KR20190048894A - Jnk 활성 억제제를 유효성분으로 포함하는 퇴행성 신경질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 - Google Patents
Jnk 활성 억제제를 유효성분으로 포함하는 퇴행성 신경질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20190048894A KR20190048894A KR1020170144178A KR20170144178A KR20190048894A KR 20190048894 A KR20190048894 A KR 20190048894A KR 1020170144178 A KR1020170144178 A KR 1020170144178A KR 20170144178 A KR20170144178 A KR 20170144178A KR 20190048894 A KR20190048894 A KR 20190048894A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- administration
- tbi
- composition
- mice
- brain
- Prior art date
Links
- 108010055717 JNK Mitogen-Activated Protein Kinases Proteins 0.000 title claims abstract description 27
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 16
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 title description 2
- 229940043355 kinase inhibitor Drugs 0.000 title 1
- 239000003757 phosphotransferase inhibitor Substances 0.000 title 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 15
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 10
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 claims abstract description 9
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 claims abstract description 9
- 230000003412 degenerative effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 claims abstract description 5
- 208000030886 Traumatic Brain injury Diseases 0.000 claims description 32
- 230000009529 traumatic brain injury Effects 0.000 claims description 32
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 11
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 9
- 230000036541 health Effects 0.000 claims description 8
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 8
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 claims description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 5
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 9
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 abstract description 7
- 102000013455 Amyloid beta-Peptides Human genes 0.000 abstract description 5
- 108010090849 Amyloid beta-Peptides Proteins 0.000 abstract description 5
- 101001050288 Homo sapiens Transcription factor Jun Proteins 0.000 abstract description 3
- 102100023132 Transcription factor Jun Human genes 0.000 abstract description 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 abstract description 2
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 abstract 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 abstract 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 44
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 40
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 34
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 30
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 25
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 22
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 20
- 101710137189 Amyloid-beta A4 protein Proteins 0.000 description 16
- 101710151993 Amyloid-beta precursor protein Proteins 0.000 description 16
- 102100022704 Amyloid-beta precursor protein Human genes 0.000 description 16
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 15
- DZHSAHHDTRWUTF-SIQRNXPUSA-N amyloid-beta polypeptide 42 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)[C@@H](C)CC)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C(C)C)C(C)C)C1=CC=CC=C1 DZHSAHHDTRWUTF-SIQRNXPUSA-N 0.000 description 15
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 15
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 15
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 14
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 11
- 238000003125 immunofluorescent labeling Methods 0.000 description 11
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 10
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 230000008859 change Effects 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 9
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 8
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 8
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 8
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 8
- 239000003642 reactive oxygen metabolite Substances 0.000 description 8
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 8
- 102000013498 tau Proteins Human genes 0.000 description 8
- 108010026424 tau Proteins Proteins 0.000 description 8
- COXVTLYNGOIATD-HVMBLDELSA-N CC1=C(C=CC(=C1)C1=CC(C)=C(C=C1)\N=N\C1=C(O)C2=C(N)C(=CC(=C2C=C1)S(O)(=O)=O)S(O)(=O)=O)\N=N\C1=CC=C2C(=CC(=C(N)C2=C1O)S(O)(=O)=O)S(O)(=O)=O Chemical compound CC1=C(C=CC(=C1)C1=CC(C)=C(C=C1)\N=N\C1=C(O)C2=C(N)C(=CC(=C2C=C1)S(O)(=O)=O)S(O)(=O)=O)\N=N\C1=CC=C2C(=CC(=C(N)C2=C1O)S(O)(=O)=O)S(O)(=O)=O COXVTLYNGOIATD-HVMBLDELSA-N 0.000 description 7
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 description 7
- 229960003699 evans blue Drugs 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 7
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 7
- 210000001320 hippocampus Anatomy 0.000 description 7
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 102100021257 Beta-secretase 1 Human genes 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 6
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 6
- 108090000397 Caspase 3 Proteins 0.000 description 5
- 102000003952 Caspase 3 Human genes 0.000 description 5
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 5
- 102100030545 Synaptosomal-associated protein 23 Human genes 0.000 description 5
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 5
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 5
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 5
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 5
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 5
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 4
- 101710150192 Beta-secretase 1 Proteins 0.000 description 4
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 4
- 102000004057 Claudin-5 Human genes 0.000 description 4
- 108090000582 Claudin-5 Proteins 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 208000029028 brain injury Diseases 0.000 description 4
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 4
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 4
- 230000003447 ipsilateral effect Effects 0.000 description 4
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 4
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 4
- 230000009182 swimming Effects 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 3
- 102000013717 Cyclin-Dependent Kinase 5 Human genes 0.000 description 3
- 108010025454 Cyclin-Dependent Kinase 5 Proteins 0.000 description 3
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 3
- 101000652300 Homo sapiens Synaptosomal-associated protein 23 Proteins 0.000 description 3
- 102100021496 Insulin-degrading enzyme Human genes 0.000 description 3
- 108090000828 Insulysin Proteins 0.000 description 3
- 108010057466 NF-kappa B Proteins 0.000 description 3
- 102000003729 Neprilysin Human genes 0.000 description 3
- 108090000028 Neprilysin Proteins 0.000 description 3
- 102000011779 Nitric Oxide Synthase Type II Human genes 0.000 description 3
- 108010076864 Nitric Oxide Synthase Type II Proteins 0.000 description 3
- 102100023050 Nuclear factor NF-kappa-B p105 subunit Human genes 0.000 description 3
- 102100023712 Poly [ADP-ribose] polymerase 1 Human genes 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 3
- 102000055102 bcl-2-Associated X Human genes 0.000 description 3
- 108700000707 bcl-2-Associated X Proteins 0.000 description 3
- 230000003542 behavioural effect Effects 0.000 description 3
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 208000002173 dizziness Diseases 0.000 description 3
- 235000013402 health food Nutrition 0.000 description 3
- 230000000971 hippocampal effect Effects 0.000 description 3
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 230000015654 memory Effects 0.000 description 3
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 3
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 108091007505 ADAM17 Proteins 0.000 description 2
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 2
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 208000007333 Brain Concussion Diseases 0.000 description 2
- 206010048962 Brain oedema Diseases 0.000 description 2
- 206010051290 Central nervous system lesion Diseases 0.000 description 2
- 206010010904 Convulsion Diseases 0.000 description 2
- 102100031111 Disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 17 Human genes 0.000 description 2
- 108700019745 Disks Large Homolog 4 Proteins 0.000 description 2
- 102000047174 Disks Large Homolog 4 Human genes 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010019196 Head injury Diseases 0.000 description 2
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 2
- 101000894895 Homo sapiens Beta-secretase 1 Proteins 0.000 description 2
- 108091054455 MAP kinase family Proteins 0.000 description 2
- 102000043136 MAP kinase family Human genes 0.000 description 2
- 208000028389 Nerve injury Diseases 0.000 description 2
- 108010064218 Poly (ADP-Ribose) Polymerase-1 Proteins 0.000 description 2
- 208000031074 Reinjury Diseases 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 102000004874 Synaptophysin Human genes 0.000 description 2
- 108090001076 Synaptophysin Proteins 0.000 description 2
- 101710189545 Synaptosomal-associated protein 23 Proteins 0.000 description 2
- 244000299461 Theobroma cacao Species 0.000 description 2
- 208000003443 Unconsciousness Diseases 0.000 description 2
- ZHAFUINZIZIXFC-UHFFFAOYSA-N [9-(dimethylamino)-10-methylbenzo[a]phenoxazin-5-ylidene]azanium;chloride Chemical compound [Cl-].O1C2=CC(=[NH2+])C3=CC=CC=C3C2=NC2=C1C=C(N(C)C)C(C)=C2 ZHAFUINZIZIXFC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 2
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 description 2
- 208000006752 brain edema Diseases 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 210000003710 cerebral cortex Anatomy 0.000 description 2
- OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N chlorobutanol Chemical compound CC(C)(O)C(Cl)(Cl)Cl OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000019219 chocolate Nutrition 0.000 description 2
- 208000010877 cognitive disease Diseases 0.000 description 2
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 210000005257 cortical tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 210000001947 dentate gyrus Anatomy 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 2
- 235000012041 food component Nutrition 0.000 description 2
- 239000005417 food ingredient Substances 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 2
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 2
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 230000013016 learning Effects 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000008764 nerve damage Effects 0.000 description 2
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 2
- 235000012149 noodles Nutrition 0.000 description 2
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N p-hydroxybenzoic acid methyl ester Natural products COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000002574 p38 Mitogen-Activated Protein Kinases Human genes 0.000 description 2
- 108010068338 p38 Mitogen-Activated Protein Kinases Proteins 0.000 description 2
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HELXLJCILKEWJH-NCGAPWICSA-N rebaudioside A Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)O[C@]12C(=C)C[C@@]3(C1)CC[C@@H]1[C@@](C)(CCC[C@]1([C@@H]3CC2)C)C(=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O HELXLJCILKEWJH-NCGAPWICSA-N 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L sodium sulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])=O GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 230000000946 synaptic effect Effects 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PXEZTIWVRVSYOK-UHFFFAOYSA-N 2-(3,6-diacetyloxy-2,7-dichloro-9h-xanthen-9-yl)benzoic acid Chemical compound C1=2C=C(Cl)C(OC(=O)C)=CC=2OC2=CC(OC(C)=O)=C(Cl)C=C2C1C1=CC=CC=C1C(O)=O PXEZTIWVRVSYOK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 1
- 108010043324 Amyloid Precursor Protein Secretases Proteins 0.000 description 1
- 102000002659 Amyloid Precursor Protein Secretases Human genes 0.000 description 1
- 208000019901 Anxiety disease Diseases 0.000 description 1
- 102100021569 Apoptosis regulator Bcl-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010011485 Aspartame Proteins 0.000 description 1
- 101150017888 Bcl2 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000034656 Contusions Diseases 0.000 description 1
- 241000209020 Cornus Species 0.000 description 1
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 230000005778 DNA damage Effects 0.000 description 1
- 231100000277 DNA damage Toxicity 0.000 description 1
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 241001269524 Dura Species 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 239000004386 Erythritol Substances 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N Erythritol Natural products OCC(O)C(O)CO UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010015866 Extravasation Diseases 0.000 description 1
