BR112019026389A2 - método para diagnosticar a fibrilação atrial paroxística, método para auxiliar no diagnóstico de fibrilação atrial paroxística e seus usos - Google Patents
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Abstract
A presente invenção refere-se a um método para o diagnóstico da fibrilação atrial paroxística em um sujeito, compreendendo: determinar a quantidade de FABP-3 (proteína 3 ligante de ácido graxo) em uma amostra de um sujeito suspeito de sofrer fibrilação atrial paroxística e comparar a quantidade determinada com um valor de referência. O método da presente invenção pode compreender ainda a determinação de um peptídeo tipo BNP. A presente invenção abrange ainda um dispositivo adaptado para executar o método da presente invenção.
Description
[001] A presente invenção refere-se a um método para diagnosticar fibrilação atrial paroxística em um sujeito, compreendendo: determinar a quantidade de FABP-3 (proteína 3 ligante de ácido graxo) em uma amostra de um sujeito suspeito de sofrer fibrilação atrial paroxística e comparar a quantidade determinada com um valor de referência. O método da presente invenção pode compreender ainda a determinação de um peptídeo tipo BNP. Está abrangido ainda pela presente invenção um dispositivo adaptado para executar o método da presente invenção.
[002] A fibrilação atrial paroxística é definida como episódios recorrentes de fibrilação atrial (FA) que terminam espontaneamente em menos de sete dias, geralmente em menos de 24 horas. Ela pode ser autolimitada ou intermitente. A FA paroxística é comum (5-10% dos idosos) (consulte Prevalence, incidence and lifetime risk of atrial fibrillation: the Rotterdam study. Heeringa et al., Eur Heart J.. 2006; 27 (8): 949)). Os pacientes não tratados têm um risco aumentado de AVC sem a administração de terapia anticoagulante. O diagnóstico de arritmia cardíaca, como fibrilação atrial, geralmente envolve a determinação da causa da arritmia e a classificação da arritmia. O padrão-ouro para detectar a FA é o eletrocardiograma (ECG), realizado preferencialmente como ECG de 24 horas (monitoramento de Holter) No entanto, o monitoramento de Holter pode detectar FA apenas se a arritmia ocorrer no período de 24 horas da gravação do ECG. Assim, a FA paroxística frequentemente não é detectada pelo monitoramento de Holter.
[003] Várias publicações científicas lidam com a associação de biomarcadores em níveis avançados com fibrilação atrial (revisado em:
Biomarkers in Atrial Fibrillation: Investigating Biologic Plausibility, Cause, and Effect R. Becker Journal of Thrombosis and Thrombolysis 19 (1), 71-75, 2005).
[004] A determinação de NT-proBNP permite avaliar a disfunção sistólica. Além disso, testes altamente sensíveis para troponina permitem a detecção de lesões cardíacas subclínicas. Foi descrito que níveis elevados de ambos, Troponina T e NT-proBNP, predizem independentemente um risco maior de uma primeira recorrência de FA após 6 ou 12 meses (Circulating cardiovascular biomarkers in recurrent atrial fibrillation: data from the GISSI- Atrial Fibrillation Trial, R. Latini et al., J InternMed 2011; 269:160-171). Foi descrito ainda que pacientes podem ser selecionados com base nos níveis de proteína cardíaca, Troponina T e NT-proBNP para diagnosticar a FA paroxística que ocorrera antes e é capaz de detectar um evento que ocorrera até cerca de 1 semana e selecionar pacientes que podem se beneficiar da terapia de anticoagulação (WO 2014/072500).
[005] O biomarcador FABP-3 (proteína 3 ligante de ácido graxo), também conhecido como Proteína de Ligação a Ácido Graxo - Cardíaca (H- FABP), foi sugerido como um marcador precoce de infarto do miocárdio. À FABP-3 é uma proteína citoplasmática de baixo peso molecular - a FABP-3 humana é um polipeptídeo de 132 aminoácidos e 14,8 KDa - e está presente em abundância no miocárdio. Quando o miocárdio é lesionado, como no caso de infarto do miocárdio, as proteínas citoplasmáticas de baixo peso molecular, incluindo FABP-3, são liberadas na circulação e um nível elevado de FABP-3 é detectável em uma amostra de sangue (consulte, por exemplo, Ruzgar et al., Heart Vessels, 21; 209- 314 (2006). Outros nomes para a FABP-3 e H-FABP são: FABP-11 (proteína de ligação a ácido graxo 11), M-FABP (proteína de ligação a ácido graxo muscular), MDGI (inibidor de crescimento derivado de mama) e O-FABP.
[006] Níveis elevados de FABP-3 circulantes foram observados em pacientes com fibrilação atrial em curso (FA) em comparação com pacientes em ritmo sinusal (Otaki et al., Internal medicine, (2014) Vol. 53, No. 7, págs. 661-8).
[007] Níveis circulantes elevados de FABP-3 foram observados por estarem associados a eventos pós-operatórios de FA (Sezai et al, Carperiítide and Atrial Fibrillation after Coronary Bypass Grafting: The Nihon University Working Group Study of Low-Dose HANP Infusion Therapy during Cardiac Surgery Trial for Postoperative Atrial Fibrillation. Circulation: Arrhythmia and Electrophysiology, (4 de junho de 2015) vol. 8, No. 3, págs. 546-553).
[008] Um nível aumentado de FABP-3 foi associado à FA após cirurgia cardíaca, sugerindo que o dano isquêmico no miocárdico é um mecanismo subjacente contribuinte (Rader et a/., Perioperative heart-type fatty acid binding protein levels in atrial fibrillation after cardiac surgery. Heart rhythm: the official journal of the Heart Rhythm Society, (2013) Vol. 10, No. 2, págs.153-7).
[009] Yang et al, descrevem o uso combinado de betabloqueador e trimetazidina, um medicamento anti-isquêmico. As diretrizes de 2016 indicam que a trimetazidina podem ser considerada para o tratamento de angina pectoris estável com insuficiência cardíaca com fração de ejeção reduzida (ICFER) sintomática, quando angina persiste apesar do tratamento com um betabloqueador (ou alternativo), para aliviar a angina (tratamento antianginoso eficaz, seguro em IC). Essa recomendação baseia-se no conjunto de evidências sugerindo que a trimetazidina pode melhorar a capacidade funcional NYHA, a duração do exercício e a função do VE em pacientes com ICFER. Não há recomendação para trimetazidina apenas no contexto da IC sozinha. (Yang et al. Efficacy of metoprolol in combination with trimetazidine in patients with atrial fibrillation and its effects on serum concentrations of H- FABP. South China Journal of Cardiovascular Diseases, (2014) 20(2), 168-
170). Os autores da publicação descrevem o uso de trimetazidina em combinação com um betabloqueador em pacientes com FA com os desfechos de melhora dos sintomas clínicos, recorrência reduzida da FA e níveis reduzidos de FABP3. Não há indícios de que a FABP3 se associe significativamente à FA paroxística. Vários parâmetros clínicos diferentes que são aprimorados por esses medicamentos também podem causar a redução da FABP3. A trimetazidina é um medicamento anti-isquêmico, que melhora a utilização da glicose no miocárdio através da inibição do metabolismo dos ácidos graxos. A FABP3 desempenha um papel no transporte citossólico de ácidos graxos de cadeia longa e na proteção dos cardiomiócitos a partir dos ácidos graxos durante a isquemia. Sugere-se que a FABP3 como parâmetro de lesão cardíaca isquêmica se correlacione com o mecanismo anti-isquêmico da droga. Os betabloqueadores são anti-hipertensivos. O bloqueio de receptores beta reduz o débito cardíaco e a pressão sanguínea, bem como o fluxo sanguíneo renal e a taxa de filtração glomerular do rim. Níveis elevados de FABP3 podem resultar da depuração reduzida devido a disfunção renal. Sugere-se que a FABP3 como parâmetro da taxa de filtração glomerular reduzida se correlacione com o mecanismo anti-hipertensivo do fármaco.
[010] Os documentos US 2006/099608 e US 2007/218498 divulgam a FABP-3 dentro de uma lista de vários biomarcadores para o diagnóstico de condições vasculares.
[011] O documento US 2011/144205 divulga a triagem de pacientes assintomáticos com risco de insuficiência cardíaca. A FABP-3 está descrita em uma lista de vários biomarcadores.
[012] O documento US 2015/126385 divulga que a FABP-3 pode auxiliar no diagnóstico de acidente vascular cerebral isquêmico.
[013] De acordo com o documento US2016/258965, a FABP-3 pode ser indicativa do tempo decorrido desde o início do AVC, como um dos vários distúrbios cardíacos.
[014] Observou-se que níveis circulantes elevados de FABP-3 estão associados ao risco de AVC recorrente em pacientes com histórico de ataque isquêmico transitório prévio (Segal et al. Population-based study of blood biomarkers in prediction of subacute recurrent stroke. Stroke (2014) vol. 45, nº 10, págs. 2912-2917).
[015] É observado um aumento progressivo dos níveis circulantes entre os subgrupos de pacientes de fibrilação atrial paroxística a persistente ou permanente para a maioria dos biomarcadores, incluindo a proteína C reativa (PCR) (Li et al., Plasma oxidative stress and inflammatory biomarkers are associated with the sizes of the left atrium and pulmonary vein in atrial fibrillation patients. Clin Cardiol (2017) 40(2), págs. 89-942017, ou Kossaify et al., Perspectives of biomarkers in acute cardiac care. Biomarker Insights (2013) 8, págs.115-126).
[016] Assim, um aumento significativo da maioria dos biomarcadores de FA, como a PCR, é observado nos estágios posteriores da fibrilação atrial.
[017] Entretanto, um diagnóstico precoce da fibrilação atrial e, portanto, o diagnóstico de fibrilação atrial paroxística, é altamente desejado, pois a fibrilação atrial é um importante fator de risco para o acidente vascular cerebral e embolia sistêmica. A consequência mais temida de fibrilação atrial é o acidente vascular cerebral (isquêmico), que ocorre quando o fluxo sanguíneo para o cérebro é bloqueado por um coágulo ou por depósitos de gordura chamados de placas presentes no revestimento dos vasos sanguíneos. Independentemente da sintomatologia, os indivíduos com fibrilação atrial têm risco 5 vezes maior de AVC isquêmico. Além disso, acidentes vasculares cerebrais causados por complicações de FA tendem a ser mais graves do que os AVCs por outras causas subjacentes. O AVC causado por fibrilação atrial dá origem a deficiências mais debilitante e tem uma taxa de mortalidade mais elevada. Estima-se que pelo menos 30% de todos os pacientes com AVC tenham fibrilação atrial, de modo que a anticoagulação oral (OAC) para a prevenção de AVC se tornou um tratamento comum e benéfico.
