KR20180021736A

KR20180021736A - 세포의 항아폽토시스, 생존, 또는 증식을 유도하기 위한 조성물 및 방법

Info

Publication number: KR20180021736A
Application number: KR1020177037742A
Authority: KR
Inventors: 로버트 에이. 애슐리; 리 란딘
Original assignee: 바이탈 쎄러피스, 인코포레이티드
Priority date: 2015-06-15
Filing date: 2016-06-14
Publication date: 2018-03-05
Also published as: AU2016279985A1; HK1258469A1; US20180185446A1; CA2989322A1; CN108289916A; JP2018525335A; EP3307285A4; IL256257A; WO2016205227A1; EP3307285A1

Abstract

본 발명은 세포의 항아폽토시스, 항피롭토시스, 항네크롭토시스, 생존, 보호, 증식 및/또는 표현형 조정을 유도할 뿐만 아니라 개체에서 질환을 치료하기 위한 조성물 및 방법을 제공한다.

Description

세포의 항아폽토시스, 생존, 또는 증식을 유도하기 위한 조성물 및 방법

관련된 출원에 대한 교차 참조

본 출원은 35 U.S.C. §119(e) 하에, 2015년 6월 15일자 제출된 U.S. 특허가출원 일련 번호 62/175,947, 그리고 2015년 11월 6일자 제출된 U.S. 특허가출원 일련 번호 62/252,219에 우선권을 주장하고, 이들의 전체 내용은 본원에 전체적으로 참조로서 편입된다.

배경

발명의 분야

본 발명은 세포생물학, 그리고 더욱 구체적으로, 세포의 항아폽토시스, 항피롭토시스, 항네크롭토시스, 생존, 보호, 증식 및/또는 표현형 조정을 유도할 뿐만 아니라 개체에서 질환을 치료하기 위한 조성물 및 방법에 전반적으로 관계한다.

배경 정보

세균, 바이러스, 물리적 손상, 화학적 손상 (가령, 알코올, 약물 등), 암, 화학요법 및 방사선 요법을 포함하지만 이들에 한정되지 않는 다양한 작용제가 특정한 작용제 및 이것에 노출된 동물의 유전자 구성에 따라, 세포 및 조직에 직접적인 피해를 유발하거나 또는 연장된 및 과도한 염증의 환경을 창출할 수 있다. 정상적인 조건 하에, 염증은 동물이 손상으로부터 회복하는데 도움을 주는 과정이다. 급성 염증은 유해한 자극에 대한 조직의 초기 반응이다. 이것은 대식세포, 수지상 세포, 조직구, 쿠퍼 세포 및 비만 세포를 비롯한 세포가 손상된 조직 내에 손상과 연관된 감각 분자를 제공하고 활성화될 때 시작되는 복잡하고, 고도로 조절된 과정을 수반한다. 활성화 시에, 이들 세포는 염증성 매개인자, 예를 들면, 혈관확장제를 방출한다. 혈관확장제는 손상 부위의 인근에서 혈관의 증가된 혈류 및 투과성을 유도한다. 이것은 차례로, 혈장 및 백혈구 (호중구 및 대식세포 포함)의 혈액으로부터 손상된 조직 내로의 증가된 움직임을 유발한다. 염증성 매개인자는 일반적으로, 급속히 분해되기 때문에, 급성 염증이 지속되기 위해서는 끊임없는 자극을 필요로 한다. 결과적으로, 일단 유해한 자극이 제거되면 급성 염증이 종료된다.

만성 염증은 간 질환, 예를 들면, 간염, 간경변 및 지방간 질환, 심장병, 암, 호흡기 질환, 뇌졸중, 신경학적 질환, 예를 들면, 알츠하이머병, 당뇨병 및 신장병을 비롯한 많은 광범위한 심신쇠약성 질환에 대한 기여 인자인 것으로 생각된다. 만성 염증의 결과는 정상적인 조직의 파괴 및 콜라겐-풍부한 결합 조직으로 이의 대체이다. 흉터 조직으로서 또한 알려져 있는 콜라겐-풍부한 결합 조직은 정상적인 조직과 비교하여 축소된 조직 기능을 전시한다. 흉터 조직의 지속적이고 연장된 형성은 차례로, 섬유증을 야기한다. 섬유증은 폐, 피부, 간, 심장 및 골수에 영향을 주는 질환의 통상적인 증상 중에서 한 가지이고, 그리고 질환, 예를 들면, 특발성 폐섬유증, 경피증, 켈로이드, 간경화증, 심근 섬유증, 당뇨병성 신장 질환, 골수형성이상 증후군 및 기타 장애에서 결정적인 인자이다.

