KR20210005539A

KR20210005539A - 심방 세동 (af) 의 평가를 위한 지방산 결합 단백질 3

Info

Publication number: KR20210005539A
Application number: KR1020207000937A
Authority: KR
Inventors: 요한 칼; 페터 카슈트너; 핀첸트 롤니; 우르줄라-헨리케 빈휘스-텔렌; 마누엘 디트리히; 앙드레 치글러; 울리히 쇼텐
Original assignee: 에프. 호프만-라 로슈 아게; 마스트리흐트 유니버시티 메디컬 센터
Priority date: 2017-06-13
Filing date: 2018-06-12
Publication date: 2021-01-14
Also published as: WO2018229051A1; EP3639035A1; BR112019026389A2; US20200116708A1; JP7109484B2; EP3639035B1; ES2954321T3; KR102356418B1; CN111263887A; CN111263887B; JP2020524781A

Abstract

본 발명은 발작성 심방 세동을 앓는 것으로 의심되는 대상체로부터의 샘플에서 FABP-3 (지방산 결합 단백질 3) 의 양을 결정하는 단계, 및 결정된 양을 기준량과 비교하는 단계를 포함하는 대상체에서 발작성 심방 세동을 진단하기 위한 방법에 관한 것이다. 본 발명의 방법은 BNP-형 펩티드의 결정을 추가로 포함할 수 있다. 본 발명은 또한 본 발명의 방법을 수행하도록 구성된 장치를 포함한다.

Description

심방 세동 (AF) 의 평가를 위한 지방산 결합 단백질 3

본 발명은 발작성 심방 세동을 앓는 것으로 의심되는 대상체로부터의 샘플에서 FABP-3 (지방산 결합 단백질 3) 의 양을 결정하는 것, 및 결정된 양을 기준량과 비교하는 것을 포함하는, 대상체에서 발작성 심방 세동을 진단하기 위한 방법에 관한 것이다. 본 발명의 방법은 BNP-형 펩티드의 결정을 추가로 포함할 수 있다. 본 발명은 또한 본 발명의 방법을 수행하도록 구성된 장치를 포함한다.

발작성 심방 세동은 7 일 미만, 통상적으로 24 시간 미만 내에 자연적으로 종결되는 심방 세동 (AF) 의 재발성 에피소드로 정의된다. 이는 자가-종료일 수 있거나 또는 간헐적일 수 있다. 발작성 AF 는 일반적이다 (노인 대상체의 5-10% (심방 세동의 유병률, 발생률 및 평생 위험: 로테르담 연구. Heeringa et al., Eur Heart J. 2006; 27(8):949b 참조)). 미치료 환자는 항 응고 요법의 투여 없이 증가된 뇌졸중 위험을 갖는다. 부정맥 예컨대 심방 세동의 진단은 전형적으로 부정맥의 원인 결정, 및 부정맥의 분류를 포함한다. AF 를 검출하기 위한 최적 표준은 심전도 (ECG) 이며, 바람직하게는 24 시간 ECG (홀터 모니터링) 로서 수행된다. 그러나, 홀터 모니터링은 24 시간의 기간 동안의 ECG 기록에서 부정맥이 발생하는 경우에만 AF 를 검출할 수 있다. 따라서, 발작성 AF 는 흔히 홀터 모니터링으로 검출되지 않는다.

다양한 과학 간행물은 심방 세동과 함께 향상된 수준의 바이오마커와의 연관성을 다루고 있다 (Biomarkers in Atrial Fibrillation: Investigating Biologic Plausibility, Cause, and Effect R. Becker Journal of Thrombosis and Thrombolysis 19(1), 71-75, 2005 에서 검토됨).

NT-proBNP 의 결정은 수축기 기능 이상의 평가를 허용한다. 또한, 고감도 트로포닌 분석은 무증상 심장 손상의 검출을 허용한다. 트로포닌 T 및 NT-proBNP 의 상승된 수준은 6 개월 또는 12 개월 후에 AF 의 첫 번째 재발의 위험이 높은 것으로 독립적으로 예측한다고 설명되어 있다 (Circulating cardio-vascular biomarkers in recurrent atrial fibrillation: data from the GISSI-Atrial Fibrillation Trial, R. Latini et al., JInternMed2011;269:160-171). 심장 단백질 수준, 트로포닌 T 및 NT-proBNP 를 기준으로 환자를 선택하여 심지어 약 1 주일 전에도 발생한 발작성 AF 를 진단하고 항 응고 요법으로부터 이익을 얻을 수 있는 환자를 선택할 수 있다는 것이 추가로 설명되어 있다 (WO 2014/072500).

바이오마커 FABP-3 (지방산 결합 단백질 3) (심장형 지방산 결합 단백질 (H-FABP) 로도 알려짐) 은 심근 경색의 초기 마커로서 제안되어 왔다. FABP-3 은 저분자량 세포질 단백질 (인간 FABP-3 는 132 개의 아미노산의 폴리펩티드이고 14.8 KDa 임) 이고 심근에 풍부하게 존재한다. 심근 경색의 경우와 같이 심근이 손상되면, FABP-3 을 포함한 저분자량 세포질 단백질이 순환으로 방출되고 혈액 샘플에서 상승된 FABP-3 수준이 검출될 수 있다 (예를 들어 Ruzgar et al., Heart Vessels, 21;209- 314 (2006) 참조). FABP-3 및 H-FABP 의 다른 이름은 FABP-11 (지방산 결합 단백질 11), M-FABP (근육 지방산 결합 단백질), MDGI (유방 유래 성장 억제제), 및 O-FABP 이다.

동리듬 환자와 비교하여 심방 세동 (AF) 이 진행 중인 환자에서 상승된 순환 FABP-3 수준이 관찰되었다 (Otaki et al., Internal medicine, (2014) Vol. 53, No. 7, pp. 661-8).

FABP-3 의 상승된 순환 수준은 AF 의 수술 후 사건과 관련이 있는 것으로 관찰되었다 (Sezai et al., Carperitide and Atrial Fibrillation after Coronary Bypass Grafting: The Nihon University Working Group Study of Low-Dose HANP Infusion Therapy during Cardiac Surgery Trial for Postoperative Atrial Fibrillation. Circulation: Arrhythmia and Electrophysiology, (4 Jun 2015) Vol. 8, No. 3, pp. 546-553).

FABP-3 의 증가된 수준은 심장 수술 후 AF 와 관련이 있으며, 이는 허혈성 심근 손상이 기여하는 기저 메커니즘임을 시사한다 (Rader et al., Perioperative heart-type fatty acid binding protein levels in atrial fibrillation after cardiac surgery. Heart rhythm: the official journal of the Heart Rhythm Society, (2013) Vol. 10, No. 2, pp.153-7).

Yang 등은 베타-차단제와 항-허혈성 약물 트리메타디진의 병용을 기술하고 있다. 2016 가이드라인은 트리메타지딘이 베타-차단제 (또는 대안) 로 치료를 받더라도 협심증이 지속되는 경우 협심증을 완화시키기 위해 (효과적인 항-협심증 치료, HF 에서 안전) 증상이 있는 HFrEF 를 사용한 안정 협심증 치료에 고려할 수 있음을 나타낸다. 이러한 권장 사항은 트리메타지딘이 HFrEF 환자에서 NYHA 기능 용량, 운동 시간 및 LV 기능을 개선할 수 있음을 시사하는 증거를 기반으로 한다. HF 단독의 셋팅에서 트리메타지딘에 대한 권장 사항은 없다 (Yang et al. Efficacy of metoprolol in combination with trimetazidine in patients with atrial fibrillation and its effects on serum concentrations of H-FABP. South China Journal of Cardiovascular Diseases, (2014) 20(2), 168-170). 이 논문의 저자는 임상 증상의 종말점 개선, AF 의 재발 감소 및 FABP3 수준 감소와 함께 AF 환자에서 베타-차단제와 함께 트리메타디진을 사용하는 것을 기술하고 있다. FABP3 가 발작성 AF 와 유의하게 관련되어 있다는 힌트는 없다. 이러한 약물에 의해 개선된 여러 가지 임상 매개 변수는 FABP3 의 감소를 유발할 수도 있다. 트리메타지딘은 항-허혈성 약물이며 지방산 대사 억제를 통해 심근 포도당 사용을 향상시킨다. FABP3 은 장쇄 지방산의 세포질 수송 및 허혈 동안 지방산으로부터 심장 근세포를 보호하는 역할을 한다. 허혈성 심장 손상의 매개 변수로서 FABP3 은 항-허혈성 약물 메커니즘과 상관 관계가 있는 것으로 시사된다. 베타 차단제는 항 고혈압 약물이다. 베타-수용체의 봉쇄는 신장의 혈류 및 사구체 여과율뿐만 아니라 심장 출력 및 혈압을 감소시킨다. 신장 기능 이상으로 인한 제거율 감소로 인해 FABP3 수준이 상승될 수 있다. 감소된 사구체 여과율의 매개 변수로서 FABP3 은 항 고혈압 약물 메커니즘과 관련이 있는 것으로 시사된다.

US 2006/099608 및 US 2007/218498 은 혈관 상태의 진단을 위한 몇몇 바이오마커 목록 내에서 FABP-3 을 개시하고 있다.

US 2011/144205 는 심부전의 위험이 있는 무증상 환자의 스크리닝을 개시하고 있다. FABP-3 은 몇몇 바이오마커 목록 내에 설명되어 있다.

US 2015/126385 는 FABP-3 이 허혈성 뇌졸중의 진단을 보조할 수 있다고 개시하고 있다.

US2016/258965 에 따르면, FABP-3 은 뇌졸중이 시작된 후 경과한 시간을 여러 가지 심장 질환 중 하나로 나타낼 수 있다.

FABP-3 의 상승된 순환 수준은 이전의 일시적 허혈성 발작 병력이 있는 환자에서 재발성 뇌졸중의 위험과 관련이 있는 것으로 관찰되었다 (Segal et al. Population-based study of blood biomarkers in prediction of subacute recurrent stroke. Stroke (2014) Vol. 45, No. 10, pp. 2912-2917).

CRP 를 포함한 대부분의 바이오마커에서 발작성 내지 지속적 또는 영구적 심방 세동 환자의 하위 그룹 중에서 순환 수준의 점진적인 증가가 관찰된다 (Li et al., Plasma oxidative stress and inflammatory biomarkers are associated with the sizes of the left atrium and pulmonary vein in atrial fibrillation patients. Clin Cardiol (2017) 40(2), pp. 89-942017, 또는 Kossaify et al., Perspectives of biomarkers in acute cardiac care. Biomarker Insights (2013) 8, pp.115-126).

따라서, 심방 세동의 후기 단계에서 CRP 와 같은 대부분의 AF 바이오마커의 상당한 증가가 관찰된다.

