KR20210004961A - 치료 항체 및 그의 용도 - Google Patents
치료 항체 및 그의 용도 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20210004961A KR20210004961A KR1020207027136A KR20207027136A KR20210004961A KR 20210004961 A KR20210004961 A KR 20210004961A KR 1020207027136 A KR1020207027136 A KR 1020207027136A KR 20207027136 A KR20207027136 A KR 20207027136A KR 20210004961 A KR20210004961 A KR 20210004961A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- antibody
- antigen
- seq
- binding fragment
- cancer
- Prior art date
Links
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 title description 6
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 209
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 209
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 209
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 188
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 166
- 108010058905 CD44v6 antigen Proteins 0.000 claims abstract description 122
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 105
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 42
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 34
- 229940049595 antibody-drug conjugate Drugs 0.000 claims abstract description 22
- 239000000611 antibody drug conjugate Substances 0.000 claims abstract description 15
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 309
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 159
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 110
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 107
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 105
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 89
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 87
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 claims description 65
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 51
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 45
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 36
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims description 29
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 28
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 28
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 28
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 27
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 26
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 claims description 22
- 101100112922 Candida albicans CDR3 gene Proteins 0.000 claims description 20
- 102100035360 Cerebellar degeneration-related antigen 1 Human genes 0.000 claims description 20
- 102100035361 Cerebellar degeneration-related protein 2 Human genes 0.000 claims description 20
- 101000737793 Homo sapiens Cerebellar degeneration-related antigen 1 Proteins 0.000 claims description 20
- 101000737796 Homo sapiens Cerebellar degeneration-related protein 2 Proteins 0.000 claims description 20
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 claims description 20
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 claims description 19
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 claims description 19
- 108010045069 keyhole-limpet hemocyanin Proteins 0.000 claims description 19
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 claims description 18
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 claims description 18
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 claims description 18
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 17
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 17
- -1 DM-3 Chemical compound 0.000 claims description 16
- 208000006644 Malignant Fibrous Histiocytoma Diseases 0.000 claims description 16
- 208000015778 Undifferentiated pleomorphic sarcoma Diseases 0.000 claims description 16
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 claims description 16
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims description 16
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims description 16
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 claims description 15
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 claims description 15
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 14
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 14
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 claims description 14
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 claims description 14
- IEDXPSOJFSVCKU-HOKPPMCLSA-N [4-[[(2S)-5-(carbamoylamino)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl)hexanoylamino]-3-methylbutanoyl]amino]pentanoyl]amino]phenyl]methyl N-[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(3R,4S,5S)-1-[(2S)-2-[(1R,2R)-3-[[(1S,2R)-1-hydroxy-1-phenylpropan-2-yl]amino]-1-methoxy-2-methyl-3-oxopropyl]pyrrolidin-1-yl]-3-methoxy-5-methyl-1-oxoheptan-4-yl]-methylamino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]-N-methylcarbamate Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H]([C@@H](CC(=O)N1CCC[C@H]1[C@H](OC)[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)c1ccccc1)OC)N(C)C(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)OCc1ccc(NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CCCCCN2C(=O)CCC2=O)C(C)C)cc1)C(C)C IEDXPSOJFSVCKU-HOKPPMCLSA-N 0.000 claims description 12
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims description 12
- 108010093470 monomethyl auristatin E Proteins 0.000 claims description 12
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 claims description 11
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims description 11
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 11
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 claims description 11
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims description 10
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims description 10
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 10
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 10
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 10
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 10
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 claims description 10
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 10
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 10
- 108010019670 Chimeric Antigen Receptors Proteins 0.000 claims description 9
- 201000008808 Fibrosarcoma Diseases 0.000 claims description 9
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 9
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 claims description 9
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 claims description 9
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 9
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 9
- 210000003739 neck Anatomy 0.000 claims description 9
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 claims description 9
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 claims description 9
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 claims description 9
- 206010003571 Astrocytoma Diseases 0.000 claims description 8
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 claims description 8
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 claims description 8
- 102000005600 Cathepsins Human genes 0.000 claims description 8
- 108010084457 Cathepsins Proteins 0.000 claims description 8
- 208000005243 Chondrosarcoma Diseases 0.000 claims description 8
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 8
- 208000002250 Hematologic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 8
- 208000018142 Leiomyosarcoma Diseases 0.000 claims description 8
- 206010027406 Mesothelioma Diseases 0.000 claims description 8
- 208000009277 Neuroectodermal Tumors Diseases 0.000 claims description 8
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 claims description 8
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims description 8
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 8
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 claims description 8
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 claims description 8
- 206010006007 bone sarcoma Diseases 0.000 claims description 8
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 claims description 8
- 208000037828 epithelial carcinoma Diseases 0.000 claims description 8
- 210000003128 head Anatomy 0.000 claims description 8
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 claims description 8
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 claims description 8
- 230000009033 hematopoietic malignancy Effects 0.000 claims description 8
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 claims description 8
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 claims description 8
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 8
- 208000037819 metastatic cancer Diseases 0.000 claims description 8
- 208000011575 metastatic malignant neoplasm Diseases 0.000 claims description 8
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 claims description 8
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 claims description 8
- 201000005528 peripheral nervous system neoplasm Diseases 0.000 claims description 8
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 8
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 claims description 8
- YUOCYTRGANSSRY-UHFFFAOYSA-N pyrrolo[2,3-i][1,2]benzodiazepine Chemical compound C1=CN=NC2=C3C=CN=C3C=CC2=C1 YUOCYTRGANSSRY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 claims description 8
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 claims description 8
- 210000003932 urinary bladder Anatomy 0.000 claims description 8
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 claims description 8
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 claims description 7
- 208000021519 Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 claims description 7
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 claims description 7
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 7
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 7
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 claims description 6
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 5
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 5
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 claims description 5
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 claims description 5
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 5
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 claims description 5
- 239000000138 intercalating agent Substances 0.000 claims description 5
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 claims description 5
- 229940123780 DNA topoisomerase I inhibitor Drugs 0.000 claims description 4
- 108091022875 Microtubule Proteins 0.000 claims description 4
- 102000029749 Microtubule Human genes 0.000 claims description 4
- 239000000365 Topoisomerase I Inhibitor Substances 0.000 claims description 4
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 4
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 claims description 4
- 210000004688 microtubule Anatomy 0.000 claims description 4
- MFRNYXJJRJQHNW-DEMKXPNLSA-N (2s)-2-[[(2r,3r)-3-methoxy-3-[(2s)-1-[(3r,4s,5s)-3-methoxy-5-methyl-4-[methyl-[(2s)-3-methyl-2-[[(2s)-3-methyl-2-(methylamino)butanoyl]amino]butanoyl]amino]heptanoyl]pyrrolidin-2-yl]-2-methylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoic acid Chemical compound CN[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N(C)[C@@H]([C@@H](C)CC)[C@H](OC)CC(=O)N1CCC[C@H]1[C@H](OC)[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 MFRNYXJJRJQHNW-DEMKXPNLSA-N 0.000 claims description 3
- FJHBVJOVLFPMQE-QFIPXVFZSA-N 7-Ethyl-10-Hydroxy-Camptothecin Chemical compound C1=C(O)C=C2C(CC)=C(CN3C(C4=C([C@@](C(=O)OC4)(O)CC)C=C33)=O)C3=NC2=C1 FJHBVJOVLFPMQE-QFIPXVFZSA-N 0.000 claims description 3
- 108010044540 auristatin Proteins 0.000 claims description 3
- HXCHCVDVKSCDHU-LULTVBGHSA-N calicheamicin Chemical compound C1[C@H](OC)[C@@H](NCC)CO[C@H]1O[C@H]1[C@H](O[C@@H]2C\3=C(NC(=O)OC)C(=O)C[C@](C/3=C/CSSSC)(O)C#C\C=C/C#C2)O[C@H](C)[C@@H](NO[C@@H]2O[C@H](C)[C@@H](SC(=O)C=3C(=C(OC)C(O[C@H]4[C@@H]([C@H](OC)[C@@H](O)[C@H](C)O4)O)=C(I)C=3C)OC)[C@@H](O)C2)[C@@H]1O HXCHCVDVKSCDHU-LULTVBGHSA-N 0.000 claims description 3
- 229930195731 calicheamicin Natural products 0.000 claims description 3
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- WKPWGQKGSOKKOO-RSFHAFMBSA-N maytansine Chemical class CO[C@@H]([C@@]1(O)C[C@](OC(=O)N1)([C@H]([C@@H]1O[C@@]1(C)[C@@H](OC(=O)[C@H](C)N(C)C(C)=O)CC(=O)N1C)C)[H])\C=C\C=C(C)\CC2=CC(OC)=C(Cl)C1=C2 WKPWGQKGSOKKOO-RSFHAFMBSA-N 0.000 claims description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 2
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 claims 4
- 101000693922 Bos taurus Albumin Proteins 0.000 claims 2
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 claims 2
- 210000004696 endometrium Anatomy 0.000 claims 2
- 229950007318 ozogamicin Drugs 0.000 claims 1
- HNMATTJJEPZZMM-BPKVFSPJSA-N s-[(2r,3s,4s,6s)-6-[[(2r,3s,4s,5r,6r)-5-[(2s,4s,5s)-5-[acetyl(ethyl)amino]-4-methoxyoxan-2-yl]oxy-6-[[(2s,5z,9r,13e)-13-[2-[[4-[(2e)-2-[1-[4-(4-amino-4-oxobutoxy)phenyl]ethylidene]hydrazinyl]-2-methyl-4-oxobutan-2-yl]disulfanyl]ethylidene]-9-hydroxy-12-(m Chemical compound C1[C@H](OC)[C@@H](N(CC)C(C)=O)CO[C@H]1O[C@H]1[C@H](O[C@@H]2C\3=C(NC(=O)OC)C(=O)C[C@@](C/3=C/CSSC(C)(C)CC(=O)N\N=C(/C)C=3C=CC(OCCCC(N)=O)=CC=3)(O)C#C\C=C/C#C2)O[C@H](C)[C@@H](NO[C@@H]2O[C@H](C)[C@@H](SC(=O)C=3C(=C(OC)C(O[C@H]4[C@@H]([C@H](OC)[C@@H](O)[C@H](C)O4)O)=C(I)C=3C)OC)[C@@H](O)C2)[C@@H]1O HNMATTJJEPZZMM-BPKVFSPJSA-N 0.000 claims 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 28
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 22
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 abstract description 21
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 abstract description 21
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 abstract description 21
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 abstract description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 106
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 100
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 94
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 49
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 45
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 41
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 30
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 29
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 28
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 27
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 27
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 26
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 24
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 22
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 18
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 18
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 18
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 17
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 17
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 17
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 17
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 16
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 15
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 15
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 14
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 14
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 14
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 14
- 229910052702 rhenium Inorganic materials 0.000 description 14
- WUAPFZMCVAUBPE-UHFFFAOYSA-N rhenium atom Chemical compound [Re] WUAPFZMCVAUBPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 13
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 13
- 102100035133 Lysosome-associated membrane glycoprotein 1 Human genes 0.000 description 12
- 101710116782 Lysosome-associated membrane glycoprotein 1 Proteins 0.000 description 12
- 230000008045 co-localization Effects 0.000 description 12
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 12
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 12
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 11
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 11
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 11
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 11
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 11
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 11
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 10
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 description 10
- 102000048851 human CD44 Human genes 0.000 description 10
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 10
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 9
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 9
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 9
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 9
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 9
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 9
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 8
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 8
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 8
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 8
- 230000006870 function Effects 0.000 description 8
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 8
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 8
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 8
- 230000004044 response Effects 0.000 description 8
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 8
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 8
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 8
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 7
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 7
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 7
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 7
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 7
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 7
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 7
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 7
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 description 7
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 7
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 7
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 7
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 7
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 7
- 231100000682 maximum tolerated dose Toxicity 0.000 description 7
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 7
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 7
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 7
- 241000894007 species Species 0.000 description 7
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 7
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 6
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 6
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 6
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 6
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 6
- 230000002357 endometrial effect Effects 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 6
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 description 6
- 230000001868 lysosomic effect Effects 0.000 description 6
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 6
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 6
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 6
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 6
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 6
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 6
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 5
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 5
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 5
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 5
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 5
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 5
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 230000036541 health Effects 0.000 description 5
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 5
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 5
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 5
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 5
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 5
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 5
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 5
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 5
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 5
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 5
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 5
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 5
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 5
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 5
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 5
- 229910052727 yttrium Inorganic materials 0.000 description 5
- VWQVUPCCIRVNHF-UHFFFAOYSA-N yttrium atom Chemical compound [Y] VWQVUPCCIRVNHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- 206010000830 Acute leukaemia Diseases 0.000 description 4
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 4
- 102400000888 Cholecystokinin-8 Human genes 0.000 description 4
- 101800005151 Cholecystokinin-8 Proteins 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 4
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 4
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 4
- NLMBVBUNULOTNS-HOKPPMCLSA-N [4-[[(2s)-5-(carbamoylamino)-2-[[(2s)-2-[6-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)hexanoylamino]-3-methylbutanoyl]amino]pentanoyl]amino]phenyl]methyl n-[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(3r,4s,5s)-1-[(2s)-2-[(1r,2r)-3-[[(1s,2r)-1-hydroxy-1-phenylpropan-2-yl]amino]-1-methoxy-2-methyl-3-o Chemical compound C1([C@H](O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)[C@@H](OC)[C@@H]2CCCN2C(=O)C[C@H]([C@H]([C@@H](C)CC)N(C)C(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)OCC=2C=CC(NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CCCCCN3C(C=CC3=O)=O)C(C)C)=CC=2)C(C)C)OC)=CC=CC=C1 NLMBVBUNULOTNS-HOKPPMCLSA-N 0.000 description 4
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 4
- 208000036676 acute undifferentiated leukemia Diseases 0.000 description 4
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 4
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 4
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 4
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 4
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 4
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 4
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 4
- 231100000371 dose-limiting toxicity Toxicity 0.000 description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 4
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 4
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 4
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 4
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 4
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 4
- 208000003849 large cell carcinoma Diseases 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 4
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 4
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 4
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 4
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 229920002113 octoxynol Polymers 0.000 description 4
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 description 4
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 4
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 4
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 4
- IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N sincalide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N 0.000 description 4
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 4
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 4
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 4
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 4
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 4
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 3
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 208000009329 Graft vs Host Disease Diseases 0.000 description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 3
- 108700005078 Synthetic Genes Proteins 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 3
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 3
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 3
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 3
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 3
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 230000008676 import Effects 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 3
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 3
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 3
- 231100001221 nontumorigenic Toxicity 0.000 description 3
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 208000037821 progressive disease Diseases 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 3
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 3
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 3
- CRTGSPPMTACQBL-UHFFFAOYSA-N 2,3-dihydroxycyclopent-2-en-1-one Chemical compound OC1=C(O)C(=O)CC1 CRTGSPPMTACQBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WXTMDXOMEHJXQO-UHFFFAOYSA-N 2,5-dihydroxybenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC(O)=CC=C1O WXTMDXOMEHJXQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 4-aminobenzoic acid Chemical compound NC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxybenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011729 BALB/c nude mouse Methods 0.000 description 2
- 108010080412 CD44v9 antigen Proteins 0.000 description 2
- 208000017897 Carcinoma of esophagus Diseases 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 2
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 2
- 101710112752 Cytotoxin Proteins 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SHIBSTMRCDJXLN-UHFFFAOYSA-N Digoxigenin Natural products C1CC(C2C(C3(C)CCC(O)CC3CC2)CC2O)(O)C2(C)C1C1=CC(=O)OC1 SHIBSTMRCDJXLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710181478 Envelope glycoprotein GP350 Proteins 0.000 description 2
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 description 2
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102000009786 Immunoglobulin Constant Regions Human genes 0.000 description 2
- 108010009817 Immunoglobulin Constant Regions Proteins 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 206010061309 Neoplasm progression Diseases 0.000 description 2
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 2
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 2
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Natural products OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 2
- 241000714474 Rous sarcoma virus Species 0.000 description 2
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 2
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 2
- 108010028230 Trp-Ser- His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys Proteins 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091023045 Untranslated Region Proteins 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N acridine Chemical compound C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 2
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 2
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 2
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 2
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N catechol Chemical compound OC1=CC=CC=C1O YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 2
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 2
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004292 cytoskeleton Anatomy 0.000 description 2
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002619 cytotoxin Substances 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 2
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- QONQRTHLHBTMGP-UHFFFAOYSA-N digitoxigenin Natural products CC12CCC(C3(CCC(O)CC3CC3)C)C3C11OC1CC2C1=CC(=O)OC1 QONQRTHLHBTMGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SHIBSTMRCDJXLN-KCZCNTNESA-N digoxigenin Chemical compound C1([C@@H]2[C@@]3([C@@](CC2)(O)[C@H]2[C@@H]([C@@]4(C)CC[C@H](O)C[C@H]4CC2)C[C@H]3O)C)=CC(=O)OC1 SHIBSTMRCDJXLN-KCZCNTNESA-N 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 2
- 201000005619 esophageal carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 2
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 201000005787 hematologic cancer Diseases 0.000 description 2
- 108060003552 hemocyanin Proteins 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 2
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 2
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N m-cresol Chemical compound CC1=CC=CC(O)=C1 RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 230000000683 nonmetastatic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 2
- 210000004789 organ system Anatomy 0.000 description 2
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 2
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 2
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 2
- AQIXEPGDORPWBJ-UHFFFAOYSA-N pentan-3-ol Chemical compound CCC(O)CC AQIXEPGDORPWBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 2
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 2
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 2
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 2
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 2
- ZCCUUQDIBDJBTK-UHFFFAOYSA-N psoralen Chemical compound C1=C2OC(=O)C=CC2=CC2=C1OC=C2 ZCCUUQDIBDJBTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N resorcinol Chemical compound OC1=CC=CC(O)=C1 GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 2
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 2
- 239000000878 small molecule-drug conjugate Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 229910052713 technetium Inorganic materials 0.000 description 2
- GKLVYJBZJHMRIY-UHFFFAOYSA-N technetium atom Chemical compound [Tc] GKLVYJBZJHMRIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 2
- APJYDQYYACXCRM-UHFFFAOYSA-N tryptamine Chemical compound C1=CC=C2C(CCN)=CNC2=C1 APJYDQYYACXCRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000005751 tumor progression Effects 0.000 description 2
- 231100000588 tumorigenic Toxicity 0.000 description 2
- 230000000381 tumorigenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VLARLSIGSPVYHX-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 6-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)hexanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCCCCN1C(=O)C=CC1=O VLARLSIGSPVYHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N (2R)-6-amino-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2R,3S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[2-[[2-[[2-[(2-amino-1-hydroxyethylidene)amino]-3-carboxy-1-hydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1,5-dihydroxy-5-iminopentylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]hexanoic acid Chemical compound C[C@@H]([C@@H](C(=N[C@@H](CS)C(=N[C@@H](C)C(=N[C@@H](CO)C(=NCC(=N[C@@H](CCC(=N)O)C(=NC(CS)C(=N[C@H]([C@H](C)O)C(=N[C@H](CS)C(=N[C@H](CO)C(=NCC(=N[C@H](CS)C(=NCC(=N[C@H](CCCCN)C(=O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)N=C([C@H](CS)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](C)N=C(CN=C([C@H](CO)N=C([C@H](CS)N=C(CN=C(C(CS)N=C(C(CC(=O)O)N=C(CN)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 1
- VEGGTWZUZGZKHY-GJZGRUSLSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-amino-3-methylbutanoyl]amino]-5-(carbamoylamino)-n-[4-(hydroxymethyl)phenyl]pentanamide Chemical compound NC(=O)NCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(=O)NC1=CC=C(CO)C=C1 VEGGTWZUZGZKHY-GJZGRUSLSA-N 0.000 description 1
- MGRVRXRGTBOSHW-UHFFFAOYSA-N (aminomethyl)phosphonic acid Chemical compound NCP(O)(O)=O MGRVRXRGTBOSHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VSAZFRKEFQPOIS-UHFFFAOYSA-N 2,5-dihydroxybenzene-1,4-disulfonic acid Chemical compound OC1=CC(S(O)(=O)=O)=C(O)C=C1S(O)(=O)=O VSAZFRKEFQPOIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RXACEEPNTRHYBQ-UHFFFAOYSA-N 2-[[2-[[2-[(2-sulfanylacetyl)amino]acetyl]amino]acetyl]amino]acetic acid Chemical compound OC(=O)CNC(=O)CNC(=O)CNC(=O)CS RXACEEPNTRHYBQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VXGRJERITKFWPL-UHFFFAOYSA-N 4',5'-Dihydropsoralen Natural products C1=C2OC(=O)C=CC2=CC2=C1OCC2 VXGRJERITKFWPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940090248 4-hydroxybenzoic acid Drugs 0.000 description 1
- 102100025854 Acyl-coenzyme A thioesterase 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710175445 Acyl-coenzyme A thioesterase 1 Proteins 0.000 description 1
- 206010052747 Adenocarcinoma pancreas Diseases 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- 108010049777 Ankyrins Proteins 0.000 description 1
- 102000008102 Ankyrins Human genes 0.000 description 1
- BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N Aspirin Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N Boron Chemical compound [B] ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150017002 CD44 gene Proteins 0.000 description 1
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M Carbamate Chemical compound NC([O-])=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- 229940123150 Chelating agent Drugs 0.000 description 1
- 108091007741 Chimeric antigen receptor T cells Proteins 0.000 description 1
- 102000014447 Complement C1q Human genes 0.000 description 1
- 108010078043 Complement C1q Proteins 0.000 description 1
- 241000975300 Concholepas concholepas Species 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- 239000004971 Cross linker Substances 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- CIWBSHSKHKDKBQ-DUZGATOHSA-N D-araboascorbic acid Natural products OC[C@@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-DUZGATOHSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000012591 Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline Substances 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 102400001368 Epidermal growth factor Human genes 0.000 description 1
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N Ethylenediamine Chemical compound NCCN PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100020903 Ezrin Human genes 0.000 description 1
- 241000272186 Falco columbarius Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- 102000003745 Hepatocyte Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 108090000100 Hepatocyte Growth Factor Proteins 0.000 description 1
- 208000009889 Herpes Simplex Diseases 0.000 description 1
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000690301 Homo sapiens Aldo-keto reductase family 1 member C4 Proteins 0.000 description 1
- 101000878605 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Proteins 0.000 description 1
- 101001116548 Homo sapiens Protein CBFA2T1 Proteins 0.000 description 1
- 101000686915 Homo sapiens Reticulophagy regulator 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 241000701024 Human betaherpesvirus 5 Species 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical class C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 1
- 241000235058 Komagataella pastoris Species 0.000 description 1
- FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N L-Phenylalanyl-L-lysin Natural products NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 108091026898 Leader sequence (mRNA) Proteins 0.000 description 1
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100038007 Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Human genes 0.000 description 1
- 241000219745 Lupinus Species 0.000 description 1
- 241000282553 Macaca Species 0.000 description 1
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 1
- PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N Maleimide Chemical compound O=C1NC(=O)C=C1 PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 102000002274 Matrix Metalloproteinases Human genes 0.000 description 1
- 108010000684 Matrix Metalloproteinases Proteins 0.000 description 1
- 102000003792 Metallothionein Human genes 0.000 description 1
- 108090000157 Metallothionein Proteins 0.000 description 1
- 102100027869 Moesin Human genes 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N N-Vinyl-2-pyrrolidone Chemical compound C=CN1CCCC1=O WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091007491 NSP3 Papain-like protease domains Proteins 0.000 description 1
- 108091061960 Naked DNA Proteins 0.000 description 1
- 244000061176 Nicotiana tabacum Species 0.000 description 1
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 102000004264 Osteopontin Human genes 0.000 description 1
- 108010081689 Osteopontin Proteins 0.000 description 1
- 241000237988 Patellidae Species 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- FADYJNXDPBKVCA-STQMWFEESA-N Phe-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 FADYJNXDPBKVCA-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- ABLZXFCXXLZCGV-UHFFFAOYSA-N Phosphorous acid Chemical group OP(O)=O ABLZXFCXXLZCGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 101710182846 Polyhedrin Proteins 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 102400000745 Potential peptide Human genes 0.000 description 1
- 101800001357 Potential peptide Proteins 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000588770 Proteus mirabilis Species 0.000 description 1
- 208000007660 Residual Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102100024733 Reticulophagy regulator 2 Human genes 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- 102220492414 Ribulose-phosphate 3-epimerase_H35A_mutation Human genes 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M Sodium bisulfite Chemical compound [Na+].OS([O-])=O DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000021712 Soft tissue sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 241000256251 Spodoptera frugiperda Species 0.000 description 1
- 208000000102 Squamous Cell Carcinoma of Head and Neck Diseases 0.000 description 1
- 208000034331 Squamous cell carcinoma of the stomach Diseases 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- 208000018359 Systemic autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 1
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 1
- 108091036066 Three prime untranslated region Proteins 0.000 description 1
- 102100023935 Transmembrane glycoprotein NMB Human genes 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 241000223259 Trichoderma Species 0.000 description 1
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 1
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 1
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- DFPAKSUCGFBDDF-ZQBYOMGUSA-N [14c]-nicotinamide Chemical compound N[14C](=O)C1=CC=CN=C1 DFPAKSUCGFBDDF-ZQBYOMGUSA-N 0.000 description 1
- HYSPJPGXSALJRR-DHIFEGFHSA-N [4-[[(2s)-5-(carbamoylamino)-2-[[(2s)-2-[6-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)hexanoylamino]-3-methylbutanoyl]amino]pentanoyl]amino]phenyl]methyl (4-nitrophenyl) carbonate Chemical compound N([C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=O)C(=O)NC=1C=CC(COC(=O)OC=2C=CC(=CC=2)[N+]([O-])=O)=CC=1)C(=O)CCCCCN1C(=O)C=CC1=O HYSPJPGXSALJRR-DHIFEGFHSA-N 0.000 description 1
- 238000002679 ablation Methods 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 230000009824 affinity maturation Effects 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 description 1
- 229940100198 alkylating agent Drugs 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 229940059260 amidate Drugs 0.000 description 1
- 229960004050 aminobenzoic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000000202 analgesic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000012805 animal sample Substances 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 1
- 125000003710 aryl alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 229960000686 benzalkonium chloride Drugs 0.000 description 1
- 229960001950 benzethonium chloride Drugs 0.000 description 1
- UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M benzethonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(C(C)(C)CC(C)(C)C)=CC=C1OCCOCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N benzyl(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[NH+](C)CC1=CC=CC=C1 CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002306 biochemical method Methods 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 238000005460 biophysical method Methods 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- HUTDDBSSHVOYJR-UHFFFAOYSA-H bis[(2-oxo-1,3,2$l^{5},4$l^{2}-dioxaphosphaplumbetan-2-yl)oxy]lead Chemical compound [Pb+2].[Pb+2].[Pb+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O HUTDDBSSHVOYJR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 210000003969 blast cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 238000010504 bond cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000006664 bond formation reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052796 boron Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000000488 breast squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 125000005997 bromomethyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N butyl alcohol Substances CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 125000002837 carbocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 1
- 230000004709 cell invasion Effects 0.000 description 1
- 239000002771 cell marker Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000004186 co-expression Effects 0.000 description 1
- 201000000493 colon squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000004732 colorectal carcinogenesis Effects 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 1
- 238000012866 crystallographic experiment Methods 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000392 cycloalkenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N cyclohexanol Chemical compound OC1CCCCC1 HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 210000005220 cytoplasmic tail Anatomy 0.000 description 1
- 230000003436 cytoskeletal effect Effects 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 1
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002074 deregulated effect Effects 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 1
- NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-K dioxido-sulfanylidene-sulfido-$l^{5}-phosphane Chemical compound [O-]P([O-])([S-])=S NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 125000002228 disulfide group Chemical group 0.000 description 1
- 239000006196 drop Substances 0.000 description 1
- 210000003162 effector t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 1
- 235000010350 erythorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004318 erythorbic acid Substances 0.000 description 1
- NPUKDXXFDDZOKR-LLVKDONJSA-N etomidate Chemical compound CCOC(=O)C1=CN=CN1[C@H](C)C1=CC=CC=C1 NPUKDXXFDDZOKR-LLVKDONJSA-N 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 108010055671 ezrin Proteins 0.000 description 1
- 229960003692 gamma aminobutyric acid Drugs 0.000 description 1
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000010749 gastric carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 201000000496 gastric squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000003168 generic drug Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000025 genetic toxicology Toxicity 0.000 description 1
- 230000001738 genotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 229960005219 gentisic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000003823 glutamate receptor agonist Substances 0.000 description 1
- 239000003825 glutamate receptor antagonist Substances 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 229940093915 gynecological organic acid Drugs 0.000 description 1
- 201000000459 head and neck squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 102000054751 human RUNX1T1 Human genes 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 1
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 1
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 1
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012642 immune effector Substances 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 229940102223 injectable solution Drugs 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000007914 intraventricular administration Methods 0.000 description 1
- 229940026239 isoascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 1
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 230000029226 lipidation Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 1
- 201000005243 lung squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 210000001365 lymphatic vessel Anatomy 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- MGIUUAHJVPPFEV-ABXDCCGRSA-N magainin ii Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 MGIUUAHJVPPFEV-ABXDCCGRSA-N 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000009364 mariculture Methods 0.000 description 1
- 210000003519 mature b lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 229910044991 metal oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000004706 metal oxides Chemical class 0.000 description 1
- 230000008883 metastatic behaviour Effects 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 229960002216 methylparaben Drugs 0.000 description 1
- YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-L methylphosphonate(2-) Chemical compound CP([O-])([O-])=O YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 108010071525 moesin Proteins 0.000 description 1
- 230000009149 molecular binding Effects 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 239000006199 nebulizer Substances 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 1
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 229940127073 nucleoside analogue Drugs 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 229940124276 oligodeoxyribonucleotide Drugs 0.000 description 1
- 238000002515 oligonucleotide synthesis Methods 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N p-hydroxybenzoic acid methyl ester Natural products COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000002094 pancreatic adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 1
- 229940021222 peritoneal dialysis isotonic solution Drugs 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 1
- 150000004713 phosphodiesters Chemical class 0.000 description 1
- PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-L phosphoramidate Chemical compound NP([O-])([O-])=O PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 229920000729 poly(L-lysine) polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 229940069328 povidone Drugs 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 208000029340 primitive neuroectodermal tumor Diseases 0.000 description 1
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 1
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004405 propyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- JGQDBVXRYDEWGM-UHFFFAOYSA-N quinoxaline-6-carboxylic acid Chemical compound N1=CC=NC2=CC(C(=O)O)=CC=C21 JGQDBVXRYDEWGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000718 radiation-protective agent Substances 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 230000010410 reperfusion Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 201000000980 schizophrenia Diseases 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000010267 sodium hydrogen sulphite Nutrition 0.000 description 1
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 208000013274 squamous cell breast carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000012972 squamous cell carcinoma of colon Diseases 0.000 description 1
- SFVFIFLLYFPGHH-UHFFFAOYSA-M stearalkonium chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 SFVFIFLLYFPGHH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 201000000498 stomach carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 125000000101 thioether group Chemical group 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000005026 transcription initiation Effects 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 108091007466 transmembrane glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 230000005909 tumor killing Effects 0.000 description 1
- 231100000402 unacceptable toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 1
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 1
- NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N valeric acid Chemical compound CCCCC(O)=O NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
- A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
- A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
- A61K47/68031—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being an auristatin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70585—CD44
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2884—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD44
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57407—Specifically defined cancers
- G01N33/57423—Specifically defined cancers of lung
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/77—Internalization into the cell
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- G01N2333/70585—CD44
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Oncology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
서열식별번호: 19 또는 43을 포함하거나 또는 이로 본질적으로 이로 이루어진 CD44v6 또는 v9 에피토프에 특이적인 항체 또는 항원-결합 단편이 제공된다. 또한, 항체-약물-접합체 (ADC), 항체 또는 항원-결합 단편을 포함하는 다른 유도체, 그를 코딩하는 핵산 분자, 그의 제조 방법, 그를 포함하는 제약 조성물, 및 질환의 치료 또는 진단에서의 그의 용도가 제공된다.
Description
CD44는 동형 세포, 세포-매트릭스 및 세포-세포골격 상호작용에 관여하는 막횡단 당단백질의 패밀리이다. CD44의 세포외 도메인은 수많은 매트릭스 대체물: 히알루론산, 에즈린, 라딕신, 모에신 및 메를린, 헤파린-친화성 성장 인자, 혈관 내피 성장 인자, p185HER2, 표피 성장 인자 및 간세포 성장 인자에 결합한다. 그의 세포내 도메인은 세포골격 대체물인 안키린에 결합하여, 세포 및 조직 아키텍처 형태를 결정한다 (Bourguignon et al., 1998, Front. Biosci. 3:D637-649; Welch et al., 1995, J. Cell. Physiol. 164:605-612).
염색체 11에 맵핑되는 CD44 유전자는 60 kb에 걸친 20개의 엑손을 함유하고, 5개의 구조적 도메인으로 세분될 수 있다. 20개의 엑손 중 10개인 엑손 1-5 및 16-20은 CD44의 표준 형태 (CD44s 또는 CD44std)를 구성한다. 이러한 최소 CD44 이소형 (CD44s)은 상피 세포를 포함한 상이한 조직들에서 편재적으로 발현되지만, 특정 CD44 스플라이스 변이체 (CD44v, CD44var)는 상피 세포의 하위세트 상에서만 발현된다.
CD44 변이체는, 단백질의 세포외 부분 내의 10개의 엑손 (v1-v10)의 서열이 CD44s에서 완전히 절제되지만 상이한 조합으로 더 큰 변이체에서 나타날 수 있는 방식으로, 메신저 RNA (mRNA) 수준에서 선택적 스플라이싱에 의해 생성된다 (Screaton et al., 1992; Toelg et al., 1993; Hofmann et al., 1991). 변이체는 상이한 아미노산 서열이 단백질의 세포외 부분의 특정 부위에 삽입된다는 점에서 상이하다. 이론적으로, CD44 변이체 (CD44v) 이소형에 대해 1000개 초과의 잠재적 펩티드 도메인 조합이 존재한다. 모든 변이체 엑손을 포함한다면 분자량 230 kD의 단백질이 생성될 것이지만, 대부분의 변이체 이소형은 120 kD 미만이다. 보다 긴 변이체 이소형 (CD44v1-10)은 스플라이싱된 엑손 6-15 중 1개 이상을 포함하며, 인간에서는 엑손 6 (v1)이 발현되지 않는다.
일부 스플라이스 변이체는 조직-특이적 방식으로 정상 상피 세포에 의해 발현된다. 예를 들어, CD44v10은 정상 림프구에 의해 발현된다 (Okamoto et al., 1998, J. Natl. Cancer Inst. 90:307-315).
그러나, 최근에는, 특정 CD44 변이체의 발현이 비-전이성 래트 췌장 선암종 세포주뿐만 아니라 비-전이성 래트 섬유육종 세포주의 소위 자발적 전이 거동을 유발하는데 필요하고 충분하다는 것이 밝혀졌다 (Guenthert et al., 1991). 이러한 변이체는 다양한 인간 종양 세포뿐만 아니라 인간 종양 조직에서 검출될 수 있다.
