KR20200015672A

KR20200015672A - 비아칸젤리신을 포함하는 폐 또는 뇌의 생체분포도 증진을 위한 약제학적 제형

Info

Publication number: KR20200015672A
Application number: KR1020200013048A
Authority: KR
Inventors: 목혜정; 임융호; 강윤영; 송지현
Original assignee: 건국대학교 산학협력단
Priority date: 2018-08-01
Filing date: 2020-02-04
Publication date: 2020-02-12
Also published as: KR102313068B1

Abstract

본 발명은 비아칸젤리신을 포함하는 폐 또는 뇌의 생체분포도 증진을 위한 약제학적 제형에 관한 것으로, 보다 구체적으로 폐 질환 또는 뇌 질환 치료용 약물 및 비아칸젤리신을 포함하는 약제학적 제형의 생체분포도 증진 효과에 관한 것으로, 본 발명의 커큐민, 움벨리페론 또는 독소루비신과 같은 활성 성분 및 비아칸젤리신을 포함하는 약제학적 제형의 경우 다른 장기에는 다른 영향을 미치지 않으면서, 생체분포도가 폐 및 뇌에 집중되는 효과를 확인하고, 활성 성분의 분포를 형광이미징의 방법으로 직적적으로 분석이 가능하며, 생체 시료의 전처리 과정이나 추출 과정 중에서 활성물질의 변성 및 농도 변화 등의 문제점 없이 활성 성분을 분석할 수 있어, in vivo 상에서의 활성물질의 생체분포 증진 효과를 쉽고 빠르게 볼 수 있는 효과가 있다.

Description

비아칸젤리신을 포함하는 폐 또는 뇌의 생체분포도 증진을 위한 약제학적 제형{Pharmaceutical formulation for enhancing biodistribution of the lung or brain, including byakangelicin}

본 발명은 비아칸젤리신을 포함하는 폐 또는 뇌의 생체분포도 증진을 위한 약제학적 제형에 관한 것으로, 보다 구체적으로 폐 질환 또는 뇌 질환 치료용 약물 및 비아칸젤리신을 포함하는 약제학적 제형의 생체분포도 증진 효과에 관한 것이다.

원하는 곳에 약물을 선택적으로 전달할 수 있는 선택적 약물 전달 시스템(targeted drug delivery system)은 의·약학 분야에서 가장 중요한 과제 중의 하나이며, 지금도 수많은 연구자가 보다 우수한 선택적 약물 전달 시스템의 개발에 몰두하고 있다. 특정 세포, 장기 혹은 질환에 선택적으로 약물을 전달할 수 있다면, 현재 약물 치료에 의하여 발생하는 많은 문제점을 바로 해결할 수 있다.

일반적으로 대부분의 약물은 전신 투여 시 질환 세포뿐 만 아니라, 정상 세포에도 그 독성을 발현하여 많은 부작용을 일으키게 된다. 이러한 부작용 때문에 약물 투여량 및 투여 횟수 등에 제한이 따르며, 따라서 효과적으로 질병을 치료하지 못하는 경우가 발생하게 된다. 대표적으로 항암제 투여에 의한 항암 치료 시 발생하는 골수 감소, 위장 장애, 탈모 등의 부작용을 들 수 있다.

약물 전달 시스템의 중요성 및 앞으로의 발전 가능성을 고려할 때, 약물 전달 시스템의 생체 내 분포, 대사, 소실 등의 생체 내 거동을 영상화하여 평가, 분석하는 기술은 기존 약물 전달 시스템의 문제점을 파악하고, 새로운 약물 전달 시스템을 보다 신뢰할 수 있게 정확히 평가하며, 보다 효율적인 약물 전달 시스템의 설계 방향을 제시할 수 있기 때문에 그 효용 가치가 매우 크다.

앞에서 언급한 대로 의약품의 약리 효과는 생체 내 작용부위에 도달한 약물 분자에 의해 발현되고 다른 부위로 이행된 약물에 의해 부작용이 나타나게 된다. 따라서, 약물치료를 효과적으로 안전하게 행하기 위해서는 약물을 가능한 한 작용 발현 부위에 선택적으로 전달시켜야 할 뿐만 아니라 최적의 양이 원하는 시간만큼 즉, 효율적으로 약물의 생체 내 거동을 평가하는 기술의 중요성은 매우 크다.

