KR20180096767A - 망막 줄기 세포 - Google Patents

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로베르토 피넬리
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Abstract

본 발명은 망막의 톱니분계 및 톱니둘레 영역으로부터 단리된 줄기 세포, 상기 줄기 세포를 단리하기 위한 방법, 그리고 눈에 영향을 주는 질환 및 다른 병리학적 상태의 치료에서 이들의 용도에 관계한다.

Description

망막 줄기 세포
기술 분야
본 발명은 망막의 특정한 영역으로부터 단리된 줄기 세포, 상기 줄기 세포를 단리하기 위한 방법, 그리고 눈에 영향을 주는 질환 및 다른 병리학적 상태의 치료에서 이들의 용도에 관계한다.
배경 기술
시력의 상실은 망막 또는 눈에 대한 질환 또는 손상에 의해 유발될 수 있다. 가령, 감염성 과정, 예를 들면, 시토메갈로바이러스에 의한 망막의 감염이 시야의 상실, 감소된 시력 및 시력상실을 야기할 수 있다. 염증성 과정, 예를 들면, 포도막염 역시 망막에 영향을 줄 수 있고, 그리고 시력에서 감소를 야기할 수 있다. 망막의 암, 예를 들면, 예로서 망막모세포종 역시 시력을 더욱 악화시킨다. 다른 질환이 연령에 연관된 황반 변성으로 인해 일어날 수 있다. 많은 상이한 유전성 질환, 예를 들면, 망막 색소변성은 망막 손상 및 시력상실뿐만 아니라 다른 유형의 망막 변성 (망막 이영양증)을 야기한다. 망막에 대한 물리적 손상은 또한, 망막의 박리로부터 발생할 수 있는데, 이것은 망막 변성 및 시력상실을 야기한다.
망막 손상에 의해 유발된 시력의 상실을 치료하는데 가용한 요법은 여전히 한정적이다.
상기 요법은 종종, 외과 시술 및/또는 조직 이식을 수반하고, 따라서 영향을 받은 개체를 부작용의 위험에 노출시키는데, 이것은 조직 이식의 경우에 이물질에 대한 반응의 위험 및 이식조직의 거부를 포함할 수 있다. 게다가, 기저 질환을 치유하거나 또는 교정하는 대신에, 많은 가용한 요법은 이들 질환의 증상만을 단순히 치료하거나 또는 감춘다. 눈에 영향을 주는 질환 및 다른 병리학적 상태의 치료를 위한 새로운 요법이 여전히 요구되고, 그리고 이들 질환 또는 병리학적 상태를 효과적으로 및 영구적으로 교정할 수 있는 요법이 특히 필요하다. 부작용의 발생을 최소화할 수 있는 요법이 또한 필요하다.
톱니분계 (ora terminalis) 및 톱니둘레 (ora serrata)는 근접하고 연결되어 있음에도 불구하고, 망막의 상이한 부분이다 (도면 1을 참조한다). 톱니둘레 (라틴어로 "serrata"는 "닫힌"을 의미한다)는 기능적 망막 및 톱니분계 (라틴어로 "terminalis"는 "종말부"를 의미한다) 사이에 연결이다. 톱니분계는 망막의 가장 편심적 경계이다 (Holden et al., Retinal Magnification Factor at the Ora Terminalis: A Structural Study of Human and Animal Eyes, Vision Res. 27: 1229-1235, 1987); 톱니분계는 톱니둘레의 전방에서 및 포도막의 일부인 평면부의 후방으로 배열된다. 톱니분계 및 톱니둘레는 성체에서 신경 망막의 배아 부분이고, 그리고 전체 추정적 신경 망막을 덮는데 이용되었던 배아 신경상피 배엽의 생존 잔류물이다.
어류, 양서류 및 조류의 톱니분계 및 톱니둘레는 다양한 간행물에서 설명된 증식성 구역이다. 어류 및 양서류에서 신경발생은 배아 시기 후에도 중단되지 않고 동물의 수명 내내 계속 작동한다. 어류 또는 양서류의 톱니분계로부터 단리된 줄기 세포 및 조류의 톱니둘레로부터 단리된 줄기 세포는 예로서, Amato et al., Retinal stem cells in vertebrates: parallels and divergences, Int. T. Dev. Biol. 48: 993-1001, 2004); Cerveny et al., Continued Growth and Circuit Building in the Anamniote Visual System, Develop. Neurobiol. 72: 328-345, 2012)에 의해 설명되었다.
톱니분계에 인접한 망막 분야의 경계에서 구역 또한, 배율에 대한 연구의 맥락에서 포유동물 및 조류 종에서 폭넓게 연구되었다. 인간에서 톱니둘레 및 유인원, 고양이, 비둘기, 소와 돼지에서 톱니분계의 해부학적 계측은 톱니둘레 및 톱니분계 각각의 배율 상수의 계산을 위한 기초로서 간주되었다. 인간 및 유인원의 눈에서 망막 분야의 최외곽 영역에서 배율은 후극부에서보다 훨씬 작은 것으로 밝혀졌다; 고양이, 토끼, 쥐 및 생쥐에서는 감소가 더욱 적다; 비둘기, 올빼미 및 찌르레기에서는 상기 배율이 최외곽 영역에서 및 후극부에서 매우 유사하다 (Holden et al., Retinal Magnification Factor at the Ora Terminalis: A Structural Study of Human and Animal Eyes, Vision Res. 27: 1229-1235, 1987).
망막 줄기 세포는 성체 포유동물의 망막 내에 존재하는 것으로 알려져 있다; 구체적으로, 망막 줄기 세포는 망막 색소 상피의 섬모체 가장자리 (US 6,117,675 및 Coles et al., PNAS 101(44):15772-15777, 2004를 참조한다)에서 및 신경 망막 층 (WO 01/58460을 참조한다)에서 발견되었다.