그러나, 심방 세동의 조기 진단, 및 그에 따른 발작성 심방 세동의 진단은 심방 세동이 뇌졸중 및 전신 색전증의 중요한 위험 인자이기 때문에 매우 요구된다. 심방 세동의 가장 두려운 결과는 뇌로의 혈류가 혈전에 의해 또는 혈관 내벽에 플라크라고하는 지방 침착물에 의해 차단될 때 발생하는 (허혈성) 뇌졸중이다. 증상에 관계 없이, 심방 세동 환자는 허혈성 뇌졸중 위험이 5 배 증가한다. 또한, AF 의 합병증으로 인한 뇌졸중은 다른 기저 원인이 있는 뇌졸중보다 더 심한 경향이 있다. 심방 세동으로 인한 뇌졸중은 더 쇠약해진 장애를 일으키고 사망률이 더 높다. 모든 뇌졸중 환자의 30% 이상은 심방 세동이 있는 것으로 추정되어 뇌졸중 예방을 위한 경구 항 응고 (OAC) 가 유익하고 일반적인 치료가 되었다.

상기로부터 유도될 수 있는 바와 같이, 발작성 심방 세동의 검출은 특히 관련성이 있지만 도전적이다. 따라서, 발작성 심방 세동의 진단을 위한 신뢰할 수 있는 방법이 필요하다.

본 발명의 기저가 되는 기술적 문제는 전술한 필요성을 충족시키기 위한 방법의 제공으로 볼 수 있다. 기술적 문제는 청구범위 및 이하에서 특징 지어지는 구현예에 의해 해결된다.

유리하게는, 본 발명의 연구의 맥락에서, 대상체로부터의 샘플에서 FABP-3 의 양의 결정이 발작성 심방 세동의 진단을 허용하는 것으로 밝혀졌다. AF 의 여러 다른 바이오마커와 달리, FABP-3 은 AF 의 초기 단계에서 이미 상당히 증가한다. 본 발명 덕분에, 대상체가 발작성 심방 세동을 앓고 있는지 여부를 평가할 수 있다.

따라서, 본 발명은 하기를 포함하는 대상체에서 발작성 심방 세동을 진단하기 위한 방법에 관한 것이다:

(a) 발작성 심방 세동을 앓는 것으로 의심되는 대상체로부터의 샘플에서 FABP-3 (지방산 결합 단백질 3) 의 양을 결정하는 단계, 및

(b) 단계 a) 에서 결정된 양을 기준량과 비교하는 단계.

본 발명의 방법의 구현예에서, 방법은 단계 a) 에서 대상체로부터의 샘플에서 BNP-형 펩티드의 양을 결정하는 것 및 단계 b) 에서 상기 BNP-형 펩티드의 양과 기준량을 비교하는 것을 추가로 포함한다.

(a) 발작성 심방 세동을 앓는 것으로 의심되는 대상체로부터의 샘플에서 FABP-3 (지방산 결합 단백질 3) 및 BNP-형 펩티드의 양을 결정하는 단계, 및

(b) 단계 a) 에서 결정된 양을 기준량과 비교하는 단계.

바람직한 구현예에서, 심방 세동 (AF) 의 진단은 비교 단계 b) 의 결과를 기반으로 한다.

따라서, 본 발명은 바람직하게는 하기 단계를 포함한다:

a) 대상체로부터의 샘플에서 FABP-3 의 양, 및 BNP-형 펩티드의 양을 결정하는 단계,

b) FABP-3 의 양을 기준량 (상기 마커에 대한) 과 비교하고 임의로 BNP-형 펩티드의 양을 기준량 (상기 마커에 대한) 과 비교하는 단계, 및

c) 비교 단계 b) 의 결과(들)을 기반으로 심방 세동을 진단하는 단계.

본 발명에 따라 언급되는 방법은 상기 언급된 단계로 본질적으로 이루어지는 방법 또는 추가 단계를 포함하는 방법을 포함한다. 게다가, 본 발명의 방법은 바람직하게 생체외, 보다 바람직하게는 시험관내 방법이다. 게다가, 상기에 분명하게 언급된 것들 이외의 단계를 포함할 수 있다. 예를 들어, AF 의 진단은 추가로 (본원의 다른 곳에서 설명된 바와 같은) 소형 ECG 장치를 사용하여 적어도 1 주의 기간 동안 상기 대상체로부터 수득한 간헐적 ECG 기록의 평가를 기반으로 할 수 있다. 또한, 추가 단계는 추가 마커의 결정 및/또는 샘플 전처리 또는 방법으로 수득된 결과의 평가에 관한 것일 수도 있다. 방법은 수동으로 수행할 수 있거나 또는 자동화로 보조될 수 있다. 바람직하게, 단계 (a), (b) 및/또는 (c) 는 단계 (a) 에서의 결정 또는 단계 (b) 에서 컴퓨터-실행 계산의 경우에 자동화를 통해서, 예를 들어, 적합한 로봇식 및 감지식 장비를 통해서 전체적으로 또는 부분적으로 보조될 수 있다.

본 명세서에서 사용되는 용어 "진단하는" 은 바람직하게는 본 발명의 방법에 따라서 언급되는 대상체가 발작성 심방 세동 (AF) 을 앓는지 또는 그렇지 않은지 여부를 평가하는 것을 의미한다. 예를 들어, 용어는 대상체가 발작성 AF 을 앓는지 또는 그렇지 않은지의 확률을 평가하는 것을 의미한다. 따라서, 대상체가 AF 를 앓을 확률이 낮거나 높은지 여부가 평가된다. 발작성 AF 를 앓는 것으로 진단된 대상체는 발작성 AF 를 앓을 확률이 높을 것이다 (예컨대 약 80% 이상의 확률). 발작성 AF 를 앓지 않는 것으로 진단된 대상체는 발작성 AF 를 앓을 확률이 낮을 것이다 (예컨대 약 15% 또는 15% 미만의 확률). 따라서, 본원에 사용된 표현 "발작성 심방 세동의 진단" 은 발작성 심방 세동의 진단에서 "보조" 또는 "도움" 으로 이해되어야 한다. 예를 들어, 의사는 발작성 심방 세동 진단에 도움을 줄 수 있다.

당업자가 이해하게 되는 바와 같이, 본 발명의 진단은 일반적으로 검사되는 대상체의 100%에 대해 정확한 것을 의도하는 것이 아니다. 용어 "진단하는" 은 바람직하게는 통계적으로 유의한 일부 대상체에 대해 정확한 진단이 이루어질 수 있는 것을 요구한다. 일부가 통계적으로 유의한지 여부는 다양한 잘 알려진 통계 평가 도구, 예를 들어, 신뢰 구간 결정, p-값 결정, 스튜던트 t-검정, 만-휘트니 (Mann-Whitney) 검사 등을 사용하여 당업자에 의해 지체 없이 결정될 수 있다. 자세한 내용은 Dowdy and Wearden, Statistics for Research, John Wiley & Sons, New York 1983 에서 확인할 수 있다. 바람직한 신뢰 구간은 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 이다. p-값은 바람직하게는, 0.4, 0.1, 0.05, 0.01, 0.005, 또는 0.0001 이다.

바이오마커는 다양한 질환 및 장애에서 증가될 수 있다는 것은 당분야에 공지되어 있다. 이는 FABP-3 및 BNP-형 펩티드에도 적용된다. 예를 들어, FABP-3 은 급성 관상 동맥 증후군 환자에서 증가하는 것으로 알려져 있는 반면, BNP-형 펩티드는 심부전 환자에서 증가하는 것으로 알려져 있다. 그러나, 이것은 당업자가 고려한다.

용어 "심방 세동" ("약어" AF 또는 AFib) 은 당분야에서 잘 알려져 있다. 본 명세서에서 사용시, 이 용어는 바람직하게는 비동조적 심방 활성과 그 결과로 인한 심방의 기계적 기능의 악화를 특징으로 하는 심실상성 부정빈맥이라고 한다. 특히, 이 용어는 빠르고 불규칙적인 박동을 특징으로 하는 비정상적인 심장 박동을 의미한다. 여기에는 심장의 2개의 윗쪽 심실이 관여된다. 정상 심장 리듬에서, 동방결절에 의해 발생되는 임펄스가 심장을 통해서 확산되고 심장 근육의 수축 및 혈액의 펌프 작용을 야기한다. 심방 세동에서, 동방결절의 규칙적인 전기 임펄스는 불규칙적인 심장 박동을 일으키는 혼란형의 빠른 전기 임펄스로 대체된다. 심방 세동의 증상은 심장의 심계항진, 실신, 호흡곤란, 또는 흉통이다. 그러나, 대부분의 에피소드는 무증상이다. 심전도검사 시에, 심방 세동은 심방심실 전도가 온전할 때 불규칙한, 빈번하게 빨라진 심실 반응과 연관된, 진폭, 형상 및 시기가 다양하게 되는 빠른 진동 또는 세동 파동에 의해 일관적인 P 파동이 대체되는 것을 특징으로 한다.

미국 심장병학 학회 (American College of Cardiology) (ACC), 미국 심장 협회 (American Heart Association) (AHA), 및 유럽 심장병학 학회 (European Society of Cardiology) (ESC) 는 다음과 같은 분류 체계를 제안한다 (그 전문이 참조로 본 명세서에 편입되는 문헌 [Fuster (2006) Circulation 114 (7): e257-354]을 참조하고, 예를 들어 이 문헌의 도 3을 참조함): 최초 검출된 AF, 발작성 AF, 지속성 AF, 및 영속성 AF.

AF 를 갖는 모든 사람은 초기에 최초 검출 AF 라고 하는 카테고리에 있다. 그러나, 대상체는 이전에 미검출된 에피소드를 가졌을 수 있거나 또는 갖지 않았을 수 있다. 대상체는 AF 가 1년이 넘는 동안 지속되었다면, 영속성 AF 를 앓는 것이다. 특히, 동리듬으로의 재전환은 일어나지 않는다 (또는 오직 의학적 중재에 의함). 대상체는 AF 가 7일 넘게 지속되면, 지속성 AF 를 앓는다. 대상체는 심방 세동을 종결하기 위해 약학적 또는 전기적 중재술을 요구할 수 있다. 따라서, 지속성 AF 는 에피소드에서 발생하지만, 부정맥은 자연스럽게 동리듬으로 다시 변환되지 않는다. 발작성 심방 세동은, 바람직하게, 최대 7일 동안 지속되는 심방 세동의 간헐적 에피소드를 의미한다. 발작성 AF 의 대부분의 사례에서, 에피소드는 24 시간 이내로 지속된다. 발작성 심방 세동의 에피소드는 자발적으로, 즉 의학적 중재 없이 종료된다. 발작성 AF 는 무증상이며 진단되지 않는다 (무증상 AF). 본 발명의 바람직한 에피소드 길이는 48 시간, 24 시간 또는 12 시간보다 짧다 (발작성 AF). 따라서, 본원에 사용되는 용어 "발작성 심방 세동" 은 바람직하게는, 48 시간 미만, 보다 바람직하게는 24 시간 미만, 가장 바람직하게는 12 시간 미만 내에 자가-종결되는 AF 의 에피소드로서 정의된다. 바람직하게는, 상기 에피소드는 재발성이다. 또한, 에피소드는 6 시간 미만 내에 자가-종결되는 것으로 예상된다.

지속성 및 발작성 AF 둘 모두는 몇 주 또는 몇 개월 내에 재발할 수 있으며, 발작성 및 지속성 AF 의 구별은 ECG 기록에 의해 제공된다: 환자가 2 회 이상의 에피소드를 경험한 경우 AF 는 재발성으로 간주된다. 부정맥이 자발적으로 종결되면, AF, 특히 재발성 AF는 발작성이라고 명명된다. AF 가 7 일 넘게 지속되면 지속성으로 명명된다.

