KR20190020805A - 수스의 면역 시스템을 프라이밍하는 방법 - Google Patents
수스의 면역 시스템을 프라이밍하는 방법 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20190020805A KR20190020805A KR1020197002308A KR20197002308A KR20190020805A KR 20190020805 A KR20190020805 A KR 20190020805A KR 1020197002308 A KR1020197002308 A KR 1020197002308A KR 20197002308 A KR20197002308 A KR 20197002308A KR 20190020805 A KR20190020805 A KR 20190020805A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- whole cell
- cell lysate
- administered
- mycobacteria
- sous
- Prior art date
Links
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 title claims abstract description 48
- 239000012130 whole-cell lysate Substances 0.000 claims abstract description 230
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 115
- 230000037452 priming Effects 0.000 claims abstract description 57
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 36
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 25
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 claims description 24
- 241000187480 Mycobacterium smegmatis Species 0.000 claims description 17
- 230000037396 body weight Effects 0.000 claims description 15
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 claims description 15
- 235000014102 seafood Nutrition 0.000 claims description 14
- 210000001132 alveolar macrophage Anatomy 0.000 claims description 13
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 9
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 claims description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 7
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 claims description 7
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 6
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 claims description 6
- 230000006433 tumor necrosis factor production Effects 0.000 claims description 6
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 claims description 5
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 claims description 5
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 claims description 4
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 claims description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 claims description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 47
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 47
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 41
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 41
- 239000000306 component Substances 0.000 description 41
- 206010057190 Respiratory tract infections Diseases 0.000 description 38
- 241001467578 Microbacterium Species 0.000 description 36
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 36
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 34
- 241000186359 Mycobacterium Species 0.000 description 32
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 29
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 17
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 17
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 17
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 17
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 16
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 16
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 13
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 13
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 12
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 12
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 12
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 11
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 11
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 11
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 10
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 9
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 9
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 9
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 8
- 241000282890 Sus Species 0.000 description 8
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 8
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 8
- 238000011161 development Methods 0.000 description 8
- 210000005007 innate immune system Anatomy 0.000 description 8
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 8
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 8
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 8
- 102000002689 Toll-like receptor Human genes 0.000 description 7
- 108020000411 Toll-like receptor Proteins 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 7
- 239000008358 core component Substances 0.000 description 7
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 7
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 7
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 7
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 6
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 6
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 6
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 6
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 6
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 6
- 108010042708 Acetylmuramyl-Alanyl-Isoglutamine Proteins 0.000 description 5
- 101710183446 C-type lectin domain family 4 member E Proteins 0.000 description 5
- 230000033289 adaptive immune response Effects 0.000 description 5
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 5
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 5
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 5
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 5
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 241000894007 species Species 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 241000134396 Babyrousa babyrussa Species 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000589902 Leptospira Species 0.000 description 4
- 241000187488 Mycobacterium sp. Species 0.000 description 4
- 241001135989 Porcine reproductive and respiratory syndrome virus Species 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- MCMNRKCIXSYSNV-UHFFFAOYSA-N Zirconium dioxide Chemical compound O=[Zr]=O MCMNRKCIXSYSNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960000190 bacillus calmette–guérin vaccine Drugs 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 4
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 4
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 4
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 4
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 4
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 4
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 4
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 4
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 4
- 102100034540 Adenomatous polyposis coli protein Human genes 0.000 description 3
- 229920000189 Arabinogalactan Polymers 0.000 description 3
- 239000001904 Arabinogalactan Substances 0.000 description 3
- 108090000342 C-Type Lectins Proteins 0.000 description 3
- 102000003930 C-Type Lectins Human genes 0.000 description 3
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101000924577 Homo sapiens Adenomatous polyposis coli protein Proteins 0.000 description 3
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 3
- 241000545499 Mycobacterium avium-intracellulare Species 0.000 description 3
- 241000186366 Mycobacterium bovis Species 0.000 description 3
- 241001467552 Mycobacterium bovis BCG Species 0.000 description 3
- 241000134401 Sus barbatus Species 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 230000034994 death Effects 0.000 description 3
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 3
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 3
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 3
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 230000008088 immune pathway Effects 0.000 description 3
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 3
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 3
- 230000014828 interferon-gamma production Effects 0.000 description 3
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 3
- BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N muramyl dipeptide Chemical compound OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H](O)[C@@H]1NC(C)=O BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N 0.000 description 3
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 3
- 235000015277 pork Nutrition 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 3
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000606748 Actinobacillus pleuropneumoniae Species 0.000 description 2
- 241001291962 Actinobaculum Species 0.000 description 2
- 241000186046 Actinomyces Species 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 241001148111 Brucella suis Species 0.000 description 2
- 102100028699 C-type lectin domain family 4 member E Human genes 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 2
- 101000831567 Homo sapiens Toll-like receptor 2 Proteins 0.000 description 2
- 241000944534 Hylochoerus meinertzhageni Species 0.000 description 2
- 102000007651 Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 2
- 108010046938 Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 2
- 241000186362 Mycobacterium leprae Species 0.000 description 2
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 description 2
- 241000579205 Mycoplasma suis Species 0.000 description 2
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 2
- 241001672793 Phacochoerus aethiopicus Species 0.000 description 2
- 241000132157 Phacochoerus africanus Species 0.000 description 2
- 241000434249 Potamochoerus larvatus Species 0.000 description 2
- 241000434248 Potamochoerus porcus Species 0.000 description 2
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BCKXLBQYZLBQEK-KVVVOXFISA-M Sodium oleate Chemical compound [Na+].CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC([O-])=O BCKXLBQYZLBQEK-KVVVOXFISA-M 0.000 description 2
- 241001291321 Sus cebifrons Species 0.000 description 2
- 241000434293 Sus celebensis Species 0.000 description 2
- 241001291315 Sus philippensis Species 0.000 description 2
- 241001551799 Sus salvanius Species 0.000 description 2
- 241000725681 Swine influenza virus Species 0.000 description 2
- 102100024333 Toll-like receptor 2 Human genes 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 2
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 2
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 2
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 2
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 230000003862 health status Effects 0.000 description 2
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 2
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 2
- FYGDTMLNYKFZSV-URKRLVJHSA-N (2s,3r,4s,5s,6r)-2-[(2r,4r,5r,6s)-4,5-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-[(2r,4r,5r,6s)-4,5,6-trihydroxy-2-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxan-3-yl]oxy-6-(hydroxymethyl)oxane-3,4,5-triol Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1[C@@H](CO)O[C@@H](OC2[C@H](O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O FYGDTMLNYKFZSV-URKRLVJHSA-N 0.000 description 1
- 108091064702 1 family Proteins 0.000 description 1
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SATHPVQTSSUFFW-UHFFFAOYSA-N 4-[6-[(3,5-dihydroxy-4-methoxyoxan-2-yl)oxymethyl]-3,5-dihydroxy-4-methoxyoxan-2-yl]oxy-2-(hydroxymethyl)-6-methyloxane-3,5-diol Chemical compound OC1C(OC)C(O)COC1OCC1C(O)C(OC)C(O)C(OC2C(C(CO)OC(C)C2O)O)O1 SATHPVQTSSUFFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GOZMBJCYMQQACI-UHFFFAOYSA-N 6,7-dimethyl-3-[[methyl-[2-[methyl-[[1-[3-(trifluoromethyl)phenyl]indol-3-yl]methyl]amino]ethyl]amino]methyl]chromen-4-one;dihydrochloride Chemical compound Cl.Cl.C=1OC2=CC(C)=C(C)C=C2C(=O)C=1CN(C)CCN(C)CC(C1=CC=CC=C11)=CN1C1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 GOZMBJCYMQQACI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- -1 7H9 Substances 0.000 description 1
- 241000606729 Actinobacillus equuli Species 0.000 description 1
- 241000606731 Actinobacillus suis Species 0.000 description 1
- 241000186043 Actinobaculum suis Species 0.000 description 1
- 241000701386 African swine fever virus Species 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 1
- 241000606646 Anaplasma Species 0.000 description 1
- 241000134398 Babyrousa Species 0.000 description 1
- 241000630756 Babyrousa celebensis Species 0.000 description 1
- 241000193738 Bacillus anthracis Species 0.000 description 1
- 208000023514 Barrett esophagus Diseases 0.000 description 1
- 229920002498 Beta-glucan Polymers 0.000 description 1
- 241000588779 Bordetella bronchiseptica Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 241001148534 Brachyspira Species 0.000 description 1
- 241000589893 Brachyspira hyodysenteriae Species 0.000 description 1
- 241000510930 Brachyspira pilosicoli Species 0.000 description 1
- 241000589567 Brucella abortus Species 0.000 description 1
- 102100040840 C-type lectin domain family 7 member A Human genes 0.000 description 1
- 108010009992 CD163 antigen Proteins 0.000 description 1
- 241000589877 Campylobacter coli Species 0.000 description 1
- 102100026089 Caspase recruitment domain-containing protein 9 Human genes 0.000 description 1
- 102100035882 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- 241000606161 Chlamydia Species 0.000 description 1
- 241001647378 Chlamydia psittaci Species 0.000 description 1
- 241000186581 Clostridium novyi Species 0.000 description 1
- 241000193468 Clostridium perfringens Species 0.000 description 1
- 241000193449 Clostridium tetani Species 0.000 description 1
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 1
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 1
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 description 1
- 241001134763 Corynebacterium flavescens Species 0.000 description 1
- 241000186427 Cutibacterium acnes Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 108010037897 DC-specific ICAM-3 grabbing nonintegrin Proteins 0.000 description 1
- 241001461743 Deltacoronavirus Species 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000186394 Eubacterium Species 0.000 description 1
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 208000005577 Gastroenteritis Diseases 0.000 description 1
- 241000606807 Glaesserella parasuis Species 0.000 description 1
- 241000606831 Histophilus somni Species 0.000 description 1
- 101000983508 Homo sapiens Caspase recruitment domain-containing protein 9 Proteins 0.000 description 1
- 101000946889 Homo sapiens Monocyte differentiation antigen CD14 Proteins 0.000 description 1
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 1
- 101000669447 Homo sapiens Toll-like receptor 4 Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 102000002227 Interferon Type I Human genes 0.000 description 1
- 108010014726 Interferon Type I Proteins 0.000 description 1
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 102000018682 Interleukin Receptor Common gamma Subunit Human genes 0.000 description 1
- 108010066719 Interleukin Receptor Common gamma Subunit Proteins 0.000 description 1
- 241000588748 Klebsiella Species 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 241001148567 Lawsonia intracellularis Species 0.000 description 1
- 108010028921 Lipopeptides Proteins 0.000 description 1
- 241000186779 Listeria monocytogenes Species 0.000 description 1
- 241001293418 Mannheimia haemolytica Species 0.000 description 1
- 108010031099 Mannose Receptor Proteins 0.000 description 1
- 241001643857 Menangle virus Species 0.000 description 1
- UEZVMMHDMIWARA-UHFFFAOYSA-N Metaphosphoric acid Chemical compound OP(=O)=O UEZVMMHDMIWARA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100035877 Monocyte differentiation antigen CD14 Human genes 0.000 description 1
- MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N Muraminsaeure Natural products OC(=O)C(C)OC1C(N)C(O)OC(CO)C1O MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100183772 Mus musculus Mfap2 gene Proteins 0.000 description 1
- 241001508003 Mycobacterium abscessus Species 0.000 description 1
- 241001467553 Mycobacterium africanum Species 0.000 description 1
- 241000957223 Mycobacterium alvei Species 0.000 description 1
- 241000186367 Mycobacterium avium Species 0.000 description 1
- 241000187482 Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis Species 0.000 description 1
- 241001312372 Mycobacterium canettii Species 0.000 description 1
- 241000187911 Mycobacterium farcinogenes Species 0.000 description 1
- 241000186365 Mycobacterium fortuitum Species 0.000 description 1
- 241000186363 Mycobacterium kansasii Species 0.000 description 1
- 241000908167 Mycobacterium lepraemurium Species 0.000 description 1
- 241000187492 Mycobacterium marinum Species 0.000 description 1
- 241000168058 Mycobacterium peregrinum Species 0.000 description 1
- 241000187481 Mycobacterium phlei Species 0.000 description 1
- 241001532509 Mycobacterium porcinum Species 0.000 description 1
- 241000187490 Mycobacterium scrofulaceum Species 0.000 description 1
- 241000187468 Mycobacterium senegalense Species 0.000 description 1
- 241000187477 Mycobacterium thermoresistibile Species 0.000 description 1
- 241000187917 Mycobacterium ulcerans Species 0.000 description 1
- 241000187644 Mycobacterium vaccae Species 0.000 description 1
- 241000187494 Mycobacterium xenopi Species 0.000 description 1
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 1
- 241000202899 Mycoplasma flocculare Species 0.000 description 1
- 241000204045 Mycoplasma hyopneumoniae Species 0.000 description 1
- 241000202938 Mycoplasma hyorhinis Species 0.000 description 1
- 241001148549 Mycoplasma hyosynoviae Species 0.000 description 1
- 102000003945 NF-kappa B Human genes 0.000 description 1
- 108010057466 NF-kappa B Proteins 0.000 description 1
- 241000526636 Nipah henipavirus Species 0.000 description 1
- 206010067482 No adverse event Diseases 0.000 description 1
- 208000001388 Opportunistic Infections Diseases 0.000 description 1
- 241000606860 Pasteurella Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 108010013639 Peptidoglycan Proteins 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 241000202347 Porcine circovirus Species 0.000 description 1
- 241000881705 Porcine endogenous retrovirus Species 0.000 description 1
- 241000973060 Porcine pestivirus isolate Bungowannah Species 0.000 description 1
- 241000526894 Porcine sapovirus Species 0.000 description 1
- 241000676890 Porcine torovirus Species 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 241000125945 Protoparvovirus Species 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 description 1
- 241001138501 Salmonella enterica Species 0.000 description 1
- 102100025831 Scavenger receptor cysteine-rich type 1 protein M130 Human genes 0.000 description 1
- 241000295644 Staphylococcaceae Species 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- 241000194021 Streptococcus suis Species 0.000 description 1
- 241000701093 Suid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 241001551359 Sus bucculentus Species 0.000 description 1
- 101000648288 Sus scrofa Tumor necrosis factor Proteins 0.000 description 1
- 241000058884 Sus verrucosus Species 0.000 description 1
- 241000893930 Swine hepatitis E virus Species 0.000 description 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- 102100039360 Toll-like receptor 4 Human genes 0.000 description 1
- 241000960387 Torque teno virus Species 0.000 description 1
- 241000186064 Trueperella pyogenes Species 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 241000607734 Yersinia <bacteria> Species 0.000 description 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 230000004721 adaptive immunity Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 238000000787 affinity precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 description 1
- 244000000022 airborne pathogen Species 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 1
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000013011 aqueous formulation Substances 0.000 description 1
- 235000019312 arabinogalactan Nutrition 0.000 description 1
- 125000000089 arabinosyl group Chemical group C1([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO1)* 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 229940065181 bacillus anthracis Drugs 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 1
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940056450 brucella abortus Drugs 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 229940099352 cholate Drugs 0.000 description 1
- BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N cholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 1
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108010025838 dectin 1 Proteins 0.000 description 1
- 230000008260 defense mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000151 deposition Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 208000022602 disease susceptibility Diseases 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 1
- 235000012041 food component Nutrition 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 210000004392 genitalia Anatomy 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 1
- 244000144980 herd Species 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 230000005745 host immune response Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 1
- 230000004957 immunoregulator effect Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000009655 industrial fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 1
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 1
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000004068 intracellular signaling Effects 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000001630 jejunum Anatomy 0.000 description 1
- GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N lipid A (E. coli) Chemical compound O1[C@H](CO)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCC)[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](OP(O)(O)=O)O1 GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000527 lymphocytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 108091005446 macrophage receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 239000013586 microbial product Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 229940055036 mycobacterium phlei Drugs 0.000 description 1
- 239000007922 nasal spray Substances 0.000 description 1
- 229940097496 nasal spray Drugs 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000006384 oligomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000005022 packaging material Substances 0.000 description 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 150000003905 phosphatidylinositols Chemical class 0.000 description 1
- 239000000419 plant extract Substances 0.000 description 1
- 230000007505 plaque formation Effects 0.000 description 1
- 238000002962 plaque-reduction assay Methods 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 230000034190 positive regulation of NF-kappaB transcription factor activity Effects 0.000 description 1
- 230000023603 positive regulation of transcription initiation, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 230000007112 pro inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 229940055019 propionibacterium acne Drugs 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 1
- 231100000033 toxigenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001551 toxigenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/04—Mycobacterium, e.g. Mycobacterium tuberculosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
- A01K67/02—Breeding vertebrates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
- A01K67/027—New or modified breeds of vertebrates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2227/00—Animals characterised by species
- A01K2227/10—Mammal
- A01K2227/108—Swine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/52—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
- A61K2039/541—Mucosal route
- A61K2039/543—Mucosal route intranasal
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
- A61K2039/552—Veterinary vaccine
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
수스의 면역 시스템을 프라이밍하는 방법이 개시된다. 상기 방법은 수스가 태어난 후 효과적인 기간 내에 유효량의 마이코박테리아 전세포 용해물을 수스에 투여하는 것을 포함한다.