하지만, 성체 포유동물의 톱니분계 및 톱니둘레로부터 줄기 세포의 단리는 결코 설명된 바가 없다.
발명의 요약
망막 줄기 세포로 현재 치료는 망막 세포가 손상될 때 상실된 시력을 회복하는데 부적당하고, 그리고 이런 이유로, 망막 줄기 세포의 임상적 적용의 잠재력이 여전히 매우 높다.
해부학적으로, 기능적 망막에서 더욱 심부에서 단리되는 세포는 줄기 세포의 공급원이 될 가능성이 더욱 낮다.
놀랍게도, 본 출원인은 성체 포유동물의 망막의 톱니분계 및 톱니둘레 영역으로부터 망막 줄기 세포를 단리하였다. 본 출원인에 의해 단리된 줄기 세포는 성체 포유동물에서 전체 수명 동안 다분화성 세포를 생산할 수 있고, 그리고 기능적 망막으로의 예비 통로이다.
본 발명에 따른 톱니분계 (OTRSC) 및 톱니둘레 (OSRSC)의 망막 줄기 세포는 체간의 둘레 주변에 세포의 환상 고리의 층화에 의해 성장하는 나무에서 일어나는 것과 유사한 방식으로, 신경 망막 줄기 세포에서 성장하고 발아할 수 있다. 상기 OTRSC 및 OSRSC는 건강한 성인 및 망막 질환을 앓는 인간 둘 모두에서 망막 세포의 대체 및 재성장을 견뎌낼 수 있다.
앞서 인용된 US 6,117,675 및 Coles et al., (2004)은 포유동물의 망막의 섬모체 가장자리의 영역, 다시 말하면, 톱니분계 및 톱니둘레로부터 아주 멀리 떨어진 영역으로부터 단리된 망막 줄기 세포를 설명한다; 게다가, 여기에서 설명된 망막 세포는 선조체 세포이고, 그리고 이런 이유로, 단분화성이고 단일 유형의 분화된 신경 망막 세포를 발생시키는 자손만을 생산할 수 있다.
앞서 인용된 WO 01/58460은 포유동물의 신경 망막 조직의 해부학적으로 구별되지 않는 영역으로부터 단리된 망막 줄기 세포를 설명한다; 망막의 톱니분계 또는 톱니둘레 영역의 단리는 이러한 특허 출원에서 언급되지 않는다.
이에 반하여, 본 발명에서 설명된 망막 줄기 세포는 해부학적으로 상이한 영역, 다시 말하면, 성체 포유동물의 망막의 톱니분계 및 톱니둘레 영역으로부터 각각 단리되었고, 그리고 다분화성이다.
본 발명의 첫 번째 목적은 이런 이유로, 단리된 망막 줄기 세포인데, 여기서 상기 망막 줄기 세포는 출생후 포유동물의 망막의 톱니분계 및/또는 톱니둘레 영역으로부터 단리된다.
본 발명의 두 번째 목적은 출생후 포유동물로부터 망막 줄기 세포를 단리하기 위한 방법인데, 여기서 상기 방법은 다음의 단계를 포함한다:
(a) 개체의 눈으로부터 톱니분계 및/또는 톱니둘레 중에서 전부 또는 일부를 분리하는 단계,
(b) 상기 분리된 톱니분계 및/또는 톱니둘레를 망막 줄기 세포를 포함하는 세포의 구체 및/또는 소집단 (클러스터)의 형성을 야기하는 배지에서 배양하는 단계,
(c) 결과의 세포 구체 및/또는 클러스터를 효소 트립신 및 히알루론산분해효소를 포함하는 배지에서 배열하는 단계,
(d) 이들 효소를 하나 또는 그 이상의 저해제로 차단하는 단계, 그리고
(e) 결과의 세포 구체 및/또는 클러스터로부터 결과의 망막 줄기 세포를 단리하는 단계.
본 발명의 세 번째 목적은 앞서 설명된 방법으로 획득된 단리된 망막 줄기 세포이다.
본 발명의 네 번째 목적은 다음을 포함하는 제약학적 조성물이다:
- 상기 규정된 바와 같은 또는 앞서 설명된 방법으로 획득된 단리된 망막 줄기 세포 및/또는 이의 자손, 그리고
- 최소한 하나의 제약학적으로 허용되는 운반제 및/또는 부형제.
본 발명의 다섯 번째 목적은 약제로서 이용을 위한, 상기 규정된 바와 같은 단리된 망막 줄기 세포 또는 앞서 설명된 방법으로 획득된 단리된 망막 줄기 세포 및/또는 이의 자손이다.
본 발명의 여섯 번째 목적은 안과 병리학적 상태 또는 질환의 치료에서 이용을 위한, 상기 규정된 바와 같은 단리된 망막 줄기 세포 또는 앞서 설명된 방법으로 획득된 단리된 망막 줄기 세포 및/또는 이의 자손이다.
본 발명의 일곱 번째 목적은 안과 병리학적 상태 또는 질환의 치료를 위한 약제를 생산하기 위한, 상기 규정된 바와 같은 단리된 망막 줄기 세포 또는 앞서 설명된 방법으로 획득된 단리된 망막 줄기 세포 및/또는 이의 자손의 용도이다.
본 발명의 여덟 번째 목적은 개체에서 안과 병리학적 상태 또는 질환의 치료를 위한 방법인데, 상기 방법은 상기 규정된 바와 같은 단리된 망막 줄기 세포 또는 앞서 설명된 방법에 의하여 획득된 단리된 망막 줄기 세포 및/또는 이들의 자손의 효과적인 양을 상기 치료를 필요로 하는 상기 개체에 투여하는 단계를 포함한다.
