KR20190121305A - apoC-II 모방 펩타이드 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 아포지질단백질 C-II(apoC-II) 모방 펩타이드 및 apoC-II 모방 펩타이드의 유효량을 이용하여 환자에서 고중성지방혈증을 치료하는 방법을 제공한다.
Description
연방 후원 연구 또는 개발에 관한 진술
본 발명은 미국 보건복지부의 기관인 국립 보건원과 협동 연구 및 개발 협정 번호 HL-CR-16-005의 수행으로 개발되었다. 미국 정부는 본 발명에서 특정 권리를 갖는다.
서열 목록
본 출원은 EFS-Web을 통해 제출된 서열 목록을 포함하며, 이는 그 전체가 참조로 본원에 포함되어 있다. 2018년 XX월에 생성된 상기 ASCII 사본의 명칭은 XXXXXUS_sequencelisting.txt이며, X,XXX,XXX 바이트 크기이다.
고중성지방혈증(hypertriglyceridemia)은 전형적으로 150 mg/dL가 넘는 혈청 트리글리세라이드 수준으로 정의된다(Berglund et al., J. Clin . Endocrinol . Metab. 97:2969-2989, 2012). 트리글리세라이드가 약간 증가한 환자는 심혈관 질환의 위험이 있다(Budoff, Am J Cardiol 118:138-45, 2016). 중증 고중성지방혈증을 갖는 환자는 또한 급성 췌장염의 위험이 있다(Viljoen and Wierzbicki, Expert Rev Cardiovasc Ther 10:505-514, 2012).
고중성지방혈증은 비만, 당뇨병, 임신, 알코올 및 다양한 약물에 가장 일반적으로 부수적이다(Anderson et al., Pancreatology 9:252-257, 2009; Dominguez-Munoz et al., Int . J. Pancreatol . 10:261-267, 1991). 트리글리세라이드는 킬로미크론(chylomicron) 및 초저밀도 지질단백질(VLDL)에서 풍부하며, 지질단백질 리파아제(LPL)에 의한 지방분해는 이러한 트리글리세라이드가 풍부한 지질단백질 입자의 이화작용에서 중요한 단계이다. 드물게, 고중성지방혈증은 LPL 또는 LPL의 절대(obligate) 활성제인 apoC-II(Fojo et al., J. Intern. Med . 231:669-677, 1992) 또는 다른 유전자에서의 유전적 결함의 결과이다.
어유(fish oil)와 같은 오메가-3 다불포화 지방산이 풍부한 피브레이트(fibrate) 및 보충제는 고중성지방혈증의 주된 치료법이다(Berglund et al., J. lin. Endocrinol . Metab . 97:2969-2989, 2012). 그러나, 이들 제제가 심혈관 질환과 같은 상승된 트리글리세라이드와 관련된 위험을 낮추는데 효과적이라는 것은 명확하게 입증되지 않았다(Budoff, Am J Cardiol 118:138-45, 2016).
따라서, 일반적인 형태의 고중성지방혈증 및 유전적 결함에 의해 야기되는 고중성지방혈증인 고중성지방혈증의 치료를 위한 새로운 치료제가 필요하다.
본 발명자들은 시험관내 및 생체내 모두에서 트리글리세라이드 수준을 낮추는 능력을 갖는 apoC-II 모방 펩타이드(apoC-II mimetic peptide)를 디자인하고 생산하였다. 이들 펩타이드는 고중성지방혈증을 치료하는데 사용될 수 있다.
전형적인 구현예에서, apoC-II 모방 펩타이드는 다중나선 펩타이드로서, 나선 도메인 중 하나 이상은 양친매성이어서 펩타이드에게 지질 및/또는 지질단백질의 표면에 결합하는 능력을 부여하고, 나선 도메인 중 또 다른 하나는 LPL을 활성화시킨다. 특정 구현예에서, apoC-II 모방 펩타이드는 N-말단부터 C-말단의 순서로 제1 나선 도메인, 힌지 영역, 및 제2 나선 도메인을 포함하는 이중나선 펩타이드로서, 제1 나선 도메인은 양친매성이고, 제2 나선 도메인은 LPL을 활성화시킨다. 본 발명자들은, apoC-II과 같은 공지된 아포지질단백질의 양친매성 나선을 모델로 하여, 다양한 양친매성 나선이 적합하다는 것을 발견하였다. 본 발명자들은 또한 트리글리세라이드를 낮추는 상기 펩타이드의 능력이 LPL의 활성화에만 국한되지 않아 LPL이 감소하거나 부재하는 장애에서 이들을 사용할 수 있다는 것과, 이들이 지질단백질의 표면으로부터 apoC-III를 대체하여 apoC-III 수준이 상승된 장애에서 이들을 사용할 수 있다는 것을 발견하였다.
따라서, 제1 양태에서, N-말단부터 C-말단까지 제1 나선 도메인, 힌지 영역, 및 제2 나선 도메인을 포함하는, 50개 이하의 아미노산의 단리된 apoC-II 모방 펩타이드로서, 제1 나선 도메인은 양친매성이며, apoC-II 모방 펩타이드는 서열번호: 56의 펩타이드가 아닌 것인 펩타이드가 본원에 제공된다.
일부 구현예에서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드의 제1 도메인은 apoC-II의 천연 나선 1이다. 일부 다른 구현예에서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드의 제1 도메인은 apoC-II의 나선 1의 변이체이다. 일부 구현예에서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드의 제1 도메인은 apoC-II의 천연 나선 2이다. 일부 다른 구현예에서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드의 제1 도메인은 apoC-II의 나선 2의 변이체이다.
일부 구현예에서, apoC-II의 나선 2의 변이체는 apoC-II의 나선 2의 신장(elongation)을 포함한다. 다양한 구현예에서, apoC-II의 나선 2는 N-말단에서 1-10개의 아미노산에 의해 신장된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2는 N-말단에서 1개의 아미노산에 의해 신장된다. 이들 구현예 중 일부에서, 아미노산은 아스파트산이다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2는 N-말단에서 2개의 아미노산에 의해 신장된다. 이들 구현예 중 일부에서, 아미노산은 N-말단부터 C-말단까지 리신 및 알라닌이다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2는 N-말단에서 5개의 아미노산에 의해 신장된다. 이들 구현예 중 일부에서, apoC-II의 나선 2는 인간 apoC-II의 천연 상류 아미노산 서열, 또는 인간 apoC-II의 천연 상류 아미노산 서열의 돌연변이체에 의해 신장된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2의 변이체는 위치 40에 아스파트산을 포함한다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2의 변이체는 위치 41에 티로신 또는 트립토판을 포함한다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2의 변이체는 위치 42에 류신을 포함한다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2의 변이체는 위치 43에 리신 또는 아르기닌을 포함한다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2의 변이체는 위치 44에 알라닌 또는 글루탐산을 포함한다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2의 변이체는 위치 40에 아스파트산, 위치 41에 티로신, 위치 42에 류신, 위치 43에 리신, 및 위치 44에 글루탐산을 포함한다.
일부 구현예에서, apoC-II의 나선 2의 변이체는 apoC-II의 나선 2의 절두(truncation)를 포함한다. 이들 구현예 중 일부에서, apoC-II의 천연 나선 2의 아미노산 잔기 45-46은 결실된다. 이들 구현예 중 일부에서, apoC-II의 천연 나선 2의 아미노산 잔기 45-48은 결실된다. 이들 구현예 중 일부에서, apoC-II의 천연 나선 2의 아미노산 잔기 45-49는 결실된다. 이들 구현예 중 일부에서, apoC-II의 천연 나선 2의 아미노산 잔기 45-50은 결실된다. 이들 구현예 중 일부에서, apoC-II의 천연 나선 2의 아미노산 잔기 45-53은 결실된다.
일부 구현예에서, apoC-II의 나선 2의 변이체는 apoC-II의 나선 2의 적어도 하나의 돌연변이를 포함한다. 이들 구현예 중 일부에서, 돌연변이는 아미노산 치환이다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2의 원래의 아미노산은 천연 아미노산에 의해 치환된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2의 원래의 아미노산은 비천연 아미노산에 의해 치환된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2의 원래의 아미노산은 아미노산 유사체에 의해 치환된다. 특정 구현예에서, 아미노산 치환은 위치 45에 있다. 이들 구현예 중 일부에서, 위치 45에서의 발린은 페닐알라닌에 의해 치환된다. 특정 구현예에서, 아미노산 치환은 위치 46에 있다. 이들 구현예 중 일부에서, 위치 46에서의 아스파트산은 페닐알라닌에 의해 치환된다. 이들 구현예 중 일부에서, 위치 46에서의 아스파트산은 리신에 의해 치환된다. 이들 구현예 중 일부에서, 위치 46에서의 아스파트산은 아미노이소부티르산에 의해 치환된다. 특정 구현예에서, 아미노산 치환은 위치 48에 있다. 이들 구현예 중 일부에서, 위치 48에서의 리신은 아르기닌에 의해 치환된다. 특정 구현예에서, 아미노산 치환은 위치 49에 있다. 이들 구현예 중 일부에서, 위치 49에서의 류신은 리신에 의해 치환된다. 특정 구현예에서, 아미노산 치환은 위치 50에 있다. 이들 구현예 중 일부에서, 위치 50에서의 아르기닌은 리신에 의해 치환된다. 특정 구현예에서, 아미노산 치환은 위치 53에 있다. 이들 구현예 중 일부에서, 위치 53에서의 티로신은 류신에 의해 치환된다. 특정 구현예에서, 아미노산 치환은 위치 54에 있다. 이들 구현예 중 일부에서, 위치 54에서의 세린은 글루탐산에 의해 치환된다. 이들 구현예 중 일부에서, 위치 54에서의 세린은 리신에 의해 치환된다. 이들 구현예 중 일부에서, 위치 54에서의 세린은 아스파트산에 의해 치환된다. 특정 구현예에서, 아미노산 치환은 위치 55에 있다. 이들 구현예 중 일부에서, 위치 55에서의 리신은 아르기닌에 의해 치환된다. 특정 구현예에서, 아미노산 치환은 위치 56에 있다. 이들 구현예 중 일부에서, 위치 56에서의 세린은 페닐알라닌에 의해 치환된다. 이들 구현예 중 일부에서, 위치 56에서의 세린은 리신에 의해 치환된다. 이들 구현예 중 일부에서, 위치 56에서의 세린은 알라닌에 의해 치환된다. 이들 구현예 중 일부에서, 위치 56에서의 세린은 아미노이소부티르산에 의해 치환된다. 특정 구현예에서, 아미노산 치환은 위치 57에 있다. 이들 구현예 중 일부에서, 위치 57에서의 트레오닌은 페닐알라닌에 의해 치환된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2의 변이체는 3개의 아미노산 치환을 포함하고, 아미노산 치환은 위치 46, 위치 54, 및 위치 56에 있다. 이들 구현예 중 일부에서, 위치 46에서의 아스파트산은 페닐알라닌에 의해 치환되고, 위치 54에서의 세린은 글루탐산에 의해 치환되며, 위치 56에서의 세린은 페닐알라닌에 의해 치환된다.
일부 구현예에서, apoC-II의 나선 2의 변이체는 적어도 하나의 화학적 변형을 포함한다. 특정 구현예에서, 화학적 변형은 지방산의 공유 결합이다. 다양한 구현예에서, 지방산은 4 내지 26개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 10개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 12개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 14개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 16개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 18개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 20개의 탄소를 포함한다. 일부 구현예에서, 지방산은 포화된다. 일부 다른 구현예에서, 지방산은 불포화된다. 특정 구현예에서, 지방산은 N-말단 아미노산에 연결된다. 특정 구현예에서, 지방산은 아미노산 측기(side group)에 연결된다. 특정 구현예에서, 지방산은 리신 잔기의 ε-아민에 연결된다.
일부 구현예에서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드의 힌지 영역은 5-10개의 아미노산을 포함한다. 특정 구현예에서, 힌지 영역은 7개의 아미노산을 포함한다. 특정 구현예에서, 힌지 영역은 프롤린을 포함한다. 이들 구현예 중 일부에서, 힌지 영역은 위치 58에 프롤린을 포함한다. 특정 구현예에서, 힌지 영역은 알라닌을 포함한다. 이들 구현예 중 일부에서, 힌지 영역은 위치 58에 알라닌을 포함한다. 특정 구현예에서, 힌지 영역은 노르류신을 포함한다. 이들 구현예 중 일부에서, 힌지 영역은 위치 60에 노르류신을 포함한다. 특정 구현예에서, 힌지 영역은 리신을 포함한다. 이들 구현예 중 일부에서, 힌지 영역은 위치 60에 리신을 포함한다. 특정 구현예에서, 힌지 영역은 발린을 포함한다. 이들 구현예 중 일부에서, 힌지 영역은 위치 60에 발린을 포함한다. 특정 구현예에서, 힌지 영역은 류신을 포함한다. 이들 구현예 중 일부에서, 힌지 영역은 위치 60에 류신을 포함한다. 특정 구현예에서, 힌지 영역은 메티오닌을 포함한다. 이들 구현예 중 일부에서, 힌지 영역은 위치 60에 메티오닌을 포함한다.
일부 구현예에서, 힌지 영역은 적어도 하나의 화학적 변형을 포함한다. 특정 구현예에서, 화학적 변형은 지방산의 공유 결합이다. 다양한 구현예에서, 지방산은 4 내지 26개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 10개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 12개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 14개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 16개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 18개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 20개의 탄소를 포함한다. 일부 구현예에서, 지방산은 포화된다. 일부 다른 구현예에서, 지방산은 불포화된다. 특정 구현예에서, 지방산은 아미노산 측기에 연결된다. 특정 구현예에서, 지방산은 리신 잔기의 ε-아민에 연결된다.
다양한 구현예에서, 힌지 영역은 제1 나선 도메인 및 제2 나선 도메인이 거의 직선 형태를 유지하게 하며, 제2 도메인은 약 20° 이하의 각도로 제1 도메인으로부터 멀리 구부러진다.
일부 구현예에서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드의 제2 도메인은 apoC-II의 천연 나선 3이다. 일부 다른 구현예에서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드의 제2 도메인은 apoC-II의 나선 3의 변이체이다.
일부 구현예에서, apoC-II의 나선 3의 변이체는 apoC-II의 나선 3의 신장을 포함한다. 다양한 구현예에서, apoC-II의 나선 3은 C-말단에서 1-10개의 아미노산에 의해 신장된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3은 C-말단에서 4개의 아미노산에 의해 신장된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3은 아미노산 리신, 글리신, 글루탐산, 및 N-말단부터 C-말단까지 글루탐산에 의해 신장된다.
일부 구현예에서, apoC-II의 나선 3의 변이체는 apoC-II의 나선 3의 적어도 하나의 돌연변이를 포함한다. 이들 구현예 중 일부에서, 돌연변이는 아미노산 치환이다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3의 원래의 아미노산은 천연 아미노산에 의해 치환된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3의 원래의 아미노산은 비천연 아미노산에 의해 치환된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3의 원래의 아미노산은 아미노산 유사체에 의해 치환된다. 특정 구현예에서, 아미노산 치환은 위치 70에 있다. 이들 구현예 중 일부에서, 위치 70에서의 글루타민은 아르기닌에 의해 치환된다. 이들 구현예 중 일부에서, 위치 70에서의 글루타민은 리신에 의해 치환된다.
일부 구현예에서, apoC-II의 나선 3의 변이체는 적어도 하나의 화학적 변형을 포함한다. 특정 구현예에서, 화학적 변형은 지방산의 공유 결합이다. 다양한 구현예에서, 지방산은 4 내지 26개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 10개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 12개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 14개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 16개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 18개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 20개의 탄소를 포함한다. 일부 구현예에서, 지방산은 포화된다. 일부 다른 구현예에서, 지방산은 불포화된다. 특정 구현예에서, 지방산은 C-말단 아미노산에 연결된다. 특정 구현예에서, 지방산은 아미노산 측기에 연결된다. 특정 구현예에서, 지방산은 리신 잔기의 ε-아민에 연결된다. 특정 구현예에서, C-말단 아미노산은 C-말단 아미드에 의해 변형된다.
다양한 구현예에서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드는 정제 태그를 추가로 포함한다. 이들 구현예 중 일부에서, 정제 태그는 폴리히스티딘-태그, myc-태그, 또는 HA-태그이다.
다양한 구현예에서, apoC-II 모방 펩타이드의 제1 도메인은 지질단백질에의 결합에 대해 친화성을 갖는다. 다양한 구현예에서, 제2 도메인은 지질단백질 리파아제(LPL)를 활성화시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 펩타이드는 LPL에 의한 지방분해를 활성화시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 펩타이드는 지질단백질 내의 apoC-III을 대체할 수 있다. 일부 구현예에서, 펩타이드는 생체내 트리글리세라이드(TG) 수준을 감소시킬 수 있다. 이들 구현예 중 일부에서, 펩타이드는 LPL 결핍에 의해 유발된 상승된 TG 수준을 감소시킬 수 있다. 이들 구현예 중 일부에서, 펩타이드는 상승된 apoC-III에 의해 유발된 상승된 TG 수준을 감소시킬 수 있다. 이들 구현예 중 일부에서, 펩타이드는 apoC-II 결핍에 의해 유발된 상승된 TG 수준을 감소시킬 수 있다. 이들 구현예 중 일부에서, 펩타이드는 식후의 상승된 TG 수준을 감소시킬 수 있다.
특정 구현예에서, 펩타이드는 서열번호: 6에 제시된 서열을 갖는다.
특정 구현예에서, 펩타이드는 서열번호: 9에 제시된 서열을 갖는다.
또 다른 양태에서, apoC-II의 나선 3의 변이체로 구성되는, 30개 이하의 아미노산의 단리된 apoC-II 모방 펩타이드가 본원에 제공된다.
일부 구현예에서, apoC-II의 나선 3의 변이체는 apoC-II의 나선 3의 신장을 포함한다. 다양한 구현예에서, apoC-II의 나선 3은 N-말단에서 1-10개의 아미노산에 의해 신장된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3은 N-말단에서 6개의 아미노산에 의해 신장된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3의 변이체는 위치 60에 리신 또는 메티오닌을 포함한다. 다양한 구현예에서, apoC-II의 나선 3은 C-말단에서 1-10개의 아미노산에 의해 신장된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3은 C-말단에서 4개의 아미노산에 의해 신장된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3은 아미노산 리신, 글리신, 글루탐산, 및 N-말단부터 C-말단까지 글루탐산에 의해 신장된다.
일부 구현예에서, apoC-II의 나선 3의 변이체는 apoC-II의 나선 3의 적어도 하나의 돌연변이를 포함한다. 이들 구현예 중 일부에서, 돌연변이는 아미노산 치환이다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3의 원래의 아미노산은 천연 아미노산에 의해 치환된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3의 원래의 아미노산은 비천연 아미노산에 의해 치환된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3의 원래의 아미노산은 아미노산 유사체에 의해 치환된다.
일부 구현예에서, apoC-II의 나선 3의 변이체는 적어도 하나의 화학적 변형을 포함한다. 특정 구현예에서, 화학적 변형은 지방산의 공유 결합이다. 다양한 구현예에서, 지방산은 4 내지 26개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 10개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 12개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 14개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 16개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 18개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 20개의 탄소를 포함한다. 일부 구현예에서, 지방산은 포화된다. 일부 다른 구현예에서, 지방산은 불포화된다. 특정 구현예에서, 지방산은 N-말단 아미노산에 연결된다. 특정 구현예에서, 지방산은 C-말단 아미노산에 연결된다. 특정 구현예에서, 지방산은 아미노산 측기에 연결된다. 특정 구현예에서, 지방산은 리신 잔기의 ε-아민에 연결된다.
다양한 구현예에서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드는 정제 태그를 추가로 포함한다. 이들 구현예 중 일부에서, 정제 태그는 폴리히스티딘-태그, myc-태그, 또는 HA-태그이다.
다양한 구현예에서, apoC-II의 나선 3의 변이체는 지질단백질에의 결합에 대해 친화성을 갖는다. 다양한 구현예에서, apoC-II의 나선 3의 변이체는 지질단백질 리파아제(LPL)를 활성화시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 펩타이드는 LPL에 의한 지방분해를 활성화시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 펩타이드는 지질단백질 내의 apoC-III을 대체할 수 있다. 일부 구현예에서, 펩타이드는 생체내 트리글리세라이드(TG) 수준을 감소시킬 수 있다. 이들 구현예 중 일부에서, 펩타이드는 LPL 결핍에 의해 유발된 상승된 TG 수준을 감소시킬 수 있다. 이들 구현예 중 일부에서, 펩타이드는 상승된 apoC-III에 의해 유발된 상승된 TG 수준을 감소시킬 수 있다. 이들 구현예 중 일부에서, 펩타이드는 apoC-II 결핍에 의해 유발된 상승된 TG 수준을 감소시킬 수 있다. 이들 구현예 중 일부에서, 펩타이드는 식후의 상승된 TG 수준을 감소시킬 수 있다.
또 다른 양태에서, apoC-II 모방 펩타이드 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학 조성물이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 약학 조성물은 피하 주사에 적합하다.
또 다른 양태에서, apoC-II 모방 펩타이드 또는 apoC-II 모방 펩타이드를 포함하는 약학 조성물의 유효량을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 환자에서 고중성지방혈증을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 고중성지방혈증은 비만과 관련된다. 일부 구현예에서, 고중성지방혈증은 당뇨병과 관련된다. 일부 구현예에서, 고중성지방혈증은 알코올 섭취와 관련된다. 일부 구현예에서, 고중성지방혈증은 약물과 관련된다.
일부 구현예에서, 고중성지방혈증은 LPL 결핍에 의해 유발된다. 특정 구현예에서, 고중성지방혈증은 가족성 지질단백질 리파아제 결핍이다. 일부 구현예에서, LPL 결핍은 LPL 유전자의 돌연변이에 의해 유발된다. 특정 구현예에서, 돌연변이는 감소된 LPL 효소 활성을 야기한다. 특정 구현예에서, 돌연변이는 부재하는 LPL 효소 활성을 야기한다. 일부 구현예에서, LPL 결핍은 환자의 혈청 내의 LPL 활성의 부재에 의해 진단된다. 일부 구현예에서, 돌연변이는 DNA 서열 분석에 검출된다. 일부 구현예에서, 고중성지방혈증은 apoC-II 결핍에 의해 유발된다. 일부 구현예에서, 고중성지방혈증은 상승된 apoC-III에 의해 유발된다.
특정 구현예에서, 환자의 치료전 혈청 트리글리세라이드(TG) 농도는 150 mg/dL 내지 199 mg/dL이다. 특정 구현예에서, 환자의 치료전 혈청 트리글리세라이드(TG) 농도는 200 mg/dL 내지 499 mg/dL이다. 특정 구현예에서, 환자의 치료전 혈청 트리글리세라이드(TG) 농도는 500 mg/dL 내지 999 mg/dL이다. 특정 구현예에서, 환자의 치료전 혈청 트리글리세라이드(TG) 농도는 1000 mg/dL 내지 1999 mg/dL이다. 특정 구현예에서, 환자의 치료전 혈청 트리글리세라이드(TG) 농도는 2000 mg/dL 이상이다.
특정 구현예에서, 환자는 급성 췌장염이 발병했거나 급성 췌장염 위험이 있다. 특정 구현예에서, 환자는 급성 심혈관 질환이 발병했거나 급성 심혈관 질환 위험이 있다.
또 다른 양태에서, 펩타이드를 재조합으로 생산하는 단계를 포함하는, apoC-II 모방 펩타이드를 제조하는 방법이 또한 본원에 제공된다.
또 다른 양태에서, 펩타이드를 화학적 합성에 의해 생산하는 단계를 포함하는, apoC-II 모방 펩타이드를 제조하는 방법이 또한 본원에 제공된다.
본 발명의 이들 및 다른 특징, 양태, 및 장점은 다음의 설명, 및 첨부 도면과 관련하여 더 잘 이해될 것이다:
도 1은 다양한 종에 걸쳐 성숙한 인간 apoC-II 단백질의 아미노산 잔기 40-58의 상동성을 나타낸다.
도 2A 및 도 2B는 천연 apoC-II 및 변이체 델타4'의 아미노산 잔기 40-57의 나선 바퀴 플롯을 나타내며, 도 2A는 천연 apoC-II를 나타내고, 도 2B는 변이체 델타4'를 나타낸다. 공의 크기 및 색상은 전하 및 소수성의 정도를 나타낸다. 나선 바퀴의 중앙에 있는 첫 번째 숫자는 소수성 모멘트를 나타낸다. 나선 바퀴의 중앙에 있는 두 번째 숫자 및 화살표는 소수성 모멘트의 각도를 나타낸다.
도 3A 및 도 3B는 천연 apoC-II 및 변이체 델타5'의 아미노산 잔기 40-57의 나선 바퀴 플롯을 나타내며, 도 3A는 천연 apoC-II를 나타내고, 도 3B는 변이체 델타5'를 나타낸다.
도 4A 및 도 4B는 천연 apoC-II 및 변이체 델타6'의 아미노산 잔기 40-57의 나선 바퀴 플롯을 나타내며, 도 4A는 천연 apoC-II를 나타내고, 도 4B는 변이체 델타6'를 나타낸다.
도 5는 변이체 델타4'의 화학적 변형의 예를 나타낸다. 모노-아실-델타4'는 스테아르산 변형된 N-말단을 포함한다. 디-아실-델타4'는 스테아르산 변형된 N-말단 및 위치 49에 스테아르산 변형된 류신 잔기를 포함한다.
도 6은 기질로서 apoC-II 결핍 환자 혈청을 사용한 예시적인 apoC-II 모방 펩타이드 및 화학적 변형을 갖는 변이체의 시험관내 LPL 분석의 결과를 나타낸다. 천연 전장 인간 apoC-II 단백질을 대조군으로 사용하였다.
도 7은 기질로서 인트라리피드(Intralipid)를 사용한 예시적인 apoC-II 모방 펩타이드 및 화학적 변형을 갖는 변이체의 시험관내 LPL 분석의 결과를 나타낸다. 천연 전장 인간 apoC-II 단백질을 대조군으로 사용하였다.
도 8은 기질로서 apoC-II 결핍 환자 혈청을 사용한 예시적인 apoC-II 모방 펩타이드 델타4, 델타4 변이체, 및 apoC-II의 제3 나선의 변이체의 시험관내 LPL 분석의 결과를 나타낸다.
도 9는 기질로서 apoC-II 결핍 환자 혈청을 사용한 apoC-II의 제3 나선의 변이체의 시험관내 LPL 분석의 결과를 나타낸다.
도 10은 기질로서 apoC-II 결핍 환자 혈청을 사용한 예시적인 apoC-II 모방 펩타이드 델타4의 변이체의 시험관내 LPL 분석의 결과를 나타낸다.
도 11은 기질로서 apoC-II 결핍 환자 혈청을 사용한 예시적인 apoC-II 모방 펩타이드 델타4의 변이체의 시험관내 LPL 분석의 결과를 나타낸다.
도 12는 기질로서 apoC-II 결핍 환자 혈청을 사용한 예시적인 apoC-II 모방 펩타이드 델타4 및 그의 변이체의 시험관내 LPL 분석의 결과를 나타낸다. apoC-II 모방 펩타이드의 농도는 100 pM 내지 10 μM 범위이다. 천연 전장 인간 apoC-II 단백질을 대조군으로 사용하였다.
도 13은 기질로서 apoC-II 결핍 환자 혈청을 사용한 예시적인 apoC-II 모방 펩타이드 델타4의 절두 변이체의 시험관내 LPL 분석의 결과를 나타낸다. apoC-II 모방 펩타이드의 농도는 10 pM 내지 100 μM 범위이다.
도 14는 기질로서 apoC-II 결핍 환자 혈청을 사용한 예시적인 apoC-II 모방 펩타이드 델타5 및 예시적인 apoC-II 모방 펩타이드 델타6의 변이체의 시험관내 LPL 분석의 결과를 나타낸다. apoC-II 모방 펩타이드의 농도는 100 pM 내지 10 μM 범위이다.
도 15A, 도 15B, 도 15C, 및 도 15D는 기질로서 고중성지방혈증 환자 혈청을 사용한 예시적인 apoC-II 모방 펩타이드 델타6 및 그의 변이체의 시험관내 LPL 분석에서 LPL 활성의 백분율 변화를 나타낸다. 도 15A, 도 15B, 도 15C, 및 도 15D에서 환자 혈청의 트리글리세라이드 농도는 각각 1084 mg/dL, 1224 mg/dL, 1442 mg/dL, 및 1669 mg/dL이다.
도 16은 apoC-II 모방 펩타이드 델타4의 피하 주사 후 apoC-II 넉아웃 마우스의 혈청 트리글리세라이드(TG) 수준을 나타낸다. 식염수를 대조군으로 사용하였다.
도 17은 apoC-II 모방 펩타이드 델타4의 피하 주사 후 apoC-II 넉아웃 마우스의 총 콜레스테롤(TC) 수준을 나타낸다. 식염수를 대조군으로 사용하였다.
도 18은 apoC-II 모방 펩타이드 델타4의 복강내 주사 후 apoC-II 넉아웃 마우스의 혈청 트리글리세라이드(TG) 수준을 나타낸다. 식염수를 대조군으로 사용하였다.
도 19는 apoC-II 모방 펩타이드 델타4의 복강내 주사 후 apoC-II 넉아웃 마우스의 총 콜레스테롤(TC) 수준을 나타낸다. 식염수를 대조군으로 사용하였다.
도 20은 apoC-II 모방 펩타이드의 복강내 주사의 존재 또는 부재하에 식물성 오일 위관영양법(gavage) 후 야생형 마우스의 혈청 트리글리세라이드(TG) 수준의 백분율 변화를 나타낸다. 시험된 apoC-II 모방 펩타이드는 델타4, 델타4b 및 델타4b-3을 포함하였다. 식염수를 대조군으로 사용하였다.
도 21은 apoC-II 모방 펩타이드 델타6의 복강내 주사 후 apoC-II 넉아웃 마우스의 혈청 트리글리세라이드(TG) 수준을 나타낸다. 식염수를 대조군으로 사용하였다.
도 22는 apoC-II 모방 펩타이드 델타6의 복강내 주사 후 apoC-II 넉아웃 마우스의 총 콜레스테롤(TC) 수준을 나타낸다. 식염수를 대조군으로 사용하였다.
도 23은 상이한 용량의 apoC-II 모방 펩타이드 델타6의 복강내 주사 후 apoC-II 넉아웃 마우스의 혈청 트리글리세라이드(TG) 수준을 나타낸다. 식염수를 대조군으로 사용하였다. 주사 시점에서의 혈청 TG 수준과 비교하여 주사 후 상이한 시점에서의 혈청 TG 수준의 백분율을 계산하였다.
도 24는 델타6 변이체의 복강내 주사 후 apoC-II 넉아웃 마우스의 혈청 트리글리세라이드(TG)의 백분율 변화를 나타낸다. 식염수를 대조군으로 사용하였다. 주사 시점에서의 혈청 TG 수준과 비교하여 혈청 TG의 백분율 변화를 계산하였다.
도 25는 인간 혈장으로부터 단리된 VLDL 및 킬로미크론에서 apoC-II 모방 펩타이드 델타6에 의한 apoC-III 대체(displacement)를 나타낸다.
도 26은 인간 혈장으로부터 단리된 VLDL에서 apoC-II 모방 펩타이드 델타6의 변이체에 의한 apoC-III 대체를 나타낸다.
도 27은 기질로서 고 apoC-III 수준을 갖는 고중성지방혈증 환자 혈청을 사용한 apoC-II 모방 펩타이드 델타4 및 델타6의 시험관내 LPL 분석의 결과를 나타낸다.