Description
배경
호흡기 감염은 돼지고기 산업에 막대한 경제적 손실을 초래하는 약 19일 내지 약 68일 범위에 있는 보육 연령의 새끼 돼지 중 사망의 주요 원인이다.1 예를 들어, 돼지 생식기 호흡기 증후군(PRRS)은 세계적으로 돼지의 만성 바이러스 질환이다. PRRS는 대부분의 돼지고기-생산 국가에서 발생하고, 돼지 산업에 대한 주요 경제적 손실의 원인이며, 미국에서 추정되는 연간 손실액은 6억6천4백만 달러이다.2 PRRS의 임상 증상은 호흡기 및 생식기 기능장애를 포함하고, 원인 물질은 PRRS 바이러스("PRRSV")이다.3 PRRSV는 돼지 면역 시스템을 빠르면 2일부터 조절함에 의해 질병을 확립하고, 감염 후 수 주 동안 지속시킨다.4
새끼 돼지의 백신화는 호흡기 감염을 방지하기 위해 일반적으로 사용되는 전략이다; 그러나, 백신화 접근법으로 신생돼지 보호를 달성하려는 시도는 효과가 없는 것으로 고려된다.5 신생돼지의 성공적인 면역화에 대한 도전은 신생돼지 면역 시스템의 미숙의 결과로서 발생하는데, 이는 세포독성 T 세포 뿐만 아니라 IFN-감마 생산 T 세포(즉, T 헬퍼 (Th) 1 세포)를 포함하는 세포-매개 면역 반응을 만드는 제한된 용량을 갖는 것으로 알려져 있다. 결과적으로, 바이러스를 포함하는 세포내 병원체에 대한 방어는 효과가 없다.6 신생돼지 항원 제시 세포("APC"), 림프구, 및 적응 면역의 발달과 관련이 있는 선천 면역 시스템의 다른 세포의 능력에 대한 대표적인 보고서는 미토겐에 대한 제한된 반응, 사이토카인 프로파일의 차이, 해부학적 구조 발달의 결핍, 및 적절하고 보호적인 적응 면역 반응의 발달에 필요한 막 수용체의 발현에서의 차이를 나타낸다.7
백신화에 적절한 적응 면역 반응을 일으키는데 필요한 신생돼지에서의 선천 면역 시스템의 부적절함은 양과 품질 둘 모두의 측면에서 손상된 백신-유도 항체 반응으로 나타난다.8 이 상태는 신생 돼지가 백신화되는 연령에 따라 돼지 인플루엔자 바이러스("SIV")에 대한 백신화에 대한 항체 반응의 규모 차이에 의해 입증된다. 1주령에 처음 백신화되는 새끼 돼지는 2차 백신화 후 더 낮은 최대 항체 역가를 나타내었고, 4 또는 8주령에 처음 백신화된 돼지보다 일찍 혈청음성이 되었다.9 유사하게, 3주령에 돼지 서코바이러스병("PCVD")에 대해 백신화된 새끼 돼지는 1주령에 백신화된 돼지보다 이 바이러스에 대해 더 잘 보호되었다.10 따라서, 신생 돼지 백신학의 주요 도전 중 하나는 선천 면역 시스템의 나이브(프라이밍되지 않은) 상태가 T 세포 활성화에 대한 적절한 신호전달 뿐만 아니라 항균 보호 면역을 제공하기에 충분한 품질 및 강도의 적응 면역 반응을 발달시킬 수 있는 최적의 사이토카인 환경을 제공하지 못하므로 생물학제가 초기 수명 기간에 적절한 보호 면역을 유도할 수 없다는 것이다.
신생 돼지의 면역 시스템은 충분히 성숙하지 않기 때문에, 백신이 제공하는 항원성 자극에 대한 적절한 적응 면역 반응을 일으킬 준비가 되려면 출생 후 몇 주가 필요하다. 결과적으로, 신생돼지 폐는 공기 중의 병원체에 대한 보호를 위해 선천 면역 시스템에 크게 의존한다. 현재 돼지의 바이러스 또는 박테리아 호흡기 감염에 대한 충분히 효과적인 백신 또는 요법은 존재하지 않는다. 그러나, 이러한 문제를 해결하기 위한 다양한 접근법이 시도되었다.
이러한 문제를 해결하기 위한 한 가지 접근법은 무해하지만 면역-자극성인 물질을 투여하여 신생돼지의 선천 면역 경로를 활성화시키는 것이고, 이는, 선천 면역 경로의 발달을 촉진함에 의해, 이의 성숙화 및 기능을 가속화할 것이다. 신생 돼지의 선천 면역 시스템의 발달을 촉진하기 위해 연구된 전략은 효모 세포벽의 구성요소인 베타-글루칸, 또는 다른 식물 추출물을 지닌 식이 보충물을 포함한다.11 전신 면역-자극 효과의 자극을 나타내는 결과가 보고되었지만, 그러나, 식이 보충물은 기도에 있는 선천 면역 시스템의 세포에서 그 효과를 직접 표적화하지 않는다.
식이 보충물 이외에, 또 다른 접근법은 기도에 있는 선천 면역의 세포를 직접 프라이밍하는 것이다. 예를 들어, 대식세포 및 수지상 세포를 포함하는 선천 면역 시스템의 세포는 보호 면역을 매개하거나 항원 제시 세포("APC")로서 직접적인 역할을 한다. 인간에서, 강력한 Th1-타입 면역 반응을 유도할 수 있는 살아 있는 박테리아인 바실루스 칼메트-게랭(BCG)은 인간의 출생시 정기적으로 제공된다. 임의의 이론에 구속되지 않으며, BCG 백신의 효과는 이 미생물이 APC에 의해 발현되는 다수의 toll 유사 수용체("TLR")와 결합하여 결과적으로 전염증성 사이토카인을 생산하고 Th1 면역의 발달을 촉진하는 능력 때문인 것으로 여겨진다.
이러한 문제를 해결하고자 하는 또 다른 접근법은, 프로피오니박테리움 아크네의 열 살균되거나 포름알데하이드 처리된 현탁액, 미생물 다당류, 지질다당류, 단백질-결합된 다당류, 뮤라밀-디펩티드, 지질 A, 및 단백질제거되고 지질제거된 마이코박테리움 플레이(Mycobacterium phlei) 세포벽 추출물(MCWE)을 비제한적으로 포함하는, 면역-조절제로서 사용되는 미생물 생성물의 주입에 의한 투여이다. 예를 들어, 미국 특허 4,744,984호(Vetrepharm Research, Inc.)는 동물 및 인간에게 오일 및 물 에멀젼 중 단백질제거된 박테리아 세포벽 현탁액을 주입하는 단계를 포함하는 동물 및 인간에서 바이러스 감염을 치료하는 방법을 개시하고, 박테리아 세포벽 현탁액은 마이코박테리움 종으로부터 유래될 수 있다. 미국 특허 5,759,554호(Vetrepharm Research, Inc.)는 인간 또는 동물에게 오일을 함유하지 않는 불용성 박테리아 세포벽 분획의 수성 현탁액을 투여하는 것을 포함하는 인간 또는 동물에서 면역 시스템을 자극하는 방법을 기술하고, 불용성 세포벽 분획은 마이코박테리움 종으로부터 제조되고 분획으로부터 지질을 추출하기 위해 처리된다. 미국 특허 6,890,541호(Bioniche Life Sciences, Inc.)는 신생 동물에 마이코박테리움 세포벽 추출물을 투여하는 것을 포함하는 동물의 생산 성능을 향상시키기 위해 신생 동물의 면역 시스템을 활성화시키는 방법을 기술한다.
그러나, 불행히도, 미국 특허 4,744,984호, 5,759,554호 및 6,890,541호에 개시된 방법은 중요한 단점을 갖는다. 한 가지 단점은 세포벽 현탁액, 세포벽 분획 또는 세포벽 추출물의 투여가 잠재적으로 다른 전략만큼 효과적이지 않다는 것이다. 예를 들어, 세포벽 현탁액, 세포벽 분획 또는 세포벽 추출물의 투여는 세포벽 코어 구성요소에만 한정되고 마이코박테리아 외피의 외부 첨판에 존재하는 임의의 구조적 구성요소는 포함하지 않을 것이다. 세포벽 구조는 마이코박테리아 외피의 단지 작은 부분이다. 어떤 이론에 구속되지 않으며, 마이코박테리아 외피의 외부 첨판에 존재하는 구조적 구성요소와 함께 핵심 세포벽 코어 구성요소를 투여하는 것은 세포벽 코어 구성요소만을 투여하는 것과 비교하여 신생 동물의 면역 시스템의 자극에 부가적이며 아마도 상승적인 효과를 갖는다고 가정된다.
다른 단점은 미국 특허 4,744,984호, 5,759,554호, 및 6,890,541호의 일부 구체예에서 세포벽 추출 및 분획화의 과정 동안 세포벽은 지질제거되고, 이 경우에 마이코박테리아 외피의 적어도 2개의 주요 구성요소, 즉, 외피의 외부 첨판에 존재하고 면역자극 활성을 갖는 것으로 알려진 TDM 및 LAM은 지질제거 동안 제거될 가능성이 가장 높다는 것이다.12 지질제거 후에 남은 구성요소는, 마이코박테리아 외피의 중요한 분획일지라도, 대식세포를 활성화시켜 선천 숙주 반응, 예를 들어, 염증성 사이토카인의 생산을 촉발하는 능력을 갖는 것으로 공지된, 예를 들어, TDM 및 LAM과 같은 외부 첨판의 중요한 마이코박테리아 구성요소가 빠진 세포벽 코어 구조로 구성된다.
추가 단점은 세포벽 코어 구성요소만을 투여하는 것이 불편하다는 것이다. 예를 들어, 세포벽 코어 구성요소를 분리하거나 추출하는 것은 시간 소모적일 수 있으며, 여러 단계를 필요로 한다. 또 다른 잠재적인 단점은 세포벽 코어 구성요소가 수성 제형에 불용성이고 전달을 위해 지질 또는 오일 기반 에멀젼을 필요로 한다는 것이다.
새끼 돼지의 주요 사망 원인인 호흡기 감염의 문제에 관해 상기-언급된 문제를 해결하기 위한 전략들이 이용 가능하지만, 그러한 전략은 불편하고, 단점을 가지며, 다른 전략보다 덜 효과적일 수 있다. 따라서, 새끼 돼지의 호흡기 감염을 방지하기 위한 대안이 필요하다. 바람직하게는, 그러한 대안은 다른 전략보다 효과적이고, 현재 접근법 중 하나 이상의 불편함 및 단점을 감소시킨다.
개요
본 개시내용은 바람직한 특성을 나타내고 관련 이점도 제공하는 수스(Sus)의 면역 시스템을 프라이밍하는 효과적이고 효율적인 방법을 제공함에 의해 상기 기술된 문제를 해결한다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 상기 방법은 수스가 태어난 후 효과적인 기간 내에 유효량의 마이코박테리아 전세포 용해물을 수스에 투여하는 것을 포함한다.
본 개시내용의 또 다른 양태는 수스의 면역 시스템을 프라이밍하는데 사용하기 위한 마이코박테리아 전세포 용해물을 제공한다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 수스의 면역 시스템을 프라이밍하는데 사용하기 위한 마이코박테리아 전세포 용해물은 수스가 태어난 후 효과적인 기간 내에 유효량의 마이코박테리아 전세포 용해물을 수스에 투여하는 것을 포함한다.
본 개시내용의 또 다른 양태는 수스의 면역 시스템을 프라이밍하는데 사용하기 위한 약제의 제조를 위한 마이코박테리아 전세포 용해물의 용도를 제공한다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 상기 용도는 수스가 태어난 후 효과적인 기간 내에 유효량의 마이코박테리아 전세포 용해물을 수스에 투여하는 것을 포함한다.
본 개시내용은 활용되어 왔던 당 분야의 다른 접근법과 비교하여 몇 가지 이점을 제공한다. 구체예에 따른 방법의 한 가지 이점은 마이코박테리아 전세포 용해물의 투여가 마이코박테리아 외피의 구조적 구성요소의, 전부는 아니더라도, 대부분을 함유한다는 것이다. 따라서, 세포벽 코어 구성요소만이 아닌 마이코박테리아 외피의 구조적 구성요소를 포함하는 마이코박테리아 전세포 용해물을 투여하는 것은 세포벽 구성요소만을 투여하는 것과 비교하여 수스의 면역 시스템의 자극에 부가적이며 그리고 아마도 상승적인 효과를 갖는다.
또 다른 구체예에 따른 방법의 이점은 본 개시내용에 따라 사용된 마이코박테리아 전세포 용해물이 지질제거되지 않을 것이라는 점이다. 따라서, 세포벽 현탁액, 세포벽 분획 또는 세포벽 추출물을 제조할 때 사용되는 지질 추출 절차와 달리, 본 개시내용의 마이코박테리아 전세포 용해물에서 강력한 면역자극 활성을 갖는 세포벽 코어 구성요소는 손실되지 않을 것이다.
또 다른 구체예에 따른 방법의 이점은 마이코박테리아 전세포 용해물이 세포벽 현탁액, 세포벽 분획 또는 세포벽 추출물보다 제조하기가 쉬우므로 다른 접근법의 불편함 및 비효율을 감소시킨다는 것이다. 예를 들어, 마이코박테리아 외피의 모든 또는 실질적으로 모든 구조적 구성요소를 함유하는 마이코박테리아 전세포 용해물을 제조하는 것은 세포벽 구성요소를 분리하거나 추출하는 것보다 적은 단계 및 짧은 시간을 필요로 한다.
또 다른 구체예에 따른 방법의 이점은 마이코박테리아 전세포 용해물을 제조하는데 필요한 공정 단계가 세포벽 현탁액, 세포벽 분획 또는 세포벽 추출물을 제조하는데 필요한 공정 단계와 달리 전통적인 산업 발효 시설 및 장비에 비해 용이하게 확장될 수 있다는 것이다.
도면의 간단한 설명
구체예의 상기-언급된 양태는 첨부된 도면과 관련하여 수행된 구체예에 대한 다음 설명을 참조하여 더욱 명백해지고 더 잘 이해될 것이다.