예를 들어, 오카모토 등(Okamoto et al.)의 문헌 [Okamoto et al., 2002, Am. J. Pathol. 160:441-447; Okamoto et al., 2001, J. Cell. Biol. 155:755-762; Murakami et al., 2003, Oncogene 22:1511-1516]은 여러 인간 종양 (전립선암 제외)에서 25-30 kD의 절단 생성물이 CD44의 세포질 부분에 대한 항체를 사용하는 웨스턴 블롯에 의해 검출가능하다는 것을 제시하였다. CD44의 가용성 부분은 혈청에서 분자의 세포외 부분에 대한 항-CD44v 모노클로날 항체를 사용하여 100-160-kD 단편으로서 검출되었다 (Gansauge et al., 1997, Cancer 80:1733-1739). 순환 내로 흘러나온 CD44 이소형의 웨스턴 블롯 검출은 악성종양에 대한 진단 또는 예후 시험으로서의 역할을 할 수 있다 (Taylor et al., 1996, J. Soc. Gynecol. Invest. 3:289-294). 이어서 효소-연결된 혈청 면역검정 (ELISA)이 단백질의 보다 용이한 고감도 검출을 위해 개발될 수 있다. CD44v6의 증폭은 전이성 표현형의 췌장암 (Rall and Rustgi, 1995, Cancer Res. 55:1831-1835) 및 증가하는 등급의 유방암 (Woodman et al., 1996, Am. J. Pathol. 149:1519-1530; Bourguignon et al., 1999, Cell Motil. Cytoskeleton 43:269-287)에서 주목된다. 단일 또는 인접 변이체 엑손의 포함은 많은 양성 및 암 조직에서의 RT-PCR 및 서열분석에 의해 설명되었다 (Okamoto et al., 1998, J. Natl. Cancer Inst. 90:307-315; Okamoto et al., 2002, Am. J. Pathol. 160:441-447; Rall and Rustgi, 1995, Cancer Res. 55:1831-1835; Woodman, et al., 1996, Am. J. Pathol. 149:1519-1530; Bourguignon et al., 1999, Cell Motil. Cytoskeleton 43:269-287; Roca et al., 1998, Am. J. Pathol. 153:183-190; Franzmann et al., 2001, Otolaryngol. Head Neck Surg. 124:426-432; Terpe et al., 1996, Am. J. Pathol. 148:453-463; Christ et al., 2001, J. Leukoc. Biol. 69:343-352; Mortegani et al., 1999, Am. J. Pathol. 154:291-300; Miyake et al., 1998, Int. J. Cancer. 18:560-564; Yamaguchi et al., 1996, J. Clin. Oncol. 14:1122-1127).
전이 동안, 종양 세포는 원발성 부위로부터 탈착되고, 세포외 매트릭스 내로 이동하고, 혈액 및 림프관을 침습한다. 전이성 부위에서의 종양 생장은 CD44와 같은 부착 단백질을 통한 새로운 세포외 매트릭스에 대한 부착을 필요로 한다. 이는 많은 암이 탈조절된 CD44 mRNA 스플라이싱을 가져, 전이에 있어서 소정 역할을 할 수 있는 신규 CD44 변이체 이소형의 발현을 유도한다는 사실과 일치한다.
실제로, 결장직장 발암 과정에서의 CD44 변이체의 발현이 최근에 연구되었다 (Heider et al., 1993a). CD44 변이체의 발현은 정상 인간 결장 상피에는 부재하고, 약한 발현만이 음와의 증식 세포에서 검출가능하다. 종양 진행의 후기 단계에서, 예를 들어 선암종에서, 모든 악성종양은 CD44의 변이체를 발현한다. 또한, 변이체 CD44의 높은 수준의 조직 발현이 공격성 비-호지킨 림프종에서 나타났다 (Koopman et al., 1993).
엑손 v6은 특히 전이성 확산 과정에서 특별한 역할을 하는 것으로 보인다 (Rudy et al., 1993). 동물 모델에서, v6 특이적 에피토프에 대한 항체는 전이성 세포의 침강 및 전이의 성장을 방지할 수 있다 (Seiter et al., 1993). 결장 암종에서, v6 발현은 종양 진행과 상관관계가 있다 (Wielenga et al., 1993). 위 암종에서, v6 발현은 장 유형의 종양을 미만성 유형의 종양과 구별하는 중요한 진단 마커이다 (Heider et al., 1993b). 후자의 두 간행물에서, v6 특이적 에피토프에 대한 항체를 사용하여 v6 발현이 결정되었다.
CD44v6이 인간 종양 및 정상 조직에서 유리한 발현 패턴을 갖는 종양-연관 항원인 것으로 밝혀졌기 때문에 (Heider et al., 1995; Heider et al., 1996), 이는 항체-기반 진단 및 치료 접근법에 적용되어 왔다 (Heider et al., 1996; WO 95/33771; WO 97/21104).
다른 한편으로, CD44v9의 비정상적 발현은 위암, 결장암, 유방암, 폐암 및 두경부 편평 세포 암종과 연관되었다 (US20170137810A1). CD44v6 및 CD44v9는 둘 다 결장암에서 과다발현되는 것으로 이전에 입증되었다 (Wielenga et al., Am. J. Pathol., 1999, 154: 515-523). CD44v9는 또한 위암에서 과다발현되는 것으로 밝혀졌다 (Ue et al., Co-expression of osteopontin and CD44v9 in gastric cancer. Int J Cancer 1998; 79:127-132).
CD44v9 양성 세포는 종양의 후속 치료 내성, 재발 및 전이를 초래하는 ROS의 생산을 억제하는 증진된 능력을 입증한다 (Ishimoto et al., 2011; Tsugawaet al., 2012; Yae et al., 2012). 또한 CD44v9는 다양한 종양 유형에서 암 줄기 세포 마커인 것으로 보고되었다 (Aso et al., 2015).
인간에의 적용을 위해 비-인간 항체를 사용하는 경우에 발생하는 한 가지 심각한 문제는 이들이 환자에서 항체의 효능을 감소시키고 계속적인 투여를 손상시키는 인간 항-비-인간 반응을 급속하게 상승시킨다는 것이다. 이러한 문제를 극복하기 위해, 비-인간 항체를 "인간화"하는 개념이 관련 기술분야에서 개발되었다. 제1 접근법에서, 비-인간 가변 영역이 인간 불변 영역에 연결되는 비-인간/인간 키메라 항체를 구축함으로써 비-인간 항체의 인간화를 달성하도록 시도되었다 (Boulianne G. L., Hozumi N. and Shulman, M. J. (1984) Production of functional chimeric mouse/human antibody Nature 312: 643). 이렇게 생성된 키메라 항체는 원래의 비-인간 항체의 결합 특이성 및 친화도를 보유한다.
그러나, 키메라 항체는, 마우스 항체보다 훨씬 더 우수하긴 하지만, 인간에서 항-키메라 반응을 여전히 도출할 수 있다 (LoBuglio A. F., Wheeler R. H., Trang J., Haynes A., Rogers K., Harvey E. B., Sun L., Ghrayeb J. and Khazaeli M. B. (1989) Mouse/human chimeric monoclonal antibody in man: Kinetics and immune response. Proc. Natl. Acad. Sci. 86: 4220). 이러한 접근법은 추후에, 비-인간 가변 영역으로부터의 상보성 결정 영역 (CDR)을 인간 가변 영역에 그라프팅함으로써 비-인간 서열의 양을 추가로 감소시키고, 이어서 이들 "재성형된 인간" 가변 영역을 인간 불변 영역에 연결시킴으로써 정밀화되었다 (Riechmann L., Clark M., Waldmann H. and Winter G. (1988) Reshaping human antibodies for therapy. Nature 332: 323). CDR-그라프팅된 또는 재성형된 인간 항체는 마우스 항체로부터 유래된 것으로 확인될 수 있는 단백질 서열을 거의 또는 전혀 함유하지 않는다. CDR-그라프팅에 의해 인간화된 항체가 심지어 천연 인간 항체에서 보여지는 바와 같은 일부 면역 반응, 예컨대 항-동종이형 또는 항-이디오타입 반응을 여전히 도출할 수도 있지만, CDR-그라프팅된 항체는 마우스 항체보다 훨씬 덜 면역원성이어서 보다 장기간의 환자 치료를 가능하게 할 것이다.
그러나, 곧 CDR-그라프팅 단독으로 충분한 결합 친화도를 갖는 항체를 항상 생성하지는 않는 것으로 밝혀졌다. CDR-그라프팅된 항체는 때때로 그의 모 비-인간 항체와 비교하여 상대적으로 불량한 결합 특징을 갖는데, 이는 예를 들어 CDR 내의 아미노산보다 더 많은 아미노산이 항원 결합에 관여할 수 있기 때문이다. 그 결과, 불량한 결합 친화도를 갖는 CDR-그라프팅된 항체는 요법에 유용한 것으로 간주되지 않는다. 따라서, CDR-그라프팅된 항체의 낮은 면역원성을 비-인간 모 항체에 우수한 결합 특징과 조합하는 항체를 생성하기 위한 시도가 이루어져 왔다. CDR-그라프팅 이외에, 인간화 프레임워크 영역 내의 1개 내지 여러개의 아미노산이 결합 친화도를 보유하기 위해 설치류 공여자 기원의 잔기로서 보유되어야 한다는 개념이 개발되었다 (Queen et al., (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. 86: 10029-10033).
이러한 항체가 진단 및 요법에서 가질 수 있는 높은 잠재적 유용성 때문에, 인간 질환, 예컨대 다양한 암의 치료에 적합한 개선된 특성을 갖는 항체가 필요하다.
본 발명의 기저를 이루는 한 가지 문제는, 바람직하게는 공지된 CD44v6 또는 CD44v9 특이적 항체와 비교하여 더 우수한 특성을 갖는 대안적인 CD44v6 또는 CD44v9 특이적 항체를 제공하는 것이었다.
본 발명의 한 측면은 단리된 CD44v6 에피토프에 특이적인 단리된 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 제공하며, 여기서 상기 CD44v6 에피토프는 서열식별번호(SEQ ID NO): 19를 포함하거나 / 이로 본질적으로 이루어지거나 (예를 들어, 에피토프는 서열식별번호: 19 플러스 서열식별번호: 19의 N-말단 상의 1 또는 2개의 잔기, 서열식별번호: 19 플러스 서열식별번호: 19의 C-말단 상의 1 또는 2개의 잔기, 또는 서열식별번호: 19 플러스 서열식별번호: 19의 N-말단 및 C-말단 둘 다 상의 1 또는 2개의 잔기로 이루어짐), 또는 서열식별번호: 19로 이루어지고; 바람직하게는, 상기 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 상기 단리된 CD44v6 에피토프에 대해 생성되거나, 또는 상기 단리된 CD44v6 에피토프 및 담체 단백질 (예컨대 알부민, 바람직하게는 BSA 또는 오브알부민, 또는 키홀 림펫 헤모시아닌 (KLH))을 포함하는 융합 단백질 또는 그의 화학적 접합체에 대해 생성된다.
특정 실시양태에서, 모노클로날 항체는 (1) 서열식별번호: 1의 중쇄 가변 영역 (HCVR) CDR1 서열, 서열식별번호: 2의 HCVR CDR2 서열 및 서열식별번호: 3의 HCVR CDR3 서열을 포함하는 HCVR; (2) 서열식별번호: 10의 경쇄 가변 영역 (LCVR) CDR1 서열, 서열식별번호: 11의 LCVR CDR2 서열 및 서열식별번호: 12의 LCVR CDR3 서열을 포함하는 LCVR을 포함한다.
특정 실시양태에서, CD44v6 에피토프는 서열식별번호: 19이다.
특정 실시양태에서, CD44v6 에피토프는 서열식별번호: 19로 본질적으로 이루어진다 (예를 들어, 에피토프는 서열식별번호: 19 플러스 서열식별번호: 19의 N-말단 상의 1 또는 2개의 잔기, 서열식별번호: 19 플러스 서열식별번호: 19의 C-말단 상의 1 또는 2개의 잔기, 또는 서열식별번호: 19 플러스 서열식별번호: 19의 N-말단 및 C-말단 둘 다 상의 1 또는 2개의 잔기로 이루어짐).
특정 실시양태에서, CD44v6 에피토프는 서열식별번호: 24 (HEGYRQTPKEDS)이다.
특정 실시양태에서, (i) HCVR은 서열식별번호: 7-9 중 1개 이상을 추가로 포함하고/거나, (ii) LCVR은 서열식별번호: 13-18 중 1개 이상을 추가로 포함한다.
특정 실시양태에서, 단리된 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 상기 CD44v6 에피토프 또는 상기 CD44v6 에피토프를 갖는 세포에 약 10 nM, 약 5 nM 또는 약 2 nM 또는 그 미만의 KD로 결합한다.
특정 실시양태에서, 단리된 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 인간-마우스 키메라 항체, 인간화 항체, 인간 항체, CDR-그라프팅된 항체 또는 재표면화 항체이다.
특정 실시양태에서, 그의 항원-결합 단편은 Fab, Fab', F(ab')2, Fd, 단일 쇄 Fv 또는 scFv, 디술피드 연결된 Fv, V-NAR 도메인, IgNar, 인트라바디, IgGΔCH2, 미니바디, F(ab')3, 테트라바디, 트리아바디, 디아바디, 단일-도메인 항체, DVD-Ig, Fcab, mAb2, (scFv)2, 또는 scFv-Fc이다.
관련 측면에서, 본 발명은 단리된 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 제공하며, 여기서 상기 단리된 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 참조 모노클로날 항체에 의해 결합되는 CD44v6의 동일한 에피토프에 결합하거나 또는 CD44v6의 동일한 에피토프에의 결합에 대해 상기 참조 모노클로날 항체와 경쟁하고, 여기서 상기 참조 모노클로날 항체는 (1) 서열식별번호: 1의 중쇄 가변 영역 (HCVR) CDR1 서열, 서열식별번호: 2의 HCVR CDR2 서열 및/또는 서열식별번호: 3의 HCVR CDR3 서열을 포함하는 HCVR; (2) 서열식별번호: 10의 경쇄 가변 영역 (LCVR) CDR1 서열, 서열식별번호: 11의 LCVR CDR2 서열 및/또는 서열식별번호: 12의 LCVR CDR3 서열을 포함하는 LCVR을 포함한다.
본 발명의 또 다른 측면은 단리된 CD44v9 에피토프에 특이적인 단리된 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 제공하며, 여기서 상기 CD44v9 에피토프는 서열식별번호: 43을 포함하거나 / 이로 본질적으로 이루어지거나 (예를 들어, 에피토프는 서열식별번호: 43 플러스 서열식별번호: 43의 N-말단 상의 1 또는 2개의 잔기, 서열식별번호: 19 플러스 서열식별번호: 43의 C-말단 상의 1 또는 2개의 잔기, 또는 서열식별번호: 43 플러스 서열식별번호: 43의 N-말단 및 C-말단 둘 다 상의 1 또는 2개의 잔기로 이루어짐), 또는 서열식별번호: 43으로 이루어지고; 바람직하게는, 상기 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 상기 단리된 CD44v9 에피토프에 대해 생성되거나, 또는 상기 단리된 CD44v9 에피토프 및 담체 단백질 (예컨대 알부민, 바람직하게는 BSA 또는 오브알부민 또는 키홀 림펫 헤모시아닌 (KLH))을 포함하는 융합 단백질 또는 그의 화학적 접합체에 대해 생성된다.
특정 실시양태에서, 모노클로날 항체는 (1) 서열식별번호: 25의 중쇄 가변 영역 (HCVR) CDR1 서열, 서열식별번호: 26의 HCVR CDR2 서열 및 서열식별번호: 27의 HCVR CDR3 서열을 포함하는 HCVR; (2) 서열식별번호: 34의 경쇄 가변 영역 (LCVR) CDR1 서열, 서열식별번호: 35의 LCVR CDR2 서열 및 서열식별번호: 36의 LCVR CDR3 서열을 포함하는 LCVR을 포함한다.
특정 실시양태에서, CD44v9 에피토프는 서열식별번호: 43이다.
특정 실시양태에서, CD44v9 에피토프는 서열식별번호: 43으로 본질적으로 이루어진다 (예를 들어, 에피토프는 서열식별번호: 43 플러스 서열식별번호: 43의 N-말단 상의 1 또는 2개의 잔기, 서열식별번호: 43 플러스 서열식별번호: 43의 C-말단 상의 1 또는 2개의 잔기, 또는 서열식별번호: 43 플러스 서열식별번호: 43의 N-말단 및 C-말단 둘 다 상의 1 또는 2개의 잔기로 이루어짐).
특정 실시양태에서, CD44v9 에피토프는 서열식별번호: 44 (SHEGLEEDKDH)이다.
특정 실시양태에서, (i) HCVR은 서열식별번호: 28-33 중 1개 이상을 추가로 포함하고/거나, (ii) LCVR은 서열식별번호: 37-42 중 1개 이상을 추가로 포함한다.
특정 실시양태에서, 단리된 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 상기 CD44v9 에피토프 또는 상기 CD44v9 에피토프를 갖는 세포에 약 10 nM, 약 5 nM, 약 2 nM, 약 1 nM 또는 그 미만의 KD로 결합한다.
특정 실시양태에서, 단리된 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 인간-마우스 키메라 항체, 인간화 항체, 인간 항체, CDR-그라프팅된 항체 또는 재표면화 항체이다.
특정 실시양태에서, 그의 항원-결합 단편은 Fab, Fab', F(ab')2, Fd, 단일 쇄 Fv 또는 scFv, 디술피드 연결된 Fv, V-NAR 도메인, IgNar, 인트라바디, IgGΔCH2, 미니바디, F(ab')3, 테트라바디, 트리아바디, 디아바디, 단일-도메인 항체, DVD-Ig, Fcab, mAb2, (scFv)2, 또는 scFv-Fc이다.
관련 측면에서, 본 발명은 단리된 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 제공하며, 여기서 상기 단리된 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 참조 모노클로날 항체에 의해 결합되는 CD44v9의 동일한 에피토프에 결합하거나 또는 CD44v9의 동일한 에피토프에의 결합에 대해 상기 참조 모노클로날 항체와 경쟁하고, 여기서 상기 참조 모노클로날 항체는 (1) 서열식별번호: 25의 중쇄 가변 영역 (HCVR) CDR1 서열, 서열식별번호: 26의 HCVR CDR2 서열 및/또는 서열식별번호: 27의 HCVR CDR3 서열을 포함하는 HCVR; (2) 서열식별번호: 34의 경쇄 가변 영역 (LCVR) CDR1 서열, 서열식별번호: 35의 LCVR CDR2 서열 및/또는 서열식별번호: 36의 LCVR CDR3 서열을 포함하는 LCVR을 포함한다.
본 발명의 또 다른 측면은 대상 항-CD44v6 또는 항-CD44v9 항체 또는 그의 항원 결합 단편 중 어느 하나의 HCVR 및/또는 LCVR을 포함하는 폴리펩티드를 제공한다.
특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 융합 단백질 (예컨대 키메라 항원 T 세포 수용체)이다.
본 발명의 또 다른 측면은 임의의 대상 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명의 또 다른 측면은 임의의 대상 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 제공한다.
특정 실시양태에서, 벡터는 발현 벡터 (예를 들어, 포유동물 발현 벡터, 효모 발현 벡터, 곤충 발현 벡터 또는 박테리아 발현 벡터)이다.
본 발명의 또 다른 측면은 임의의 대상 항-CD44v6 또는 항-CD44v9 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 임의의 대상 폴리펩티드, 임의의 대상 폴리뉴클레오티드 또는 임의의 대상 벡터를 포함하는 세포를 제공한다.
특정 실시양태에서, 세포는 임의의 대상 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 임의의 대상 폴리펩티드를 발현한다.
특정 실시양태에서, 세포는 BHK 세포, CHO 세포 또는 COS 세포이다.
특정 실시양태에서, 세포는 세포의 표면 상에 임의의 대상 항-CD44v6 또는 항-CD44v9 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 임의의 대상 폴리펩티드를 포함한다.
특정 실시양태에서, 세포는 임의의 대상 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 임의의 대상 폴리펩티드를 포함하는 키메라 항원 수용체를 보유하는 T-세포 (CAR-T 세포)이다.
본 발명의 또 다른 측면은 서열식별번호: 19를 포함하거나 / 이로 본질적으로 이루어지거나 (예를 들어, 서열식별번호: 19 플러스 서열식별번호: 19의 N-말단 상의 1 또는 2개의 잔기, 서열식별번호: 19 플러스 서열식별번호: 19의 C-말단 상의 1 또는 2개의 잔기, 또는 서열식별번호: 19 플러스 서열식별번호: 19의 N-말단 및 C-말단 둘 다 상의 1 또는 2개의 잔기로 이루어진 에피토프), 또는 서열식별번호: 19로 이루어진 단리된 CD44v6 에피토프를 제공한다.
본 발명의 또 다른 측면은 제28항의 단리된 CD44v6 에피토프 및 담체 단백질 (예컨대 알부민, 바람직하게는 BSA 또는 오브알부민, 또는 키홀 림펫 헤모시아닌 (KLH))을 포함하는 융합 단백질 또는 화학적 접합체를 제공한다.
본 발명의 또 다른 측면은 서열식별번호: 43을 포함하거나 / 이로 본질적으로 이루어지거나 (예를 들어, 서열식별번호: 43 플러스 서열식별번호: 43의 N-말단 상의 1 또는 2개의 잔기, 서열식별번호: 43 플러스 서열식별번호: 43의 C-말단 상의 1 또는 2개의 잔기, 또는 서열식별번호: 43 플러스 서열식별번호: 43의 N-말단 및 C-말단 둘 다 상의 1 또는 2개의 잔기로 이루어진 에피토프), 또는 서열식별번호: 43으로 이루어진 단리된 CD44v9 에피토프를 제공한다.
본 발명의 또 다른 측면은 제28a항의 단리된 CD44v9 에피토프 및 담체 단백질 (예컨대 알부민, 바람직하게는 BSA 또는 오브알부민, 또는 키홀 림펫 헤모시아닌 (KLH))을 포함하는 융합 단백질 또는 화학적 접합체를 제공한다.
본 발명의 또 다른 측면은 (a) 임의의 대상 세포를 배양하는 단계; 및 (b) 상기 배양된 세포로부터 임의의 대상 항-CD44v6 또는 항-CD44v9 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 임의의 대상 폴리펩티드를 단리하는 단계를 포함하는, 임의의 대상 항-CD44v6 또는 항-CD44v9 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 임의의 대상 폴리펩티드를 생산하는 방법을 제공한다.
특정 실시양태에서, 세포는 진핵 세포이다.
본 발명의 또 다른 측면은 하기 화학식을 갖는 면역접합체 (또는 항체-약물 접합체 또는 ADC)이며: Ab-[-L-D]n, 여기서 Ab는 임의의 대상 항-CD44v6 또는 항-CD44v9 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 그의 임의의 대상 폴리펩티드이고, 이는 링커-약물 모이어티 -[-L-D]의 1개 이상의 단위에 공유 연결되고, 여기서 L은 링커이고, D는 세포독성 약물이고; n은 1 내지 20 (예를 들어, 1-12)의 정수이고; 여기서 각각의 링커-약물 모이어티는 동일하거나 상이한 링커 L 또는 세포독성 약물 D를 가질 수 있는 것인 면역접합체를 제공한다.
특정 실시양태에서, 각각의 링커-약물 모이어티 -[-L-D]는 Lys의 측쇄 아미노기를 통해 Ab에 공유 연결된다.
특정 실시양태에서, 각각의 링커-약물 모이어티 -[-L-D]는 Cys의 측쇄 티올 기를 통해 Ab에 공유 연결된다.
특정 실시양태에서, 각각의 링커-약물 모이어티 -[-L-D]는 부위-특이적으로 혼입된 비-천연 아미노산을 통해 Ab에 공유 연결된다.
특정 실시양태에서, 각각의 링커 L은 펩티드 단위를 포함한다.
특정 실시양태에서, 펩티드 단위는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 2-10 또는 2-5개의 아미노산 잔기를 포함한다.
특정 실시양태에서, 링커 L은 프로테아제 (예를 들어, 카텝신)에 의해 절단가능하지 않다.
특정 실시양태에서, 링커 L은 프로테아제 (예를 들어, 카텝신), 산성 환경 또는 산화환원 상태 변화에 의해 절단될 수 있는 절단가능한 링커이다.
특정 실시양태에서, 세포독성 약물은 DNA 삽입제, 미세관 결합제, 토포이소머라제 I 억제제 또는 DNA 작은 홈 결합제이다.
특정 실시양태에서, 세포독성 약물은 아우리스타틴 부류, 예컨대 모노메틸 아우리스타틴 E (MMAE) 및 MMAF, 메이탄신 부류, 예컨대 DM-1, DM-3, DM-4, 칼리케아미신, 예컨대 오조가미신, SN-38 또는 PBD (피롤로벤조디아제핀)이다.
본 발명의 또 다른 측면은 임의의 대상 항-CD44v6 또는 항-CD44v9 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 그의 폴리펩티드 또는 그의 면역접합체 및 제약상 허용되는 담체 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
본 발명의 또 다른 측면은 CD44v6을 발현하는 세포를 임의의 대상 항-CD44v6 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 그의 대상 폴리펩티드 또는 그의 대상 면역접합체 또는 그의 대상 제약 조성물과 접촉시키는 것을 포함하는, CD44v6을 발현하는 세포의 성장을 억제하는 방법을 제공한다.
특정 실시양태에서, 세포는 종양 세포이다.
특정 실시양태에서, 종양 세포는 폐암 (예컨대 NSCLC)으로부터의 것이다.
특정 실시양태에서, 종양 세포는 결장직장암, 유방암, 두경부암, 난소암, 방광암, 췌장암 또는 뇌의 전이성 암으로부터의 것이다.
본 발명의 또 다른 측면은 CD44v9를 발현하는 세포를 임의의 대상 항-CD44v9 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 그의 폴리펩티드 또는 그의 면역접합체 또는 그의 제약 조성물과 접촉시키는 것을 포함하는, CD44v9를 발현하는 세포의 성장을 억제하는 방법을 제공한다.
특정 실시양태에서, 세포는 종양 세포이다.
특정 실시양태에서, 종양 세포는 폐암 (예컨대 NSCLC)으로부터의 것이다.
특정 실시양태에서, 종양 세포는 결장직장암, 유방암, 간암, 두경부암, 난소암, 방광암, 췌장암 또는 뇌의 전이성 암으로부터의 것이다.
본 발명의 또 다른 측면은 세포가 CD44v6을 발현하는 암을 갖는 대상체에게 CD44v6 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 CD44v6의 길항제의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체를 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명의 또 다른 측면은 대상체에게 CD44v6 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 CD44v6의 길항제의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 세포가 CD44v6을 발현하는 세포-증식성 장애를 치료하는 방법을 제공한다.
특정 실시양태에서, CD44v6의 길항제는 임의의 대상 항-CD44v6 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 그의 대상 폴리펩티드 또는 그의 대상 면역접합체 또는 그의 대상 제약 조성물을 포함한다.
특정 실시양태에서, 암은 유방, 폐, 간, 결장직장, 두경부, 식도, 췌장, 난소, 방광, 위, 피부, 자궁내막, 난소, 고환, 식도, 전립선 또는 신장 기원을 포함한 상피 암종; 골 및 연부-조직 육종, 예컨대 골육종, 연골육종, 섬유육종, 악성 섬유성 조직구종 (MFH), 평활근육종; 조혈 악성종양, 예컨대 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종 또는 백혈병; 신경외배엽 종양, 예컨대 말초 신경 종양, 성상세포종 또는 흑색종; 또는 중피종이다.
본 발명의 또 다른 측면은 세포가 CD44v9를 발현하는 암을 갖는 대상체에게 CD44v9 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 CD44v9의 길항제의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체를 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명의 또 다른 측면은 대상체에게 CD44v9 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 CD44v9의 길항제의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 세포가 CD44v9를 발현하는 세포-증식성 장애를 치료하는 방법을 제공한다.
특정 실시양태에서, CD44v9의 길항제는 임의의 대상 항-CD44v9 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 그의 폴리펩티드 또는 그의 면역접합체 또는 그의 제약 조성물을 포함한다.
특정 실시양태에서, 암은 유방, 폐, 간, 결장직장, 두경부, 식도, 췌장, 난소, 방광, 위, 피부, 자궁내막, 난소, 고환, 식도, 전립선 또는 신장 기원을 포함한 상피 암종; 골 및 연부-조직 육종, 예컨대 골육종, 연골육종, 섬유육종, 악성 섬유성 조직구종 (MFH), 평활근육종; 조혈 악성종양, 예컨대 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종 또는 백혈병; 신경외배엽 종양, 예컨대 말초 신경 종양, 성상세포종 또는 흑색종; 또는 중피종이다.
본 발명의 또 다른 측면은 대상체로부터의 샘플을 임의의 대상 항-CD44v6 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 접촉시키는 것을 포함하는, 대상체로부터의 샘플에서 CD44v6의 존재 및/또는 존재비를 결정하는 방법을 제공한다.
본 발명의 또 다른 측면은 대상체로부터의 샘플을 임의의 대상 항-CD44v9 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 접촉시키는 것을 포함하는, 대상체로부터의 샘플에서 CD44v9의 존재 및/또는 존재비를 결정하는 방법을 제공한다.
본 발명의 또 다른 측면은 (1) 대상체로부터의 암 샘플에서 CD44v6의 존재 및/또는 존재비를 결정하는 대상 방법을 사용하여 암 샘플에서 CD44v6을 발현하는 대상체를 확인하는 단계, (2) 상기 대상체에게 치료 유효량의 임의의 대상 항-CD44v6 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 그의 폴리펩티드 또는 그의 면역접합체 또는 그의 제약 조성물을 투여하는 단계를 포함하며, 이에 의해 세포가 CD44v6을 발현하는 암을 갖는 대상체를 진단 및 치료하는 것인, 상기 암을 갖는 대상체를 진단 및 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명의 또 다른 측면은 (1) 대상체로부터의 암 샘플에서 CD44v9의 존재 및/또는 존재비를 결정하는 대상 방법을 사용하여 암 샘플에서 CD44v9를 발현하는 대상체를 확인하는 단계, (2) 상기 대상체에게 치료 유효량의 임의의 대상 항-CD44v9 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 그의 폴리펩티드 또는 그의 면역접합체 또는 그의 제약 조성물을 투여하는 단계를 포함하며, 이에 의해 세포가 CD44v9를 발현하는 암을 갖는 대상체를 진단 및 치료하는 것인, 상기 암을 갖는 대상체를 진단 및 치료하는 방법을 제공한다.
실시예에만 기재된 것 및 본 발명의 한 측면 하에만 기재된 것을 포함한 본원에 기재된 임의의 실시양태는 명백하게 배제되거나 부적절하지 않은 한 1개 이상의 다른 실시양태와 조합될 수 있다는 것이 이해되어야 한다.
도 1a는 CD44v6 또는 CD44v9 모노클로날 항체 mAb119 또는 mAb116을 단리하기 위한 살아있는 세포 Mab어레이(MabArray)의 개략도이다. 구체적으로, 약 6 x 104개의 상이한 모노클로날 항체 (mAb)를 어레이젯(Arrayjet) 프린터를 사용하여 4개의 유리 알데히드 칩 (75x25mm) 상에 인쇄하여 Mab어레이를 생성하였다. 이어서 Mab어레이 칩을 10% BSA로 밤새 차단한 후에 실험을 수행하였다. 폐암 세포주 PC9 세포를 녹색 형광 핵산 염색제 SYTO14 (써모피셔 사이언티픽(ThermoFisher Scientific))로 표지하고, 1시간 동안 PBS 중 1 x 107개 세포/mL의 밀도로 칩과 함께 인큐베이션하였다. 이어서 Mab어레이 칩을 PBS로 부드럽게 세척하고, 진픽스(Genepix) 스캐너로 스캐닝하였다.
도 1b는 4개의 독립적인 PC9 살아있는 세포 Mab어레이 실험에서의 mAb119 및 대조군 mAb의 영상을 보여준다. 살아있는 PC9 세포를 Mab어레이 칩 상에서 mAb119에 의해 포획하였다.
도 2는 PC9 세포에 대한 mAb119의 FACS 분석의 결과를 보여준다. PC9 세포를 얼음 상에서 30분 동안 mAb119의 연속 희석물 (30000 pM 내지 0.1 pM, 3배 연속 희석물)과 함께 인큐베이션함으로써 mAb119의 PC9 FACS 적정을 수행한 후에, 세포를 30분 동안 알렉사488-접합된 항-마우스 IgG (잭슨 랩(Jackson lab))로 염색하였다. BD C6을 사용하여 MFI를 분석하였다. 친화도 KD는 약 2 nM인 것으로 결정되었다.
도 3은 PC9 세포가 결합된 mAb119를 내재화하였다는 것을 보여준다. 살아있는 PC 세포를 커버슬립 상에서 배양하고, 얼음 상에서 1시간 동안 10 μg/mL mAb119와 함께 인큐베이션한 후에, 세포를 PBS로 3회 세척하였다. 이어서 세포를 37℃에서 0시간, 2시간 또는 4시간 동안 배양한 후에, 4% PFA로 고정한 후에, FACS에 의해 FITC 접합된 2차 항체로 검출하였다. 이어서 PC9 세포를 mAb119 (녹색 형광 염료 알렉사488에 의해 표지됨) 및 항-LAMP1 (적색 형광 염료 알렉사595에 의해 표지됨)에 의해 공동-염색하였다. 구체적으로, PC9 세포를 0.1% 트리톤 X로 투과시키고, mAb119 및 토끼 항-LAMP1 항체 (1:200, 압캠(Abcam)) 및 mAb119와 함께 1시간 동안 인큐베이션하였다. 이어서 항체를 각각 알렉사488 접합된 항-마우스 항체 및 알렉사595 접합된 항-토끼 항체로 표지하였다. 리소솜-회합 막 단백질 1 (LAMP1)은 주로 리소솜 막을 가로질러 발현되는 당단백질이다. mAb119 및 항-LAMP1의 공동국재화 신호는 황색 신호를 생성하며, 이는 PC9 세포에 의한 mAb119의 리소솜 구획으로의 내재화를 나타낸다. mAb119는 0시간에 LAMP1과의 임의의 공동-국재화 없이 세포 표면 상에서 처음 관찰되었다. mAb119 및 LAMP1의 공동국재화는 2시간 및 4시간에 관찰되었다.
표면 형광에 기초한 FACS 분석은 PC9 세포 상에서의 mAb119 내재화를 보여준다 (데이터는 제시되지 않음). 구체적으로, 살아있는 PC9 세포를 얼음 상에서 0.5시간 동안 10 μg/mL mAb119와 함께 인큐베이션한 후에, PBS로 3회 세척하였다. 이어서 세포를 37℃에서 0시간, 2시간 또는 4시간 동안 배양한 후에, 4% PFA로 고정시켰다. 이어서 세포를 알렉사488 접합된 항-마우스 항체로 염색하고, 표면 MFI를 계산함으로써 FACS로 분석하였다. mAb119의 표면 국재화를 나타내는 표면 MFI는 37℃에서 2시간 및 4시간 인큐베이션한 후에 각각 70% 및 80%만큼 감소하였다. PC9 세포에서의 평균 퍼센트 내재화 ± SEM (n = 3)으로서 표현된 FACS 데이터의 정량화가 제시된다. 수직축은 상대 표면 형광 (%)을 나타낸다. 데이터는 mAb119가 막 항원에 결합할 수 있고 PC9 세포에 내재화될 수 있다는 것을 제시한다.
