KR20200032169A

KR20200032169A - 말라리아 백신

Info

Publication number: KR20200032169A
Application number: KR1020207005260A
Authority: KR
Inventors: 아드리안 브이.에스. 힐; 케이티 유어
Original assignee: 옥스포드 유니버시티 이노베이션 리미티드
Priority date: 2017-07-27
Filing date: 2018-07-27
Publication date: 2020-03-25
Also published as: US20200207811A1; EP3658575A1; PH12020500194A1; BR112020001586A2; CN111148754A; MX2020001055A; WO2019021013A1

Abstract

본 발명은 플라스모디움 팔시파룸 감염에 감수성인 인간 대상체의 면역화에 사용하기 위한, 서열식별번호: 1의 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 1과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 폴리펩티드 (R21)를 포함하며, 여기서 상기 폴리펩티드는 바이러스-유사 입자 (VLP)의 형태이며, 여기서 상기 입자는 10% 미만의 유리 B형 간염 표면 항원 단백질을 포함하는 것인 조성물로서, 상기 조성물은 적어도 18세의 대상체에 대해 투여당 1 μg 내지 20 μg R21의 적어도 1회 용량, 또는 18세 미만의 대상체에 대해 투여당 0.5 μg 내지 10 μg R21의 적어도 1회 용량의 투여량 레지멘으로 투여되는 것을 특징으로 하는 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 또한 키트, 방법 및 용도에 관한 것이다.

Description

말라리아 백신

본 발명은 말라리아 병원체 예컨대 플라스모디움 팔시파룸(Plasmodium falciparum)의 치료 또는 그로부터의 보호를 위한 면역원성 조성물에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 특정한 투여량 레지멘으로 인간 대상체를 면역화하는데 있어서의 이러한 조성물의 용도에 관한 것이다.

지난 15년에 걸친 말라리아와 연관된 사망률의 유의한 감소는 살곤충제에 대한 아르테미시닌 저항성 및 벡터 저항성의 출현 및 확산에 의해 위협받고 있다. 내구성있고 고도로 유효한 말라리아 백신을 개발하기 위한 세계적인 보건 우선사항이 남아 있다. 가장 진보된 말라리아 백신 후보인 RTS,S/AS01은 몇몇 아프리카 지역에 걸친 다기관 연구에서 III상 시험을 완료하였으며, 3회 용량 스케줄 후 5-17개월의 아동에서 임상적 말라리아에 대한 저-수준 (~30%) 효능을 입증한다 [1-4]. 이러한 효능은 첫번째 12개월 후 시간 경과에 따라 급속하게 줄어들며 [5], 2018년에 아프리카에서의 시작에 기인한 계획된 파일럿 전개 시험에서 다루어질 필요가 있는 이러한 백신 스케줄의 안전성 문제가 남아 있다 [6, 7]. 따라서, 말라리아 백신 테크놀로지 로드맵(Malaria Vaccine Technology Roadmap)- 2030년까지 임상적 말라리아에 대한 적어도 75% 내구성있는 효능을 갖는 적합한 백신의 개발에 의해 세워진 목표를 달성하기 위해 RTS,S/AS01에 대해 개선시킬 상당한 필요가 있다 [8].

R21은 유니버시티 오브 옥스포드(University of Oxford)의 제너 인스티튜트(Jenner Institute)에서 개발되었다. 이는 HBsAg에 융합된 환상포자소체 단백질 (CSP)의 중심 반복부 및 C-말단을 발현하는 재조합 입자를 포함하지만, RTS,S에서 발견되는 과량의 비융합된 HBsAg 단백질은 갖지 않는 개선된 RTS,S 구축물이다 [9]. 본 발명자들은 최근 매트릭스-M으로 아주반트화된 R21이 훨씬 더 낮은 용량에서 RTS,S/AS01에 대해 필적하는 체액성 면역원성을 유발하였으며, 반응원성은 RTS,S/AS01과 비교 시 R21/MM으로 유의하게 개선되었음을 제시하였다 (Venkatraman et al.). 이들 유망한 결과는 본 발명자들이 말라리아-미감작 성인에서 말라리아 포자소체 챌린지 연구에서 효능을 평가하기 위한 기초를 제공하였다.

그러나, 선행 기술 접근법으로의 문제 예컨대 RTS,S/AS01의 오래가지 못하는 분야 효능이 있다. 또한, 유효한 말라리아 백신은 그의 복잡한 생활 주기의 상이한 단계에 관여하는 다중 항원에 대해 작용하는 상이한 접근법의 조합일 가능성이 있음은 관련 기술분야에서 폭넓게 생각된다 [11]. 이와 관련하여, 선두적인 대안적이고, 잠재적으로 보완적인 전략은 둘 다 ME-TRAP (트롬보스폰딘-관련된 부착 단백질에 융합된 다중 에피토프 스트링)를 코딩하는 바이러스-벡터화된 백신 침팬지 아데노바이러스 혈청형 63 (ChAd63) 및 변형된 백시니아 앙카라 (MVA)의 순차적 투여로의 이종 프라임-부스팅 면역화이다. 항체 반응을 유발하는 것 외에도, 이러한 접근법은 영국에서의 성인, 뿐만 아니라 말라리아 풍토 지역에서의 성인 및 영아에서 강력한 T 세포 반응을 유발하며, 이들 집단에서 안전성 및 내약성의 우수한 실적을 갖는다 [12-16]. ChAd63-MVA ME-TRAP 말라리아 백신 전략은 영국에서 제어된 인간 말라리아 감염 (CHMI) 연구에서 내구성있는 부분적 효능을 입증하였으며 [17], 부분적 효능은 Pf-감염된 포자소체로의 후속 CHMI 연구에서 다시 명백하였다 [18]. 더욱이, 케냐 남성 성인에서 착수된 무작위 대조 단일-맹검 시험은 백신접종이 말라리아 감염의 위험을 67% 감소시켰음을 제시하였다 [19]. 최근의 임상 시험은 처음으로 동일한 레지멘에서 RTS,S/AS01을 ChAd63-MVA ME-TRAP와 조합하였으며, 포자소체 챌린지에 대한 효능을 시험하였다. 이러한 연구는 이들 백신을 동일한 레지멘에서 조합하는 것이 안전하고 내성가능할 뿐만 아니라, 고도로 면역원성이고 유효하였음을 입증하였다 [20]. 따라서, 이들 조합된 접근법은 계속된 연구 노력을 위한 가장 유망한 출발점을 나타내는 것으로 관련 기술분야에서 믿어진다.

문헌 [Collins et al. 2017 (Scientific Reports, Volume 7, Article 46621)]은 고도로 면역원성 바이러스 유사 입자 백신으로 말라리아에 대한 보호적 면역을 향상시키는 것에 초점을 맞춘 전임상 마우스 모델 연구를 개시한다. 저자들은 CSP-HBsAg 융합 단백질 외에도 4배 과량의 HBsAg 단량체를 포함하는 GSK 백신으로부터의 널리 연구된 RTS,S 백신과 대조적으로, 단일 CSP-B형 간염 표면 항원 (HBsAg) 융합 단백질로부터 형성된 R21 입자를 개시한다 (도 1). BALB/c 마우스에서의 면역원성은 아주반트 아비스코-100 및 매트릭스-M과 함께 투여되는 경우에 '매우 낮은' 용량에서 입증된다. 트랜스제닉 포자소체 챌린지에 대한 멸균 보호가 입증된다. 연구는 마우스에 국한된다. 1회 용량이 교시된다: 100μl 총 주사에서 12μg 매트릭스-M으로 제형화된, 각각의 마우스의 양측 뒷다리의 경골 근육 내로 분포된 마우스당 0.5μg R21. (문헌 [Collins et al.]의 제12면, 제1 단락). 이는 R21:매트릭스-M의 1:24의 비이다.

콜린스(Collins) 등에 의해 도출된 핵심적 결론은 R21과 다른 구성요소의 조합이 바람직하다는 것이다. 예를 들어, 제2면, 제5 단락의 말미 ("결과" 섹션 바로 앞)에서, "더욱이, 다중구성요소 백신접종 전략의 일부로서 R21에 대한 잠재성을 평가하는 경우에, 보호적 효능은 MF59에서 R21을 PbTRAP-기반 바이러스 벡터와 조합함으로써 향상되었다"라고 진술되어 있다. 이러한 결론은 "더욱이, R21+MF59를 PbTRAP-기반 바이러스 벡터와 혼합하고 공동-투여하는 것은 효능의 향상을 초래하였다"라고 진술되어 있는 제11면, 제1 단락에서 강조된다. 이러한 결과는 2가지 상이한 항원을 이용하여 세포성 및 체액성 반응 둘 다를 갖는 포자소체 및 간 단계 기생충 둘 다를 표적화하는 것이 포자소체 백신의 임의의 누출을 극복할 수 있다는 가설을 뒷받침한다.

WO 2014/111733은 적어도 1개의 NANP (서열식별번호(SEQ ID NO): 6) 반복부, 플라스모디움 팔시파룸으로부터의 CS 단백질의 C-말단의 일부 또는 전부 및 B형 간염 표면 항원을 포함하는 융합 단백질을 포함하는 입자를 개시한다. 개시내용은 특히 말라리아의 예방을 위해 면역 반응을 유발하는데 사용하기 위한 면역원성 조성물에 관한 것이다. 보다 구체적으로, R21 융합 단백질이 기재되어 있다. 이러한 문서 전반에 걸쳐 마우스에게 주어진 유일한 용량은 0.5μg R21이다. WO 2014/111733의 제9면, 제16행 내지 제21행에서의 섹션은 특정한 조성물이 약 1 내지 약 1000μg의 융합 단백질을 포함하는 용량을 가질 수 있음을 언급한다. 어떤 유기체가 이러한 용량에 대해 의도되는지는 언급되어 있지 않다. 단일 용량 또는 다중 용량은 예를 들어 WO 2014/111733의 제10면, 제1 단락, WO 2014/111733의 제10면, 제3 단락에서 고려된다. 아주반트는 WO 2014/111733에 언급되어 있다. 예를 들어, 제7면, 제28행 내지 제29행은 조성물이 아주반트를 포함할 수 있으며, 아주반트가 아비스코 또는 매트릭스-M일 수 있음을 언급한다. 이러한 개시내용은 WO 2014/111733의 제8면, 제10행 내지 제14행에서 반복된다. 이러한 문서에서 얼마나 많은 아주반트가 유효할 것인지의 개시 또는 지침은 없다. 이러한 문서에서의 실시예는 사용되는 아주반트의 양을 개시하지 않는다. 사용되는 아주반트 예컨대 매트릭스-M의 양의 유일한 개시는 도 13, 15 및 16에 대한 범례에서 발생하는, 마우스에게의 투여를 위한 12μg 매트릭스-M의 재발성 단일 양이다. 다중 용량이 사용되는 경우에, 용량 사이에 2주 내지 4개월의 막간이 사용될 수 있음이 기새되어 있다 (제10면, 제15행). 마우스에서의 보호적 효능은 예를 들어, WO 2014/111733의 도 10에서 개시된 매트릭스-M 및 R21의 특이적 조합에 대해 입증된다.

본 발명은 선행 기술과 연관된 문제(들)를 극복하는 것을 추구한다.

본 발명의 이점은 투여당 지극히 낮은 용량, 예컨대 투여당 항원 R21 및/또는 아주반트 매트릭스-M의 용량이 교시된다는 것이다. 이러한 우수한 효능 결과가 이러한 이례적으로 낮은 용량으로 달성될 수 있음은 놀라운 것이다.

따라서, 본 발명은 이러한 놀랍게도 유효한 투여량 레지멘을 기반으로 한다.

따라서, 한 측면에서, 본 발명은

플라스모디움 팔시파룸 감염에 감수성인 인간 대상체의 치료 또는 면역화, 바람직하게는 면역화에 사용하기 위한,

서열식별번호: 1의 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 1과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 폴리펩티드 (R21)를 포함하는 조성물로서,

상기 조성물은 적어도 18세의 대상체에 대해 투여당 1 μg 내지 20 μg R21의 적어도 1회 용량, 또는 18세 미만의 대상체에 대해 투여당 0.5 μg 내지 10 μg R21의 적어도 1회 용량의 투여량 레지멘으로 투여되는 것을 특징으로 하는

조성물을 제공한다.

적합하게는 상기 조성물은 적어도 18세의 대상체에 대해 투여당 5 μg 내지 20 μg R21의 적어도 1회 용량, 또는 18세 미만의 대상체에 대해 투여당 2.5 μg 내지 10 μg R21의 적어도 1회 용량의 투여량 레지멘으로 투여된다.

적합하게는 상기 조성물은 적어도 18세의 대상체에 대해 투여당 10 μg R21의 적어도 1회 용량, 또는 18세 미만의 대상체에 대해 투여당 5 μg R21의 적어도 1회 용량의 투여량 레지멘으로 투여된다.

적합하게는 투여량 레지멘은 2회 용량을 포함한다.

적합하게는 투여량 레지멘은 3회 용량을 포함한다.

투여량 레지멘이 2회 이상의 용량을 포함하는 경우에, 적합하게는 최종 용량은 제1 용량 중 R21의 양의 100%를 함유한다. 일부 실시양태에서 적합하게는 최종 용량은 제1 용량 중 R21의 양의 10% 내지 50%를 함유한다. 보다 적합하게는 최종 용량은 제1 용량 중 R21의 양의 20%를 함유한다.

적합하게는 조성물은 아주반트를 추가로 포함한다. 적합하게는 상기 아주반트는 매트릭스-M이다. 적합하게는 상기 아주반트는 R21:매트릭스-M의 범위 1:1 내지 1:50의 비로 존재한다. 보다 적합하게는 상기 아주반트는 R21:매트릭스-M의 범위 1:2 내지 1:25의 비로 존재한다. 보다 적합하게는 상기 아주반트는 R21:매트릭스-M의 범위 1:2 내지 1:20의 비로 존재한다. 보다 적합하게는 상기 아주반트는 R21:매트릭스-M의 범위 1:10 내지 1:20의 비로 존재한다.

가장 적합하게는 상기 아주반트는 R21:매트릭스-M의 범위 1:5 내지 1:10의 비로 존재한다.

적합하게는 상기 용량은 적어도 18세의 대상체에 대해 10 내지 500 μg 아주반트, 또는 18세 미만의 대상체에 대해 5 내지 250 μg 아주반트를 포함하며, 가장 적합하게는 상기 아주반트는 매트릭스-M이다.

적합하게는 상기 용량은 적어도 18세의 대상체에 대해 20 내지 200 μg 아주반트, 또는 18세 미만의 대상체에 대해 10 내지 100 μg 아주반트를 포함하며, 가장 적합하게는 상기 아주반트는 매트릭스-M이다.

적합하게는 상기 용량은 적어도 18세의 대상체에 대해 100 내지 200 μg 아주반트, 또는 18세 미만의 대상체에 대해 50 내지 100 μg 아주반트를 포함하며, 가장 적합하게는 상기 아주반트는 매트릭스-M이다.

가장 적합하게는 상기 용량은 적어도 18세의 대상체에 대해 25 내지 50 μg 아주반트, 또는 18세 미만의 대상체에 대해 5 내지 50 μg 아주반트를 포함하며, 가장 적합하게는 상기 아주반트는 매트릭스-M이다.

적합하게는 상기 용량은 적어도 18세의 대상체에 대해 약 10 μg R21 및 약 50 μg 아주반트를 포함하거나, 또는 18세 미만의 대상체에 대해 약 5 μg R21 및 약 25 μg 아주반트를 포함하며, 가장 적합하게는 상기 아주반트는 매트릭스-M이다.

적합하게는 상기 용량은 18세 미만의 대상체에 대해 약 5 μg 내지 10 μg R21, 가장 적합하게는 약 5 μg R21, 및 약 50 μg 아주반트를 포함하며, 가장 적합하게는 상기 아주반트는 매트릭스-M이다.

적합하게는 상기 용량은 적어도 18세의 대상체에 대해 약 2 μg R21 및 약 50 μg 아주반트를 포함하며, 가장 적합하게는 상기 아주반트는 매트릭스-M이다. 본 발명자들은 이러한 용량이 양호하게 작동하는 것을 제시하는 임상 데이터 (성인에서)를 생성하였다.

투여량 레지멘이 2회 이상의 용량을 포함하는 경우에, 적합하게는 상기 용량은 1주 내지 12주, 보다 적합하게는 3주 내지 12주의 간격(들)으로 상기 대상체에게 투여된다. 한 실시양태에서 적합하게는 상기 용량은 1 내지 2주의 간격(들)으로 상기 대상체에게 투여된다. 가장 적합하게는 상기 용량은 4주의 간격으로 상기 대상체에게 투여된다.

한 측면에서, 본 발명은 서열식별번호: 3의 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 3과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 폴리펩티드 (Rv21)를 추가로 포함하는 상기 기재된 바와 같은 조성물에 관한 것이다.

한 측면에서, 본 발명은 바이러스 벡터를 추가로 포함하며, 상기 바이러스 벡터는 말라리아 항원으로부터의, 바람직하게는 피. 팔시파룸(P. falciparum) 또는 피. 비박스 (P. vivax) 항원으로부터의 적어도 1개의 에피토프를 코딩하는 핵산을 포함하는 것인 상기 기재된 바와 같은 조성물에 관한 것이다.

한 측면에서, 본 발명은 상기 조성물이 제약 조성물인 상기 기재된 바와 같은 조성물에 관한 것이다.

한 측면에서, 본 발명은 상기 조성물이 백신 조성물인 상기 기재된 바와 같은 조성물에 관한 것이다.

한 측면에서, 본 발명은 상기 조성물이 인간에서 피. 팔시파룸에 대한 보호적 면역 반응을 유도할 수 있는 것인 상기 기재된 바와 같은 조성물에 관한 것이다.

한 측면에서, 본 발명은 적어도 제1 및 최종 조성물; 및

인간 대상체에게의 투여에 대한 지침서

를 포함하는 키트로서,

상기 제1 조성물은 적어도 18세의 대상체에 대해 투여당 1 μg 내지 20 μg R21, 또는 18세 미만의 대상체에 대해 투여당 0.5 μg 내지 10 μg R21을 포함하고, 상기 조성물은 아주반트를 추가로 포함하며, 여기서 상기 아주반트는 매트릭스-M이고, 여기서 상기 아주반트는 R21:매트릭스-M의 범위 1:1 내지 1:50의 비로 존재하고;

상기 최종 조성물은 투여당 제1 조성물 중 R21의 양의 10% 내지 100%, 바람직하게는 10% 내지 50%, 가장 바람직하게는 20%를 포함하고, 상기 최종 조성물은 아주반트를 추가로 포함하며, 여기서 상기 아주반트는 매트릭스-M이고, 여기서 상기 아주반트는 R21:매트릭스-M의 범위 1:1 내지 1:50의 비로 존재하는 것인

키트에 관한 것이다.

의혹을 피하기 위해, 적어도 제1 및 최종 조성물을 포함하는 키트는 적어도 2종의 조성물 (1종의 제1 및 1종의 최종)을 함유해야 한다.

적합하게는 상기 키트는 제2 조성물을 추가로 포함하며,

상기 제2 조성물은 상기 제1 조성물과 동일하다.

의혹을 피하기 위해, 이러한 맥락에서, 제2 조성물을 추가로 포함하는 키트는 적어도 3종의 조성물 (1종의 제1 및 1종의 제2 및 1종의 최종)을 함유해야 한다. 다시 말해서, 적합하게는 상기 키트는 3종의 조성물, 즉, 상기 기재된 바와 같은 제1 조성물 및 최종 조성물, 및 제2 조성물을 포함하며,

상기 제2 조성물은 상기 제1 조성물과 동일하다.

한 측면에서, 본 발명은 플라스모디움 팔시파룸 감염에 감수성인 인간 대상체의 치료/면역화를 위한 의약의 제조에 있어서의 서열식별번호: 1의 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 1과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 폴리펩티드 (R21)를 포함하는 조성물의 용도로서,

상기 조성물은 적어도 18세의 대상체에 대해 투여당 1 μg 내지 20 μg R21의 적어도 1회 용량, 또는 18세 미만의 대상체에 대해 투여당 0.5 μg 내지 10 μg R21의 적어도 1회 용량을 포함하는 것을 특징으로 하는

용도에 관한 것이다.

적합하게는 상기 조성물은 아주반트를 추가로 포함하며, 여기서 상기 아주반트는 매트릭스-M이고, 여기서 상기 아주반트는 R21:매트릭스-M의 범위 1:1 내지 1:50의 비로 존재한다.

한 측면에서, 본 발명은 서열식별번호: 1의 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 1과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 폴리펩티드 (R21)를 포함하는 조성물을 플라스모디움 팔시파룸 감염에 감수성인 인간 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 조성물은 적어도 18세의 대상체에 대해 투여당 1 μg 내지 20 μg R21의 적어도 1회 용량, 또는 18세 미만의 대상체에 대해 투여당 0.5 μg 내지 10 μg R21의 적어도 1회 용량의 투여량 레지멘으로 투여되는 것인, 플라스모디움 팔시파룸 감염에 감수성인 인간 대상체의 면역화의 방법에 관한 것이다. 적합하게는 상기 조성물은 아주반트를 추가로 포함하며, 여기서 상기 아주반트는 매트릭스-M이고, 여기서 상기 아주반트는 R21:매트릭스-M의 범위 1:1 내지 1:50의 비로 존재한다.

