KR20200082041A

KR20200082041A - 로즈마리 추출물 및 아스코르브산류를 유효성분으로 함유하는 항균용 조성물

Info

Publication number: KR20200082041A
Application number: KR1020180172182A
Authority: KR
Inventors: 최태호; 윤성건; 윤태미; 김진용
Original assignee: 주식회사 다인소재
Priority date: 2018-12-28
Filing date: 2018-12-28
Publication date: 2020-07-08
Also published as: KR102228770B1

Abstract

본 발명은 로즈마리 추출물 및 아스코르브산류를 유효성분으로 함유하는 항균용 조성물에 관한 것으로, 구체적으로 로즈마리 추출물; 및 아스코르브산, 아스코르브산칼슘, 아스코르브산나트륨 및 아스코빌팔미테이트 중에서 선택된 1종 이상의 화합물;을 유효성분으로 함유하는 항균용 조성물, 및 로즈마리 추출물; 및 아스코르브산, 아스코르브산칼슘, 아스코르브산나트륨 및 아스코빌팔미테이트 중에서 선택된 1종 이상의 화합물;을 식품, 화장품, 피부 외용제, 의약품 및 의약 부외품 중에서 선택된 항균 대상물에 배합하여 상기 항균 대상물의 미생물 오염을 방지하거나 살균하는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 항균용 조성물은 인류가 오랜 기간 섭취하여 그 안전성이 증명된 소재로 구성되어 식품, 의약품, 화장품, 식기, 조리기기, 의료기기, 미용기기 등 인체에 직접 적용되는 물품에 안전하게 사용할 수 있으며, 로즈마리 추출물의 항균력을 높임으로써 로즈마리 추출물의 사용량을 줄일 수 있어 경제적이다. 또한, 본 발명의 방법에 따르면 식품, 의약품, 화장품 등의 경제적이며 안전한 미생물 오염 방지 및 살균이 가능하다.

Description

로즈마리 추출물 및 아스코르브산류를 유효성분으로 함유하는 항균용 조성물{Anti-microbial composition comprising rosemary extract and ascorbic acid as active ingredient}

본 발명은 로즈마리 추출물 및 아스코르브산류를 유효성분으로 함유하는 항균용 조성물에 관한 것으로, 구체적으로 로즈마리 추출물; 및 아스코르브산, 아스코르브산칼슘, 아스코르브산나트륨 및 아스코빌팔미테이트 중에서 선택된 1종 이상의 화합물;을 유효성분으로 함유하는 항균용 조성물, 및 로즈마리 추출물; 및 아스코르브산, 아스코르브산칼슘, 아스코르브산나트륨 및 아스코빌팔미테이트 중에서 선택된 1종 이상의 화합물;을 식품, 화장품, 피부 외용제, 의약품 및 의약 부외품 중에서 선택된 항균 대상물에 배합하여 상기 항균 대상물의 미생물 오염을 방지하거나 살균하는 방법에 관한 것이다.

경제 성장에 따른 소득수준 향상으로 인한 식생활 패턴의 다양화와 1인 가구의 증가에 따른 외식 및 도시락과 같은 HMR 제품의 소비가 증가함에 있어 식중독관련 질병 및 사건사고가 증가하고 있다. 국내에서는 용혈성 요독증후군을 일으킨 햄버거병, 해산물 섭취에 따른 비브리오 패혈증 발병, 학교 및 직장 급식에 따른 집단 식중독 등의 사고가 있었으며, 이러한 사고들이 매년 발생되고 있다. 최근 폭염에 따른 온도의 지속적인 상승으로 인하여 공공위생안전에 대한 관심이 높아지고 있으며, 특히 식품 및 식료품에 대한 식중독 문제가 크게 대두되고 있다.

식품이 다양하게 변하고 있음에 따라 세균, 효모 및 곰팡이 등 여러 식품 유래 미생물에 의한 부패와 오염문제와 안전하고 식품의 영양 및 맛에 영향이 없도록 유통기한의 연장이 지속적으로 필요하였다. 그래서 식품업계에서는 식품 보존의 증진을 위하여 여러 항균제 및 보존제를 사용하고 있다. 대표적으로 안식향산 나트륨, 솔빈산 칼륨 등 여러 화학적 합성 항균제를 사용하고 있다. 그러나 이러한 화학적 합성 항균제들은 사용분야와 양이 제한적이다. 또한, 웰빙 열풍 이후 건강에 유익하며 친환경적인 식품에 대한 소비가 늘어나면서, 화학적 합성 항균제에 대한 거부감에 따른 소비감소로 인해 새로운 천연 유래 식품용 항균제의 필요성이 늘어나고 있다. 효과적인 항균제 개발을 위해서 국내외의 여러 천연물에 대한 이해와 연구가 필요하다. 특히, 항균제의 폭넓은 방부 및 항균 스펙트럼 증가와 항균력 증가, 제형성의 안정성을 보유한 천연 항균제의 개발이 필요하다.