도 4는 mAb119의 간접적 세포독성이 항원 발현-의존성이라는 것을 보여준다. PC9 또는 TE1 세포를 96-웰 플레이트에서 2000개 세포 / 웰의 전면생장률로 밤새 배양하였다. 72시간 동안 2 μg/mL MMAE-접합된 염소 항-마우스 IgG 항체와 함께 mAb119의 연속 희석물로 세포를 처리하였다. 이어서 CCK8 (도진도(dojindo))에 의해 세포 수를 계산하였다. TE1 및 PC9 세포에서 상이한 세포독성이 관찰되었다. 항체 칵테일은 PC9 성장을 18 pM의 IC50으로 억제한 반면, 동일한 항체 칵테일은 TE1 세포 성장을 억제하지 않았다. 평균 퍼센트 성장 억제 ± SEM (n = 3)으로서 표현된, TE1 및 PC9 세포로부터 유도된 대표적인 데이터가 제시된다.
2종의 세포주에서의 mAb119 항원의 발현을 또한 FACS에 의해 결정하였다. 측면 삽입 패널은 mAb119에 의해 표지된 TE1 (상부 패널) 및 PC9 (하부 패널)의 FACS 분석을 보여준다. 결과는 PC9 세포가 mAb119 항원을 발현하지만 TE1 세포는 그렇지 않다는 것을 시사한다. 따라서 간접적 세포독성은 항원 발현과 양의 상관관계가 있었다.
도 5a 및 5b는 mAb119가 인간 CD44 v6 엑손을 표적화한다는 것을 보여준다. 48시간 동안 인간 CD44 v6 에피토프를 표적화하는 4종의 상이한 siRNA의 혼합물 또는 대조군 siRNA로 PC9를 형질감염시켰다. 이어서 형질감염된 세포를 mAb119로 염색하고 FACS에 의해 분석하거나, 또는 총 단백질을 추출하고 mAb119 항원의 존재비를 웨스턴 블롯팅에 의해 평가하였다. CD44v6의 녹다운은 FACS에서 mAb119 표면 염색 강도를 감소시켰다 (도 5a, CD44v6 siRNA (V6.si)가 mAb119의 표면 신호를 억제한다는 것을 보여주는 FACS 데이터 (n=3을 나타냄)). CD44v6의 녹다운은 또한 mAb119 항원의 단백질 발현 수준을 감소시켰다 (도 5b, CD44v6 siRNA (V6.si)가 mAb119 항원의 단백질 발현을 억제한다는 것을 보여주는 웨스턴 블롯팅 데이터 (n=3을 나타냄)). 데이터는 mAb119가 CD44v6을 표적화한다는 것을 시사한다.
도 6a는 mAb119-ADC (AMT119)의 구조의 개략도이다. mAb119를 MC-vc-PAB-MMAE와 접합시켰다.
도 6b는 AMT119의 HPLC-HIC (소수성 상호작용 크로마토그래피)의 그래프이다. 평균 약물-항체 비 (DAR)는 약 6이었다.
도 7은 PC9 및 TE1 세포에서의 AMT119의 세포독성을 보여준다. 그래프는 AMT119의 평균 퍼센트 성장 억제 ± SEM (n = 3)을 나타내는, PC9 및 TE1 세포로부터 유도된 대표적인 데이터이다. IC50 값은 PC9 및 TE1 세포에서 각각 2,600 pM 및 39,000 pM이었다. 차이는 2종의 세포주에서의 CD44v6의 상이한 발현 수준과 일치하였다 (도 4 참조).
도 8a 및 8b는 인간 비소세포 폐암 (NSCLC, 도 8a의 우측 패널) 및 정상 폐 조직 (도 8a의 좌측 패널)에서의 CD44v6의 발현을 보여준다. mAb119 항체를 사용하는 CD44v6 단백질의 IHC (면역조직화학) 검출이 일련의 정상 및 암 조직으로부터 제시되어 있으며, 이는 CD44v6이 종양-특이적 방식으로 상향조절되었음을 보여준다. 현미경사진 영상은 0, 1+, 2+ 및 3+ 염색 강도를 나타내는 종양 조직을 도시한다 (도 8a의 우측 패널). 도 8b는 NSCLC의 상이한 하위유형에서의 CD44v6의 유병률을 보여준다. SCC, 편평 세포 암종; LCC, 대세포 암종.
도 9는 PC9 세포에 대한 mAb116의 FACS 분석의 결과를 보여준다. PC9 세포를 얼음 상에서 30분 동안 mAb116의 연속 희석물 (30000 pM 내지 0.1 pM, 3배 연속 희석물)과 함께 인큐베이션함으로써 mAb116의 PC9 FACS 적정을 수행한 후에, 세포를 30분 동안 알렉사488-접합된 항-마우스 IgG (잭슨 랩)로 염색하였다. BD C6을 사용하여 MFI를 분석하였다. 친화도 KD는 약 980 pM (또는 0.98 nM)인 것으로 결정되었다.
도 10은 PC9 세포가 결합된 mAb116을 내재화하였다는 것을 보여준다. 살아있는 PC 세포를 커버슬립 상에서 배양하고, 얼음 상에서 1시간 동안 10 μg/mL mAb116과 함께 인큐베이션한 후에, 세포를 PBS로 3회 세척하였다. 이어서 세포를 37℃에서 0시간, 2시간 또는 4시간 동안 배양한 후에, 4% PFA로 고정한 후에, FACS에 의해 FITC 접합된 2차 항체로 검출하였다. 이어서 PC9 세포를 mAb116 (녹색 형광 염료 알렉사488에 의해 표지됨) 및 항-LAMP1 (적색 형광 염료 알렉사595에 의해 표지됨)에 의해 공동-염색하였다. 구체적으로, PC9 세포를 0.1% 트리톤 X로 투과시키고, mAb116 및 토끼 항-LAMP1 항체 (1:200, 압캠) 및 mAb116과 함께 1시간 동안 인큐베이션하였다. 이어서 항체를 각각 알렉사488 접합된 항-마우스 항체 및 알렉사595 접합된 항-토끼 항체로 표지하였다. mAb116 및 항-LAMP1의 공동국재화 신호는 황색 신호를 생성하며, 이는 PC9 세포에 의한 mAb116의 리소솜 구획으로의 내재화를 나타낸다. mAb116은 0시간에 LAMP1과의 임의의 공동-국재화 없이 세포 표면 상에서 처음 관찰되었다. mAb116 및 LAMP1의 공동국재화는 2시간 및 4시간에 관찰되었다.
표면 형광에 기초한 FACS 분석은 PC9 세포 상에서의 mAb116 내재화를 보여준다 (데이터는 제시되지 않음). 구체적으로, 살아있는 PC9 세포를 얼음 상에서 0.5시간 동안 10 μg/mL mAb116과 함께 인큐베이션한 후에, PBS로 3회 세척하였다. 이어서 세포를 37℃에서 0시간, 2시간 또는 4시간 동안 배양한 후에, 4% PFA로 고정시켰다. 이어서 세포를 알렉사488 접합된 항-마우스 항체로 염색하고, 표면 MFI를 계산함으로써 FACS로 분석하였다. mAb116의 표면 국재화를 나타내는 표면 MFI는 37℃에서 4시간 인큐베이션시 약 90%만큼 감소하였다. PC9 세포에서의 평균 퍼센트 내재화 ± SEM (n = 3)으로서 표현된 FACS 데이터의 정량화가 제시된다. 수직축은 상대 표면 형광 (MFI, %)을 나타낸다. 데이터는 mAb116이 막 항원에 결합할 수 있고 PC9 세포에 내재화될 수 있다는 것을 보여준다.
도 11은 mAb116 및 대조군 IgG의 간접적 세포독성을 보여준다. PC9 세포를 96-웰 플레이트에서 2000개 세포 / 웰의 전면생장률로 밤새 배양하였다. 이어서 72시간 동안 2 μg/mL MMAE-접합된 염소 항 마우스 IgG 항체와 함께 IgG 또는 mAb116의 연속 희석물로 세포를 처리하였다. 이어서 CCK8 (도진도)에 의해 세포 수를 계산하였다. mAb116 항체 칵테일은 PC9 성장을 약 30 pM의 IC50으로 억제하였지만, IgG 칵테일은 어떠한 효과도 나타내지 않았다. 평균 퍼센트 성장 억제 ± SEM (n = 3)으로서 표현된, PC9 세포로부터 유도된 대표적인 데이터가 제시된다.
도 12a 및 12b는 mAb116이 인간 CD44 v9 엑손을 표적화한다는 것을 보여준다. 48시간 동안 인간 CD44 V9 에피토프를 표적화하는 siRNA 또는 대조군 siRNA로 PC9를 형질감염시켰다. 이어서 형질감염된 세포를 mAb116으로 염색하고 FACS에 의해 분석하거나, 또는 총 단백질을 추출하고 mAb116 항원의 존재비를 웨스턴 블롯팅에 의해 평가하였다. CD44v9의 녹다운은 FACS에서 mAb116 표면 염색 강도를 감소시켰다 (도 12a, CD44v9 siRNA (V9.si)가 mAb116의 표면 신호를 억제한다는 것을 보여주는 FACS 데이터 (n=3을 나타냄)). CD44v9의 녹다운은 또한 mAb116 항원의 단백질 발현 수준을 감소시켰다 (도 12b). 데이터는 mAb116이 CD44v9를 표적화한다는 것을 시사한다.
도 13a는 mAb116-ADC (AMT116)의 구조의 개략도이다. mAb116을 MC-vc-PAB-MMAE와 접합시켰다.
도 13b는 AMT116의 HPLC-HIC의 그래프이다. 평균 약물-항체 비 (DAR)는 약 4.23이었다.
도 14는 PC9 및 KYSE-150 (식도 암종 세포주) 세포에서의 AMT116의 세포독성을 보여준다. 그래프는 AMT116 및 IgG 대조군의 평균 퍼센트 성장 억제 ± SEM (n = 3)을 나타내는, PC9 및 KYSE-150 세포로부터 유도된 대표적인 데이터이다. AMT116의 IC50 값은 PC9 및 KYSE-150 세포에서 각각 134 pM 및 670.2 pM이었다.
도 15는 AMT116의 생체내 효능을 보여준다. 약 5 x 106개 KYSE-150 세포를 1:1 마트리겔에 현탁시킨 후에, 암컷 Balb/c 누드 마우스 (8-10주령, 20-22 g)의 우측 측복부에 주사하였다. 종양 부피 (0.5 x 길이 x 폭2으로 측정됨) 및 체중을 적어도 매주 2회 결정하였다. 마우스를 투여 전 그의 초기 종양 크기 (중앙 종양 부피 대략 250-500 mm3)에 기초하여 무작위로 그룹핑하였다 (n=5/군). 비히클 (PBS), AMT116 또는 대조군 ADC를 i.v. 주입에 의해 투여하였다 (3 mg/kg, q3d x3). 군 평균 (±SEM) 종양 부피를 연구 지속기간에 걸쳐 플롯팅하였다.
도 16a 및 16b는 인간 비소세포 폐암 (도 16a의 우측 패널) 및 정상 폐 조직 (도 16a의 좌측 패널)에서의 CD44v9의 발현을 보여준다. mAb116 항체를 사용하는 CD44v9 단백질의 IHC 검출이 일련의 정상 및 암 조직으로부터 제시되어 있으며, 이는 CD44v9가 종양-특이적 방식으로 상향조절되었음을 보여준다. 현미경사진 영상은 0, 1+, 2+ 및 3+ 염색 강도를 나타내는 종양 조직을 도시한다 (도 16a의 우측 패널). 도 16b는 NSCLC의 상이한 하위유형에서의 CD44v9의 유병률을 보여준다. SCC, 편평 세포 암종; LCC, 대세포 암종.
도 17은 다수의 종양 유형에서의 CD44v9의 과다발현을 보여준다. mAb116 항체를 사용하는 CD44v9 단백질의 IHC 검출이 일련의 정상 및 암 조직으로부터 제시되어 있으며, 이는 CD44v9가 종양-특이적 방식으로 상향조절되었음을 보여준다.
도 1b는 4개의 독립적인 PC9 살아있는 세포 Mab어레이 실험에서의 mAb119 및 대조군 mAb의 영상을 보여준다. 살아있는 PC9 세포를 Mab어레이 칩 상에서 mAb119에 의해 포획하였다.
도 2는 PC9 세포에 대한 mAb119의 FACS 분석의 결과를 보여준다. PC9 세포를 얼음 상에서 30분 동안 mAb119의 연속 희석물 (30000 pM 내지 0.1 pM, 3배 연속 희석물)과 함께 인큐베이션함으로써 mAb119의 PC9 FACS 적정을 수행한 후에, 세포를 30분 동안 알렉사488-접합된 항-마우스 IgG (잭슨 랩(Jackson lab))로 염색하였다. BD C6을 사용하여 MFI를 분석하였다. 친화도 KD는 약 2 nM인 것으로 결정되었다.
도 3은 PC9 세포가 결합된 mAb119를 내재화하였다는 것을 보여준다. 살아있는 PC 세포를 커버슬립 상에서 배양하고, 얼음 상에서 1시간 동안 10 μg/mL mAb119와 함께 인큐베이션한 후에, 세포를 PBS로 3회 세척하였다. 이어서 세포를 37℃에서 0시간, 2시간 또는 4시간 동안 배양한 후에, 4% PFA로 고정한 후에, FACS에 의해 FITC 접합된 2차 항체로 검출하였다. 이어서 PC9 세포를 mAb119 (녹색 형광 염료 알렉사488에 의해 표지됨) 및 항-LAMP1 (적색 형광 염료 알렉사595에 의해 표지됨)에 의해 공동-염색하였다. 구체적으로, PC9 세포를 0.1% 트리톤 X로 투과시키고, mAb119 및 토끼 항-LAMP1 항체 (1:200, 압캠(Abcam)) 및 mAb119와 함께 1시간 동안 인큐베이션하였다. 이어서 항체를 각각 알렉사488 접합된 항-마우스 항체 및 알렉사595 접합된 항-토끼 항체로 표지하였다. 리소솜-회합 막 단백질 1 (LAMP1)은 주로 리소솜 막을 가로질러 발현되는 당단백질이다. mAb119 및 항-LAMP1의 공동국재화 신호는 황색 신호를 생성하며, 이는 PC9 세포에 의한 mAb119의 리소솜 구획으로의 내재화를 나타낸다. mAb119는 0시간에 LAMP1과의 임의의 공동-국재화 없이 세포 표면 상에서 처음 관찰되었다. mAb119 및 LAMP1의 공동국재화는 2시간 및 4시간에 관찰되었다.
표면 형광에 기초한 FACS 분석은 PC9 세포 상에서의 mAb119 내재화를 보여준다 (데이터는 제시되지 않음). 구체적으로, 살아있는 PC9 세포를 얼음 상에서 0.5시간 동안 10 μg/mL mAb119와 함께 인큐베이션한 후에, PBS로 3회 세척하였다. 이어서 세포를 37℃에서 0시간, 2시간 또는 4시간 동안 배양한 후에, 4% PFA로 고정시켰다. 이어서 세포를 알렉사488 접합된 항-마우스 항체로 염색하고, 표면 MFI를 계산함으로써 FACS로 분석하였다. mAb119의 표면 국재화를 나타내는 표면 MFI는 37℃에서 2시간 및 4시간 인큐베이션한 후에 각각 70% 및 80%만큼 감소하였다. PC9 세포에서의 평균 퍼센트 내재화 ± SEM (n = 3)으로서 표현된 FACS 데이터의 정량화가 제시된다. 수직축은 상대 표면 형광 (%)을 나타낸다. 데이터는 mAb119가 막 항원에 결합할 수 있고 PC9 세포에 내재화될 수 있다는 것을 제시한다.
도 4는 mAb119의 간접적 세포독성이 항원 발현-의존성이라는 것을 보여준다. PC9 또는 TE1 세포를 96-웰 플레이트에서 2000개 세포 / 웰의 전면생장률로 밤새 배양하였다. 72시간 동안 2 μg/mL MMAE-접합된 염소 항-마우스 IgG 항체와 함께 mAb119의 연속 희석물로 세포를 처리하였다. 이어서 CCK8 (도진도(dojindo))에 의해 세포 수를 계산하였다. TE1 및 PC9 세포에서 상이한 세포독성이 관찰되었다. 항체 칵테일은 PC9 성장을 18 pM의 IC50으로 억제한 반면, 동일한 항체 칵테일은 TE1 세포 성장을 억제하지 않았다. 평균 퍼센트 성장 억제 ± SEM (n = 3)으로서 표현된, TE1 및 PC9 세포로부터 유도된 대표적인 데이터가 제시된다.
2종의 세포주에서의 mAb119 항원의 발현을 또한 FACS에 의해 결정하였다. 측면 삽입 패널은 mAb119에 의해 표지된 TE1 (상부 패널) 및 PC9 (하부 패널)의 FACS 분석을 보여준다. 결과는 PC9 세포가 mAb119 항원을 발현하지만 TE1 세포는 그렇지 않다는 것을 시사한다. 따라서 간접적 세포독성은 항원 발현과 양의 상관관계가 있었다.
도 5a 및 5b는 mAb119가 인간 CD44 v6 엑손을 표적화한다는 것을 보여준다. 48시간 동안 인간 CD44 v6 에피토프를 표적화하는 4종의 상이한 siRNA의 혼합물 또는 대조군 siRNA로 PC9를 형질감염시켰다. 이어서 형질감염된 세포를 mAb119로 염색하고 FACS에 의해 분석하거나, 또는 총 단백질을 추출하고 mAb119 항원의 존재비를 웨스턴 블롯팅에 의해 평가하였다. CD44v6의 녹다운은 FACS에서 mAb119 표면 염색 강도를 감소시켰다 (도 5a, CD44v6 siRNA (V6.si)가 mAb119의 표면 신호를 억제한다는 것을 보여주는 FACS 데이터 (n=3을 나타냄)). CD44v6의 녹다운은 또한 mAb119 항원의 단백질 발현 수준을 감소시켰다 (도 5b, CD44v6 siRNA (V6.si)가 mAb119 항원의 단백질 발현을 억제한다는 것을 보여주는 웨스턴 블롯팅 데이터 (n=3을 나타냄)). 데이터는 mAb119가 CD44v6을 표적화한다는 것을 시사한다.
도 6a는 mAb119-ADC (AMT119)의 구조의 개략도이다. mAb119를 MC-vc-PAB-MMAE와 접합시켰다.
도 6b는 AMT119의 HPLC-HIC (소수성 상호작용 크로마토그래피)의 그래프이다. 평균 약물-항체 비 (DAR)는 약 6이었다.
도 7은 PC9 및 TE1 세포에서의 AMT119의 세포독성을 보여준다. 그래프는 AMT119의 평균 퍼센트 성장 억제 ± SEM (n = 3)을 나타내는, PC9 및 TE1 세포로부터 유도된 대표적인 데이터이다. IC50 값은 PC9 및 TE1 세포에서 각각 2,600 pM 및 39,000 pM이었다. 차이는 2종의 세포주에서의 CD44v6의 상이한 발현 수준과 일치하였다 (도 4 참조).
도 8a 및 8b는 인간 비소세포 폐암 (NSCLC, 도 8a의 우측 패널) 및 정상 폐 조직 (도 8a의 좌측 패널)에서의 CD44v6의 발현을 보여준다. mAb119 항체를 사용하는 CD44v6 단백질의 IHC (면역조직화학) 검출이 일련의 정상 및 암 조직으로부터 제시되어 있으며, 이는 CD44v6이 종양-특이적 방식으로 상향조절되었음을 보여준다. 현미경사진 영상은 0, 1+, 2+ 및 3+ 염색 강도를 나타내는 종양 조직을 도시한다 (도 8a의 우측 패널). 도 8b는 NSCLC의 상이한 하위유형에서의 CD44v6의 유병률을 보여준다. SCC, 편평 세포 암종; LCC, 대세포 암종.
도 9는 PC9 세포에 대한 mAb116의 FACS 분석의 결과를 보여준다. PC9 세포를 얼음 상에서 30분 동안 mAb116의 연속 희석물 (30000 pM 내지 0.1 pM, 3배 연속 희석물)과 함께 인큐베이션함으로써 mAb116의 PC9 FACS 적정을 수행한 후에, 세포를 30분 동안 알렉사488-접합된 항-마우스 IgG (잭슨 랩)로 염색하였다. BD C6을 사용하여 MFI를 분석하였다. 친화도 KD는 약 980 pM (또는 0.98 nM)인 것으로 결정되었다.
도 10은 PC9 세포가 결합된 mAb116을 내재화하였다는 것을 보여준다. 살아있는 PC 세포를 커버슬립 상에서 배양하고, 얼음 상에서 1시간 동안 10 μg/mL mAb116과 함께 인큐베이션한 후에, 세포를 PBS로 3회 세척하였다. 이어서 세포를 37℃에서 0시간, 2시간 또는 4시간 동안 배양한 후에, 4% PFA로 고정한 후에, FACS에 의해 FITC 접합된 2차 항체로 검출하였다. 이어서 PC9 세포를 mAb116 (녹색 형광 염료 알렉사488에 의해 표지됨) 및 항-LAMP1 (적색 형광 염료 알렉사595에 의해 표지됨)에 의해 공동-염색하였다. 구체적으로, PC9 세포를 0.1% 트리톤 X로 투과시키고, mAb116 및 토끼 항-LAMP1 항체 (1:200, 압캠) 및 mAb116과 함께 1시간 동안 인큐베이션하였다. 이어서 항체를 각각 알렉사488 접합된 항-마우스 항체 및 알렉사595 접합된 항-토끼 항체로 표지하였다. mAb116 및 항-LAMP1의 공동국재화 신호는 황색 신호를 생성하며, 이는 PC9 세포에 의한 mAb116의 리소솜 구획으로의 내재화를 나타낸다. mAb116은 0시간에 LAMP1과의 임의의 공동-국재화 없이 세포 표면 상에서 처음 관찰되었다. mAb116 및 LAMP1의 공동국재화는 2시간 및 4시간에 관찰되었다.
표면 형광에 기초한 FACS 분석은 PC9 세포 상에서의 mAb116 내재화를 보여준다 (데이터는 제시되지 않음). 구체적으로, 살아있는 PC9 세포를 얼음 상에서 0.5시간 동안 10 μg/mL mAb116과 함께 인큐베이션한 후에, PBS로 3회 세척하였다. 이어서 세포를 37℃에서 0시간, 2시간 또는 4시간 동안 배양한 후에, 4% PFA로 고정시켰다. 이어서 세포를 알렉사488 접합된 항-마우스 항체로 염색하고, 표면 MFI를 계산함으로써 FACS로 분석하였다. mAb116의 표면 국재화를 나타내는 표면 MFI는 37℃에서 4시간 인큐베이션시 약 90%만큼 감소하였다. PC9 세포에서의 평균 퍼센트 내재화 ± SEM (n = 3)으로서 표현된 FACS 데이터의 정량화가 제시된다. 수직축은 상대 표면 형광 (MFI, %)을 나타낸다. 데이터는 mAb116이 막 항원에 결합할 수 있고 PC9 세포에 내재화될 수 있다는 것을 보여준다.
도 11은 mAb116 및 대조군 IgG의 간접적 세포독성을 보여준다. PC9 세포를 96-웰 플레이트에서 2000개 세포 / 웰의 전면생장률로 밤새 배양하였다. 이어서 72시간 동안 2 μg/mL MMAE-접합된 염소 항 마우스 IgG 항체와 함께 IgG 또는 mAb116의 연속 희석물로 세포를 처리하였다. 이어서 CCK8 (도진도)에 의해 세포 수를 계산하였다. mAb116 항체 칵테일은 PC9 성장을 약 30 pM의 IC50으로 억제하였지만, IgG 칵테일은 어떠한 효과도 나타내지 않았다. 평균 퍼센트 성장 억제 ± SEM (n = 3)으로서 표현된, PC9 세포로부터 유도된 대표적인 데이터가 제시된다.
도 12a 및 12b는 mAb116이 인간 CD44 v9 엑손을 표적화한다는 것을 보여준다. 48시간 동안 인간 CD44 V9 에피토프를 표적화하는 siRNA 또는 대조군 siRNA로 PC9를 형질감염시켰다. 이어서 형질감염된 세포를 mAb116으로 염색하고 FACS에 의해 분석하거나, 또는 총 단백질을 추출하고 mAb116 항원의 존재비를 웨스턴 블롯팅에 의해 평가하였다. CD44v9의 녹다운은 FACS에서 mAb116 표면 염색 강도를 감소시켰다 (도 12a, CD44v9 siRNA (V9.si)가 mAb116의 표면 신호를 억제한다는 것을 보여주는 FACS 데이터 (n=3을 나타냄)). CD44v9의 녹다운은 또한 mAb116 항원의 단백질 발현 수준을 감소시켰다 (도 12b). 데이터는 mAb116이 CD44v9를 표적화한다는 것을 시사한다.
도 13a는 mAb116-ADC (AMT116)의 구조의 개략도이다. mAb116을 MC-vc-PAB-MMAE와 접합시켰다.
도 13b는 AMT116의 HPLC-HIC의 그래프이다. 평균 약물-항체 비 (DAR)는 약 4.23이었다.
도 14는 PC9 및 KYSE-150 (식도 암종 세포주) 세포에서의 AMT116의 세포독성을 보여준다. 그래프는 AMT116 및 IgG 대조군의 평균 퍼센트 성장 억제 ± SEM (n = 3)을 나타내는, PC9 및 KYSE-150 세포로부터 유도된 대표적인 데이터이다. AMT116의 IC50 값은 PC9 및 KYSE-150 세포에서 각각 134 pM 및 670.2 pM이었다.
도 15는 AMT116의 생체내 효능을 보여준다. 약 5 x 106개 KYSE-150 세포를 1:1 마트리겔에 현탁시킨 후에, 암컷 Balb/c 누드 마우스 (8-10주령, 20-22 g)의 우측 측복부에 주사하였다. 종양 부피 (0.5 x 길이 x 폭2으로 측정됨) 및 체중을 적어도 매주 2회 결정하였다. 마우스를 투여 전 그의 초기 종양 크기 (중앙 종양 부피 대략 250-500 mm3)에 기초하여 무작위로 그룹핑하였다 (n=5/군). 비히클 (PBS), AMT116 또는 대조군 ADC를 i.v. 주입에 의해 투여하였다 (3 mg/kg, q3d x3). 군 평균 (±SEM) 종양 부피를 연구 지속기간에 걸쳐 플롯팅하였다.
도 16a 및 16b는 인간 비소세포 폐암 (도 16a의 우측 패널) 및 정상 폐 조직 (도 16a의 좌측 패널)에서의 CD44v9의 발현을 보여준다. mAb116 항체를 사용하는 CD44v9 단백질의 IHC 검출이 일련의 정상 및 암 조직으로부터 제시되어 있으며, 이는 CD44v9가 종양-특이적 방식으로 상향조절되었음을 보여준다. 현미경사진 영상은 0, 1+, 2+ 및 3+ 염색 강도를 나타내는 종양 조직을 도시한다 (도 16a의 우측 패널). 도 16b는 NSCLC의 상이한 하위유형에서의 CD44v9의 유병률을 보여준다. SCC, 편평 세포 암종; LCC, 대세포 암종.
도 17은 다수의 종양 유형에서의 CD44v9의 과다발현을 보여준다. mAb116 항체를 사용하는 CD44v9 단백질의 IHC 검출이 일련의 정상 및 암 조직으로부터 제시되어 있으며, 이는 CD44v9가 종양-특이적 방식으로 상향조절되었음을 보여준다.
1. 개관
본원에 기재된 본 발명은 특정 항-CD44v6 또는 항-CD44v9 항체, 예컨대 본원에 기재된 것이 암과 같은 질환을 치료하는데 효과적이라는 발견에 부분적으로 기초한다.
따라서 본 발명의 한 측면은 단리된 CD44v6 에피토프에 특이적인 단리된 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 제공하며, 여기서 상기 CD44v6 에피토프는 (1) 서열식별번호: 19를 포함하거나 / 이로 본질적으로 이루어지거나 (예를 들어, 에피토프는 서열식별번호: 19 플러스 서열식별번호: 19의 N-말단 상의 1 또는 2개의 잔기, 서열식별번호: 19 플러스 서열식별번호: 19의 C-말단 상의 1 또는 2개의 잔기, 또는 서열식별번호: 19 플러스 서열식별번호: 19의 N-말단 및 C-말단 둘 다 상의 1 또는 2개의 잔기로 이루어짐), 또는 (2) 서열식별번호: 19로 이루어진다.
예를 들어, 본 발명의 항체 또는 항원-결합 단편은 관련 기술분야에 공지된 방법에 따라, 단리된 CD44v6 에피토프에 대해 생성되거나, 또는 상기 단리된 CD44v6 에피토프 및 담체 단백질을 포함하는 융합 단백질 또는 그의 화학적 접합체에 대해 생성될 수 있다 (하기 참조).
특정 실시양태에서, 항-CD44v6 모노클로날 항체는 (1) 서열식별번호: 1의 중쇄 가변 영역 (HCVR) CDR1 서열, 서열식별번호: 2의 HCVR CDR2 서열 및/또는 서열식별번호: 3의 HCVR CDR3 서열을 포함하는 HCVR; 및/또는 (2) 서열식별번호: 10의 경쇄 가변 영역 (LCVR) CDR1 서열, 서열식별번호: 11의 LCVR CDR2 서열 및/또는 서열식별번호: 12의 LCVR CDR3 서열을 포함하는 LCVR을 포함한다.
특정 실시양태에서, CD44v6 에피토프는 서열식별번호: 19이다.
특정 실시양태에서, CD44v6 에피토프는 서열식별번호: 19로 본질적으로 이루어진다 (예를 들어, 에피토프는 서열식별번호: 19 플러스 서열식별번호: 19의 N-말단 상의 1 또는 2개의 잔기, 서열식별번호: 19 플러스 서열식별번호: 19의 C-말단 상의 1 또는 2개의 잔기, 또는 서열식별번호: 19 플러스 서열식별번호: 19의 N-말단 및 C-말단 둘 다 상의 1 또는 2개의 잔기로 이루어짐). 서열식별번호: 19의 N- 및/또는 C-말단에 부가된 / 여분의 잔기는 야생형 CD44v6에서 자연 발생 잔기 또는 인공 잔기일 수 있다.
특정 실시양태에서, CD44v6 에피토프는 서열식별번호: 24 (HEGYRQTPKEDS)이다.
특정 실시양태에서, (i) HCVR은 서열식별번호: 7-9 중 1개 이상을 추가로 포함하고/거나, (ii) LCVR은 서열식별번호: 13-18 중 1개 이상을 추가로 포함한다.
특정 실시양태에서, 단리된 항-CD44v6 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 상기 CD44v6 에피토프 또는 상기 CD44v6 에피토프를 갖는 세포에 약 10 nM, 약 5 nM 또는 약 2 nM 또는 그 미만의 KD로 결합한다.
특정 실시양태에서, 단리된 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 인간-마우스 키메라 항체, 인간화 항체, 인간 항체, CDR-그라프팅된 항체 또는 재표면화 항체이다.
특정 실시양태에서, 그의 항원-결합 단편은 Fab, Fab', F(ab')2, Fd, 단일 쇄 Fv 또는 scFv, 디술피드 연결된 Fv, V-NAR 도메인, IgNar, 인트라바디, IgGΔCH2, 미니바디, F(ab')3, 테트라바디, 트리아바디, 디아바디, 단일-도메인 항체, DVD-Ig, Fcab, mAb2, (scFv)2, 또는 scFv-Fc이다.
관련 측면에서, 본 발명은 단리된 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 제공하며, 여기서 상기 단리된 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 참조 모노클로날 항체에 의해 결합되는 CD44v6의 동일한 에피토프에 결합하거나 또는 CD44v6의 동일한 에피토프에의 결합에 대해 상기 참조 모노클로날 항체와 경쟁하고, 여기서 상기 참조 모노클로날 항체는 (1) 서열식별번호: 1의 중쇄 가변 영역 (HCVR) CDR1 서열, 서열식별번호: 2의 HCVR CDR2 서열 및/또는 서열식별번호: 3의 HCVR CDR3 서열을 포함하는 HCVR; (2) 서열식별번호: 10의 경쇄 가변 영역 (LCVR) CDR1 서열, 서열식별번호: 11의 LCVR CDR2 서열 및/또는 서열식별번호: 12의 LCVR CDR3 서열을 포함하는 LCVR을 포함한다.
본 발명의 또 다른 측면은 단리된 CD44v9 에피토프에 특이적인 단리된 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 제공하며, 여기서 상기 CD44v9 에피토프는 (1) 서열식별번호: 43을 포함하거나 / 이로 본질적으로 이루어지거나 (예를 들어, 에피토프는 서열식별번호: 43 플러스 서열식별번호: 43의 N-말단 상의 1 또는 2개의 잔기, 서열식별번호: 19 플러스 서열식별번호: 43의 C-말단 상의 1 또는 2개의 잔기, 또는 서열식별번호: 43 플러스 서열식별번호: 43의 N-말단 및 C-말단 둘 다 상의 1 또는 2개의 잔기로 이루어짐), 또는 (2) 서열식별번호: 43으로 이루어진다.
특정 실시양태에서, 항-CD44v9 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 상기 단리된 CD44v9 에피토프에 대해 생성되거나, 또는 상기 단리된 CD44v9 에피토프 및 담체 단백질 (예컨대 알부민, 바람직하게는 BSA 또는 오브알부민, 또는 키홀 림펫 헤모시아닌 (KLH))을 포함하는 융합 단백질 또는 그의 화학적 접합체에 대해 생성된다.
특정 실시양태에서, 모노클로날 항체는 (1) 서열식별번호: 25의 중쇄 가변 영역 (HCVR) CDR1 서열, 서열식별번호: 26의 HCVR CDR2 서열 및/또는 서열식별번호: 27의 HCVR CDR3 서열을 포함하는 HCVR; 및/또는 (2) 서열식별번호: 34의 경쇄 가변 영역 (LCVR) CDR1 서열, 서열식별번호: 35의 LCVR CDR2 서열 및/또는 서열식별번호: 36의 LCVR CDR3 서열을 포함하는 LCVR을 포함한다.
특정 실시양태에서, CD44v9 에피토프는 서열식별번호: 43이다.
특정 실시양태에서, CD44v9 에피토프는 서열식별번호: 43으로 본질적으로 이루어진다 (예를 들어, 에피토프는 서열식별번호: 43 플러스 서열식별번호: 43의 N-말단 상의 1 또는 2개의 잔기, 서열식별번호: 43 플러스 서열식별번호: 43의 C-말단 상의 1 또는 2개의 잔기, 또는 서열식별번호: 43 플러스 서열식별번호: 43의 N-말단 및 C-말단 둘 다 상의 1 또는 2개의 잔기로 이루어짐). 서열식별번호: 43의 N- 및/또는 C-말단에 부가된 / 여분의 잔기는 야생형 CD44v9에서 자연 발생 잔기 또는 인공 잔기일 수 있다.
특정 실시양태에서, CD44v9 에피토프는 서열식별번호: 44 (SHEGLEEDKDH)이다.
