO:76 - 10B3 중쇄 CDR1 DNA 서열
SEQ ID NO:77 - 10B3 중쇄 CDR2 DNA 서열
SEQ ID NO:78 - 10B3 중쇄 CDR3 DNA 서열
SEQ ID NO:79 - 10B3 중쇄 프레임워크 DNA 서열
SEQ ID NO:80 - 10B3 중쇄 전장 DNA 서열
SEQ ID NO:81 - 10B3 경쇄 1 - CDR1 DNA 서열
SEQ ID NO:82 - 10B3 경쇄 1 - CDR2 DNA 서열
SEQ ID NO:83 - 10B3 경쇄 1 - CDR3 DNA 서열
SEQ ID NO:84 - 10B3 경쇄 1 - 프레임워크 DNA 서열
SEQ ID NO:85 - 10B3 경쇄 1 - 전장 DNA 서열
SEQ ID NO:86 - 10B3 경쇄 2 - CDR1 DNA 서열
SEQ ID NO:87 - 10B3 경쇄 2 - CDR2 DNA 서열
SEQ ID NO:88 - 10B3 경쇄 2 - CDR3 DNA 서열
SEQ ID NO:89 - 10B3 경쇄 2 - 프레임워크 DNA 서열
SEQ ID NO:90 - 10B3 경쇄 2 - 전장 DNA 서열
SEQ ID NO:91 - 4G7 에피토프 (람다 아이소형 2 및 3) 에피토프 1
SEQ ID NO:92 - 4G7 에피토프 (람다 아이소형 2 및 3) 에피토프 2
SEQ ID NO:93 - 4G7 에피토프 (람다 아이소형 1) 에피토프 1
SEQ ID NO:94 - 4G7 에피토프 (람다 아이소형 1) 에피토프 2
발명의 상세한 설명
일반 기술 및 선택된 정의
달리 구체적으로 정의되지 않는 한, 본원에서 사용되는 모든 기술 및 과학 용어는 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 것(예를 들어, 분자생물학, 생화학, 항체, 항체 단편 및 임상 연구)과 동일한 의미를 갖도록 해석되어야 한다.
"람다 골수종 항원"(LMA)은 악성 골수종 세포와 같은 형질 세포, 및 일부 경우에는, 형질모세포와 같은 비-악성 형질 세포 전구체의 표면에서 발견되는 세포막 항원이다. 구체적으로, LMA는 세포막에서 발현되는 유리 람다 경쇄로 구성된다. 본 발명의 개시에 의해 포함되는 항-LMA 결합 단백질은 람다 경쇄가 중쇄와 회합되지 않은 경우에만 결합에 이용 가능한 람다 경쇄 상의 입체형태적 에피토프를 특이적으로 인지한다. 따라서, 본 발명의 개시에 의해 포함되는 항-LMA 결합 단백질은 IgG, IgM, IgE 또는 IgA를 함유하는 온전한 람다-사슬에 결합하지 않는다.
본원에 기재된 결합 단백질과 LMA의 상호작용과 관련하여 본원에서 사용되는 용어 "결합하다"는 상호작용이 LMA 상의 특정 구조(예를 들어, 항원 결정인자 또는 에피토프)의 존재에 의존함을 의미한다. 예를 들어, 결합 단백질은 항원을 전반적으로 인지하고 결합한다기 보다는 특정 항원 구조를 인지하고, 이에 결합한다. 예를 들어, 결합 단백질이 에피토프 "A"에 결합하는 경우, 표지된 "A" 및 결합 단백질을 함유하는 반응에서 에피토프 "A"(또는 유리의 표지되지 않은 "A")를 함유하는 분자의 존재는 결합 단백질에 결합된 표지된 "A"의 양을 감소시킬 것이다. 일 예에서, 본원에 개시된 LMA 결합 단백질은 유리 람다 경쇄(예를 들어, 혈청 항원)에 비해 LMA(즉, 세포 표면 항원)에 우선적으로 결합한다. 유리 람다 경쇄에 비해 LMA에 우선적으로 결합하는 본원에 개시된 결합 단백질은 유리 경쇄보다 LMA와 더 빈번히, 더 신속히, 더 긴 기간 및/또는 더 큰 친화성으로 반응하거나 회합한다.
본원에서 사용되는 용어 "특이적으로 결합하다"는 결합 단백질과 LMA 사이의 결합 상호작용이 결합 단백질에 의한 LMA의 검출의 의존한다는 것을 의미하는 것으로 간주되어야 한다. 따라서, 결합 단백질은 다른 분자, 세포 또는 유기체의 혼합물에 존재하는 경우에도 LMA에 특이적으로 결합하거나 이를 인지한다. 일 예에서, 결합 단백질은 대안적 항원 또는 세포보다 LMA와 더 빈번히, 더 신속하게, 더 긴 기간 및/또는 더 큰 친화성으로 반응하거나 이와 회합한다. 일 예에서, LMA에 특이적으로 결합하는 본원에 개시된 결합 단백질은 또한 유리 경쇄에 비해 LMA에 우선적으로 결합하거나 이를 인지할 수 있다. 예를 들어, LMA에 특이적으로 결합하는 결합 단백질은 제2 항원에 특이적으로 결합하거나 결합하지 않을 수 있음이 본 정의를 읽음으로써 또한 이해된다. 이와 같이, "특이적 결합"은 반드시 또 다른 항원의 배타적 결합 또는 검출 가능하지 않은 결합을 필요로 하는 것은 아니다. 용어 "특이적으로 결합하는"은 본원에서 "선택적으로 결합하는"과 상호교환적으로 사용될 수 있다. 일반적으로, 본원에서 결합에 대한 언급은 특이적 결합을 의미하며, 각각의 용어는 다른 용어에 대한 명시적인 지원을 제공하는 것으로 이해되어야 한다. 특이적 결합을 결정하기 위한 방법은 당업자에게 명백할 것이다. 예를 들어, 본 발명의 개시의 결합 단백질은 LMA 또는 대안적 항원과 접촉된다. LMA 또는 대안적 항원에 대한 결합 단백질의 결합이 이후 결정되고, 대안적 항원이 아닌 LMA에 대해 상기에 기재된 바와 같이 결합하는 결합 단백질은 LMA에 특이적으로 결합하는 것으로 간주된다. 우선적 결합을 확인하기 위해 유사한 방법이 이용될 수 있다. 이러한 경우, 대안적 항원은 유리 경쇄일 것이다.
용어 "면역글로불린"은 면역글로불린 도메인을 포함하는 항-LMA 결합 단백질을 포함하는 것으로 이해될 것이다. 예시적 면역글로불린은 항체이다. 용어 "면역글로불린"에 의해 포함되는 추가 단백질은 도메인 항체, 카멜리드 항체 및 연골 어류로부터의 항체(즉, 면역글로불린 신규 항원 수용체(IgNAR))를 포함한다. 일반적으로, 카멜리드 항체 및 IgNAR은 VH를 포함하나, VL은 결여되어 있으며, 종종 중쇄 면역글로불린으로 언급된다. 다른 "면역글로불린"은 T 세포 수용체를 포함한다.
용어 "결합 단백질"은 특정 항원과 면역학적으로 반응성인 인간 면역글로불린 분자를 나타내기 위해 본 발명의 개시의 맥락에서 사용되며, 폴리클로날 및 모노클로날 항체 둘 모두를 포함한다. 용어 "결합 단백질"은 또한 항원 결합 능력을 갖는 단편을 포함하는 항체의 항원 결합 형태를 포함한다(예를 들어, 문헌[Pierce Catalogue and Handbook, 1994-1995 (Pierce Chemical Co., Rockford, Ill.); Kuby, J., Immunology, 3rd Ed., W.H. Freeman & Co., New York (1998)]에 논의된 바와 같은 Fab', F(ab')2, Fab, Fv 및 rIgG). 상기 용어는 또한 재조합 단일 사슬 Fv 단편(scFv)뿐만 아니라 이의 2가(di-scFv) 및 3가(tri-scFV) 형태를 나타내기 위해 사용된다. 용어 항체는 또한 디아바디, 트리아바디 및 테트라바디를 포함한다.
항체의 "항원 결합 단편"은 온전한 항체의 하나 이상의 가변 영역을 포함한다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')2 및 Fv 단편; 디아바디; 항체 단편으로부터 형성된 선형 항체 및 단일-사슬 항체 분자를 포함한다. 예를 들어, 용어 항원 결합 단편은 재조합 단일 사슬 Fv 단편(scFv)뿐만 아니라 이의 2가(di-scFv) 및 3가(tri-scFV) 형태를 나타내기 위해 사용될 수 있다.
상기 단편은 당 분야에 공지된 다양한 방법을 통해 생성될 수 있다.
용어 "전장 항체", "온전한 항체" 또는 "전체 항체"는 항체의 항원 결합 단편과 반대로 실질적으로 온전한 형태의 항체를 나타내기 위해 상호교환적으로 사용된다. 구체적으로, 전체 항체는 Fc 영역을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 갖는 항체를 포함한다. 불변 도메인은 야생형 서열 불변 도메인(예를 들어, 인간 야생형 서열 불변 도메인) 또는 이의 아미노산 서열 변이체일 수 있다.
용어 "상보성 결정 영역" 또는 "CDR"은 특정 항원을 인지하고 이에 결합하는 항체의 2개의 가변 사슬(중쇄 및 경쇄)의 부분을 나타내기 위해 본 발명의 개시의 맥락에서 사용된다. CDR은 가변 사슬의 가장 가변적인 부분이며, 결합 단백질에 이의 특이성을 제공한다. 일반적으로, 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL) 각각에 3개의 CDR이 존재한다.
본원에서 사용되는 "가변 영역"은 항원에 특이적으로 결합하고, 예를 들어, CDR, 즉, CDR1, CDR2 및 CDR3 및 프레임워크 영역(FR)의 아미노산 서열을 포함하는 본원에 정의된 바와 같은 항체의 경쇄 및/또는 중쇄의 부분을 나타낸다. 예를 들어, 가변 영역은 3개 또는 4개의 FR(예를 들어, FR1, FR2, FR3 및 선택적으로 FR4)과 함께 3개의 CDR을 포함한다. VH는 중쇄의 가변 영역을 나타낸다. VL은 경쇄의 가변 영역을 나타낸다.
일 예에서, CDR 및 FR에 할당된 아미노산 위치는 문헌[Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1987 and 1991](본원에서 "카밧 넘버링 시스템" 또는 "카밧"으로도 언급됨)에 따라 정의된다.
가변 도메인에 대한 수정 또는 대안적 넘버링 시스템을 포함하는 다른 규칙은 IMGT(Lefranc, et al. (2003), Dev Comp Immunol 27: 55- 77), 초티아(Chothia)(Chothia C, Lesk AM (1987), J Mal Biol 196: 901-917; Chothia, et al. (1989), Nature 342: 877-883) 및 AHo(Honegger A, Pl
Figure pct00001
ckthun A (2001) J Mol Biol 309: 657-670)를 포함한다. 편의를 위해, 본 발명의 개시의 결합 단백질의 예는 또한 IMGT에 따라 표지될 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "불변 영역"은 가변 영역 이외의 항체의 중쇄 또는 경쇄의 부분을 나타낸다. 중쇄에서, 불변 영역은 일반적으로 복수의 불변 도메인 및 힌지 영역을 포함하며, 예를 들어, IgG 불변 영역은 불변 중쇄 CH1, 링커, CH2 및 CH3의 연결된 성분을 포함한다. 중쇄에서, 불변 영역은 Fc를 포함한다. 경쇄에서, 불변 영역은 일반적으로 하나의 불변 도메인(CL1)을 포함한다.
용어 "단편 결정화 가능" 또는 "Fc" 또는 "Fc 영역" 또는 "Fc 부분"(본원에서 상호 교환적으로 사용될 수 있음)은 적어도 하나의 불변 도메인을 포함하고, 일반적으로(반드시 그런 것은 아님) 당화되고, 하나 이상의 Fc 수용체 및/또는 보체 캐스케이드의 성분에 결합할 수 있는 항체의 영역을 나타낸다. 중쇄 불변 영역은 α, δ, ε, γ 또는 μ의 5개의 아이소형 중 임의의 것으로부터 선택될 수 있다. 예시적인 중쇄 불변 영역은 감마 1(IgG1), 감마 2(IgG2) 및 감마 3(IgG3) 또는 이들의 하이브리드이다.
"불변 도메인"은 항체 내의 도메인이며, 이의 서열은 항체/동일한 유형의 항체, 예를 들어, IgG 또는 IgM 또는 IgE에서 매우 유사하다. 항체의 불변 영역은 일반적으로 복수의 불변 도메인을 포함하며, 예를 들어, γ, α 또는 δ 중쇄의 불변 영역은 2개의 불변 도메인을 포함한다.
용어 "항체 중쇄"는 천연 발생 입체형태의 모든 항체 분자에 존재하는 폴리펩티드 사슬의 2개의 유형 중 더 큰 것을 나타내기 위해 본원에서 사용된다. 본원에서 사용되는 "항체 경쇄"는 천연 발생 입체형태의 모든 항체 분자에 존재하는 폴리펩티드 사슬의 2개의 유형 중 더 작은 것을 나타낸다. κ 및 λ 경쇄는 2개의 주요 항체 경쇄 아이소형을 나타낸다.
용어 "네이키드(naked)"는 또 다른 화합물, 예를 들어, 독성 화합물 또는 방사성표지에 컨쥬게이션되지 않은 본 발명의 개시의 결합 단백질을 나타내기 위해 사용된다. 예를 들어, 용어 "네이키드"는 또 다른 화합물에 컨쥬게이션되지 않은 결합 단백질을 나타내기 위해 사용될 수 있다. 따라서, 일 예에서, 본 발명의 개시의 결합 단백질은 "네이키드"이다. 다시 말해서, 본 발명의 개시의 결합 단백질은 컨쥬게이션되지 않을 수 있다.
대조적으로, 용어 "컨쥬게이션된"은 또 다른 화합물, 예를 들어, 독성 화합물, 예를 들어, 세포독성제 또는 방사성표지에 컨쥬게이션된 본원에 기재된 결합 단백질을 나타내기 위해 본 발명의 개시의 맥락에서 사용된다. 따라서, 일 예에서, 본 발명의 개시의 결합 단백질은 "컨쥬게이션"된다.
본원에서 사용되는 용어 "세포독성제"는 세포 기능을 억제하거나 방지하고/하거나 세포 사멸 또는 파괴를 야기시키는 물질을 나타낸다. 세포독성제는 방사성 동위원소(예를 들어, At211, 1131, 1125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi, P, Pb 및 Lu의 방사성 동위원소), 화학요법제 또는 약물(예를 들어, 메토트렉세이트, 아드리아마이신, 빈카 알칼로이드(빈크리스틴, 빈블라스틴, 에토포시드), 독소루비신, 멜팔란, 미토마이신 C, 클로람부실, 다우노루비신 또는 다른 중격제); 성장 억제제; 효소 및 이의 단편, 예를 들어, 핵분해 효소; 항생제; 독소, 예를 들어, 박테리아, 진균, 식물 또는 동물 기원의 소분자 독소 또는 효소적으로 활성인 독소, 예를 들어, 이들의 단편 및/또는 변이체; 및 하기 개시되는 다양한 항종양제 또는 항암제를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
"숙주 세포", "숙주 세포주" 및 "숙주 세포 배양물"과 같은 용어는 세포의 자손을 포함하여 외인성 핵산이 도입된 세포를 나타내기 위해 본 발명의 개시의 맥락에서 상호교환적으로 사용된다. 숙주 세포는 "형질전환체" 및 "형질전환된 세포"를 포함하며, 이는 계대 수에 관계 없이 일차 형질전환 세포 및 이로부터 유래된 자손을 포함한다. 자손은 핵산 함량이 모 세포와 완전히 동일하지 않을 수 있으며, 돌연변이를 함유할 수 있다. 본래 형질전환된 세포에서 스크리닝되거나 선택된 것과 동일한 기능 또는 생물학적 활성을 갖는 돌연변이체 자손이 본원에 포함된다.
본 발명의 개시에 따른 "분리된 핵산"은 이의 천연 환경의 성분으로부터 분리된 핵산 분자이다. 분리된 핵산은 일반적으로 핵산 분자를 함유하는 세포에 함유된 핵산 분자를 포함하지만, 핵산 분자는 염색체외 또는 천연 염색체 위치와 상이한 염색체 위치에 존재한다.
