KR20190053467A - Anti-aging composition comprising culture or its extract of microorganism of serratia genus - Google Patents

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KR20190053467A
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Abstract

Disclosed in the present specification are an anti-aging composition comprising Serratia sp. microorganisms, a crushed product thereof, a culture thereof or an extract of the culture as active ingredients; and Serratia sp. Dolsongi-HT4 microorganisms with accession number KCCM12140P. The composition and the microorganisms are effective in reducing skin wrinkles, improving skin elasticity, collagen synthesis, elastin synthesis, antioxidant activities, and inhibiting elastin degradation.

Description

세라티아 속 미생물의 배양물 또는 이의 추출물을 유효성분으로 포함하는 항노화용 조성물{ANTI-AGING COMPOSITION COMPRISING CULTURE OR ITS EXTRACT OF MICROORGANISM OF SERRATIA GENUS}TECHNICAL FIELD [0001] The present invention relates to an anti-aging composition comprising a culture of a microorganism belonging to the genus Serratia or an extract thereof as an active ingredient.

본 명세서에는 세라티아 속(Serratia sp.) 미생물, 이의 파쇄물, 이의 배양물 또는 상기 배양물의 추출물을 유효성분으로 포함하는 항노화용 조성물이 개시된다.The term " Serratia " sp.) microorganism, a disruption thereof, a culture thereof or an extract of the above culture as an active ingredient.

노화를 촉진하는 원인들은 여러 가지가 있으나 그 중에서도 활성산소계 (ROS: Reactive Oxygen species)가 상당히 주요한 원인 중 하나인 것으로 받아들여지고 있다. 이러한 활성산소는 에너지 대사과정, 면역 반응 등에서 필수 불가결하게 생성되며, 외부의 유해 환경에 의해서도 유발되는 피할 수 없는 요소이다. 활성산소는 반응성이 매우 커서 체내에서 DNA 변성, 과도한 신호전달 유발 및 단백질 변성 등을 초래하여 건강에 해로운 영향을 누적하는 일련의 반응을 일으키게 된다. 이러한 유해한 반응들은 생체 내에 존재하는 항산화 물질 (uric acid, vit.C, vit.E 등) 또는 항산화 효소 (Glutathione peroxidase, superoxide dismutase, catalse 등)에 의해 정교하게 그 항상성을 유지하도록 되어 있다.There are many reasons for promoting aging, but Reactive Oxygen species (ROS) is considered to be one of the major causes. This active oxygen is indispensable for energy metabolism, immune response, etc., and is also an inevitable factor caused by external harmful environment. Active oxygen is highly reactive and causes a series of reactions in the body that cause DNA denaturation, induce excessive signal transduction, and protein denaturation, accumulating adverse health effects. These harmful reactions are supposed to preserve their homeostasis by antioxidants (uric acid, vit.C, vit.E etc.) or antioxidant enzymes (Glutathione peroxidase, superoxide dismutase, catalase, etc.) in vivo.

그러나, 내인성 노화에 따른 항산화 시스템의 노쇠와 지속적인 유해 자극에 의한 활성산소의 집적은 이러한 균형을 깨뜨려 건강을 해치게 되며, 노화를 촉진시키고 피부 질환, 피부암, 동맥경화 및 혈전 등과 같은 각종 질병을 유발하기도 한다.However, the aging of the antioxidant system due to endogenous aging and the accumulation of active oxygen by continuous noxious stimuli breaks this balance, harming health, promoting aging, causing various diseases such as skin diseases, skin cancer, arteriosclerosis and thrombosis do.

한편, 피부 진피층에 존재하는 콜라겐은 피부 전체 건조 중량의 약 70~80%를 차지하며, 탄력섬유인 엘라스틴과 함께 피부 탄력을 주관하는 것으로 알려져 있다. 이러한 콜라겐의 감소에 중요한 영향을 미치는 것이 MMP로서, 이는 세포외 기질 (extracellular matrix)과 기저막 (basement membrane)의 분해에 관여한다. 상기 효소는 노화 또는 자외선에 의해 활성이 증가되며, MMP를 억제함으로써 노화 또는 자외선에 의해 유도되는 피부 두께 증가, 주름 형성 등의 피부 노화 현상을 감소시킬 수 있다.On the other hand, the collagen existing in the dermal layer of the skin occupies about 70 ~ 80% of the dry weight of the skin, and it is known to control skin elasticity together with elastic fiber elastin. MMP plays an important role in collagen degradation, which is involved in the degradation of extracellular matrix and basement membrane. The enzyme increases activity by aging or ultraviolet rays, and by inhibiting MMP, it is possible to reduce skin aging phenomena such as skin thickness increase and wrinkle formation induced by aging or ultraviolet rays.

한국 공개특허공보 제10-2016-0097539호Korean Patent Publication No. 10-2016-0097539

일 측면에서, 본 명세서는 세라티아 속 (Serratia sp.) 미생물, 이의 파쇄물, 이의 배양물 또는 상기 배양물의 추출물을 유효성분으로 포함하는 항노화용 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.In one aspect, the present disclosure relates to the use of Serratia spp. It is an object of the present invention to provide a composition for anti-aging comprising microorganism, a disruption product thereof, a culture thereof or an extract of the culture as an active ingredient.

다른 측면에서, 본 명세서는 기탁번호가 KCCM12140P인 세라티아 속 돌송이-HT4 (Serratia sp. Dolsongi-HT4) 미생물을 제공하는 것을 목적으로 한다.In another aspect, the present disclosure is directed to providing a Serratia sp. Dolsongi-HT4 microorganism having a deposit number of KCCM12140P.

일 측면에서, 본 명세서에 개시된 기술은 세라티아 속 (Serratia sp.) 미생물, 이의 파쇄물, 이의 배양물 또는 상기 배양물의 추출물을 유효성분으로 포함하는 항노화용 조성물을 제공한다.In one aspect, the techniques disclosed herein are based on the genus Serratia sp.) microorganism, a disrupted product thereof, a culture thereof or an extract of the above culture as an active ingredient.

예시적인 일 구현예에서, 상기 조성물은 (a) 피부 주름 개선; (b) 피부 탄력 증진; (c) 콜라겐 합성 증진; (d) 엘라스틴 합성 증진; 및 (e) 엘라스틴 분해 억제 용도 중 하나 이상을 갖는 것일 수 있다.In an exemplary embodiment, the composition comprises (a) skin wrinkle improvement; (b) improving skin elasticity; (c) enhancing collagen synthesis; (d) Enhancing elastin synthesis; And (e) an elastin degradation inhibiting application.

예시적인 일 구현예에서, 상기 조성물은 항산화 용도를 갖는 것일 수 있다.In an exemplary embodiment, the composition may be one having antioxidant use.

예시적인 일 구현예에서, 상기 조성물은 DPPH 라디칼 소거 활성을 갖는 것일 수 있다.In an exemplary embodiment, the composition may be one having DPPH radical scavenging activity.

예시적인 일 구현예에서, 상기 미생물은 기탁번호가 KCCM12140P인 세라티아 속 돌송이-HT4 (Serratia sp. Dolsongi-HT4)인 것일 수 있다.In an exemplary embodiment, the microorganism may be Serratia sp. Dolsongi-HT4, which has the accession number KCCM12140P.

예시적인 일 구현예에서, 상기 미생물은 서열번호 1의 염기서열을 포함하는 16S rDNA를 갖는 것일 수 있다.In an exemplary embodiment, the microorganism may be one having 16S rDNA comprising the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1.

예시적인 일 구현예에서, 상기 배양물은 배양물의 여과액 또는 배양물을 원심분리한 배양 상등액일 수 있다.In an exemplary embodiment, the culture may be a filtrate of the culture or a culture supernatant in which the culture is centrifuged.

예시적인 일 구현예에서, 상기 추출물은 헥세인 (Hexane) 분획물, 메틸렌 클로라이드 (Methylene Chloride) 분획물, 에틸 아세테이트 (Ethyl Acetate) 분획물, 부탄올 (Butanol) 분획물 및 물 분획물로 이루어진 군에서 선택되는 1 이상인 것일 수 있다.In one exemplary embodiment, the extract is one or more selected from the group consisting of a Hexane fraction, a Methylene Chloride fraction, an Ethyl Acetate fraction, a Butanol fraction, and a water fraction .

예시적인 일 구현예에서, 상기 조성물은 화장료 조성물일 수 있다.In an exemplary embodiment, the composition may be a cosmetic composition.