특정 실시양태에서, (i) HCVR은 서열식별번호: 28-33 중 1개 이상을 추가로 포함하고/거나, (ii) LCVR은 서열식별번호: 37-42 중 1개 이상을 추가로 포함한다.
특정 실시양태에서, 단리된 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 상기 CD44v9 에피토프 또는 상기 CD44v9 에피토프를 갖는 세포에 약 10 nM, 약 5 nM, 약 2 nM, 약 1 nM 또는 그 미만의 KD로 결합한다.
특정 실시양태에서, 단리된 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 인간-마우스 키메라 항체, 인간화 항체, 인간 항체, CDR-그라프팅된 항체 또는 재표면화 항체이다.
특정 실시양태에서, 그의 항원-결합 단편은 Fab, Fab', F(ab')2, Fd, 단일 쇄 Fv 또는 scFv, 디술피드 연결된 Fv, V-NAR 도메인, IgNar, 인트라바디, IgGΔCH2, 미니바디, F(ab')3, 테트라바디, 트리아바디, 디아바디, 단일-도메인 항체, DVD-Ig, Fcab, mAb2, (scFv)2, 또는 scFv-Fc이다.
관련 측면에서, 본 발명은 단리된 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 제공하며, 여기서 상기 단리된 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 참조 모노클로날 항체에 의해 결합되는 CD44v9의 동일한 에피토프에 결합하거나 또는 CD44v9의 동일한 에피토프에의 결합에 대해 상기 참조 모노클로날 항체와 경쟁하고, 여기서 상기 참조 모노클로날 항체는 (1) 서열식별번호: 25의 중쇄 가변 영역 (HCVR) CDR1 서열, 서열식별번호: 26의 HCVR CDR2 서열 및/또는 서열식별번호: 27의 HCVR CDR3 서열을 포함하는 HCVR; (2) 서열식별번호: 34의 경쇄 가변 영역 (LCVR) CDR1 서열, 서열식별번호: 35의 LCVR CDR2 서열 및/또는 서열식별번호: 36의 LCVR CDR3 서열을 포함하는 LCVR을 포함한다.
본 발명의 또 다른 측면은 대상 항-CD44v6 또는 항-CD44v9 항체 또는 그의 항원 결합 단편 중 어느 하나의 HCVR 및/또는 LCVR을 포함하는 폴리펩티드를 제공한다.
특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 융합 단백질 (예컨대 키메라 항원 T 세포 수용체)이다.
키메라 항원 T 세포 수용체 (CAR-T)는 또한 키메라 항원 수용체 (CAR), 키메라 면역수용체, 키메라 T 세포 수용체 또는 인공 T 세포 수용체로서 공지되어 있다. 이는 면역 이펙터 T 세포 상에 임의의 특이성을 그라프팅하는 조작된 수용체이다. 전형적으로, 이들 수용체는 T 세포 상에 모노클로날 항체의 특이성을 그라프팅하는데 사용되고, 이들의 코딩 서열의 전달은 레트로바이러스 벡터에 의해 용이해진다. 수용체는 상이한 공급원으로부터의 부분으로 구성되기 때문에 키메라로 불린다. CAR-T는, T 세포를 환자로부터 분리해내고 이들이 환자의 특정한 암에 특이적인 수용체, 예컨대 암 세포 상에 발현되는 CD44v6 또는 CD44v9를 발현하도록 변형시키는 입양 세포 전달을 사용하여 암을 치료하는데 사용될 수 있다. 이어서 암 세포를 인식하고 사멸시킬 수 있는 T 세포가 환자 내로 재도입된다. 환자 이외의 공여자로부터 공급된 T-세포의 변형이 또한 유사하게 사용될 수 있다.
특정 실시양태에서, 본 발명의 CAR-T는 막횡단 도메인 (예컨대 CD3-제타 막횡단 도메인) 및 엔도도메인 (예컨대 CD3-제타 엔도도메인)에 융합된, 임의의 대상 모노클로날 항-CD44v6 또는 항-CD44v9 항체로부터 유래된 대상 단일쇄 가변 단편 (scFv)의 융합체이다.
특정 실시양태에서, scFv 앞에, 신생 단백질을 내형질 세망으로 지시하고 후속 표면 발현을 지시하는 신호 펩티드가 선행된다. 임의의 진핵 신호 펩티드 서열이 사용될 수 있다. 특정 실시양태에서, 아미노-말단에 천연적으로 부착된 신호 펩티드가 사용된다 (예를 들어, 경쇄 - 링커 - 중쇄의 배향을 갖는 scFv에서, 경쇄의 천연 신호가 사용됨).
특정 실시양태에서, 가요성 스페이서가 부가되어 scFv가 최적의 항원 결합을 할 수 있도록 상이한 방향으로 배향되게 한다. 스페이서는 바람직하게는 항원 결합 도메인이 항원 인식을 용이하게 하도록 상이한 방향으로 배향되게 하기에 충분히 가요성이다. 특정 실시양태에서, IgG1로부터의 힌지 영역이 스페이서로서 사용된다. 특정 실시양태에서, 이뮤노글로불린의 CH2CH3 영역 및 CD3의 부분이 스페이서로서 사용된다. 대부분의 scFv 기반 구축물의 경우, IgG1 힌지가 통상적으로 충분하다.
특정 실시양태에서, 구축물은 세포 내로 돌출하여 목적하는 신호를 전달하는 신호전달 엔도도메인의 원래 분자로부터 유래된 전형적인 소수성 알파 나선인 막횡단 도메인을 포함한다. 특정 실시양태에서, 엔도도메인의 가장 막 근접한 성분으로부터의 막횡단 도메인, 예컨대 CD3-제타 막횡단 도메인이 사용된다.
특정 실시양태에서, 엔도도메인은 항원이 본 발명의 항원 결합 단편에 의해 결합된 후에 활성화 신호를 T 세포로 전달하는 3개의 ITAM을 함유하는 CD3-제타 엔도도메인이다.
특정 실시양태에서, 엔도도메인은 T 세포에 추가적인 신호를 제공하기 위해 구축물의 세포질 꼬리 (CD3-제타 도메인에 대해 N- 또는 C-말단)에 융합된, 공동자극 단백질 수용체 (예를 들어, CD28, 41BB, ICOS의 것)로부터의 세포내 신호전달 도메인을 추가로 포함한다.
특정 실시양태에서, 엔도도메인은 효력을 증대시키거나 또는 증식 / 생존 신호를 전달하기 위해, 다수의 신호전달 도메인을 조합하며, 예컨대 CD3z-CD28-41BB 또는 CD3z-CD28-OX40이다.
특정 실시양태에서, 본 발명의 키메라 항원 수용체는 신속한 정제를 위한 식별 마커를 갖는 조작된 T 세포를 제공하기 위해, 스트렙-태그 II 서열 (스트렙타비딘에 대한 고유한 친화도를 나타내는 8개-잔기의 최소 펩티드 서열 (Trp-Ser-His-Pro-Gln-Phe-Glu-Lys))을 추가로 포함한다.
본 발명의 또 다른 측면은 임의의 대상 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명의 또 다른 측면은 임의의 대상 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 제공한다.
특정 실시양태에서, 벡터는 발현 벡터 (예를 들어, 포유동물 발현 벡터, 효모 발현 벡터, 곤충 발현 벡터 또는 박테리아 발현 벡터)이다.
본 발명의 또 다른 측면은 임의의 대상 항-CD44v6 또는 항-CD44v9 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 임의의 대상 폴리펩티드, 임의의 대상 폴리뉴클레오티드 또는 임의의 대상 벡터를 포함하는 세포를 제공한다.
특정 실시양태에서, 세포는 임의의 대상 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 임의의 대상 폴리펩티드를 발현한다.
특정 실시양태에서, 세포는 BHK 세포, CHO 세포 또는 COS 세포이다.
특정 실시양태에서, 세포는 세포의 표면 상에 임의의 대상 항-CD44v6 또는 항-CD44v9 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 임의의 대상 폴리펩티드를 포함한다.
특정 실시양태에서, 세포는 임의의 대상 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 임의의 대상 폴리펩티드를 포함하는 키메라 항원 수용체를 보유하는 T-세포 (CAR-T 세포)이다.
특정 실시양태에서, 바이러스 벡터, 예컨대 레트로바이러스, 렌티바이러스 또는 트랜스포존은 트랜스진 보유 대상 CAR-T 구축물을 숙주 세포 게놈 내로 통합시키는데 사용될 수 있다.
특정 실시양태에서, 비-통합 벡터 또는 에피솜 DNA/RNA 구축물, 예컨대 플라스미드 또는 mRNA가 대신 사용될 수 있다.
특정 실시양태에서, 게놈 내로 통합되지 않으면서 T 세포에서 안정하게 유지되는 벡터는 삽입 돌연변이유발 또는 유전자독성의 위험 없이 장기간 트랜스진 발현을 가능하게 하는데 사용된다.
본 발명의 또 다른 측면은 서열식별번호: 19를 포함하거나 / 이로 본질적으로 이루어지거나 (예를 들어, 서열식별번호: 19 플러스 서열식별번호: 19의 N-말단 상의 1 또는 2개의 잔기, 서열식별번호: 19 플러스 서열식별번호: 19의 C-말단 상의 1 또는 2개의 잔기, 또는 서열식별번호: 19 플러스 서열식별번호: 19의 N-말단 및 C-말단 둘 다 상의 1 또는 2개의 잔기로 이루어진 에피토프), 또는 서열식별번호: 19로 이루어진 단리된 CD44v6 에피토프를 제공한다.
본 발명의 또 다른 측면은 제28항의 단리된 CD44v6 에피토프 및 담체 단백질 (예컨대 알부민, 바람직하게는 BSA 또는 오브알부민, 또는 키홀 림펫 헤모시아닌 (KLH))을 포함하는 융합 단백질 또는 화학적 접합체를 제공한다.
본 발명의 또 다른 측면은 서열식별번호: 43을 포함하거나 / 이로 본질적으로 이루어지거나 (예를 들어, 서열식별번호: 43 플러스 서열식별번호: 43의 N-말단 상의 1 또는 2개의 잔기, 서열식별번호: 43 플러스 서열식별번호: 43의 C-말단 상의 1 또는 2개의 잔기, 또는 서열식별번호: 43 플러스 서열식별번호: 43의 N-말단 및 C-말단 둘 다 상의 1 또는 2개의 잔기로 이루어진 에피토프), 또는 서열식별번호: 43으로 이루어진 단리된 CD44v9 에피토프를 제공한다.
본 발명의 또 다른 측면은 제28a항의 단리된 CD44v9 에피토프 및 담체 단백질 (예컨대 알부민, 바람직하게는 BSA 또는 오브알부민, 또는 키홀 림펫 헤모시아닌 (KLH))을 포함하는 융합 단백질 또는 화학적 접합체를 제공한다.
관련 기술분야에 공지된 바와 같이, 담체 단백질은, 면역 반응을 유도하고 항체를 생산하기에 스스로 충분히 크거나 복잡하지 않은 펩티드 또는 다른 합텐과의 커플링에 사용되는 임의의 단백질이다. 담체 단백질은, 그것이 크고 복잡하기 때문에, 접합된 합텐에 면역원성을 부여하여, 합텐 및 담체 상의 에피토프에 대해 항체가 생산되게 한다.
많은 단백질이 담체로서 사용될 수 있고, 합텐과의 접합을 달성시킬 수 있는 유용한 관능기의 면역원성, 용해도 및 이용가능성에 기초하여 선택된다. 특정 실시양태에서, 본 발명에서 사용되는 담체 단백질은 키홀 림펫 헤모시아닌 (KLH) 또는 알부민, 예컨대 소 혈청 알부민 (BSA) 또는 오브알부민이다.
본 발명에서 사용될 수 있는 많은 이러한 담체 단백질은 상업적으로 입수가능하며, 예컨대 써모 사이언티픽(Thermo Scientific) 임젝트 마리컬쳐 키홀 림펫 헤모시아닌 (mcKLH); 청색 담체* 단백질 (KLH와 대부분의 동일한 면역원성 특성을 나타내는 콘콜레파스 콘콜레파스(Concholepas concholepas) 헤모시아닌 (CCH)의 정제된 제제); 써모 사이언티픽 임젝트 BSA (고도로 정제된 (즉, 분획 V) 소 혈청 알부민); 양이온화 소 혈청 알부민 (cBSA) (천연 BSA를 과량의 에틸렌디아민으로 변형시켜 제조됨, 본질적으로 모든 음으로-하전된 카르복실기를 양으로-하전된 1급 아민으로 캡핑하여, 고도로 양으로-하전된 단백질 (pI > 11)을 생성하며, 이는 천연 BSA와 비교하여 유의하게 증가된 면역원성을 가짐); 및 오브알부민이다.
본 발명의 CD44v6 및 CD44v9 에피토프는 담체 단백질에 융합되거나, 또는 예를 들어 담체 단백질의 표면 1급 아민 기 중 어느 1개 이상을 통해 담체 단백질에 화학적으로 접합될 수 있다.
합텐 / 에피토프 상에서 이용가능한 관능기, 요구되는 합텐 / 에피토프 배향 및 담체로부터의 거리, 및 생물학적 및 항원 특성에 대한 접합의 가능한 효과에 따라, 합텐 / 펩티드 에피토프를 담체 단백질에 접합시키기 위한 상이한 접근법이 이용가능하다. 예를 들어, 1급 아민 (N-말단 및 리신 잔기의 측쇄), 카르복실 기 (C-말단 또는 아스파르트산 및 글루탐산의 측쇄) 및 술프히드릴 (시스테인 잔기의 측쇄)을 갖는 에피토프가 이러한 기를 사용하는 접합을 위해 표적화될 수 있다. 일반적으로, 담체 단백질 내의 많은 1급 아민이 가교 시약을 통해 합텐을 커플링시키는데 사용된다.
특정 실시양태에서, 단백질-담체 및 펩티드-담체 접합은 카르보디이미드 가교제 EDC (즉, 카르복실 및 아민 가교를 통한 EDC 접합)를 사용하여 수행된다.
특정 실시양태에서, 단백질-담체 및 펩티드-담체 접합은 말레이미드 접합 (술프히드릴 가교)을 사용하여 수행된다.
특정 실시양태에서, 단백질-담체 및 펩티드-담체 접합은 글루타르알데히드 접합 (아민-대-아민 가교)을 사용하여 수행된다.
본 발명의 또 다른 측면은 (a) 임의의 대상 세포를 배양하는 단계; 및 (b) 상기 배양된 세포로부터 임의의 대상 항-CD44v6 또는 항-CD44v9 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 임의의 대상 폴리펩티드를 단리하는 단계를 포함하는, 임의의 대상 항-CD44v6 또는 항-CD44v9 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 임의의 대상 폴리펩티드를 생산하는 방법을 제공한다.
특정 실시양태에서, 세포는 진핵 세포이다.
본 발명의 또 다른 측면은 하기 화학식을 갖는 면역접합체 (또는 항체-약물 접합체 또는 ADC)이며: Ab-[-L-D]n, 여기서 Ab는 임의의 대상 항-CD44v6 또는 항-CD44v9 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 그의 임의의 대상 폴리펩티드이고, 이는 링커-약물 모이어티 -[-L-D]의 1개 이상의 단위에 공유 연결되고, 여기서 L은 링커이고, D는 세포독성 약물이고; n은 1 내지 20 (예를 들어, 1-12)의 정수이고; 여기서 각각의 링커-약물 모이어티는 동일하거나 상이한 링커 L 또는 세포독성 약물 D를 가질 수 있는 것인 면역접합체를 제공한다.
특정 실시양태에서, 각각의 링커-약물 모이어티 -[-L-D]는 Lys의 측쇄 아미노기를 통해 Ab에 공유 연결된다.
특정 실시양태에서, 각각의 링커-약물 모이어티 -[-L-D]는 Cys의 측쇄 티올 기를 통해 Ab에 공유 연결된다.
특정 실시양태에서, 각각의 링커-약물 모이어티 -[-L-D]는 부위-특이적으로 혼입된 비-천연 아미노산을 통해 Ab에 공유 연결된다.
특정 실시양태에서, 각각의 링커 L은 펩티드 단위를 포함한다.
특정 실시양태에서, 펩티드 단위는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 2-10 또는 2-5개의 아미노산 잔기를 포함한다.
특정 실시양태에서, 링커 L은 프로테아제 (예를 들어, 카텝신)에 의해 절단가능하지 않다.
특정 실시양태에서, 링커 L은 프로테아제 (예를 들어, 카텝신), 산성 환경 또는 산화환원 상태 변화에 의해 절단될 수 있는 절단가능한 링커이다.
특정 실시양태에서, 세포독성 약물은 DNA 삽입제, 미세관 결합제, 토포이소머라제 I 억제제 또는 DNA 작은 홈 결합제이다.
특정 실시양태에서, 세포독성 약물은 아우리스타틴 부류, 예컨대 모노메틸 아우리스타틴 E (MMAE) 및 MMAF, 메이탄신 부류, 예컨대 DM-1, DM-3, DM-4, 칼리케아미신, 예컨대 오조가미신, SN-38 또는 PBD (피롤로벤조디아제핀)이다.
관련 측면에서, D 모이어티는 약물 분자 그 자체가 아니라 어댑터 분자 (예컨대 FITC)이며, 이는 어댑터 분자에 특이적인 범용 CAR-T에 의해 단단히 결합될 수 있다. 본 발명의 이러한 측면에 따르면, 어댑터 분자, 예컨대 FITC에 대해 매우 높은 친화도로 결합하는 단일 범용 CAR-T 세포는 이중특이적 SMDC (소분자 약물 접합체) 어댑터 분자와 공-투여되는 경우에 다양한 암 유형을 치료하는데 사용된다. 이들 독특한 이중특이적 어댑터는 어댑터, 예컨대 FITC 분자 및 종양-귀소 분자, 예컨대 대상 항-CD44v6 또는 항-CD44v9 항체의 항원-결합 단편을 사용하여 구축되어, 범용 CAR-T 세포를 암 세포와 정확하게 가교시켜, 국재화된 T 세포 활성화를 유발한다. 항종양 활성은 범용 CAR-T 세포 및 정확한 항원-특이적 어댑터 분자가 둘 다 존재하는 경우에만 유도된다. 항종양 활성 및 독성은 투여되는 어댑터 분자 용량을 조정함으로써 추가로 제어될 수 있다. 항원적으로 불균질한 종양의 치료는 목적하는 항원-특이적 어댑터의 혼합물의 투여에 의해 달성될 수 있다.
본 발명의 또 다른 측면은 임의의 대상 항-CD44v6 또는 항-CD44v9 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 그의 폴리펩티드 또는 그의 면역접합체 및 제약상 허용되는 담체 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
본 발명의 또 다른 측면은 CD44v6을 발현하는 세포를 임의의 대상 항-CD44v6 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 그의 대상 폴리펩티드 또는 그의 대상 면역접합체 또는 그의 대상 제약 조성물과 접촉시키는 것을 포함하는, CD44v6을 발현하는 세포의 성장을 억제하는 방법을 제공한다.
특정 실시양태에서, 세포는 종양 세포이다.
특정 실시양태에서, 종양 세포는 폐암 (예컨대 NSCLC)으로부터의 것이다.
특정 실시양태에서, 종양 세포는 결장직장암, 유방암, 두경부암, 난소암, 방광암, 췌장암 또는 뇌의 전이성 암으로부터의 것이다.
본 발명의 또 다른 측면은 CD44v9를 발현하는 세포를 임의의 대상 항-CD44v9 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 그의 폴리펩티드 또는 그의 면역접합체 또는 그의 제약 조성물과 접촉시키는 것을 포함하는, CD44v9를 발현하는 세포의 성장을 억제하는 방법을 제공한다.
특정 실시양태에서, 세포는 종양 세포이다.
특정 실시양태에서, 종양 세포는 폐암 (예컨대 NSCLC)으로부터의 것이다.
특정 실시양태에서, 종양 세포는 결장직장암, 유방암, 간암, 두경부암, 난소암, 방광암, 췌장암 또는 뇌의 전이성 암으로부터의 것이다.
본 발명의 또 다른 측면은 세포가 CD44v6을 발현하는 암을 갖는 대상체에게 CD44v6 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 CD44v6의 길항제의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체를 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명의 또 다른 측면은 대상체에게 CD44v6 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 CD44v6의 길항제의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 세포가 CD44v6을 발현하는 세포-증식성 장애를 치료하는 방법을 제공한다.
특정 실시양태에서, CD44v6의 길항제는 임의의 대상 항-CD44v6 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 그의 대상 폴리펩티드 또는 그의 대상 면역접합체 또는 그의 대상 제약 조성물을 포함한다.
특정 실시양태에서, 암은 유방, 폐, 간, 결장직장, 두경부, 식도, 췌장, 난소, 방광, 위, 피부, 자궁내막, 난소, 고환, 식도, 전립선 또는 신장 기원을 포함한 상피 암종; 골 및 연부-조직 육종, 예컨대 골육종, 연골육종, 섬유육종, 악성 섬유성 조직구종 (MFH), 평활근육종; 조혈 악성종양, 예컨대 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종 또는 백혈병; 신경외배엽 종양, 예컨대 말초 신경 종양, 성상세포종 또는 흑색종; 또는 중피종이다.
본 발명의 또 다른 측면은 세포가 CD44v9를 발현하는 암을 갖는 대상체에게 CD44v9 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 CD44v9의 길항제의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체를 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명의 또 다른 측면은 대상체에게 CD44v9 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 CD44v9의 길항제의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 세포가 CD44v9를 발현하는 세포-증식성 장애를 치료하는 방법을 제공한다.
특정 실시양태에서, CD44v9의 길항제는 임의의 대상 항-CD44v9 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 그의 폴리펩티드 또는 그의 면역접합체 또는 그의 제약 조성물을 포함한다.
특정 실시양태에서, 암은 유방, 폐, 간, 결장직장, 두경부, 식도, 췌장, 난소, 방광, 위, 피부, 자궁내막, 난소, 고환, 식도, 전립선 또는 신장 기원을 포함한 상피 암종; 골 및 연부-조직 육종, 예컨대 골육종, 연골육종, 섬유육종, 악성 섬유성 조직구종 (MFH), 평활근육종; 조혈 악성종양, 예컨대 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종 또는 백혈병; 신경외배엽 종양, 예컨대 말초 신경 종양, 성상세포종 또는 흑색종; 또는 중피종이다.
본 발명의 또 다른 측면은 대상체로부터의 샘플을 임의의 대상 항-CD44v6 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 접촉시키는 것을 포함하는, 대상체로부터의 샘플에서 CD44v6의 존재 및/또는 존재비를 결정하는 방법을 제공한다.
본 발명의 또 다른 측면은 대상체로부터의 샘플을 임의의 대상 항-CD44v9 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 접촉시키는 것을 포함하는, 대상체로부터의 샘플에서 CD44v9의 존재 및/또는 존재비를 결정하는 방법을 제공한다.
본 발명의 또 다른 측면은 (1) 대상체로부터의 암 샘플에서 CD44v6의 존재 및/또는 존재비를 결정하는 대상 방법을 사용하여 암 샘플에서 CD44v6을 발현하는 대상체를 확인하는 단계, (2) 상기 대상체에게 치료 유효량의 임의의 대상 항-CD44v6 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 그의 폴리펩티드 또는 그의 면역접합체 또는 그의 제약 조성물을 투여하는 단계를 포함하며, 이에 의해 세포가 CD44v6을 발현하는 암을 갖는 대상체를 진단 및 치료하는 것인, 상기 암을 갖는 대상체를 진단 및 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명의 또 다른 측면은 (1) 대상체로부터의 암 샘플에서 CD44v9의 존재 및/또는 존재비를 결정하는 대상 방법을 사용하여 암 샘플에서 CD44v9를 발현하는 대상체를 확인하는 단계, (2) 상기 대상체에게 치료 유효량의 임의의 대상 항-CD44v9 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 그의 폴리펩티드 또는 그의 면역접합체 또는 그의 제약 조성물을 투여하는 단계를 포함하며, 이에 의해 세포가 CD44v9를 발현하는 암을 갖는 대상체를 진단 및 치료하는 것인, 상기 암을 갖는 대상체를 진단 및 치료하는 방법을 제공한다.
상기 일반적으로 기재된 본 발명과 함께, 본 발명의 특정 구체적 측면 또는 실시양태가 하기 섹션에서 추가로 기재된다.
2. 정의
용어 "항체", "항체 분자" 및 "항체 단백질"은 본원에서 상호교환가능하게 사용되고, 동등물로 간주될 것이다. 이들은 이뮤노글로불린 분자의 경쇄 및/또는 중쇄 가변 영역 내의 적어도 1개의 항원 인식 부위를 통해 표적 분자, 예컨대 단백질, 폴리펩티드, 펩티드, 탄수화물, 폴리뉴클레오티드, 지질 또는 상기의 조합을 인식하고 이에 특이적으로 결합하는 이뮤노글로불린 분자를 포함한다. 본원에 사용된 용어 "항체"는 무손상 폴리클로날 항체, 무손상 모노클로날 항체를 포괄하고, 약어로서 항체 단편 (예컨대 Fab, Fab', F(ab')2 및 Fv 단편), 단일 쇄 Fv (scFv) 돌연변이체, 다중특이적 항체, 예컨대 이중특이적 항체, 키메라 항체, 인간화 항체, 인간 항체, 항체의 항원 결정 부분을 포함하는 융합 단백질, 및 항체가 목적하는 생물학적 활성을 나타내는 한 항원 인식 부위를 포함하는 임의의 다른 변형된 이뮤노글로불린 분자를 포함한다. 항체는 각각 알파, 델타, 엡실론, 감마 및 뮤로 지칭되는 그의 중쇄 불변 도메인의 동일성에 기초하여, 이뮤노글로불린의 5가지 주요 부류: IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM, 또는 그의 하위부류 (이소형) (예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2) 중 임의의 것일 수 있다. 상이한 부류의 이뮤노글로불린은 상이하고, 널리 공지되어 있는 서브유닛 구조 및 3차원 구성을 갖는다. 항체는 네이키드이거나 또는 다른 분자, 예컨대 독소, 방사성동위원소 등에 접합될 수 있다.
일부 실시양태에서, 항체는 비-자연 발생의 재조합적으로 생성된 항체이다. 일부 실시양태에서, 항체는 자연 성분으로부터 정제된다. 일부 실시양태에서, 항체는 재조합적으로 생산된다. 일부 실시양태에서, 항체는 하이브리도마에 의해 생산되거나 또는 항체의 라이브러리에서 생성된다.
"모노클로날 항체의 상보성 결정 영역 (CDR)"은 코티아(Chothia) 및 레스크(Lesk) (문헌 [Chothia and Lesk (1987) J. Mol. Biol. 196:901-917] (본원에 참조로 포함됨))와 관련하여 카바트(Kabat) (문헌 [Kabat E. A., Wu T. T., Perry H. M., Gottesman K. S. and Foeller C. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest (5th Ed.). NIH Publication No. 91-3242. U.S. Department of Health and Human Services, Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.] (본원에 참조로 포함됨))에 따라 특이적 항원 결합에 관여하는 아미노산 서열인 것으로 이해된다.
본원에 사용된 용어 "프레임워크 변형"은 개별 상보성 결정 영역을 둘러싸는 가변 영역 내의 단일 또는 다중 아미노산의 교환, 결실 또는 부가를 지칭한다. 프레임워크 변형은 항체 단백질의 면역원성, 생산성 또는 결합 특이성에 영향을 미칠 수 있다.
본원에 사용된 "항원-결합 단편", "항원-결합 부분" 또는 "단편"은 전장 서열보다 더 짧은 핵산 분자에 의해 코딩되지만 여전히 그의 항체 결합 활성을 보유한다는 것 (예를 들어, Kd에 의해 측정시 약간 더 불량한 결합 친화도일 수도 있지만, 실질적으로는 동일한 결합 특이성)을 특징으로 하는, 보다 짧은 버전의 항체 분자, 즉 임의의 폴리펩티드 하위세트를 지칭한다.
이들 용어는 무손상 항체의 한 부분을 지칭하고, 무손상 항체의 항원 결정 가변 영역을 지칭한다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')2 및 Fv 단편, 선형 항체, 단일 쇄 항체, 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 용어 항체의 "항원-결합 단편"은 항원에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는 항체의 1개 이상의 단편을 포함한다. 항체의 항원-결합 기능은 전장 항체의 특정 단편에 의해 수행될 수 있다는 것이 밝혀져 있다. 용어 항체의 "항원-결합 단편" 내에 포괄되는 결합 단편의 예는 (비제한적으로) 다음을 포함한다: (i) VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 이루어진 1가 단편인 Fab 단편 (예를 들어, 파파인에 의해 소화된 항체는 다음 3개의 단편을 생성함: 2개의 항원-결합 Fab 단편 및 항원에 결합하지 않는 1개의 Fc 단편); (ii) 힌지 영역에서 디술피드 가교에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편인 F(ab')2 단편 (예를 들어, 펩신에 의해 소화된 항체는 다음 2개의 단편을 생성함: 2가 항원-결합 F(ab')2 단편 및 항원에 결합하지 않는 pFc' 단편), 및 그의 관련 F(ab') 1가 유닛; (iii) VH 및 CH1 도메인으로 이루어진 Fd 단편 (즉, Fab에 포함되는 중쇄의 그 부분); (iv) 항체의 단일 아암의 VL 및 VH 도메인으로 이루어진 Fv 단편, 및 관련 디술피드 연결된 Fv; (v) VH 도메인으로 이루어진 dAb (도메인 항체) 또는 sdAb (단일 도메인 항체) 단편 (Ward et al., Nature 341:544-546, 1989); 및 (vi) 단리된 상보성 결정 영역 (CDR).
항체 단편의 생산을 위한 다양한 기술이 공지되어 있다. 전통적으로, 이들 단편은 무손상 항체의 단백질분해적 소화를 통해 유도된다 (예를 들어, 문헌 [Morimoto et al., Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24: 107-117, 1993; Brennan et al., Science 229:81, 1985]). 특정 실시양태에서, 항체 단편은 재조합적으로 생산된다. Fab, Fv 및 scFv 항체 단편은 모두 이. 콜라이(E. coli) 또는 다른 숙주 세포에서 발현되고 이로부터 분비될 수 있어서, 이들 단편의 다량 생산을 가능하게 한다. 이러한 항체 단편은 또한 항체 파지 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 항체 단편은 또한, 예를 들어 미국 특허 5,641,870에 기재된 바와 같은 선형 항체일 수 있고, 단일특이적 또는 이중특이적일 수 있다. 항체 단편의 생산을 위한 다른 기술은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 명백할 것이다.
"모노클로날 항체"는 단일 항원 결정기 또는 에피토프의 고도의 특이적인 인식 및 결합에 관여하는 동종 항체 집단을 지칭한다. 이는 전형적으로 상이한 항원 결정기에 대해 지시되는 상이한 항체를 포함하는 폴리클로날 항체와 대조적이다. 용어 "모노클로날 항체"는 무손상 및 전장 모노클로날 항체 둘 다, 뿐만 아니라 항체 단편 (예컨대 Fab, Fab', F(ab')2, Fv), 단일 쇄 (scFv) 돌연변이체, 항체 부분을 포함하는 융합 단백질, 및 항원 인식 부위를 포함하는 임의의 다른 변형된 이뮤노글로불린 분자를 포괄한다. 추가로, "모노클로날 항체"는 하이브리도마, 파지 선택, 재조합 발현 및 트랜스제닉 동물을 포함하나 이에 제한되지는 않는 임의의 수의 방식으로 제조된 이러한 항체를 지칭한다.
모노클로날 항체는 하이브리도마 방법, 예컨대 문헌 [Kohler and Milstein (1975) Nature 256:495]에 기재된 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 하이브리도마 방법을 사용하여, 마우스, 햄스터 또는 다른 적절한 숙주 동물을 면역화하여, 면역화 항원에 특이적으로 결합할 항체의 림프구에 의한 생산을 도출해낸다. 또한 림프구를 시험관내에서 면역화할 수 있다. 면역화 후에, 림프구를 단리하고, 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜을 사용하여 적합한 골수종 세포주와 융합시켜 하이브리도마 세포를 형성하고, 이어서 이를 비융합 림프구 및 골수종 세포로부터 선택해 낼 수 있다. 이어서 면역침전, 이뮤노블롯팅에 의해 또는 시험관내 결합 검정 (예를 들어, 방사성면역검정 (RIA); 효소-연결된 면역흡착 검정 (ELISA))에 의해 결정된 바와 같이 선택된 항원에 특이적으로 지시되는 모노클로날 항체를 생산하는 하이브리도마를, 표준 방법 (Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, Academic Press, 1986)을 사용하는 시험관내 배양에서 또는 동물 내의 복수 종양으로서 생체내에서 증식시킬 수 있다. 이어서 폴리클로날 항체에 대해 기재된 바와 같이 배양 배지 또는 복수액으로부터 모노클로날 항체를 정제할 수 있다.
대안적으로 미국 특허 4,816,567에 기재된 바와 같은 재조합 DNA 방법을 사용하여 모노클로날 항체를 또한 제조할 수 있다. 모노클로날 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 성숙 B-세포 또는 하이브리도마 세포로부터, 예컨대 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 유전자를 특이적으로 증폭시키는 올리고뉴클레오티드 프라이머를 사용하는 RT-PCR에 의해 단리하고, 통상적인 절차를 사용하여 그의 서열을 결정한다. 이어서 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 적합한 발현 벡터 내로 클로닝하고, 이를 숙주 세포, 예컨대 이. 콜라이 세포, 원숭이 COS 세포, 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포 또는 골수종 세포 내로 형질감염시키는 경우에 (이들은 달리 이뮤노글로불린 단백질을 생산하지 않음), 이러한 숙주 세포에 의해 모노클로날 항체가 생성된다. 또한 문헌 [McCafferty et al., Nature 348:552-554, 1990; Clackson et al., Nature, 352:624-628, 1991; 및 Marks et al., J. Mol. Biol. 222:581-597, 1991]에 기재된 바와 같이 목적하는 종의 CDR을 발현하는 파지 디스플레이 라이브러리로부터 목적하는 종의 재조합 모노클로날 항체 또는 그의 단편을 단리할 수 있다.
모노클로날 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드(들)를 재조합 DNA 기술을 사용하여 수많은 상이한 방식으로 추가로 변형시켜 대안적 항체를 생성할 수 있다. 일부 실시양태에서, 예를 들어 마우스 모노클로날 항체의 경쇄 및 중쇄의 불변 도메인으로 1) 예를 들어 인간 항체의 이러한 영역을 치환시켜 키메라 항체를 생성하거나 또는 2) 비-이뮤노글로불린 폴리펩티드를 치환시켜 융합 항체를 생성할 수 있다. 일부 실시양태에서, 불변 영역을 말단절단 또는 제거하여 목적하는 모노클로날 항체의 항체 단편을 생성한다. 가변 영역의 부위-지정 또는 고밀도 돌연변이유발을 사용하여 모노클로날 항체의 특이성, 친화도 등을 최적화할 수 있다.