한 측면에서 본 발명은 서열식별번호: 1의 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 1과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 폴리펩티드 (R21)를 포함하는 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 조성물은 적어도 18세의 대상체에 대해 투여당 1 μg 내지 20 μg R21의 적어도 1회 용량, 또는 18세 미만의 대상체에 대해 투여당 0.5 μg 내지 10 μg R21의 적어도 1회 용량의 투여량 레지멘으로 투여되는 것인 방법에 관한 것이다. 적합하게는 상기 조성물은 아주반트를 추가로 포함하며, 여기서 상기 아주반트는 매트릭스-M이고, 여기서 상기 아주반트는 R21:매트릭스-M의 범위 1:1 내지 1:50의 비로 존재한다. 적합하게는 상기 방법은 플라스모디움 팔시파룸 감염에 감수성인 대상체 예컨대 인간 대상체를 면역화하는 방법이고; 적합하게는 상기 방법은 플라스모디움 팔시파룸 감염에 감수성인 대상체 예컨대 인간 대상체를 치료하는 방법이고; 적합하게는 상기 방법은 말라리아/플라스모디움 팔시파룸 감염에 대해 대상체 예컨대 인간 대상체를 면역화하는 방법이고; 적합하게는 상기 방법은 말라리아/플라스모디움 팔시파룸 감염에 대해 대상체 예컨대 인간 대상체를 치료하는 방법이다.

한 측면에서, 본 발명은 상기 투여량 레지멘이 적어도 18세의 대상체에 대해 범위 0.0000125 내지 0.0003333 mg/Kg, 또는 18세 미만의 대상체에 대해 0.00000625 내지 0.0001667mg/Kg의 양으로의 상기 인간 대상체에게의 서열식별번호: 1의 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 1과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 폴리펩티드 (R21)의 투여를 포함하는 것인 상기 기재된 바와 같은 조성물, 키트, 용도 또는 방법에 관한 것이다.

적합하게는 상기 투여는 근육내, 피하 또는 진피내 투여이다. 가장 적합하게는 상기 투여는 근육내 투여이다.

적합하게는 상기 투여는 주사에 의한 것이다.

폭넓은 측면에서 본 발명은

상기 조성물은 적어도 18세의 대상체에 대해 투여당 1 μg 내지 20 μg R21의 적어도 1회 용량, 또는 18세 미만의 대상체에 대해 투여당 0.5 μg 내지 10 μg R21의 적어도 1회 용량으로 제공되는 것을 특징으로 하는

조성물을 제공한다.

적합하게는 조성물은 아주반트를 추가로 포함한다. 적합하게는 상기 아주반트는 매트릭스-M이다. 적합하게는 상기 아주반트는 R21:매트릭스-M의 범위 1:1 내지 1:50의 비로 존재한다. 보다 적합하게는 상기 아주반트는 R21:매트릭스-M의 범위 1:2 내지 1:20의 비로 존재한다. 보다 적합하게는 상기 아주반트는 R21:매트릭스-M의 범위 1:5 내지 1:10의 비로 존재한다.

적합하게는 상기 조성물은 적어도 18세의 대상체에 대해 범위 0.0000125 내지 0.0003333 mg/Kg, 또는 18세 미만의 대상체에 대해 0.00000625 내지 0.0001667mg/Kg의 용량당 양으로 제공된다.

바람직한 실시양태에서 다중 용량 레지멘에서의 용량은 항원, 예를 들어 R21의 동일한 양을 함유한다. 용량이 R21의 동일한 양을 함유하는 경우에, 이는 때때로 '비-분할 용량 레지멘'으로 지칭된다. 가장 적합하게는 본 발명은 성인 (적어도 18세의 대상체)에 대해 10, 10, 10 mcg의 3회 용량 또는 아동/영아 (18세 미만의 대상체)에 대해 5, 5, 5 mcg의 3회 용량을 갖는 (또는 보다 적합하게는 그로 이루어진) 투여하는 키트, 조성물 또는 방법을 포함한다.

상세한 설명

본 발명자들은 매트릭스-M(Matrix-M)™ 아주반트 중 차세대 피. 팔시파룸 항-포자소체 백신: R21의 인간에서의 높은 수준 효능을 제공한다.

매트릭스-M 아주반트는 그 안에 TLR4 리간드 (MPA)를 갖지 않음이 주목되어야 한다. 대조적으로, 선행 기술 아주반트 예컨대 ASO1은 TLR4 리간드를 포함한다.

한 실시양태에서 3회 용량이 주어지며, 1회 용량은 0주에 주어지고, 1회 용량은 4주에 주어지고, 1회 용량은 8주에 주어진다. 이러한 투여량 레지멘은 아기들이 특히 시골 아프리카에서 이들 시점에서 면역화를 위해 클리닉으로 종종 데려와지며, 따라서 면역화를 위한 대상체의 가능성있는 이용가능성과 혼화성인 투여량 레지멘을 설계함으로써, 정확한 백신접종의 증가된 가능성이 달성된다는 이점을 갖는다.

한 실시양태에서 적합하게는 투여량 레지멘은 3회 용량을 포함하며, 1회 용량은 0주에 주어지고, 1회 용량은 4주에 주어지고, 1회 용량은 8주에 주어진다.

한 실시양태에서 적합하게는 투여량 레지멘은 2회 용량을 포함하며, 1회 용량은 0주에 주어지고, 1회 용량은 4주에 주어진다. 이러한 투여량 레지멘은 투여의 수를 2회로 최소화한다는 이점을 갖는다.

한 실시양태에서, 적합하게는 투여량 레지멘은 2회 용량을 포함하며, 1회 용량은 0주에 주어지고, 1회 용량은 1주에 주어진다. 이러한 투여량 레지멘은 여행자, 특히 촉박하게 말라리아 지역을 향하는 여행자에 대해 이상적으로 적합하다는 이점을 갖는다.

내구성 (예컨대 시간 경과에 따른 보호적 반응의 지속성)은 관련 기술분야에서 문제이다. 예를 들어, 조직 예컨대 게이츠 파운데이션(Gates Foundation)은 내구성을 개선시키기 위해 새로운 아주반트를 발견하려는 노력을 쏟아붓고 있다. 본 발명은 내구성의 영역에서 기술적 유익을 제공한다. 예를 들어, 본 발명의 조성물은 입자의 표면 상의 항원의 보다 높은 농도를 제공한다. 이는 본 발명의 조성물에서 R21 폴리펩티드/입자를 사용하여 달성된다.

본 발명자들은 놀랍게도, 성인에서 R21의 10 마이크로그램의 보다 낮은 용량의 사용이 보다 높은 50 마이크로그램 용량의 사용보다 면역화 후 3 내지 6개월에 보다 내구성있는 면역 반응을 유도하였음을 밝혀내었다 (도 6 참조). 이러한 보다 양호한 내구성은 Tfh2 하위세트의 T 소포성 헬퍼 세포의 보다 양호한 유도 및 증가된 스위칭된 기억 B 세포와 상관되며, 이는 어떻게 보다 낮은 용량이 보다 큰 내구성을 초래하는 면역 반응의 상이한 질을 제공하는지의 잠재적 메카니즘을 시사한다 (도 7 참조). R21의 표준 높은 용량보다는 오히려 보다 낮은 용량의 사용에 의한 중심 NANP 반복부에 대한 핵심적 보호적 항-CSP 항체 반응의 보다 큰 내구성의 이러한 증거는 매트릭스-M 중 낮은 용량 R21이 높은 수준 효능을 제공한다는 본 발명자들의 주요한 발견을 보완한다. 함께, 효능 데이터 플러스 내구성 데이터는 본원에서 적합하게는 50 마이크로그램의 매트릭스-M과 함께 사용된 R21의 보다 낮은 용량 예컨대 10 마이크로그램의 사용을 위한 설득력있는 주장을 편다.

본 발명은 유도된 항체의 향상된 결합력을 제공할 수 있다.

말라리아의 분야에서 높은 항체 역가는 유익함이 주목되어야 한다. 예를 들어, ml당 100μg의 과량의 역가는 말라리아 (ml당 단지 2 내지 3μg의 역가가 유효한 것으로 간주되는 Men B.와 같은 질환과 대조적임)에 유익한 것으로 간주될 수 있다.

본 발명의 이점은 본원에 교시된 투여량 레지멘이 B형 간염 반응을 감소시키거나 제거한다는 것이다. 이와 관련하여, 본원에 제시된 데이터로부터 볼 수 있는 바와 같이, B형 간염 반응은 본 발명에 따라 거의 유도되지 않는다. 이는 유리하다. 더욱이, 이는 B형 간염 반응의 감소가 관련 반응이 보다 높은 비율의 전체 면역 반응임을 의미한다는 추가의 유익을 갖는다. 이는 본 발명에 의해 산출되는 추가의 유익이다.

한 실시양태에서, 성인 투여를 위해, 1:5의 항원 (예컨대 R21) 대 아주반트 (예컨대 매트릭스-M)의 비가 사용될 수 있으며; 적합하게는 용량은 10μg R21 및 50μg 매트릭스-M을 포함한다.

한 실시양태에서, 18세 미만의 개체에게의 투여를 위해 1:10의 항원 (예컨대 R21) 대 아주반트 (예컨대 매트릭스-M)의 비가 사용될 수 있으며; 적합하게는 18세 미만의 대상체에게의 투여를 위한 용량은 5μg R21 및 50μg 매트릭스-M을 포함한다.

한 실시양태에서, 2μg 항원 예컨대 R21 및 50μg 아주반트 예컨대 매트릭스-M을 포함하는 조성물이 사용된다 (적합하게는 항원:아주반트의 1:25의 비). 본 발명자들은 이러한 용량 및 비가 I상 연구에서 안전하고 고도로 면역원성인 둘 다임을 밝혀내었다 (도 4 및 8 참조).

관련 기술분야의 관점은 아주반트가 반응원성을 유발한다는 것이다. 따라서, 관련 기술분야의 교시는 반응원성을 감소시키기 위해 높은 양의 아주반트를 사용하는 것이다. 대조적으로, 본 발명에 교시된 낮은 양의 아주반트는 유리하게는 여전히 우수한 면역 반응 및 효능을 생성한다.

이론에 구애되기를 원하지는 않지만, 본 발명에 사용되는 조성물은 선행 기술 제형 예컨대 RTS,S와 비교 시 μg당 보다 많은 항원 (예를 들어 μg당 면역원성 에피토프)을 전달하는 것으로 믿어진다. 예를 들어, 선행 기술 방식은 50μg의 RTS,S의 사용을 교시하며; 때때로 각각의 용량이 50μg RTS,S를 포함하는 RTS,S의 3회 용량이 사용된다. 대조적으로, 본 발명은 유리하게는 보다 낮은 항원 양 예컨대 10μg을 교시한다. 그러나, 심지어 조성물에서 단백질/입자의 μg당 "등가" 항원 전달을 계산하여, RTS,S의 50μg 용량은 대략 15μg의 R21의 "등가" 항원 전달 값을 가질 수 있다 - 유리하게는, 본 발명자들은 R21의 훨씬 더 낮은 양 예컨대 용량당 10μg R21의 사용을 교시한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 적합하게는 용량당 단지 2μg R21을 포함한다.

한 실시양태에서, 투여량 레지멘은 2회 용량을 포함하며, 각각의 용량은 2μg R21을 포함한다.

한 실시양태에서, 투여량 레지멘은 3회 용량을 포함하며, 각각의 용량은 2μg R21을 포함한다.

항원의 양

항원 예컨대 서열식별번호: 1의 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 1과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 폴리펩티드 (R21)의 양이 교시되며; 예를 들어 적어도 18세의 대상체에 대해 투여당 1 μg 내지 20 μg R21의 적어도 1회 용량, 또는 18세 미만의 대상체에 대해 투여당 0.5 μg 내지 10 μg R21의 적어도 1회 용량이 교시된다.

유럽 특허청의 판례법 (예를 들어 T 198/84 및 T 279/89)에 관하여:

(a) 선택된 하위-범위는 공지된 범위와 비교 시 좁음;

WO 2014/111733은 특정한 조성물이 약 1 내지 약 1000μg의 융합 단백질을 포함하는 용량을 가질 수 있음을 언급하는 제9면 제16행 내지 제21행의 개시내용을 함유한다. 어떤 유기체가 이들 용량에 대한 것인지는 언급되어 있지 않다. WO 2014/111733에서의 유일한 예는 마우스이다. 또한, 연령 제한은 WO 2014/111733에 주어져 있지 않다 - 유일한 예는 마우스이다 (단지 주령일 수 있음).

임의의 경우에, 본원에 교시된 용량은 WO 2014/111733와 비교 시 좁다 - 적어도 18세의 대상체에 대해 투여당 1 μg 내지 20 μg R21, 또는 18세 미만의 대상체에 대해 투여당 0.5 μg 내지 10 μg R21의 적어도 1회 용량을 WO 2014/111733에서의 "약 1 내지 약 1000μg"의 개시내용과 비교한다.

보다 중요하게는, 인간에 대해 mg/Kg으로 교시된 용량에서 전혀 중첩은 없다 - 용량은 2 내지 3 자릿수 떨어져 있다 (하기 참조).

(b) 선택된 하위-범위는 선행 기술에서 개시된 임의의 구체적인 예로부터 및 공지된 범위의 종점으로부터 충분히 멀리 제거됨;

적합하게는 마우스 예컨대 성체 마우스는 중량이 20 g인 것으로 간주된다. 따라서, 선행 기술에 기재된 바와 같은 용량으로의 구성요소의 양/조성물은 비교를 위해 동일한 'mg/Kg' 용어로 표현될 수 있다. 예로서, 마우스 예컨대 성체 마우스에게의 투여를 위한 0.5 μg R21을 포함하는 용량은 (0.0005 mg/(20/1000Kg)=) 0.025 mg/Kg의 용량과 동등하다 (WO 2014/111733에서와 같이).

적합하게는 성인 인간은 중량이 60-80 Kg인 것으로 간주된다. 따라서, 기재된 바와 같은 용량으로의 구성요소의 양/조성물은 'mg/Kg' 또는 바람직할 경우에 다른 단위로 전환될 수 있다. 예로서, 성인 인간에게의 투여를 위한 10 μg R21을 포함하는 용량은 (0.01 mg/60 Kg 내지 0.01 mg/80 Kg =) 0.000167 내지 0.000125 mg/Kg의 용량과 동등하다.

따라서, 본 발명의 범위는 선행 기술의 그것들로부터 2 내지 3 자릿수만큼 분리된다.

(c) 선택된 범위는 선행 기술의 임의적인 표본이 아니며, 즉, 선행 기술의 단순 실시양태가 아니며, 또 다른 발명임 (목적있는 선택, 새로운 기술적 교시);

본원에서 설명된 바와 같이, 본원에 교시된 믿을 수 없고 예상치 못한 낮은 용량은 놀랍게도 유효하며, 본원에서 설명된 바와 같은 및 포함된 데이터에 의해 입증된 바와 같은 다른 기술적 유익을 가져온다.

마우스는 전형적으로 중량이 약 20gm이고; 인간은 전형적으로 중량이 약 60 내지 80kg이다. 따라서, 인간은 마우스보다 약 3000 내지 4000배 더 크다. 마우스에 대한 마우스당 0.5μg R21의 문헌 [Collins et al. 2017 (Scientific Reports, Volume 7, Article 46621)]의 개시된 용량을 인간으로 확대하는 것은 300,000μl (300ml)의 부피 중 36,000 내지 48,000μg의 매트릭스-M을 갖는 대략 1500 내지 2000μg R21의 용량을 초래할 것이다. 극명하게 대조적으로, 본 발명은 성인 인간에 대해 투여당 단지 1 내지 20μg R21 (또는 영아 또는 아동에 대해 투여당 0.5 내지 10μg R21)의 사용을 교시한다. 따라서, 본 발명자들은 놀랍게도 선행 기술 예컨대 콜린스 등의 고려사항으로부터 고려될 수 있는 것보다 2 내지 3 자릿수 더 낮은 유효 용량을 교시한다.

따라서, 본 발명은 말라리아에 대해 면역화하기 위한 조성물에 유용한 R21의 유효량의 새롭고, 작고, 좁고, 구체적인 범위를 개시한다. 범위는 극도로 작다. 기술적 효과는 구체적으로 이러한 새롭게 개시된 범위와 연관된다. 범위는 WO 2014/111733에 개시된 범위의 단지 대략 2% (1 내지 1000μg에 비해 1 내지 20μg)를 점유한다. 본원에 개시된 양은 인간에 대해 교시되는 반면, 선행 기술은 마우스 연구에 초점을 맞춘다. 더욱이, 매트릭스-M의 구체적인 양이 개시되며, 이는 또한 선행 기술에 개시된 것들과는 상이하고, 또한 선행 기술과 비교된 기술적 효과에 기여한다. 이들 놀라운 유익은 본원에 보다 상세히 논의되어 있다. 더욱이, WO 2014/111733은 본 발명에서의 범위와 중첩되는 것으로 간주될 수 있는 큰 범위를 개시하지만, 단지 단일 값 (0.5μg R21)이 이러한 문서에서 실제로 입증된다. 상기 문서가 R21의 양의 1 내지 1000μg 범위의 폭의 전체에 대한 가능하게 하는 개시내용을 제공하는지 여부는 통상의 기술자에게 명백하지 않다.

R21 항원

항원은 적합하게는 폴리펩티드이다.

도 1A는 RTS,S를 제시한다. 에스. 세레비지아에(S. cerevisiae)에서 생산되었고; CSP 반복부 및 HBsAg 둘 다에 대해 고도로 면역원성이고; III상 시험을 완료하였고; 필드 시험에서 효능 < 50%.

도 1B는 R21을 제시한다. 피. 파스토리스(P. pastoris)에서 생산되었고; CSP 반복부에 대해 매우 높은 면역원성이고; HBsAg에 대해 비-면역원성이고; 마우스에서 트랜스제닉 기생충 챌린지로 100% 효능; I/II상 시험 (매트릭스-M, AS01).

폴리펩티드는 적합하게는 R21이다. R21의 제조 및 제작을 위한 기술적 상세사항은 본원에서 달리 언급되지 않는다면 WO2014/111733에서와 같다. 제조 및 제작의 프로세스는 피키아(Pichia)로부터 바이러스-유사 입자 백신의 생성의 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 변형될 수 있다.

R21 폴리펩티드는 적합하게는 바이러스-유사 입자 (VLP) 내로 어셈블리된다. R21 폴리펩티드는 자기-어셈블리한다 - 추가의 헬퍼 단백질이 요구되지 않는다. 따라서, 때때로 폴리펩티드는 바이러스-유사 입자 (VLP) 또는 '입자'로 지칭될 수 있다.

보다 상세하게는, 항원은 적어도 1개의 NANP 반복부, 플라스모디움 팔시파룸으로부터의 CS 단백질의 C-말단의 일부 또는 전부 및 B형 간염 표면 항원을 포함하는 융합 단백질을 포함하는 입자일 수 있다. 바람직하게는 B형 간염 표면 항원은 S 항원이다. NANP 반복부는 플라스모디움 팔시파룸으로부터의 CS 단백질에서 천연적으로 발생하는 4개의 아미노산 아스파라긴, 알라닌, 아스파라긴, 프롤린의 반복부이다. NANP의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18개 또는 그 초과의 반복부가 있을 수 있다. 바람직하게는 적어도 3개의 반복부가 있고, 보다 바람직하게는 적어도 10개의 반복부가 있다. 융합 단백질은 한 실시양태에서 NANP의 18개의 반복부를 포함한다.

"CS 단백질의 C-말단의 일부 또는 전부"는 그의 자연적 의미를 가지며; 적합하게는 융합 단백질은 플라스모디움 팔시파룸으로부터의 CS 단백질의 C-말단의 적어도 일부를 포함한다.

CS 단백질의 C-말단은 종종 T-세포 에피토프 함유 C-말단으로 지칭된다. 본 발명의 융합 단백질에 포함되는 CS 단백질의 C-말단은 하기 서열 (서열식별번호: 7)을 포함할 수 있으며:

이때 C-말단 아미노산의 일부는 결실된다. 바람직하게는 15개 이하의 아미노산이 결실되고, 보다 바람직하게는 10개 아미노산, 9개 아미노산, 8개 아미노산, 7개 아미노산, 6개 아미노산, 5개 아미노산, 4개 아미노산, 3개 아미노산 이하가 결실된다.

융합 단백질에서의 CS 단백질의 C-말단은 하기 서열 (서열식별번호: 8)을 가질 수 있다:

항원성 입자는 때때로 바이러스-유사 입자로 지칭된다. 이러한 입자는 단량체성 단백질보다 더 면역원성인 것으로 간주된다. 적합하게는 입자는 다른 단백질성 물질을 포함하지 않거나, 실질적으로 포함하지 않을 수 있다. 적합하게는 입자는 유리 B형 간염 표면 항원 단백질: 즉, 융합 단백질의 일부가 아닌 B형 간염 표면 항원 단백질을 포함하지 않거나, 실질적으로 포함하지 않을 수 있다. 본 발명의 입자는 유리 CS 단백질: 즉, 융합 단백질의 일부가 아닌 CS 단백질을 포함하지 않거나, 실질적으로 포함하지 않을 수 있다.