도 1은 마이코박테리움 스메그마티스(Mycobacterium smegmatis)의 미정제 전세포 용해물과 비교하여 지질다당류("LPS")로의 자극에 대한 폐포 대식세포의 TNF-알파 반응을 도시한다.
도 2는 마이코박테리움 스메그마티스의 미정제 전세포 용해물로의 자극에 대한 돼지 폐포 대식세포의 TNF-알파 반응의 동역학 및 WCL의 효능에 대한 박테리아를 성장시키는데 사용된 배양 배지의 영향을 도시한다. 3개의 상이한 유형의 배양 배지인 7H9, GAS 또는 NB를 사용하여 마이코박테리아를 배양함으로써 미정제 전세포 용해물을 수득하는데 사용되는 박테리아 세포 덩어리를 준비하였다.
도 3은 마이코박테리움 스메그마티스 WCL의 효능(50%-유효 용량으로 표시됨)이 WCL을 제조하는 박테리아 세포 덩어리를 준비하기 위해 마이코박테리움 스메그마티스를 배양하는데 사용되는 성장 배지의 유형에 의해 영향을 받을 수 있음을 도시한다.
도 4는 (1) 마이코박테리움 스메그마티스로부터의 리포아라비노만난("LAM-MS")의 상업적 제조물, 및 (2) 마이코박테리움 플레이 세포벽 추출물의 상업적 제조물과 비교하여 미정제 마이코박테리움 스메그마티스 WCL의 상대 효능을 도시한다.
도 5는 마이코박테리움 스메그마티스 WCL의 투여로부터 돼지에서의 TNF-알파 자극 강화 효과를 도시한다.
도 6은 마이코박테리움 스메그마티스 WCL의 투여로부터 돼지에서의 자연 살해 서브집단 강화 효과를 도시한다.
도 7은 마이코박테리움 스메그마티스 WCL의 투여로부터 돼지에서의 B-세포 서브집단 강화 효과를 도시한다.
구체예의 상기-언급된 양태는 첨부된 도면과 관련하여 수행된 구체예에 대한 다음 설명을 참조하여 더욱 명백해지고 더 잘 이해될 것이다.
도 1은 마이코박테리움 스메그마티스(Mycobacterium smegmatis)의 미정제 전세포 용해물과 비교하여 지질다당류("LPS")로의 자극에 대한 폐포 대식세포의 TNF-알파 반응을 도시한다.
도 2는 마이코박테리움 스메그마티스의 미정제 전세포 용해물로의 자극에 대한 돼지 폐포 대식세포의 TNF-알파 반응의 동역학 및 WCL의 효능에 대한 박테리아를 성장시키는데 사용된 배양 배지의 영향을 도시한다. 3개의 상이한 유형의 배양 배지인 7H9, GAS 또는 NB를 사용하여 마이코박테리아를 배양함으로써 미정제 전세포 용해물을 수득하는데 사용되는 박테리아 세포 덩어리를 준비하였다.
도 3은 마이코박테리움 스메그마티스 WCL의 효능(50%-유효 용량으로 표시됨)이 WCL을 제조하는 박테리아 세포 덩어리를 준비하기 위해 마이코박테리움 스메그마티스를 배양하는데 사용되는 성장 배지의 유형에 의해 영향을 받을 수 있음을 도시한다.
도 4는 (1) 마이코박테리움 스메그마티스로부터의 리포아라비노만난("LAM-MS")의 상업적 제조물, 및 (2) 마이코박테리움 플레이 세포벽 추출물의 상업적 제조물과 비교하여 미정제 마이코박테리움 스메그마티스 WCL의 상대 효능을 도시한다.
도 5는 마이코박테리움 스메그마티스 WCL의 투여로부터 돼지에서의 TNF-알파 자극 강화 효과를 도시한다.
도 6은 마이코박테리움 스메그마티스 WCL의 투여로부터 돼지에서의 자연 살해 서브집단 강화 효과를 도시한다.
도 7은 마이코박테리움 스메그마티스 WCL의 투여로부터 돼지에서의 B-세포 서브집단 강화 효과를 도시한다.
설명
하기 설명되는 구체예는 철저한 것이거나 다음의 상세한 설명에 개시된 정확한 형태로 본 발명을 제한하려는 의도가 아니다. 오히려, 구체예는 당업자가 본 개시내용의 원리 및 실시를 인지하고 이해할 수 있도록 선택되고 설명된다.
기도는 신생 돼지에서 질병 감수성에 대한 주요 표적이고 마이코박테리아의 구조적 구성요소는 선천 면역 시스템의 여러 경로에 진입하는 것으로 알려져 있기 때문에, 본 개시내용은 마이코박테리아 전세포 용해물의 전달에 의해 신생 돼지 기도의 선천 면역 시스템을 직접 프라이밍하고 호흡기 병원체에 대한 이 중요한 진입 지점에서 이의 방어 메커니즘을 강화시킴으로써 이러한 문제를 해결한다.
마이코박테리아 외피의 다양한 구조적 구성요소의 면역자극 활성은 얼마 동안 인지되어 왔다.13 마이코박테리아 세포 외피는 복잡하고, 층으로 배열된 지질, 다당류, 당지질, 및 마이콜산의 두꺼운 왁스 혼합물로 구성된다14. 이들 층은 먼저 전형적인 막 이중층을 형성하는 통상적인 극성 지질로 구성된 내부 막("IM")으로 구성되고, 포스파티딜이노시톨 만노사이드("PIM")를 중요한 성분으로서 포함한다. IM을 덮는 것은 펩티도글리칸-아라비노갈락탄("AGP") 복합체인데, 이는 다당류 아라비난에 고정을 제공하는 나선형 갈락탄(갈락토스의 중합체)이 산재된 나선형 펩티도글리칸("PG") 모이어티 네트워크로 구성된 스캐폴드를 형성한다. 갈락탄 및 아라비난 다당류가 조합될 때, 조합된 구조는 외피의 아라비노갈락탄("AG") 구성요소를 구성한다.15 차례로, AG 유닛의 원위 아라비노스 모이어티는 공유 결합을 통해 마이콜산에 대한 고정을 제공한다. 세포벽의 이 하부 세그먼트는 세포벽 코어, 즉, 마이콜릴 아라비노갈락탄-펩티도글리칸("mAGP") 복합체로 명명된다.16 마이코박테리아 외피는 최종적으로 당 분야에서 상부 세그먼트, 외부 첨판 또는 외부 막으로 공지된 추출 가능한 지질로 구성된 상부 층으로 덮여 있다. 외피의 이 외부 첨판의 추출 가능한 지질은 지방산, 리포올리고당류("LOS"), 트리아실 리포펩티드, 글리코펩티도리피드("GPL"), 트레할로스 디미콜레이트("TDM") 및 리포글리칸, 즉 리포아라비노만난("LAM")을 포함하는 다양한 유형의 지질로 구성된다.17
OM의 구성요소는 근본적인 펩티도글리칸-아라비노갈락탄("AGP") 복합체에 공유적으로 결합되지 않은 "유리" 지질(즉, 용매-추출 가능한 지질)로서 마이코박테리아 세포벽에 존재한다.18 TDM 및 LAM의 면역 자극 활성은 광범위하게 연구되어 왔다. TDB는 C-타입 렉틴인 Mincle(대식세포-유도성 C-타입 렉틴)에 결합한다.19 TDB 인지시, C-타입 렉틴인 Mincle은 Fc 수용체 공통 γ-사슬("FcRγ")과 상호작용하고, 이는 Syk를 통해 세포내 신호전달을 촉발시켜 CARD9-의존성 NF-κB 활성화를 발생시킨다. LAM은 숙주 면역 반응의 강력한 조절제로서 작용하는 마이코박테리움 속에 제한된 리포글리칸이고, 병원성 균주 M. 투베르쿨로시스(M. tuberculosis) 및 M. 레프라에(M. leprae), 백신 균주, M. 보비스(M. bovis) BCG, 기회감염 균주 M. 아비움(M. avium) 및 M. 포루이툼(M. foruitum), 및 비병원성 균주 M. 스메그마티스와 같은 모든 마이코박테리아 종의 외피에서 발견된다. LAM은 이들의 구조에 따라 다른 면역조절 효과를 나타낸다. 포스포이노시톨-캡핑된 LAM이고 비병원성 종(M. 스메그마티스)에서 발견되는 PILAM은 전염증성 분자인 반면, 만노스-캡핑된 LAM이고 병원성 종(M. 투베르쿨로시스)에서 발견되는 ManLAM은 항-염증성 분자이다.20 PILAM은 TLR4가 아닌 다른 TLR들을 포함하는 것으로 보이는 TLR2-의존성 방식으로 대식세포를 활성화시킨다.21
면역자극 활성을 갖는 마이코박테리아 구조적 구성요소를 정의하기 위해, 이들 구성요소가 개별적으로 연구될 수 있도록 이들 구성요소를 분별 및 정제하기 위한 다양한 기술이 사용되었다. 이러한 기술의 대부분은 박테리아의 기계적 분해 이후에 분별 원심분리에 기반한다. 박테리아를 기계적 수단에 의해 파쇄한 후, 생성된 구성요소를 분별 원심분리에 의해 분리할 수 있다. 낮은 속도(3,000 x g, 여기서 g는 강도의 중력장이다)에서 WCL의 원심분리는 현탁액에 남아있는 박테리아의 모든 다른 구조적 구성요소와 함께 파손되지 않은 세포를 제거한다. 반면, 고속 27,000 g에서 WCL의 원심분리는 세포벽을 분리하고, 이는 원심분리 후 펠렛 다운(pellet down)되는 한편 막 및 세포질 구성요소는 상청액에 현탁된 채로 유지된다.22 생성된 세포벽 펠렛은 mAGP 복합체 뿐만 아니라 관련 LAM을 함유한다.23 이러한 유형의 조성물은 박테리아 분획화 절차 중 임의의 시점에서 의도적으로 지질제거되지 않은 WCL 제조물에서만 발생할 것이다. 그렇지 않으면, 지질제거 후, 일반적으로 TDM 및 LAM과 같은 외부 첨판을 구성하는 추출 가능한 지질 분자는 추출 절차 중에 손실된다. 실제로, 지질제거된 마이코박테리움 스메그마티스는 마이코박테리아 TDM을 인지하고 마이코박테리아 외피의 외부 첨판에 존재하는 유리 지질 중 하나인 대식세포 수용체 Mincle(대식세포 유도성 C-타입 렉틴)에 의해 인지되지 못하는 것으로 나타났다.24 따라서, 마이코박테리아의 미정제 전세포 용해물은 이러한 유형의 박테리아의 마이코박테리아 외피에 존재하는 것으로 알려진 거대분자의 전부는 아니더라도 대부분을 가질 것으로 예상된다.
마이코박테리아의 구조적 구성요소는 가장 두드러지게 대식세포 및 수지상 세포를 포함하는 골수 세포에서 발현되는 다수의 숙주 수용체, Toll-유사 수용체, 뉴클레오티드-결합 올리고머화 도메인(NOD)-유사 수용체("NLR"), C-타입 렉틴 수용체 유사 Minicle 및 만노스 수용체("CD207), 수지상 세포-특이적 세포내 부착 분자-3 그래빙(grabbing) 비인테그린("DC-SIGN.CD209"), 및 Dectin-1에 의해 인지된다.25 마이코박테리아에 의해 개시된 대부분의 TLR-의존성 신호는 양성이어서, 염증성 및 항균성 선천 면역 반응의 활성화를 유도한다. 예를 들어, 마이코박테리움 스메그마티스와 같이 빠르게-성장하는 비병원성 종으로부터의 포스포이노시톨-캡핑된 LAM은 대식세포에 의한 종양 괴사 인자(TNF)-알파 및 IL-12의 생산을 자극하는 전염증성 분자이다.26 대부분의 박테리아가 N-아세틸 MDP를 생산하는 반면, 마이코박테리아는 N-글리콜릴 MDP라고 불리는 MDP의 특이한 변형된 형태를 생산하는데, 이는 타입 I 인터페론("IFN")의 매우 강력한 유도제이고 인플루엔자 바이러스 감염에 대한 보호 효과가 매우 탁월한 것으로 나타났다.27 또한, 상기 기재된 대로, 마이코박테리아 외피 외부 첨판은 특이적 숙주 상호작용을 매개할 수 있고 시험관내에서 진핵생물 세포에 대한 강력한 생물학적 활성을 지니는 것으로 나타난 다수의 화학적으로 다양한 지질 및 당지질을 함유한다.28
"수스의 면역 시스템을 프라이밍"하는 것은 수스의 면역 시스템을 자극 및/또는 활성화시키는 것을 의미하고 수스의 면역 시스템의 세포에 의한 면역 반응을 일으키는 것을 포함한다. "면역 반응"은 면역 시스템의 세포, 예를 들어, 이를 테면, B 세포, T 세포, 단핵구 등의 자극에 대한 반응이다. 면역 반응은 항원 특이적인 중화 항체와 같은 특정 항체의 생산을 발생시키는 B 세포 반응일 수 있다. 면역 반응은 또한 CD4+ 반응 또는 CD8+ 반응과 같은 T 세포 반응일 수 있다. 일부 경우에, 반응은 특정 항원에 특이적이다(즉, "항원-특이적 반응"). 면역 반응은 또한 선천 반응을 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, 수스의 면역 시스템을 프라이밍하는 것은 대식세포를 프라이밍하는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 수스의 면역 시스템을 프라이밍하는 것은 폐포 대식세포를 프라이밍하는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 프라이밍된 폐포 대식세포는 자극에 반응하여 향상된 TNF-알파의 생산을 나타낸다. 항원이 병원체로부터 유래되는 경우, 항원-특이적 반응은 "병원체-특이적 반응"이다. "보호 면역 반응"은 병원체의 해로운 기능 또는 활동을 억제하거나, 병원체에 의한 감염을 감소시키거나, 병원체에 의한 감염으로 인한 증상(사망 포함)을 감소시키는 면역 반응이다. 보호 면역 반응은, 예를 들어, 플라크 감소 검정 또는 ELISA-중화 검정에서 바이러스 복제 또는 플라크 형성의 억제에 의해, 또는 생체내에서 병원체 공격에 대한 내성을 측정함에 의해 측정될 수 있다. 일부 구체예에서, 면역 반응은 국소화된다. 일부 구체예에서, 면역 반응은 전신성 반응이다.
본 개시내용의 일부 구체예에서, "수스의 면역 시스템을 프라이밍"하는 것은 "백신화를 위해 수스의 면역 시스템을 프라이밍"하는 것을 포함한다. 백신화는 임의의 유형의 바이러스, 박테리아, 진균, 원생동물, 또는 수스를 감염시킬 수 있는 다른 기생충에 대항할 수 있을 것으로 예상된다. 백신화 대상이 될 수 있는 바이러스의 비제한적인 목록은 PRRSV, 돼지 인플루엔자 바이러스, 돼지 서코바이러스, 돼지 파보바이러스("PPV"), 전염성 위장염("TGE") 바이러스, 돼지 유행성 설사 바이러스("PEDV"), 돼지 로타바이러스, 돼지 파라믹소바이러스, 슈도광견병 바이러스, 아프리카 돼지열 바이러스("ASFV"), 고전 돼지열 바이러스("CSF"), 돼지 코로나바이러스 패밀리, 돼지 토크 테노 바이러스(porcine torque teno virus), 돼지 보카바이러스, 돼지 토로바이러스, 돼지 E형 간염 바이러스, 돼지 내인성 레트로바이러스, 돼지 림프친화성 헤르페스바이러스, 돼지 사포바이러스, 돼지 페스트바이러스, Nipah 바이러스, Bungowannah 바이러스, Menangle 바이러스, 및 델타 코로나바이러스를 비제한적으로 포함한다.