- 239000001512 FEMA 4601 Substances 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 208000018522 Gastrointestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 108010001483 Glycogen Synthase Proteins 0.000 description 1
- 239000004378 Glycyrrhizin Substances 0.000 description 1
- 101000777461 Homo sapiens Disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 17 Proteins 0.000 description 1
- 101000695522 Homo sapiens Synaptophysin Proteins 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 101150018665 MAPK3 gene Proteins 0.000 description 1
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 206010027940 Mood altered Diseases 0.000 description 1
- 238000012347 Morris Water Maze Methods 0.000 description 1
- 206010028813 Nausea Diseases 0.000 description 1
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- -1 OCT compound Chemical class 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 1
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 description 1
- 229920002230 Pectic acid Polymers 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 206010034719 Personality change Diseases 0.000 description 1
- 108010073135 Phosphorylases Proteins 0.000 description 1
- 102000009097 Phosphorylases Human genes 0.000 description 1
- 101710179684 Poly [ADP-ribose] polymerase Proteins 0.000 description 1
- 229920000776 Poly(Adenosine diphosphate-ribose) polymerase Polymers 0.000 description 1
- 102000013535 Proto-Oncogene Proteins c-bcl-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010090931 Proto-Oncogene Proteins c-bcl-2 Proteins 0.000 description 1
- HELXLJCILKEWJH-SEAGSNCFSA-N Rebaudioside A Natural products O=C(O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)[C@@]1(C)[C@@H]2[C@](C)([C@H]3[C@@]4(CC(=C)[C@@](O[C@H]5[C@H](O[C@H]6[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O6)[C@@H](O[C@H]6[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O6)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)(C4)CC3)CC2)CCC1 HELXLJCILKEWJH-SEAGSNCFSA-N 0.000 description 1
- DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M Sodium bisulfite Chemical compound [Na+].OS([O-])=O DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Chemical class 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 244000228451 Stevia rebaudiana Species 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 102100028706 Synaptophysin Human genes 0.000 description 1
- 108010057722 Synaptosomal-Associated Protein 25 Proteins 0.000 description 1
- 102100030552 Synaptosomal-associated protein 25 Human genes 0.000 description 1
- YGZWVPBHYABGLT-KJEVXHAQSA-N Thr-Pro-Tyr Chemical group C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 YGZWVPBHYABGLT-KJEVXHAQSA-N 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 1
- 206010047513 Vision blurred Diseases 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000016571 aggressive behavior Effects 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 208000030961 allergic reaction Diseases 0.000 description 1
- VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N alprazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1 VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 230000036506 anxiety Effects 0.000 description 1
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000000605 aspartame Substances 0.000 description 1
- 235000010357 aspartame Nutrition 0.000 description 1
- IAOZJIPTCAWIRG-QWRGUYRKSA-N aspartame Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)OC)CC1=CC=CC=C1 IAOZJIPTCAWIRG-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- 229960003438 aspartame Drugs 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 208000003464 asthenopia Diseases 0.000 description 1
- 230000000386 athletic effect Effects 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 235000013527 bean curd Nutrition 0.000 description 1
- 229960000686 benzalkonium chloride Drugs 0.000 description 1
- CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N benzyl(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[NH+](C)CC1=CC=CC=C1 CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 1
- 235000015895 biscuits Nutrition 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 210000004958 brain cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 1
- 235000008429 bread Nutrition 0.000 description 1
- 235000012970 cakes Nutrition 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 235000014171 carbonated beverage Nutrition 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Chemical class 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Chemical class 0.000 description 1
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 1
- 210000004720 cerebrum Anatomy 0.000 description 1
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 229960004926 chlorobutanol Drugs 0.000 description 1
- 230000001149 cognitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003920 cognitive function Effects 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 208000030251 communication disease Diseases 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000001218 confocal laser scanning microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000004624 confocal microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000009519 contusion Effects 0.000 description 1
- 230000001054 cortical effect Effects 0.000 description 1
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 1
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 238000000326 densiometry Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 208000010643 digestive system disease Diseases 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 101150069842 dlg4 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 1
- 230000002996 emotional effect Effects 0.000 description 1
- HELXLJCILKEWJH-UHFFFAOYSA-N entered according to Sigma 01432 Natural products C1CC2C3(C)CCCC(C)(C(=O)OC4C(C(O)C(O)C(CO)O4)O)C3CCC2(C2)CC(=C)C21OC(C1OC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)OC(CO)C(O)C1OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O HELXLJCILKEWJH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 235000019414 erythritol Nutrition 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N erythritol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)CO UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N 0.000 description 1
- 229940009714 erythritol Drugs 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000036251 extravasation Effects 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012757 fluorescence staining Methods 0.000 description 1
- 125000001153 fluoro group Chemical group F* 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 235000020510 functional beverage Nutrition 0.000 description 1
- 208000018685 gastrointestinal system disease Diseases 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 1
- LPLVUJXQOOQHMX-UHFFFAOYSA-N glycyrrhetinic acid glycoside Natural products C1CC(C2C(C3(CCC4(C)CCC(C)(CC4C3=CC2=O)C(O)=O)C)(C)CC2)(C)C2C(C)(C)C1OC1OC(C(O)=O)C(O)C(O)C1OC1OC(C(O)=O)C(O)C(O)C1O LPLVUJXQOOQHMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004949 glycyrrhizic acid Drugs 0.000 description 1
- UYRUBYNTXSDKQT-UHFFFAOYSA-N glycyrrhizic acid Natural products CC1(C)C(CCC2(C)C1CCC3(C)C2C(=O)C=C4C5CC(C)(CCC5(C)CCC34C)C(=O)O)OC6OC(C(O)C(O)C6OC7OC(O)C(O)C(O)C7C(=O)O)C(=O)O UYRUBYNTXSDKQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019410 glycyrrhizin Nutrition 0.000 description 1
- LPLVUJXQOOQHMX-QWBHMCJMSA-N glycyrrhizinic acid Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O[C@@H]1O[C@@H]1C([C@H]2[C@]([C@@H]3[C@@]([C@@]4(CC[C@@]5(C)CC[C@@](C)(C[C@H]5C4=CC3=O)C(O)=O)C)(C)CC2)(C)CC1)(C)C)C(O)=O)[C@@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O LPLVUJXQOOQHMX-QWBHMCJMSA-N 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 1
- 229940093915 gynecological organic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000003862 health status Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 235000015243 ice cream Nutrition 0.000 description 1
- 238000002991 immunohistochemical analysis Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 239000007972 injectable composition Substances 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 208000013433 lightheadedness Diseases 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 238000013227 male C57BL/6J mice Methods 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 230000007087 memory ability Effects 0.000 description 1
- 230000009225 memory damage Effects 0.000 description 1
- 206010027175 memory impairment Diseases 0.000 description 1
- 230000004630 mental health Effects 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 229960002216 methylparaben Drugs 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000007510 mood change Effects 0.000 description 1
- 230000004973 motor coordination Effects 0.000 description 1
- 230000007659 motor function Effects 0.000 description 1
- 239000012120 mounting media Substances 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000003387 muscular Effects 0.000 description 1
- 230000008693 nausea Effects 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 238000001584 occupational therapy Methods 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003002 pH adjusting agent Substances 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 230000001936 parietal effect Effects 0.000 description 1
- LCLHHZYHLXDRQG-ZNKJPWOQSA-N pectic acid Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)O[C@H](C(O)=O)[C@@H]1OC1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O2)C(O)=O)O)[C@@H](C(O)=O)O1 LCLHHZYHLXDRQG-ZNKJPWOQSA-N 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 238000000554 physical therapy Methods 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 235000013550 pizza Nutrition 0.000 description 1
- 239000010318 polygalacturonic acid Substances 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004405 propyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000002731 protein assay Methods 0.000 description 1
- 238000000751 protein extraction Methods 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 235000019203 rebaudioside A Nutrition 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 229940069575 rompun Drugs 0.000 description 1
- 235000019204 saccharin Nutrition 0.000 description 1
- CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N saccharin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)NS(=O)(=O)C2=C1 CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940081974 saccharin Drugs 0.000 description 1
- 239000000901 saccharin and its Na,K and Ca salt Substances 0.000 description 1
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 1
- 235000013580 sausages Nutrition 0.000 description 1
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006748 scratching Methods 0.000 description 1
- 230000002393 scratching effect Effects 0.000 description 1
- 230000035807 sensation Effects 0.000 description 1
- 235000019615 sensations Nutrition 0.000 description 1
- 230000031893 sensory processing Effects 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 235000011888 snacks Nutrition 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229940079827 sodium hydrogen sulfite Drugs 0.000 description 1
- 235000010267 sodium hydrogen sulphite Nutrition 0.000 description 1
- 229940001482 sodium sulfite Drugs 0.000 description 1
- 235000010265 sodium sulphite Nutrition 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 1
- 229960002920 sorbitol Drugs 0.000 description 1
- 235000014347 soups Nutrition 0.000 description 1
- 230000006886 spatial memory Effects 0.000 description 1
- 238000002630 speech therapy Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Chemical class 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 1
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 230000036962 time dependent Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006453 vascular barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000031836 visual learning Effects 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- QYEFBJRXKKSABU-UHFFFAOYSA-N xylazine hydrochloride Chemical compound Cl.CC1=CC=CC(C)=C1NC1=NCCCS1 QYEFBJRXKKSABU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 1
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 1
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 1
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
- A61K31/415—1,2-Diazoles
- A61K31/416—1,2-Diazoles condensed with carbocyclic ring systems, e.g. indazole
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2200/00—Function of food ingredients
- A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
- A23V2200/322—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health having an effect on the health of the nervous system or on mental function
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
본 발명은 JNK 활성 억제 물질을 유효성분으로 포함하는 퇴행성 신경질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것으로, 상기 조성물은 c-Jun 인산화효소의 활성을 억제하고, 신경세포의 염증반응 및 베타 아밀로이드 생성을 감소시킬 수 있다.