용어 "인간화 항체"는 최소의 비-인간 (예를 들어, 뮤린) 서열을 함유하는 특이적 이뮤노글로불린 쇄, 키메라 이뮤노글로불린 또는 그의 단편인 비-인간 (예를 들어, 뮤린) 항체의 형태를 지칭한다. 전형적으로, 인간화 항체는 상보성 결정 영역 (CDR)으로부터의 잔기가 목적하는 특이성, 친화도 및 능력을 갖는 비-인간 종 (예를 들어, 마우스, 래트, 토끼, 햄스터)의 CDR로부터의 잔기에 의해 대체된 인간 이뮤노글로불린이다 (Jones et al., Nature 321:522-525, 1986; Riechmann et al., Nature 332:323-327, 1988; Verhoeyen et al., Science 239:1534-1536, 1988).
비-인간 또는 인간 항체를 조작, 인간화 또는 재표면화하는 방법이 또한 사용될 수 있고, 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 인간화, 재표면화 또는 유사하게 조작된 항체는 비-인간, 예를 들어 비제한적으로, 마우스, 래트, 토끼, 비-인간 영장류 또는 다른 포유동물인 공급원으로부터의 1개 이상의 아미노산 잔기를 가질 수 있다. 이들 비-인간 아미노산 잔기는 종종 "유입" 잔기로 지칭되는 잔기에 의해 대체되고, 이는 전형적으로 공지된 인간 서열의 "유입" 가변, 불변 또는 다른 도메인으로부터 취해진다.
이러한 유입된 서열은 관련 기술분야에 공지된 바와 같이, 면역원성을 감소시키거나 또는 결합, 친화도, 온-레이트, 오프-레이트, 결합력, 특이성, 반감기 또는 임의의 다른 적합한 특징을 감소, 증진 또는 변형시키기 위해 사용될 수 있다. 일반적으로, CDR 잔기가 CD44v6 또는 CD44v9 결합에 영향을 미치는데 직접적으로 및 가장 실질적으로 관여한다. 따라서, 가변 및 불변 영역의 비-인간 서열이 인간 또는 다른 아미노산으로 대체될 수 있지만 비-인간 또는 인간 CDR 서열의 일부 또는 전부는 유지된다.
항체는 또한 임의로 항원 CD44v6 또는 CD44v9에 대한 높은 친화도 및 다른 유리한 생물학적 특성을 보유하도록 조작된 인간화, 재표면화, 조작된 또는 인간 항체일 수 있다. 이러한 목적을 달성하기 위해, 인간화 (또는 인간) 또는 조작된 항-CD44v6 또는 항-CD44v9 항체 및 재표면화 항체는 임의로, 모, 조작된 및 인간화 서열의 3차원 모델을 사용하여 모 서열 및 다양한 개념적 인간화 및 조작된 생성물의 분석 과정에 의해 제조될 수 있다. 3차원 이뮤노글로불린 모델은 통상적으로 이용가능하고, 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 친숙하다. 선택된 후보 이뮤노글로불린 서열의 개연성 있는 3차원 입체형태적 구조를 예시하고 디스플레이하는 컴퓨터 프로그램이 이용가능하다. 이들 디스플레이의 검사는 후보 이뮤노글로불린 서열의 기능에 있어서 잔기의 가능한 역할의 분석을 가능하게 하고, 즉 후보 이뮤노글로불린이 그의 항원, 예컨대 CD44v6 또는 CD44v9에 결합하는 능력에 영향을 미치는 잔기의 분석을 가능하게 한다. 이러한 방식으로, 프레임워크 (FR) 잔기는 목적하는 항체 특징, 예컨대 표적 항원(들)에 대한 증가된 친화도가 달성되도록 컨센서스 및 유입 서열로부터 선택되고 조합될 수 있다.
본 발명의 항체의 인간화, 재표면화 또는 조작은 임의의 공지된 방법, 예컨대 비제한적으로 문헌 [Winter (Jones et al., Nature 321:522, 1986; Riechmann et al., Nature 332:323, 1988; Verhoeyen et al., Science 239:1534, 1988, Sims et al., J. Immunol. 151:2296, 1993; Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901, 1987, Carter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89:4285, 1992; Presta et al., J. Immunol. 151:2623, 1993; Raguska et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 91(3):969-973, 1994]; 미국 특허 번호 5,639,641, 5,723,323; 5,976,862; 5,824,514; 5,817,483; 5,814,476; 5,763,192; 5,723,323; 5,766,886; 5,714,352; 6,204,023; 6,180,370; 5,693,762; 5,530,101; 5,585,089; 5,225,539; 4,816,567; PCT/: US98/16280; US96/18978; US91/09630; US91/05939; US94/01234; GB89/01334; GB91/01134; GB92/01755; WO90/14443; WO90/14424; WO90/14430; EP 229246; 7,557,189; 7,538,195; 및 7,342,110 (이들 각각은 그 안에 인용된 참고문헌을 비롯하여, 전문이 본원에 참조로 포함됨)에 기재된 방법을 사용하여 수행될 수 있다.
특정의 대안적 실시양태에서, CD44v6 또는 CD44v9에 대한 항체는 인간 항체이다. 인간 항체는 관련 기술분야에 공지된 다양한 기술을 사용하여 직접 제조될 수 있다. 시험관내에서 면역화되거나 또는 표적 항원에 대해 지시된 항체를 생산하는 면역화 개체로부터 단리된 불멸화 인간 B 림프구가 생성될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985); Boemer et al., 1991, J. Immunol, 147 (l):86-95]; 및 미국 특허 5,750,373 참조). 또한, 인간 항체는, 예를 들어 문헌 [Vaughan et al., Nat. Biotech. 14:309- 314, 1996, Sheets et al., Proc. Nat'l. Acad. Sci. 95:6157-6162, 1998, Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol. 227:381, 1991, 및 Marks et al., J. Mol. Biol. 222:581, 1991]에 기재된 바와 같이, 인간 항체를 발현하는 파지 라이브러리로부터 선택될 수 있다. 항체 파지 라이브러리의 생성 및 사용에 대한 기술은 또한 미국 특허 번호 5,969,108, 6,172,197, 5,885,793, 6,521,404; 6,544,731; 6,555,313; 6,582,915; 6,593,081; 6,300,064; 6,653,068; 6,706,484; 및 7,264,963; 및 문헌 [Rothe et al., J. Mol. Bio. doi: 10.1016/j.jmb.2007.12.018, 2007] (이들 각각은 그 전문이 본원에 참조로 포함됨)에 기재되어 있다. 친화도 성숙 전략 및 쇄 셔플링 전략 (문헌 [Marks et al., Bio/Technology 10:779-783, 1992] (그 전문이 본원에 참조로 포함됨))은 관련 기술분야에 공지되어 있고, 고친화도 인간 항체를 생성하는데 사용될 수 있다.
인간화 항체는 또한 면역화시 내인성 이뮤노글로불린 생산의 부재 하에 인간 항체의 전체 레퍼토리를 생산할 수 있는 인간 이뮤노글로불린 유전자좌를 함유하는 트랜스제닉 마우스에서 제조될 수 있다. 이러한 접근법은 미국 특허 5,545,807; 5,545,806; 5,569,825; 5,625,126; 5,633,425; 및 5,661,016에 기재되어 있다.
일부 경우에, 인간 이뮤노글로불린의 Fv 프레임워크 영역 (FR) 잔기는 목적하는 특이성, 친화도 및 능력을 갖는 비-인간 종으로부터의 항체 내의 상응하는 잔기로 대체된다. 인간화 항체는 Fv 프레임워크 영역에서 및/또는 대체된 비-인간 잔기 내에서 추가의 잔기를 치환시킴으로써 추가로 변형되어 항체 특이성, 친화도 및/또는 능력을 정밀화 및 최적화할 수 있다. 일반적으로, 인간화 항체는 비인간 이뮤노글로불린에 상응하는 CDR 영역을 모두 또는 실질적으로 모두 함유하는 적어도 1개, 전형적으로는 2 또는 3개의 가변 도메인을 실질적으로 모두 포함할 것이나, 모든 또는 실질적으로 모든 FR 영역은 인간 이뮤노글로불린 컨센서스 서열의 것이다. 인간화 항체는 또한 이뮤노글로불린 불변 영역 또는 도메인 (Fc)의 적어도 한 부분, 전형적으로 인간 이뮤노글로불린의 것을 포함할 수 있다. 인간화 항체를 생성하기 위해 사용되는 방법의 예는 미국 특허 5,225,539 및 5,639,641, 문헌 [Roguska et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91(3):969-973, 1994; 및 Roguska et al., Protein Eng. 9(10):895-904, 1996] (모두 본원에 참조로 포함됨)에 기재되어 있다. 일부 실시양태에서, "인간화 항체"는 재표면화 항체이다. 일부 실시양태에서, "인간화 항체"는 CDR-그라프팅된 항체이다.
항체의 "가변 영역"은 단독 또는 조합의 항체 경쇄의 가변 영역 또는 항체 중쇄의 가변 영역을 지칭한다. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 각각 초가변 영역으로도 또한 공지된 3개의 상보성 결정 영역 (CDR)에 의해 연결된 4개의 프레임워크 영역 (FR)으로 이루어진다. 각각의 쇄에서의 CDR들은 FR에 의해 함께 근접하게 유지되고, 다른 쇄로부터의 CDR들은 항체의 항원-결합 부위의 형성에 기여한다. CDR을 결정하기 위한 다음 적어도 2가지 기술이 존재한다: (1) 교차-종 서열 가변성에 기초한 접근법 (즉, 문헌 [Kabat et al. Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., 1991, National Institutes of Health, Bethesda Md.)]); 및 (2) 항원-항체 복합체의 결정학적 연구에 기초한 접근법 (문헌 [Al-lazikani et al., J. Molec. Biol. 273:927-948, 1997]). 추가로, 이들 두 접근법의 조합이 관련 기술분야에서 CDR을 결정하는데 때때로 사용된다.
카바트 넘버링 시스템은 일반적으로, 가변 도메인 내의 잔기 (대략적으로, 경쇄의 잔기 1-107 및 중쇄의 잔기 1-113)를 지칭하는 경우에 사용된다 (예를 들어, 문헌 [Kabat et al., Sequences of Immunological Interest, 5th Ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)]).
카바트에서와 같은 아미노산 위치 넘버링은 문헌 [Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)] (본원에 참조로 포함됨)에서 항체 편집의 중쇄 가변 도메인 또는 경쇄 가변 도메인에 대해 사용된 넘버링 시스템을 지칭한다. 이러한 넘버링 시스템을 사용하여, 실제 선형 아미노산 서열은 가변 도메인의 FR 또는 CDR의 단축 또는 이 내로의 삽입에 상응하는 더 적은 또는 추가의 아미노산을 함유할 수 있다. 예를 들어, 중쇄 가변 도메인은 H2의 잔기 52 다음에 단일 아미노산 삽입물 (카바트에 따라 잔기 52a), 및 중쇄 FR 잔기 82 다음에 삽입된 잔기 (예를 들어, 카바트에 따라 잔기 82a, 82b 및 82c 등)를 포함할 수 있다. 잔기의 카바트 넘버링은 주어진 항체에 대해 항체 서열의 상동성 영역에서 "표준" 카바트 넘버링된 서열과 정렬시킴으로써 결정될 수 있다. 코티아는 그 대신 구조 루프의 위치를 지칭한다 (Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917,1987). 카바트 넘버링 규정을 사용하여 넘버링되는 경우 코티아 CDR-H1 루프의 말단은 루프의 길이에 따라 H32와 H34 사이에서 달라진다. 이는 카바트 넘버링 스킴이 H35A 및 H35B에서 삽입을 배치하기 때문이며 - 35A나 35B가 둘 다 존재하지 않는 경우에, 루프는 32에서 끝나고; 35A만이 존재하는 경우에, 루프는 33에서 끝나고; 35A 및 35B 둘 다가 존재하는 경우에, 루프는 34에서 끝난다. AbM 초가변 영역은 카바트 CDR과 코티아 구조적 루프 사이의의 절충을 나타내고, 옥스포드 몰레큘라(Oxford Molecular)의 AbM 항체 모델링 소프트웨어에 의해 사용된다.
용어 "인간 항체"는 인간에 의해 생산된 항체 또는 관련 기술분야에 공지된 임의의 기술을 사용하여 제조된 인간에 의해 생산된 항체에 상응하는 아미노산 서열을 갖는 항체를 의미한다. 특정 실시양태에서, 인간 항체는 비-인간 서열을 갖지 않는다. 인간 항체의 이러한 정의는 무손상 또는 전장 항체 및 그의 항원-결합 단편을 포함한다.
용어 "키메라 항체"는 이뮤노글로불린 분자의 아미노산 서열이 2개 이상의 종으로부터 유래된 것인 항체를 지칭한다. 전형적으로, 경쇄 및 중쇄 둘 다의 가변 영역은 목적하는 특이성, 친화도 및 능력을 갖는 포유동물 (예를 들어, 마우스, 래트, 토끼 등) 중 하나의 종으로부터 유래된 항체의 가변 영역에 상응하는 한편 불변 영역은 또 다른 종 (통상적으로 인간)으로부터 유래된 항체 내의 서열과 상동이어서 그 종 (예를 들어, 인간)에서 면역 반응을 도출할 가능성을 피하거나 감소시킨다. 특정 실시양태에서, 키메라 항체는 적어도 1개의 인간 중쇄 및/또는 경쇄 폴리펩티드를 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 예를 들어 뮤린 경쇄 및 인간 중쇄 폴리펩티드를 포함하는 항체를 포함할 수 있다.
본 발명의 목적을 위해, 변형된 항체는 항체와 인간 CD44v6 또는 CD44v9의 폴리펩티드의 회합을 제공하는 임의의 유형의 가변 영역을 포함할 수 있다는 것을 인지해야 한다. 이와 관련하여, 가변 영역은 체액성 반응을 시작하고 목적하는 종양 연관 항원에 대한 이뮤노글로불린 생성하기 위해 유도될 수 있는 임의의 유형의 포유동물의 것을 포함하거나 또는 이로부터 유래될 수 있다. 이에 따라, 변형된 항체의 가변 영역은, 예를 들어 인간, 뮤린, 비-인간 영장류 (예를 들어, 시노몰구스 원숭이, 마카크 등) 또는 루핀 기원의 것일 수 있다. 일부 실시양태에서, 변형된 이뮤노글로불린의 가변 및 불변 영역은 둘 다 인간이다. 다른 실시양태에서, 상용성 항체 (통상적으로 비-인간 공급원으로부터 유래됨)의 가변 영역은 결합 특성을 개선시키거나 분자의 면역원성을 감소시키기 위해 조작되거나 또는 특이적으로 맞추어질 수 있다. 이러한 점에서, 본 발명에 유용한 가변 영역은 인간화될 수 있거나 또는 유입된 아미노산 서열의 포함을 통해 달리 변경될 수 있다.
특정 실시양태에서, 중쇄 및 경쇄 둘 다의 가변 도메인은 1개 이상의 CDR의 적어도 부분적 대체에 의해, 및 필요한 경우, 부분적 프레임워크 영역 대체 및 서열 변화에 의해 변경된다. CDR은, 프레임워크 영역이 유래된 항체와 동일한 부류 또는 심지어는 하위부류의 항체로부터 유래될 수 있지만, CDR은 상이한 부류의 항체로부터, 특정 실시양태에서는 상이한 종의 항체로부터 유래될 것으로 생각된다. 하나의 가변 도메인의 항원-결합 능력을 또 다른 가변 도메인으로 전달하기 위해 모든 CDR을 공여자 가변 영역으로부터의 모든 CDR로 대체할 필요는 없을 수도 있다. 그보다는, 항원-결합 부위의 활성을 유지하는데 필요한 잔기를 전달하는 것만이 필요할 수 있다. 미국 특허 번호 5,585,089, 5,693,761 및 5,693,762에 제시된 설명을 고려하여, 감소된 면역원성을 갖는 기능적 항체를 수득하는 것은 상용 실험의 수행 또는 시행 착오 시험에 의해 관련 기술분야의 통상의 기술자의 능력 범위 내에 있을 것이다.
가변 영역에 대한 변경에도 불구하고, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 본 발명의 변형된 항체가 불변 영역 도메인의 적어도 1개 이상의 부분이 결실되거나 또는 달리 변경되어, 목적하는 생화학적 특징, 예컨대 천연 또는 비변경 불변 영역을 포함하는 대략 동일한 면역원성의 항체와 비교할 때 증가된 종양 국재화 또는 감소된 혈청 반감기를 제공하는 항체 (예를 들어, 전장 항체 또는 그의 면역반응성 단편)를 포함할 것임을 인지할 것이다. 일부 실시양태에서, 변형된 항체의 불변 영역은 인간 불변 영역을 포함할 것이다. 본 발명과 상용성인 불변 영역에 대한 변형은 1개 이상의 도메인에서의 1개 이상의 아미노산의 부가, 결실 또는 치환을 포함한다. 즉, 본원에 개시된 변형된 항체는 3개의 중쇄 불변 도메인 (CH1, CH2 또는 CH3) 중 1개 이상 및/또는 경쇄 불변 도메인 (CL)에 대한 변경 또는 변형을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 도메인이 부분적으로 또는 전체적으로 결실된 변형된 불변 영역이 고려된다. 일부 실시양태에서, 변형된 항체는 전체 CH2 도메인이 제거된 도메인 결실 구축물 또는 변이체 (ACH2 구축물)를 포함할 것이다. 일부 실시양태에서, 생략된 불변 영역 도메인은 부재 불변 영역에 의해 전형적으로 부여되는 분자 가요성의 일부를 제공하는 짧은 아미노산 스페이서 (예를 들어, 10개의 잔기)에 의해 대체될 것이다.
특정 실시양태에서, 변형된 항체를 조작하여 CH3 도메인을 각각의 변형된 항체의 힌지 영역에 직접 융합시킬 수 있다는 것을 주목할 것이다. 다른 구축물에서, 힌지 영역과 변형된 CH2 및/또는 CH3 도메인 사이에 펩티드 스페이서를 제공하는 것이 바람직할 수 있다. 예를 들어, CH2 도메인이 결실되고, 남아있는 CH3 도메인 (변형 또는 비변형)이 5-20개의 아미노산 스페이서에 의해 힌지 영역에 연결되는 상용성 구축물이 발현될 수 있다. 이러한 스페이서를 부가하여, 예를 들어 불변 도메인의 조절 요소를 자유롭고 접근가능하게 하거나 또는 힌지 영역을 가요성이게 할 수 있다. 그러나, 아미노산 스페이서는 일부 경우에 면역원성인 것으로 입증되어 구축물에 대해 원치않는 면역 반응을 도출할 수 있다는 것을 주목해야 한다. 따라서, 특정 실시양태에서, 구축물에 부가되는 임의의 스페이서는 변형된 항체의 목적하는 생물학적 품질을 유지하도록 비교적 비-면역원성이거나 또는 심지어 전적으로 생략될 것이다.
전체 불변 영역 도메인의 결실 이외에, 본 발명의 항체는 소수 또는 심지어 단일 아미노산의 부분 결실 또는 치환이 제공될 수 있다는 것을 인지할 것이다. 예를 들어, CH2 도메인의 선택된 영역에서의 단일 아미노산의 돌연변이는 실질적으로 Fc 결합을 감소시켜 종양 국재화를 증가시키기에 충분할 수 있다. 유사하게, 조정될 이펙터 기능 (예를 들어, 보체 C1Q 결합)을 제어하는 1개 이상의 불변 영역 도메인의 일부를 간단히 결실시키는 것이 바람직할 수 있다. 이러한 불변 영역의 부분 결실은 대상 무손상 불변 영역 도메인과 연관된 다른 바람직한 기능은 남기면서 항체의 선택된 특징 (혈청 반감기)을 개선시킬 수 있다. 또한, 상기 언급된 바와 같이, 개시된 항체의 불변 영역은, 예를 들어 생성되는 구축물의 프로파일을 증진시킬 수 있는 1개 이상의 아미노산의 돌연변이 또는 치환을 통해 변형될 수 있다. 이러한 점에서, 변형된 항체의 구성 및 면역원성 프로파일은 실질적으로 유지시키면서 보존된 결합 부위에 의해 제공되는 활성 (예를 들어, Fc 결합)을 방해하는 것이 가능할 수 있다. 특정 실시양태는 바람직한 특징을 증진시키기 위해, 예컨대 이펙터 기능을 감소 또는 증가시키기 위해 또는 보다 많은 세포독소 또는 탄수화물 부착을 제공하기 위해 불변 영역에 대한 1개 이상의 아미노산의 부가를 포함할 수 있다. 이러한 실시양태에서, 선택된 불변 영역 도메인으로부터 유래된 특정 서열을 삽입 또는 복제하는 것이 바람직할 수 있다.
본 발명은 본원에 제시된 키메라, 인간화 및 인간 항체 또는 그의 항체 단편과 실질적으로 상동인 변이체 및 등가물을 추가로 포함한다. 이들은, 예를 들어 보존적 치환 돌연변이, 즉 유사한 아미노산에 의한 1개 이상의 아미노산의 치환을 함유할 수 있다. 예를 들어, 보존적 치환은 아미노산을 동일한 일반 부류 내의 또 다른 아미노산으로 치환하는 것, 예를 들어 하나의 산성 아미노산을 또 다른 산성 아미노산으로, 하나의 염기성 아미노산을 또 다른 염기성 아미노산으로 또는 하나의 중성 아미노산을 또 다른 중성 아미노산으로 치환하는 것을 지칭한다. 보존적 아미노산 치환에 의해 의도되는 것은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있고, 예컨대 본원 상기에 정의된 것이다.
용어 "에피토프" 및 "항원 결정기"는 본원에서 상호교환가능하게 사용되고, 특정한 항체에 의해 인식되고 특이적으로 결합될 수 있는 항원의 부분을 지칭한다. 항원이 폴리펩티드인 경우에, 에피토프는 인접 아미노산 및 단백질의 3차 폴딩에 의해 병치되는 비인접 아미노산 둘 다로부터 형성될 수 있다. 인접 아미노산으로부터 형성된 에피토프는 전형적으로 단백질 변성시 보유되는 반면에 3차 폴딩에 의해 형성된 에피토프는 전형적으로 단백질 변성시 상실된다. 에피토프는 전형적으로 독특한 공간 입체형태로 적어도 3개, 보다 통상적으로는 적어도 5개 또는 8-10개의 아미노산을 포함한다.
"결합 친화도"는 일반적으로 분자 (예를 들어, 항체)의 단일 결합 부위와 그의 결합 파트너 (예를 들어, 항원) 사이의 비공유 상호작용의 총 합계 강도를 지칭한다. 달리 나타내지 않는 한, 본원에 사용된 "결합 친화도"는 결합 쌍의 구성원 (예를 들어, 항체와 항원) 사이의 1:1 상호작용을 반영하는 고유 결합 친화도를 지칭한다. 분자 X의 그의 파트너 Y에 대한 친화도는 일반적으로 해리 상수 (Kd) 또는 반수-최대 유효 농도 (EC50)로 나타내어질 수 있다. 친화도는 본원에 기재된 방법을 포함한, 관련 기술분야에 공지된 통상적인 방법에 의해 측정될 수 있다. 저친화도 항체는 일반적으로 항원에 천천히 결합하고 용이하게 해리되는 경향이 있으며, 반면 고친화도 항체는 일반적으로 항원에 더 신속히 결합하고 결합을 더 길게 유지하는 경향이 있다. 결합 친화도를 측정하는 다양한 방법이 관련 기술분야에 공지되어 있고, 본 발명의 목적을 위해 이들 중 임의의 방법이 사용될 수 있다. 구체적인 예시적 실시양태가 본원에 기재된다.
본원에 사용된 어구 "실질적으로 유사한" 또는 "실질적으로 동일한"은 관련 기술분야의 통상의 기술자가 상기 값 (예를 들어, Kd 값)에 의해 측정된 생물학적 특징의 맥락 내에서 2개의 수치값 (일반적으로 하나는 본 발명의 항체와 연관되고 다른 하나는 참조/비교 항체와 연관됨) 사이의 차이를 생물학적 및/또는 통계학적 유의성이 거의 또는 전혀 없는 것으로 간주할 만큼 상기 2개의 값 사이에 충분히 높은 정도의 유사성이 있다는 것을 나타낸다. 상기 2개의 값 사이의 차이는 참조/비교 항체에 대한 값의 함수로서 약 50% 미만, 약 40% 미만, 약 30% 미만, 약 20% 미만, 또는 약 10% 미만이다.
"단리된" 폴리펩티드, 항체, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 세포 또는 조성물은 자연에서 발견되지 않는 형태의 폴리펩티드, 항체, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 세포 또는 조성물이다. 단리된 폴리펩티드, 항체, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 세포 또는 조성물은 더 이상 자연에서 발견되는 형태가 아닌 정도로 정제된 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 단리된 폴리펩티드, 항체, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 세포 또는 조성물은 실질적으로 순수하다.
관련 기술분야에 공지된 항체 및 다른 단백질의 정제 방법은 또한, 예를 들어 미국 특허 공개 번호 2008/0312425, 2008/0177048 및 2009/0187005 (이들 각각은 그 전문이 본원에 참조로 포함됨)에 기재된 것을 포함한다.
본원에 사용된 "실질적으로 순수한"은 물질이 적어도 50% 순수한 (즉, 오염물이 없는), 적어도 90% 순수한, 적어도 95% 순수한, 적어도 98% 순수한, 또는 적어도 99% 순수한 것을 지칭한다.
본 발명에 따른 항체 분자의 "기능적 변이체"는 본 발명에 따른 항체 분자와 실질적으로 유사한 생물학적 활성 (기능적 또는 구조적), 즉 실질적으로 유사한 기질 특이성 또는 기질 절단을 갖는 항체 분자이다.
용어 "기능적 변이체"는 또한 "단편", "대립유전자 변이체", "기능적 변이체", "축중성 핵산 코드에 기초한 변이체" 또는 "화학적 유도체"를 포함한다. 이러한 "기능적 변이체"는 1개 또는 여러개의 점 돌연변이, 코딩 서열 내의 1개 또는 여러개의 핵산 교환, 결실 또는 삽입, 또는 1개 또는 여러개의 아미노산 교환, 결실 또는 삽입을 보유할 수 있다. 상기 기능적 변이체는 여전히 그의 생물학적 활성, 예컨대 항체 결합 활성을 적어도 부분적으로 보유하거나 또는 심지어는 상기 생물학적 활성을 개선시키면서 보유한다.
본 발명에 따른 항체 분자의 "기능적 변이체"는 또한 본 발명에 따른 항체 분자와 실질적으로 유사한 생물학적 활성 (기능적 또는 구조적), 즉 실질적으로 유사한 표적 분자 결합 활성을 갖는 항체 분자를 포함할 수 있다.
"대립유전자 변이체"는 대립유전자 변이, 예를 들어 인간에서의 2개의 대립유전자에서의 차이로 인한 변이체이다. 상기 변이체는 여전히 그의 생물학적 활성, 예컨대 항체 표적 결합 활성을 적어도 부분적으로 보유하거나 또는 심지어는 상기 생물학적 활성을 개선시키면서 보유한다.
"유전자 코드의 축중성에 기초한 변이체"는 특정 아미노산이 여러 상이한 뉴클레오티드 삼중자에 의해 코딩될 수 있다는 사실로 인한 변이체이다. 상기 변이체는 여전히 그의 생물학적 활성, 예컨대 항체 결합 활성을 적어도 부분적으로 보유하거나 또는 심지어는 상기 생물학적 활성을 개선시키면서 보유한다.
"융합 분자"는, 예를 들어 리포터 분자, 예컨대 방사성표지, 화학 분자, 예컨대 독소 또는 형광 표지 또는 관련 기술분야에 공지된 임의의 다른 분자에 융합된 본 발명에 따른 항체 분자일 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 본 발명에 따른 "화학적 유도체"는 통상적으로 분자의 일부가 아닌 추가의 화학적 모이어티를 함유하거나 또는 화학적으로 변형된 본 발명에 따른 항체 분자이다. 이러한 모이어티는 분자의 활성, 예컨대 표적 파괴 (예를 들어 종양 세포의 사멸)를 개선시킬 수 있거나 또는 그의 용해도, 흡수, 생물학적 반감기 등을 개선시킬 수 있다.
분자는 두 분자가 실질적으로 유사한 구조 또는 생물학적 활성을 갖는 경우에 또 다른 분자와 "실질적으로 유사한" 것이다. 따라서, 두 분자가 유사한 활성을 갖는다면, 이들은 분자 중 하나의 구조가 다른 것에서 발견되지 않더라도 또는 아미노산 잔기의 서열이 동일하지 않은 경우에도 상기 용어가 본원에 사용된 바와 같이 변이체로 간주된다.
본 발명의 "샘플" 또는 "생물학적 샘플"은 생물학적 기원, 구체적 실시양태에서, 예컨대 진핵 유기체의 것이다. 일부 실시양태에서, 샘플은 인간 샘플이지만, 동물 샘플이 또한 사용될 수 있다. 본 발명에 사용하기 위한 샘플의 비제한적 공급원은, 예를 들어 고체 조직, 생검 흡인물, 복수, 유체 추출물, 혈액, 혈장, 혈청, 척수액, 림프액, 피부, 호흡기, 장 및 비뇨생식관의 외부 절편, 눈물, 타액, 유액, 종양, 기관, 세포 배양물 및/또는 세포 배양 구성성분을 포함한다. "암성 / 종양 샘플"은 암성 세포를 함유하는 샘플이다. 상이한 유형의 세포 또는 조직을 비교하는 것, 상이한 발생 단계를 비교하는 것, 및 질환 또는 이상의 존재 및/또는 유형을 검출 또는 결정하는 것을 포함하나 이에 제한되지는 않는, CD44v6 또는 CD44v9의 발현의 측면 또는 샘플의 상태를 조사하는 것에 방법이 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 항체의 많은 용도를 위해, 최소의 가능한 항원-결합, 즉 CD44v6- 또는 CD44v9-결합 단위를 갖는 것이 바람직하다. 따라서, 또 다른 바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따른 항체 단백질은 Fab 단편 (항원-결합 단편=Fab)이다. 본 발명에 따른 이들 CD44v6-특이적 항체 단백질은 인접한 불변 영역에 의해 함께 유지되는 두 쇄의 가변 영역으로 이루어진다. 이들은 통상적인 항체로부터 프로테아제 소화, 예를 들어 파파인에 의해 형성될 수 있지만, 그 동안 유사한 Fab 단편이 또한 유전자 조작에 의해 생산될 수 있다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따른 항체 단백질은 펩신에 의한 단백질분해적 절단으로 제조될 수 있는 F(ab')2 단편이다.
유전자 조작 방법을 사용하여 중쇄 가변 영역 (VH) 및 경쇄 가변 영역 (VL)만으로 이루어진 단축된 항체 단편을 생산하는 것이 가능하다. 이들은 Fv 단편으로 지칭된다 (가변 단편=가변부의 단편). 또 다른 바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따른 CD44v6- 또는 CD44v9-특이적 항체 분자는 이러한 Fv 단편이다. 이들 Fv-단편은 불변 쇄의 시스테인에 의한 두 쇄의 공유 결합이 결여되어 있기 때문에, Fv 단편은 종종 안정화된다. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역을, 예를 들어 10 내지 30개의 아미노산, 바람직하게는 15개의 아미노산의 짧은 펩티드 단편에 의해 연결시키는 것이 유리하다. 이러한 방식으로, 펩티드 링커에 의해 연결된 VH 및 VL로 이루어진 단일 펩티드 가닥이 수득된다. 이러한 종류의 항체 단백질은 단일쇄-Fv (scFv)로 공지되어 있다. 선행 기술로부터 공지된 이러한 종류의 scFv-항체 단백질의 예는 문헌 [Huston et al. (1988, PNAS 16: 5879-5883)]에 기재되어 있다. 따라서, 또 다른 바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따른 CD44v6- 또는 CD44v9-특이적 항체 단백질은 단일쇄-Fv 단백질 (scFv)이다.
최근 수년간, scFv를 다량체 유도체로서 제조하기 위한 다양한 전략이 개발되었다. 이는 특히 개선된 약동학 및 생체분포 특성뿐만 아니라 증가된 결합력을 갖는 재조합 항체를 유도하는 것으로 의도된다. scFv의 다량체화를 달성하기 위해, scFv를 다량체화 도메인을 갖는 융합 단백질로서 제조하였다. 다량체화 도메인은, 예를 들어 IgG 또는 코일드 코일 구조 (나선 구조)의 CH3 영역, 예컨대 류신-지퍼 도메인일 수 있다. 그러나, scFv의 VH/VL 영역 사이의 상호작용이 다량체화 (예를 들어 디-, 트리- 및 펜타바디)를 위해 사용되는 전략이 또한 존재한다. 따라서, 또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 항체 단백질은 CD44v6- 또는 CD44v9-특이적 디아바디 항체 단편이다. 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 디아바디는 2가 동종이량체 scFv 유도체를 의미한다 (Hu et al., 1996, PNAS 16: 5879-5883). scFv 분자 내 링커의 5-10개 아미노산으로의 단축은 쇄간 VH/NL- 중첩이 일어나는 동종이량체의 형성을 유도한다. 디아바디는 디술피드 가교의 혼입에 의해 추가적으로 안정화될 수 있다. 선행 기술로부터의 디아바디-항체 단백질의 예는 문헌 [Perisic et al. (1994, Structure 2: 1217-1226)]에서 찾을 수 있다.
관련 기술분야의 통상의 기술자에게 미니바디는 2가 동종이량체 scFv 유도체를 의미한다. 이는 이뮤노글로불린, 바람직하게는 IgG, 가장 바람직하게는 IgG1의 CH3 영역을 이량체화 영역으로서 함유하며, 이는 힌지 영역 (예를 들어 또한 IgG1로부터의 것) 및 링커 영역을 통해 scFv에 연결되는 융합 단백질로 이루어진다. 힌지 영역 내의 디술피드 가교는 대부분 고등 세포에서 형성되고 원핵생물에서는 형성되지 않는다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따른 항체 단백질은 CD44v6-특이적 미니바디 항체 단편이다. 선행 기술로부터의 미니바디-항체 단백질의 예는 문헌 [Hu et al. (1996, Cancer Res. 56: 3055-61)]에서 찾을 수 있다.
관련 기술분야의 통상의 기술자에게 트리아바디는 3가 동종삼량체 scFv 유도체를 의미한다 (Kortt et al. 1997 Protein Engineering 10: 423-433). VH-VL이 링커 서열 없이 직접 융합되는 scFv 유도체는 삼량체의 형성을 유도한다.
관련 기술분야의 통상의 기술자는 또한 2가, 3가 또는 4가 구조를 갖고 scFv로부터 유래된 소위 미니안티바디에 친숙할 것이다. 다량체화는 이량체, 삼량체 또는 사량체 코일드 코일 구조에 의해 수행된다 (Pack et al., 1993 Biotechnology II:, 1271-1277; Lovejoy et al. 1993 Science 259: 1288-1293; Pack et al., 1995 J. Mol. Biol. 246: 28-34).
따라서, 한 실시양태에서, 본 발명에 따른 항체 단백질은 상기 언급된 항체 단편에 기초한 CD44v6- 또는 CD44v9-특이적 다량체화 분자이고, 예를 들어 트리아바디, 4가 미니안티바디 또는 펜타바디일 수 있다.
인간화 CD44v6- 또는 CD44v9-특이적 항체 단백질은 관련 기술분야에 공지된 분자 생물학 방법에 의해 생성될 수 있다.