만성 염증 및 섬유증의 연구는 활성화 작용제 및 영향을 받은 조직에 상관없이, 신호전달 단백질의 공통 네트워크가 친염증성 상태를 확립하기 위해 함께 기능하는 경향이 있다는 것을 지시하였다. 신호전달 단백질의 이러한 네트워크는 다수의 상이한 사이토킨, 사이토킨 수용체, 전사 인자 등을 포함한다.

염증성 간 질환, 예를 들면, 간염을 비롯한 치료적 목적으로 다양한 혈액 성분을 제거하기 위한 혈액의 처리가 수행되었다. 혈액 처리 방법의 실례는 부적합한 신장 기능으로 고통받는 환자의 혈액으로부터 물질대사 폐기물을 제거하는 것을 허용하는 혈액투석을 포함한다. 환자로부터 혈류는 이들 폐기물을 제거하기 위해 여과되고, 그리고 이후, 환자로 돌려 보내진다. 혈장분리교환술의 방법 또한, 매우 다양한 질환 상태를 치료하기 위해, 접선 유동 막 분리를 이용하여 혈액을 처리한다. 원치 않는 혈장 성분을 제거하도록 막 구멍 크기가 선별될 수 있다. 혈액은 또한, 혈액 내에 존재하는 생물학적 성분을 변경하는 생화학적 반응을 활용하는 다양한 장치를 이용하여 처리될 수 있다. 가령, 혈액 성분, 예를 들면, 빌리루빈 또는 페놀은 막 표면에 결합되는 효소를 교차하여 혈장의 시험관내 순환에 의해 글루콘화되거나 또는 황산화될 수 있다.

현재 이용되는 기술은 일반적으로, 예로서 약화된 간 기능을 갖는 환자를 뒷받침하는 것에 대하여 불충분하다. 전통적인 시스템 및 방법은 이식을 위한 적합한 공여자 장기가 발견될 수 있을 때까지 또는 환자의 선천적 간이 건강한 상태로 재생할 수 있을 때까지, 이런 환자를 생존하게 하는 것과 연관된 다양한 문제점을 안고 있다.

간은 손상될 때 조직을 재생하고 조직 상실을 대체하는 방대한 능력을 소유한다. 간세포는 대다수의 간 기능을 제공하고, 그리고 일차적으로, 세포 표면 수용체 활성화, 예를 들면, MET (간세포 성장 인자 (HGF)에 대한 수용체 및 다양한 리간드와 상호작용하는 표피 성장 인자 수용체 (EGFR))를 통해 재생 자극에 반응한다. 상주성 간세포가 증식할 수 없으면, 간세포 기능은 담관에 근접하게 위치된 전환분화된 담즙 상피 세포에서 유래하는 것으로 생각되는 재생 세포 풀로부터 대체될 수 있다. 만성 알코올 소비, 바이러스 감염, 또는 전격성 독물로 인한 간염을 앓는 환자에서, 상주성 간세포는 축소된 복제 능력을 갖는다.

과도한 염증 및/또는 감소된 세포 증식 또는 생존을 수반하는 질환에 관한 증가하는 지식에도 불구하고, 이런 질환에 대한 치료는 거의 달성하기 어려운 상태로 남아있다. 따라서 이런 질환을 치료하기 위한 더욱 진전된 조성물 및 방법이 요구된다.

발명의 요약

한 양상에서, 본 발명은 세포의 항아폽토시스, 항피롭토시스, 항네크롭토시스, 생존, 보호, 증식 및/또는 표현형 조정을 유도하기 위한 조성물을 제공한다. 조성물은 표 I 또는 II에서 진술된 것들에서 선택되는 하나 또는 그 이상의 항아폽토시스성, 항피롭토시스성, 항네크롭토시스성, 생존, 보호, 증식성, 및/또는 표현형 조정 인자를 포함한다.

다른 양상에서, 본 발명은 세포의 항아폽토시스, 항피롭토시스, 항네크롭토시스, 보호, 생존, 및/또는 증식, 및/또는 표현형 조정을 유도하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 세포를 본 발명의 조성물과 접촉시키고, 따라서 상기 세포의 항아폽토시스, 항피롭토시스, 항네크롭토시스, 보호, 생존, 및/또는 증식, 및/또는 표현형 조정을 유도하는 것을 포함한다.