본원에서 사용되는 용어 "발현 벡터"는 발현될 핵산 서열에 작동 가능하게 연결된 적어도 하나의 발현 조절 서열을 포함하는 재조합 핵산 서열을 포함하는 벡터를 나타낸다. 발현 벡터는 발현에 필요한 모든 필수 시스(cis) 작용 요소를 포함한다. 발현 벡터의 예는 발현될 재조합 폴리뉴클레오티드를 인코딩하는 플라스미드, 코스미드 및 바이러스를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 다른 예에서, 발현 벡터는 유전체에 통합될 수 있는 전이 가능한 요소, 예를 들어, PiggyBac 발현 시스템을 포함한다. 또 다른 예에서, 발현 벡터는 숙주 유전체로의 발현 벡터 내용물의 통합을 가능하게 하는 바이러스 벡터, 예를 들어, 레트로바이러스 및 렌티바이러스 벡터이다.
참조 폴리펩티드 서열에 관한 "아미노산 서열 동일성 백분율(%)"은 서열을 정렬시키고, 필요시, 최대 서열 동일성 백분율을 달성하기 위해 갭을 도입시키고, 서열 동일성의 일부로서 임의의 보존성 치환을 고려하지 않은 후에 참조 폴리펩티드 서열 내의 핵산 잔기와 동일한 후보 서열 내의 아미노산 잔기의 백분율로 정의된다. 아미노산 서열 동일성 백분율을 결정하기 위한 정렬은 해당 분야에서 실행하는 사람들의 기술 내에 있는 다양한 방식으로, 예를 들어, 공개적으로 이용 가능한 컴퓨터 소프트웨어, 예를 들어, BLAST, BLAST-2, ALIGN 또는 Megalign(DNASTAR) 소프트웨어를 이용하여 달성될 수 있다. 당업자는 비교되는 서열의 전체 길이에 걸쳐 최대 정렬을 달성하기 위해 필요한 임의의 알고리즘을 포함하는 서열을 정렬하기 위한 적절한 파라미터를 결정할 수 있다.
본 발명의 개시에 따른 결합 단백질 및 이를 포함하는 조성물은 다양한 적응증을 치료하기 위해 대상체에 투여될 수 있다. "대상체", "환자" 또는 "개체"와 같은 용어는 문맥 상 본 발명의 개시에서 상호교환적으로 사용될 수 있는 용어이다. 일 예에서, 대상체는 포유동물이다. 포유동물은 개 또는 고양이와 같은 반려 동물, 또는 말 또는 소와 같은 가축일 수 있다. 일 예에서, 대상체는 인간이다. 예를 들어, 대상체는 성인일 수 있다. 또 다른 예에서, 대상체는 아동일 수 있다. 또 다른 예에서, 대상체는 청소년일 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "치료"는 임상 병리 과정 동안 치료되는 개체 또는 세포의 천연 과정을 변경하도록 설계된 임상 개입을 나타낸다. 치료의 바람직한 효과는 질병 진행률 감소, 질병 상태 개선 또는 완화, 및 예후 완화 또는 개선을 포함한다. 개체는, 예를 들어, 질병과 관련된 하나 이상의 증상이 완화되거나 제거되는 경우 성공적으로 "치료"된다.
본원에서 사용되는 용어 "예방"은 개체에서 질병의 발생 또는 재발에 대한 예방을 제공하는 것을 포함한다. 개체는 질병 또는 질병 재발의 소인이 있거나 질병 또는 질병 재발이 발달할 위험이 있을 수 있으나, 아직 질병 또는 재발 진단을 받지 않았다.
"유효량"은 적어도 원하는 치료 또는 예방 결과를 달성하기 위해 필요한 투여량 및 기간 동안 효과적인 양을 나타낸다. 유효량은 1회 이상의 투여로 제공될 수 있다. 본 발명의 개시의 일부 예에서, 용어 "유효량"은 하기 기재된 질병 또는 질환의 치료에 영향을 미치는 데 필요한 양을 의미한다. 유효량은 치료할 질병 또는 질환에 따라, 그리고 또한 체중, 연령, 인종적 배경, 성별, 건강 및/또는 신체 상태 및 치료받는 대상체와 관련된 기타 요인에 따라 달라질 수 있다. 전형적으로, 유효량은 의료 종사자에 의한 일상적인 시험 및 실험을 통해 결정될 수 있는 비교적 넓은 범위(예를 들어, "투여량" 범위)에 속할 것이다.
"치료적 유효량"은 적어도 특정 장애(예를 들어, 암)의 측정 가능한 개선에 영향을 미치는 데 필요한 최소 농도이다. 본원의 치료적 유효량은 환자의 질병 상태, 연령, 성별 및 체중과 같은 요인, 및 개체에서 원하는 반응을 유도하는 결합 단백질의 능력에 따라 달라질 수 있다. 치료적 유효량은 또한 결합 단백질의 임의의 독성 또는 유해 효과보다 치료적으로 이로운 효과가 더 가치가 있는 양이다. 암의 경우, 결합 단백질의 치료적 유효량은 암세포의 수를 감소시킬 수 있고/있거나; 원발성 종양 크기를 감소시키고/시키거나; 말초 기관으로의 암세포 침윤을 억제(즉, 어느 정도 늦추고, 일부 예에서, 중지시킴)하고/하거나; 종양 전이를 억제(즉, 어느 정도 늦추고, 일부 예에서, 중지시킴)하고/하거나; 종양 성장 또는 종양 진행을 어느 정도로 억제하거나 지연시키고/시키거나; 암과 관련된 증상 중 하나 이상을 어느 정도 완화시킬 수 있다. 결합 단백질이 기존 암세포의 성장을 방지하고/하거나 이를 사멸시킬 수 있는 한, 이는 세포증식억제 및/또는 세포독성일 수 있다. 암 치료의 경우, 생체 내 효능은, 예를 들어, 생존 기간, 질병 진행 시간(TTP), 반응률(RR), 반응 기간 및/또는 삶의 질을 평가함으로써 측정될 수 있다.
인간 결합 단백질
본 발명의 개시는 "인간" 결합 단백질에 관한 것이다. 일 예에서, 본 발명의 개시의 "인간" 결합 단백질은 인간 서열에 의해 인코딩되지 않는 아미노산 잔기, 예를 들어, 시험관 내 무작위 또는 부위 특이적 돌연변이(특히, 단백질의 적은 수의 잔기, 예를 들어, 단백질의 1, 2, 3, 4 또는 5개의 잔기에서 보존적 치환 또는 돌연변이를 포함하는 돌연변이)에 의해 도입된 돌연변이를 포함할 수 있다. 이들 "인간 결합 단백질"은 반드시 인간의 면역 반응의 결과로서 생성될 필요는 없으며, 오히려 이들은 재조합 수단(예를 들어, 파지 디스플레이 라이브러리 스크리닝)을 이용하고/하거나 인간 항체 불변 및/또는 가변 영역을 인코딩하는 핵산을 포함하는 트랜스제닉 동물(예를 들어, 마우스)에 의하고/의하거나 가이드된 선택(예를 들어, 미국 특허 번호 5,565,332호에 기재됨)을 사용하여 생성될 수 있다. 이러한 용어는 또한 상기 항체의 친화성 성숙 형태를 포함한다. 일 예에서, 상기 용어는 인간 항체를 포함한다.
모노클로날 항체는 본 발명의 개시에 의해 고려되는 결합 단백질의 또 다른 예시적 형태이다. 용어 "모노클로날 항체" 또는 "MAb"는 동일한 항원(들), 예를 들어, 항원 내의 동일한 에피토프에 결합할 수 있는 동종 항체 집단을 나타낸다. 이러한 용어는 항체의 공급원 또는 항체가 제조되는 방식과 관련하여 제한되는 것으로 의도되지 않는다.
본 발명의 개시는 또한, 예를 들어, WO2000/34317호 및 WO2004/108158호에 기재된 바와 같은 탈면역화된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 고려한다. 탈면역화된 항체 및 단편은 하나 이상의 에피토프, 예를 들어, B 세포 에피토프 또는 T 세포 에피토프가 제거(즉, 돌연변이)되어 대상체가 항체 또는 단백질에 대한 면역 반응을 일으킬 가능성을 감소시킨다. 예를 들어, 본 발명의 개시의 항체는 하나 이상의 B 또는 T 세포 에피토프를 확인하기 위해 분석되고, 에피토프 내의 하나 이상의 아미노산 잔기는 돌연변이되어 항체의 면역원성을 감소시킨다.
항체 단편
단일-도메인 항체
일부 예에서, 본 발명의 개시의 결합 단백질은 단일-도메인 항체(용어 "도메인 항체" 또는 "dAb"와 상호 교환적으로 사용됨)이거나 이를 포함한다. 단일-도메인 항체는 항체의 중쇄 가변 도메인의 전부 또는 일부를 포함하는 단일 폴리펩티드 사슬이다.
단일 사슬 Fv(scFv) 단편
당업자는 scFv가 단일 폴리펩티드 사슬 내에 VH 및 VL 영역 및 scFv가 항원 결합을 위한 원하는 구조를 형성하는 것을 가능하게 하는 VH와 VL(즉, 단일 폴리펩티드 사슬의 VH 및 VL은 서로 회합되어 Fv를 형성함) 사이의 폴리펩티드 링커를 포함하는 것을 인지할 것이다. 단일 사슬 가변 단편은 완전한 항체 분자에서 발견되는 불변 Fc 영역이 결여되어 있으며, 따라서 감소된 면역원성을 가질 수 있다. 예시적 링커는 12개 초과의 아미노산 잔기를 포함하며, (Gly4Ser)3는 scFv에 대해 더 선호되는 링커 중 하나이다.
본 발명의 개시는 또한 단일 시스테인 잔기가 VH의 FR 및 VL의 FR 및 이황화 결합에 의해 연결된 시스테인 잔기에 도입되어 안정적인 Fv를 생성하는 이황화 안정화 Fv(또는 diFv 또는 dsFv)를 고려한다.
또 다른 예에서, 본 발명의 개시는 이량체 scFv(di-scFV), 즉, 비-공유 또는 공유 결합에 의해, 예를 들어, 류신 지퍼 도메인(예를 들어, Fos 또는 Jun으로부터 유래됨) 또는 삼량체 scFV(tri-scFv)에 의해 연결된 2개의 scFv 분자를 포함하는 단백질을 포함한다. 또 다른 예에서, 2개의 scFv는, 예를 들어, 미국 공개 출원 번호 20060263367호에 기재된 바와 같이 둘 모두의 scFv가 형성되고, 항원에 결합하도록 허용하기에 충분한 길이의 펩티드 링커에 의해 연결된다.
디아바디, 트리아바디, 테트라바디
일부 예에서, 본 발명의 개시의 항원 결합 단편은 WO98/044001호 및/또는 WO94/007921호에 기재된 것과 같은 디아바디, 트리아바디, 테트라바디 또는 고차 단백질 복합체이거나 이를 포함한다.
예를 들어, 디아바디는 각각의 폴리펩티드 사슬이 구조 VL-X-VH 또는 VH-X-VL을 포함하는 2개의 회합된 폴리펩티드 사슬을 포함하는 단백질이며, 여기서 X는 단일 폴리펩티드 사슬 내의 VH 및 VL이 회합(또는 Fv를 형성)하는 것을 허용하기에 불충분한 잔기를 포함하는 링커이거나 부재하고, 하나의 폴리펩티드 사슬의 VH는 다른 폴리펩티드 사슬의 VL에 결합하여 항원 결합 부위를 형성하고, 즉, 하나 이상의 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 Fv 분자를 형성한다.
면역글로불린 및 면역글로불린 단편
본 발명의 개시의 결합 단백질의 예는 T 세포 수용체 또는 중쇄 면역글로불린(예를 들어, IgNAR, 카멜리드 항체)과 같은 면역글로불린의 가변 영역을 포함하는 단백질(예를 들어, 항체 모방체)이다.
V-유사 단백질
본 발명의 개시의 결합 단백질의 일 예는 T-세포 수용체이다. T 세포 수용체는 항체의 Fv 모듈과 유사한 구조로 조합하는 2개의 V-도메인을 갖는다. 문헌[Novotny et al., Proc Natl Acad Sci USA 88: 8646-8650, 1991]에는 T-세포 수용체의 2개의 V-도메인(알파 및 베타로 언급됨)이 융합되고, 단일 사슬 폴리펩티드로 발현될 수 있는 방법, 및 추가로 항체 scFv와 직접적으로 유사한 소수성을 감소시키기 위해 표면 잔기를 변경시키는 방법이 기재되어 있다. 2개의 V-알파 및 V-베타 도메인을 포함하는 단일 사슬 T-세포 수용체 또는 다량체 T 세포 수용체의 생성을 기재하는 다른 공보는 WO1999/045110호 또는 WO2011/107595호를 포함한다.
항원 결합 도메인을 포함하는 다른 비-항체 단백질은 일반적으로 단량체인 V-유사 도메인을 갖는 단백질을 포함한다. 상기 V-유사 도메인을 포함하는 단백질의 예는 CTLA-4, CD28 및 ICOS를 포함한다. 상기 V-유사 도메인을 포함하는 단백질의 추가 개시는 WO1999/045110호에 포함된다.
어피바디(affibody)
추가 예에서, 본 발명의 개시의 결합 단백질은 어피바디이다. 어피바디는 항원에 결합하도록 조작될 수 있는 스태필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus)의 단백질 A의 Z 도메인(항원 결합 도메인)에서 유래된 스캐폴드이다. Z 도메인은 대략 58개의 아미노산의 3-나선 번들로 구성된다. 라이브러리는 표면 잔기의 무작위화에 의해 생성되었다. 추가 세부사항에 대해서는 EP1641818호를 참조한다.
아비머
추가 예에서, 본 발명의 개시의 결합 단백질은 아비머이다. 아비머는 A-도메인 스캐폴드 패밀리에서 유래된 다중도메인 단백질이다. 대략 35개의 아미노산의 고유 도메인은 정의된 이황화 결합된 구조를 채택한다. 다양성은 A-도메인 패밀리에 의해 나타내는 천연 변이의 셔플링(shuffling)에 의해 생성된다. 추가 세부사항에 대해서는 WO2002/088171호를 참조한다.
다른 결합 단백질
본 발명의 개시에 의해 포함되는 결합 단백질의 다른 예는 하기를 포함한다:
(i) 어피머(affimer) 및 어드히론(adhiron)과 같은 펩티드 디스플레이 스캐폴드(WO2009136182호; Tiede et al. (2014) Protein Eng Des Sel 27, 145-155); 및,
(ii) 센티린(centyrin)(Jacobs et al. (2012) Protein Eng Des Sel. 25, 107-117; Diem et al. (2014) Protein Eng Des sel. 27, 49-429).
람다 골수종 항원(LMA) 결합 단백질
본원에 정의된 결합 단백질은 람다 골수종 항원(LMA)에 결합하거나 특이적으로 결합하는 항원 결합 도메인을 갖는다. 일 예에서, 본원에 정의된 결합 단백질은 유리 경쇄에 비해 LMA에 우선적으로 결합하는 항원 결합 도메인을 갖는다. 일 예에서, 본 발명의 개시에 따른 항-LMA 결합 단백질은 SEQ ID NO:1에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:2에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:3에 제시된 바와 같은 CDR3를 갖는 중쇄 가변 영역(VH)을 포함한다. 또 다른 예에서, 항-LMA 결합 단백질은 SEQ ID NO:6에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:7에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:8 또는 SEQ ID NO:13에 제시된 바와 같은 CDR3를 갖는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다. 또 다른 예에서, 항-LMA 결합 단백질은 SEQ ID NO:6에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:7에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:8에 제시된 바와 같은 CDR3를 갖는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다. 또 다른 예에서, 항-LMA 결합 단백질은 SEQ ID NO:6에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:7에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:13에 제시된 바와 같은 CDR3를 갖는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다. 따라서, 또 다른 예에서, 항-LMA 결합 단백질은 SEQ ID NO:1에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:2에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:3에 제시된 바와 같은 CDR3를 갖는 VH 및 SEQ ID NO:6에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:7에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:8에 제시된 바와 같은 CDR3를 갖는 VL을 포함한다. 또 다른 예에서, 항-LMA 결합 단백질은 SEQ ID NO:1에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:2에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:3에 제시된 바와 같은 CDR3를 갖는 VH 및 SEQ ID NO:6에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:7에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:13에 제시된 바와 같은 CDR3를 갖는 VL을 포함한다. 이들 예의 일 구현예에서, LMA 결합 단백질은 LMA 아이소형 2 및 아이소형 3에 결합한다.