백신화 대상이 될 수 있는 박테리아의 비제한적인 목록은 마이코플라스마 수이스(Mycoplasma suis); 파스퇴렐라 헤몰리티카(Pasteurella haemolytica); 헤모필루스 솜누스(Haemophilus somnus); 브루셀라 아보르투스(Brucella abortus); 클라미디아(chlamydia); 아나플라스마(anaplasma); 마이코플라스마; 악티노바실루스 플뢰로뉴모니아에(Actinobacillus pleuropneumoniae); 악티노바실루스 수이스(Actinobacillus suis) 및 에큘리(equuli); 보르데텔라 브론치셉티카(Bordetella bronchiseptica); 브루셀라 수이스(Brucella suis); 캄필로박터 콜리(Campylobacter coli), 제주넘(jejunum), 하이오인테스티날리스(hyointestinalis); 에스체리치아 콜리(Escherichia coli)(E. 콜리); 헤모필루스 파라수이스(Haemophilus parasuis); 클렙시엘라 종(Klebsiella species); 로소니아 인트라셀룰라리스(Lawsonia intracellularis); 렙토스피라 포모나(Leptospira pomona); 렙토스피라 브라티스라바(Leptospira bratislava)/뮌헨(muenchen); 렙토스피라 익테로헤모라지아에(Leptospira icterohaemorrhagiae); 파스퇴렐라 물토시다(Pastueurella multocida)(독소발생); 파스퇴렐라 물토시다(비-독소발생); 살모넬라 콜레라에수이스(Salmonella choleraesuis); 살모넬라 티피무리움(Salmonella typhimurium), 더비(derby) 등; 브라키스피라 필로시콜리(Brachyspira pilosicoli); 브라키스피라 하이오다이센테리아에(Brachyspira hyodysenteriae); 브라치스피라(Brachyspira)(약 용혈성 종); 예르시니아 종(Yersinia species); 악티노마이세스 (코리네박테리움) 피오게네스(Actinomyces (Corynebacterium) pyogenes); 바실루스 안트라시스(Bacillus anthracis); 브루셀라 수이스(Brucella suis); 클라미디아 프시타시(Chlamydia psittaci); 클로스트리디움 노비이(Clostridium novyi); 클로스트리디움 퍼프린젠스(Clostridium perfringens); 클로스트리디움 테타니(Clostridium tetani); 악티노바쿨룸 (코리네박테리움, 유박테리움) 수이스(Actinobaculum (Corynebacterium, Eubacterium) suis); 에페리트로준 수이스(Eperythrozoon suis); 에니시펠로트릭스 류시오파티아(Enysipelothrix rhusiopathia); 리스테리아 모노사이토게네스(Listeria monocytogenes); 마이코박테리움 아비움(Mycobacterium avium)/인트라셀룰라레(intracellulare); 마이코플라스마 하이오뉴모니아에(Mycoplasma hyopneumoniae); 마이코플라스마 플로쿨라레(Mycoplasma flocculare); 마이코플라스마 하이오리니스(Mycoplasma hyorhinis); 마이코플라스마 하이오시노비아에(Mycoplasma hyosynoviae); 스타필로쿠스 하이쿠스(Staphyloccus hyicus); 다른 포도상구균; 스트렙토코쿠스 수이스(Streptococcus suis) 타입 1; 스트렙토코쿠스 수이스 타입 2, 타입 15; 및 다른 유형의 연쇄상구균을 비제한적으로 포함한다.
본원에서 사용되는 "수스"는 바비로우사 바비루사(Babyrousa babyrussa) 또는 골든 바비루사(Golden Babirusa), 바비로우사 셀레벤시스(Babyrousa celebensis) 또는 술라웨시 바비루사(Sulawesi Babirusa), 바비로우사 토게아넨시스(Babyrousa togeanensis) 또는 토기안 바비루사(Togian Babirusa), 하일로코에루스 메이너츠하게니(Hylochoerus meinertzhageni) 또는 자이언트 포레스트 호그(Giant Forest Hog), 파코초에루스 에티오피쿠스(Phacochoerus aethiopicus) 또는 케이프(Cape), 소말리(Somali) 또는 데저트 워호그(Desert Warthog), 파코초에루스 아프리카누스(Phacochoerus africanus) 또는 일반 워호그, 포르쿨라 살바니아(Porcula salvania) 또는 피그미 호그(Pygmy Hog), 포타모초에루스 라바투스(Potamochoerus larvatus) 또는 부시피그(Bushpig), 포타모초에루스 포르쿠스(Potamochoerus porcus) 또는 레드 리버 호그(Red River Hog), 수스 아호에노바르부스(Sus ahoenobarbus) 또는 팔라완 비어드 피그(Palawan Bearded Pig), 수스 바르바투스(Sus barbatus) 또는 비어드 피그(Bearded Pig), 수스 부쿨렌투스(Sus bucculentus) 또는 베트남 워티 피그(Vietnamese Warty Pig), 수스 세비프론스(Sus cebifrons) 또는 비사얀 워티 피그(Visayan Warty Pig), 수스 셀레벤시스(Sus celebensis) 또는 셀레베스 워티 피그(Celebes Warty Pig), 수스 휴레니(Sus heureni) 또는 플로레스 워티 피그(Flores Warty Pig), 수스 올리베리(Sus oliveri) 또는 민도로 워티 피그(Mindoro Warty Pig), 수스 필리펜시스(Sus philippensis) 또는 필리핀 워티 피그(Philippine Warty Pig), 수스 스크로파(Sus scrofa) 또는 와일드 보아르(Wild Boar) 또는 가축 돼지(Domestic Pig), 수스 베루코수스(Sus verrucosus) 또는 자반 워티 피그(Javan Warty Pig), 및 어떤 성별 또는 임의의 연령의 모든 다른 보아르(boar), 소우(sow), 새끼 돼지, 한 배 새끼 돼지, 젖 뗀 새끼 돼지, 어린 암퇘지, 거세돼지, 비육돈, 스와인(swine) 또는 포신(porcine)을 비제한적으로 포함하는, 생물학적 과인 멧돼지과의 구성원인 임의의 야생 동물 또는 가축을 지칭한다.
본 개시내용의 방법은 마이코박테리아 전세포 용해물을 사용한다. 본원에 사용된 바와 같이, 일반적으로 "WCL"로 약칭되는 "전세포 용해물"은 본 개시내용이 속하는 분야의 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 일부 구체예에서, 마이코박테리아 전세포 용해물은 미정제 마이코박테리아 전세포 용해물이다. 일부 구체예에서, 미정제 마이코박테리아 전세포 용해물은, 예를 들어, 분해되지 않은 세포를 제거하는 것 이외에, 구조적 구성요소가 제거되거나 분획화되지 않고, 물리적 또는 화학적 성질의 다른 구분, 추출 또는 분리가 없는 용해된 마이코박테리아 세포를 포함한다. 일부 구체예에서, 마이코박테리아 전세포 용해물은 죽은 세포이고 더 이상 복제할 수 없지만 미리-용해된 세포의 모든 구성요소를 함유하는 용해된 세포를 포함한다. 일부 구체예에서, 전세포 용해물은 WCL의 변성되지 않은 상청액이다. 일부 구체예에서, 마이코박테리아 전세포 용해물은 애쥬번트이다.
본 개시내용의 일부 구체예에서, 마이코박테리아 전세포 용해물은 정제되지 않는다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 마이코박테리아 전세포 용해물은 정제된다. 본원에서 사용된 "정제"는 마이코박테리아 전세포 용해물로부터 바람직하지 않은 구성요소를 제거하는 공정을 지칭한다. 정제는 바람직하지 않은 구성요소의 모든 흔적이 마이코박테리아 전세포 용해물로부터 제거될 것을 요구하지 않는다. 정제 기술은 세포 분획화, 원심분리, 투석, 이온-교환 크로마토그래피, 크기-배제 크로마토그래피, 및 친화성-정제 또는 침전을 비제한적으로 포함한다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 마이코박테리아 전세포 용해물은 분획화되지 않는다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 마이코박테리아 전세포 용해물은 지질제거되지 않는다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 마이코박테리아 전세포 용해물은 단백질제거되지 않는다. 일부 구체예에서, 마이코박테리아 전세포 용해물은 단독으로 투여된다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 마이코박테리아 전세포 용해물은 돼지 바이러스 질병에 대한 하나 이상의 적합한 백신과 함께 투여된다.
본 개시내용의 방법에 사용되는 마이코박테리아 전세포 용해물은 임의의 마이코박테리움으로부터 제조될 수 있다. 본원에서 사용되는 "마이코박테리움"은 마이코박테리아세아에 과 또는 마이코박테리움 속으로부터의 임의의 원핵생물을 지칭한다. 본 개시내용의 방법에 사용될 수 있는 마이코박테리아의 비제한적인 목록은 마이코박테리움 보비스(Mycobacterium bovis), 마이코박테리움 아프리카눔(Mycobacterium africanum), 마이코박테리움 미크로티(Mycobacterium microtti), 마이코박테리움 투베르쿨로시스(Mycobacterium tuberculosis), 마이코박테리움 카네티이(Mycobacterium canettii), 마이코박테리움 마리눔(Mycobacterium marinum), 마이코박테리움 아비움 인트라셀룰라레(Mycobacterium avium intracellulare), 마이코박테리움 레프라에(Mycobacterium leprae), 마이코박테리움 레프라에무리움(Mycobacterium lepraemurium), 마이코박테리움 파라투베르쿨로시스(Mycobacterium paratuberculosis), 마이코박테리움 울세란스(Mycobacterium ulcerans), 마이코박테리움 스메그마티스, 마이코박테리움 제노피(Mycobacterium xenopi), 마이코박테리움 첼로네이(Mycobacterium chelonei), 마이코박테리움 포르투이툼(Mycobacterium fortuitum), 마이코박테리움 파르시노게네스(Mycobacterium farcinogenes), 마이코박테리움 플라붐(Mycobacterium flavum), 마이코박테리움 헤모피툼(Mycobacterium haemophitum), 마이코박테리움 칸사시이(Mycobacterium kansasii), 마이코박테리움 플레이, 마이코박테리움 스크로풀라세움(Mycobacterium scrofulaceum), 마이코박테리움 세네갈렌세(Mycobacterium senegalense), 마이코박테리움 시미아에(Mycobacterium simiae), 마이코박테리움 서모레지스터블(Mycobacterium thermoresistible), 마이코박테리움 바카에(Mycobacterium vaccae), 마이코박테리움 포르시눔(Mycobacterium porcinum), 마이코박테리움 아브세수(Mycobacterium abscessu), 마이코박테리움 페레그리눔(Mycobacterium peregrinum), 마이코박테리움 플레이, 마이코박테리움 알베이(Mycobacterium alvei), 및 마이코박테리움 제노피를 비제한적으로 포함한다.
본 개시내용의 방법에 사용되는 마이코박테리아 전세포 용해물은, 경구, 정맥내("IV"), 피하("SC"), 근육내("IM"), 복강내, 피내, 안내, 폐내, 비내, 경피, 피하, 국소, 점막, 비강, 피부로의 인상, 질내, 자궁내, 자궁경관내, 및 직장을 비제한적으로 포함하는, 당업자가 고려할 임의의 적용 가능한 경로를 사용하여 투여될 수 있다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 비내 투여 경로는 비내 점적을 포함한다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 비내 투여 경로는 비내 에어로졸 전달을 포함한다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 비내 에어로졸 전달은 비강 스프레이 전달을 포함한다.
본 개시내용의 방법을 수행함에 있어서, 유효량의 마이코박테리아 전세포 용해물은 수스에 투여된다. 투여와 관련하여, 용어 "유효량"은 수스에 투여될 때 수스의 면역 시스템을 프라이밍하기에 충분한 마이코박테리아 전세포 용해물의 양을 지칭한다. 그러한 양은 치료된 수스에서 부작용을 전혀 또는 거의 발생시키지 않아야 한다. 유사하게, 그러한 양은 독성 효과를 전혀 또는 거의 발생시키지 않아야 한다. 당 분야에 익숙한 사람들이 이해하는 바와 같이, 마이코박테리아 전세포 용해물의 양은 치료되는 수스의 유형, 수스의 연령, 크기, 체중, 및 일반적인 신체 조건, 및 투여 요법을 비제한적으로 포함하는 많은 요인에 따라 달라질 것이다.
본 개시내용의 일부 구체예에서, 수스에 전달되는 마이코박테리아 전세포 용해물의 유효량은 수스의 체중 킬로그램 당 마이코박테리아 전세포 용해물의 마이크로그램을 결정함에 의해 정량될 수 있다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 수스에 투여되는 마이코박테리아 전세포 용해물의 양은 수스의 체중 kg 당 약 0.00001 내지 약 1000 μg의 마이코박테리아 전세포 용해물이다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 수스에 투여되는 마이코박테리아 전세포 용해물의 양은 수스의 체중 kg 당 약 1 내지 약 600 μg의 마이코박테리아 전세포 용해물이다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 수스에 투여되는 마이코박테리아 전세포 용해물의 양은 수스의 체중 kg 당 약 1 내지 약 500 μg의 마이코박테리아 전세포 용해물이다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 수스에 투여되는 마이코박테리아 전세포 용해물의 양은 수스의 체중 kg 당 약 100 내지 약 500 μg의 마이코박테리아 전세포 용해물이다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 수스에 투여되는 마이코박테리아 전세포 용해물의 양은 수스의 체중 kg 당 약 100 내지 약 300 μg의 마이코박테리아 전세포 용해물이다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 수스에 투여되는 마이코박테리아 전세포 용해물의 양은 수스의 체중 kg 당 약 1 내지 약 100 μg의 마이코박테리아 전세포 용해물이다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 수스에 투여되는 마이코박테리아 전세포 용해물의 양은 수스의 체중 kg 당 약 1 내지 약 75 μg의 마이코박테리아 전세포 용해물이다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 수스에 투여되는 마이코박테리아 전세포 용해물의 양은 수스의 체중 kg 당 약 1 내지 약 50 μg의 마이코박테리아 전세포 용해물이다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 수스에 투여되는 마이코박테리아 전세포 용해물의 양은 수스의 체중 kg 당 약 1 내지 약 25 μg의 마이코박테리아 전세포 용해물이다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 수스에 투여되는 마이코박테리아 전세포 용해물의 양은 수스의 체중 kg 당 약 25 내지 약 50 μg의 마이코박테리아 전세포 용해물이다.
본 개시내용의 일부 구체예에서, 수스에 전달되는 마이코박테리아 전세포 용해물의 유효량은 약학적으로 허용되는 담체의 밀리리터 당 마이코박테리아 전세포 용해물의 마이크로그램을 결정함에 의해 정량될 수 있다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 수스에 투여되는 마이코박테리아 전세포 용해물의 양은 용량 당 약학적으로 허용되는 담체의 mL 당 약 0.0001 내지 약 1000 μg의 마이코박테리아 전세포 용해물이다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 수스에 투여되는 마이코박테리아 전세포 용해물의 양은 용량 당 약학적으로 허용되는 담체의 mL 당 약 1 내지 약 1000 μg의 마이코박테리아 전세포 용해물이다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 수스에 투여되는 마이코박테리아 전세포 용해물의 양은 용량 당 약학적으로 허용되는 담체의 mL 당 약 1 내지 약 500 μg의 마이코박테리아 전세포 용해물이다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 수스에 투여되는 마이코박테리아 전세포 용해물의 양은 용량 당 약학적으로 허용되는 담체의 mL 당 약 25 내지 약 500 μg의 마이코박테리아 전세포 용해물이다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 수스에 투여되는 마이코박테리아 전세포 용해물의 양은 용량 당 약학적으로 허용되는 담체의 mL 당 약 50 내지 약 500 μg의 마이코박테리아 전세포 용해물이다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 수스에 투여되는 마이코박테리아 전세포 용해물의 양은 용량 당 약학적으로 허용되는 담체의 mL 당 약 50 내지 약 400 μg의 마이코박테리아 전세포 용해물이다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 수스에 투여되는 마이코박테리아 전세포 용해물의 양은 용량 당 약학적으로 허용되는 담체의 mL 당 약 50 내지 약 250 μg의 마이코박테리아 전세포 용해물이다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 수스에 투여되는 마이코박테리아 전세포 용해물의 양은 용량 당 약학적으로 허용되는 담체의 mL 당 약 50 내지 약 300 μg의 마이코박테리아 전세포 용해물이다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 수스에 투여되는 마이코박테리아 전세포 용해물의 양은 용량 당 약학적으로 허용되는 담체의 mL 당 약 100 내지 약 400 μg의 마이코박테리아 전세포 용해물이다.