[018] Como pode ser deduzido a partir do exposto acima, a detecção da fibrilação atrial paroxística é de particular relevância, mas desafiadora. Consequentemente, são necessários métodos confiáveis para o diagnóstico da fibrilação atrial paroxística.
[019] O problema técnico subjacente à presente invenção pode ser visto como o fornecimento de métodos para atender à necessidade mencionada acima. O problema técnico é resolvido pelos exemplos de realização caracterizados nas reivindicações e na descrição abaixo.
[020] Vantajosamente, verificou-se no contexto dos estudos da presente invenção que a determinação da quantidade de FABP-3 na amostra de um sujeito, permite o diagnóstico da fibrilação atrial paroxística. Ao contrário de vários outros biomarcadores da FA, a FABP-3 já está significativamente aumentada nos estágios iniciais da FA. Graças a presente invenção, pode-se avaliar se um sujeito sofre de fibrilação atrial paroxística ou não.
[021] Consequentemente, a presente invenção refere-se a um método para diagnosticar fibrilação atrial paroxística em um sujeito, compreendendo: (a) determinar a quantidade de FABP-3 (proteína 3 ligante de ácido graxo) em uma amostra de um sujeito com suspeita de sofrer fibrilação atrial paroxística; e (b) comparar a quantidade determinada na etapa (a) com um valor de referência.
[022] Em um exemplo de realização do método da presente invenção, o método compreende ainda a determinação da quantidade de um peptídeo tipo BNP em uma amostra do sujeito na etapa (a) e a comparação da quantidade do referido peptídeo tipo BNP com um valor de referência na etapa (b).
[023] Consequentemente, a presente invenção refere-se a um método para diagnosticar fibrilação atrial paroxística em um sujeito, compreendendo: (a) determinar a quantidade de FABP-3 (proteína 3 ligante de ácido graxo) e a quantidade de um peptídeo tipo BNP em uma amostra de um sujeito com suspeita de sofrer de fibrilação atrial paroxística; e (b) comparar as quantidades determinadas na etapa (a) com valores de referência.
[024] Em um exemplo de realização preferido, o diagnóstico da fibrilação atrial (FA) é baseado nos resultados da etapa de comparação (b).
[025] Consequentemente, a presente invenção compreende preferencialmente as etapas de; a) determinar a quantidade de FABP-3 e, opcionalmente, a quantidade de um peptídeo tipo BNP, em uma amostra do sujeito, b) comparar a quantidade de FABP-3 com uma quantidade de referência (para o referido marcador) e opcionalmente comparar a quantidade do peptídeo tipo BNP com uma quantidade de referência (para o referido marcador), e Cc) diagnosticar a fibrilação atrial com base no(s) resultado(s) da etapa de comparação (b).
[026] O método de acordo com a presente invenção inclui um método que consiste essencialmente nas etapas mencionadas acima ou um método que inclui etapas adicionais. Além disso, o método da presente invenção é, preferencialmente, um método ex vivo e mais preferencialmente um método in vitro. Além disso, pode compreender etapas além daquelas explicitamente mencionadas acima. Por exemplo, o diagnóstico da FA pode ser adicionalmente baseado na avaliação de registros de eletrocardiograma (ECG) intermitentes obtidos do referido sujeito durante um período de pelo menos uma semana usando um dispositivo de ECG portátil (conforme descrito em detalhes em outra parte do presente documento). Além disso, etapas adicionais podem estar relacionadas à determinação de outros marcadores e/ou pré- tratamentos de amostras ou avaliação dos resultados obtidos pelo método. O método pode ser realizado manualmente ou assistido por automação. De preferência, as etapas (a), (b) e/ou (c) podem ser total ou parcialmente auxiliadas por automação, por exemplo, por um equipamento robótico e sensorial adequado para a determinação na etapa (a) ou um cálculo implementado por computador na etapa (b).
[027] Preferencialmente, o termo “diagnóstico”, conforme utilizado no presente, significa avaliar se um sujeito, conforme referido de acordo com o método da presente invenção, sofre ou não sofre de fibrilação atrial (FA) paroxística. Por exemplo, o termo refere-se à avaliação da probabilidade do sujeito sofrer ou não de FA paroxística. Assim, avalia-se se um sujeito tem uma probabilidade baixa ou alta de sofrer de FA. Um sujeito que é diagnosticado com FA paroxística deve ter uma alta probabilidade de sofrer de FA paroxística (tal como uma probabilidade de cerca de 80% ou mais). Um sujeito que é diagnosticado como um sujeito que não sofre de FA paroxística deve ter uma baixa probabilidade de sofrer de FA paroxística (tal como uma probabilidade de cerca de 15% ou menos). Consequentemente, a expressão “diagnosticar a fibrilação atrial paroxística”, tal como utilizada na presente invenção, deve ser entendida como “auxiliar” ou “assistir” o diagnóstico da fibrilação atrial paroxística.
[028] Como compreenderão os técnicos no assunto, o diagnóstico da presente invenção não se destina a ser correta para 100% dos sujeitos testados. O termo “diagnosticar”, preferencialmente, exige que um diagnóstico correto pode ser feito em uma porção estatisticamente significativa de sujeitos. Pode-se determinar se uma porção é estatisticamente significativa sem esforços adicionais pelos técnicos no assunto utilizando diversas ferramentas de avaliação estatística conhecidas, tais como determinação de intervalos de confiança, determinação de valor p, teste t de Student, teste de Mann-Whitney etc. Detalhes são encontrados em Dowdy e Wearden, Statistics for Research, John Wiley & Sons, Nova lorque, 1983. Os intervalos de confiança preferidos são pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%. Os valores p são preferencialmente 0,1, 0,05, 0,01, 0,005 ou 0,0001.
[029] É conhecido no estado da técnica que os biomarcadores podem ser aumentados em várias doenças e distúrbios. Isto também se aplica à FABP-3 e aos peptídeos tipo BNP. Por exemplo, FABP-3 é conhecida por estar aumentada em pacientes com a síndrome coronária aguda, ao passo que os peptídeos tipo BNP são conhecidos por estarem aumentados em pacientes com insuficiência cardíaca. Entretanto, isso é levado em consideração pelo técnico no assunto.
[030] O termo “fibrilação atrial” (abreviado com o FA ou FAib) é bem conhecido no estado da técnica. Conforme utilizado no presente, o termo preferencialmente se refere a uma taquiarritmia supraventricular caracterizada por ativação atrial descoordenada com consequente deterioração da função mecânica atrial. Em especial, o termo se refere a um ritmo cardíaco anormal caracterizado por batimento rápido e irregular. Ele envolve as duas câmaras superiores do coração. Em um ritmo cardíaco normal, o impulso gerado pelo nódulo sinoatrial se espalha pelo coração e provoca a contração do músculo cardíaco e bombeamento de sangue. Na Fibrilação Atrial, os impulsos elétricos regulares do nódulo sinoatrial são substituídos por impulsos elétricos rápidos e desorganizados, que resultam em batimentos cardíacos irregulares. Os sintomas da Fibrilação Atrial são as palpitações cardíacas, desmaios, falta de ar ou dor no peito. Entretanto, a maioria dos episódios não apresenta sintomas. No eletrocardiograma, a Fibrilação Atrial é caracterizada pela substituição de ondas P consistentes por oscilações rápidas ou ondas fibrilatórias que variam em amplitude, formato e tempo, associadas a uma resposta ventricular irregular, frequentemente rápida, quando a condução atrioventricular está intacta.
[031] O Colégio Americano de Cardiologia (ACC), a Associação Americana do Coração (AHA) e a Sociedade Europeia de Cardiologia (ESC) propõem o seguinte sistema de classificação (vide Fuster (2006) Circulation 114 (7): e257-354 que está incorporado no presente como referência em sua totalidade, vide, por exemplo, a Figura 3 do documento): primeira FA detectada, FA paroxística, FA persistente e FA permanente.
[032] Todas as pessoas com FA estão inicialmente na categoria denominada primeira FA detectada. Entretanto, o sujeito pode ou não ter apresentado episódios prévios não detectados. Um sujeito sofre de FA permanente, se a FA persistir durante um período superior a um ano. Em especial, a conversão de volta ao ritmo sinusal não ocorre (ou apenas com intervenção médica). Um sujeito sofre de FA persistente, se a FA durar um período superior a 7 dias. O sujeito pode necessitar de intervenção farmacológica ou elétrica para terminar a Fibrilação Atrial. Assim, a FA persistente ocorre em episódios, mas a arritmia normalmente não se converte de volta ao ritmo sinusal espontaneamente. A Fibrilação Atrial Paroxística refere-se a um episódio intermitente de Fibrilação Atrial que não dura um período superior a 7 dias. Na maioria dos casos de FA paroxística, os episódios duram um período inferior a 24 horas. Os episódios de fibrilação atrial paroxística terminam espontaneamente, ou seja, sem a intervenção médica. À FA paroxística é assintomática e subdiagnosticada (FA silenciosa). Uma duração de episódio de FA preferida da presente invenção é inferior a 48 horas, 24 horas ou 12 horas (FA paroxística). Consequentemente, o termo “fibrilação atrial paroxística”, conforme utilizado na presente invenção, é definido como episódios de FA que terminam automaticamente, de preferência em menos de 48 horas, mais preferencialmente em menos de 24 horas e, mais preferencialmente em menos de 12 horas. De preferência, os referidos episódios são recorrentes. Além disso, prevê-se que os episódios terminem em menos de 6 horas.
[033] Tanto a FA persistente quanto a paroxística podem ser recorrentes em semanas ou meses, de modo que a distinção entre FA paroxística e a FA persistente é fornecida pelas gravações de ECG: Quando um paciente teve dois ou mais episódios, a FA é considerada recorrente. Se a arritmia termina espontaneamente, a FA, em particular a FA recorrente, é designada paroxística. A FA é declarada persistente se durar mais do que 7 dias.
[034] Se um sujeito sofre FA paroxística ou persistente ou se um sujeito não sofre de FA pode ser confirmado pelo Mapeamento Epicárdico de Alta Densidade. Este método aplicado na seção Exemplos é um meio diferente de discriminação entre subgrupos de ritmo sinusal, FA paroxística e persistente de acordo com diferentes padrões de condução de ondas de fibrilação resultantes de ativações elétricas (veja Eckstein et al., Transmural Conduction ls the Predominant Mechanism of Breakthrough During Atrial Fibrillation Evidence From Simultaneous Endo-Epicardial High-Density Activation Mapping.