도 28은 인간 혈장으로부터 단리된 VLDL(TG = 291mg/dL)에서 apoC-II-a 펩타이드에 의한 apoC-III 대체를 나타낸다.
도 29A 및 도 29B는 질량 분석법(MALDI-TOF)에 의해 분석된 apoC-II-a 펩타이드에 의한 apoC-III의 용량 의존적 대체를 나타내며, 도 29A는 apoC-II-a가 apoC-III 및 apoC-I를 선택적으로 대체하나 apoC-II를 대체하지 않는다는 것을 보여주고, 도 29B는 VLDL에 대한 apoC-II-a 펩타이드의 결합이 그의 농도에 거의 비례한다는 것을 보여준다.
도 30은 인간 혈장으로부터 단리된 킬로미크론에서 apoC-II-a 펩타이드에 의한 apoC-III 대체를 나타낸다.
도 31은 기질로서 인트라리피드 및 억제제로서 재조합 apoC-III을 이용한 LPL 활성화 분석의 결과를 나타낸다. ApoC-II-a 펩타이드는 apoC-III에 의한 억제를 극복한다.
도 32는 기질로서 고 TG 인간 혈장 및 억제제로서 재조합 apoC-III을 이용한 LPL 활성화 분석으로부터의 결과를 나타낸다. ApoC-II-a 펩타이드는 apoC-III에 의한 억제를 극복한다
도 33은 기질로서 apoC-III 형질전환(tg) 마우스 혈장을 사용한 LPL 활성화 분석의 결과를 그래프화한다. ApoC-III tg1, ApoC-III tg2, 및 ApoC-III tg3 마우스의 TG 농도는 각각 323 mg/dL, 497 mg/dL, 및 478 mg/dL이다. ApoC-II-a 펩타이드는 모든 3개의 형질전환 마우스 혈장 샘플에서 apoC-III의 상승된 발현의 억제 효과를 극복한다.
도 34A 및 도 34B는 LPL 억제제 트리톤 WR1339의 존재 또는 부재 하에, 그리고 apoC-II-a 펩타이드의 존재 또는 부재 하에 식물성 오일을 이용한 경구 위관영양법 후 마우스에서 24시간 혈청 식후의 TG 수준을 나타내며, 도 34A는 0-100 mg/dL의 TG 농도 범위에 초점을 맞추고, 도 34B는 0-4500 mg/dL의 TG 농도 범위에 초점을 맞춘다.
도 35A 및 도 35B는 LPL 억제제 트리톤의 존재 또는 부재 하에 델타6PV 펩타이드의 복강내 주사와 함께 또는 없이 인트라리피드 주사 후 야생형 마우스의 혈청 TG 수준의 백분율 변화를 나타내며, 도 35A는 주사의 시각표를 나타내고, 도 35B는 트리톤의 존재 또는 부재 하에 델타6PV의 복강내 주사 후 혈청 TG 수준의 백분율 변화를 나타낸다. 식염수를 대조군으로 사용하였다.
도 36A, 도 36B, 및 도 36C는 apoC-II 모방 펩타이드 델타6PV의 주사 후 apoC-II 넉아웃 마우스의 혈청 TG 수준의 백분율 변화를 나타내며, 도 36A는 주사의 시각표를 나타내고, 도 36B는 델타6PV의 복강내 주사 후 혈청 TG 수준의 백분율 변화를 나타내며, 도 36C는 델타6PV의 피하 주사 후 혈청 TG 수준의 백분율 변화를 나타낸다. 식염수를 대조군으로 사용하였다. SM은 델타6PV를 세포막의 구성성분인 스핑고미엘린(SM)과 혼합한 조건을 나타낸다.
도 37A 및 도 37B는 델타6PV 펩타이드의 복강내 주사와 함께 또는 없이 인트라리피드 주사 후 apoC-II 넉아웃 마우스의 혈청 TG 수준의 백분율 변화를 나타내며, 도 37A는 주사의 시각표를 나타내고, 도 37B는 5 μmole/kg 및 10 μmole/kg(B. W.)의 델타6PV의 복강내 주사 후 혈청 TG 수준의 백분율 변화를 나타낸다. 식염수를 대조군으로 사용하였다.
도 38A, 및 도 38B는 apoC-II 모방 펩타이드 델타6PV의 주사 후 apoC-III 형질전환 마우스의 혈청 TG 수준의 백분율 변화를 나타내며, 도 38A는 주사의 시각표를 나타내고, 도 38B는 1 μmole/kg, 5 μmole/kg, 및 10 μmole/kg(B. W.)의 델타6PV의 복강내 주사 후 혈청 TG 수준의 백분율 변화를 나타낸다. 식염수를 대조군으로 사용하였다.
도 39는 5 μmole/kg 및 10 μmole/kg(B. W.)의 델타6PV 펩타이드의 복강내 주사와 함께 또는 없이 인트라리피드 주사 후 apoC-III 형질전환 마우스의 혈청 TG 수준의 백분율 변화를 나타낸다. 식염수를 대조군으로 사용하였다.
도 40은 0.25 μmole/kg 및 1 μmole/kg(B. W.)의 apoC-II 모방 펩타이드 델타6PV의 다중 주사 후 apoC-II 넉아웃 마우스의 혈청 TG 수준의 백분율 변화를 나타낸다. 화살표는 델타6PV 주사의 시점을 나타낸다. 식염수를 대조군으로 사용하였다.
도 41은 1 μmole/kg(B. W.) 델타6PV가 투여된 apoC-II 넉아웃 마우스에서 다양한 지질 분획의 SEC-FPLC 분리 결과를 나타낸다. 지질단백질 입자의 수준이 인지질에 의해 표시되어 있다.
도 42는 1 μmole/kg 델타6PV가 투여된 apoC-II 넉아웃 마우스에서 다양한 지질 분획의 SEC-FPLC 분리 결과를 나타낸다. 지질단백질 입자의 수준이 TG에 의해 표시되어 있다.
도 43A 및 도 43B는 apoC-II 모방 펩타이드 델타6PV의 다중 주사 후 apoC-III 형질전환 마우스의 혈청 TG 수준의 백분율 변화를 나타내며, 도 43A는 주사의 시각표를 나타내고, 도 43B는 5 μmole/kg(B. W.)의 델타6PV의 복강내 주사 후 혈청 TG 수준의 백분율 변화를 나타낸다. 화살표는 델타6PV 주사의 시점을 나타낸다. 식염수를 대조군으로 사용하였다.
도 44는 5 μmole/kg(B. W.)의 apoC-II 모방 펩타이드 델타6PV의 다중 주사 후 apoC-III 형질전환 마우스의 혈청 TG 수준의 백분율 변화를 나타낸다. 화살표는 델타6PV 주사의 시점을 나타낸다. 식염수를 대조군으로 사용하였다.
도 45A 및 도 45B는 ELISA에 의해 측정된 바와 같이, apoC-III 형질전환 마우스에서 델타6PV 주사 후 apoC-III 수준을 나타내며, 도 45A는 주사 전 1일 및 5일과 주사 후 3시간에 VLDL 입자에서의 apoC-III 수준을 나타내고, 도 45B는 주사 전 1일 및 5일과 주사 후 3시간에 HDL 입자에서의 apoC-III 수준을 나타낸다.
도 46A 및 도 46B는 델타6PV 펩타이드의 다중 복강내 주사와 함께 또는 없이 인트라리피드 주사 후 야생형 마우스의 혈청 TG 수준의 백분율 변화를 나타내며, 도 46A는 주사의 시각표를 나타내고, 도 46B는 0.25 μmole/kg 및 1 μmole/kg(B. W.)의 델타6PV의 복강내 주사 후 혈청 TG 수준의 백분율 변화를 나타낸다. 식염수를 대조군으로 사용하였다.
도 47은 기저선 수준과 비교하여 1 mg/kg 및 5 mg/kg(B. W.)의 델타6PV 펩타이드의 정맥내 주사를 갖는 또는 없는 비만 원숭이 모델에서 혈청 TG의 비율을 나타낸다. 식염수를 대조군으로 사용하였다.
도 48A, 도 48B, 및 도 48C는 기저선 수준과 비교하여 1 mg/kg 및 5 mg/kg(B. W.)의 델타6PV 펩타이드의 정맥내 주사를 갖는 또는 없는 비만 원숭이 모델에서 VLDL, LDL, 및 HDL의 백분율을 나타내며, 도 48A는 기저선 수준과 비교하여 비만 원숭이 모델에서 VLDL의 백분율을 나타내고, 도 48B는 기저선 수준과 비교하여 비만 원숭이 모델에서 LDL의 백분율을 나타내며, 도 48C는 기저선 수준과 비교하여 비만 원숭이 모델에서 HDL의 백분율을 나타낸다.
도 49는 인간 혈장으로부터 단리된 VLDL에서 델타6PV 펩타이드에 의한 apoC-III 대체를 나타낸다.
도 50은 기질로서 고 TG 인간 혈장 및 억제제로서 재조합 apoC-III을 이용한 LPL 활성화 분석의 결과를 나타낸다. 델타6PV 펩타이드는 apoC-III의 억제를 극복한다.
도 51은 기질로서 apoC-II 결핍 환자 혈청을 사용한 델타6 및 델타6PV 펩타이드의 시험관내 LPL 분석의 결과를 나타낸다.
도 52는 기질로서 apoC-II 결핍 환자 혈청을 사용한 apoC-II 모방 펩타이드 델타6PV, 델타6-T18F-PV, 델타6-T18F-PV-AIB7, 17 및 델타13-31-PV의 시험관내 LPL 분석의 결과를 나타낸다.
도 53은 델타6 변이체, 델타6PV 및 델타6-T18F-PV의 복강내 주사 후 apoC-II 넉아웃 마우스에서 혈청 TG의 백분율 변화를 나타낸다. 식염수를 대조군으로 사용하였다. 주사 시점에서의 혈청 TG와 비교하여 혈청 TG의 백분율 변화를 계산하였다.
도 54A, 도 54B, 및 도 54C는 apoC-II 모방 펩타이드, apoC-II-a의 나선 바퀴 및 네트(net) 플롯을 나타낸다. 도 54A는 18A 나선의 나선 바퀴 플롯이다. 공의 크기 및 색상은 전하 및 소수성의 정도(황색, 비극성; 녹색, 극성/비전하; 분홍색, 산성; 청색, 염기성)를 나타낸다. 도 54B는 apoC-II의 제3 나선의 나선 바퀴 플롯이다. 도 54C는 apoC-II-a 펩타이드의 나선 네트 플롯이다. ApoC-II-a는 DWLKAFYDKVAEKLKEAFPAMSTYTGIFTDQVLSVLKGEE(서열번호: 56)의 서열을 갖는다. 중앙 영역은 소수성 면의 위치를 나타낸다.
도 55는 마우스에서 식후의 고중성지방혈증을 시험하기 위한 연구 디자인을 나타낸다.
도 56은 LPL 억제제의 존재하에 마우스에서 식후의 고중성지방혈증을 시험하기 위한 연구 디자인을 나타낸다.
도 1은 다양한 종에 걸쳐 성숙한 인간 apoC-II 단백질의 아미노산 잔기 40-58의 상동성을 나타낸다.
도 2A 및 도 2B는 천연 apoC-II 및 변이체 델타4'의 아미노산 잔기 40-57의 나선 바퀴 플롯을 나타내며, 도 2A는 천연 apoC-II를 나타내고, 도 2B는 변이체 델타4'를 나타낸다. 공의 크기 및 색상은 전하 및 소수성의 정도를 나타낸다. 나선 바퀴의 중앙에 있는 첫 번째 숫자는 소수성 모멘트를 나타낸다. 나선 바퀴의 중앙에 있는 두 번째 숫자 및 화살표는 소수성 모멘트의 각도를 나타낸다.
도 3A 및 도 3B는 천연 apoC-II 및 변이체 델타5'의 아미노산 잔기 40-57의 나선 바퀴 플롯을 나타내며, 도 3A는 천연 apoC-II를 나타내고, 도 3B는 변이체 델타5'를 나타낸다.
도 4A 및 도 4B는 천연 apoC-II 및 변이체 델타6'의 아미노산 잔기 40-57의 나선 바퀴 플롯을 나타내며, 도 4A는 천연 apoC-II를 나타내고, 도 4B는 변이체 델타6'를 나타낸다.
도 5는 변이체 델타4'의 화학적 변형의 예를 나타낸다. 모노-아실-델타4'는 스테아르산 변형된 N-말단을 포함한다. 디-아실-델타4'는 스테아르산 변형된 N-말단 및 위치 49에 스테아르산 변형된 류신 잔기를 포함한다.
도 6은 기질로서 apoC-II 결핍 환자 혈청을 사용한 예시적인 apoC-II 모방 펩타이드 및 화학적 변형을 갖는 변이체의 시험관내 LPL 분석의 결과를 나타낸다. 천연 전장 인간 apoC-II 단백질을 대조군으로 사용하였다.
도 7은 기질로서 인트라리피드(Intralipid)를 사용한 예시적인 apoC-II 모방 펩타이드 및 화학적 변형을 갖는 변이체의 시험관내 LPL 분석의 결과를 나타낸다. 천연 전장 인간 apoC-II 단백질을 대조군으로 사용하였다.
도 8은 기질로서 apoC-II 결핍 환자 혈청을 사용한 예시적인 apoC-II 모방 펩타이드 델타4, 델타4 변이체, 및 apoC-II의 제3 나선의 변이체의 시험관내 LPL 분석의 결과를 나타낸다.
도 9는 기질로서 apoC-II 결핍 환자 혈청을 사용한 apoC-II의 제3 나선의 변이체의 시험관내 LPL 분석의 결과를 나타낸다.
도 10은 기질로서 apoC-II 결핍 환자 혈청을 사용한 예시적인 apoC-II 모방 펩타이드 델타4의 변이체의 시험관내 LPL 분석의 결과를 나타낸다.
도 11은 기질로서 apoC-II 결핍 환자 혈청을 사용한 예시적인 apoC-II 모방 펩타이드 델타4의 변이체의 시험관내 LPL 분석의 결과를 나타낸다.
도 12는 기질로서 apoC-II 결핍 환자 혈청을 사용한 예시적인 apoC-II 모방 펩타이드 델타4 및 그의 변이체의 시험관내 LPL 분석의 결과를 나타낸다. apoC-II 모방 펩타이드의 농도는 100 pM 내지 10 μM 범위이다. 천연 전장 인간 apoC-II 단백질을 대조군으로 사용하였다.
도 13은 기질로서 apoC-II 결핍 환자 혈청을 사용한 예시적인 apoC-II 모방 펩타이드 델타4의 절두 변이체의 시험관내 LPL 분석의 결과를 나타낸다. apoC-II 모방 펩타이드의 농도는 10 pM 내지 100 μM 범위이다.
도 14는 기질로서 apoC-II 결핍 환자 혈청을 사용한 예시적인 apoC-II 모방 펩타이드 델타5 및 예시적인 apoC-II 모방 펩타이드 델타6의 변이체의 시험관내 LPL 분석의 결과를 나타낸다. apoC-II 모방 펩타이드의 농도는 100 pM 내지 10 μM 범위이다.
도 15A, 도 15B, 도 15C, 및 도 15D는 기질로서 고중성지방혈증 환자 혈청을 사용한 예시적인 apoC-II 모방 펩타이드 델타6 및 그의 변이체의 시험관내 LPL 분석에서 LPL 활성의 백분율 변화를 나타낸다. 도 15A, 도 15B, 도 15C, 및 도 15D에서 환자 혈청의 트리글리세라이드 농도는 각각 1084 mg/dL, 1224 mg/dL, 1442 mg/dL, 및 1669 mg/dL이다.
도 16은 apoC-II 모방 펩타이드 델타4의 피하 주사 후 apoC-II 넉아웃 마우스의 혈청 트리글리세라이드(TG) 수준을 나타낸다. 식염수를 대조군으로 사용하였다.
도 17은 apoC-II 모방 펩타이드 델타4의 피하 주사 후 apoC-II 넉아웃 마우스의 총 콜레스테롤(TC) 수준을 나타낸다. 식염수를 대조군으로 사용하였다.
도 18은 apoC-II 모방 펩타이드 델타4의 복강내 주사 후 apoC-II 넉아웃 마우스의 혈청 트리글리세라이드(TG) 수준을 나타낸다. 식염수를 대조군으로 사용하였다.
도 19는 apoC-II 모방 펩타이드 델타4의 복강내 주사 후 apoC-II 넉아웃 마우스의 총 콜레스테롤(TC) 수준을 나타낸다. 식염수를 대조군으로 사용하였다.
도 20은 apoC-II 모방 펩타이드의 복강내 주사의 존재 또는 부재하에 식물성 오일 위관영양법(gavage) 후 야생형 마우스의 혈청 트리글리세라이드(TG) 수준의 백분율 변화를 나타낸다. 시험된 apoC-II 모방 펩타이드는 델타4, 델타4b 및 델타4b-3을 포함하였다. 식염수를 대조군으로 사용하였다.
도 21은 apoC-II 모방 펩타이드 델타6의 복강내 주사 후 apoC-II 넉아웃 마우스의 혈청 트리글리세라이드(TG) 수준을 나타낸다. 식염수를 대조군으로 사용하였다.
도 22는 apoC-II 모방 펩타이드 델타6의 복강내 주사 후 apoC-II 넉아웃 마우스의 총 콜레스테롤(TC) 수준을 나타낸다. 식염수를 대조군으로 사용하였다.
도 23은 상이한 용량의 apoC-II 모방 펩타이드 델타6의 복강내 주사 후 apoC-II 넉아웃 마우스의 혈청 트리글리세라이드(TG) 수준을 나타낸다. 식염수를 대조군으로 사용하였다. 주사 시점에서의 혈청 TG 수준과 비교하여 주사 후 상이한 시점에서의 혈청 TG 수준의 백분율을 계산하였다.
도 24는 델타6 변이체의 복강내 주사 후 apoC-II 넉아웃 마우스의 혈청 트리글리세라이드(TG)의 백분율 변화를 나타낸다. 식염수를 대조군으로 사용하였다. 주사 시점에서의 혈청 TG 수준과 비교하여 혈청 TG의 백분율 변화를 계산하였다.
도 25는 인간 혈장으로부터 단리된 VLDL 및 킬로미크론에서 apoC-II 모방 펩타이드 델타6에 의한 apoC-III 대체(displacement)를 나타낸다.
도 26은 인간 혈장으로부터 단리된 VLDL에서 apoC-II 모방 펩타이드 델타6의 변이체에 의한 apoC-III 대체를 나타낸다.
도 27은 기질로서 고 apoC-III 수준을 갖는 고중성지방혈증 환자 혈청을 사용한 apoC-II 모방 펩타이드 델타4 및 델타6의 시험관내 LPL 분석의 결과를 나타낸다.
도 28은 인간 혈장으로부터 단리된 VLDL(TG = 291mg/dL)에서 apoC-II-a 펩타이드에 의한 apoC-III 대체를 나타낸다.
도 29A 및 도 29B는 질량 분석법(MALDI-TOF)에 의해 분석된 apoC-II-a 펩타이드에 의한 apoC-III의 용량 의존적 대체를 나타내며, 도 29A는 apoC-II-a가 apoC-III 및 apoC-I를 선택적으로 대체하나 apoC-II를 대체하지 않는다는 것을 보여주고, 도 29B는 VLDL에 대한 apoC-II-a 펩타이드의 결합이 그의 농도에 거의 비례한다는 것을 보여준다.
도 30은 인간 혈장으로부터 단리된 킬로미크론에서 apoC-II-a 펩타이드에 의한 apoC-III 대체를 나타낸다.
도 31은 기질로서 인트라리피드 및 억제제로서 재조합 apoC-III을 이용한 LPL 활성화 분석의 결과를 나타낸다. ApoC-II-a 펩타이드는 apoC-III에 의한 억제를 극복한다.
도 32는 기질로서 고 TG 인간 혈장 및 억제제로서 재조합 apoC-III을 이용한 LPL 활성화 분석으로부터의 결과를 나타낸다. ApoC-II-a 펩타이드는 apoC-III에 의한 억제를 극복한다
도 33은 기질로서 apoC-III 형질전환(tg) 마우스 혈장을 사용한 LPL 활성화 분석의 결과를 그래프화한다. ApoC-III tg1, ApoC-III tg2, 및 ApoC-III tg3 마우스의 TG 농도는 각각 323 mg/dL, 497 mg/dL, 및 478 mg/dL이다. ApoC-II-a 펩타이드는 모든 3개의 형질전환 마우스 혈장 샘플에서 apoC-III의 상승된 발현의 억제 효과를 극복한다.
도 34A 및 도 34B는 LPL 억제제 트리톤 WR1339의 존재 또는 부재 하에, 그리고 apoC-II-a 펩타이드의 존재 또는 부재 하에 식물성 오일을 이용한 경구 위관영양법 후 마우스에서 24시간 혈청 식후의 TG 수준을 나타내며, 도 34A는 0-100 mg/dL의 TG 농도 범위에 초점을 맞추고, 도 34B는 0-4500 mg/dL의 TG 농도 범위에 초점을 맞춘다.
도 35A 및 도 35B는 LPL 억제제 트리톤의 존재 또는 부재 하에 델타6PV 펩타이드의 복강내 주사와 함께 또는 없이 인트라리피드 주사 후 야생형 마우스의 혈청 TG 수준의 백분율 변화를 나타내며, 도 35A는 주사의 시각표를 나타내고, 도 35B는 트리톤의 존재 또는 부재 하에 델타6PV의 복강내 주사 후 혈청 TG 수준의 백분율 변화를 나타낸다. 식염수를 대조군으로 사용하였다.
도 36A, 도 36B, 및 도 36C는 apoC-II 모방 펩타이드 델타6PV의 주사 후 apoC-II 넉아웃 마우스의 혈청 TG 수준의 백분율 변화를 나타내며, 도 36A는 주사의 시각표를 나타내고, 도 36B는 델타6PV의 복강내 주사 후 혈청 TG 수준의 백분율 변화를 나타내며, 도 36C는 델타6PV의 피하 주사 후 혈청 TG 수준의 백분율 변화를 나타낸다. 식염수를 대조군으로 사용하였다. SM은 델타6PV를 세포막의 구성성분인 스핑고미엘린(SM)과 혼합한 조건을 나타낸다.
도 37A 및 도 37B는 델타6PV 펩타이드의 복강내 주사와 함께 또는 없이 인트라리피드 주사 후 apoC-II 넉아웃 마우스의 혈청 TG 수준의 백분율 변화를 나타내며, 도 37A는 주사의 시각표를 나타내고, 도 37B는 5 μmole/kg 및 10 μmole/kg(B. W.)의 델타6PV의 복강내 주사 후 혈청 TG 수준의 백분율 변화를 나타낸다. 식염수를 대조군으로 사용하였다.
도 38A, 및 도 38B는 apoC-II 모방 펩타이드 델타6PV의 주사 후 apoC-III 형질전환 마우스의 혈청 TG 수준의 백분율 변화를 나타내며, 도 38A는 주사의 시각표를 나타내고, 도 38B는 1 μmole/kg, 5 μmole/kg, 및 10 μmole/kg(B. W.)의 델타6PV의 복강내 주사 후 혈청 TG 수준의 백분율 변화를 나타낸다. 식염수를 대조군으로 사용하였다.
도 39는 5 μmole/kg 및 10 μmole/kg(B. W.)의 델타6PV 펩타이드의 복강내 주사와 함께 또는 없이 인트라리피드 주사 후 apoC-III 형질전환 마우스의 혈청 TG 수준의 백분율 변화를 나타낸다. 식염수를 대조군으로 사용하였다.
도 40은 0.25 μmole/kg 및 1 μmole/kg(B. W.)의 apoC-II 모방 펩타이드 델타6PV의 다중 주사 후 apoC-II 넉아웃 마우스의 혈청 TG 수준의 백분율 변화를 나타낸다. 화살표는 델타6PV 주사의 시점을 나타낸다. 식염수를 대조군으로 사용하였다.
도 41은 1 μmole/kg(B. W.) 델타6PV가 투여된 apoC-II 넉아웃 마우스에서 다양한 지질 분획의 SEC-FPLC 분리 결과를 나타낸다. 지질단백질 입자의 수준이 인지질에 의해 표시되어 있다.
도 42는 1 μmole/kg 델타6PV가 투여된 apoC-II 넉아웃 마우스에서 다양한 지질 분획의 SEC-FPLC 분리 결과를 나타낸다. 지질단백질 입자의 수준이 TG에 의해 표시되어 있다.
도 43A 및 도 43B는 apoC-II 모방 펩타이드 델타6PV의 다중 주사 후 apoC-III 형질전환 마우스의 혈청 TG 수준의 백분율 변화를 나타내며, 도 43A는 주사의 시각표를 나타내고, 도 43B는 5 μmole/kg(B. W.)의 델타6PV의 복강내 주사 후 혈청 TG 수준의 백분율 변화를 나타낸다. 화살표는 델타6PV 주사의 시점을 나타낸다. 식염수를 대조군으로 사용하였다.
도 44는 5 μmole/kg(B. W.)의 apoC-II 모방 펩타이드 델타6PV의 다중 주사 후 apoC-III 형질전환 마우스의 혈청 TG 수준의 백분율 변화를 나타낸다. 화살표는 델타6PV 주사의 시점을 나타낸다. 식염수를 대조군으로 사용하였다.
도 45A 및 도 45B는 ELISA에 의해 측정된 바와 같이, apoC-III 형질전환 마우스에서 델타6PV 주사 후 apoC-III 수준을 나타내며, 도 45A는 주사 전 1일 및 5일과 주사 후 3시간에 VLDL 입자에서의 apoC-III 수준을 나타내고, 도 45B는 주사 전 1일 및 5일과 주사 후 3시간에 HDL 입자에서의 apoC-III 수준을 나타낸다.
도 46A 및 도 46B는 델타6PV 펩타이드의 다중 복강내 주사와 함께 또는 없이 인트라리피드 주사 후 야생형 마우스의 혈청 TG 수준의 백분율 변화를 나타내며, 도 46A는 주사의 시각표를 나타내고, 도 46B는 0.25 μmole/kg 및 1 μmole/kg(B. W.)의 델타6PV의 복강내 주사 후 혈청 TG 수준의 백분율 변화를 나타낸다. 식염수를 대조군으로 사용하였다.
도 47은 기저선 수준과 비교하여 1 mg/kg 및 5 mg/kg(B. W.)의 델타6PV 펩타이드의 정맥내 주사를 갖는 또는 없는 비만 원숭이 모델에서 혈청 TG의 비율을 나타낸다. 식염수를 대조군으로 사용하였다.
도 48A, 도 48B, 및 도 48C는 기저선 수준과 비교하여 1 mg/kg 및 5 mg/kg(B. W.)의 델타6PV 펩타이드의 정맥내 주사를 갖는 또는 없는 비만 원숭이 모델에서 VLDL, LDL, 및 HDL의 백분율을 나타내며, 도 48A는 기저선 수준과 비교하여 비만 원숭이 모델에서 VLDL의 백분율을 나타내고, 도 48B는 기저선 수준과 비교하여 비만 원숭이 모델에서 LDL의 백분율을 나타내며, 도 48C는 기저선 수준과 비교하여 비만 원숭이 모델에서 HDL의 백분율을 나타낸다.
도 49는 인간 혈장으로부터 단리된 VLDL에서 델타6PV 펩타이드에 의한 apoC-III 대체를 나타낸다.
도 50은 기질로서 고 TG 인간 혈장 및 억제제로서 재조합 apoC-III을 이용한 LPL 활성화 분석의 결과를 나타낸다. 델타6PV 펩타이드는 apoC-III의 억제를 극복한다.
도 51은 기질로서 apoC-II 결핍 환자 혈청을 사용한 델타6 및 델타6PV 펩타이드의 시험관내 LPL 분석의 결과를 나타낸다.
도 52는 기질로서 apoC-II 결핍 환자 혈청을 사용한 apoC-II 모방 펩타이드 델타6PV, 델타6-T18F-PV, 델타6-T18F-PV-AIB7, 17 및 델타13-31-PV의 시험관내 LPL 분석의 결과를 나타낸다.
도 53은 델타6 변이체, 델타6PV 및 델타6-T18F-PV의 복강내 주사 후 apoC-II 넉아웃 마우스에서 혈청 TG의 백분율 변화를 나타낸다. 식염수를 대조군으로 사용하였다. 주사 시점에서의 혈청 TG와 비교하여 혈청 TG의 백분율 변화를 계산하였다.
도 54A, 도 54B, 및 도 54C는 apoC-II 모방 펩타이드, apoC-II-a의 나선 바퀴 및 네트(net) 플롯을 나타낸다. 도 54A는 18A 나선의 나선 바퀴 플롯이다. 공의 크기 및 색상은 전하 및 소수성의 정도(황색, 비극성; 녹색, 극성/비전하; 분홍색, 산성; 청색, 염기성)를 나타낸다. 도 54B는 apoC-II의 제3 나선의 나선 바퀴 플롯이다. 도 54C는 apoC-II-a 펩타이드의 나선 네트 플롯이다. ApoC-II-a는 DWLKAFYDKVAEKLKEAFPAMSTYTGIFTDQVLSVLKGEE(서열번호: 56)의 서열을 갖는다. 중앙 영역은 소수성 면의 위치를 나타낸다.
도 55는 마우스에서 식후의 고중성지방혈증을 시험하기 위한 연구 디자인을 나타낸다.
도 56은 LPL 억제제의 존재하에 마우스에서 식후의 고중성지방혈증을 시험하기 위한 연구 디자인을 나타낸다.
정의
달리 정의하지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어는 본 발명이 속하는 기술에서 통상의 기술을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 의미를 갖는다.
용어 "아미노산"은 천연 아미노산, 비천연 아미노산, 및 아미노산 유사체를 지칭한다. 달리 나타내지 않는 한, 용어 "아미노산"은, 각각의 구조가 이러한 입체이성질체 형태를 허용하는 경우 D 및 L 입체이성질체 모두를 포함한다.
천연 아미노산은 알라닌(Ala 또는 A), 아르기닌(Arg 또는 R), 아스파라긴(Asn 또는 N), 아스파트산(Asp 또는 D), 시스테인(Cys 또는 C), 글루타민(Gln 또는 Q), 글루탐산(Glu 또는 E), 글리신(Gly 또는 G), 히스티딘(His 또는 H), 이소류신(Ile 또는 I), 류신(Leu 또는 L), 리신(Lys 또는 K), 메티오닌(Met 또는 M), 페닐알라닌(Phe 또는 F), 프롤린(Pro 또는 P), 세린(Ser 또는 S), 트레오닌(Thr 또는 T), 트립토판(Trp 또는 W), 티로신(Tyr 또는 Y) 및 발린(Val 또는 V)을 포함한다.
비천연 아미노산, 또는 비천연 아미노산은, 비제한적으로, 아제티딘카르복실산, 2-아미노아디프산, 3-아미노아디프산, 베타-알라닌, 나프틸알라닌("naph"), 아미노프로피온산, 2-아미노부티르산, 4-아미노부티르산, 6-아미노카프로산, 2-아미노헵탄산, 2-아미노이소부티르산, 3-아미노이소부티르산, 2-아미노피멜산, 3차-부틸글리신("tBuG"), 2,4-디아미노이소부티르산, 데스모신, 2,2'-디아미노피멜산, 2,3-디아미노프로피온산, N-에틸글리신, N-에틸아스파라긴, 호모프롤린("hPro" 또는 "homoP"), 하이드록시리신, 알로-하이드록시리신, 3-하이드록시프롤린("3Hyp"), 4-하이드록시프롤린("4Hyp"), 이소데스모신, 알로-이소류신, N-메틸알라닌("MeAla" 또는 "Nime"), N-메틸글리신을 포함하는 N알킬글리신("NAG"), N-메틸이소류신, N-메틸펜틸글리신을 포함하는 N-알킬펜틸글리신("NAPG"), N-메틸발린, 나프틸알라닌, 노르발린("Norval"), 노르류신("Norleu"), 옥틸글리신("OctG"), 오르니틴("Orn"), 펜틸글리신("pG" 또는 "PGly"), 피페콜산, 티오프롤린("ThioP" 또는 "tPro"), 호모리신("hLys"), 및 호모아르기닌("hArg")을 포함한다.