대상이 발작성 또는 지속성 심방 세동을 앓는지 또는 AF 를 앓지 않는지 여부는 심외막 고밀도 맵핑으로 확인할 수 있다. 실시예 섹션에서 적용된 이 방법은 전기 활성화로 인한 세동파의 전도 패턴에 따라 동리듬, 발작성 및 지속성 AF 의 하위 그룹을 구별하는 다른 수단이다 (Eckstein et al., Transmural Conduction Is the Predominant Mechanism of Breakthrough During Atrial Fibrillation Evidence From Simultaneous Endo-Epicardial High-Density Activation Mapping. Circ Arrhythm Electrophysiol. (2013) 6, pp. 334-341; van Marion et al., Diagnosis and Therapy of Atrial Fibrillation: the Past, the Present and the Future Diagnosis and Therapy of Atrial Fibrillation: the Past, the Present and the Future JAFIB: Journal of Atrial Fibrillation;Aug/Sep2015, Vol. 8 Issue 2, p5 참조).

본 명세서에서 언급되는 용어 "대상체" 는 바람직하게, 포유동물이다. 포유동물은 제한없이, 가축 (예를 들어, 소, 양, 고양이, 개 및 말), 영장류 (예를 들어, 인간 및 인간이외의 영장류 예컨대 원숭이), 토끼 및 설치류 (예를 들어, 마우스 및 래트) 를 포함한다. 바람직한 구현예에서, 대상체는 인간이다. 대상체는 남성 또는 여성일 수 있다.

구현예에서, 대상체는 발작성 심방 세동에 대한 하나 이상의 위험 인자를 가질 수 있다. 바람직한 위험 인자는 연령 (다음 단락 참조, 예를 들어 대상체는 65 세 이상임), 고혈압, 예컨대 고혈압 치료제를 필요로 하는 고혈압, 심부전, 예컨대 심부전 AHA 단계 A - C, 뇌졸중 병력, 심장 수술 또는 절제 병력이다. 바람직하게는 대상체는 또한 건강 앱을 포함하는 원격 심전도 진단, 소형 장치로부터 힌트를 가질 수 있다.

바람직하게는, 검사되는 대상체는 50 세 이상, 보다 바람직하게는 60 세 이상, 가장 바람직하게는 65 세 이상이다. 또한, 검사되는 대상체는 70 세 이상을 고려한다.

상기에 기재된 바와 같이, 바이오마커 FABP-3 은 심방 세동 이외의 다양한 질환 및 장애에서 증가될 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서, 대상체는 이러한 질환 및 장애를 앓지 않는 것을 고려한다. 예를 들어, 대상체는 급성 관상 동맥 증후군을 앓지 않아야 하는 것을 고려한다.

본 발명의 방법의 구현예에서, 검사되는 대상체는 심장 질환, 특히 판막 수술이 필요한 심장 질환, 또는 관상 동맥 우회 수술이 필요한 심장 질환을 앓고 있다. 따라서, 대상체는 관상 동맥 질환, 즉 안정한 관상 동맥 질환을 앓고 있을 수 있다. 대상체는 심각한 심부전 환자까지의 다양한 정도의 심혈관 위험 프로파일을 가질 수 있다. 대상체는 심혈관 질환을 갖지 않을 수 있다.

바람직하게는, 발작성 심방 세동을 앓는 것으로 의심되는 대상체는 심방 세동의 적어도 하나의 증상을 보이는 대상체 및/또는 발작성 심방 세동 평가 방법을 수행하기 전에 심방 세동의 적어도 하나의 증상을 나타낸 대상체이다. 상기 증상은 일반적으로 일시적이고 수 초 간 발생될 수 있고 아주 빠르게 사라질 수 있다. 심방 세동의 증상은 현기증, 실신, 숨가뿜, 특히, 심계 항진을 포함한다. 따라서, 심방 세동의 적어도 하나의 증상은 현기증, 실신, 숨가뿜, 특히, 심장의 심계항진으로부터 선택된다. 바람직하게는, 대상체는 샘플을 수득하기 전에 6 개월 이내에, 보다 바람직하게는 1 개월 이내에, 보다 더 바람직하게는 2 주 이내에, 가장 바람직하게는 1 주 이내에 심방 세동의 적어도 하나의 증상을 보였다. 특히, 대상체는 샘플을 수득하기 전에 2 일 이내에 AF 의 적어도 하나의 증상을 보인 것으로 생각된다. 또한, 대상체는 샘플을 수득하기 전에 24 시간 이내에, 또는 심지어 12 시간 이내에 AF 의 적어도 하나의 증상을 보인 것으로 생각된다. 따라서, 대상체는 이러한 기간 중 하나 내에 심방 세동, 즉 발작성 심방 세동의 에피소드를 나타내는 것으로 의심된다. 따라서, 상기 언급된 본 발명의 방법에 따라 수행된 단계는 이러한 기간 내에 대상체가 최근에 심방 세동의 에피소드를 겪었는지 여부에 관계없이, 특히, 대상체가 샘플을 수득하기 전에 1 주 이내에, 특히 2 일 이내에 또는 24 시간 이내에 또는 12 시간 이내에 심방 세동의 에피소드를 겪었는지 여부에 관계없이, 진단을 가능하게 한다 (또는 진단에 도움을 주기 위해 더 정밀하게). 따라서, 본 발명은 또한 심방 세동, 특히 발작성 심방 세동의 최근 에피소드의 진단 방법을 고려한다.

본 발명의 방법의 바람직한 구현예에서, 대상체는 심방 세동, 특히 발작성 심방 세동의 기지 병력을 갖지 않는다. 따라서, 따라서, 대상체는 이전에, 즉 본 발명의 방법을 수행하기 전 (특히 대상체로부터의 샘플을 수득하기 전) 에 심방 세동을 앓는다고 진단받지 않았던 대상체이다. 그러나, 대상체는 이전에 미진단된 심방 세동의 에피소드를 가졌을 수 있거나 또는 갖지 않았을 수 있다.

본 발명의 방법 또는 사용의 구현예에서, 대상체는 전도 장애를 갖는다. 이러한 전도 장애는 심장 수술 동안 심방 세동의 침습적 전기적 맵핑으로 확인할 수 있다 (실시예 섹션 참조). 지방 침윤은 임펄스 전파를 방해하는 전기적 장벽으로서 전도 장애의 중요한 결정 요인이다.

또한, 시험되는 대상체는 바람직하게는 영구적 심방 세동 및 지속적 심방 세동을 앓지 않는다. 따라서, 대상체는 영구적 AF 및 지속성 AF 를 앓지 않는다. 또한, 대상체는 심방 조동을 앓지 않는 것으로 예상된다.

특히, 대상체는 본 발명의 방법을 수행하기 전에 (특히 검사할 샘플을 수득하기 전에) 심전도를 받지 않은 것으로 예상된다. 심율동전환은 심장 부정맥을 정상 리듬으로 전환시키는 의학적 시술이다. 이것은 전기적 심율동전환 또는 항부정맥제에 의한 심율동전환에 의해 획득될 수 있다.

바람직하게는, 환자는 샘플을 수득한 시점에 동리듬 상태이다 (즉 정상 동리듬). 따라서, 대상체는 바람직하게는 샘플을 수득한 시점에 심방 세동의 에피소드를 앓지 않는다.

정상 동리듬의 기준은 정상 심박수 (일반적으로 성인의 경우 1 분 당 60 내지 100 비트), 규칙적인 리듬, 연속적 P 파 사이의 최단 및 최장 기간에서 0.16 초 미만의 변화를 포함하고, 동방 결절은 심장 박동을 조정해야 한다 - 따라서, P 파는 둥글고, 모두 같은 모양이어야 하며, 모든 QRS 컴플렉스 앞에 1:1 의 비, 정상 P 파 축 (0 내지 +75 도) 으로 존재해야 한다. 정상 PR 간격, QRS 컴플렉스 및 QT 간격, 리드 I, II, aVF 및 V3-V6 에서 QRS 컴플렉스 양성, 및 리드 aVR 에서 음성.

용어 "샘플" 은 체액 샘플, 분리시킨 세포의 샘플 또는 조직 또는 장기 유래의 샘플을 의미한다. 체액의 샘플은 잘 알려진 기술을 통해 수득될 수 있고, 혈액, 혈장, 혈청, 소변, 림프액, 객담, 복수, 또는 임의의 다른 신체 분비물 또는 이의 유도체의 샘플을 포함한다. 조직 또는 장기 샘플은 예를 들어 생검에 의해 임의의 조직 또는 장기로부터 수득될 수 있다. 한 구현예에서, 조직 샘플은 심근 조직 샘플이다. 특히, 샘플은 우심방 부속물의 조직 샘플이다.

분리시킨 세포는 분리 기술, 예컨대 원심분리 또는 세포 분류에 의해 체액 또는 조직 또는 장기로부터 수득될 수 있다. 예를 들어, 세포-, 조직- 또는 장기 샘플은 바이오마커를 발현하거나 또는 생산하는 세포, 조직 또는 장기로부터 수득될 수 있다. 샘플은 냉동되고/되거나, 신선하고/하거나, 고정 (예를 들어, 포르말린 고정)되고/되거나, 원심분리되고/되거나 포매 (예를 들어, 파라핀 포매) 등이 될 수 있다. 세포 샘플은 물론, 샘플 중 마커의 양을 평가하기 이전에 다양한 잘 알려진 채취후 준비 및 저장 기술 (예를 들어, 핵산 및/또는 단백질 추출, 고정, 저장, 냉동, 한외여과, 농축, 증발, 원심분리 등) 이 가해질 수 있다.

바람직한 구현예에서, 샘플은 혈액 (즉, 전혈), 혈청 또는 혈장 샘플이다. 혈청은 혈액이 응고되게 한 후에 수득되는 전혈의 액상 분획이다. 혈청을 수득하기 위해서, 원심분리에 의해 응혈을 제거하고 상청액을 수집한다. 혈장은 혈액의 무세포 유체 부분이다. 혈장 샘플을 수득하기 위해서, 전혈은 항응고제-처리된 튜브 (예를 들어, 시트레이트-처리 또는 EDTA-처리 튜브) 에 채혈된다. 세포를 샘플로부터 원심분리에 의해 제거하고 상청액 (즉, 혈장 샘플) 을 수득한다.

본 발명의 방법의 바람직한 구현예에서, 방법은 단계 a) 에서 대상체로부터의 샘플에서 BNP-형 펩티드의 양을 결정하는 것 및 단계 b) 에서 BNP-형 펩티드의 양을 기준량, 즉 상기 BNP-형 펩티드에 대한 기준량과 비교하는 것을 추가로 포함한다.