본원에서 "실질적으로 없는"에 대한 언급은 적합하게는 입자가 언급되는 특정한 물질의 약 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2% 또는 약 1% 미만을 포함할 것을 요구한다. 바람직하게는 입자는 5% 미만, 보다 바람직하게는 1% 미만의 유리 B형 간염 표면 항원 단백질을 함유한다.

비; RTS에 대한 차이

R21 및 RTS,S 둘 다는 VLP이다. 이들 VLP는 폴리펩티드로부터 자기-어셈블리한다.

R21 및 RTS에 사용되는 융합 단백질의 서열은 매우 유사하다. N-말단 영역에서 또는 CS 단백질의 반복부에서 또는 HBsAg 서열에서 변화가 없다. RTS와 비교 시 R21에서의 CSP의 C-말단의 단부에 말단절단이 있다.

R21 및 RTS,S 사이의 주요한 차이는 RTS,S가 1:5의 영역에서 CSP:HBsAg 비를 갖는다는 것이다 (즉, RTS 융합 단백질의 각각의 분자에 대해 1:1, 그러나 RTS 융합 단백질의 각각의 분자는 RTS,S에서 CSP:HBsAg 전체에 대해 1:5를 만드는 대략 4개의 비융합된 HBsAg 분자가 수반됨). R21의 VLP에서 모든 폴리펩티드 분자는 CSP 서열을 갖는 반면, 대조적으로 RTS,S의 VLP에서 5개의 분자 중 단지 1개가 CSP 서열을 가짐을 주목하는 것은 중요하다. 다시 말해서 R21에서 CSP 서열 대 HBsAg 서열의 비는 1:1인 반면, RTS,S에서 CSP 서열 대 HBsAg 서열의 비는 1:5이다. 이는 RTS,S보다 R21 상의 CSP 서열의 훨씬 더 높은 수준의 노출을 초래한다.

서열 차이에 관하여, 하기는 R21 및 RTS의 서열의 비교이다.

RTSS 424aa와 비교 시 R21 410aa = 96.7% 동일

환상포자소체 단백질의 C-말단 영역은 상기 서열에서 밑줄친다

R21 = 105개 아미노산

RTS,S = 116개 아미노산

따라서, CSP 서열에 걸쳐 90.5% 동일성.

RTSS에 대한 전체 서열 동일성 R21 = 96.7% 동일.

RTSS에 대한 단지 CSP 서열 (환상포자소체의 C-말단 영역) (환상포자소체 단백질 C-말단 영역) 서열 동일성 R21을 고려하여 = 90.5% 동일.

적합하게는 본 발명의 조성물, 키트, 용도 또는 방법은 서열식별번호: 1과 적어도 97% 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드를 포함한다.

적합하게는 본 발명의 조성물, 키트, 용도 또는 방법은 서열식별번호: 1의 CSP 서열과 적어도 91% 서열 동일성을 갖는 CSP 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함한다.

임의의 경우에, RTS,S에 비한 R21의 핵심적 이점은 R21 VLP가 유리하게는 RTS,S VLP에서 발견되는 4배 과량의 B형 간염 표면 항원 ("S")이 없다는 (즉, 그의 부재를 갖는다는) 사실로부터 산출된다. 다시 말해서 적합하게는 CSP:HsBAg의 비는 R21에서 1:1이므로, R21 백신은 말라리아 예방에 무관한 B형 간염에 대한 실제로 강한 면역 반응을 생성함으로써 그의 면역원성을 "낭비하지" 않는다. 따라서, RTS,S에 비한 R21의 이점은 면역 반응이 RTS,S에서 발견되는 과량의 HsBAg 에피토프에 의해 '희석된다'는 것 보다는, 말라리아 에피토프 상에서 보다 충분히 집중된다는 것이다.

적합하게는 본 발명의 조성물은 폴리펩티드를 포함하고, 폴리펩티드는 VLP로서 제시되고, VLP는 CSP 서열 및 HsBAg 서열을 포함하며, VLP에서 CSP:HsBAg의 비는 1:1이다.

바람직한 실시양태에서, 적합하게는 폴리펩티드는 바이러스-유사 입자 (VLP)의 형태로 존재하고, VLP는 융합 단백질로서 환상포자소체 단백질 (CSP) 서열의 중심 반복부 및 C-말단의 일부 및 B형 간염 표면 항원 (HBsAg) 서열을 포함하지만, VLP에서 임의의 비융합된 B형 간염 표면 단백질 분자를 갖지 않는다. 이는 RTS,S로부터의 놀라운 차이인 VLP에서 비융합된 HBsAg의 부재의 추가의 이점을 갖는다. 어구 "의 일부"는 R21이 완전한 중심 반복부 또는 C-말단 서열을 갖지 않는다는 사실을 지칭한다. R21은 통상적인 말라리아 균주에서와 같이 NANP의 중심 반복부의 수의 약 절반, 즉 40개보다는 오히려 19개를 가지며, R21은 20개의 아미노산에 의해 그의 단부에서 C-말단 영역을 말단절단하였다.

적합하게는 본 발명의 조성물은 폴리펩티드를 포함하며, 여기서 상기 폴리펩티드는 바이러스-유사 입자 (VLP)의 형태로 존재하고, 여기서 VLP는 환상포자소체 단백질 (CSP) 서열 및 B형 간염 표면 항원 (HBsAg) 서열을 1:1 비로 포함한다.

적합하게는 본 발명의 조성물은 폴리펩티드를 포함하며, 여기서 상기 폴리펩티드는 바이러스-유사 입자 (VLP)의 형태로 존재하고, 여기서 VLP는 환상포자소체 단백질 (CSP) 서열의 C-말단 및 B형 간염 표면 항원 (HBsAg) 서열을 1:1 비로 포함한다.

적합하게는 본 발명의 조성물은 폴리펩티드를 포함하며, 여기서 상기 폴리펩티드는 바이러스-유사 입자 (VLP)의 형태로 존재하고, 여기서 VLP는 환상포자소체 단백질 (CSP) 서열의 중심 반복부 및 C-말단 및 B형 간염 표면 항원 (HBsAg) 서열을 1:1 비로 포함한다.

따라서, 한 측면에서, 본 발명은

플라스모디움 팔시파룸 감염에 감수성인 인간 대상체의 면역화에 사용하기 위한,

서열식별번호: 1의 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 1과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 폴리펩티드 (R21)를 포함하며,

여기서 상기 폴리펩티드는 바이러스-유사 입자 (VLP)의 형태이고, 여기서 VLP는 환상포자소체 단백질 (CSP) 서열 및 B형 간염 표면 항원 (HBsAg) 서열을 1:1 비로 포함하는 것인

조성물로서,

조성물을 제공한다.

따라서, 한 측면에서, 본 발명은

여기서 상기 폴리펩티드는 바이러스-유사 입자 (VLP)의 형태이며, 여기서 상기 입자는 10% 미만의 유리 B형 간염 표면 항원 단백질을 포함하는 것인

조성물로서,

조성물을 제공한다.

따라서, 한 측면에서, 본 발명은 서열식별번호: 1의 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 1과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 폴리펩티드 (R21)를 포함하며, 여기서 상기 폴리펩티드는 바이러스-유사 입자 (VLP)의 형태이며, 여기서 상기 입자는 10% 미만의 유리 B형 간염 표면 항원 단백질을 포함하는 것인 조성물을 플라스모디움 팔시파룸 감염에 감수성인 인간 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 조성물은 적어도 18세의 대상체에 대해 투여당 1 μg 내지 20 μg R21의 적어도 1회 용량, 또는 18세 미만의 대상체에 대해 투여당 0.5 μg 내지 10 μg R21의 적어도 1회 용량의 투여량 레지멘으로 투여되는 것인, 플라스모디움 팔시파룸 감염에 감수성인 인간 대상체의 면역화의 방법을 제공한다.

따라서, 한 측면에서, 본 발명은 상기 투여량 레지멘이 적어도 18세의 대상체에 대해 범위 0.0000125 내지 0.0003333 mg/Kg, 또는 18세 미만의 대상체에 대해 0.00000625 내지 0.001667mg/Kg의 양으로 상기 인간 대상체에게의 서열식별번호: 1의 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 1과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 상기 폴리펩티드 (R21)의 투여를 포함하며, 여기서 상기 폴리펩티드는 바이러스-유사 입자 (VLP)의 형태이며, 여기서 상기 입자는 10% 미만의 유리 B형 간염 표면 항원 단백질을 포함하는 것인 임의의 선행하는 청구항에 따른 조성물, 키트, 용도 또는 방법을 제공한다.

따라서, 한 측면에서, 본 발명은 서열식별번호: 1의 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 1과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 폴리펩티드 (R21)를 포함하며, 여기서 상기 폴리펩티드는 바이러스-유사 입자 (VLP)의 형태이고, 여기서 VLP는 환상포자소체 단백질 (CSP) 서열 및 B형 간염 표면 항원 (HBsAg) 서열을 1:1 비로 포함하고, 여기서 상기 조성물은 적어도 18세의 대상체에 대해 투여당 1 μg 내지 20 μg R21의 적어도 1회 용량, 또는 18세 미만의 대상체에 대해 투여당 0.5 μg 내지 10 μg R21의 적어도 1회 용량의 투여량 레지멘으로 투여되는 것인, 플라스모디움 팔시파룸 감염에 감수성인 인간 대상체의 면역화의 방법을 제공한다.

따라서, 한 측면에서, 본 발명은 상기 투여량 레지멘이 적어도 18세의 대상체에 대해 범위 0.0000125 내지 0.0003333 mg/Kg, 또는 18세 미만의 대상체에 대해 0.00000625 내지 0.001667mg/Kg의 양으로 상기 인간 대상체에게의 서열식별번호: 1의 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 1과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 상기 폴리펩티드 (R21)의 투여를 포함하며, 여기서 상기 폴리펩티드는 바이러스-유사 입자 (VLP)의 형태이고, 여기서 VLP는 환상포자소체 단백질 (CSP) 서열 및 B형 간염 표면 항원 (HBsAg) 서열을 1:1 비로 포함하는 것인 임의의 선행하는 청구항에 따른 조성물, 키트, 용도 또는 방법을 제공한다.

바람직하게는, 입자의 단백질성 물질의 적어도 약 40 질량% 또는 그 초과는 플라스모디움 팔시파룸으로부터 유래된다. 입자 중의 이러한 높은 수준의 플라스모디움 팔시파룸 물질을 갖는 능력은 말라리아에 관한 보다 선호하는 항체 반응, 보다 구체적으로, 플라스모디움 팔시파룸에 대한 유의한 항체 반응 및 B형 간염 표면 항원에 대한 보다 적은 항체 반응을 허용한다.

입자 중의 B형 간염 표면 항원의 상대량의 감소는 또한 입자가 초기 영아기에서 개선된 효능을 갖는다는 이점을 가질 수 있다. 너무 많은 B형 간염 표면 항원이 존재하는 경우에, 어린 영아에 존재하는 모체 항체가 입자를 면역원으로서 보다 덜 유효하게 만들 수 있다는 문제가 있다.

바람직하게는 본 발명의 융합 단백질에서 B형 간염 표면 항원은 임의의 플라스모디움 팔시파룸 물질에 대한 C-말단이다.

입자는 서열식별번호: 1의 서열 (R21) 또는 서열식별번호: 1의 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99% 또는 그 초과의 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 융합 단백질을 포함할 수 있다.

백분율 서열 동일성은 서열을 정렬하고, 필요할 경우에 갭을 도입하여 최대 퍼센트 서열 동일성을 달성한 후에 제공된 서열에서의 아미노산과 동일한 서열에서의 아미노산의 백분율로서 정의된다. 퍼센트 서열 동일성을 측정하는 목적을 위한 정렬은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지된 많은 방법으로 달성될 수 있으며, 예를 들어, BLAST (내셔널 센터 포 바이오테크놀로지 인포메이션(National Center for Biotechnology Information) 베이직 로컬 얼라인먼트 서치 툴(Basic Local Alignment Search Tool))를 사용하는 것을 들 수 있다.

퍼센트 동일성의 변동은 예를 들어, 아미노산 치환, 삽입 또는 결실에 기인할 수 있다. 아미노산 치환은 성질상 보존적일 수 있으며, 즉, 치환된 아미노산은 유사한 구조적 및/또는 화학적 특성을 가지며, 예를 들어, 류신의 이소류신으로의 치환은 보존적 치환이다.

바람직하게는 폴리펩티드는 생성된 융합 단백질의 면역원성에 임의의 유의한 효과를 갖지 않는 보존적 치환을 갖는 서열을 포함한다.

보존적 치환은 예를 들어 하기 표에 따라 생성될 수 있다. 제2 열에서의 동일한 블록에서의 및 적합하게는 제3 열에서의 동일한 줄에서의 아미노산은 서로에 대해 치환될 수 있다:

치환은 또한 플라스모디움 팔시파룸의 다른 균주의 CS 서열을 보다 잘 매칭하도록 도입될 수 있다. 본원에 보고된 R21 예에서 사용된 서열은 3D7 균주의 것이다.

바람직하게는 입자는 융합 단백질의 다수의 단량체를 포함한다. 입자는 적어도 10개의 융합 단백질 단량체, 바람직하게는 20개 이상, 30개 이상, 40개 이상, 50개 이상, 60개 이상, 70개 이상, 80개 이상, 90개 이상, 100개 이상의 융합 단백질 단량체를 포함할 수 있다. 한 실시양태에서, 입자는 대략 96개의 융합 단백질 단량체를 포함한다.

바람직하게는 입자는 면역원성이다. 입자는 적합하게는 말라리아 유발 기생충 플라스모디움 팔시파룸에 대한 면역 반응을 유발할 수 있다. 면역 반응은 치료적 및/또는 예방적일 수 있다. 면역 반응은 플라스모디움 팔시파룸에 의한 감염 또는 질환 원인을 감소시키거나 예방하는데 충분할 수 있다. 입자는 대상체, 바람직하게는 인간 대상체에게 투여되는 경우에 보호적 면역 반응을 유발/생성할 수 있다.

바람직하게는 본 발명의 조성물에 의해 유발되는 면역 반응은 면역화된 인간을 감염시키는 플라스모디움 팔시파룸의 능력에 영향을 미친다. 바람직하게는 본 발명의 조성물로 면역화된 인간을 감염시키는 플라스모디움 팔시파룸의 능력은 저해되거나 방해된다. 이는 다수의 방식으로 달성될 수 있다. 유발되는 면역 반응은 플라스모디움 팔시파룸을 인식하고 파괴할 수 있다. 대안적으로, 또는 추가적으로, 유발되는 면역 반응은 플라스모디움 팔시파룸의 복제를 저해하거나 방해할 수 있다. 대안적으로, 또는 추가적으로, 유발되는 면역 반응은 대상체 예컨대 인간에서 플라스모디움 팔시파룸 유발 질환을 저해하거나 방해할 수 있다. 바람직하게는 면역 반응은 항체 반응에 의해 유발된다.

적합하게는 대상체는 인간이다.

조성물은 액체 제형으로 제공될 수 있다. 대안적으로, 조성물은 동결건조된 형태로 제공될 수 있다. 대안적으로 조성물은 문헌 [Alcock et al. (Sci Transl Med. 2010 Feb 17;2(19): 19ral2)]에 의해 기재된 바와 같이 막 상에 건조된 당 기반 제형으로 제공될 수 있다.

입자로서의 폴리펩티드 예컨대 R21은 사카로미세스 세레비지아에(Saccharomyces cerevisiae) 또는 피키아 파스토리스(Pichia pastoris) 또는 또 다른 메틸로트로픽 효모 예컨대 한세눌라 폴리모르파(Hansenula polymorpha)에서 융합 단백질을 발현시키고, 융합 단백질을 바람직하게는 입자의 형태로 회수하여 생성될 수 있다.

융합 단백질이 피키아 파스토리스, 또는 또 다른 메틸로트로픽 효모에서 발현되는 경우에, 단백질의 발현은 AOXl 프로모터에 의해 또는 GAP 프로모터에 의해 또는 또 다른 강한 프로모터에 의해 유도될 수 있다 (Vogl & Glieder, New Biotechnology. 2012 Nov 16. pii: S 1871-6784(12)00867-9).

융합 단백질이 사카로미세스 세레비지아에에서 발현되는 경우에, 단백질의 발현은 TDH3 프로모터에 의해 또는 또 다른 강한 프로모터에 의해 유도될 수 있다.

바람직하게는 융합 단백질은 효모의 용해 시 융합 단백질이 자발적으로 다량체화하여 때때로 바이러스 유사 입자 (VLP)로 지칭되는 입자를 형성하는 충분하게 높은 수준에서 발현된다.

융합 단백질을 코딩하는 핵산, 예컨대 DNA는 효모에 의해 일시적으로 또는 구성적으로 발현될 수 있다. 융합 단백질을 코딩하는 핵산은 숙주 게놈 내로 통합될 수 있거나, 세포외 구성요소, 예컨대 플라스미드 상에 운반될 수 있다. 효모는 융합 단백질을 코딩하는 핵산의 1, 2, 3, 4, 5개 또는 그 초과의 카피를 함유할 수 있다.

융합 단백질을 코딩하는 핵산은 효모에서의 발현에 대해 코돈 최적화될 수 있다.

관련 기술분야의 통상의 기술자는 융합 단백질을 코딩하는 핵산을 발현하기에 적합한 숙주를 용이하게 제조할 수 있을 것이다.

바람직하게는 본 발명의 방법에 사용되는 사카로미세스 세레비지아에 또는 피키아 파스토리스 또는 또 다른 메틸로트로픽 효모는 융합 단백질의 일부가 아닌 임의의, 또는 임의의 유의한 B형 간염 표면 항원 단백질을 발현하지 않는다.

바람직하게는 본 발명의 방법에 사용되는 사카로미세스 세레비지아에 또는 피키아 파스토리스 또는 또 다른 메틸로트로픽 효모는 융합 단백질의 일부가 아닌 임의의, 또는 임의의 유의한 플라스모디움 팔시파룸으로부터의 CS 단백질을 발현하지 않는다.

고 수율 효모 균주, 예컨대 피키아 파스토리스에서 본 발명에 따른 입자를 발현하는 능력은 폴리펩티드의 생물제조를 단순화하고 향상시켜 제조를 위한 상품의 보다 낮은 비용을 초래할 수 있다. 이러한 비용의 절약은 저 비용 백신을 요구하는 저 소득 국가에서, 집단, 특히 아동 및 영아에서 주로 표적화되는 말라리아 백신에 대해 특히 중요하다.

폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열은 합성될 수 있다. 핵산 서열이 전사 제어 요소에 작동적으로 연결될 수 있는, 핵산 서열을 함유하는 벡터는 구축될 수 있다.

조성물은 제약 조성물일 수 있다.

조성물은 백신 조성물일 수 있다.

조성물은 적합하게는 말라리아의 예방에 사용하기 위한 것이다.

조성물은 제약학적으로 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함할 수 있다.

적합한 허용되는 부형제 및 담체는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있을 것이다. 이들은 고체 또는 액체 담체를 포함할 수 있다. 적합한 액체 담체로는 물 및 염수를 들 수 있다. 조성물의 폴리펩티드는 에멀전으로 제형화될 수 있거나, 생체분해성 마이크로구체 또는 리포솜으로 제형화될 수 있다.

조성물은 또한 조성물의 일관성을 제어하고/거나, 조성물로부터의 항원/폴리펩티드의 방출을 제어하는 중합체 또는 다른 작용제를 포함할 수 있다.

희석제로는 물, 염수, 글리세롤 또는 다른 적합한 알콜 등을 들 수 있다.

조성물은 추가의 구성성분 예컨대 습윤화제 또는 유화제; 완충제; 증점제, 예를 들어 셀룰로스 또는 셀룰로스 유도체; 보존제; 세정제, 항미생물제 등을 포함할 수 있다.

바람직하게는 조성물 중의 활성 성분은 50% 초과 순수하고, 통상적으로 80% 초과 순수하고, 종종 90% 초과 순수하고, 보다 바람직하게는 95%, 98% 또는 99% 초과 순수하다. 100% 순수한 것에 접근하는 활성 성분, 예를 들어 약 99.5% 순수한 또는 약 99.9% 순수한 것이 가장 적합하다.

본 발명의 조성물은 또한 1종 이상의 추가의 항원과의 혼합물을 포함할 수 있다. 1종 이상의 추가의 항원은 플라스모디움 팔시파룸으로부터 또는 플라스모디움(Plasmodium)의 다른 종, 예컨대 플라스모디움 비박스(Plasmodium vivax) 또는 플라스모디움 말라리아에(Plasmodium malariae)로부터 유래될 수 있다.

제약 조성물 또는 백신 조성물은 액체 형태로 또는 동결건조된 형태로 제공될 수 있다.

바람직하게는 제약 조성물 또는 백신 조성물은 플라스모디움 팔시파룸에 대한 보호적 면역 반응을 생성할 수 있다.