용어 "아미노산 유사체"는 C-말단 카르복시기, N-말단 아미노기 및 측쇄 작용기 중 하나 이상이 가역적으로 또는 비가역적으로 화학적으로 차단되거나, 또는 또 다른 작용기로 변형된 천연 또는 비천연 아미노산을 지칭한다. 예를 들어, 아스파트산-(베타-메틸 에스테르)는 아스파트산의 아미노산 유사체이며; N-에틸글리신은 글리신의 아미노산 유사체이거나; 또는 알라닌 카르복사미드는 알라닌의 아미노산 유사체이다. 다른 아미노산 유사체는 메티오닌 설폭사이드, 메티오닌 설폰, S-(카르복시메틸)-시스테인, S-(카르복시메틸) 시스테인 설폭사이드 및 S-(카르복시메틸)-시스테인 설폰을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "펩타이드"는 펩타이드 결합에 의해 함께 연결된 아미노산의 짧은 중합체를 지칭한다. 다른 아미노산 중합체(예컨대, 단백질, 폴리펩타이드 등)와 대조적으로, 펩타이드는 약 75개 이하의 아미노산 길이이다. 펩타이드는 천연 아미노산, 비천연 아미노산, 아미노산 유사체, 및/또는 변형된 아미노산을 포함할 수 있다. 펩타이드는 자연발생 단백질의 하위서열 또는 비천연(합성) 서열일 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "돌연변이체 펩타이드"는 "야생형" 서열로 지칭되는 자연에 존재하는 가장 일반적인 변이체와 구별되는 아미노산 서열을 갖는 펩타이드의 변이체를 지칭한다. 돌연변이체 펩타이드는 야생형 서열과 비교하여 하나 이상 아미노산 치환, 결실, 또는 삽입을 포함할 수 있다. 돌연변이체 펩타이드는 돌연변이체 단백질 또는 폴리펩타이드의 하위서열(예컨대, 자연에서 가장 일반적인 서열이 아닌 자연발생 단백질의 하위서열)일 수 있거나, 또는 자연발생 단백질 또는 폴리펩타이드의 하위서열이 아닌 펩타이드일 수 있다. 예를 들어, "돌연변이체 apoC-II 펩타이드"는 apoC-II의 돌연변이체 형태의 하위서열일 수 있거나 자연발생 apoC-II 단백질에서 발견되지 않는 구별되는 서열일 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "합성 펩타이드"는 천연 펩타이드 및/또는 단백질에서 발견되는 것과 구별되는 아미노산 서열을 갖는 펩타이드를 지칭한다. 합성 단백질은 야생형(즉, 가장 풍부함) 또는 이의 돌연변이체 형태인 자연발생 단백질의 하위서열이 아니다. 예를 들어, "합성 apoC-II 펩타이드"는 자연발생 apoC-II의 하위서열이 아니다. 본원에 사용된 바와 같이, "합성 펩타이드"는 임의의 적합한 방법(예컨대, 재조합 발현, 화학적 합성, 효소적 합성 등)에 의해 생산되거나 합성될 수 있다.
용어 "펩타이드 모방체(peptide mimetic)" 또는 "펩타이드모방체(peptidomimetic)"은 단백질 또는 펩타이드로부터 유래된 서열을 모방하는 펩타이드 유사 분자를 지칭한다. 펩타이드 모방체 또는 펩타이드모방체는 아미노산 및/또는 비아미노산 성분을 함유할 수 있다. 펩타이드모방체의 예는 화학적으로 변형된 펩타이드, 펩토이드(peptoid)(측기가 α-탄소가 아닌 펩타이드 백본의 질소 원자에 부착됨), β-펩타이드(α-탄소가 아닌 β 탄소에 결합된 아미노기) 등을 포함한다. 화학적 변형은 아미노산 측기, α-탄소 원자, 말단 아민기, 또는 말단 카르복시기에 하나 이상의 변형을 포함한다. 화학적 변형은 화학적 모이어티를 부가하는 것, 새로운 결합을 생성하는 것, 또는 화학적 모이어티를 제거하는 것일 수 있다. 아미노산 측기에서의 변형은, 비제한적으로, 리신 ε-아미노기의 아실화, 아르기닌, 히스티딘, 또는 리신의 N-알킬화, 글루타믹 또는 아스파틱 카르복실산기의 알킬화, 리신 ε-아미노기와 글루타믹 또는 아스파트산 측기 카르복실기와의 고리화를 통한 락탐 형성, 탄화수소 "스태플링(stapling)"(예컨대, 알파-나선 형태를 안정화시키는 것), 및 글루타민 또는 아스파라긴의 탈아미드화를 포함한다. 말단 아민기의 변형은, 비제한적으로, 데스아미노, N-저급 알킬, N-디-저급 알킬, 제한된(constrained) 알킬(예컨대, 분지된, 사이클릭, 융합된, 아다만틸) 및 N-아실 변형을 포함한다. 말단 카르복시기의 변형은, 비제한적으로, 아미드, 저급 알킬 아미드, 제한된 알킬(예컨대, 분지된, 사이클릭, 융합된, 아다만틸) 알킬, 디알킬 아미드, 및 저급 알킬 에스테르 변형을 포함한다. 저급 알킬은 C1-C4 알킬이다. 또한, 하나 이상 측기, 또는 말단기는 통상적인 기술을 가진 펩타이드 화학자에게 알려진 보호기에 의해 보호될 수 있다. 아미노산의 α-탄소는 모노 또는 디메틸화될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, "보존적" 아미노산 치환은 펩타이드 또는 폴리펩타이드 내의 아미노산을 유사한 화학적 특성, 예컨대 크기 또는 전하를 갖는 또 다른 아미노산으로 치환하는 것을 지칭한다. 본 발명의 목적을 위해, 하기 8개의 기 각각은 서로에 대해 보존적 치환인 아미노산을 함유한다:
1) 알라닌(A) 및 글리신(G);
2) 아스파트산(D) 및 글루탐산(E);
3) 아스파라긴(N) 및 글루타민(Q);
4) 아르기닌(R) 및 리신(K);
5) 이소류신(I), 류신(L), 메티오닌(M), 및 발린(V);
6) 페닐알라닌(F), 티로신(Y), 및 트립토판(W);
7) 세린(S) 및 트레오닌(T); 및
8) 시스테인(C) 및 메티오닌(M).
자연발생 잔기는 일반적인 측기 특성에 기초하여 부류로 나뉠 수 있으며, 예를 들어: 극성 양성(히스티딘(H), 리신(K), 및 아르기닌(R)); 극성 음성(아스파트산(D), 글루탐산(E)); 극성 중성(세린(S), 트레오닌(T), 아스파라긴(N), 글루타민(Q)); 비극성 지방족(알라닌(A), 발린(V), 류신(L), 이소류신(I), 메티오닌(M)); 비극성 방향족(페닐알라닌(F), 티로신(Y), 트립토판(W)); 프롤린 및 글리신; 및 시스테인으로 나뉠 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, "반보존적" 아미노산 치환은 펩타이드 또는 폴리펩타이드 내의 아미노산을 동일한 부류에 속하는 또 다른 아미노산으로 치환하는 것을 지칭한다.
일부 구현예에서, 달리 명시하지 않는 한, 보존적 또는 반보존적 아미노산 치환은 또한 천연 잔기와 유사한 화학적 특성을 갖는 비자연발생 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 이들 비천연 잔기는 전형적으로 생물학적 시스템에서의 합성이 아닌 화학적 펩타이드 합성에 의해 혼입된다. 이들은, 비제한적으로, 펩타이드모방체 및 다른 역전되거나 반전된 형태의 아미노산 모이어티를 포함한다. 본원에서의 구현예는 천연 아미노산, 비천연 아미노산, 및 아미노산 유사체를 포함한다. 예를 들어, 노르-류신은 메티오닌을 치환하는데 사용될 수 있다.
비보존적 치환은 하나의 부류의 구성원을 다른 부류의 구성원으로 교환하는 것을 포함할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "서열 동일성"은 2개의 중합체 서열(예컨대, 펩타이드, 폴리펩타이드, 핵산 등)이 단량체 하위단위의 동일한 순차적 조성을 갖는 정도를 지칭한다. 용어 "서열 유사성"은 2개의 중합체 서열(예컨대, 펩타이드, 폴리펩타이드, 핵산 등)이 보존적 및/또는 반보존적 아미노산 치환만이 상이한 정도를 지칭한다. "퍼센트 서열 동일성"(또는 "퍼센트 서열 유사성")은 (1) 비교 창(예컨대, 더 긴 서열의 길이, 더 짧은 서열의 길이, 특정 창 등)에서 2개의 최적 정렬된 서열을 비교하고, (2) 동일한(또는 유사한) 단량체(예컨대, 동일한 아미노산이 두 서열에서 존재함, 유사한 아미노산이 두 서열에서 존재함)를 함유하는 위치의 수를 결정하여 매치된 위치의 수를 산출하고, (3) 매치된 위치의 수를 비교 창(예컨대, 더 긴 서열의 길이, 더 짧은 서열의 길이, 특정 창)에서의 위치의 총 수로 나누고, (4) 결과에 100을 곱하여 퍼센트 서열 동일성 또는 퍼센트 서열 유사성을 산출함으로써 계산된다. 예를 들어, 펩타이드 A 및 B가 모두 20개의 아미노산 길이이고 1개 위치를 제외한 모든 위치에서 동일한 아미노산을 가지는 경우, 펩타이드 A 및 펩타이드 B는 95% 서열 동일성을 갖는다. 동일하지 않은 위치에 있는 아미노산이 동일한 생물물리학적 특징을 공유하면(예컨대, 둘 모두 산성임), 펩타이드 A 및 펩타이드 B는 100% 서열 유사성을 가질 것이다. 또 다른 예로서, 펩타이드 C가 20개의 아미노산 길이이고, 펩타이드 D가 15개의 아미노산 길이이며, 펩타이드 D 내의 15개의 아미노산 중 14개가 펩타이드 C의 부분의 것과 동일하면, 펩타이드 C 및 D는 70% 서열 동일성을 갖지만, 펩타이드 D는 펩타이드 C의 최적 비교 창에 대해 93.3% 서열 동일성을 갖는다. 본원에서 "퍼센트 서열 동일성"(또는 "퍼센트 서열 유사성")을 계산하기 위해, 정렬된 서열 내의 임의의 갭은 상기 위치에서 미스매치로서 취급된다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "그룹화된(grouped) 잔기"는 3차원 공간에 함께 물리적으로 위치하는 펩타이드, 폴리펩타이드, 또는 단백질 내의 아미노산 세트를 지칭한다. 그룹화된 잔기는 펩타이드, 폴리펩타이드, 또는 단백질의 일차 서열에서 순차적이거나 순차적이지 않을 수 있다. 잔기는 구형 도메인에서 그룹화될 수 있거나, 동일한 표면 상에 존재할 수 있거나, 펩타이드, 폴리펩타이드, 또는 단백질 내의 2차 구조(예컨대, 알파 나선) 또는 3차 구조의 동일한 말단 또는 측면 상에 제시될 수 있다. 일부 구현예에서, 물리적으로 함께 위치하는 것 외에도, 그룹화된 잔기는 또한 잔기 특징(예컨대, 크기, 극성 전하 등)에서 상당한 정도의 유사성을 나타낸다.
본원에 사용된 바와 같이, "소수성 모멘트(μH)"는 나선의 양친매성의 측정치를 지칭한다. 다중 도메인 펩타이드 또는 펩타이드 유사체에서 양친매성 정도(즉, 소수성의 비대칭의 정도)는 양친매성 α-나선 도메인 각각의 소수성 모멘트(μH)을 계산함으로써 정량화될 수 있다. 특정 펩타이드 서열에 대한 μH 를 계산하는 방법은 당업계에 널리 알려져 있으며, 예를 들어 문헌[Eisenberg et al., Faraday Symp . Chem . Soc .17: 109-120, 1982; Eisenberg et al., PNAS 81:140-144, 1984; 및 Eisenberg et al., J. Mal . Biol . 179:125-142, 1984]에 기재되어 있다. 특정 펩타이드 서열에 대해 수득되는 실제 μH는 펩타이드를 구성하는 아미노산 잔기의 총 수에 좌우될 것이다. 상이한 길이의 펩타이드의 양친매성은 평균 소수성 모멘트에 의해 직접 비교될 수 있다. 잔기당 평균 소수성 모멘트는 μH를 펩타이드 내의 잔기의 수로 나눔으로써 수득될 수 있다.
달리 명시하지 않는 한, "apoC-II"(동의어로, "apoC2")는 인간 아포지질단백질 C-II를 지칭한다. 잔기는 신호 서열의 절단 후 인간 apoC-II 단백질의 성숙한 79개의 아미노산 내의 이들의 위치에 따라 본원에서 넘버링된다. 성숙한 아포지질단백질 C-II 단백질은 3개의 나선: 나선 1, 잔기 17-38; 나선 2, 잔기 45-57; 및 나선 3, 잔기 65-74/75를 포함하는 79개의 아미노산 단백질이다(Zdunek et al., Biochemistry 42: 1872-1889, 2003). apoC-II의 리파아제 활성화 영역은 이전에 약 잔기 56으로부터 서열의 C-말단 도메인에 국소화된 반면, 서열의 N-말단 도메인(잔기 1-50)은 지질 결합에 관여한다. 다양한 종 유래의 apoC-II 오르소로그(orthologue)에 대한 핵산 및 단백질 서열은 공개적으로 이용가능하다. 인간 apoC-II 전구체에 대한 GenBank NCBI 등록 번호는 NP_000474이다. 성숙한 인간 apoC-II, 인간 apoC-II의 아미노산 잔기 40-79, 및 인간 apoC-II의 천연 나선 1-3의 아미노산 서열이 하기 표 1에 나타나 있다.
달리 명시하지 않는 한, "LPL"은 지질단백질 리파아제를 지칭한다. 인간 LPL 단백질에 대한 GenBank NCBI 등록 번호는 NP_000228이다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "대상"은 광범위하게는 비제한적으로, 인간 및 비인간 동물(예컨대, 개, 고양이, 소, 말, 양, 돼지, 가금류, 어류, 갑각류 등)을 포함하는 임의의 동물을 지칭한다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "환자"는 전형적으로 질병 또는 병태를 위해 치료받고 있는 대상을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "유효량" 유익하거나 원하는 결과를 달성하는데 충분한 조성물(예컨대, 합성 펩타이드)의 양을 지칭한다. 유효량은 하나 이상의 투여, 적용 또는 투여량으로 투여될 수 있고, 특정 제제 또는 투여 경로에 제한되고자 하는 것이 아니다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "투여" 및 "투여하는 것"은 약물, 전구약물, 또는 다른 제제, 또는 치료적 치료제(예컨대, 합성 펩타이드)를 대상 또는 생체내, 시험관내, 또는 생체외 세포, 조직, 및 기관에 제공하는 행위를 지칭한다. 인체 투여의 예시적인 경로는 뇌 또는 척수의 지주막(arachnoid membrane) 아래의 공간(척추강내), 눈(안과), 입(경구), 피부(국소 또는 경피), 코(비강), 폐(흡입), 경구 점막(협측 또는 설측), 귀, 직장, 질, 주사(예컨대, 정맥내, 피하, 종양내, 복강내 등) 등을 통하는 것일 수 있다
본원에 사용된 바와 같이 용어 "공동 투여" 및 "공동 투여하는 것"은 적어도 2개의 제제(들)(예컨대, 다수의 합성 펩타이드 또는 하나의 펩타이드 및 또 다른 치료제) 또는 요법들을 대상에세 투여하는 것을 지칭한다. 일부 구현예에서, 2개 이상의 제제 또는 요법의 공동 투여는 동시에 발생한다. 다른 구현예에서, 제1 제제/요법은 제2 제제/요법 전에 투여된다. 당업자는 사용된 다양한 제제 또는 요법의 제제화 및 투여 경로가 달라질 수 있음을 이해한다. 공동 투여를 위한 적절한 투여량은 당업자에 의해 쉽게 결정될 수 있다. 일부 구현예에서, 제제 또는 요법이 공동 투여되는 경우, 각각의 제제 또는 요법은 이들의 단독 투여에 적절한 투여량보다 더 낮은 투여량으로 투여된다. 따라서, 공동 투여는 제제 또는 요법의 공동 투여가 잠재적으로 유해한(예컨대, 독성) 제제의 필요한 투여량을 낮추고/거나, 2개 이상의 제제의 공동 투여가 다른 제제의 공동 투여를 통해 제제 중 하나의 유익한 효과에 대해 대상을 민감하게 만드는 구현예에서 특히 바람직하다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "치료"는 유익하거나 의도된 임상 결과를 수득하기 위한 접근법을 의미한다. 유익하거나 의도된 임상 결과는 증상의 경감, 질병의 중증도의 감소, 질병 또는 병태의 근본 원인을 억제하는 것, 질병을 비진행 상태로 진정시키는 것, 질병의 진행을 지연시키는 것, 및/또는 질병 병태의 개선 또는 경감을 포함할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "약학 조성물"은 활성제(예컨대, apoC-II 모방 펩타이드)와 비활성 또는 활성 담체와의 조합을 지칭하며, 이는 조성물을 시험관내, 생체내 또는 생체외에서 치료 또는 진단 용도에 특히 적합하게 만든다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "약학적으로 허용가능한" 또는 "약리학적으로 허용가능한"은 대상에게 투여될 때 부정적인 반응, 예컨대, 독성, 알러지, 또는 면역 반응을 실질적으로 야기하지 않는 조성물을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "약학적으로 허용가능한 담체"는, 비제한적으로, 포스페이트 완충 식염수 용액, 물, 유화액(예컨대, 유/수 또는 수/유 유화액), 글리세롤, 액체 폴리에틸렌 글리콜, 비양성자성(aprotic) 용매, 예컨대 디메틸설폭사이드, N-메틸피롤리돈 및 이의 혼합물, 및 다양한 유형의 습윤제, 가용화제, 항산화제, 증량제, 단백질 담체, 예컨대 알부민, 임의의 및 모든 용매, 분산 매질, 코팅제, 나트륨 라우릴 설페이트, 등장성 및 흡수 지연제, 붕해제(예컨대, 감자 전분 또는 나트륨 전분 글리콜레이트) 등을 포함하는 표준 약학 담체 중 어느 것을 지칭한다. 조성물은 또한 안정화제 및 보존제를 포함할 수 있다. 담체, 안정화제 및 보조제의 예의 경우, 예컨대, 그 전체가 참조로 본원에 포함된 문헌[Martin, Remington's Pharmaceutical Sciences, 21th Ed., Mack Publ . Co., Easton, Pa.(2005)]을 참고한다.
1.1.
ApoC
-II 모방
펩타이드
제1 양태에서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드가 본원에 개시된다.
일부 구현예에서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드는 복수의 나선 도메인을 포함하는 다중나선 펩타이드이다. 일부 다중나선 구현예에서, 나선 도메인 중 하나 이상은 양친매성이고, 지질에 및/또는 지질단백질의 표면에 결합할 수 있다. 특정 구현예에서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드는 2개의 나선 도메인을 포함하는 이중나선 펩타이드이다. 일부 이중나선 구현예에서, 적어도 하나의 나선 도메인은 양친매성이다. 일부 이중나선 구현예에서, 하나의 나선 도메인은 양친매성이고, 다른 나선 도메인은 구형 단백질에서 발견되는 유형 G 나선이다.
일부 구현예에서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드는 단일 나선 펩타이드이다. 이들 구현예 중 일부에서, 나선 도메인은 양친매성이다. 이들 구현예 중 일부 다른 구현예에서, 나선 도메인은 유형 G 나선이다.
다양한 구현예에서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드는 75개 이하의 아미노산이다. 특정 구현예에서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드는 70개 이하의 아미노산이다. 특정 구현예에서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드는 60개 이하의 아미노산이다. 특정 구현예에서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드는 50개 이하의 아미노산이다. 특정 구현예에서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드는 40개 이하의 아미노산이다. 특정 구현예에서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드는 30개 이하의 아미노산이다. 특정 구현예에서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드는 20개 이하의 아미노산이다.
전형적인 구현예에서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드는 제1 나선 도메인, 힌지 영역, 및 제2 나선 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드는 N-말단부터 C-말단의 순서로 제1 나선 도메인, 힌지 영역, 및 제2 나선 도메인을 포함한다. 이들 구현예 중 일부에서, 제1 나선 도메인은 양친매성이다. 이들 구현예 중 일부에서, 제2 나선 도메인은 구형 나선을 형성한다. 이들 구현예 중 특정 구현예에서, 제1 나선 도메인은 양친매성이고, 제2 나선 도메인은 구형 나선을 형성한다.
일부 구현예에서, 제1 도메인은 지질단백질에의 결합에 대해 친화성을 갖는다. 일부 구현예에서, 제2 도메인은 지질단백질 리파아제(LPL)를 활성화시킬 수 있다. 특정 구현예에서, 제1 도메인은 지질단백질에의 결합에 대해 친화성을 갖고, 제2 도메인은 지질단백질 리파아제(LPL)를 활성화시킬 수 있다.
특정 구현예에서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드는 LPL에 의한 지방분해를 활성화시킬 수 있다. 특정 구현예에서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드는 지질단백질로부터 apoC-III를 대체할 수 있다.
다양한 구현예에서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드는 생체내 트리글리세라이드(TG) 수준을 감소시킬 수 있다. 이들 구현예 중 일부에서, 펩타이드는 LPL 결핍에 의해 유발된 상승된 TG 수준을 감소시킬 수 있다. 이들 구현예 중 일부에서, 펩타이드는 상승된 apoC-III에 의해 유발된 상승된 TG 수준을 감소시킬 수 있다. 이들 구현예 중 일부에서, 펩타이드는 apoC-II 결핍에 의해 유발된 상승된 TG 수준을 감소시킬 수 있다. 이들 구현예 중 일부 구현예에서, 펩타이드는 식후의 상승된 TG 수준을 감소시킬 수 있다.
다양한 구현예에서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드는 서열번호: 6-52 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 갖는다(표 2). 일부 구현예에서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드는 서열번호: 6-52 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열에 90% 서열 유사성을 갖는다. 일부 구현예에서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드는 서열번호: 6-52 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열에 91%, 92%, 93%, 94%, 또는 95% 서열 유사성을 갖는다. 일부 구현예에서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드는 서열번호: 6-52 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열에 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 유사성을 갖는다.
1.1.1. 제1 나선 도메인
다양한 구현예에서, 제1 나선 도메인은 지질단백질에의 결합에 대해 친화성을 갖는다. 일부 구현예에서, 제1 나선 도메인은 양친매성이다. 이들 구현예 중 특정 구현예에서, 나선 도메인은 약 6 내지 약 15, 예컨대 약 7 내지 약 15, 약 8 내지 약 15, 약 9 내지 약 15, 약 10 내지 약 15, 약 11 내지 약 15, 약 12 내지 약 15, 약 13 내지 약 15, 약 14 내지 약 15, 약 8 내지 약 14, 약 9 내지 약 14, 약 10 내지 약 14, 약 11 내지 약 14, 약 12 내지 약 14, 약 13 내지 약 14, 약 8 내지 약 13, 약 9 내지 약 13, 약 10 내지 약 13, 약 11 내지 약 13, 약 12 내지 약 13, 약 8 내지 약 12, 약 9 내지 약 12, 약 10 내지 약 12, 약 11 내지 약 12, 약 8 내지 약 11, 약 9 내지 약 11, 약 10 내지 약 11, 약 8 내지 약 10, 약 9 내지 약 10, 또는 약 8 내지 약 9의 소수성 모멘트 스코어를 갖는다. 펩타이드의 소수성 모멘트는 rzlab.ucr.edu/scripts/wheel/wheel.cgi와 같은 온라인 도구로 계산될 수 있다.
일부 구현예에서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드의 제1 나선 도메인은 apoC-II 단백질의 천연 나선 1이다. apoC-II 단백질의 나선 1은 성숙한 79개의 아미노산 apoC-II 단백질에서의 이들의 위치에 따라 넘버링된 아미노산 잔기 17-38(서열번호: 3)로 구성된다. 일부 다른 구현예에서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드의 제1 나선 도메인은 apoC-II 단백질의 나선 1의 변이체이다.
일부 구현예에서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드의 제1 나선 도메인은 apoC-II 단백질의 천연 나선 2이다. apoC-II 단백질의 나선 2는 성숙한 79개의 아미노산 apoC-II 단백질에서의 이들의 위치에 따라 넘버링된 아미노산 잔기 45-57(서열번호: 4)로 구성된다. 일부 다른 구현예에서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드의 제1 나선 도메인은 apoC-II 단백질의 나선 2의 변이체이다. 특정 구현예에서, apoC-II 단백질의 나선 2의 변이체는 apoC-II 단백질의 천연 나선 2에 적어도 하나의 변형을 포함한다. 특정 구현예에서, apoC-II 단백질의 나선 2의 변이체는 apoC-II 단백질의 천연 나선 2의 복수의 변형을 포함한다. 다양한 구현예에서, 각각의 변형은 독립적으로 신장, 절두, 돌연변이, 및/또는 화학적 변형으로부터 선택된다.
일부 다른 구현예에서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드의 제1 나선 도메인은 apoC-II 이외의 아포지질단백질에서 발견되는 양친매성 나선의 변이체, 또는 지질과 결합할 수 있는 다른 단백질로부터의 아포지질단백질에서 발견되는 양친매성 나선의 변이체이다.
1.1.1.1.
apoC
-II의 나선 2의 신장
특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2의 변이체는 apoC-II의 나선 2의 신장을 포함한다. 다양한 구현예에서, 신장은 apoC-II의 천연 나선 2와 비교하여 apoC-II의 나선 2의 변이체의 양친매성을 증가시킨다. 일부 구현예에서, 신장은 지질단백질에의 결합에 대한 apoC-II의 나선 2의 변이체의 친화성을 증가시킨다.
일부 구현예에서, apoC-II의 나선 2는 N-말단에서 신장된다. 다양한 구현예에서, apoC-II의 나선 2는 N-말단에서 1-20개의 아미노산에 의해 신장된다. 이들 구현예 중 일부에서, apoC-II의 나선 2는 N-말단에서 1-10개의 아미노산에 의해 신장된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2는 N-말단에서 1개의 아미노산에 의해 신장된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2는 N-말단에서 2개의 아미노산에 의해 신장된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2는 N-말단에서 3개의 아미노산에 의해 신장된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2는 N-말단에서 4개의 아미노산에 의해 신장된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2는 N-말단에서 5개의 아미노산에 의해 신장된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2는 N-말단에서 6개의 아미노산에 의해 신장된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2는 N-말단에서 7개의 아미노산에 의해 신장된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2는 N-말단에서 8개의 아미노산에 의해 신장된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2는 N-말단에서 9개의 아미노산에 의해 신장된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2는 N-말단에서 10개의 아미노산에 의해 신장된다.
특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2가 N-말단에서 1개의 아미노산에 의해 신장되는 경우, 신장하는 아미노산은 아스파트산이다.
특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2가 N-말단에서 2개의 아미노산에 의해 신장되는 경우, 신장하는 아미노산은 N-말단부터 C-말단까지 리신 및 알라닌이다.
전형적인 구현예에서, apoC-II의 나선 2는 N-말단에서 5개의 아미노산에 의해 신장된다. 일부 구현예에서, apoC-II의 나선 2는 인간 apoC-II의 천연 상류 아미노산 서열에 의해 신장된다. 일부 구현예에서, apoC-II의 나선 2는 인간 apoC-II의 천연 상류 아미노산 서열의 돌연변이체에 의해 신장된다. 일부 구현예에서, 아미노산은 성숙한 79개의 아미노산 인간 apoC-II 단백질에서의 이들의 위치에 따라 넘버링된 위치 40 내지 44에 있다. 일부 구현예에서, apoC-II의 나선 2의 변이체 위치 40에 아스파트산을 포함한다. 일부 구현예에서, apoC-II의 나선 2의 변이체는 위치 41에 티로신 또는 트립토판을 포함한다. 일부 구현예에서, apoC-II의 나선 2의 변이체는 위치 42에 류신을 포함한다. 일부 구현예에서, apoC-II의 나선 2의 변이체는 위치 43에 리신 또는 아르기닌을 포함한다. 일부 구현예에서, apoC-II의 나선 2의 변이체는 위치 44에 알라닌 또는 글루탐산을 포함한다.
특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2가 N-말단에서 5개의 아미노산에 의해 신장되는 경우, apoC-II의 나선 2의 변이체는 위치 40에 아스파트산, 위치 41에 티로신, 위치 42에 류신, 위치 43에 리신, 및 위치 44에 글루탐산을 포함한다.
특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2가 N-말단에서 5개의 아미노산에 의해 신장되는 경우, apoC-II의 나선 2의 변이체는 위치 40에 아스파트산, 위치 41에 티로신, 위치 42에 류신, 위치 43에 리신, 및 위치 44에 알라닌을 포함한다.
1.1.1.2.
apoC
-II의 나선 2의 절두
특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2의 변이체는 apoC-II의 나선 2의 절두를 포함한다. 다양한 구현예에서, 절두는 apoC-II의 천연 나선 2와 비교하여 apoC-II의 나선 2의 변이체의 양친매성을 증가시킨다. 일부 구현예에서, 절두는 지질단백질에의 결합에 대한 apoC-II의 나선 2의 변이체의 친화성을 증가시킨다.
일부 구현예에서, apoC-II의 나선 2는 N-말단에서 절두된다. 다양한 구현예에서, apoC-II의 나선 2는 N-말단에서 1-12개의 아미노산에 의해 절두된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2는 N-말단에서 1개의 아미노산에 의해 절두된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2는 N-말단에서 2개의 아미노산에 의해 절두된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2는 N-말단에서 3개의 아미노산에 의해 절두된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2는 N-말단에서 4개의 아미노산에 의해 절두된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2는 N-말단에서 5개의 아미노산에 의해 절두된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2는 N-말단에서 6개의 아미노산에 의해 절두된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2는 N-말단에서 7개의 아미노산에 의해 절두된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2는 N-말단에서 8개의 아미노산에 의해 절두된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2는 N-말단에서 9개의 아미노산에 의해 절두된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2는 N-말단에서 10개의 아미노산에 의해 절두된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2는 N-말단에서 11개의 아미노산에 의해 절두된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2는 N-말단에서 12개의 아미노산에 의해 절두된다.
특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2가 N-말단에서 2개의 아미노산에 의해 절두되는 경우, apoC-II의 천연 나선 2의 아미노산 잔기 45-46이 결실된다.
특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2가 N-말단에서 4개의 아미노산에 의해 절두되는 경우, apoC-II의 천연 나선 2의 아미노산 잔기 45-48은 결실된다.
특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2가 N-말단에서 5개의 아미노산에 의해 절두되는 경우, apoC-II의 천연 나선 2의 아미노산 잔기 45-49는 결실된다.
특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2가 N-말단에서 6개의 아미노산에 의해 절두되는 경우, apoC-II의 천연 나선 2의 아미노산 잔기 45-50은 결실된다.
특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2가 N-말단에서 9개의 아미노산에 의해 절두되는 경우, apoC-II의 천연 나선 2의 아미노산 잔기 45-53는 결실된다.