다른 측면에서, 본 명세서에 개시된 기술은 세라티아 속 돌송이-HT4 (Serratia sp. Dolsongi-HT4) 미생물 (기탁번호 : KCCM12140P)을 제공한다.In another aspect, the technology disclosed herein provides a Serratia sp. Dolsongi-HT4 microorganism (Accession No. KCCM12140P).

예시적인 일 구현예에서, 상기 미생물은 서열번호 1의 염기서열을 포함하는 16S rDNA를 갖는 것일 수 있다.In an exemplary embodiment, the microorganism may be one having 16S rDNA comprising the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1.

예시적인 일 구현예에서, 상기 미생물은 항노화 용도를 갖는 것일 수 있다.In an exemplary embodiment, the microorganism may have anti-aging use.

예시적인 일 구현예에서, 상기 항노화 용도는 (a) 피부 주름 개선; (b) 피부 탄력 증진; (c) 콜라겐 합성 증진; (d) 엘라스틴 합성 증진; (e) 엘라스틴 분해 억제; 및 (f) 항산화 활성 용도 중 하나 이상을 갖는 것일 수 있다.In an exemplary embodiment, the anti-aging application comprises (a) improving skin wrinkles; (b) improving skin elasticity; (c) enhancing collagen synthesis; (d) Enhancing elastin synthesis; (e) inhibiting elastin degradation; And (f) an antioxidant activity application.

일 측면에서, 본 명세서에 개시된 기술은 세라티아 속 (Serratia sp.) 미생물, 이의 파쇄물, 이의 배양물 또는 상기 배양물의 추출물을 유효성분으로 포함하는 항노화용 조성물을 제공하는 효과가 있다.In one aspect, the techniques disclosed herein are based on the genus Serratia The present invention also provides an anti-aging composition comprising a microorganism, a disruption product thereof, a culture thereof or an extract of the culture as an active ingredient.

다른 측면에서, 본 명세서에 개시된 기술은 기탁번호가 KCCM12140P인 세라티아 속 돌송이-HT4 (Serratia sp. Dolsongi-HT4) 미생물을 제공하는 효과가 있다.In another aspect, the technique disclosed herein is effective to provide a Serratia sp. Dolsongi-HT4 microorganism with accession number KCCM12140P.

도 1은 세라티아 속 돌송이-HT4 (Serratia sp. Dolsongi-HT4)의 16S rDNA 부분 서열을 나타낸 것이다.
도 2는 세라티아 속 돌송이-HT4 (Serratia sp. Dolsongi-HT4) 배양물에 대한 항산화 활성 시험 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 세라티아 속 돌송이-HT4 (Serratia sp. Dolsongi-HT4) 배양물의 분획물에 대한 항산화 활성 시험 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 세라티아 속 돌송이-HT4 (Serratia sp. Dolsongi-HT4) 배양물의 분획물에 대한 항산화 활성 시험 결과를 나타낸 것이다.
도 5는 세라티아 속 돌송이-HT4 (Serratia sp. Dolsongi-HT4) 배양물에 의한 col1A1, elastin 유전자 발현량 분석 결과를 나타낸 것이다.
도 6은 세라티아 속 돌송이-HT4 (Serratia sp. Dolsongi-HT4) 배양물에 의한 프로콜라겐 I 펩타이드 합성량 분석 결과를 나타낸 것이다.
도 7은 세라티아 속 돌송이-HT4 (Serratia sp. Dolsongi-HT4) 배양물의 엘라스타제 억제 활성 시험 결과를 나타낸 것이다.
Figure 1 shows the 16S rDNA partial sequence of Serratia sp. Dolsongi-HT4.
Fig. 2 shows the results of antioxidant activity test on cultures of Serratia sp. Dolsongi-HT4.
Figure 3 shows the results of antioxidant activity test for fractions of Serratia sp. Dolsongi-HT4 cultures of the genus Serratia .
Figure 4 shows the antioxidant activity test results for fractions of Serratia sp. Dolsongi-HT4 cultures.
Fig. 5 shows the results of analysis of expression of col1A1 and elastin gene by cultures of Serratia sp. Dolsongi-HT4 ( Serratia sp. Dolsongi-HT4).
FIG. 6 shows the results of analysis of the amount of procollagen I peptide synthesized by a culture of Serratia sp. Dolsongi-HT4 ( Serratia sp. Dolsongi-HT4).
Fig. 7 shows the results of the elastase inhibitory activity test of a culture of Serratia sp. Dolsongi-HT4 ( Serratia sp. Dolsongi-HT4).

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

일 측면에서, 본 명세서에 개시된 기술은 세라티아 속 (Serratia sp.) 미생물, 이의 파쇄물, 이의 배양물 또는 상기 배양물의 추출물을 유효성분으로 포함하는 항노화용 조성물을 제공한다.In one aspect, the techniques disclosed herein are based on the genus Serratia sp.) microorganism, a disrupted product thereof, a culture thereof or an extract of the above culture as an active ingredient.

다른 측면에서, 본 명세서에 개시된 기술은 세라티아 속 돌송이-HT4 (Serratia sp. Dolsongi-HT4) 미생물 (기탁번호 : KCCM12140P)을 제공한다.In another aspect, the technology disclosed herein provides a Serratia sp. Dolsongi-HT4 microorganism (Accession No. KCCM12140P).

본 명세서에 따른 세라티아 속 (Serratia sp.) 미생물은 항노화 효능을 갖는 물질을 생산하여 항노화 용도를 제공하는 효과가 있다.The Serratia species according to the present invention sp.) microorganisms have the effect of producing a substance having an anti-aging effect and providing an anti-aging use.

본 명세서에 따른 미생물은 본 명세서가 속한 기술분야에서 공지된 통상적인 물리화학적 돌연변이 방법 등에 의해 이와 동등한 활성을 가지거나 또는 이보다 우수한 활성을 가지도록 개선 또는 개량된 것일 수 있다.The microorganism according to the present specification may be improved or improved so as to have an activity equivalent to or higher than that by the conventional physicochemical mutation method or the like known in the art to which the present specification belongs.

본 명세서에서 "유효성분"은 단독으로 목적으로 하는 활성을 나타내거나 또는 그 자체는 활성이 없는 담체 등과 함께 목적으로 하는 활성을 나타낼 수 있는 성분을 의미한다.As used herein, the term " active ingredient " refers to a component that can exhibit the desired activity alone, such as a carrier that exhibits the desired activity alone or is itself inactive.

본 명세서에서 "항노화용"은 유전적 요인 등을 포함하는 내적 요인과 자외선 등을 포함하는 외적 요인에 의해 발생하는 노화 현상을 예방, 지연 및/또는 개선하는 용도를 의미한다. 예를 들어, 노화에 따른 피부 변화 현상, 예컨대 피부 두께 증가, 피부 장벽 손상, 피부 탄력 감소, 주름 생성, 주름의 깊이나 수의 증가, 피부 건조, 거칠어짐, 자외선에 의한 피부 손상을 예방, 지연시키거나 개선, 완화하는 것을 의미한다. As used herein, the term " anti-aging " means an application for preventing, delaying, and / or improving the aging phenomena caused by internal factors including genetic factors and external factors including ultraviolet rays and the like. For example, skin changes due to aging such as skin thickness increase, skin barrier damage, skin elasticity reduction, wrinkle formation, increase in depth or number of wrinkles, skin dryness, roughness, , Or to improve or alleviate it.

예시적인 일 구현예에서, 상기 조성물은 광노화에 대한 항노화용 조성물인 것일 수 있다.In an exemplary embodiment, the composition may be an anti-aging composition for photoaging.

예시적인 일 구현예에서, 상기 조성물은 피부 주름을 개선하거나, 또는 피부 탄력을 증진시키는 항노화용 조성물인 것일 수 있다. 구체적으로, 상기 조성물은 주름의 생성 시기를 가능한 늦추어 주름 생성을 예방 또는 방지하거나, 이미 생성된 주름을 완화 또는 개선하는 효과가 있다. 또한, 상기 조성물은 피부 탄력 감소를 예방 또는 방지하거나, 피부 탄력을 증진 또는 개선하는 효과가 있다.In an exemplary embodiment, the composition may be an anti-aging composition that improves skin wrinkles or promotes skin elasticity. Specifically, the composition has the effect of preventing or preventing the generation of wrinkles by delaying the generation timing of wrinkles as much as possible, or alleviating or improving wrinkles that have already been generated. In addition, the composition has the effect of preventing or preventing skin elasticity reduction, or improving or improving skin elasticity.

예시적인 일 구현예에서, 상기 조성물은 콜라겐 분해를 억제하거나 콜라겐 합성을 증진시키는 것일 수 있다.In an exemplary embodiment, the composition may be one that inhibits collagen degradation or promotes collagen synthesis.