또 다른 예에서, 항-LMA 결합 단백질은 SEQ ID NO:4에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 또 다른 예에서, 항-LMA 결합 단백질은 SEQ ID NO:9 또는 SEQ ID NO:14에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 예를 들어, VL은 SEQ ID NO:9에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 또 다른 예에서, VL은 SEQ ID NO:14에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 또 다른 예에서, VH는 SEQ ID NO:5에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 예에서, VL은 SEQ ID NO:10 또는 SEQ ID NO:15에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 예를 들어, VL은 SEQ ID NO:10에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 또 다른 예에서, VL은 SEQ ID NO:15에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 따라서, 또 다른 예에서, 항-LMA 결합 단백질은 SEQ ID NO:4에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 SEQ ID NO:10 또는 SEQ ID NO:15에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 예를 들어, VH는 SEQ ID NO:4에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있고, VL은 SEQ ID NO:10에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 예를 들어, VH는 SEQ ID NO:4에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있고, VL은 SEQ ID NO:15에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 이들 예에서, VH 및/또는 VL은 인용된 SEQ ID NO와 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일할 수 있다.
또 다른 예에서, 항-LMA 결합 단백질은 SEQ ID NO:4에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 또 다른 예에서, 항-LMA 결합 단백질은 SEQ ID NO:9 또는 SEQ ID NO:14에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 예를 들어, VL은 SEQ ID NO:9에 제시된 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 또 다른 예에서, VL은 SEQ ID NO:14에 제시된 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 또 다른 예에서, VH는 SEQ ID NO:5에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 예에서, VL은 SEQ ID NO:10 또는 SEQ ID NO:15에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 예를 들어, VL은 SEQ ID NO:10에 제시된 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 또 다른 예에서, VL은 SEQ ID NO:15에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 따라서, 또 다른 예에서, 항-LMA 결합 단백질은 SEQ ID NO:4에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 SEQ ID NO:10 또는 SEQ ID NO:15에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 예를 들어, VH는 SEQ ID NO:4에 제시된 아미노산 서열을 포함할 수 있고, VL은 SEQ ID NO:10에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 예를 들어, VH는 SEQ ID NO:4에 제시된 아미노산 서열을 포함할 수 있고, VL은 SEQ ID NO:15에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 이들 예에서, 결합 단백질은 LMA에 특이적으로 결합한다. 예를 들어, 결합 단백질은 유리 람다 경쇄에 비해 LMA에 우선적으로 결합할 수 있다.
또 다른 예에서, 항-LMA 결합 단백질은 SEQ ID NO:31에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:32에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:33에 제시된 바와 같은 CDR3를 갖는 중쇄 가변 영역(VH)을 포함한다. 또 다른 예에서, 항-LMA 결합 단백질은 SEQ ID NO:61에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:62에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:63에 제시된 바와 같은 CDR3를 갖는 중쇄 가변 영역(VH)을 포함한다. 또 다른 예에서, 항-LMA 결합 단백질은 SEQ ID NO:36 또는 SEQ ID NO:41에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:37 또는 SEQ ID NO:42에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:38 또는 SEQ ID NO:43에 제시된 바와 같은 CDR3를 갖는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다. 예를 들어, 항-LMA 결합 단백질은 SEQ ID NO:36에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:37에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:38에 제시된 바와 같은 CDR3를 갖는 VL을 포함할 수 있다. 또 다른 예에서, 항-LMA 결합 단백질은 SEQ ID NO:41에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:42에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:43에 제시된 바와 같은 CDR3를 갖는 VL을 포함할 수 있다. 따라서, 일 예에서, 항-LMA 결합 단백질은 SEQ ID NO:31에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:32에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:33에 제시된 바와 같은 CDR3를 갖는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO:36 또는 SEQ ID NO:41에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:37 또는 SEQ ID NO:42에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:38 또는 SEQ ID NO:43에 제시된 바와 같은 CDR3를 포함하는 VL을 포함할 수 있다. 예를 들어, 항-LMA 결합 단백질은 SEQ ID NO:31에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:32에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:33에 제시된 바와 같은 CDR3를 갖는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO:36에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:37에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:38에 제시된 바와 같은 CDR3를 포함하는 VL을 포함할 수 있다. 또 다른 예에서, 항-LMA 결합 단백질은 SEQ ID NO:31에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:32에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:33에 제시된 바와 같은 CDR3를 갖는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO:41에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:42에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:43에 제시된 바와 같은 CDR3를 포함하는 VL을 포함할 수 있다.
또 다른 예에서, 항-LMA 결합 단백질은 SEQ ID NO:61에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:62에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:63에 제시된 바와 같은 CDR3를 갖는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO:66 또는 SEQ ID NO:71에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:67 또는 SEQ ID NO:72에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:68 또는 SEQ ID NO:73에 제시된 바와 같은 CDR3를 포함하는 VL을 포함할 수 있다. 예를 들어, 항-LMA 결합 단백질은 SEQ ID NO:61에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:62에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:63에 제시된 바와 같은 CDR3를 갖는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO:66에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:67에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:68에 제시된 바와 같은 CDR3를 포함하는 VL을 포함할 수 있다. 또 다른 예에서, 항-LMA 결합 단백질은 SEQ ID NO:61에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:62에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:63에 제시된 바와 같은 CDR3를 갖는 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO:71에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:72에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:73에 제시된 바와 같은 CDR3를 포함하는 VL을 포함할 수 있다. 이들 예의 일 구현예에서, LMA 결합 단백질은 LMA 아이소형 1, 2 및 아이소형 3에 결합한다.
또 다른 예에서, VH는 SEQ ID NO:34 또는 SEQ ID NO:64에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 예를 들어, VH는 SEQ ID NO:34에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 또 다른 예에서, VH는 SEQ ID NO:64에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 또 다른 예에서, VL은 SEQ ID NO:39, 44, 69 또는 74 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 예에서, VH는 SEQ ID NO:34 또는 SEQ ID NO:64에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, VL은 SEQ ID NO:39, 44, 69 또는 74 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 예를 들어, VH는 SEQ ID NO:34에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있고, VL은 SEQ ID NO:39에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 또 다른 예에서, VH는 SEQ ID NO:34에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있고, VL은 SEQ ID NO:44에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 또 다른 예에서, VH는 SEQ ID NO:64에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있고, VL은 SEQ ID NO:39에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 또 다른 예에서, VH는 SEQ ID NO:64에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있고, VL은 SEQ ID NO:44에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 또 다른 예에서, VH는 SEQ ID NO:64에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있고, VL은 SEQ ID NO:69에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 또 다른 예에서, VH는 SEQ ID NO:64에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있고, VL은 SEQ ID NO:74에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 또 다른 예에서, VH는 SEQ ID NO:5에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있고, VL은 SEQ ID NO:10 또는 SEQ ID NO:15에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 또 다른 예에서, VH는 SEQ ID NO:5에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있고, VL은 SEQ ID NO:10에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 또 다른 예에서, VH는 SEQ ID NO:5에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있고, VL은 SEQ ID NO:15에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 또 다른 예에서, VH는 SEQ ID NO:34에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있고, VL은 SEQ ID NO:40 또는 SEQ ID NO:45에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 또 다른 예에서, VH는 SEQ ID NO:34에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있고, VL은 SEQ ID NO:40에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 또 다른 예에서, VH는 SEQ ID NO:34에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있고, VL은 SEQ ID NO:10 또는 SEQ ID NO:45에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 또 다른 예에서, VH는 SEQ ID NO:65에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있고, VL은 SEQ ID NO:70 또는 SEQ ID NO:75에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 또 다른 예에서, VH는 SEQ ID NO:65에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있고, VL은 SEQ ID NO:70에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 또 다른 예에서, VH는 SEQ ID NO:65에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있고, VL은 SEQ ID NO:75에 제시된 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 이들 예에서, VH 및/또는 VL은 인용된 SEQ ID NO와 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일할 수 있다. 또 다른 예에서, VH는 SEQ ID NO:34 또는 SEQ ID NO:64에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 예를 들어, VH는 SEQ ID NO:34에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 예에서, VH는 SEQ ID NO:64에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 예에서, VL은 SEQ ID NO:39, 44, 69 또는 74 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 예에서, VH는 SEQ ID NO:34 또는 SEQ ID NO:64에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VL은 SEQ ID NO:39, 44, 69 또는 74 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 예를 들어, VH는 SEQ ID NO:34에 제시된 아미노산 서열을 포함할 수 있고, VL은 SEQ ID NO:39에 제시된 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 또 다른 예에서, VH는 SEQ ID NO:34에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VL은 SEQ ID NO:44에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 예에서, VH는 SEQ ID NO:64에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VL은 SEQ ID NO:39에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 예에서, VH는 SEQ ID NO:64에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VL은 SEQ ID NO:44에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 예에서, VH는 SEQ ID NO:64에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VL은 SEQ ID NO:69에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 예에서, VH는 SEQ ID NO:64에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VL은 SEQ ID NO:74에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 예에서, VH는 SEQ ID NO:5에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VL은 SEQ ID NO:10 또는 SEQ ID NO:15에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 예에서, VH는 SEQ ID NO:5에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VL은 SEQ ID NO:10에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 예에서, VH는 SEQ ID NO:5에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VL은 SEQ ID NO:15에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 예에서, VH는 SEQ ID NO:34에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VL은 SEQ ID NO:40 또는 SEQ ID NO:45에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 예에서, VH는 SEQ ID NO:34에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VL은 SEQ ID NO:40에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 예에서, VH는 SEQ ID NO:34에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VL은 SEQ ID NO:10 또는 SEQ ID NO:45에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 예에서, VH는 SEQ ID NO:65에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VL은 SEQ ID NO:70 또는 SEQ ID NO:75에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 예에서, VH는 SEQ ID NO:65에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VL은 SEQ ID NO:70에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 예에서, VH는 SEQ ID NO:65에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VL은 SEQ ID NO:75에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
일 예에서, 상기 언급된 결합 단백질은 항체이다. 예를 들어, 본 발명의 개시는 상기 언급된 CDR의 조합을 갖는 항체를 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 개시의 항체는 SEQ ID NO:1에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:2에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:3에 제시된 바와 같은 CDR3를 갖는 중쇄 가변 영역(VH)을 포함할 수 있다. 또 다른 예에서, 항체는 SEQ ID NO:6에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:7에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:8 또는 SEQ ID NO:13에 제시된 바와 같은 CDR3를 갖는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다. 또 다른 예에서, 항체는 SEQ ID NO:6에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:7에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:8에 제시된 바와 같은 CDR3를 갖는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다. 또 다른 예에서, 항체는 SEQ ID NO:6에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:7에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:13에 제시된 바와 같은 CDR3를 갖는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다. 따라서, 또 다른 예에서, 항체는 SEQ ID NO:1에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:2에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:3에 제시된 바와 같은 CDR3를 갖는 VH 및 SEQ ID NO:6에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:7에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:8에 제시된 바와 같은 CDR3를 갖는 VL을 포함한다. 또 다른 예에서, 항체는 SEQ ID NO:1에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:2에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:3에 제시된 바와 같은 CDR3를 갖는 VH 및 SEQ ID NO:6에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:7에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:13에 제시된 바와 같은 CDR3를 갖는 VL을 포함한다. 이들 예의 일 구현예에서, 항체는 LMA 아이소형 2 및 아이소형 3에 결합한다.
또 다른 예에서, 본 발명의 개시에 의해 포함되는 결합 단백질은 상기 예시된 VH 및 VL 조합의 CDR을 포함할 수 있다. 일 예에서, CDR은 카밧(Kabat)을 사용하여 정의된다. 또 다른 예에서, CDR은 IMGT를 사용하여 정의된다.
상기 언급된 서열 동일성 %를 갖는 결합 단백질과 관련하여, 다양한 예에서, 본 발명의 개시에 의해 포함되는 결합 단백질은 언급된 서열 식별자 번호와 비교하여 적어도 1개, 적어도 2개, 적어도 3개, 적어도 4개 또는 적어도 5개의 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 예시적 치환은 하기 표 A에 기재된 것과 같은 보존적 아미노산 치환을 포함한다.
표 A. 예시적 치환.
Figure pct00002
용어 "4G7"은 하기 제시된 아미노산 서열을 포함하는 에피토프에 결합하는 인간 유리 람다 경쇄에 대한 모노클로날 항체를 나타내기 위해 본 발명의 개시의 맥락에서 사용된다:
- SEQ ID NO:91(KADGSPVK) 및 93(SHR)(아이소형 1);
- SEQ ID NO:92(KADSSPVK) 및 93(SHR)(아이소형 2); 또는
- SEQ ID NO:92(KADSSPVK) 및 94(SHK)(아이소형 3),
4G7은 다양한 공급업체(예를 들어, Abcam, Cambridge, United Kingdom, #ab54380; Yamasa Corporation, Choshi, Japan, #7642)로부터 상업적으로 이용 가능하다.
일 예에서, 본 발명의 개시에 의해 포함되는 항-LMA 결합 단백질은 4G7과 동일한 에피토프에 결합할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 개시에 의해 포함되는 항-LMA 결합 단백질은 하기 제시된 아미노산 서열을 포함하는 에피토프에 결합할 수 있다:
- SEQ ID NO:91 및 93(람다 아이소형 1);
- SEQ ID NO:92 및 93(람다 아이소형 2); 또는
- SEQ ID NO:92 및 94(람다 아이소형 3).
또 다른 예에서, 본 발명의 개시에 의해 포함되는 항-LMA 결합 단백질은 하기 제시된 아미노산 서열을 포함하는 에피토프에 결합하고:
- SEQ ID NO:91 및 93(람다 아이소형 1);
- SEQ ID NO:92 및 93(람다 아이소형 2); 또는
- SEQ ID NO:92 및 94(람다 아이소형 3),
가용성 람다-경쇄에 결합하지 않는다.
또 다른 예에서, 결합 단백질은 SEQ ID NO:92 및 93(람다 아이소형 2) 및 SEQ ID NO:92 및 94(람다 아이소형 3)에 결합한다.
다양한 람다 경쇄 아이소형이 보고되었으며, 이들 아이소형은 분자의 불변 영역 내의 아미노산 변화에 의해 정의된다.
람다 경쇄 아이소형은 다양한 빈도로 발현된다. 예를 들어, 다발골수종을 갖는 대상체에서, 약 14%는 아이소형 1을 발현하고, 약 64%는 아이소형 2를 발현하고, 약 23%는 아이소형 3을 발현한다. 따라서, 일부 예에서, 하나 이상의 또는 모든 람다 경쇄 아이소형에 결합하는 본 발명의 개시에 따른 항체를 투여하는 것이 바람직할 수 있다. 일 예에서, 결합 단백질은 람다 아이소형 2 및 아이소형 3에 결합한다. 일 예에서, 결합 단백질은 아이소형 1에 결합하지 않는다.
또 다른 예에서, 결합 단백질은 4G7에 비해 개선된 제조가능성을 갖는다.
개선된 제조가능성은 감소된 수의 탈아미드화 부위, 아스파테이트 이성화 부위, 메티오닌 및 트립토판과 같은 산화 부위, 유리-시스테인 티올기, N & O-당화 부위, C-말단 리신 및/또는 등전점의 존재와 관련된 번역후 변형 또는 증가된 화학적 안정성을 포함한다.
일 예에서, 결합 단백질은 4G7과 비교하여 VH 및/또는 VL에서 더 적은 아스파라긴을 포함한다.
일 예에서, 결합 단백질은 4G7과 비교하여 VH 및/또는 VL에서 더 적은 메티오닌을 포함한다.
일 예에서, 결합 단백질은 4G7과 비교하여 VH 및/또는 VL에서 더 적은 트립토판을 포함한다.
일 예에서, 결합 단백질은 4G7과 비교하여 VH 및/또는 VL에서 더 적은 아스파르트산을 포함한다.
일 예에서, 결합 단백질의 물리적 안정성은 4G7보다 크다.
물리적 안정성은 용액 내에서의 응집에 대한 경향을 포함할 수 있다. 용어 "응집"은 세포 배양 및 발효로부터 분리, 정제 및 제형화 공정에 이르기까지 여러 환경에서 발생할 수 있는 단백질 자가-회합을 나타내기 위해 본 발명의 개시의 맥락에서 사용된다. 예를 들어, 용어 "응집"은 무엇보다도 포함물의 형성; 세포 분획화 후 "불용성" 분획에서 단백질의 축적; 혼탁의 출현, 단백질 침전 또는 샘플 내의 입자의 형성; 또는 작은 가용성 올리고머의 형성을 설명하는 경우에 사용될 수 있다.