정의
톱니분계로부터 단리된 망막 줄기 세포는 본원에서 "톱니분계 망막 줄기 세포" 또는 "OTRSC"로서 지칭된다.
상기 OTRSC는 출생후 수명의 첫 번째 시기로부터 시작하고, 일생 내내 계속되고, 그리고 때때로, 8십 년의 수명을 뛰어넘는 기간 동안 포유동물의 눈으로부터 단리된다.
톱니둘레로부터 단리된 망막 줄기 세포는 본원에서 "톱니둘레 망막 줄기 세포" 또는 "OSRSC"로서 지칭된다. 상기 OSRSC는 출생후 수명의 첫 번째 시기로부터 시작하고, 일생 내내 계속되고, 그리고 때때로, 8십 년의 수명을 뛰어넘는 기간 동안 포유동물의 눈으로부터 단리된다.
본원에서 이용된 바와 같이, 용어 "단리한다"는 선천적 조직으로부터 또는 주변 환경으로부터 이들 세포의 물리적 분리 또는 선별을 지칭한다. 유사하게, 용어 "단리하는"은 일반적으로, 예로서 세포의 특징, 또는 하나 또는 그 이상의 세포 또는 생물학적 마커의 발현에 따라, 일군의 세포 (가령, 신경구)로부터 하나 또는 그 이상의 세포의 물리적 분리 또는 선별을 지칭한다.
본원에서 이용된 바와 같이, 용어 "포유동물"은 포유동물 부류의 임의의 구성원을 지칭한다: 인간, 비인간 영장류, 예를 들면, 침팬지 및 다른 유인원 종; 경작용 동물, 예를 들면, 소, 말, 양, 염소, 돼지; 애완동물, 예를 들면, 토끼, 개 및 고양이; 설치류, 예를 들면, 쥐, 생쥐 및 기니 피그를 비롯한 실험 동물, 기타 등등.
본원에서 이용된 바와 같이, 용어 "미분화된"은 아직 분화되지 않았거나 또는 만약 그렇지 않으면, 한 유형의 특수한 세포로 발달하지 않은 세포를 지칭한다; 줄기 세포는 미분화된다. 미분화된 줄기 세포는 하나 또는 그 이상 유형의 특수한 세포 (가령, 신경 망막의 세포)로 분화하는 능력을 유지한다.
본원에서 이용된 바와 같이, 용어 "다분화성" 또는 "다형잠재성"은 분화된 세포가 위치되는 조직의 이들 분화된 세포의 주요 유형 중에서 각 한 가지를 발생시키는 자손을 생산할 수 있는 세포를 지칭한다. 성체 줄기 세포는 다분화성이고, 그리고 단지 기능적 유도체만을 생산할 수 있다. 가령, 성체 망막 줄기 세포는 다분화성이고, 그리고 따라서, 하나 또는 그 이상의 특수한 신경 망막 세포 (가령, 예로서 무축삭 세포, 수평/양극 세포, 광수용기 간상체, 간상체의 외부 디스크의 단백질, Muller 별아교세포/아교세포, RPE, 색소침착된 세포, 미분화된 및 Mueller 신경 아교세포, RPC 및 무축삭 세포, RPC 및 양극 간상 세포)로 분화할 수 있다.
본원에서 이용된 바와 같이, 용어 "단분화성"은 단지 한 가지 유형의 세포만 생산할 수 있고, 그리고 또한, 전구체 세포로 명명되는 세포를 지칭한다.
본원에서 이용된 바와 같이, 용어 "자손"은 다분화성 줄기 세포에서 유래하는 특수한 세포를 지칭한다.
본 발명의 첫 번째 목적에 따른 단리된 망막 줄기 세포의 치료적으로 효과적인 양은 개체가 상기 화합물로 치료로부터 이익을 얻을 수 있는 질환 또는 원치 않는 상태를 앓는다는 것을 결정한 후에, 상기 개체에게 투여될 수 있다. 의학적 또는 임상적 인원은 개체에서 질환 또는 병리학적 상태의 진단의 일부로서 이러한 결정을 내릴 수 있다. 상기 화합물은 또한, 이들 상태의 예방에 이용될 수 있는데, 이것은 개체가 이들 상태 중에서 하나 또는 그 이상을 앓을 가능성을 감소시키는 것으로 고려될 수 있다.
본원에서 이용된 바와 같이, "치료적으로 효과적인 양"은 의도된 목적을 달성하는데 충분한 양을 지칭한다. 효과적인 양의 결정은 원하는 효과의 달성의 기초에서 당해 분야에서 전문가의 지식 범위 안에 있다. 효과적인 양은 개체의 크기 및/또는 개체에게 영향을 주는 질환 또는 원치 않는 상태가 진행된 정도를 포함하지만 이들에 한정되지 않는 인자에 의존한다. 효과적인 양은 또한, 상기 화합물이 단일 용량으로 또는 시간의 추이에서 주기적으로 개체에게 투여된다는 사실에 의존한다. 본 발명의 첫 번째 목적에 따른 단리된 망막 줄기 세포는 개체의 치료용으로 설계된다. 본원에서 이용된 바와 같이, 용어 "개체"는 포유동물 및 비포유동물을 포함한다.
포유동물의 실례는 포유동물의 부류의 임의의 구성원을 포함하지만 이들에 한정되지 않는다: 인간, 비인간 영장류, 예를 들면, 침팬지 및 다른 유인원 종; 경작용 동물, 예를 들면, 소, 말, 양, 염소, 돼지; 애완동물, 예를 들면, 토끼, 개 및 고양이; 설치류, 예를 들면, 쥐, 생쥐 및 기니 피그를 포함하는 실험 동물, 기타 등등. 비포유동물의 실례는 조류, 어류 등을 포함하지만 이들에 한정되지 않는다. 본원에서 이해되는 바와 같이, 상기 개체의 수명의 기간은 출생후 수명의 첫 번째 시기로부터 8십여 년의 수명일 수 있다.