한편, 로즈마리는 꿀풀과(Labiatae)에 속하는 상록성 다년초이며, 식용은 물론이고 약용, 미용, 향료 등으로 널리 이용되고 있다. 로즈마리 추출물은 로즈마리산(rosemary acid), 로즈마놀(rosmanol), 카르노식산(carnosic acid), 로즈마릭산(rosmarinic acid) 등의 많은 활성물질을 함유하고 있고, 그람양성균에 대해 항균력이 있는 것으로 알려져 있으며, 항염, 이뇨예방, 노화방지, 미백 등 의약 및 화장품 분야에서 많이 사용되고 있다. 현재 식품업계에서 로즈마리 추출물은 강한 항산화능을 이용하여 지방음식의 산화과정을 지연시키거나 식품의 안정성을 향상시키고 식품의 가공 및 저장 시간을 늘리는데 사용되어 왔다. 그러나 이러한 로즈마리 추출물은 원가가 매우 높아 식품 등에 다량으로 함유시킬 경우 제품의 비용이 증가하는 문제가 있다.

본 발명자는 상기와 같은 문제점을 해결하고자 로즈마리 추출물의 항균력을 높여 그 사용량을 줄임으로써 결과적으로 제품 비용 증가의 문제를 해결하면서 식품 등에 안전하게 사용할 수 있는 항균제를 개발하고자 하였다.

대한민국 등록특허 제10-0319252호

FEMS Microbiology Letters. 224:247-253. Journal of Food Protection, 72(8): 1744-1752, 2009. Molecules. 17: 3989-4006.

따라서 본 발명의 주된 목적은 로즈마리 추출물의 항균력을 높여 그 사용량을 줄임으로써 결과적으로 제품 비용 증가의 문제를 해결하면서 식품 등에 안전하게 사용할 수 있는 항균제를 제공하는데 있다.

본 발명의 다른 목적은 로즈마리 추출물을 이용하여 보다 적은 비용으로 안전하게 식품, 화장품, 의약품 등의 미생물 오염을 방지할 수 있는 방법을 제공하는데 있다.

본 발명의 한 양태에 따르면, 본 발명은 로즈마리 추출물; 및 아스코르브산, 아스코르브산칼슘, 아스코르브산나트륨 및 아스코빌팔미테이트 중에서 선택된 1종 이상의 화합물;을 유효성분으로 함유하는 항균용 조성물을 제공한다.

본 발명의 항균용 조성물에 있어서, 로즈마리 추출물 및 아스코르브산을 6.25 : 2,500 내지 6.25 : 9,000 의 중량비로 함유하며, 상기 로즈마리 추출물을 6.25㎍/㎖ 이상의 농도로, 상기 아스코르브산을 2,500㎍/㎖ 이상의 농도로 함유하고, 그람양성균에 대한 항균의 용도인 것이 바람직하다.

본 발명의 항균용 조성물에 있어서, 로즈마리 추출물 및 아스코르브산칼슘을 25 : 3,200 내지 25 : 9,000 의 중량비로 함유하며, 상기 로즈마리 추출물을 25㎍/㎖ 이상의 농도로, 상기 아스코르브산칼슘을 3,200㎍/㎖ 이상의 농도로 함유하고, 그람양성균에 대한 항균의 용도인 것이 바람직하다.

본 발명의 항균용 조성물에 있어서, 로즈마리 추출물 및 아스코르브산나트륨을 12.5 : 3,200 내지 12.5 : 9,000 의 중량비로 함유하며, 상기 로즈마리 추출물을 12.5㎍/㎖ 이상의 농도로, 상기 아스코르브산나트륨을 3,200㎍/㎖ 이상의 농도로 함유하고, 그람양성균에 대한 항균의 용도인 것이 바람직하다.

본 발명의 항균용 조성물에 있어서, 로즈마리 추출물 및 아스코빌팔미테이트를 25 : 3,200 내지 25 : 9,000 의 중량비로 함유하며, 상기 로즈마리 추출물을 25㎍/㎖ 이상의 농도로, 상기 아스코빌팔미테이트를 3,200㎍/㎖ 이상의 농도로 함유하고, 그람양성균에 대한 항균의 용도인 것이 바람직하다.

본 발명의 항균용 조성물에 있어서, 로즈마리 추출물 및 아스코르브산을 87.5 : 5,000 내지 87.5 : 9,000 의 중량비로 함유하며, 상기 로즈마리 추출물을 87.5㎍/㎖ 이상의 농도로, 상기 아스코르브산을 5,000㎍/㎖ 이상의 농도로 함유하고, 그람음성균에 대한 항균의 용도인 것이 바람직하다.