따라서, 상기 언급된 예에서, 결합 단백질의 물리적 안정성은 용액에서의 이의 물리적 안정성에 기초할 수 있으며, 용액으로부터의 결합 단백질의 침전은 결합 단백질이 불안정해진 것을 나타낸다. 물리적 안정성을 평가하기 위해, 본 발명의 개시에 따른 결합 단백질 또는 4G7을 포함하는 용액은 4℃에서 인큐베이션되고, 2주, 4주, 12주, 6개월 및 12개월에 침전에 대해 시각적으로 평가될 수 있다.
또 다른 예에서, 결합 단백질은 4G7에 비해 인간 대상체에서 감소된 면역원성을 갖는다. 예를 들어, 결합 단백질은 면역원성이 효소-결합 면역흡착 검정(ELISA)을 통해 측정되는 경우 4G7에 비해 감소된 면역원성을 가질 수 있다. 또 다른 예에서, 결합 단백질은 면역원성이 표면 플라즈몬 공명을 통해 측정되는 경우 4G7에 비해 감소된 면역원성을 가질 수 있다.
또 다른 예에서, 결합 단백질은 4G7보다 LMA에 대해 더 높은 특이성을 갖는다.
또 다른 예에서, 결합 단백질은 4G7에 비해 낮은 교차-반응성(즉, 결합 단백질이 상이한 단백질 상의 유사한 항원 부위와 반응하는 능력)을 갖는다. 이러한 예에서, 결합 단백질의 교차 반응성은 다양한 방법을 이용하여 측정될 수 있다. 일 예에서, 교차-반응성은 ELISA를 통해 평가된다.
또 다른 예에서, 결합 단백질은 4G7보다 LMA에 대해 더 높은 결합 친화성을 갖는다.
또 다른 예에서, 결합 단백질은 4G7보다 경쇄에 비해 LMA에 대해 더 높은 결합 친화성을 갖는다.
상기 언급된 예에서, LMA에 대한 결합 단백질의 친화성은 다양한 방법을 통해 측정될 수 있다. 일 예에서, LMA에 대한 결합 단백질의 해리 상수(KD) 또는 연합 상수(KA) 또는 평형 상수(KD)가 결정된다. 결합 단백질에 대한 이들 상수는, 일 예에서, 방사성표지 또는 형광 표지된 LMA-결합 검정에 의해 측정된다. 이러한 검정은 표지되지 않은 LMA의 적정 시리즈의 존재하에서 표지된 LMA의 최소 농도로 결합 단백질을 평형화한다. 결합되지 않은 LMA를 제거하기 위해 세척 후, 표지의 양이 결정된다.
친화성 측정은 항체 반응에 대한 표준 방법론, 예를 들어, 면역검정, 표면 플라즈몬 공명(SPR)(Rich and Myszka Curr. Opin. Biotechnol 11:54, 2000; Englebienne Analyst. 123: 1599, 1998), 등온 적정 열량측정법(ITC) 또는 당 분야에 공지된 다른 운동 상호작용 검정에 의해 결정될 수 있다.
일 예에서, 상수는 표면 플라즈몬 공명 검정을 사용하여, 예를 들어, 고정된 LMA와 함께 BIAcore 표면 플라즈몬 공명(BIAcore, Inc., Piscataway, NJ)을 사용하여 측정된다. 예시적 SPR 방법은 미국 특허 번호 7,229,619호에 기재되어 있다.
다른 예에서, LMA에 대한 결합 단백질의 친화성은 등온 적정 미세열량측정법을 사용하여 측정될 수 있다.
결합 단백질 생성
재조합 발현
일 예에서, 본원에 기재된 바와 같은 결합 단백질은 펩티드 또는 폴리펩티드(예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 단편)이다. 일 예에서, 결합 단백질은 재조합 결합 단백질이다.
재조합 펩티드 또는 폴리펩티드의 경우, 이를 인코딩하는 핵산은 발현 벡터로 클로닝될 수 있고, 이는 이후 달리 면역글로불린 또는 항체 단백질을 생성하지 않는 숙주 세포, 예를 들어, E. 콜리 세포, 효모 세포, 곤충 세포, 또는 포유동물 세포, 예를 들어, 원숭이 COS 세포, 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포, 인간 배아 신장(HEK) 세포, 또는 골수종 세포로 형질감염된다.
적합한 분자 클로닝 기술은 당 분야에 공지되어 있으며, 예를 들어, 문헌[Ausubel et al., (editors), Current Protocols in Molecular Biology, Greene Pub. Associates and Wiley-Interscience (1988, 현재까지의 모든 업데이트를 포함함) 또는 Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989)]에 기재되어 있다. 다양한 클로닝 및 시험관 내 증폭 방법이 재조합 핵산의 작제에 적합하다. 재조합 항체를 생성하는 방법은 또한 당 분야에 공지되어 있다. 미국 특허 번호 4,816,567호 또는 미국 특허 번호 5,530,101호를 참조한다.
분리 후, 핵산은 추가 클로닝(DNA의 증폭) 또는 무세포 시스템 또는 세포에서의 발현을 위해 발현 작제물 또는 발현 벡터 내의 프로모터에 삽입되고, 작동 가능하게 연결된다. 따라서, 본 발명의 개시의 또 다른 예는 본 발명의 개시의 분리된 핵산 및 하나 이상의 추가 뉴클레오티드 서열을 포함하는 발현 작제물을 제공한다. 적합하게는, 발현 작제물은 당 분야에서 이해되는 바와 같이 플라스미드, 박테리오파지, 코스미드, 효모 또는 박테리아 인공 염색체의 형태이거나, 이의 유전적 성분을 포함한다. 발현 작제물은 재조합 DNA 기술에 의한 조작 및/또는 본 발명의 개시의 핵산 또는 결합 단백질의 발현을 위해 박테리아 또는 다른 숙주 세포에서의 분리된 핵산의 유지 및 증식에 적합할 수 있다.
세포에서의 발현을 위한 많은 벡터가 이용 가능하다. 벡터 성분은 일반적으로 다음 중 하나 이상을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다: 신호 서열, 결합 단백질을 인코딩하는 서열(예를 들어, 본원에 제공된 정보로부터 유래됨), 인핸서 요소, 프로모터, 및 전사 종료 서열. 예시적인 신호 서열은 원핵생물 분비 신호(예를 들어, pelB, 알칼리성 포스파타제, 페니실리나제, Ipp, 또는 열-안정성 장독소 II), 효모 분비 신호(예를 들어, 인버타제 선도서열, α 인자 선도서열, 또는 산 포스파타제 선도서열) 또는 포유동물 분비 신호(예를 들어, 단순 헤르페스 gD 신호)를 포함한다.
포유동물 세포에서 활성인 예시적 프로모터는 사이토메갈로바이러스 즉시 초기 프로모터(CMV-IE), 인간 신장 인자 1-α 프로모터(EF1), 작은 핵 RNA 프로모터(U1a 및 U1b), α-미오신 중쇄 프로모터, 원숭이 바이러스 40 프로모터(SV40), 라우스 육종 바이러스 프로모터(RSV), 아데노바이러스 주요 후기 프로모터, β-액틴 프로모터; CMV 인핸서/ β-액틴 프로모터 또는 면역글로불린 또는 항체 프로모터를 포함하는 하이브리드 조절 요소 또는 이의 활성 단편을 포함한다. 유용한 포유동물 숙주 세포주의 예는 SV40에 의해 형질전환된 원숭이 신장 CV1 계통(COS-7, ATCC CRL 1651); 인간 배아 신장 계통(현탁 배양에서 성장을 위해 서브클로닝된 293 또는 293 세포); 새끼 햄스터 신장 세포(BHK, ATCC CCL 10); 또는 차이니즈 햄스터 난소 세포(CHO)이다.
효모 세포, 예를 들어, 피키아 파스토리스(Pichia pastoris), 사카로마이세스 세레비시에(Saccharomyces cerevisiae) 및 S. 폼베(S. pombe)를 포함하는 군으로부터 선택되는 효모 세포에서의 발현에 적합한 전형적인 프로모터는 ADH1 프로모터, GAL1 프로모터, GAL4 프로모터, CUP1 프로모터, PHO5 프로모터, nmt 프로모터, RPR1 프로모터, 또는 TEF1 프로모터를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
분리된 핵산 또는 이를 포함하는 발현 작제물을 발현을 위한 세포에 도입하기 위한 수단은 당업자에게 공지되어 있다. 제공된 세포에 사용되는 기술은 공지된 성공적인 기술에 좌우된다. 재조합 DNA를 세포에 도입하기 위한 수단은 무엇보다도 미세주입, DEAE-덱스트란에 의해 매개되는 형질감염, 리포펙타민(Gibco, MD, USA) 및/또는 셀펙틴(Gibco, MD, USA)을 사용하는 것과 같은 리포솜에 의해 매개되는 형질감염, PEG-매개 DNA 흡수, 전기천공 및 DNA-코팅된 텅스텐 또는 금 입자를 사용하는 것과 같은 미세입자 봄바드먼트(bombardment)(Agracetus Inc., WI, USA)를 포함한다.
결합 단백질(예를 들어, 항체 또는 항원 결합 단편)을 생성하는 데 사용되는 숙주 세포는 사용되는 세포 유형에 따라 다양한 배지에서 배양될 수 있다. 상업적으로 이용 가능한 배지, 예를 들어, Ham's F10(Sigma), 최소 필수 배지((MEM), (Sigma), RPMl-1640(Sigma), 및 둘베포 변형 이글 배지(Dulbecco's Modified Eagle's Medium)((DMEM), Sigma)가 포유동물 세포 배양에 적합하다. 본원에서 논의된 다른 세포 유형을 배양하기 위한 배지는 당 분야에 공지되어 있다.
당업자는 본 발명의 개시가 또한 본 발명의 개시의 결합 단백질(예를 들어, 펩티드 또는 폴리펩티드 결합 단백질 또는 항체 또는 이의 항원 결합 단편)을 인코딩하는 분리된 핵산을 제공한다는 것을 상기 설명으로부터 이해할 것이다.
본 발명의 개시는 또한 프로모터에 작동 가능하게 연결된 본 발명의 개시의 분리된 핵산을 포함하는 발현 작제물을 제공한다. 일 예에서, 발현 작제물은 발현 벡터이다.
일 예에서, 본 발명의 개시의 발현 작제물은 프로모터에 작동 가능하게 연결된 폴리펩티드(예를 들어, VH를 포함함)를 인코딩하는 핵산 및 프로모터에 작동 가능하게 연결된 또 다른 폴리펩티드(예를 들어, VL을 포함함)를 인코딩하는 핵산을 포함한다.
본 발명의 개시는 또한 본 발명의 개시에 따른 발현 작제물을 포함하는 숙주 세포를 제공한다.
본 발명의 개시는 또한 본 발명의 개시의 결합 단백질을 발현하는 분리된 세포 또는 결합 단백질을 발현하도록 유전적으로 변형된 재조합 세포를 제공한다.
단백질의 분리
본 발명의 개시에 따른 결합 단백질을 정제하기 위한 방법은 당 분야에 공지되어 있다. 펩티드 또는 폴리펩티드가 배지로 분비되는 경우, 상기 발현 시스템으로부터의 상층액은 먼저 상업적으로 이용 가능한 단백질 농축 필터, 예를 들어, Amicon 또는 Millipore Pellicon 초여과 유닛을 사용하여 농축될 수 있다. PMSF와 같은 프로테아제 억제제는 단백질분해를 억제하기 위해 상기 단계 중 임의의 단계에 포함될 수 있으며, 항생제는 외래성 오염물의 성장을 방지하기 위해 포함될 수 있다.
세포로부터 제조된 결합 단백질은, 예를 들어, 이온 교환, 하이드록시아파타이트 크로마토그래피, 소수성 상호작용 크로마토그래피, 젤 전기영동, 투석, 친화성 크로마토그래피(예를 들어, 단백질 A 친화성 크로마토그래피 또는 단백질 G 크로마토그래피), 또는 상기의 임의의 조합을 사용하여 정제될 수 있다. 이들 방법은 당 분야에 공지되어 있으며, 예를 들어, WO99/57134호 또는 문헌[Ed Harlow and David Lane (editors) Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, (1988)]에 기재되어 있다.
컨쥬게이트
일 예에서, 본 발명의 개시의 결합 단백질은 또 다른 화합물에 컨쥬게이션된다. 결합 단백질은 화합물에 직접적 또는 간접적으로 결합될 수 있다(예를 들어, 간접 결합의 경우 링커를 포함할 수 있음). 화합물의 예는 방사성동위원소(예를 들어, 요오드-131, 이트륨-90 또는 인듐-111), 검출 가능한 표지(예를 들어, 형광단 또는 형광 나노결정 또는 양자점), 치료 화합물(예를 들어, 화학요법 또는 항-염증제), 콜로이드(예를 들어, 금), 독소(예를 들어, 리신 또는 파상풍 톡소이드), 핵산, 대상체에서 화합물의 반감기를 증가시키는 제제(예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜 또는 이러한 활성을 갖는 다른 수용성 중합체) 및 이들의 혼합물을 포함한다.
항체에 약물 또는 다른 소분자 약제를 부착시키기 위한 방법은 널리 공지되어 있으며, 이는 이기능성 화학 링커, 예를 들어, N-숙신이미딜(4-요오도아세틸)-아미노벤조에이트; 설포숙신이미딜(4-요오도아세틸)-아미노벤조에이트; 4-숙신이미딜-옥시카르보닐--(2-피리딜디티오)톨루엔; 설포숙신이미딜-6-[α-메틸-∀-(피리딜디티올)-톨루아미도]헥사노에이트; N-숙신이미딜-3-(-2-피리딜디티오)-프로프리오네이트; 숙신이미딜-6-[3 (-(-2-피리딜디티오)-프로프리온아미도]헥사노에이트; 설포숙신이미딜-6-[3 (-(-2-피리딜디티오)-프로프리온아미도]헥사노에이트; 3-(2-피리딜디티오)-프로피오닐 하이드라지드, 엘만 시약(Ellman's reagent), 디클로로트리아진산, S-(2-티오피리딜)-L-시스테인 등의 사용을 포함할 수 있다. 추가의 이기능성 연결 분자는, 예를 들어, 미국 특허 번호 5,349,066호, 5,618,528호, 4,569,789호, 4,952,394호, 및 5,137,877호에 논의되어 있다.
링커는 절단 가능하거나 절단 불가능할 수 있다. 매우 안정적인 링커는 순환에서 떨어지는 페이로드(payload)의 양을 감소시켜, 안전성 프로파일을 개선할 수 있고, 더 많은 페이로드가 표적 세포에 도달하는 것을 보장한다. 링커는 디설파이드, 하이드라존 또는 펩티드(절단가능함), 또는 티오에테르(절단가능하지 않음)를 포함하는 화학적 모티프에 기초할 수 있으며, 이는 표적 세포로의 활성제의 분포 및 전달을 제어할 수 있다. 절단 가능한 유형 및 절단 가능하지 않은 유형의 링커는 전임상 및 임상 시험에서 안전한 것으로 입증되었다(예를 들어, 카텝신에 의해 절단 가능한 효소 민감성 링커를 포함하는 브렌툭시맙 베도틴(Brentuximab vedotin); 및 안정적인 절단 가능하지 않은 링커를 포함하는 트라스투주맙 엠탄신(Trastuzumab emtansine) 참조). 일 예에서, 링커는 에드만 분해(Edman degredation)에 의해 절단 가능한 펩티드 링커이다(Bachor, et al., Molecular diversity, 17 (3): 605-11 (2013)).
일 예에서, 결합 단백질은 나노입자 또는 마이크로입자에 컨쥬게이션된다(예를 들어, 문헌[Kogan et al., Nanomedicine (Lond). 2: 287-306, 2007]에서 검토됨). 나노입자는 금속 나노입자일 수 있다. 입자는 중합체 입자, 리포솜, 마이셀, 마이크로버블, 및 당 분야에 공지된 다른 담체 및 전달 비히클일 수 있다.
본 발명의 개시의 결합 단백질에 컨쥬게이션될 수 있는 일부 예시적 화합물은 표 B에 열거되어 있다.
표 B. 컨쥬게이션에 유용한 화합물.
Figure pct00003
일 예에서, 본 발명의 개시의 결합 단백질은 화학요법제에 컨쥬게이션된다.