1.1.1.3.
apoC
-II의 나선 2의 돌연변이
특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2의 변이체는 apoC-II의 나선 2의 적어도 하나의 돌연변이를 포함한다. 다양한 구현예에서, 돌연변이는 apoC-II의 천연 나선 2와 비교하여 apoC-II의 나선 2의 변이체의 양친매성을 증가시킨다. 일부 구현예에서, 돌연변이는 지질단백질에의 결합에 대한 apoC-II의 나선 2의 변이체의 친화성을 증가시킨다.
특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2의 변이체는 apoC-II의 나선 2의 하나의 돌연변이를 포함한다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2의 변이체는 apoC-II의 나선 2의 2개의 돌연변이를 포함한다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2의 변이체는 apoC-II의 나선 2의 3개의 돌연변이를 포함한다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2의 변이체는 apoC-II의 나선 2의 4개의 돌연변이를 포함한다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2의 변이체는 apoC-II의 나선 2의 5개의 돌연변이를 포함한다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2의 변이체는 apoC-II의 나선 2의 5개 초과의 돌연변이를 포함한다.
일부 구현예에서, 돌연변이는 아미노산 치환이다. 일부 구현예에서, 돌연변이는 아미노산 삽입이다. 일부 구현예에서, 돌연변이는 아미노산 결실이다.
일부 구현예에서, apoC-II의 나선 2의 원래의 아미노산은 천연 아미노산에 의해 치환된다. 일부 구현예에서, apoC-II의 나선 2의 원래의 아미노산은 비천연 아미노산에 의해 치환된다. 일부 구현예에서, apoC-II의 나선 2의 원래의 아미노산은 아미노산 유사체에 의해 치환된다. 일부 구현예에서, apoC-II의 나선 2의 원래의 아미노산은 화학적으로 변형된 아미노산에 의해 치환된다.
다양한 구현예에서, 아미노산 치환은 보존적 또는 반보존적 치환이다. 일부 구현예에서, 아미노산 치환은 생성된 펩타이드의 활성 및/또는 구조에 최소 영향을 미친다. 특정 구현예에서, 아미노산 치환은 치환 영역에서 펩타이드 백본의 구조를, 예를 들어, 나선 형태로 유지시킨다. 특정 구현예에서, 아미노산 치환은 표적 부위에서 분자의 전하 또는 소수성을 유지시킨다. 특정 구현예에서, 아미노산 치환은 아미노산 측기의 크기를 유지시킨다.
다양한 구현예에서, 아미노산 치환은 비보존적 치환이다. 일부 구현예에서, 아미노산 치환은 펩타이드 특성의 유의한 변화를 야기한다. 특정 구현예에서, 친수성 잔기는 소수성 잔기에 의해 치환된다. 특정 다른 구현예에서, 소수성 잔기는 친수성 잔기에 의해 치환된다. 특정 구현예에서, 시스테인 또는 프롤린은 또 다른 잔기에 의해 치환된다. 특정 다른 구현예에서, 비시스테인 또는 비프롤린은 시스테인 또는 프롤린에 의해 치환된다. 특정 구현예에서, 양전기 측기를 갖는 잔기는 음전기 잔기에 의해 치환된다. 특정 다른 구현예에서, 음전기 측기를 갖는 잔기는 양전기 잔기에 의해 치환된다. 특정 구현예에서, 큰 측기를 갖는 잔기는 측기를 갖지 않는 잔기에 의해 치환된다. 특정 다른 구현예에서, 측기를 갖지 않는 잔기는 큰 측기를 갖는 잔기에 의해 치환된다.
특정 구현예에서, 아미노산 치환 위치 45에 있다. 일부 구현예에서, 위치 45에서의 발린은 페닐알라닌에 의해 치환된다.
특정 구현예에서, 아미노산 치환은 위치 46에 있다. 일부 구현예에서, 위치 46에서의 아스파트산은 페닐알라닌에 의해 치환된다. 일부 구현예에서, 위치 46에서의 아스파트산은 리신에 의해 치환된다. 일부 구현예에서, 위치 46에서의 아스파트산은 아미노이소부티르산에 의해 치환된다.
특정 구현예에서, 아미노산 치환은 위치 47에 있다.
특정 구현예에서, 아미노산 치환은 위치 48에 있다. 일부 구현예에서, 위치 48에서의 리신은 아르기닌에 의해 치환된다.
특정 구현예에서, 아미노산 치환은 위치 49에 있다. 일부 구현예에서, 위치 49에서의 류신은 리신에 의해 치환된다. 이들 구현예 중 일부에서, 리신은 지방산에 의해 변형된다.
특정 구현예에서, 아미노산 치환은 위치 50에 있다. 일부 구현예에서, 위치 50에서의 아르기닌은 리신에 의해 치환된다.
특정 구현예에서, 아미노산 치환은 위치 51에 있다.
특정 구현예에서, 아미노산 치환은 위치 52에 있다.
특정 구현예에서, 아미노산 치환은 위치 53에 있다. 일부 구현예에서, 위치 53에서의 티로신은 류신에 의해 치환된다.
특정 구현예에서, 아미노산 치환은 위치 54에 있다. 일부 구현예에서, 위치 54에서의 세린은 글루탐산에 의해 치환된다. 일부 구현예에서, 위치 54에서의 세린은 리신에 의해 치환된다. 일부 구현예에서, 위치 54에서의 세린은 아스파트산에 의해 치환된다.
특정 구현예에서, 아미노산 치환은 위치 55에 있다. 일부 구현예에서, 위치 55에서의 리신은 아르기닌에 의해 치환된다.
특정 구현예에서, 아미노산 치환은 위치 56에 있다. 일부 구현예에서, 위치 56에서의 세린은 페닐알라닌에 의해 치환된다. 일부 구현예에서, 위치 56에서의 세린은 리신에 의해 치환된다. 일부 구현예에서, 위치 56에서의 세린은 알라닌에 의해 치환된다. 일부 구현예에서, 위치 56에서의 세린은 아미노이소부티르산에 의해 치환된다.
특정 구현예에서, 아미노산 치환은 위치 57에 있다. 일부 구현예에서, 위치 57에서의 트레오닌은 페닐알라닌에 의해 치환된다.
특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2의 변이체는 2개의 아미노산 치환을 포함하고, 아미노산 치환은 위치 46 및 위치 56에 있다. 이들 구현예 중 일부에서, 위치 46에서의 아스파트산은 페닐알라닌에 의해 치환되고, 위치 56에서의 세린은 페닐알라닌에 의해 치환된다.
특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2의 변이체는 3개의 아미노산 치환을 포함하고, 아미노산 치환은 위치 46, 위치 54, 및 위치 56에 있다. 이들 구현예 중 일부에서, 위치 46에서의 아스파트산은 페닐알라닌에 의해 치환되고, 위치 54에서의 세린은 글루탐산에 의해 치환되며, 위치 56에서의 세린은 페닐알라닌에 의해 치환된다.
1.1.1.4.
apoC
-II의 나선 2의
변이체의
화학적 변형
특정 구현예에서, apoC-II의 나선 2의 변이체는 적어도 하나의 화학적 변형을 포함한다. 다양한 구현예에서, 화학적 변형은 apoC-II의 천연 나선 2와 비교하여 apoC-II의 나선 2의 변이체의 양친매성을 증가시킨다. 일부 구현예에서, 화학적 변형은 지질단백질에의 결합에 대한 apoC-II의 나선 2의 변이체의 친화성을 증가시킨다.
일부 구현예에서, 화학적 변형은 제1 도메인의 N-말단에 있다. 다양한 구현예에서, N-말단의 아미노-말단은 다양한 작용기와의 접합에 의해 변형될 수 있다. 아포지질단백질의 합성 펩타이드 모방체의 말단 전하의 중화는 이들의 지질 친화성을 증가시키는 것으로 나타났다(Yancey et al., Biochem. 34:7955-7965, 1995; Venkatachalapathi et al., Protein: Structure, Function and Genetics 15:349-359, 1993). 예를 들어, 양친매성 펩타이드의 아미노 말단의 아세틸화는 펩타이드의 지질 친화성을 증가시킨다(Mishra et al., J. Biol . Chem . 269:7185-7191, 1994). 다른 가능한 말단 변형은, 예를 들어, 문헌[Brouillette et al., Biochem . Biophys. Acta 1256: 103-129, 1995; Mishra et al., J. Biol . Chem . 269:7185-7191, 1994; 및 Mishra et al., J. Biol. Chem. 270:1602-1611, 1995]에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 화학적 변형은 제1 도메인의 아미노산 측기에 있다. 아미노산 측기에서의 변형은, 비제한적으로, 리신 ε-아미노기의 아실화, 아르기닌, 히스티딘, 또는 리신의 N-알킬화, 글루타믹 또는 아스파틱 카르복실산기의 알킬화, 리신 ε-아미노기와 글루타믹 또는 아스파트산 측기 카르복실기와의 고리화를 통한 락탐 형성, 탄화수소 "스태플링"(예컨대, 알파-나선 형태를 안정화시키는 것), 및 글루타민 또는 아스파라긴의 탈아미드화를 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 도메인은 하나 이상 측기를 다른 측기, 예컨대 알킬, 저급 알킬, 사이클릭 4-, 5-, 6-, 내지 7-원 알킬, 아미드, 아미드 저급 알킬, 아미드 디(저급 알킬), 저급 알콕시, 하이드록시, 카르복시 및 이의 저급 에스테르 유도체, 및 4-, 5-, 6-, 내지 7-원 헤테로사이클릭로 대체함으로써 변형된다. 예를 들어, 프롤린 잔기의 고리 크기가 5-원 고리로부터 4-, 6-, 또는 7-원 고리로 변화된 프롤린 유사체가 만들어질 수 있다. 사이클릭기는 포화되거나 불포화될 수 있고, 불포화되는 경우, 방향족 또는 비방향족일 수 있다. 헤테로사이클릭기는 하나 이상 질소, 산소, 및/또는 황 헤테로원자를 함유할 수 있다. 이러한 기의 예는 푸라자닐, 푸릴, 이미다졸리디닐, 이미다졸릴, 이미다졸리닐, 이소티아졸릴, 이속사졸릴, 모폴리닐(예컨대, 모폴리노), 옥사졸릴, 피페라지닐(예컨대, 1-피페라지닐), 피페리딜(예컨대, 1-피페리딜, 피페리디노), 피라닐, 피라지닐, 피라졸리디닐, 피라졸리닐, 피라졸릴, 피리다지닐, 피리딜, 피리미디닐, 피롤리디닐(예컨대, 1-피롤리디닐), 피롤리닐, 피롤릴, 티아디아졸릴, 티아졸릴, 티에닐, 티오모폴리닐(예컨대, 티오모폴리노), 및 티아졸릴기를 포함한다. 이들 헤테로사이클릭기는 치환되거나 비치환될 수 있다. 기가 치환되는 경우, 치환기는 알킬, 알콕시, 할로겐, 산소, 또는 치환된 또는 비치환된 페닐일 수 있다. 펩타이드뿐만 아니라 펩타이드 유사체 및 모방체는 또한 하나 이상의 다양한 비단백질성 중합체, 예를 들어, 미국 특허 제4,640,835호; 제4,496,689호; 제4,301,144호; 제4,670,417호; 제4,791,192호; 및 제4,179,337호에 기재된 바와 같은 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜, 또는 폴리옥시알켄에 공유 결합될 수 있다.
특정 구현예에서, 화학적 변형은 비공유 변형이다. 특정 다른 구현예에서, 화학적 변형은 변형된 아미노산에 공유 결합된다. 다양한 구현예에서, 화학적 변형은 인산화, 글리코실화, 또는 지질화일 수 있다.
일부 구현예에서, 화학적 변형은 지방산의 공유 결합이다. 특정 구현예에서, 지방산은 포화된다. 특정 다른 구현예에서, 지방산은 불포화된다.
다양한 구현예에서, 지방산은 2 내지 30개의 탄소, 예컨대 4 내지 26개의 탄소, 6 내지 24개의 탄소, 10 내지 20개의 탄소, 12 내지 18개의 탄소, 및 14 내지 16개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 6개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 7개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 8개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 9개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 10개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 11개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 12개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 13개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 14개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 15개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 16개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 17개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 18개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 19개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 20개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 21개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 22개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 23개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 24개의 탄소를 포함한다.
일부 구현예에서, 불포화 지방산은 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개 이중 결합을 갖는다. 특정 구현예에서, 불포화 지방산은 아라키돈산이다. 특정 구현예에서, 불포화 지방산은 리놀레산이다. 특정 구현예에서, 불포화 지방산은 올레산이다. 특정 구현예에서, 불포화 지방산은 팔미트올레산이다. 특정 구현예에서, 불포화 지방산은 리놀렌산이다. 특정 구현예에서, 불포화 지방산은 에이코사펜타에노산이다. 특정 구현예에서, 불포화 지방산은 도코사헥사에노산이다.
특정 구현예에서, 지방산은 팔미트산이다. 특정 구현예에서, 지방산은 스테아르산이다.
특정 구현예에서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드는 N-말단 아미노산에 공유 결합된 스테아르산을 포함한다. 이들 구현예 중 일부에서, N-말단 아미노산은 아스파트산이다.
특정 구현예에서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드는 리신 잔기의 측기에 공유 결합된 스테아르산을 포함한다. 특정 구현예에서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드가 위치 46에 리신을 포함하는 경우, 스테아르산은 위치 46에서의 리신 잔기에 공유 결합된다. 특정 구현예에서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드가 위치 49에 리신을 포함하는 경우, 스테아르산은 위치 49에서의 리신 잔기에 공유 결합된다. 특정 구현예에서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드가 위치 56에서 리신을 포함하는 경우, 스테아르산은 위치 56에서의 리신 잔기에 공유 결합된다.
1.1.2.
힌지
영역
일부 구현예에서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드는 제1 나선 도메인 및 제2 나선 도메인을 연결하는 힌지 영역을 포함한다. 특정 구현예에서, 힌지 영역은 기능적으로 제1 나선 도메인 및 제2 나선 도메인을 분리한다. 다양한 구현예에서, 힌지 영역은 LPL 활성화 활성을 갖는 제2 도메인이 지질단백질의 미셀 표면에 부착하는 것을 돕는다. 특정 구현예에서, 힌지 영역은 제1 나선 도메인 및 제2 나선 도메인이 거의 직선 형태를 유지하게 하며, 제2 도메인은 약 20° 이하, 예컨대 약 15° 이하, 약 10° 이하, 또는 약 5° 이하의 각도의 각도로 제1 도메인으로부터 멀리 구부러진다.
1.1.2.1.
힌지
영역의 아미노산 조성
다양한 구현예에서, 힌지 영역은 3-15개의 아미노산, 예컨대 4-12개의 아미노산, 5-10개의 아미노산, 6-9개의 아미노산, 또는 7-8개의 아미노산을 포함한다. 특정 구현예에서, 힌지 영역은 3개의 아미노산을 포함한다. 특정 구현예에서, 힌지 영역은 4개의 아미노산을 포함한다. 특정 구현예에서, 힌지 영역은 5개의 아미노산을 포함한다. 특정 구현예에서, 힌지 영역은 6개의 아미노산을 포함한다. 특정 구현예에서, 힌지 영역은 7개의 아미노산을 포함한다. 특정 구현예에서, 힌지 영역은 8개의 아미노산을 포함한다. 특정 구현예에서, 힌지 영역은 9개의 아미노산을 포함한다. 특정 구현예에서, 힌지 영역은 10개의 아미노산을 포함한다. 특정 구현예에서, 힌지 영역은 11개의 아미노산을 포함한다. 특정 구현예에서, 힌지 영역은 12개의 아미노산을 포함한다. 특정 구현예에서, 힌지 영역은 13개의 아미노산을 포함한다. 특정 구현예에서, 힌지 영역은 14개의 아미노산을 포함한다. 특정 구현예에서, 힌지 영역은 15개의 아미노산을 포함한다.
일부 구현예에서, 힌지 영역은 천연 아미노산을 포함한다. 일부 구현예에서, 힌지 영역은 비천연 아미노산을 포함한다. 일부 구현예에서, 힌지 영역은 아미노산 유사체를 포함한다.
다양한 구현예에서, 힌지 영역은 프롤린을 포함한다. 일부 구현예에서, 힌지 영역은 하이드록실 프롤린을 포함한다. 2개의 나선 도메인을 기능적으로 분리시키는 다른 적합한 아미노산(예컨대, 글리신, 세린, 트레오닌, 및 알라닌)이 또한 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 힌지 영역은 프롤린을 포함한다. 이들 구현예 중 일부에서, 힌지 영역은 위치 58에 프롤린을 포함한다. 특정 구현예에서, 힌지 영역은 알라닌을 포함한다. 이들 구현예 중 일부에서, 힌지 영역은 위치 58에 알라닌을 포함한다. 이들 구현예 중 일부에서, 힌지 영역은 위치 59에 알라닌을 포함한다. 일부 구현예에서, 힌지 영역은 노르류신을 포함한다. 이들 구현예 중 일부에서, 힌지 영역은 위치 60에 노르류신을 포함한다. 일부 구현예에서, 힌지 영역은 리신을 포함한다. 이들 구현예 중 일부에서, 힌지 영역은 위치 60에 리신을 포함한다. 일부 구현예에서, 힌지 영역은 메티오닌을 포함한다. 이들 구현예 중 일부에서, 힌지 영역은 위치 60에 메티오닌을 포함한다. 일부 구현예에서, 힌지 영역은 세린을 포함한다. 이들 구현예 중 일부에서, 힌지 영역은 위치 61에 세린을 포함한다. 일부 구현예에서, 힌지 영역은 트레오닌을 포함한다. 이들 구현예 중 일부에서, 힌지 영역은 위치 62에 트레오닌을 포함한다. 이들 구현예 중 일부에서, 힌지 영역은 위치 64에 트레오닌을 포함한다. 일부 구현예에서, 힌지 영역은 티로신을 포함한다. 이들 구현예 중 일부에서, 힌지 영역은 위치 63에 티로신을 포함한다.
1.1.2.2.
힌지
영역의 화학적 변형
특정 구현예에서, 힌지 영역은 적어도 하나의 화학적 변형을 포함한다.
일부 구현예에서, 화학적 변형은 힌지 영역의 아미노산 측기에 있다. 아미노산 측기에서의 변형은, 비제한적으로, 리신 ε-아미노기의 아실화, 아르기닌, 히스티딘, 또는 리신의 N-알킬화, 글루타믹 또는 아스파틱 카르복실산기의 알킬화, 리신 ε-아미노기와 글루타믹 또는 아스파트산 측기 카르복실기와의 고리화를 통한 락탐 형성, 탄화수소 "스태플링"(예컨대, 알파-나선 형태를 안정화시키는 것), 및 글루타민 또는 아스파라긴의 탈아미드화를 포함한다. 일부 구현예에서, 힌지 영역은 하나 이상 측기를 다른 측기, 예컨대 알킬, 저급 알킬, 사이클릭 4-, 5-, 6-, 내지 7-원 알킬, 아미드, 아미드 저급 알킬, 아미드 디(저급 알킬), 저급 알콕시, 하이드록시, 카르복시 및 이의 저급 에스테르 유도체, 및 4-, 5-, 6-, 내지 7-원 헤테로사이클릭으로 대체함으로써 변형된다. 예를 들어, 프롤린 잔기의 고리 크기가 5-원 고리로부터 4-, 6-, 또는 7-원 고리로 변화된 프롤린 유사체가 만들어질 수 있다. 사이클릭기는 포화되거나 불포화될 수 있고, 불포화되는 경우, 방향족 또는 비방향족일 수 있다. 헤테로사이클릭기는 하나 이상 질소, 산소, 및/또는 황 헤테로원자를 함유할 수 있다. 이러한 기의 예는 푸라자닐, 푸릴, 이미다졸리디닐, 이미다졸릴, 이미다졸리닐, 이소티아졸릴, 이속사졸릴, 모폴리닐(예컨대, 모폴리노), 옥사졸릴, 피페라지닐(예컨대, 1-피페라지닐), 피페리딜(예컨대, 1-피페리딜, 피페리디노), 피라닐, 피라지닐, 피라졸리디닐, 피라졸리닐, 피라졸릴, 피리다지닐, 피리딜, 피리미디닐, 피롤리디닐(예컨대, 1-피롤리디닐), 피롤리닐, 피롤릴, 티아디아졸릴, 티아졸릴, 티에닐, 티오모폴리닐(예컨대, 티오모폴리노), 및 티아졸릴기를 포함한다. 이들 헤테로사이클릭기는 치환되거나 비치환될 수 있다. 기가 치환되는 경우, 치환기는 알킬, 알콕시, 할로겐, 산소, 또는 치환된 또는 비치환된 페닐일 수 있다. 펩타이드뿐만 아니라 펩타이드 유사체 및 모방체는 또한 다양한 비단백질성 중합체, 예를 들어, 미국 특허 제4,640,835호; 제4,496,689호; 제4,301,144호; 제4,670,417호; 제4,791,192호; 및 제4,179,337호에 기재된 바와 같은 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜, 또는 폴리옥시알켄에 공유 결합될 수 있다.
특정 구현예에서, 화학적 변형은 비공유 변형이다. 특정 다른 구현예에서, 화학적 변형은 공유 결합된다. 다양한 구현예에서, 화학적 변형은 인산화, 글리코실화, 또는 지질화일 수 있다.
일부 구현예에서, 화학적 변형은 지방산의 공유 결합이다. 특정 구현예에서, 지방산은 포화된다. 특정 다른 구현예에서, 지방산은 불포화된다.
다양한 구현예에서, 지방산은 2 내지 30개의 탄소, 예컨대 4 내지 26개의 탄소, 6 내지 24개의 탄소, 10 내지 20개의 탄소, 12 내지 18개의 탄소, 및 14 내지 16개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 6개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 7개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 8개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 9개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 10개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 11개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 12개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 13개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 14개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 15개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 16개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 17개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 18개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 19개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 20개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 21개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 22개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 23개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 24개의 탄소를 포함한다.
일부 구현예에서, 불포화 지방산은 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 이중 결합을 갖는다. 특정 구현예에서, 불포화 지방산은 아라키돈산이다. 특정 구현예에서, 불포화 지방산은 리놀레산이다. 특정 구현예에서, 불포화 지방산은 올레산이다. 특정 구현예에서, 불포화 지방산은 팔미트올레산이다. 특정 구현예에서, 불포화 지방산은 리놀렌산이다. 특정 구현예에서, 불포화 지방산은 에이코사펜타에노산이다. 특정 구현예에서, 불포화 지방산은 도코사헥사에노산이다.
특정 구현예에서, 지방산은 팔미트산이다. 특정 구현예에서, 지방산은 스테아르산이다.
특정 구현예에서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드는 리신 잔기의 측기에 공유 결합된 팔미트산을 포함한다. 특정 구현예에서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드가 위치 60에 리신을 포함하는 경우, 팔미트산은 위치 60에서의 리신 잔기에 공유 결합된다.
1.1.3. 제2 나선 도메인
일부 구현예에서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드의 제2 나선 도메인은 apoC-II 단백질의 천연 나선 3이다. apoC-II 단백질의 나선 3은 성숙한 79개의 아미노산 apoC-II 단백질에서의 이들의 위치에 따라 넘버링된 아미노산 잔기 65-74/75(서열번호: 5)로 구성된다. 일부 다른 구현예에서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드의 제2 나선 도메인은 apoC-II 단백질의 나선 3의 변이체이다.
특정 구현예에서, apoC-II 단백질의 나선 3의 변이체는 apoC-II 단백질의 천연 나선 3의 변형을 포함한다. 다양한 구현예에서, 변형은 신장, 절두, 돌연변이, 및 화학적 변형을 포함한다.
1.1.3.1.
apoC
-II의 나선 3의 신장
특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3의 변이체는 apoC-II의 나선 3의 신장을 포함한다. 일부 구현예에서, 신장은 LPL에 의한 지방분해를 활성화시키는 apoC-II의 나선 3의 변이체의 능력을 증가시킨다.
일부 구현예에서, apoC-II의 나선 3은 C-말단에서 신장된다. 다양한 구현예에서, apoC-II의 나선 3은 C-말단에서 1-20개의 아미노산에 의해 신장된다. 이들 구현예 중 일부에서, apoC-II의 나선 3은 C-말단에서 1-10개의 아미노산에 의해 신장된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3은 C-말단에서 1개의 아미노산에 의해 신장된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3은 C-말단에서 2개의 아미노산에 의해 신장된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3은 C-말단에서 3개의 아미노산에 의해 신장된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3은 C-말단에서 4개의 아미노산에 의해 신장된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3은 C-말단에서 5개의 아미노산에 의해 신장된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3은 C-말단에서 6개의 아미노산에 의해 신장된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3은 C-말단에서 7개의 아미노산에 의해 신장된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3은 C-말단에서 8개의 아미노산에 의해 신장된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3은 C-말단에서 9개의 아미노산에 의해 신장된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3은 C-말단에서 10개의 아미노산에 의해 신장된다.
특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3이 C-말단에서 4개의 아미노산에 의해 신장되는 경우, 아미노산은 리신, 글리신, 글루탐산, 및 N-말단부터 C-말단까지 글루탐산이다.
특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3이 C-말단에서 4개의 아미노산에 의해 신장되는 경우, 아미노산은 아르기닌, 글리신, 글루탐산, 및 N-말단부터 C-말단까지 글루탐산이다.
1.1.3.2.
apoC
-II의 나선 3의 돌연변이
특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3의 변이체는 apoC-II의 나선 3의 적어도 하나의 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 돌연변이는 LPL에 의한 지방분해를 활성화시키기 위한 apoC-II의 나선 3의 변이체의 능력을 증가시킨다.
특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3의 변이체는 apoC-II의 나선 3의 하나의 돌연변이를 포함한다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3의 변이체는 apoC-II의 나선 3의 2개의 돌연변이를 포함한다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3의 변이체는 apoC-II의 나선 3의 3개의 돌연변이를 포함한다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3의 변이체는 apoC-II의 나선 3의 4개의 돌연변이를 포함한다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3의 변이체는 apoC-II의 나선 3의 5개의 돌연변이를 포함한다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3의 변이체는 apoC-II의 나선 3의 5개 초과의 돌연변이를 포함한다.
일부 구현예에서, 돌연변이는 아미노산 치환이다. 일부 구현예에서, 돌연변이는 아미노산 삽입이다. 일부 구현예에서, 돌연변이는 아미노산 결실이다.
일부 구현예에서, apoC-II의 나선 3의 원래의 아미노산은 천연 아미노산에 의해 치환된다. 일부 구현예에서, apoC-II의 나선 3의 원래의 아미노산은 비천연 아미노산에 의해 치환된다. 일부 구현예에서, apoC-II의 나선 3의 원래의 아미노산은 아미노산 유사체에 의해 치환된다.
다양한 구현예에서, 아미노산 치환은 보존적 또는 반보존적 치환이다. 일부 구현예에서, 아미노산 치환은 생성된 펩타이드의 활성 및/또는 구조에 최소 영향을 미친다. 특정 구현예에서, 아미노산 치환은 치환 영역에서 펩타이드 백본의 구조를, 예를 들어, 나선 형태로 유지시킨다. 특정 구현예에서, 아미노산 치환은 표적 부위에서 분자의 전하 또는 소수성을 유지시킨다. 특정 구현예에서, 아미노산 치환은 아미노산 측기의 크기를 유지시킨다.
다양한 구현예에서, 아미노산 치환은 비보존적 치환이다. 일부 구현예에서, 아미노산 치환은 펩타이드 특성의 유의한 변화를 야기한다. 특정 구현예에서, 친수성 잔기는 소수성 잔기에 의해 치환된다. 특정 다른 구현예에서, 소수성 잔기는 친수성 잔기에 의해 치환된다. 특정 구현예에서, 시스테인 또는 프롤린은 또 다른 잔기에 의해 치환된다. 특정 다른 구현예에서, 비시스테인 또는 비프롤린은 시스테인 또는 프롤린에 의해 치환된다. 특정 구현예에서, 양전기 측기를 갖는 잔기는 음전기 잔기에 의해 치환된다. 특정 다른 구현예에서, 음전기 측기를 갖는 잔기는 양전기 잔기에 의해 치환된다. 특정 구현예에서, 큰 측기를 갖는 잔기는 측기를 갖지 않는 잔기에 의해 치환된다. 특정 다른 구현예에서, 측기를 갖지 않는 잔기는 큰 측기를 갖는 잔기에 의해 치환된다.
특정 구현예에서, 아미노산 치환은 위치 70에 있다. 이들 구현예 중 일부에서, 위치 70에서의 글루타민은 아르기닌에 의해 치환된다. 이들 구현예 중 일부 다른 구현예에서, 위치 70에서의 글루타민은 리신에 의해 치환된다.
1.1.3.3.
apoC
-II의 나선 3의
변이체의
화학적 변형
특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3의 변이체는 적어도 하나의 화학적 변형을 포함한다. 일부 구현예에서, 화학적 변형은 LPL에 의한 지방분해를 활성화시키는 나선 3의 변이체의 능력을 증가시킨다.
일부 구현예에서, 화학적 변형은 제2 도메인의 C-말단에 있다. 다양한 구현예에서, C-말단의 카르복실-말단은 다양한 작용기와의 접합에 의해 변형될 수 있다. 아포지질단백질의 합성 펩타이드 모방체의 말단 전하의 중화는 이들의 지질 친화성을 증가시키는 것으로 나타났다(Yancey et al., Biochem. 34:7955-7965, 1995; Venkatachalapathi et al., Protein: Structure, Function and Genetics 15:349-359, 1993). 예를 들어, 양친매성 펩타이드의 아미노 말단의 아세틸화는 펩타이드의 지질 친화성을 증가시킨다(Mishra et al., J. Biol . Chem . 269:7185-7191, 1994). 다른 가능한 말단 변형은, 예를 들어, 문헌[Brouillette et al., Biochem . Biophys . Acta 1256: 103-129, 1995; Mishra et al., J. Biol . Chem. 269:7185-7191, 1994; 및 Mishra et al., J. Biol . Chem . 270:1602-1611, 1995]에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 화학적 변형은 제2 도메인 내의 아미노산의 아미노산 측기에 있다. 아미노산 측기에서의 변형은, 비제한적으로, 리신 ε-아미노기의 아실화, 아르기닌, 히스티딘, 또는 리신의 N-알킬화, 글루타믹 또는 아스파틱 카르복실산기의 알킬화, 리신 ε-아미노기와 글루타믹 또는 아스파트산 측기 카르복실기와의 고리화를 통한 락탐 형성, 탄화수소 "스태플링"(예컨대, 알파-나선 형태를 안정화시키는 것), 및 글루타민 또는 아스파라긴을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 도메인은 하나 이상 측기를 다른 측기, 예컨대 알킬, 저급 알킬, 사이클릭 4-, 5-, 6-, 내지 7-원 알킬, 아미드, 아미드 저급 알킬, 아미드 디(저급 알킬), 저급 알콕시, 하이드록시, 카르복시 및 이의 저급 에스테르 유도체, 및 4-, 5-, 6-, 내지 7-원 헤테로사이클릭으로 대체함으로써 변형된다. 예를 들어, 프롤린 잔기의 고리 크기가 5-원 고리로부터 4-, 6-, 또는 7-원 고리로 변화된 프롤린 유사체가 만들어질 수 있다. 사이클릭기는 포화되거나 불포화될 수 있고, 불포화되는 경우, 방향족 또는 비방향족일 수 있다. 헤테로사이클릭기는 하나 이상의 질소, 산소, 및/또는 황 헤테로원자를 함유할 수 있다. 이러한 기의 예는 푸라자닐, 푸릴, 이미다졸리디닐, 이미다졸릴, 이미다졸리닐, 이소티아졸릴, 이속사졸릴, 모폴리닐(예컨대, 모폴리노), 옥사졸릴, 피페라지닐(예컨대, 1-피페라지닐), 피페리딜(예컨대, 1-피페리딜, 피페리디노), 피라닐, 피라지닐, 피라졸리디닐, 피라졸리닐, 피라졸릴, 피리다지닐, 피리딜, 피리미디닐, 피롤리디닐(예컨대, 1-피롤리디닐), 피롤리닐, 피롤릴, 티아디아졸릴, 티아졸릴, 티에닐, 티오모폴리닐(예컨대, 티오모폴리노), 및 티아졸릴기를 포함한다. 이들 헤테로사이클릭기는 치환되거나 비치환될 수 있다. 기가 치환되는 경우, 치환기는 알킬, 알콕시, 할로겐, 산소, 또는 치환된 또는 비치환된 페닐일 수 있다. 펩타이드뿐만 아니라 펩타이드 유사체 및 모방체는 또한 하나 이상의 다양한 비단백질성 중합체, 예를 들어, 미국 특허 제4,640,835호; 제4,496,689호; 제4,301,144호; 제4,670,417호; 제4,791,192호; 및 제4,179,337호에 기재된 바와 같은 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜, 또는 폴리옥시알켄에 공유 결합될 수 있다.