또 다른 양상에서, 본 발명은 개체에서 질환 또는 장애를 치료하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 본 발명의 조성물을 개체에 투여하고, 따라서 상기 질환 또는 장애를 치료하는 것을 포함한다.

또 다른 양상에서, 본 발명은 부모 C3A 세포주로부터 유래된 유자격 C3A 세포주를 제공하는데, 여기서 상기 세포주의 세포는 친염증성 분자, 예를 들면, 친염증성 사이토킨에 대한 응답으로 표 I 또는 II에서 진술된 것들에서 선택되는 하나 또는 그 이상의 인자를 발현한다.

도면의 간단한 설명
도면 1은 본 발명의 구체예에 관련된 데이터를 묘사하는 그래픽적 플롯이다.
도면 2는 본 발명의 구체예에 관련된 데이터를 묘사하는 그래픽적 플롯이다.
도면 3은 선행 기술 체외 여과 및 해독 시스템을 도해하는 단순화된 블록 선도이다.

발명의 상세한 설명

본 발명은 일정한 C3A 클론 세포주의 세포가 간 재생 및 간세포 증식에 관여하는 다양한 분비된 인자를 생산할 수 있다는 예상치 못한 발견에 근거된다. 이들 인자는 간세포의 직접적인 자극을 통해 직접적으로, 또는 개체의 순환계 내로 도입 시에 다른 상주성 세포 개체군과의 상호작용을 통해 간접적으로 간 재생을 조장한다. 이러한 지식은 세포의 항아폽토시스, 항피롭토시스, 항네크롭토시스, 보호, 생존, 및/또는 증식, 및/또는 표현형 조정을 유도할 뿐만 아니라 질환의 치료를 위한 조성물 및 방법을 제공하기 위한 기초를 형성한다.

본 발명의 조성물과 방법을 더욱 설명하기에 앞서, 본 발명은 설명된 특정 조성물, 방법과 실험 조건에 한정되지 않는 것으로 이해되는데, 그 이유는 이런 조성물, 방법과 조건이 변할 수 있기 때문이다. 또한, 본원에서 이용된 용어는 단지 특정 구체예를 설명하는 것을 목적으로 하고 제한하는 것으로 의도되지 않는 것으로 이해되는데, 그 이유는 본 발명의 범위가 첨부된 특허청구범위에 의해서만 한정될 것이기 때문이다.

본 발명에 따른 방법의 원리 및 운용은 도면 및 동행하는 설명을 참조하면 더욱 잘 이해될 수 있다.

본 명세서 및 첨부된 특허청구범위에서 이용된 바와 같이, 단수 형태 ("a", "an" 및 "the")는 문맥에서 달리 지시되지 않으면, 복수 지시대상을 포함한다. 따라서, 예로서, "방법"에 대한 언급은 본 개시 등등을 읽어본 후 당업자에게 명백해지는, 본원에서 설명된 유형의 하나 또는 그 이상의 방법 및/또는 단계를 포함한다.

달리 정의되지 않으면, 본원에서 이용된 모든 기술 용어와 과학 용어는 본 발명이 속하는 당해 분야의 평균적 기술자에 의해 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 비록 본원에서 설명된 것들과 유사하거나 동등한 임의의 방법과 재료가 발명의 실시 또는 시험에 이용될 수 있긴 하지만, 일부 바람직한 방법과 재료가 하기에 설명된다.

본원에서 설명된 발명은 하나 또는 그 이상의 항아폽토시스성, 친생존 및/또는 친재생 인자를 포함하는 친염증성 조성물에 관계한다. 상기 조성물은 질환, 장애 또는 만약 그렇지 않으면, 비정상적인 상태, 예를 들면, 염증성 질환 또는 장애를 치료하는데 이용하기 위한 제약학적 조성물을 생산하는데 이용될 수 있다.

본원에서 이용된 바와 같이, 용어 "개체"는 포유류 개체를 지칭한다. 따라서, 포유류 목에서 임의의 동물의 치료가 구상된다. 이런 동물은 말, 고양이, 개, 토끼, 생쥐, 염소, 양, 비인간 영장류 및 인간을 포함하지만 이들에 한정되지 않는다. 따라서, 본 발명의 방법은 수의학적 적용에서 이용뿐만 아니라 인간 이용에서 예기된다.