조성물
적합하게는, 본 발명의 개시에 따른 결합 단백질을 대상체에 투여하기 위한 조성물 또는 방법에서, 결합 단백질은 당 분야에서 이해되는 바와 같이 약학적으로 허용되는 담체와 조합된다. 일 예에서, 본 발명의 개시는 약학적으로 허용되는 담체와 조합된 본 발명의 개시의 결합 단백질을 포함하는 조성물(예를 들어, 약학적 조성물)을 제공한다. 또 다른 예에서, 본 발명의 개시는 대상체에게 투여 전 본원에 개시된 결합 단백질과 조합하거나 혼합하기에 적합한 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 키트를 제공한다. 이러한 예에서, 키트는 사용 설명서를 추가로 포함할 수 있다.
일반적인 용어에서, "담체"는 대상체, 예를 들어, 인간 대상체에 안전하게 투여될 수 있는 고체 또는 액체 충전제, 결합제, 희석제, 캡슐화 물질, 유화제, 습윤제, 용매, 현탁제, 코팅 또는 윤활제를 나타내는 데 사용된다. 특정 투여 경로에 따라, 예를 들어, 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Co. N.J. USA, 1991)]에 기재된 바와 같이 당 분야에 공지된 다양한 허용 가능한 담체가 사용될 수 있다.
예를 들어, 적합한 담체는 당(예를 들어, 수크로스, 말토스, 트레할로스, 글루코스), 전분, 셀룰로스 및 이의 유도체, 맥아, 젤라틴, 탤크, 칼슘 설페이트, 식물성 오일을 포함한 오일, 합성 오일 및 합성 모노- 또는 디-글리세라이드, 저급 알콜, 폴리올, 알긴산, 인산염 완충 용액, 소듐 또는 마그네슘 스테아레이트와 같은 윤활제, 등장성 식염수 및 발열원 비함유 물을 포함하는 군으로부터 선택될 수 있다. 일 예에서, 담체는 H2O가 아니다.
일 예에서, 담체는 비경구 투여와 양립되거나, 이에 적합하다. 비경구 투여는 소화관을 통하지 않는 모든 투여 경로를 포함한다. 비경구 투여의 예는 주사, 주입 등을 포함한다. 주사에 의한 투여의 예는 정맥내, 동맥내, 근내 및 피하 주사를 포함한다. 또 다른 예에서, 조성물은 피부내, 근내 또는 피하로 전달될 수 있는 데포 또는 서방형 제형을 통해 전달될 수 있다.
일 예에서, 본원에 개시된 LMA 결합 단백질은 암 부위 또는 부위들을 검출하기 위해 사용된다. 상기 방법은 전형적으로 진단 영상화 또는 핵 의학 기술을 사용하여 검출 가능한 유효량의 제제를 상기 방법을 필요로 하는 대상체에 투여하고, 제제를 검출하는 것을 포함한다. 상기 방법에서, 제제는 전형적으로 LMA 결합 단백질에 컨쥬게이션되거나, LMA 결합 단백질과 컨쥬게이션된 전달 비히클에 캡슐화된다. 진단 영상화 또는 핵 의학 기술은, 예를 들어, PET-CT, 뼈 스캔, MRI, CT, 심장초음파, 초음파 및 x-선일 수 있다.
일 예에서, 결합 단백질 및 이를 포함하는 조성물은 LMA-발현 암과 같은 LMA-발현 세포의 비정상적인 증식을 특징으로 하는 질환의 치료를 위한 약제의 제조에 사용될 수 있다. 또 다른 예에서, 본 발명의 개시는 질환의 치료에 사용하기 위한 결합 단백질 또는 이를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 치료할 질환의 예는 하기에 논의된다.
치료할 질환
일 예에서, 본 발명의 개시는 LMA-발현 암을 치료하는 방법을 포함하며, 상기 방법은 본원에 정의된 항-LMA 결합 단백질을 투여하는 것을 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 개시는 악성 B-세포가 LMA를 발현하는 B-세포 악성종양을 치료하는 방법을 포함한다. 또 다른 예에서, 본 발명의 개시는 다발골수종 및 관련 병리를 치료하는 방법을 포함한다. 용어 "다발골수종" 또는 "골수종"은 형질 세포의 암을 나타내기 위해 본 발명의 개시의 맥락에서 사용된다. 본 발명의 개시의 맥락에서, 이들 용어는 분비성 골수종, 비-분비성 골수종, 경쇄 단독 골수종, 스몰더링 골수종(smouldering myeloma) 및 관련 병리를 포함한다. 예시적 관련 병리는 형질세포종, 아밀로이드증, 결정되지 않은 중요성의 단세포군 감마글로불린병증을 포함한다. 일 예에서, 다발골수종은 람다형 다발골수종이다.
따라서, 일 예에서, 본 발명의 개시는 아밀로이드증을 치료하는 방법을 포함한다. 일 예에서, 상기 방법은 유리 람다 경쇄에 대한 높은 친화성을 갖는 본원에 개시된 결합 단백질을 투여하는 것을 포함한다. 예를 들어, SEQ ID NO:31에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:32에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:33에 제시된 바와 같은 CDR3를 갖는 VH 및 SEQ ID NO:36에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:37에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:38에 제시된 바와 같은 CDR3를 갖는 VL을 포함하는 결합 단백질이 투여될 수 있다. 또 다른 예에서, SEQ ID NO:34에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 SEQ ID NO:39에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL을 갖는 결합 단백질이 투여될 수 있다. 또 다른 예에서, SEQ ID NO:66에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:67에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:68에 제시된 바와 같은 CDR3를 갖는 VH 및 SEQ ID NO:71에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:72에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:73에 제시된 바와 같은 CDR3를 갖는 VL을 포함하는 결합 단백질이 투여될 수 있다. 또 다른 예에서, SEQ ID NO:64에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 SEQ ID NO:74에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL을 갖는 결합 단백질이 투여될 수 있다. 또 다른 예에서, SEQ ID NO:61에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:62에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:63에 제시된 바와 같은 CDR3를 갖는 VH 및 SEQ ID NO:66에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:67에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:68에 제시된 바와 같은 CDR3를 갖는 VL을 포함하는 결합 단백질이 투여될 수 있다.
다발골수종을 갖는 대상체는 다양한 대상체 집단으로 특성규명될 수 있다. 예시적 집단은 문헌[Rajkumar et al. 2011]에 기재되어 있다.
일 예에서, 대상체 다발골수종은 진행성 질병으로 특성규명될 수 있다(Rajkumar et al. 2011). 달리 말하면, 본 발명의 개시의 방법은 대상체에서 진행성 다발골수종의 치료에 관한 것이다. "진행성 질병"의 예시적 지표는 다음 중 어느 하나에서 가장 낮은 반응 값으로부터 약 25%의 증가를 포함한다: 혈청 M-성분(0.5 g/㎗ 이상의 절대 증가) 및/또는 소변 M-성분(절대 증가는 200 ㎎/24hr 이상이어야 함. 다른 예시적인 지표는 새로운 뼈 병변 또는 연조직 형질세포종의 명확한 발달 또는 기존 뼈 병변 또는 연조직 형질세포종의 크기에서의 명확한 증가; 다발골수종에만 기인할 수 있는 고칼슘혈증(수정된 혈청 칼슘 > 11.5 ㎎/㎗)의 발달을 포함한다. 일 예에서, 대상체 다발골수종은 재발된 것이고, 진행성 질병으로 특성규명된다. 이러한 예에서, 대상체 다발골수종은 또한 치료에 불응성일 수 있다.
일 예에서, 대상체 다발골수종이 재발성이다. "재발성 골수종"은 진행되고, 구제 요법의 개시를 필요로 하지만, "일차 불응성 골수종"에 대한 기준을 충족하지 않는 이전에 치료된 골수종을 나타내는 데 사용된다.
또 다른 예에서, 대상체는 일차 불응성 골수종을 갖는다. "일차 불응성 골수종"은 어떤 치료로도 최소한의 반응 또는 더 나은 반응을 달성하지 못한 환자에서 반응이 없는 질병을 나타내는 데 사용된다.
또 다른 예에서, 대상체는 불응성 골수종을 갖는다. 용어 "불응성 골수종"은 일차 또는 구제 요법을 받는 동안 반응이 없거나, 마지막 요법 후 60일 이내에 진행되는 질병을 나타내는 데 사용된다. 일 예에서, 대상체 다발골수종은 항암 요법에 불응성이다. 용어 "불응성"은 이러한 맥락에서 대상체의 다발골수종에 대해 더 이상 치료적으로 효과적이지 않은 항암 치료 라인을 나타내기 위해 사용된다. 예를 들어, 본 발명의 개시의 방법에 의해 치료되는 대상체는 적어도 하나의 프로테아솜 억제제에 대해 불응성일 수 있다. "치료 라인"은 계획된 치료 프로그램의 하나 이상의 주기로 정의된다. 이는 계획된 방식으로 투여되는 일련의 치료뿐만 아니라 단일 제제 치료 또는 조합 치료의 하나 이상의 계획된 주기로 구성될 수 있다. 예를 들어, 유도 치료에 후속된 자가 줄기 세포 이식에 후속된 유지의 계획된 치료 접근법이 하나의 치료 라인으로 간주된다.
또 다른 예에서, 대상체는 적어도 2개의 이전 치료 라인에 불응성이다. 또 다른 예에서, 대상체는 적어도 3개, 적어도 4개, 적어도 5개, 적어도 6개의 이전 치료 라인에 불응성일 수 있다.
또 다른 예에서, 대상체는 재발성 및 불응성 골수종을 갖는다. "재발성 및 불응성 골수종"은 구제 요법을 받는 동안 반응이 없거나, 질병 과정으로 진행하기 전에 이전에 어느 시점에서 최소 반응(MR) 또는 더 나은 반응을 달성한 환자에서 마지막 치료 후 60일 이내에 진행되는 질병을 나타내는 데 사용된다.
일 예에서, 본 발명의 개시에 따라 치료되는 다발골수종은 최초 투여시 안정적인 질병으로 특성규명된다. 달리 말하면, 대상체는 최초 투여 시점에 정점지속(plateau) 단계에 있을 수 있다. 안정된 질병에 대한 예시적 기준은 지속적인 치료에도 불구하고 추가 종양 퇴행 없이 M-단백질의 안정화, 골수종의 증상이 거의 없거나 없음 및/또는 수혈 필요조건이 없음을 포함할 수 있다(Blade et al. 1998).
또 다른 예에서, 본 발명의 개시의 방법은 B 세포 림프종 및 마크로글로불린혈증을 치료하는 데 사용될 수 있다.
또 다른 예에서, 본 발명의 개시의 방법은 POEMS를 치료하는 데 사용될 수 있다. 본원에서 사용되는 "POEMS 증후군"은 신경을 손상시키고, 신체의 많은 다른 부분에 영향을 미치는 희귀한 혈액 장애이다. "POEMS"는 다음과 같은 징후 및 증상을 나타낸다: 다발신경병증: 다리 및 시간이 지남에 따른 손에서의 무감각, 저림 및 쇠약 및 호흡 곤란; 기관비대(Organomegaly): 비장, 간 또는 림프절 비대; 내분비병증: 갑상선 기능저하(갑상선기능항진증), 당뇨병, 성적 문제, 피로, 사지 부종 및 대사 및 기타 필수 기능 문제를 발생시킬 수 있는 비정상적인 호르몬 수준; 모노클로날 혈장-증식 장애: 혈류에서 발견될 수 있는 단백질을 생성하는 비정상적인 골수 세포(형질 세포); 피부 변화: 피부에서 정상보다 더 많은 색상, 혹여 더 두꺼운 피부 및 증가된 안면 및/또는 다리털.
또 다른 예에서, 본원에 정의된 결합 단백질은 자가면역 장애를 치료하기 위해 대상체에게 투여될 수 있다. 일 예에서, 자가면역 장애는 LMA를 막 유리 경쇄(mFLC)로 발현하는 형질 세포 전구체의 비정상적인 증식을 특징으로 한다. 예를 들어, 본원에 정의된 결합 단백질은 류마티스 관절염, 전신 홍반 루푸스, 당뇨병, 다발경화증, 크론병, 면역 혈소판감소 자색반, 보통천포창, 자가면역 두드러기, 복강병, 포진피부염, 급성 류마티스 열, 그레이브스병, 중증근육무력증, 쇼그렌 증후군, 굿파스쳐 증후군, 연쇄구균감염후사구체신염, 접촉피부염, 자가면역성 갑상샘염, 하시모토 갑상샘염, 애디슨병, 자가면역 용혈 빈혈, 악성빈혈, 항-호중구 세포질 항체(ANCA)에 의해 야기된 혈관염, 결절다발동맥염, 자가면역 간염, 및 원발쓸개관간경화증과 같은 자가면역 장애를 치료하기 위해 대상체에 투여될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 개시의 방법은 류마티스 관절염, 전신 홍반 루푸스, 당뇨병 및 다발경화증을 치료하는 데 사용될 수 있다. 따라서, 일 예에서, 본 발명의 개시의 방법은 류마티스 관절염을 치료하는 데 사용될 수 있다. 또 다른 예에서, 본 발명의 개시는 전신 홍반 루푸스를 치료하는 데 사용될 수 있다. 또 다른 예에서, 본 발명의 개시에 따른 결합 단백질은 당뇨병을 치료하는 데 사용될 수 있다. 또 다른 예에서, 본 발명의 개시에 따른 결합 단백질은 다발경화증을 치료하는 데 사용될 수 있다.
또 다른 예에서, 본 발명의 개시에 따른 결합 단백질은 대상체에서 람다 유리 경쇄 수준을 감소(즉, 세포막에서 발현되지 않는 대상체의 람다 경쇄, 예를 들어, 혈청 내의 람다 경쇄의 양을 감소)시키기 위해 사용될 수 있다. 상기 방법은 유리 람다 경쇄에 대한 높은 친화성을 갖는 본원에 개시된 결합 단백질을 투여하는 것을 포함한다. 예를 들어, SEQ ID NO:31에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:32에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:33에 제시된 바와 같은 CDR3를 갖는 VH 및 SEQ ID NO:36에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:37에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:38에 제시된 바와 같은 CDR3를 갖는 VL을 포함하는 결합 단백질이 투여될 수 있다. 또 다른 예에서, SEQ ID NO:34에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 SEQ ID NO:39에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL을 갖는 결합 단백질이 투여될 수 있다. 또 다른 예에서, SEQ ID NO:66에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:67에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:68에 제시된 바와 같은 CDR3를 갖는 VH 및 SEQ ID NO:71에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:72에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:73에 제시된 바와 같은 CDR3를 갖는 VL을 포함하는 결합 단백질이 투여될 수 있다. 또 다른 예에서, SEQ ID NO:64에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 SEQ ID NO:74에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL을 갖는 결합 단백질이 투여될 수 있다. 또 다른 예에서, SEQ ID NO:61에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:62에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:63에 제시된 바와 같은 CDR3를 갖는 VH 및 SEQ ID NO:66에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:67에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:68에 제시된 바와 같은 CDR3를 갖는 VL을 포함하는 결합 단백질이 투여될 수 있다.
또 다른 예에서, 본 발명의 개시의 방법은 유리 람다 경쇄에 대한 낮은 친화성을 갖는 본 발명의 개시의 결합 단백질과 조합된 유리 람다 경쇄에 대한 높은 친화성을 갖는 본 발명의 개시의 결합 단백질을 투여함으로써 LMA-발현 암 또는 본원에 개시된 다른 장애를 치료하는 것을 포함한다. 예를 들어, SEQ ID NO:64에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 SEQ ID NO:74에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL을 갖는 결합 단백질은 SEQ ID NO:4에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 SEQ ID NO:9에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL을 갖는 결합 단백질과 조합하여 투여될 수 있다. 또 다른 예에서, SEQ ID NO:64에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 SEQ ID NO:74에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL을 갖는 결합 단백질은 SEQ ID NO:4에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 SEQ ID NO:9에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL을 갖는 결합 단백질과 조합하여 투여될 수 있다.
본 발명의 개시의 방법을 수행하는 일부로서 조합하여 투여되는 항체는 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다.