Circ Arrhythm Electrophysiol. (2013) 6, págs. 334-341; van Marion et al, Diagnosis and Therapy of Atrial Fibrillation: the Past, the Present and the Future Diagnosis and Therapy of Atrial Fibrillation: the Past, the Present and the Future JAFIB: Journal of Atrial Fibrillation; Aug/Sep2015, Vol. 8 Issue 2, p5).
[035] O termo “sujeito”, conforme referido neste documento, é de preferência um mamífero. Mamíferos incluem, mas não se limitam a, animais domesticados (por exemplo, vacas, ovelhas, gatos, cachorros e cavalos), primatas (por exemplo, primatas humanos e não humanos tais como macacos), coelhos e roedores (por exemplo, camundongos e ratos). Em um exemplo de realização, o sujeito é um humano. O sujeito pode ser masculino ou feminino.
[036] Em um exemplo de realização, o sujeito pode ter pelo menos um fator de risco para fibrilação atrial paroxística. Os fatores de risco preferidos são a idade (consulte o próximo parágrafo, por exemplo, o sujeito tem 65 anos ou mais), hipertensão, tal como uma hipertensão que exige medicação anti-hipertensiva, insuficiência cardíaca, como insuficiência cardíaca com estágio AHA: A - C, histórico de acidente vascular cerebral, histórico de cirurgia cardíaca ou ablação. Preferencialmente, o sujeito também pode ter dicas de diagnóstico remoto por eletrocardiograma, dispositivos portáteis, incluindo aplicativos de saúde para dispositivos móveis.
[037] De preferência, o sujeito a ser testado tem 50 anos ou mais, mais preferencialmente 60 anos ou mais e mais preferencialmente 65 anos ou mais. Além disso, prevê-se que o sujeito a ser testado tenha 70 anos de idade ou mais.
[038] Conforme estabelecido acima, o biomarcador FABP-3 pode estar aumentado em várias doenças e distúrbios que não a fibrilação atrial. Em um exemplo de realização da presente invenção, prevê-se que o sujeito não sofra de tais doenças e distúrbios. Por exemplo, está previsto que o sujeito não sofra de uma síndrome coronariana aguda.
[039] Em um exemplo de realização do método da presente invenção, o sujeito a ser testado sofre de doença cardíaca, em particular de doença cardíaca que requer cirurgia valvar ou doença cardíaca que requer cirurgia de revascularização do miocárdio. Assim, o sujeito pode sofrer de doença arterial coronariana, isto é, doença arterial coronariana estável. O sujeito pode ter vários níveis de perfil de risco cardiovascular até pacientes com insuficiência cardíaca grave. O sujeito pode não ter doença cardiovascular.
[040] De preferência, um sujeito com suspeita de fibrilação atrial paroxística é um sujeito que mostra pelo menos um sintoma de fibrilação atrial e/ou um sujeito que mostrou pelo menos um sintoma de fibrilação atrial antes de executar o método para avaliar a fibrilação atrial paroxística. Esses sintomas geralmente são transitórios e podem surgir em alguns segundos e desaparecer com a mesma rapidez. Os sintomas da fibrilação atrial incluem tonturas, desmaios, falta de ar e em particular, palpitaições cardíacas. Consequentemente, o pelo menos um sintoma da fibrilação atrial é selecionado a partir de tonturas, desmaios, falta de ar e, em particular, palpitações cardíacas. Preferencialmente, o sujeito mostra pelo menos um sintoma de fibrilação atrial dentro de seis meses, mais preferencialmente dentro de um mês, ainda mais preferencialmente dentro de duas semanas e mais preferencialmente ainda dentro de uma semana antes da obtenção da amostra. Em particular, prevê-se que o sujeito tenha demonstrado pelo menos um sintoma de FA nos 2 dias anteriores à obtenção da amostra. Além disso, prevê- se que o sujeito tenha demonstrado pelo menos um sintoma de FA dentro de 24 horas ou mesmo dentro de 12 horas antes da obtenção da amostra. Assim, o sujeito tem suspeita de ter apresentado um episódio de fibrilação atrial, isto é, fibrilação atrial paroxística, dentro de um desses períodos. Consequentemente, as etapas executadas de acordo com o método da presente invenção mencionado acima permitem o diagnóstico (ou para ser mais preciso para um auxílio no diagnóstico) se o sujeito sofreu recentemente de um episódio de fibrilação atrial, ou não, dentro desses períodos, em particular, se o sujeito sofreu um episódio de fibrilação atrial dentro de uma semana, em particular dentro de dois dias ou dentro de 24 horas ou dentro de 12 horas antes da obtenção da amostra. Desse modo, a presente invenção também contempla um método para diagnosticar um episódio recente de fibrilação atrial, particularmente de fibrilação atrial paroxística.
[041] Em um exemplo de realização preferido do método da presente invenção, o sujeito não tem histórico conhecido de fibrilação atrial, em particular fibrilação atrial paroxística. Consequentemente, o sujeito não deve ter sido diagnosticado como portador de fibrilação atrial anteriormente, ou seja, antes de executar o método da presente invenção (em particular antes da obtenção da amostra do sujeito). Entretanto, o sujeito pode ou não ter apresentado episódios prévios de fibrilação atrial não detectados.
[042] Em um exemplo de realização do método ou uso da presente invenção, o sujeito tem distúrbios de condução. Tais distúrbios de condução podem ser confirmados pelo mapeamento elétrico invasivo da fibrilação atrial durante uma cirurgia cardíaca (consulte a seção Exemplos). À infiltração gordurosa é um determinante importante dos distúrbios de condução como barreira elétrica que impede a propagação do impulso.
[043] Além disso, o sujeito a ser testado, de preferência, não sofre de fibrilação atrial permanente e fibrilação atrial persistente. Assim, o sujeito não sofre de FA permanente nem de FA persistente. Além disso, prevê- se que o sujeito não sofra de flutter atrial.
[044] Em particular, prevê-se que o sujeito não tenha sido submetido à cardioversão antes de executar o método da presente invenção (em particular antes de obter a amostra a ser testada). A cardioversão é um procedimento médico pelo qual a arritmia cardíaca é convertida em um ritmo normal. Isso pode ser alcançado por cardioversão elétrica ou cardioversão com um agente antiarrítmico.
[045] De preferência, o paciente está no ritmo sinusal no momento em que a amostra é obtida (isto é, no ritmo sinusal normal). Consequentemente, o sujeito preferencialmente não sofre de um episódio de fibrilação atrial no momento em que a amostra é obtida.
[046] Os critérios para o ritmo sinusal normal incluem frequência cardíaca normal (classicamente de 60 a 100 batimentos por minuto para um adulto), ritmo regular, com variação inferior a 0,16 segundo nas durações mais curta e mais longa entre as ondas P sucessivas, o nó sinusal deve acompanhar o coração - portanto, as ondas P devem ser redondas, com o mesmo formato e estarem presentes antes de cada complexo QRS na proporção de 1:1, eixo da onda P normal (O a +75 graus). Intervalo PR normal, complexo QRS e intervalo QT, complexo QRS positivo nas derivações |, Il, avF e V3-V6 e negativo na derivação aVR.
[047] O termo “amostra” refere-se a uma amostra de um fluido corporal, uma amostra de células separadas ou uma amostra de um tecido ou órgão. As amostras de fluidos corporais podem ser obtidas por meio de técnicas bem conhecidas e incluem amostras de sangue, plasma, soro, urina, fluido linfático, expectoração, ascite, ou qualquer outra secreção corporal ou derivado desta. Amostras de tecido ou órgão podem ser obtidas a partir de qualquer tecido ou órgão, por exemplo, por biópsia. Em um exemplo de realização, a amostra de tecido é uma amostra de tecido do miocárdio. Em particular, a amostra é uma amostra de tecido do apêndice atrial direito.
[048] Células separadas podem ser obtidas a partir dos fluidos corporais ou tecidos ou órgãos por meio de técnicas de separação, tal como a centrifugação ou separação de células. Por exemplo, amostras de células, tecido ou órgãos podem ser obtidas a partir dessas células, tecidos ou órgãos que expressam ou produzem o biomarcador. As amostras podem ser congeladas, frescas, fixadas (por exemplo, fixadas em formalina), centrifugadas e/ou emblocadas (por exemplo, emblocadas em parafina), e etc. A amostra de células pode, naturalmente, ser submetida a uma série de técnicas preparativas de pós-coleta e armazenamento bem conhecidas (por exemplo, extração de ácido nucleico e/ou proteínas, fixação, armazenamento, congelamento, ultrafiltração, concentração, evaporação, centrifugação, etc.) antes de avaliar a quantidade do marcador na amostra.
[049] Em um exemplo de realização preferido, a amostra é uma amostra de sangue (ou seja, uma amostra de sangue total), soro ou plasma. Soro é a fração líquida do sangue total obtida após a coagulação do sangue. Para a obtenção do soro, o coágulo é removido por centrifugação e o sobrenadante é coletado. O plasma é a porção fluida acelular do sangue. Para a obtenção de uma amostra de plasma, o sangue total é coletado em tubos tratados com anticoagulantes (por exemplo, tubos tratados com citrato ou EDTA). As células são removidas da amostra por centrifugação e o sobrenadante (ou seja, a amostra de plasma) é obtido.
[050] Em um exemplo de realização preferido do método da presente invenção, o método compreende adicionalmente na etapa (a) a determinação da quantidade de um peptídeo tipo BNP em uma amostra do sujeito e na etapa (b) a comparação da quantidade do peptídeo tipo BNP com uma quantidade de referência, ou seja, a uma quantidade de referência para o referido peptídeo tipo BNP.
[051] Os biomarcadores que são determinados em conexão com o método da presente invenção são bem conhecidos no estado da técnica:
[052] O termo “FABP-3", conforme utilizado na presente invenção, refere-se à proteína 3 ligante de ácido graxo. A FABP-3 também é conhecida como proteína de ligação a ácidos graxos específica do coração ou proteína de ligação a ácidos graxos do tipo cardíaca (abreviado com H-FABP). Preferencialmente, o termo também inclui formas variantes da FABP-3. O termo FABP-3 conforme utilizado na presente invenção, refere-se preferencialmente à FABP-3 humana. A sequência de DNA do polipeptídeo que codifica o polipeptídeo FABP-3 humano, bem como a sequência proteica do polipeptídeo FABP-3 humano são bem conhecidas no estado da técnica e tais sequências foram descritas pela primeira vez por Peeters et al. (Biochem. J. 276 (Pt 1), 203-207 (1991)). Além disso, a sequência da H-FABP humana pode ser encontrada, de um modo preferido, no Genbank sob o número de entrada U57623.1 (sequência de cDNA) e AABO2555.1 (sequência de proteína). Acredita-se que a principal função fisiológica da FABP seja o transporte de ácidos graxos livres, vide, por exemplo, Storch et al., Biochem. Biophys. Acta. 1486 (2000), 28-44. Outros nomes para a FABP-3 e H-FABP são: FABP-11 (proteína de ligação a ácido graxo 11), M-FABP (proteína de ligação a ácido graxo muscular), MDGI (inibidor de crescimento derivado de mama) e O-FABP.