본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 로즈마리 추출물; 및 아스코르브산, 아스코르브산칼슘, 아스코르브산나트륨 및 아스코빌팔미테이트 중에서 선택된 1종 이상의 화합물;을 식품, 화장품, 피부 외용제, 의약품 및 의약 부외품 중에서 선택된 항균 대상물에 배합하여 상기 항균 대상물의 미생물 오염을 방지하거나 살균하는 방법을 제공한다.

본 발명의 방법에 있어서, 상기 항균 대상물에 로즈마리 추출물을 6.25 내지 40㎍/㎖의 농도로, 아스코르브산을 2,500 내지 9,000㎍/㎖의 농도로 배합하여 그람양성균의 오염을 방지하거나 살균하는 것이 바람직하다.

본 발명의 방법에 있어서, 상기 항균 대상물에 로즈마리 추출물을 25 내지 40㎍/㎖의 농도로, 아스코르브산칼슘을 3,200 내지 9,000㎍/㎖의 농도로 배합하여 그람양성균의 오염을 방지하거나 살균하는 것이 바람직하다.

본 발명의 방법에 있어서, 상기 항균 대상물에 로즈마리 추출물을 12.5 내지 40㎍/㎖의 농도로, 아스코르브산나트륨을 3,200 내지 9,000㎍/㎖의 농도로 배합하여 그람양성균의 오염을 방지하거나 살균하는 것이 바람직하다.

본 발명의 방법에 있어서, 상기 항균 대상물에 로즈마리 추출물을 25 내지 40㎍/㎖의 농도로, 아스코빌팔미테이트를 3,200 내지 9,000㎍/㎖의 농도로 배합하여 그람양성균의 오염을 방지하거나 살균하는 것이 바람직하다.

본 발명의 방법에 있어서, 상기 항균 대상물에 로즈마리 추출물을 87.5 내지 200㎍/㎖의 농도로, 아스코빌팔미테이트를 5,000 내지 9,000㎍/㎖의 농도로 배합하여 그람음성균의 오염을 방지하거나 살균하는 것이 바람직하다.

본 발명의 항균용 조성물은 인류가 오랜 기간 섭취하여 그 안전성이 증명된 소재로 구성되어 식품, 의약품, 화장품, 식기, 조리기기, 의료기기, 미용기기 등 인체에 직접 적용되는 물품에 안전하게 사용할 수 있으며, 로즈마리 추출물의 항균력을 높임으로써 로즈마리 추출물의 사용량을 줄일 수 있어 경제적이다. 또한, 본 발명의 방법에 따르면 식품, 의약품, 화장품 등의 경제적이며 안전한 미생물 오염 방지 및 살균이 가능하다.

본 발명의 항균용 조성물은 로즈마리 추출물과 함께 아스코르브산, 아스코르브산칼슘, 아스코르브산나트륨 및 아스코빌팔미테이트 중에서 선택된 1종 이상의 화합물을 유효성분으로 함유함으로써 로즈마리 추출물을 단독으로 사용한 경우에 비해 낮은 농도에서 우수한 항균 및 살균 효과를 나타내는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 로즈마리 추출물은 로즈마리(학명 : Rosmarinus officinalis L)를 추출원료하여 통상적으로 사용되는 식물추출방법을 통해 수득할 수 있다. 이때 추출용매로는 증류수, C1~C4 알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 클로로포름, 메틸렌클로라이드, 또는 이들의 혼합용매 등의 식물추출을 위해 통상적으로 사용되는 추출용매를 사용할 수 있으며, 바람직하게는 증류수, 에탄올, 주정 또는 이들의 혼합용액을 사용하는 것이 좋다. 바람직하게는 추출재료로 로즈마리의 잎을 사용하는 것이 좋다. 보다 바람직하게는 로즈마리 잎을 분쇄한 다음 분쇄물 중량의 5 ~ 10배 중량의 50 ~ 95%(v/v) 에탄올 용액을 첨가하고 0 ~ 50℃에서 5시간 이상 추출하여 수득한 것을 사용하는 것이 좋으며, 보다 바람직하게는 7 ~ 9배 중량의 70 ~ 85%(v/v) 에탄올 용액을 첨가하고 30 ~ 40℃에서 10시간 이상 진탕추출하여 수득한 것을 사용하는 것이 좋다. 또한 상기 방법으로 추출한 다음 여과 및 농축과정을 수행한 다음 사용하는 것이 바람직하다.

아스코르브산은 비타민 C로 알려져 있으며, 중요한 항산화제 중 하나이다. 아스코르브산이 단독으로 사용되었을 때에는 식품 위해 미생물에 대해 거의 항균력을 나타내지 못하며, 나타난다 하더라도 10% 이상의 고농도에서 미약한 효과만을 나타낸다. 본 발명에 따르면 이러한 아스코르브산 및 이의 염 또는 유사체를 함께 사용함으로써 로즈마리 추출물의 항균력을 높일 수 있다. 아스코르브산은 여러 염형태로 개발되어 사용되고 있는데, 식품의약품안전처에는 식품첨가물로 사용 가능한 형태로 L-아스코르브산나트륨, L-아스코르브산칼슘, L-아스코빌스테아레이트, L-아스코빌팔미테이트 등 6종이 등록되어 있다.