실시예
실시예 1: 람다 다발골수종 세포 상의 람다 골수종 항원(LMA)
람다 다발골수종 세포의 표면 상의 람다 골수종 항원(LMA)의 존재를 결정하기 위해, 람다 벤스 존스 단백질(Bence Jones Proteins; BJP)에 대해 생성된 뮤린 모노클로날 항체 4G7을 ELISA, 표면 플라즈몬 공명(SPR) 및 웨스턴 블롯 검정에서 사용하였다. 마우스 모노클로날 항체 4G7은 마우스 모노클로날 항체 3D12와 비교하여 모든 유리 람다 경쇄 BJP 및 3개의 우세한 람다 경쇄 아이소형을 포함하는 다양한 람다 인간 다발골수종 세포주에 대한 범 반응성을 나타내었다(표 1 및 2). 이의 상호작용은 IgG/람다가 아닌 람다 유리 경쇄에 의해 억제될 수 있으며, 이는 람다 인간 다발골수종 세포주 RPMI8226의 세포 표면 상의 람다 경쇄의 존재를 입증한다. 4G7은 또한 흐름세포측정법 분석에 의해 결정된 바와 같이 CD38 및 CD138에 대해 양성인 람다 다발골수종 환자 유래 골수 단핵 세포 집단에서 LMA를 검출하였다(표 3). 에피토프 절제 실험은 람다 다발골수종 세포주 상의 4G7 모노클로날 항체 에피토프의 성분으로서 2개의 펩티드를 확인하였다(도 1).
표 1. SPR 검정에서 모든 람다 경쇄에 결합하는 뮤린 모노클로날 항체 4G7
Figure pct00004
표 2. ELISA 검정에서 모든 람다 경쇄에 결합하는 뮤린 모노클로날 항체 4G7
Figure pct00005
표 3. 람다 다발골수종 환자로부터의 일차 골수 세포에서 LMA를 검출하는 뮤린 모노클로날 항체 4G7. 약어. NA: 이용 가능하지 않음; ND: 검출되지 않음; FLC: 유리 경쇄; %PC: 골수 혈장 백분율.
Figure pct00006
실시예 2: 인간 항-LMA 항체의 생성
HuMAb-마우스(Medarex)를 Ig 유리 람다-경쇄 및 람다 골수종 항원(LMA) 양성 세포주로 면역화하였다. 인간 항-LMA 항체를 LMA 특이적 후보를 확인하기 위해 ELISA를 사용하여 Ig 유리 람다-경쇄 및 Ig 관련 람다-경쇄에 대한 결합에 대해 스크리닝하였다. 인간 항-LMA 항체를 정제하고, 흐름세포측정법을 사용하여 LMA 양성 세포주에 대한 결합 및 표면 플라즈몬 공명(SPR) 분석을 사용하여 Ig 유리 람다-경쇄에 대한 친화성에 의해 특성규명하였다. 확인된 인간 항-LMA 항체 후보는 1A11, 7F11, 10B3, 18E8, 18E11, 18F9였다.
실시예 3: 람다 경쇄에 결합하는 인간 항-LMA 항체
람다-경쇄에 대한 항-LMA 항체의 결합 친화성을 결정하기 위해, 표면 플라즈몬 공명(SPR) 실험을 수행하였다. 항-인간 Ig 경쇄를 BIACore CM5 칩 상에 고정시키고, 인간 항-LMA 항체 후보(20 ㎍/㎖)를 포획하는 데 사용하였다. 시험된 람다-경쇄를 후보 포획 후 주사하였고(20 ㎕/min), SPR을 결정하였다(상대 단위: RU).
인간 항-LMA 항체(클론 1A11, 7F11, 10B3, 18E8, 18E11 및 18F9)는 정제된 람다-경쇄 BJP에 대해 높고 선택적인 친화성을 나타내었으나, κBJP(KAP960M)(도 2a), 시노몰구스 원숭이 람다-경쇄(CYNO1, CYNO3), 및 람다-경쇄 형질감염된 HEK 세포로부터의 상층액, LP-1 람다-경쇄 분리물(LP-1 ISO) 및 RPMI-8226 람다-경쇄 분리물(RPMI-8226 ISO)(도 3)에는 그렇지 않았다. 유사하게, 인간 항-LMA 항체(6A1, 13H3 및 4A1)는 람다-경쇄 아이소형을 발현하는 인간 다발골수종 세포주에 대해 높고 선택적인 친화성을 나타내었으나, 카파-경쇄 발현 JJN3 세포주에 대해서는 그렇지 않은 반면(도 4), 클론 18E8, 7F11 및 18F9는 상업적 람다-경쇄(Bethyl)에 대한 선택적 친화성을 나타내었다(도 2b).
인간 항-LMA 항체 7F11은 시험된 다른 클론에 비해 정제된 람다-경쇄 BJP에 대해 더 낮은 선택적 친화성을 나타내었고(도 2a, 2b), 시노몰구스 원숭이 람다-경쇄(CYNO1, CYNO3; 도 3) 및 람다-경쇄 형질감염된 HEK 세포로부터의 상층액, LP-1 람다-경쇄 분리물(LP-1 ISO) 및 RPMI-8226 람다-경쇄 분리물(RPMI-8226 ISO)(도 4)에 대해 낮은 친화성을 나타내었다.
실시예 4: LMA 양성 인간 골수종 세포주에 결합하는 인간 항-LMA 항체
분산 람다 아이소형의 LMA를 발현하는 인간 골수종 세포주에 대한 인간 항-LMA 항체의 결합을 결정하기 위해, 흐름세포측정법 분석을 수행하였다.
인간 골수종 세포주(5x105 세포)를 인간 항-LMA 항체(50 ㎍/㎖) 또는 마우스 항-LMA 항체 4G7의 용액으로 염색하였다. 인간 항-LMA 항체(1A11, 7F11, 10B3, 18E8, 18E11 및 18F9)는 모든 시험된 인간 골수종 세포주(RPMI-8226(람다 아이소형 2), U266(람다 아이소형 2), JJN3(카파), OPM-2(람다 아이소형 3))의 선택적 염색을 나타내었고, JJN3(카파) 세포주는 염색되지 않고(또는 약하게 염색되었고)(도 5a), KMS-18(람다 아이소형 1)에 대한 약한 염색을 나타내었다(도 5b). 인간 항-LMA 항체(6A1, 4A1 및 13H3)는 모든 시험된 LMA 양성 인간 골수종 세포주의 낮은 염색을 나타내었다.
실시예 5: 항체 의존적 세포 세포독성(ADCC)
말초 혈액 단핵 세포(PMBC) 제조물 또는 PMBC 제조물과 함께 함유된 자연 살해(NK) 세포 또는 단핵구와 같은 특정 세포 집단을 ADCC 검정에서 분석하였다. 혈액에 피콜(Ficoll)을 위에 깔고, 구배를 원심분리하고, PBMC를 구배의 경계면으로부터 수집하였다.
특정 세포 집단을 원하지 않는 세포를 고갈시키기 위해 자기적으로 표지된 항체 제조물(Miltenyi Biotec, Germany)을 사용하여 생성된 PMBC 제조물로부터 분리하였다. 효과기 및 표적 세포를 혼합하고, 16시간 동안 37℃에서 10% 우 태아 혈청이 보충된 RPMI에서 인큐베이션하였다. 세포 용해의 정도는 방출된 세포내 락테이트 데하이드로게나제(LDH)의 수준을 측정하여 결정하였다(CytoTox-ONE Homogenous Membrane Integrity Assay Kit; Promega, USA).
인간 항-LMA 항체는 다양한 정도의 효과기 기능을 나타내었으며, 클론 10B3이 시험된 항체 중에서 가장 강한 ADCC를 나타내었다(도 6).
실시예 6: 보체 의존적 세포독성(CDC)
표적 세포를 37℃에서 30분 내지 12시간 동안 10% 우 태아 혈청이 보충된 RPMI에서 보체(정제된 보체 또는 인간 혈청 함유 보체) 및 항체의 존재하에서 인큐베이션하였다. 세포 용해의 정도는 방출된 세포내 락테이트 데하이드로게나제(LDH)의 수준을 측정하여 결정하였다(CytoTox-ONE Homogenous Membrane Integrity Assay Kit; Promega, USA). 세포의 대사 상태를 Alamar Blue(Invitrogen, USA)를 사용하여 측정하였다.
인간 항-LMA 항체는 다양한 정도의 효과기 기능을 나타내었으며, 클론 10B3이 시험된 항체 중에서 가장 강한 CDC 활성을 나타내었다(도 7).
실시예 7: LMA에 대해 선택적이고, 유리 람다-경쇄에 대해서는 그렇지 않은 인간 항-LMA 항체 7F11
인간 항-LMA 항체 10B3 및 18E8은 가용성 람다-경쇄 및 LMA 양성 세포 둘 모두에 결합하고, 람다 발현 RPMI8226 세포를 표적화하기 위해 사용되는 경우 ADCC 및 CDC를 촉진할 수 있다(표 5). 흥미롭게도, 인간 항-LMA 항체 7F11은 LMA(막 결합 경쇄)에 대해 선택적이고, 람다 발현 RPMI8226 세포를 표적화하는 데 사용되는 경우 ADCC 및 CDC를 촉진할 수 있으나, 가용성 람다-경쇄에는 결합하지 않는다(표 5). 7F11 서열의 분석은 유리 경쇄에 결합된 시험된 다른 인간 항체와 비교하여 독특한 중쇄 CDR을 나타내었다(도 8). 10B3 및 18E8에 비한 인간 항-LMA 항체 7F11 사이의 상이한 결합 특징은 유리 람다 경쇄 및/또는 표적 LMA 양성 세포를 고갈시키기 위한 선택적 사용을 허용한다.
표 5. 람다-경쇄 또는 LMA 양성 세포에 대한 인간 항-LMA 항체 친화성.
Figure pct00007
표 5는 7F11이 람다 경쇄 아이소형 1을 발현하는 세포에 결합하지 않는 반면, 4G7, 18E8 및 10B3은 결합한다는 것을 나타낸다.
실시예 8: 인간 조직에서의 인간 항-LMA 항체 염색
인간 LP-1(다발골수종) 세포, JJN3(형질 세포 백혈병), 인간 편도 표본 및 인간 소뇌 표본을 10B3 및 7F11 항체와 접촉시키고, 항체 염색을 HuIgG1-람다로부터의 대조군 항체 염색과 비교하였다.
LP-1 세포는 LMA 아이소형 1을 발현한다. 10B3은 LP-1 세포를 염색한 반면 7F11은 LP-1 세포를 염색하지 않았다. 이들 결과는 10B3이 람다 아이소형 1에 결합하는 반면, 7F11은 결합하지 않음을 제시하는 상기 결과와 일치한다. 10B3 또는 7F11로 JJN3 세포의 염색은 관찰되지 않았다.
편도는 미생물 및 환경 항원이 체내에서 관리되는 최초의 부위이며, 따라서 림프계 세포를 수용한다(림프계 세포의 약 55%는 B 세포임). 10B3 및 7F11로 난포 배아 중심, 모낭간 배아 중심 및 모낭간 영역에서 희귀 단핵 세포의 약하거나 강한 염색이 관찰되었다(도 9 및 도 10; 7F11보다 큰 친화성을 갖는 10B3 염색된 인간 편도). 이들 결과는 10B3 및 7F11 둘 모두가 인간에서 LMA를 발현하는 세포에 결합할 수 있음을 확인한다.
중요하게는, 인간 소뇌의 염색이 10B3 또는 7F11에 대해 관찰되지 않았다. 인간 소뇌는 비특이적 결합을 평가하기 위한 효과적인 대조군으로 공지되어 있다. 10B3 및 7F11 둘 모두에 의한 염색의 결여는 LMA에 대한 이들 항체의 특이성을 강조하며, 생체 내에서 비특이적 결합의 위험을 감소시킨다.
실시예 9: 항-LMA 항체 친화성
항-인간 Fc IgG를 CM5 센서 칩 상에 고정시켰다(단백질 A; Fc2는 항체로 포획되었고, Fc1은 블랭크로 설정되었다). 항-LMA 항체(7F11-VL1; 10B3-VL1; 10B3-VL2)를 25℃에서 칩 표면 상에 유동시키고(런닝 완충액(running buffer): 1x HBS-EP+ (10 mM HEPES, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA, 0.05% P20, pH 7.4), 결합 특징을 Biacore 8k를 사용하여 기록하였다. 검정 특징은 표 6에 요약되어 있다. 친화성 측정은 표 7에 제시되어 있다.
10B3-VL1은 모든 람다 유리 경쇄 항원에 높은 친화성으로 결합되었다. 7F11은 Sigma, 134c 및 788a 람다 유리 경쇄 항원에만 결합되었으나, 친화성이 낮다. 이들 발견은 7F11이 유리 람다-경쇄가 아니라 LMA에 대해 선택적임을 제시하는 실시예 7과 일치한다. 10B3-VL2는 임의의 람다 경쇄에 결합하지 않았으며, 이는 이러한 항체의 J 유전자에 대한 변화가 람다 유리 경쇄에 대한 친화성을 폐기하였음을 시사한다.
중요하게는, 카파 경쇄에 대한 결합은 시험된 임의의 항체에 대해 관찰되지 않았는데, 이는 람다 경쇄에 대한 이들 항체의 특이성을 추가로 확인한다.
요약하면, 7F11은 가용성 람다 경쇄에 결합하는 친화성이 없거나 낮지만, 아이소형 2 및 3을 갖는 LMA+ 세포주에 결합한다. 대조적으로, 10B3-VL1은 높은 친화성으로 모든 가용성 람다 경쇄에 결합하고, 모든 LMA+ 세포주(아이소형 1, 2 및 3)에 결합한다. 10B3-VL1에 대한 상이한 J 유전자를 갖는 10B3-VL2는 가용성 람다 경쇄에 결합하지 않는다.
표 6: 검정 특징
Figure pct00008
표 7: 친화성 측정
Figure pct00009
광범위하게 기재된 바와 같이 본 발명의 개시의 사상 또는 범위로부터 벗어나지 않고 특정 구현예에 제시된 바와 같이 본 발명의 개시에 대해 다수의 변화 및/또는 변형이 이루어질 수 있음이 당업자에 의해 인지될 것이다. 따라서, 본 발명의 구현예는 모든 점에서 예시적이고 제한적이지 않은 것으로 간주되어야 한다.
상기 논의된 모든 간행물은 이들의 전체내용이 본원에 포함된다.
본 명세서에 포함된 문서, 행위, 물질, 장치, 물품 등의 임의의 논의는 단지 본 발명의 개시의 상황을 제공하기 위한 것이다. 이들 내용 중 임의의 것 또는 전부는 종래 기술 기초의 일부를 형성하거나, 본 출원의 각각의 청구의 우선권 날짜 이전에 존재하는 바와 같은 본 발명의 개시와 관련된 분야의 공통적인 일반 지식인 것으로 인정되지 않아야 한다.
본 출원은 2018년 2월 20일에 출원된 AU 2018900534호의 우선권을 주장하며, 이의 전체 내용은 참조로서 본원에 포함된다.