본원에서 개체의 "치료"는 치료적 처치 및 예방적 또는 방지적 조치 둘 모두를 지칭한다. 치료가 필요한 개체는 질환 또는 장애를 이미 앓고 있는 개체뿐만 아니라 이것이 예방되어야 하는 개체를 포함한다. 따라서, 개체는 질환 또는 장애를 앓는 것으로 진단되었을 수 있거나, 또는 질환 또는 장애의 성향이 있거나 또는 이것에 감수성일 수 있다.

표현 "효과량"은 질환 또는 장애를 예방하거나, 개선하거나 또는 치료하는데 효과적인, 항아폽토시스성, 친생존 및/또는 친재생의 양을 지칭한다. 이런 효과량은 일반적으로, 질환 또는 장애의 징후, 증상 또는 다른 지표에서 향상을 유발할 것이다. 가령, 간 질환에서 효과량은 불량한 간 기능을 지시하는 생화학적 마커의 감소를 유발한다.

질환 또는 장애의 "증상"은 개체에 의해 경험되고 질환 또는 장애를 지시하는 임의의 병적 현상, 또는 구조, 기능 또는 감각에서 정상으로부터 이탈이다.

본원에서 이용된 바와 같이, "염증성 질환, 장애 또는 만약 그렇지 않으면 비정상적인 상태"는 염증과 연관되거나 또는 염증 성분, 예를 들면, 하지만 제한 없이, 패혈증, 감염 (가령, 바이러스, 세균 또는 진균 감염), 보통 여드름, 천식, 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD), 자가면역 질환, 소아 지방변증, 만성 (플라크) 전립선염, 사구체신염, 과민성, 염증성 장 질환 (IBD, 크론병, 궤양성 대장염), 골반 염증 질환, 재관류 손상, 류마티스성 관절염, 사르코이드증, 이식 거부반응, 혈관염, 간질성 방광염, 죽상경화증, 알레르기 (유형 1, 2 및 3 과민성, 고초열), 염증성 근병증 및 전신 경화증을 갖는 장애를 포함하고, 그리고 피부근염, 다발근육염, 봉입체 근염, 체디아크 히가시 증후군, 만성 육아종병, 비타민 A 결핍, 암 (고형 종양, 담낭 암종), 치주염, 육아종 염증 (결핵, 나병, 사르코이드증 및 매독), 섬유소 염증, 화농 염증, 장액성 염증, 궤양 염증, 허혈성 심장 질환, I형 당뇨병 및 당뇨병성 신장병증을 포함할 수 있다.

일정한 구체예에서, 염증성 질환, 장애 또는 만약 그렇지 않으면 비정상적인 상태는 염증과 연관되거나 또는 예로서, 하나 또는 그 이상의 유형의 과민성에 상응하는 염증 성분을 갖는 많은 자가면역 질환 또는 장애를 포함한다. 하나 또는 그 이상의 유형의 과민성에 상응하는 예시적인 자가면역 질환 또는 장애는 다음을 포함한다: 아토피성 알레르기, 아토피성 피부염, 자가면역 용혈성 빈혈, 자가면역 간염, 자가면역 다내분비선 증후군, 자가면역 두드러기, 소아 지방변증, 저온 응집병, 접촉성 피부염, 크론병, 진성 당뇨병 유형 1, 원반모양 홍반성 루푸스, 태아 적혈모구증, 굿파스처 증후군, 그레이브스병, 길랭 바레 증후군 (GBS), 하시모토 뇌병증, 하시모토 갑상선염, 특발성 혈소판감소성 자반병, 자가면역 혈소판감소성 자반병, IgA 신장병증, 홍반성 루푸스, 메니에르 병, 다발성 경화증, 중증 근무력증, 기면증, 시신경척수염, 데빅병, 신경근긴장증, 눈 반흔성 유천포창, 안구간대경련 근간대경련 증후군, PANDAS (연쇄상구균과 연관된 소아 자가면역 신경정신병적 장애), 부종양성 소뇌 변성, 심상성 천포창, 악성 빈혈, 건선, 건선성 관절염, 류마티스성 관절염, 류마티스열, 사르코이드증, 경피증, 아급성 세균심내막염 (SBE), 전신성 홍반성 낭창, 홍반성 낭창, 측두 동맥염 ("거대 세포 동맥염"으로서 또한 알려져 있음), 혈소판감소증, 궤양성 대장염, 미분화된 결합 조직병, 두드러기 혈관염, 그리고 혈관염.