본 발명의 방법과 관련하여 결정된 바이오마커는 당업계에 널리 공지되어 있다:

본원에 사용되는 용어 "FABP-3" 은 지방산 결합 단백질 3 을 지칭한다. FABP-3 은 심장 지방산 결합 단백질 또는 심장 유형 지방산 결합 단백질 (약칭 H-FABP) 로도 알려져 있다. 바람직하게는, 용어는 FABP-3 의 변형도 포함한다. 본원에 사용되는 FABP-3 은 바람직하게는 인간 FABP-3 에 관한 것이다. 인간 FABP-3 폴리펩티드를 코딩하는 폴리펩티드의 DNA 서열뿐만 아니라 인간 FABP-3 의 단백질 서열은 당업계에 널리 공지되어 있으며, Peeters 등에 의해 최초로 기재되었다 (Biochem. J. 276 (Pt 1), 203-207 (1991)). 또한, 인간 H-FABP 의 서열은 바람직하게는 Genbank entry U57623.1 (cDNA 서열) 및 AAB02555.1 (단백질 서열) 에서 확인할 수 있다. FABP 의 주요 생리학적 기능은 유리 지방산의 수송인 것으로 생각된다 (예를 들어 Storch et al., Biochem. Biophys. Acta. 1486 (2000), 28-44 참조). FABP-3 및 H-FABP 의 다른 이름은 FABP-11 (지방산 결합 단백질 11), M-FABP (근육 지방산 결합 단백질), MDGI (유방 유래 성장 억제제), 및 O-FABP 이다.

본 발명의 바람직한 구현예에서, FABP-3 폴리펩티드의 양이 결정된다. 본 발명의 다른 구현예에서, FABP-3 전사체의 양이 결정된다.

뇌 나트륨이뇨 펩티드 (Brain Natriuretic Peptide) 유형 펩티드 (본원에서 또한 BNP-유형 펩티드로 언급됨) 는 바람직하게는 pre-proBNP, proBNP, NT-proBNP, 및 BNP 로 이루어지는 군으로부터 선택된다. pre-프로 펩티드 (pre-proBNP 의 경우에 134 개의 아미노산) 는 짧은 신호 펩티드를 포함하고, 효소적으로 절단되어 프로 펩티드를 방출한다 (proBNP 의 경우에 108 개의 아미노산). 프로 펩티드는 N-말단 프로 펩티드 (NT-프로 펩티드, NT-proBNP 의 경우 76개 아미노산) 및 활성 호르몬 (BNP의 경우 32개 아미노산) 으로 추가로 절단된다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 뇌 나트륨이뇨 펩티드는 NT-proBNP, BNP, 및 이의 변이체이다. BNP는 활성 호르몬이고 이의 개별 불활성 대응물 NT-proBNP 보다 더 짧은 반감기를 갖는다. 바람직하게는, 뇌 나트륨이뇨 펩티드-유형 펩티드는 BNP (뇌 나트륨이뇨 펩티드), 더욱 바람직하게는 NT-proBNP (프로호르몬 뇌 나트륨이뇨 펩티드의 N-말단) 이다.

본 명세서에 언급된 바와 같은 바이오마커 (즉 FABP-3 또는 BNP-형 펩티드) 의 양을 "결정하는" 이라는 용어는 바이오마커의 정량화, 예를 들어, 본 명세서의 다른 곳에 기술된 적절한 검출 방법을 적용하여, 샘플 중 바이오마커의 수준을 결정하는 것을 의미한다. 용어 "측정하는" 및 "결정하는" 은 본원에서 상호 교환적으로 (바이오마커와 관련하여) 사용된다.

일 구현예에서, 바이오마커의 양은 바이오마커에 특이적으로 결합하는 작용제와 샘플을 접촉시키고, 그리하여 작용제와 상기 바이오마커 간에 복합체를 형성시켜서, 형성된 복합체의 양을 검출하고, 그리하여 상기 바이오마커의 양을 측정함으로써 측정된다.

FABP-3 폴리펩티드 또는 BNP-형 펩티드는 당분야에서 일반적으로 공지된 방법을 사용해 검출될 수 있다. 검출 방법은 일반적으로 샘플 중 바이오마커의 양을 정량화하는 방법 (정량적 방법) 을 포괄한다. 하기 방법 중 어떠한 것이 바이오마커의 정성적 및/또는 정량적 검출에 적합한가는 당업자에게 일반적으로 공지되어 있다. 샘플은 통상적으로, 예를 들어 상업적으로 입수할 수 있는, ELISA, RIA, 형광발광 기반 및 발광-기반 면역어세이와 같은 면역어세이 및 웨스턴을 사용해 단백질에 대해 어세이될 수 있다. 바이오마커를 검출하는 추가의 적합한 방법은 펩티드 또는 폴리펩티드에 특이적인 물리적 또는 화학적 특성, 예컨대 이의 정확한 분자량 또는 NMR 스펙트럼을 측정하는 것을 포함한다. 상기 방법은 예를 들어 바이오센서, 면역어세이에 커플링된 광학 장치, 바이오칩, 분석 장치, 예컨대 질량-분광계, NMR-분석기 또는 크로마토그래피 장치를 포함한다. 더 나아가서, 방법은 마이크로플레이트 ELISA-기반 방법, 전자동 또는 로봇식 면역어세이 (예를 들어, Elecsys™ 분석기로 이용가능), CBA (효소적 코발트 결합 어세이, 예를 들어 Roche-Hitachi™ 분석기에서 이용가능), 및 라텍스 응집 어세이 (예를 들어, Roche-Hitachi™ 분석기에서 이용가능) 를 포함한다.

본 명세서에서 언급되는 바이오마커 단백질의 검출을 위해서, 이러한 어세이 형식을 사용하는 광범위한 면역어세이 기술이 이용가능하며, 예를 들어, 미국 특허 제4,016,043호, 제4,424,279호, 및 제4,018,653호를 참조한다. 이들은 비경쟁 유형의 1-부위 및 2-부위 둘 모두 또는 "샌드위치" 어세이를 비롯하여, 전통적인 경쟁적 결합 어세이를 포함한다. 이들 어세이는 또한 표적 바이오마커와 표지된 항체의 직접 결합을 포함한다.

샌드위치 어세이는 가장 유용한 면역어세이 중 하나이다.

전기화학발광성 표지를 적용하는 방법이 잘 알려져 있다. 이러한 방법은 바닥 상태로 붕괴하여 전기화학발광을 방출하는 여기 상태, 산화에 의해서 획득하는 특별한 금속 착체의 능력을 이용한다. 고찰을 위해서, 문헌 [Richter, M.M., Chem. Rev. 104 (2004) 3003-3036]을 참조한다.

일 구현예에서, 바이오마커의 양을 측정하기 위해 사용되는 검출 항체 (또는 이의 항원 결합 단편) 은 루테늄화되거나 또는 이리듐화될 수 있다. 따라서, 항체 (또는 이의 항원 결합 단편) 은 루테늄 표지를 포함하게 될 것이다. 일 구현예에서, 상기 루테늄 표지는 비피리딘-루테늄(II) 착체이다. 또는 항체 (또는 이의 항원 결합 단편) 은 이리듐 표지를 포함하게 될 것이다. 일 구현예에서, 상기 이리듐 표지는 WO 2012/107419에 개시된 착체이다.

폴리펩티드 (예컨대 FABP-3 또는 BNP-형 펩티드)의 양을 측정하는 것은 바람직하게, (a) 폴리펩티드를 상기 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 작용제와 접촉시키는 단계, (b) (임의로) 미결합된 작용제를 제거하는 단계, (c) 결합된 결합제, 즉 단계 (a)에서 형성된 작용제의 복합체의 양을 측정하는 단계를 포함할 수 있다. 바람직한 구현예에 따라서, 상기 접촉, 제거 및 측정의 단계들은 분석기 유닛에 의해 수행될 수 있다. 일부 구현예에 따라서, 상기 단계들은 상기 시스템의 단일 분석기 유닛에 의해서 또는 서로 작동적으로 연통된 하나를 초과하는 분석기 유닛에 의해 수행될 수 있다. 예를 들어, 특정한 구현예에 따라서, 본 명세서에 개시된 상기 시스템은 상기 접촉 및 제거 단계를 수행하기 위한 제 1 분석기 유닛, 및 상기 측정 단계를 수행하는 수송 유닛 (예를 들어, 로봇식 팔대)에 의해 상기 제 1 분석기 유닛에 작동적으로 연결된 제 2 분석기 유닛을 포함할 수 있다.

바이오마커에 특이적으로 결합하는 작용제 (본 명세서에서 또한 "작용제"라고도 함) 는 결합된 작용제의 검출 및 측정을 가능하게 하는 표지에 공유적으로 또는 비공유적으로 커플링될 수 있다. 표지화는 간접 또는 직접 방법으로 수행될 수 있다. 직접 표지화는 결합제에 표지의 직접적 (공유적 또는 비공유적) 커플링을 포함한다. 간접 표지화는 제 1 결합제와 제 2 결합제의 (공유적 또는 비공유적) 결합을 포함한다. 제 2 결합제는 제 1 결합제에 특이적으로 결합해야만 한다. 상기 제 2 결합제는 적합한 표지와 커플링될 수 있고/있거나 제 2 결합제에 결합하는 제 3 결합제의 표적 (수용체) 일 수 있다. 적합한 제 2 및 보다 고차의 결합제는 항체, 2차 항체, 및 잘 알려진 스트렙타비딘-바이오틴 시스템 (Vector Laboratories, Inc.) 을 포함할 수 있다. 결합제 또는 기질은 또한 당분야에 공지된 하나 이상의 태그로 "태그화"될 수도 있다. 이러한 태그는 이후에 보다 고차의 결합제에 대한 표적일 수 있다. 적합한 태그는 바이오틴, 디곡시게닌, His-태그, 글루타티온-S-트랜스퍼라제, FLAG, GFP, myc-태그, 인플루엔자 A 바이러스 해마글루티닌 (HA), 말토스 결합 단백질 등을 포함한다. 펩티드 또는 폴리펩티드의 경우, 태그는 바람직하게는 N-말단 및/또는 C-말단에 존재한다. 적합한 표지는 적절한 검출 방법으로 검출할 수 있는 임의의 표지이다. 전형적인 표지는 금 입자, 라텍스 비드, 아크리단 에스테르, 루미놀, 루테늄 착체, 이리듐 착체, 효소적 활성 표지, 방사능 표지, 자성 표지 (예를 들어, 상자성 및 초상자성 표지를 포함하는 "자성 비드"), 및 형광발광 표지를 포함한다. 효소적 활성 표지는 예를 들어 홀스래디쉬 퍼옥시다제, 알칼리성 포스파타제, 베타-갈락토시다제, 루시퍼라제, 및 이의 유도체를 포함한다. 검출에 적합한 기질은 디-아미노-벤지딘 (DAB), 3,3'-5,5'-테트라메틸벤지딘, NBT-BCIP (4-니트로 블루 테트라졸륨 클로라이드 및 5-브로모-4-클로로-3-인돌릴-포스페이트로서, Roche Diagnostics에서 스톡 용액의 기성품으로 입수가능함), CDP-Star™ (Amersham Biosciences), ECF™ (Amersham Biosciences) 를 포함한다. 적합한 효소-기질 조합은 그 결과로 착색된 반응 생성물, 형광발광 또는 화학발광을 생성시킬 수 있고, 그것을 당분야에 공지된 방법에 따라 측정할 수 있다 (예를 들어, 감광 필름 또는 적합한 카메라 시스템을 사용함). 효소적 반응을 측정하기 위해서, 상기 제공된 기준이 유사하게 적용된다. 전형적인 형광발광 표지는 형광발광 단백질 (예컨대 GFP 및 이의 유도체), Cy3, Cy5, 텍사스 레드, 플루오레세인, 및 알렉사 염료 (예를 들어, Alexa 568) 를 포함한다. 추가의 형광발광 표지는 예를 들어, Molecular probes (Oregon)에서 입수할 수 있다. 또한 형광발광 표지로서 양자점의 사용이 고려된다. 방사능 표지는 공지된 임의 방법 및 적절한, 예를 들어 감광성 필름 또는 포스포르 이미저를 통해 검출될 수 있다.