본 발명의 항체 단백질의 가변 영역은 전형적으로 이뮤노글로불린 불변 영역 (Fc)의 적어도 한 부분, 전형적으로 인간 이뮤노글로불린의 것에 연결된다. 인간 불변 영역 DNA 서열은 다양한 인간 세포, 그러나 바람직하게는 불멸화 B 세포로부터 널리 공지된 절차에 따라 단리될 수 있다 (문헌 [Kabat et al. 상기 문헌] 및 WO 87/02671 참조). 따라서, 본 발명의 항체 단백질은 이들이 CD44v6 또는 CD44v9 항원에 대한 특이적 결합을 나타내는 한 불변 영역의 전부 또는 한 부분만을 함유할 수 있다. 불변 영역의 유형 및 정도의 선택은 보체 고정 또는 항체 의존성 세포 독성과 같은 이펙터 기능이 요구되는지 여부 및 항체 단백질의 목적하는 약리학적 특성에 좌우된다. 본 발명의 항체 단백질은 전형적으로 2개의 경쇄/중쇄 쌍으로 이루어진 사량체일 것이지만, 또한 이량체, 즉 1개의 경쇄/중쇄 쌍, 예를 들어 Fab 또는 Fv 단편으로 이루어진 이량체일 수 있다.
따라서, 추가 실시양태에서, 본 발명은 인간 불변 영역에 각각 연결된 가변 경쇄 영역 및 가변 중쇄 영역을 갖는 것을 특징으로 하는, 본 발명에 따른 항체 단백질에 관한 것이다. 특히, 경쇄의 가변 영역을 인간 카파 불변 영역에 연결하고, 중쇄의 가변 영역을 인간 감마-1 불변 영역에 연결하였다. 경쇄 및 중쇄를 키메라화하기 위한 다른 인간 불변 영역도 또한 이용가능하다.
뮤린 항체의 가변 영역의 인간화는 관련 기술분야에 공지된 방법을 사용하여 달성될 수 있다. EP 0239400은 뮤린 가변 영역의 CDR을 인간 가변 영역의 프레임워크 내로 그라프팅하는 것을 개시한다. WO 90/07861은 추가의 프레임워크 변형을 도입함으로써 CDR-그라프팅된 가변 영역을 재성형하는 방법을 개시한다. WO 92/11018은 공여자 CDR을 공여자 프레임워크에 대해 높은 상동성을 갖는 수용자 프레임워크와 조합하는 인간화 Ig를 생산하는 방법을 개시한다. WO 92/05274는 뮤린 항체로부터 시작하는 프레임워크 돌연변이된 항체의 제조를 개시한다. 뮤린 모노클로날 항체의 인간화에 관련된 추가의 선행 기술 참고문헌은 EP 0368684; EP 0438310; WO 92/07075 또는 WO 92/22653이다. 모두 본원에 참조로 포함된다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 상기 경쇄의 가변 영역 및 상기 중쇄 영역의 가변 영역 각각이 인간 불변 영역에 개별적으로 연결된 것을 특징으로 하는, 본 발명에 따른 항체 분자에 관한 것이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 경쇄의 상기 인간 경쇄 불변 영역이 인간 카파 불변 영역인, 본 발명에 따른 항체 분자에 관한 것이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 상기 인간 중쇄 불변 영역이 인간 IgG1 불변 영역인, 본 발명에 따른 항체 단백질에 관한 것이다.
본 발명의 항체 단백질은 치료제를 CD44v6 또는 CD44v9 항원에 표적화하기 위한 고도로 특이적인 도구를 제공한다. 따라서, 추가 측면에서, 본 발명은 항체-약물-접합체 (ADC)에서 임의로 링커를 통해 치료제에 접합된 본 발명에 따른 항체 단백질에 관한 것이다. 관련 기술분야에 공지된 많은 치료제 중에서, 방사성동위원소, 독소, 톡소이드, 염증생성 작용제, 효소, 안티센스 분자, 펩티드, 시토카인 및 화학요법제로 이루어진 군으로부터 선택된 치료제가 바람직하다. 방사성동위원소 중에서, 감마, 베타 및 알파-방출 방사성동위원소가 치료제로서 사용될 수 있다. β-방출 방사성동위원소가 치료 방사성동위원소로서 바람직하다. 186레늄, 188레늄, 131아이오딘 및 90이트륨이 악성 종양 세포의 국재화된 방사선조사 및 파괴를 달성하기 위해 특히 유용한 β-방출 동위원소인 것으로 입증되었다. 따라서, 186레늄, 188레늄, 131아이오딘 및 90이트륨으로 이루어진 군으로부터 선택된 방사성동위원소가 본 발명의 항체 단백질에 접합된 치료제로서 특히 바람직하다. 예를 들어, 본 발명의 항체의 방사성아이오딘화를 위해, WO 93/05804에 개시된 바와 같은 방법이 사용될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "면역접합체", "접합체" 또는 "ADC"는 세포 결합제 (즉, 항-CD44v6 또는 -CD44v9 항체 또는 그의 단편)에 연결되고 일반식: A-L-C (여기서 C = 세포독소, L = 링커 및 A = 세포 결합제 (CBA), 예컨대 항-CD44v6 또는 항-CD44v9 항체 또는 항체 단편)에 의해 정의되는 화합물 또는 그의 유도체를 지칭한다. 면역접합체는 또한 역순으로 일반식: C-L-A에 의해 정의될 수 있다.
"링커"는 화합물, 통상적으로 약물, 예컨대 본원에 기재된 세포독성제를 세포-결합제, 예컨대 항-CD44v6 또는 -CD44v9 항체 또는 그의 단편에 안정한 공유 방식으로 연결할 수 있는 임의의 화학적 모이어티이다. 링커는 화합물 또는 항체가 활성인 상태로 유지되는 조건에서 산-유도된 절단, 광-유도된 절단, 펩티다제-유도된 절단, 에스테라제-유도된 절단 및 디술피드 결합 절단에 대해 감수성이거나 또는 실질적으로 그에 대해 저항성일 수 있다. 적합한 링커는 관련 기술분야에 널리 공지되어 있고, 예를 들어 디술피드 기, 티오에테르 기, 산 불안정성 기, 광불안정성 기, 펩티다제 불안정성 기 및 에스테라제 불안정성 기를 포함한다. 링커는 또한 본원에 기재되고 관련 기술분야에 공지된 바와 같은 하전된 링커 및 그의 친수성 형태를 포함한다.
용어 "암 세포", "종양 세포" 및 문법적 등가물은 대규모의 종양 세포 집단을 포함하는 비-종양발생 세포 및 종양발생 줄기 세포 (암 줄기 세포) 둘 다를 비롯한, 종양 또는 전암성 병변으로부터 유래된 총 세포 집단을 지칭한다. 본원에 사용된 용어 "종양 세포"는 종양 세포를 암 줄기 세포와 구별되게 하는 재생 및 분화 능력이 결여된 종양 세포만을 지칭하는 경우에 "비-종양발생"이라는 용어로 변형될 것이다.
용어 "대상체"는 특정한 치료의 수용자가 되는 인간, 비-인간 영장류, 설치류 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는 임의의 동물 (예를 들어, 포유동물)을 지칭한다. 전형적으로, 용어 "대상체" 및 "환자"는 인간 대상체와 관련하여 본원에서 상호교환가능하게 사용된다.
1종 이상의 추가의 치료제와의 "조합" 투여는 동시 (공동) 투여 및 임의의 순서의 연속 투여를 포함한다.
용어 "제약 제제"는 활성 성분의 생물학적 활성이 효과적이도록 하는 형태로 존재하며 제제를 투여할 대상체에게 허용되는 않는 독성인 추가의 성분을 함유하지 않는 제제를 지칭한다. 이러한 제제는 멸균될 수 있다.
본원에 개시된 바와 같은 항체 또는 면역접합체의 "유효량"은 구체적으로 언급된 목적을 수행하기에 충분한 양이다. "유효량"은 언급된 목적과 관련하여 실험적으로 및 상용 방식으로 결정될 수 있다.
용어 "치료 유효량"은 대상체 또는 포유동물에서 질환 또는 장애의 "치료"에 효과적인 항체 또는 다른 약물의 양을 지칭한다. 암의 경우에, 약물의 치료 유효량은 암 세포 수를 감소시키고/거나; 종양 크기를 감소시키고/거나; 말초 기관 내로의 암 세포 침윤을 억제하고/거나 (즉, 어느 정도 느리게 하고, 특정 실시양태에서는 정지시킴); 종양 전이를 억제하고/거나 (즉, 어느 정도 느리게 하고, 특정 실시양태에서는 정지시킴); 종양 성장을 어느 정도 억제하고/거나; 암과 연관된 증상 중 1종 이상을 어느 정도 경감시키고/거나; 유리한 반응, 예컨대 증가된 무진행 생존 (PFS), 무질환 생존 (DFS) 또는 전체 생존 (OS), 완전 반응 (CR), 부분 반응 (PR), 또는 일부 경우에, 안정 질환 (SD), 진행성 질환 (PD)의 감소, 감소된 진행까지의 시간 (TTP), 또는 그의 임의의 조합을 유발할 수 있다. 본원의 정의 "치료하는"을 참조한다. 약물이 성장을 방지하고/거나 기존 암 세포를 사멸시킬 수 있는 정도로, 이는 세포증식억제성 및/또는 세포독성일 수 있다.
"예방 유효량"은 목적하는 예방 결과를 달성하는데 필요한 투여량에서 필요한 기간 동안 효과적인 양을 지칭한다. 반드시는 아니지만 전형적으로, 예방 용량은 질환의 초기 단계 전 또는 초기 단계에서 대상체에 사용되기 때문에, 예방 유효량은 치료 유효량 미만일 것이다.
"화학요법제"는 작용 메카니즘에 상관없이, 암의 치료에 유용한 화학적 화합물이다. "치료하는" 또는 "치료" 또는 "치료하기 위한" 또는 "완화시키는" 또는 "완화시키기 위한"과 같은 용어는 진단된 병리학적 상태 또는 장애의 증상을 치유하고/거나, 느리게 하고/거나, 경감시키고/거나, 그의 진행을 중지시키는 치료적 조치를 지칭한다. 따라서, 치료를 필요로 하는 자는 이미 장애를 갖는 것으로 진단된 자를 포함하고, 최소의 잔류 질환 또는 내성 질환 또는 재발성 질환을 갖는 자를 또한 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 환자가 하기 중 1개 이상을 나타내는 경우에, 대상체는 본 발명의 방법에 따라 암에 대해 성공적으로 "치료된다": 암 세포의 수 감소 또는 완전한 부재; 종양 크기의 감소; 예를 들어 연부 조직 및 골 내로의 암의 확산을 비롯한 말초 기관 내로의 암 세포 침윤의 억제 또는 부재; 종양 전이의 억제 또는 부재; 종양 성장의 억제 또는 부재; 특정 암과 연관된 1종 이상의 증상의 경감; 감소된 이환율 및 사망률; 삶의 질의 개선; 종양의 종양발생성, 종양발생 빈도 또는 종양발생 능력의 감소; 종양 내 암 줄기 세포의 수 또는 빈도의 감소; 종양발생 세포의 비-종양발생 상태로의 분화; 증가된 무진행 생존 (PFS), 무질환 생존 (DFS) 또는 전체 생존 (OS), 완전 반응 (CR), 부분 반응 (PR), 안정 질환 (SD), 진행성 질환 (PD)의 감소, 감소된 진행까지의 시간 (TTP), 또는 그의 임의의 조합.
"폴리뉴클레오티드" 또는 "핵산"은 본원에서 상호교환가능하게 사용되고, 임의의 길이의 뉴클레오티드의 중합체를 지칭하며, DNA 및 RNA를 포함한다. 뉴클레오티드는 데옥시리보뉴클레오티드, 리보뉴클레오티드, 변형된 뉴클레오티드 또는 염기, 및/또는 그의 유사체, 또는 DNA 또는 RNA 폴리머라제에 의해 중합체 내로 혼입될 수 있는 임의의 기질일 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드, 예컨대 메틸화 뉴클레오티드 및 그의 유사체를 포함할 수 있다. 존재하는 경우, 뉴클레오티드 구조에 대한 변형은 중합체의 조립 전 또는 후에 부여될 수 있다. 뉴클레오티드의 서열에는 비-뉴클레오티드 성분이 개재될 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 중합 후에, 예컨대 표지 성분과의 접합에 의해 추가로 변형될 수 있다. 다른 유형의 변형은, 예를 들어 1개 이상의 자연 발생 뉴클레오티드의 유사체로의 "캡" 치환, 뉴클레오티드간 변형, 예컨대, 예를 들어 비하전된 연결 (예를 들어, 메틸 포스포네이트, 포스포트리에스테르, 포스포아미데이트, 카르바메이트 등) 및 하전된 연결 (예를 들어, 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트 등)을 갖는 것, 펜던트 모이어티, 예컨대, 예를 들어 단백질 (예를 들어, 뉴클레아제, 독소, 항체, 신호 펩티드, 폴리-L-리신 등)을 함유하는 것, 삽입제 (예를 들어, 아크리딘, 프소랄렌 등)를 갖는 것, 킬레이트화제 (예를 들어, 금속, 방사성 금속, 붕소, 산화 금속 등)를 함유하는 것, 알킬화제를 함유하는 것, 변형된 연결 (예를 들어, 알파 아노머 핵산 등)을 갖는 것, 뿐만 아니라 비변형된 형태의 폴리뉴클레오티드(들)를 포함한다. 추가로, 당에 통상적으로 존재하는 임의의 히드록실 기는, 예를 들어 포스포네이트 기, 포스페이트 기에 의해 대체될 수 있거나, 표준 보호 기에 의해 보호될 수 있거나, 추가의 뉴클레오티드에 대한 추가의 연결을 제조하기 위해 활성화될 수 있거나, 또는 고체 지지체에 접합될 수 있다. 5' 및 3' 말단 OH는 인산화될 수 있거나 또는 1 내지 20개 탄소 원자의 유기 캡핑 기 모이어티 또는 아민으로 치환될 수 있다. 다른 히드록실이 또한 표준 보호 기로 유도체화될 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 또한 관련 기술분야에 일반적으로 공지된 리보스 또는 데옥시리보스 당의 유사한 형태, 예를 들어 2'-O-메틸-, 2'-O-알릴, 2'-플루오로- 또는 2'-아지도-리보스, 카르보시클릭 당 유사체, 알파-아노머 당, 에피머 당, 예컨대 아라비노스, 크실로스 또는 릭소스, 피라노스 당, 푸라노스 당, 세도헵툴로스, 비-시클릭 유사체 및 무염기성 뉴클레오시드 유사체, 예컨대 메틸 리보시드를 함유할 수 있다. 1개 이상의 포스포디에스테르 연결은 대안적 연결 기에 의해 대체될 수 있다. 이들 대안적 연결 기는 포스페이트가 P(O)S ("티오에이트"), P(S)S ("디티오에이트"), (O)NR2 ("아미데이트"), P(O)R, P(O)OR*, CO 또는 CH2 ("포름아세탈")에 의해 대체되고, 여기서 각각의 R 또는 R은 독립적으로 H 또는 치환 또는 비치환된 알킬 (1-20 C)이고, 이는 에테르 (-O-) 연결, 아릴, 알케닐, 시클로알킬, 시클로알케닐 또는 아르알킬을 임의로 함유하는 것인 실시양태를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 폴리뉴클레오티드 내의 모든 연결은 동일한 필요는 없다. 상기 기재는 RNA 및 DNA를 포함한, 본원에 언급된 모든 폴리뉴클레오티드에 적용된다.
용어 "벡터"는 숙주 세포 내에 1개 이상의 관심 유전자(들) 또는 서열(들)을 전달하고 발현시킬 수 있는 구축물을 의미한다. 벡터의 예는 바이러스 벡터, 네이키드 DNA 또는 RNA 발현 벡터, 플라스미드, 코스미드 또는 파지 벡터, 양이온성 축합제와 연관된 DNA 또는 RNA 발현 벡터, 리포솜에 캡슐화된 DNA 또는 RNA 발현 벡터, 및 특정 진핵 세포, 예컨대 생산자 세포를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
용어 "폴리펩티드", "펩티드" 및 "단백질"은 임의의 길이의 아미노산의 중합체를 지칭하는 것으로 본원에서 상호교환가능하게 사용된다. 중합체는 선형 또는 분지형일 수 있고, 변형된 아미노산을 포함할 수 있으며, 비-아미노산이 개재될 수 있다. 용어는 또한 자연적으로 또는 개입에 의해; 예를 들어, 디술피드 결합 형성, 글리코실화, 지질화, 아세틸화, 인산화 또는 임의의 다른 조작 또는 변형, 예컨대 표지 성분과의 접합에 의해 변형된 아미노산 중합체를 포괄한다. 또한 상기 정의에는, 예를 들어 1개 이상의 아미노산 유사체 (예를 들어, 비천연 아미노산 등 포함), 뿐만 아니라 관련 기술분야에 공지된 다른 변형을 함유하는 폴리펩티드가 포함된다. 본 발명의 폴리펩티드는 항체를 기반으로 하기 때문에, 특정 실시양태에서, 폴리펩티드가 단일 쇄 또는 회합된 쇄로 발생할 수 있는 것으로 이해된다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드, 펩티드 또는 단백질은 비-자연 발생이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드, 펩티드 또는 단백질은 다른 자연 발생 성분으로부터 정제된다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드, 펩티드 또는 단백질은 재조합적으로 생산된다.
2개 이상의 핵산 또는 폴리펩티드와 관련하여 용어 "동일한" 또는 퍼센트 "동일성"은, 임의의 보존적 아미노산 치환을 서열 동일성의 부분으로 간주하지 않으면서 최대 상응을 위해 (필요한 경우, 갭을 도입하여) 비교 및 정렬하는 경우에, 동일하거나 또는 명시된 백분율의 동일한 뉴클레오티드 또는 아미노산 잔기를 갖는 2개 이상의 서열 또는 하위서열을 지칭한다. 퍼센트 동일성은 서열 비교 소프트웨어 또는 알고리즘을 사용하여 또는 육안 검사에 의해 측정될 수 있다. 아미노산 또는 뉴클레오티드 서열의 정렬을 얻는데 사용될 수 있는 다양한 알고리즘 및 소프트웨어는 관련 기술분야에 공지되어 있다. 서열 정렬 알고리즘의 하나의 이러한 비제한적 예는 문헌 [Karlin et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 87:2264-2268, 1990]에 기재된 알고리즘이며, 이는 문헌 [Karlin et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 90:5873-5877, 1993]에서 변형되고, NBLAST 및 XBLAST 프로그램 내로 혼입된다 (Altschul et al., Nucleic Acids Res. 25:3389-3402, 1991). 특정 실시양태에서, 갭드(Gapped) BLAST가 문헌 [Altschul et al., Nucleic Acids Res. 25:3389-3402, 1997]에 기재된 바와 같이 사용될 수 있으며; BLAST-2, WU-BLAST-2 (Altschul et al., Methods in Enzymology 266:460-480, 1996), ALIGN, ALIGN-2 (제넨테크(Genentech), 캘리포니아주 사우스 샌프란시스코) 또는 메그얼라인(Megalign) (DNASTAR)은 서열을 정렬하는데 사용될 수 있는 추가의 공개적으로 이용가능한 소프트웨어 프로그램이다. 특정 실시양태에서, 2개의 뉴클레오티드 서열 사이의 퍼센트 동일성은 GCG 소프트웨어의 GAP 프로그램을 사용하여 결정된다 (예를 들어, NWSgapdna.CMP 매트릭스 및 갭 가중치 40, 50, 60, 70 또는 90 및 길이 가중치 1, 2, 3, 4, 5 또는 6을 사용함). 특정의 대안적 실시양태에서, 문헌 [Needleman and Wunsch (J. Mol. Biol. (48):444-453, 1970)]의 알고리즘을 포함하는 GCG 소프트웨어 패키지의 GAP 프로그램을 사용하여 2개의 아미노산 서열 사이의 퍼센트 동일성을 결정할 수 있다 (예를 들어, 블로섬(Blossum) 62 매트릭스 또는 PAM250 매트릭스 및 갭 가중치 16, 14, 12, 10, 8, 6 또는 4 및 길이 가중치 1, 2, 3, 4, 5를 사용함). 대안적으로, 특정 실시양태에서, 뉴클레오티드 또는 아미노산 서열 사이의 퍼센트 동일성은 문헌 [Myers and Miller (CABIOS, 4:11-17, 1989)]의 알고리즘을 사용하여 결정된다. 예를 들어, 퍼센트 동일성은 ALIGN 프로그램 (버전 2.0)을 사용하여 및 잔기 표, 갭 길이 페널티 12 및 갭 페널티 4를 갖는 PAM120을 사용하여 결정될 수 있다. 특정한 정렬 소프트웨어에 의한 최대 정렬에 대한 적절한 파라미터는 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 결정될 수 있다. 특정 실시양태에서, 정렬 소프트웨어의 디폴트 파라미터가 사용된다. 특정 실시양태에서, 제2 아미노산 서열에 대한 제1 아미노산 서열의 백분율 동일성 "X"는 100 x (Y/Z)로 계산되며, 여기서 Y는 제1 및 제2 서열의 정렬 (육안 검사 또는 특정한 서열 정렬 프로그램에 의해 정렬됨)에서 동일한 매치로 스코어링된 아미노산 잔기의 수이고, Z는 제2 서열에서의 잔기의 총 수이다. 제1 서열의 길이가 제2 서열보다 길다면, 제2 서열에 대한 제1 서열의 퍼센트 동일성은 제1 서열에 대한 제2 서열의 퍼센트 동일성보다 더 길 것이다.
비제한적 예로서, 임의의 특정한 폴리뉴클레오티드가 참조 서열에 대해 특정 백분율 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 80%의 동일성, 적어도 85%의 동일성, 적어도 90%의 동일성, 및 일부 실시양태에서, 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 동일성)을 갖는지 여부는, 특정 실시양태에서 베스트핏(Bestfit) 프로그램 (위스콘신 서열 분석 패키지, 유닉스(Unix)용 버전 8, 제네틱스 컴퓨터 그룹(Genetics Computer Group), 53711 위스콘신주 매디슨 사이언스 드라이브 575 유니버시티 리서치 파크)을 사용하여 결정될 수 있다. 베스트핏은 문헌 [Smith and Waterman, Advances in Applied Mathematics 2: 482-489, 1981]의 국부 상동성 알고리즘을 사용하여 두 서열 사이의 최고의 상동성 세그먼트를 찾는다. 특정한 서열이, 예를 들어 본 발명에 따른 참조 서열에 대해 95% 동일한지 여부를 결정하기 위해 베스트핏 또는 임의의 다른 서열 정렬 프로그램을 사용하는 경우에, 동일성 백분율이 참조 뉴클레오티드 서열의 전장에 걸쳐 계산되고 참조 서열 내 뉴클레오티드의 총 수의 5% 이하의 상동성 차이가 허용되도록 파라미터가 설정된다.
일부 실시양태에서, 2개의 본 발명의 핵산 또는 폴리펩티드가 실질적으로 동일하다는 것은, 최대 상응을 위해 비교 및 정렬하는 경우에, 서열 비교 알고리즘을 사용하거나 또는 육안 검사에 의한 측정시, 이들이 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 일부 실시양태에서는 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99%의 뉴클레오티드 또는 아미노산 잔기 동일성을 갖는다는 것을 의미한다. 특정 실시양태에서, 동일성은 적어도 약 10, 약 20, 약 40-60개 잔기 길이 또는 그 사이의 임의의 정수 값인 서열 영역에 걸쳐, 또는 60-80개 잔기 보다 더 긴 영역, 적어도 약 90-100개 잔기에 걸쳐 존재하거나, 또는 서열은 예를 들어 뉴클레오티드 서열의 코딩 영역과 같은 비교하는 서열의 전체 길이에 걸쳐 실질적으로 동일하다.
"보존적 아미노산 치환"은 하나의 아미노산 잔기가 유사한 측쇄를 갖는 또 다른 아미노산 잔기로 대체된 것이다. 염기성 측쇄 (예를 들어, 리신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄 (예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산), 비하전된 극성 측쇄 (예를 들어, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인), 비극성 측쇄 (예를 들어, 글리신, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판), 베타-분지형 측쇄 (예를 들어, 트레오닌, 발린, 이소류신) 및 방향족 측쇄 (예를 들어, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)를 포함한, 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 패밀리가 관련 기술분야에서 정의되었다. 예를 들어, 티로신을 페닐알라닌으로 치환하는 것은 보존적 치환이다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 폴리펩티드 및 항체의 서열 내의 보존적 치환은 이러한 아미노산 서열을 함유하는 폴리펩티드 또는 항체가 항원(들), 즉 폴리펩티드 또는 항체가 결합하는 CD123/IL-3Rα에 결합하는 것을 제거하지 않는다. 항원-결합을 제거하지 않는 뉴클레오티드 및 아미노산 보존적 치환을 확인하는 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다 (예를 들어, 문헌 [Brummell et al., Biochem. 32:1180-1187, 1993; Kobayashi et al., Protein Eng. 12(10):879-884, 1999; 및 Burks et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:412-417, 1997] 참조).
본 발명의 또 다른 측면은 치료제에 연결된 본 발명에 따른 항체 단백질을 제공하며, 여기서 상기 치료제는 방사성동위원소, 독소, 톡소이드, 전구약물 및 화학요법제로 이루어진 군으로부터 선택된 치료제이다.
특정 실시양태에서, 치료제는 항체 단백질에, MAG-3 (미국 특허 번호 5,082,930 A, EP 0247866 B1 (페이지 2 라인 55-56-페이지 3 라인 1-23)); MAG-2 GABA (미국 특허 번호 5,681,927 A, EP 0284071 B1 (페이지 6 라인 9-29)); 및 N2S2 ((=펜티오에이트) 미국 특허 번호 4,897,255 A, 5,242,679 A, EP 0188256 B1 (페이지 2, 라인 38-페이지 3, 라인 18)), (Ac)Phe-Lys(Alloc)-PABC-PNP, 6-말레이미도헥산산 N-히드록시숙신이미드 에스테르, 6-퀴녹살린카르복실산, 2,3-비스(브로모메틸)-Fmoc-Val-Cit-PAB, Fmoc-Val-Cit-PAB-PNP, Mc-Val-Cit-PABC-PNP, Val-cit-PAB-OH (모두 본원에 참조로 포함됨)의 군으로부터 선택된 링커를 통해 연결된다.
특정 실시양태에서, 방사성동위원소는 186레늄, 188레늄, 131아이오딘 및 90이트륨으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 본 발명에 따른 항체 단백질은 표지된다. 이러한 CD44v6- 또는 CD44v9-특이적 표지된 항체는 시험관내 및/또는 생체내에서 CD44v6 / CD44v9 항원의 국재화 및/또는 검출을 가능하게 한다.
표지는 직접적으로 또는 간접적으로 검출가능할 수 있는 마커로서 정의된다. 간접 마커는 그 자체로 검출될 수 없지만 간접 마커에 특이적인 추가의 직접적으로 검출가능한 마커를 필요로 하는 마커로서 정의된다. 본 발명을 실시하기 위한 바람직한 표지는 검출가능한 마커이다. 매우 다양한 검출가능한 마커로부터, 검출가능한 마커는 효소, 염료, 방사성동위원소, 디곡시게닌 및 비오틴으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
특정 실시양태에서, 표지는 검출가능한 마커, 예컨대 효소, 염료, 방사성동위원소, 디곡시게닌 및 비오틴으로 이루어진 군으로부터 선택된 것이다.
특정 실시양태에서, 본 발명에 따른 항체 단백질은 영상화가능한 작용제에 접합된다. 매우 다양한 영상화가능한 작용제, 특히 방사성동위원소는 최신 기술로부터 이용가능하다. 특정 실시양태에서, 영상화가능한 작용제는 감마-방출 동위원소, 예컨대 125아이오딘이다. 특정 실시양태에서, 항체 단백질은 약 0.5 내지 약 15 mCi/mg, 또는 약 0.5 내지 약 14 mCi/mg, 또는 약 1 내지 약 10 mCi/mg, 또는 약 1 내지 약 5 mCi/mg, 및 약 2 내지 6 mCi/mg 또는 1 내지 3 mCi/mg의 비활성을 갖는다.
3. 조성물 및 제약 조성물
본 발명은 본원에 기재된 대상 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 그의 면역-접합체 및 담체 (예를 들어, 제약상 허용되는 담체)를 포함하는 조성물 (예를 들어, 제약 조성물)을 포함한다. 본 발명은 또한 대상 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 그의 접합체 및 담체 (제약상 허용되는 담체)를 포함하고, 제2 치료제를 추가로 포함하는 조성물 (예를 들어, 제약 조성물)을 포함한다. 본 발명의 조성물은 혈액암, 백혈병 또는 림프종을 포함한, 포유동물 (예를 들어, 인간)에서의 비정상적 세포 성장을 억제하거나 증식성 장애를 치료하는데 유용하다.
특히, 본 발명은 본원에 기재된 CD44v6 또는 CD44v9-결합제 또는 그의 면역-접합체 중 1종 이상을 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 특정 실시양태에서, 제약 조성물은 제약상 허용되는 비히클을 추가로 포함한다. 이들 제약 조성물은 혈액암, 백혈병 또는 림프종을 포함한, 인간 환자에서의 종양 성장을 억제하고 암을 치료하는데 사용된다.
특정 실시양태에서, 제제는 본 발명의 정제된 항체 또는 그의 면역-접합체를 제약상 허용되는 비히클 (예를 들어 담체, 부형제)과 조합함으로써 저장 및 사용을 위해 제조된다 (Remington, The Science and Practice of Pharmacy 20th Edition Mack Publishing, 2000). 적합한 제약상 허용되는 비히클은 비독성 완충제, 예컨대 포스페이트, 시트레이트 및 다른 유기 산; 염, 예컨대 염화나트륨; 항산화제, 예컨대 아스코르브산 및 메티오닌; 보존제 (예를 들어, 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드; 벤제토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알콜; 알킬 파라벤, 예컨대 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 시클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자량 폴리펩티드 (예를 들어, 약 10개 미만의 아미노산 잔기); 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴 또는 이뮤노글로불린; 친수성 중합체, 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 리신; 탄수화물, 예컨대 모노사카라이드, 디사카라이드, 글루코스, 만노스 또는 덱스트린; 킬레이트화제, 예컨대 EDTA; 당, 예컨대 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨; 염-형성 반대-이온, 예컨대 나트륨; 금속 착물 (예를 들어, Zn-단백질 착물); 및 비-이온성 계면활성제, 예컨대 트윈(TWEEN) 또는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
제약상 허용되는 담체는, 예를 들어 AMPA 글루타메이트 수용체 효능제, 길항제 또는 조정제의 흡수를 안정화시키거나 증가시키는 작용을 하는 생리학상 허용되는 화합물을 함유할 수 있다. 이러한 생리학상 허용되는 화합물은, 예를 들어 탄수화물, 예컨대 글루코스, 수크로스 또는 덱스트란, 항산화제, 예컨대 아스코르브산 또는 글루타티온, 킬레이트화제, 저분자량 단백질 또는 다른 안정화제 또는 부형제를 포함한다 (또한, 예를 들어 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences (1990), 18th ed. Mack Publ., Easton] 참조). 관련 기술분야의 통상의 기술자는 생리학상 허용되는 화합물을 포함한 제약상 허용되는 담체의 선택이, 예를 들어 조성물의 투여 경로에 좌우된다는 것을 알 것이다.
적합한 제약상 허용되는 담체, 희석제 및 부형제는 일반적으로 널리 공지되어 있고, 임상 상황에 따라 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 결정될 수 있다. 적합한 담체, 희석제 및/또는 부형제의 예는 (1) 약 1 mg/mL 내지 25 mg/mL 인간 혈청 알부민을 함유하거나 또는 함유하지 않는 둘베코 포스페이트 완충 염수, pH 약 7.4, (2) 0.9% 염수 (0.9% w/v NaCl), 및 (3) 5% (w/v) 덱스트로스를 포함하고; 또한 항산화제, 예컨대 트립타민 및 안정화제, 예컨대 트윈 20을 함유할 수 있다.
본원에 기재된 제약 조성물은 국부 또는 전신 치료를 위한 임의의 수의 방식으로 투여될 수 있다. 투여는 국소 (예컨대 질 및 직장 전달을 포함한 점막으로), 예컨대 경피 패치, 연고, 로션, 크림, 겔, 점적제, 좌제, 스프레이, 액체 및 분말; 폐 (예를 들어, 네뷸라이저에 의한 것을 포함한, 분말 또는 에어로졸의 흡입 또는 취입에 의해; 기관내, 비강내, 표피 및 경피); 경구; 또는 정맥내, 동맥내, 피하, 복강내 또는 근육내 주사 또는 주입을 포함한 비경구; 또는 두개내 (예를 들어, 척수강내 또는 뇌실내) 투여일 수 있다. 일부 특정 실시양태에서, 투여는 정맥내 투여이다. 본원에 기재된 제약 조성물은 또한 시험관내 또는 생체외에서 사용될 수 있다.
동물 또는 인간 신체에서, 상기 기재된 바와 같은 제약 조성물을 정맥내 또는 다른 경로를 통해, 예를 들어 전신으로, 국부로 또는 국소로 관심 조직 또는 기관에, 치료되는 질환 또는 문제, 예를 들어 종양의 유형 및 기원에 따라 적용하는 것이 유리한 것으로 입증될 수 있다. 예를 들어, 전신 작용 방식은 상이한 기관 또는 기관계가 치료를 필요로 하는 경우, 예를 들어 전신 자가면역 질환, 또는 알레르기, 또는 외래 기관 또는 조직의 이식, 또는 미만성이거나 국재화하기 어려운 종양에서 요구된다. 국부 작용 방식은, 예를 들어 국부 종양과 같이 신생물성 또는 면역학적 작용의 국부 징후만이 예상되는 경우에 고려될 것이다.
본 발명의 항체 단백질을 포함하는 제약 조성물은 전문가에게 공지된 상이한 적용 경로, 특히 정맥내 주사 또는 표적 조직 내로의 직접 주사에 의해 적용될 수 있다. 전신 적용을 위해, 정맥내, 혈관내, 근육내, 동맥내, 복강내, 경구 또는 척수강내 경로가 바람직하다. 보다 많은 국부 적용은 피하로, 피내로, 심장내로, 폐엽내로, 수질내로, 폐내로 또는 치료될 조직 (결합-, 뼈-, 근육-, 신경-, 상피 조직) 내에 또는 그 근처에 직접적으로 수행될 수 있다. 목적하는 치료 지속기간 및 유효성에 따라, 제약 항체 조성물은 1회 또는 수회, 또한 간헐적으로, 예를 들어 수일, 수주 또는 수개월 동안 매일 기준으로 및 상이한 투여량으로 투여될 수 있다.
상기 기재된 적용을 위한 항체 제제를 포함하는 적합한 제약 조성물을 제조하기 위해, 공지된 주사가능한 생리학상 허용되는 멸균 용액을 사용할 수 있다. 비경구 주사 또는 주입을 위한 즉시 사용 용액을 제조하기 위해, 수성 등장성 용액, 예컨대, 예를 들어 염수 또는 상응하는 혈장 단백질 용액이 용이하게 이용가능하다. 제약 조성물은 동결건조물 또는 건조 제제로서 제공될 수 있고, 이는, 예를 들어 부분들의 키트로서, 멸균 조건 하에 사용 직전 공지된 주사가능한 용액으로 재구성될 수 있다. 본 발명의 항체 조성물의 최종 제제는 본 발명에 따른 정제된 항체를 멸균 생리학상 허용되는 용액과 혼합함으로써 주사, 주입 또는 관류용으로 제조되며, 이는 공지된 담체 물질 또는/및 첨가제 (예를 들어 혈청 알부민, 덱스트로스, 중아황산나트륨, EDTA)로 보충될 수 있다.