참고문헌
Figure pct00010
<110> Haemalogix Pty Ltd. <120> ANTI-LAMBDA MYELOMA ANTIGEN (LMA) BINDING PROTEINS TO TREAT LMA-EXPRESSING CANCER AND AUTOIMMUNE DISORDERS <130> Pi20-B215 <150> AU 2018900534 <151> 2018-02-20 <160> 94 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 1 Ser Tyr Ala Met Ser 1 5 <210> 2 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 2 Ala Ile Asn Asn Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 3 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 3 Asp Gln Gly Trp Gly Pro Leu Asn Trp Phe Asp Pro 1 5 10 <210> 4 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 4 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Asn Asn Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp Gln Gly Trp Gly Pro Leu Asn Trp Phe Asp Pro Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 5 <211> 470 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 5 Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Leu Phe Leu Val Ala Ile Leu Lys Gly 1 5 10 15 Val Gln Cys Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln 20 25 30 Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45 Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Val Ser Ala Ile Asn Asn Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala 65 70 75 80 Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn 85 90 95 Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Lys Asp Gln Gly Trp Gly Pro Leu Asn Trp Phe Asp 115 120 125 Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys 130 135 140 Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly 145 150 155 160 Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro 165 170 175 Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr 180 185 190 Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val 195 200 205 Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn 210 215 220 Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro 225 230 235 240 Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu 245 250 255 Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 260 265 270 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 275 280 285 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 290 295 300 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn 305 310 315 320 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 325 330 335 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro 340 345 350 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 355 360 365 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn 370 375 380 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 385 390 395 400 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 405 410 415 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 420 425 430 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 435 440 445 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 450 455 460 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 465 470 <210> 6 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 6 Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 7 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 7 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 8 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 8 Gln Gln Tyr Asn Ser His Pro Arg Thr 1 5 <210> 9 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 9 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser His Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 10 <211> 236 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 10 Met Asp Met Arg Val Leu Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Cys 1 5 10 15 Phe Pro Gly Ala Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser 20 25 30 Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser 35 40 45 Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys 50 55 60 Ala Pro Lys Ser Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val 65 70 75 80 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 85 90 95 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 100 105 110 Tyr Asn Ser His Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile 115 120 125 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 130 135 140 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 145 150 155 160 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 165 170 175 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 180 185 190 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 195 200 205 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 210 215 220 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235 <210> 11 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 11 Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 12 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 12 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 13 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 13 Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro 1 5 <210> 14 <211> 105 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 14 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Phe 85 90 95 Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 15 <211> 234 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 15 Met Asp Met Arg Val Leu Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Cys 1 5 10 15 Phe Pro Gly Ala Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser 20 25 30 Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser 35 40 45 Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys 50 55 60 Ala Pro Lys Ser Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val 65 70 75 80 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 85 90 95 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 100 105 110 Tyr Asn Ser Tyr Pro Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 115 120 125 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 130 135 140 Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 145 150 155 160 Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 165 170 175 Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 180 185 190 Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 195 200 205 His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 210 215 220 Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 <210> 16 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 16 ggattcacct ttagcagcta tgccatgagc 30 <210> 17 <211> 51 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 17 gctattaata atagtggtgg tagcacatac tacgcagact ccgtgaaggg c 51 <210> 18 <211> 36 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 18 gatcagggct ggggacccct caactggttc gacccc 36 <210> 19 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 19 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attaataata gtggtggtag cacatactac 180 gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaagatcag 300 ggctggggac ccctcaactg gttcgacccc tggggccagg gaaccctggt caccgtctcc 360 tca 363 <210> 20 <211> 1410 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 20 atggagtttg ggctgagctg gctttttctt gtggctattt taaaaggtgt ccagtgtgag 60 gtgcagctgt tggagtctgg gggaggcttg gtacagcctg gggggtccct gagactctcc 120 tgtgcagcct ctggattcac ctttagcagc tatgccatga gctgggtccg ccaggctcca 180 gggaaggggc tggagtgggt ctcagctatt aataatagtg gtggtagcac atactacgca 240 gactccgtga agggccggtt caccatctcc agagacaatt ccaagaacac gctgtatctg 300 caaatgaaca gcctgagagc cgaggacacg gccgtatatt actgtgcgaa agatcagggc 360 tggggacccc tcaactggtt cgacccctgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcctca 420 gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 480 ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 540 tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 600 ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 660 tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agttgagccc 720 aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 780 ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 840 gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 900 tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 960 agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 1020 gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 1080 aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggatgag 1140 ctgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 1200 gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 1260 ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 1320 cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 1380 cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 1410 <210> 21 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 21 cgggcgagtc agggtattag cagctggtta gcc 33 <210> 22 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 22 gctgcatcca gtttgcaaag t 21 <210> 23 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 23 caacagtata atagtcaccc tcggacg 27 <210> 24 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 24 gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gagaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtc accctcggac gttcggccaa 300 gggaccaagg tggaaatcaa a 321 <210> 25 <211> 708 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 25 atggacatga gggtcctcgc tcagctcctg gggctcctgc tgctctgttt cccaggtgcc 60 agatgtgaca tccagatgac ccagtctcca tcctcactgt ctgcatctgt aggagacaga 120 gtcaccatca cttgtcgggc gagtcagggt attagcagct ggttagcctg gtatcagcag 180 aaaccagaga aagcccctaa gtccctgatc tatgctgcat ccagtttgca aagtggggtc 240 ccatcaaggt tcagcggcag tggatctggg acagatttca ctctcaccat cagcagcctg 300 cagcctgaag attttgcaac ttattactgc caacagtata atagtcaccc tcggacgttc 360 ggccaaggga ccaaggtgga aatcaaacga actgtggctg caccatctgt cttcatcttc 420 ccgccatctg atgagcagtt gaaatctgga actgcctctg ttgtgtgcct gctgaataac 480 ttctatccca gagaggccaa agtacagtgg aaggtggata acgccctcca atcgggtaac 540 tcccaggaga gtgtcacaga gcaggacagc aaggacagca cctacagcct cagcagcacc 600 ctgacgctga gcaaagcaga ctacgagaaa cacaaagtct acgcctgcga agtcacccat 660 cagggcctga gctcgcccgt cacaaagagc ttcaacaggg gagagtgt 708 <210> 26 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 26 cgggcgagtc agggtattag cagctggtta gcc 33 <210> 27 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 27 gctgcatcca gtttgcaaag t 21 <210> 28 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 28 caacagtata atagttaccc t 21 <210> 29 <211> 315 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 29 gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gagaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt accctttcgg cggagggacc 300 aaggtggaga tcaaa 315 <210> 30 <211> 702 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 30 atggacatga gggtcctcgc tcagctcctg gggctcctgc tgctctgttt cccaggtgcc 60 agatgtgaca tccagatgac ccagtctcca tcctcactgt ctgcatctgt aggagacaga 120 gtcaccatca cttgtcgggc gagtcagggt attagcagct ggttagcctg gtatcagcag 180 aaaccagaga aagcccctaa gtccctgatc tatgctgcat ccagtttgca aagtggggtc 240 ccatcaaggt tcagcggcag tggatctggg acagatttca ctctcaccat cagcagcctg 300 cagcctgaag attttgcaac ttattactgc caacagtata atagttaccc tttcggcgga 360 gggaccaagg tggagatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 420 tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 480 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 540 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 600 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 660 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 702 <210> 31 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 31 Ser Tyr Ser Met Asn 1 5 <210> 32 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 32 Phe Ile Ser Ser Trp Ser Asn Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 33 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 33 Leu Ala Asn Trp Gly Thr Tyr Phe Asp Cys 1 5 10 <210> 34 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 34 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Phe Ile Ser Ser Trp Ser Asn Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ser Leu Ala Asn Trp Gly Thr Tyr Phe Asp Cys Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 35 <211> 468 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 35 Met Glu Leu Gly Leu Arg Trp Val Phe Leu Val Ala Ile Leu Glu Gly 1 5 10 15 Val Gln Cys Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys 20 25 30 Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45 Ser Ser Tyr Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Val Ser Phe Ile Ser Ser Trp Ser Asn Tyr Ile Tyr Tyr Ala 65 70 75 80 Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn 85 90 95 Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Ser Leu Ala Asn Trp Gly Thr Tyr Phe Asp Cys Trp 115 120 125 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 130 135 140 Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr 145 150 155 160 Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 165 170 175 Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 180 185 190 Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 195 200 205 Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn 210 215 220 His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser 225 230 235 240 Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu 245 250 255 Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 260 265 270 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 275 280 285 His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 290 295 300 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr 305 310 315 320 Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 325 330 335 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro 340 345 350 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 355 360 365 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val 370 375 380 Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 385 390 395 400 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 405 410 415 Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 420 425 430 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 435 440 445 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 450 455 460 Ser Pro Gly Lys 465 <210> 36 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 36 Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 37 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 37 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 38 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 38 Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu Thr 1 5 <210> 39 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 39 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 40 <211> 236 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 40 Met Asp Met Arg Val Leu Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Cys 1 5 10 15 Phe Pro Gly Ala Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser 20 25 30 Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser 35 40 45 Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys 50 55 60 Ala Pro Lys Ser Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val 65 70 75 80 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 85 90 95 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 100 105 110 Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 115 120 125 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 130 135 140 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 145 150 155 160 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 165 170 175 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 180 185 190 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 195 200 205 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 210 215 220 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235 <210> 41 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 41 Trp Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 42 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 42 Phe Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 43 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 43 Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Leu Thr 1 5 <210> 44 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 44 Ala Ile Arg Met Thr Gln Ser Pro Phe Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Trp Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Asn Pro Ala Lys Ala Pro Lys Leu Phe Ile 35 40 45 Tyr Phe Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Ser Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 45 <211> 236 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 45 Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Arg Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp 1 5 10 15 Phe Pro Gly Ala Arg Cys Ala Ile Arg Met Thr Gln Ser Pro Phe Ser 20 25 30 Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Trp Ala Ser 35 40 45 Gln Gly Ile Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Asn Pro Ala Lys 50 55 60 Ala Pro Lys Leu Phe Ile Tyr Phe Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val 65 70 75 80 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr 85 90 95 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Ser Cys Gln Gln 100 105 110 Tyr Tyr Ser Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 115 120 125 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 130 135 140 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 145 150 155 160 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 165 170 175 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 180 185 190 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 195 200 205 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 210 215 220 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235 <210> 46 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 46 agctatagca tgaac 15 <210> 47 <211> 51 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 47 ttcattagta gttggagtaa ttacatatac tacgcagact cagtgaaggg c 51 <210> 48 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 48 ctagctaact ggggaaccta ctttgactgc 30 <210> 49 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 49 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ctggtcaagc ctggggggtc cctgaaactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatagca tgaactgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcattc attagtagtt ggagtaatta catatactac 180 gcagactcag tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagcctagct 300 aactggggaa cctactttga ctgctggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcgtca 357 <210> 50 <211> 1404 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 50 atggaactgg ggctccgctg ggttttcctt gttgctattt tagaaggtgt ccagtgtgag 60 gtgcagctgg tggagtctgg gggaggcctg gtcaagcctg gggggtccct gaaactctcc 120 tgtgcagcct ctggattcac cttcagtagc tatagcatga actgggtccg ccaggctcca 180 gggaaggggc tggagtgggt ctcattcatt agtagttgga gtaattacat atactacgca 240 gactcagtga agggccgatt caccatctcc agagacaacg ccaagaactc actgtatctg 300 caaatgaaca gcctgagagc cgaggacacg gctgtgtatt actgtgcgag cctagctaac 360 tggggaacct actttgactg ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc gtcagcctcc 420 accaagggcc catcggtctt ccccctggca ccctcctcca agagcacctc tgggggcaca 480 gcggccctgg gctgcctggt caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac 540 tcaggcgccc tgaccagcgg cgtgcacacc ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc 600 tactccctca gcagcgtggt gaccgtgccc tccagcagct tgggcaccca gacctacatc 660 tgcaacgtga atcacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agagagttga gcccaaatct 720 tgtgacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc ccagcacctg aactcctggg gggaccgtca 780 gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac accctcatga tctcccggac ccctgaggtc 840 acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg 900 gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca aagccgcggg aggagcagta caacagcacg 960 taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg caccaggact ggctgaatgg caaggagtac 1020 aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc 1080 aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac accctgcccc catcccggga tgagctgacc 1140 aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg 1200 gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac 1260 tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag 1320 gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag 1380 agcctctccc tgtctccggg taaa 1404 <210> 51 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 51 cgggcgagtc agggtattag cagctggtta gcc 33 <210> 52 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 52 gctgcatcca gtttgcaaag t 21 <210> 53 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 53 caacagtata atagttaccc gctcact 27 <210> 54 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 54 gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gagaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt acccgctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa a 321 <210> 55 <211> 708 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 55 atggacatga gggtcctcgc tcagctcctg gggctcctgc tgctctgttt cccaggtgcc 60 agatgtgaca tccagatgac ccagtctcca tcctcactgt ctgcatctgt aggagacaga 120 gtcaccatca cttgtcgggc gagtcagggt attagcagct ggttagcctg gtatcagcag 180 aaaccagaga aagcccctaa gtccctgatc tatgctgcat ccagtttgca aagtggggtc 240 ccatcaaggt tcagcggcag tggatctggg acagatttca ctctcaccat cagcagcctg 300 cagcctgaag attttgcaac ttattactgc caacagtata atagttaccc gctcactttc 360 ggcggaggga ccaaggtgga gatcaaacga actgtggctg caccatctgt cttcatcttc 420 ccgccatctg atgagcagtt gaaatctgga actgcctctg ttgtgtgcct gctgaataac 480 ttctatccca gagaggccaa agtacagtgg aaggtggata acgccctcca atcgggtaac 540 tcccaggaga gtgtcacaga gcaggacagc aaggacagca cctacagcct cagcagcacc 600 ctgacgctga gcaaagcaga ctacgagaaa cacaaagtct acgcctgcga agtcacccat 660 cagggcctga gctcgcccgt cacaaagagc ttcaacaggg gagagtgt 708 <210> 56 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 56 tgggccagtc agggcattag cagttattta gcc 33 <210> 57 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 57 tttgcatcca gtttgcaaag t 21 <210> 58 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 58 caacagtatt atagtacccc gctcact 27 <210> 59 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 