본 문서에서 이용된 바와 같이, 용어 "치료" 또는 "치료하는" 또는 "치료된"은 치료적 유익성을 획득하기 위한 병리학적 장애의 치유 또는 해결을 포함하는데, 여기서 치료적 유익성은 치료되는 근원적인 장애의 근절 또는 향상을 지칭하는 것으로 이해된다. 게다가, 치료적 유익성은 환자가 여전히 근원적인 장애에 종속될 수 있다는 사실에도 불구하고 환자의 향상이 관찰되도록, 근원적인 장애와 연관된 생리학적 증상 중에서 하나 또는 그 이상의 근절 또는 향상으로 도달된다.
본 문서에서 이용된 바와 같이, "안과 병리학적 상태 또는 질환"은 안과 병인을 갖는 질환 또는 병리학적 상태, 그리고 심혈관 또는 대사성 질환 (가령, 고혈압, 이상지질혈증 또는 진성 당뇨병)에 이차적인 안과 성분을 갖는 질환 또는 병리학적 상태를 포함한다.
본원의 상세한 설명 및 청구항에서 이용된 바와 같이, 관사 "a" 및 "an"은 달리 명시되지 않으면, 복수 지시대상을 포함하는 것으로 이해되어야 하다. 군의 하나 또는 그 이상의 구성원 사이에 "또는"을 포함하는 청구항 또는 상세한 설명은 달리 지시되지 않으면, 또는 만약 그렇지 않으면, 문맥으로부터 명백하면, 군의 하나, 하나 이상 또는 모든 구성원이 소정의 산물 또는 과정에서 존재하거나, 이용되거나 또는 달리 유관한 것으로 고려된다. 본 발명은 군의 정확하게 하나의 구성원이 소정의 산물 또는 방법에서 존재하거나, 이용되거나 또는 달리 유관한 구체예를 포함한다. 본 발명은 또한, 군의 하나 이상 또는 모든 구성원이 소정의 산물 또는 방법에서 존재하거나, 이용되거나, 또는 달리 유관한 구체예를 포함한다. 게다가, 본 발명은 모든 변이, 조합 및 순열을 포함하는 것으로 이해될 것인데, 여기서 열거된 청구항 중에서 하나 또는 그 이상에서 하나 또는 그 이상의 제한, 요소, 조항, 서술적 용어 등은 달리 지시되지 않으면, 또는 상충 또는 불일치가 이것에서 유래할지도 모른다는 것이 당업자에게 명백하지 않으면, 동일한 청구항의 다른 종속항 (또는, 유관하면, 임의의 다른 청구항)에서 도입된다. 요소가 목록 (마쿠쉬 군 또는 유사한 형식에서)으로서 표현될 때, 요소의 이러한 하위군 역시 설명되고, 그리고 임의의 요소 또는 요소들이 상기 군으로부터 제거될 수 있는 것으로 이해될 것이다. 또한, 일반적으로, 본 발명 또는 본 발명의 양상이 특정 요소, 특징 등을 포함하는 것으로 설명될 때, 본 발명의 일정한 구체예 또는 이들의 양상은 상기 요소, 특징 등으로 구성되거나, 또는 이들로 본질적으로 구성되는 것으로 이해될 것이다. 단순함의 이유로, 이들 구체예는 모든 사례에서 구체적으로 지시되지는 않았다. 또한, 본 발명의 임의의 구체예 또는 양상은 특정한 배제가 상세한 설명에서 지시된다는 사실에 상관없이, 청구항으로부터 명시적으로 배제될 수 있는 것으로 이해될지도 모른다.
도면에 관한 설명
도면 1은 눈의 시상 다이어그램의 상세도인데, 이것은 톱니둘레, 톱니분계 및 망막 섬모체 가장자리의 개별 위치를 명확하게 도해한다.
발명의 상세한 설명
본 발명은 눈의 조직, 그리고 특히, 출생후 포유동물의 망막의 톱니분계 및 톱니둘레의 영역의 색소침착된 및 비-색소침착된 상피 층이 망막 줄기 세포를 내포한다는 사실의 증거를 제공한다.
본원에서 설명된 톱니분계의 망막 줄기 세포 (OTRSC) 및 톱니둘레의 망막 줄기 세포 (OSRSC)는 다분화성이고, 망막의 해부학적으로 상이한 영역으로부터 단리되고, 그리고 이런 이유로, US 6,117,675에서 및 Coles et al. (2004)에 의해 설명된 섬모체 가장자리 (평면부 및 주름부, 포도막의 일부)의 구역으로부터 단리된 망막 줄기 세포 구역과 구별될 수 있는데, 이들은 선조체 세포이고, 그리고 이런 이유로, 단분화성이다.
앞서 인용된 WO 01/58460은 포유동물의 신경 망막 조직의 해부학적으로 구별되지 않는 영역으로부터 단리된 망막 줄기 세포를 설명한다; 망막의 톱니분계 또는 톱니둘레 영역으로부터 단리는 이러한 특허 출원에서 언급된 바가 없다.
본 발명의 첫 번째 목적은 단리된 망막 줄기 세포인데, 여기서 상기 망막 줄기 세포는 출생후 포유동물의 망막의 톱니분계 영역으로부터 및/또는 톱니둘레 영역으로부터 단리된다.