본원에 사용된 바와 같은 어구 "보호적 면역 반응을 생성하는"은 조성물이 그것이 투여되는 숙주 유기체, 예컨대 인간 포유동물에서 보호적 반응을 생성할 수 있음을 의미한다. 바람직하게는 보호적 면역 반응은 플라스모디움 팔시파룸에 의해 유발되는 후속 감염 또는 질환에 대해 보호한다. 보호적 면역 반응은 플라스모디움 팔시파룸의 복제를 감소시킴으로써 또는 플라스모디움 팔시파룸이 작용의 방식에 영향을 미쳐 질환을 감소시킴으로써 감염의 수준을 제거하거나 감소시킬 수 있다.

바람직하게는, 조성물이 백신으로서 사용되는 경우에, 조성물은 본 발명에 따른 폴리펩티드의 면역학적 유효량을 포함한다. 항원의 "면역학적 유효량"은 본원에 교시된 레지멘에 따라 개체에게 투여되는 경우에, 플라스모디움 팔시파룸에 의한 감염의 치료 또는 예방에 유효한 양이다. 이러한 양은 치료되는 개체의 건강 및 신체 상태에 따라 및 항원에 따라 다양할 것이다. 정확한 양은 본원에서 논의된 레지멘의 일부로서 개시된다.

조성물은 경구, 전신, 비경구, 국소, 점막, 근육내, 정맥내, 복강내, 진피내, 피하, 비내, 질내, 직장내, 경피, 설하, 흡입 또는 에어로졸 투여를 위한 것일 수 있다.

보다 적합하게는 조성물은 근육내, 피하 또는 진피내 투여를 위한 것이다.

가장 적합하게는 조성물은 근육내 투여를 위한 것이다.

가장 적합하게는 조성물은 주사를 위한 것이다.

따라서, 적합하게는 투여는 근육내, 피하 또는 진피내 투여이다.

가장 적합하게는 투여는 근육내 투여이다.

가장 적합하게는 투여는 주사에 의한 것이다.

본 발명의 조성물은 대상체에게 투여된 후에 플라스모디움 팔시파룸의 파괴 또는 불활성화를 매개하는 혈청 항체 반응을 유도할 수 있다. 본 발명의 조성물은 또한, 또는 대안적으로, 플라스모디움 팔시파룸을 중화시키는 면역 반응을 유발하고, 그에 의해 그들을 그들의 정상적인 기능을 갖는 것으로부터 예방하고, 반드시 플라스모디움 팔시파룸을 파괴하지 않고 질환 진행을 예방하거나 감소시킬 수 있다.

본 발명에 따른 조성물은 별개로 사용될 수 있거나, 이는 1종 이상의 다른 면역원성 또는 백신 조성물과, 및/또는 1종 이상의 다른 치료 레지멘과 조합될 수 있다.

적합하게는 R21 융합 단백질은 WO2014/111733에서와 같이 사용된다. 가장 바람직한 예는 서열식별번호: 1에 주어진다. 본원의 지지 데이터의 일부에 대해, 이러한 R21은 단백질 입자의 보다 용이한 면역크로마토그래피 정제를 허용하는 "C-태그"로 공지된 작은, 4개 아미노산 C-말단 연장부를 제외하고 사용되었다. 따라서, R21은 임의로 C-말단에 C-태그 (EPEA) 서열을 가질 수 있다. 이는 때때로 "R21c"로 지칭된다 - 서열식별번호: 2를 참조한다. R21c는 4개 아미노산 C-말단 연장부: EPEA (글루탐산 - 프롤린 - 글루탐산 - 알라닌)를 갖는다. 적합하게는 인간 사용을 위해 R21의 비-C-태그부착된 버전 (서열식별번호: 1) 또는 하기 구체화된 바와 같이 그에 대해 높은 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드가 사용된다.

아주반트

조성물은 아주반트를 추가로 포함할 수 있다. 아주반트는 사포닌을 함유할 수 있다. 아주반트는 아비스코, 또는 매트릭스 M일 수 있다.

아주반트는 스쿠알렌-기반 아주반트 및/또는 ISCOM-기반 아주반트, 예컨대 아비스코/매트릭스 M (웁살라에 소재하는 이스코노바(Isconova) - 현재 '노바박스 아베(Novavax AB)'로부터)일 수 있다.

아비스코-100 (GMP 표준으로 제조되는 경우에 매트릭스-M으로 공지됨)은 하기 화학적 내용물을 갖는다: 식물 퀼라자 스포나리아 몰리나(Quillaja saponaria Molina)의 조 추출물로부터 얻어진 정제된 사포닌; 라놀린(Lanolin)으로부터의 콜레스테롤 및 신선한 난황으로부터의 포스파티딜 콜린 (인지질); PBS 중, 상기 성분으로 이루어진 나노-크기 (40nm) 케이지-유사 입자의 현탁액 중.

매트릭스 M (또는 아비스코-100)은 80:20 내지 95:5, 바람직하게는 85: 15의 비로의 매트릭스 A 및 매트릭스 C의 혼합물로 이루어진다. 매트릭스 A는 T 세포 유도를 초래하고, 낮은 독성을 가지며, 매트릭스 C는 항체를 유도하고, 일부 독성을 갖는다. 매트릭스 C는 QS21에 상응하는 QS 분리의 C 분획을 함유한다. 분획 A (매트릭스 A 중)는 QS7에 상응한다.

아비스코-100 및 매트릭스-M은 각각 노바박스 아베로부터의 동일한 아주반트의 전임상 및 임상 버전이다. 아비스코-100은 GMP 표준으로 제조되는 경우에 매트릭스-M으로 공지되어 있다. 적합하게는 본 발명의 아주반트는 아비스코-100 또는 매트릭스-M이다.

가장 적합하게는 본 발명의 아주반트는 인간 사용에 임상적으로 허용되는 이점을 갖는 매트릭스-M이다.

가장 적합하게는 매트릭스-M은 스웨덴 SE-753 18 웁살라 쿵그스가탄 109에 소재하는 노바박스 아베로부터의 것이다.

구성요소의 비

적합하게는 항원 (예컨대 R21) 및 아주반트 (예컨대 매트릭스-M)는 본원에 개시된 비로 투여되거나, 조성물에 존재한다.

맥락으로부터 달리 명백하지 않다면, 본원에서 언급된 용량은 인간에 대한 것이다.

맥락으로부터 달리 명백하지 않다면, 본원에서 언급된 조성물의 구성요소의 양은 '용량당' 주어진다. 물론, 언급된 조성물의 보다 큰 배치를 제조하고, 예를 들어 투여 전에 또는 분배/수송 전에 이를 분할하거나, 이를 나중에 용량으로 분취하는 것이 바람직할 수 있다.

용량

용량은 인간 대상체에게의 단일 투여를 위한 조성물의 양이다.

따라서, 본 발명의 조성물은 다중 용량을 함유하는 양으로 제공될 수 있음이 인정될 수 있다. 이는 예를 들어 패킹 및 분배의 비용을 최소화하는데 유용하다 - 다중 용량을 함유하는 단일 바이알은 바이알당 1회 용량보다 더 낮은 비용을 위해 수송/냉장될 수 있다. 용량은 투여의 시점에서 간단하게 빼낼 수 있다. 단일 바이알은 투여되는 용량의 수에 대한 조성물의 양을 함유할 수 있다. 조성물의 양은 예를 들어 조성물의 양이 표면 장력으로 인해 바이알로부터 빼낼 수 없거나, 투여의 프로세스 동안 에어 버블 또는 에어록을 도입할 위험성의 경우에, 오차의 여지를 제공하기 위해 '오버패킹될' 수 있다. 따라서, 한 실시양태에서, 본 발명은 본 발명에 따른 조성물의 적어도 2회 용량, 보다 적합하게는 본 발명에 따른 조성물의 적어도 3회 용량, 보다 적합하게는 본 발명에 따른 조성물의 적어도 2회 용량 플러스 10%, 보다 적합하게는 본 발명에 따른 조성물의 적어도 3회 용량 플러스 10%를 함유하는 바이알에 관한 것이다.

일부 실시양태에서, 제공되거나 투여되는 용량은 상이한 항원 양 예컨대 상이한 R21 양을 가질 수 있다. 이와 관련하여, '최종' 조성물은 그의 통상적인 의미, 즉, 면역화 (면역화의 과정)의 단일 레지멘에서 대상체에게 투여되는 마지막 조성물을 가질 것이다.

예를 들어, 제1 용량에 대해 R21 양은 상기 기재된 바와 같을 것이며, 예를 들어 적어도 18세의 대상체에 대해 투여당 1 μg 내지 20 μg R21, 또는 18세 미만의 대상체에 대해 투여당 0.5 μg 내지 10 μg R21일 것이다. 최종 용량 (즉, 2회 용량 레지멘에서 제2 용량 및 3회 용량 레지멘에서 제3 용량)에 대해, R21 양은 2 내지 10배 감소될, 가장 적합하게는 5배 감소될 수 있다. 다시 말해서, 최종 용량 (즉, 2회 용량 레지멘에서 제2 용량 및 3회 용량 레지멘에서 제3 용량)에 대해, R21 양은 제1 용량에서 양의 10 내지 50%, 가장 적합하게는 제1 용량에서 양의 20%일 수 있다.

다른 실시양태에서, 최종 용량은 제1 용량 중 양의 R21 양 100%를 갖는다.

다른 실시양태에서, 각각의 용량은 동일한 R21 양을 갖는다.

명확하게, 제1 용량 중 양은 편리하게는 범위로 표현되지만, 투여되는 실제 양은 예를 들어 조작자 선택에 따라, 또는 대상체의 중량에 따라, 또는 대상체의 연령에 따라 등으로 절대값을 가질 것이다. 따라서, 최종 용량에서의 양은 또한 제1 용량에서 투여되는 실제 양을 참조로 절대값을 가질 것이다. 적합하게는 제1 용량에서 투여되는 실제 양은 기록된다. 적합하게는 최종 용량에서의 양은 제1 용량에서 투여되는 상기 기록된 실제 양을 참조로 계산된다.

예로서, 적어도 18세의 대상체에 대한 제1 용량이 10 μg R21을 포함하는 경우에, 한 실시양태에서 적합하게는 최종 용량은 1 내지 5 μg R21, 가장 적합하게는 2 μg R21을 포함한다.

한 실시양태에서, 투여량 레지멘은 2회 용량을 포함할 수 있다 - 10 μg R21로의 제1 용량, 및 1 내지 5 μg R21, 가장 적합하게는 2 μg R21로의 최종 용량.

한 실시양태에서, 투여량 레지멘은 3회 용량을 포함할 수 있다 - 10 μg R21로의 제1 용량, 제1 용량과 동일한 제2 용량 (즉, 10 μg R21로의 제2 용량) 및 1 내지 5 μg R21, 가장 적합하게는 2 μg R21로의 최종 용량.

적합하게는 본 발명에 따른 키트는 인간 대상체에게의 투여에 대한 지침서를 포함한다. 적합하게는 상기 지침서는 항원의 투여량, 아주반트의 투여량, 용량의 수, 용량 사이의 간격, 및 투여의 경로 중 하나 이상을 명시하며, 이들 각각은 본원에 기재된 바와 같다.

적합하게는 상기 지침서는 인쇄된 지침서이다. 적합하게는 상기 지침서는 라벨 상에 인쇄될 수 있다. 상기 라벨은 조성물을 함유하는 용기에 부착될 수 있다.

한 실시양태에서, 10 μg R21/ 50 μg 매트릭스 M1로의 백신접종이 사용된다.

한 실시양태에서, 10 μg R21/ 50 μg 매트릭스 M1 (제8주에서의 제3을 포함함)로의 3회의 백신접종이 사용된다. 한 실시양태에서, 제8주에 10 μg R21/ 50 μg 매트릭스 M1로의 백신접종이 사용되며, 최종 (예를 들어 제3) 용량은 50 mcg에서 10 mcg으로 감소된다.

한 실시양태에서, 3회 용량 레지멘이 바람직하다. 3회 용량 레지멘 (때때로 '표준 레지멘'으로 지칭됨)은 82% 효능을 제공하도록 매우 잘 작동한다. 가장 적합하게는 3회 용량은 4주의 간격으로 주어진다.

본 발명자들은 2회 용량이 충분할 수 있는 면역 반응으로부터의 증거를 생성하였다. 2회 용량 레지멘은 실시에서 매우 유익할 것이며, 2회 용량으로의 양호한 효능을 입증하는 것은 돌파구를 나타낸다. 단지 2회 용량을 제공하는 것은 비용 및 투여에서의 노동을 절약하며, 추가적으로 보다 높은 비율의 대상체가 그들의 용량의 과정을 완료하는 것을 용이하게 한다.

* 상이한 연령의 18세 미만의 대상체는 상이한 중량을 가질 수 있으며, 의사는 용량을 투여하는 경우에 전형적으로 이를 고려할 것이다. 특히, 2 내지 12개월의 영아는 중량이 상기 제시된 값 미만일 수 있다 - 본원에서 제공된 mg/Kg으로의 용량은 용량이 투여될 것인 대상체의 중량을 고려하여 상응하는 용량을 계산하는데 간단하게 사용될 수 있다.

간격

맥락으로부터 달리 명백하지 않다면, 간격은 용량 사이의 시간이다. 주어진 제1 용량은 '제0일/제0일'이다. 간격은 다음 용량까지의 시간이다.

적합하게는 2일 내지 12개월의 간격이 사용될 수 있다.

보다 적합하게는 1주 내지 12주의 간격이 사용된다.

보다 적합하게는 3주 내지 12주의 간격이 사용된다.

가장 적합하게는 4주의 간격이 사용된다.

예를 들어, 하기 백신 레지멘이 사용될 수 있다:

그룹 1 백신접종- 제0주, 제4주 및 제8주에

그룹 2 백신접종- 제0주, 제4주 및 제8주에

그룹 3 백신접종- 제1주 및 제9주 (또는 다른 편리한 시점)에 바이러스-벡터화된 백신 외에도 제0주, 제4주 및 제8주에.

보다 적합하게는 그룹 3 백신접종- 제1주 및 제9주에 바이러스-벡터화된 백신 외에도 제0주, 제4주 및 제8주에.

간섭

추가의 이점은 간섭 문제를 감소시키거나 회피하는 것일 수 있다.

피. 팔시파룸 (예를 들어 R21을 사용함으로써) 및 피. 비박스 말라리아 둘 다에 대한 보호를 제공하는 것이 바람직하다. 따라서 일부 실시양태에서 본 발명은 둘 다의 병원체에 대한 면역화를 위한 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 유리하게는 이러한 접근법으로 예상될 수 있는 간섭 문제를 회피하거나 감소시킨다.

적합하게는 피. 비박스에 대한 보호는 Rv21의 투여에 의해 달성된다. 적합하게는 Rv21은 구체적으로 Rv21 VLP의 구축에 대해 본원에 참조로 포함되는 문헌 [Salman et al. 2017 (Rational development of a protective P. vivax vaccine evaluated with transgenic rodent parasite challenge models. Sci. Rep. 7, 46482)]에 기재된 바와 같다.

보다 상세하게는, Rv21은 임의로 C-말단에 위치한 4개 아미노산 C-태그 서열 (Glu-Pro-Glu-Ala)을 갖는, B형 간염 표면 항원 (HepB-S) 유전자에 융합된 키메라 PvCSP VK210/VK247 중심 반복부 및 CSP C-말단 서열로 이루어진 바이러스 유사 입자 (VLP)이다. 태그는 인간 사용을 위해 생략되거나 포함될 수 있다 - 예를 들어 실시예 섹션에 기재된 임상 시험에서, 태그는 포함된다. 가장 적합하게는 태그는 인간 사용을 위해 생략된다. 융합 유전자의 코돈 사용은 피키아 파스토리스에서의 발현을 위해 최적화되었으며, 세포내 융합 단백질 (PvCSP-HepB-S)의 생산은 시간 과정 연구 발현을 사용하여 3가지 프로테아제 넉아웃 균주 및 프로테아제 야생형 피. 파스토리스 균주에서 평가되었다. prb1 및 pep4 프로테아제에 대한 이중 넉-아웃 피. 파스토리스 균주는 메탄올 유도의 108시간 후에 최적 단백질 발현 수준을 가졌다. 융합 단백질 PvCSP-HepB S의 존재는 PvCSP VK210, PvCSP VK247 및 HepB S에 대한 항체를 사용한 웨스턴 블롯 분석에 의해 확인되었다. Rv21 단백질의 존재, 크기 및 순도는 민감성 은 염색 기법을 사용하여 수행되었다.

융합 단백질 VLP의 정제에 사용되는 프로토콜은 R21에 대해 사용되었으며, 2 단계를 포함하였다 (Collins, Brod et al. Scientific Reports, 2017). 첫번째는 중성 조건 하에서 융합 단백질에 결합된 포획 선택 C-태그 매트릭스를 사용한 친화성 정제로 이루어졌다. PvCSP-HepB S 단백질에 상응하는 예상된 단백질 밴드를 수집하는 것 외에도, 샘플은 또한 추가의 단백질을 함유하였다. VLP 입자 어셈블리를 투과 전자 현미경검사 (TEM)를 사용하여 검출하였다. 후속 정제 단계는 상이한 분자 크기를 갖는 다른 단백질로부터 샘플을 청소하고, 고 농도의 염 (용리 완충제)을 제거하기 위해 크기 배제 크로마토그래피에 의해 수행되었다. PvCSP-HepB S 단백질 (75 kDa)의 예상된 크기의 단일 단백질 밴드를 은 염색 기법을 사용하여 가시화하였으며, TEM은 아마도 표면 상에 PvCSP 단백질 존재로 인한, 표면 상에 일부 돌기 또는 스파이크를 갖는 구 형상을 갖는 VLP의 보다 동종 집단을 제시하였다. 정제된 Rv21을, 0.5 μ g/마우스의 낮은 용량을 사용하고, 면역화 사이에 1주의 간격을 사용한 상동성 프라임-부스트 면역화 프로토콜을 채용하여, 마우스를 면역화하는데 사용하였다. RTS,S 백신접종에 표준적으로 사용되는 ASO1 아주반트를 투여하기 보다는, 매트릭스-M 아주반트 (노바박스 아베, 스웨덴 웁살라)를 사용하여 Rv21의 면역원성 및 보호적 효능을 향상시켰다. 매트릭스-M은 인간 사용에 적합하며, 면역 세포를 배수 림프절 및 비장에 활성화시키고 동원할 수 있는 사포닌-기반 40 nm 입자로 이루어진다.

본 발명의 레지멘은 이들 Rv21과 함께 R21을 혼합물로서 (예를 들어 상기와 같이 2 내지 3회 용량으로) 투여한다.

유리하게는 이러한 레지멘은 (하나의 다른 것과의) 비-간섭의 이점을 갖는다.

따라서, 한 실시양태에서, 본 발명은 Rv21을 추가로 포함하는 상기 기재된 바와 같은 조성물을 제공한다.

본 발명의 조성물이 Rv21을 추가로 포함하는 경우에, 적합하게는 사용되는 Rv21의 양은 R21에 대한 것과 거의, 가장 적합하게는 R21에 대한 것과 정확하게 동일해야 한다.

추가의 실시양태

한 실시양태에서, 용량은 50 mcg 매트릭스-M 중 10mcg R21 (성인에 대해) (즉, 비 R21:매트릭스-M= 1:5), 및/또는 50 mcg 매트릭스-M 중 5 mcg R21 (아동에 대해) (즉, 비 R21:매트릭스-M = 1:10)을 포함하거나 또는 그로 이루어진다.

한 실시양태에서, 용량은 아주반트 예컨대 매트릭스-M의 일정한 양을 포함한다. 이러한 일정한 양은 50 mcg 매트릭스-M일 수 있다. 따라서, 본 발명은 50 mcg 매트릭스-M 중 10mcg R21; 또는 50 mcg 매트릭스-M 중 5mcg R21; 또는 50 mcg 매트릭스-M 중 2mcg R21을 포함하거나 또는 그로 이루어진 1회 이상의 용량(들)을 제공한다. 50 mcg 매트릭스-M 양은 성인 (적어도 18세의 대상체)에 대한 및/또는 아동 (18세 미만의 대상체)에 대한 것일 수 있다. 명확하게, 항원 예컨대 R21의 양은 여전히 본원에서 주어진 지침에 따라 주의깊게 선택되어야 한다.