[053] Em um exemplo de realização preferido da presente invenção, é determinada a quantidade do polipeptídeo FABP-3. Em outro exemplo de realização preferido da presente invenção, é determinada a quantidade do transcrito de FABP-3.
[054] O peptídeo do tipo Peptídeo Natriurético Cerebral (BNP, acrônimo do inglês Brain Natriuretic Peptide) (também referido no presente como “peptídeo tipo BNP”) é preferencialmente selecionado a partir do grupo que consiste em pré-proBNP, proBNP, NT-proBNP e BNP. O peptídeo pré-pro (134 aminoácidos no caso do pré-proBNP) compreende um peptídeo sinal curto, que é enzimaticamente clivado para liberar o pró-peptídeo (108 aminoácidos no caso do proBNP). O pró-peptídeo é adicionalmente clivado em um pró-peptídeo N-terminal (peptídeo NT-pro, com 76 aminoácidos no caso do NT-proBNP) e no hormônio ativo (32 aminoácidos no caso do BNP). De preferência, os peptídeos natriuréticos cerebrais de acordo com a presente invenção são NT-proBNP, BNP ou variantes dos mesmos. O BNP é o hormônio ativo e possui uma meia-vida mais curta que sua respectiva contraparte inativa, o NT-proBNP. De preferência, o peptídeo tipo peptídeo natriurético cerebral é BNP (peptídeo natriurético cerebral) e mais preferencialmente NT-proBNP (N- terminal do pró-hormônio peptídeo natriurético cerebral).
[055] O termo “determinação” da quantidade de um biomarcador, conforme referido no presente, ou seja, de FABP-3 ou peptídeo tipo BNP, se refere à quantificação do biomarcador, por exemplo, para determinar a quantidade de biomarcador na amostra, empregando os métodos de detecção adequados descritos no presente. Os termos “medição”, “medir” e “determinar” são utilizados no presente de maneira intercambiável (em conexão com biomarcadores).
[056] Em uma realização, a quantidade de um biomarcador é medida através do contato da amostra com um agente que se liga especificamente ao biomarcador, consequentemente, formando um complexo entre o agente e o referido biomarcador, detectando a quantidade de complexo formado e, desse modo, medindo a quantidade do referido biomarcador.
[057] O polipeptídeo FABP-3 ou o peptídeo tipo BNP pode ser detectado usando métodos geralmente conhecidos no estado da técnica. Os métodos de detecção em geral abrangem métodos para quantificar a quantidade de um biomarcador na amostra (método quantitativo). É do conhecimento geral do técnico hábil no assunto quais dos métodos seguintes são adequados para a detecção qualitativa e/ou quantitativa de um biomarcador. As amostras podem ser convenientemente analisadas para, por exemplo, proteínas utilizando ensaios tipo Westerns (baseados em anticorpos) e imunoensaios, tais como ELISA, RIAs, imunoensaios baseados em fluorescência e luminescência, que estão comercialmente disponíveis. Outros métodos adequados para a detecção dos biomarcadores incluem a medição de uma propriedade física ou química específica para o peptídeo ou polipeptídeo, tais como a massa molecular precisa ou o espectro de RMN dos mesmos. Os referidos métodos compreendem, por exemplo, biossensores, dispositivos ópticos acoplados aos imunoensaios, biochips, dispositivos analíticos, tal como espectrômetros de massa, analisadores de RMN, ou dispositivos de cromatografia. Além disso, os métodos incluem os métodos baseados em microplaca de ELISA, imunoensaios totalmente automatizados ou robotizados (disponíveis, por exemplo, nos analisadores Elecsysº), CBA (um ensaio de ligação enzimática de cobalto, disponível, por exemplo, em analisadores Roche-Hitachiº), e análises de aglutinação em látex (disponíveis, por exemplo, em analisadores Roche-Hitachiº).
[058] Uma vasta gama de técnicas de imunoensaio que utilizam tais fundamentos de ensaio está disponível, consulte, por exemplo, as Patentes Norte-Americanas US 4.016.043, US 4.424.279 e US 4.018.653. Estes incluem tanto ensaios de sítio único ou sítio duplo como ensaios do tipo “sanduíche” do tipo não competitivo, bem como nos ensaios de ligação competitiva tradicionais. Estes ensaios também incluem a ligação direta de um anticorpo marcado a um biomarcador alvo.
[059] Os ensaios do tipo sanduíche estão entre os imunoensaios mais úteis.
[060] Os métodos que empregam marcadores eletroquimioluminescentes são bem conhecidos. Tais métodos utilizam a capacidade de complexos metálicos especiais para alcançar, por meio de oxidação, um estado excitado a partir do qual eles decaem para o estado fundamental, emitindo eletroquimiluminescência. Para uma revisão, consulte Richter, M.M., Chem. Rev. 104 (2004) 3003-3036.
[061] Em um exemplo de realização, o anticorpo de detecção (ou um fragmento de ligação ao antígeno) a ser usado para medir a quantidade de um biomarcador é rutenilado ou iridinilado. Consequentemente, o anticorpo (ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo) deve compreender um marcador (rótulo) de rutênio. Em um exemplo de realização, o referido marcador de rutênio é um complexo de bipiridina-rutênio(ll). Ou o anticorpo (ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo) deve compreender um marcador de irídio. Em um exemplo de realização, o referido marcador de irídio é um complexo, conforme divulgado no documento WO 2012/107419.
[062] A medição da quantidade de um polipeptídeo (tal como FABP-3 ou peptídeo tipo BNP) pode, preferencialmente, compreender as etapas de (a) colocar o polipeptídeo em contato com um agente que se liga especificamente ao referido polipeptídeo, (b) (opcionalmente) remover os agentes de ligação não ligados, (c) medir a quantidade de agente de ligação ligado, ou seja, o complexo do agente formado na etapa (a). De acordo com um exemplo de realização preferido, as referidas etapas de contato, remoção e medição podem ser realizadas por uma unidade analisadora. De acordo com alguns exemplos de realização, as referidas etapas podem ser executadas por uma única unidade analisadora do referido sistema ou por mais de uma unidade analisadora em comunicação operacional entre si. Por exemplo, de acordo com um exemplo de realização específico, o referido sistema divulgado no presente documento pode incluir uma primeira unidade analisadora para executar as referidas etapas de contato e remoção e uma segunda unidade analisadora, operacionalmente conectada à referida primeira unidade analisadora por uma unidade de transporte (por exemplo, um braço robótico), que executa a referida etapa de medição.
[063] O agente que se liga especificamente ao biomarcador (também referido no presente como “agente de ligação”) pode estar acoplado de maneira covalente ou não covalente a um marcador que permite a detecção e medição do agente ligado.
A marcação (também chamada de rotulação) pode ser feita por métodos diretos ou indiretos.
A marcação direta envolve o acoplamento direto do marcador (de maneira covalente ou não covalente) ao agente de ligação.
A marcação indireta envolve a ligação (de maneira covalente ou não covalente) de um agente de ligação secundário ao primeiro agente de ligação.
O agente de ligação secundário deve se ligar especificamente ao primeiro agente de ligação.
O referido agente de ligação secundário pode estar acoplado a um marcador adequado e/ou ser o alvo (receptor) de um agente de ligação terciário que se liga ao agente de ligação secundário.
Os agentes de ligação secundários e de ordem superior adequados podem incluir anticorpos, anticorpos secundários e o sistema bem conhecido de estreptavidina-biotina (Vector Laboratories, Inc.). O agente de ligação ou substrato também pode ser “etiquetado” (tagged) com uma ou mais etiquetas (tags), tal como é conhecido no estado da técnica.
Estas etiquetas, em seguida, podem ser alvos para os agentes de ligação de ordem superior.
Os tags adequados incluem a biotina, digoxigenina, His-Tag, Glutationa-S- Transferase, FLAG, GFP, myc-tag, hemaglutinina do vírus influenza A (HA), proteína de ligação de maltose, e similares.
No caso de um peptídeo ou polipeptídeo, o tag está preferencialmente na posição N-terminal e/ou C- terminal.
Os marcadores adequados são quaisquer marcadores detectáveis por um método de detecção apropriado.
Os marcadores típicos incluem as partículas de ouro, esferas de látex, éster de acridano, luminol, rutênio, marcadores enzimaticamente ativos, marcadores radioativos, marcadores magnéticos (por exemplo, esferas magnéticas, incluindo os marcadores paramagnéticos e superparamagnéticos) e marcadores fluorescentes.
Os marcadores enzimaticamente ativos incluem, por exemplo, peroxidase de rábano-silvestre, fosfatase alcalina, beta-galactosidase, luciferase e derivados dos mesmos.
Os substratos adequados para detecção incluem di-amino-
benzidina (DAB), 3,3'-5,5'-tetrametilbenzidina, NBT-BCIP (cloreto de 4- nitroazul- tetrazólio e 5-bromo-4-cloro-3-indolil-fosfato, disponível como solução estoque pronta para uso da Roche Diagnostics), CDP-Starº (Amersham Biosciences), ECFº (Amersham Biosciences). Uma combinação enzima- substrato adequada pode resultar em um produto reacional colorido, fluorescente ou quimioluminescente, que pode ser mensurado de acordo com métodos conhecidos no estado da técnica (por exemplo, utilizando um filme sensível à luz ou um sistema adequado de câmera). Para a medição da reação enzimática, os critérios indicados acima se aplicam de maneira análoga. Os marcadores fluorescentes típicos incluem as proteínas fluorescentes (tais como GFP e seus derivados), Cy3, Cy5, Vermelho do Texas (TexasRed), Fluoresceína, e os corantes Alexa (por exemplo, o Alexa 568). Outros marcadores fluorescentes estão disponíveis, por exemplo, pela Molecular Probes (Oregon). Além disso, o uso de pontos quânticos como marcadores fluorescentes está contemplado. Um marcador radioativo pode ser detectado por qualquer método conhecido e adequado, por exemplo, uma película sensível à luz ou um imageador de fósforo.