특정 구현예에서, 화학적 변형은 비공유 변형이다. 특정 다른 구현예에서, 화학적 변형은 공유 결합된다. 다양한 구현예에서, 화학적 변형은 인산화, 글리코실화, 또는 지질화일 수 있다.
일부 구현예에서, 화학적 변형은 지방산의 공유 결합이다. 특정 구현예에서, 지방산은 포화된다. 특정 다른 구현예에서, 지방산은 불포화된다.
다양한 구현예에서, 지방산은 2 내지 30개의 탄소, 예컨대 4 내지 26개의 탄소, 6 내지 24개의 탄소, 10 내지 20개의 탄소, 12 내지 18개의 탄소, 및 14 내지 16개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 6개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 7개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 8개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 9개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 10개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 11개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 12개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 13개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 14개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 15개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 16개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 17개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 18개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 19개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 20개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 21개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 22개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 23개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 24개의 탄소를 포함한다.
일부 구현예에서, 불포화 지방산은 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 이중 결합을 갖는다. 특정 구현예에서, 불포화 지방산은 아라키돈산이다. 특정 구현예에서, 불포화 지방산은 리놀레산이다. 특정 구현예에서, 불포화 지방산은 올레산이다. 특정 구현예에서, 불포화 지방산은 팔미트올레산이다. 특정 구현예에서, 불포화 지방산은 리놀렌산이다. 특정 구현예에서, 불포화 지방산은 에이코사펜타에노산이다. 특정 구현예에서, 불포화 지방산은 도코사헥사에노산이다.
특정 구현예에서, 지방산은 팔미트산이다. 특정 구현예에서, 지방산은 스테아르산이다.
특정 구현예에서, C-말단 아미노산은 C-말단 아미드에 의해 변형된다. 이들 구현예 중 일부에서, C-말단 아미노산은 글루탐산이다.
1.1.4. 단일 도메인
ApoC
-II 모방
펩타이드
일부 구현예에서, apoC-II 모방 펩타이드는 하나의 나선 도메인으로 구성된다. 이들 구현예 중 일부에서, 나선 도메인은 양친매성이다. 이들 구현예 중 일부 다른 구현예에서, 나선 도메인은 구형 나선이다. 특정 구현예에서, apoC-II 모방 펩타이드는 apoC-II 단백질의 천연 나선 3이다. apoC-II 단백질의 나선 3은 성숙한 79개의 아미노산 apoC-II 단백질에서의 이들의 위치에 따라 넘버링된 아미노산 잔기 65-74/75(서열번호: 5)로 구성된다. 특정 다른 구현예에서, apoC-II 모방 펩타이드는 apoC-II의 나선 3의 변이체이다.
일부 구현예에서, apoC-II의 나선 3의 변이체는 40개 이하의 아미노산, 예컨대 30개 이하의 아미노산, 또는 20개 이하의 아미노산이다. 일부 구현예에서, apoC-II의 나선 3의 변이체는 apoC-II의 천연 나선 3의 변형을 포함한다. 다양한 구현예에서, 변형은 신장, 절두, 돌연변이, 및 화학적 변형을 포함한다.
1.1.4.1.
apoC
-II의 나선 3의 신장
특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3의 변이체는 apoC-II의 나선 3의 신장을 포함한다. 일부 구현예에서, 신장은 지질단백질에의 결합에 대한 나선 3의 변이체의 친화성을 증가시킨다. 일부 구현예에서, 신장은 LPL에 의한 지방분해를 활성화시키기 위한 apoC-II의 나선 3의 변이체의 능력을 증가시킨다.
일부 구현예에서, apoC-II의 나선 3은 N-말단에서 신장된다. 다양한 구현예에서, apoC-II의 나선 3은 N-말단에서 1-20개의 아미노산에 의해 신장된다. 이들 구현예 중 일부에서, apoC-II의 나선 3은 N-말단에서 1-10개의 아미노산에 의해 신장된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3은 N-말단에서 1개의 아미노산에 의해 신장된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3은 N-말단에서 2개의 아미노산에 의해 신장된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3은 N-말단에서 3개의 아미노산에 의해 신장된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3은 N-말단에서 4개의 아미노산에 의해 신장된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3은 N-말단에서 5개의 아미노산에 의해 신장된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3은 N-말단에서 6개의 아미노산에 의해 신장된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3은 N-말단에서 7개의 아미노산에 의해 신장된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3은 N-말단에서 8개의 아미노산에 의해 신장된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3은 N-말단에서 9개의 아미노산에 의해 신장된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3은 N-말단에서 10개의 아미노산에 의해 신장된다.
일부 구현예에서, apoC-II의 나선 3은 C-말단에서 신장된다. 다양한 구현예에서, apoC-II의 나선 3은 C-말단에서 1-20개의 아미노산에 의해 신장된다. 이들 구현예 중 일부에서, apoC-II의 나선 3은 C-말단에서 1-10개의 아미노산에 의해 신장된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3은 C-말단에서 1개의 아미노산에 의해 신장된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3은 C-말단에서 2개의 아미노산에 의해 신장된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3은 C-말단에서 3개의 아미노산에 의해 신장된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3은 C-말단에서 4개의 아미노산에 의해 신장된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3은 C-말단에서 5개의 아미노산에 의해 신장된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3은 C-말단에서 6개의 아미노산에 의해 신장된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3은 C-말단에서 7개의 아미노산에 의해 신장된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3은 C-말단에서 8개의 아미노산에 의해 신장된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3은 C-말단에서 9개의 아미노산에 의해 신장된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3은 C-말단에서 10개의 아미노산에 의해 신장된다.
특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3은 N-말단 및 C-말단 모두에서 신장된다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3은 N-말단에서 6개의 아미노산 및 C-말단에서 4개의 아미노산에 의해 신장된다. 이들 구현예 중 일부에서, apoC-II의 나선 3이 C-말단에서 4개의 아미노산에 의해 신장되는 경우, 아미노산은 아르기닌, 글리신, 글루탐산, 및 N-말단부터 C-말단까지 글루탐산이다. 이들 구현예 중 일부에서, apoC-II의 나선 3이 N-말단에서 6개의 아미노산에 의해 신장되는 경우, 아미노산은 알라닌, 메티오닌, 세린, 트레오닌, 티로신, 및 N-말단부터 C-말단까지 트레오닌이다. 이들 구현예 중 일부 다른 구현예에서, apoC-II의 나선 3이 N-말단에서 6개의 아미노산에 의해 신장되는 경우, 아미노산은 알라닌, 리신, 세린, 트레오닌, 티로신, 및 N-말단부터 C-말단까지 트레오닌이다.
1.1.4.2.
apoC
-II의 나선 3의 돌연변이
특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3의 변이체는 apoC-II의 나선 3의 적어도 하나의 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 돌연변이는 지질단백질에 대한 나선 3의 변이체의 친화성을 증가시킨다. 일부 구현예에서, 돌연변이는 LPL에 의한 지방분해를 활성화시키기 위한 apoC-II의 나선 3의 변이체의 능력을 증가시킨다.
특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3의 변이체는 apoC-II의 나선 3의 하나의 돌연변이를 포함한다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3의 변이체는 apoC-II의 나선 3의 2개의 돌연변이를 포함한다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3의 변이체는 apoC-II의 나선 3의 3개의 돌연변이를 포함한다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3의 변이체는 apoC-II의 나선 3의 4개의 돌연변이를 포함한다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3의 변이체는 apoC-II의 나선 3의 5개의 돌연변이를 포함한다. 특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3의 변이체는 apoC-II의 나선 3의 5개 초과의 돌연변이를 포함한다.
일부 구현예에서, 돌연변이는 아미노산 치환이다. 일부 구현예에서, 돌연변이는 아미노산 삽입이다. 일부 구현예에서, 돌연변이는 아미노산 결실이다.
일부 구현예에서, apoC-II의 나선 3의 원래의 아미노산은 천연 아미노산에 의해 치환된다. 일부 구현예에서, apoC-II의 나선 3의 원래의 아미노산은 비천연 아미노산에 의해 치환된다. 일부 구현예에서, apoC-II의 나선 3의 원래의 아미노산은 아미노산 유사체에 의해 치환된다.
다양한 구현예에서, 아미노산 치환은 보존적 또는 반보존적 치환이다. 일부 구현예에서, 아미노산 치환은 생성된 펩타이드의 활성 및/또는 구조에 최소 영향을 미친다. 특정 구현예에서, 아미노산 치환은 치환 영역에서 펩타이드 백본의 구조를, 예를 들어, 나선 형태로 유지시킨다. 특정 구현예에서, 아미노산 치환은 표적 부위에서 분자의 전하 또는 소수성을 유지시킨다. 특정 구현예에서, 아미노산 치환은 아미노산 측기의 크기를 유지시킨다.
다양한 구현예에서, 아미노산 치환은 비보존적 치환이다. 일부 구현예에서, 아미노산 치환은 펩타이드 특성의 유의한 변화를 야기한다. 특정 구현예에서, 친수성 잔기는 소수성 잔기에 의해 치환된다. 특정 다른 구현예에서, 소수성 잔기는 친수성 잔기에 의해 치환된다. 특정 구현예에서, 시스테인 또는 프롤린은 또 다른 잔기에 의해 치환된다. 특정 다른 구현예에서, 비시스테인 또는 비프롤린은 시스테인 또는 프롤린에 의해 치환된다. 특정 구현예에서, 양전기 측기를 갖는 잔기는 음전기 잔기에 의해 치환된다. 특정 다른 구현예에서, 음전기 측기를 갖는 잔기는 양전기 잔기에 의해 치환된다. 특정 구현예에서, 큰 측기를 갖는 잔기는 측기를 갖지 않는 잔기에 의해 치환된다. 특정 다른 구현예에서, 측기를 갖지 않는 잔기는 큰 측기를 갖는 잔기에 의해 치환된다.
1.1.4.3.
apoC
-II의 나선 3의
변이체의
화학적 변형
특정 구현예에서, apoC-II의 나선 3의 변이체는 적어도 하나의 화학적 변형을 포함한다. 일부 구현예에서, 화학적 변형은 지질단백질에의 결합에 대한 나선 3의 변이체의 친화성을 증가시킨다. 일부 구현예에서, 화학적 변형은 LPL에 의한 지방분해를 활성화시키기 위한 나선 3의 변이체의 능력을 증가시킨다.
일부 구현예에서, 화학적 변형은 apoC-II의 나선 3의 변이체의 N-말단에 있다. 일부 구현예에서, 화학적 변형은 apoC-II의 나선 3의 변이체의 C-말단에 있다. 다양한 구현예에서, N-말단의 아미노-말단 및/또는 C-말단의 카르복실-말단은 다양한 작용기와의 접합에 의해 변형될 수 있다. 아포지질단백질의 합성 펩타이드 모방체의 말단 전하의 중화는 이들의 지질 친화성을 증가시키는 것으로 나타났다(Yancey et al., Biochem. 34:7955-7965, 1995; Venkatachalapathi et al., Protein: Structure, Function and Genetics 15:349-359, 1993). 예를 들어, 양친매성 펩타이드의 아미노 말단의 아세틸화는 펩타이드의 지질 친화성을 증가시킨다(Mishra et al., J. Biol . Chem . 269:7185-7191, 1994). 다른 가능한 말단 변형은, 예를 들어, 문헌[Brouillette et al., Biochem . Biophys . Acta 1256: 103-129, 1995; Mishra et al., J. Biol . Chem . 269:7185-7191, 1994; 및 Mishra et al., J. Biol. Chem. 270:1602-1611, 1995]에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 화학적 변형은 apoC-II의 나선 3의 변이체의 아미노산 측기에 있다. 아미노산 측기에서의 변형은, 비제한적으로, 리신 ε-아미노기의 아실화, 아르기닌, 히스티딘, 또는 리신의 N-알킬화, 글루타믹 또는 아스파틱 카르복실산기의 알킬화, 리신 ε-아미노기와 글루타믹 또는 아스파트산 측기 카르복실기와의 고리화를 통한 락탐 형성, 탄화수소 "스태플링"(예컨대, 알파-나선 형태를 안정화시키는 것), 및 글루타민 또는 아스파라긴의 탈아미드화를 포함한다. 일부 구현예에서, apoC-II의 나선 3의 변이체는 하나 이상 측기를 다른 측기, 예컨대 알킬, 저급 알킬, 사이클릭 4-, 5-, 6-, 내지 7-원 알킬, 아미드, 아미드 저급 알킬, 아미드 디(저급 알킬), 저급 알콕시, 하이드록시, 카르복시 및 이의 저급 에스테르 유도체, 및 4-, 5-, 6-, 내지 7-원 헤테로사이클릭으로 대체함으로써 변형된다. 예를 들어, 프롤린 잔기의 고리 크기가 5-원 고리로부터 4-, 6-, 또는 7-원 고리로 변화된 프롤린 유사체가 만들어질 수 있다. 사이클릭기는 포화되거나 불포화될 수 있고, 불포화되는 경우, 방향족 또는 비방향족일 수 있다. 헤테로사이클릭기는 하나 이상의 질소, 산소, 및/또는 황 헤테로원자를 함유할 수 있다. 이러한 기의 예는 푸라자닐, 푸릴, 이미다졸리디닐, 이미다졸릴, 이미다졸리닐, 이소티아졸릴, 이속사졸릴, 모폴리닐(예컨대, 모폴리노), 옥사졸릴, 피페라지닐(예컨대, 1-피페라지닐), 피페리딜(예컨대, 1-피페리딜, 피페리디노), 피라닐, 피라지닐, 피라졸리디닐, 피라졸리닐, 피라졸릴, 피리다지닐, 피리딜, 피리미디닐, 피롤리디닐(예컨대, 1-피롤리디닐), 피롤리닐, 피롤릴, 티아디아졸릴, 티아졸릴, 티에닐, 티오모폴리닐(예컨대, 티오모폴리노), 및 티아졸릴기를 포함한다. 이들 헤테로사이클릭기는 치환되거나 비치환될 수 있다. 기가 치환되는 경우, 치환기는 알킬, 알콕시, 할로겐, 산소, 또는 치환된 또는 비치환된 페닐일 수 있다. 펩타이드뿐만 아니라 펩타이드 유사체 및 모방체는 또한 하나 이상의 다양한 비단백질성 중합체, 예를 들어, 미국 특허 제4,640,835호; 제4,496,689호; 제4,301,144호; 제4,670,417호; 제4,791,192호; 및 제4,179,337호에 기재된 바와 같은 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜, 또는 폴리옥시알켄에 공유 결합될 수 있다.
특정 구현예에서, 화학적 변형은 비공유 변형이다. 특정 다른 구현예에서, 화학적 변형은 공유 결합이다. 다양한 구현예에서, 화학적 변형은 인산화, 글리코실화, 또는 지질화일 수 있다.
일부 구현예에서, 화학적 변형은 지방산의 공유 결합이다. 특정 구현예에서, 지방산은 포화된다. 특정 다른 구현예에서, 지방산은 불포화된다.
다양한 구현예에서, 지방산은 2 내지 30개의 탄소, 예컨대 4 내지 26개의 탄소, 6 내지 24개의 탄소, 10 내지 20개의 탄소, 12 내지 18개의 탄소, 및 14 내지 16개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 6개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 7개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 8개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 9개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 10개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 11개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 12개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 13개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 14개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 15개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 16개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 17개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 18개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 19개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 20개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 21개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 22개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 23개의 탄소를 포함한다. 특정 구현예에서, 지방산은 24개의 탄소를 포함한다.
일부 구현예에서, 불포화 지방산은 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 이중 결합을 갖는다. 특정 구현예에서, 불포화 지방산은 아라키돈산이다. 특정 구현예에서, 불포화 지방산은 리놀레산이다. 특정 구현예에서, 불포화 지방산은 올레산이다. 특정 구현예에서, 불포화 지방산은 팔미트올레산이다. 특정 구현예에서, 불포화 지방산은 리놀렌산이다. 특정 구현예에서, 불포화 지방산은 에이코사펜타에노산이다. 특정 구현예에서, 불포화 지방산은 도코사헥사에노산이다.
특정 구현예에서, 지방산은 팔미트산이다. 특정 구현예에서, 지방산은 스테아르산이다.
특정 구현예에서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드는 N-말단 아미노산에 공유결합된 스테아르산을 포함한다. 이들 구현예 중 일부에서, N-말단 아미노산은 알라닌이다.
특정 구현예에서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드는 리신 잔기의 측기에 공유결합된 스테아르산을 포함한다. 특정 구현예에서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드가 위치 60에 리신을 포함하는 경우, 스테아르산은 리신 잔기에 공유결합된다. 특정 구현예에서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드가 위치 76에 리신을 포함하는 경우, 스테아르산은 리신 잔기에 공유결합된다.
1.1.5.
ApoC
-II 모방
펩타이드의
제조
또한 단리된 apoC-II 모방 펩타이드를 생산하는 방법이 본원에 개시된다.
1.1.5.1. 재조합 합성
특정 구현예에서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드는, 예를 들어 박테리아, 효모, 또는 진핵 발현 시스템을 사용하여, 재조합으로 생산된다.
재조합 생산을 위해, 단일 또는 다중 도메인 펩타이드를 코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열은 적절한 발현 비히클, 즉, 삽입된 코딩 서열의 전사 및 번역에 필요한 요소, 또는 RNA 바이러스 벡터의 경우, 복제 및 번역에 필요한 요소를 함유하는 벡터에 삽입된다. 이후, 발현 비히클은 단일 또는 다중 도메인 펩타이드를 발현할 적합한 표적 세포 내로 형질감염된다. 이후, 사용된 발현 시스템에 따라, 발현된 펩타이드는 당업계에 널리 확립된 절차에 의해 단리된다. 재조합 단백질 및 펩타이드 생산을 위한 방법은 당업계에 널리 알려져 있다.
생산 효율을 증가시키기 위해, 폴리뉴클레오타이드는 효소 절단 부위에 의해 분리된 단일 또는 다중 도메인 펩타이드의 다수의 단위를 코딩하도록 디자인될 수 있다. 생성된 폴리펩타이드는 펩타이드 단위를 회수하기 위해 절단될 수 있다(예컨대, 적절한 효소 처리에 의해). 이것은 단일 프로모터에 의해 유도된 펩타이드의 수율을 증가시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 폴리시스트론 폴리뉴클레오타이드는 다수의 펩타이드를 코딩하는 단일 mRNA가 전사되도록 디자인될 수 있고, 각각의 코딩 영역은 캡(cap) 독립적 번역 제어 서열, 예를 들어, 내부 리보솜 진입 부위(IRES)에 작동가능하게 연결된다. 적절한 바이러스 발현 시스템에서 사용되는 경우, mRNA에 의해 코딩된 각 펩타이드의 번역은, 예를 들어, IRES에 의해, 전사체에서 내부적으로 지시된다. 따라서, 폴리시스트론 구조체는 단일의 큰 폴리시스트론 mRNA의 전사를 지시하고, 이는 결국 다수의 개별 펩타이드의 번역을 지시한다. 이 접근법은 폴리펩타이드의 생산 및 효소 처리를 제거하고, 단일 프로모터에 의해 유도된 펩타이드의 수율을 유의하게 증가시킬 수 있다.
다양한 숙주 발현 벡터 시스템은 본원에 기재된 펩타이드를 발현하는데 이용될 수 있다. 이들은, 비제한적으로, 미생물, 예컨대 적절한 코딩 서열을 함유하는 재조합 박테리오파아지 DNA 또는 플라스미드 DNA 발현 벡터로 형질전환된 박테리아; 적절한 코딩 서열을 함유하는 재조합 효모 또는 진균 발현 벡터로 형질전환된 효모 또는 사상성 진균; 적절한 코딩 서열을 함유하는 재조합 바이러스 발현 벡터(예컨대, 배큘로바이러스)로 형질감염된 곤충 세포 시스템; 재조합 바이러스 발현 벡터(예컨대, 콜리플라워 모자이크 바이러스(CaMV) 또는 담배 모자이크 바이러스(TMV))로 감염되거나 적절한 코딩 서열을 함유하는 재조합 플라스미드 발현 벡터(예컨대, Ti 플라스미드)로 형질전환된 식물 세포 시스템; 또는 동물 세포 시스템을 포함한다.
발현 시스템의 발현 요소는 강도 및 특이성이 다양하다. 이용된 숙주/벡터 시스템에 따라, 구성적 및 유도성 프로모터를 포함하는, 많은 적합한 전사 및 번역 요소가 발현 벡터에 사용될 수 있다. 예를 들어, 박테리아 시스템에서 클로닝할 때, 박테리오파아지 λ의 pL, plac, ptrp, ptac(ptrp-lac 혼성체 프로모터) 등과 같은 유도성 프로모터가 사용될 수 있다. 곤충 세포 시스템에서 클로닝할 때, 배큘로바이러스 폴리히드론 프로모터(polyhedron promoter)와 같은 프로모터가 사용될 수 있다. 식물 세포 시스템에서 클로닝할 때, 식물 세포의 게놈으로부터 유래된 프로모터(예컨대, 열 충격 프로모터, RUBISCO의 작은 하위단위에 대한 프로모터, 엽록소 a/b 결합 단백질에 대한 프로모터) 또는 식물 바이러스의 게놈으로부터 유래된 프로모터(예컨대, CaMV의 35S RNA 프로모터, TMV의 코트 단백질 프로모터)가 사용될 수 있다. 포유동물 세포 시스템에서 클로닝할 때, 포유동물 세포의 게놈으로부터 유래된 프로모터(예컨대, 메탈로티오네인 프로모터) 또는 포유동물의 바이러스의 게놈으로부터 유래된 프로모터(예컨대, 아데노바이러스 후기 프로모터, 백시나 바이러스 7.5 K 프로모터)가 사용될 수 있다.
1.1.5.2. 화학적 합성
특정 다른 구현예에서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드는 화학적 합성에 의해 생산된다. 일부 구현예에서, 펩타이드는 액상 펩타이드 합성 기술을 사용하여 생산된다. 일부 다른 구현예에서, 펩타이드는 고상 펩타이드 합성 기술을 사용하여 생산된다.
D- 또는 L-형태를 갖는 펩타이드는 당업계에 널리 공지된 자동화된 고상 절차에 의해 합성될 수 있다. 적합한 합성은 "Boc" 또는 "Fmoc" 절차를 이용하여 수행될 수 있다. 고상 합성을 위한 기술 및 절차는 당업계에 널리 알려져 있다. 단일 및 다중 도메인 펩타이드는 또한, 예를 들어, 문헌[Liu et al., Tetrahedron Lett . 37:933-936, 1996; Baca et al., J. Am. Chem . Soc .117: 1881-1887, 1995; Tam et al.,Int. J. Peptide Protein Res. 45:209-216, 1995; Schnolzer and Kent, Science 256:221-225, 1992; Liu and Tam, J. Am. Chem . Soc . 116:4149-4153,1994; Liu and Tam, Proc . Natl . Acad . Sci . USA 91:6584-6588, 1994; 및 Yamashiro and Li, Int . J. Peptide Protein Res.31:322-334, 1988]에 기재된 바와 같이 부분 축합(segment condensation)에 의해 제조될 수 있다. 이것은 특히 글리신 함유 펩타이드의 경우이다. 본 발명의 단일 및 다중 도메인 펩타이드를 합성하는데 유용한 다른 방법은 문헌[Nakagawa et al., J. Am. Chem . Soc . 107:7087-7092, 1985]에 기재되어 있다.
펩타이드 및 펩타이드 유사체 합성 분야에서 통상의 기술을 가진 자에게 공지되어 있는 추가의 예시적인 기술은 문헌[Bodanszky, M. and Bodanszky, A., The Practice of Peptide Synthesis, Springer Verlag, New York, 1994; and by Jones, J., Amino Acid and Peptide Synthesis, 2nd ed., Oxford University Press, 2002]에 의해 교시되어 있다. Bodanszky 및 Jones 문헌은 아미노산 및 아미노산 유도체를 활성화시키고 커플링시키는 파라미터 및 기술을 상세히 설명한다. 또한, 문헌은 다양한 유용한 작용기 및 보호기를 선택하고, 사용하고, 제거하는 방법을 교시한다.
D- 또는 L-형태를 갖는 펩타이드는 또한 합성 펩타이드의 상업적 공급업체로부터 구입할 수 있다. 이러한 공급업체는, 예를 들어 Advanced ChemTech(Louisville, KY), Applied Biosystems(Foster City, CA), Bachem(Torrance, CA), Anaspec(San Jose, CA), 및 Cell Essentials(Boston, MA)를 포함한다.
1.1.6.
ApoC
-II 모방
펩타이드의
정제
본 발명의 펩타이드 또는 펩타이드 유사체는 역상 크로마토그래피, 고성능 액체 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 크기 배제 크로마토그래피, 친화성 크로마토그래피, 겔 전기영동 등과 같이 당업계에 널리 공지된 많은 기술에 의해 정제될 수 있다. 특정 단일 또는 다중 도메인 펩타이드 또는 펩타이드 유사체를 정제하는데 사용되는 실제 조건은 합성 전략 및 인자, 예컨대 순 전하, 소수성, 친수성 등에 일부 좌우될 것이며, 당업계에서 통상의 기술을 가진 자에게 명백할 것이다.
다양한 구현예에서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드는 정제 태그를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 정제 태그는 폴리히스티딘-태그, myc-태그, 또는 HA-태그이다.
1.2. 약학 조성물
본원에 기재된 하나 이상의 단리된 apoC-II 모방 펩타이드 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학 조성물이 본원에 제공된다.
활성 펩타이드를 공급할 수 있는 임의의 담체(예컨대, 담체 내의 펩타이드를 파괴하거나 손상시키지 않으면서)가 적합한 담체이며, 이러한 담체는 당업계에 널리 알려져 있다. apoC-II 모방 펩타이드는, 예컨대, FDA 승인된 치료 펩타이드 및 단백질의 THPdb 데이터베이스(crdd.osdd.net/raghava/thpdb/)에 개시된 인슐린, GLP-1 효능제, 및 모든 승인된 펩타이드와 같은 다른 치료 펩타이드를 제제화하는데 현재 사용되는 임의의 제제를 사용하여 제제화될 수 있다.
apoC-II 모방 펩타이드 기반의 약학 조성물은 분말, 용액, 엘릭서르, 시럽, 현탁액, 크림, 점적제, 페이스트 및 스프레이와 같은 고체, 반고체 또는 액체 제형의 형태일 수 있다. 당업자는 선택된 투여 경로에 따라 조성물 형태가 결정된다는 것을 인식할 수 있다.
일부 구현예에서, 조성물은 비제한적으로, 경구로(예컨대, 정제, 캡슐, 과립 또는 분말의 형태로), 설하로, 구강으로, 비경구로(예컨대, 피하, 정맥내, 근육내, 피내, 또는 흉골내 주사 또는 주입(예컨대, 멸균 주사가능한 수성 또는 비수성 용액 또는 현탁액 등으로서)), 비강으로(흡입 스프레이에 의한 것과 같은 비강 막으로의 투여 포함), 국소로(예컨대, 크림 또는 연고의 형태로), 경피로(예컨대, 피내 패치에 의해), 직장으로(예컨대, 좌제의 형태로), 또는 특정 부위에 외과 이식에 의한 것 등을 포함하는, 임의의 적합한 경로에 의한 투여를 위해 제제화된다.
특정 구현예에서, 약학 조성물은 피하 주사에 적합하도록 제제화된다.
1.3. 치료 방법
또한 비제한적으로 고지질혈증, 고지질단백질혈증, 고콜레스테롤혈증, 고중성지방혈증, HDL 결핍, 관상 동맥 질환, 아테롬성 동맥경화증, 혈전성 뇌졸중, 말초 혈관 질병, 재발협착증, 급성 관상동맥 증후군, 및 재관류 심근 손상을 포함하는, 이상지질혈증 장애 및 혈관 장애를 치료하는 방법이 본원에 제공된다.
일부 구현예에서, 방법은 본원에 기재된 바와 같은 펩타이드 또는 약학 조성물을 고중성지방혈증을 갖는 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 환자는 고중성지방혈증이 발생할 위험이 있다.
다양한 구현예에서, 환자는 특정 수준을 초과하는 공복 혈장 또는 혈청 TG 농도에 기초한 중성지방혈증을 갖는다. 일부 구현예에서, 환자는 150 mg/dL 내지 199 mg/dL의 치료전 혈청 트리글리세라이드(TG) 농도로서 정의된 가벼운 고중성지방혈증을 갖는다. 일부 구현예에서, 환자는 200 mg/dL 내지 999 mg/dL, 예컨대 200 mg/dL 내지 499 mg/dL 및 500 mg/dL 내지 999 mg/dL의 치료전 혈청 트리글리세라이드(TG) 농도로서 정의된 중등도의 고중성지방혈증을 갖는다. 일부 구현예에서, 환자는 1000 mg/dL 내지 1999 mg/dL의 치료전 혈청 트리글리세라이드(TG) 농도로서 정의된 중증 고중성지방혈증을 갖는다. 일부 구현예에서, 환자는 2000 mg/dL 이상의 치료전 혈청 트리글리세라이드(TG) 농도로서 정의된 매우 중증 고중성지방혈증을 갖는다.
일부 구현예에서, 환자는 정상 초과의 LDL-c 수준을 갖는다. 일부 다른 구현예에서, 환자는 정상 미만의 HDL-c 수준을 갖는다.
특정 구현예에서, 고중성지방혈증은 LPL 결핍에 의해 유발된다. 이들 구현예 중 일부에서, 환자의 고중성지방혈증은 가족성 지질단백질 리파아제 결핍이다.
일부 구현예에서, LPL 결핍은 유전자 돌연변이에 의해 유발된다. 이들 구현예 중 일부에서, 유전자 돌연변이는 DNA 서열 분석에 의해 검출된다. 다양한 구현예에서, LPL 결핍은 LPL, APOC2, APOA5, GPIHBP1, 또는 LMF1 유전자에서의 돌연변이에 의해 유발된다.
특정 구현예에서, LPL 결핍은 LPL 유전자에서의 돌연변이에 의해 유발된다. 이들 구현예 중 일부에서, 돌연변이는 감소된 LPL 효소 활성을 야기한다. 이들 구현예 중 일부에서, 돌연변이는 부재하는 LPL 효소 활성을 야기한다.
특정 구현예에서, 환자의 고중성지방혈증은 단일유전자성(monogenic)이다. 특정 다른 구현예에서, 환자의 고중성지방혈증은 다유전자성(polygenic)이다. 특정 구현예에서, 돌연변이는 동형접합 상태로 존재한다. 특정 구현예에서, 돌연변이는 이종접합 상태로 존재한다.