이에 본 발명자들은 의약품을 단일처리한 경우보다 비아칸젤리신(Byakangelicin)과 함께 처리할 경우 의약품의 뇌와 폐에서의 생체분포도가 현저히 증가함을 확인하였으며, 또한, 뇌 또는 폐를 제외한 다른 장기에는 다른 영향을 미치지 않는 것을 확인함에 따라 본 발명을 완성하였다.

공개특허공보 10-2003-0051623호

본 발명의 목적은 폐의 생체분포도 증진을 위한 약제학적 제형을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 뇌의 생체분포도 증진을 위한 약제학적 제형을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여,

본 발명은 폐 질환 치료용 약물; 및 비아칸젤리신(Byakangelicin);을 포함하는 폐의 생체분포도 증진을 위한 약제학적 제형을 제공한다.

또한, 본 발명은 뇌 질환 치료용 약물; 및 비아칸젤리신(Byakangelicin);을 포함하는 뇌의 생체분포도 증진을 위한 약제학적 제형을 제공한다.

본 발명의 커큐민, 움벨리페론 또는 독소루비신과 같은 활성 성분 및 비아칸젤리신을 포함하는 약제학적 제형의 경우 뇌 또는 폐를 제외한 다른 장기에는 다른 영향을 미치지 않으면서, 생체분포도가 폐 또는 뇌에 집중되는 효과를 확인하고, 활성 성분의 분포를 형광이미징의 방법으로 직접적으로 분석이 가능하며, 생체 시료의 전처리 과정이나 추출 과정 중에서 활성물질의 변성 및 농도 변화 등의 문제점 없이 활성 성분을 분석할 수 있어, in vivo 상에서의 활성물질의 생체분포 증진 효과를 쉽고 빠르게 볼 수 있는 효과가 있다.

도 1은 각 장기에서 움벨리페론의 생체분포도를 확인한 결과이다.
도 2는 뇌와 폐에 분포한 움벨리페론의 양을 정량화한 결과이다.
도 3은 각 장기에서 커큐민의 생체분포도를 확인한 결과이다.
도 4는 각 장기에서 독소루비신의 생체분포도를 확인한 결과이다.
도 5는 각 장기에서 이반스블루(Evan's blue)의 생체분포도를 확인한 결과이다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

폐 또는 뇌의 생체분포도 증진을 위한 약제학적 제형

본 발명은 폐 또는 뇌 질환 치료용 약물; 및 비아칸젤리신(Byakangelicin); 을 포함하는 폐 또는 뇌의 생체분포도 증진을 위한 약제학적 제형을 제공한다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 폐 질환은 만성기침, 천식, 기관지확장증, 만성폐쇄성폐질환(COPD), 급성기관지염 및 폐암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상일 수 있다.

또한, 본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 뇌 질환은 치매, 알츠하이머 병(Alzheimer's disease), 다발성 경화증(Multiple sclerosis), 파킨슨병(Parkinson's disease), 뇌졸중(stroke) 및 허혈장애(ischemia), 야콥-크루츠펠트병(Jacob-Creutzfeldt disease), 헌팅턴병(Huntington's disease), 니만-픽병(nieman-pick disease), 뇌전증(Epilepsy), 우울증(Depressive Disorder), 불안장애(Anxiety Disorders) 및 뇌종양(brain tumor)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상일 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 약제학적 제형은 각각의 사용 목적에 맞게 통상의 방법에 따라 과립, 정제, 현탁제, 에멀젼, 시럽, 연질 또는 경질 젤라틴 캅셀 및 에어로졸 등의 다양한 형태로 제형화하여 사용할 수 있으며, 경구 투여하거나 정맥내, 복강내, 피하, 직장, 국소 투여 등을 포함한 다양한 경로를 통해 투여될 수 있다.

이러한 제형에 포함될 수 있는 적합한 담체, 부형제 또는 희석제의 예로는 락토오스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리쓰리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로스, 메틸 셀룰로스, 비정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등을 들 수 있다. 본 발명의 약제학적 제형은 충전제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제, 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다.

경구 투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 상기 약제학적 제형에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면 전분, 탄산칼슘, 수크로스, 락토오스, 젤라틴 등을 혼합하여 제형화한다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크와 같은 윤활제가 사용될 수 있다. 경구용 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 예시될 수 있으며, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 액체 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.

비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액제, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제, 좌제 등을 예시할 수 있다. 비수성용제, 현탁제에는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 포함될 수 있다 주사제에는 용해제, 등장화제, 현탁화제, 유화제, 안정화제, 방부제 등과 같은 종래의 첨가제가 포함될 수 있다.