본 발명에 따르면, 로즈마리 추출물과 아스코르브산을 병용할 경우(조합 1) 로즈마리 추출물 6.25㎍/㎖의 농도 및 아스코르브산 2,500㎍/㎖의 농도에서부터, 로즈마리 추출물과 아스코르브산칼슘을 병용할 경우(조합 2) 로즈마리 추출물 25㎍/㎖의 농도 및 아스코르브산칼슘 3,200㎍/㎖의 농도에서부터, 로즈마리 추출물과 아스코르브산나트륨을 병용할 경우(조합 3) 로즈마리 추출물 12.5㎍/㎖의 농도 및 아스코르브산나트륨 3,200㎍/㎖의 농도에서부터, 로즈마리 추출물과 아스코빌팔미테이트를 병용할 경우(조합 4) 로즈마리 추출물 25㎍/㎖의 농도 및 아스코빌팔미테이트 3,200㎍/㎖의 농도에서부터 그람양성균에 대한 우수한 항균력을 나타낼 수 있다. 또한, 상기 조합 1의 경우 로즈마리 추출물 87.5㎍/㎖의 농도 및 아스코르브산 5,000㎍/㎖의 농도에서부터 그람음성균에 대한 우수한 항균력을 나타낼 수 있다. 각 농도에서 로즈마리 추출물의 농도를 낮추거나 아스코르브산류 화합물의 농도를 낮출 경우 항균력이 크게 줄거나 발휘되지 않을 수 있으므로, 상기 최저농도 및 두 성분의 비율은 항균력을 발휘하는데 매우 중요한 요소라고 할 수 있다.

이에 상기 농도를 기준으로 조합 1의 경우 그람양성균에 대한 항균효과를 위해 로즈마리 추출물 및 아스코르브산의 농도를 각각 6.25 ~ 40㎍/㎖, 2,500 ~ 9,000㎍/㎖의 농도로 적용하는 것이 바람직하며, 보다 바람직하게는 각각 6.25 ~ 20㎍/㎖, 2,500 ~ 5,000㎍/㎖의 농도로, 보다 바람직하게는 각각 6.25 ~ 10㎍/㎖, 2,500 ~ 3,000㎍/㎖의 농도로 적용하는 것이 좋을 것이다. 또한, 조합 1에서 그람음성균에 대한 항균효과를 위해서는 각각 87.5 ~ 200㎍/㎖, 5,000 ~ 9,000㎍/㎖의 농도로 적용하는 것이 바람직하며, 보다 바람직하게는 각각 87.5 ~ 100㎍/㎖, 5,000 ~ 7,000㎍/㎖의 농도로, 보다 바람직하게는 각각 87.5 ~ 90㎍/㎖, 5,000 ~ 5,500㎍/㎖의 농도로 적용하는 것이 좋을 것이다. 조합 2의 경우 그람양성균에 대한 항균효과를 위해 로즈마리 추출물 및 아스코르브산칼슘의 농도를 각각 25 ~ 40㎍/㎖, 3,200 ~ 9,000㎍/㎖의 농도로 적용하는 것이 바람직하며, 보다 바람직하게는 각각 25 ~ 35㎍/㎖, 3,200 ~ 6,000㎍/㎖의 농도로, 보다 바람직하게는 각각 25 ~ 30㎍/㎖, 3,200 ~ 4,000㎍/㎖의 농도로 적용하는 것이 좋을 것이다. 조합 3의 경우 그람양성균에 대한 항균효과를 위해 로즈마리 추출물 및 아스코르브산나트륨의 농도를 각각 12.5 ~ 40㎍/㎖, 3,200 ~ 9,000㎍/㎖의 농도로 적용하는 것이 바람직하며, 보다 바람직하게는 각각 12.5 ~ 30㎍/㎖, 3,200 ~ 6,000㎍/㎖의 농도로, 보다 바람직하게는 각각 12.5 ~ 20㎍/㎖, 3,200 ~ 4,000㎍/㎖의 농도로 적용하는 것이 좋을 것이다. 조합 4의 경우 그람양성균에 대한 항균효과를 위해 로즈마리 추출물 및 아스코빌팔미테이트의 농도를 각각 25 ~ 40㎍/㎖, 3,200 ~ 9,000㎍/㎖의 농도로 적용하는 것이 바람직하며, 보다 바람직하게는 각각 25 ~ 35㎍/㎖, 3,200 ~ 6,000㎍/㎖의 농도로, 보다 바람직하게는 각각 25 ~ 30㎍/㎖, 3,200 ~ 4,000㎍/㎖의 농도로 적용하는 것이 좋을 것이다.