[064] A quantidade de um polipeptídeo também pode ser preferencialmente medida da seguinte forma: (a) colocar em contato um suporte sólido compreendendo um agente de ligação para o polipeptídeo, como descrito em outro lugar no presente documento, com uma amostra compreendendo o peptídeo ou polipeptídeo; e (b) mensurar a quantidade de peptídeo ou polipeptídeo que está ligada ao suporte. Os materiais para a fabricação de uma fase sólida (suporte sólido) são bem conhecidos no estado da técnica e incluem, inter alia, materials de colunas comercialmente disponíveis, esferas de poliestireno, esferas de látex, esferas magnéticas, partículas de metal coloidal, vidro e/ou chips de silício e superfícies, tiras de nitrocelulose, membranas, folhas, duracytes, poços e paredes de placas de reação, poços e paredes de recipientes de reação, tubos de plástico e etc.
[065] Ainda em um aspecto a amostra é removida do complexo formado entre o agente de ligação e, pelo menos, um marcador antes da medição da quantidade de complexo formado. Consequentemente, em um aspecto, o agente de ligação pode ser imobilizado em um suporte sólido. Ainda em outro aspecto, a amostra pode ser removida do complexo formado no suporte sólido através da aplicação de uma solução de lavagem.
[066] Os ensaios “sanduíche” estão entre os ensaios mais úteis e comumente utilizados, englobando diversas variações da técnica de ensaio sanduíche. Resumidamente, em um ensaio típico, um agente de ligação não marcado (de captura) é imobilizado ou pode ser imobilizado em um substrato sólido, e a amostra a ser testada é colocada em contato com o agente de ligação de captura. Após um período adequado de incubação, por um período de tempo suficiente para permitir a formação de um complexo “agente de ligação—biomarcador', um segundo agente de detecção marcado com uma molécula repórter capaz de produzir um sinal detectável é então adicionado e incubado por tempo suficiente para permitir a formação de outro complexo de “agente de ligação-biomarcador-agente de ligação marcado'. Qualquer material que não reagiu pode ser lavado, e a presença do biomarcador é determinada pela observação de um sinal produzido pela molécula repórter ligada ao agente de ligação de detecção. Os resultados podem ser tanto qualitativos pela simples observação do sinal visível, como podem ser quantitativos pela comparação com uma amostra de controle contendo quantidades conhecidas de biomarcadores.
[067] As etapas de incubação de um ensaio sanduíche típico podem variar conforme necessário e apropriado. Tais variações incluem, por exemplo, incubações simultâneas, em que dois ou mais agentes de ligação e o biomarcador são coincubados. Por exemplo, ambos, a amostra a ser analisada e um agente de ligação marcado são adicionados simultaneamente com um agente de ligação de captura imobilizado. Também é possível incubar primeiro a amostra a ser analisada e um agente de ligação marcado e depois adicionar um anticorpo ligado a uma fase sólida ou capaz de se ligar a uma fase sólida.
[068] O complexo formado entre um agente de ligação específico e o biomarcador deve ser proporcional à quantidade de biomarcador presente na amostra. Será entendido que a especificidade e/ou sensibilidade do agente de ligação a ser aplicado define o grau de proporção de pelo menos um marcador compreendido na amostra que é capaz de se ligar especificamente. Mais detalhes sobre como a medição pode ser realizada também são encontrados em outros lugares na presente invenção. A quantidade de complexo formado deve ser transformada em uma quantidade do biomarcador refletindo a quantidade de fato presente na amostra.
[069] Os termos “agente de ligação”, “agente de ligação específico”, “agente de ligação específico do analito”, “agente de detecção” e “agente que se liga especificamente a um biomarcador” são utilizados de maneira intercambiável no presente pedido. De preferência, os termos se referem a um agente que compreende uma porção de ligação que se liga especificamente ao biomarcador correspondente. Os exemplos de “agentes de ligação” ou “agentes” são: sonda de ácido nucleico, iniciador (primer) de ácido nucleico, molécula de DNA, molécula de RNA, aptâmero, anticorpo, fragmento de anticorpo, peptídeo, ácido nucleico peptídico (PNA) ou composto químico. Um agente preferido é um anticorpo que se liga especificamente ao biomarcador a ser medido. O termo “anticorpo” na presente invenção é utilizado no sentido mais amplo e abrange diferentes estruturas de anticorpo, incluindo, mas não se limitando, a anticorpos monoclionais, anticorpos policlonais, anticorpos multiespecíficos (por exemplo, anticorpos biespecíficos), e fragmentos de anticorpos contanto que eles exibam a atividade biológica desejada (ou seja, os fragmentos de ligação ao seu antígeno). Preferencialmente, o anticorpo é um anticorpo policlonal. De modo mais preferido, o anticorpo é um anticorpo monoclonal.
[070] O termo “ligação específica” ou “se liga especificamente” se refere a uma reação de ligação em que as moléculas do par de ligação exibem uma ligação entre si em condições nas quais elas não se ligam de maneira significante a outras moléculas. O termo “ligação específica" ou “se liga especificamente”, quando se refere a uma proteína ou peptídeo como biomarcador, se refere a uma reação de ligação em que um agente de ligação se liga ao biomarcador correspondente com uma afinidade de, pelo menos, 10" 7? M. O termo “ligação específica” ou “se liga especificamente” refere-se preferencialmente a uma afinidade de, pelo menos, 108 M ou, ainda mais preferencialmente, com uma afinidade de pelo menos 10º M para a sua molécula alvo. O termo “específico” ou “especificamente” é utilizado para indicar que outras moléculas presentes na amostra não se ligam significativamente ao agente de ligação específico para a molécula alvo.
[071] O termo “quantidade”, conforme utilizado no presente pedido, engloba a quantidade absoluta de um biomarcador conforme referido no presente, a quantidade ou concentração relativa do referido biomarcador, bem como qualquer valor ou parâmetro que se correlacione com o mesmo ou que possa ser derivado dele. Tais valores ou parâmetros compreendem os valores de sinal de intensidade de todas as propriedades físicas ou químicas específicas obtidas a partir dos referidos peptídeos através de medições diretas, por exemplo, os valores de intensidade em espectros de massa ou espectros de RMN. Além disso, são abrangidos todos os valores ou parâmetros que são obtidos através de medições indiretas especificadas em outro local da presente descrição, por exemplo, as quantidades de resposta medidas a partir de sistemas de leitura biológica em resposta aos peptídeos ou sinais de intensidade obtidos a partir de ligantes especificamente ligados. Deve ser entendido que os valores correlacionados com as quantidades ou parâmetros mencionados acima também podem ser obtidos por todas as operações matemáticas padrão.
[072] O termo “comparação”, conforme utilizado no presente, refere-se à comparação da quantidade do polipeptídeo FABP-3 ou do peptídeo tipo BNP na amostra do sujeito com a quantidade de referência do biomarcador. Deve ser entendido que a comparação, conforme utilizada no presente, refere-se, em geral, a uma comparação de parâmetros ou valores correspondentes, por exemplo, uma quantidade absoluta é comparada com uma quantidade de referência absoluta enquanto uma concentração é comparada com uma concentração de início ou um sinal de intensidade obtido a partir do biomarcador em uma amostra é comparado ao mesmo tipo de sinal de intensidade obtido a partir de uma amostra de referência. A comparação pode ser realizada manualmente ou assistida por computador. Assim, a comparação pode ser realizada através de um dispositivo de computação. O valor da quantidade medida ou detectada do biomarcador na amostra do sujeito e a quantidade de referência podem, por exemplo, ser comparadas entre si e a referida comparação pode ser realizada automaticamente por um programa de computador que executa um algoritmo para a comparação. O programa de computador que realiza a referida avaliação irá fornecerá a avaliação desejada em um formato de saída adequado. Para uma comparação assistida por computador, o valor da quantidade medida pode ser comparado com os valores correspondentes às referências adequadas que são armazenadas em uma base de dados por um programa de computador. O programa de computador pode, adicionalmente, avaliar o resultado da comparação, ou seja, fornecer automaticamente a avaliação desejada em um formato de saída adequado. Para uma comparação assistida por computador,
o valor da quantidade medida pode ser comparado com os valores correspondentes às referências adequadas que são armazenadas em uma base de dados por um programa de computador. O programa de computador pode, adicionalmente, avaliar o resultado da comparação, ou seja, fornecer automaticamente a avaliação desejada em um formato de saída adequado.
[073] De acordo com a presente invenção, a quantidade de FABP-3 e opcionalmente a quantidade de peptídeo tipo BNP (em particular a quantidade do biomarcador NT-proBNP) deve ser comparada com uma referência. A referência é preferencialmente uma quantidade de referência. O termo “quantidade de referência”, conforme utilizado na presente invenção, refere-se a uma quantidade que permite a alocação de um sujeito em (i) um grupo de sujeitos que sofrem de fibrilação atrial paroxística ou (ii) um grupo de sujeitos que não sofrem de fibrilação atrial paroxística. Uma quantidade de referência adequada pode ser determinada a partir de uma amostra de referência a ser analisada em conjunto, ou seja, simultaneamente ou subsequentemente, com a amostra teste.
[074] Os valores de referência podem, em princípio, ser calculados para uma coorte de sujeitos, conforme especificado acima, com base nos valores médios ou médios de um determinado biomarcador, aplicando métodos estatísticos padrão. Em particular, a precisão de um teste, como um método que visa diagnosticar ou não um evento, é mais bem descrita por suas características de operação do receptor (ROC) (veja especialmente Zweig 1993, Clin. Chem. 39: 561-577). O gráfico de ROC representa um gráfico de todos os pares de sensibilidade versus especificidade resultantes da variação contínua do limiar de decisão ao longo de todo intervalo de dados observados. O desempenho clínico de um método diagnóstico depende de sua precisão, isto é, sua capacidade de alocar corretamente os sujeitos em um determinado prognóstico ou diagnóstico. O gráfico de ROC indica a sobreposição entre as duas distribuições, traçando o gráfico da sensibilidade versus 1 - especificidade para o intervalo completo de limiares adequados para realizar uma distinção.
No eixo y está a sensibilidade, ou a fração verdadeiro- positiva, que é definida como a proporção entre o número de resultados de testes verdadeiro-positivos para o produto do número de resultados de testes verdadeiro-positivos e número de resultados de testes verdadeiro-negativos.
Isso também foi referido como positividade na presença de uma doença ou condição.
É unicamente calculado a partir do subgrupo afetado.