예시적인 일 구현예에서, 상기 조성물은 엘라스틴 분해를 억제하는 것일 수 있다.In an exemplary embodiment, the composition may be one that inhibits elastin degradation.

예시적인 일 구현예에서, 상기 조성물은 엘라스타제의 발현을 억제하거나 또는 본 명세서의 조성물에 의해 미미하게 발현된 엘라스타제의 활성을 저해하는 것일 수 있다. 다른 측면에서, 상기 조성물은 엘라스타제의 발현 또는 활성을 저해하는 상위 (up-stream)의 효소 또는 단백질과 같은 물질에도 특정 효과를 가져올 수 있다.In an exemplary embodiment, the composition may be one that inhibits the expression of elastase or inhibits the activity of elastase that is minimally expressed by the compositions herein. In another aspect, the composition may also have specific effects on substances such as up-stream enzymes or proteins that inhibit the expression or activity of elastase.

본 명세서에서 "항산화용"은 활성산소종이 일으키는 질병 또는 증상의 개선, 치료 및 상기 질병 또는 증상의 발병 억제, 지연 용도를 의미한다.As used herein, " antioxidant " means to ameliorate, treat and ameliorate the delayed use of the disease or condition causing the active oxygen species.

예시적인 일 구현예에서, 상기 조성물은 DPPH 라디칼 소거 활성을 갖는 것일 수 있다.In an exemplary embodiment, the composition may be one having DPPH radical scavenging activity.

상기 파쇄물은 미생물 자체를 화학적 또는 물리적 힘에 의하여 파쇄하여 얻은 산물을 의미할 수 있다.The crushed product may mean a product obtained by crushing the microorganism itself by chemical or physical force.

상기 배양물은 배양물의 형태를 불문하고 미생물을 배양한 배지 내에 포함되어 있는 일부 또는 모든 물질을 포함하는 물질을 의미할 수 있으며, 예컨대 미생물 배양의 결과물인 대사물 또는 분비물을 포함하는 물질 또는 그 파쇄물을 의미할 수 있고, 미생물 자체도 배양물 내에 포함되어 있을 수 있다.The culture may refer to a substance including some or all of the substances contained in the medium in which the microorganism has been cultured, regardless of the form of the culture. For example, a substance containing metabolites or secretions resulting from the microbial culture or a fragment thereof , And the microorganism itself may be contained in the culture.

예시적인 일 구현예에서, 상기 배양물은 본 명세서에 따른 미생물을 적합한 액체 배지에서 배양한 배양액 자체, 상기 배양액을 여과 또는 원심분리하여 미생물을 제거한 여액 (여과액 또는 원심분리한 상등액), 상기 배양액을 초음파 처리하거나 상기 배양액에 용해효소 (lysozyme)를 처리하여 수득한 세포 파쇄액 등을 포함할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 일 측면에서, 상기 배양물은 세포를 파쇄하여 수득한 물질이 아닌, 배양물의 여과액 또는 배양물을 원심분리한 배양 상등액인 것이 바람직할 수 있다.In an exemplary embodiment, the culture may be a culture medium itself in which the microorganism according to the present invention is cultured in a suitable culture medium, a filtrate (filtrate or centrifuged supernatant) from which the microorganism has been removed by filtration or centrifugation of the culture medium, Or a cell lysate obtained by treating the culture broth with a lysozyme, but the present invention is not limited thereto. In one aspect, it may be preferred that the culture is a culture supernatant obtained by centrifuging the filtrate or culture of the culture, but not the material obtained by breaking down the cells.

상기 추출물은 추출 방법, 추출 용매, 추출된 성분 또는 추출물의 형태를 불문하고 상기 배양물을 추출하여 얻어진 산물을 의미할 수 있으며, 추출 후 다른 방법으로 가공 또는 처리하여 얻어질 수 있는 물질을 모두 포함하는 광범위한 개념이다.The extract may be a product obtained by extracting the culture regardless of the extraction method, the extraction solvent, the extracted component or the form of the extract, and includes all substances that can be obtained by processing or treating with other methods after extraction Is a broad concept.

예시적인 일 구현예에서, 상기 추출물은 헥세인 (Hexane), 메틸렌 클로라이드 (Methylene Chloride), 에틸 아세테이트 (Ethyl Acetate) 및 부탄올 (Butanol)의 순서로 순차적으로 분획하여 얻은 헥세인 분획물, 메틸렌 클로라이드 분획물, 에틸 아세테이트 분획물 및 부탄올 분획물로 이루어진 군에서 선택되는 1 이상인 것일 수 있다.In one exemplary embodiment, the extract is a hexane fraction, a methylene chloride fraction, a hexane fraction, and a hexane fraction obtained by sequentially fractionating in the order of hexane, methylene chloride, ethyl acetate and butanol, Ethyl acetate fraction, and butanol fraction.

예시적인 일 구현예에서, 상기 추출물은 물 분획물인 것일 수 있다.In an exemplary embodiment, the extract may be a water fraction.

예시적인 일 구현예에서, 상기 유효성분은 조성물 전체 중량을 기준으로 0.001 내지 10 중량%로 포함된 것일 수 있다.In an exemplary embodiment, the active ingredient may be included in an amount of 0.001 to 10% by weight based on the total weight of the composition.

예시적인 일 구현예에서, 상기 조성물은 화장료 조성물인 것일 수 있다.In an exemplary embodiment, the composition may be a cosmetic composition.

상기 화장료 조성물에는 유효성분 이외에 기능성 첨가물 및 일반적인 화장료 조성물에 포함되는 성분이 추가로 포함될 수 있다. 상기 기능성 첨가물로는 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 성분을 포함할 수 있다. 이외에 포함되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한 (制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다.The cosmetic composition may further contain, in addition to the active ingredient, a functional additive and a component included in a general cosmetic composition. The functional additives may include water-soluble vitamins, oil-soluble vitamins, polymer peptides, polymeric polysaccharides, sphingolipids and seaweed extracts. Examples of the other ingredients that can be included in the composition include humectants, emollients, surfactants, organic and inorganic pigments, organic powders, ultraviolet absorbents, preservatives, bactericides, antioxidants, plant extracts, pH adjusters, alcohols, Accelerators, coolants, antiperspirants, purified water, and the like.

상기 화장료 조성물은 제형이 특별히 한정되지 않으며, 목적하는 바에 따라 적절히 선택할 수 있다. 예를 들어, 분말, 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 샴푸, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클렌저로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 제형으로 제조될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.The formulation of the cosmetic composition is not particularly limited and may be appropriately selected according to the purpose. For example, powder, skin lotion, skin softener, skin toner, astringent, lotion, milky lotion, moisturizing lotion, nutrition lotion, massage cream, nutritional cream, moisturizing cream, hand cream, foundation, essence, nutrition essence, pack, shampoo , A soap, a cleansing foam, a cleansing lotion, a cleansing cream, a body lotion and a body cleanser, but the present invention is not limited thereto.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a paste, cream or gel, animal fiber, plant fiber, wax, paraffin, starch, tracant, cellulose derivative, polyethylene glycol, silicone, bentonite, silica, talc or zinc oxide may be used as the carrier component .

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.When the formulation of the present invention is a powder or a spray, lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate or polyamide powder may be used as a carrier component. In the case of a spray, in particular, / Propane or dimethyl ether.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.In the case of the solution or emulsion of the present invention, a solvent, a solvent or an emulsifier is used as a carrier component, and examples thereof include water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, propylene glycol, , 3-butyl glycol oil, glycerol aliphatic ester, polyethylene glycol or sorbitan fatty acid esters.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a suspension, a carrier such as water, a liquid diluent such as ethanol or propylene glycol, a suspending agent such as ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol ester and polyoxyethylene sorbitan ester, Cellulose, aluminum metahydroxide, bentonite, agar or tracant, etc. may be used.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is an interfacial active agent-containing cleansing, the carrier component is selected from aliphatic alcohol sulfate, aliphatic alcohol ether sulfate, sulfosuccinic acid monoester, isethionate, imidazolinium derivative, methyltaurate, sarcosinate, fatty acid amide Ether sulfates, alkylamidobetaines, aliphatic alcohols, fatty acid glycerides, fatty acid diethanolamides, vegetable oils, linolenic derivatives or ethoxylated glycerol fatty acid esters.