본 발명의 첫 번째 목적에 따른 한 구체예에서, 상기 망막 줄기 세포는 상기 톱니분계 및/또는 톱니둘레 영역을 포함하는 망막의 영역으로부터 단리된다: 바람직하게는, 상기 망막 줄기 세포는 상기 톱니분계 및/또는 톱니둘레 영역에 의해 구성되는 망막의 영역으로부터 단리된다; 더욱 바람직하게는, 상기 망막 줄기 세포는 상기 톱니분계 및/또는 톱니둘레 영역에 의해 본질적으로 구성되는 망막의 영역으로부터 단리된다; 가장 바람직하게는, 상기 망막 줄기 세포는 상기 톱니분계 및/또는 톱니둘레 영역에 의해 배타적으로 구성되는 망막의 영역으로부터 단리되고 망막의 다른 구역으로부터 단리되지 않는다.
본원에서 이용된 바와 같이, 표현 "본질적으로"는 망막 줄기 세포가 단리되는 망막의 영역의 75% 이상, 바람직하게는 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상이 톱니분계 및/또는 톱니둘레에 의해 구성된다는 것을 지시한다.
본원에서 이용된 바와 같이, 표현 "배타적으로"은 망막 줄기 세포가 단리되는 망막의 영역의 96% 이상, 바람직하게는 99% 이상이 톱니분계 및/또는 톱니둘레에 의해 구성된다는 것을 지시한다.
본 발명의 첫 번째 양상에 따른 한 구체예에서, 상기 OTRSC 및/또는 OSRSC는 색소침착된 또는 비-색소침착된 상피 층으로부터 단리된다; 바람직하게는, OTRSC 및/또는 OSRSC는 색소상피층으로부터 단리된다.
본 발명의 첫 번째 목적에 따른 다른 구체예에서, 상기 단리된 OTRSC 및/또는 상기 OSRSC는 신경 줄기 세포이다.
본 발명의 첫 번째 목적에 따른 한 구체예에서, 상기 OTRSC 및/또는 OSRSC는 개체의 수명의 임의의 기간 동안, 또는 일정한 경우에 사망한 개체로부터 단리된다 (가령, 상기 OTRSC 및/또는 OSRSC는 개체의 사망 후 대략 1, 2, 3, 4, 6, 8, 12, 24, 36, 48 또는 72 시간 이내에 단리된다). 바람직하게는, 상기 개체는 인간 개체이다.
바람직하게는, 상기 OTRSC 및/또는 OSRSC는 출생후 수명의 초기 단계로부터 시작하고, 일생 내내 계속되고, 일부 경우에 8십 년의 수명을 뛰어넘는 기간 동안 인간 개체로부터 단리된다.
본 발명의 첫 번째 목적에 따른 한 구체예에서, 상기 OTRSC 및/또는 OSRSC는 미분화되고 다분화성이다; 바람직하게는, 상기 OTRSC 및/또는 OSRSC는 다분화성이고, 그리고 모든 상이한 유형의 신경 망막 세포로 분화할 수 있다.
본 발명의 첫 번째 목적에 따른 다른 구체예에서, 상기 OTRSC 및/또는 OSRSC는 선조체 세포가 아니다. 본 발명의 첫 번째 목적에 따른 다른 구체예에서, 상기 OTRSC 및/또는 OSRSC는 단분화성이 아니다.
본 발명의 두 번째 요부는 출생후 포유동물로부터 망막 줄기 세포를 단리하기 위한 방법인데, 여기서 상기 방법은 다음의 단계를 포함한다:
(a) 개체의 눈으로부터 톱니분계 및/또는 톱니둘레 중에서 전부 또는 일부를 분리하는 단계,
(b) 분리된 상기 톱니분계 및/또는 톱니둘레를 망막 줄기 세포를 포함하는 세포의 구체 및/또는 군 (클러스터)의 형성을 야기하는 배지에서 배양하는 단계,
(c) 결과의 세포 구체 및/또는 결과의 세포 클러스터를 효소 트립신 및 히알루론산분해효소를 포함하는 배지에서 배열하는 단계,
(d) 이들 효소를 하나 또는 그 이상의 저해제로 차단하는 단계, 그리고
(e) 결과의 망막 줄기 세포를 결과의 세포 구체로부터 및/또는 결과의 세포 클러스터로부터 단리하는 단계.
본 발명의 두 번째 목적에 따른 한 구체예에서, 개체는 인간 포유동물, 예를 들면, 공여자 또는 사체이다.
본 발명의 두 번째 목적에 따른 다른 구체예에서, 배지는 하나 또는 그 이상의 외인성 성장 인자를 포함한다; 다른 구체예에서 상기 배지는 외인성 성장 인자를 포함하지 않는다.
본 발명의 두 번째 목적에 따른 한 구체예에서, OTRSC 및/또는 OSRSC는 일과적인 수단, 예를 들면, 피펫팅을 이용함으로써, 거의 1:500 또는 최소한 1:500의 빈도로 상응하는 결과의 세포 구체로부터 및/또는 결과의 세포 클러스터로부터 단리된다.
본 발명의 세 번째 목적은 앞서 설명된 방법으로 획득된 단리된 망막 줄기 세포이다.
본 발명의 네 번째 목적은 다음을 포함하는 제약학적 조성물이다:
- 상기 규정된 바와 같은 또는 앞서 설명된 방법으로 획득된 단리된 망막 줄기 세포 및/또는 이의 자손, 그리고
- 최소한 하나의 제약학적으로 허용되는 운반제 및/또는 부형제.
주목해야 할 것은 본 발명의 네 번째 목적에 따른 제약학적 조성물이 눈, 척수강내, 국소, 경피, 협측, 설하, 경구 또는 비경구 투여 중에서 하나 또는 그 이상을 포함하는 임의의 적합한 투여 경로를 통해 개체에게 투여될 수 있다는 점이다.