Description
본 발명은 JNK 활성 억제제를 유효성분으로 포함하는 퇴행성 신경질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.
외상성 뇌손상(Tranumatic brain injury, TBI)은 두부에 가해지는 외부의 물리적 힘에 의한 손상으로 의식 저하나 변화를 유발하고, 이로 인한 인지 기능 혹은 육체적 기능의 손상을 야기한다. 또한 행동 장애나 감정적 손상을 유발할 수도 있다. 이러한 손상이나 장애는 일시적 또는 영구적일 수 있으며, 신체 일부의 손상 혹은 전체 기능의 장애나 정신심리학적 문제를 야기할 수 있다.
일반적으로 TBI는 손상의 심한 정도에 따라 경도(mild), 중등도(moderate) 및 중증(severe)으로 분류한다. 경도 TBI를 갖는 사람은 의식을 유지할 수 있거나, 수 초 또는 수 분 동안 의식의 상실을 경험할 수 있다. 또는 두통, 혼돈, 현기증(lightheadedness), 어지러움(dizziness), 흐릿한 시야, 눈의 피로, 귀 울림, 행동 또는 기분 변화, 기억, 집중, 주의, 또는 사고의 곤란을 경험할 수 있다. 중등도 또는 중증 TBI를 갖는 사람은 이와 동일한 증상을 나타낼 수 있으며, 악화되거나 사라지지 않는 두통, 반복된 구토 또는 오심, 경련 또는 발작, 불명료한 언어, 사지의 약화 또는 마비 등의 증상을 나타낼 수 있다.
TBI에 의하여 초래된 장애는 손상의 정도, 손상의 위치 및 환자의 나이와 건강 상태에 따라 달라질 수 있으며, 일부 공통적으로 나타나는 장애에는 인지장애(사고, 기억 및 추론), 감각 처리 장애(시각, 청각, 촉각, 미각 및 후각), 의사소통장애(표현 및 이해), 및 행동 또는 정신건강장애(우울증, 불안, 인격 변환, 공격 및 사회적 부적합) 등이 있다. 이러한 장애를 치료하기 위하여 TBI 환자는 물리 치료, 작업 요법, 언어 치료 등의 재활 치료를 받게 되나, 상기 재활 치료는 장애 개선 속도가 느린 단점이 있다. 따라서 TBI를 보다 효과적으로 치료할 수 있는 기술이 필요한 실정이다.
본 발명의 일 목적은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 퇴행성 신경질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다:
본 발명의 다른 목적은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 외상성 뇌손상에 의한 퇴행성 신경질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공하는 것이다:
[화학식 1]
본 발명의 일 양상은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 퇴행성 신경질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다:
[화학식 1]
본 발명의 일 구체예에 따르면 상기 퇴행성 신경질환은 인지기능 장애, 기억력 손상, 치매, 파킨슨병 및 알츠하이머병으로 이루어진 군에서 선택될 수 있으며, 외상성 뇌손상(traumatic brain injury)에 의하여 유도될 수 있다.
또한, 본 발명의 일 구체예에 따르면 상기 조성물은 c-Jun 인산화효소(c-Jun N-terminal kinase, JNK)의 활성을 억제할 수 있다. JNK는 c-Jun의 Ser-63 및 Ser-73을 인산화시키는 효소이며, MAPK(mitogen-activated protein kinase) 패밀리에 속한다. 서브도메인 Ⅷ(subdomain Ⅷ)에 위치한 Thr-Pro-Tyr 모티프에서 Thr 및 Tyr 잔기가 인산화됨으로써 활성화되며, 세포 분화(cell proliferation), 유전자 발현 및 세포사멸(apoptosis)과 같은 세포 반응에 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 상기 화학식 1의 화합물은 JNK의 인산화를 저해함으로서 JNK의 활성화를 억제할 수 있다.
본 발명의 일 구체예에 따르면 상기 조성물은 신경세포의 퇴화 또는 염증반응을 억제할 수 있으며, 뇌손상에 의하여 신경세포에서 베타 아밀로이드가 생성되는 것을 저해할 수 있다.
본 명세서의 용어, "베타 아밀로이드(beta amyloid, Aβ)"는 아밀로이드 전구 단백질로부터 단백질 분해효소 작용에 의해 생성되는 단백질로, 뇌 조직에 침착되면 뇌세포의 사멸을 일으키는 것으로 알려져 있다. 대뇌의 신경세포가 변성하여 대량으로 사멸하는 경우 Aβ가 축적된 '노인 반점', '신경 원섬유 매듭'이라고 하는 섬유 모양의 구조가 신경세포 내에서 나타나며, 신경세포는 세포사멸 기작에 의해 사멸하는 것으로 알려져 있다.
본 발명의 조성물은 약학적으로 허용되는 담체를 추가로 포함할 수 있다. 상기에서 "약학적으로 허용되는"이란 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여될 때, 통상적으로 위장 장애, 현기증 등과 같은 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 조성물을 말한다. 약학적으로 허용되는 담체로는 예를 들면, 락토스, 전분, 셀룰로스 유도체, 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산 등과 같은 경구 투여용 담체 및 물, 적합한 오일, 식염수, 수성 글루코스 및 글리콜 등과 같은 비경구 투여용 담체 등이 있으며 안정화제 및 보존제를 추가로 포함할 수 있다. 적합한 안정화제로는 아황산수소나트륨, 아황산나트륨 또는 아스코르 브산과 같은 항산화제가있다. 적합한 보존제로는 벤즈알코늄 클로라이드, 메틸- 또는 프로필-파라벤 및 클로로부탄올이 있다. 그 밖의 약학적으로 허용되는 담체로는 다음의 문헌에 기재되어 있는 것을 참고로 할 수 있다(Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1995). 상기 본 발명에 따른 약학적 조성물은 상술한 바와 같은 약학적으로 허용되는 담체와 함께 당업계에 공지된 방법에 따라 적합한 형태로 제형화 될 수 있다.
즉, 본 발명의 약학적 조성물은 공지의 방법에 따라 다양한 비경구 또는 경구 투여용 형태로 제조될 수 있다. 비경구 투여용 제형의 대표적인 것으로는 주사용 제형으로 등장성 수용액 또는 현탁액이 바람직하다. 주사용 제형은 적합한 분산제 또는 습윤제 및 현탁화제를 사용하여 당업계에 공지된 기술에 따라 제조할 수 있다. 예를 들면, 각 성분을 식염수 또는 완충액에 용해시켜 주사용으로 제형화될 수 있다. 또한, 경구 투여용 제형으로는, 이에 한정되지는 않으나, 분말, 과립, 정제, 환약 및 캡슐 등이 있다.
상기와 같은 방법으로 제형화된 약학적 조성물은 유효량으로 경구, 경피, 피하, 정맥 또는 근육을 포함한 여러 경로를 통해 투여될 수 있다. 상기에서 '유효량'이란 환자에게 투여하였을 때, 예방 또는 치료 효과를 나타내는 양을 말한다. 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여량은 투여 경로, 투여 대상, 연령, 성별 체중, 개인차 및 질병 상태에 따라 적절히 선택할 수 있다. 바람직하게 본 발명의 약학적 조성물은 질환의 정도에 따라 유효성분의 함량을 달리할 수 있으며, 일 구체예에 따르면 비경구 투여의 형태일 때 1 내지 100 mg/kg/day의 유효량으로 투여할 수 있다.
본 발명의 다른 양상은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는, 외상성 뇌손상에 의한 퇴행성 신경질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다:
[화학식 1]
본 발명의 일 구체예에 따르면 상기 건강식품은 상기 화학식 1의 화합물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 식품의 예로는 드링크제, 육류, 소세지, 빵, 비스켓, 떡, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.
본 발명에 따른 화학식 1의 화합물은 식품에 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 그의 사용 목적(예방 또는 개선용)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 건강식품 중의 상기 화학식 1의 화합물의 양은 전체 식품 중량의 0.01 내지 15 중량으로 가할 수 있으며, 건강 음료 조성물은 100 ㎖를 기준으로 0.02 내지 5 g, 바람직하게는 0.3 내지 1 g의 비율로 가할 수 있다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
본 발명의 건강 기능성 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 화학식 1의 화합물을 함유하는 외에 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다.
상기 외에 본 발명의 식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있으며, 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 화합물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
본 발명의 조성물은 c-Jun 인산화효소의 활성을 억제하고, 신경세포의 염증반응 및 베타 아밀로이드 생성을 감소시킬 수 있다.
도 1은 SP600125 투여에 의한 JNK의 활성 변화를 외상성 뇌손상 동물모델에서 확인한 결과를 보여준다.
도 2는 SP600125 투여 농도에 따른 JNK의 활성 및 APP(amyloid precursor protein) 수준 변화를 외상성 뇌손상 동물모델에서 확인한 결과를 보여준다.
도 3은 SP600125 투여에 의한 JNK의 활성 정도를 외상성 뇌손상 동물모델에서 면역형광염색으로 확인한 결과를 보여준다.
도 4는 SP600125 투여에 의한 BACE-1(beta-site amyloid precursor protein cleaving enzyme 1), APP 및 Aβ(amyloid beta)의 수준 변화를 외상성 뇌손상 동물모델에서 확인한 결과를 보여준다.
도 5는 SP600125 투여에 의한 Aβ의 수준 변화를 외상성 뇌손상 동물모델에서 면역형광염색으로 확인한 결과를 보여준다.
도 6은 SP600125 투여에 의한 JNK와 APP의 상호작용 여부를 외상성 뇌손상 동물모델에서 확인한 결과를 보여준다.
도 7은 SP600125 투여에 의한 Aβ1 -42의 수준 변화를 외상성 뇌손상 동물모델에서 확인한 결과를 보여준다.
도 8은 SP600125 투여에 의한 ADMA17, Neprilysin 및 IDE의 발현 변화를 외상성 뇌손상 동물모델에서 확인한 결과를 보여준다.