본 발명의 제형이 비누인 경우에는 담체 성분으로서 지방산의 알칼리 금속염, 지방산 헤미에스테르염, 지방산 단백질 히드롤리제이트, 이세티오네이트, 라놀린 유도체, 지방족 알코올, 식물성 유, 글리세롤, 당 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a soap, an alkali metal salt of a fatty acid, a fatty acid hemiester salt, a fatty acid protein hydrolizate, isethionate, a lanolin derivative, an aliphatic alcohol, a vegetable oil, glycerol, have.

예시적인 일 구현예에 따르면, 상기 조성물은 약학 조성물인 것일 수 있다.According to one exemplary embodiment, the composition may be a pharmaceutical composition.

상기 약학 조성물은 유효성분 이외에 방부제, 안정화제, 수화제 또는 유화 촉진제, 삼투압 조절을 위한 염 및/또는 완충제 등의 약제학적 보조제 및 기타 치료적으로 유용한 물질을 추가로 함유할 수 있으며, 통상적인 방법에 따라 다양한 경구 투여제 또는 비경구 투여제 형태로 제형화할 수 있다.The pharmaceutical composition may further contain, in addition to the active ingredient, a preservative, a stabilizer, a wetting agent or an emulsifying accelerator, a pharmaceutical adjuvant such as a salt and / or a buffer for controlling osmotic pressure, and other therapeutically useful substances, And can be formulated into various oral or parenteral dosage forms accordingly.

상기 경구 투여제는 예를 들면, 정제, 환제, 경질 및 연질 캅셀제, 액제, 현탁제, 유화제, 시럽제, 분제, 산제, 세립제, 과립제, 펠렛제 등이 있으며, 이들 제형은 유효성분 이외에 계면 활성제, 희석제 (예: 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 만니톨, 솔비톨, 셀룰로오스 및 글리신), 활택제 (예: 실리카, 탈크, 스테아르산 및 그의 마그네슘 또는 칼슘염 및 폴리에틸렌 글리콜)를 함유할 수 있다. 정제는 또한 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분페이스트, 젤라틴, 트라가칸스, 메틸셀룰로오스, 나트륨 카복시메틸셀룰로오스 및 폴리비닐피롤리딘과 같은 결합제를 함유할 수 있으며, 경우에 따라 전분, 한천, 알긴산 또는 그의 나트륨 염과 같은 붕해제, 흡수제, 착색제, 향미제, 및 감미제 등의 약제학적 첨가제를 함유할 수 있다. 상기 정제는 통상적인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 의해 제조될 수 있다.Examples of the oral administration agent include tablets, pills, hard and soft capsules, liquids, suspensions, emulsions, syrups, powders, powders, granules, granules and pellets, , Diluents (such as lactose, dextrose, sucrose, mannitol, sorbitol, cellulose and glycine), lubricants (such as silica, talc, stearic acid and magnesium or calcium salts thereof and polyethylene glycols) . The tablets may also contain binders such as magnesium aluminum silicate, starch paste, gelatin, tragacanth, methylcellulose, sodium carboxymethylcellulose and polyvinylpyrrolidine, optionally mixed with starch, agar, alginic acid or its sodium salt Such as disintegrants, absorbents, coloring agents, flavoring agents, and sweetening agents. The tablets may be prepared by conventional mixing, granulating or coating methods.

또한, 상기 비경구 투여 형태로는 경피 투여형 제형일 수 있으며, 예를 들어 주사제, 점적제, 연고, 로션, 겔, 크림, 스프레이, 현탁제, 유제, 좌제 (坐劑), 패취 등의 제형일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In addition, the parenteral administration forms may be transdermal dosage forms, and may be formulations such as injections, drops, ointments, lotions, gels, creams, sprays, suspensions, emulsions, suppositories, But is not limited thereto.

상기 유효성분의 투여량 결정은 통상의 기술자의 수준 내에 있으며, 약물의 1일 투여 용량은 투여하고자 하는 대상의 진행 정도, 발병 시기, 연령, 건강상태, 합병증 등의 다양한 요인에 따라 달라지지만, 성인을 기준으로 할 때 일 측면에서 상기 조성물 1 ㎍/kg 내지 200 mg/kg, 다른 일 측면에서 50 ㎍/kg 내지 50 mg/kg을 1일 1 내지 3회 분할하여 투여할 수 있으며, 상기 투여량은 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것이 아니다.The dosage of the active ingredient is within the level of ordinary skill in the art and the daily dose of the drug depends on various factors such as the degree of progress of the subject to be administered, the age of onset, age, health condition, The composition may be administered in an amount of 1 / / kg to 200 mg / kg in one aspect, and 50 / / kg to 50 mg / kg in another aspect, divided into 1 to 3 times a day, Are not intended to limit the scope of the invention in any way.

상기 약학 조성물은 피부 외용제일 수 있으며, 상기 피부 외용제는 피부 외부에서 도포되는 어떠한 것이라도 포함될 수 있는 총칭으로서 다양한 제형의 의약품이 여기에 포함될 수 있다.The pharmaceutical composition may be an external preparation for skin, and the external preparation for skin may include any substance applied outside the skin, and may include various formulations of medicines.

예시적인 일 구현예에 따르면, 상기 조성물은 식품 조성물인 것일 수 있다.According to one exemplary embodiment, the composition may be a food composition.

상기 식품 조성물은 액상 또는 고체 상태의 제형일 수 있고, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류 등이 있고, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료인 형태로 사용될 수 있다. 각 제형의 식품 조성물은 유효성분 이외에 해당 분야에서 통상적으로 사용되는 성분들을 제형 또는 사용 목적에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있으며, 다른 원료와 동시에 적용할 경우 상승 효과가 일어날 수 있다.The food composition may be in a liquid or solid form and may be in the form of, for example, various foods, beverages, gums, tea, vitamin complexes, health supplements and the like and may be in the form of powders, granules, tablets, capsules or beverages . The food composition of each formulation can be blended with the ingredients commonly used in the field in addition to the active ingredient without difficulty by those skilled in the art depending on the purpose of formulation or use, and synergistic effect can be obtained when the composition is applied simultaneously with other ingredients.

본 명세서에 개시된 유효성분 외에 함유할 수 있는 액체 성분에는 특별한 제한점이 없으며, 통상의 음료와 같이 여러가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가성분으로 포함할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 예로는 모노사카라이드, 포도당, 과당 등의 디사카라이드, 말토스, 슈크로스 등의 폴리사카라이드, 덱스트린, 시클로덱스트린 등의 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당 알코올 등이 있다. 상기의 향미제로는 천연 향미제 (예를 들어 타우마틴, 스테비아 추출물, 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제 (예를 들어 사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 명세서에 개시된 조성물 100 ml 당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 일 측면에서 약 5 내지 12 g일 수 있다.There are no particular limitations on the liquid components that can be contained in addition to the active ingredients disclosed in this specification, and may include various flavoring agents or natural carbohydrates such as ordinary beverages as additional ingredients. Examples of the natural carbohydrate include common saccharides such as disaccharides such as monosaccharide, glucose and fructose, polysaccharides such as maltose and sucrose, dextrin and cyclodextrin, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol and erythritol . As the above flavorings, natural flavors (e.g., tau martin, stevia extract, rebaudioside A, glycyrrhizin, etc.) and synthetic flavors (e.g., saccharin, aspartame, etc.) . The ratio of the natural carbohydrate may be generally about 1 to 20 g, and in one aspect about 5 to 12 g per 100 ml of the composition disclosed herein.

상기 식품 조성물은 일 측면에서 여러 가지 영양제, 비타민, 광물 (전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제 (치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그 염, 알긴산 및 그 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 포함할 수 있다. 다른 측면에서 천연 과일 주스 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 포함할 수 있다. 상기 성분들은 독립적으로 또는 조합하여 사용될 수 있다. 상기 첨가제의 비율은 다양할 수 있으나, 본 명세서에 개시된 조성물 100 중량부 당 0.001 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.In one aspect, the food composition may include flavors such as various nutrients, vitamins, minerals (electrolytes), synthetic flavors and natural flavors, colorants and heavies (cheese, chocolate, etc.), pectic acid and its salts, Salts, organic acids, protective colloid thickeners, pH adjusting agents, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohols, carbonating agents used in carbonated drinks, and the like. On the other hand, flesh for the production of natural fruit juices and vegetable beverages. These components can be used independently or in combination. The proportion of the additive may vary, but is generally selected in the range of from 0.001 to about 20 parts by weight per 100 parts by weight of the composition disclosed herein.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples. It is to be understood by those skilled in the art that these embodiments are merely illustrative of the present invention and that the scope of the present invention is not construed as being limited by these embodiments.