이점

문헌 [Salman et al. 2017 (Rational development of a protective P. vivax vaccine evaluated with transgenic rodent parasite challenge models. Sci. Rep. 7, 46482)]과 같은 문서, 및 상기 배경기술 섹션에 인용된 바와 같은 피. 팔시파룸/R21을 다루고 있는 보다 관련된 문서는 마우스에 초점을 맞춘다. 마우스는 인간에서의 백신에 요구되는 투여량에 대한 매우 빈약한 가이드이며, 이는 예를 들어 임상 시험에서 측정되어야 한다. 마우스는 전형적으로 20 그램이고, 인간 성인은 중량이 전형적으로 60-80 킬로그램이며, 이는 3000 - 4000배 차이이다. 따라서, 마우스에서 작동하는 1 mcg 용량의 간단한 외삽은 인간에서 3000-4000 mcg를 요구할 것이다. 그러나, 보다 양호한 가이드는 인간에서 사용되는 다른 유사한 백신의 용량이다. R21과 가장 가깝게 관련된 백신은 표준 성인 투여량이 50 mcg인 RTS,S이다. 이는 본 발명자들의 처음에 그들의 첫번째 2종의 임상 시험 (Vac053 및 Vac056)에서 50 mcg을 시험한 이유이다. 그러나, 후속 면역화에서, 인간 성인에서 1 내지 20 mcg, 특히 10 mcg, 및 심지어 2 mcg이 R21의 적합한 용량임이 놀랍게도 밝혀졌다. 이들 투여량은 RTS,S로 동일한 면역 반응을 생성하는데 요구되는 것보다 2.5배, 5배 및 25배 더 낮다 - 이는 매우 놀라운 발견이다. 살만(Salman) 등 (동일 문헌에서)은 Rv21에 대해 20 그램 마우스에서 효능을 위한 요구되는 용량이 용량당 5 mcg 또는 0.5 mcg 중 어느 하나임을 제시하였으며, 이는 인간에서의 용량이 인간의 >3000 더 큰 질량 때문에, 적어도 50 mcg, 및 아마도 실질적으로 더 많을 것임을 시사한다.

문헌 [Collins et al. 2017]은 궁극적으로 R21과 바이러스 기반 벡터 예컨대 PbTRAP-기반 바이러스 벡터의 조합을 권고한다. 대조적으로, 본 발명은 보호적 효능을 위해 R21, 및 특히 지극히 낮은 용량 (콜린스 등에 의해 교시된 것들보다 2 내지 3 자릿수 더 낮은)으로의 R21의 투여에 관한 것이다. 이는 사용되는 이례적으로 낮은 용량으로 인해 그 자체로 놀라운 것이다. 더욱이, 이는 본 발명은 특정한 용량 및 투여 레지멘이 다른 벡터 예컨대 PbTRAP-기반 바이러스 벡터와의 조합에 대한 필요 없이 이들 효과를 생성함을 제시하기 때문에 콜린스 등의 교시의 관점에서 더욱 놀라운 것이며, 이는 본 발명의 추가의 이점이다.

선행 기술로부터의 단순 외삽은 가능하지 않으며, 본원에 교시된 낮은 용량으로의 매우 높은 면역원성 및 효능은 본 발명자들에게 진정으로 놀라운 것이다. 또한, 낮은 용량으로의 명백하게 개선된 안전성 프로파일은 또 다른 놀라운 기술적 유익이며, 본 발명자들 자신이 예상하지 않았던 것이다. 따라서, 관련 기술분야에 대한 핵심적 기여는 본원에 교시된 낮은 용량 접근법 (조성물/레지멘)이다. 이러한 접근법은 제조 (낮은 비용), 안전성 (입증된 더 적은 부작용) 뿐만 아니라 반응의 내구성에 대한 유용성을 갖는다: 전체 용량 (50 mcg)보다 낮은 용량 (1 내지 20 mcg, 가장 적합하게는 10 mcg)으로 유의하게 더 양호함.

또한, 2 - 용량 레지멘을 포함하는 실시양태에 대한 구체적인 유익이 있다; 3회보다는 오히려 2회 용량으로 인간 대상체 예컨대 영아를 보호하는 것은 개발 도상국 전개를 위한 큰 유익 - 따라서, 물류적 유익 뿐만 아니라 상품의 감소된 비용에 대한 유익 (즉, 보다 적은 용량의 감소된 비용), 뿐만 아니라 개선된 안전성 및 내구성 (이는 보다 낮은 용량이 또한 제공하는 이점임)일 수 있다.

상기 언급된 바와 같이, 조합(들)으로의 간섭은 관련 기술분야에서의 도전과제이다. 마우스에서, 본 발명자들은 이를 시험하였다. 본 발명자들은 혼합된 서브유닛 백신으로의 간섭이 종종 있다는 충분한 증거가 있음을 주장하며; 본원에 기재된 접근법은 비-간섭의 추가의 유익을 갖는다. 이러한 맥락에서, 조합은 Rv21과 R21이다.

추가의 특정한 및 바람직한 측면은 첨부된 독립항 및 종속항에 제시된다. 종속항의 특색은 적절할 경우에 독립항의 특색과, 및 청구범위에 명백하게 제시된 것들 외의 조합으로 조합될 수 있다.

장치 특색이 기능을 제공하기 위해 작동가능한 것으로 기재되는 경우에, 이는 그 기능을 제공하거나 그 기능을 제공하도록 개조되거나 구성된 장치 특색을 포함함이 인정될 것이다.

본 발명의 실시양태는 이하 첨부된 도면을 참조로 추가로 설명될 것이다:
도 1은 다이어그램을 제시한다. R21 및 RTS,S 백신 바이러스-유사 입자의 일부 특징의 비교. RTS,S 입자와 비교 시 R21 VLP의 표면 상의 CSP 서열의 보다 큰 밀도는 R21 백신의 바람직한 특징 예컨대 HBsAg 서열에 대한 항체의 유의한 수준의 유도의 결여와 관련될 수 있다.
도 2는 플로우 차트를 제시한다. 주요 임상 센터로서 옥스포트로 영국에서 수행된 R21 백신의 Vac053 I상 임상 시험 (Venkatraman et al.). 75명의 대상체를 적격성에 대해 스크리닝하고, 31명을 등록하였다. 그룹 2에서의 대상체는 R21과 함께 아주반트를 받지 않았음을 주목한다. 도면에 제시된 바와 같은 R21의 용량. 그룹 1, 3 및 4에서, 매트릭스-M의 용량은 모든 대상체에서 50 마이크로그램이었다.
도 3은 막대 차트를 제시한다. R21/매트릭스-M 50μg RTS,S/AS01 vs 10μg R21/매트릭스-M에 대한 보다 양호한 안전성 프로파일. RTS,S/AS01 (50 mcg의 RTS,S와 비교된 매트릭스-M 아주반트 (50 mcg) 중 R21 (10 mcg)의 안전성 프로파일. 국소 및 전신 유해 사건을 1 (가장 덜함) 내지 3 (가장 중증)의 표준 중증도 스케일로 등급화하였다. R21/매트릭스-M의 반응원성 프로파일은 제2 용량 후에 (데이터는 제시되지 않음) 및 또한 제1 용량 후에 (데이터는 제시되지 않음) RTS,S/AS01보다 통계적으로 유의하게 더 양호하였다. 제3 용량 후, 다시 R21/매트릭스-M의 안전성 프로파일은 더 양호하였지만, 유의하게 그렇지는 않았다.
도 4A 및 4B는 막대 차트를 제시한다. 낮은 용량 2μg R21/매트릭스-M의 우수한 안전성 프로파일이 제시되어 있다. R21/매트릭스-M의 안전성 프로파일은 R21 (그러나 매트릭스-M은 그렇지 않음)의 용량을 단지 2 마이크로그램으로 추가로 감소시킴으로써 추가로 개선되었다 (도 4B).
도 5는 그래프를 제시한다. R21 임상 면역원성 데이터가 제시되어 있으며; 도 5A는 매트릭스-M에 의존하는 면역원성을 제시하며; 도 5B는 50μg RTS,S/AS01B와 필적하는 10μg R21/MM을 제시한다.
도 5A: VAC53에서의 CSP의 NANP 반복부 영역에 대한 IgG의 중위 시간 과정. 제시된 시간 과정은 그룹 1 (="G1") (매트릭스-M (여기서 MM으로 약칭됨) 중 10ug R21), G2 (아주반트를 갖지 않는 50ug (= 50 마이크로그램) R21) 및 G3 (MM 중 50ug R21)에 대해 중위이며, 추적을 완료한 모든 자원자에 대한 데이터를 사용하여 계산된다: G1 n=10, G2 n=3, G3 n=8. 중위 NANP-특이적 IgG 수준은 제2 및 제3 백신접종 후에 비아주반트화된 R21을 받은 그룹과 비교 시 아주반트화된 그룹에서 유의하게 더 높았다. NANP-특이적 IgG는 제3 백신접종 후에 다시 부스팅되었지만, 단지 MM 중 R21을 받은 그룹에서만이었다. NANP에 대한 가장 높은 중위 항체 반응은 제3 백신접종 후 2주에 10ug R21/MM 그룹에서 관찰되었다.
도 5B: NANP-특이적 IgG의 평균 시간 과정은 VAC53에서 G1 및 G3에 대해 및 제0주, 제4주 및 제8주에 50ug RTS,S/AS01B를 받은 자원자에서 VAC55 시험 (NCT:01883609)에서 나타난 반응과 비교하여 제시되어 있다. 평균 NANP-특이적 IgG 수준은 각각의 백신접종 후에 10ug R21/MM 및 50ug RTS,S/AS01B 그룹 사이에 필적하다.
NANP에 대한 항체 반응은 효소-결합 면역흡착 검정 (ELISA)을 사용하여 분석되며, 문헌 [Rampling et al. (J Infect Dis (2016) 214 (5): 772-781. DOI: https://doi.org/10.1093/infdis/jiw244)]에 의해 공개된 바와 같이 수행되었다. NANP-특이적 IgG에 대해 양성인 혈청의 풀을 사용하여 각각의 플레이트 상에 표준 곡선을 형성하였다. 임의적 ELISA 단위 (EU)를 샘플의 광학 밀도 (OD405) 및 표준 곡선의 파라미터에 기초하여 각각의 샘플에 대해 계산하였다.
도 6은 플롯을 제시한다. 항체 반응의 내구성; 10μg R21은 6개월에서 50μg R21보다 유의하게 더 높은 항체 역가를 생성하였다.
도 5에서 사용된 표준화된 ELISA 방법을 사용하여 측정된 NANP-특이적 IgG 반응의 내구성. NANP-특이적 IgG를 제238일 (D238)에 VAC53 G1 및 G3 자원자에 대해 측정하였다. 이러한 늦은 시점에서, 항체 수준은 50ug R21/MM 그룹과 비교 시 10ug R21/MM 그룹에서 유의하게 더 높았으며 (만-휘트니 분석, P=0.02, 선은 중위를 제시함), 이는 백신의 보다 낮은 용량으로의 놀랍게도 보다 양호한 내구성을 지시한다.
도 7은 플롯을 제시한다. 보다 낮은 용량 레지멘은 질적으로 상이한 Tfh 반응 및 증가된 B 세포를 유도한다.
제C-1일 (D76)로 나타내어진, 말라리아 챌린지 전 1일의 시점에서 VAC65 자원자로부터의 말초 혈액 단핵세포 (PBMC)에서의 총 순환 T 소포성 헬퍼 세포 (cTfh) 및 B 세포의 표현형분석. 10ug R21/MM 및 50ug R21/MM의 비교. cTfh의 표현형분석은 세포를 특이적 마커에 대한 형광 표지된 항체로 염색함으로써 달성되며, 유동 세포측정법에 의해 분석된다. 순환 Tfh는 PD1+CXCR5+CD45RA-CD4+ T 세포인 단일의 살아있는 림프구로서 정의되며, 케모카인 수용체 CXCR3 및 CCR6의 발현에 의해 하기로서 하위세트로 더 나누어진다: 이전에 공개된 바와 같이 (Schmitt, Bentebibel and Ueno, Trends in Immunology, 2014. DOI: http://dx.doi.org/10.1016/j.it.2014.06.002) Tfh17 (CXCR3-CCR6+), 이중 양성/dp (CXCR3+CCR6+), Tfh1 (CXCR3+CCR6-) 및 Tfh2 (CXCR3-CCR6-). B 세포를 CD19, CD20, CD21, CD27, IgD, IgG 및 IgM에 대한 마커를 사용하여 동일한 방식으로 표현형분석하였다. CD19+CD20+ B 세포는 IgD 및 CD27의 발현에 의해 이전에 공개된 바와 같이 (Sanz et al. Semin Immunol 2008 DOI: 10.1016/j.smim.2007.12.006) "스위칭된 기억" (IgD-CD27+), "비-스위칭된 기억" (IgD+CD27+), "이중 음성" (IgD-CD27-) 또는 "미감작" (IgD+CD27+)으로서 분류되었다.
↑ 총 B 세포; ↑ 스위칭된 기억 B 세포 (IgD-CD27+); ↑ IgG+ MBC; ↑ IgG:IgM.
도 7A: 총 cTfh 내의 하위세트의 백분율. G1 (10,10,10ug R21/MM)은 G2 (50,50,10ug R21/MM, 만-휘트니 분석, P=0.0018)보다 Tfh2 cTfh의 유의하게 더 높은 비율을 갖는다. R21/MM의 더 낮은 용량으로의 이러한 더 높은 Tfh2 반응은 백신의 보다 낮은 용량의 보다 양호한 성능을 설명할 수 있다.
박스표시된 섹션 (화살표로)은 CXCR3-CCR6- cTfh가 B 세포에 도움을 제공하는데 있어서 보다 양호함을 지시한다 (Locci et al. Immunity 2013).
도 7B: 림프구 내의 CD19+CD20+ B 세포의 백분율. 50,50,10ug R21/MM 그룹보다 10,10,10ug R21/MM 그룹에서 림프구 내의 CD19+CD20+ B 세포의 유의하게 더 높은 백분율 (만-휘트니 분석, P=0.0104).
도 7C: 림프구 내의 스위칭된 기억 B 세포 (CD19+CD20+IgD-CD27+)의 백분율. 10,10,10ug R21/MM 그룹에서 림프구 내의 스위칭된 기억 B 세포의 유의하게 더 높은 백분율이 있으며 (만-휘트니 분석, P=0.0004), 이는 다시 백신의 보다 낮은 용량의 보다 양호한 성능과 관련될 수 있다.
도 8은 플롯을 제시한다. 매우 낮은 2μg 용량 R21/매트릭스-M; 이러한 매우 낮은 용량으로 여전히 높은 면역원성; 반응원성은 이러한 매우 낮은 용량에서 최소인 것으로 밝혀졌다.
도 5 및 6에서와 같이 ELISA에 의해 측정된 NANP-특이적 IgG 반응. MM 중 2, 10 또는 50ug R21로 백신접종된 자원자에서 VAC53에서 제28일 (D28), D56 및 D84에서의 NANP-특이적 항체 반응의 비교. 검정을 시험의 시간에 이용가능한 모든 샘플에 대해 완료하였다 - 일부 자원자는 이들 시점을 아직 통과하지 않았다. 각각의 시점에서의 다중 비교를 위한 던 검정을 갖는 크루스칼-월리스 (Kruskal-Wallis) 분석은 D28 및 D56에서 2ug 그룹에서 유의하게 더 낮은 역가를 제시하지만, 제84일에서는 그렇지 않다 (D28, D56 및 D84에 각각 크루스칼-월리스 P=0.022, P=0.050 및 P=0.212). 선은 각각의 시점에서 각각의 그룹에서의 중위를 지시하였다. 용량 그룹에 걸친 제84일에서의 유사한 역가는 R21의 심지어 이러한 매우 낮은 용량이 양호하게 보호적일 수 있음을 시사한다.
도 9는 표를 제시한다. VAC065 - I/IIa상 포자소체 챌린지 연구; 31명의 백신접종자 (그룹 1, 2, 및 3에서 11명, 11명, 9명) & 6명의 대조군은 2017년 1월 30일 및 31일에 CHMI를 겪었다.
2016-2017년에 옥스포드에서 수행된 IIa상 제어된 인간 말라리아 감염 (CHMI) 시험인 Vac065 내의 설계 및 그룹의 요약.
도 10은 그래프를 제시한다. 낮은 용량 R21/매트릭스-M으로의 82% 효능.

Vac065 CHMI 시험에서 그룹 1 내지 3에서의 3가지 백신 레지멘의 효능의 요약. 가장 높은 효능은 놀랍게도 50 마이크로그램의 매트릭스-M 중 10 마이크로그램의 R21의 3회의 매주 4회 용량이 1:5의 백신 대 아주반트 비로 사용된 그룹 1의 간단한 낮은 용량 레지멘으로 관찰되었다. 보다 낮은 효능은 다른 그룹에서 관찰되었다. 말라리아 진단까지의 시간의 카플란-마이어 곡선은 그룹 1에서 말라리아를 발병한 (11명 중) 2명의 백신접종자가 수 일 후에, 그 후 대조군 대상체에서 그렇게 되었음을 제시한다. 이는 백신이 기생충이 나중에 검출되도록 혈액-단계 감염을 초래하는 기생충의 수를 감소시킴을 지시한다. 따라서, 이들 2명의 대상체에서, 부분적 백신 효능의 명백한 증거가 있었다.
도 11은 그래프를 제시한다. 10μg의 R21/매트릭스-M vs 50μg의 RTS,S/AS01의 3회 용량의 효능.
동일한 시험에서 비-백신접종된 대조군과 비교된, 영국 및 미국에서 이전의 CHMI 시험에서, AS01 중 50 mcg의 RTS,S로의 표준 0, 4, 8주 레지멘에서 사용된, 매트릭스-M 백신 중 R21의 효능 대 RTS,S/AS01 백신의 효능의 비교. R21 백신의 효능은 58%인 RTS,S 백신의 그것보다 82%에서 더 높으며, 이러한 차이는 통계적 유의성에 접근한다 (양측 P 값 = 0.16; 단측 P 값 = 0.08).
도 12는 그래프를 제시한다. R21/매트릭스-M의 2회 용량 후의 면역원성은 3회 (제0일, 제28일, 제56일 레지멘) 후보다 더 높을 수 있다.
기하 평균 NANP IgG 시간 경과 (이전의 도면과 동일한 ELISA 방법을 사용하여 측정됨). 시간 과정은 VAC55 G2 및 VAC59 G1에서 10ug R21/MM (VAC53 G1) 및 50ug RTS,S/AS01B에 대해 제시되어 있다. 제2 백신접종 후의 항체 반응은 50ug RTS,S/AS01B 그룹 중 어느 하나와 비교 시 10ug R21/MM 그룹에서 유의하게 더 높다. 이들 역가는 제3 백신접종에 의해 재-부스팅되지만, 이들은 피크 제2 용량후에 필적하는 수준으로 부스팅되며, 제2 백신접종 후보다 더 급속하게 떨어진다. 3회 용량 후에 관찰된 수준에 대해 역가에서 필적하는 단지 2회 용량 후의 이러한 높은 수준 면역원성은 예상치 않게, R21의 2회 용량 레지멘이 유의한 효능을 제공할 수 있음을 (3회 용량 레지멘에서와 같이) 강하게 시사한다.
도 13은 그래프를 제시한다.
도 14는 플롯을 제시한다.
도 15는 플롯을 제시한다.
도 16은 플롯을 제시한다.

실시예

실시예 1: R21 +/- ChAd63/MVA ME-TRAP의 안전성 및 효능 연구

후원자:

유니버시티 오브 옥스포드

(책임있는 기관)에 의해 제공된 정보:

유니버시티 오브 옥스포드

ClinicalTrials.gov 식별자:

NCT02905019

목적

본 연구의 목적은 건강한 말라리아-미감작 자원자에서 말라리아 포자소체 챌린지에 대한 단독으로 및 바이러스-벡터화된 백신 레지멘과 조합으로 (아주반트화된 R21 + ChAd63 및 MVA 코딩 ME-TRAP로 구성됨) 아주반트화된 R21의 안전성 및 효능을 평가하는 것이다.

건강한 성인 자원자는 런던, 옥스포드 및 사우스앰프턴에서 모집될 것이다.

모든 백신접종은 근육내로 투여될 것이다. 연구는 2회, 3회 또는 5회 백신접종 중 어느 하나를 갖고, 그 후 말라리아로의 챌린지 감염을 겪거나, 백신접종을 받지 않고, 그 후 말라리아로의 챌린지 감염을 겪는 것을 포함한다.

연구 유형: 개입적

연구 설계: 할당: 무작위

개입 모델: 병렬 배정

마스킹: 결과물 평가자

1차 목적: 예방

공식 표제: 2종의 상이한 용량에서의 아주반트화된 R21 및 아주반트화된 R21 + ChAd63 및 MVA 코딩 ME-TRAP의 조합 말라리아 백신 후보 레지멘의 안전성 및 보호적 효능을 평가하기 위한 I/IIa상 포자소체 챌린지 연구.

NLM에 의해 제공된 리소스 링크:

메드라인플러스(MedlinePlus) 관련된 주제: 말라리아

유전적 및 희귀 질환 정보 센터 (Genetic and Rare Diseases Information Center) 리소스: 말라리아

미국 FDA 리소스

유니버시티 오브 옥스포드에 의해 제공된 바와 같은 추가의 연구 상세사항:

1차 결과물 척도:

완전히 보호된 개체의 수에 의해 평가된 바와 같은 건강한 말라리아-미감작 자원자에서의 2종의 상이한 용량에서의 아주반트화된 R21 및 아주반트화된 R21 + ChAd63 및 MVA 코딩 ME-TRAP의 효능. [ 기간: 6개월 ]

통계적 분석을 사용하여 대조군과 비교된 백신 그룹에서의 완전히 보호된 개체 (포자소체 챌린지 후 제21일까지 혈액 슬라이드에 의해 평가된 피. 팔시파룸 기생충혈증의 발생에 의해 측정된 혈액 단계 감염을 발병하지 않는 개체들)의 수를 비교한다.