일부 구현예에서, LPL 결핍은 환자의 혈청 내의 LPL 활성의 부재에 의해 진단된다.
특정 구현예에서, 고중성지방혈증은 apoC-II 결핍에 의해 유발된다. 특정 구현예에서, 고중성지방혈증은 상승된 apoC-III에 의해 유발된다.
일부 구현예에서, 환자는 당뇨병을 갖는다. 일부 구현예에서, 환자는 대사 증후군을 갖는다. 이들 구현예 중 일부에서, 대사 증후군은 비만이다. 일부 구현예에서, 환자는 췌장염을 갖는다. 이들 구현예 중 일부에서, 환자는 급성 췌장염을 갖는다. 일부 구현예에서, 환자는 지방증(steatosis) 또는 지방간염(steatohepatitis)을 갖는다. 이들 구현예 중 일부에서, 지방증 또는 지방간염은 알코올과 관련된다. 이들 구현예 중 일부에서, 지방증 또는 지방간염은 비알코올성이다. 일부 구현예에서, 환자는 심혈관 질환을 갖는다. 이들 구현예 중 일부에서, 환자는 급성 심혈관 질환을 갖는다. 일부 구현예에서, 환자는 관절경화증을 갖는다. 일부 구현예에서, 환자는 고중성지방혈증을 야기할 수 있는 약물을 섭취하였다.
특정 구현예에서, 환자는 성인이다. 특정 다른 구현예에서, 환자는 어린이이다.
다양한 구현예에서, 펩타이드 또는 약학 조성물은 환자의 혈중 트리글리세라이드 수준을 감소시키는데 충분한 양으로, 스케줄로, 그리고 지속시간 동안 투여된다. 일부 구현예에서, 폴리펩타이드는 치료 개시 직전과 비교하여 트리글리세라이드 수준을 적어도 5%, 10%, 15%, 20%, 25% 이상 감소시키는데 충분한 양으로, 스케줄로, 그리고 지속시간 동안 투여된다. 특정 구현예에서, 폴리펩타이드는 트리글리세라이드 수준을 적어도 30%, 35%, 40%, 45%, 50% 이상 감소시키는데 충분한 양으로, 스케줄로, 그리고 지속시간 동안 투여된다. 특정 구현예에서, 폴리펩타이드는 트리글리세라이드 수준을 적어도 55%, 60%, 65%, 70% 이상 감소시키는데 충분한 양으로, 스케줄로, 그리고 시간 동안 투여된다.
치료는 일정 기간 동안 단일 용량 또는 복수의 용량으로 구성될 수 있다.
실시예
하기는 본 발명을 실시하기 위한 특정 구현예의 예이다. 실시예는 단지 예시적인 목적으로 제공되며 본 발명의 범위를 어떤 식으로든 제한하고자 하는 것이 아니다. 사용된 수(예컨대, 양, 온도 등)에 대한 정확성을 확보하기 위한 노력이 이루어졌지만, 일부 실험 오차 및 편차가 물론 허용되어야 한다.
본 발명의 실시는 달리 나타내지 않는 한 당해 분야의 기술 내에서 단백질 화학, 생화학, 재조합 DNA 기술 및 약리학의 통상적인 방법을 사용할 것이다. 이러한 기술은 문헌에 충분히 설명되어 있다.
방법
LPL
분석
LPL의 제조: 10 μL의 0.5 mg/mL 소 LPL의 냉동 스톡(stock)을 사용하였고, 1:100으로 희석하였다(10 μL + 990 μL의 PBS).
20% 인트라리피드(Intralipid)의 제조: 2000 mg/dL TG 인트라리피드를 사용하여 1.5 μL의 스톡을 998.5 μL PBS로 희석하거나, 또는 스톡을 먼저 1:10으로 희석한 다음 15 μL의 희석된 스톡을 985 μL PBS와 혼합하여 3 mg/dL TG 인트라리피드를 제조하였다. apoC-II 결핍 인간 혈청을 기질로 사용한 경우, 1711 mg/dL(TG)의 냉동된 10 μL 분취액은 990 μL PBS을 첨가하여 희석하였다(1:100 희석).
유리 지방산(NEFA) 분석의 준비: NEFA 시약을 Wako Diagnostics, Wako Life Sciences, Inc로부터 구입하였다. 시약 A는 착색 시약 A를 용매 A(웰당 225 μL)와 혼합하여 제조하였다. 시약 B는 착색 시약 B를 용매 B(웰당 75 μL)와 혼합하여 제조하였다. 5 nmoL 올레산 표준품은 20 μL의 1 mM 올레산 스톡(WAKO NEFA 표준 용액)을 180 μL의 0.2% BSA로 희석하여 제조하였다.
LPL 활성 분석: 10 μL의 인트라리피드, 인간 혈장 샘플, 또는 마우스 혈장 샘플을 리피터(repeater) 피펫을 사용하여 각 웰에 첨가하였다. 10 μL(또는 LPL 대조군이 없는 웰에서는 15 μL)의 PBS 및 10 μL의 1% BSA를 리피터 피펫을 사용하여 각 웰에 첨가하였다. 10 μL의 펩타이드를 수직 3배수로 상응하는 웰에 첨가하였다(최저 농도는 좌측에 있고, 최고 농도는 우측에 있음). 플레이트를 1000 RPM에서 10초 동안 회전시켜 혼합하고 각 웰의 벽으로부터 용액을 제거하였다. 플레이트를 얼음 위에 두고, 5 μL의 LPL을 리피터 피펫을 사용하여 첨가하였다. 플레이트를 1000 RPM에서 10초 동안 다시 회전시켰다. 플레이트를 덮고 30분 동안 배양하기 위해 다시 얼음 위에 두었다. 이후, 플레이트를 37℃로 옮기고 1시간 동안 배양하였다.
유리 지방산(NEFA) 분석: 45 μL의 5 nmoL 표준품 및 0 nmoL 대조군(0.2% BSA)을 상응하는 웰에 첨가하였다. 225 μL의 시약 A를 시약 트레이 및 12-채널 피펫을 사용하여 각 웰에 첨가하였다. 플레이트를 10분 동안 배양한 후, 75 μL의 시약 B를 시약 트레이 및 12-채널 피펫을 사용하여 각 웰에 첨가하였다. 큰 부피로 인해 플레이트를 덮지 않았다. 550 nm 및 660 nm에서의 흡광도를 측정하였다.
ApoC
-III 대체 연구
인간 혈장으로부터 단리된 VLDL 또는 킬로미크론을 37℃에서 1시간 동안 apoC-II 모방 펩타이드와 함께 배양하고 100 kDa 컷오프 막을 갖는 회전 여과를 사용하여 PBS로 3회 세척하였다. 상층액을 PBS로 원래의 부피로 조정하고, 4-12% Bis-TRIS SDS PAGE 겔에 로딩하였다. ApoC-I, apoC-II, apoC-III, 및 apoE 밴드를 이들의 상응하는 크기에 의해 확인하였다.
ApoC
-III의 억제 연구
LPL 분석을 인트라리피드, 고 TG 인간 혈장(1:50 희석), 또는 apoC-III 형질전환 마우스 혈장(1:50 희석)을 사용하여 수행하였다. 인트라리피드를 기질로 사용한 경우, 25 또는 50 μM 재조합 ApoC-III을 억제제로서 첨가하였다. 고 TG 인간 혈장을 기질로서 사용한 경우, 25 또는 50 μM 재조합 ApoC-III를 37℃에서 1시간 동안 전배양하거나 전배양하지 않고 억제제로서 첨가하였다. apoC-II 모방 펩타이드를 다양한 농도로 첨가하였다.
생체내
연구
C57Bl/6 마우스(야생형), apoC-II 넉아웃(apoC-II KO) 마우스, 및 apoC-III 형질전환 마우스를 생체내 연구에 사용하였다. C57Bl/6 마우스(야생형)를 타코닉 바이오사이언시즈사(Taconic Biosciences Inc)로부터 구입하였다. apoC-II KO 마우스를 문헌[Sakurai et al., J Pharmacol Exp Ther 356:341-353, 2016]에 기재된 바와 같이 생성하였다. apoC-III 형질전환 마우스를 C57Bl/6 마우스에서 인간 apoC-III를 과발현시킴으로써 생성하였다. 문헌[Qu et al., J. Lipid Res. 48:1476-1487, 2007]을 참고한다.
마우스를 연구 전 밤새(약 12시간) 및 다음날 연구 6시간 동안 단식시켰다. ApoC-II 모방 펩타이드를 합성적으로 생산하였고 생물학적 오염이 없었다(FDA 승인된 화합물/치료로서 이용가능하지 않음). 펩타이드를 멸균 조건에서 생산하여 사용하였고, 0.2 nm 필터에 의해 여과한 후, 문헌[Sakurai et al., J Pharmacol Exp Ther 356:341-353, 2016]에 기재된 바와 같이 피하 주사(S.Q. 또는 S.C.), 복강내 주사(I.P.) 또는 정맥내 주사(I.V.)(멸균, 약학적 등급 PBS 용액에서 부피 ≤ 200 μL로)로 투여된 단일 용량 1-10 μmol/kg 체중(B. W.)으로 주사하였다.
생체내
인트라리피드
연구
일부 실험에서, 각각의 동물에게 용량 10-20 μL/gram 체중(B.W.)으로 경구 위관영양법(특수 멸균 1회용 비독성 동물 공급 바늘 사용)에 의해(Tuzcu et al. Drug Chem Toxicol 37: 261-267, 2014; Kusminski et al. Nature Medicine 18: 1539-1549, 2012), 또는 0.1-1.0 mL의 단일 볼루스로 복강내 주사에 의해(Mahadero et al. American J Surgery 164: 45-50, 1992), 또는 단일 용량 10-20 μL/gram 체중으로 식이 상업적으로 이용가능한 액체 오일(식품 등급 식물성 오일, 옥수수 오일, 대두 오일 또는 올리브 오일)의 위내 투여에 의해 단일 용량으로 20% 인트라리피드(FDA 승인됨, Fresenius Kabi, Uppsala, Sweden)를 투여하였다. 이들 오일은 흡수된 TG가 3시간 이내에 분해되는 경향이 있을 때(30분에 최고) TG의 공급원이었다(Kritchevsky Nutritional Biochemistry 6:172-178, 1995). 지질의 측정을 위해 혈액 샘플(20-30 μL)을 시점: -1시간, 0시간, 1시간, 3시간, 6시간 및 24시간에 안와정맥총(retro-orbital plexus)으로부터 얻었다. 마우스를 6시간 시점 이후 대사 케이지로 돌려보내고, 음식을 다시 넣었다. 연구가 완료되면(지방 투여로부터 24시간 후), 마우스를 안락사시키고 장기를 수집하였다.
일부 경우, 마우스를 일반 케이지로 돌려보내고, 또 다른 실험에서 연구하기 전에 완전한 회복을 위해 2-3주 동안 사육하였다. 펩타이드 대신에 멸균 약학적 등급 식염수를 투여한 1개의 대조군이 있었다.
연구 디자인이 도 55에 제시되어 있다.
생체내
트리톤
WR1339 연구
20% 인트라리피드에 의해 제공된 고 TG의 존재하에, LPL 억제제인 틸록사폴(Tyloxapol)로 처리된 마우스에서 고중성지방혈증을 정상화시키는 아포지질단백질 모방 펩타이드의 능력을 평가하였다.
마우스를 연구 전 밤새(약 12시간) 및 다음날 연구 6시간 동안 단식시켰다. apo 모방 펩타이드를 합성적으로 생산하였고 생물학적 오염이 없었다(FDA 승인된 화합물/치료로서 이용가능하지 않음). 펩타이드를 멸균 조건에서 생산하여 사용하였고, 0.2 nm 필터에 의해 여과한 후, S.C. 또는 I.P. 또는 I.V.(멸균, 약학적 등급 PBS 용액에서 부피 ≤ 200 μL로)로 단일 용량 1-5 μmol/kg B.W.로 주사하였다. 다음으로, 10% 틸록사폴(트리톤 WR-1339, T-0307, Sigma-Aldrich)을 이전에 기재된 바와 같이, 5 μL/gram B.W.의 단일 용량으로 I.V.로 주사하였다(Zhang Y.L. et al., J Biol Chem . 279: 19362-19374, 2004; Abe C. et al., J. Nutr . 137: 345-350, 2007). 틸록사폴은 LPL을 억제하여 혈청으로부터 트리글리세라이드의 제거를 억제하는 비이온성 세제이다(Rasouli M. et al., J Clin . Diagn . Research. 10: BF01-BF05, 2016). 마지막으로, 각 동물에게 용량 10-20 μL/gram B.W.로 경구 위관영양법(특수 멸균 1회용 비독성 동물 공급 바늘 사용)에 의해(Tuzcu K. et al., Drug Chem Toxicol., 37: 261-267, 2014, Kusminski C. et al., Nature Medicine. 18: 1539-1549, 2012), 또는 0.1-1.0 mL의 단일 볼루스로 복강내 주사에 의해(Mahadero G. et al., American J Surgery. 164: 45-50, 1992) 단일 용량으로 20% 인트라리피드(FDA 승인됨, Fresenius Kabi, Uppsala, Sweden)를 투여하였다. 지질의 측정을 위해 혈액 샘플(20-30 μL)을 시점: -1시간, 0시간, 1시간, 3시간, 6시간 및 24시간에 안와정맥총으로부터 얻었다. 마우스를 6시간 시점 이후 대사 케이지로 돌려보내고, 음식을 다시 넣었다. 연구가 완료되면(인트라리피드 투여로부터 24시간 후), 마우스를 안락사시키고 장기를 수집하였다.
일부 경우, 마우스를 일반 케이지로 돌려보내고, 또 다른 실험에서 연구하기 전에 완전한 회복을 위해 2-3주 동안 사육하였다. 펩타이드 또는 트리톤 WR1339 대신에 멸균 약학적 등급 식염수를 투여한 2개의 대조군이 있었다.
연구 디자인이 도 56에 제시되어 있다.
비만 원숭이 모델에서
생체내
연구
2 mmol/L 초과의 TG 수준을 갖는 원숭이를 선택하고, 훈련시키고, 3개의 군(대조군, 1 mg/kg 델타6PV, 및 5 mg/kg 델타6PV)으로 배정하였다. 원하는 용량을 0시간 시점에 동물에 정맥내로 주사하였다. 원숭이를 72시간 동안 모니터링하고, 상이한 시점의 혈액 샘플을 바이오마커 분석을 위해 수집하였다.
실시예
1:
펩타이드
디자인
아포지질단백질 C-II(apoC-II)는 지질단백질 리파아제(LPL)의 생리 활성제이며, 지질단백질 내의 트리글리세라이드의 가수분해를 촉진할 수 있다. 기능적 apoC-II의 결여는 LPL의 유전적 결핍에서 관찰되는 것과 유사한 중증 고중성지방혈증을 야기한다(Breckenridge et al., N Engl J Med . 298: 1265-1273, 1978).
인간 apoC-II의 성숙한 형태는 79개의 아미노산 잔기로 구성된다. apoC-II의 2차 구조는 다양한 측정에 의해 결정되었고, 나선 1로 지정된 잔기 17-38, 나선 2로 지정된 잔기 45-57, 및 나선 3으로 지정된 잔기 65-74/75를 갖는다(Zdunek et al., Biochemistry 42: 1872-1889, 2003). LPL의 활성화에 필요한 apoC-II의 C-말단 1/3은 지질 결합에 필요한 apoC-II의 N-말단 2/3보다 상이한 종 사이에서 더 보존된다(Shen et al., Gene 254:189-198, 2000). 다양한 종에 걸친 성숙한 인간 apoC-II 단백질의 아미노산 잔기 40-58의 상동성이 도 1에 나타나 있다.
임상적으로 유용한 LPL 활성화 펩타이드를 제조하기 위해, 본 발명자들은 단일 나선 및 이중나선 apoC-II 모방 펩타이드를 디자인하였다. 본 발명자들은 천연 인간 apoC-II 단백질의 나선에 신장, 절두, 돌연변이, 및 화학적 변형과 같은 다양한 변형을 도입하였다.
아미노산 치환과 같은 일부 변형은 apoC-II의 천연 아미노산 서열의 소수성 모멘트를 증가시켰다. 예를 들어, 도 2A 및 도 2B에 나타낸 바와 같이, 위치 40에서 T에서 D로의 치환, 위치 43에서 P에서 K로의 치환, 위치 46에서 D에서 F로의 치환, 및 위치 56에서 S에서 F로의 치환은 아미노산 잔기 40-57의 소수성 모멘트를 6.04에서 9.62로 증가시켰다. 도 3A 및 도 3B에 나타낸 바와 같이, 위치 40에서 T에서 D로의 치환, 위치 43에서 P에서 K로의 치환, 위치 44에서 A에서 E로의 치환, 위치 46에서 D에서 F로의 치환, 및 위치 56에서 S에서 F로의 치환은 아미노산 잔기 40-57의 소수성 모멘트를 6.04에서 11.08로 증가시켰다. 도 4A 및 도 4B는 위치 40에서 T에서 D로의 치환, 위치 43에서 P에서 K로의 치환, 위치 44에서 A에서 E로의 치환, 위치 46에서 D에서 F로의 치환, 위치 54에서 S에서 E로의 치환, 및 위치 56에서 S에서 F로의 치환이 아미노산 잔기 40-57의 소수성 모멘트를 6.04에서 12.48로 증가시켰음을 보여준다.
화학적 변형을 또한 도입하여 지질 입자에 대한 apoC-II 모방 펩타이드의 결합을 증가시키고, apoC-II 모방 펩타이드의 다른 치료적 특징, 예컨대 증가된 세포 투과성 및/또는 연장된 생물학적 반감기를 향상시켰다. 도 5는 스테아르산에 의해 변형된 apoC-II 모방 펩타이드의 예를 나타낸다.
apoC-II 모방 펩타이드 및 이들의 서열의 목록이 하기 표 2에 나타내 있으며, 여기서 "nL"은 노르류신을 나타내고, "Aib"는 아미노이소부티르산을 나타낸다.
실시예
2: 아미노산
치환을 갖는
예시적인
ApoC
-II 모방
펩타이드가
시험관내
TG 가수분해를 촉진한다
TG의 가수분해에 대한 apoC-II 모방 펩타이드의 가능한 영향을 결정하기 위해, 본 발명자들은 시험관내 지방분해 분석을 사용하여 펩타이드의 영향을 평가하였다.
apoC-II 결핍 환자 혈청을 이용한 LPL 분석은 예시적인 apoC-II 모방 펩타이드 델타4, 델타5, 및 델타6뿐만 아니라 델타4 변이체 모노-아실-델타4 및 바이-아실-델타4가 LPL의 존재하에 TG 가수분해를 촉진할 수 있었음을 보여주었다. 더 낮은 농도에서, 델타4, 델타5, 및 델타6과 같은 시험된 모방 펩타이드 대부분은 천연 apoC-II 단백질보다 더 효율적으로 작용하였다(도 6).
기질로서 인트라리피드를 사용한 LPL 분석은 시험된 모든 apoC-II 모방 펩타이드가 LPL의 존재하에 TG 가수분해를 촉진할 수 있었음을 확인시켜 주었다. ApoC-II 모방 펩타이드 델타4 및 델타5는 약 1 nM 내지 약 10 μM의 농도에서 천연 apoC-II 단백질보다 더 효율적으로 작용하였다(도 7).
이들 결과는 예시적인 apoC-II 모방 펩타이드 델타4, 델타5, 및 델타6이 시험관내 TG 가수분해를 촉진할 수 있음을 보여준다.
실시예
3:
apoC
-II의
델타4
및 제3 나선의
변이체는
시험관내
TG 가수분해를 촉진한다
apoC-II 단백질의 나선 2 및 나선 3 사이의 힌지 영역은 2개의 나선이 비교적 직선 형태를 유지하게 한다. 나선 3은 약 20° 이하의 각도로 상이한 방향으로 균일하게 나선2로부터 멀리 구부러져 있다. 이 형태는 LPL 활성화 도메인을 함유하는 나선 3이 지질단백질의 미셀 표면에 부착하는 것을 돕는 것으로 여겨진다. 힌지 도메인의 위치 58에 프롤린을 혼입시키는 것은 형태를 보존하고 두드러지게 한다. 델타4b, 델타4b-1, 및 델타4b S54E와 같은 델타4의 변이체는 위치 58에 프롤린을 포함한다.
apoC-II 모방 펩타이드 C2thirdhelix는 apoC-II 단백질의 아미노산 잔기 59-79를 포함한다. C2thirdhelixStearylpos1, C2thirdhelixStearylpos2, 및 C2thirdhelixStearylpos17은 상이한 아미노산 잔기에 C2thirdhelix의 스테아르산 변형을 포함한다.
도 8에 나타낸 바와 같이, 전술한 apoC-II 모방 펩타이드 대부분은 apoC-II 결핍 환자 혈청을 기질로 사용하였을 때 LPL의 존재하에 TG 가수분해를 촉진하는 능력을 나타내었다. C2thirdhelix, C2thirdhelixStearylpos1, C2thirdhelixStearylpos2, 및 C2thirdhelixStearylpos17의 결과의 자세한 관찰은 지질화가 TG 가수분해를 촉진하는 C2thirdhelix의 능력을 향상시켰음을 밝혀내었다(도 9). apoC-II 모방 펩타이드 델타4, 델타4b, 및 델타4b-3의 비교는 위치 58에 프롤린의 도입 및 위치 56에서의 리신 잔기의 스테아르산 변형이 예시적인 apoC-II 모방 펩타이드 델타4의 TG 제거 능력을 향상시켰음을 밝혀내었다(도 10). 도 11은 apoC-II 모방 펩타이드 델타4b의 지질화가, 특히 낮은 농도에서, 지방분해를 향상시키는 능력을 향상시켰음을 확인시켜 주었다.
본 발명자들은 100 pM 내지 10 μM의 광범위한 농도의 apoC-II 모방 펩타이드를 추가로 시험하였다. ApoC-II 모방 펩타이드, 델타4b-1, 델타4b-2, 델타4b-3, 델타4b, 델타4b T57F, 및 델타4는 용량 의존적 방식으로 TG 가수분해를 촉진하였다. 본 실험에서 시험된 모든 apoC-II 모방 펩타이드는 전장 apoC-II 단백질보다 더 효율적으로 작용하였다(도 12).
델타4c 펩타이드는 위치 60에 팔미트산 변형된 리신(K)을 포함하였고, 그의 유도체는 C-말단에 3, 4, 7, 10, 11, 또는 14개의 아미노산에 의한 절두를 포함하였다. 기질로서 apoC-II 결핍 환자 혈청을 사용하고 10 pM 내지 100 μM의 펩타이드 농도 범위에서의 LPL 분석에서, 델타4c 및 그의 절두 변이체는 TG 가수분해를 촉진하였다(도 13).
종합하면, 이들 결과는 예시적인 apoC-II 모방 펩타이드 델타4의 변이체 및 apoC-II의 제3 나선의 변이체가 시험관내 TG 가수분해를 촉진할 수 있음을 보여준다.
실시예
4:
델타5의
변이체는
시험관내
TG 가수분해를
촉진한다
위치 58에 프롤린 및 위치 60에 메티오닌을 포함하는 apoC-II 모방 펩타이드 델타5b에 추가의 아미노산 치환을 수행하였다.
기질로서 apoC-II 결핍 환자 혈청을 사용하여 LPL 분석을 수행하였다. 펩타이드를 100 pM 내지 10 nM의 농도 범위에서 시험하였다. 도 14에 나타낸 바와 같이, 표시된 아미노산 치환을 갖는 델타5의 모든 변이체 및 델타6은 용량 의존적인 방식으로 TG 가수분해를 촉진하는 능력을 나타내었다.
이들 결과는 예시적인 apoC-II 모방 펩타이드 델타5의 변이체가 시험관내 TG 가수분해를 촉진할 수 있음을 보여준다.
실시예
5:
델타6의
변이체는
시험관내
TG 가수분해를
촉진한다
예시적인 apoC-II 모방 펩타이드 델타6을 재조합 발현에 더 적합하도록 추가로 변형시켰다. 델타6L은 위치 60에 류신(L) 잔기를 포함한다. 델타6PV는 위치 58에 프롤린(P) 및 위치 60에 발린(V)을 포함한다. 델타6PV는 위치 58에 프롤린(P) 및 위치 60에 류신(V)을 포함한다. 델타6T18F-PV는 델타6PV와 비교하여 위치 57에 페닐알라닌(F)을 추가로 포함한다. 델타6T18F-PV-AIB7,17은 델타6PV와 비교하여 위치 46 및 56에 아미노이소부티르산(Aib) 및 위치 57에 페닐알라닌(F)을 추가로 포함한다.
도 15A-D에 나타낸 바와 같이, 델타6 펩타이드 및 그의 변이체 델타6L, 델타6PV, 및 델타6PL은 기질로서 고중성지방혈증 환자 혈청을 사용하였을 때 시험관내에서 LPL을 활성화시켰다. 환자 혈청의 트리글리세라이드 농도는 약 1000 mg/dL 내지 약 1700 mg/dL 범위였다.
본 발명자들은 10 pM 내지 10 μM의 광범위한 농도에서 활성 델타6 펩타이드 및 그의 변이체 델타6PV를 추가로 시험하였다. ApoC-II 결핍 환자 혈청을 기질로서 사용하였다. 도 51에 나타낸 바와 같이, 델타6 및 델타6PV는 전장 apoC-II 단백질보다 더 효율적으로 시험관내에서 LPL을 활성화시켰다.
또한, 델타 6 변이체 델타6PV, 델타6T18F-PV, 및 델타6T18F-PV-AIB7,17은 apoC-II 결핍 환자의 혈청 샘플로 시험관내에서 LPL을 활성화시켰다(도 52).
본 발명자들은 apoC-II의 나선 1의 변이체를 포함하는 apoC-II 모방 펩타이드 델타13-31-PV를 생성하였다. 델타13-31-PV는 DKVKEFLSEYWEKAKEFAPAVSTYTGIFTDQVLSVLKGEE(서열번호: 55)의 서열을 가지며, apoC-II의 나선 1에 대한 아미노산 치환이 밑줄쳐 있다. 델타13-31-PV 펩타이드는 용량 의존적 방식으로 시험관내 TG 가수분해를 촉진하였다(도 52).
이들 결과는 예시적인 apoC-II 모방 펩타이드 델타6의 변이체 및 apoC-II의 나선 1의 변이체를 포함하는 apoC-II 모방 펩타이드가 시험관내 TG 가수분해를 촉진할 수 있음을 보여준다.
실시예
6:
델타4
및 그의
변이체는
생체내
지방분해를
향상시켰다
ApoC-II는 트리글리세라이드를 가수분해하는 효소인 지질단백질 리파아제에 대한 보조인자이다. ApoC-II 결핍은 인간 대상에서 고중성지방혈증을 초래한다. 문헌[Sakurai et al., J Pharmacol Exp Ther 356:341-353, 2016]에 기재된 바와 같이, 본 발명자들은 고 혈장 TG를 가진 apoC-II 넉아웃 마우스를 생성하였다.
ApoC-II 모방 펩타이드 델타4를 apoC-II 넉아웃 마우스에 피하 주사하였고, 혈장 지질을 시간이 지남에 따라 모니터링하였다(도 16). 델타4의 주사는 혈장 TG의 빠르고 현저한 감소를 초래하였다. 델타4의 피하 주사는 또한 총 콜레스테롤 수준의 감소를 야기하였다(도 17).
ApoC-II 넉아웃 마우스에게 또한 델타4 펩타이드를 복강내로 주사하였다(도 18 및 19). 유사하게, 델타4 주사는 약 3시간 후 최대 감소와 함께 혈장 TG의 현저한 감소를 야기하였다. 복강내 주사는 또한 총 콜레스테롤 수준의 감소를 야기하였다.
델타4 유도체 델타4b 및 델타4b-3을 또한 생체내 TG 가수분해를 촉진하는 능력에 대해 시험하였다(도 20). 식물성 오일로 경구 위관영양법 후, 혈청 TG는 C57BL/6 마우스에서 3시간에 약 4.5배로 증가하였다. 마우스에게 위관영양법 30분 전에 apoC-II 모방 펩타이드 델타4, 델타4b, 또는 델타4b-3을 복강내로 주사한 경우, TG 증가는 유의하게 감소하였다.
이들 결과는 apoC-II 모방 펩타이드 델타4 및 그의 변이체가 생체내 지방분해를 향상시키는 능력을 갖는다는 것을 보여준다.
실시예
7:
델타6
및 그의
변이체는
생체내
지방분해를
향상시켰다
ApoC-II 모방 펩타이드 델타6을 apoC-II 넉아웃 마우스에 복강내로 주사하고, 혈장 지질을 시간이 지남에 따라 모니터링하였다(도 21). 델타6의 주사는 혈장 TG의 신속하고 현저한 감소를 초래하였다. 델타6의 복강내 주사는 또한 총 콜레스테롤 수준의 감소를 야기하였다(도 22).
도 23에 나타낸 바와 같이, 델타6 펩타이드의 3개의 상이한 용량(0.25, 0.5, 및 1 μmol/kg 체중)을 apoC-II 넉아웃 마우스에 복강내로 주사하고, 혈장 TG를 시간이 지남에 따라 모니터링하였다. 델타6의 모든 용량은 혈장 TG의 신속하고 현저한 감소를 야기하였다.
델타6, 델타6b-A, 델타6b-P, 및 델타6-NH의 변이체를 또한 0.25 μmol/kg의 체중의 농도에서 생체내 지방 분해를 향상시키는 능력에 대해 시험하였다. 모든 델타6 변이체는 apoC-II 넉아웃 마우스의 복강내 주사 후 혈장 TG의 유의한 감소를 초래하였다(도 24).
도 53에 나타낸 바와 같이, 델타6 변이체 델타6PV 및 델타6-T18F-PV를 0.1 μmol/kg의 체중으로 apoC-II 넉아웃 마우스에 복강내로 주사하고, 혈장 TG를 시간이 지남에 따라 모니터링하였다. 델타6PV 및 델타6-T18F-PV 모두는 펩타이드 주사 후 약 6시간에 최대 감소로 apoC-II 넉아웃 마우스에서 혈장 TG의 신속한 감소를 야기하였다.
이들 결과는 apoC-II 모방 펩타이드 델타6 및 그의 변이체가 생체내 지방분해를 향상시키는 능력을 갖는다는 것을 보여준다.
실시예
8:
ApoC
-II 모방
펩타이드에
의한
ApoC
-III 대체
ApoC-III은 일반적으로 트리글리세라이드 풍부 지질단백질과 관련되며, 혈장 TG 수준의 강력한 조절제인 것으로 확인되었다. ApoC-III은 지질단백질 리파아제(LPL) 활성의 억제 및 TG 제거에 대한 LPL 독립적 효과를 포함하는 다양한 기전을 통해 혈장 TG 수준을 조절한다. 본 발명자들은 apoC-III의 대체에 대한 apoC-II 모방 펩타이드의 영향을 조사하였다.
인간 혈장으로부터 단리된 VLDL 및 킬로미크론을 상이한 농도의 apoC-II 모방 펩타이드 델타6과 배양하는 것은 아포지질단백질보다 VLDL 및 킬로미크론에 대해 더 높은 친화성을 나타내었다(도 25). 유사하게, 인간 혈장으로부터 단리된 VLDL을 델타6 및 그의 유도체, 델타6-A, Delat6-P, 및 델타6-NH와 함께 배양하는 것은 델타6 및 유도체가 apoC-III를 대체할 수 있음을 보여주었다(도 26).
도 27에 나타낸 바와 같이, 시험관내 LPL 분석을 고중성지방혈증 환자 혈청으로 수행하였다. ApoC-II 모방 펩타이드 델타4 및 델타6은 높은 수준의 apoC-III 단백질을 갖는 환자에서 LPL 활성을 증가시켰다.