본 발명의 약제학적 제제는 약제학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에서, "약제학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 제제는 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고, 종래의 치료제와 순차적으로 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.

구체적으로, 본 발명의 약제학적 제제에서 유효량은 환자의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으며, 일반적으로는 체중 ㎏ 당 0.01 내지 100 mg, 바람직하게는 0.1 내지 10 mg을 매일 또는 격일 투여하거나 1일 1 내지 3회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나, 투여 경로, 질병의 중증도, 성별, 체중, 연령 등에 따라서 증감될 수 있으므로 상기 투여량이 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 약제학적 제제는 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내 (intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다. 본 발명에서 "투여"는 임의의 적절한 방법으로 환자에게 소정의 물질을 제공하는 것을 의미하며, 본 발명의 약제학적 제제의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 일반적인 모든 경로를 통하여 경구 또는 비경구 투여될 수 있다. 또한, 본 발명의 약제학적 제제는 유효성분을 표적 세포로 전달할 수 있는 임의의 장치를 이용해 투여될 수 있다.

본 발명에서 "대상"은 인간, 원숭이, 소, 말, 양, 돼지, 닭, 칠면조, 메추라기, 고양이, 개, 마우스, 쥐, 또끼 또는 기니아 피그를 포함하나 이에 한정되지 아니하는 동물을 의미하고, 일 실시예에서는 포유류를, 또 다른 실시예에서는 인간을 의미한다.

이하, 본 발명을 하기의 실시예에 의하여 더욱 상세하게 설명한다. 단, 하기의 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기의 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.

<준비예>

유기용매인 DMSO를 이용하여 움벨리페론(umbelliferone, Umb)은 100 mg/ml, 커큐민(curcumin, Cur)은 2.66 mg/ml, 독소루비신(Doxorubicin, Dox)은 5.4 mg/ml로 녹인 뒤, 원하는 농도가 되도록 희석하여 사용하였다.

<실험예 1> 움벨리페론(Umbelliferone; Umb)의 생체분포도 측정

움벨리페론(umbelliferone, Umb)을 유기용매인 DMSO를 이용하여 100 mg/ml로 녹인 뒤, 크레모포아(Cremophor)와 DMSO가 각각 15%씩 들어있는 PBS를 이용하여 희석한 뒤, ICR 마우스의 꼬리 정맥에 주사하였다(4 mg/kg).

이때 최종 움벨리페론 농도는 0.5 mg/ml로 고정하고 다른 폴리페놀(데커신(Decursin ;Dec), 노다케닌(Nodakenin; Nod), 비아칸젤리신(Byakangelicin; Byn))의 농도를 0, 10 mg/ml으로 다양하게 하여 질량 비 1:0, 1:20이 되도록 준비하고, 준비한 용액 200 μl를 ICR (암컷, 6주) 꼬리 정맥에 주사 하였다.

움벨리페론(Umbelliferone) 투여 2 분 후 움벨리페론(Umbelliferone)의 생체 내 분포를 관찰하기 위하여 안락사한 쥐의 장기를 적출, PBS로 세척하였다. 각 장기들은 Lago-X (Spectral Instruments Imaging, Tucson, AZ, USA)를 이용하여 Excitation 360 nm, Emission 490 nm에서 측정하였다.

각 장기의 total flux는 Lago-X를 이용하여 분석하고 자가 형광(autofluorescence)으로 인한 오차를 제외하기 위하여 움벨리페론(Umbelliferone)이 투여된 장기의 total flux에서 일반 장기의 total flux를 빼주어 움벨리페론(Umbelliferone) 만의 total flux를 구하였으며, 장기는 다음의 질량 분석 때까지 -70℃에서 보관하였다.

도 1에 나타낸 바와 같이, 뇌에서 측정된 Umb의 형광은 8.9 ± 4.7이였으며, Dec, Nod와 혼합하였을 때는 혼합 비율이 증가하여도 형광에 차이가 없었다.

그러나, Byn을 1:20(w/r)으로 혼합한 경우 37.4 ± 0.1로 4.2배 높게 나타난 것을 확인하였다. 폐에서 측정된 Umb의 형광은 8.1 ± 9.1 이었으며, Byn을 1:20(w/r)으로 혼합하여 전달하면 58.0 ± 29.5 로 7.2배 높게 측정되어 유의한 차이를 보이는 것을 확인하였다. Byn의 혼합 비율이 1:20(w/r)으로 증가하더라도 췌장에서 측정된 Umb의 형광은 8.2 ± 6.2에서 1.1 ± 3.8로 감소하였으며, 간과 비장에서 측정된 형광은 큰 차이를 보이지 않았다.