59 gccatccgga tgacccagtc tccattctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgct gggccagtca gggcattagc agttatttag cctggtatca gcaaaatcca 120 gcaaaagccc ctaagctctt catctatttt gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacggat tacactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttattc ctgtcaacag tattatagta ccccgctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa a 321 <210> 60 <211> 708 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 60 atggacatga gggtgcccgc tcagcgcctg gggctcctgc tgctctggtt cccaggtgcc 60 agatgtgcca tccggatgac ccagtctcca ttctccctgt ctgcatctgt aggagacaga 120 gtcaccatca cttgctgggc cagtcagggc attagcagtt atttagcctg gtatcagcaa 180 aatccagcaa aagcccctaa gctcttcatc tattttgcat ccagtttgca aagtggggtc 240 ccatcaaggt tcagcggcag tggatctggg acggattaca ctctcaccat cagcagcctg 300 cagcctgaag attttgcaac ttattcctgt caacagtatt atagtacccc gctcactttc 360 ggcggaggga ccaaggtgga gatcaaacga actgtggctg caccatctgt cttcatcttc 420 ccgccatctg atgagcagtt gaaatctgga actgcctctg ttgtgtgcct gctgaataac 480 ttctatccca gagaggccaa agtacagtgg aaggtggata acgccctcca atcgggtaac 540 tcccaggaga gtgtcacaga gcaggacagc aaggacagca cctacagcct cagcagcacc 600 ctgacgctga gcaaagcaga ctacgagaaa cacaaagtct acgcctgcga agtcacccat 660 cagggcctga gctcgcccgt cacaaagagc ttcaacaggg gagagtgt 708 <210> 61 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 61 Ser Tyr Ser Met Asn 1 5 <210> 62 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 62 Phe Ile Ser Ser Asn Arg Asn Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 63 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 63 Leu Ala Asn Trp Gly Thr Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 64 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 64 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Phe Ile Ser Ser Asn Arg Asn Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ser Leu Ala Asn Trp Gly Thr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 65 <211> 468 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 65 Met Glu Leu Gly Leu Arg Trp Val Phe Leu Val Ala Ile Leu Glu Gly 1 5 10 15 Val Gln Cys Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys 20 25 30 Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45 Ser Ser Tyr Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Val Ser Phe Ile Ser Ser Asn Arg Asn Tyr Ile Tyr Tyr Ala 65 70 75 80 Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn 85 90 95 Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Ser Leu Ala Asn Trp Gly Thr Tyr Phe Asp Tyr Trp 115 120 125 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 130 135 140 Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr 145 150 155 160 Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 165 170 175 Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 180 185 190 Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 195 200 205 Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn 210 215 220 His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser 225 230 235 240 Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu 245 250 255 Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 260 265 270 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 275 280 285 His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 290 295 300 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr 305 310 315 320 Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 325 330 335 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro 340 345 350 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 355 360 365 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val 370 375 380 Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 385 390 395 400 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 405 410 415 Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 420 425 430 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 435 440 445 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 450 455 460 Ser Pro Gly Lys 465 <210> 66 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 66 Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 67 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 67 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 68 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 68 Arg Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu Thr 1 5 <210> 69 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 69 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Arg Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Arg 100 105 <210> 70 <211> 236 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 70 Met Asp Met Arg Val Leu Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Cys 1 5 10 15 Phe Pro Gly Ala Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser 20 25 30 Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser 35 40 45 Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys 50 55 60 Ala Pro Lys Ser Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val 65 70 75 80 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 85 90 95 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Arg Gln 100 105 110 Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 115 120 125 Arg Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 130 135 140 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 145 150 155 160 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 165 170 175 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 180 185 190 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 195 200 205 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 210 215 220 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235 <210> 71 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 71 Trp Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 72 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 72 Tyr Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 73 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 73 Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Leu Thr 1 5 <210> 74 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 74 Ala Ile Arg Met Thr Gln Ser Pro Phe Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Trp Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Ala Lys Ala Pro Asn Leu Phe Ile 35 40 45 Tyr Tyr Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 75 <211> 236 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 75 Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Arg Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp 1 5 10 15 Phe Pro Gly Ala Arg Cys Ala Ile Arg Met Thr Gln Ser Pro Phe Ser 20 25 30 Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Trp Ala Ser 35 40 45 Gln Gly Ile Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Ala Lys 50 55 60 Ala Pro Asn Leu Phe Ile Tyr Tyr Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val 65 70 75 80 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr 85 90 95 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 100 105 110 Tyr Tyr Ser Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 115 120 125 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 130 135 140 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 145 150 155 160 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 165 170 175 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 180 185 190 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 195 200 205 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 210 215 220 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235 <210> 76 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 76 agctatagca tgaac 15 <210> 77 <211> 51 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 77 ttcattagta gtaatcgtaa ttacatatac tacgcagact cagtgaaggg c 51 <210> 78 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 78 ctagctaact ggggaaccta ctttgactac 30 <210> 79 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 79 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ctggtcaagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatagca tgaactgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcattc attagtagta atcgtaatta catatactac 180 gcagactcag tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagcctagct 300 aactggggaa cctactttga ctactggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcctca 357 <210> 80 <211> 1404 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 80 atggaactgg ggctccgctg ggttttcctt gttgctattt tagaaggtgt ccagtgtgag 60 gtgcagctgg tggagtctgg gggaggcctg gtcaagcctg gggggtccct gagactctcc 120 tgtgcagcct ctggattcac cttcagtagc tatagcatga actgggtccg ccaggctcca 180 gggaaggggc tggagtgggt ctcattcatt agtagtaatc gtaattacat atactacgca 240 gactcagtga agggccgatt caccatctcc agagacaacg ccaagaactc actgtatctg 300 caaatgaaca gcctgagagc cgaggacacg gctgtgtatt actgtgcgag cctagctaac 360 tggggaacct actttgacta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctcagcctcc 420 accaagggcc catcggtctt ccccctggca ccctcctcca agagcacctc tgggggcaca 480 gcggccctgg gctgcctggt caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac 540 tcaggcgccc tgaccagcgg cgtgcacacc ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc 600 tactccctca gcagcgtggt gaccgtgccc tccagcagct tgggcaccca gacctacatc 660 tgcaacgtga atcacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agagagttga gcccaaatct 720 tgtgacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc ccagcacctg aactcctggg gggaccgtca 780 gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac accctcatga tctcccggac ccctgaggtc 840 acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg 900 gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca aagccgcggg aggagcagta caacagcacg 960 taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg caccaggact ggctgaatgg caaggagtac 1020 aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc 1080 aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac accctgcccc catcccggga tgagctgacc 1140 aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg 1200 gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac 1260 tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag 1320 gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag 1380 agcctctccc tgtctccggg taaa 1404 <210> 81 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 81 cgggcgagtc agggtattag cagctggtta gcc 33 <210> 82 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 82 gctgcatcca gtttgcaaag t 21 <210> 83 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 83 cgacagtata atagttaccc actcact 27 <210> 84 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 84 gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120 gagaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgccgacag tataatagtt acccactcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcag a 321 <210> 85 <211> 708 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 85 atggacatga gggtcctcgc tcagctcctg gggctcctgc tgctctgttt cccaggtgcc 60 agatgtgaca tccagatgac ccagtctcca tcctcactgt ctgcatctgt aggagacaga 120 gtcaccatca cttgtcgggc gagtcagggt attagcagct ggttagcctg gtatcagcag 180 aaaccagaga aagcccctaa gtccctgatc tatgctgcat ccagtttgca aagtggggtc 240 ccatcaaggt tcagcggcag tggatctggg acagatttca ctctcaccat cagcagcctg 300 cagcctgaag attttgcaac ttattactgc cgacagtata atagttaccc actcactttc 360 ggcggaggga ccaaggtgga gatcagacga actgtggctg caccatctgt cttcatcttc 420 ccgccatctg atgagcagtt gaaatctgga actgcctctg ttgtgtgcct gctgaataac 480 ttctatccca gagaggccaa agtacagtgg aaggtggata acgccctcca atcgggtaac 540 tcccaggaga gtgtcacaga gcaggacagc aaggacagca cctacagcct cagcagcacc 600 ctgacgctga gcaaagcaga ctacgagaaa cacaaagtct acgcctgcga agtcacccat 660 cagggcctga gctcgcccgt cacaaagagc ttcaacaggg gagagtgt 708 <210> 86 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 86 tgggccagtc agggcattag cagttattta gcc 33 <210> 87 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 87 tatgcatcca gtttgcaaag t 21 <210> 88 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 88 caacagtatt atagtacccc gctcact 27 <210> 89 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 89 gccatccgga tgacccagtc tccattctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgct gggccagtca gggcattagc agttatttag cctggtatca gcaaaaacca 120 gcaaaagccc ctaacctctt catctattat gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacggat tacactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgtcaacag tattatagta ccccgctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa a 321 <210> 90 <211> 708 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 90 atggacatga gggtgcccgc tcagcgcctg gggctcctgc tgctctggtt cccaggtgcc 60 agatgtgcca tccggatgac ccagtctcca ttctccctgt ctgcatctgt aggagacaga 120 gtcaccatca cttgctgggc cagtcagggc attagcagtt atttagcctg gtatcagcaa 180 aaaccagcaa aagcccctaa cctcttcatc tattatgcat ccagtttgca aagtggggtc 240 ccatcaaggt tcagcggcag tggatctggg acggattaca ctctcaccat cagcagcctg 300 cagcctgaag attttgcaac ttattactgt caacagtatt atagtacccc gctcactttc 360 ggcggaggga ccaaggtgga gatcaaacga actgtggctg caccatctgt cttcatcttc 420 ccgccatctg atgagcagtt gaaatctgga actgcctctg ttgtgtgcct gctgaataac 480 ttctatccca gagaggccaa agtacagtgg aaggtggata acgccctcca atcgggtaac 540 tcccaggaga gtgtcacaga gcaggacagc aaggacagca cctacagcct cagcagcacc 600 ctgacgctga gcaaagcaga ctacgagaaa cacaaagtct acgcctgcga agtcacccat 660 cagggcctga gctcgcccgt cacaaagagc ttcaacaggg gagagtgt 708 <210> 91 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 91 Lys Ala Asp Gly Ser Pro Val Lys 1 5 <210> 92 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <400> 92 Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys 1 5 <210> 93 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 93 Xaa Ser His Arg 1 <210> 94 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Artificial Sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 94 Xaa Ser His Lys 1

Claims (28)

  1. 항원 결합 도메인을 갖는 항-람다 골수종 항원(LMA) 결합 단백질로서, 상기 항원 결합 도메인이 유리 람다 경쇄에 비해 LMA에 우선적으로 결합하고, 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하며, 상기 VH가 SEQ ID NO:1에 제시된 바와 같은 상보성 결정 영역(CDR) 1, SEQ ID NO:2에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:3에 제시된 바와 같은 CDR3를 포함하는, 항-람다 골수종 항원(LMA) 결합 단백질.
  2. 제1항에 있어서, VH가 SEQ ID NO:4에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 결합 단백질.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, VL이 SEQ ID NO:6에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:7에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:8 또는 SEQ ID NO:13에 제시된 바와 같은 CDR3를 포함하는 결합 단백질.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, VL이 SEQ ID NO:9 또는 SEQ ID NO:14에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 결합 단백질.
  5. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, VL이 SEQ ID NO:9에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 결합 단백질.
  6. 항원 결합 도메인을 갖는 항-LMA 결합 단백질로서, 상기 항원 결합 도메인이 LMA에 결합하고, VH 및 VL을 포함하며, 여기서:
    - VH가 SEQ ID NO:31에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:32에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:33에 제시된 바와 같은 CDR3를 포함하고, VL이 SEQ ID NO:36 또는 SEQ ID NO:41에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:37 또는 SEQ ID NO:42에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:38 또는 SEQ ID NO:43에 제시된 바와 같은 CDR3를 포함하거나;
    - VH가 SEQ ID NO:61에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:62에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:63에 제시된 바와 같은 CDR3를 포함하고, VL이 SEQ ID NO:66 또는 SEQ ID NO:71에 제시된 바와 같은 CDR1, SEQ ID NO:67 또는 SEQ ID NO:72에 제시된 바와 같은 CDR2 및 SEQ ID NO:68 또는 SEQ ID NO:73에 제시된 바와 같은 CDR3를 포함하는,
    항-LMA 결합 단백질.
  7. 제6항에 있어서, VH가 SEQ ID NO:34 또는 SEQ ID NO:64에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 결합 단백질.
  8. 제6항 또는 제7항에 있어서, VL이 SEQ ID NO:39, 44, 69 또는 74 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 결합 단백질.
  9. 항원 결합 도메인을 갖는 항-LMA 결합 단백질로서, 상기 항원 결합 도메인이 LMA에 결합하고, 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하며, 여기서:
    - VH가 SEQ ID NO:5에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VL이 SEQ ID NO:10 또는 SEQ ID NO:15에 제시된 아미노산 서열을 포함하고;
    - VH가 SEQ ID NO:34에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VL이 SEQ ID NO:40 또는 SEQ ID NO:45에 제시된 아미노산 서열을 포함하고;
    - VH가 SEQ ID NO:65에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VL이 SEQ ID NO:70 또는 SEQ ID NO:75에 제시된 아미노산 서열을 포함하는,
    항-LMA 결합 단백질.
  10. 제6항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 결합 단백질이 LMA에 특이적으로 결합하는 결합 단백질.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 항체인 결합 단백질.
  12. 제11항에 있어서, 항체가 LMA에 특이적으로 결합하는 결합 단백질.
  13. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, VH 및 VL이 단일 폴리펩티드 사슬에 있는 결합 단백질.
  14. 제13항에 있어서,
    (i) 단일 사슬 Fv 단편(scFv);
    (ii) 이량체 scFv(di-scFv);
    (iii) 삼량체 scFv(tri-scFv);
    (iv) 항체의 불변 영역, Fc 또는 중쇄 불변 도메인 CH2 및/또는 CH3에 연결된 (i), (ii) 또는 (iii) 중 어느 하나인,
    결합 단백질.
  15. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, VH 및 VL이 별도의 폴리펩티드 사슬에 있는 결합 단백질.
  16. 제15항에 있어서,
    (i) 디아바디(diabody);
    (ii) 트리아바디(triabody);
    (iii) 테트라바디(tetrabody);
    (iv) Fab;
    (v) F(ab')2;
    (vi) Fv;
    (vii) 항체의 불변 영역, Fc 또는 중쇄 불변 도메인 CH2 및/또는 CH3에 연결된 (i) 내지 (vi) 중 하나; 또는
    (viii) 온전한 항체인,
    결합 단백질.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 의해 정의된 결합 단백질을 인코딩하는 핵산.
  18. 제17항에 의해 정의된 핵산을 포함하는 발현 작제물.
  19. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 정의된 결합 단백질, 제17항에 의해 정의된 핵산 또는 제18항의 발현 작제물을 발현하는 분리된 세포 또는 재조합 세포.
  20. 약학적 담체 및 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 정의된 결합 단백질을 포함하는 조성물.
  21. 유효량의 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 정의된 결합 단백질 또는 제20항의 조성물을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 LMA-발현 암을 치료하는 방법.
  22. LMA-발현 암을 치료하기 위한 약제의 제조에서 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 정의된 결합 단백질 또는 제20항의 조성물의 용도.
  23. LMA 발현 암을 치료하는 데 사용하기 위한 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 정의된 결합 단백질 또는 제20항의 조성물.
  24. 제21항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, LMA-발현 암이 다발골수종, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), POEMS 증후군 또는 아밀로이드증인 방법 또는 용도.
  25. 유효량의 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 정의된 결합 단백질 또는 제20항의 조성물을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 자가면역 장애를 치료하는 방법.
  26. 자가면역 장애를 치료하기 위한 약제의 제조에서 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 정의된 결합 단백질 또는 제20항의 조성물의 용도.
  27. 자가면역 장애를 치료하는 데 사용하기 위한 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 정의된 결합 단백질 또는 제20항의 조성물.
  28. 제25항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 자가면역 장애가 류마티스 관절염, 전신 홍반 루푸스, 당뇨병 및 다발경화증으로 구성된 군으로부터 선택되는 방법 또는 용도.
KR1020207027033A 2018-02-20 2019-02-20 Lma-발현 암 및 자가면역 장애를 치료하기 위한 항-람다 골수종 항원(lma) 결합 단백질 KR20210005553A (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
AU2018900534A AU2018900534A0 (en) 2018-02-20 Composition and method
AU2018900534 2018-02-20
PCT/AU2019/050137 WO2019161443A1 (en) 2018-02-20 2019-02-20 Anti-lambda myeloma antigen (lma) binding proteins to treat lma-expressing cancer and autoimmune disorders

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20210005553A true KR20210005553A (ko) 2021-01-14

Family

ID=67686653

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020207027033A KR20210005553A (ko) 2018-02-20 2019-02-20 Lma-발현 암 및 자가면역 장애를 치료하기 위한 항-람다 골수종 항원(lma) 결합 단백질

Country Status (10)

Country Link
US (2) US11447571B2 (ko)
EP (1) EP3755724A4 (ko)
JP (1) JP7490559B2 (ko)
KR (1) KR20210005553A (ko)
CN (1) CN111918879A (ko)
AU (2) AU2019225446B2 (ko)
BR (1) BR112020017018A2 (ko)
CA (1) CA3091711A1 (ko)
SG (1) SG11202007925SA (ko)
WO (1) WO2019161443A1 (ko)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023242634A1 (en) * 2022-06-13 2023-12-21 Paradox Immunotherapeutics Inc. Monoclonal antibodies targeting conformation-specific epitopes of immunoglobulin light chains of the lambda subclass

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MXPA06009759A (es) * 2004-02-27 2007-03-26 Pacmab Ltd Codocito para trastornos por linfocitos b.
US20100187181A1 (en) * 2009-01-29 2010-07-29 Sortwell Edwin T Method for Dispersing and Aggregating Components of Mineral Slurries
MY183617A (en) * 2009-04-07 2021-03-03 Immune System Therapeutics Ltd Method for treating immune disorders
GB201203938D0 (en) * 2012-03-06 2012-04-18 Binding Site Group The Ltd Assay system

Also Published As

Publication number Publication date
US20210230309A1 (en) 2021-07-29
CA3091711A1 (en) 2019-08-29
EP3755724A4 (en) 2022-03-23
EP3755724A1 (en) 2020-12-30
US11447571B2 (en) 2022-09-20
WO2019161443A1 (en) 2019-08-29
AU2021202092A1 (en) 2021-04-29
SG11202007925SA (en) 2020-09-29
AU2019225446A1 (en) 2020-10-08
US20230174675A1 (en) 2023-06-08
JP2021514369A (ja) 2021-06-10
BR112020017018A2 (pt) 2020-12-29
JP7490559B2 (ja) 2024-05-27
CN111918879A (zh) 2020-11-10
AU2019225446B2 (en) 2021-01-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2756236C2 (ru) PD-L1 специфические антитела
CA2501653C (en) Human anti-ifn-.gamma. neutralizing antibodies as selective ifn-.gamma. pathway inhibitors
CA2501984C (en) Erythropoietin receptor binding antibodies
CN107531783B (zh) 靶向bmp6抗体的组合物和方法
CN111788225A (zh) 抗cd38抗体及与抗cd3和抗cd28抗体的组合
US20040175379A1 (en) Erythropoietin receptor binding antibodies
CN111094352A (zh) B7-h4抗体及其使用方法
KR20210092769A (ko) 항-nkg2a 항체 및 그의 용도
KR20170065029A (ko) 증강된 면역 반응 및 암 요법을 위한 조성물 및 사용 방법
KR20200061320A (ko) 세포독성 t-림프구-관련 단백질 4 (ctla-4)에 대한 신규의 단일클론 항체
US20170198040A1 (en) ANTIBODIES TARGETING CD32b AND METHODS OF USE THEREOF
CN101027322A (zh) 促红细胞生成素受体结合抗体
PT2379594T (pt) Anticorpos de ligação ao recetor de cgrp humano
WO2012172495A1 (en) Compositions and methods for antibodies targeting tem8
KR20140059168A (ko) 시신경 척수염 치료용 조성물 및 치료 방법
CN106795223B (zh) 针对Fcγ受体IIB及Fcε受体的抗体
RU2734432C1 (ru) Моноклональное антитело, которое специфически связывается с GITR
JP2022516161A (ja) 頭頸部のがんを処置するための化合物及び方法
KR20220062500A (ko) 항-cd39 항체 조성물 및 방법
KR20200044899A (ko) 암의 치료 및 진단을 위한 tim-3 길항제
KR20210005007A (ko) 항-il-27 항체 및 이의 용도
KR20180014714A (ko) 골 형태형성 단백질 9 (bmp9)를 표적화하는 항체 및 그에 대한 방법
KR20210104064A (ko) 항-il-27 항체 및 그의 용도
CN115151570A (zh) 抗人cd19抗体
AU2021297856A1 (en) Anti-CD73 antibody and use thereof