No eixo x está a fração falsa-positiva, ou 1-especificidade, que é definida como a proporção entre o número de resultados falso-positivos para o produto do número de resultados verdadeiro-negativos e número de resultados falso-positivos.
É um índice da especificidade e é inteiramente calculado a partir do subgrupo não afetado.
Uma vez que as frações verdadeiro-positivas e falso-positivas são inteiramente calculadas separadamente, utilizando os resultados do teste de dois subgrupos diferentes, o gráfico ROC é independente da prevalência do evento na coorte.
Cada ponto no gráfico ROC representa um par de sensibilidade/1 - especificidade correspondente a um limiar de decisão especial.
Um teste com a discriminação perfeita (sem sobreposição das duas distribuições de resultados) possui um gráfico ROC que passa através do canto superior esquerdo, em que a fração verdadeiro-positiva é de 1,0, ou 100% (sensibilidade perfeita), e a fração falso-positiva é O (especificidade perfeita). O gráfico teórico para um teste sem a discriminação (distribuições idênticas de resultados para os dois grupos) é uma linha diagonal de 45º a partir do canto inferior esquerdo para o canto superior direito.
A maioria dos gráficos fica entre esses dois extremos.
Se o gráfico ROC cair completamente abaixo da diagonal de 45º, ele é facimente remediado através da inversão do critério de “positividade” a partir de “superior a” a “inferior a” ou vice-versa.
Qualitativamente, quanto mais próximo o gráfico estiver para o canto superior esquerdo, maior será a precisão global do teste. Dependendo de um intervalo de confiança desejado, um limiar pode ser derivado da curva ROC possibilitando o diagnóstico para um determinado evento com um balanço adequado de sensibilidade e especificidade, respectivamente. Consequentemente, a referência a ser utilizada para o método mencionado acima da presente invenção, isto é, um limiar que possibilita diferenciar entre sujeitos que estão em risco de recorrência de Fibrilação Atrial daqueles que não estão em risco de recorrência de Fibrilação Atrial pode ser gerada, de preferência, estabelecendo um gráfico ROC para a referida coorte conforme descrito acima e derivando uma quantidade limiar a partir da mesma. Dependendo da sensibilidade e especificidade desejadas para um método diagnóstico, o gráfico ROC possibilita derivar um limiar adequado. Deve ser compreendido que uma sensibilidade ótima é desejada para excluir um sujeito com risco de recorrência de Fibrilação Atrial paroxística (isto é, uma exclusão), considerando-se uma especificidade ideal para um sujeito ser avaliado como estando em risco de recorrência de Fibrilação Atrial. (isto é, uma inclusão). Em uma realização, o método da presente invenção possibilita a previsão de que um sujeito está em risco de recorrência de Fibrilação Atrial paroxística.
[075] Em certos exemplos de realização, o termo “quantidade de referência” no presente pedido refere-se a um valor predeterminado. Em um exemplo de realização preferido, o referido valor predeterminado deve permitir a diferenciação entre um sujeito que sofre de fibrilação atrial paroxística e um sujeito que não sofre de fibrilação atrial paroxística (opcionalmente em combinação com os resultados dos registros ECG). Em outro exemplo de realização, a referida quantidade de referência deve permitir diagnosticar que um sujeito não sofre de fibrilação atrial paroxística, ou seja, deve excluir um sujeito que sofre de fibrilação atrial.
[076] Em determinados exemplo de realização, a quantidade de referência é derivada de um sujeito ou um grupo de sujeitos que não sofrem fibrilação atrial paroxística ou de um sujeito ou grupo de sujeitos que sabidamente sofrem de fibrilação atrial paroxística.
[077] De preferência, uma quantidade de FABP-3 na amostra do sujeito que é maior que a quantidade de referência indica que o sujeito sofre de fibrilação atrial paroxística.
[078] De modo também preferido, uma quantidade de FABP-3 na amostra do sujeito que é menor do que a quantidade de referência indica que o sujeito não sofre de fibrilação atrial paroxística.
[079] O seguinte aplica-se preferencialmente, se FABP-3 e um peptídeo tipo BNP forem determinados:
[080] De preferência, uma quantidade de FABP-3 na amostra do sujeito que é maior que a quantidade de referência e uma quantidade de peptídeo tipo BNP na amostra do sujeito que é maior que a quantidade de referência indica que o sujeito sofre de fibrilação atrial paroxística. Assim, ambas as quantidades estão aumentadas.
[081] De modo também preferido, uma quantidade de FABP-3 na amostra do sujeito que é menor do que a quantidade de referência e uma quantidade de peptídeo tipo BNP na amostra do sujeito que é menor do que a quantidade de referência indica que o sujeito não sofre de fibrilação atrial paroxística.
[082] Em um exemplo de realização preferido do método da presente invenção, o método compreende ainda a avaliação de registros de ECG intermitentes obtidos a partir do referido sujeito durante um período de pelo menos uma semana usando um dispositivo de ECG portátil. Neste exemplo de realização, o diagnóstico se o sujeito sofre ou não de fibrilação atrial paroxística é baseado nos resultados da etapa de comparação (b), ou seja, da quantidade de FABP-3 com a quantidade de referência e,
opcionalmente, da quantidade de peptídeo tipo BNP com a quantidade de referência e a avaliação de registros de ECG intermitentes.
[083] O eletrocardiograma (abreviada como ECG) é o processo de registrar a atividade elétrica do coração. Um dispositivo de ECG registra os sinais elétricos produzidos pelo coração que se espalham pelo corpo para a pele. A gravação do sinal elétrico é obtida pelo contato com a pele do sujeito sendo avaliado com os eletrodos compreendidos pelo dispositivo de ECG. O processo de obtenção da gravação é não invasivo e livre de riscos.
[084] De acordo com a presente invenção, as gravações obtidas com um dispositivo de ECG portátil devem ser avaliadas. A expressão “avaliação de registros de ECG intermitentes”, conforme utilizado no presente, refere-se preferencialmente à avaliação da presença ou ausência de fibrilação atrial nas gravações de ECG intermitentes (ou seja, leituras de ECG/tiras de ECG) obtidas a partir do sujeito. Assim, as gravações são interpretadas. Essa avaliação pode ser realizada por um médico como cardiologista e/ou pode ser assistida por computador. Por exemplo, uma pré-avaliação pode ser feita por um software automatizado. A avaliação final dos resultados pré-avaliados pode ser realizada por um médico.
[085] O dispositivo de ECG portátil, conforme referido no método da presente invenção, deve, portanto, permitir o diagnóstico da fibrilação atrial, isto é, a avaliação da presença ou ausência de fibrilação atrial (nos registros de ECG obtidos a partir do sujeito).
[086] Os dispositivos de ECG portátil que permitem o diagnóstico de FA são produzidos por vários fabricantes. Exemplos são o AfibAlertº da Lohman Technologies, um dispositivo voltado especificamente para a detecção da fibrilação atrial, o Zenicor-ECG da Zenicor, Suécia, o AliveCor Mobile ECG, o gravador de ECG ambulatorial Dimetek Micro, o ECG Check, o eletrocardiograma portátil HeartCheckº PEN, o monitor ECG InstantCheck Real
Time Display, o dispositivo ReadMyHeart ou REKA E100.
[087] Em um exemplo de realização do método da presente invenção, o dispositivo de ECG portátil é um dispositivo de uma derivação. Em outro exemplo de realização preferido, o dispositivo ECG utilizado para obter as gravações de ECG intermitentes é um dispositivo de ECG de 12 derivações.
[088] Em um exemplo de realização da presente invenção, o dispositivo de ECG portátil é um dispositivo operado pelo sujeito a ser testado. Assim, o dispositivo portátil como referido no método da presente invenção deve permitir o autoteste pelo sujeito do teste. Em outras palavras, os registros a serem avaliados foram obtidos por autoteste.
[089] De acordo com a presente invenção, está previsto que o dispositivo de ECG portátil compreenda dois eletrodos de contato seco. Assim, contempla-se que os registros de ECG intermitentes foram obtidos colocando dois dedos (como o polegar esquerdo e direito) sobre os elétrodos de contato seco. Alternativamente, os eletrodos de contato seco podem ser colocados contra a pele nua, como o peito.
[090] As gravações de ECG de acordo com a presente invenção devem ser gravações de ECG intermitentes. Assim, as gravações de ECG não devem ter sido obtidas a partir do sujeito de maneira continua (que é, por exemplo, o caso do monitoramento Holter). Consequentemente, as gravações de ECG a serem avaliadas são gravadas periodicamente durante um período de pelo menos uma semana.
[091] No entanto, prevê-se que as gravações de ECG sejam obtidas pelo menos uma vez por dia a partir do sujeito. Assim, o dispositivo é operado pelo sujeito pelo menos uma vez por dia. A expressão “pelo menos uma vez” como utilizada na presente invenção significa uma ou mais de uma vez, tal como duas vezes, três vezes, quatro vezes, cinco vezes etc. Em um exemplo de realização, as gravações de ECG são obtidas duas vezes por dia ou mais. As gravações podem ser armazenadas ou transmitidas para um banco de dados de ECG, por exemplo, por telefone celular embutido ou conectado ao dispositivo de ECG. Por exemplo, o dispositivo ECG pode ser conectado a um telefone celular (por exemplo, através de uma conexão sem fio ou bluetooth) que transfere as gravações para o banco de dados. A transmissão pode ser realizada por meio de um aplicativo (tal como um aplicativo para Android ou iOS). Após a transmissão das gravações para o banco de dados, os registros podem ser avaliados quanto à presença ou ausência de fibrilação atrial, ou seja, interpretada por um médico.
[092] A duração de uma gravação (única) geralmente fica entre e 120 segundos. Em um exemplo de realização, a duração de uma gravação está entre cerca de 20 segundos e cerca de 60 segundos. Por exemplo, uma gravação de ECG pode ter sido obtida colocando os polegares nos dois eletrodos por cerca de 30 segundos.
[093] Além disso, prevê-se, em particular, que as gravações intermitentes de ECG sejam obtidas quando o sujeito apresenta sintomas de fibrilação atrial (desde que o sujeito tenha apresentado sintomas). Os sintomas são descritos em outras partes do presente documento. Esses sintomas geralmente são transitórios e podem surgir em alguns segundos e desaparecer com a mesma rapidez. Se o sujeito não mostra sintomas de fibrilação atrial, as gravações serão, no entanto, obtidas por pelo menos uma vez por dia, tal como descrito acima.