본 발명의 네 번째 목적에 따른 한 구체예에서, 상기 제약학적 조성물은 흡입에 의해 투여될 수 있다; 다른 구체예에서 상기 제약학적 조성물은 유리체내 주사에 의하여 투여된다.
본 발명의 네 번째 목적에 따른 한 구체예에서, 제약학적 조성물은 바람직하게는 안과 투여에 적합한, 더욱 바람직하게는 유리체내 투여에 적합한 용액 또는 현탁액이다; 유리체에서 투여의 경우에, 이러한 조성물은 균형화된 식염수 또는 Dulbecco 인산염으로 완충된 식염수를 포함할 수 있다.
바람직하게는, 본 발명의 네 번째 목적에 따라, 제약학적 조성물은 0.5 μl마다 최소한 대략 10,000 세포의 농도로, 균형화된 식염수에서 현탁된 본 발명의 단리된 세포 및/또는 이들의 자손을 포함하는 수성 조성물이다.
바람직하게는, 본 발명의 네 번째 목적에 따라, 제약학적 조성물은 유리체에서 주사용으로 설계된다.
본 발명에 따른 제약학적 조성물을 제조하기 위한 방법 및 제약학적으로 허용되는 운반제 및/또는 부형제의 선택은 예로서, L. William, Remington: The Science and Practice of Pharmacy. Twentieth Edition, Mack Publishing Company. Easton, PA, (2000)에서 상세하게 설명된다.
본 발명의 다섯 번째 목적은 약제로서 이용을 위한, 상기 규정된 바와 같은 단리된 망막 줄기 세포 또는 앞서 설명된 방법으로 획득된 단리된 망막 줄기 세포 및/또는 이의 자손이다.
본 발명의 여섯 번째 목적은 안과 병리학적 상태 또는 질환의 치료에서 이용을 위한 상기 규정된 바와 같은 단리된 망막 줄기 세포 또는 앞서 설명된 방법으로 획득된 단리된 망막 줄기 세포 및/또는 이의 자손이다.
본 발명의 일곱 번째 목적은 안과 병리학적 상태 또는 질환을 치료하기 위한 약제의 생산을 위한, 상기 규정된 바와 같은 단리된 망막 줄기 세포 또는 앞서 설명된 방법으로 획득된 단리된 망막 줄기 세포 및/또는 이의 자손의 용도에 있다.
본 발명의 여덟 번째 목적은 개체에서 안과 병리학적 상태 또는 질환을 치료하기 위한 방법이고, 상기 방법은 상기 규정된 바와 같은 단리된 망막 줄기 세포 또는 앞서 설명된 방법에 의하여 획득된 단리된 망막 줄기 세포 및/또는 이들의 자손의 효과적인 양을 상기 치료를 필요로 하는 상기 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.
본 발명의 여섯 번째, 일곱 번째 및 여덟 번째 목적에 따른 한 구체예에서, 치료되는 안과 병리학적 상태 또는 질환은 망막 색소변성, 황반병증, 당뇨병성 망막병증, 고혈압성 망막병증 및 망막 이영양증 중에서 하나 또는 그 이상을 포함하지만 이들에 한정되지 않는다.
본 발명의 여덟 번째 목적에 따른 한 구체예에서, 개체는 포유동물, 바람직하게는 인간, 더욱 바람직하게는 인간 청소년이다.
본 발명의 여덟 번째 목적에 따른 한 구체예에서, 치료 방법은 본 발명에 따른 단리된 세포, 또는 앞서 설명된 방법에 의하여 획득된 단리된 망막 줄기 세포 및/또는 이의 자손을 유리체에서 주사에 의해 투여하는 단계를 포함한다.
본 발명의 여덟 번째 목적에 따른 한 구체예에서, 치료 방법은 본 발명에 따른 단리된 세포, 또는 앞서 설명된 방법에 의하여 획득된 단리된 망막 줄기 세포 및/또는 이의 자손의 개체에서 자가 이식을 포함한다; 이러한 구체예에서, 상기 단리된 세포 (OTRSC 및/또는 OSRSC)는 개체로부터 단리되고, 배양되고, 그리고 이후, 이물질에 대한 부작용의 위험을 최소화하거나 또는 제거하기 위해, 동일한 개체에 이식되거나 또는 복귀된다.
대안으로서, 본 발명의 여덟 번째 목적에 따른 다른 구체예에서, 상기 OTRSC 및/또는 OSRSC는 공여자 (가령, 예로서 포유동물 사체)로부터 단리되고, 그리고 차후에, 안과 병리학적 상태 또는 질환을 치료하기 위해 개체에 이식되거나 또는 투여된다 (가령, 유리체에서 주사에 의해).
실험적 섹션
실시예 1
인간 눈의 톱니분계로부터 망막 줄기 세포의 단리가 본 실험에서 수행되었다.
톱니분계는 클론 구체를 형성하기 위한 검정을 이용하여 분리되고 배양되었는데, 여기서 줄기 세포는 클론 유래된 구체를 형성한다.
주목해야 할 것은 줄기 세포가 해부학적으로 공각막 가장자리 아래에 및 실질적으로 톱니분계 내에 있는 조직으로부터 배타적으로 단리된다는 점이다. 이들 세포는 거의 1:500의 빈도로 단리되었다.
조직의 생검은 이후, 효소 트립신 및 히알루론산분해효소를 내포하는 튜브 내에 배치되고, 그리고 37℃에서 15 분 동안 수조에서 배양되었다. 이들 효소는 이후, 저해제에 의하여 차단되었고, 그리고 단일 망막 줄기 세포는 차후에, 정교한 피펫팅에 의한 기계적 단리로 단리되었다. 이들 세포는 이후, 혈구계수 챔버에서 계수되고, 원심분리에 의해 펠레타이징되고, 그리고 0.5 μl마다 대략 10,000 세포의 농도에 도달하기 위해 Dulbecco 인산염 (DPBS)으로 완충된 적절한 용적의 식염수에서 재현탁되었다.