적용되는 항체의 양은 질환의 성질에 좌우된다. 암 환자에서, 본 발명에 따른 제약 조성물에 포함된 "네이키드" 항체의 적용 용량은 적용당 0.1 내지 100 mg/m2, 5 내지 50 mg/m2, 10 mg/m2 내지 약 40 mg/m2, 10 mg/m2 내지 약 30 mg/m2, 또한 20 mg/m2 내지 약 30 mg/2, 및 약 25 mg/m2 체표면적일 수 있다. 또한, 약 50 mg/m2 체표면적의 항체 단백질 용량이 사용될 수 있다.
투여당 환자에게 적용되는 방사능의 용량은 효과적이기에 충분히 높아야 하지만, 용량 제한 독성 (DLT) 미만이어야 한다. 예를 들어 186레늄으로 방사성표지된 항체를 포함하는 제약 조성물의 경우, 치료 환경에서 초과되지 않아야 하는 최대 허용 용량 (MTD)이 결정되어야 한다. 이어서 암 환자에 대한 방사성표지된 항체의 적용은 MTD 미만인 용량의 반복 (매월 또는 매주) 정맥내 주입에 의해 수행될 수 있다 (예를 들어 문헌 [Welt et al. (1994) J. Clin. Oncol. 12: 1193-1203] 참조). 다중 투여는 일반적으로 매주 간격으로의 투여가 바람직하지만; 그러나, 방사성표지된 물질은 보다 긴 간격으로, 즉 4-24주 간격, 바람직하게는 12-20주 간격으로 투여되어야 한다. 그러나, 통상의 기술자는 투여를 2회 이상의 적용으로 분할하는 것을 선택할 수 있으며, 이는 서로 직후에 또는 예를 들어 1일 내지 1주 범위의 일부 다른 미리 결정된 간격으로 적용될 수 있다.
또한, 적용된 방사능 용량은 하기 약술된 가이드라인에 따를 것이다. 일반적으로, 투여당 방사능 용량은 30 내지 75 mCi/m2/체표면적 (BSA)일 것이다. 따라서, 환자에게 적용될 본 발명에 따른 제약 조성물 중, 186레늄, 188레늄, 99m테크네튬, 133아이오딘 또는 90이트륨으로 표지된, 바람직하게는 186레늄으로 표지된 방사성표지된 항체의 양은 10, 20, 30, 40, 50 또는 60 mCi/m2, 바람직하게는 50 mCi/m2이다. 한 실시양태에서, 본 발명은 본 발명에 따른 상기 방사성표지된 항체의 용량이 MTD 50 mCi/m2인 제약 조성물에 관한 것이다.
특정 실시양태에서, 본 발명에 따른 제약 조성물은 아스코르브산, 겐티스산, 리덕트산, 에리소르브산, p-아미노벤조산, 4-히드록시벤조산, 니코틴산, 니코틴아미드, 2,5-디히드록시-1,4-벤젠디술폰산, 포비돈, 이노시톨 및/또는 시트레이트의 군으로부터 선택된 1종 이상의 방사성보호제를 추가로 포함한다. 특정 실시양태에서, 방사성보호제는 아스코르브산이다.
본 발명의 항체 또는 면역접합체는 제약 조합 제제 또는 조합 요법으로서의 투여 요법에서 제2 화합물, 예컨대 관심 질환 또는 장애를 치료하는데 효과적인 것으로 공지된 것과 조합될 수 있다. 일부 실시양태에서, 제2 화합물은 항암제이다. 일부 실시양태에서, 방법은 면역접합체 단독의 투여와 비교하여 보다 우수한 효능을 생성하는 제2 화합물과 본 발명의 면역접합체의 투여를 포괄한다. 제2 화합물은, 예를 들어 국소, 폐, 경구, 비경구 또는 두개내 투여를 포함한 임의의 수의 방식을 통해 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 투여는 경구 투여이다. 일부 실시양태에서, 투여는 정맥내 투여이다. 일부 실시양태에서, 투여는 경구 및 정맥내 투여 둘 다이다.
항체 또는 면역접합체는 또한 제약 조합 제제 또는 조합 요법으로서의 투여 요법에서 진통제 또는 다른 의약과 조합될 수 있다.
항체 또는 면역접합체는 제약 조합 제제 또는 조합 요법으로서의 투여 요법에서 항암 특성을 갖는 제2 화합물과 조합될 수 있다. 제약 조합 제제 또는 투여 요법의 제2 화합물은 조합의 ADC에 대해, 이들이 서로 불리한 영향을 미치지 않도록 하는 상보적 활성을 가질 수 있다. CD44v6- 또는 CD44v9-결합제 및 제2 항암제를 포함하는 제약 조성물이 또한 제공된다.
특정 실시양태에서, 치료 유효량의 대상 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 본원에 기재된 면역-접합체 또는 그의 조성물은, 단독으로 또는 제2 치료제와 조합되어, 정상 조혈 줄기 세포 (HSC)보다 백혈병성 줄기 세포 (LSC), 백혈병 전구세포 (LP) 및/또는 백혈병성 모세포의 증식을 우선적으로 억제한다. 특정 실시양태에서, 백혈병성 줄기 세포 (LSC), 백혈병 전구세포 (LP) 및/또는 백혈병성 모세포의 증식을 억제하는 상기 대상 작용제의 IC50값 또는 반수 최대 농도는, 정상 조혈 줄기 세포 (HSC)에 대한 것보다 적어도 10-, 20-, 30-, 40-, 50-, 60-, 70-, 80-, 90-, 100-, 150-, 300-, 500-배 또는 그 초과 배수 더 낮다.
4. 치료 방법
본 발명은 포유동물 (예를 들어, 인간)에게 치료 유효량의 대상 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 본원에 기재된 면역-접합체 또는 그의 조성물을 단독으로 또는 제2 치료제와 조합하여 투여하는 것을 포함하는, 상기 포유동물에서 비정상적 세포 성장을 억제하거나 또는 증식성 장애를 치료하는 방법을 포함한다.
본 발명의 또 다른 측면은 암 치료용 의약의 제조에서의 본 발명에 따른 항체 단백질의 용도이다. 본 발명의 또 다른 측면은 암의 치료를 위한 상기 기재된 바와 같은 치료제에 접합된 본 발명에 따른 항체 단백질의 용도에 관한 것이다. 암은 악성 성장과 연관된 임의의 질환, 예컨대 고형 종양, 육종 및 백혈병을 포함한다. 이러한 질환에 대한 필요한 전제조건은 CD44v6 또는 CD44v9의 발현이다.
본 발명은 또한 표적 세포 또는 표적 세포를 함유하는 조직을 유효량의 대상 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 본 발명의 면역-접합체와 접촉시키는 것을 포함하는, 선택된 세포 집단에서 세포 사멸을 유도하는 방법을 제공한다. 표적 세포는 접합체의 세포-결합제가 결합할 수 있는 세포이다.
선택된 세포 집단에서 세포 사멸을 유도하고/거나, 세포 성장을 억제하고/거나, 암을 치료하기 위한 본 발명의 방법은 시험관내, 생체내 또는 생체외에서 실시될 수 있다. 임상 생체내 사용을 위해, 본 발명의 세포독성 화합물 또는 접합체는 용액 또는 동결건조 분말로서 공급될 것이며, 멸균성 및 내독소 수준에 대해 시험된다.
특정 실시양태에서, 포유동물에서의 비정상적 세포 성장 또는 증식성 장애는 CD44v6 또는 CD44v9의 발현과 연관되거나 이를 특징으로 하는 질환 또는 상태, 예컨대 암이다.
예를 들어, 암은 유방, 폐, 간, 결장직장, 두경부, 식도, 췌장, 난소, 방광, 위, 피부, 자궁내막, 난소, 고환, 식도, 전립선 및 신장 기원을 포함한 상피 암종; 골육종, 연골육종, 섬유육종, 악성 섬유성 조직구종 (MFH) 및 평활근육종을 포함한 골 및 연부-조직 육종; 림프종 및 백혈병을 포함한 조혈 악성종양; 말초 신경 종양, 성상세포종 및 흑색종을 포함한 신경외배엽 종양, 및 중피종으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
본 발명에 따른 암은 또한 1) 유방, 폐, 간, 결장직장, 두경부, 식도, 췌장, 난소, 방광, 위, 피부, 자궁내막, 난소, 고환, 식도, 전립선 및 신장 기원을 포함한 상피 암종; 2) 골 및 연부-조직 육종: 골육종, 연골육종, 섬유육종, 악성 섬유성 조직구종 (MFH), 평활근육종; 3) 조혈 악성종양: 호지킨 및 비-호지킨 림프종, 백혈병; 4) 신경외배엽 종양: 말초 신경 종양, 성상세포종, 흑색종; 5) 중피종을 포함할 수 있으나 이에 제한되지는 않는다.
고형 종양과 연관된 암성 질환 상태의 예는 결장직장암, 비소세포 폐암, 유방암, 두경부암, 난소암, 폐암, 방광암, 췌장암 및 뇌의 전이성 암을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
특정 실시양태에서, 암은 적어도 1종의 음성 예후 인자를 갖는다.
본 발명의 또 다른 측면은 암 치료용 의약의 제조에서의 상기 정의된 바와 같은 본 발명에 따른 항체 단백질의 용도에 관한 것이며, 여기서 적용당 항체 단백질의 양은 0.1 내지 100 mg/m2, 5 내지 50 mg/m2, 10 mg/m2 내지 약 40 mg/m2, 10 mg/m2 내지 약 30 mg/m2, 또는 20 mg/m2 내지 약 30 mg/m2, 또는 약 25 mg/m2 체표면적, 또는 약 50 mg/m2 체표면적이다.
특정 실시양태에서, 상기 정의된 바와 같은 본 발명에 따른 방사성동위원소에 접합된 항체 단백질이 암 치료용 의약의 제조에 사용되며, 여기서 투여당 방사능 용량은 30 내지 75 mCi/m2 체표면적 (BSA)이다. 특정 실시양태에서, 본 발명에 따른 항체 단백질은 186레늄, 188레늄, 99m테크네튬, 131아이오딘 또는 90이트륨, 예컨대 186레늄으로 방사성표지된다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명은 암 치료용 의약의 제조에서의 상기 정의된 바와 같은 본 발명에 따른 방사성동위원소에 접합된 항체 단백질의 용도에 관한 것이며, 여기서 항체 용량은 10, 20, 30, 40, 50 또는 60 mCi/m2, 또는 50 mCi/m2이다.
특정 실시양태에서, 상기 정의된 바와 같은 본 발명에 따른 방사성동위원소에 접합된 항체 단백질이 암 치료용 의약의 제조에 사용되며, 여기서 항체 단백질은 약 0.5 내지 약 15 mCi/mg, 또는 약 0.5 내지 약 14 mCi/mg, 바람직하게는 약 1 내지 약 10 mCi/mg, 바람직하게는 약 1 내지 약 5 mCi/mg, 및 가장 바람직하게는 2 내지 6 mCi/mg 또는 1 내지 3 mCi/mg의 비활성을 갖는다.
또한, 암 치료용 의약의 제조에서의 상기 정의된 바와 같은 본 발명에 따른 방사성동위원소에 접합된 항체 단백질의 용도이며, 여기서 상기 항체 또는 항체 유도체는 약 7 내지 약 8의 pH 및 약 0.5 내지 약 2.0 mg/ml의 농도의 수용액으로 존재하는 것이 바람직하다.
본 발명은 추가로 암 치료를 필요로 하는 개체에게 본 발명에 따른 항체 단백질을 1회 내지 수회 투여하여, 상기 항체 단백질이 CD44v6 또는 CD44v9에 선택적으로 결합하고, 항체 단백질에 연결된 치료제를 통해 종양 세포를 파괴하고, 치료적 성공을 모니터링하는 암 치료 방법에 관한 것이다. 상기 항체 단백질은 네이키드/비변형된 항체 단백질, 변형된 항체 단백질, 예컨대 예를 들어 융합 단백질 또는 치료제에 접합된 항체 단백질로서 존재할 수 있으며, 종양을 유효량의 상기 항체와 접촉시키는 것을 포함한다. 상기 기재된 바와 같은 종양의 치료 방법은 시험관내 또는 생체내에서 효과적일 수 있다. 암은 상기 기재된 바와 같은 임의의 암이다.
암 요법 및 그의 투여량, 투여 경로 및 권장 용법은 관련 기술분야에 공지되어 있고, [Physician's Desk Reference (PDR)]과 같은 문헌에 기재되었다. PDR은 다양한 암의 치료에 사용된 작용제의 투여량을 개시한다. 치료상 유효한 이들 상기 언급된 화학요법 약물의 투여 요법 및 투여량은 치료될 특정한 암, 질환의 정도 및 관련 기술분야의 의사에게 친숙한 다른 인자에 좌우될 것이고, 의사에 의해 결정될 수 있다. PDR의 내용은 그 전문이 본원에 참조로 명백히 포함된다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 본 발명의 교시에 따라 사용될 수 있는 화학요법제 및 접합체의 투여 요법 및 투여량을 결정하기 위해 하기 파라미터 중 1개 이상을 사용하여 PDR을 검토할 수 있다. 이들 파라미터는 다음을 포함한다: 포괄적 지수; 제조업체; 제품 (회사명 또는 약물 상표명); 카테고리 지수; 일반/화학 지수 (비-상표 일반 약물 명칭); 의약의 색 영상; FDA 표지와 일치하는 제품 정보; 화학 정보; 기능/작용; 적응증 & 금기; 시험 연구, 부작용, 경고.
적용되는 항체의 양은 질환의 성질에 좌우된다. 암 환자에서, "네이키드" 항체의 적용 용량은 적용당 0.1 내지 100 mg/m2, 5 내지 50 mg/m2, 10 mg/m2 내지 약 40 mg/m2, 10 mg/m2 내지 약 30 mg/m, 또한 20 mg/m2 내지 약 30 mg/m2, 및 약 25 mg/m2 체표면적, 또는 약 50 mg/m2 체표면적일 수 있다.
투여당 환자에게 적용되는 방사능의 용량은 효과적이기에 충분히 높아야 하지만, 용량 제한 독성 (DLT) 미만이어야 한다. 예를 들어 186레늄으로 방사성표지된 항체의 경우, 치료 환경에서 초과되지 않아야 하는 최대 허용 용량 (MTD)이 결정되어야 한다. 이어서 암 환자에 대한 방사성표지된 항체의 적용은 MTD 미만인 용량의 반복 (매월 또는 매주) 정맥내 주입에 의해 수행될 수 있다 (예를 들어 문헌 [Welt et al. (1994) J. Clin. Oncol. 12: 1193-1203] 참조). 다중 투여는 일반적으로 매주 간격으로의 투여가 바람직하지만; 그러나, 방사성표지된 물질은 보다 긴 간격으로, 즉 4-24주 간격 또는 12-20주 간격으로 투여되어야 한다. 그러나, 통상의 기술자는 투여를 2회 이상의 적용으로 분할하는 것을 선택할 수 있으며, 이는 서로 직후에 또는 예를 들어 1일 내지 1주 범위의 일부 다른 미리 결정된 간격으로 적용될 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 암 치료 방법 (상기 참조)이 제공되며, 여기서 상기 정의된 바와 같은 본 발명에 따른 방사성동위원소에 접합된 항체 단백질은 약 0.5 내지 약 15 mCi/mg, 또는 약 0.5 내지 약 14 mCi/mg, 바람직하게는 약 1 내지 약 10 mCi/mg, 바람직하게는 약 1 내지 약 5 mCi/mg, 및 가장 바람직하게는 2 내지 6 mCi/mg 또는 1 내지 3 mCi/mg의 비활성을 갖는다.
또한, 본 발명에 따른 암 치료 방법 (상기 참조)이 제공되며, 여기서 상기 정의된 바와 같은 본 발명에 따른 방사성동위원소에 접합된 항체 단백질은 약 7 내지 약 8의 pH 및 약 0.5 내지 약 2.0 mg/ml의 농도의 수용액으로 존재한다.
특정 실시양태에서, 암은 결장직장암, 비소세포 폐암, 유방암, 두경부암, 난소암, 폐암, 방광암, 췌장암 또는 뇌의 전이성 암이다.
본 발명의 방법은 또한 세포, 예컨대 암 세포를 사멸시키는 시험관내 방법을 제공한다. 시험관내 사용의 예는, 이환 또는 악성 세포를 사멸시키기 위한 동일한 환자 내로의 이식 전 자가 골수의 처리; 적격 T 세포를 사멸시키고 이식편-대-숙주 질환 (GVHD)을 예방하기 위한 이식 전 골수의 처리; 표적 항원을 발현하지 않는 목적하는 변이체를 제외한 모든 세포를 사멸시키기 위한 또는 목적하지 않는 항원을 발현하는 변이체를 사멸시키기 위한 세포 배양물의 처리를 포함한다.
비-임상 시험관내 사용의 조건은 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 용이하게 결정된다.
임상 생체외 사용의 예는, 암 치료 또는 자가면역 질환의 치료에서 자가 이식 전 골수로부터 종양 세포 또는 림프성 세포를 제거하거나, 또는 GVHD를 예방하기 위해 이식 전 자가 또는 동종 골수 또는 조직으로부터 T 세포 및 다른 림프성 세포를 제거하는 것이다. 처리는 하기와 같이 수행될 수 있다. 골수를 환자 또는 다른 개체로부터 수거한 다음, 약 10 μM 내지 1 pM 범위의 농도로 본 발명의 세포독성제가 첨가된 혈청 함유 배지에서 약 37℃에서 약 30분 내지 약 48시간 동안 인큐베이션한다. 농도 및 인큐베이션 시간의 정확한 조건, 즉 용량은 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 용이하게 결정된다. 인큐베이션 후, 골수 세포를 혈청 함유 배지로 세척하고, 공지된 방법에 따라 환자에게 정맥내로 다시 투여한다. 환자가 골수의 수거 시점과 처리된 세포의 재관류 사이에 다른 치료, 예컨대 절제 화학요법 또는 전신 방사선조사 과정을 받는 상황에서, 처리된 골수 세포는 표준 의료 장비를 사용하여 액체 질소 중에 동결 저장된다.
5. 핵산
본 발명의 추가 측면은 본 발명에 따른 항체 또는 단백질을 코딩하는 것을 특징으로 하는 핵산이다. 상기 핵산은 RNA 또는 바람직하게는 DNA일 수 있다. 상기 DNA 분자는 화학적으로 합성될 수 있다. 먼저, 적합한 올리고뉴클레오티드를 관련 기술분야에 공지된 방법에 의해 합성할 수 있고 (예를 들어 문헌 [Gait, M. J., 1984, Oligonucleotide Synthesis. A Practical Approach. IRL Press, Oxford, UK]), 이를 사용하여 합성 유전자를 생산할 수 있다. 합성 유전자를 생성하는 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있다 (예를 들어 문헌 [Stemmer et al. 1995, Single-step assembly of a gene and entire plasmid from large numbers of oligodeoxyribonucleotides, Gene 164(1): 49-53; Ye et al. 1992, Gene synthesis and expression in E. coli for pump, a human matrix metalloproteinase, Biochem Biophys Res Commun 186(1):143-9; Hayden et Mandecki 1988, Gene synthesis by serial cloning of oligonucleotides, DNA 7(8): 571-7]). 이들 방법을 사용하여 본 출원에 개시된 임의의 DNA 분자를 합성할 수 있다.
본 발명에 따른 핵산은 5' 또는 3' 또는 5' 및 3' 비번역 영역을 함유할 수 있다. 본 발명에 따른 핵산은 상류 및/또는 하류에 다른 비번역 영역을 함유할 수 있다. 비번역 영역은 조절 요소, 예컨대 예를 들어 전사 개시 단위 (프로모터) 또는 인핸서를 함유할 수 있다. 상기 프로모터는, 예를 들어 구성적, 유도성 또는 발생-제어된 프로모터일 수 있다. 특정 실시양태에서, 다른 공지된 프로모터, 인간 시토메갈로바이러스 (CMV) 및 라우스 육종 바이러스 (RSV)의 구성적 프로모터, 뿐만 아니라 원숭이 바이러스 40 (SV40) 및 단순 헤르페스 프로모터를 배제하지 않는다. 본 발명에 따른 유도성 프로모터는 항생제-내성 프로모터, 열-쇼크 프로모터, 호르몬-유도성 "유방 종양 바이러스 프로모터" 및 메탈로티오네인 프로모터를 포함한다. 본 발명에 따른 핵산은 본 발명에 따른 항체 단백질의 단편을 코딩할 수 있다. 이는 본 발명에 따른 폴리펩티드의 일부를 지칭한다.
6. 벡터
본 발명의 또 다른 중요한 측면은 본 발명에 따른 핵산을 함유하는 것을 특징으로 하는 재조합 DNA 벡터이다. 예는 바이러스 벡터, 예컨대 예를 들어 백시니아, 셈리키-포스트-바이러스 및 아데노바이러스이다. COS-세포에서 사용하기 위한 벡터는 SV40 복제 기점을 갖고, 플라스미드의 높은 카피수를 달성하는 것을 가능하게 한다. 곤충 세포에서 사용하기 위한 벡터는, 예를 들어 이. 콜라이 전달 벡터이고, 예를 들어 프로모터로서 폴리헤드린을 코딩하는 DNA를 함유한다.
본 발명의 또 다른 측면은 발현 벡터인 것을 특징으로 하는 본 발명에 따른 재조합 DNA 벡터이다.
본 발명의 또 다른 측면은 벡터 pAD-CMV 또는 그의 기능적 유도체인 것을 특징으로 하는 본 발명에 따른 재조합 DNA 벡터이다. 이러한 유도체는, 예를 들어 pAD-CMV1, pAD-CMV19 또는 pAD-CMV25이다.
벡터는 본 발명에 따른 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 미국 특허 번호 5,648,267 A 또는 5,733,779 A에 개시된 것일 수 있다. 본 발명의 또 다른 측면은 벡터 N5KG1Val 또는 그의 유도체인 것을 특징으로 하는 본 발명에 따른 재조합 DNA 벡터이다.
7. 세포 또는 숙주 세포
또 다른 측면은 본 발명에 따른 벡터를 함유하는 것을 특징으로 하는 숙주이다.
또 다른 측면은 진핵 숙주 세포인 것을 특징으로 하는 본 발명에 따른 숙주이다. 본 발명에 따른 진핵 숙주 세포는 진균, 예컨대 예를 들어 피키아 파스토리스, 사카로미세스 세레비지아에, 쉬조사카로미세스, 트리코더마, 곤충 세포 (예를 들어 스포도프테라 프루기페르다로부터의 Sf-9 세포, 바큘로바이러스 발현 시스템을 갖는 세포), 식물 세포, 예를 들어 니코티아나 타바쿰으로부터의 세포, 포유동물 세포, 예를 들어 COS 세포, BHK, CHO 또는 골수종 세포를 포함한다.
체내에서도 항체 단백질이 형성되는 면역계의 세포의 후손에서, 본 발명에 따른 항체 단백질은 특히 잘 폴딩되고 글리코실화된다. 포유동물 숙주 세포, 바람직하게는 CHO 또는 COS 세포, 예를 들어 CHO DG44 (Urlaub and Chasin, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 77(7): 4216-20 (1980)) 또는 CHO-K1 (ATCC CCL-61) 세포가 바람직하다. 따라서, 또 다른 측면은 BHK, CHO 또는 COS 세포이고, 가장 바람직하게는 CHO DG44 또는 CHO-K1 (ATCC CCL-61) 세포인 것을 특징으로 하는 본 발명에 따른 숙주이다.
특정 실시양태에서, 숙주는 박테리오파지이다.
특정 실시양태에서, 숙주는 원핵 숙주 세포이다. 원핵 숙주 세포의 예는 에스케리키아 콜라이, 바실루스 서브틸리스, 스트렙토미세스 또는 프로테우스 미라빌리스이다.
본 발명은 추가로 하기 단계: 본 발명에 따른 숙주를 상기 항체 단백질이 상기 숙주 세포에 의해 발현되는 조건 하에 배양하는 단계 및 상기 항체 단백질을 단리하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 본 발명에 따른 항체 단백질의 제조 방법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 항체는 하기와 같이 생산될 수 있다. 경쇄 및 중쇄를 코딩하는 핵산 분자를 표준 방법에 의해 화학적으로 및 효소적으로 합성할 수 있다. 먼저, 적합한 올리고뉴클레오티드를 관련 기술분야에 공지된 방법으로 합성할 수 있다 (상기 상세설명). 올리고뉴클레오티드로부터 합성 유전자를 생성하는 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있다 (상기 상세설명). 항체 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 이들 핵산 분자를 발현 벡터 (두 쇄가 하나의 벡터 분자 내에 있거나 또는 각각의 쇄가 개별 벡터 분자 내에 있음) 내로 클로닝할 수 있고, 이어서 이를 숙주 세포 내로 도입한다. 숙주 세포는 포유동물 숙주 세포 (상기 상세설명), 예를 들어 COS, CHO (차이니즈 햄스터 난소), 또는 BHK 세포일 수 있다. 이어서 숙주 세포를 항체가 생산되는 조건 하에 적합한 배양 배지에서 배양한 다음, 항체를 표준 절차에 따라 배양물로부터 단리한다. 숙주 세포에서 재조합 DNA로부터 항체를 생산하는 절차 및 각각의 발현 벡터는 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다 (예를 들어 WO 94/11523, WO 97/9351, EP 0481790 참조).
본 발명은 또한 숙주가 포유동물 세포, 바람직하게는 CHO 또는 COS 세포인 방법에 관한 것이다.
특정 실시양태에서, 숙주 세포는 경쇄 또는 중쇄에 대한 발현 단위를 보유하는 2개의 플라스미드로 공동-형질감염된다.
실시예
하기 실시예는 본 발명을 추가로 예시하는 역할을 하지만; 본원에 개시된 본 발명의 범주를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다.
실시예 1
항-CD44v6 모노클로날 항체 mAb119 및 항-CD44v9 모노클로날 항체 mAb116의 살아있는-세포 Mab어레이 단리
도 1a에 제시된 바와 같이, 약 6 x 104개의 상이한 모노클로날 항체 (mAb)를 어레이젯 프린터를 사용하여 4개의 유리 알데히드 칩 (75x25mm) 상에 인쇄하여 Mab어레이를 생성하였다. 이어서 Mab어레이 칩을 10% BSA로 밤새 차단한 후에 실험을 수행하였다. 폐암 세포주 PC9 세포를 녹색 형광 핵산 염색제 SYTO14 (써모피셔 사이언티픽)로 표지하고, 1시간 동안 PBS 중 1 x 107개 세포/mL의 밀도로 칩과 함께 인큐베이션하였다. 이어서 Mab어레이 칩을 PBS로 부드럽게 세척하고, 진픽스 스캐너로 스캐닝하였다.
도 1b는 4개의 독립적인 PC9 살아있는 세포 Mab어레이 실험에서의 mAb119 및 대조군 mAb의 영상을 보여준다. 살아있는 PC9 세포를 Mab어레이 칩 상에서 mAb119에 의해 포획하였다.
실시예 2
mAb119 항원은 PC9 세포의 표면 상에서 발현되고, PC9 세포에 의해 내재화된다
도 2는 PC9 세포에 대한 mAb119의 FACS 분석의 결과를 보여준다. PC9 세포를 얼음 상에서 30분 동안 mAb119의 연속 희석물 (30000 pM 내지 0.1 pM, 3배 연속 희석물)과 함께 인큐베이션함으로써 mAb119의 PC9 FACS 적정을 수행한 후에, 세포를 30분 동안 알렉사488-접합된 항-마우스 IgG (잭슨 랩)로 염색하였다. BD C6을 사용하여 MFI를 분석하였다. 친화도 KD는 약 2 nM인 것으로 결정되었다.
도 3은 PC9 세포가 결합된 mAb119를 내재화하였다는 것을 보여준다. 살아있는 PC 세포를 커버슬립 상에서 배양하고, 얼음 상에서 1시간 동안 10 μg/mL mAb119와 함께 인큐베이션한 후에, 세포를 PBS로 3회 세척하였다. 이어서 세포를 37℃에서 0시간, 2시간 또는 4시간 동안 배양한 후에, 4% PFA로 고정한 후에, FACS에 의해 FITC 접합된 2차 항체로 검출하였다. 이어서 PC9 세포를 mAb119 (녹색 형광 염료 알렉사488에 의해 표지됨) 및 항-LAMP1 (적색 형광 염료 알렉사595에 의해 표지됨)에 의해 공동-염색하였다. 구체적으로, PC9 세포를 0.1% 트리톤 X로 투과시키고, mAb119 및 토끼 항-LAMP1 항체 (1:200, 압캠) 및 mAb119와 함께 1시간 동안 인큐베이션하였다. 이어서 항체를 각각 알렉사488 접합된 항-마우스 항체 및 알렉사595 접합된 항-토끼 항체로 표지하였다. 리소솜-회합 막 단백질 1 (LAMP1)은 주로 리소솜 막을 가로질러 발현되는 당단백질이다. mAb119 및 항-LAMP1의 공동국재화 신호는 황색 신호를 생성하며, 이는 PC9 세포에 의한 mAb119의 리소솜 구획으로의 내재화를 나타낸다. mAb119는 0시간에 LAMP1과의 임의의 공동-국재화 없이 세포 표면 상에서 처음 관찰되었다. mAb119 및 LAMP1의 공동국재화는 2시간 및 4시간에 관찰되었다.
표면 형광에 기초한 FACS 분석은 PC9 세포 상에서의 mAb119 내재화를 보여준다 (데이터는 제시되지 않음). 구체적으로, 살아있는 PC9 세포를 얼음 상에서 0.5시간 동안 10 μg/mL mAb119와 함께 인큐베이션한 후에, PBS로 3회 세척하였다. 이어서 세포를 37℃에서 0시간, 2시간 또는 4시간 동안 배양한 후에, 4% PFA로 고정시켰다. 이어서 세포를 알렉사488 접합된 항-마우스 항체로 염색하고, 표면 MFI를 계산함으로써 FACS로 분석하였다. mAb119의 표면 국재화를 나타내는 표면 MFI는 37℃에서 2시간 및 4시간 인큐베이션한 후에 각각 70% 및 80%만큼 감소하였다. PC9 세포에서의 평균 퍼센트 내재화 ± SEM (n = 3)으로서 표현된 FACS 데이터의 정량화가 제시된다. 수직축은 상대 표면 형광 (%)을 나타낸다. 데이터는 mAb119가 막 항원에 결합할 수 있고 PC9 세포에 내재화될 수 있다는 것을 제시한다.
실시예 3
mAb119의 간접적 세포독성은 항원 발현-의존성이다
도 4는 mAb119의 간접적 세포독성이 항원 발현-의존성이라는 것을 보여준다. PC9 또는 TE1 세포를 96-웰 플레이트에서 2000개 세포 / 웰의 전면생장률로 밤새 배양하였다. 72시간 동안 2 μg/mL MMAE-접합된 염소 항-마우스 IgG 항체와 함께 mAb119의 연속 희석물로 세포를 처리하였다. 이어서 CCK8 (도진도)에 의해 세포 수를 계산하였다. TE1 및 PC9 세포에서 상이한 세포독성이 관찰되었다. 항체 칵테일은 PC9 성장을 18 pM의 IC50으로 억제한 반면, 동일한 항체 칵테일은 TE1 세포 성장을 억제하지 않았다. 평균 퍼센트 성장 억제 ± SEM (n = 3)으로서 표현된, TE1 및 PC9 세포로부터 유도된 대표적인 데이터가 제시된다.
2종의 세포주에서의 mAb119 항원의 발현을 또한 FACS에 의해 결정하였다. 측면 삽입 패널은 mAb119에 의해 표지된 TE1 (상부 패널) 및 PC9 (하부 패널)의 FACS 분석을 보여준다. 결과는 PC9 세포가 mAb119 항원을 발현하지만 TE1 세포는 그렇지 않다는 것을 시사한다. 따라서 간접적 세포독성은 항원 발현과 양의 상관관계가 있었다.
실시예 4
mAb119는 인간 CD44 v6 엑손을 표적화한다
도 5a 및 5b는 mAb119가 인간 CD44 v6 엑손을 표적화한다는 것을 보여준다. 48시간 동안 인간 CD44 v6 에피토프를 표적화하는 4종의 상이한 siRNA의 혼합물 또는 대조군 siRNA로 PC9를 형질감염시켰다. 이어서 형질감염된 세포를 mAb119로 염색하고 FACS에 의해 분석하거나, 또는 총 단백질을 추출하고 mAb119 항원의 존재비를 웨스턴 블롯팅에 의해 평가하였다. CD44v6의 녹다운은 FACS에서 mAb119 표면 염색 강도를 감소시켰다 (도 5a, CD44v6 siRNA (V6.si)가 mAb119의 표면 신호를 억제한다는 것을 보여주는 FACS 데이터 (n=3을 나타냄)). CD44v6의 녹다운은 또한 mAb119 항원의 단백질 발현 수준을 감소시켰다 (도 5b, CD44v6 siRNA (V6.si)가 mAb119 항원의 단백질 발현을 억제한다는 것을 보여주는 웨스턴 블롯팅 데이터 (n=3을 나타냄)). 데이터는 mAb119가 CD44v6을 표적화한다는 것을 시사한다.
항원-결합 모이어티로서 mAb119를 사용하여 항체-약물-접합체를 제조하였다. 도 6a는 mAb119가 MC-vc-PAB-MMAE와 접합된 mAb119-ADC (AMT119)의 구조의 개략도를 보여준다. AMT119의 HPLC-HIC (소수성 상호작용 크로마토그래피)는 평균 약물-항체 비 (DAR)가 약 6이었다는 것을 나타낸다 (도 6b).
도 7은 PC9 및 TE1 세포에서의 AMT119의 세포독성을 보여준다. 그래프는 AMT119의 평균 퍼센트 성장 억제 ± SEM (n = 3)을 나타내는, PC9 및 TE1 세포로부터 유도된 대표적인 데이터이다. IC50 값은 PC9 및 TE1 세포에서 각각 2,600 pM 및 39,000 pM이었다. 차이는 2종의 세포주에서의 CD44v6의 상이한 발현 수준과 일치하였다 (도 4 참조).
실시예 5
인간 비소세포 폐암에서의 CD44v6의 발현
도 8a 및 8b는 인간 비소세포 폐암 (NSCLC, 도 8a의 우측 패널) 및 정상 폐 조직 (도 8a의 좌측 패널)에서의 CD44v6의 발현을 보여준다. mAb119 항체를 사용하는 CD44v6 단백질의 IHC (면역조직화학) 검출이 일련의 정상 및 암 조직으로부터 제시되어 있으며, 이는 CD44v6이 종양-특이적 방식으로 상향조절되었음을 보여준다. 현미경사진 영상은 0, 1+, 2+ 및 3+ 염색 강도를 나타내는 종양 조직을 도시한다 (도 8a의 우측 패널). 도 8b는 NSCLC의 상이한 하위유형에서의 CD44v6의 유병률을 보여준다. SCC, 편평 세포 암종; LCC, 대세포 암종.