[094] Em um exemplo de realização, as gravações de ECG intermitentes, ou seja, não contínuas, devem ter sido obtidas durante um período de pelo menos quatro dias. Em outro exemplo de realização, as gravações de ECG intermitentes, ou seja, não contínuas, devem ter sido obtidas durante um período de pelo menos uma semana. Assim, deve haver pelo menos sete, em particular pelo menos 14 registros que devem ser avaliados. Em um exemplo de realização, as gravações de ECG intermediárias devem ter sido obtidas durante um período de pelo menos dez dias. Em outro exemplo de realização, as gravações intermitentes de ECG devem ter sido obtidas durante um período de pelo menos duas semanas. Além disso, prevê- se que as gravações intermitentes de ECG a serem avaliadas tenham sido obtidas durante um período de uma semana a duas semanas, em particular durante um período de dez dias a duas semanas. A presença de FA em pelo menos uma gravação é indicativa para o diagnóstico de FA, em particular a FA paroxística.
[095] Se o método compreender a avaliação dos registros intermitentes de ECG, conforme estabelecido acima, o diagnóstico de que o sujeito sofre ou não de fibrilação atrial deve basear-se nos resultados da etapa de comparação (b) e na avaliação dos registros intermitentes de ECG:
[096] Em um exemplo de realização, é diagnosticado que o paciente não sofre de fibrilação atrial paroxística (exclusão da fibrilação atrial paroxística). Isso é indicado pela ausência de fibrilação atrial nos registros intermitentes de ECG e por uma quantidade de FABP-3 (e por uma quantidade de peptídeo tipo BNP, se o peptídeo tipo BNP for determinado) na amostra do sujeito inferior ao do valor de referência. Em outras palavras, a ausência de fibrilação atrial nos registros de ECG intermitentes em combinação com uma quantidade de FABP-3 (e, opcionalmente, de peptídeo tipo BNP) abaixo da referência são indicativas de um sujeito que não sofre de fibrilação atrial paroxística. Assim, o sujeito tem uma baixa probabilidade de sofrer de fibrilação atrial paroxística (como uma probabilidade menor que 10 ou 15%).
[097] Em um exemplo de realização, é diagnosticado que o paciente sofre de fibrilação atrial paroxística. Isso é indicado pela presença de fibrilação atrial nos registros intermitentes de ECG (ou seja, presença de fibrilação atrial em pelo menos uma gravação) e/ou por uma quantidade de
FABP-3 (e opcionalmente por uma quantidade de peptídeo tipo BNP) na amostra do sujeito acima da referência. Em outras palavras, a presença de fibrilação atrial nas gravações intermitentes de ECG e/ou uma quantidade de FABP-3 (e opcionalmente uma quantidade de peptídeo tipo BNP) acima da referência são indicativas para um sujeito que sofre de fibrilação atrial paroxística. Assim, o sujeito tem uma alta probabilidade de sofrer de fibrilação atrial paroxística (como uma probabilidade superior a 70 ou 80%).
[098] A ausência de fibrilação atrial nas gravações intermitentes de ECG do sujeito em combinação com uma quantidade de FABP-3 acima da referência pode ser indicativa de um sujeito que sofre de fibrilação atrial. Embora não tenha sido detectada a fibrilação atrial no ECG, é provável que o sujeito sofra de fibrilação atrial. Isso pode ser confirmado pelo monitoramento contínuo da atividade elétrica do sistema cardiovascular por pelo menos 24 horas, por exemplo, pelo monitoramento de Holter ou por gravador de eventos implantável (implantable loop recorders ou ILR).
[099] Em um exemplo de realização do método da invenção, o referido método compreende ainda uma etapa de recomendar e/ou iniciar pelo menos uma medida de suporte adequada com base nos resultados do diagnóstico. A referida pelo menos uma medida de suporte adequada deve ser recomendada ou iniciada para sujeitos diagnosticados como portadores de fibrilação atrial, isto é, para um sujeito com alta probabilidade de sofrer de FA.
[100] O termo “recomendar”, conforme usado na presente invenção, significa estabelecer uma proposta para uma medida de suporte adequada que possa ser aplicada ao sujeito que foi diagnosticado com FA paroxística.
[101] A medida de suporte adequada refere-se a todas as medidas que podem ser aplicadas em sujeitos que sofrem de FA, ou seja, com alta probabilidade de sofrer de FA paroxística. Por exemplo, as medidas de gerenciamento de pacientes incluem a verificação do diagnóstico de FA paroxística (por exemplo, pelo monitoramento de Holter) e/ou tratamento medicamentoso.
[102] Se o sujeito sofrer de fibrilação atrial paroxística, uma terapia com pelo menos um anticoagulante deve ser recomendada ou iniciada. O anticoagulante deve ter como objetivo reduzir ou prevenir a coagulação do sangue e derrame relacionado. De preferência, o anticoagulante é selecionado a partir do grupo que consiste em heparina, um derivado de cumarina, como varfarina ou dicumarol, inibidor da via do fator de processo (TFPI), antitrombina Il, inibidores do fator IXa, inibidores do fator Xa, inibidores dos fatores Va e inibidores de trombina.
[103] Em um exemplo de realização preferido, o anticoagulante é um antagonista não-vitamina K oral (abreviado como NOAC). Tais anticoagulantes inibem a formação de coágulos e, diferentemente da varfarina, não são antagonistas da vitamina K. Tais anticoagulantes são bem conhecidos no estado da técnica e descritos, por exemplo, em Hijazi et al/., 2015. The ABC (age, biomarkers, clinical history) stroke risk score: a biomarker-based risk score for predicting stroke in atrial fibrillation. Os NOACs preferidos são dabigatran, rivaroxaban e apixaban.
[104] Consequentemente, a presente invenção refere-se ainda a um método para recomendar e/ou iniciar pelo menos uma medida de suporte adequada, conforme estabelecido acima. Em um exemplo de realização, o método compreende as etapas do método da presente invenção, ou seja, o método de diagnosticar a fibrilação atrial paroxística, conforme estabelecido em outro local na presente invenção e a etapa adicional de recomendar e/ou iniciar pelo menos uma medida de suporte adequada. Em um exemplo de realização, a fibrilação atrial paroxística é tratada no sujeito pela administração de um anticoagulante.
[105] A presente invenção refere-se ainda a um método de auxílio no diagnóstico da fibrilação atrial, cujo método compreende as etapas de: a) obter ou fornecer uma amostra de um sujeito como referido na presente invenção em conexão com o método de diagnóstico de fibrilação atrial paroxística, b) determinar a quantidade de FABP-3 e, opcionalmente, a quantidade de um peptídeo tipo BNP, em uma amostra, e c) fornecer informações sobre a quantidade determinada do biomarcador FABP-3 e, opcionalmente, sobre a quantidade determinada do peptídeo tipo BNP ao médico que atente o sujeito, auxiliando assim no diagnóstico da fibrilação atrial paroxística no referido sujeito.
[106] O médico atendente deve ser o médico que solicitou a determinação do(s) biomarcador(es). O método mencionado acima deve auxiliar o médico atendente no diagnóstico da fibrilação atrial paroxística.
[107] A etapa a) do método mencionado acima de obtenção da amostra não abrange a retirada da amostra do sujeito. Preferencialmente, a amostra é obtida pelo recebimento de uma amostra a partir do referido sujeito. Assim, a amostra pode ter sido entregue.
[108] A presente invenção diz respeito ainda a um método, compreendendo: a) fornecer um teste para o biomarcador FABP-3 e, opcionalmente, um teste para um peptídeo tipo BNP; e b) fornecer instruções para utilizar os resultados dos testes obtidos ou que podem ser obtidos pelos referidos testes no diagnóstico da fibrilação atrial paroxística.
[109] O objetivo do método mencionado acima é, de preferência, o auxílio no diagnóstico da fibrilação atrial paroxística.
[110] As instruções devem conter um protocolo para realizar o método de diagnóstico de fibrilação atrial paroxística, conforme descrito acima. Além disso, as instruções devem conter pelo menos um valor para uma quantidade de referência de FABP-3 e, opcionalmente, pelo menos um valor para uma quantidade de referência de um peptídeo tipo BNP.
[111] O “teste” é preferencialmente um kit adaptado para a condução do método de determinação da fibrilação atrial paroxística. O referido kit deverá compreender pelo menos um agente de detecção para o biomarcador FABP-3 e, opcionalmente, pelo menos um agente de detecção para peptídeo tipo BNP. Os agentes de detecção para os dois biomarcadores podem ser fornecidos em um único Kit ou em dois kits separados.
[112] O resultado do teste obtido ou que pode ser obtido pelo mencionado teste é o valor para a a quantidade do(s) biomarcador(es) na amostra do sujeito.
[113] Além disso, a presente invenção refere-se ao uso de; i) biomarcador FABP-3 e, opcionalmente, de um peptídeo tipo BNP; e/ou ii) pelo menos um agente de detecção que se liga especificamente à FABP-3 e, opcionalmente, pelo menos um agente de detecção que se liga especificamente a um peptídeo tipo BNP, em uma amostra de um sujeito para diagnosticar a fibrilação atrial paroxística (no referido sujeito).
[114] O uso mencionado acima pode abranger ainda o uso de dispositivo de ECG portátil e/ou gravações de ECG intermitentes obtidas usando um dispositivo de ECG portátil obtidos a partir do referido sujeito durante um período de pelo menos uma semana usando um dispositivo de ECG portátil.
[115] Os termos mencionados com relação ao uso mencionado acima, tais como “amostra”, “sujeito”, “agente de detecção”, “FABP-3”, “que se liga especificamente”, “fibrilação atrial paroxística” foram definidas com relação ao método de determinação da fibrilação atrial paroxística. As definições e explicações são válidas de modo correspondente.
[116] Fig. 1: Diagnóstico de FA paroxística com níveis elevados de FABP-3 circulante (valores medianos: 1,92 ng/ml em amostras de 30 pacientes sem FA, 2,84 ngíml em amostras de 14 pacientes com FA paroxística; 2,75 ng/ml em amostras de 16 pacientes com FA persistente).
[117] Fig. 2: Resultados para NT-proBNP em amostras de plasma a partir dos pacientes descritos na legenda da Figura 1.
[118] Fig. 3: Resultados para Proteína C reativa de alta sensibilidade (PCRas) (amostras de plasma) em amostras de plasma dos 14 pacientes que sofrem de FA paroxística e em amostras de plasma dos 30 pacientes que não sofrem de FA descritos na legenda da Figura 1.