유해 사건의 빈도에 의해 평가된 바와 같은 건강한 말라리아-미감작 자원자에서의 2종의 상이한 용량에서의 아주반트화된 R21 및 아주반트화된 R21 + ChAd63 및 MVA 코딩 ME-TRAP의 안전성. [ 기간: 6개월 ]

명시된 및 비명시된 유해 사건 데이터는 각각의 클리닉 방문에서 다이어리 카드, 임상적 검토, 임상적 조사 (관찰을 포함함) 및 실험실 결과로부터 수집될 것이다. 이러한 AE 데이터는 표로 작성되고, AE의 빈도, 지속기간 및 중증도가 그룹 사이에 비교될 것이다.

2차 결과물 척도:

말라리아 미감작 개체에서 2종의 상이한 용량에서의 아주반트화된 R21로 생성된 체액성 면역원성 [ 기간: 6개월 ]

아주반트화된 R21로의 백신접종에 의해 생성된 환상포자소체 단백질에 대한 항체 반응.

말라리아 미감작 개체에서 ChAd63 및 MVA 코딩 ME-TRAP로 생성된 세포-매개된 면역원성 [ 기간: 6개월 ]

ChAd63 및 MVA 코딩 ME-TRAP로의 백신접종에 의해 생성된 말라리아 기생충의 TRAP 항원에 대한 T-세포 반응.

건강한 말라리아-미감작 자원자에서, 말라리아 포자소체 챌린지에 대해 PCR에 의해 평가된 피. 팔시파룸 기생충혈증까지의 시간으로서 측정된 효능. [ 기간: 6개월 ]

정량적 PCR에 의한 말초 혈액 중 500개 이상의 기생충/ml에 의해 정의된 바와 같은 혈액 단계 감염을 사용한 통계적 분석.

건강한 말라리아-미감작 자원자에서, 말라리아 포자소체 챌린지에 대해 혈액 슬라이드에 의해 평가된 피. 팔시파룸 기생충혈증까지의 시간으로서 측정된 효능. [ 기간: 6개월 ]

증상, 혈액 필름 결과 및 기생충혈증의 복합체에 의해 정의된 혈액 단계 감염을 사용한 통계적 분석.

건강한 말라리아-미감작 자원자에서, 말라리아 포자소체 챌린지에 대해 PCR에 의해 평가된 기생충 밀도 역학에 의해 평가된 피. 팔시파룸 기생충혈증까지의 시간으로서 측정된 효능. [ 기간: 6개월 ]

정량적 PCR에 의해 말초 혈액 중 20개 이상의 피. 팔시파룸 기생충/ml에 의해 정의된 바와 같은 혈액 단계 말라리아 감염을 사용한 통계적 분석.

다른 결과물 척도:

2종의 상이한 용량에서의 아주반트화된 R21 및 아주반트화된 R21 + ChAd63 및 MVA 코딩 ME-TRAP의 장기 보호적 효능 [ 기간: 12개월 ]

백신접종 레지멘의 장기 효능은 제1 포자소체 챌린지 후 5 - 7개월 (연구의 시작 후 ~12개월)에 임의의 멸균적으로 보호된 개체를 재-챌린지하고, 혈액 단계 감염을 발병한 재-챌린지의 수를 비백신접종된 대조군과 비교함으로써 평가될 것이다.

추정된 등록: 70

상세한 설명:

백신접종 상 및 챌린지 절차는 시험 기간에 걸쳐 2개의 부분, 즉, 챌린지 A 및 B로 시차를 두었다.

챌린지 A:

그룹 1 내지 3은 R21 단독 또는 R21 + ChAd63-MVA ME-TRAP 중 어느 하나, 이어서 제12주에 포자소체 챌린지 (모기 물림)에 의한 CHMI를 받은 자원자로 이루어진다. 12명의 자원자는 각각의 그룹에 대해 모집될 것이다.

그룹 4a는 감염성 대조군으로서 기능할 것이며, 이들 자원자는 백신접종되지 않을 것이다.

챌린지 B:

그룹 1 내지 3에서의 멸균적으로 보호된 자원자는 초기 챌린지 후 5 내지 12개월에 효능의 내구성을 평가하기 위해 재챌린지될 수 있다.

그룹 5 내지 7은 또한 챌린지 B에 참여하도록 등록될 것이다.

그룹 5 (8명의 자원자)는 분할 제3 용량으로의 표준 용량 R21, 이어서 제12주에 CHMI의 효능을 시험할 것이다.

그룹 6은 표준 용량 R21 백신접종 레지멘의 장기 효능을 시험할 것이다 (이 그룹에서의 자원자는 2015년에 시작된 VAC053 I상 말라리아 시험에 등록되면서 그들의 백신접종을 이미 받았을 것이며, 따라서 그들의 면역화 후 대략 2년에 챌린지를 겪기 전에 임의의 추가의 백신접종을 받지 않을 것이다).

그룹 7 (8명의 자원자)은 2회 용량 R21 백신접종 레지멘, 이어서 제8주에 CHMI의 효능을 시험할 것이다.

그룹 4b는 그룹 5-7 및 멸균적으로 보호된 그룹 13 자원자에 대한 감염성 대조군으로서 기능할 것이다. 그룹 4c 자원자는 그룹 5 및 7로부터의 임의의 자원자가 재챌린지되는 경우에 감염성 대조군으로서 사용될 것이다.

적격성:

연구에 적격인 연령: 18세 내지 45세 (성인)

연구에 적격인 성별: 모두

건강한 자원자의 용인: 예

기준

포함 기준:

18 내지 45세의 건강한 성인.

모든 연구 요구에 순응할 수 있으며 기꺼이 그렇게 함 (조사자의 의견으로).

조사자가 자원자의 의학적 병력을 그들의 일반 실시자와 논의하는 것을 기꺼이 허용함.

단지 여성: 연구의 기간 동안 연속적으로 유효한 피임^*을 실시해야 함.

연구의 과정 동안 및 연구에서의 그들의 관여의 종료 후 적어도 3년 동안 혈액 공여를 삼가기로 동의함.

시험에 참여하기 위해 서면 고지 동의서.

CHMI 및 항말라리아 치료의 완료 사이의 기간 동안 휴대폰에 의해 도달가능함 (24/7).

CHMI 후 치유적 항-말라리아 레지멘을 기꺼이 취함.

그들의 지정된 말라리아 챌린지 추적 지역 (옥스포드 또는 사우스앰프턴)에 가깝게 살고 있지 않은 자원자에 대해: 연구의 일부 동안 시험 센터에 가까운 호텔 방에 머물기로 동의함 (항-말라리아 치료가 완료될 때까지 모기 물림 후 적어도 6.5일로부터).

고지 동의서 퀴즈에 대한 모든 질문에 정확하게 대답함.

배제 기준:

임상적 말라리아 (임의의 종)의 병력.

연구 기간 동안 또는 선행하는 6개월 내에 명확하게 말라리아 풍토 지역으로 여행함.

CHMI의 30일 내에 공지된 항말라리아 활성을 갖는 전신 항생제 (예를 들어 트리메토프림-술파메톡사졸, 독시시클린, 테트라시클린, 클린다마이신, 에리트로마이신, 플루오로퀴놀론 및 아지트로마이신)의 사용.

30일 선행하는 등록에서 조사 제품의 수령, 또는 연구 기간 동안 계획된 수령.

조사자에 의해 평가된 바와 같은 시험 데이터의 해석에 대해 영향을 미칠 가능성이 있는 조사 백신의 사전 수령. 그룹 1 내지 3에서의 임의의 자원자가 재챌린지를 겪는 경우에, 이러한 배제 기준은 VAC065 시험에서 이전에 받은 백신으로 연장되지 않는다.

단지 그룹 3 자원자에 대해: 비-말라리아 MVA 또는 비-말라리아 아데노바이러스 벡터화된 실험 백신의 사전 수령

과거 6개월 내에 HIV 감염; 무비증; 재발성, 중증 감염 및 만성 (14일 초과) 면역억제 약물을 비롯한 임의의 확인되거나 의심되는 면역억제 또는 면역결핍 상태 (흡입된 및 국소 스테로이드는 허용됨).

등록 전 3개월 내에 이뮤노글로불린 또는 혈액 제품의 사용.

백신의 임의의 구성요소 (예를 들어 달걀 제품, 카톤(Kathon)) 또는 말라리아 감염에 의해 악화될 가능성이 있는 알러지성 질환 또는 반응의 병력.

백신접종 후 아나필락시스의 임의의 병력.

임상적으로 유의한 접촉 피부염의 병력.

겸상 적혈구 빈혈증, 겸상 적혈구 소질, 지중해빈혈 또는 지중해빈혈 소질 또는 말라리아 감염에 대한 감수성에 영향을 미칠 수 있는 임의의 혈액학적 상태의 병력.

연구 동안 임신, 수유 또는 임신하려는 의도.

QT 간격의 연장을 유발하는 것으로 공지된 의약의 사용 및 말라론(Malarone)™의 사용에 대한 기존의 금기

리아메트(Riamet)™ 및 말라론™과의 잠재적으로 임상적으로 유의한 상호작용을 갖는 것으로 공지된 의약의 사용

QT 간격을 연장시키는 것으로 공지된 임의의 임상적 상태

임상적으로 관련된 서맥을 비롯한 심장 부정맥의 병력

전해질 균형의 교란, 예를 들어, 저칼륨혈증 또는 저마그네슘혈증

선천적 QT 연장 또는 돌연사의 가족력

모든 3가지 제안된 항-말라리아 의약의 사용에 대한 금기; 리아메트™, 말라론™ 및 클로로퀸(Chloroquine).

암의 병력 (피부의 기저 세포 암종 및 상피내 자궁경부 암종을 제외함).

연구에의 참여에 영향을 미칠 수 있는 심각한 정신의학적 상태의 병력.

병원 전문가 감독을 요구하는 임의의 다른 심각한 만성 질병.

매주 42 표준 UK 단위 초과의 알콜 섭취에 의해 정의된 바와 같은 의심되거나 공지된 현재 알콜 남용.

등록 전 5년에 의심되거나 공지된 주사 약물 남용.

혈청에서 검출된 B형 간염 표면 항원 (HBsAg).

스크리닝 시 C형 간염 바이러스에 대해 혈청양성 (HCV에 대한 항체) (그 연구에 참여하기 전에 확인된 음성 HCV 항체로의 사전 C형 간염 백신 연구에 참여하였거나, 이러한 연구를 위한 스크리닝 시에 음성 HCV RNA PCR가 아니라면).

전신 관상동맥 위험 평가 (SCORE: Systematic Coronary Risk Evaluation) 시스템에 의해 추정된 바와 같은, ≥5%의 치명적 심혈관 질환의 추정된 10년 위험.60

심장 질환에 대한 < 50세의 1급 및 2급 친척에서의 양성 가족력.

사회적, 지리적 또는 정신적 이유로 가깝게 따르는 것이 불가능한 자원자.

생화학 또는 혈액학 혈액 시험, 뇨분석 또는 임상적 검사에 대한 임의의 임상적으로 유의한 비정상적 결과.

유의하게, 연구에의 참여 때문에 자원자에 대한 위험을 증가시키거나, 연구에 참여하는 자원자의 능력에 영향을 미치거나, 연구 데이터의 해석을 손상시킬 수 있는 임의의 다른 유의한 질환, 장애, 또는 결과.

ClinicalTrials.gov 식별자: NCT02905019

장소 - 영국

NIHR 웰컴 트러스트 클리니컬 리서치 퍼실러티(NIHR Wellcome Trust Clinical Research Facility), 해머스미스 호스피탈(Hammersmith Hospital)

영국 런던

연락처: 레쉬마 술탄(Reshma Sultan) 　　 +44 (0)20 331 31086

CCVTM, 유니버시티 오브 옥스포드,

영국 옥스포드 OX3 7LE

연락처: 자원자 코디네이터 vaccinetrials@ndm.ox.ac.uk

사우스앰프턴 내셔널 인스티튜트 포 헬스 리서치(Southampton National Institute for Health Research)

영국 사우스앰프턴

연락처 　　 02381 204989 　　　UHS.RecruitmentCRF@nhs.net

후원자 및 협력자: 유니버시티 오브 옥스포드

책임있는 기관: 유니버시티 오브 옥스포드

ClinicalTrials.gov 식별자: NCT02905019

다른 연구 ID 번호: VAC065

개별적 참여자 데이터 (IPD) 공유 진술:

IPD를 공유하기로 계획됨: 결정되지 않음

실시예 2

임상 시험 개요에 관하여, 그룹 2 또는 3 중 어느 하나가 보다 양호할 것임을 믿기 위한 좋은 이유가 있었으며, 놀랍게도 그들은 그렇지 않았다. 낮은 용량 R21로의 그룹 1 결과 (82% 효능)가 시험된 다른 2종의 레지멘 (그룹 2 및 3)보다 더 양호하였음은 인상적이다. 그룹 2는 그 안에 R21의 보다 많은 양이 투여되었기 때문에 보다 양호할 수 있었다: 용량 1 및 2에 대해 10 mcg보다는 오히려 50 mcg, 그러나 용량 3에 대해 동일한 용량: 이러한 "분할 (즉, 감소된) 제3 용량" 레지멘이 표준 레지멘 (그룹 1에서와 같이)보다 더 양호할 수 있음은 RTS,S로부터의 문헌에서 증거가 있다 (참고문헌: Regules et al. J Infect Dis. 2016; 214:762-71.) 그룹 3은 문헌 [Rampling et al. (J Infect Dis. 2016 Sep 1;214(5):772-81)]에 의해 보고된 바와 같이, 부분적으로 유효한 벡터화된 백신의 추가의 투여 때문에 가장 양호한 그룹일 수 있었지만, 명백하게 그룹 3에서의 효능은 그룹 1에서만큼 높지 않았다.

실시예 3

개관: R21은 가장 진보된 말라리아 백신 후보, RTS,S/AS01의 바이오시밀러인 신규한 말라리아 백신 후보이며, 말라리아 환상포자소체 단백질 및 B형 간염 표면 항원의 융합 단백질로 구성된다. 본 발명자들은 건강한 UK 자원자에서 제어된 인간 말라리아 감염 (CHMI)을 사용하여 2종의 상이한 용량 스케줄에서 단독으로 및 바이러스-벡터화된 백신과 조합으로 주어진 매트릭스-M과 함께 투여된 R21 (R21/MM)의 효능을 평가하였다.

본 발명자들은 건강한 영국 자원자에서 이러한 IIa상 연구에 착수하여 상이한 용량 스케줄로 및 ChAd63-MVA ME-TRAP와 조합으로 R21/MM의 말라리아 포자소체 챌린지에 대한 효능을 평가하였다.

방법 자원자를 영국에서 3개의 시험 센터에서 이러한 IIa상 연구 내로 모집하였고, CHMI를 런던의 임페리얼 칼리지(Imperial College)에서 착수하였다. 31명의 건강한 자원자를 R21/MM의 10/10/10μg의 3회 용량 (그룹 1; n= 11), 또는 R21/MM의 50/50/10μg의 3회 용량 (그룹 2; n= 11), 또는 ChAd63-MVA 발현 ME-TRAP와 함께 주어진 R21/MM의 10/10/10μg의 3회 용량 (그룹 1; n= 11) 중 어느 하나로 백신접종하였다.

도 2에 대해 언급하면, 본 발명자들은 Ia상 연구; 오픈-라벨; 비-무작위화; 18 내지 50세의 건강한 성인; 옥스포드; 런던 (임페리얼); 총 31명의 자원자를 기재하였다.

I상 시험 (Vac053, 시험 프로파일에 대해서는 도 2 참조)에서 관찰된 바와 같이, 매트릭스-M (50 마이크로그램) 중 R21 (10 마이크로그램)의 안전성 프로파일 (도 3 참조)은 RTS,S/AS01 백신에 대한 것보다 명백하게 더 양호하였다. I상 시험, vac053 - 도 5 참조에서와 같이, 양호한 면역원성은 모든 레지멘으로의 CSP에 대한 항체에 대해 관찰되었다.

CHMI는 6명의 비백신접종된 대조군을 비롯하여, 제1 백신접종 후의 제12주에 모기 물림에 의해 전달되었다. 시험은 ClinicalTrials.gov (NCT02905019)로 등록된다.

결과 이러한 시험은 2016년 11월 7일 내지 2017년 5월 15일에 수행되었다. 스크리닝된 70명 초과의 자원자 중에서, 37명의 자원자 (도 9)는 2017년 1월 30일 및 31일에 말라리아 포자소체 챌린지를 겪었다. 백신접종은 일반적으로 양호하게 내성화되었으며, 국소 및 전신 유해 사건의 대다수는 성질상 중성 및 공개된 RTS,S/As01 데이터와 비교 시 개선된 안전성 프로파일이었다 - 도 3 참조. 멸균 보호는 그룹 1에서 9/11 (81.8%) 대상체, 그룹 2에서 7/11 (63.6%) 대상체 및 그룹 3에서 6/9 (66.7%) 대상체에서 관찰되었다 (도 10 참조). 모든 백신접종된 자원자는 대조군 자원자에 비해 개방성에서 유의한 지연을 제시하였다. 5/6 대조군 대상체는 혈액 단계 말라리아로 진단되었다. 환상포자소체 단백질의 NANP 반복부 영역에 대한 항체 반응은 모든 자원자에서 제2 백신접종 후 14일에 유의하게 부스팅되었으며, RTS,S/AS01과 필적하였다.

보다 낮은 용량 그룹에서 관찰된 높은 수준 효능은 본 발명의 유익으로서 입증된다.

실험 상세사항

연구 설계 및 참가자

본 발명자들은 18세 내지 45세의 건강한 말라리아-미감작 성인 남성 및 비-임신 여성에서 IIa상 연구를 수행하였다. 모집 및 백신접종은 유니버시티 오브 옥스포드의 센터 포 클리니칼 백시놀로지 앤드 트로피칼 메디신(Centre for Clinical Vaccinology and Tropical Medicine) 및 사우스앰프턴의 웰컴 트러스트 클리니칼 리서치 퍼실러티 및 영국의 임페리얼 칼리지에서 수행되었다. 이러한 IIa상, 오픈-라벨 말라리아 포자소체 챌린지 시험은 4개의 코호트로 이루어졌다. 샘플 크기는 자원자 모집에 대한 실제 제한, 효능의 사전 증거 없이 백신 레지멘을 받아야 하는 자원자의 수를 제한하는 윤리적 고려사항, 및 면역화 레지멘의 효능을 기재하는 요망을 반영한다. 연구 그룹으로의 할당을 대상체 선호에 기초한 등록 전에 조사자에 의해 착수하였다. 그룹 1 (n=11)은 3회의 백신접종 (0, 4 및 8주에 R21/MM 10μg)을 받았고; 그룹 2 (n=11)는 3회의 백신접종 (0 및 4주에 R21/MM 50μg 및 8주에 R21/MM 10μg)을 받았고; 그룹 3 (n=9)은 5회의 백신접종 (0, 4 및 8주에 R21/MM 10μg 및 1주에 ChAd63 ME-TRAP 5 x 10¹⁰ 바이러스 입자 (vp), 및 9주에 MVA ME-TRAP 2 x 10⁸ 플라크 형성 단위 (pfu))을 받았고, 그룹 4 (n=6)는 백신접종을 받지 않았다. 모든 대상체는 동시에 모기 물림에 의해 초기 CHMI를 겪었다 (백신접종된 대상체에 대해 제1 백신접종 후 제12주).

자원자를 런던 임페리얼 칼리지에서 피. 팔시파룸 3D7-균주 감염된 아노펠레스 스테펜시(Anopheles stephensi) 모기로부터의 5회의 감염성 물림을 사용하여 감염시켰다. 모든 대상체를 미국 워싱턴 디씨에 소재하는 월터 리드 아미 인스티튜트 오브 리서치(Walter Reed Army Institute of Research), 디파트먼트 오브 에토몰로지(Department of Entomology)에 의해 공급된 모기의 단일 배치로 감염시켰다. 포함 및 배제 기준은 보충 부록에 열거되어 있다. 모든 참가자는 참여 전에 서면 고지 동의서를 제공하였으며, 연구는 헬싱키 선언의 원칙에 따라 및 우수 임상 관행 (GCP: Good Clinical Practice)에 따라 수행되었다.

연구는 독립적으로 및 외부적으로 우수 임상 관행 지침으로의 준수를 모니터링한 영국 내셔널 리서치 에틱스 서비스(UK National Research Ethics Service), 커미티 사우스 센트럴-버크샤이어(Committee South Central-Berkshire) (Ref: 16/SC/0261), 메디슨즈 앤드 헬스케어 프로덕츠 레귤러토리 에이전시(Medicines and Healthcare Products Regulatory Agency) (Ref: 21584/0360/001-0001), 및 옥스포드 유니버시티 클리니칼 앤드 트라이얼즈 앤드 리서치 가버넌스 팀(Oxford University Clinical Trials and Research Governance team)에 의해 승인되었다. 바이러스-벡터화된 백신 사용은 옥스포드 유니버시티 호스피탈즈 엔에이치에스 트러스트(Oxford University Hospitals NHS Trust)의 유전적으로 변형된 유기체 안전성 위원회 (GMSC: Genetically Modified Organisms Safety Committee)에 의해 인가되었다 (조회 번호 GM 462.16.88). 시험은 ClinicalTrials.gov (Ref: NCT02905019)로 등록되었으며, 독립적 지역 안전성 모니터는 안전성 관리를 제공하였다.