폴리펩티드의 양은 또한 바람직하게는, 다음과 같이 측정될 수 있다: (a) 본 명세서의 다른 곳에 기술된 바와 같이 폴리펩티드에 대한 결합제를 포함하는 고형 지지체를 펩티드 또는 폴리펩티드를 포함하는 샘플과 접촉시키는 단계, 및 (b) 지지체에 결합된 펩티드 또는 폴리펩티드의 양을 측정하는 단계. 지지체 제작용 재료는 당분야에 잘 알려져 있으며, 특히 상업적으로 입수할 수 있는 컬럼 재료, 폴리스티렌 비드, 라텍스 비드, 자성 비드, 콜로이드 금속 입자, 유리 및/또는 실리콘 칩 및 표면, 니트로셀룰로스 스트립, 멤브레인, 시트, 듀라사이트, 반응 트레이의 웰 및 벽, 플라스틱 튜브 등을 포함한다.

다른 양상에서, 샘플은 형성된 복합체의 양을 측정하기 이전에 적어도 하나의 마커와 결합제 사이에 형성된 복합체로부터 제거된다. 따라서, 일 양상에서, 결합제는 고형 지지체 상에 고정될 수 있다. 다른 양상에서, 샘플은 세척 용액을 적용하여 고형 지지체 상에 형성된 복합체로부터 제거될 수 있다.

"샌드위치 어세이" 는 샌드위치 어세이 기술의 다양한 별형을 포괄하는 가장 유용하고 일반적으로 사용되는 어세이 중 하나이다. 간략하게, 전형적인 어세이에서, 미표지 (포획) 결합제가 고정되거나 또는 고형 기질 상에 고정될 수 있고, 검사하려는 샘플을 포획 결합제와 접촉시킨다. 결합제-바이오마커 복합체의 형성이 가능하도록 충분한 시간 기간 동안, 적합한 인큐베이션 기간 이후에, 검출가능한 신호를 생산할 수 있는 수용체 분자로 표지된 제 2 (검출) 결합제를 이어서 첨가하고 인큐베이션시켜서, 결합제-바이오마커-표지된 결합제의 다른 복합체의 형성에 충분한 시간이 되도록 한다. 임의의 미반응된 재료를 세척해 버릴 수 있으며, 바이오마커의 존재는 검출 결합제에 결합되는 수용체 분자에 의해 생산되는 신호의 관찰에 의해 결정된다. 그 결과는 가시적인 신호의 단순 관찰에 의해 정성화될 수 있거나, 또는 바이오마커의 기지량을 함유하는 대조군 샘플과의 비교에 의해 정량화될 수 있다.

전형적인 샌드위치 어세이의 인큐베이션 단계는 요구에 따라서 적절하게 가변적일 수 있다. 이러한 변동은 예를 들어 둘 이상의 결합제 및 바이오마커를 공동인큐베이션시키는 동시 인큐베이션을 포함한다. 예를 들어, 분석하려는 샘플 및 표지된 결합제 둘 모두를 동시에 고정된 포획 결합제에 첨가한다. 또한 분석하려는 샘플과 표지된 결합제를 먼저 인큐베이션시키고 이후에 고체상에 결합되었거나 또는 고체상에 결합할 수 있는 항체를 첨가하는 것도 가능하다.

특이적 결합제와 바이오마커 사이에 형성된 복합체는 샘플에 존재하는 바이오마커의 양에 비례하게 될 것이다. 적용하려는 결합제의 특이성 및/또는 감도는 특이적으로 결합할 수 있는 샘플에 포함된 적어도 하나의 마커의 비율 정도로 정의된다는 것을 이해하게 될 것이다. 측정을 수행할 수 있는 방법에 관한 추가의 상세 사항은 본 명세서의 다른 곳에서 또한 확인된다. 형성된 복합체의 양은 샘플에 실제로 존재하는 양을 반영하는 바이오마커의 양으로 변환되게 될 것이다.

용어 "결합제", "특이적 결합제", "피분석물-특이적 결합제", "검출제" 및 "바이오마커에 특이적으로 결합하는 작용제" 는 본 명세서에서 상호교환적으로 사용된다. 바람직하게, 상응하는 바이오마커에 특이적으로 결합하는 결합 모이어티를 포함하는 작용제에 관한 것이다. "결합제" 또는 "작용제"의 예에는 핵산 프로브, 핵산 프라이머, DNA 분자, RNA 분자, 앱타머, 항체, 항체 단편, 펩티드, 펩티드 핵산 (PNA) 또는 화학적 화합물이 있다. 바람직한 작용제는 측정하려는 바이오마커에 특이적으로 결합하는 항체이다. 본 명세서에서 용어 "항체" 는 광범위한 의미로 사용되며 제한없이 단일클론 항체, 다클론 항체, 다중특이적 항체 (예를 들어, 이중특이적 항체), 및 그들이 바람직한 항원-결합 활성을 나타낸다면 항체 단편 (즉, 이의 항원-결합 단편) 을 포함하는 다양한 항체 구조를 포괄한다. 바람직하게, 항체는 다클론 항체이다. 보다 바람직하게는, 항체는 단일클론 항체이다.

용어 "특이적 결합" 또는 "특이적으로 결합하다" 는 결합쌍 분자가 그들이 다른 분자에 유의하게 결합하지 않는 조건 하에서 서로와의 결합을 나타내는 결합 반응을 의미한다. 바이오마커로서 단백질 또는 펩티드를 언급시, 용어 "특이적 결합" 또는 "특이적으로 결합하다" 는 결합제가 적어도 10^-7 M의 친화성으로 상응하는 바이오마커에 결합하는 결합 반응을 의미한다. 용어 "특이적 결합" 또는 "특이적으로 결합하다" 는 바람직하게는 이의 표적 분자에 대한 적어도 10^-8 M 또는 보다 더 바람직하게 적어도 10^-9 M의 친화성을 의미한다. 용어 "특이적" 또는 "특이적으로" 는 샘플에 존재하는 다른 분자가 표적 분자에 특이적인 결합제에 유의하게 결합하지 않는 것을 표시하기 위해 사용된다.

본 명세서에서 사용시 용어 "양" 은 바이오마커의 절대량, 바이오마커의 상대적인 양 또는 농도를 비롯하여 그와 상관되거나 또는 그로부터 유도될 수 있는 임의 값 또는 매개변수를 포괄한다. 이러한 값 또는 매개변수는 직접 측정에 의해 상기 펩티드로부터 수득되는 모든 특별한 물리적 또는 화학적 특성 유래의 강도 신호 값, 예를 들어 질량 스펙트럼 또는 NMR 스펙트럼의 강도 값을 포함한다. 게다가, 본 설명의 다른 곳에서 명시하는 간접 측정에 의해 수득되는 모든 값 또는 매개변수, 예를 들어 펩티드에 대응하는 생물학적 판독 시스템으로부터 측정된 반응량 또는 특이적으로 결합된 리간드로부터 수득되는 강도 신호를 포괄한다. 상기에 언급된 양 또는 매개변수와 상관있는 값은 또한 모든 표준 수학적 작업을 통해 수득될 수 있다는 것을 이해해야 한다.

본 명세서에서 사용시 용어 "비교하는" 은 대상체로부터의 샘플 중 FABP-3 폴리펩티드 또는 BNP-형 펩티드의 양을 바이오마커의 기준량과 비교하는 것을 의미한다. 본 명세서에서 사용시 비교하는은 일반적으로 상응하는 매개변수 또는 값의 비교를 의미하는 것으로 이해하는데, 예를 들어 절대량은 절대 기준량과 비교되는 한편 농도는 기준 농도와 비교되거나 또는 샘플 중 바이오마커로부터 수득된 강도 신호는 기준 샘플로부터 수득된 동일 유형의 강도 신호와 비교된다. 비교는 수동으로 수행되거나 또는 컴퓨터-보조될 수 있다. 따라서, 비교는 컴퓨터 장비를 통해 수행될 수 있다. 기준량 및 대상체로부터의 샘플 중 바이오마커의 측정되거나 또는 검출된 양의 값은 예를 들어 서로 비교될 수 있고 상기 비교는 비교를 위한 알고리즘을 실행하는 컴퓨터 프로그램을 통해서 자동으로 수행될 수 있다. 상기 평가를 수행하는 컴퓨터 프로그램은 적합한 출력 형식으로 바람직한 평가를 제공하게 된다. 컴퓨터-보조 비교의 경우, 측정된 양의 값은 컴퓨터 프로그램을 통해 데이타베이스에 저장된 적합한 기준에 상응하는 값과 비교될 수 있다. 컴퓨터 프로그램은 비교의 결과를 추가로 평가할 수 있는데, 즉 적합한 출력 형식으로 바람직한 평가를 자동으로 제공할 수 있다. 컴퓨터-보조 비교의 경우, 측정된 양의 값은 컴퓨터 프로그램을 통해 데이타베이스에 저장된 적합한 기준에 상응하는 값과 비교될 수 있다. 컴퓨터 프로그램은 비교의 결과를 추가로 평가할 수 있는데, 즉 적합한 출력 형식으로 바람직한 평가를 자동으로 제공할 수 있다.

본 발명에 있어서, FABP-3 의 양 및 임의로 BNP-형 펩티드의 양 (특히 바이오마커 NT-proBNP 의 양) 은 기준과 비교될 것이다. 기준은 바람직하게 기준량이다. 본원에 사용되는 용어 "기준량" 은 (i) 발작성 심방 세동을 앓고 있는 대상체의 그룹 또는 (ii) 발작성 심방 세동을 앓지 않는 대상체의 그룹으로 대상체를 할당할 수 있게 하는 양을 의미한다. 적합한 기준량은 검사 샘플과 함께, 즉 동시에 또는 후속하여 분석하려는 기준 샘플로부터 결정될 수 있다.