본 개시내용의 일부 구체예에서, 마이코박테리아 전세포 용해물은 투여 전에 다중-용량 바이알에 함유되어 있다. 본 개시내용의 마이코박테리아 전세포 용해물을 함유하는 다중-용량 바이알은 유리, 플라스틱, 또는 다른 재료로 제조될 수 있다. 일부 구체예에서, 다중-용량 바이알은 약 1 내지 약 1000회 용량의 마이코박테리아 전세포 용해물을 포함한다. 일부 구체예에서, 다중-용량 바이알은 약 1 내지 약 500회 용량의 마이코박테리아 전세포 용해물을 포함한다. 일부 구체예에서, 다중-용량 바이알은 약 1 내지 약 250회 용량의 마이코박테리아 전세포 용해물을 포함한다. 일부 구체예에서, 다중-용량 바이알은 약 1 내지 약 100회 용량의 마이코박테리아 전세포 용해물을 포함한다. 일부 구체예에서, 다중-용량 바이알은 약 1 내지 약 50회 용량의 마이코박테리아 전세포 용해물을 포함한다. 일부 구체예에서, 다중-용량 바이알은 약 1 내지 약 25회 용량의 마이코박테리아 전세포 용해물을 포함한다.
본 개시내용의 일부 구체예에서, 마이코박테리아 전세포 용해물은 다중 용량 요법으로서 투여된다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 다중 용량 요법은 약 7일의 기간이다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 다중 용량 요법은 약 14일의 기간이다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 다중 용량 요법은 약 1개월의 기간이다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 다중 용량 요법은 약 2개월의 기간이다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 다중 용량 요법은 약 3개월의 기간이다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 다중 용량 요법은 약 4개월의 기간이다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 다중 용량 요법은 약 5개월의 기간이다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 다중 용량 요법은 약 6개월의 기간이다.
본 개시내용의 일부 구체예에서, 마이코박테리아 전세포 용해물은 단일 용량으로서 투여된다. 본 개시내용의 또 다른 구체예에서, 마이코박테리아 전세포 용해물은 단일 단위 용량으로서 투여된다. 본원에서 사용되는 용어 "단위 용량"은 마이코박테리아 전세포 용해물의 소정량이다. 마이코박테리아 전세포 용해물의 양은 일반적으로 수스에 투여될 마이코박테리아 전세포 용해물의 투여량 또는 그러한 투여량의 편리한 분획, 예를 들어, 이를 테면, 그러한 투여량의 1/2 또는 1/3과 동일하다. 본 개시내용의 방법에 따르면, 용어 "단일 용량" 및 "단일 단위 용량"은 조성물이 단일 적용으로 투여되고 다중 적용으로 투여될 수 있는 구체예를 포함한다.
본 개시내용의 일부 구체예에서, 마이코박테리아 전세포 용해물은 처음 사용 전에 물 또는 다른 수성 매질로 재구성되는 건조 분말 또는 과립으로서 제공된다. 일부 구체예에서, 물 또는 다른 수성 매질로의 재구성은 수성 현탁액을 형성한다. 일부 구체예에서, 수성 현탁액은 본원에 기재된 다중-용량 바이알에 함유되고, 본원에 기재된 대로 임의의 용량 수의 마이코박테리아 전세포 용해물을 갖는다. 일부 구체예에서, 수성 현탁액은 본원에 기재된 대로 단일 용량으로서 투여된다. 일부 구체예에서, 수성 현탁액은 본원에 기재된 대로 단일 단위 용량으로서 투여된다. 당업자는 본 개시내용이 임의의 크기, 형상, 부피 등의 건조 분말 또는 과립의 사용을 구상하고 있음을 이해한다. 제약 산업에서 사용되며 당업자가 이해하는 바와 같은 "병 내의 분말" 공정은, 그 임의의 변형을 포함하여, 본 개시내용에 의해 고려된다.
본 개시내용의 일부 구체예에서, 용량 당 수스에 투여되는 마이코박테리아 전세포 용해물의 부피는 다양하다. 예를 들어, 마이코박테리아 전세포 용해물을 투여하는데 사용되는 투여 경로 및 장치는 용량 당 수스에 투여되는 마이코박테리아 전세포 용해물의 부피에 변화를 일으킬 수 있다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 용량 당 부피는 용량 당 약 0.001 내지 약 50 mL이다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 용량 당 부피는 용량 당 약 0.01 내지 약 25 mL이다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 용량 당 부피는 용량 당 약 0.1 내지 약 10 mL이다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 용량 당 부피는 용량 당 약 0.1 내지 약 5 mL이다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 용량 당 부피는 용량 당 약 1 내지 약 5 mL이다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 용량 당 부피는 용량 당 약 1 내지 약 2 mL이다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 용량 당 부피는 용량 당 약 1 mL 미만이다.
본 개시내용의 방법은 수스가 태어난 후 효과적인 기간 내에 수스의 면역 시스템을 프라이밍하기 위해 수스에 마이코박테리아 전세포 용해물의 투여를 활용한다. 본원에 사용되는 용어 "효과적인 기간"은 요망되는 프라이밍 결과를 얻기 위해 원하는 투여를 제공하기에 충분히 긴 기간을 의미한다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 마이코박테리아 전세포 용해물은 출생 직후부터 약 1시간의 연령의 수스에 투여된다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 마이코박테리아 전세포 용해물은 약 1시간 내지 약 24시간의 연령의 수스에 투여된다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 마이코박테리아 전세포 용해물은 약 24시간 내지 약 1주일의 연령의 수스에 투여된다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 마이코박테리아 전세포 용해물은 약 1주일 내지 약 1개월의 연령의 수스에 투여된다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 마이코박테리아 전세포 용해물은 약 1개월 내지 약 2개월의 연령의 수스에 투여된다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 마이코박테리아 전세포 용해물은 약 2개월 내지 약 3개월의 연령의 수스에 투여된다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 마이코박테리아 전세포 용해물은 약 3개월 내지 약 4개월의 연령의 수스에 투여된다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 마이코박테리아 전세포 용해물은 약 4개월 내지 약 8개월의 연령의 수스에 투여된다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 마이코박테리아 전세포 용해물은 약 8개월 내지 약 12개월의 연령의 수스에 투여된다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 마이코박테리아 전세포 용해물은 약 12개월 내지 약 24개월의 연령의 수스에 투여된다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 마이코박테리아 전세포 용해물은 약 24개월 내지 약 36개월의 연령의 수스에 투여된다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 마이코박테리아 전세포 용해물은 약 36개월 내지 약 48개월의 연령의 수스에 투여된다.
일부 구체예에서, 본 개시내용의 방법은 표 1에 제시된 용량에 따라 수스에 비내 투여될 수 있다.
표 1
본 개시내용의 방법에 활용되는 마이코박테리아 전세포 용해물은 임의로 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체와 조합될 수 있다. 본 개시내용의 방법에 활용될 수 있는 약학적으로 허용되는 담체의 비제한적인 목록은 물 또는 염수, 겔, 연고(salve), 용매, 오일, 희석제, 유체 연고 기재, 리포좀, 미셀, 거대 미셀, 합성 중합체, 에멀젼, 지질로 제조된 고체 입자 등을 비제한적으로 포함한다. 당업자가 이해하는 바와 같이, 당 분야에 공지된 임의의 희석제가 본 개시내용에 따라 사용될 수 있다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 희석제는 수용성이다. 본 개시내용의 일부 구체예에서, 희석제는 수불용성이다. 본원에서 사용되는 용어 "희석제"는 물, 염수, 포스페이트 완충된 염수(PBS), 덱스트로스, 글리세롤, 에탄올, 완충된 소듐 또는 암모늄 아세테이트 용액 등 및 이들의 조합물을 비제한적으로 포함한다.
하기 구체예가 또한 고려된다:
1.
유효량의 마이코박테리아 전세포 용해물을 수스가 태어난 후 효과적인 기간 내에 수스에 투여하는 것을 포함하는 수스의 면역 시스템을 프라이밍하는 방법.
2.
제1항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 마이코박테리움 스메그마티스로부터 제조되는 방법.
3.
제1항 또는 제2항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 정제되지 않는 방법.
4.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 분획화되지 않는 방법.
5.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 지질제거되지 않는 방법.
6.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 단백질제거되지 않는 방법.
7.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 투여가 경구, 정맥내, 피하, 근육내, 복강내, 피내, 안내, 폐내, 비내, 경피, 피하, 국소, 점막, 비강, 피부로의 인상(impression), 질내, 자궁내, 자궁경관내, 및 직장으로 구성된 군으로부터 선택되는 방법.
8.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 투여가 점막 투여인 방법.
9.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 투여가 비내 투여인 방법.
10.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 수스에 투여되는 마이코박테리아 전세포 용해물의 양이 용량 당 약학적으로 허용되는 담체의 mL 당 약 0.0001 내지 약 1000 μg의 마이코박테리아 전세포 용해물인 방법.
11.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 수스에 투여되는 마이코박테리아 전세포 용해물의 양이 용량 당 약학적으로 허용되는 담체의 mL 당 약 50 내지 약 500 μg의 마이코박테리아 전세포 용해물인 방법.
12.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 수스에 투여되는 마이코박테리아 전세포 용해물의 양이 용량 당 약학적으로 허용되는 담체의 mL 당 약 100 내지 약 400 μg의 마이코박테리아 전세포 용해물인 방법.
13.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 단일 용량으로서 투여되는 방법.
14.
제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 단일 단위 용량으로서 투여되는 방법.
15.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 다중 용량 요법으로서 투여되는 방법.
16.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 용량 당 부피가 용량 당 약 0.001 내지 약 50 mL인 방법.
17.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 용량 당 부피가 용량 당 약 0.01 내지 약 25 mL인 방법.
18.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 용량 당 부피가 용량 당 약 0.1 내지 약 10 mL인 방법.
19.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 용량 당 부피가 용량 당 약 1 내지 약 5 mL인 방법.
20.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 용량 당 부피가 용량 당 약 1 내지 약 2 mL인 방법.
21.
제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 출생 직후부터 약 1시간의 연령의 수스에 투여되는 방법.
22.
제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 약 1시간 내지 약 24시간의 연령의 수스에 투여되는 방법.
23.
제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 약 24시간 내지 약 1주일의 연령의 수스에 투여되는 방법.
24.
제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 약 1주일 내지 약 1개월의 연령의 수스에 투여되는 방법.
25.
제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 약 1개월 내지 약 2개월의 연령의 수스에 투여되는 방법.
26.
제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 약 2개월 내지 약 3개월의 연령의 수스에 투여되는 방법.
27.
제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 약 3개월 내지 약 4개월의 연령의 수스에 투여되는 방법.
28.
제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 수스의 면역 시스템을 프라이밍하는 것이 백혈구를 프라이밍하는 것을 포함하는 방법.
29.
제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 수스의 면역 시스템을 프라이밍하는 것이 T 세포를 프라이밍하는 것을 포함하는 방법.
30.
제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 수스의 면역 시스템을 프라이밍하는 것이 단핵구를 프라이밍하는 것을 포함하는 방법.
31.
제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 수스의 면역 시스템을 프라이밍하는 것이 대식세포를 프라이밍하는 것을 포함하는 방법.
32.
제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 수스의 면역 시스템을 프라이밍하는 것이 폐포 대식세포를 프라이밍하는 것을 포함하는 방법.
33.
제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 프라이밍된 백혈구가 자극에 반응하여 향상된 인터페론 감마의 생산을 나타내는 방법.
34.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 약학적으로 허용되는 담체와 조합되는 방법.
35.
제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 수스가 돼지인 방법.
36.
수스가 태어난 후 효과적인 기간 내에 유효량의 마이코박테리아 전세포 용해물을 수스에 투여하는 것을 포함하는 수스의 면역 시스템을 프라이밍하는데 사용하기 위한 마이코박테리아 전세포 용해물.
37.
제36항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 마이코박테리움 스메그마티스로부터 제조되는 마이코박테리아 전세포 용해물.
38.
제36항 또는 제37항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 정제되지 않는 마이코박테리아 전세포 용해물.
39.
제36항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 분획화되지 않는 마이코박테리아 전세포 용해물.
40.
제36항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 지질제거되지 않는 마이코박테리아 전세포 용해물.
41.
제36항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 단백질제거되지 않는 마이코박테리아 전세포 용해물.
42.
제36항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 투여가 경구, 정맥내, 피하, 근육내, 복강내, 피내, 안내, 폐내, 경피, 피하, 국소, 점막, 비강, 및 피부로의 인상으로 구성된 군으로부터 선택되는 마이코박테리아 전세포 용해물.
43.
제36항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 투여가 점막 투여인 마이코박테리아 전세포 용해물.
44.
제36항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 투여가 비내 투여인 마이코박테리아 전세포 용해물.
45.
제36항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 수스에 투여되는 마이코박테리아 전세포 용해물의 양이 용량 당 약학적으로 허용되는 담체의 mL 당 약 0.0001 내지 약 1000 μg의 마이코박테리아 전세포 용해물인 마이코박테리아 전세포 용해물.
46.
제36항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 수스에 투여되는 마이코박테리아 전세포 용해물의 양이 용량 당 약학적으로 허용되는 담체의 mL 당 약 50 내지 약 500 μg의 마이코박테리아 전세포 용해물인 마이코박테리아 전세포 용해물.
47.
제36항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 수스에 투여되는 마이코박테리아 전세포 용해물의 양이 용량 당 약학적으로 허용되는 담체의 mL 당 약 100 내지 약 400 μg의 마이코박테리아 전세포 용해물인 마이코박테리아 전세포 용해물.
48.
제36항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 단일 용량으로서 투여되는 마이코박테리아 전세포 용해물.
49.
제36항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 단일 단위 용량으로서 투여되는 마이코박테리아 전세포 용해물.
50.
제36항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 다중 용량 요법으로서 투여되는 마이코박테리아 전세포 용해물.
51.
제36항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 용량 당 부피가 용량 당 약 0.001 내지 약 50 mL인 마이코박테리아 전세포 용해물.
52.
제36항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 용량 당 부피가 용량 당 약 0.01 내지 약 25 mL인 마이코박테리아 전세포 용해물.
53.
제36항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 용량 당 부피가 용량 당 약 0.1 내지 약 10 mL인 마이코박테리아 전세포 용해물.
54.
제36항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 용량 당 부피가 용량 당 약 1 내지 약 5 mL인 마이코박테리아 전세포 용해물.
55.
제36항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 용량 당 부피가 용량 당 약 1 내지 약 2 mL인 마이코박테리아 전세포 용해물.
56.
제36항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 출생 직후부터 약 1시간의 연령의 수스에 투여되는 마이코박테리아 전세포 용해물.
57.