시험예 1.항산화 활성을 갖는 미생물의 분리Test Example 1. Isolation of microorganisms having antioxidative activity

한국 제주도 돌송이 차밭의 지하수로부터 하기와 같이 항산화 활성을 갖는 미생물을 분리하였다. The microorganisms having antioxidant activity were isolated from the ground water of the stone paddy field in Jeju Island, Korea as follows.

미생물 배양에 일반적으로 사용되는 LB (Luria-Bertani), NB (Nutrient Broth), BHI (Brain heart infusion), YPD (Yeast extract-peptone-Dextrose) 고체 배지에 수자원으로부터 얻은 미생물을 도말하여 30 ℃ 또는 37 ℃ 정치 배양기에서 배양하였다. 배양 후 고체 배지에서 성장한 다양한 미생물을 액체 배지 (3 ml)에서 24 시간 동안 배양한 다음, 원심분리기를 통해 세포를 제거하고 배양액을 얻었다. 얻어진 배양액은 DPPH assay를 통해 항산화력을 측정하였다.Microorganisms obtained from water sources are plated on LB (Luria-Bertani), Nutrient Broth (NB), Brain Heart Infusion (BHI) and Yeast extract-peptone-Dextrose (YPD) Lt; / RTI > incubator. After culturing, various microorganisms grown in solid medium were cultured in liquid medium (3 ml) for 24 hours, and then the cells were removed through a centrifuge to obtain a culture solution. Antioxidant activity was measured by DPPH assay.

상기와 같이 미생물을 배양하여 DPPH assay를 통해 항산화 활성이 높은 미생물을 선별할 수 있었다. 유기 용매에 녹인 DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) 라디칼은 515 nm에서 최대 흡광도를 가지게 되는데, 항산화 물질은 DPPH 라디칼을 소거하여 고유의 색을 잃고 투명하게 변화시킨다. The microorganisms were cultured as described above, and microorganisms having high antioxidative activity could be selected through the DPPH assay. DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) radicals dissolved in organic solvents have the maximum absorbance at 515 nm. Antioxidants dissolve DPPH radicals and lose their intrinsic color and change their transparency.

본 명세서에서 DPPH assay는 다음과 같다. DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) 100 μM과 처리할 물질의 시료 준비하고, 준비된 시료를 DPPH 용액과 1:20의 비율로 섞어 30분간, 37 ℃에서 보관하였다. 이후, 반응이 끝난 시료를 Spectrophotometer를 이용하여 517 nm에서 흡광도를 측정하였다. 흡광도가 낮을수록 항산화력이 높은 것을 의미한다.Herein, the DPPH assay is as follows. 100 μM of DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) and samples to be treated were prepared, and the prepared samples were mixed at a ratio of 1:20 with DPPH solution and stored at 37 ° C. for 30 minutes. After that, the absorbance of the reacted sample was measured at 517 nm using a spectrophotometer. The lower the absorbance, the higher the antioxidant power.

시험예Test Example 2. 분리된 미생물의 동정 2. Identification of isolated microorganisms

상기 시험예 1에서 분리한 항산화 활성이 높은 미생물을 동정하기 위해, 미생물의 16S ribosomal RNA 부분 서열을 암호화하는 DNA 서열을 분석하였다. In order to identify the microorganism having high antioxidative activity, which was isolated in Test Example 1, a DNA sequence encoding the 16S ribosomal RNA partial sequence of the microorganism was analyzed.

미생물을 액체 배지에서 배양시킨 후, 미생물로부터 genomic DNA를 추출하여 일반적으로 박테리아 동정에 사용되는 27F (5'-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3', 서열번호 2)/1492R (5'-TACGGYTACCTTGTTACGACTT-3', 서열번호 3) 프라이머를 사용하여 PCR (polymerase chain reaction) 방법으로 증폭시키고 이의 서열을 분석하였다.After the microorganisms were cultured in a liquid medium, genomic DNA was extracted from the microorganisms to obtain 27F (5'-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3 ', SEQ ID NO: 2) / 1492R (5'-TACGGYTACCTTGTTACGACTT-3' 3) amplification by PCR (polymerase chain reaction) method using primers and its sequence was analyzed.

염기서열 분석 결과, Serratia sp. Se40의 16S ribosomal RNA 부분 서열과 99%의 상동성을 갖는 것으로 나타났다.Sequence analysis showed that Serratia sp. And 99% homology to the 16S ribosomal RNA partial sequence of Se40.

이에, 본 명세서에서 분리 및 배양된 신규한 미생물 균주는 16S rDNA 염기서열에 기초한 분자계통분류학적 분석을 통하여 세라티아 속 (Serratia sp.)임을 확인하였으며, 이를 세라티아 속 돌송이-HT4 (Serratia sp. Dolsongi-HT4)로 명명하고, 상기 신규한 미생물 균주를 2017년 10월 26일자로 기탁기관인 한국미생물보존센터에 기탁번호 KCCM12140P로 기탁하였다. 서열번호 1의 세라티아 속 돌송이-HT4 (Serratia sp. Dolsongi-HT4) 16S rDNA partial sequence는 도 1에 나타내었다.Thus, the novel microorganism strains isolated and cultivated in this specification were confirmed to be Serratia sp. By molecular system taxonomic analysis based on the 16S rDNA nucleotide sequence, and it was confirmed that Serratia sp Dolsongi-HT4), and the novel microorganism strain was deposited on October 26, 2017 with the deposit number KCCM12140P in the Korean Society for Microbiological Care, which is a depository institution. The partial sequence of Serratia sp. Dolsongi-HT4 16S rDNA of SEQ ID NO: 1 is shown in Fig.

시험예 3. 세라티아 속 돌송이-HT4 (Experimental Example 3: Streptomyces sp. SerratiaSerratia sp. Dolsongi-HT4) 배양물의 항산화 활성 sp. Antioxidant activity of Dolsongi-HT4) culture

상기 시험예 2에서 동정한 미생물을 1% 글루코즈를 포함하는 M9 배지 (CaCl2 0.015 g/L, Na2HPO4 6.78 g/L, KH2PO4 3 g/L, NaCl 0.5 g/L, NH4Cl 1 g/L, MgSO4 0.5 g/L, Glucose 1%(w/v))에서 15시간 동안 배양한 후, 배양물을 5,000 rpm에서 10분간 원심분리하여 상등액을 수득하였다. 수득한 상등액은 DPPH assay를 통해 항산화 활성을 측정하였다.The microorganisms identified in Test Example 2 were dissolved in M9 medium (CaCl 2 0.015 g / L, Na 2 HPO 4 6.78 g / L, KH 2 PO 4 3 g / L, NaCl 0.5 g / L, NH 4 Cl 1 g / L, MgSO 4 0.5 g / L, Glucose 1% (w / v)) for 15 hours and then the culture was centrifuged at 5,000 rpm for 10 minutes to obtain a supernatant. The obtained supernatant was assayed for antioxidative activity by DPPH assay.

그 결과, 도 2에서 보는 바와 같이, 상기 배양물은 항산화능이 있는 것으로 알려져 있는 ascorbic acid을 1.25 내지 5 ppm의 농도로 포함하고 있는 시료들 (AA-5, AA-2.5, AA-1.25)과 대비하여 유사한 효과 내지는 현저하게 우수한 효과가 있는 것을 확인하였다.As a result, as shown in FIG. 2, the cultures were compared with samples (AA-5, AA-2.5, AA-1.25) containing ascorbic acid at a concentration of 1.25 to 5 ppm It was confirmed that similar effects or remarkably excellent effects were obtained.

시험예 4. 세라티아 속 돌송이-HT4 (Test Example 4. Streptomyces sp. SerratiaSerratia sp. Dolsongi-HT4) 배양물로부터 얻은 분획물의 항산화 활성 1 sp. Antioxidant activity of fractions from Dolsongi-HT4) cultures 1

상기 시험예 3에서 수득한 배양물, 즉 배양물로부터 미생물을 제거하기 위해 배양물을 원심분리한 배양 상등액으로부터 4가지 용매 (n-Hexane (Hex), Methylene Chloride (MC), Ethyl Acetate (EA), n-Butanol (BuOH))를 이용하여 Hex, MC, EA, BuOH의 순서로 순차적으로 분획물을 제조하였다. (N-Hexane (Hex), Methylene Chloride (MC), Ethyl Acetate (EA)) from the culture supernatant obtained by centrifuging the culture to remove the microorganism from the culture obtained in Test Example 3, , n-Butanol (BuOH)), fractions of Hex, MC, EA and BuOH were sequentially prepared.