또한, 상기 비율을 기준으로 조합 1의 경우 그람양성균에 대한 항균효과를 위해 로즈마리 추출물 및 아스코르브산의 비율을 6.25 : 2,500 ~ 6.25 : 9,000의 중량비로 적용하는 것이 바람직하며, 보다 바람직하게는 6.25 : 2,500 ~ 6.25 : 5,000의 중량비로, 보다 바람직하게는 6.25 : 2,500 ~ 6.25 : 3,000의 중량비로 적용하는 것이 좋을 것이다. 또한, 조합 1에서 그람음성균에 대한 항균효과를 위해서는 87.5 : 5,000 ~ 87.5 : 9,000의 중량비로 적용하는 것이 바람직하며, 보다 바람직하게는 87.5 : 5,000 ~ 87.5 : 7,000의 중량비로, 보다 바람직하게는 87.5 : 5,000 ~ 87.5 : 5,500의 중량비로 적용하는 것이 좋을 것이다. 조합 2의 경우 그람양성균에 대한 항균효과를 위해 로즈마리 추출물 및 아스코르브산칼슘의 비율을 25 : 3,200 ~ 25 : 9,000의 중량비로 적용하는 것이 바람직하며, 보다 바람직하게는 25 : 3,200 ~ 25 : 6,000의 중량비로, 보다 바람직하게는 25 : 3,200 ~ 25 : 4,000의 중량비로 적용하는 것이 좋을 것이다. 조합 3의 경우 그람양성균에 대한 항균효과를 위해 로즈마리 추출물 및 아스코르브산나트륨의 비율을 12.5 : 3,200 ~ 12.5 : 9,000의 중량비로 적용하는 것이 바람직하며, 보다 바람직하게는 12.5 : 3,200 ~ 12.5 : 6,000의 중량비로, 보다 바람직하게는 12.5 : 3,200 ~ 12.5 : 4,000의 중량비로 적용하는 것이 좋을 것이다. 조합 4의 경우 그람양성균에 대한 항균효과를 위해 로즈마리 추출물 및 아스코빌팔미테이트의 비율을 25 : 3,200 ~ 25 : 9,000의 중량비로 적용하는 것이 바람직하며, 보다 바람직하게는 25 : 3,200 ~ 25 : 6,000의 중량비로, 보다 바람직하게는 25 : 3,200 ~ 25 : 4,000의 중량비로 적용하는 것이 좋을 것이다.

본 발명의 조성물은 식품, 화장품, 피부 외용제, 의약품 및 의약 부외품 등의 항균 대상물에 첨가하는 방식으로 적용할 수 있으며, 또한 식기, 주방기기, 미용기기, 의료기기 등의 기계나 기구를 본 발명의 조성물 혹은 이의 희석액에 침지하거나, 이들 기계가 기구의 표면에 본 발명의 조성물 혹은 이의 희석액을 분무하는 방식으로 적용할 수 있다.

또한, 본 발명의 조성물은 상기 농도에서 살균력을 나타낼 수 있으므로 살균소독제로도 사용할 수 있다. 특히 모든 구성 성분이 피부자극이 낮은 원료이므로 사람, 반려동물 및 가축의 피부용 살균소독제로도 사용될 수 있다.

본 발명의 조성물은 상기 각 성분 이외에도 본 발명 조성물의 항균력을 낮추지 않는 한 다른 소재가 더 추가될 수 있다. 이때 추가되는 소재는 바람직하게는 식품이나 식품첨가물에 사용될 수 있는 소재가 좋다.

본 발명의 조성물은 상기 각 성분의 용해 또는 분산을 위해 용매를 포함할 수 있다. 이때 용매는 주정이나 물, 또는 이들의 혼합물인 것이 바람직하다. 또한 본 발명의 조성물은 약학적, 식품학적 또는 화장품학적으로 허용되는 다양한 형태로 제형화될 수 있다.

본 발명은 또한 상기와 같은 본 발명의 조성물의 유효성분으로 사용되는 두 성분의 작용효과를 바탕으로 이들 두 성분을 항균 대상물에 배합하여 상기 항균 대상물의 미생물 오염을 방지하거나 살균하는 방법을 제공한다. 이때 두 성분의 배합 농도는 상기에서 제시된 농도로 적용하는 것이 바람직하다.

본 발명의 방법에서 두 성분을 항균 대상물에 배합할 때, 믹서 혹은 호모게나이저 등을 사용하여 항균 대상물 중 두 성분이 상기 제시된 농도로 균일하게 분포하도록 하는 것이 바람직하며, 항균 대상물을 균질화할 수 없는 경우 나머지 균질화가 가능한 부분이 상기 제시된 농도가 되도록 하는 것이 바람직하다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하기로 한다. 이들 실시예는 단지 본 발명을 예시하기 위한 것이므로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는다.