[119] Fig. 4: Expressão diferencial do FABP-3 em amostra de tecido do apêndice atrial direito de pacientes com FA (caso) ou em ritmo sinusal (controle) com base nas análises de RNAseq aplicando os algoritmos RSEM e DESEQ?2. Mudança na quantidade (em vezes) da expressão (FC) = 1,279; FDR (taxa de falsa descoberta) = 0,009 (Análise de amostras de tecido de 39 pacientes que não sofrem de FA e 11 pacientes com FA).
[120] Os exemplos a seguir devem ilustrar a invenção. Entretanto, tais Exemplos não devem ser interpretados como limitantes do escopo da invenção.
EXEMPLO 1
[121] Os níveis de FABP3, NT-probBNP e PCRas foram determinados em amostras de plasma de n = 60 pacientes com amostra de sangue e biomarcadores analisados antes da cirurgia de tórax aberto decorrente de cirurgia de revascularização miocárdica (CABG) ou valvar. Evidências de diferentes tipos de FA, FA paroxística e FA persistente ou SR (controles) foram geradas durante a cirurgia com o Mapeamento de Ativação Endo-Epicárdico de Alta Densidade simultâneo. Os pacientes com FA, FA paroxística ou FA persistente e controles foram pareados em relação ao sexo, idade e comorbidades.
[122] O mapeamento epicárdico de alta densidade é um meio diferente de discriminação entre subgrupos de ritmo sinusal, FA paroxística e persistente de acordo com diferentes padrões de condução das ondas de fibrilação resultantes de ativações elétricas (consulte Eckstein et al. e van Marion et a/., Ambos citados acima).
[123] O mapeamento epicárdico de alta densidade, por exemplo, permite o diagnóstico da fibrilação atrial paroxística, mesmo na ausência de um episódio de Fibrilação Atrial. Assim, ele permite uma diferenciação confiável entre sujeitos que não sofrem de FA, sujeitos que sofrem de FA paroxística e sujeitos que sofrem de FA persistente.
[124] No momento da coleta de sangue . pacientes que sofrem de FA paroxística, opcional no ritmo sinusal; n = 14 pacientes; . pacientes com FA persistente não estavam em ritmo sinusal; n = 16 pacientes; . pacientes controle estavam em ritmo sinusal; n = 30 pacientes.
[125] A avaliação dos dados mostrou que pacientes com níveis de FABP3 (independentes de outros biomarcadores) acima de um valor de referência (no estudo > 2,3 ng/mL ) são suspeitos de apresentar fibrilação atrial paroxística e podem se beneficiar da terapia de anticoagulação. Como mostrado na Figura 1, a AUC observada do FABP3 para a detecção de FA paroxística foi de 0,718. A AUC observada para FA persistente foi de 0,718. Surpreendentemente, é até mostrado que não foi detectado aumento progressivo dos níveis circulantes de FABP3 de pacientes com FA paroxística para pacientes com FA persistente. Os valores médios observados de FABP3 circulante foram de 1,92 ng/uml. em amostras de 30 pacientes sem FA, 2,84 ng/ml em amostras de 14 pacientes com FA paroxística; 2,75 ng/ml em amostras de 16 pacientes com FA persistente.
[126] Em contraste com a FABP3, para o NTproBNP foi observado um aumento progressivo dos níveis circulantes entre os subgrupos a partir de pacientes com fibrilação atrial paroxística para persistente ou permanente, conforme mostrado na Figura 2. A AUC observada de NTproBNP para a detecção de FA paroxística foi de 0,636 e 0,873 para a detecção de FA persistente. Assim, nos pacientes aqui analisados, o biomarcador FABP3 permite um diagnóstico melhorado da FA paroxística.
[127] Os valores médios observados de NTproBNP circulante foram de 154,31 pg/ml em amostras de 30 pacientes em ritmo sinusal, 263,93 pPg/mL em amostras de 14 pacientes com FA paroxística; 1.829,35 pg/ml em amostras de 16 pacientes com FA persistente.
[128] Como mostrado na Figura 3, a AUC observada de PCRas para a detecção de FA paroxística foi de 0,608. A AUC observada de PCRas para a detecção de FA persistente foi de 0,644.
[129] Conclui-se que a FABP3 mostra desempenho benéfico versus PCRas e pode, portanto, individualmente e/ou em combinação com NTproBNP, auxiliar na detecção de episódios de fibrilação atrial paroxística. Os pacientes com níveis de FABP3 acima de um valor de referência (no estudo > 2,3 ng/ml) em combinação com níveis elevados de NTproBNP são suspeitos de apresentarem fibrilação atrial paroxística e podem se beneficiar da terapia anticoagulante.
[130] Assim, o diagnóstico de fibrilação atrial paroxística em pacientes que apresentam ritmo sinusal pode ser alcançado com a detecção de níveis aumentados de FABP3 isoladamente ou em combinação com NT- proBNP.
EXEMPLO 2 EXPRESSÃO DIFERENCIAL DE FABP3 No TECIDO CARDÍACO DE PACIENTES COM FA
[131] Níveis de expressão diferencials de FABP3 foram determinados em amostras de tecido miocárdico do apêndice atrial direito de n = 39 pacientes.
Análises RNAseg
[132] Foram obtidas amostras de tecido atrial durante a cirurgia de tórax aberto decorrentes de cirurgia de revascularização coronária (CABG) ou valvar. Evidências de FA ou SR (controles) foram geradas durante a cirurgia com mapeamento de ativação endo-epicárdica de alta densidade em simultâneo. Os pacientes com FA e controles foram pareados em relação ao sexo, idade e comorbidades.
[133] As amostras de tecido atrial foram preparadas para . pacientes com FA; n = 11 pacientes . pacientes controle em SR; n = 39 pacientes.
[134] A expressão diferencial de FABP3 foi determinada nas análises de RNAsegq aplicando os algoritmos RSEM e DESEQ?2.
[135] Conforme mostrado na Figura 4, verificou-se que a expressão de FABP3 foi suprarregulada nos tecidos atriais analisados dos 11 pacientes com FA persistente versus os 39 pacientes de controle.
[136] A mudança na expressão (FC) foi de 1.279. A FDR (taxa de falsa descoberta) foi de 0,009.
[137] A expressão alterada de FABP3 foi determinada no órgão final danificado, o tecido atria. Os níveis de mRNA de FABP3 foram comparados com os resultados do mapeamento de alta densidade do tecido atrial. Níveis elevados de MRNA de FABP3 foram detectados em amostras de tecidos atrials com perturbações de condução como caracterizado pelo mapeamento elétrica. Os distúrbios de condução podem ser causados por infiltração de gordura ou fibrose intersticial. A expressão diferencial observada de FABP3 no tecido atrial dos pacientes que sofrem de fibrilação atrial suporta que a FABP é liberada na circulação do miocárdio, em particular a partir do apêndice atrial direito e os títulos séricos/plasmáticos elevados auxiliam na detecção de episódios de FA.
[138] Conclui-se que a FABP-3 é liberada a partir do coração para o sangue e pode auxiliar na detecção de episódios de FA.
Claims (18)
1. MÉTODO PARA DIAGNOSTICAR A FIBRILAÇÃO ATRIAL PAROXÍSTICA em um sujeito, caracterizado por compreender: (a) a determinação da quantidade de FABP-3 (proteína 3 ligante de ácido graxo) em uma amostra de um sujeito com suspeita de sofrer fibrilação atrial paroxística; e (b) a comparação da quantidade determinada na etapa (a) com um valor de referência.
2. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo sujeito estar em ritmo sinusal no momento em que a amostra é obtida.
3. MÉTODO, de acordo com as reivindicações 1 e 2, caracterizado pela amostra ser uma amostra de sangue, soro ou plasma.
4. MÉTODO, de acordo com as reivindicações 1 e 2, caracterizado pela amostra ser uma amostra de tecido do miocárdio.
5. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 4, caracterizado pelo sujeito suspeito de sofrer de fibrilação atrial exibir ou ter demonstrado pelo menos um sintoma de fibrilação atrial.
6. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo sintoma da fibrilação atrial ser selecionado a partir de tontura, desmaio, falta de ar e, particularmente, palpitações cardíacas.
7. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 6, caracterizado pelo sujeito não ter histórico conhecido de fibrilação atrial.
8. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 7, caracterizado por uma quantidade de FABP-3 na amostra do sujeito que é maior que a quantidade de referência indicar que o sujeito sofre de fibrilação atrial paroxística.
9. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 7, caracterizado por uma quantidade de FABP-3 na amostra do sujeito que é menor que a quantidade de referência indicar que o sujeito não sofre de fibrilação atrial paroxística.
10. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 9, caracterizado por compreender adicionalmente na etapa (a) a determinação da quantidade de um peptídeo tipo BNP na amostra do sujeito, e compreender adicionalmente na etapa (b) a comparação da quantidade de peptídeo tipo BNP com uma quantidade de referência.
11. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 10, caracterizado por compreender ainda a avaliação de registros de ECG intermitentes obtidos a partir do referido sujeito durante um período de pelo menos uma semana usando um dispositivo de ECG portátil.
12. MÉTODO de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 11, caracterizado pelo sujeito ser um sujeito humano.
13. MÉTODO PARA AUXILIAR NO DIAGNÓSTICO DE FIBRILAÇÃO ATRIAL PAROXÍSTICA, caracterizado por compreender as etapas de: a) obter ou fornecer uma amostra de um sujeito como referido na presente invenção em conexão com o método de diagnóstico de fibrilação atrial paroxística, b) determinar a quantidade do biomarcador FABP-3 e, opcionalmente, a quantidade de um peptídeo tipo BNP, na referida amostra, e c) fornecer informações sobre a quantidade determinada do biomarcador FABP-3 e, opcionalmente, sobre a quantidade determinada do peptídeo tipo BNP ao médico atendente, auxiliando assim no diagnóstico da fibrilação atrial paroxística no referido sujeito.
14. USO,de i) biomarcador FABP-3 e, opcionalmente, de um peptídeo tipo BNP; e/ou ii) pelo menos um agente de detecção que se liga especificamente à FABP-3 e, opcionalmente, pelo menos um agente de detecção que se liga especificamente a um peptídeo tipo BNP, em uma amostra de um sujeito caracterizado para diagnosticar a fibrilação atrial paroxística.
15. USO, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo agente de detecção ser um anticorpo ou fragmento do mesmo.
16. USO, de acordo com as reivindicações 14 e 15, caracterizado a amostra ser uma amostra de sangue, soro ou plasma ou ser uma amostra de tecido do miocárdio.
17. USO, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 14 a 16, caracterizado pelo sujeito estar em ritmo sinusal no momento em que a amostra é obtida.
18. — USO, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 14 a 17, caracterizado pelo sujeito não ter histórico conhecido de fibrilação atrial.
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