구체적으로, 시료와 동일한 양 (1:1 (v/v))의 용매를 섞은 후, 약 3시간 동안 정치하여 층분리를 하였다. 층분리된 시료의 물 분획 부분과 용매 분획 부분을 각각 분리한 후, 물 분획 부분에 다시 다음 순서의 용매를 동일한 양으로 섞어 앞의 방법을 반복하여 총 5개의 분획물 (Hex, MC, EA, BuOH, water)을 획득하였다. 분리된 분획물은 진공회전농축기 (rotary evaporator)를 이용하여 용매를 휘발시키고 건조된 상태로 농축하였다. 이와 같이 준비된 시료는 DPPH assay를 통해 항산화 효능 비교 실험을 진행하였다.Concretely, the same amount (1: 1 (v / v)) of the solvent as the sample was mixed, and the mixture was allowed to stand for about 3 hours to separate the layers. The water fraction and the solvent fraction of the layered sample were separated, and the water fraction was mixed with the same amount of the following solvent in the same manner. The above procedure was repeated to obtain a total of five fractions (Hex, MC, EA, BuOH , water). The separated fractions were evaporated using a rotary evaporator and concentrated to dryness. The DPPH assay was used to compare the antioxidant efficacy of the prepared samples.

그 결과, 도 3에서 보는 바와 같이, 상기 배양 상등액의 분획물은 항산화능이 있는 것으로 알려져 있는 ascorbic acid을 2.5 내지 10 ppm의 농도로 포함하고 있는 시료들 (AA-10, AA-5, AA-2.5)과 대비하여 유사한 효과 내지는 현저하게 우수한 효과가 있는 것을 확인하였다. 특히, 메틸렌 클로라이드 분획물 및 상기 배양 상등액으로부터 유기용매 분획 후 얻어진 수용액층인 물 분획물에는 항산화 물질이 다량 함유되어 있음을 알 수 있었다. As a result, as shown in FIG. 3, the fractions of the supernatant of the culture contained samples (AA-10, AA-5, AA-2.5) containing ascorbic acid at a concentration of 2.5 to 10 ppm, It was confirmed that similar effects or remarkably excellent effects were obtained. In particular, it was found that a large amount of antioxidant substances were contained in the methylene chloride fraction and the water fraction as an aqueous solution layer obtained after fractionation of the organic solvent from the culture supernatant.

시험예 5. 세라티아 속 돌송이-HT4 (Experimental Example 5 [0060] SerratiaSerratia sp. Dolsongi-HT4) 배양물로부터 얻은 분획물의 항산화 활성 2 sp. Antioxidant activity of fractions from Dolsongi-HT4) cultures 2

상기 시험예 3에서 수득한 배양물을 에틸아세테이트 용매를 이용하여 분획한 후, C18 컬럼을 사용하여 분리정제한 다음, 유기용매를 제거하고 건조한 시료에 대해 하기와 같은 항산화 활성을 측정하였다.The culture obtained in Test Example 3 was fractionated using an ethyl acetate solvent, and then separated and purified using a C18 column. Then, the organic solvent was removed, and the following antioxidant activity was measured on the dried sample.

구체적으로, 0.25 ml의 DPPH 용액 (0.1 mM of DPPH in methanol)을 다양한 농도의 시료 (test samples) 0.75 ml과 혼합하여, DPPH (1-diphenyl-2-picryl-hydazil) 자유 라디칼 소거능 분석을 수행하였다. 혼합물을 상온에 3시간 동안 인큐베이션 (incubation)한 다음, 흡광도는 자외선-가시광선 분광광도계 (UV-Visible spectrophotometer (SCINCO))를 이용하여 517 nm에서 측정하였다. 시료가 포함되지 않거나, 시판 중인 부틸레이티드 하이드록시아니솔 (butylated hydroxyanisole, BHA)과 혼합한 반응 혼합물을 각각 음성 (negative) 및 양성 (positive controls) 대조군으로 사용하였고, 3회 반복하여 시험하고 데이터를 평균하여 표준편차를 계산하였다. Specifically, a DPPH (1-diphenyl-2-picryl-hydazil) free radical scavenging assay was performed by mixing 0.25 ml of DPPH solution (0.1 mM of DPPH in methanol) with 0.75 ml of various concentrations of test samples . The mixture was incubated at room temperature for 3 hours and the absorbance was measured at 517 nm using an ultraviolet-visible spectrophotometer (SCINCO). A reaction mixture containing no sample or mixed with commercially available butylated hydroxyanisole (BHA) was used as a negative and positive controls, respectively, To calculate the standard deviation.

그 결과, 상기 배양물로부터 얻은 분획물은 DPPH 자유 라디칼 소거능 (free radical scavenging activity) 측면에서 1.35 ㎍/ml의 IC50 value를 갖는 매우 강한 항산화능을 갖는 것을 확인하였다 (도 4 참조).As a result, it was confirmed that the fraction obtained from the culture had a very strong antioxidant ability with an IC 50 value of 1.35 / / ml in terms of DPPH free radical scavenging activity (see FIG. 4).

시험예 6. 세라티아 속 돌송이-HT4 (Experimental Example 6 [0060] SerratiaSerratia sp. Dolsongi-HT4) 배양물로부터 얻은 분획물이 피부 매트릭스 단백질에 미치는 영향 sp. Effect of Fractions from Dolsongi-HT4 Cultures on Skin Matrix Proteins

상기 시험예 4에서 수득한 배양물로부터 얻은 분획물, 구체적으로 메틸렌 클로라이드 분획물이 섬유아세포에서 콜라겐 (Col1A1), 엘라스틴 (elastin)의 유전자 발현량 및 프로콜라겐 타입 I의 합성량에 미치는 영향을 확인하였다. 콜라겐은 세포 내에서 프로콜라겐으로 합성된 후 세포 외로 분비되어 콜라겐 섬유로 중합되고, 이때 프로콜라겐의 N-말단 및 C-말단의 프로펩타이드가 엔도펩티데이즈에 의해 유리된다. 본 시험예에서는 Human procollagen I peptide (PIP) kit를 이용하여 PIP를 정량 (단위; ng/ml)하였다.The effect of the fraction obtained from the culture obtained in Test Example 4, specifically methylene chloride fraction, on the amount of expression of collagen (Col1A1), elastin gene expression and the amount of procollagen type I in fibroblast was examined. Collagen is synthesized in the cells as procollagen, secreted extracellularly and polymerized into collagen fibers, wherein the N-terminal and C-terminal propeptides of the procollagen are released by endopeptidase. In this test, PIP was quantified (unit: ng / ml) using human procollagen I peptide (PIP) kit.

구체적으로, NHDF (Normal Human Dermal Fibroblast) cell을 6 well plate에 4×105 cell/well로 배양하였다. 24시간 후 UVB 50 ml/cm2를 조사한 다음 serum-free media에 분획물을 희석한 후 각 well에 처리하였다. 24시간 후 Trizol을 이용하여 세포를 녹인 후 total RNA를 추출하여 cDNA로 변환한 후, qPCR을 통해 colA1, elastin 유전자 발현을 확인하였다.Specifically, NHDF (Normal Human Dermal Fibroblast) cells were cultured on a 6-well plate at 4 × 10 5 cells / well. After 24 hours, UVB 50 ml / cm 2 was irradiated and the fractions were diluted in serum-free media and treated in each well. Twenty-four hours later, Trizol was used to dissolve the cells. Total RNA was extracted and transformed into cDNA. The expression of colA1 and elastin gene was confirmed by qPCR.

그 결과, NHDF (Normal Human Dermal Fibroblast) 세포에 UVB 50 mJ/cm2를 조사하여 감소된 col1A1과 elastin 유전자 발현량을 상기 분획물 2 μg/ml 이상 처리 시 100% 이상 증가시키는 것을 확인하였다 (도 5 참조). 또한, 프로콜라겐 타입 I 합성량도 상기 분획물 2 μg/ml 이상 처리 시 100% 이상 증가시키는 것을 확인하였다 (도 6 참조). As a result, it was confirmed that irradiation of UVB 50 mJ / cm 2 with NHDF (Normal Human Dermal Fibroblast) cells increased the amount of reduced col1A1 and elastin gene expression by 100% or more when the fraction was treated at 2 μg / ml or more Reference). In addition, it was confirmed that the amount of procollagen type I synthesized was increased by 100% or more when the fraction was treated at 2 μg / ml or more (see FIG. 6).