[실시예]

1. 로즈마리 추출물 제조

건조한 로즈마리 잎을 믹서기로 분쇄한 후, 분쇄물 100g에 70 ~ 85%(v/v) 에탄올을 8배 중량으로 첨가하고, 30 ~ 40℃에서 180rpm으로 12시간 동안 진탕추출하였다.

추출물을 여과(Whatman No.2 filter paper)하여 추출액을 수득하고 감압농축하여 분말화 하였다.

2. 시험용액 제조

아스코르브산(L-ascorbic acid)(S/N PHR1008), 아스코르브산나트륨(Sodium L-ascorbate)(S/N A7631), 아스코르브산칼슘(Calcium L-ascorbate)(S/N 1086356) 및 아스코빌팔미테이트(Ascorbyl palmitate)(S/N 1043105)를 시그마(Sigma)사에서 구매하여 사용하였다.

아스코빌팔미테이트는 100% 에탄올에 용해하였으며, 아스코르브산, 아스코르브산나트륨 및 아스코르브산칼슘은 정제수에 용해하여 사용하였다.

상기 실시예 1의 로즈마리 추출물은 100% 에탄올에 용해하여 사용하였으며, 시험 전까지 -20℃에서 냉동보관하였다.

상기 시험용액들은 최소억제농도 시험과 분획억제농도 시험 직전에 각 설정한 농도로 맞추어 사용하였다.

3. 로즈마리 추출물 및 아스코르브산류 화합물의 항균력 평가

아래 표 1과 같이 로즈마리 추출물과 아스코르브산류 화합물 4종의 항균력을 평가하였다. 항균력 평가에는 CLSI(The Clinical & Laboratory Standards Institute) 등에서 제공하는 항균력 측정방법 중의 하나인 최소억제농도(Minimal Inhibitory Concentration; MIC) 측정방법을 사용하였다.

시험균주는 E. coli ATCC 10536와 S. aureus ATCC 6538균을 사용하였다. 먼저 시험균주를 TSA(Tryptic soy agar) 배지에 도말하여 36℃에서 18 ~ 24시간 배양하고, 배양된 균주를 10㎖의 TSB(Triptic soy broth) 배지에 접종하여 36℃에서 18 ~ 24시간 배양한 후 배양액을 생리식염수로 희석하여 생균수를 약 10⁶cfu/㎖로 조정한 다음 이를 시험균주 현탁액으로 사용하였다.

생균수를 조절한 시험균주 현탁액에 상기 실시예 2에서 준비한 시험용액을 농도별로 첨가하여 각 소재들의 MIC를 측정하였다.

100% 에탄올에 녹인 로즈마리 추출물과 아스코빌팔미테이트는 정확한 결과를 위하여 최종볼륨의 5% 이하로 함유시켜 각 균에 대하여 에탄올에 의한 항균력이 나타나지 않도록 하였다.

MIC 결과를 바탕으로, 살균력을 확인하기 위해 각 MIC 시험군의 용액을 한천배지에 접종하여 최소살균농도(Minimal Bactericidal Concentration; MBC) 실험을 수행하였고, 한천배지에서 균이 자라지 않는 시험군의 소재 농도를 확인하여 MBC를 결정하였다. 각 소재들의 MBC 결과는 표 1과 같다.

시험 물질	MBC 농도(㎍/㎖)
시험 물질	E. coli	S. aureus
로즈마리 추출물	350	50
아스코르브산	10,000	10,000
아스코르브산칼슘	>25,000	>25,000
아스코르브산나트륨	>25,000	>25,000
아스코빌팔미테이트	>10,000	>10,000

항균력 분석 결과, E. coli에 대하여 로즈마리 추출물과 아스코르브산의 MBC 농도는 각각 350㎍/㎖과 10,000㎍/㎖로 나타났다. S. aureus에 대해서는 로즈마리 추출물의 MBC 농도는 50㎍/㎖, 아스코르브산의 MBC 농도는 E. coli 결과와 동일한 10,000㎍/㎖로 나타났다. 로즈마리 추출물은 S. aureus에 대해 더 강한 항균력을 보였다. 아스코르브산을 제외한 다른 아스코르브산류 화합물 3종은 두 균에 대하여 MBC 농도가 10,000㎍/㎖를 초과하는 것으로 나타났으며, 특히 아스코르브산칼슘과 아스코르브산나트륨은 두 균에 대하여 고농도인 25,000㎍/㎖가 MBC 농도로 나타났다.

이 결과를 토대로 하여 항균력이 우수한 소재인 로즈마리 추출물을 기준으로 아스코르브산류 화합물 4종과 각각 결합하여 복합 조성물을 제조하였다.

4. 로즈마리 추출물과 아스코르브산류 화합물 복합 조성물의 항균력 평가

로즈마리 추출물과 상기 아스코르브산류 화합물 4종간의 복합 조성물을 제조하였다. 제조한 복합 조성물의 조성은 표 2와 같다.