<실험예 2> 장기 내 움벨리페론(Umbelliferone; Umb)의 정량 분석

뇌, 폐에 분포한 움벨리페론 (Umbelliferone)양을 정량하기 위하여 PBS (pH 7.4, 장기:PBS =1:3, w/v)를 넣고 장기를 균질화하였다.

균질액 500 μl에 10% SDS 200 μl, 에틸아세테이트 (Ethyl Acetate) 500 μl를 혼합한 뒤, 10 분간 볼텍싱(voltexing)처리하였다. 이 혼합물을 12,000 rpm에서 3 분간 원심 분리하여 얻은 상층액은 상온에서 건조시켜 얻은 최종 산물은 DMSO를 이용하여 녹인 뒤 Excitation 325 nm, Emission 495 nm 측정하였다.

장기내에 존재하는 움벨리페론(Umbelliferone)을 정량하기 위해, DMSO에 녹인 움벨리페론(Umbelliferone)을 순차적 희석 (serial dilution, 0-500 ng/ml)하여 스탠다드로 사용하였다.

도 1의 이미징을 통해 얻은 결과와 비교하기 위해, Umb 단독으로 투여된 뇌, 폐에서 추출한 Umb의 형광을 기준으로 폴리페놀 혼합물을 비율별로 투여한 각 장기에서 추출된 Umb의 형광을 비교 분석하였다.

그 결과, 도 2와 같이 장기에서 추출된 결과는 도 1의 결과와 유사한 경향을 보이는 것을 확인하였다.

<실험예 3> 커큐민(Curcumin; Cur)의 생체분포도 측정

다른 폴리페놀 Byn에 의해 생체분포가 변하는지 확인하고자 커큐민(Curcumin, Cur)을 폴리페놀 혼합물의 표적물질(tracing molecule)로 사용하였다. DMSO에 녹인 커큐민(Curcumin) 2.66 mg/ml과 다른 폴리페놀(Dec, 또는 Byn) 0, 1.33, 2.66, 5.32, 53.2, 또는 133 mg/ml를 부피비 1:1로 혼합하여 질량비 1:0, 1:0.5, 1:2, 1:20, 1:50이 되도록 하였다.

상기 혼합물이 녹아 있는 DMSO와 Cremophor가 각각 15%씩 들어있는 PBS 용액을 만들고, 상기 용액 200 μl를 ICR (암컷, 6주) 쥐 꼬리 정맥에 주사 하였다(커큐민 기준 1.6 mg/kg).

커큐민(curcumin, Cur) 투여 2 분 후 커큐민(Curcumin)의 생체 내 분포를 관찰하기 위하여 안락사한 쥐의 장기를 적출, PBS로 세척하였다. 각 장기들은 In Vivo Imaging System (IVIS, Caliper Life Sciences Lumina Ⅱ, Massachusetts, USA)를 이용하여 Excitation 430, Emission 509nm에서 측정하였다. 각 장기의 total flux는 IVIS를 이용하여 분석하고 자가 형광을 제외하기 위하여 커큐민(Curcumin)이 투여된 장기의 total flux에서 일반 장기의 total flux를 빼주어 커큐민 만의 total flux를 구하고, 장기는 다음 분석 때까지 -70℃에서 보관하였다.

도 3에 나타낸 바와 같이, 커큐민 단독으로 투여한 경우 뇌, 폐, 췌장(pancreas), 간 (liver), 비장 (spleen)에서 측정된 형광은 3.2 ± 1.6, 5.9 ± 3.8, 3.6 ± 1.2, 11.2 ± 11.3, 0.3 ± 0.2이며, 데커신(Dec)과 1:50(w/r)으로 혼합하여 투여했을때 형광은 5.7 ± 1.7, 6.8 ± 2.8, 4.0 ± 1.0, 8.8 ± 1.9, 0.3 ± 0.1 으로 커큐민(cur) 단독일때와 큰 차이를 보이지 않아 움베리페론과 유사한 경향을 보이는 것을 확인하였다. 비아칸젤리신(Byn)을 커큐민(Cur)과 혼합하여 전달하면, 1:50(w/r)으로 처리한 경우 뇌에서 측정된 형광이 8.6 ± 2.1로 2.7배 증가하였으며, 폐로 전달된 커큐민(Cur)의 형광은 1:50(w/r)일때 46.6 ± 2.0으로 관찰되어, 비아칸젤리신(Byn)은 혼합비가 증가할수록 뇌와 폐로 전달되는 커큐민(Cur)의 양이 유의하게 증가함을 확인하였다. 하지만 간에서 측정된 커큐민(Cur)의 형광은 3.7 ± 2.5로 감소하는 경향을 보였고, 췌장과 비장의 형광은 2.7 ± 2.9와 0.2 ± 0.2로 혼합전과 큰 차이를 보이지 않았다.