시험예 7. 세라티아 속 돌송이-HT4 (Test Example 7: SerratiaSerratia sp. Dolsongi-HT4) 배양물로부터 얻은 분획물이 피부 매트릭스 분해 효소에 미치는 영향 sp. Effect of Fractions from Dolsongi-HT4 Cultures on Skin Matrix Degrading Enzymes

상기 시험예 4에서 수득한 배양물로부터 얻은 분획물, 구체적으로 메틸렌 클로라이드 분획물이 엘라스타제 활성에 미치는 영향을 확인하였다. 엘라스타제 (elastase)는 피부의 진피 조직 속에서 피부의 탄력성을 조절하는 그물망 구조를 형성하는 단백질 중의 하나인 엘라스틴을 분해하는 효소이다. 따라서 이 효소의 활성을 저해하게 되면 피부 노화를 억제할 수 있다.The effect of the fraction obtained from the culture obtained in Test Example 4, specifically the methylene chloride fraction, on elastase activity was confirmed. Elastase is an enzyme that degrades elastin, one of the proteins that form a network structure that regulates the elasticity of the skin in the dermal tissue of the skin. Therefore, inhibition of the activity of this enzyme can inhibit skin aging.

0.4M Tris-HCl buffer (pH 8.6) 50 μl, 시료 50 μl, 동일 buffer로 희석시킨 0.6 U/ml elastase 50 μl를 넣고 37 ℃에서 30분간 반응시켰다. 이후, Substrate (N-succinyl-Ala-Ala-Ala-p-nitroanilide)를 100 μl 넣은 후 37 ℃에서 30분간 반응시킨 후 410 nm에서 흡광도를 측정하였다. 50 μl of 0.4 M Tris-HCl buffer (pH 8.6), 50 μl of sample, and 50 μl of 0.6 U / ml elastase diluted in the same buffer were added and reacted at 37 ° C for 30 minutes. Subsequently, 100 μl of the substrate (N-succinyl-Ala-Ala-Ala-p-nitroanilide) was added and reacted at 37 ° C. for 30 minutes. Absorbance was measured at 410 nm.

그 결과, 도 7에서 보는 바와 같이, 대조군 대비 200 μg/ml의 농도에서 25%, 500 μg/ml의 농도에서 32%, 1000 μg/ml의 농도에서 35%의 엘라스타제 저해 활성을 나타내는 것을 확인하였다.As a result, as shown in FIG. 7, 25% at the concentration of 200 μg / ml, 32% at the concentration of 500 μg / ml and 35% of the inhibitory activity of the elastase at the concentration of 1000 μg / ml Respectively.

본 명세서의 일 측면에 따른 조성물의 제형예를 아래에서 설명하나, 다른 여러 가지 제형으로도 응용 가능하며, 이는 본 발명을 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.Formulation examples of compositions according to one aspect of the present disclosure are described below, but are applicable to various other formulations, which are not intended to be limiting, but rather to illustrate only specifically.

[제형예 1] 유연화장수(스킨로션)[Formulation Example 1] Softening lotion (skin lotion)

배합 성분Compounding ingredient 함량 (중량%)Content (% by weight) 시험예 3의 배양물The culture of Test Example 3 0.10.1 글리세린glycerin 3.03.0 부틸렌글리콜Butylene glycol 2.02.0 프로필렌글리콜Propylene glycol 2.02.0 카르복시비닐폴리머Carboxyvinyl polymer 0.10.1 피이지-12 노닐페닐에테르Phage-12 nonylphenyl ether 0.20.2 폴리솔베이트 80Polysorbate 80 0.40.4 에탄올ethanol 10.010.0 트리에탄올아민Triethanolamine 0.10.1 방부제, 색소, 향료Preservative, coloring, fragrance 적량Suitable amount 정제수Purified water 잔량Balance

[제형예 2] 영양화장수(밀크로션)[Formulation Example 2] Nutritional lotion (Milk lotion)

배합 성분Compounding ingredient 함량 (중량%)Content (% by weight) 시험예 3의 배양물The culture of Test Example 3 0.10.1 글리세린glycerin 3.03.0 부틸렌글리콜Butylene glycol 3.03.0 프로필렌글리콜Propylene glycol 3.03.0 카르복시비닐폴리머Carboxyvinyl polymer 0.10.1 밀납Wax 4.04.0 폴리솔베이트 60Polysorbate 60 1.51.5 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드Caprylic / capric triglyceride 5.05.0 스쿠알란Squalane 5.05.0 솔비타세스퀴올레이트Sorbitacecequioleate 1.51.5 유동파라핀Liquid paraffin 0.50.5 세테아릴 알코올Cetearyl alcohol 1.01.0 트리에탄올아민Triethanolamine 0.20.2 방부제, 색소, 향료Preservative, coloring, fragrance 적량Suitable amount 정제수Purified water 잔량Balance

[제형예 3] 영양크림[Formulation Example 3] Nourishing cream

배합 성분Compounding ingredient 함량 (중량%)Content (% by weight) 시험예 3의 배양물The culture of Test Example 3 0.10.1 글리세린glycerin 3.03.0 부틸렌글리콜Butylene glycol 3.03.0 유동파라핀Liquid paraffin 7.07.0 베타글루칸Beta Glucan 7.07.0 카보머Carbomer 0.10.1 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드Caprylic / capric triglyceride 3.03.0 스쿠알란Squalane 5.05.0 세테아릴 글루코사이드Cetearyl glucoside 1.51.5 소르비탄 스테아레이트Sorbitan stearate 0.40.4 폴리솔베이트 60Polysorbate 60 1.21.2 트리에탄올아민Triethanolamine 0.10.1 방부제, 색소, 향료Preservative, coloring, fragrance 적량Suitable amount 정제수Purified water 잔량Balance

[제형예 4] 마사지크림[Formulation Example 4] Massage cream

배합 성분Compounding ingredient 함량 (중량%)Content (% by weight) 시험예 3의 배양물The culture of Test Example 3 0.10.1 글리세린glycerin 8.08.0 부틸렌글리콜Butylene glycol 4.04.0 유동파라핀Liquid paraffin 45.045.0 베타글루칸Beta Glucan 7.07.0 카보머Carbomer 0.10.1 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드Caprylic / capric triglyceride 3.03.0 밀납Wax 4.04.0 세테아릴 글루코사이드Cetearyl glucoside 1.51.5 세스퀴 올레인산 소르비탄Sesquioleic acid sorbitan 0.90.9 바세린Vaseline 3.03.0 파라핀paraffin 1.51.5 방부제, 색소, 향료Preservative, coloring, fragrance 적량Suitable amount 정제수Purified water 잔량Balance

[제형예 5] 팩[Formulation Example 5] Pack

배합 성분Compounding ingredient 함량 (중량%)Content (% by weight) 시험예 3의 배양물The culture of Test Example 3 0.10.1 글리세린glycerin 4.04.0 폴리비닐알콜Polyvinyl alcohol 15.015.0 히알루론산 추출물Hyaluronic acid extract 5.05.0 베타글루칸Beta Glucan 7.07.0 알란토인Allantoin 0.10.1 노닐 페닐에테르Nonyl phenyl ether 0.40.4 폴리솔베이트 60Polysorbate 60 1.21.2 에탄올 방부제Ethanol preservative 적량Suitable amount 방부제, 색소, 향료Preservative, coloring, fragrance 적량Suitable amount 정제수Purified water 잔량Balance

이상, 본 발명내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 실시태양일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의해 정의된다고 할 것이다.Having described specific portions of the present invention in detail, it will be apparent to those skilled in the art that this specific description is only a preferred embodiment and that the scope of the present invention is not limited thereby. It will be obvious. Accordingly, the actual scope of the present invention will be defined by the appended claims and their equivalents.