복합 조성물	추출물	아스코르브산류
조성물 1	로즈마리 추출물	아스코르브산
조성물 2		아스코빌팔미테이트
조성물 3		아스코르브산칼슘
조성물 4		아스코르브산나트륨

복합 조성물 1 ~ 4에 대한 최소살균농도를 평가하였다. 실험방법은 체크보드의 형태를 이용하여 행과 열에 각각의 항균소재를 넣어 실험하는 방법을 사용하였다. 행의 방향으로는 로즈마리 추출물을 MBC 농도인 350㎍/㎖의 농도부터 시작하여 2배씩 희석하여 32배 희석한 10.9㎍/㎖의 농도로 적용하였으며, 열의 방향으로는 4종의 아스코르브산류 화합물 중 하나를 선택하여 MBC 농도인 10,000㎍/㎖의 농도부터 2배씩 희석하여 최대 32배 희석한 농도인 312.5㎍/㎖의 농도로 적용하였다. 각 행과 열에서 교차되는 지점의 농도를 확인하였다.

MBC의 측정은 상기 실시예 3과 동일한 방식을 적용하였다. 이의 결과는 표 3과 같다.

실험용액	MBC 농도(㎍/㎖)
	E. coli		S. aureus
	로즈마리 추출물	아스코르브산류	로즈마리 추출물	아스코르브산류
조성물 1	87.5	5,000	6.25	2,500
조성물 2	350	0	25	3,200
조성물 3	350	0	25	3,200
조성물 4	350	0	12.5	3,200

조성물 1 ~ 4의 항균력이 로즈마리 추출물과 아스코르브산류 화합물 4종의 단일 항균력에 비해 훨씬 우수한 것으로 나타났다.

E. coli의 경우 로즈마리 추출물과 아스코르브산의 복합 조성물인 조성물 1에서 우수한 활성을 나타내었는데, 이때의 로즈마리 추출물의 농도는 단일 처리 시의 농도에 비해 1/4배 낮은 농도이며, 아스코르브산 또한 1/2배 낮은 농도이다.

S. aureus의 경우, 조성물 1 ~ 4 모두 단일 처리 시의 농도에 비해 훨씬 낮은 농도에서 우수한 활성을 나타내었다. 가장 활성이 좋은 조성물 1의 경우 로즈마리 추출물은 단일 처리 시의 농도에 비해 1/8배 낮은 농도에서, 아스코르브산은 1/4배 낮은 농도에서 활성이 나타났다. 조성물 2 및 3의 경우 1/2배 낮은 로즈마리 추출물의 농도에서, 조성물 4의 경우 1/4배 낮은 로즈마리 추출물의 농도에서 활성이 나타났다. 아스코르브산을 제외한 아스코르브산류 화합물 3종은 두 균에 대해 MBC 농도가 25,000㎍/㎖을 초과할 정도로 항균력이 매우 낮았으나, 로즈마리 추출물과 함께 처리할 경우 MBC 농도가 3,200㎍/㎖으로 강한 항균력이 나타남을 확인하였다.

5. 복합 조성물의 FBC 평가

로즈마리 추출물과 아스코르브산류 화합물 4종에 대한 복합 조성물의 분획살균농도(Fractional Bactericidal Concentration, FBC)를 평가하였다. 분획살균농도 값은 하기 수학식 1에 기재된 방법으로 구할 수 있다.

[수학식 1]

상기 수학식 1에서 [A]는 화합물 A의 농도이고, MBC_A는 화합물 A의 MBC 값이며, FBC_A는 화합물 A의 각 테스트균에 대한 MBC 값이다. 화합물 B도 화합물 A와 동일한 방식으로 적용한다. Index 기준은 Pei(2009)의 논문에 언급된 기준(표 4 참조)에 따라 구분하였다.

구분	수치
상승효과	< 1
부분상승효과	1
상가효과	1-2
길항작용	>2

FBC 값의 평가 결과는 표 5와 같다.

실험균주	실험용액	FBC_로즈마리	FBC_{아스코르브}	FBC 값	구분
E. coli	조성물 1	0.5	0.25	0.75	상승효과
	조성물 2	1	0	1	부분상승효과
	조성물 3	1	0	1	부분상승효과
	조성물 4	1	0	1	부분상승효과
S. aureus	조성물 1	0.125	0.25	0.375	상승효과
	조성물 2	0.5	0	0.5	상승효과
	조성물 3	0.5	0	0.5	상승효과
	조성물 4	0.25	0	0.25	상승효과

E. coli에 대해 조성물 1이 상승효과를 나타냈다. 반면 S. aureus에 대해 모든 조성물의 FBC 값이 0.5 이하로 계산되었으며, 높은 상승효과를 나타내었다. 특히, 조성물 1의 경우 로즈마리 추출물의 FBC 값이 0.125로 단일 처리 시 MBC 값보다 매우 낮은 농도에서 활성이 나타남을 확인할 수 있었다. FBC아스코르브의 값이 0으로 확인되는 것은 조성물 2 ~ 4에서 사용된 아스코르브산류 화합물이 두 균에 대해 항균력과 살균력이 전혀 나타나지 않았기 때문에, 수학식 1의 분모값이 무한대로 인정되어 0으로 표기된다. E. coli와 S. aureus에 대해 로즈마리 추출물과 아스코르브산류 화합물이 상승효과 이상의 시너지 효과를 나타냈으며, 특히 그람양성세균인 S. aureus에 대해 높은 시너지효과를 나타냄을 확인하였다.