도 9는 SP600125 투여에 의한 p-CDK5, pGSK3β(Ser9), p-Tau(Ser413), p-Tau(Ser404) 및 총 Tau 단백질의 수준 변화를 외상성 뇌손상 동물모델에서 확인한 결과를 보여준다.
도 10은 SP600125 투여에 의한 p-Tau(Ser413)의 수준 변화를 외상성 뇌손상 동물모델에서 면역형광염색으로 확인한 결과를 보여준다.
도 11은 SP600125 처리에 의한 JNK의 활성 변화를 뇌 내피세포 세포주에서 확인한 결과를 보여준다.
도 12는 SP600125 처리에 의한 APP 및 Aβ의 수준 변화를 뇌 내피세포 세포주에서 확인한 결과를 보여준다.
도 13은 SP600125 처리 농도에 따른 JNK의 활성 변화를 뇌 내피세포 세포주에서 확인한 결과를 보여준다.
도 14는 SP600125 투여에 의한 혈관뇌장벽 손상 여부, 병변부위 부피 및 뇌 수분 함량 변화를 외상성 뇌손상 동물모델에서 측정한 결과를 보여준다.
도 15는 SP600125 투여에 의한 claudin-5 및 ZO-1 단백질의 발현 변화를 외상성 뇌손상 동물모델에서 확인한 결과를 보여준다.
도 16은 SP600125 투여에 의한 claudin-5 및 ZO-1 단백질의 발현 변화를 외상성 뇌손상 동물모델에서 시간대별로 확인한 결과를 보여준다.
도 17은 SP600125 투여에 의한 절단된 PARP-1, 절단된 caspase-3, Bax 및 Bcl2 단백질의 수준 변화를 외상성 뇌손상 동물모델에서 확인한 결과를 보여준다.
도 18은 외상성 뇌손상 동물모델에서 SP600125 투여에 의한 절단된 caspase-3의 수준 변화 및 FJB(Fluoro-Jade B) 염색 결과를보여준다.
도 19은 SP600125 투여에 의한 활성산소 변화를 외상성 뇌손상 동물모델에서 확인한 결과를 보여준다.
도 20은 SP600125 투여에 의한 p-NF-κB, IL-1β, TNF-α 및 iNOS의 수준 변화를 외상성 뇌손상 동물모델에서 확인한 결과를 보여준다.
도 21은 SP600125 투여에 의한 NF-κB 활성 및 TNF-α의 수준 변화를 외상성 뇌손상 동물모델에서 시간대별로 확인한 결과를 보여준다.
도 22은 SP600125 투여에 의한 IL-1β의 수준 변화를 외상성 뇌손상 동물모델에서 면역형광염색으로 확인한 결과를 보여준다.
도 23은 SP600125 투여에 의한 p-p38, p-ERK1/2 및 p-AKT의 수준 변화를 외상성 뇌손상 동물모델에서 확인한 결과를 보여준다.
도 24은 SP600125 처리에 의한 p-p38, p-ERK1/2 및 p-AKT의 수준 변화를 뇌 내피세포 세포주에서 시간대별로 확인한 결과를 보여준다.
도 25은 SP600125 투여에 의한 PSD-95, SNAP-23 및 SYP의 수준 변화를 외상성 뇌손상 동물모델에서 확인한 결과를 보여준다.
도 26은 SP600125 투여에 의한 SNAP-23의 수준 변화를 외상성 뇌손상 동물모델에서 면역형광염색으로 확인한 결과를 보여준다.
도 27은 SP600125 투여 여부에 따른 외상성 뇌손상 동물모델의 수중미로 실험 결과를 보여준다.
도 28은 SP600125 투여 여부에 따른 외상성 뇌손상 동물모델의 플랫폼 도달시간(latency to platform), 수영 속도, 교차 횟수(number of crossing) 및 표적 사분면에서 소모하는 시간(time spent in the target quardrent)을 측정한 결과를 보여준다.
도 29는 SP600125 투여 여부에 따른 외상성 뇌손상 동물모델의 평행봉 걷기 검사 결과를 보여준다.
도 2는 SP600125 투여 농도에 따른 JNK의 활성 및 APP(amyloid precursor protein) 수준 변화를 외상성 뇌손상 동물모델에서 확인한 결과를 보여준다.
도 3은 SP600125 투여에 의한 JNK의 활성 정도를 외상성 뇌손상 동물모델에서 면역형광염색으로 확인한 결과를 보여준다.
도 4는 SP600125 투여에 의한 BACE-1(beta-site amyloid precursor protein cleaving enzyme 1), APP 및 Aβ(amyloid beta)의 수준 변화를 외상성 뇌손상 동물모델에서 확인한 결과를 보여준다.
도 5는 SP600125 투여에 의한 Aβ의 수준 변화를 외상성 뇌손상 동물모델에서 면역형광염색으로 확인한 결과를 보여준다.
도 6은 SP600125 투여에 의한 JNK와 APP의 상호작용 여부를 외상성 뇌손상 동물모델에서 확인한 결과를 보여준다.
도 7은 SP600125 투여에 의한 Aβ1 -42의 수준 변화를 외상성 뇌손상 동물모델에서 확인한 결과를 보여준다.
도 8은 SP600125 투여에 의한 ADMA17, Neprilysin 및 IDE의 발현 변화를 외상성 뇌손상 동물모델에서 확인한 결과를 보여준다.
도 9는 SP600125 투여에 의한 p-CDK5, pGSK3β(Ser9), p-Tau(Ser413), p-Tau(Ser404) 및 총 Tau 단백질의 수준 변화를 외상성 뇌손상 동물모델에서 확인한 결과를 보여준다.
도 10은 SP600125 투여에 의한 p-Tau(Ser413)의 수준 변화를 외상성 뇌손상 동물모델에서 면역형광염색으로 확인한 결과를 보여준다.
도 11은 SP600125 처리에 의한 JNK의 활성 변화를 뇌 내피세포 세포주에서 확인한 결과를 보여준다.
도 12는 SP600125 처리에 의한 APP 및 Aβ의 수준 변화를 뇌 내피세포 세포주에서 확인한 결과를 보여준다.
도 13은 SP600125 처리 농도에 따른 JNK의 활성 변화를 뇌 내피세포 세포주에서 확인한 결과를 보여준다.
도 14는 SP600125 투여에 의한 혈관뇌장벽 손상 여부, 병변부위 부피 및 뇌 수분 함량 변화를 외상성 뇌손상 동물모델에서 측정한 결과를 보여준다.
도 15는 SP600125 투여에 의한 claudin-5 및 ZO-1 단백질의 발현 변화를 외상성 뇌손상 동물모델에서 확인한 결과를 보여준다.
도 16은 SP600125 투여에 의한 claudin-5 및 ZO-1 단백질의 발현 변화를 외상성 뇌손상 동물모델에서 시간대별로 확인한 결과를 보여준다.
도 17은 SP600125 투여에 의한 절단된 PARP-1, 절단된 caspase-3, Bax 및 Bcl2 단백질의 수준 변화를 외상성 뇌손상 동물모델에서 확인한 결과를 보여준다.
도 18은 외상성 뇌손상 동물모델에서 SP600125 투여에 의한 절단된 caspase-3의 수준 변화 및 FJB(Fluoro-Jade B) 염색 결과를보여준다.
도 19은 SP600125 투여에 의한 활성산소 변화를 외상성 뇌손상 동물모델에서 확인한 결과를 보여준다.
도 20은 SP600125 투여에 의한 p-NF-κB, IL-1β, TNF-α 및 iNOS의 수준 변화를 외상성 뇌손상 동물모델에서 확인한 결과를 보여준다.
도 21은 SP600125 투여에 의한 NF-κB 활성 및 TNF-α의 수준 변화를 외상성 뇌손상 동물모델에서 시간대별로 확인한 결과를 보여준다.
도 22은 SP600125 투여에 의한 IL-1β의 수준 변화를 외상성 뇌손상 동물모델에서 면역형광염색으로 확인한 결과를 보여준다.
도 23은 SP600125 투여에 의한 p-p38, p-ERK1/2 및 p-AKT의 수준 변화를 외상성 뇌손상 동물모델에서 확인한 결과를 보여준다.
도 24은 SP600125 처리에 의한 p-p38, p-ERK1/2 및 p-AKT의 수준 변화를 뇌 내피세포 세포주에서 시간대별로 확인한 결과를 보여준다.
도 25은 SP600125 투여에 의한 PSD-95, SNAP-23 및 SYP의 수준 변화를 외상성 뇌손상 동물모델에서 확인한 결과를 보여준다.
도 26은 SP600125 투여에 의한 SNAP-23의 수준 변화를 외상성 뇌손상 동물모델에서 면역형광염색으로 확인한 결과를 보여준다.
도 27은 SP600125 투여 여부에 따른 외상성 뇌손상 동물모델의 수중미로 실험 결과를 보여준다.
도 28은 SP600125 투여 여부에 따른 외상성 뇌손상 동물모델의 플랫폼 도달시간(latency to platform), 수영 속도, 교차 횟수(number of crossing) 및 표적 사분면에서 소모하는 시간(time spent in the target quardrent)을 측정한 결과를 보여준다.
도 29는 SP600125 투여 여부에 따른 외상성 뇌손상 동물모델의 평행봉 걷기 검사 결과를 보여준다.
이하 하나 이상의 구체예를 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나 이들 실시예는 하나 이상의 구체예를 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실험방법
1.
TBI
모델(Traumatic brain injury model)
8주령의 수컷 C57BL/6J 마우스는 샘타코 바이오(Samtako Bio, 대한민국)에서 구입하여 23℃에서 12시간 명암주기, 습도 60±10% 습도 및 임의 섭식 조건으로 사육하였다. 1주일간의 적응기간을 거친 후, 마우스를 무작위로 4그룹으로 나누었다.
1-1.