절차

R21 (배치 번호: 01015-01)은 유니버시티 오브 옥스포드, 클리니칼 바이오매뉴팩튜어링 퍼실러티(Clinical Biomanufacturing Facility)에서 우수 제조 관행 (Good Manufacturing Practice) 조건 하에서 제조되고, 바이알에 넣었다: 이러한 산물의 생산, 제조 및 저장은 WO2014/111733에서 이전에 기재되었다; 또한 문헌 [Venkatraman et al.]을 참조한다. 매트릭스-M (배치 번호: M1-103)은 노바박스에 의해 개발된 특허된 아주반트 기술이다: 이러한 산물의 생산, 제조 및 저장은 이전에 기재되었다 [21]. ChAd63 ME-TRAP (배치 번호: 01S11-01) 및 MVA ME-TRAP (배치 번호: 0091013) 백신의 생성, 제조 및 저장은 이전에 기재되었다 [12, 22]. 백신접종 일에, R21을 실온으로 해동시키고, 매트릭스-M과 혼합하여 냉동고로부터의 제거의 1시간 내에 비-우세 팔의 삼각근 내로 근육내로 투여하였다. 바이러스 벡터화된 백신을 해동의 1시간 내에 우세 팔 (R21 투여에 대해 반대쪽 팔)의 삼각근 내로 근육내로 투여하였다. 모든 자원자를 백신접종 후 1시간 동안 유닛에서 관찰하였다. 자원자는 그들의 온도 및 백신접종 후 7일 동안 임의의 명시된 국소 및 전신 유해 사건 및 백신접종 후 28일 동안 비명시된 유해 사건을 기록하도록 전자 다이어리 카드가 제공되었다. 유해 사건의 중증도 등급 및 유해 사건에 대한 인과 관계의 배정을 프로토콜에서 언급된 미리 정의된 지침에 따라 수행하였다. 독립적인 세이프티 모니터링 커미티(Safety Monitoring Committee)는 시험의 과정 동안 안전성 관리를 제공하였다. 전체 혈액 카운트, 신장 기능 및 간 기능 시험을 비롯한 안전성 혈액을 그룹 1 및 2 자원자에서 제0일, 제7일, 제28일, 제35일, 제56일, 제63일 및 제83일 (CHMI 전 일)에서의 방문에서 수행하였다. 추가의 안전성 혈액을 그룹 3에서의 자원자에 대해 제14일 및 제70일에 수행하였다. 항-NANP IgG ELISA에 의해 측정된 항체 반응을 제0일, 제7일, 제14일, 제28일, 제35일, 제42일, 제56일, 제63일, 제70일 및 제83일로부터의 샘플에 대해 수행하였다. CSP에 대한 생체외 IFN-ELISpot 반응을 제0일, 제42일 및 제83일로부터의 샘플에 대해 평가하였다. 또한, TRAP에 대한 IFN-ELISpot 반응을 그룹 3 자원자에서 제0일, 제28일, 제70일 및 제83일로부터의 샘플에 대해 평가하였다. 이들 면역학적 검정에 사용된 전체 방법은 이전에 기재되었다 [23]. CHMI 절차는 문헌 [Rampling et al. J Infect Dis. 2016 Sep 1;214(5):772-81]에 의해 기재되었다. CHMI 후, 혈액 단계 말라리아 감염의 진단을 말라리아를 암시하는 증상 및 양성 후막 현미경검사, 또는 qPCR 결과 >500개 기생충/ml을 갖는 대상체에서, 후막이 음성이거나, 증상이 부재한 경우에, 수행하였다 [12]. CHMI 후 제21일까지 혈액 단계 말라리아를 발병하지 않은 백신접종된 대상체는 멸균 보호를 나타낸 것으로 간주하였다.

결과물

1차 결과물 척도는 건강한 말라리아-미감작 자원자에서 말라리아 포자소체 챌린지에 대한 상이한 백신 레지멘의 효능 (혈액 슬라이드에 의해 평가된 피. 팔시파룸 기생충혈증의 발생)을 평가하고, 백신의 안전성을 평가하는 것이었다. 2차 결과물 척도는 건강한 말라리아-미감작 자원자에서 면역원성을 평가하고, 효능 (혈액 슬라이드에 의해, PCR에 의해 평가된 피. 팔시파룸 기생충혈증까지의 시간, 및 PCR에 의해 평가된 기생충 밀도 역학으로서 측정됨)을 평가하는 것이었다.

통계적 분석

데이터를 윈도우용 그래프패드 프리즘(GraphPad Prism) 버전 5.03 (그래프패드 소프트웨어 인크.(GraphPad Software Inc.), 미국 캘리포니아주) 및 스타타(Stata) 10.0 (스타타코프 엘피(Statacorp LP), 미국 텍사스주)을 사용하여 분석하였다. 각각의 그룹에 대해 사분위수 범위를 갖는 기하 평균 및 중위값을 기재한다. 크루스칼-월리스 분석 및 프리드만 검정을 사용하여 피크 면역 반응을 기준선과 비교하였다. 2개의 그룹 사이의 차이의 유의성 검정은 만-휘트니 분석을 사용하였다. 윌콕슨 매칭된-쌍 분석을 사용하여 그룹 내의 시점 사이를 비교하였다. 경항에 대한 카이-제곱 검정을 사용하여 상이한 그룹 사이의 안전성 데이터를 비교하였다. 백신접종 레지멘 및 대조군 사이의 효능의 통계적으로 유의한 차이를 상이한 종점에서 단측 로그 순위 검정을 사용하여, 카플란 마이어 곡선의 로그 순위 분석에 의해 평가하였다. p < 0.05의 값을 유의한 것으로 간주하였다.

결과

연구 집단

2016년 11월 7일부터 2017년 1월 31일까지, 적격성에 대해 스크리닝된 75명 중 총 43명의 자원자를 이러한 연구에 등록하였다. 그룹 1에서의 1명의 자원자는 개인적 상황의 변화로 인해 그들의 제1 백신접종 후에 탈퇴되었고, 대체되었다. 또 다른 그룹 1 자원자는 개인적 상황의 변화로 인해 그들의 제2 백신접종 후에 탈퇴되었다. 1명의 그룹 2 자원자는 이들이 참석의 스케줄에 더 이상 전념할 수 없었기 때문에 그들의 제1 백신접종 후에 탈퇴되었다. 그룹 3에서의 2명의 자원자는 개인적 상황의 변화로 인해 그들의 제3 백신접종 후에 탈퇴되었다. 또 다른 그룹 3 자원자는 CHMI를 겪는 것에 대한 불안으로 인해 그들의 제5 백신접종 후에 탈퇴되었다. 탈퇴 중 어느 것도 백신접종과 관련되지 않았으며, 계속되는 AE는 없었고, 안전성 혈액은 정상이었다. 37명의 자원자 (11명의 그룹 1 자원자, 11명의 그룹 2 자원자, 9명의 그룹 3 자원자 및 6명의 비백신접종된 대조군)는 2017년 1월 30일 및 31일에 CHMI를 겪었다. 이들 37명의 자원자 모두는 CHMI 후 90일까지 추적을 완료하였다. 참가자 흐름 및 연구 설계는 도 9의 표에 요약되어 있다.

효능

각각 81.8% (p=0.0009), 63.6% (p=0.004) 및 66.7% (p=0.006)의 멸균 효능을 초래하는 CHMI 후 제21일에 말라리아를 발병하지 않은 9/11명의 그룹 1 자원자, 7/11명의 그룹 2 자원자 및 6/9명의 그룹 3 자원자가 있었다. 6명의 대조군 자원자 중 5명은 11.3일 (중위 11, 범위 11 내지 12, SD 0.45)의 진단까지의 평균 시간으로 말라리아를 발병하였다. 개방성에서의 유의한 지연이 그룹 1, 2 및 3에서 각각 15.3일 (중위 15.3, 범위 14.5 내지 16, SD 1.1), 16.4일 (중위 16.5, 범위 14.5 내지 16, SD 1.5) 및 15.3일 (중위 16, 범위 14 내지 16, SD 1.2)의 진단까지의 시간으로 모든 3개의 그룹에서 관찰되었다.

유해 사건

심각한 유해 반응 (SAR) 또는 의심되는 예상치 않은 심각한 유해 반응 (SUSAR)은 발생하지 않았다. 안전성 문제로 인한 탈퇴는 없었으며, 미리-정의된 연구 중단 또는 유지 규칙은 활성화되지 않았다. 보고된 유해 사건 (AE)의 대다수는 자기-제한적이고, 중증도에서 경도이며, 관찰된 반응원성 프로파일은 R21/MM (Ref: VAC053, 도 2; Venkatraman et al.) 및 ChAd63_MVA ME-TRAP 둘 다에 대한 이전의 연구와 유사하였다 [23]. 각각의 백신접종 후 첫번째 7일에서 명시된 국소 및 전신 유해 사건은 경도 내지 중등도였으며, 전체적으로 모든 백신접종 레지멘은 양호하게 내성화되었다. 백신 부위 통증은 가장 통상적인 국소 유해 사건이었으며, 중증도에 있어서 우세하게 경도였다. 또한 이전의 I상 시험 (Venkatraman et al.)에서 시험되었던 10/10/10μg R21/MM 용량 그룹의 반응원성 프로파일은 RTS,S/AS01을 사용한 본 발명자들의 센터에서의 2종의 이전의 시험으로부터의 데이터에 비해 유의하게 개선되었다 (백신접종 1 - p=0.003; 백신접종 2 - p=0; 백신접종 3 - p=0.125). 백신 부위 통증은 RTS,S/AS01에 비해 제1 (p=0.02) 및 제2 (p=0.02) 백신접종 후에 유의하게 감소되었다. 백신접종과 명백하게, 가능하게 또는 아마도 관련된 것으로 보이는 각각의 백신접종 후 28일 동안 수집된 비명시된 유해 사건은 성질상 우세하게 경도였다. 실험실 유해 사건은 우세하게 등급 1이었다. 면역원성 프로파일링은 Vac053 I상 시험에서 관찰된 바와 같이 환상포자소체 단백질의 중심 NANP 반복부 영역에 대해 강력한 항체 유도를 제시하였다 (도 5).

논의

본 발명자들은 본원에서 처음으로, 가장 진보된 말라리아 백신 후보, RTS,S/AS01의 용량의 1/5에서의 매트릭스-M으로 아주반트화된 신규한 말라리아 백신 후보, R21의 높은 수준 효능을 보고한다. 이는 이것이 말라리아 풍토 지역에 살고 있는 대상체에서 유효한 것으로 입증된 경우에 백신의 대규모 생산을 위한 유의한 용량-절약 및 비용-절약 이점을 가질 것이다. 본 발명자들의 데이터는 이러한 백신 접근법이 안전하며, 성질상 우세하게 경도인 유해 사건으로 건강한 영국 자원자에서 양호하게 내성화됨을 확인한다. 분할 (1/5) 제3 용량을 갖는 50μg 용량의 사용은 RTS,S/AS01의 지연된 분할 제3 용량이 말라리아 포자소체 챌린지 연구에서 효능을 개선시킨 것으로 제시된 레귤즈(Regules) 등에 의한 최근에 공개된 연구와 대조적으로 효능을 개선시키지 않았다 [10]. 백신에 대한 체액성 반응은 그룹 1 내지 3 사이에 다양하지 않았으며, 그룹 3에서의 레지멘에의 바이러스-벡터화된 백신의 첨가는 감소된 CS 항체 면역원성을 초래하지 않았다. 반응의 규모는 효능을 예측하지 않았으며, 이는 항체 반응의 질 또는 다른 측면이 또한 효능에 관련될 수 있음을 시사한다. 단지 낮은 수준 CD4⁺를 유도하고, CD8⁺ T-세포 반응을 유도하지 않는 RTS,S/AS01로의 이전의 경험과 유사한, R21/MM에 의해 유도된 CSP에 대한 최소 IFN-γ ELISpot 반응이 있었다 [24].

대조군 자원자 중 1명은 임상적 말라리아를 발병하지 않았으며, 이는 매우 드문 일이고, 옥스포트 센터에서의 CHMI 시험에서 이전에 결코 발생하지 않았다. 그러나, 대조군 중 1명이 말라리아를 발병하지 못한 것은 정맥내 전체 포자소체 백신을 시험하는 사나리아 인크.(Sanaria Inc.)에 의해 착수된 다수의 다른 CHMI 시험에서 보고되었다 [25, 26]. 11.3일의 대조군 그룹에서의 개방성까지의 평균 시간은 이것이 드물게 약한 챌린지가 아니었음을 지시하며, 이러한 시험에 사용된 백신접종 및 CHMI 방법론은 다른 CHMI 연구와 대체로 필적한다 [23].

결론적으로, 이러한 IIa상 말라리아 포자소체 챌린지 연구는 신규한 저-비용 말라리아 백신, R21/MM으로의 높은 수준 효능을 입증하였다. 이러한 높은 효능은 적어도 유사한 0, 4, 8주 스케줄에 사용된 RTS,S/AS01 백신의 보다 높은 (50 마이크로그램) 용량을 사용한 레지멘만큼 높거나 그보다 더 높다 (도 11).

이는 또한 2-용량 스케줄이 이러한 프라이밍된 집단을 보호하는데 충분할 것일 수 있다 - 단지 2회의 면역화 후에 항-CSP 항체에 대해 관찰된 높은 면역원성에 기초하여 (도 12). 이러한 관점에서, 건강한 영국 자원자에서 CHMI 연구에서 10μg의 R21/MM을 사용한 2회 용량-스케줄을 사용하고 있다. 이것이 또한 높은 수준 효능을 갖는 것으로 입증되는 경우에, 이는 유의한 비용-절약 유익을 가질 것이며, EPI 프로그램과 합동으로 전개하기에 잠재적으로 보다 용이할 것이다.

실시예 4 - 챌린지 연구

여기서, 본 발명자들은 R21/매트릭스-M 백신의 추가의 챌린지 연구를 제시한다. 본 발명자들은 매트릭스-M 중 저-용량 R21로의 본 발명자들의 완료된 챌린지 연구로부터의 데이터를 제공한다. 요약하면, 본 발명자들은 하기 그룹에서 효능을 제시한다:-

면역화 후 8.5개월에 재-챌린지된 자원자: 3/5 보호됨 = 60%

2회 용량 그룹 (10, 10 mcg): 3주에 4/7 보호됨 = 57%

3회 용량 그룹 (10, 10, 2 mcg): 3주에 5/7 보호됨 = 71%

2회 용량 레지멘으로의 57%는 전체 말라리아 백신 분야에서 전례가 없으며, 이는 본 발명의 현저한 기술적 효과를 입증한다. 8.5개월에서의 60%의 재챌린지 효능은 또한 우수하다.

연구 상세사항

R21/매트릭스-M 백신의 추가의 챌린지 연구를 착수하였다. 2가지 핵심적 목적을 하기에 기재한다.

첫번째 목적은 4회의 매주 간격으로 3회 투여된 50 mcg의 매트릭스-M 중 10 마이크로그램 (mcg) R21 용량의 보호의 내구성을 평가하는 것이었다. 2017년 1월 말의 원래 챌린지 연구에서, 이러한 레지멘이 투여된 11명의 백신접종자 중 9명이 멸균적으로 보호되었다. 9명의 보호된 대상체 중에서 모두는 2017년 9월 중순에 재-챌린지를 위해 방문하였고, 5명이 참가하는데 동의하였다. 5명의 재-챌린지 참가자 중에서 3명은 다시 멸균적으로 보호되었고, 2명은 그렇지 않았으며, 이는 60% 멸균 효능에 상응한다. 부스터 백신 용량은 이들 대상체의 재-챌린지가 1월 초에 그들의 마지막 백신 용량 후 약 8.5개월에 발생하도록 재-챌린지 전에 투여되지 않았다.

마지막 면역화 후 8.5개월에 달하는 대부분의 보호된 대상체에서의 멸균 보호의 내구성의 이러한 증거는 매우 긍정적이며, 일반적으로 마지막 용량 후 약 6개월에 측정된 RTS,S/AS01 보호의 효능과 비교하여 유리하다. 8.5개월에서의 R21의 효능은 26%의 5 - 8개월에서의 RTS,S/AS 백신의 보고된 효능과 비교 시 49%였다 (표 참조).

두번째 목적은 매트릭스-M 중 R21의 바람직한 낮은 투여량을 사용한 2가지 새로운 R21 면역화 레지멘을 평가하는 것이었다. 하나의 그룹에서 7명의 대상체를 50 mcg의 매트릭스-M 아주반트 중 10 mcg의 R21의 단지 2회 용량으로 면역화하였다. 챌린지는 마지막 용량 후 3 내지 4주에서였다. 이들 7명의 개체 중에서 4명은 멸균적으로 보호되어 57% 백신 효능에 달하였으며, 이는 명백하게 2회 용량 말라리아 백신으로 지금까지 보고된 가장 높은 효능이다 (상세한 문헌 검토에 의한 평가로부터).

추가의 백신접종 그룹은 4주 간격으로 10 mcg의 R21/매트릭스-M의 2회 용량, 이어서 추가의 4주 후 50 mcg 매트릭스-M 중 2 mcg R21 용량을 사용하였다. 이렇게 면역화된 7명의 대상체를 3 내지 4주 후에 챌린지하였으며, 5명이 멸균적으로 보호되었고, 71%의 효능 비율이었다. 이는 50 mcg의 매트릭스-M 중 10 mcg의 R21의 3회 용량으로 보호된 9/11명과는 약간 상이하다. 3회의 낮은 용량의 R21/매트릭스-M으로의 이들 데이터는 그의 높은 수준 효능의 추가의 증거를 제공한다.

예시적인 데이터는 하기에 제공된다:

R21 (본 발명)

0, 1, 2개월에서 3 x 10 mcg 용량 4주에서 챌린지

9 / 11 = 82%

마지막 용량 후 8.5개월에 5명 (9명 중)이 재-챌린지됨

3 / 5 = 60%

마지막 용량 후 8.5개월에서의 전체 R21 효능 = 49%

RTS,S

Regules et al. J Infect Dis 2016 마지막 용량 챌린지 후 3주

10 / 16 = 62.5%

마지막 용량 후 8개월에 10명 중 5명이 재-챌린지됨

1 / 5 = 20%

마지막 용량 후 8.5개월에서의 전체 효능= 12.5%

Kester et al. J Infect Dis 2009 0, 1, 2개월: 2 내지 3주에서 챌린지:

18/36 보호됨 = 50%

마지막 용량 후 5.5개월에 재챌린지:

4/9 보호됨 = 44%

마지막 용량 후 5.5개월에서의 RTS,S/AS01의 전체 효능 = 22%

(RTS,S/AS02 0, 1, 2 경우에: 14/44 보호됨 = 32% 및 재-챌린지 시 4/9 (44%). 전체 = 14%)

Rampling et al. J Infect Dis 2016 0, 1, 2개월:

4주에 12/16 보호됨 = 75%

제1 CHMI 후 6개월에 재-챌린지:

5/6 보호됨 = 83%

마지막 용량 후 7개월에서의 전체 효능 = 62%

평균을 가늠하기 위해: 12.5 x 5, 22 x 9, 14 x 9, 62 x 6: 합계 = 758.5 / 29

평균된 전체 RTS,S 5 내지 8개월 효능: = 26%

표 범례: R21 및 RTS,S 말라리아 백신으로의 면역화 후의 보호의 내구성. 마지막 용량 후 5 내지 8개월에서의 전체 효능은 초기 챌랜지에서 보호된 비율을 마지막 챌린지에서 보호된 비율과 곱함으로써 계산되며, 백분율로서 표현된다. 단지 초기 챌린지에서 보호된 사람들만 재-챌린지된다. R21 내구성있는 효능은 RTS,S에 대해 보고된 비율의 약 2배로 보인다.

결론적으로, 본 실시예는 R21로의 보호의 내구성에 대한 추가의 유용한 임상 데이터를 제시하며, 또한 2회 용량 레지멘이 인간에서 작동함을 제시한다.

실시예 5 - R21 낮은 용량 추가의 챌린지 연구

본 실시예에서, 본 발명자들은 추가의 챌린지 연구에서의 양호한 효능을 입증한다. 보다 구체적으로, 본 발명자들은 R21/매트릭스-M 백신의 추가의 챌린지 연구를 보고한다. 핵심적 결과는 공지된 RTS,S보다 더 양호한 것으로 보이는 백신접종 후 8.5개월에서의 효능의 양호한 내구성, 및 또한 2회 용량 저-용량 레지멘으로의 양호한 효능이다.

실험:

R21/매트릭스-M 백신의 추가의 챌린지 연구를 2가지 목적으로 2017년 9월에 착수하였다.