기준량은 원칙적으로, 표준 통계학 방법을 적용하여 소정 바이오마커에 대한 평균치 또는 평균값을 기반으로 상기에 명시된 바와 같은 대상체의 코호트에 대해 계산될 수 있다. 특히, 검사, 예컨대 사건을 진단하는 것을 목표로 하거나, 또는 그렇지 않은 방법의 정확도는 이의 수신자 조작 특징 (ROC) 을 통해 최고로 설명된다 (특히 Zweig 1993, Clin. Chem. 39:561-577 참조). ROC 그래프는 관찰되는 전체 범위의 데이터에 대해 결정 역치값을 연속으로 변화시킴으로써 수득되는 모든 감도 대 특이도 쌍의 플롯이다. 진단 방법의 임상적 효율은 이의 정확도, 즉 일정한 예후 또는 진단으로 대상체를 정확하게 할당하는 이의 능력에 의존적이다. ROC 그래프는 구분하는데 적합한 한계치의 완전한 범위에 대해 감도 대 1 - 특이도를 그래프화하여 2개 분포 간의 중복부를 의미한다. y-축이 감도이거나, 또는 참-양성 분율이면, 이것은 참-양성 검사 결과의 수 대 참-양성의 수 및 거짓-음성 검사 결과의 수의 곱의 비율로서 정의된다. 이것은 또한 질환 또는 상태의 존재를 양성 (positivity) 으로서 언급한다. 이것은 영향받은 서브그룹으로부터 단독으로 계산된다. x-축이 거짓-양성 분율, 또는 1 - 특이도일 때, 이것은 거짓-양성 결과의 수 대 참-거짓의 수 및 거짓-양성 결과의 수의 곱의 비율로서 정의된다. 이것은 특이도의 지수이고 영향받지 않은 하위그룹으로부터 전체적으로 계산된다. 참-양성 및 거짓-양성 분율은 2개의 상이한 하위 그룹에 의한 검사 결과를 사용하여, 별도로 전체로 계산되기 때문에, ROC 그래프는 코호트에서 이벤트의 출현율과 독립적이다. ROC 그래프 상에서 각 점은 특정한 판단 한계치에 상응하는 감도/1 - 특이도 쌍을 대표한다. 완벽한 판별력 검사 (결과의 2개 분포에 중복부가 없음) 는 상부 좌측 코너를 통해 통과하는 ROC 그래프를 갖고, 여기서 참-양성 분율은 1.0, 또는 100% (완벽한 감도) 이고, 거짓-양성 분율은 0이다 (완벽한 특이도). 판별력이 없는 검사에 대한 이론적 그래프 (2개 그룹에 대한 결과의 동일한 분포) 는 하부 좌측 코너에서 상부 우측 코너로 45°사선이다. 대부분의 그래프는 이들 2개 극단 사이에 속한다. ROC 그래프가 45°사선 아래에 완전하게 속하면, 이것은 "양성도"에 대한 기준을 "초과"에서 "미만"으로 또는 그 반대로 반전시켜 쉽게 교정된다. 정성적으로, 그래프가 상부 좌측 코너에 가까울수록, 검사의 전체 정확도는 더 높아진다. 바람직한 신뢰 구간에 의존하여, 한계치는 각각 감도 및 특이도의 적절한 균형으로 소정 이벤트에 대한 진단을 가능하게 하는 ROC 그래프로부터 유래될 수 있다. 따라서, 상기 언급된 본 발명의 방법에 사용되는 기준, 즉 대상체의 코호트 중에서 발작성 심방 세동을 앓는 대상체와 발작성 심방 세동을 앓지 않는 대상체를 구별할 수 있게 하는 한계치는 바람직하게는 상기 기술된 바와 같이 상기 코호트에 대한 ROC를 확립하고 그로부터 한계치 양을 유도하여 생성시킬 수 있다. 진단 방법에 바람직한 감도 및 특이도에 의존하여, ROC 그래프는 적합한 한계치를 유도시킬 수 있다. 최적 감도는 발작성 심방 세동을 앓고 있는 대상체를 배제 (즉, 제외)시키는데 바람직한데 반해, 최적 특이도는 발작성 심방 세동을 앓고 있는 것으로 대상체를 평가 (즉, 포함)하는 것을 고려한다는 것을 이해하게 될 것이다. 특히, 대상체는 발작성 심방 세동을 앓고 있는 것으로 평가되는 것이 예상된다.

바람직한 구현예에서, 본원에서 용어 "기준량" 은 사전결정된 값을 의미한다. 바람직한 구현예에서, 상기 사전결정된 값은 발작성 심방 세동을 앓고 있는 대상체와 발작성 심방 세동을 앓지 않는 대상체를 구별할 수 있게 한다 (임의로 ECG 기록의 결과와 조합으로). 다른 구현예에서, 상기 기준량은 발작성 심방 세동을 앓지 않는 대상체를 진단할 수 있게 하며, 즉 심방 세동을 앓고 있는 대상체를 배제할 수 있게 한다.

특정 구현예에서, 기준량은 발작성 심방 세동을 앓지 않는 것으로 알려진 대상체 또는 대상체의 그룹 또는 발작성 심방 세동을 앓는 것으로 알려진 대상체 또는 대상체의 그룹으로부터 유래된다.

바람직하게는, 기준량보다 큰 대상체로부터의 샘플 중 FABP-3 의 양은 대상체가 발작성 심방 세동을 앓고 있음을 나타낸다.

또한 바람직하게는, 기준량보다 작은 대상체로부터의 샘플 중 FABP-3 의 양은 대상체가 발작성 심방 세동을 앓고 있지 않음을 나타낸다.

FABP-3 및 BNP-형 펩티드가 결정되는 경우, 하기가 바람직하게 적용된다:

바람직하게는, 기준량보다 큰 대상체로부터의 샘플 중 FABP-3 의 양 및 기준량보다 큰 대상체로부터의 샘플 중 BNP-형 펩티드의 양은 대상체가 발작성 심방 세동을 앓고 있음을 나타낸다. 따라서, 두 양이 증가한다.

또한 바람직하게는, 기준량보다 작은 대상체로부터의 샘플 중 FABP-3 의 양 및 기준량보다 작은 대상체로부터의 샘플 중 BNP-형 펩티드의 양은 대상체가 발작성 심방 세동을 앓고 있지 않음을 나타낸다.

본 발명의 방법의 바람직한 구현예에서, 방법은 소형 ECG 장치를 사용하여 적어도 1 주의 기간 동안 상기 대상체로부터 수득된 간헐적 ECG 기록의 평가를 추가로 포함한다. 이 구현예에서, 대상체가 발작성 심방 세동을 앓고 있는지 여부의 진단은 비교 단계 (b), 즉 기준량에 대한 FABP-3 의 양, 및 임의로 기준량에 대한 BNP-형 펩티드의 양, 및 간헐적 ECG 기록의 평가의 결과를 기반으로 한다.

심전도검사 (ECG로 축약) 는 심장의 전기적 활동을 기록하는 프로세스이다. ECG 장치는 신체를 통해 피부로 확산되는 심장에 의해 생성되는 전기 신호를 기록한다. 전기 신호의 기록은 ECG 장치에 포함된 전극과 검사 대상체의 피부를 접촉시켜 획득된다. 기록을 수득하는 프로세스는 비침습성 및 무위험성이다.

본 발명에 따르면, 소형 ECG 장치로 수득한 기록이 평가되어야 한다. 본원에서 사용되는 표현 "간헐적 ECG 기록 평가" 는 바람직하게는 대상체로부터 수득된 간헐적 ECG 기록 (즉 ECG 판독/ECG 스트립) 에서 심방 세동의 존재 또는 부재를 평가하는 것을 의미한다. 따라서, 기록이 해석된다. 상기 평가는 심장 전문의와 같은 의사에 의해 수행될 수 있고/있거나 컴퓨터 지원될 수 있다. 예를 들어, 사전 평가는 자동화 소프트웨어로 수행될 수 있다. 사전 평가 결과의 최종 평가는 의사에 의해 수행될 수 있다.

따라서, 본 발명의 방법에서 언급된 소형 ECG 장치는 심방 세동의 진단, 즉 (대상체로부터 수득한 ECG 기록에서) 심방 세동의 존재 또는 부재의 평가를 허용해야 한다.

AF 의 진단을 가능하게 하는 소형 ECG 장치는 다양한 제조업체에서 생산한다. 그 예는 심방 세동의 검출을 특별히 목표로 하는 장치 AfibAlert® (Lohman Technologies), Zenicor-ECG (Zenicor, Sweden), AliveCor Mobile ECG, Dimetek Micro Ambulatory ECG Recorder, ECG Check, HeartCheck™ PEN 소형 ECG, InstantCheck Real Time Display ECG 모니터, ReadMyHeart 장치, 또는 REKA E100 이다.

본 발명의 방법의 한 구현예에서, 소형 ECG 장치는 원-리드 장치이다. 다른 바람직한 구현예에서, 간헐적 ECG 기록을 수득하기 위해 사용되는 ECG 장치는 12-리드 ECG 장치이다.

본 발명의 한 구현예에서, 소형 ECG 장치는 검사될 대상체에 의해 작동되는 장치이다. 따라서, 본 발명의 방법에서 언급되는 소형 장치는 검사 대상체에 의한 자가-검사를 허용해야 한다. 다시 말해서, 평가될 기록은 자가-검사에 의해 수득되었다.

본 발명에 따르면, 소형 ECG 장치는 2 개의 건식 접촉 전극을 포함하는 것으로 예상된다. 따라서, 간헐적 ECG 기록은 건식 접촉 전극 상에 2 개의 손가락 (예컨대 좌우 엄지) 을 위치시킴으로써 수득되는 것으로 예상된다. 대안적으로, 건식 접촉 전극은 가슴과 같은 맨살에 대항하여 배치될 수 있다.

본 발명에 따른 ECG 기록은 간헐적 ECG 기록이어야 한다. 따라서, ECG 기록은 대상체 (예를 들어 홀터 모니터링의 경우) 로부터 지속적으로 수득되지 않아야 한다. 따라서, 평가될 ECG 기록은 적어도 1 주의 기간 동안 주기적으로 수득된 기록이다.

그러나, ECG 기록은 대상체로부터 적어도 하루에 한 번 수득된 것으로 예상된다. 따라서, 장치는 적어도 하루에 한 번 대상체에 의해 작동된다. 본원에서 사용되는 표현 "적어도 한 번" 은 한 번 또는 두 번, 세 번, 네 번, 다섯 번 등과 같은 한 번 초과를 의미한다. 한 구현예에서, ECG 기록은 하루에 두 번 이상 수득된다. 기록은 예를 들어 ECG 장치에 내장되거나 연결된 휴대폰을 통해 ECG 데이터베이스에 저장되거나 전송될 수 있다. 예를 들어, ECG 장치는 기록을 데이터베이스로 전송하는 휴대폰 (예를 들어 블루투스 또는 무선 연결을 통해) 연결될 수 있다. 전송은 앱 (예컨대 안드로이드 또는 iOS 앱) 을 통해 가능하다. 기록이 데이터베이스로 전송된 후, 기록은 심방 세동의 존재 또는 부재에 대해 평가될 수 있으며, 즉 의사에 의해 해석될 수 있다.

(단일) 기록의 길이는 통상적으로 약 10 초 내지 약 120 초이다. 한 구현예에서, 기록의 길이는 약 20 초 내지 약 60 초이다. 예를 들어, ECG 기록은 약 30 초 동안 두 전극 상에 엄지 손가락을 위치시킴으로써 수득될 수 있다.