이들 결과는 apoC-II 모방 펩타이드 델타4, 델타6 및 이들의 변이체가 고 apoC-III 단백질을 갖는 환자 혈청에서 apoC-III를 대체할 수 있고 시험관내 지방분해를 향상시킬 수 있음을 보여준다.
실시예
9:
ApoC
-II-a
펩타이드에
의한
ApoC
-III 대체
본 발명자들은 apoC-III의 대체에 대한 apoC-II-a 펩타이드의 영향을 조사하였다.
인간 혈장으로부터 단리된 VLDL을 외인성 apoC-II-a 펩타이드와 함께 배양하는 것은 apoC-II-a가 아포지질단백질보다 VLDL에 대해 더 높은 친화성을 갖는다는 것을 보여주었다(도 28). MALDI-TOF 질량 분석법은 apoC-II-a 펩타이드가 apoC-III 및 apoC-I를 선택적으로 대체하였지만, apoC-II는 선택적으로 대체하지 않았음을 보여주었다(도 29A). 흥미롭게도, VLDL에 대한 apoC-II-a 펩타이드의 결합은 그의 농도에 거의 비례한다(도 29B).
인간 혈장으로부터 단리된 킬로미크론을 외인성 apoC-II-a 펩타이드와 함께 배양하는 것은 apoC-II-a가 아포지질단백질보다 킬로미크론에 대해 더 높은 친화성을 갖는다는 것을 보여주었다(도 30).
LPL 분석을 기질로서 인트라리피드를 사용하여 수행하였다. 도 31에 나타낸 바와 같이, apoC-III은 유리 지방산(NEFA)의 생산을 억제하였다. apoC-II-a 펩타이드의 첨가는 apoC-III의 억제 효과를 극복하였고 용량 의존적 방식으로 지방분해를 촉진하였다.
LPL 분석을 또한 기질로서 고 TG 인간 혈장을 1:50 희석으로 사용하여 수행하였다. 결과가 도 32에 나타나 있다. 50 μM apoC-III 재조합 단백질을 첨가한 경우, 유리 지방산(NEFA) 생산은 약 3.2 μM에서 약 1.7 μM으로 떨어졌다. ApoC-II-a 펩타이드를 다양한 농도로 첨가하였다. 0.01 μM의 농도에서, 그것은 지방분해에 영향을 미치기 시작했다. 약 0.2 μM의 농도에서, 그것은 apoC-III의 억제 효과를 극복하였다. 더 높은 농도의 apoC-II-a는 지방분해를 더 촉진시켰다. apoC-III을 인간 혈장과 함께 전배양하는 것은 apoC-II-a 펩타이드의 효과를 변화시키지 않았다.
본 발명자들은 또한 인간 apoC-III을 과발현하는 형질전환 마우스의 혈장을 시험하였다. 혈장 내의 ApoC-III은 고중성지방혈증을 유발하는 고농도의 apoC-III의 공지된 능력과 일치하게도 지방분해를 억제하였다. apoC-III 형질전환 마우스의 혈장을 사용한 LPL 분석에서, apoC-II-a 펩타이드는 3개의 모든 형질전환 마우스 혈장 샘플에서 apoC-III의 상승된 발현의 억제 효과를 극복하였다(도 33).
실시예
10:
ApoC
-II-a는
지질단백질
리파아제 활성화에 추가적인 메커니즘에 의해 마우스에서 식후의 고중성지방혈증을 둔화시킨다.
후의 고중성지방혈증은 중요한 심혈관 질환(CVD) 위험 인자이다. 본 발명자들은 최근에 apoC-II-KO 마우스에서 LPL을 활성화시키고 혈청 TG를 낮추는 apoC-II 모방 펩타이드(apoC-II-a)를 기술하였다. 식후의 고중성지방혈증을 위한 요법으로서 apoC-II-a를 조사하기 위해, 본 발명자들은 지방 도전 시험(fat challenge test) 후 몇 마리의 마우스 모델에 대한 그의 영향을 조사하였다.
식물성 오일(10 μL/gram)로 경구 위관영양법 후, 혈청 TG는 C57BL/6 마우스에서 3시간에 적어도 5배 증가하였으나, 마우스에게 위관영양법 30분 전에 apoC-II-a(1 μmoL/kg; IP 또는 SQ)를 주사한 경우, 식후의 TG 상승은 거의 완전히 둔화되었다. 마우스 혈청 내의 식후의 TG 수준이 도 34A 및 34B에 나타나 있다. 유사한 결과가 apoE-KO 마우스에서 확인되었고, 이는 apoC-II-a의 효과가 apoE와 독립적이라는 것을 나타낸다(나타내지 않음). ApoC-II-a는 TG 흡수 수준에서 작용하지 않는 것으로 보였는데, 그것이 또한 20% 인트라리피드의 IP 주사 후 TG의 혈청 제거를 빠르게 가속화시켰기 때문이다. 인트라리피드의 IP 주사 후 수집된 혈청 샘플에 외인성 LPL을 첨가하는 것은 apoC-II-a로 처리된 마우스로부터의 지질단백질 입자가 LPL에 대해 더 우수한 기질이었음을 밝혀내었다.
인트라리피드의 IP 주사 후 혈청 TG의 상승은 마우스에게 LPL 억제제 트리톤 WR1339을 공동 주사하였을 때 약 50%로 단지 부분적으로 차단되었는데, 이는 apoC-II-a가 LPL 독립적인 메커니즘에 의해 추가로 작용한다는 것을 나타낸다. 도 34A 및 34B는 트리톤 공동 주사를 갖는 또는 없는 마우스 혈청에서 식후의 TG의 비교를 나타낸다. 인간 혈청을 마우스에서 생체내에서 달성된 것과 대등한 용량의 외인성 apoC-II-a와 함께 배양하는 것은 apoC-II-a가 HDL을 포함하는 모든 지질단백질에 결합하고 apoC-I 및 apoC-III의 대체를 유발한다는 것을 나타내었다. 또한, 외인성 apoC-III의 첨가로부터 LPL의 시험관내 억제는 apoC-III과 비교하여 적어도 1:10의 몰비로 apoC-II-a를 첨가함으로써 극복될 수 있었다.
요약하면, 상대적으로 낮은 용량의 apoC-II-a 모방 펩타이드는 지방 부하(fat load) 후 식후의 TG의 제거를 가속화시킬 수 있다. 그것은 예상대로 LPL을 활성화시킴으로써 부분적으로 그렇게 한다. 그러나, 예기치 않게, 본 발명자들은 apoC-II-a가 또한 apoC-III에 의한 LPL의 억제를 완화함으로써, 그리고 아마도 또한 TG의 식후의 제거를 지연시키는데 있어서 apoC-III, 및 아미도 apoC-I의 다른 공지된 LPL 독립적 효과를 차단함으로써, 트리글리세라이드 수준을 감소시킨다는 것을 발견하였다.
실시예
11:
델타6PV는
마우스 모델에서
생체내
지방분해를
향상시켰다(단일-
용량 연구)
생체내 지방분해에 대한 델타6PV 펩타이드의 영향을 단일 용량 연구로 야생형, apoC-II 넉아웃, 및 apoC-III 형질전환 마우스에서 조사하였다.
인트라리피드의 복강내 주사 후, 혈청 TG는 야생형 마우스에서 유의하게 증가하였다. LPL 억제제 트리톤의 공동 주사는 6시간 시점에 혈청 TG 수준을 1000배 넘게 더 증가시켰다. 마우스에게 apoC-II 모방 펩타이드 델타6PV를 복강내로 주사한 경우, TG 증가는 유의하게 감소하였다(도 35B). 델타6PV 펩타이드는 트리톤에 의한 LPL의 억제를 역전시켰다.
apoC-II 모방 펩타이드 델타6PV를 apoC-II 넉아웃 마우스에 복강내로(도 36B) 또는 피하로(도 36C) 주사하였고, 혈장 TG 수준을 시간이 지남에 따라 모니터링하였다. 델타6PV의 주사는 혈장 TG의 빠르고 현저한 감소를 초래하였다.
인트라리피드로 복강내 주사 후, 혈청 TG는 apoC-II 넉아웃 마우스에서 주사 후 6시간에 약 7배 증가하였다. 마우스에게 인트라리피드 주사 후 1시간에 델타6PV 펩타이드를 복강내로 주사한 경우, TG 증가는 유의하게 감소하였다(도 37B).
델타6PV 펩타이드를 apoC-III 형질전환 마우스에 복강내로 주사하였고, 혈장 TG 수준을 시간이 지남에 따라 모니터링하였다. 델타6PV의 주사는 주사 후 약 6시간 후 최대 감소와 함께 혈장 TG의 빠르고 현저한 감소를 초래하였다(도 38B).
인트라리피드로 복강내 주사 후, 혈청 TG는 apoC-III 형질전환 마우스에서 주사 후 6시간에 약 4배로 증가하였다. 마우스에게 인트라리피드의 주사 후 1시간에 델타6PV 펩타이드를 복강내 주사한 경우, TG 증가는 유의하게 감소하였다(도 39).
단일-용량 연구는 apoC-II 모방 펩타이드 델타6PV가 마우스 모델에서 생체내 지방분해를 향상시키는 능력을 갖는다는 것을 보여준다.
실시예
12:
델타6PV는
마우스 모델에서
생채내
지방분해를
향상시켰다(반복-용량 연구)
야생형 마우스, apoC-II 넉아웃 마우스, 및 apoC-III 형질전환 마우스에게 apoC-II 모방 펩타이드 델타6PV를 복강내 주사에 의해 여러 번 주사하였다.
델타6PV 펩타이드를 apoC-II 넉아웃 마우스에 6일 동안 24시간 간격으로 복강내로 주사하였고, 혈장 TG 수준을 1일에 0시간, 3시간 및 6시간 및 6일에 0시간, 3시간, 및 6시간에 측정하였다. 델타6PV의 반복 주사는 혈장 TG의 현저하고 지속적인 감소를 초래하였다(도 40). SEC-FPLC(크기 배제 크로마토그래피 - 고속 단백질 액체 크로마토그래피)를 1 μmole/kg(B. W.)의 델타6PV 펩타이드가 처리된 마우스의 1일에 0시간 및 6시간 및 6일에 0시간 및 6시간의 수집된 혈장 샘플 상에서 진행하였다. 도 41에 나타낸 바와 같이, VLDL 수준은 델타6PV 펩타이드의 주사 후 6시간에 감소하였지만, HDL의 수준은 인지질 수준에 의해 측정된 바와 같이 증가하였다. TG의 수준은 또한 VLDL 풀에서 감소하였다(도 42).
델타6PV 펩타이드를 5일 동안 24시간 간격으로 apoC-III 형질전환 마우스에 복강내로 주사하였고, 혈장 지질을 도 43A에 나타낸 바와 같이 1일 및 5일에 모니터링하였다. 델타6PV의 반복 주사는 대조군 조건과 비교하여 1일 및 5일에 펩타이드 주사 후 1시간, 3시간 및 6시간에 더 낮은 혈장 TG를 초래하였다(도 43B 및 도 44). 5 μmole/kg(B. W.) 델타6PV 펩타이드로 처리된 마우스의 1일 및 5일에 0시간 및 3시간의 혈장 샘플을 SEC-FPLC에 적용하여 VLDL 및 HDL 집단을 분리하였다. VLDL 및 HDL에서의 apoC-III의 수준을 ELISA에 의해 측정하였다. ApoC-III은 델타6PV-처리된 마우스에서 VLDL 및 HDL 모두에서 감소하였다(도 45A 및 도 45B). 이 결과는 델타6PV가 대체에 의해 VLDL 및 HDL에서 apoC-III 수준을 감소시켰다는 것을 나타낸다.
인트라리피드로 복강내 주사 후, 혈청 TG는 야생형 마우스에서 주사 후 3시간에 40배 넘게 증가하였다. 마우스에게 인트라리피드의 주사 후 1시간에 델타6PV 펩타이드를 복강내로 주사한 경우, TG 증가는 유의하게 감소하였다(도 46B).
반복-용량 연구는 apoC-II 모방 펩타이드 델타6PV가 마우스 모델에서 생체내 지방분해를 향상시키는 능력을 갖는다는 것을 보여준다.
실시예
13:
델타6PV는
비만 원숭이 모델에서
생체내
지방분해를
향상시켰다
ApoC-II 모방 펩타이드 델타6PV를 2 mmol/L 초과의 혈장 TG 수준을 갖는 비만 원숭이에게 정맥내로 주사하였고, 혈장 지질을 시간이 지남에 따라 모니터링하였다. 델타6PV 펩타이드의 단일 주사는 주사 후 24시간, 48시간, 및 72시간에 측정된 혈장 TG 수준의 유의한 감소를 야기하였다(도 47). 비만 원숭이 모델에서 델타6PV 펩타이드의 효과는 용량 의존적이다.
델타6PV 펩타이드의 주사는 또한 VLDL 수준의 현저한 감소를 야기하였으나(도 48A), LDL 및 HDL의 수준은 유의하게 변하지 않았다(도 48B 및 도 48C).
요약하면, apoC-II 모방 펩타이드 델타6PV는 비만 원숭이 모델에서 생체내 지방분해를 향상시키고 VLDL 수준을 감소시키는 능력을 갖는다.
실시예
14:
델타6PV
펩타이드에
의한
ApoC
-III 대체
본 발명자들은 apoC-III의 대체에 대한 델타6PV 펩타이드의 영향을 조사하였다.
인간 혈장으로부터 단리된 VLDL을 델타6PV 펩타이드와 함께 배양하는 것은 델타6PV 펩타이드가 아포지질단백질보다 VLDL에 대해 더 높은 친화성을 갖는다는 것을 보여주었다. 도 49에 나타낸 바와 같이, 델타6PV 펩타이드는 용량 의존적 방식으로 apoC-III를 대체시켰다. VLDL 내의 ApoC-II는 또한 델타6PV 펩타이드에 의해 대체되었다.
LPL 분석을 또한 기질로서 인간 apoC-II 결핍 혈장을 사용하여 수행하였다. 결과가 도 50에 나타나 있다. 25 μM apoC-III 재조합 단백질을 첨가한 경우, 유리 지방산(NEFA) 생산은 약 1.5 μM에서 약 0.8 μM으로 떨어졌다. 델타6 및 델타6PV 펩타이드를 다양한 농도로 첨가하였다. 델타6 및 델타6PV 펩타이드의 첨가는 apoC-III의 억제 효과를 극복하였고 지방분해를 촉진하였다.
이들 결과는 델타6PV 펩타이드가 apoC-III를 대체하고 시험관내 지방분해를 향상시킬 수 있음을 보여준다.
본 발명이 바람직한 구현예 및 다양한 대안적인 구현예를 참조하여 구체적으로 나타내고 기술되었지만, 본 발명의 취지 및 범위를 벗어나지 않고 형태 및 세부사항에서 다양한 변화가 이루어질 수 있음이 관련 분야의 당업자에 의해 이해될 것이다.
본 명세서 내에 언급된 모든 문헌, 발행된 특허 및 특허 출원은 모든 목적을 위해 그 전체가 참고로 본원에 포함된다.
SEQUENCE LISTING
<110> THE UNITED STATES OF AMERICA, AS REPRESENTED BY THE
SECRETARY, DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES
CORVIDIA THERAPEUTICS, INC.
<120> APOC-II MIMETIC PEPTIDES
<130> 32601-36431/PCT
<140> PCT/US2018/014532
<141> 2018-01-19
<150> 62/476,535
<151> 2017-03-24
<150> 62/476,531
<151> 2017-03-24
<150> 62/448,358
<151> 2017-01-19
<160> 73
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 79
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 1
Thr Gln Gln Pro Gln Gln Asp Glu Met Pro Ser Pro Thr Phe Leu Thr
1 5 10 15
Gln Val Lys Glu Ser Leu Ser Ser Tyr Trp Glu Ser Ala Lys Thr Ala
20 25 30
Ala Gln Asn Leu Tyr Glu Lys Thr Tyr Leu Pro Ala Val Asp Glu Lys
35 40 45
Leu Arg Asp Leu Tyr Ser Lys Ser Thr Ala Ala Met Ser Thr Tyr Thr
50 55 60
Gly Ile Phe Thr Asp Gln Val Leu Ser Val Leu Lys Gly Glu Glu
65 70 75
<210> 2
<211> 40
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 2
Thr Tyr Leu Pro Ala Val Asp Glu Lys Leu Arg Asp Leu Tyr Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ala Ala Met Ser Thr Tyr Thr Gly Ile Phe Thr Asp Gln Val
20 25 30
Leu Ser Val Leu Lys Gly Glu Glu
35 40
<210> 3
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<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 3
Gln Val Lys Glu Ser Leu Ser Ser Tyr Trp Glu Ser Ala Lys Thr Ala
1 5 10 15
Ala Gln Asn Leu Tyr Glu
20
<210> 4
<211> 13
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 4
Val Asp Glu Lys Leu Arg Asp Leu Tyr Ser Lys Ser Thr
1 5 10
<210> 5
<211> 11
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 5
Gly Ile Phe Thr Asp Gln Val Leu Ser Val Leu
1 5 10
<210> 6
<211> 40
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<220>
<221> MOD_RES
<222> (21)..(21)
<223> Norleucine
<400> 6
Asp Tyr Leu Lys Glu Val Phe Glu Lys Leu Arg Asp Leu Tyr Glu Lys
1 5 10 15
Phe Thr Ala Ala Leu Ser Thr Tyr Thr Gly Ile Phe Thr Asp Gln Val
20 25 30
Leu Ser Val Leu Lys Gly Glu Glu
35 40
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<211> 40
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
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1 5 10 15
Phe Thr Ala Ala Val Ser Thr Tyr Thr Gly Ile Phe Thr Asp Gln Val
20 25 30
Leu Ser Val Leu Lys Gly Glu Glu
35 40
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
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20 25 30
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35 40
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
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20 25 30
Leu Ser Val Leu Lys Gly Glu Glu
35 40
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 10
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1 5 10 15
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20 25 30
Leu Ser Val Leu Lys Gly Glu Glu
35 40
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 11
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20 25 30
Leu Ser Val Leu Lys Gly Glu Glu
35 40
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
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20 25 30
Leu Ser Val Leu Arg Gly Glu Glu
35 40
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<220>
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<223> Norleucine
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Phe Thr Ala Ala Leu Ser Thr Tyr Thr Gly Ile Phe Thr Asp Gln Val
20 25 30
Leu Ser Val Leu Lys Gly Glu Glu
35 40
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<220>
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1 5 10 15
Lys Thr Pro Ala Leu Ser Thr Tyr Thr Gly Ile Phe Thr Asp Gln Val
20 25 30
Leu Ser Val Leu Lys Gly Glu Glu
35 40
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<212> PRT
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<220>
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Asp Tyr Leu Lys Glu Val Phe Glu Lys Leu Arg Asp Leu Tyr Glu Lys
1 5 10 15
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20 25 30
Leu Ser Val Leu Lys Gly Glu Glu
35 40
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<220>
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Asp Tyr Leu Lys Ala Val Phe Glu Lys Leu Arg Asp Leu Tyr Ser Lys
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Phe Thr Ala Ala Leu Ser Thr Tyr Thr Gly Ile Phe Thr Asp Gln Val
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Leu Ser Val Leu Lys Gly Glu Glu
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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20 25 30
Leu Ser Val Leu Lys Gly Glu Glu
35 40
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Asp Tyr Leu Lys Ala Val Phe Glu Lys Leu Arg Asp Leu Tyr Ser Lys
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20 25 30
Leu Ser Val Leu Lys Gly Glu Glu
35 40
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
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Asp Tyr Leu Lys Ala Val Phe Glu Lys Leu Arg Asp Leu Tyr Ser Lys
1 5 10 15
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20 25 30
Leu Ser Val Leu Lys Gly Glu Glu
35 40
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<220>
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Asp Tyr Leu Lys Ala Val Phe Glu Lys Leu Arg Asp Leu Tyr Ser Lys
1 5 10 15
Phe Thr Ala Ala Leu Ser Thr Tyr Thr Gly Ile Phe Thr Asp Arg Val
20 25 30
Leu Ser Val Leu Lys Gly Glu Glu
35 40
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
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Asp Tyr Leu Lys Ala Val Phe Glu Lys Leu Arg Asp Leu Tyr Ser Lys
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Phe Thr Ala Ala Leu Ser Thr Tyr Thr Gly Ile Phe Thr Asp Lys Val
20 25 30
Leu Ser Val Leu Lys Gly Glu Glu
35 40
<210> 22
<211> 31
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<220>
<221> MOD_RES
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<223> Norleucine
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Lys Arg Asp Leu Tyr Glu Lys Lys Phe Ala Ala Leu Ser Thr Tyr Thr
1 5 10 15
Gly Ile Phe Thr Asp Gln Val Leu Ser Val Leu Lys Gly Glu Glu
20 25 30
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<211> 40
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
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<221> MOD_RES
<222> (21)..(21)
<223> Norleucine
<400> 23
Asp Tyr Leu Lys Ala Val Phe Glu Lys Leu Arg Asp Leu Tyr Ser Lys
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Phe Thr Ala Ala Leu Ser Thr Tyr Thr Gly Ile Phe Thr Asp Gln Val
20 25 30
Leu Ser Val Leu Lys Gly Glu Glu
35 40
<210> 24
<211> 40
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<220>
<221> MOD_RES
<222> (21)..(21)
<223> Norleucine
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Asp Tyr Leu Lys Ala Val Phe Glu Lys Lys Arg Asp Leu Tyr Ser Lys
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Phe Thr Ala Ala Leu Ser Thr Tyr Thr Gly Ile Phe Thr Asp Gln Val
20 25 30
Leu Ser Val Leu Lys Gly Glu Glu
35 40
<210> 25
<211> 40
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 25
Asp Tyr Leu Lys Ala Val Phe Glu Lys Leu Arg Asp Leu Tyr Ser Lys
1 5 10 15
Phe Thr Pro Ala Met Ser Thr Tyr Thr Gly Ile Phe Thr Asp Gln Val
20 25 30
Leu Ser Val Leu Lys Gly Glu Glu
35 40
<210> 26
<211> 40
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 26
Asp Tyr Leu Lys Ala Val Phe Glu Lys Leu Arg Asp Leu Tyr Glu Lys
1 5 10 15
Phe Thr Pro Ala Met Ser Thr Tyr Thr Gly Ile Phe Thr Asp Gln Val
20 25 30
Leu Ser Val Leu Lys Gly Glu Glu
35 40
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<211> 40
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 27
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Leu Ser Val Leu Lys Gly Glu Glu
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 28
Asp Tyr Leu Lys Ala Val Phe Glu Lys Leu Lys Asp Leu Tyr Ser Lys
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Leu Ser Val Leu Lys Gly Glu Glu
35 40
<210> 29
<211> 40
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 29
Asp Trp Leu Lys Ala Val Phe Glu Lys Leu Arg Asp Leu Tyr Ser Lys
1 5 10 15
Phe Thr Pro Ala Met Ser Thr Tyr Thr Gly Ile Phe Thr Asp Gln Val
20 25 30
Leu Ser Val Leu Lys Gly Glu Glu
35 40
<210> 30
<211> 40
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 30
Asp Tyr Leu Lys Ala Val Phe Glu Lys Leu Arg Asp Leu Tyr Ser Lys
1 5 10 15
Phe Phe Pro Ala Met Ser Thr Tyr Thr Gly Ile Phe Thr Asp Gln Val
20 25 30
Leu Ser Val Leu Lys Gly Glu Glu
35 40
<210> 31
<211> 40
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 31
Asp Tyr Leu Lys Ala Phe Tyr Glu Lys Leu Arg Asp Leu Leu Ser Lys
1 5 10 15
Ala Phe Pro Ala Met Ser Thr Tyr Thr Gly Ile Phe Thr Asp Gln Val
20 25 30
Leu Ser Val Leu Lys Gly Glu Glu
35 40
<210> 32
<211> 40
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 32
Asp Tyr Leu Lys Ala Val Lys Glu Lys Leu Arg Asp Leu Tyr Ser Lys
1 5 10 15
Phe Thr Pro Ala Met Ser Thr Tyr Thr Gly Ile Phe Thr Asp Gln Val
20 25 30
Leu Ser Val Leu Lys Gly Glu Glu
35 40
<210> 33
<211> 40
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 33
Asp Tyr Leu Lys Ala Val Phe Glu Lys Lys Arg Asp Leu Tyr Ser Lys
1 5 10 15
Phe Thr Pro Ala Met Ser Thr Tyr Thr Gly Ile Phe Thr Asp Gln Val
20 25 30
Leu Ser Val Leu Lys Gly Glu Glu
35 40
<210> 34
<211> 40
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 34
Asp Tyr Leu Lys Ala Val Phe Glu Lys Leu Arg Asp Leu Tyr Ser Lys
1 5 10 15
Lys Thr Pro Ala Met Ser Thr Tyr Thr Gly Ile Phe Thr Asp Gln Val
20 25 30
Leu Ser Val Leu Lys Gly Glu Glu
35 40
<210> 35
<211> 40
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 35
Asp Tyr Leu Lys Ala Val Phe Glu Lys Leu Arg Asp Leu Tyr Ser Lys
1 5 10 15
Phe Thr Ala Ala Lys Ser Thr Tyr Thr Gly Ile Phe Thr Asp Gln Val
20 25 30
Leu Ser Val Leu Lys Gly Glu Glu
35 40
<210> 36
<211> 37
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 36
Lys Ala Val Phe Glu Lys Leu Arg Asp Leu Tyr Ser Lys Phe Thr Ala
1 5 10 15
Ala Lys Ser Thr Tyr Thr Gly Ile Phe Thr Asp Gln Val Leu Ser Val
20 25 30
Leu Lys Gly Glu Glu
35
<210> 37
<211> 36
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 37
Asp Val Phe Glu Lys Leu Arg Asp Leu Tyr Ser Lys Phe Thr Ala Ala
1 5 10 15
Lys Ser Thr Tyr Thr Gly Ile Phe Thr Asp Gln Val Leu Ser Val Leu
20 25 30
Lys Gly Glu Glu
35
<210> 38
<211> 33
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 38
Glu Lys Leu Arg Asp Leu Tyr Ser Lys Phe Thr Ala Ala Lys Ser Thr
1 5 10 15
Tyr Thr Gly Ile Phe Thr Asp Gln Val Leu Ser Val Leu Lys Gly Glu
20 25 30
Glu
<210> 39
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 39
Arg Asp Leu Tyr Ser Lys Phe Thr Ala Ala Lys Ser Thr Tyr Thr Gly
1 5 10 15
Ile Phe Thr Asp Gln Val Leu Ser Val Leu Lys Gly Glu Glu
20 25 30
<210> 40
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 40
Asp Leu Tyr Ser Lys Phe Thr Ala Ala Lys Ser Thr Tyr Thr Gly Ile
1 5 10 15
Phe Thr Asp Gln Val Leu Ser Val Leu Lys Gly Glu Glu
20 25
<210> 41
<211> 26
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 41
Asp Lys Phe Thr Ala Ala Lys Ser Thr Tyr Thr Gly Ile Phe Thr Asp
1 5 10 15
Gln Val Leu Ser Val Leu Lys Gly Glu Glu
20 25
<210> 42
<211> 40
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<220>
<221> MOD_RES
<222> (21)..(21)
<223> Norleucine
<400> 42
Asp Tyr Leu Lys Glu Val Phe Glu Lys Leu Arg Asp Leu Tyr Ser Lys
1 5 10 15
Phe Thr Ala Ala Leu Ser Thr Tyr Thr Gly Ile Phe Thr Asp Gln Val
20 25 30
Leu Ser Val Leu Lys Gly Glu Glu
35 40
<210> 43
<211> 40
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 43
Asp Trp Leu Lys Ala Val Phe Glu Lys Leu Arg Asp Leu Tyr Glu Lys
1 5 10 15
Phe Thr Pro Ala Met Ser Thr Tyr Thr Gly Ile Phe Thr Asp Gln Val
20 25 30
Leu Ser Val Leu Lys Gly Glu Glu
35 40
<210> 44
<211> 40
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 44
Asp Tyr Leu Lys Ala Val Phe Glu Lys Leu Arg Asp Leu Tyr Glu Lys
1 5 10 15
Phe Phe Pro Ala Met Ser Thr Tyr Thr Gly Ile Phe Thr Asp Gln Val
20 25 30
Leu Ser Val Leu Lys Gly Glu Glu
35 40
<210> 45
<211> 40
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 45
Asp Trp Leu Lys Ala Val Phe Glu Lys Leu Arg Asp Leu Tyr Glu Lys
1 5 10 15
Phe Phe Pro Ala Met Ser Thr Tyr Thr Gly Ile Phe Thr Asp Gln Val
20 25 30
Leu Ser Val Leu Lys Gly Glu Glu
35 40
<210> 46
<211> 40
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<220>
<221> MOD_RES
<222> (21)..(21)
<223> Norleucine
<400> 46
Asp Trp Leu Lys Ala Val Phe Glu Lys Leu Arg Asp Leu Tyr Glu Lys
1 5 10 15
Phe Thr Pro Ala Leu Ser Thr Tyr Thr Gly Ile Phe Thr Asp Gln Val
20 25 30
Leu Ser Val Leu Lys Gly Glu Glu
35 40
<210> 47
<211> 40
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<220>
<221> MOD_RES
<222> (21)..(21)
<223> Norleucine
<400> 47
Asp Tyr Leu Lys Ala Val Phe Glu Lys Leu Arg Asp Leu Tyr Glu Lys
1 5 10 15
Phe Phe Pro Ala Leu Ser Thr Tyr Thr Gly Ile Phe Thr Asp Gln Val
20 25 30
Leu Ser Val Leu Lys Gly Glu Glu
35 40
<210> 48
<211> 40
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<220>
<221> MOD_RES
<222> (21)..(21)
<223> Norleucine
<400> 48
Asp Trp Leu Lys Ala Val Phe Glu Lys Leu Arg Asp Leu Tyr Glu Lys
1 5 10 15
Phe Phe Pro Ala Leu Ser Thr Tyr Thr Gly Ile Phe Thr Asp Gln Val
20 25 30
Leu Ser Val Leu Lys Gly Glu Glu
35 40
<210> 49
<211> 21
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 49
Ala Met Ser Thr Tyr Thr Gly Ile Phe Thr Asp Gln Val Leu Ser Val
1 5 10 15
Leu Lys Gly Glu Glu
20
<210> 50
<211> 21
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 50
Ala Met Ser Thr Tyr Thr Gly Ile Phe Thr Asp Gln Val Leu Ser Val
1 5 10 15
Leu Lys Gly Glu Glu
20
<210> 51
<211> 21
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 51
Ala Lys Ser Thr Tyr Thr Gly Ile Phe Thr Asp Gln Val Leu Ser Val
1 5 10 15
Leu Lys Gly Glu Glu
20
<210> 52
<211> 21
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 52
Ala Met Ser Thr Tyr Thr Gly Ile Phe Thr Asp Gln Val Leu Ser Val
1 5 10 15
Leu Lys Gly Glu Glu
20
<210> 53
<211> 40
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 53
Asp Tyr Leu Lys Glu Val Phe Glu Lys Leu Arg Asp Leu Tyr Glu Lys
1 5 10 15
Phe Phe Pro Ala Val Ser Thr Tyr Thr Gly Ile Phe Thr Asp Gln Val
20 25 30
Leu Ser Val Leu Lys Gly Glu Glu
35 40
<210> 54
<211> 40
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> Aib
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> Aib
<400> 54
Asp Tyr Leu Lys Glu Val Xaa Glu Lys Leu Arg Asp Leu Tyr Glu Lys
1 5 10 15
Xaa Phe Pro Ala Val Ser Thr Tyr Thr Gly Ile Phe Thr Asp Gln Val
20 25 30
Leu Ser Val Leu Lys Gly Glu Glu
35 40
<210> 55
<211> 40
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 55
Asp Lys Val Lys Glu Phe Leu Ser Glu Tyr Trp Glu Lys Ala Lys Glu
1 5 10 15
Phe Ala Pro Ala Val Ser Thr Tyr Thr Gly Ile Phe Thr Asp Gln Val
20 25 30
Leu Ser Val Leu Lys Gly Glu Glu
35 40
<210> 56
<211> 40
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 56
Asp Trp Leu Lys Ala Phe Tyr Asp Lys Val Ala Glu Lys Leu Lys Glu
1 5 10 15
Ala Phe Pro Ala Met Ser Thr Tyr Thr Gly Ile Phe Thr Asp Gln Val
20 25 30
Leu Ser Val Leu Lys Gly Glu Glu
35 40
<210> 57
<211> 19
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 57
Thr Tyr Leu Pro Ala Val Asp Glu Lys Leu Arg Asp Leu Tyr Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ala
<210> 58
<211> 19
<212> PRT
<213> Pan troglodytes
<400> 58
Thr Tyr Leu Pro Ala Val Asp Glu Lys Leu Arg Asp Leu Tyr Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ala
<210> 59
<211> 19
<212> PRT
<213> Macaca fascicularis
<400> 59
Thr Tyr Leu Pro Ala Val Asp Glu Lys Leu Arg Asp Leu Tyr Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ala
<210> 60
<211> 19
<212> PRT
<213> Macaca mulatta
<400> 60
Thr Tyr Leu Pro Ala Val Asp Glu Lys Leu Arg Asp Leu Tyr Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ala
<210> 61
<211> 19
<212> PRT
<213> Papio hamadryas
<400> 61
Thr Tyr Leu Pro Ala Val Asp Glu Lys Leu Arg Asp Leu Tyr Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ala
<210> 62
<211> 19
<212> PRT
<213> Callithrix jacchus
<400> 62
Thr Tyr Leu His Thr Val Asp Glu Lys Leu Arg Asp Met Tyr Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ala
<210> 63
<211> 19
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 63
Thr Tyr Pro Ile Ser Met Asp Glu Lys Leu Arg Asp Met Tyr Ser Lys
1 5 10 15
Ser Ser Ala
<210> 64
<211> 19
<212> PRT
<213> Rattus norvegicus
<400> 64
Thr Tyr Leu Thr Ser Val Asp Glu Lys Leu Arg Asp Met Tyr Ser Lys
1 5 10 15
Ser Ser Ala
<210> 65
<211> 19
<212> PRT
<213> Canis lupus familiaris
<400> 65
Ala Tyr Pro Thr Thr Met Asp Glu Lys Ile Arg Asp Ile Tyr Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ala
<210> 66
<211> 19
<212> PRT
<213> Bos taurus
<400> 66
Thr Tyr Leu Pro Ala Val Asp Glu Lys Ile Arg Asp Ile Tyr Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ala
<210> 67
<211> 19
<212> PRT
<213> Sus scrofa
<400> 67
Thr Tyr Leu Pro Thr Val Asp Glu Lys Ile Arg Asp Met Tyr Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ala
<210> 68
<211> 19
<212> PRT
<213> Cavia porcellus
<400> 68
Thr Tyr Leu Pro Ala Val Asp Glu Thr Ile Arg Asp Ile Tyr Ser Lys
1 5 10 15
Gly Ser Ala
<210> 69
<211> 18
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 69
Thr Tyr Leu Pro Ala Val Asp Glu Lys Leu Arg Asp Leu Tyr Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr
<210> 70
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 70
Asp Tyr Leu Lys Ala Val Phe Glu Lys Leu Arg Asp Leu Tyr Ser Lys
1 5 10 15
Phe Thr
<210> 71
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 71
Asp Tyr Leu Lys Glu Val Phe Glu Lys Leu Arg Asp Leu Tyr Ser Lys
1 5 10 15
Phe Thr
<210> 72
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 72
Asp Tyr Leu Lys Glu Val Phe Glu Lys Leu Arg Asp Leu Tyr Glu Lys
1 5 10 15
Phe Thr
<210> 73
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 73
Asp Tyr Leu Asp Ala Val Trp Glu Lys Leu Arg Asp Leu Tyr Ser Lys
1 5 10 15
Phe Thr
Claims (209)
- N-말단부터 C-말단까지 제1 나선 도메인, 힌지 영역, 및 제2 나선 도메인을 포함하는, 50개 이하의 아미노산의 단리된 apoC-II 모방 펩타이드로서,
제1 나선 도메인은 양친매성이며, apoC-II 모방 펩타이드는 서열번호: 56의 펩타이드가 아닌 것인 단리된 apoC-II 모방 펩타이드. - 제1항에 있어서, 제1 도메인은 apoC-II의 천연 나선 1인 펩타이드.