Claims

로즈마리 추출물; 및 아스코르브산, 아스코르브산칼슘, 아스코르브산나트륨 및 아스코빌팔미테이트 중에서 선택된 1종 이상의 화합물;을 유효성분으로 함유하는 항균용 조성물.
제 1항에 있어서,
로즈마리 추출물 및 아스코르브산을 6.25 : 2,500 내지 6.25 : 9,000의 중량비로 함유하며,
상기 로즈마리 추출물을 6.25㎍/㎖ 이상의 농도로, 상기 아스코르브산을 2,500㎍/㎖ 이상의 농도로 함유하고,
그람양성균에 대한 항균의 용도인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1항에 있어서,
로즈마리 추출물 및 아스코르브산칼슘을 25 : 3,200 내지 25 : 9,000의 중량비로 함유하며,
상기 로즈마리 추출물을 25㎍/㎖ 이상의 농도로, 상기 아스코르브산칼슘을 3,200㎍/㎖ 이상의 농도로 함유하고,
그람양성균에 대한 항균의 용도인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1항에 있어서,
로즈마리 추출물 및 아스코르브산나트륨을 12.5 : 3,200 내지 12.5 : 9,000의 중량비로 함유하며,
상기 로즈마리 추출물을 12.5㎍/㎖ 이상의 농도로, 상기 아스코르브산나트륨을 3,200㎍/㎖ 이상의 농도로 함유하고,
그람양성균에 대한 항균의 용도인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1항에 있어서,
로즈마리 추출물 및 아스코빌팔미테이트를 25 : 3,200 내지 25 : 9,000의 중량비로 함유하며,
상기 로즈마리 추출물을 25㎍/㎖ 이상의 농도로, 상기 아스코빌팔미테이트를 3,200㎍/㎖ 이상의 농도로 함유하고,
그람양성균에 대한 항균의 용도인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1항에 있어서,
로즈마리 추출물 및 아스코르브산을 87.5 : 5,000 내지 87.5 : 9,000의 중량비로 함유하며,
상기 로즈마리 추출물을 87.5㎍/㎖ 이상의 농도로, 상기 아스코르브산을 5,000㎍/㎖ 이상의 농도로 함유하고,
그람음성균에 대한 항균의 용도인 것을 특징으로 하는 조성물.
로즈마리 추출물; 및 아스코르브산, 아스코르브산칼슘, 아스코르브산나트륨 및 아스코빌팔미테이트 중에서 선택된 1종 이상의 화합물;을 식품, 화장품, 피부 외용제, 의약품 및 의약 부외품 중에서 선택된 항균 대상물에 배합하여 상기 항균 대상물의 미생물 오염을 방지하거나 살균하는 방법.
제 7항에 있어서,
상기 항균 대상물에 로즈마리 추출물을 6.25 내지 40㎍/㎖의 농도로, 아스코르브산을 2,500 내지 9,000㎍/㎖의 농도로 배합하여 그람양성균의 오염을 방지하거나 살균하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 7항에 있어서,
상기 항균 대상물에 로즈마리 추출물을 25 내지 40㎍/㎖의 농도로, 아스코르브산칼슘을 3,200 내지 9,000㎍/㎖의 농도로 배합하여 그람양성균의 오염을 방지하거나 살균하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 7항에 있어서,
상기 항균 대상물에 로즈마리 추출물을 12.5 내지 40㎍/㎖의 농도로, 아스코르브산나트륨을 3,200 내지 9,000㎍/㎖의 농도로 배합하여 그람양성균의 오염을 방지하거나 살균하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 7항에 있어서,
상기 항균 대상물에 로즈마리 추출물을 25 내지 40㎍/㎖의 농도로, 아스코빌팔미테이트를 3,200 내지 9,000㎍/㎖의 농도로 배합하여 그람양성균의 오염을 방지하거나 살균하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 7항에 있어서,
상기 항균 대상물에 로즈마리 추출물을 87.5 내지 200㎍/㎖의 농도로, 아스코빌팔미테이트를 5,000 내지 9,000㎍/㎖의 농도로 배합하여 그람음성균의 오염을 방지하거나 살균하는 것을 특징으로 하는 방법.