제36항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 약 1시간 내지 약 24시간의 연령의 수스에 투여되는 마이코박테리아 전세포 용해물.
58.
제36항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 약 24시간 내지 약 1주일의 연령의 수스에 투여되는 마이코박테리아 전세포 용해물.
59.
제36항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 약 1주일 내지 약 1개월의 연령의 수스에 투여되는 마이코박테리아 전세포 용해물.
60.
제36항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 약 1개월 내지 약 2개월의 연령의 수스에 투여되는 마이코박테리아 전세포 용해물.
61.
제36항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 약 2개월 내지 약 3개월의 연령의 수스에 투여되는 마이코박테리아 전세포 용해물.
62.
제36항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 약 3개월 내지 약 4개월의 연령의 수스에 투여되는 마이코박테리아 전세포 용해물.
63.
제36항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 수스의 면역 시스템을 프라이밍하는 것이 백혈구를 프라이밍하는 것을 포함하는 마이코박테리아 전세포 용해물.
64.
제36항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 수스의 면역 시스템을 프라이밍하는 것이 T 세포를 프라이밍하는 것을 포함하는 마이코박테리아 전세포 용해물.
65.
제36항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 수스의 면역 시스템을 프라이밍하는 것이 단핵구를 프라이밍하는 것을 포함하는 마이코박테리아 전세포 용해물.
66.
제36항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 수스의 면역 시스템을 프라이밍하는 것이 대식세포를 프라이밍하는 것을 포함하는 마이코박테리아 전세포 용해물.
67.
제36항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 수스의 면역 시스템을 프라이밍하는 것이 폐포 대식세포를 프라이밍하는 것을 포함하는 마이코박테리아 전세포 용해물.
68.
제36항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 프라이밍된 백혈구가 자극에 반응하여 향상된 인터페론 감마의 생산을 나타내는 마이코박테리아 전세포 용해물.
69.
제36항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 약학적으로 허용되는 담체와 조합되는 마이코박테리아 전세포 용해물.
70.
제36항 내지 제69항 중 어느 한 항에 있어서, 수스가 돼지인 마이코박테리아 전세포 용해물.
71.
수스가 태어난 후 효과적인 기간 내에 유효량의 마이코박테리아 전세포 용해물을 수스에 투여하는 것을 포함하는 수스의 면역 시스템을 프라이밍하는데 사용하기 위한 약제의 제조를 위한 마이코박테리아 전세포 용해물의 용도.
72.
제71항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 마이코박테리움 스메그마티스로부터 제조되는 용도.
73.
제71항 또는 제72항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 정제되지 않는 용도.
74.
제71항 내지 제73항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 분획화되지 않는 용도.
75.
제71항 내지 제74항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 지질제거되지 않는 용도.
76.
제71항 내지 제75항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 단백질제거되지 않는 용도.
77.
제71항 내지 제76항 중 어느 한 항에 있어서, 투여가 경구, 정맥내, 피하, 근육내, 복강내, 피내, 안내, 폐내, 경피, 피하, 국소, 점막, 비강, 및 피부로의 인상으로 구성된 군으로부터 선택되는 용도.
78.
제71항 내지 제77항 중 어느 한 항에 있어서, 투여가 점막 투여인 용도.
79.
제71항 내지 제78항 중 어느 한 항에 있어서, 투여가 비내 투여인 용도.
80.
제71항 내지 제79항 중 어느 한 항에 있어서, 수스에 투여되는 마이코박테리아 전세포 용해물의 양이 용량 당 약학적으로 허용되는 담체의 mL 당 약 0.0001 내지 약 1000 μg의 마이코박테리아 전세포 용해물인 용도.
81.
제71항 내지 제80항 중 어느 한 항에 있어서, 수스에 투여되는 마이코박테리아 전세포 용해물의 양이 용량 당 약학적으로 허용되는 담체의 mL 당 약 50 내지 약 500 μg의 마이코박테리아 전세포 용해물인 용도.
82.
제71항 내지 제81항 중 어느 한 항에 있어서, 수스에 투여되는 마이코박테리아 전세포 용해물의 양이 용량 당 약학적으로 허용되는 담체의 mL 당 약 100 내지 약 400 μg의 마이코박테리아 전세포 용해물인 용도.
83.
제71항 내지 제82항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 단일 용량으로서 투여되는 용도.
84.
제71항 내지 제83항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 단일 단위 용량으로서 투여되는 용도.
85.
제71항 내지 제82항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 다중 용량 요법으로서 투여되는 용도.
86.
제71항 내지 제79항 중 어느 한 항에 있어서, 용량 당 부피가 용량 당 약 0.001 내지 약 50 mL인 용도.
87.
제71항 내지 제79항 중 어느 한 항에 있어서, 용량 당 부피가 용량 당 약 0.01 내지 약 25 mL인 용도.
88.
제71항 내지 제79항 중 어느 한 항에 있어서, 용량 당 부피가 용량 당 약 0.1 내지 약 10 mL인 용도.
89.
제71항 내지 제79항 중 어느 한 항에 있어서, 용량 당 부피가 용량 당 약 1 내지 약 5 mL인 용도.
90.
제71항 내지 제79항 중 어느 한 항에 있어서, 용량 당 부피가 용량 당 약 1 내지 약 2 mL인 용도.
91.
제71항 내지 제90항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 출생 직후부터 약 1시간의 연령의 수스에 투여되는 용도.
92.
제71항 내지 제90항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 약 1시간 내지 약 24시간의 연령의 수스에 투여되는 용도.
93.
제71항 내지 제90항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 약 24시간 내지 약 1주일의 연령의 수스에 투여되는 용도.
94.
제71항 내지 제90항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 약 1주일 내지 약 1개월의 연령의 수스에 투여되는 용도.
95.
제71항 내지 제90항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 약 1개월 내지 약 2개월의 연령의 수스에 투여되는 용도.
96.
제71항 내지 제90항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 약 2개월 내지 약 3개월의 연령의 수스에 투여되는 용도.
97.
제71항 내지 제90항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 약 3개월 내지 약 4개월의 연령의 수스에 투여되는 용도.
98.
제71항 내지 제97항 중 어느 한 항에 있어서, 수스의 면역 시스템을 프라이밍하는 것이 백혈구를 프라이밍하는 것을 포함하는 용도.
99.
제71항 내지 제97항 중 어느 한 항에 있어서, 수스의 면역 시스템을 프라이밍하는 것이 T 세포를 프라이밍하는 것을 포함하는 용도.
100.
제71항 내지 제97항 중 어느 한 항에 있어서, 수스의 면역 시스템을 프라이밍하는 것이 단핵구를 프라이밍하는 것을 포함하는 용도.
101.
제71항 내지 제97항 중 어느 한 항에 있어서, 수스의 면역 시스템을 프라이밍하는 것이 대식세포를 프라이밍하는 것을 포함하는 용도.
102.
제71항 내지 제97항 중 어느 한 항에 있어서, 수스의 면역 시스템을 프라이밍하는 것이 폐포 대식세포를 프라이밍하는 것을 포함하는 용도.
103.
제71항 내지 제98항 중 어느 한 항에 있어서, 프라이밍된 백혈구가 자극에 반응하여 향상된 인터페론 감마의 생산을 나타내는 용도.
104.
제71항 내지 제79항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 약학적으로 허용되는 담체와 조합되는 용도.
105.
제71항 내지 제104항 중 어느 한 항에 있어서, 수스가 돼지인 용도.
마이코박테리아 전세포 용해물 및 마이코박테리아 전세포 용해물을 제조하는 공정의 예가 제공된다. 마이코박테리움 스메그마티스 균주 지정 mc2155(1세대)를 Middlebrook7H9 브로스 및 OADC(7H9+OADC) 배지에서 성장시켜 시드 스톡을 생성함에 의해, 향후 배양 배지의 접종을 위해 동결된 시드 스톡을 저장하는 것과 같은 추가 처리를 위해 50 내지 100개 시드 스톡을 생성한다. 마이코박테리움 스메그마티스 mc2155의 상업적으로 이용 가능한 공급원은 마이코박테리움 스메그마티스(Trevisan) Lehmann 및 Neumann(ATCC® 700084™)이다. 본 개시내용에 적합한 Middlebrook7H9 브로스의 상업적으로 이용 가능한 공급원은 BD(Becton, Dickinson, and Company) Difco™ Middlebrook7H9 브로스이다.
당업자가 알고 있는 바와 같이, OADC는 마이코박테리아 종의 배지에 사용되는 올레산, 알부민, 덱스트로스, 및 카탈라제의 약어이다. OADC 보충물은 표 2에서 확인된 양의 구성요소를 포함한다.
표 2
OADC 보충물은 먼저 표 2에 제공된 구성요소의 양에 기반하여 적절한 크기의 용기에서 NaCl을 물에 용해시켜 준비된다. BSA를 서서히 첨가하고, 조합물을 BSA가 용해될 때까지 교반하며, 이는 최대 1시간이 걸릴 수 있다. D-이성질체 글루코스 ("D-글루코스")를 상기 조합물에 첨가한다. 조합물의 pH를 적합한 양의 NaOH를 첨가함에 의해 7로 조정한다. 두 번째 용기에서, 소듐 올레에이트를 준비하고, 이의 구성요소는 240 mL의 물, 4.8 mL의 6MNaOH, 및 4.8 mL의 올레산을 포함한다. 구성요소를 56℃까지 가온시키고, 구성요소가 투명한 용액이 될 때까지 빙빙 돌린다. 소듐 올레에이트 용액을 OADC 보충물에 첨가한다. 후드에서, 조합물을 멸균 병으로 여과한다. 병을 알루미늄 호일로 덮고, 4℃에 보관한다.
7H9+OADC 배지는 표 3에 제시된 양의 구성요소를 사용하여 제조된다. 7H9 배지는 먼저 오토클레이브된 에를렌마이어에 글리세롤, 배지, 및 물을 첨가하고, 구성요소를 혼합시킴에 의해 제조된다. OADC 보충물을 조합물에 첨가하고, 조합물을 혼합시킨다. 후드에서, 배지를 멸균 병으로 여과한다. 병을 알루미늄 호일로 덮고, 4℃에 보관한다.
표 3
마이코박테리움 스메그마티스 mc2155의 배양물을 7H9+OADC 배지 또는 GAS 배지 상에서 마이코박테리움 스메그마티스 mc2155의 1세대 스톡을 사용하여 성장시킬 수 있다. 첫 번째 단계는 사용되는 성장 배지(7H9 또는 GAS)를 제조하고 10 mL 내지 50 mL의 튜브로 분취시킴에 의해 배양을 시작하는 것이다. 마이코박테리움 스메그마티스 시드 배양물을 신속하게 해동하고 무균적으로 1 mL의 동결된 스톡을 10 mL의 배양 배지로 옮김에 의해 시작 배양물을 접종한다. 배양 튜브를 마이코박테리아의 성장이 분명하고 견고해질 때까지 24시간 내지 72시간 동안 37℃에서 인큐베이션한다.
다음 단계는 서브-배양(sub-culturing)하는 것이다. 동결된 스톡에서 시작한 후, 성장하는 마이코박테리아 배양물을 제거하고 총 최종 부피의 10%로 신선한 성장 배지에 첨가함에 의해 배양물을 증량시켰다. 예를 들어, 10 mL의 성장 시드를 100 mL의 새로운 배지에 첨가할 것이다. 새롭게 접종된 배양물을 37℃에서 24 내지 72시간 동안의 인큐베이션으로 돌려보낸다.
다음 단계는 최종 배양이다. 서브-배양 방법에 따라 마이코박테리아 배양물의 최종 총 부피를 달성한 다음, 생산 발효 용기를 통기 및 혼합시키며 접종 후 37℃에서 72시간 동안 인큐베이션한다.
다음 단계는 수확하는 것이다. 마이코박테리아를 함유하는 배양 배지를 발효 용기로부터 제거하고, 원심분리시켜 세포를 3000 rpm(2,000 x g)에서 15분 동안 펠렛화한다. 대안적으로, 배양물을 10-15분 동안 그대로 두어 더 무거운 마이코박테리아가 수집 용기의 바닥에 침전되게 할 수 있다. 액체를 붓거나 액체를 침전/원심분리된 펠렛 위에서 흡입시킴에 의해 상청액 유체를 제거한다. 포스페이트 완충된 염수를 침전/원심분리된 펠렛에 첨가하여 마이코박테리아를 세척한다. 침전/원심분리에 의해 PBS를 다시 제거하고, 펠렛을 동결/용해 전에 총 3회 세척한다.
다음 단계는 동결/용해시키는 것이다. 수집 및 세척된 펠렛은 추가 가공시까지 동결될 수 있거나 펠렛은 동결 없이 즉시 가공될 수 있다. 펠렛은 용해 완충액(8 mM EDTA를 지닌 PBS), 프로테이나제 억제제, 250 ug/mL Dnase 및 250 ug/mL Rnase에 현탁되어 용해 완충액 mL 당 2그램(습윤 중량)의 마이코박테리아를 함유한다. 마이코박테리아 세포는 초음파처리, 고압 균질화 또는 지르코니아 비드에 의한 실험실용 균질화와 같은 물리적 전단력을 사용하여 파괴된다. 세포 제조물을 같은 부피의 지르코니아/실리카 비드(0.1 mM)에 첨가하고, 최대 30분 동안 혼합한다.
다음 단계는 정화이다. 마이코박테리아 세포의 용해 후, 큰 비드 및 파괴되지 않은 세포 구성요소를 용기에 침전시킴에 의해 물질을 다시 정화한다. 원심분리는 또한 침강 속도를 높이는데 사용될 수 있다. 정화된 후, 생성된 물질을 0.22 미크론 필터를 통해 여과하고, -20℃ 이하에서 동결된 분취량으로 보관한다.
마지막 단계는 분석적 시험이다. 최종 동결된 물질은 내독소, TNF-알파 자극 능력, 총 단백질, 및 무균성에 대해 시험된다.
본 개시내용은 하기 비제한적인 실시예에 의해 추가로 설명된다. 폐포 대식세포(AMΦ)는 기도에서의 면역 항상성을 유지하는 선천 면역 시스템 세포의 주요 유형이다. 임의의 이론에 구속되지 않으며, 미생물 생성물에 반응하는 AMΦ에 의해 생성된 전염증성 환경은 호흡기 바이러스 감염에 대한 적응 면역 반응의 발달에 결정적인 것으로 고려된다. AMΦ에서 전염증성 반응을 자극하는 마이크로박테리움 스메그마티스 WCL의 능력을 시험하기 위해, 마이크로박테리움 스메그마티스 WCL 노출에 대한 돼지 AMΦ의 종양 괴사 인자(TNF)-알파("TNF-α") 반응을 측정하기 위한 연구가 수행될 수 있다. 이러한 유형의 세포에 대한 대표적인 샘플링은 돼지 AMΦ ZMAC 세포로 구성된다.
TNF 알파는 주로 대식세포-유래된 사이토카인이다. 이것은 선천 숙주 방어를 매개하는데 관련된 많은 사이토카인 유전자의 전이활성(transactivation)을 위한 "마스터 스위치(master switch)"로서 작용하는 NF-κB의 신호 전달, 활성화, 및 전위를 유도한다. INF 감마 및 IL-12와 같은 다른 전염증성 사이토카인과 함께, TNF 알파는 대식세포 및 호중구의 활성화, 전문 포식세포-의존성 기능의 확대, 및 세포-매개 면역의 방향에 관여한다.