앞서 설명된 동일한 절차에 따라, 인간 눈의 톱니둘레로부터 망막 줄기 세포의 단리가 수행되었다.
실시예 2
본 실험에서, 단리된 톱니분계 망막 줄기 세포 (OTRSC)의 시험관내 증식, 장기간 자기재생 및 잠재적 분화가 평가되었다; 구체-형성 검정 및 단일-층 검정 둘 모두 이용되었다.
톱니분계로부터 획득된 단일 일차 세포는 단리된 OTRSC가 클론 유래된 구체를 형성하기 위해 증식할 수 있는 지를 시험할 수 있기 위해, 웰마다 1개 세포의 밀도에서 96 웰을 갖는 평판에서 도말되었다. OTRSC는 색소침착된 및 비-색소침착된 세포 둘 모두를 내포하는 클론 구체를 발생시켰다. 단일 구체 계대 검정을 이용하여, 일차 구체가 분리되고 이식되었고, 그리고 개별 구체는 자기재생 능력을 전시하였고, 각 단일 구체는 각 차후 계대에서 하나 또는 그 이상의 새로운 구체를 발생시켰다. 인간 눈의 톱니분계 영역은 토끼 눈 톱니분계로부터 단리된 망막 줄기 세포의 것과 유사한 시험관내 성장 인자에 순응도를 보여주는 망막 줄기 세포를 내포한다.
클론 구체는 분화의 조건에서 도말되었고, 그리고 이들의 자손의 분화 잠재력이 평가되었다. 이들 구체는 모든 상이한 망막 유형 (가령, 예로서 광수용기 세포)을 생산하고, 따라서 단리된 OTRSC의 다형잠재성을 증명하였는데, 이들은 신경 망막의 배역으로부터 유래함으로써, 광수용기로 전환하도록 자연적으로 설계된다.
앞서 설명된 동일한 절차를 추종함으로써, 톱니둘레의 단리된 망막 줄기 세포 (OSRSC)의 시험관내 증식, 장기간 자기재생 및 분화에 대한 잠재력이 연구되었다.
실시예 3
본 실험에서, 단리된 OTRSC 및 이들의 자손의 생체내 잠재력이 평가되었다.
OTRSC를 내포하는 구형 분리된 인간 망막 세포는 성체 토끼의 눈 내로 이식되었다. OTRSC 및 이들의 자손을 숙주 토끼의 눈 내로 이식하기 위해 이들을 가시화하기 위해, 증강된 녹색 형광 단백질 (EGFP)을 내포하는 렌티바이러스 구조체가 준비되었다. OTRSC는 녹색 형광 구체의 발달을 야기하는 렌티바이러스 입자로 감염되었다.
녹색 형광 구체는 이후, 개별 세포로 분리되고, 그리고 1 μl마다 20,000 세포의 농도로, 균형화된 Hank 식염수에서 재현탁되었다. 차후에, 유리체내 주사에 의하여, 0.5 μl마다 대략 10,000 세포가 프로파라카인 점적제로 미리 국소 마취된 성체 토끼의 눈의 유리질 공동 내로 이식되었다. 이들 OTRSC는 숙주 토끼의 OTRSC가 오염되지 않도록 담보하기 위해, 장벽으로 변형된 협측 투여용 피펫을 이용함으로써 주사되었다. 숙주 토끼의 안검이 이후, 함께 재배치되었고, 그리고 깨어난 동물은 그들의 케이지로 복귀되었다. 이식조직 후 30 일에, 이들 토끼는 희생되었고, 그리고 이들의 눈이 적출되고 4% PFA (포스포노포르믹산)에서 고정되었다; 눈은 Bright 저온조에서 14 μm로 절단되었다. 눈 섹션은 이후, EGFP 양성 세포, 다시 말하면, OTRSC 및 이들의 자손의 존재를 드러내기 위해 형광 현미경 하에 가시화되었다.
앞서 설명된 동일한 절차를 추종함으로써, 단리된 OSRSCs 및 이들의 자손의 생체내 잠재력이 평가되었다.
실시예 4
돼지 및 토끼 눈으로부터 단리된 OTRSC의 시험관내 분화 잠재력이 본 실험에서 평가되었다.
OTRSC는 실시예 1에서 설명된 바와 같이 단리되었고, 그리고 이후, 이들의 분화 잠재력이 실시예 2에서 설명된 바와 같이 평가되었다.
OTRSC 구체로부터 이주한 세포 중에서 백분율은 3 주 이후에도 미분화된 상태로 남아있지만, 분화된 세포 중에서 대부분은 광수용기 세포이었다.
상기-인용된 실험은 포유동물의 톱니분계 및 톱니둘레가 시험관내 증식, 장기간 자기재생 및 분화 잠재력에 의해 특징되는 진실한 망막 줄기 세포의 다산성 공급원이라는 것을 증명한다.
선행하는 실험은 게다가, OTRSC, OSRSC 및 개별 자손이 시험관내에서 생존하고, 이주하고, 신경 망막의 세포 내로 통합하고, 그리고 이들 세포, 특히 광수용기 (다시 말하면, 간상 세포 및 추상 세포)로 분화할 수 있다는 것을 증명하고, 따라서 안과 질환 또는 병리학적 상태의 치료를 위한 OTRSC 및/또는 OSRSC의 유용성을 뒷받침한다.