첫번째 목적은 4회의 매주 간격으로 3회 투여된 50 mcg의 매트릭스-M 중 10 마이크로그램 (mcg) R21 용량의 보호의 내구성을 평가하는 것이었다. 원래 챌린지 연구 (상기 실시예 참조 - 2017년 1월)에서, 이러한 레지멘이 투여된 11명의 백신접종자 중 9명이 멸균적으로 보호되었다. 9명의 보호된 대상체 중에서 모두는 2017년 9월 중순에 재-챌린지를 위해 방문하였고, 5명이 참가하는데 동의하였다. 5명의 재-챌린지 참가자 중에서, 3명이 다시 멸균적으로 보호되었고, 2명은 그렇지 않았으며, 이는 60% 멸균 효능에 상응하였다 (도 13에서 그룹 1 참조).

도 13은 2017년 9월에서의 제어된 인간 말라리아 감염 (CHMI) 시험의 결과물을 제시한다. 대조군 그룹에서, 거의 모두의 비-백신접종된 대상체 중 모두가 감염되었으며, 이러한 경우에 6명 중 5명이었다. 매트릭스-M 중 소실된 용량 (10 마이크로그램) R21으로 CHMI 전 20개월에 면역화된 2명의 백신접종자인 그룹 6에서, 아무도 보호되지 않았다. 그러나, 그룹 5에서, 2017년 1월 말 (2016년 11월 내지 2017년 1월 초에서의 면역화 후)에 처음으로 CHMI를 겪은 5명의 개체 중 3명이 그들의 마지막 면역화 후 8.5개월에 여전히 멸균적으로 보호되었으며, 이는 백신 효능의 매우 유용한 내구성을 지시한다. 더욱이, 2017년 9월에 CHMI 전 1 및 2개월에 단지 2회의 낮은 10 마이크로그램 용량의 R21을 받은 7명의 백신접종자 중 4명이 멸균적으로 보호되었으며, 이는 매트릭스-M 중 R21의 단지 2회 용량으로의 양호한 백신 효능을 지시한다. 또한, 그룹 5는 10, 10 및 2 마이크로그램으로의 백신의 3회 용량이 72% 멸균 효능 (5/6 대상체가 보호됨)을 생성하였음을 제시하였으며, 이는 다시 매트릭스-M 중 R21의 낮은 용량의 효능을 제시한다. 모든 백신접종자에서, 사용된 매트릭스-M의 용량은 50 마이크로그램이었다.

부스터 백신 용량은 이들 대상체의 재-챌린지가 1월 초에 그들의 마지막 백신 용량 후 약 8.5개월에 발생하도록 재-챌린지 전에 투여되지 않았다.

마지막 면역화 후 8.5개월에 이르는 대부분의 보호된 대상체에서의 멸균 보호의 내구성의 이러한 증거는 매우 긍정적이며, 일반적으로 마지막 용량 후 약 6개월에 측정된 RTS,S/AS01 보호의 효능과 비교하여 유리하다. 8.5개월에서의 R21의 효능은 26%의 5 내지 8개월에서의 RTS,S/AS 백신의 보고된 효능과 비교 시 49%였다 (하기 표 참조).

두번째 목적은 매트릭스-M 중 R21의 낮은 투여량을 사용한 2가지 새로운 R21 면역화 레지멘을 평가하는 것이었다. 하나의 그룹 (도면에서 그룹 7)에서, 7명의 대상체를 50 mcg의 매트릭스-M 아주반트 중 10 mcg의 R21의 단지 2회 용량으로 면역화하였다. 챌린지는 마지막 용량 후 3 내지 4주에서였다. 이들 7명의 개체 중에서 4명은 멸균적으로 보호되어 57% 백신 효능에 달하였고, 이는 명백하게 2회 용량 말라리아 백신으로 지금까지 보고된 가장 높은 효능이며 (상세한 문헌 검토에 의한 평가로부터), 이는 본 발명의 기술적 유익을 제시한다.

추가의 백신접종 그룹은 4주 간격으로 10 mcg의 R21/매트릭스-M의 2회 용량, 이어서 추가의 4주 후 50 mcg 매트릭스-M 중 2 mcg R21 용량을 받았다. 이렇게 면역화된 7명의 대상체를 3 내지 4주 후에 챌린지하였으며, 5명이 멸균적으로 보호되었고, 71%의 효능 비율이었다 (도면에서 그룹 5). 이는 50 mcg의 매트릭스-M 중 10 mcg의 R21의 3회 용량으로 보호된 9/11과는 약간 상이하다. 3회의 낮은 용량의 R21/매트릭스-M으로의 이들 데이터는 그의 높은 수준 효능의 추가의 증거를 제공한다.

최종 그룹 (도면에서 그룹 6)은 20개월 먼저 R21을 받은 단지 2명의 백신접종자였다: 아무도 멸균적으로 보호되지 않았다. 이러한 그룹에서의 샘플 크기는 매우 낮았다.

데이터의 표: R21 및 RTS,S 말라리아 백신으로의 면역화 후의 보호의 내구성이 제시되어 있다. 마지막 용량 후 5 내지 8개월에서의 전체 효능은 초기 챌랜지에서 보호된 비율을 마지막 챌린지에서 보호된 비율과 곱함으로써 계산되며, 백분율로서 표현된다. 단지 초기 챌린지에서 보호된 사람들만 재-챌린지된다. R21 내구성있는 효능 (49%)은 RTS,S (26%)에 대해 보고된 비율의 약 2배로 보인다.

데이터:

R21 (본 연구)

0, 1, 2개월에서 3 x 10 mcg 용량 4주에 챌린지 9 / 11 = 82%

마지막 용량 후 8.5개월에 5명 (9명 중)이 재-챌린지됨 3 / 5 = 60%

마지막 용량 후 8.5개월에서의 전체 R21 효능 = 49%

RTS,S (공지된/이전에 공개된 연구)

Regules et al. J Infect Dis 2016 마지막 용량 챌린지 후 3주 10 / 16 = 62.5%

마지막 용량 후 8개월에 10명 중 5명이 재-챌린지됨 1 / 5 = 20%

마지막 용량 후 8.5개월에서의 전체 효능= 12.5%

Kester et al. J Infect Dis 2009 0, 1, 2개월: 2 내지 3주에 챌린지: 18/36 보호됨 = 50%

마지막 용량 후 5.5개월에 재챌린지: 4/9 보호됨 = 44%

마지막 용량 후 5.5개월에서의 RTS,S/AS01의 전체 효능 = 22%

(RTS,S/AS02 0, 1, 2 경우에: 14/44 보호됨 = 32% 및 재-챌린지 시 4/9 (44%). 전체 = 14%)

Rampling et al. J Infect Dis 2016 0, 1, 2개월: 4주에 12/16 보호됨 = 75%

제1 CHMI 후 6개월에 재-챌린지: 5/6 보호됨 = 83%

마지막 용량 후 7개월에서의 전체 효능 = 62%

평균을 가늠하기 위해: 12.5 x 5, 22 x 9, 14 x 9, 62 x 6: 합계 = 758.5 / 29

평균된 전체 RTS,S 5 내지 8개월 효능: = 26%

실시예 6: R21 낮은 용량 백신접종은 서부 아프리카 뿐만 아니라 영국 대상체에서 면역원성이다

본 실시예에서, 본 발명자들은 서부 아프리카에서의 낮은 용량 레지멘의 양호한 면역원성을 처음으로 보인다.

본 발명자들은 도 14를 언급한다.

이러한 데이터는 R21 낮은 용량 백신접종이 서부 아프리카 뿐만 아니라 영국 대상체에서 면역원성임을 입증한다. 50 마이크로그램 매트릭스-M 중 10 마이크로그램의 용량으로의 R21을 영국 대상체 (VAC53 시험) 및 부르키나 파소 (반포라)로부터의 서부 아프리카 대상체 (Vac060 시험에서) 둘 다에게 투여하였다. 각각의 시험에서 백신접종을 제0개월, 제1개월 및 제2개월에 3회 용량 레지멘으로서 투여하였다. 2회 용량 후의 면역원성은 둘 다의 집단에서 유사하였으며, 3회 용량 후 부르키나 파소 성인에서 단지 약간 더 낮았다. 이들 데이터는 심지어 높은 수준 풍토적 말라리아 전염을 갖는 지역에서도 낮은 용량 R21 백신의 양호한 면역원성을 제시한다.

실시예 7: 2 마이크로그램 뿐만 아니라 10 마이크로그램 R21로의 낮은 용량 면역원성

본 실시예에서, 본 발명자들은 2 마이크로그램 R21이 또한 면역원성 용량임을 제시한다.

이는 낮은 용량의 유용성을 입증한다 - 이전의 실시예에서의 데이터는 10 마이크로그램에 대해서였다.

본 발명자들은 도 15를 언급한다.

영국 건강한 성인 대상체를 3회 용량 0, 1, 2개월 면역화 레지멘에서 R21의 상이한 용량으로 면역화하였다. 제84일에 R21의 3회 용량 후에 유도된 항체 역가는 2 마이크로그램, 10 마이크로그램 및 50 마이크로그램의 R21 (각각의 경우에 50 마이크로그램의 매트릭스-M 아주반트 중)을 사용하여 매우 유사하였다. 2 마이크로그램 용량 레지멘의 국소 및 전신 반응원성은 10 마이크로그램 또는 50 마이크로그램 투여량으로 관찰된 것과 비교 시 보다 양호하였다 (즉, 감소하였음). 따라서, 본 발명자들은 본 발명에 교시된 낮은 용량의 유익을 입증한다 - 감소된 반응원성에 의해 예시된 바와 같은 감소된 부작용 - 훨씬 더 높은 용량 예컨대 50 마이크로그램 용량과 유사한 항체 역가를 여전히 달성함.

실시예 8: R21로의 낮은 용량 백신접종은 백신 반응의 보다 양호한 내구성을 생성한다

여기서, 본 발명자들은 놀랍게도 보다 양호한 면역 반응이 50 마이크로그램 R21과 비교 시 10으로 제238일에 발견됨을 제시한다: 즉, 본 발명자들은 용량이 더 낮을수록 더 양호함 을 제시한다.

본 발명자들은 도 16을 언급한다.

데이터는 R21로의 낮은 용량 백신접종이 백신 반응의 보다 양호한 내구성을 생성함을 입증한다. 영국 대상체를 10 마이크로그램 또는 50 마이크로그램 (항상 50 마이크로그램 매트릭스-M 아주반트를 가짐)의 투여량을 갖는 R21로 0, 1, 2개월에 면역화하였다. 제1 용량 후 제238일에 백신 효능의 상관성인 환상포자소체 단백질의 중심 반복부 영역에 대한 항체 수준은 보다 높은 용량 50 마이크로그램 레지멘보다 낮은 용량 10 마이크로그램 레지멘으로 더 높았으며, 즉, 본 발명자들은 더 낮은 용량이 더 양호함 을 제시한다.

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본 발명의 예시적인 실시양태가 첨부된 도면을 참조로 본원에 상세하게 개시되었지만, 본 발명은 정확한 실시양태에 제한되지 않으며, 첨부된 청구범위 및 그들의 등가물에 의해 정의되는 바와 같은 본 발명의 범위로부터 벗어나지 않고 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 다양한 변화 및 변형이 그에 실행될 수 있음이 이해된다.

SEQUENCE LISTING <110> Oxford University Innovation Limited <120> MALARIA VACCINE <130> P10450WO <150> 1712092.4 <151> 2017-07-27 <150> 1718337.7 <151> 2017-11-06 <160> 8 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 410 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> R21 <400> 1 Met Asp Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn 1 5 10 15 Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn 20 25 30 Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn 35 40 45 Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn 50 55 60 Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Lys Asn Asn Gln 65 70 75 80 Gly Asn Gly Gln Gly His Asn Met Pro Asn Asp Pro Asn Arg Asn Val 85 90 95 Asp Glu Asn Ala Asn Ala Asn Ser Ala Val Lys Asn Asn Asn Asn Glu 100 105 110 Glu Pro Ser Asp Lys His Ile Lys Glu Tyr Leu Asn Lys Ile Gln Asn 115 120 125 Ser Leu Ser Thr Glu Trp Ser Pro Cys Ser Val Thr Cys Gly Asn Gly 130 135 140 Ile Gln Val Arg Ile Lys Pro Gly Ser Ala Asn Lys Pro 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Claims

플라스모디움 팔시파룸(Plasmodium falciparum) 감염에 감수성인 인간 대상체의 면역화에 사용하기 위한,
서열식별번호: 1의 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 1과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 폴리펩티드 (R21)를 포함하며,
여기서 상기 폴리펩티드는 바이러스-유사 입자 (VLP)의 형태이며, 여기서 상기 입자는 10% 미만의 유리 B형 간염 표면 항원 단백질을 포함하는 것인
조성물로서,
상기 조성물은 적어도 18세의 대상체에 대해 투여당 1 μg 내지 20 μg R21의 적어도 1회 용량, 또는 18세 미만의 대상체에 대해 투여당 0.5 μg 내지 10 μg R21의 적어도 1회 용량의 투여량 레지멘으로 투여되는 것을 특징으로 하는
조성물.
플라스모디움 팔시파룸 감염에 감수성인 인간 대상체의 면역화에 사용하기 위한,
서열식별번호: 1의 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 1과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 폴리펩티드 (R21)를 포함하며,
여기서 상기 폴리펩티드는 바이러스-유사 입자 (VLP)의 형태이고, 여기서 VLP는 환상포자소체 단백질 (CSP) 서열 및 B형 간염 표면 항원 (HBsAg) 서열을 1:1 비로 포함하는 것인
조성물로서,
상기 조성물은 적어도 18세의 대상체에 대해 투여당 1 μg 내지 20 μg R21의 적어도 1회 용량, 또는 18세 미만의 대상체에 대해 투여당 0.5 μg 내지 10 μg R21의 적어도 1회 용량의 투여량 레지멘으로 투여되는 것을 특징으로 하는
조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 조성물이 적어도 18세의 대상체에 대해 투여당 5 μg 내지 20 μg R21의 적어도 1회 용량, 또는 18세 미만의 대상체에 대해 투여당 2.5 μg 내지 10 μg R21의 적어도 1회 용량의 투여량 레지멘으로 투여되는 것인 조성물.
제3항에 있어서, 상기 조성물이 적어도 18세의 대상체에 대해 투여당 10 μg R21의 적어도 1회 용량, 또는 18세 미만의 대상체에 대해 투여당 5 μg R21의 적어도 1회 용량의 투여량 레지멘으로 투여되는 것인 조성물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 투여량 레지멘이 2회 용량을 포함하는 것인 조성물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 투여량 레지멘이 3회 용량을 포함하는 것인 조성물.
제5항 또는 제6항에 있어서, 최종 용량이 제1 용량 중 R21의 양의 10%-50%를 함유하는 것인 조성물.
제7항에 있어서, 최종 용량이 제1 용량 중 R21의 양의 20%를 함유하는 것인 조성물.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 아주반트를 추가로 포함하며, 여기서 상기 아주반트는 매트릭스-M이고, 여기서 상기 아주반트는 R21:매트릭스-M의 범위 1:1 내지 1:50의 비로 존재하는 것인 조성물.
제9항에 있어서, 상기 아주반트가 R21:매트릭스-M의 범위 1:2 내지 1:25의 비로 존재하는 것인 조성물.
제10항에 있어서, 상기 아주반트가 R21:매트릭스-M의 범위 1:5 내지 1:10의 비로 존재하는 것인 조성물.
제4항에 있어서, 상기 용량이 적어도 18세의 대상체에 대해 10 내지 500 μg 아주반트, 또는 18세 미만의 대상체에 대해 5 내지 250 μg 아주반트를 포함하며, 여기서 상기 아주반트는 매트릭스-M인 조성물.
제4항에 있어서, 상기 용량이 적어도 18세의 대상체에 대해 20 내지 200 μg 아주반트, 또는 18세 미만의 대상체에 대해 10 내지 100 μg 아주반트를 포함하며, 여기서 상기 아주반트는 매트릭스-M인 조성물.
제4항에 있어서, 상기 용량이 적어도 18세의 대상체에 대해 25 내지 50 μg 아주반트, 또는 18세 미만의 대상체에 대해 5 내지 50 μg 아주반트를 포함하며, 여기서 상기 아주반트는 매트릭스-M인 조성물.
제4항 또는 제5항에 있어서, 상기 용량이 적어도 18세의 대상체에 대해 약 10 μg R21 및 약 50 μg 아주반트를 포함하거나, 또는 18세 미만의 대상체에 대해 약 5 μg R21 및 약 25 μg 아주반트를 포함하며, 여기서 상기 아주반트는 매트릭스-M인 조성물.
제5항 내지 제15항에 있어서, 상기 용량이 1주 내지 12주의 간격(들)으로 상기 대상체에게 투여되는 것인 조성물.
제16항에 있어서, 상기 용량이 4주의 간격으로 상기 대상체에게 투여되는 것인 조성물.
제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 서열식별번호: 3의 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 3과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 폴리펩티드 (Rv21)를 추가로 포함하는 조성물.
제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 바이러스 벡터를 추가로 포함하며, 상기 바이러스 벡터는 말라리아 항원으로부터의, 바람직하게는 피. 팔시파룸(P. falciparum) 또는 피. 비박스(P. vivax) 항원으로부터의 적어도 1개의 에피토프를 코딩하는 핵산을 포함하는 것인 조성물.
제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물이 제약 조성물인 조성물.
제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물이 백신 조성물인 조성물.
제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물이 인간에서 피. 팔시파룸에 대한 보호적 면역 반응을 유도할 수 있는 것인 조성물.
적어도 제1 및 최종 조성물; 및
인간 대상체에게의 투여에 대한 지침서
를 포함하는 키트로서,
상기 제1 조성물은 적어도 18세의 대상체에 대해 투여당 1 μg 내지 20 μg R21, 또는 18세 미만의 대상체에 대해 투여당 0.5 μg 내지 10 μg R21을 포함하고, 상기 조성물은 아주반트를 추가로 포함하며, 여기서 상기 아주반트는 매트릭스-M이고, 여기서 상기 아주반트는 R21:매트릭스-M의 범위 1:1 내지 1:50의 비로 존재하고;
상기 최종 조성물은 투여당 제1 조성물 중 R21의 양의 10%-50%, 바람직하게는 20%를 포함하고, 상기 최종 조성물은 아주반트를 추가로 포함하며, 여기서 상기 아주반트는 매트릭스-M이고, 여기서 상기 아주반트는 R21:매트릭스-M의 범위 1:1 내지 1:50의 비로 존재하는 것인
키트.
제23항에 있어서, 제2 조성물을 추가로 포함하며,
상기 제2 조성물은 상기 제1 조성물과 동일한 것인
키트.
플라스모디움 팔시파룸 감염에 감수성인 인간 대상체의 치료/면역화를 위한 의약의 제조에 있어서의 R21을 포함하는 조성물의 용도로서,
상기 조성물은 적어도 18세의 대상체에 대해 투여당 1 μg 내지 20 μg R21의 적어도 1회 용량, 또는 18세 미만의 대상체에 대해 투여당 0.5 μg 내지 10 μg R21의 적어도 1회 용량을 포함하는 것을 특징으로 하는
용도.
제25항에 있어서, 상기 조성물이 아주반트를 추가로 포함하며, 여기서 상기 아주반트는 매트릭스-M이고, 여기서 상기 아주반트는 R21:매트릭스-M의 범위 1:1 내지 1:50의 비로 존재하는 것인 용도.
서열식별번호: 1의 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 1과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 폴리펩티드 (R21)를 포함하며, 여기서 상기 폴리펩티드는 바이러스-유사 입자 (VLP)의 형태이며, 여기서 상기 입자는 10% 미만의 유리 B형 간염 표면 항원 단백질을 포함하는 것인 조성물을 플라스모디움 팔시파룸 감염에 감수성인 인간 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 조성물은 적어도 18세의 대상체에 대해 투여당 1 μg 내지 20 μg R21의 적어도 1회 용량, 또는 18세 미만의 대상체에 대해 투여당 0.5 μg 내지 10 μg R21의 적어도 1회 용량의 투여량 레지멘으로 투여되는 것인, 플라스모디움 팔시파룸 감염에 감수성인 인간 대상체의 면역화의 방법.
제27항에 있어서, 상기 조성물이 아주반트를 추가로 포함하며, 여기서 상기 아주반트는 매트릭스-M이고, 여기서 상기 아주반트는 R21:매트릭스-M의 범위 1:1 내지 1:50의 비로 존재하는 것인 방법.
제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여량 레지멘이 적어도 18세의 대상체에 대해 범위 0.0000125 내지 0.0003333 mg/Kg, 또는 18세 미만의 대상체에 대해 0.00000625 내지 0.001667mg/Kg의 양으로의 상기 인간 대상체에게의 서열식별번호: 1의 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 1과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하거나 또는 그로 이루어진 상기 폴리펩티드 (R21)의 투여를 포함하며, 여기서 상기 폴리펩티드는 바이러스-유사 입자 (VLP)의 형태이며, 여기서 상기 입자는 10% 미만의 유리 B형 간염 표면 항원 단백질을 포함하는 것인 조성물, 키트, 용도 또는 방법.
제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여가 근육내 투여인 조성물, 키트, 용도 또는 방법.