Feeney'
s
자유 낙하 모델 (
Feeney'
s
Weight Drop model)
기존에 알려진 방법(Feeney et al. 1981; Tian et al. 2012)을 일부 변형시켜 외상성 뇌손상 모델(Traumatic brain injury model; 이하, TBI 모델로 기재함)을 제작하였다. 간략하게, 마우스를 졸레틸(zoletil) 및 롬펀(rompun)으로 마취시켜 뇌 고정장치(stereotaxic)에 고정하고, 세로 방향으로 중간 절개하여 머리뼈를 노출시켰다. 치과용 드릴을 이용하여 5 ㎜ 직경(브레그마(bregma) 후방 1 ㎜ 및 중심선(midline) 측면 2 ㎜)으로 머리뼈를 원형 절개하였다. 이때 경막(dura)은 손상시키지 않고 남겨두었다. 직경 4 ㎜의 평면 말단 직경(flat end diameter)을 가지는 50 g 철 막대(steel rod)를 경막 위에 위치한 피스톤(piston)에 낙하시켰다. 표준화된 두부 손상(parietal contusion)을 유도하기 위하여 낙하 높이는 20 ㎝로 설정하였다. 2 ㎜의 뇌 변형 깊이(brain deformation depth)를 만들기 위하여, 조직을 최대 4 ㎜까지 압축할 수 있도록 피스톤을 조정하였다. 머리뼈는 뼈 밀랍(bone wax)으로 봉인하였으며, 피부는 실크 봉합사(silk suture)로 봉합하였다. 대조군 마우스는 두부 손상을 제외하고, 동일한 과정을 진행하였다. 마취에서 깨어날 때까지 열 램프를 이용하여 마우스를 따뜻한 상태에서 회복시켰다. 마취로 인한 활력징후의 변화가 안정될 때까지 15분 내지 20분마다 마우스를 육안으로 모니터하였다.
1-2. 반복적인 경도 외상성 뇌손상(Repetitive Mild Traumatic Brain Injury,
rmTBI
) 모델
8 내지 10주령의 마우스를 무작위로 2개 그룹으로 나누고, 반복적인 경도 외상성 뇌손상(repetitive mild traumatic brain injury; 이하, rmTBI로 기재함)을 가하거나, 또는 이전에 알려진 방법(J Cereb Blood Flow Metab. 35:443-453.)을 일부 변형시켜 샴 손상(sham injury)을 가하였다. 간략하게, 마우스를 졸레틸과 롬펀으로 마취시킨 후 뇌 고정장치에 고정시키고, 중심선 절개로 머리뼈를 노출시켰다. 마취된 마우스를 비어 있는 가이드 다공 튜브(hollow guided perforated tube) 아래에 놓아 두었다. 이후, 58 g 무게의 물체를 28 ㎝ 높이에서 가이드 다공 튜브를 따라 낙하시켜 머리의 오른쪽 정면에 rmTBI를 유도하였다. 마우스에 4일 동안 3회 rmTBI를 유도하였다. 손상 후, 피부를 봉합하고, 마우스가 완전히 회복될 때까지 따뜻한 상태에서 사육하였다. 회복된 마우스는 케이지로 복귀시켰다. 첫 번째 손상을 유도한 다음날 두 번째 손상을 유도하였다. 두 번째 손상을 유도한 후 1일의 휴식 시간을 주고, 세 번째 손상은 첫 번째 손상을 유도한 후 4일째 되는 날 수행하였다. 샴-손상 마우스는 머리 부상 없이 마취만 실시하였다. 머리 손상 유도는 열 램프로 지속적으로 열을 가하면서 수행하였다. 손상이 유도된 마우스는 실험실에서 신선한 공기에 노출시켰고, 완전히 회복될 때까지 모니터하였다.
체외(in vitro) TBI 모델을 만들기 위하여, 알려진 방법(Exp Neurol. 237:489-498)에 따라 트랜스액션 모델(transaction model)을 제작하였다. 간략하게, SH-SY5Y를 DMEM(Dulbecco's modified Eagle medium)으로 6-웰 플레이트에서 배양하고, 멸균된 파이펫 팁으로 4 ㎜ 간격으로 스크래칭(scratching)하여 9x9 사각 격자(square grid)를 만들었다. 스크래칭 후, 세포를 37℃에서 배양하였다. 세포를 하기 세 그룹으로 나누었다: 무손상 그룹(con), 스크래치 그룹(Scr.Inj), 및 스크래치+SP600125 그룹(Scr.Inj+SP600125). 세포에 SP600125을 처리하여 배양한 후 서로 다른 시간(8, 24 및 36시간)에 세포를 회수하고, 면역블롯을 수행하였다.
또한, 뇌 내피세포 세포주(Brain endothelial cells line)인 bEnd.3(ATCC)를 DMEM으로 6-웰 플레이트에서 배양하고, 상기 SH-SY5Y 세포와 동일한 방식으로 스크래칭한 후 세포를 수거하여 면역블롯을 수행하였다.
2. SP600125 투여 방법
TBI를 유도한 마우스를 하기 두 군으로 나누었다: 개두-자유 낙하 모델(craniotomy-weight drop model=Feeney's 자유 낙하 모델) 및 rmTBI 모델. 개두-자유 낙하 모델 마우스는 하기와 같이 분류하여 투여하였다: ⑴ 식염수-투여 대조 그룹; ⑵ TIB 그룹; ⑶ TBI+SP600125 (20 ㎎/㎏/i.p./daily); 및 ⑷ 샴 처리 그룹. rmTBI 모델은 하기와 같이 분류하여 투여하였다: ⑴ 식염수-투여 대조 그룹; ⑵ rmTIB 그룹; ⑶ rmTBI+SP600125 (10 ㎎/㎏/i.p./daily); 및 ⑷ rmTBI+SP600125 (20 ㎎/㎏/i.p./daily). bEnd.3에는 SP600125 20 uM을 처리하였고, SH-SY5Y에는 서로 다른 농도(10, 20 또는 30 uM)로 처리하였다.
3. 혈액-뇌 장벽(blood-brain barrier) 유지 여부 확인
TIB 마우스의 뇌에서 에반스 블루(Evans blue; 이하, EB로 기재함)의 혈관외유출(extravasation) 여부를 확인하여 혈액-뇌 장벽(blood-brain barrier; 이하, BBB로 기재함)의 투과성(permeability)을 평가하였다(Neuropharmacology, 85:18-26에 개시된 방법을 일부 변형). EB는 0.9% 염화나트륨 용액에 준비하고, TBI 후 24시간이 지난 다음 3 ㎎/㎏ 농도의 부피로 마우스의 꼬리에 1분 동안 정맥 주입(40 ㎎/㎏)하였다. 2시간 후, EB 함량을 620 ㎚에서 측정하였다. 측정 결과는 EB(ng)/순수 뇌 무게(g)로 표시하였다.
4. 뇌 수분 함량 (brain water content)
TBI 이후 24시간이 지난 뒤에 뇌의 부종(edema) 정도를 측정하였다(J Cereb Blood Flow Metab. 25:477-484에 개시된 방법을 일부 변형). 간략하게, 처리군 마우스로부터 뇌를 분리하여 무게를 측정하고, 100℃에서 24시간 동안 건조시켰다. 뇌 무게를 다시 측정하여 뇌의 건조 무게를 확인하고, 뇌의 수분 함량을 하기 수학식 1에 따라 계산하였다.
5. 평행봉 걷기 검사
운동 협응(motor coordination) 및 기능을 확인하기 위하여, TBI 마우스에 대한 평행봉 걷기 검사(beam walking test; 이하, BWT로 기재함)를 수행하였다. BWT는 손상된 동물과 샴 동물 사이에서 정교한 운동 협응 차이를 구분하는 방법이다. 손상된 동물은 열린 공간에서 도망치기 위하여 좁은 평행봉을 걸어 평행봉 반대편의 검정 박스로 들어가는 경향이 있으므로, 검정 박스에 들어가는 시간을 기록하였다. 동물들은 TBI 2시간 전과 TBI 이후 1, 3 및 7일에 3회 검사를 수행하였다.
6. 모리스 수중 미로 실험
TBI-손상 마우스의 인지 능력(cognitive albility) 저하에 대한 SP600125의 효과를 모리스 수중 미로 실험(Morris water maze test; 이하, MWM으로 기재함)으로 분석하였다. MWM 장치는 물이 채워진 원형 탱크이며, 물에 흰색 잉크를 풀어 물을 불투명하게 만들었다. 탱크의 사분 면중 하나에는 물 표면 1 ㎝ 아래에 플랫폼(10 ㎝ 직경)이 숨겨져 있다. 각 실험마다, 60초 동안 마우스가 숨겨진 플랫폼을 발견하도록 하고, 60초 이내에 플랫폼에 도달하지 못하면, 플랫폼을 발견할 수 있도록 가이드하여 30초 동안 플랫폼에서 머무르도록 하였다. 각 마우스들은 4일 연속으로 학습 시험(traing trial)을 4번 받았다. 각 실험마다, 각 마우스의 회피 지연 및 수영 속도를 계산하였다. 다음날, 공간 기억력(spatial memory)을 확인하기 위하여 플랫폼을 제거한 후 프로브 테스트(probe test)를 수행하였다. 프로브 시험(Probe trial)을 위해서, 플랫폼 위치에 도달하는 시간(latency to the platform location), 교차 횟수(the number of crossings), 수영 속도, 및 표적 사분면에 도달하는 시간(time spent in the target quadrant)을 기록하였다. 실험 결과는 비디오 트랙킹 시스템(SMART, Panlab Harvard Apparatus, Bioscience Company)을 이용하여 기록하였다.
7. 단백질 추출
실험 종료 후, 마우스를 마취하여 희생시킨 후 뇌를 분리하였다. 동측 피질(ipsilateral cortex)과 해마(hippocampus) 영역을 조심스럽게 절개하여, -80℃에 보관하였다. 해마와 피질의 조직은 pro-prep extraction solution(iNtRON Biotechnology; 대한민국)을 이용하여 균질화한 후 원심분리하였다. 단백질은 -80℃에 보관하고, 추후 면역블롯팅 (immunoblotting)을 수행하였다.