게다가, 실시예 2에서 설명된 실험은 구체 형성 검정에서 각 구체가 단일 세포에서 유래한다는 것을 증명하는데, 이것은 섬모체 가장자리에서 희귀한 색소침착된 세포가 미분화된 줄기 세포라는 것을 암시한다. 구체 내에 색소침착된 세포 중에서 대부분은 색소침착된 망막 상피의 선조체이다.
인간 신경 망막은 이것이 토끼 눈으로부터 단리된 망막 선조체 세포와 유사한 망막 선조체 세포를 내포한다는 것을 보여주었는데, 이것은 성체 포유동물 눈이 이전에 유래된 망막 줄기 세포를 내포할 수 있다는 개념에 대한 뒷받침을 담보한다.

Claims (10)

  1. 단리된 망막 줄기 세포에 있어서, 상기 망막 줄기 세포는 출생후 포유동물의 망막의 톱니분계 영역으로부터 및/또는 톱니둘레 영역으로부터 단리되는 것을 특징으로 하는 단리된 망막 줄기 세포.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 톱니분계 및/또는 톱니둘레 영역을 포함하는 망막의 영역으로부터 단리되고; 바람직하게는 상기 톱니분계 및/또는 톱니둘레 영역에 의해 구성되는 망막의 영역으로부터 단리되고; 더욱 바람직하게는 상기 톱니분계 및/또는 톱니둘레 영역에 의해 본질적으로 구성되는 망막의 영역으로부터 단리되고; 가장 바람직하게는 상기 톱니분계 및/또는 톱니둘레 영역에 의해 배타적으로 구성되는 망막의 영역으로부터 단리되고 망막의 다른 구역으로부터 단리되지 않는 것을 특징으로 하는 단리된 망막 줄기 세포.
  3. 청구항 1 또는 2 중에서 어느 한 항에 있어서, 미분화되고 다분화성이고; 바람직하게는, 다분화성이고, 그리고 모든 상이한 유형의 신경 망막 세포로 분화할 수 있는 것을 특징으로 하는 단리된 망막 줄기 세포.
  4. 출생후 포유동물로부터 망막 줄기 세포를 단리하기 위한 방법에 있어서, 상기 방법은 다음 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법:
    (a) 개체의 눈으로부터 톱니분계 및/또는 톱니둘레 중에서 전부 또는 일부를 분리하는 단계,
    (b) 상기 분리된 톱니분계 및/또는 톱니둘레를 망막 줄기 세포를 포함하는 세포의 구체 및/또는 소집단 (클러스터)의 형성을 야기하는 배지에서 배양하는 단계,
    (c) 결과의 세포 구체 및/또는 클러스터를 효소 트립신 및 히알루론산분해효소를 포함하는 배지에서 배열하는 단계,
    (d) 이들 효소를 하나 또는 그 이상의 저해제로 차단하는 단계, 그리고
    (e) 결과의 망막 줄기 세포를 결과의 세포 구체 및/또는 클러스터로부터 단리하는 단계.
  5. 청구항 4에서 규정된 바와 같은 방법으로 획득된 단리된 망막 줄기 세포.
  6. 다음을 포함하는 제약학적 조성물:
    - 청구항 1 내지 3 중에서 어느 한 항에서 규정된 바와 같은 또는 청구항 4에서 규정된 바와 같은 방법에 의해 획득된 단리된 망막 줄기 세포 및/또는 이의 자손, 그리고
    - 최소한 하나의 제약학적으로 허용되는 운반제 및/또는 부형제.
  7. 청구항 6에 있어서, 유리체에서 주사를 위한 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
  8. 약제로서 이용을 위한, 청구항 1 내지 3 중에서 어느 한 항에서 규정된 바와 같은 또는 청구항 4에서 규정된 바와 같은 방법으로 획득된 단리된 망막 줄기 세포 및/또는 이의 자손.
  9. 안과 병리학적 상태 또는 질환의 치료에서 이용을 위한, 청구항 1 내지 3 중에서 어느 한 항에서 규정된 바와 같은 또는 청구항 4에서 규정된 바와 같은 방법으로 획득된 단리된 망막 줄기 세포 및/또는 이의 자손.
  10. 청구항 9에 있어서, 치료되는 안과 병리학적 상태 또는 질환은 망막 색소변성, 황반병증, 당뇨병성 망막병증, 고혈압성 망막병증 및 망막 이영양증 중에서 하나 또는 그 이상을 포함하는 특징으로 하는 단리된 망막 줄기 세포.
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Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2216439A1 (en) * 1996-09-25 1998-03-25 Derek Van Der Kooy Pharmaceuticals containing retinal stem cells
JP2003521910A (ja) * 2000-02-11 2003-07-22 ザ スキーペンズ アイ リサーチ インスティテュート インコーポレイテッド 網膜幹細胞の分離及び移植
JP2009544313A (ja) * 2006-07-24 2009-12-17 インターナショナル ステム セル コーポレイション 網膜幹細胞由来の合成角膜
EP3640326A1 (en) * 2007-04-18 2020-04-22 Hadasit Medical Research Services & Development Limited Stem cell-derived retinal pigment epithelial cells
EP2251028A1 (en) * 2009-05-12 2010-11-17 Biocompatibles Uk Ltd. Treatment of eye diseases using encapsulated cells encoding and secreting an anti-angiogenic factor and/or a neuroprotective factor
US8563304B2 (en) * 2011-06-14 2013-10-22 The Schepens Eye Research Institute Low oxygen culture conditions for maintaining retinal progenitor cell multipotency
CN102618490B (zh) * 2012-03-20 2013-12-25 中国人民解放军第三军医大学第一附属医院 一种诱导视网膜干细胞分化为感光细胞的方法
CN103409363B (zh) * 2013-08-06 2015-01-21 中国人民解放军总医院 感光前体细胞与视网膜组织体外共培养方法

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