한국미생물보존센터Korea Microorganism Conservation Center KCCM12140PKCCM12140P 2017102620171026

<110> AMOREPACIFIC CORPORATION <120> ANTI-AGING COMPOSITION COMPRISING CULTURE OR ITS EXTRACT OF MICROORGANISM OF SERRATIA GENUS <130> 17P558/IND <160> 3 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 1153 <212> DNA <213> Unknown <220> <223> Serratia sp. Dolsongi-HT4 <400> 1 tgtgggggcg gctaccatgc agtcgagcgg tagcacaggg agcttgctcc tgggtgacga 60 gcggcggacg ggtgagtaat gtctgggaaa ctgcctgatg gagggggata actactggaa 120 acggtagcta ataccgcata acgtctacgg accaaagtgg gggaccttcg ggcctcatgc 180 catcagatgt gcccagatgg gattagctag taggtggggt aatggctcac ctaggcgacg 240 atccctagct ggtctgagag gatgaccagc cacactggaa ctgagacacg gtccagactc 300 ctacgggagg cagcagtggg gaatattgca caatgggcgc aagcctgatg cagccatgcc 360 gcgtgtgtga agaaggcctt cgggttgtaa agcactttca gcgaggagga agggtactgt 420 gttaatagca cagtgcattg acgttactcg cagaagaagc accggctaac tccgtgccag 480 cagccgcggt aatacggagg gtgcaagcgt taatcggaat tactgggcgt aaagcgcacg 540 caggcggttt gttaagtcag atgtgaaatc cccgcgctta acgtgggaac tgcatttgaa 600 actggcaagc tagagtcttg tagagggggg tagaattcca ggtgtagcgg tgaaatgcgt 660 agagatctgg aggaataccg gtggcgaagg cggccccctg gacaaagact gacgctcagg 720 tgcgaaagcg tggggagcaa acaggattag ataccctggt agtccacgct gtaaacgatg 780 tcgacttgga ggttgtgccc ttgaggcgtg gcttccggag ctaacgcgtt aagtcgaccg 840 cctggggagt acggccgcaa ggttaaaact caaatgaatt gacgggggcc cgcacaagcg 900 gtggagcatg tggtttaatt cgatgcaacg cgaagaacct tacctactct tgacatccag 960 agaattcgct agagatagct tagtgccttc gggaactctg agacaggtgc tgcatggctg 1020 tcgtcagctc gtgttgtgaa atgttgggtt aagtcccgca acgagcgcaa cccttatcct 1080 ttgttgccag cacgtaatgg tgggaactca aaggagactg ccggtgataa accggaggaa 1140 ggtggggatg aca 1153 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 27F primer <400> 2 agagtttgat cmtggctcag 20 <210> 3 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 1492R primer <400> 3 tacggytacc ttgttacgac tt 22 <110> AMOREPACIFIC CORPORATION <120> ANTI-AGING COMPOSITION COMPRISING CULTURE OR ITS EXTRACT OF          MICROORGANISM OF SERRATIA GENUS <130> 17P558 / IND <160> 3 <170> KoPatentin 3.0 <210> 1 <211> 1153 <212> DNA <213> Unknown <220> <223> Serratia sp. Dolsongi-HT4 <400> 1 tgtgggggcg gctaccatgc agtcgagcgg tagcacaggg agcttgctcc tgggtgacga 60 gcggcggacg ggtgagtaat gtctgggaaa ctgcctgatg gagggggata actactggaa 120 acggtagcta ataccgcata acgtctacgg accaaagtgg gggaccttcg ggcctcatgc 180 catcagatgt gcccagatgg gattagctag taggtggggt aatggctcac ctaggcgacg 240 atccctagct ggtctgagag gatgaccagc cacactggaa ctgagacacg gtccagactc 300 ctacgggagg cagcagtggg gaatattgca caatgggcgc aagcctgatg cagccatgcc 360 gcgtgtgtga agaaggcctt cgggttgtaa agcactttca gcgaggagga agggtactgt 420 gttaatagca cagtgcattg acgttactcg cagaagaagc accggctaac tccgtgccag 480 cagccgcggt aatacggagg gtgcaagcgt taatcggaat tactgggcgt aaagcgcacg 540 caggcggttt gttaagtcag atgtgaaatc cccgcgctta acgtgggaac tgcatttgaa 600 actggcaagc tagagtcttg tagagggggg tagaattcca ggtgtagcgg tgaaatgcgt 660 agagatctgg aggaataccg gtggcgaagg cggccccctg gacaaagact gacgctcagg 720 tgcgaaagcg tggggagcaa acaggattag ataccctggt agtccacgct gtaaacgatg 780 tcgacttgga ggttgtgccc ttgaggcgtg gcttccggag ctaacgcgtt aagtcgaccg 840 cctggggagt acggccgcaa ggttaaaact caaatgaatt gacgggggcc cgcacaagcg 900 gtggagcatg tggtttaatt cgatgcaacg cgaagaacct tacctactct tgacatccag 960 agaattcgct agagatagct tagtgccttc gggaactctg agacaggtgc tgcatggctg 1020 tcgtcagctc gtgttgtgaa atgttgggtt aagtcccgca acgagcgcaa cccttatcct 1080 ttgttgccag cacgtaatgg tgggaactca aaggagactg ccggtgataa accggaggaa 1140 ggtggggatg aca 1153 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 27F primer <400> 2 agagtttgat cmtggctcag 20 <210> 3 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 1492R primer <400> 3 tacggytacc ttgttacgac tt 22

Claims (13)

세라티아 속 (Serratia sp.) 미생물, 이의 파쇄물, 이의 배양물 또는 상기 배양물의 추출물을 유효성분으로 포함하는 항노화용 조성물.
A composition for anti-aging comprising a microorganism of the genus Serratia sp., A fragment thereof, a culture thereof or an extract of the culture as an active ingredient.
제 1항에 있어서,
상기 조성물은 하기 용도 중 하나 이상을 갖는 것인, 항노화용 조성물.
(a) 피부 주름 개선;
(b) 피부 탄력 증진;
(c) 콜라겐 합성 증진;
(d) 엘라스틴 합성 증진; 및
(e) 엘라스틴 분해 억제.
The method according to claim 1,
Wherein the composition has one or more of the following uses.
(a) improving skin wrinkles;
(b) improving skin elasticity;
(c) enhancing collagen synthesis;
(d) Enhancing elastin synthesis; And
(e) inhibition of elastin degradation.
제 1항에 있어서,
상기 조성물은 항산화 용도를 갖는 것인, 항노화용 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein said composition has antioxidant use.
제 3항에 있어서,
상기 조성물은 DPPH 라디칼 소거 활성을 갖는 것인, 항노화용 조성물.
The method of claim 3,
Wherein the composition has DPPH radical scavenging activity.
제 1항에 있어서,
상기 미생물은 기탁번호가 KCCM12140P인 세라티아 속 돌송이-HT4 (Serratia sp. Dolsongi-HT4)인, 항노화용 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein said microorganism is Serratia sp. Dolsongi-HT4 with accession number KCCM12140P.
제 5항에 있어서,
상기 미생물은 서열번호 1의 염기서열을 포함하는 16S rDNA를 갖는 것인, 항노화용 조성물.
6. The method of claim 5,
Wherein the microorganism has 16S rDNA comprising the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1.
제 1항에 있어서,
상기 배양물은 배양물의 여과액 또는 배양물을 원심분리한 배양 상등액인, 항노화용 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein the culture is a culture supernatant obtained by centrifuging a filtrate or a culture of the culture.
제 1항에 있어서,
상기 추출물은 헥세인 (Hexane) 분획물, 메틸렌 클로라이드 (Methylene Chloride) 분획물, 에틸 아세테이트 (Ethyl Acetate) 분획물, 부탄올 (Butanol) 분획물 및 물 분획물로 이루어진 군에서 선택되는 1 이상인 것인, 항노화용 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein the extract is at least one selected from the group consisting of Hexane fraction, Methylene Chloride fraction, Ethyl Acetate fraction, Butanol fraction and Water fraction.
제 1항에 있어서,
상기 조성물은 화장료 조성물인, 항노화용 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein the composition is a cosmetic composition.
세라티아 속 돌송이-HT4 (Serratia sp. Dolsongi-HT4) 미생물 (기탁번호 : KCCM12140P).
Serratia genus Stone cluster - HT4 ( Serratia sp. Dolsongi-HT4) microorganism (Accession No .: KCCM12140P).
제 10항에 있어서,
상기 미생물은 서열번호 1의 염기서열을 포함하는 16S rDNA를 갖는 것인, 미생물.
11. The method of claim 10,
Wherein said microorganism has a 16S rDNA comprising the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1.
제 10항에 있어서,
상기 미생물은 항노화 용도를 갖는 것인, 미생물.
11. The method of claim 10,
Wherein said microorganism has anti-aging use.
제 12항에 있어서,
상기 항노화 용도는 하기 용도 중 하나 이상을 갖는 것인, 미생물.
(a) 피부 주름 개선;
(b) 피부 탄력 증진;
(c) 콜라겐 합성 증진;
(d) 엘라스틴 합성 증진;
(e) 엘라스틴 분해 억제; 및
(f) 항산화 활성.
13. The method of claim 12,
Wherein the anti-aging application has one or more of the following uses.
(a) improving skin wrinkles;
(b) improving skin elasticity;
(c) enhancing collagen synthesis;
(d) Enhancing elastin synthesis;
(e) inhibiting elastin degradation; And
(f) Antioxidant activity.
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KR20220159769A (en) * 2021-05-26 2022-12-05 이화여자대학교 산학협력단 Novel Serratia sp. strain, and uses thereof

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