8.
Aβ
1
-42
ELISA 분석
피질과 해마 균질액에서의 Aβ1 -42 수준은 모든 4개 그룹에서 3일 및 5일에 분석하였다. Aβ1 -42 수준은 Sandwich ELISA kit (Cat#: KHB3442; Thermo Fisher Scientific)를 이용하여 제조사의 프로토콜에 따라 분석하였다.
9. 염증
마커
(inflammatory marker) 확인
TBI 이후 3일 및 7일 되는 날에 모든 4그룹의 실험동물에서 피질 균질액의 염증반응 마커를 확인하였다. NF-κB와 TNFα 수준은 Cat #: KHO037(Thermo Fisher Scientific, 미국) 및 Cat #: DY410(R&D Systems, 미국) 키트를 이용하여 측정하였다.
10.
웨스턴
블롯
분석 (Western blot analysis)
단백질 발현 수준을 확인하기 위하여 웨스턴을 수행하였다. 간략하게, Bio-Rad protein assay kit (Bio-Rad Laboratories)로 피질과 해마에서 분리한 단백질의 농도를 측정하였다. 동일한 양의 단백질을 10% SDS 폴리아크릴아미드 젤 전기영동(polyacrylamide gel electrophoresis)으로 분리하고, PVDF 막으로 트랜스퍼하였다. 이후 비특이적 결합을 줄이기 위하여 막을 5%(w/v) 스킴 밀크로 블록킹하고, 1차 항체와 4에서 하룻밤 동안 반응시켰다. 이후 막을 세척하고, 2차 항체와 반응시킨 후 ECL chemiluminescence system(Atto Corporation Tokyo, 일본)을 이용하여 제조사의 지시에 따라 단백질 밴드를 확인하였다. 모든 블롯은 베타 액틴 항체를 이용하여 정규화(normalization)하였다. 사용한 1차 항체를 하기 표 1에 기재하였으며, I.F는 면역형광(immunofluorescence)의 약자이고, W.B는 웨스턴 블롯(Western blot)의 약자이다.
Antibody | Host | Application | Source |
Aβ1 -42 | Mouse | I.F/W.B | Santa Cruz Biotechnology |
BACE1 | Rabbit | W.B | Santa Cruz Biotechnology |
p-JNK | Mouse | I.F/W.B | Santa Cruz Biotechnology |
APP | Rabbit | I.F/W.B | Millipore USA |
Neprilysin | Rabbit | W.B | Santa Cruz Biotechnology |
IDE | Goat | W.B | Santa Cruz Biotechnology |
p-CDK5 | Goat | W.B | Santa Cruz Biotechnology |
p-GSK3β(Ser9) | Goat | W.B | Santa Cruz Biotechnology |
p-Tau (Ser413) | Rabbit | I.F/W.B | Santa Cruz Biotechnology |
p-Tau (Ser404) | Goat | W.B | Santa Cruz Biotechnology |
Total Tau | Rabbit | W.B | ABCAM |
ADAM17 | Rabbit | W.B | Santa Cruz Biotechnology |
PARP-1 | Mouse | W.B | Santa Cruz Biotechnology |
Cloudin-5 | Rabbit | W.B | Santa Cruz Biotechnology |
ZO-1 | Rabbit | W.B | Santa Cruz Biotechnology |
TNF-α | Mouse | W.B | Santa Cruz Biotechnology |
Caspase-3 | Mouse | I.F/W.B | Santa Cruz Biotechnology |
Bax | Rabbit | W.B | Santa Cruz Biotechnology |
p-NF-KB | Mouse | W.B | Santa Cruz Biotechnology |
IL1-β | Rabbit | I.F/W.B | Santa Cruz Biotechnology |
Synaptophysin | Mouse | W.B | Santa Cruz Biotechnology |
SNAP23 | Rabbit | I.F/W.B | Santa Cruz Biotechnology |
PSD95 | Mouse | W.B | Santa Cruz Biotechnology |
p-38MAPK | Rabbit | W.B | Santa Cruz Biotechnology |
p-ERK1/2 Thr202/Tyr204 |
Rabbit | W.B | Cell signaling |
p-AKT(413) | Rabbit | W.B | Santa Cruz Biotechnology |
β-Actin | Mouse | W.B | Santa Cruz Biotechnology |
11. 조직 수집 및 샘플 준비
뇌 섹션(brain section) 염색을 위하여, 마우스(n=5)를 마취시키고, 식염수(saline)로 경심관류(transcardial perfusion)를 시행한 후 4% 파라포름알데하이드(paraformaldehyde)로 고정시켰다. 마우스로부터 뇌를 분리하여 20% 수크로스 용액으로 48시간 동안 후고정(postfix)시키고, OCT 컴파운드(OCT compound)로 동결시켰다. Vibratome(Leica, 독일)을 이용하여 14 ㎛ 두께로 뇌를 섹션하고, probe-on plus charged slides (Fisher)에 마운트한 후 -80℃에 보관하였다.
12. 뇌
변병
부위(brain lesion) 부피 측정
뇌 섹션 슬라이드를 크레실 바이올렛(cresyl violet)으로 염색하여 이미지를 확인하였다. 마우스 뇌의 손상 부위와 SP600125를 처리한 뇌 손상 부위의 디지털 이미지를 촬영한 후 ImageJ software로 분석하였다. TBI 마우스의 손상 부위와 SP600125를 처리한 손상 부위를 추적한 후, 동측 반구 면적(ipsilateral hemispheres area)의 합에 섹션 사이의 거리를 곱하여 병변 부위의 부피를 계산하였다.
13.
면역형광
염색 (
Immunofluorescence
Staining)
해마 및 피질 조직을 포함하는 슬라이드를 선택하여 면역형광 염색을 수행하였다. 슬라이드를 하룻밤 동안 실온에서 건조시킨 후 PBS(0.01 mM)로 8 내지 10분씩 2회 세척하였다. 슬라이드를 proteinase K와 5분 동안 반응시키고, PBS(0.01 mM)로 세척한 후 2% 정상 혈청(goat/rabbit normal serum; in PBS containing 0.1% Triton X-100)으로 블록킹하였다. 슬라이드를 1차 항체와 4℃에서 하룻밤 동안 반응시켰으며, 1차 항체는 anti-p-JNK, anti-Aβ (B-4), anti-p-Tau(Ser413), anticaspase-3, 및 anti-SNAP23 (Santa Cruz Biotechnology)과 anti-APP(Millipore)를 이용하였다. 이후 슬라이드를 tetramethylerhodamine isothiocyante-fluorescein isothiocyante(FITC)-결합 2차 항체 (anti-goat, anti-rabbit 및 anti-mouse)와 실온에서 90분 동안 반응시켰다. 마운팅 용액(mounting medium)를 이용하여 슬라이드 위에 커버슬립(cover slip)을 덮고, 공초점레이저주사현미경(confocal laser-scanning microscope; FluoView FV 1000 MPE)으로 염색 이미지를 확인하였다.
14. 세포 내
ROS
측정
뇌 피질의 ROS(reactive oxygen species) 수준은 당 업계에 알려진 2,7-dichlorodihydrofluorescein diacetate(DCFH-DA) 분석법(Mol Neurobiol. 54:255-271)을 일부 변형하여 이용하였다.
15.
Fluoro
-Jade B 염색
Fluoro-Jade B(FJB; cat# AG310, Millipore) 염색은 제조사의 프로토콜에 따라 수행하였다. 슬라이드를 실온에서 건조시킨 후 1% 수산화나트륨(sodium hydroxide) 용액 및 80% 에탄올 용액에 4분 내지 5분 동안 담갔다. 이후 슬라이드를 70% 에탄올로 세척하고, 증류수(distilled water, DW)로 2분 내지 3분 동안 헹구었다. 슬라이드를 0.06% 염화마그네슘(MgCl2) 용액으로 옮겨 10분 동안 담근 후 증류수로 씻어내고, 0.1% 아세트산 및 0.01% FJB를 포함하는 용액에 20분 동안 담궈 염색하였다. 슬라이드를 자일렌(xylene)으로 5분 동안 세척하고, DPX 마운팅 용액을 이용하여 슬라이드에 글래스 커버슬립을 덮었다. 및 DAPI 용액을 마운팅하였다. 공초점레이저주사현미경으로 염색 이미지를 확인하였다.
16. 통계 분석
면역블롯 밴드는 스캔한 후 Sigma gel software(SPSS Inc.)를 이용하여 덴시토메트리(densitometry)로 분석하였다. 면역조직학적 분석은 ImageJ software(미국 국립보건원에서 제공하는 공개 소프트웨어)를 이용하였고, 실험 결과는 평균±표준 평균 오차(standard error mean, SEM) 수치로 표시하였다. 실험 결과는 Prism 5(graph Pad Software, 미국)를 이용하여 일원 분산 분석(one-way analysis of variance, ANOVA)과 Student's t-test로 분석하였다. 결과값이 p<0.05인 경우 유의한 결과로 판단하였다. 기호 * P<0.05, ** P<0.01 및 *** P<0.01은 대조군과 TBI군 사이에 유의한 차이가 있는 것을 의미하며, 기호 # P<0.05, ## P<0.01 및 ### P<0.01은 TBI군과 TBI+SP600125군 사이에 유의한 차이가 있는 것을 나타낸다.
실험결과
1. SP600125 투여에 의한
JNK의
인산화 억제
TBI 마우스의 뇌 균질액에서 웨스턴 블롯으로 활성화된 JNK(active JNK)를 확인하였다.
확인 결과, 도 1에 나타난 바와 같이 식염수를 처리한 대조군 마우스에 비해 TBI 자유 낙하 모델 마우스의 동측 피질과 해마에서는 인산화된 JNK(이하, p-JNK로 기재함)의 수준이 증가하는 것을 확인할 수 있었다. 반면, SP600125 10 ㎎/㎏ 투여한 마우스는 JNK 단백질 수준이 31% 정도 감소하였고, 20 ㎎/㎏ 투여한 마우스에서는 52% 감소한 것을 확인할 수 있었다. SP600125만을 단독 투여한 경우 마우스의 뇌에서 독성 효과를 확인할 수 없었다.