돼지 폐포 대식세포
돼지 AMΦ 세포주인 ZMAC-4는 돼지 태아의 폐에서 유래될 수 있고, CD14, CD45, CD163, 및 CD172를 포함하는 AMΦ의 특징적인 여러 표면 마커를 발현하는 포식 세포로 구성된다. ZMAC 세포는 PRRSV의 성장을 효율적으로 지지하는 것으로 나타났다. ZMAC 세포를 l-글루타민(Mediatech, Herndon, VA, USA를 포함하는 다수의 공급원으로부터 상업적으로 이용 가능함)을 함유하고 10% 우태아 혈청(FBS)(GIBCO®, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA로부터 상업적으로 이용 가능함), 1 mM 소듐 피루베이트, 및 1 × 비필수 아미노산(다른 공급원 중에서, Mediatech로부터 상업적으로 이용 가능함)이 보충된 RPMI-1640 배지에서 배양하고, 37℃에서 5% CO2 대기에서 유지시킬 수 있다. ZMAC 세포의 유지는 또한 밀리리터 당 10 나노그램(ng/ml)의 재조합 마우스 대식세포 콜로니 자극 인자("M-CSF")(Shenandoah Biotechnology, Inc.™, Warwick, PA, USA로부터 상업적으로 이용 가능함)의 포함을 필요로 한다.
돼지 AMΦ의 자극
ZMAC 세포를 48-웰 플레이트(Corning®, New York, USA)의 각 개별 웰에서 밀리리터 당 5X10^5개 세포(세포/mL)로 배양하고, 후속하여 모의 배지, 100 ng/mL 지질다당류("LPS") 또는 5, 1.67 또는 0.56 mcg/mL의 마이코박테리움 스메그마티스로부터의 리포아라비노만난(LAM-MS; InvivoGen, San Diego, CA)에 노출시키거나 10, 5, 1.67 또는 0.56 mcg/mL의 미정제 마이코박테리움 스메그마티스 WCL을 6, 12 또는 24시간 동안 배양한다. 이러한 시점 중 하나에서, 배양 상청액을 수확하고, 시험시까지 -20℃에서 보관한다.
TNF-α의 정량
모의 치료되거나 LPS, 정제된 LAM 또는 미정제 마이크로박테리움 스메그마티스 WCL로 치료된 돼지 폐포 대식세포를 배양하는데 사용된 배지는 특정 효소-결합 면역흡착 검정("ELISA")을 사용하여 TNF-알파의 존재에 대해 검정된다. TNF-α의 검출을 위해, 0.1 M 카르보네이트 완충액(pH 9.6) 중 50 마이크로리터(μl)의 마이크로리터 당 32 마이크로그램(μg/mL)의 돼지 TNF-알파 MAb(클론 103304, R&D systems, Minneapolis, MN, USA로부터 상업적으로 이용 가능함)로 4℃에서 16시간 동안 코팅된 Nunc Immulon 4HBX 96-웰 플레이트(Thermo Fisher Scientific)의 개별 웰을 0.05% Tween 20(PBS-T)을 함유하는 PBS로 3회 세척하고, 차단 용액(PBS-T 중 1% BSA)과 함께 1시간 동안 실온에서 인큐베이션한다. PBS-T로 3회 세척 후, RPMI 완전 배지에서 희석된 50 μl의 배양 상청액 및 TNF-α 표준(R&D systems)을 이중 웰에 첨가하고, 2시간 동안 실온에서 정치시킨다. PBS-T로 5회 세척 후, 각각의 웰을 2.5 μg/mL 비오틴-표지된 돼지 TNF-알파 MAb(클론 103302, R&D systems으로부터 상업적으로 이용 가능함)를 함유하는 50 μl의 PBS-T 및 0.5% BSA 차단 용액과 함께 실온에서 1.5시간 동안 인큐베이션한다. PBS-T로 5회 세척 후, 각각의 웰을 Thermo Fisher Scientific으로부터 상업적으로 이용 가능한 20 ng/mL HRP-컨쥬게이션된 스트렙타비딘을 함유하는 50 μl의 PBS-T와 함께 20분 동안 실온에서 인큐베이션한 다음, 다시 PBS-T로 5회 세척한다. 발색은 웰 당 100 μl의 TMB 기질(KPL, Gaithersburg, MD, US로부터 상업적으로 이용 가능함)을 첨가하여 실온에서 개시되고, 100 μl의 1 M 인산으로 종결된다. 광학 밀도는 SpectraMax® Plus Microplate Reader(Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA로부터 상업적으로 이용 가능함)로 450 nm에서 결정된다. 결과의 평균을 내고, TNF-α의 양을 알려진 양의 TNF-α로 얻은 값으로부터 생성된 표준 곡선과의 비교에 의해 결정한다.
실시예 1
마이크로박테리움 스메그마티스 WCL로 자극된 돼지 AMΦ에 의한 TNF-알파의 유의한 생산
LPS에 반응하여 TNF-알파를 생산하는 ZMAC 세포의 능력은 이전 연구에서 입증되었다. 마이크로박테리움 스메그마티스 WCL의 면역-자극 활성을 시험하기 위해, ZMAC 세포는 마이코박테리아 배양에 최적화된 7H9 브로스에서 성장한 마이크로박테리움 스메그마티스 WCL에 노출된다. 고농도의 10 ug/mL의 마이크로박테리움 스메그마티스를 처음에 사용하여 12 및 24시간 동안 세포를 자극한다. 도 1에 예시된 바와 같이, 결과는 돼지 폐포 대식세포(AMΦ) ZMAC가 종양 괴사 인자(TNF)-알파 생산의 강력한 자극제인 박테리아 생성물 지질다당류(LPS)에 노출될 때의 TNF-알파의 낮은 생산에 비해 돼지 AMΦ ZMAC가 마이크로박테리움 스메그마티스 WCL에 노출될 때의 TNF-알파의 생산에서의 터짐(burst)을 보여준다.
실시예 2
마이크로박테리움 스메그마티스 WCL에 반응하는 AMΦ에 의한 TNF-알파 생산의 대부분은 자극 후 처음 6시간 이내에 발생한다
이전 실험으로부터의 데이터가 자극 후 12시간까지 상당한 양의 TNF-알파가 생산된다는 것을 보여주지만, 12시간 내지 24시간의 기간 동안 이 사이토카인의 추가 생산은 없는 것으로 보인다. 이러한 관찰은 본 개시내용의 발명자들로 하여금 마이크로박테리움 스메그마티스 WCL에 대한 TNF-알파 반응이 보통 자극 후 4-6시간 내에 최고점에 도달하는, LPS 자극에 반응하여 이 사이토카인에 대해 관찰된 유사한 발현 동역학과 유사한지에 의문을 갖게 하였다. 따라서, 마이크로박테리움 스메그마티스 WCL의 자극에 반응하는 TNF-알파 생산 동역학을 확립하기 위해 시기 분석이 설정된다. 이 실험에서, 본 개시내용의 발명자들은 또한 동일한 마이크로박테리움 스메그마티스로부터 제조되지만 상이한 브로스 유형에서 배양된 2개의 다른 WCL을 포함시킨다. 도 2에 예시된 바와 같이, 이 시기 분석의 결과는 대부분의 TNF-알파 발현 활성이 자극 후 6시간 이내에 발생하고, 이 발현 동역학이 시험된 3개 모두의 마이크로박테리움 스메그마티스 WCL 제조물에 대한 반응에서 유사함을 입증한다. WCL의 3개의 상이한 제조물에 대한 대식세포의 TNF-알파 반응의 유사한 동역학 및 강도는 유사하고, 이러한 결과는 3개 모두의 제조물이 TNF-알파를 생산하는 대식세포를 자극하는 이들의 능력과 관련하여 유사한 조성을 갖는다는 것을 시사한다.
실시예 3
마이크로박테리움 스메그마티스를 성장시키는데 사용된 배양 배지는 WCL의 TNF-알파 유도 능력에 영향을 미친다
마이크로박테리움 스메그마티스의 성장 조건에 독립적인 발현 동역학에도 불구하고, 최대 TNF-알파 반응은 도 2에서 입증된 바와 같이 용해물 제조물로부터 상이하다는 것을 알 수 있다. 이러한 결과는 마이크로박테리움 스메그마티스를 성장시키는데 사용된 배양 배지가 AMΦ 세포의 TNF-알파 반응을 유도함에 있어 WCL의 효능에 영향을 미칠 수 있음을 시사한다. 이 이론을 시험하기 위해, 효능 분석에서 각 WCL에 대한 용량-반응 곡선을 확립한다. 도 3에 도시된 바와 같이, 결과는 3개 모두의 용해물이 AMΦ의 양호한 TNF-알파 반응을 유도할 수 있지만, 효능의 해석은 생산된 TNF-알파의 총 양에서의 약간의 차이로 인해 복잡해지는 것을 나타낸다. 이 연구에서, 예를 들어, 도 3은 NB 브로스에서 성장한 마이크로박테리움 스메그마티스로부터 제조된 용해물이 가장 낮은 반-유효 용량(ec50=1.2 ug/mL)을 나타내는 것을 보여주고, 이는 이러한 용해물의 가장 큰 효능을 시사한다. 그러나, 그 용해물에 의한 최대 반응은 7H9 또는 GAS 브로스에서 성장한 마이크로박테리움 스메그마티스로부터 제조된 WCL에 의해 유도된 반응의 약 80%임이 인지될 수 있다.
효능의 복잡한 해석은 NB 브로스에서 제조된 용해물을 배제시킴에 의해 제거된다. 이 분석으로부터, 7H9 배지에서 성장한 마이크로박테리움 스메그마티스로부터 제조된 용해물이 GAS 배지에서 성장한 박테리아로부터 제조된 용해물보다 약간 더 강력하다는 결론을 내리는 것이 합당하다. 따라서, 도 3에 예시된 대로, 이 연구는 마이코박테리움 스메그마티스 WCL 추출물의 효능(50%-유효 용량으로 표시됨)이 WCL을 제조하는 박테리아 세포 덩어리를 준비하기 위해 마이코박테리움 스메그마티스를 배양하는데 사용되는 성장 배지의 유형에 의해 영향을 받을 수 있음을 입증한다. 시험된 3개의 상이한 배지 중, GAS 배지가 4.79 mcg/mL의 50%-유효 용량을 가지며 가장 좋은 것으로 나타났고, 이어서 7H9 배지가 3.19 mcg/배지 mL의 50%-유효 용량을 갖고, 이어서 NB 배지가 1.2 mcg/mL의 50%-유효 용량을 갖는다.
실시예 4
마이크로박테리움 스메그마티스 WCL은 정제된 마이코박테리아 세포벽 구성요소인 LAM-MS 보다 훨씬 더 큰 TNF-알파 반응을 유도한다
마이코박테리아 세포벽의 여러 구성요소는, 예를 들어, 뮤라밀 디펩티드(MDP), 트레할로스 디미콜레이트(TDM), 및 마이코박테리아 세포벽 리포아라비노만난("LAM")을 포함하는 면역 자극 활성을 갖는 것으로 알려져 있다. 모든 마이코박테리아 종에 의해 발현되는 마이코박테리아-유래된 LAM은 마이코박테리아 세포에 존재하는 toll 유사 수용체(TLR)-2와 결합하여 대식세포를 활성화시키는 것으로 알려져 있다.
LAM은 TLR2 경로를 통해 TNF-알파를 포함하는 전염증성 사이토카인 생산을 유도하는 것으로 알려진 가장 특징적인 마이코박테리아 세포-벽 구성요소이다. 이 연구는 마이크로박테리움 스메그마티스로부터 정제된 LAM("LAM-MS")에 의한 자극에 비해 마이크로박테리움 스메그마티스 WCL에 의한 자극에 반응하는 ZMAC 세포의 TNF-알파 반응을 비교한다.
마이크로박테리움 스메그마티스 WCL 및 마이코박테리아 LAM-MS의 동일한 자극 농도에서, 마이크로박테리움 스메그마티스 WCL로의 자극에 반응하여 ZMAC 세포에 의해 생산된 TNF-알파의 관찰된 양은 상업적으로 이용 가능한 LAM-MS(InVivoGen)로의 자극에 반응하여 동일한 세포에 의해 생산된 TNF-알파의 양보다 약 4배 더 높고, 이는 도 4에 예시되어 있다. 마이크로박테리움 스메그마티스의 LAM은 마이크로박테리움 스메그마티스 WCL의 분획일 뿐이므로, 이러한 결과는 LAM 이외에 마이크로박테리움 스메그마티스의 다른 구성요소가 마이크로박테리움 스메그마티스 WCL에 존재하는 구성요소의 복잡한 혼합물 간의 부가적이고 아마도 상승적인 메커니즘에 의해 TNF-알파 생산에 기여할 가능성이 높음을 시사한다.
실시예 5
마이크로박테리움 스메그마티스 WCL은 단백질제거되고 지질제거된 마이코박테리아 세포벽 추출물(MCWE)과 비교하여 훨씬 더 큰 TNF-알파 반응을 유도한다
마이크로박테리움 스메그마티스 WCL로의 자극에 반응하는 ZMAC 세포의 TNF-알파 반응은 미국 수의학 면허 번호 289를 보유한 Bioniche Animal Health USA, Inc.(Athens, Georgia)로부터의 상업적으로 이용 가능한 제품인 Equimune I.V.로의 자극과 비교된다. Equimune I.V. 제품은 만료된 미국 특허 4,744,984호에도 포함된다. Equimune I.V.는 마이코박테리움 플레이로부터 추출된 정제된 마이코박테리움 세포벽의 에멀젼이다. 상업적 제품에 세포벽 추출물의 농도가 표시되지 않으므로, ZMAC 세포에 의한 TNF-알파 생산을 자극하는 이들의 능력에 대해 일련의 희석액이 시험된다. 이 실험의 결과는 도 4에 예시되어 있다. Equimune I.V. 대 마이크로박테리움 스메그마티스 WCL의 효능에 대한 직접 비교는 Equimune I.V. 제품 중 박테리아 추출물의 양이 알려져 있지 않기 때문에 불가능하지만, 1.67 μg/mL만큼 적은 마이크로박테리움 스메그마티스 WCL이 Equimune I.V.보다 더 강한 TNF-알파 반응을 촉진시켰다는 것은 명백하다. 따라서, 이러한 결과는 마이코박테리아 외피의 구조적 구성요소를 포함하는 마이코박테리아 전세포 용해물을 투여하는 것이 세포벽 구성요소만을 가질 Equimune I.V.를 투여하는 것과 비교하여 ZMAC 세포에 부가적이고 아마도 상승적인 효과를 갖는다는 것을 나타낸다.
실시예 6
돼지에 마이크로박테리움 스메그마티스 WCL의 투여는 돼지의 면역 시스템을 자극한다
돼지에 대한 마이크로박테리움 스메그마티스 WCL의 면역학적 효과를 평가하기 위한 개념 증명 연구가 수행된다. 기본적인 연구 설계는 표 4에 제시된다.
표 4
기본 설계 프로토콜
16마리의 돼지를 8마리 돼지씩 2개 그룹에 무작위 배정하고 귀 태그로 식별한다. 돼지를 하나의 우리 또는 동일한 생산 시설에 위치한 2개 이하의 우리에 합사한다. 돼지를 표 4에 설명된 대로 처리한다. 돼지는 연구 지속기간 내내 생산 시설에 수용된다. 모든 돼지 작업은 생산 시설에서 수행된다. 돼지는 일상적인 마무리를 위해 이들의 무리로 돌아가고 연구 종료시 정상적으로 처리된다. 혈액은 치료 후 12-18시간 내지 치료 후 3일 사이에 처리 당일 아침에 수집된다.