실시예 6
mAb116 항원은 PC9 세포의 표면 상에서 발현되고, PC9 세포에 의해 내재화된다
도 9는 PC9 세포에 대한 mAb116의 FACS 분석의 결과를 보여준다. PC9 세포를 얼음 상에서 30분 동안 mAb116의 연속 희석물 (30000 pM 내지 0.1 pM, 3배 연속 희석물)과 함께 인큐베이션함으로써 mAb116의 PC9 FACS 적정을 수행한 후에, 세포를 30분 동안 알렉사488-접합된 항-마우스 IgG (잭슨 랩)로 염색하였다. BD C6을 사용하여 MFI를 분석하였다. 친화도 KD는 약 980 pM (또는 0.98 nM)인 것으로 결정되었다.
도 10은 PC9 세포가 결합된 mAb116을 내재화하였다는 것을 보여준다. 살아있는 PC 세포를 커버슬립 상에서 배양하고, 얼음 상에서 1시간 동안 10 μg/mL mAb116과 함께 인큐베이션한 후에, 세포를 PBS로 3회 세척하였다. 이어서 세포를 37℃에서 0시간, 2시간 또는 4시간 동안 배양한 후에, 4% PFA로 고정한 후에, FACS에 의해 FITC 접합된 2차 항체로 검출하였다. 이어서 PC9 세포를 mAb116 (녹색 형광 염료 알렉사488에 의해 표지됨) 및 항-LAMP1 (적색 형광 염료 알렉사595에 의해 표지됨)에 의해 공동-염색하였다. 구체적으로, PC9 세포를 0.1% 트리톤 X로 투과시키고, mAb116 및 토끼 항-LAMP1 항체 (1:200, 압캠) 및 mAb116과 함께 1시간 동안 인큐베이션하였다. 이어서 항체를 각각 알렉사488 접합된 항-마우스 항체 및 알렉사595 접합된 항-토끼 항체로 표지하였다. mAb116 및 항-LAMP1의 공동국재화 신호는 황색 신호를 생성하며, 이는 PC9 세포에 의한 mAb116의 리소솜 구획으로의 내재화를 나타낸다. mAb116은 0시간에 LAMP1과의 임의의 공동-국재화 없이 세포 표면 상에서 처음 관찰되었다. mAb116 및 LAMP1의 공동국재화는 2시간 및 4시간에 관찰되었다.
표면 형광에 기초한 FACS 분석은 PC9 세포 상에서의 mAb116 내재화를 보여준다 (데이터는 제시되지 않음). 구체적으로, 살아있는 PC9 세포를 얼음 상에서 0.5시간 동안 10 μg/mL mAb116과 함께 인큐베이션한 후에, PBS로 3회 세척하였다. 이어서 세포를 37℃에서 0시간, 2시간 또는 4시간 동안 배양한 후에, 4% PFA로 고정시켰다. 이어서 세포를 알렉사488 접합된 항-마우스 항체로 염색하고, 표면 MFI를 계산함으로써 FACS로 분석하였다. mAb116의 표면 국재화를 나타내는 표면 MFI는 37℃에서 4시간 인큐베이션시 약 90%만큼 감소하였다. PC9 세포에서의 평균 퍼센트 내재화 ± SEM (n = 3)으로서 표현된 FACS 데이터의 정량화가 제시된다. 수직축은 상대 표면 형광 (MFI, %)을 나타낸다. 데이터는 mAb116이 막 항원에 결합할 수 있고 PC9 세포에 내재화될 수 있다는 것을 보여준다.
실시예 7
mAb116의 간접적 세포독성은 항원 발현-의존성이다
도 11은 mAb116 및 대조군 IgG의 간접적 세포독성을 보여준다. PC9 세포를 96-웰 플레이트에서 2000개 세포 / 웰의 전면생장률로 밤새 배양하였다. 이어서 72시간 동안 2 μg/mL MMAE-접합된 염소 항 마우스 IgG 항체와 함께 IgG 또는 mAb116의 연속 희석물로 세포를 처리하였다. 이어서 CCK8 (도진도)에 의해 세포 수를 계산하였다. mAb116 항체 칵테일은 PC9 성장을 약 30 pM의 IC50으로 억제하였지만, IgG 칵테일은 어떠한 효과도 나타내지 않았다. 평균 퍼센트 성장 억제 ± SEM (n = 3)으로서 표현된, PC9 세포로부터 유도된 대표적인 데이터가 제시된다.
실시예 8
mAb116은 인간 CD44 v9 엑손을 표적화한다
도 12a 및 12b는 mAb116이 인간 CD44 v9 엑손을 표적화한다는 것을 보여준다. 48시간 동안 인간 CD44 V9 에피토프를 표적화하는 siRNA 또는 대조군 siRNA로 PC9를 형질감염시켰다. 이어서 형질감염된 세포를 mAb116으로 염색하고 FACS에 의해 분석하거나, 또는 총 단백질을 추출하고 mAb116 항원의 존재비를 웨스턴 블롯팅에 의해 평가하였다. CD44v9의 녹다운은 FACS에서 mAb116 표면 염색 강도를 감소시켰다 (도 12a, CD44v9 siRNA (V9.si)가 mAb116의 표면 신호를 억제한다는 것을 보여주는 FACS 데이터 (n=3을 나타냄)). CD44v9의 녹다운은 또한 mAb116 항원의 단백질 발현 수준을 감소시켰다 (도 12b). 데이터는 mAb116이 CD44v9를 표적화한다는 것을 시사한다.
항원-결합 모이어티로서 mAb116을 사용하여 항체-약물-접합체를 제조하였다. 도 13a는 mAb116이 MC-vc-PAB-MMAE와 접합된 mAb116-ADC (AMT116)의 구조의 개략도를 보여준다. AMT116의 HPLC-HIC (소수성 상호작용 크로마토그래피)는 평균 약물-항체 비 (DAR)가 약 4.23이었다는 것을 나타낸다 (도 13b).
도 14는 PC9 및 KYSE-150 (식도 암종 세포주) 세포에서의 AMT116의 세포독성을 보여준다. 그래프는 AMT116 및 IgG 대조군의 평균 퍼센트 성장 억제 ± SEM (n = 3)을 나타내는, PC9 및 KYSE-150 세포로부터 유도된 대표적인 데이터이다. AMT116의 IC50 값은 PC9 및 KYSE-150 세포에서 각각 134 pM 및 670.2 pM이었다.
도 15는 AMT116의 생체내 효능을 보여준다. 약 5 x 106개 KYSE-150 세포를 1:1 마트리겔에 현탁시킨 후에, 암컷 Balb/c 누드 마우스 (8-10주령, 20-22 g)의 우측 측복부에 주사하였다. 종양 부피 (0.5 x 길이 x 폭2으로 측정됨) 및 체중을 적어도 매주 2회 결정하였다. 마우스를 투여 전 그의 초기 종양 크기 (중앙 종양 부피 대략 250-500 mm3)에 기초하여 무작위로 그룹핑하였다 (n=5/군). 비히클 (PBS), AMT116 또는 대조군 ADC를 i.v. 주입에 의해 투여하였다 (3 mg/kg, q3d x3). 군 평균 (±SEM) 종양 부피를 연구 지속기간에 걸쳐 플롯팅하였다.
실시예 9
인간 비-소세포 폐암 및 다른 암에서의 CD44v9의 발현
도 16a 및 16b는 인간 비소세포 폐암 (도 16a의 우측 패널) 및 정상 폐 조직 (도 16a의 좌측 패널)에서의 CD44v9의 발현을 보여준다. mAb116 항체를 사용하는 CD44v9 단백질의 IHC 검출이 일련의 정상 및 암 조직으로부터 제시되어 있으며, 이는 CD44v9가 종양-특이적 방식으로 상향조절되었음을 보여준다. 현미경사진 영상은 0, 1+, 2+ 및 3+ 염색 강도를 나타내는 종양 조직을 도시한다 (도 16a의 우측 패널). 도 16b는 NSCLC의 상이한 하위유형에서의 CD44v9의 유병률을 보여준다. SCC, 편평 세포 암종; LCC, 대세포 암종.
도 17은 다수의 종양 유형에서의 CD44v9의 과다발현을 보여준다. mAb116 항체를 사용하는 CD44v9 단백질의 IHC 검출이 일련의 정상 및 암 조직으로부터 제시되어 있으며, 이는 CD44v9가 종양-특이적 방식으로 상향조절되었음을 보여준다.
실시예 10
항체 서열
mAb119 및 mAb116 모노클로날 항체의 다양한 영역 / 도메인의 서열이 하기에 열거되어 있다.
표 1
mAb119의 가변 영역의 서열
HEGYRQTPKE (서열식별번호: 19) - 대상 항-CD44v6 항체를 생성시키는데 사용된 CD44v6 에피토프 서열.
HEGYRQTPKEDS (서열식별번호: 24)
표 2
mAb116의 가변 영역의 서열
SHEGLEEDKD (서열식별번호: 43) - 대상 항-CD44v9 항체를 생성시키는데 사용된 CD44v9 에피토프 서열.
SHEGLEEDKDH (서열식별번호: 44)
Claims (84)
- 단리된 CD44v6 에피토프에 특이적인 단리된 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 단편이며, 여기서 상기 CD44v6 에피토프는 서열식별번호: 19를 포함하거나 / 이로 본질적으로 이루어지거나 (예를 들어, 에피토프는 서열식별번호: 19 플러스 서열식별번호: 19의 N-말단 상의 1 또는 2개의 잔기, 서열식별번호: 19 플러스 서열식별번호: 19의 C-말단 상의 1 또는 2개의 잔기, 또는 서열식별번호: 19 플러스 서열식별번호: 19의 N-말단 및 C-말단 둘 다 상의 1 또는 2개의 잔기로 이루어짐), 또는 서열식별번호: 19로 이루어지고; 바람직하게는, 상기 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 상기 단리된 CD44v6 에피토프에 대해 생성되거나, 또는 상기 단리된 CD44v6 에피토프 및 담체 단백질 (예컨대 알부민, 바람직하게는 BSA 또는 오브알부민, 또는 키홀 림펫 헤모시아닌 (KLH))을 포함하는 융합 단백질 또는 그의 화학적 접합체에 대해 생성되는 것인, 단리된 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
- 제1항에 있어서, 상기 모노클로날 항체가
(1) 서열식별번호: 1의 중쇄 가변 영역 (HCVR) CDR1 서열, 서열식별번호: 2의 HCVR CDR2 서열 및 서열식별번호: 3의 HCVR CDR3 서열을 포함하는 HCVR;
(2) 서열식별번호: 10의 경쇄 가변 영역 (LCVR) CDR1 서열, 서열식별번호: 11의 LCVR CDR2 서열 및 서열식별번호: 12의 LCVR CDR3 서열을 포함하는 LCVR
을 포함하는 것인 단리된 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 단편. - 제1항 또는 제2항에 있어서, CD44v6 에피토프가 서열식별번호: 19인 단리된 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, CD44v6 에피토프가 서열식별번호: 19로 본질적으로 이루어진 것인 (예를 들어, 에피토프가 서열식별번호: 19 플러스 서열식별번호: 19의 N-말단 상의 1 또는 2개의 잔기, 서열식별번호: 19 플러스 서열식별번호: 19의 C-말단 상의 1 또는 2개의 잔기, 또는 서열식별번호: 19 플러스 서열식별번호: 19의 N-말단 및 C-말단 둘 다 상의 1 또는 2개의 잔기로 이루어짐) 단리된 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
- 제4항에 있어서, CD44v6 에피토프가 서열식별번호: 24 (HEGYRQTPKEDS)인 단리된 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
- 제2항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
(i) HCVR이 서열식별번호: 7-9 중 1개 이상을 추가로 포함하고/거나;
(ii) LCVR이 서열식별번호: 13-18 중 1개 이상을 추가로 포함하는 것인
단리된 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 단편. - 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD44v6 에피토프 또는 상기 CD44v6 에피토프를 갖는 세포에 약 10 nM, 약 5 nM 또는 약 2 nM 또는 그 미만의 KD로 결합하는 단리된 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
- 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 인간-마우스 키메라 항체, 인간화 항체, 인간 항체, CDR-그라프팅된 항체 또는 재표면화 항체인 단리된 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
- 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 그의 항원-결합 단편이 Fab, Fab', F(ab')2, Fd, 단일 쇄 Fv 또는 scFv, 디술피드 연결된 Fv, V-NAR 도메인, IgNar, 인트라바디, IgGΔCH2, 미니바디, F(ab')3, 테트라바디, 트리아바디, 디아바디, 단일-도메인 항체, DVD-Ig, Fcab, mAb2, (scFv)2, 또는 scFv-Fc인 단리된 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
- 단리된 CD44v9 에피토프에 특이적인 단리된 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 단편이며, 여기서 상기 CD44v9 에피토프는 서열식별번호: 43을 포함하거나 / 이로 본질적으로 이루어지거나 (예를 들어, 에피토프는 서열식별번호: 43 플러스 서열식별번호: 43의 N-말단 상의 1 또는 2개의 잔기, 서열식별번호: 19 플러스 서열식별번호: 43의 C-말단 상의 1 또는 2개의 잔기, 또는 서열식별번호: 43 플러스 서열식별번호: 43의 N-말단 및 C-말단 둘 다 상의 1 또는 2개의 잔기로 이루어짐), 또는 서열식별번호: 43으로 이루어지고; 바람직하게는, 상기 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 상기 단리된 CD44v9 에피토프에 대해 생성되거나, 또는 상기 단리된 CD44v9 에피토프 및 담체 단백질 (예컨대 알부민, 바람직하게는 BSA 또는 오브알부민, 또는 키홀 림펫 헤모시아닌 (KLH))을 포함하는 융합 단백질 또는 그의 화학적 접합체에 대해 생성되는 것인, 단리된 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
- 제10항에 있어서, 상기 모노클로날 항체가
(1) 서열식별번호: 25의 중쇄 가변 영역 (HCVR) CDR1 서열, 서열식별번호: 26의 HCVR CDR2 서열 및 서열식별번호: 27의 HCVR CDR3 서열을 포함하는 HCVR;
(2) 서열식별번호: 34의 경쇄 가변 영역 (LCVR) CDR1 서열, 서열식별번호: 35의 LCVR CDR2 서열 및 서열식별번호: 36의 LCVR CDR3 서열을 포함하는 LCVR
을 포함하는 것인 단리된 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 단편. - 제10항 또는 제11항에 있어서, CD44v9 에피토프가 서열식별번호: 43인 단리된 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
- 제10항 또는 제11항에 있어서, CD44v9 에피토프가 서열식별번호: 43으로 본질적으로 이루어진 것인 (예를 들어, 에피토프가 서열식별번호: 43 플러스 서열식별번호: 43의 N-말단 상의 1 또는 2개의 잔기, 서열식별번호: 43 플러스 서열식별번호: 43의 C-말단 상의 1 또는 2개의 잔기, 또는 서열식별번호: 43 플러스 서열식별번호: 43의 N-말단 및 C-말단 둘 다 상의 1 또는 2개의 잔기로 이루어짐) 단리된 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
- 제13항에 있어서, CD44v9 에피토프가 서열식별번호: 44 (SHEGLEEDKDH)인 단리된 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
- 제11항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서,
(i) HCVR이 서열식별번호: 28-33 중 1개 이상을 추가로 포함하고/거나;
(ii) LCVR이 서열식별번호: 37-42 중 1개 이상을 추가로 포함하는 것인
단리된 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 단편. - 제10항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD44v9 에피토프 또는 상기 CD44v9 에피토프를 갖는 세포에 약 10 nM, 약 5 nM, 약 2 nM, 약 1 nM 또는 그 미만의 KD로 결합하는 단리된 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
- 제10항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 인간-마우스 키메라 항체, 인간화 항체, 인간 항체, CDR-그라프팅된 항체 또는 재표면화 항체인 단리된 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
- 제10항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 그의 항원-결합 단편이 Fab, Fab', F(ab')2, Fd, 단일 쇄 Fv 또는 scFv, 디술피드 연결된 Fv, V-NAR 도메인, IgNar, 인트라바디, IgGΔCH2, 미니바디, F(ab')3, 테트라바디, 트리아바디, 디아바디, 단일-도메인 항체, DVD-Ig, Fcab, mAb2, (scFv)2, 또는 scFv-Fc인 단리된 모노클로날 항체 또는 그의 항원-결합 단편.
- 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 HCVR 및/또는 LCVR을 포함하는 폴리펩티드.
- 제19항에 있어서, 융합 단백질 (예컨대 키메라 항원 T 세포 수용체)인 폴리펩티드.
- 제10항 내지 제18항 중 어느 한 항의 HCVR 및/또는 LCVR을 포함하는 폴리펩티드.
- 제21항에 있어서, 융합 단백질 (예컨대 키메라 항원 T 세포 수용체)인 폴리펩티드.
- 제19항 또는 제20항의 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드.
- 제21항 또는 제22항의 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드.
- 제23항의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터.
- 제25항에 있어서, 발현 벡터 (예를 들어, 포유동물 발현 벡터, 효모 발현 벡터, 곤충 발현 벡터 또는 박테리아 발현 벡터)인 벡터.
- 제24항의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터.
- 제27항에 있어서, 발현 벡터 (예를 들어, 포유동물 발현 벡터, 효모 발현 벡터, 곤충 발현 벡터 또는 박테리아 발현 벡터)인 벡터.
- 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 제19항 또는 제20항의 폴리펩티드, 제23항의 폴리뉴클레오티드 또는 제25항 또는 제26항의 벡터를 포함하는 세포.
- 제29항에 있어서, 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제19항 또는 제20항의 폴리펩티드를 발현하는 세포.
- 제29항 또는 제30항에 있어서, BHK 세포, CHO 세포 또는 COS 세포인 세포.
- 제29항에 있어서, 세포의 표면 상에 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제19항 또는 제20항의 폴리펩티드를 포함하는 세포.
- 제32항에 있어서, 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제19항 또는 제20항의 폴리펩티드를 포함하는 키메라 항원 수용체를 보유하는 T-세포 (CAR-T 세포)인 세포.
- 제10항 내지 제18항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 제21항 또는 제22항의 폴리펩티드, 제24항의 폴리뉴클레오티드 또는 제27항 또는 제28항의 벡터를 포함하는 세포.
- 제34항에 있어서, 제10항 내지 제18항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제21항 또는 제22항의 폴리펩티드를 발현하는 세포.
- 제34항 또는 제35항에 있어서, BHK 세포, CHO 세포 또는 COS 세포인 세포.
- 제34항에 있어서, 세포의 표면 상에 제10항 내지 제18항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제21항 또는 제22항의 폴리펩티드를 포함하는 세포.
- 제37항에 있어서, 제10항 내지 제18항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제21항 또는 제22항의 폴리펩티드를 포함하는 키메라 항원 수용체를 보유하는 T-세포 (CAR-T 세포)인 세포.
- (a) 제29항 내지 제31항 중 어느 한 항의 세포를 배양하는 단계; 및
(b) 상기 배양된 세포로부터 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제19항 또는 제20항의 폴리펩티드를 단리하는 단계
를 포함하는, 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제19항 또는 제20항의 폴리펩티드를 생산하는 방법. - 제39항에 있어서, 상기 세포가 진핵 세포인 방법.
- (a) 제34항 내지 제36항 중 어느 한 항의 세포를 배양하는 단계; 및
(b) 상기 배양된 세포로부터 제10항 내지 제18항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제21항 또는 제22항의 폴리펩티드를 단리하는 단계
를 포함하는, 제10항 내지 제18항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제21항 또는 제22항의 폴리펩티드를 생산하는 방법. - 제41항에 있어서, 상기 세포가 진핵 세포인 방법.
- 하기 화학식을 갖는 면역접합체 (또는 항체-약물 접합체 또는 ADC)이며,
Ab-[-L-D]n
여기서
Ab는 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제19항 또는 제20항의 폴리펩티드이고, 이는 링커-약물 모이어티 -[-L-D]의 1개 이상의 단위에 공유 연결되고, 여기서 L은 링커이고, D는 세포독성 약물이고;
n은 1 내지 20 (예를 들어, 1-12)의 정수이고;
여기서 각각의 링커-약물 모이어티는 동일하거나 상이한 링커 L 또는 세포독성 약물 D를 가질 수 있는 것인
면역접합체. - 제43항에 있어서, 각각의 링커-약물 모이어티 -[-L-D]가 Lys의 측쇄 아미노기를 통해 Ab에 공유 연결된 것인 면역접합체.
- 제43항에 있어서, 각각의 링커-약물 모이어티 -[-L-D]가 Cys의 측쇄 티올 기를 통해 Ab에 공유 연결된 것인 면역접합체.
- 제43항에 있어서, 각각의 링커-약물 모이어티 -[-L-D]가 부위-특이적으로 혼입된 비-천연 아미노산을 통해 Ab에 공유 연결된 것인 면역접합체.
- 제43항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 링커 L이 펩티드 단위를 포함하는 것인 면역접합체.
- 제47항에 있어서, 펩티드 단위가 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 2-10 또는 2-5개의 아미노산 잔기를 포함하는 것인 면역접합체.
- 제43항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 링커 L이 프로테아제 (예를 들어, 카텝신)에 의해 절단가능하지 않은 것인 면역접합체.
- 제43항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 링커 L이 프로테아제 (예를 들어, 카텝신), 산성 환경 또는 산화환원 상태 변화에 의해 절단될 수 있는 절단가능한 링커인 면역접합체.
- 제43항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 세포독성 약물이 DNA 삽입제, 미세관 결합제, 토포이소머라제 I 억제제 또는 DNA 작은 홈 결합제인 면역접합체.
- 제51항에 있어서, 세포독성 약물이 아우리스타틴 부류, 예컨대 모노메틸 아우리스타틴 E (MMAE) 및 MMAF, 메이탄신 부류, 예컨대 DM-1, DM-3, DM-4, 칼리케아미신, 예컨대 오조가미신, SN-38 또는 PBD (피롤로벤조디아제핀)인 면역접합체.
- 하기 화학식을 갖는 면역접합체 (또는 항체-약물 접합체 또는 ADC)이며,
Ab-[-L-D]n
여기서
Ab는 제10항 내지 제18항 및 xa 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제21항 또는 제22항의 폴리펩티드이고, 이는 링커-약물 모이어티 -[-L-D]의 1개 이상의 단위에 공유 연결되고, 여기서 L은 링커이고, D는 세포독성 약물이고;
n은 1 내지 20 (예컨대 1-12)의 정수이고;
여기서 각각의 링커-약물 모이어티는 동일하거나 상이한 링커 L 또는 세포독성 약물 D를 가질 수 있는 것인
면역접합체. - 제53항에 있어서, 각각의 링커-약물 모이어티 -[-L-D]가 Lys의 측쇄 아미노기를 통해 Ab에 공유 연결된 것인 면역접합체.
- 제53항에 있어서, 각각의 링커-약물 모이어티 -[-L-D]가 Cys의 측쇄 티올 기를 통해 Ab에 공유 연결된 것인 면역접합체.
- 제53항에 있어서, 각각의 링커-약물 모이어티 -[-L-D]가 부위-특이적으로 혼입된 비-천연 아미노산을 통해 Ab에 공유 연결된 것인 면역접합체.
- 제53항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 링커 L이 펩티드 단위를 포함하는 것인 면역접합체.
- 제57항에 있어서, 펩티드 단위가 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 2-10 또는 2-5개의 아미노산 잔기를 포함하는 것인 면역접합체.
- 제53항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 링커 L이 프로테아제 (예를 들어, 카텝신)에 의해 절단가능하지 않은 것인 면역접합체.
- 제53항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 링커 L이 프로테아제 (예를 들어, 카텝신), 산성 환경 또는 산화환원 상태 변화에 의해 절단될 수 있는 절단가능한 링커인 면역접합체.
- 제53항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서, 세포독성 약물이 DNA 삽입제, 미세관 결합제, 토포이소머라제 I 억제제 또는 DNA 작은 홈 결합제인 면역접합체.
- 제61항에 있어서, 세포독성 약물이 모노메틸 아우리스타틴 E (MMAE), DM-1, DM-3, DM-4 또는 PBD (피롤로벤조디아제핀)인 면역접합체.
- 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제19항 또는 제20항의 폴리펩티드 또는 제43항 내지 제52항 중 어느 한 항의 면역접합체 및 제약상 허용되는 담체 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물.
- 제10항 내지 제18항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제21항 또는 제22항의 폴리펩티드 또는 제53항 내지 제62항 중 어느 한 항의 면역접합체 및 제약상 허용되는 담체 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물.
- CD44v6을 발현하는 세포를 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제19항 또는 제20항의 폴리펩티드 또는 제43항 내지 제52항 중 어느 한 항의 면역접합체 또는 제63항의 제약 조성물과 접촉시키는 것을 포함하는, CD44v6을 발현하는 세포의 성장을 억제하는 방법.
- 제65항에 있어서, 상기 세포가 종양 세포인 방법.
- 제66항에 있어서, 상기 종양 세포가 폐암 (예컨대 NSCLC)으로부터의 것인 방법.
- 제66항에 있어서, 상기 종양 세포가 결장직장암, 유방암, 두경부암, 난소암, 방광암, 췌장암 또는 뇌의 전이성 암으로부터의 것인 방법.
- CD44v9를 발현하는 세포를 제10항 내지 제18항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제21항 또는 제22항의 폴리펩티드 또는 제53항 내지 제62항 중 어느 한 항의 면역접합체 또는 제64항의 제약 조성물과 접촉시키는 것을 포함하는, CD44v9를 발현하는 세포의 성장을 억제하는 방법.
- 제69항에 있어서, 상기 세포가 종양 세포인 방법.
- 제70항에 있어서, 상기 종양 세포가 폐암 (예컨대 NSCLC)으로부터의 것인 방법.
- 제70항에 있어서, 상기 종양 세포가 결장직장암, 유방암, 간암, 두경부암, 난소암, 방광암, 췌장암 또는 뇌의 전이성 암으로부터의 것인 방법.
- 세포가 CD44v6을 발현하는 암을 갖는 대상체에게 CD44v6 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 CD44v6의 길항제의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 세포가 CD44v6을 발현하는 암을 갖는 대상체를 치료하는 방법.
- 대상체에게 CD44v6 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 CD44v6의 길항제의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 세포가 CD44v6을 발현하는 세포-증식성 장애를 치료하는 방법.
- 제73항 또는 제74항에 있어서, CD44v6의 길항제가 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제19항 또는 제20항의 폴리펩티드 또는 제43항 내지 제52항 중 어느 한 항의 면역접합체 또는 제63항의 제약 조성물을 포함하는 것인 방법.
- 제73항 또는 제75항에 있어서, 상기 암이 유방, 폐, 간, 결장직장, 두경부, 식도, 췌장, 난소, 방광, 위, 피부, 자궁내막, 난소, 고환, 식도, 전립선 또는 신장 기원을 포함한 상피 암종; 골 및 연부-조직 육종, 예컨대 골육종, 연골육종, 섬유육종, 악성 섬유성 조직구종 (MFH), 평활근육종; 조혈 악성종양, 예컨대 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종 또는 백혈병; 신경외배엽 종양, 예컨대 말초 신경 종양, 성상세포종 또는 흑색종; 또는 중피종인 방법.
- 세포가 CD44v9를 발현하는 암을 갖는 대상체에게 CD44v9 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 CD44v9의 길항제의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 세포가 CD44v9를 발현하는 암을 갖는 대상체를 치료하는 방법.
- 대상체에게 CD44v9 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 CD44v9의 길항제의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 세포가 CD44v9를 발현하는 세포-증식성 장애를 치료하는 방법.
- 제77항 또는 제78항에 있어서, CD44v9의 길항제가 제10항 내지 제18항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제21항 또는 제22항의 폴리펩티드 또는 제53항 내지 제62항 중 어느 한 항의 면역접합체 또는 제64항의 제약 조성물을 포함하는 것인 방법.
- 제77항 또는 제79항에 있어서, 상기 암이 유방, 폐, 간, 결장직장, 두경부, 식도, 췌장, 난소, 방광, 위, 피부, 자궁내막, 난소, 고환, 식도, 전립선 또는 신장 기원을 포함한 상피 암종; 골 및 연부-조직 육종, 예컨대 골육종, 연골육종, 섬유육종, 악성 섬유성 조직구종 (MFH), 평활근육종; 조혈 악성종양, 예컨대 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종 또는 백혈병; 신경외배엽 종양, 예컨대 말초 신경 종양, 성상세포종 또는 흑색종; 또는 중피종인 방법.
- 대상체로부터의 샘플을 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 접촉시키는 것을 포함하는, 대상체로부터의 샘플에서 CD44v6의 존재 및/또는 존재비를 결정하는 방법.
- 대상체로부터의 샘플을 제10항 내지 제18항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 접촉시키는 것을 포함하는, 대상체로부터의 샘플에서 CD44v9의 존재 및/또는 존재비를 결정하는 방법.
- (1) 제81항의 방법을 사용하여, 대상체로부터의 암 샘플에서 CD44v6의 존재 및/또는 존재비를 결정하여 암 샘플에서 CD44v6을 발현하는 대상체를 확인하는 단계,
(2) 상기 대상체에게 치료 유효량의 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제19항 또는 제20항의 폴리펩티드 또는 제43항 내지 제52항 중 어느 한 항의 면역접합체 또는 제63항의 제약 조성물을 투여하는 단계
를 포함하며, 이에 의해 세포가 CD44v6을 발현하는 암을 갖는 대상체를 진단 및 치료하는 것인,
세포가 CD44v6을 발현하는 암을 갖는 대상체를 진단 및 치료하는 방법. - (1) 제82항의 방법을 사용하여, 대상체로부터의 암 샘플에서 CD44v9의 존재 및/또는 존재비를 결정하여 암 샘플에서 CD44v9를 발현하는 대상체를 확인하는 단계,
(2) 상기 대상체에게 치료 유효량의 제10항 내지 제18항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 제21항 또는 제22항의 폴리펩티드 또는 제53항 내지 제62항 중 어느 한 항의 면역접합체 또는 제64항의 제약 조성물을 투여하는 단계
를 포함하며, 이에 의해 세포가 CD44v9를 발현하는 암을 갖는 대상체를 진단 및 치료하는 것인,
세포가 CD44v9를 발현하는 암을 갖는 대상체를 진단 및 치료하는 방법.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
PCT/CN2018/076958 WO2019161528A1 (en) | 2018-02-22 | 2018-02-22 | Therapeutic antibody and uses thereof |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
KR20210004961A true KR20210004961A (ko) | 2021-01-13 |
Family
ID=67687470
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
KR1020207027136A KR20210004961A (ko) | 2018-02-22 | 2018-02-22 | 치료 항체 및 그의 용도 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20210087289A1 (ko) |
EP (1) | EP3755717A4 (ko) |
JP (1) | JP2021519608A (ko) |
KR (1) | KR20210004961A (ko) |
CN (1) | CN112105643B (ko) |
AU (1) | AU2018409898A1 (ko) |
WO (1) | WO2019161528A1 (ko) |
Families Citing this family (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN116323678A (zh) * | 2020-08-28 | 2023-06-23 | 普众发现医药科技(上海)有限公司 | 治疗性抗体及其用途 |
WO2024051762A1 (en) * | 2022-09-07 | 2024-03-14 | Xadcera Biopharmaceutical (Suzhou) Co., Ltd. | Anti-trop2/egfr antibodies and uses thereof |
WO2024067864A1 (en) * | 2022-09-30 | 2024-04-04 | Shanghai Junshi Biosciences Co., Ltd. | Anti-lair1 antibodies and their uses |
WO2024179561A1 (en) * | 2023-03-02 | 2024-09-06 | Multitude Therapeutics Inc. | Antibody-drug conjugates, pharmaceutical compositions and uses thereof |
CN117554618B (zh) * | 2023-11-24 | 2024-07-19 | 唐山市人民医院 | CD44v9蛋白在胃癌诊断和预后中的用途 |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
UA58482C2 (uk) * | 1994-06-08 | 2003-08-15 | Бьорінгер Інгельхайм Інтернаціональ Гмбх | Моноклональне антитіло vff-18 проти сd44v6 і його фрагменти |
UY24389A1 (es) * | 1995-12-06 | 2001-10-25 | Karlsruhe Forschzent | Composición farmacéutica para el tratamiento de carcinoma de epitelio plano |
EP1258255A1 (en) * | 2001-05-18 | 2002-11-20 | Boehringer Ingelheim International GmbH | Conjugates of an antibody to CD44 and a maytansinoid |
WO2011007853A1 (ja) * | 2009-07-14 | 2011-01-20 | リンク・ジェノミクス株式会社 | 癌特異的アイソフォームに対するモノクローナル抗体 |
WO2015076425A1 (ja) * | 2013-11-25 | 2015-05-28 | リンク・ジェノミクス株式会社 | 新規モノクローナル抗体 |
-
2018
- 2018-02-22 CN CN201880091103.XA patent/CN112105643B/zh active Active
- 2018-02-22 EP EP18907422.2A patent/EP3755717A4/en not_active Withdrawn
- 2018-02-22 AU AU2018409898A patent/AU2018409898A1/en not_active Abandoned
- 2018-02-22 JP JP2020568012A patent/JP2021519608A/ja active Pending
- 2018-02-22 KR KR1020207027136A patent/KR20210004961A/ko unknown
- 2018-02-22 WO PCT/CN2018/076958 patent/WO2019161528A1/en unknown
-
2020
- 2020-08-19 US US16/996,949 patent/US20210087289A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AU2018409898A1 (en) | 2020-09-24 |
JP2021519608A (ja) | 2021-08-12 |
EP3755717A1 (en) | 2020-12-30 |
CN112105643A (zh) | 2020-12-18 |
WO2019161528A1 (en) | 2019-08-29 |
EP3755717A4 (en) | 2022-01-26 |
US20210087289A1 (en) | 2021-03-25 |
CN112105643B (zh) | 2023-09-26 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11033634B2 (en) | Light chain variable regions | |
JP6860614B2 (ja) | フォレート受容体1抗体及びそのイムノコンジュゲート及び使用 | |
US20210087289A1 (en) | Therapeutic antibody and uses thereof | |
JP2020141693A (ja) | Cd37結合分子及びそのイムノコンジュゲート | |
JP6326137B2 (ja) | 抗her2抗体及びその結合体 | |
KR20210125593A (ko) | 면역접합체의 제조를 위한 항체의 변형에 사용되는 특정 부위 | |
WO2012149412A2 (en) | Anti-endoglin (cd105) antibodies, immunoconjugates, and uses thereof | |
WO2003057837A2 (en) | Methods for using anti-muc18 antibodies | |
WO2017196764A1 (en) | Antibody-drug conjugate of an anti-glypican-3 antibody and a tubulysin analog, preparation and uses | |
WO2022041104A1 (en) | Therapeutic antibody and uses thereof | |
RU2814164C2 (ru) | Антитело против клаудина 18.2 и его конъюгат антитело-лекарственное средство | |
KR20230135653A (ko) | 항-클라우딘 18.2 항체 및 이의 항체-약물 접합체 | |
TW202348252A (zh) | 用治療性結合分子治療癌症的組合療法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
N231 | Notification of change of applicant |