또한, 대상체가 심방 세동의 증상을 보인 경우 (단, 대상체가 나타난 증상을 갖는 경우) 간헐적 ECG 기록이 수득되는 것이 특히 예상된다. 증상은 본원의 다른 곳에 설명되어 있다. 상기 증상은 일반적으로 일시적이고 수 초 간 발생될 수 있고 아주 빠르게 사라질 수 있다. 대상체가 심방 세동의 증상을 보이지 않는 경우, 기록은 상기한 바와 같이 적어도 하루에 한 번 수득되어야 한다.

한 구현예에서, 간헐적, 즉 비-연속적, ECG 기록은 적어도 4 일의 기간 동안 수득되어야 한다. 다른 구현예에서, 간헐적, 즉 비-연속적, ECG 기록은 적어도 1 주의 기간 동안 수득되어야 한다. 따라서, 평가될 기록이 적어도 7 개, 특히 적어도 14 개 있어야 한다. 한 구현예에서, 간헐적 ECG 기록은 적어도 10 일의 기간 동안 수득되어야 한다. 다른 구현예에서, 간헐적 ECG 기록은 적어도 2 주의 기간 동안 수득되어야 한다. 또한, 평가될 간헐적 ECG 기록은 1 주 내지 2 주, 특히 10 일 내지 2 주의 기간 동안 수득되는 것으로 예상된다. 적어도 하나의 기록에서 AF 의 존재는 AF, 특히 발작성 AF 의 진단을 의미한다.

방법이 상기한 바와 같은 간헐적 ECG 기록의 평가를 포함하는 경우, 대상체가 심방 세동을 앓고 있는지 여부에 대한 진단은 비교 단계 b) 의 결과 및 간헐적 ECG 기록의 평가를 기준으로 해야 한다:

한 구현예에서, 환자는 발작성 심방 세동을 앓지 않는 것으로 진단된다 (발작성 심방 세동 베제). 이는 간헐적 ECG 기록에서 심방 세동의 부재 및 기준량보다 작은 대상체로부터의 샘플 중 FABP-3 의 양에 의해 (및 BNP-형 펩티드가 결정되는 경우 BNP-형 펩티드의 양에 의해) 표시된다. 다시 말해서, 간헐적 ECG 기록에서 심방 세동의 부재와 함께 기준 미만의 FABP-3 (및 임의로 BNP-형 펩티드) 의 양은 발작성 심방 세동을 앓지 않는 대상체에 대한 지표이다. 따라서, 대상체는 발작성 심방 세동을 앓고 있을 확률이 낮다 (예컨대 10 또는 15% 미만의 확률).

한 구현예에서, 환자는 발작성 심방 세동을 앓는 것으로 진단된다. 이는 간헐적 ECG 기록에서 심방 세동의 존재 (즉, 적어도 하나의 기록에서 심방 세동의 존재) 및/또는 기준량 초과의 대상체로부터의 샘플 중 FABP-3 의 양 (및 임의로 BNP-형 펩티드의 양에 의해) 에 의해 나타난다. 다시 말해서, 간헐적 ECG 기록에서 심방 세동의 존재 및/또는 기준량 초과의 FABP-3 의 양 (및 임의로 BNP-형 펩티드의 양) 은 발작성 심방 세동을 앓는 대상체에 대한 지표이다. 따라서, 대상체는 발작성 심방 세동을 앓고 있을 확률이 높다 (예컨대 70 또는 80% 초과의 확률).

기준을 초과하는 FABP-3 의 양과 조합된 대상체로부터의 간헐적 ECG 기록에서 심방 세동의 부재는 심방 세동을 앓고 있는 대상체에 대한 지표일 수 있다. ECG 에서 심방 세동이 검출되지 않았더라도, 대상체가 심방 세동을 앓고 있을 가능성이 있다. 이는 예를 들어 홀터 모니터링에 의해 또는 삽입형 루프 기록기 (ILR) 에 의해 적어도 24 시간 동안 심혈관계의 전기적 활동을 지속적으로 모니터링함으로써 확인될 수 있다.

본 발명의 방법의 구현예에서, 상기 방법은 진단의 결과를 기반으로 적어도 하나의 적합한 지지 수단을 권고 및/또는 개시하는 단계를 추가로 포함한다. 상기 적어도 하나의 적합한 지지 수단은 심방 세동을 앓는 것으로 진단을 받은 대상체, 즉 AF 를 앓고 있을 가능성이 높은 대상체에게 권장되거나 개시되어야 한다.

본원에 사용되는 용어 "권장" 은 발작성 AF 를 앓는 것으로 진단을 받은 대상체에 적용될 수 있는 적합한 지지 수단에 대한 제안을 확립하는 것을 의미한다.

적합한 지지 수단은 AF 를 앓고 있는 대상체, 즉 발작성 AF 를 앓고 있을 가능성이 높은 대상체에 적용될 수 있는 모든 수단을 지칭한다. 예를 들어, 환자 관리 수단에는 (예를 들어 홀터 모니터링에 의한) 발작성 AF 의 확진 및/또는 약물 치료가 포함된다.

대상체가 발작성 심방 세동을 앓고 있는 경우, 적어도 하나의 항응고제에 의한 치료가 권장되거나 시작되어야 한다. 항응고제는 혈액 응고 및 관련 뇌졸중을 줄이거나 방지하는 것을 목표로 해야 한다. 바람직하게는, 항응고제는 헤파린, 쿠마린 유도체, 예컨대 와파린 또는 디쿠마롤, 조직 인자 경로 억제제 (TFPI), 항트롬빈 III, 인자 IXa 억제제, 인자 Xa 억제제, 인자 Va 의 억제제, 및 트롬빈 억제제로 이루어진 군으로부터 선택된다.

바람직한 구현예에서, 항응고제는 비-비타민 K 길항제 경구 항응고제 (약칭 NOAC) 이다. 이러한 항응고제는 혈전 형성을 억제하며 와파린과 달리 비타민 K 길항제가 아니다. 이러한 항응고제는 당업계에 잘 알려져 있으며, 예를 들어 Hijazi et al., 2015 에 기재되어 있다. ABC (연령, 바이오마커, 임상 병력) 뇌졸중 위험 점수: 심방 세동에서의 뇌졸중을 예측하기 위한 바이오마커-기반 위험 점수. 바람직한 NOAC 는 다비가트란, 리바록사반 및 아픽사반이다.

따라서, 본 발명은 또한 전술한 바와 같은 적어도 하나의 적합한 지지 수단을 권고 및/또는 개시하는 방법에 관한 것이다. 한 구현예에서, 방법은 본 발명의 방법, 즉 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같은 발작성 심방 세동을 진단하는 방법의 단계, 및 적어도 하나의 적합한 지지 수단을 권고 및/또는 개시하는 추가 단계를 포함한다. 한 구현예에서, 발작성 심방 세동은 항응고제를 투여함으로써 대상체에서 치료된다.

본 발명은 또한 심방 세동의 진단을 보조하는 방법에 관한 것이고, 상기 방법은 하기 단계를 포함한다:

a) 발작성 심방 세동의 진단 방법과 관련하여 본원에 언급된 대상체로부터 샘플을 수득하거나 제공하는 단계,

b) 상기 샘플에서 바이오마커 FABP-3 의 양 및 임의로 BNP-형 펩티드의 양을 결정하는 단계, 및

c) 바이오마커 FABP-3 의 결정된 양 및 임의로 BNP-형 펩티드의 결정된 양에 관한 정보를 대상체의 담당의에게 제공하여, 상기 대상체에서 발작성 심방 세동의 진단을 보조하는 단계.

담당의는 바이오마커(들)의 결정을 요청한 의사일 수 있다. 상기에 언급된 방법은 발작성 심방 세동의 진단에서 담당의를 보조하게 된다.

샘플을 수득하는 상기 언급된 방법의 단계 a) 는 대상체로부터 샘플의 채취를 포괄하지 않는다. 바람직하게, 샘플은 상기 대상체로부터 샘플을 수용하여 수득된다. 따라서, 샘플은 전달될 수 있다.

본 발명은 또한 하기를 포함하는 방법에 관한 것이다:

a) 바이오마커 FABP-3에 대한 검사 및 임의로 BNP-형 펩티드에 대한 검사를 제공하는 것 및

b) 발작성 심방 세동의 진단에서 상기 검사(들)에 의해 수득되거나 또는 수득가능한 검사 결과의 사용을 위한 지시서를 제공하는 것.

상기 언급된 방법의 목적은 바람직하게, 발작성 심방 세동의 진단을 보조하는 것이다.

지시서는 상기 본 명세서에 기술된 바와 같은 발작성 심방 세동을 진단하는 방법을 수행하기 위한 프로토콜을 함유할 것이다. 또한, 지시서는 FABP-3 의 기준량에 대한 적어도 하나의 값 및 임의로 BNP-형 펩티드의 기준량에 대한 적어도 하나의 값을 함유하게 될 것이다.

"검사" 는 바람직하게는 발작성 심방 세동을 진단하는 방법을 수행하도록 적합화된 키트이다. 상기 키트는 바이오마커 FABP-3에 대한 하나 이상의 검출제 및 임의로 BNP-타입 펩티드에 대한 하나 이상의 검출제를 포함해야 한다. 2종의 바이오마커에 대한 검출제는 단일 키트로 또는 2개의 개별 키트로 제공될 수 있다.

상기 시험에 의해 수득되거나 수득할 수 있는 시험 결과는 대상체로부터의 샘플 중 바이오마커(들)의 양에 대한 값이다.

게다가, 본 발명은 (상기 대상체에서) 발작성 심방 세동을 진단하기 위한 대상체로부터의 샘플 중

i) 바이오마커 FABP-3 및 임의로 BNP-형 펩티드 및/또는

ii) FABP-3 에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 검출제, 및 임의로 BNP-형 펩티드에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 검출제

의 용도에 관한 것이다.

상기 언급된 용도는 소형 ECG 장치를 사용하여 적어도 1 주의 기간 동안 상기 대상체로부터 수득된 소형 ECG 장치를 사용하여 수득된 간헐적 ECG 기록 및/또는 소형 ECG 장치의 사용을 추가로 포함할 수 있다.

상기 언급된 용도와 연관되어 언급된 용어들 예컨대 "샘플", "대상체", "검출제", "FABP-3", "특이적으로 결합하는", "발작성 심방 세동" 은 "발작성 심방 세동의 진단 방법"과 연관되어 정의되었다. 정의 및 설명은 그에 맞춰 적용된다.

도 1: 순환 FABP-3 의 상승된 수준에 의한 발작성 AF 의 진단 (중앙 값: AF 를 앓지 않는 환자 30 명의 샘플에서 1.92 ng/mL, 발작성 AF 를 앓는 환자 14 명의 샘플에서 2.84 ng/mL; 지속성 AF 를 앓는 환자 16 명의 샘플에서 2.75 ng/mL).
도 2: 도 1 의 도면 범례에 설명된 환자의 혈장 샘플에서 NT-proBNP 의 결과.
도 3: 도 1 의 범례에 설명된 발작성 AF 를 앓는 환자 14 명의 혈장 샘플 및 AF 를 앓지 않는 환자 30 명의 혈장 샘플에서의 hsCRP (혈장 샘플) 의 결과.
도 4: 알고리즘 RSEM 및 DESEQ2 를 적용한 RNAseq 분석을 기반으로 하는 AF (케이스) 또는 동리듬 (대조군) 환자의 우심방 부속물의 조직 샘플에서의 FABP-3 의 차등 발현. 발현의 배수 변화 (FC) = 1.279; FDR (거짓 발견 비율) = 0.009 (AF 를 앓지 않는 환자 39 명 및 AF 를 앓는 환자 11 명의 조직 샘플 분석).