<실험예 4> 독소루비신(Doxorubicin; Dox)의 생체분포도 측정

비아칸젤리신이 화합물 약물(chemical drug)의 생체 분포에 미치는 영향을 확인하고자, 항암제로 널리 사용되는 독소루비신을 선정하였다. 독소루비신(Dox)은 임상에서 정맥으로 투여되며 형광을 갖고 있어, 정맥 투여 후 이미징을 통해 생체 분포를 확인하는 본 연구 시스템에 적합한 약물이다. DMSO를 이용하여 독소루비신(Doxorubicin)은 5.4 mg/ml, 데커신(Decursin)과 비아칸젤리신(Byakangelicin)은 각각 300 mg/ml로 녹였다. 독소루비신(Doxorubicin)의 농도는 4.17 mg/ml, 데커신(Decursin) 또는 비아칸젤리신(Byakangelicin)의 농도는 0, 20.85, 41.7 mg/ml이 되도록 혼합하여, 데커신(Decursin) 또는 비아칸젤리신 (Byakangelicin)과 질량비(weight ratio)가 1:0, 1:5, 1:10이 되도록 하였다.

해당 DMSO와 Cremophor가 각각 15%씩 들어있는 PBS 용액을 만들어 200 μl를 ICR (암컷, 6주) 쥐 꼬리 정맥에 주사 하였다(독소루비신 기준 5 mg/kg).

독소루비신(Doxorubicin, Dox) 투여 2 분 후 독소루비신(Doxorubicin)의 생체 내 분포를 관찰하기 위하여 안락사한 쥐의 장기를 적출, PBS로 세척하였다. 각 장기들은 In Vivo Imaging System (IVIS, Caliper Life Sciences Lumina Ⅱ, Massachusetts, USA)를 이용하여 Excitation 465, Emission 583nm에서 측정하였다. 각 장기의 total flux는 IVIS를 이용하여 분석하고 자가 형광을 제외하기 위하여 독소루비신(Doxorubicin)이 투여된 장기의 total flux에서 일반 장기의 total flux를 빼주어 독소루비신(Doxorubicin) 만의 total flux를 구하고, 장기는 다음 분석 때까지 -70℃에서 보관하였다.

도 4에 나타낸 바와 같이, 독소루비신(Dox)을 단독으로 투여하였을때 뇌, 폐, 췌장, 간, 비장에서 측정된 형광은 2.3 ± 0.6, 12.9 ± 2.9, 8.0 ± 6.5, 5.2 ± 10.5, 0.6 ± 0.5였고, 노다케닌(Nod)과 혼합한 경우 2.9 ± 0.6와 11.6 ± 0.7, 6.1 ± 0.7, 14.0 ± 1.6, 0.8 ± 0.3으로 차이가 없었으나, 데커신(Dec)과 혼합한 경우 뇌, 폐 그리고 간은 9.0 ± 6.5, 20.6 ± 7.7, 그리고 18.3 ± 9.3으로 증가하는 경향을 보였으나, 췌장과 비장은 11.9 ± 7.6과 0.8 ± 0.9로 차이가 없었다. 또한 비아칸젤리신(Byn)을 혼합한 경우는 뇌, 폐 그리고 간에서 15.0 ± 6.8, 21.9 ± 4.8, 14.6 ± 2.4으로 증가하였고, 췌장과 비장은 2.3 ± 1.4와 0.3 ± 0.3으로 감소하는 경향을 확인하여, 앞선 결과와 마찬가지로 뇌와 폐로 유효 성분의 전달을 증대시킨 것은 데커신(Dec)과 비아칸젤리신(Byn)이었다.