제안된 계획은 다음과 같다. 0일 아침에, 돼지는 연구, 태그, 및 채혈을 위해 무작위 선택된다. 혈액은 수집 직후 일리노이주 샴페인의 Aptimmune Biologics, Inc.로 보내진다. 혈액은 주위 온도에서 보관된다. 0일 오후에, 연구 그룹 A 및 B에 돼지를 무작위 배정하기 위해 귀 태그 번호를 Aptimmune Biologics, Inc.로 보낸다. 2개의 우리를 사용하는 경우, 돼지는 2개의 우리 사이에서 무작위로 나뉜다. 0일 오후에, 치료제 A 및 B를 그룹 배정 당 각각 8마리의 돼지에게 투여하시오(치료 완료는 3 내지 5 PM을 목표로 한다). 1일 아침 일찍, 모든 돼지를 그날 가능한 빨리 채혈하며, 치료 후 12-18시간을 목표로 한다. 모든 혈액 샘플을 Aptimmune Biologics, Inc.로 보내고, 주위 온도에서 보관한다. 3일 아침에, 모든 돼지를 아침에 채혈하고, 혈액을 가능한 한 빨리 주위 온도에서 Aptimmune Biologics, Inc.로 보낸다.
분석적 시험 프로토콜
응고를 방지하기 위해 헤파린 함유 튜브에 수집된 전혈의 1 x 10 mL 샘플을 각 돼지로부터 수집하고, 귀 태그 번호 및 날짜로 식별한다. 헤파린 처리된 혈액을 수집하고, (1) TNF-알파 자극; (2) 자연 살해 서브집단; 및 (3) B-세포 서브집단에 대해 분석한다. 시험 샘플을 Aptimmune Biologics, Inc.에 전달하여 즉시 처리한다.
활성 스케쥴
0일 아침에, 연구에 등록하기 위해 16마리의 돼지에게 고유 번호를 갖는 태그를 붙인다. 건강하지 않은 동물은 사용하지 않는다. 동물에 태그를 붙이는 동안, 10 mL의 혈액 샘플을 헤파린 튜브(녹색 뚜껑)에 수집한다. 각 튜브에 동물 번호 및 샘플 수집 날짜를 표시한다. 혈액 샘플을 임의의 얼음 팩 없이 쿨러에서 Aptimmune Biologics, Inc.로 보낸다(주변을 빛으로부터 보호함).
0일 오후에, 돼지를 그룹 A 또는 B로 무작위 배정하여, 돼지를 1 mL의 비내 처리로 치료한다. 모든 동물을 같은 우리에 넣거나, 2개의 우리로 나뉘는 경우, 각 그룹으로부터의 4마리의 치료된 동물을 2개의 우리 중 하나에 무작위로 할당한다. 혈액 샘플을 임의의 얼음 팩 없이 쿨러에서 Aptimmune Biologics, Inc.로 보낸다(주변을 빛으로부터 보호함).
1일 아침에, 치료 후 12-18시간을 목표로, 연구 돼지의 일반적인 건강상태를 관찰하고, 발견된 경우 임의의 비정상적인 관찰을 기록한다. 10 mL의 혈액 샘플을 헤파린 튜브(녹색 뚜껑)에 수집한다. 각 튜브에 동물 번호 및 샘플 수집 날짜를 표시한다. 혈액 샘플을 임의의 얼음 팩 없이 쿨러에서 Aptimmune Biologics, Inc.로 보낸다(주변을 빛으로부터 보호함).
3일 아침에, 연구 돼지의 일반적인 건강상태를 관찰하고, 발견된 경우 임의의 비정상적인 관찰을 기록한다. 10 mL의 혈액 샘플을 헤파린 튜브(녹색 뚜껑)에 수집한다. 각 튜브에 동물 번호 및 샘플 수집 날짜를 표시한다. 혈액 샘플을 임의의 얼음 팩 없이 쿨러에서 Aptimmune Biologics, Inc.로 보낸다(주변을 빛으로부터 보호함).
결과/분석
TNF-알파 자극의 데이터 및 결과를 표 5 및 도 5에 제시한다. 데이터는 TNF-알파의 나노그램/mL로 표시된다.
표 5
그룹 A에 비해 그룹 B에서 TNF-알파 자극의 증가가 관찰된다. 결과는 노출된 돼지에서 그룹 B의 마이크로박테리움 스메그마티스 WCL 구성요소가 TNF-알파의 생산량에 영향을 미쳤음을 나타낸다.
살해 세포 서브집단의 데이터 및 결과는 표 6 및 도 6에 제시된다. 데이터는 말초혈 단핵 세포(PBMC) 집단의 퍼센트(%)로 표시된다.
표 6
그룹 B의 자연 살해 서브집단의 증가는 1일에 관찰된다. 임의의 이론에 구속되길 바라지 않으며, 전신 면역-자극 효과가 그룹 B의 마이크로박테리움 스메그마티스 WCL 구성요소로의 접종에 반응하여 발생하였다고 가정한다.
B-세포 서브집단의 데이터 및 결과는 표 7 및 도 7에 제시된다. 데이터는 PBMC 집단의 퍼센트(%)로 표시된다.
표 7
그룹 A에 비해 그룹 B에서 B-세포 서브집단의 증가는 1일에 관찰된다.
구체예가 상기 기술되었지만, 본 발명은 기술된 구체예에 한정되지 않는다. 대신에, 본 출원은 그 일반 원칙을 사용하여 본 발명의 임의의 변형, 사용, 또는 적응을 포괄하고자 한다. 추가로, 본 출원은 본 발명이 속하는 기술 분야의 공지되거나 통상적인 실시에 속하고 첨부된 청구항의 범위 내에 있는 본 개시내용으로부터의 그러한 변화를 포함하는 것으로 의도된다.
참고문헌
Claims (40)
- 유효량의 마이코박테리아 전세포 용해물을 수스(Sus)가 태어난 후 효과적인 기간 내에 수스에 투여하는 것을 포함하는 수스의 면역 시스템을 프라이밍하는 방법.
- 제1항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 마이코박테리움 스메그마티스(Mycobacterium smegmatis)로부터 제조되는 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 정제되지 않는 방법.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 분획화되지 않는 방법.
- 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 지질제거되지 않는 방법.
- 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 단백질제거되지 않는 방법.
- 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 투여가 경구, 정맥내, 피하, 근육내, 복강내, 피내, 안내, 폐내, 비내, 경피, 피하, 국소, 점막, 비강, 피부로의 인상(impression), 질내, 자궁내, 자궁경관내, 및 직장으로 구성된 군으로부터 선택되는 방법.
- 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 투여가 점막 투여인 방법.
- 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 투여가 비내 투여인 방법.
- 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 약학적으로 허용되는 담체와 조합되는 방법.
- 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 수스에 투여되는 마이코박테리아 전세포 용해물의 양이 수스의 체중 kg 당 약 0.00001 내지 약 1000 μg의 마이코박테리아 전세포 용해물인 방법.
- 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 수스에 투여되는 마이코박테리아 전세포 용해물의 양이 수스의 체중 kg 당 약 1 내지 약 500 μg의 마이코박테리아 전세포 용해물인 방법.
- 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 수스에 투여되는 마이코박테리아 전세포 용해물의 양이 수스의 체중 kg 당 약 1 내지 약 250 μg의 마이코박테리아 전세포 용해물인 방법.
- 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 수스에 투여되는 마이코박테리아 전세포 용해물의 양이 수스의 체중 kg 당 약 1 내지 약 125 μg의 마이코박테리아 전세포 용해물인 방법.
- 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 수스에 투여되는 마이코박테리아 전세포 용해물의 양이 용량 당 약학적으로 허용되는 담체의 mL 당 약 0.0001 내지 약 1000 μg의 마이코박테리아 전세포 용해물인 방법.
- 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 수스에 투여되는 마이코박테리아 전세포 용해물의 양이 용량 당 약학적으로 허용되는 담체의 mL 당 약 1 내지 약 500 μg의 마이코박테리아 전세포 용해물인 방법.
- 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 수스에 투여되는 마이코박테리아 전세포 용해물의 양이 용량 당 약학적으로 허용되는 담체의 mL 당 약 50 내지 약 500 μg의 마이코박테리아 전세포 용해물인 방법.
- 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 수스에 투여되는 마이코박테리아 전세포 용해물의 양이 용량 당 약학적으로 허용되는 담체의 mL 당 약 50 내지 약 300 μg의 마이코박테리아 전세포 용해물인 방법.
- 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 단일 용량으로서 투여되는 방법.
- 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 단일 단위 용량으로서 투여되는 방법.
- 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 다중 용량 요법으로서 투여되는 방법.
- 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 용량 당 부피가 용량 당 약 0.001 내지 약 50 mL인 방법.
- 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 용량 당 부피가 용량 당 약 0.01 내지 약 25 mL인 방법.
- 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 용량 당 부피가 용량 당 약 0.1 내지 약 10 mL인 방법.
- 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 용량 당 부피가 용량 당 약 1 내지 약 5 mL인 방법.
- 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 용량 당 부피가 용량 당 약 1 내지 약 2 mL인 방법.
- 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 출생 직후부터 약 1시간의 연령의 수스에 투여되는 방법.
- 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 약 1시간 내지 약 24시간의 연령의 수스에 투여되는 방법.
- 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 약 24시간 내지 약 1주일의 연령의 수스에 투여되는 방법.
- 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 약 1주일 내지 약 1개월의 연령의 수스에 투여되는 방법.
- 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 약 1개월 내지 약 2개월의 연령의 수스에 투여되는 방법.
- 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 약 2개월 내지 약 3개월의 연령의 수스에 투여되는 방법.
- 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 마이코박테리아 전세포 용해물이 약 3개월 내지 약 4개월의 연령의 수스에 투여되는 방법.
- 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 수스의 면역 시스템을 프라이밍하는 것이 백혈구를 프라이밍하는 것을 포함하는 방법.
- 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 수스의 면역 시스템을 프라이밍하는 것이 T 세포를 프라이밍하는 것을 포함하는 방법.
- 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 수스의 면역 시스템을 프라이밍하는 것이 단핵구를 프라이밍하는 것을 포함하는 방법.
- 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 수스의 면역 시스템을 프라이밍하는 것이 대식세포를 프라이밍하는 것을 포함하는 방법.
- 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 수스의 면역 시스템을 프라이밍하는 것이 폐포 대식세포를 프라이밍하는 것을 포함하는 방법.
- 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 프라이밍된 폐포 대식세포가 자극에 반응하여 향상된 TNF-알파의 생산을 나타내는 방법.
- 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 수스가 돼지인 방법.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201662354534P | 2016-06-24 | 2016-06-24 | |
| US62/354,534 | 2016-06-24 | ||
| PCT/US2017/039110 WO2017223510A1 (en) | 2016-06-24 | 2017-06-23 | Methods of priming a sus' immune system |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20190020805A true KR20190020805A (ko) | 2019-03-04 |
Family
ID=60783269
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020197002308A KR20190020805A (ko) | 2016-06-24 | 2017-06-23 | 수스의 면역 시스템을 프라이밍하는 방법 |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20190374631A1 (ko) |
| EP (1) | EP3478317A4 (ko) |
| JP (1) | JP2019522659A (ko) |
| KR (1) | KR20190020805A (ko) |
| CN (1) | CN109562155A (ko) |
| BR (1) | BR112018076875A2 (ko) |
| CA (1) | CA3028437A1 (ko) |
| GB (1) | GB2566879A (ko) |
| MX (1) | MX2018015537A (ko) |
| PH (1) | PH12018502675A1 (ko) |
| RU (1) | RU2019101814A (ko) |
| TW (1) | TW201806609A (ko) |
| WO (1) | WO2017223510A1 (ko) |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU2003270779A1 (en) * | 2002-09-20 | 2004-04-08 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Vaccine compositions and adjuvant |
| US7998471B2 (en) * | 2005-01-12 | 2011-08-16 | Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University | Mycobacteria expressing HIV-1 and malaria antigens |
| CN1318573C (zh) * | 2005-06-13 | 2007-05-30 | 中国药品生物制品检定所 | 耻垢分枝杆菌制剂及其应用 |
| GB0526033D0 (en) * | 2005-12-21 | 2006-02-01 | Bioeos Ltd | Method |
| ES2932952T3 (es) * | 2012-04-24 | 2023-01-30 | Ohio State Innovation Foundation | Composiciones y métodos para tratar y prevenir el síndrome reproductivo y respiratorio porcino |
-
2017
- 2017-06-23 BR BR112018076875-8A patent/BR112018076875A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2017-06-23 GB GB1900899.4A patent/GB2566879A/en not_active Withdrawn
- 2017-06-23 WO PCT/US2017/039110 patent/WO2017223510A1/en unknown
- 2017-06-23 KR KR1020197002308A patent/KR20190020805A/ko not_active Application Discontinuation
- 2017-06-23 EP EP17816333.3A patent/EP3478317A4/en not_active Withdrawn
- 2017-06-23 CN CN201780038973.6A patent/CN109562155A/zh active Pending
- 2017-06-23 JP JP2018567591A patent/JP2019522659A/ja active Pending
- 2017-06-23 MX MX2018015537A patent/MX2018015537A/es unknown
- 2017-06-23 US US16/312,946 patent/US20190374631A1/en not_active Abandoned
- 2017-06-23 RU RU2019101814A patent/RU2019101814A/ru not_active Application Discontinuation
- 2017-06-23 CA CA3028437A patent/CA3028437A1/en not_active Abandoned
- 2017-06-26 TW TW106121278A patent/TW201806609A/zh unknown
-
2018
- 2018-12-18 PH PH12018502675A patent/PH12018502675A1/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| BR112018076875A2 (pt) | 2019-04-02 |
| US20190374631A1 (en) | 2019-12-12 |
| EP3478317A1 (en) | 2019-05-08 |
| JP2019522659A (ja) | 2019-08-15 |
| TW201806609A (zh) | 2018-03-01 |
| GB201900899D0 (en) | 2019-03-13 |
| MX2018015537A (es) | 2019-09-16 |
| PH12018502675A1 (en) | 2019-10-21 |
| CA3028437A1 (en) | 2017-12-28 |
| EP3478317A4 (en) | 2020-03-04 |
| WO2017223510A1 (en) | 2017-12-28 |
| CN109562155A (zh) | 2019-04-02 |
| RU2019101814A3 (ko) | 2020-11-13 |
| GB2566879A (en) | 2019-03-27 |
| RU2019101814A (ru) | 2020-07-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US9220765B2 (en) | Bacterial ribonucleic acid cell wall compositions and methods of making and using them | |
| JP5730862B2 (ja) | オクロバクトラム・インターメディウムのリポ多糖類および哺乳動物の免疫刺激剤としてのそれらの使用 | |
| EP2964254B1 (en) | Immunotherapeutic potential of modified lipooligosaccharides/lipid a | |
| US10195261B2 (en) | Adjuvant compositions and related methods | |
| Michel et al. | Immuno-stimulation by a ribosomal vaccine associated with a bacterial cell wall adjuvant in humans | |
| EP3062816B1 (en) | Attenuated pasteurella multocida vaccines & methods of making & use thereof | |
| CA2968389C (en) | Adjuvant compositions and related methods | |
| KR20190020805A (ko) | 수스의 면역 시스템을 프라이밍하는 방법 | |
| US9512186B2 (en) | Recombinant strain of Mycobacterium bovis bacillus calmette-guerin (BCG), immunogenic composition and use | |
| Harris | DECIPHERING THE MHC CLASS I-UNRESTRICTED IMMUNE RESPONSE TO RHODOCOCCUS EQUI | |
| Kinjo et al. | Glycolipid Antigen-Mediated Invariant NKT Cell Activation in Microbial Immunity | |
| Adams | Analysis of P97 and P102 paralogs of Mycoplasma hyopneumoniae | |
| Quaak | Pharmaceutical development of the plasmid DNA vaccine pDERMATT |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A201 | Request for examination | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| E601 | Decision to refuse application |