도 2에 나타난 바와 같이 rmTBI 마우스에서도 유사한 결과를 확인할 수 있었으며, SP600125 투여 농도에 의존적으로 p-JNK의 수준이 감소하는 것을 알 수 있었다.
또한, 면역형광 염색 결과 도 3에 나타난 바와 같이 TBI 마우스는 해마의 치상핵(dentate gyrus, DG)과 암몬각(cornus ammoni, CA)에서 p-JNK의 수준이 증가하나, SP600125를 투여한 경우 p-JNK 수준이 유의하게 감소하였다.
2. SP600125 투여에 의한 APP 및
Aβ
생성 감소
TBI 마우스 뇌의 피질 및 해마에서 JNK 저해에 의하여 APP와 Aβ의 수준이 변하는지 확인하였다. 웨스턴 블롯 결과, 도 4에 나타난 바와 같이 TBI 마우스 뇌의 피질 및 해마에서는 APP의 발현이 증가하고, Aβ가 축적되는 것을 확인할 수 있었다. 또한, 도 2에 나타난 바와 같이 rmTBI 마우스에서도 APP와 Aβ 수준이 증가하는 것을 알 수 있었다.
그러나 TBI 마우스 및 rmTBI 마우스 모두에서 SP600125를 투여한 군은 APP와 Aβ 수준이 유의하게 감소하였다. 도 5에 나타난 바와 같이 면역형광 염색을 통해서도 TBI 마우스의 피질 및 해마에서 APP 및 Aβ의 수준이 증가하나, SP600125 투여에 의하여 감소되는 것을 알 수 있었다.
또한, Aβ1 -42 수준을 TBI 이후 3일, 7일 되는 날에 측정한 결과 도 7에 나타난 바와 같이 TBI 마우스에서 증가되어 있는 것을 확인할 수 있었으며, SP600125 투여에 의하여 감소되는 것을 알 수 있었다. 식염수 투여군과 SP600125 투여군 사이에 유의미한 차이는 없었다.
또한, JNK와 APP의 상호작용(interaction) 여부를 TBI 이후 7일 되는 날 피질에서 확인한 결과 도 6에 나타난 바와 같이 서로 상호작용하지 않는 것을 알 수 있었다.
3. SP600125 투여에 의한
세크레타제
(
secretase
) 발현 변화
TBI 마우스의 뇌에서 일부 세크레타제의 발현 이상(J Neural Transm (Vienna). 111:523-536)이 알려져 있기 때문에 SP600125 투여에 의한 세크레타제의 발현 변화를 확인하였다.
확인 결과, 도 4 및 도 8에 나타난 바와 같이 TBI 마우스의 경우 β-세크레타제(beta-secretase1, beta-site amyloid precursor protein cleaving enzyme 1, BACE1)의 발현이 증가하였고, α-세크레타제(ADAM metallopeptidase domain 17, ADAM17)의 발현은 감소되어 있었다.
그러나 도 4 및 도 8에 나타난 바와 같이 SP600125 투여에 의하여 상기 발현 변화는 반전되었다.
또한, Aβ를 분해하는 것으로 알려진 insulin degrading enzyme (IDE)와 NEP의 발현을 확인한 결과, 실험군 사이에 유의미한 차이가 없는 것을 알 수 있었다.
상기 실험 결과를 통하여 Aβ의 분해에는 변화가 없으나 TBI 마우스의 경우 아밀로이드 경로가 활성화되고, 비아밀로이드 경로는 억제되어 Aβ 생성이 증가하고, SP600125를 투여하면 비아밀로이드 경로가 활성화되고, 아밀로이드 경로는 억제되어 Aβ 생성이 감소됨을 유추할 수 있다.
4. SP600125 투여에 의한
타우
인산화 감소
타우(tau) 단백질의 인산화(Ser413 및 Ser404)를 확인한 결과, 도 9에 나타난 바와 같이 대조군(식염수 투여군)과 비교하여 TBI 마우스에서 타우 인산화가 증가한 것을 확인할 수 있었다. 그러나 SP600125 투여에 의하여 인산화는 감소하였다.
또한, 타우 인산화에 관여하는 GSK3β(glycogen synthase kinase-3b)와 CDK5(cyclin dependent kinase 5)의 인산화 수준을 확인한 결과, 도 9에 나타난 바와 같이 TBI 마우스 뇌 피질에서 GSK3β의 인산화가 증가되어 있는 것을 알 수 있었다. 그러나 SP600125 투여에 의하여 인산화는 감소하였다. 다만 CDK5의 변화는 확인할 수 없었다.
면역형광 염색을 통해서도 상기 웨스턴 블롯과 유사한 결과를 확인할 수 있었다(도 10). 상기 실험 결과를 통하여 SP600125가 타우 인산화를 저해하여 아밀로이드 생성 경로를 억제함을 유추할 수 있다.
5. SP600125 처리에 의한 아밀로이드 생성 경로 억제
SH-SY5Y 세포에서 스크래치 손상(scratch injury) 8, 24 및 36시간 후에 p-JNK, APP 및 Aβ의 발현이 증가하는지 여부를 확인하였다.
확인 결과, 도 11 및 도 12에 나타난 바와 같이 스크래치 손상 24시간 후에 p-JNK, APP 및 Aβ의 발현이 증가한 것을 확인할 수 있었으며, 이러한 발현 증가는 SP600125 처리(20 uM)에 의하여 감소하는 것을 알 수 있었다. 상기 실험 결과를 통하여, 신경 손상이 JNK 및 아밀로이드 경로를 활성화시키는 스트레스를 유도함을 유추할 수 있다.
또한, 서로 다른 농도(10, 20 및 30 uM)의 SP600125를 처리하고, 24시간 후에 JNK의 활성 억제 수준을 확인한 결과 도 13에 나타난 바와 같이 20 및 30 uM 농도에서 JNK의 활성이 유의하게 억제되는 것을 확인할 수 있었다.
6.
SP600125 투여에 의한 뇌혈관 장벽 및 뇌 병변 부위 변화
도 14A에 나타난 바와 같이 EB(Evans blue) 함량은 TBI 마우스의 뇌에서 현저하게 증가하였다. 그러나, SP600125 투여에 의하여 상기 증상은 반전되었다.
또한, 병변 부위(Lesion volume was)의 부피를 크레실 바이올렛 염색으로 확인한 결과, 도 14B에 나타난 바와 같이 SP600125 투여에 의하여 감소하는 것을 확인할 수 있었다.
또한, TBI 마우스의 피질에서 BBB 붕괴 마커인 claudin-5 및 ZO-1의 발현 수준을 웨스턴으로 확인하였다. 도 15에 나타난 바와 같이 TBI 마우스에서는 발현이 감소되나, SP600125 투여에 의하여 대조군 수준까지 발현이 회복되는 것을 확인할 수 있었다.
또한, bEnd.3 세포에서 신경 손상이 BBB 붕괴에 직접적인 영향을 미치는지 확인하였다. 서로 다른 시간에 claudin-5 및 ZO-1의 발현 수준을 확인한 결과, 발현에 차이가 없는 것을 확인할 수 있었다. 본 실험 결과를 통하여 TBI-유도에 의한 신경염증(neuroinammation)으로 인하여 BBB가 붕괴된다는 것을 유추할 수 있으며, JNK 의존성 기작을 통하여 신경염증을 억제함으로써 BBB 붕괴를 역전시킬 수 있음을 알 수 있다.
7. SP600125 투여에 의한 외상 후 뇌 부종(posttraumatic Brain Edema) 형성 변화
TBI 후 24시간 뒤에 뇌 부종 형성 정도를 분석하였다. 그 결과, 도 14C에 나타난 바와 같이 TBI 마우스와 비교하여 SP600125를 투여한 마우스에서 뇌 수분 함량이 유의하게 감소하는 것을 확인할 수 있었다. 대조군과 SP600125만 투여한 마우스 사이에서는 뇌 수분 함량에 유의미한 차이를 발견할 수 없었다.
8.
SP600125 투여에 의한
세포사멸성
신경퇴화(
apoptotic
degeneration) 변화
웨스턴 블롯 결과, 도 17에 나타난 바와 같이 세포사멸 마커인 절단된 카스파제-3(cleaved caspase-3), Bax 및 PARP(DNA 손상 마커)의 발현이 증가하고, Bcl2의 발현은 감소된 것을 확인할 수 있었다. 이러한 발현 변화는 SP600125 투여에 의하여 반전되어 세포사멸 마커의 작용이 억제된 것을 알 수 있었다.
또한, 도 18에 나타난 바와 같이 면역형광 염색을 통해서도 SP600125 투여에 의하여 절단된 카스파제-3의 발현이 감소된 것을 확인할 수 있었다. TBI 피질에서는 FJB-양성 세포가 증가하였으나, SP600125를 투여한 경우 FJB-양성 세포의 수가 감소하였다.
9. SP600125 투여에 의한
산화적
스트레스 감소
TBI 이후 7일에 뇌 피질에서 ROS(reactive oxygen species) 생성 정도를 확인하였다.
확인 결과, 도 19에 나타난 바와 같이 TBI 피질에서는 ROS 생성이 증가하였으나, SP600125 투여에 의하여 ROS 생성이 감소되는 것을 확인할 수 있었다. 본 실험 결과는 JNK를 억제함으로써 TBI 뇌에서 ROS-유도성 신경퇴화를 억제할 수 있음을 의미한다.
10. SP600125 투여에 의한 염증성 매개체(
Inammatory
Mediators) 저해
TBI 마우스 뇌의 피질에서 웨스턴 블롯으로 염증 반응 관련 마커의 발현을 확인하였다.