<실험예 5> 이반스블루(Evan's blue)의 생체분포도 측정

비아칸젤리신(Byn)이 폴리페놀이 아닌 물질 역시 폐로 전달되는 양을 늘리는지, 또한 뇌로 전달되는 양이 증가하는 이유가 BBB(blood-brain barrier) 손상에 의한 것인지 확인하고자 표적물질(tracing molecule)로 이반스블루(Evan's blue, EB)를 사용하였다.

비아칸젤리신(Byn) 0, 0.665, 1.33, 2.66, 26.6, 또는 66.5 mg/ml으로 DMSO에 녹이고, 이 DMSO와 Cremophor가 각각 15%씩 들어있는 PBS 용액을 만들었다. 이때 PBS에 이반스블루(Evan's blue)를 57.14 μg/ml로 녹여 사용하였다. 준비한 용액 200 μl를 ICR (암컷, 6주) 쥐 꼬리 정맥에 주사 하였다(이반스블루 기준 1.6 mg/kg).

이반스블루(Evan's blue) 투여 2 분 후 이반스블루(Evan's blue)의 생체 내 분포를 관찰하기 위하여 안락사한 쥐의 장기를 적출, PBS로 세척하고, 각 장기들은 In Vivo Imaging System (IVIS, Caliper Life Sciences Lumina Ⅱ, Massachusetts, USA)를 이용하여 Excitation 535, Emission 705nm에서 측정하였다. 각 장기의 total flux는 IVIS를 이용하여 분석하고 자가 형광을 제외하기 위하여 이반스블루(Evan's blue)가 투여된 장기의 total flux에서 일반 장기의 total flux를 빼주어 이반스블루(Evan's blue) 만의 total flux를 구하고, 장기는 다음 분석 때까지 -70℃에서 보관하였다.

도 5에 나타낸 바와 같이, 이반스블루 단독으로 투여한 뇌, 폐, 췌장, 간, 그리고 비장에서 측정된 형광은 1.6 ± 0.1, 5.3 ± 1.3, 2.0 ± 0.7, 2.7 ± 0.9, 1.0 ± 0.4이었고, 1:50(w/r)으로 비아칸젤리신의 혼합비가 증가되어도 각 장기에서 측정되는 형광은 1.5 ± 0.1, 5.1 ± 0.8, 1.3 ± 0.4, 1.6 ± 0.2, -0.0 ± 0.2로 차이를 보이지 않았다. 상기 결과에 의해 비아칸젤리신에 의한 물질의 뇌 분포 변화가 BBB 손상에 의한 것이 아님을 확인하였다.

이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims

뇌 질환 치료용 약물; 및
비아칸젤리신(Byakangelicin);
을 포함하는 뇌의 생체분포도 증진을 위한 약제학적 제형.
제1항에 있어서,
상기 뇌 질환은 치매, 알츠하이머 병(Alzheimer’s disease), 다발성 경화증(Multiple sclerosis), 파킨슨병(Parkinson’s disease), 뇌졸중(stroke) 및 허혈장애(ischemia), 야콥-크루츠펠트병(Jacob-Creutzfeldt disease), 헌팅턴병(Huntington's disease), 니만-픽병(nieman-pick disease), 뇌전증(Epilepsy), 우울증(Depressive Disorder), 불안장애(Anxiety Disorders) 및 뇌종양(brain tumor)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 하는 약제학적 제형.
제1항에 있어서,
상기 약제학적 제형은 분말, 과립, 정제, 현탁제, 에멀젼, 시럽, 연질 또는 경질 젤라틴 캅셀 및 에어로졸로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 하는 약제학적 제형.
제1항에 있어서,
상기 뇌 질환 치료용 약물은 화합물 약물 (chemical drug), 천연물 약물 (natural product), 바이오 약물 (biodrug), 핵산 약물 (nucleic acid drug), 펩타이드 약물 (peptide drug), 단백질 약물 (protein drug), 반합성 약물 (semi-synthetic drug), 지질 약물 (lipid drug), 효소 (enzyme), 조절 인자 (regulatory factor), 호르몬 (hormone), 성장인자 (growth factor), 조영제 (contrast agent) 및 항체 (antibody)로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 하는 약제학적 제형.
제4항에 있어서,
상기 뇌 질환 치료용 약물은 화합물 약물 (chemical drug) 또는 천연물 약물 (natural product)인 것을 특징으로 하는 약제학적 제형.
제5항에 있어서,
상기 천연물 약물은 식물유래 성분인 것을 특징으로 하는 약제학적 제형.