- 제1항에 있어서, 제1 도메인은 apoC-II의 나선 1의 변이체인 펩타이드.
- 제1항에 있어서, 제1 도메인은 apoC-II의 천연 나선 2인 펩타이드.
- 제1항에 있어서, 제1 도메인은 apoC-II의 나선 2의 변이체인 펩타이드.
- 제5항에 있어서, apoC-II의 나선 2의 변이체는 apoC-II의 나선 2의 신장을 포함하는 것인 펩타이드.
- 제6항에 있어서, apoC-II의 나선 2는 N-말단에서 1-10개의 아미노산에 의해 신장되는 것인 펩타이드.
- 제7항에 있어서, apoC-II의 나선 2는 N-말단에서 1개의 아미노산에 의해 신장되는 것인 펩타이드.
- 제8항에 있어서, 아미노산은 아스파트산인 펩타이드.
- 제7항에 있어서, apoC-II의 나선 2는 N-말단에서 2개의 아미노산에 의해 신장되는 것인 펩타이드.
- 제10항에 있어서, 아미노산은 N-말단부터 C-말단까지 리신 및 알라닌인 펩타이드.
- 제7항에 있어서, apoC-II의 나선 2는 N-말단에서 5개의 아미노산에 의해 신장되는 것인 펩타이드.
- 제12항에 있어서, apoC-II의 나선 2는 인간 apoC-II의 천연 상류 아미노산 서열, 또는 인간 apoC-II의 천연 상류 아미노산 서열의 돌연변이체에 의해 신장되는 것인 펩타이드.
- 제12항 또는 제13항에 있어서, apoC-II의 나선 2의 변이체는 위치 40에 아스파트산을 포함하는 것인 펩타이드.
- 제12항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, apoC-II의 나선 2의 변이체는 위치 41에 티로신 또는 트립토판을 포함하는 것인 펩타이드.
- 제12항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, apoC-II의 나선 2의 변이체는 위치 42에 류신을 포함하는 것인 펩타이드.
- 제12항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, apoC-II의 나선 2의 변이체는 위치 43에 리신 또는 아르기닌을 포함하는 것인 펩타이드.
- 제12항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, apoC-II의 나선 2의 변이체는 위치 44에 알라닌 또는 글루탐산을 포함하는 것인 펩타이드.
- 제12항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, apoC-II의 나선 2의 변이체는 위치 40에 아스파트산, 위치 41에 티로신, 위치 42에 류신, 위치 43에 리신, 및 위치 44에 글루탐산을 포함하는 것인 펩타이드.
- 제5항에 있어서, apoC-II의 나선 2의 변이체는 apoC-II의 나선 2의 절두를 포함하는 것인 펩타이드.
- 제20항에 있어서, apoC-II의 천연 나선 2의 아미노산 잔기 45-46은 결실되는 것인 펩타이드.
- 제20항에 있어서, apoC-II의 천연 나선 2의 아미노산 잔기 45-48은 결실되는 것인 펩타이드.
- 제20항에 있어서, apoC-II의 천연 나선 2의 아미노산 잔기 45-49는 결실되는 것인 펩타이드.
- 제20항에 있어서, apoC-II의 천연 나선 2의 아미노산 잔기 45-50은 결실되는 것인 펩타이드.
- 제20항에 있어서, apoC-II의 천연 나선 2의 아미노산 잔기 45-53은 결실되는 것인 펩타이드.
- 제5항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, apoC-II의 나선 2의 변이체는 apoC-II의 나선 2의 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는 것인 펩타이드.
- 제26항에 있어서, 돌연변이는 아미노산 치환인 펩타이드.
- 제27항에 있어서, apoC-II의 나선 2의 원래의 아미노산은 천연 아미노산에 의해 치환되는 것인 펩타이드.
- 제27항에 있어서, apoC-II의 나선 2의 원래의 아미노산은 비천연 아미노산에 의해 치환되는 것인 펩타이드.
- 제27항에 있어서, apoC-II의 나선 2의 원래의 아미노산은 아미노산 유사체에 의해 치환되는 것인 펩타이드.
- 제27항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 치환은 위치 45에 있는 것인 펩타이드.
- 제31항에 있어서, 위치 45에서의 발린은 페닐알라닌에 의해 치환되는 것인 펩타이드.
- 제27항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 치환은 위치 46에 있는 것인 펩타이드.
- 제33항에 있어서, 위치 46에서의 아스파트산은 페닐알라닌에 의해 치환되는 것인 펩타이드.
- 제33항에 있어서, 위치 46에서의 아스파트산은 리신에 의해 치환되는 것인 펩타이드.
- 제33항에 있어서, 위치 46에서의 아스파트산은 아미노이소부티르산에 의해 치환되는 것인 펩타이드.
- 제27항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 치환은 위치 48에 있는 것인 펩타이드.
- 제37항에 있어서, 위치 48에서의 리신은 아르기닌에 의해 치환되는 것인 펩타이드.
- 제27항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 치환은 위치 49에 있는 것인 펩타이드.
- 제39항에 있어서, 위치 49에서의 류신은 리신에 의해 치환되는 것인 펩타이드.
- 제27항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 치환은 위치 50에 있는 것인 펩타이드.
- 제41항에 있어서, 위치 50에서의 아르기닌은 리신에 의해 치환되는 것인 펩타이드.
- 제27항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 치환은 위치 53에 있는 것인 펩타이드.
- 제43항에 있어서, 위치 53에서의 티로신은 류신에 의해 치환되는 것인 펩타이드.
- 제27항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 치환은 위치 54에 있는 것인 펩타이드.
- 제45항에 있어서, 위치 54에서의 세린은 글루탐산에 의해 치환되는 것인 펩타이드.
- 제45항에 있어서, 위치 54에서의 세린은 리신에 의해 치환되는 것인 펩타이드.
- 제45항에 있어서, 위치 54에서의 세린은 아스파트산에 의해 치환되는 것인 펩타이드.
- 제27항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 치환은 위치 55에 있는 것인 펩타이드.
- 제49항에 있어서, 위치 55에서의 리신은 아르기닌에 의해 치환되는 것인 펩타이드.
- 제27항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 치환은 위치 56에 있는 것인 펩타이드.
- 제51항에 있어서, 위치 56에서의 세린은 페닐알라닌에 의해 치환되는 것인 펩타이드.
- 제51항에 있어서, 위치 56에서의 세린은 리신에 의해 치환되는 것인 펩타이드.
- 제51항에 있어서, 위치 56에서의 세린은 알라닌에 의해 치환되는 것인 펩타이드.
- 제51항에 있어서, 위치 56에서의 세린은 아미노이소부티르산에 의해 치환되는 것인 펩타이드.
- 제27항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 치환은 위치 57에 있는 것인 펩타이드.
- 제56항에 있어서, 위치 57에서의 트레오닌은 페닐알라닌에 의해 치환되는 것인 펩타이드.
- 제27항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, apoC-II의 나선 2의 변이체는 3개의 아미노산 치환을 포함하고, 아미노산 치환은 위치 46, 위치 54, 및 위치 56에 있는 것인 펩타이드.
- 제58항에 있어서, 위치 46에서의 아스파트산은 페닐알라닌에 의해 치환되고, 위치 54에서의 세린은 글루탐산에 의해 치환되며, 위치 56에서의 세린은 페닐알라닌에 의해 치환되는 것인 펩타이드.
- 제5항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서, apoC-II의 나선 2의 변이체는 적어도 하나의 화학적 변형을 포함하는 것인 펩타이드.
- 제60항에 있어서, 화학적 변형은 지방산의 공유 결합인 펩타이드.
- 제61항에 있어서, 지방산은 4 내지 26개의 탄소를 포함하는 것인 펩타이드.
- 제62항에 있어서, 지방산은 10개의 탄소를 포함하는 것인 펩타이드.
- 제62항에 있어서, 지방산은 12개의 탄소를 포함하는 것인 펩타이드.
- 제62항에 있어서, 지방산은 14개의 탄소를 포함하는 것인 펩타이드.
- 제62항에 있어서, 지방산은 16개의 탄소를 포함하는 것인 펩타이드.
- 제62항에 있어서, 지방산은 18개의 탄소를 포함하는 것인 펩타이드.
- 제62항에 있어서, 지방산은 20개의 탄소를 포함하는 것인 펩타이드.
- 제61항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, 지방산은 포화되는 것인 펩타이드.
- 제61항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, 지방산은 불포화되는 것인 펩타이드.
- 제61항 내지 제70항 중 어느 한 항에 있어서, 지방산은 N-말단 아미노산에 연결되는 것인 펩타이드.
- 제61항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서, 지방산은 아미노산 측기에 연결되는 것인 펩타이드.
- 제72항에 있어서, 지방산은 리신 잔기의 ε-아민에 연결되는 것인 펩타이드.
- 제1항 내지 제73항 중 어느 한 항에 있어서, 힌지 영역은 5-10개의 아미노산을 포함하는 것인 펩타이드.
- 제74항에 있어서, 힌지 영역은 7개의 아미노산을 포함하는 것인 펩타이드.
- 제74항에 있어서, 힌지 영역은 프롤린을 포함하는 것인 펩타이드.
- 제76항에 있어서, 힌지 영역은 위치 58에 프롤린을 포함하는 것인 펩타이드.
- 제74항에 있어서, 힌지 영역은 알라닌을 포함하는 것인 펩타이드.
- 제78항에 있어서, 힌지 영역은 위치 58에 알라닌을 포함하는 것인 펩타이드.
- 제74항에 있어서, 힌지 영역은 노르류신을 포함하는 것인 펩타이드.
- 제80항에 있어서, 힌지 영역은 위치 60에 노르류신을 포함하는 것인 펩타이드.
- 제74항에 있어서, 힌지 영역은 리신을 포함하는 것인 펩타이드.
- 제82항에 있어서, 힌지 영역은 위치 60에 리신을 포함하는 것인 펩타이드.
- 제74항에 있어서, 힌지 영역은 발린을 포함하는 것인 펩타이드.
- 제84항에 있어서, 힌지 영역은 위치 60에 발린을 포함하는 것인 펩타이드.
- 제74항에 있어서, 힌지 영역은 류신을 포함하는 것인 펩타이드.
- 제86항에 있어서, 힌지 영역은 위치 60에 류신을 포함하는 것인 펩타이드.
- 제74항에 있어서, 힌지 영역은 메티오닌을 포함하는 것인 펩타이드.
- 제88항에 있어서, 힌지 영역은 위치 60에 메티오닌을 포함하는 것인 펩타이드.
- 제74항 내지 제89항 중 어느 한 항에 있어서, 힌지 영역은 적어도 하나의 화학적 변형을 포함하는 것인 펩타이드.
- 제90항에 있어서, 화학적 변형은 지방산의 공유 결합인 펩타이드.
- 제91항에 있어서, 지방산은 4 내지 26개의 탄소를 포함하는 것인 펩타이드.
- 제92항에 있어서, 지방산은 10개의 탄소를 포함하는 것인 펩타이드.
- 제92항에 있어서, 지방산은 12개의 탄소를 포함하는 것인 펩타이드.
- 제92항에 있어서, 지방산은 14개의 탄소를 포함하는 것인 펩타이드.
- 제92항에 있어서, 지방산은 16개의 탄소를 포함하는 것인 펩타이드.
- 제92항에 있어서, 지방산은 18개의 탄소를 포함하는 것인 펩타이드.
- 제92항에 있어서, 지방산은 20개의 탄소를 포함하는 것인 펩타이드.
- 제91항 내지 제98항 중 어느 한 항에 있어서, 지방산은 포화되는 것인 펩타이드.
- 제91항 내지 제98항 중 어느 한 항에 있어서, 지방산은 불포화되는 것인 펩타이드.
- 제91항 내지 제100항 중 어느 한 항에 있어서, 지방산은 아미노산 측기에 연결되는 것인 펩타이드.
- 제101항에 있어서, 지방산은 리신 잔기의 ε-아민에 연결되는 것인 펩타이드.
- 제1항 내지 제102항 중 어느 한 항에 있어서, 힌지 영역은 제1 나선 도메인 및 제2 나선 도메인이 거의 직선 형태를 유지하게 하고, 제2 도메인은 약 20° 이하의 각도로 제1 도메인으로부터 멀리 구부러져 있는 것인 펩타이드.
- 제1항 내지 제103항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 도메인은 apoC-II의 천연 나선 3인 펩타이드.
- 제1항 내지 제103항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 도메인은 apoC-II의 나선 3의 변이체인 펩타이드.
- 제105항에 있어서, apoC-II의 나선 3의 변이체는 apoC-II의 나선 3의 신장을 포함하는 것인 펩타이드.
- 제106항에 있어서, apoC-II의 나선 3은 C-말단에서 1-10개의 아미노산에 의해 신장되는 것인 펩타이드.
- 제107항에 있어서, apoC-II의 나선 3은 C-말단에서 4개의 아미노산에 의해 신장되는 것인 펩타이드.
- 제108항에 있어서, apoC-II의 나선 3은 아미노산 리신, 글리신, 글루탐산, 및 N-말단부터 C-말단까지 글루탐산에 의해 신장되는 것인 펩타이드.
- 제105항 내지 제109항 중 어느 한 항에 있어서, apoC-II의 나선 3의 변이체는 apoC-II의 나선 3의 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는 것인 펩타이드.
- 제110항에 있어서, 돌연변이는 아미노산 치환인 펩타이드.
- 제111항에 있어서, apoC-II의 나선 3의 원래의 아미노산은 천연 아미노산에 의해 치환되는 것인 펩타이드.
- 제111항에 있어서, apoC-II의 나선 3의 원래의 아미노산은 비천연 아미노산에 의해 치환되는 것인 펩타이드.
- 제111항에 있어서, apoC-II의 나선 3의 원래의 아미노산은 아미노산 유사체에 의해 치환되는 것인 펩타이드.
- 제111항 내지 제114항 중 어느 한 항에 있어서, 아미노산 치환은 위치 70에 있는 것인 펩타이드.
- 제115항에 있어서, 위치 70에서의 글루타민은 아르기닌에 의해 치환되는 것인 펩타이드.
- 제115항에 있어서, 위치 70에서의 글루타민은 리신에 의해 치환되는 것인 펩타이드.
- 제105항 내지 제117항 중 어느 한 항에 있어서, apoC-II의 나선 3의 변이체는 적어도 하나의 화학적 변형을 포함하는 것인 펩타이드.
- 제118항에 있어서, 화학적 변형은 지방산의 공유 결합인 펩타이드.
- 제119항에 있어서, 지방산은 4 내지 26개의 탄소를 포함하는 것인 펩타이드.
- 제120항에 있어서, 지방산은 10개의 탄소를 포함하는 것인 펩타이드.
- 제120항에 있어서, 지방산은 12개의 탄소를 포함하는 것인 펩타이드.
- 제120항에 있어서, 지방산은 14개의 탄소를 포함하는 것인 펩타이드.
- 제120항에 있어서, 지방산은 16개의 탄소를 포함하는 것인 펩타이드.
- 제120항에 있어서, 지방산은 18개의 탄소를 포함하는 것인 펩타이드.
- 제120항에 있어서, 지방산은 20개의 탄소를 포함하는 것인 펩타이드.
- 제119항 내지 제126항 중 어느 한 항에 있어서, 지방산은 포화되는 것인 펩타이드.
- 제119항 내지 제126항 중 어느 한 항에 있어서, 지방산은 불포화되는 것인 펩타이드.
- 제119항 내지 제128항 중 어느 한 항에 있어서, 지방산은 C-말단 아미노산에 연결되는 것인 펩타이드.
- 제119항 내지 제129항 중 어느 한 항에 있어서, 지방산은 아미노산 측기에 연결되는 것인 펩타이드.
- 제130항에 있어서, 지방산은 리신 잔기의 ε-아민에 연결되는 것인 펩타이드.
- 제119항 내지 제131항 중 어느 한 항에 있어서, C-말단 아미노산은 C-말단 아미드에 의해 변형되는 것인 펩타이드.
- 제1항 내지 제132항 중 어느 한 항에 있어서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드는 정제 태그를 추가로 포함하는 것인 펩타이드.
- 제133항에 있어서, 정제 태그는 폴리히스티딘-태그, myc-태그, 또는 HA-태그인 펩타이드.
- 제1항 내지 제134항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 도메인은 지질단백질에의 결합에 대해 친화성을 갖는 것인 펩타이드.
- 제1항 내지 제135항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 도메인은 지질단백질 리파아제(LPL)를 활성화시킬 수 있는 것인 펩타이드.
- 제135항 또는 제136항에 있어서, 펩타이드는 LPL에 의한 지방분해를 활성화시킬 수 있는 것인 펩타이드.
- 제135항 또는 제136항에 있어서, 펩타이드는 지질단백질 내의 apoC-III을 대체할 수 있는 것인 펩타이드.
- 제1항 내지 제138항 중 어느 한 항에 있어서, 펩타이드는 생체내 트리글리세라이드(TG) 수준을 감소시킬 수 있는 것인 펩타이드.
- 제139항에 있어서, 펩타이드는 LPL 결핍에 의해 유발된 상승된 TG 수준을 감소시킬 수 있는 것인 펩타이드.
- 제139항에 있어서, 펩타이드는 상승된 apoC-III에 의해 유발된 상승된 TG 수준을 감소시킬 수 있는 것인 펩타이드.
- 제139항에 있어서, 펩타이드는 apoC-II 결핍에 의해 유발된 상승된 TG 수준을 감소시킬 수 있는 것인 펩타이드.
- 제139항에 있어서, 펩타이드는 식후의 상승된 TG 수준을 감소시킬 수 있는 것인 펩타이드.
- 제1항에 있어서, 펩타이드는 서열번호: 6에 제시된 서열을 갖는 것인 단리된 apoC-II 모방 펩타이드.
- 제1항에 있어서, 펩타이드는 서열번호: 9에 제시된 서열을 갖는 것인 단리된 apoC-II 모방 펩타이드.
- apoC-II의 나선 3의 변이체로 구성되는, 30개 이하의 아미노산의 단리된 apoC-II 모방 펩타이드.
- 제146항에 있어서, apoC-II의 나선 3의 변이체는 apoC-II의 나선 3의 신장을 포함하는 것인 펩타이드.
- 제147항에 있어서, apoC-II의 나선 3은 N-말단에서 1-10개의 아미노산에 의해 신장되는 것인 펩타이드.
- 제148항에 있어서, apoC-II의 나선 3은 N-말단에서 6개의 아미노산에 의해 신장되는 것인 펩타이드.
- 제149항에 있어서, apoC-II의 나선 3의 변이체는 위치 60에 리신 또는 메티오닌을 포함하는 것인 펩타이드.
- 제147항 내지 제150항 중 어느 한 항에 있어서, apoC-II의 나선 3은 C-말단에서 1-10개의 아미노산에 의해 신장되는 것인 펩타이드.
- 제151항에 있어서, apoC-II의 나선 3은 C-말단에서 4개의 아미노산에 의해 신장되는 것인 펩타이드.
- 제152항에 있어서, apoC-II의 나선 3은 아미노산 리신, 글리신, 글루탐산, 및 N-말단부터 C-말단까지 글루탐산에 의해 신장되는 것인 펩타이드.
- 제146항 내지 제153항 중 어느 한 항에 있어서, apoC-II의 나선 3의 변이체는 apoC-II의 나선 3의 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는 것인 펩타이드.
- 제154항에 있어서, 돌연변이는 아미노산 치환인 펩타이드.
- 제155항에 있어서, apoC-II의 나선 3의 원래의 아미노산은 천연 아미노산에 의해 치환되는 것인 펩타이드.
- 제155항에 있어서, apoC-II의 나선 3의 원래의 아미노산은 비천연 아미노산에 의해 치환되는 것인 펩타이드.
- 제155항에 있어서, apoC-II의 나선 3의 원래의 아미노산은 아미노산 유사체에 의해 치환되는 것인 펩타이드.
- 제146항 내지 제158항 중 어느 한 항에 있어서, apoC-II의 나선 3의 변이체는 적어도 하나의 화학적 변형을 포함하는 것인 펩타이드.
- 제159항에 있어서, 화학적 변형은 지방산의 공유 결합인 펩타이드.
- 제160항에 있어서, 지방산은 4 내지 26개의 탄소를 포함하는 것인 펩타이드.
- 제161항에 있어서, 지방산은 10개의 탄소를 포함하는 것인 펩타이드.
- 제161항에 있어서, 지방산은 12개의 탄소를 포함하는 것인 펩타이드.
- 제161항에 있어서, 지방산은 14개의 탄소를 포함하는 것인 펩타이드.
- 제161항에 있어서, 지방산은 16개의 탄소를 포함하는 것인 펩타이드.
- 제161항에 있어서, 지방산은 18개의 탄소를 포함하는 것인 펩타이드.
- 제161항에 있어서, 지방산은 20개의 탄소를 포함하는 것인 펩타이드.
- 제160항 내지 제167항 중 어느 한 항에 있어서, 지방산은 포화되는 것인 펩타이드.
- 제160항 내지 제167항 중 어느 한 항에 있어서, 지방산은 불포화되는 것인 펩타이드.
- 제160항 내지 제169항 중 어느 한 항에 있어서, 지방산은 N-말단 아미노산에 연결되는 것인 펩타이드.
- 제160항 내지 제169항 중 어느 한 항에 있어서, 지방산은 C-말단 아미노산에 연결되는 것인 펩타이드.
- 제160항 내지 제171항 중 어느 한 항에 있어서, 지방산은 아미노산 측기에 연결되는 것인 펩타이드.
- 제172항에 있어서, 지방산은 리신 잔기의 ε-아민에 연결되는 것인 펩타이드.
- 제146항 내지 제173항 중 어느 한 항에 있어서, 단리된 apoC-II 모방 펩타이드는 정제 태그를 추가로 포함하는 것인 펩타이드.
- 제174항에 있어서, 정제 태그는 폴리히스티딘-태그, myc-태그, 또는 HA-태그인 펩타이드.
- 제146항 내지 제175항 중 어느 한 항에 있어서, apoC-II의 나선 3의 변이체는 지질단백질에의 결합에 대해 친화성을 갖는 것인 펩타이드.
- 제146항 내지 제176항 중 어느 한 항에 있어서, apoC-II의 나선 3의 변이체는 지질단백질 리파아제(LPL)를 활성화시킬 수 있는 것인 펩타이드.
- 제176항 또는 제177항에 있어서, 펩타이드는 LPL에 의한 지방분해를 활성화시킬 수 있는 것인 펩타이드.
- 제176항 또는 제177항에 있어서, 펩타이드는 지질단백질 내의 apoC-III을 대체할 수 있는 것인 펩타이드.
- 제146항 내지 제179항 중 어느 한 항에 있어서, 펩타이드는 생체내 트리글리세라이드(TG) 수준을 감소시킬 수 있는 것인 펩타이드.
- 제180항에 있어서, 펩타이드는 LPL 결핍에 의해 유발된 상승된 TG 수준을 감소시킬 수 있는 것인 펩타이드.
- 제180항에 있어서, 펩타이드는 상승된 apoC-III에 의해 유발된 상승된 TG 수준을 감소시킬 수 있는 것인 펩타이드.
- 제180항에 있어서, 펩타이드는 apoC-II 결핍에 의해 유발된 상승된 TG 수준을 감소시킬 수 있는 것인 펩타이드.
- 제180항에 있어서, 펩타이드는 식후의 상승된 TG 수준을 감소시킬 수 있는 것인 펩타이드.
- 제1항 내지 제184항 중 어느 한 항의 펩타이드 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학 조성물.
- 제185항에 있어서, 약학 조성물은 피하 주사에 적합한 것인 약학 조성물.
- 제1항 내지 제186항 중 어느 한 항의 펩타이드 또는 약학 조성물의 유효량을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 환자에서 고중성지방혈증을 치료하는 방법.
- 제187항에 있어서, 고중성지방혈증은 비만과 관련되는 것인 방법.
- 제187항에 있어서, 고중성지방혈증은 당뇨병과 관련되는 것인 방법.
- 제187항에 있어서, 고중성지방혈증은 알코올 섭취와 관련되는 것인 방법.
- 제187항에 있어서, 고중성지방혈증은 약물과 관련되는 것인 방법.
- 제187항에 있어서, 고중성지방혈증은 LPL 결핍에 의해 유발되는 것인 방법.
- 제192항에 있어서, 고중성지방혈증은 가족성 지질단백질 리파아제 결핍인 방법.
- 제192항 또는 제193항에 있어서, LPL 결핍은 LPL 유전자에서의 돌연변이에 의해 유발되는 것인 방법.
- 제194항에 있어서, 돌연변이는 감소된 LPL 효소 활성을 야기하는 것인 방법.
- 제194항에 있어서, 돌연변이는 부재하는 LPL 효소 활성을 야기하는 것인 방법.
- 제192항 내지 제196항 중 어느 한 항에 있어서, LPL 결핍은 환자의 혈청 내의 LPL 활성의 부재에 의해 진단되는 것인 방법.
- 제194항 내지 제196항 중 어느 한 항에 있어서, 돌연변이는 DNA 서열 분석에 검출되는 것인 방법.
- 제187항에 있어서, 고중성지방혈증은 apoC-II 결핍에 의해 유발되는 것인 방법.
- 제187항에 있어서, 고중성지방혈증은 상승된 apoC-III에 의해 유발되는 것인 방법.
- 제187항 내지 제200항 중 어느 한 항에 있어서, 환자의 치료전 혈청 트리글리세라이드(TG) 농도는 150 mg/dL 내지 199 mg/dL인 방법.
- 제187항 내지 제200항 중 어느 한 항에 있어서, 환자의 치료전 혈청 트리글리세라이드(TG) 농도는 200 mg/dL 내지 499 mg/dL인 방법.
- 제187항 내지 제200항 중 어느 한 항에 있어서, 환자의 치료전 혈청 트리글리세라이드(TG) 농도는 500 mg/dL 내지 999 mg/dL인 방법.
- 제187항 내지 제200항 중 어느 한 항에 있어서, 환자의 치료전 혈청 트리글리세라이드(TG) 농도는 1000 mg/dL 내지 1999 mg/dL인 방법.
- 제187항 내지 제200항 중 어느 한 항에 있어서, 환자의 치료전 혈청 트리글리세라이드(TG) 농도는 2000 mg/dL 이상인 방법.
- 제187항 내지 제205항 중 어느 한 항에 있어서, 환자는 급성 췌장염이 발병했거나 급성 췌장염 위험이 있는 것인 방법.
- 제187항 내지 제206항 중 어느 한 항에 있어서, 환자는 급성 심혈관 질환이 발병했거나 급성 심혈관 질환 위험이 있는 것인 방법.
- 펩타이드를 재조합으로 생산하는 단계를 포함하는, 제1항 내지 제184항 중 어느 한 항의 펩타이드를 제조하는 방법.
- 펩타이드를 화학적 합성에 의해 생산하는 단계를 포함하는, 제1항 내지 제184항 중 어느 한 항의 펩타이드를 제조하는 방법.
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