실시예

하기 실시예는 본 발명을 설명할 것이다. 그러나 이들은 본 발명의 범주를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다.

실시예 1: 발작성 AF 의 검출

FABP3, NT-proBNP 및 hsCRP 수준은 혈액을 채혈한 n =60 환자의 혈장 샘플에서 결정되었고 CABG 또는 판막 수술로 인한 개흉 수술 이전에 바이오마커를 분석하였다. 상이한 유형의 AF, 발작성 AF 및 지속성 AF 또는 SR (대조군)의 증거는 동시적인 심내막-심외막 고밀도 활성화 맵핑으로 수술 동안 생성된다. AF, 발작성 AF 또는 지속성 AF 가 있는 환자 및 대조군은 성별, 연령 및 동반 질환에 대해서 대응시켰다.

심외막 고밀도 맵핑은 전기적 활성화로 인해 야기되는 세동파의 상이한 전도 패턴에 따라서 동리듬, 발작성 및 지속성 AF의 하위그룹 간에 판별을 위한 상이한 수단이다 (상기 인용된 Eckstein et al. 및 van Marion et al. 참조).

심외막 고밀도 맵핑은 예를 들어 심방 세동 에피소드의 부재 하에서도 발작성 심방 세동의 진단을 가능하게 한다. 따라서, AF 를 앓지 않는 대상체, 발작성 AF 를 앓는 대상체 및 지속성 AF 를 앓는 대상체 간에 신뢰할만한 구별을 가능하게 한다.

혈액 채혈 시점에,

ㆍ 발작성 AF, 임의로 동리듬 상태인 환자; n=14명 환자

ㆍ 지속성 AF 환자는 동리듬 상태가 아니었다; n=16명 환자

ㆍ 대조군 환자는 동리듬 상태였다; n=30명 환자.

데이터 평가에 따르면 기준값 초과 (연구에서 > 2.3 ng/mL) 의 FABP3 수준 (다른 바이오마커와 무관) 을 갖는 환자는 발작성 심방 세동이 의심되며 항 응고로부터 이익을 얻을 수 있다. 도 1 에 도시된 바와 같이 발작성 AF 의 검출에 대한 FABP3 의 관찰된 AUC 는 0.718 이었다. 지속성 AF 에 대한 관찰된 AUC 는 0.718 이었다. 놀랍게도, 발작성 AF 환자에서 지속성 AF 환자까지 순환 FABP3 수준의 점진적인 증가는 검출될 수 없는 것으로 밝혀졌다. 관찰된 중앙 순환 FABP3 값은 AF 를 앓지 않는 환자 30 명의 샘플에서 1.92 ng/mL 였고, 발작성 AF 를 앓는 환자 14 명의 샘플에서 2.84 ng/mL 였고; 지속성 AF 를 앓는 환자 16 명의 샘플에서 2.75 ng/mL 였다.

FABP3 과 대조적으로 NTproBNP 에 대하여 발작성 내지 지속적 또는 영구적 심방 세동 환자의 하위 그룹 중에서 순환 수준의 점진적인 증가가 도 2 에 도시된 바와 같이 관찰되었다. 발작성 AF 의 검출에 대한 NTproBNP 의 관찰된 AUC 는 지속성 AF 의 검출에 대하여 0.636 및 0.873 이었다. 따라서, 본원에서 분석된 환자에서, 바이오마커 FABP3 은 발작성 AF 의 개선된 진단을 가능하게 한다.

관찰된 중앙 순환 NTproBNP 값은 동리듬 상태의 환자 30 명의 샘플에서 154.31 pg/mL 였고; 발작성 AF 를 앓는 환자 14 명의 샘플에서 263.93 pg/mL 였고; 지속성 AF 를 앓는 환자 16 명의 샘플에서 1829.35 pg/mL 였다.

도 3 에 도시된 바와 같이, 발작성 AF 의 검출에 대한 관찰된 CRPhs 의 AUC 는 0.608 이었다. 지속성 AF 의 검출에 대한 CRPhs 의 관찰된 AUC 는 0.644 였다.

FABP3 는 CRPhs 에 비해 유리한 성능을 나타내며 따라서 발작성 심방 세동의 에피소드의 검출을 개별적으로 및/또는 NTproBNP 와 함께 보조할 수 있다는 것이 결론이다. 상승된 NTproBNP 수준과 함께 기준값 초과 (연구에서 > 2.3 ng/mL) 의 FABP3 수준을 갖는 환자는 발작성 심방 세동이 있는 것으로 의심되며 항 응고로부터 이익을 얻을 수 있다.

따라서, 동리듬 상태로 존재하는 환자에서 발작성 심방 세동의 진단은 단독 또는 NT-proBNP 와의 조합으로의 FABP3 의 향상된 수준의 검출이 달성될 수 있다.

실시예 2: AF 환자의 심장 조직에서 FABP3 의 차등 발현

n=39 환자의 우심방 부속물로부터의 심근 조직 샘플에서 차등 FABP3 발현 수준을 결정하였다.

RNAseq 분석

CABG 또는 판막 수술로 인해 개방형 흉부 수술 동안 심방 조직을 샘플링하였다. 심내막-심외막 고밀도 활성화 맵핑과 동시에 수술 중 AF 또는 SR (대조군) 의 증거를 생성하였다. AF 를 앓는 환자 대조군 환자는 성별, 연령 및 동반 질환과 관련하여 매칭시켰다.

심방 조직 샘플을 하기에 대하여 준비하였다:

ㆍ AF 환자; n=11 환자

ㆍ SR 의 대조군 환자; n=39 환자.

알고리즘 RSEM 및 DESEQ2 를 적용한 RNAseq 분석에서 FABP3 의 차등 발현을 결정하였다.

도 4 에 도시된 바와 같이, FABP3 발현은 39 명의 대조군 환자에 비해 지속성 AF 를 앓는 11 명의 환자의 분석된 심방 조직에서 상향 조절되는 것으로 밝혀졌다.

발현의 배수 변화 (FC) 는 1.279 였다. FDR (거짓 발견 비율) 은 0.009 였다. FABP3 의 변경된 발현은 손상된 최종 기관인 심방 조직에서 결정되었다. FABP3 mRNA 수준을 심방 조직의 고밀도 맵핑 결과와 비교하였다. 전기적 맵핑에 의해 특징 지어지는 바와 같이, 전도 장애를 갖는 심방 조직 샘플에서 상승된 FABP3 mRNA 수준이 검출되었다. 전도 장애는 지방 침윤 또는 간질성 섬유증에 의해 발생할 수 있다. 심방 세동 지지를 앓고 있는 환자의 심방 조직에서 FABP3 의 관찰된 차등 발현은 FABP 가 심근, 특히 우심방 부속물 및 상승된 혈청/혈장 역가로부터의 순환에서 방출되어 AF 의 에피소드의 검출을 돕는다.

FABP3 는 심장에서 혈액으로 방출되어 AF 에피소드의 검출을 보조할 수 있다는 것이 결론이다.

Claims

하기를 포함하는, 대상체에서 발작성 심방 세동을 진단하기 위한 방법:
(a) 발작성 심방 세동을 앓는 것으로 의심되는 대상체로부터의 샘플에서 FABP-3 (지방산 결합 단백질 3) 의 양을 결정하는 단계, 및
(b) 단계 a) 에서 결정된 양을 기준량과 비교하는 단계.
제 1 항에 있어서, 대상체가 샘플을 수득한 시점에 동리듬 상태인 대상체인 발작성 심방 세동을 진단하기 위한 방법.
제 1 항 및 제 2 항에 있어서, 샘플이 혈액, 혈청 또는 혈장 샘플인 발작성 심방 세동을 진단하기 위한 방법.
제 1 항 및 제 2 항에 있어서, 샘플이 심근 조직 샘플인 발작성 심방 세동을 진단하기 위한 방법.
제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 심방 세동을 앓는 것으로 의심되는 대상체가 심방 세동의 적어도 하나의 증상을 나타내거나 나타낸 발작성 심방 세동을 진단하기 위한 방법.
제 5 항에 있어서, 심방 세동의 적어도 하나의 증상이 현기증, 실신, 숨가뿜 및, 특히, 심장의 심계항진으로부터 선택되는 발작성 심방 세동을 진단하기 위한 방법.
제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 심방 세동의 기지 병력을 갖지 않는 발작성 심방 세동을 진단하기 위한 방법.
제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서, 기준량보다 큰 대상체로부터의 샘플 중 FABP-3 의 양이 대상체가 발작성 심방 세동을 앓는 것을 나타내는 발작성 심방 세동을 진단하기 위한 방법.
제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서, 기준량보다 작은 대상체로부터의 샘플 중 FABP-3 의 양이 대상체가 발작성 심방 세동을 앓지 않는 것을 나타내는 발작성 심방 세동을 진단하기 위한 방법.
제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 있어서, 단계 a) 에서 대상체로부터의 샘플에서 BNP-형 펩티드의 양을 결정하는 것, 및 단계 b) 에서 BNP-형 펩티드의 양을 기준량과 비교하는 것을 추가로 포함하는 발작성 심방 세동을 진단하기 위한 방법.
제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서, 소형 ECG 장치를 사용하여 적어도 1 주의 기간 동안 상기 대상체로부터 수득한 간헐적 ECG 기록의 평가를 추가로 포함하는 발작성 심방 세동을 진단하기 위한 방법.
제 1 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 인간 대상체인 발작성 심방 세동을 진단하기 위한 방법.
하기 단계를 포함하는, 발작성 심방 세동의 진단을 보조하는 방법:
a) 발작성 심방 세동의 진단 방법과 관련하여 본원에 언급된 대상체로부터 샘플을 수득하거나 제공하는 단계,
b) 상기 샘플에서 바이오마커 FABP-3 의 양 및 임의로 BNP-형 펩티드의 양을 결정하는 단계, 및
c) 바이오마커 FABP-3 의 결정된 양 및 임의로 BNP-형 펩티드의 결정된 양에 관한 정보를 대상체의 담당의에게 제공하여, 상기 대상체에서 발작성 심방 세동의 진단을 보조하는 단계.
발작성 심방 세동을 진단하기 위한 대상체로부터의 샘플 중
i) 바이오마커 FABP-3 및 임의로 BNP-형 펩티드 및/또는
ii) FABP-3 에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 검출제, 및 임의로 BNP-형 펩티드에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 검출제
의 용도.
제 14 항에 있어서, 검출제가 항체 또는 이의 단편인 용도.
제 14 항 및 제 15 항에 있어서, 샘플이 혈액, 혈청 또는 혈장 샘플이거나, 또는 샘플이 심근 조직 샘플인 용도.
제 14 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 샘플을 수득한 시점에 동리듬 상태인 대상체인 용도.
제 14 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 심방 세동의 기지 병력을 갖지 않는 용도.