확인 결과, 도 20에 나타난 바와 같이 식염수만 투여한 대조군 마우스와 비교하여 TBI 마우스 뇌의 피질에서는 염증 마커인 p-NF-κB, TNF-α, IL-1β 및 iNOS(inducible nitric oxide synthase)의 발현이 증가되어 있는 것을 알 수 있었다. 상기 발현 증가는 SP600125 투여에 의하여 유의하게 감소하였다.
또한, NF-κB 65 및 TNF-α와 같은 염증 반응 매개체들의 수준을 TBI 마우스 뇌의 동측 피질에서 확인하였다. 그 결과, 도 21에 나타난 바와 같이 현저하게 증가된 것을 확인할 수 있었으며, SP600125 투여에 의하여 감소하는 것을 알 수 있었다.
또한, 도 22에 나타난 바와 같이 TBI 마우스 뇌의 피질에서 IL-1β의 수준이 증가되어 있는 것을 알 수 있었으며, 이러한 증가는 SP600125 투여에 의하여 반전되었다.
상기 실험 결과들을 통하여 SP600125가 손상된 뇌 피질에서 발생하는 염증 반응을 억제하는 효과가 있음을 알 수 있다.
11.
SP600125 투여에 의한 P-p38, p-
Akt
및 p-
Erk1
/2 수준 변화
TBI 마우스 뇌의 피질과 SH-SY5Y 세포에서 p38, ERK 및 AKT의 인산화 수준을 확인하였다.
확인 결과, 도 23에 나타난 바와 같이 TBI 마우스 뇌의 피질에서 p38의 인산화(P-p38)가 증가된 것을 알 수 있었으며, SP600125 투여에 의하여 반전되는 것을 확인할 수 있었다.
반면, 도 23에 나타난 바와 같이 TBI 마우스 뇌의 피질에서 p-ERK1/2 및 p-AKT(ser413) 수준은 감소하였으며, SP600125 투여에 의하여 인산화 수준이 증가하는 것을 확인할 수 있었다.
또한, 도 24에 나타난 바와 같이 SH-SY5Y 세포에서도 유사한 결과를 확인할 수 있었다.
12.
SP600125 투여에 의한 시냅스 단백질 손실(Synaptic Protein Loss) 억제
TBI 마우스 뇌의 피질에서 시냅스 마커(synaptic marker)를 웨스턴 블롯 및 공초점현미경으로 확인하였다.
확인 결과, 도 25에 개시된 바와 같이 TBI 마우스 뇌의 피질에서 SNAP23, SNAP-25 및 시냅토파이신(synaptophysin)의 수준이 현저하게 감소되어 있는 것을 알 수 있었다. 그러나 SP600125 투여에 의하여 상기 단백질의 수준은 대조군과 유사한 수준으로 회복되었다. 도 26에 나타난 바와 같이 형광염색 결과를 통해서도 유사한 결과를 확인할 수 있었다.
13.
SP600125 투여에 의한 운동 능력 및 기억력 손상 개선
뇌 손상 전과 뇌 손상 후 1, 3 및 7일에 평행봉 걷기 검사를 수행하였다.
그 결과, 도 29에 나타난 바와 같이 SP600125 투여군은 TBI 이후 손상되었던 운동 능력이 개선된 것을 확인할 수 있었다.
또한, 모리스 미로 실험 결과 도 27에 나타난 바와 같이 TBI 마우스는 학습 기간 동안 식염수-투여 대조군 마우스보다 긴 회피 시간(escape latency; 숨겨진 플랫폼에 도달하는 시간)을 나타내어 공간 학습(spatial learning) 능력이 손상된 것을 알 수 있었다. 그러나 SP600125 투여군은 회피 시간이 감소하여 공간 학습 능력이 개선된 것을 확인할 수 있었다.
또한, 도 28에 나타난 바와 같이 5일째에 프로브 트라이얼을 실시한 결과 TBI 마우스는 회피 시간이 증가하나, SP600125 투여군은 회피 시간이 감소하는 것을 알 수 있었다. 아울러, SP600125 투여군은 평균 수영 속도, 표적 사분면에서 머무르는 시간 및 사분면 교차 횟수가 증가하여 운동 능력 및 기억력이 개선된 것을 알 수 있었다.
TBI 없이 SP600125만 투여한 그룹은 대조군과 유의미한 차이를 나타내지 않아 SP600125 자체는 학습 및 기억력에 직접적인 영향을 미치지 않는 것을 알 수 있었다.
이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.
Claims (5)
- 제1항에 있어서, 상기 퇴행성 신경질환은 외상성 뇌손상(traumatic brain injury)에 의하여 유도된 것인 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 조성물은 c-Jun 인산화효소(c-Jun N-terminal kinase)의 활성을 억제하는 것인 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 조성물은 신경세포의 퇴화 또는 염증반응을 억제하는 것인 조성물.
Priority Applications (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR1020170144178A KR20190048894A (ko) | 2017-10-31 | 2017-10-31 | Jnk 활성 억제제를 유효성분으로 포함하는 퇴행성 신경질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 |
PCT/KR2018/007287 WO2019088395A1 (ko) | 2017-10-31 | 2018-06-27 | Jnk 활성 억제제를 유효성분으로 포함하는 퇴행성 신경질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR1020170144178A KR20190048894A (ko) | 2017-10-31 | 2017-10-31 | Jnk 활성 억제제를 유효성분으로 포함하는 퇴행성 신경질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
KR1020190111030A Division KR102070403B1 (ko) | 2019-09-06 | 2019-09-06 | Jnk 활성 억제제를 유효성분으로 포함하는 외상성 뇌손상의 치료용 약학적 조성물 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
KR20190048894A true KR20190048894A (ko) | 2019-05-09 |
Family
ID=66333224
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
KR1020170144178A KR20190048894A (ko) | 2017-10-31 | 2017-10-31 | Jnk 활성 억제제를 유효성분으로 포함하는 퇴행성 신경질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 |
Country Status (2)
Country | Link |
---|---|
KR (1) | KR20190048894A (ko) |
WO (1) | WO2019088395A1 (ko) |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20130128437A (ko) | 2010-12-17 | 2013-11-26 | 안트로제네시스 코포레이션 | 태반 줄기 세포를 이용하는 척수 손상 및 외상성 뇌 손상의 치료 |
-
2017
- 2017-10-31 KR KR1020170144178A patent/KR20190048894A/ko active Application Filing
-
2018
- 2018-06-27 WO PCT/KR2018/007287 patent/WO2019088395A1/ko active Application Filing
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20130128437A (ko) | 2010-12-17 | 2013-11-26 | 안트로제네시스 코포레이션 | 태반 줄기 세포를 이용하는 척수 손상 및 외상성 뇌 손상의 치료 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2019088395A1 (ko) | 2019-05-09 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Yamamoto et al. | Nobiletin improves brain ischemia-induced learning and memory deficits through stimulation of CaMKII and CREB phosphorylation | |
Huang et al. | Polysaccharides from Ganoderma lucidum promote cognitive function and neural progenitor proliferation in mouse model of Alzheimer's disease | |
Siddiqui et al. | Gallic and vanillic acid suppress inflammation and promote myelination in an in vitro mouse model of neurodegeneration | |
Esfandiary et al. | Novel effects of Rosa damascena extract on memory and neurogenesis in a rat model of Alzheimer's disease | |
KR101725150B1 (ko) | 브로콜리 잎 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 인지기능 또는 기억능력 개선용 조성물 | |
CN109073634A (zh) | 用于诱导神经干细胞的分化和保护的组合物及使用该组合物诱导神经再生的方法 | |
Chen et al. | Surface-fill H2S-releasing silk fibroin hydrogel for brain repair through the repression of neuronal pyroptosis | |
KR102091620B1 (ko) | 엘세린을 유효성분으로 포함하는 혈뇌장벽 장애의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 건강 기능 식품 | |
El-Mehi et al. | Controlled ozone therapy modulates the neurodegenerative changes in the frontal cortex of the aged albino rat | |
JP7411175B2 (ja) | リポカリン型プロスタグランジンd2合成酵素産生促進剤 | |
KR20190048894A (ko) | Jnk 활성 억제제를 유효성분으로 포함하는 퇴행성 신경질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 | |
Erbil et al. | Neuroprotective effects of selenium and ginkgo biloba extract (EGb761) against ischemia and reperfusion injury in rat brain | |
KR102070403B1 (ko) | Jnk 활성 억제제를 유효성분으로 포함하는 외상성 뇌손상의 치료용 약학적 조성물 | |
Moon et al. | The multi-herbal medicine Gongjin-dan enhances memory and learning tasks via NGF regulation | |
Yin et al. | Effect of tanshinone on the levels of nitric oxide synthase and acetylcholinesterase in the brain of Alzheimer’s disease rat model | |
ES2277567B1 (es) | Compuestos con propiedades neuroprotectoras. | |
KR101029699B1 (ko) | 생약추출물을 유효성분으로 함유하는 알쯔하이머 치매 치료 및 예방용 조성물 | |
Grieb | Citicoline and eye health | |
KR102573755B1 (ko) | 퀸피롤을 유효성분으로 포함하는 신경염증 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물 | |
Huang et al. | Protective effects of lipopolysaccharide preconditioning against nitric oxide neurotoxicity | |
KR101802659B1 (ko) | 비타니아 코아귤란스에서 분리한 화합물을 유효성분으로 함유하는 퇴행성 신경질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 | |
KR20090112261A (ko) | 당귀로부터 추출한 향유를 포함하는 알츠하이머병 치료를위한 조성물 | |
Tientcheu et al. | The extract of Sclerocarya birrea, Nauclea latifolia, and Piper longum mixture ameliorates diabetes-associated cognitive dysfunction | |
KR20190032677A (ko) | 유백피 추출물을 유효성분으로 포함하는 건망증 또는 기억장애의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 | |
KR20050092292A (ko) | 기억력 증강 효과가 있는 생약재 조성물 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A201 | Request for examination | ||
E902 | Notification of reason for refusal | ||
AMND | Amendment | ||
E601 | Decision to refuse application | ||
E601 | Decision to refuse application | ||
E801 | Decision on dismissal of amendment | ||
A107 | Divisional application of patent |