간에서 염증성 질환, 장애 또는 만약 그렇지 않으면 비정상적인 상태는 지방간 질환, 간경변, 간암, 그리고 바이러스 감염 (가령, A, B, C, D 및 E형 간염에 의한), 알코올 간염, 약물 또는 화학적 중독 (가령, 탄소-사염화물, 아메톱테린, 테트라사이클린, 아세트아미노펜, 페노프로펜 등), 단핵구증, 아메바 이질, 그리고 엡스타인 바르 바이러스 (EBV), 시토메갈로바이러스 (CMV) 또는 세균에 의한 다른 전신 감염에 의해 유발된 급성 또는 만성 간염을 포함할 수 있다.

신장에서 염증성 질환, 장애 또는 만약 그렇지 않으면 비정상적인 상태는 급성 또는 만성 신장염, 사이질 신장염, 루푸스 신장염, IgA 신장병증 (베르게르병), 사구체신염, 막증식성 사구체신염 (MPGN), 만성 신장병 (CKD) 및 염증에 관련된 자가면역 장애, 굿파스처 증후군, 베게너 육아종증, 신우신염, 운동 신장염, 신장 결석, 그리고 통풍과 연관될 수 있다.

염증성 장 질환 (IBD)은 결장 및 소장의 일군의 염증성 병태이다. IBD의 주요 유형은 크론병 및 궤양성 대장염이다. 전형적인 IBD로서 항상 분류되지는 않는 다른 형태의 IBD는 콜라겐성 대장염, 림프성 대장염, 허혈성 대장염, 전환 대장염, 베체트병, 그리고 불확정 대장염을 포함한다.

췌장에서 염증성 질환, 장애 또는 만약 그렇지 않으면 비정상적인 상태는 알코올, 담석, 약제 (가령, 코르티코스테로이드, 예를 들면, 프레드니솔론, HIV 약물, 예를 들면, 디다노신 및 펜타미딘, 이뇨제, 항경련성 발프로산, 화학요법 작용제 L-아스파라기나아제 및 아자티오프린, 증가된 혈액 트리글리세리드에 의한 에스트로겐, 콜레스테롤-저하 스타틴, 그리고 항고혈당 작용제, 예를 들면, 메트포르민, 빌다글립틴, 시타글립틴 및 당뇨병 약물 글립틴의 이용), 외상, 유행성 이하선염, 자가면역 질환, 전갈 쏘임, 높은 혈액 칼슘, 높은 혈액 트리글리세리드, 저체온증, 내시경 역행 췌담관조영술 (ERCP), 분리 췌장, 임신, 진성 당뇨병 유형 2, 췌장암, 췌장관 결석, 혈관염 (췌장 내에 작은 혈관의 염증), 콕사키 바이러스 감염, 그리고 포르피린증--특히 급성 간헐성 포르피린증 및 적혈구형성 프로토포르피린증, 바이러스 감염 (콕사키 바이러스, 시토메갈로바이러스, B형 간염, 단순 헤르페스 바이러스, 유행성 이하선염, 수두 대상포진 바이러스에 의한), 세균 감염 (레지오넬라 (Legionella), 렙토스피라 (Leptospira), 미코플라스마 (Mycoplasma), 살모넬라 (Salmonella)), 진균 감염 (아스페르길루스 (Aspergillus)), 또는 기생충 감염 (회충 (Ascaris), 와포자충 (Cryptosporidium), 톡소플라스마 (Toxoplasma))에 의해 유발된 췌장염을 비롯하여, 다양한 원인 및 증상을 갖는 췌장염의 다양한 형태를 포함한다.

본 발명은 일반적으로 펩티드인 하나 또는 그 이상의 항아폽토시스성, 친생존 및/또는 친재생 인자를 포함하는 조성물을 제공한다. 구체예에서, 하나 또는 그 이상의 인자는 표 I 또는 II에서 진술된 것들에서 선택되고, 그리고 이들의 임의의 조합을 포함할 수 있다.

표 I: 본 발명의 인자 (가령, 항아폽토시스성 , 친생존 및/또는 친재생 인자).

인자

암피레굴린 (AR)

가용성 Fas (sFAS) 수용체

알부민

알파-1-항트립신 (AAT)

알파-2-마크로글로불린 (A2Macro)

알파 태아단백질 (AFP)

안지오포에이틴-2 (ANG-2)

아포지질단백질 A-I (아포 A-I)

아포지질단백질 A-II (아포 A-II)

아포지질단백질 C-I (아포 C-I)

아포지질단백질 C-III (아포 C-III)

아포지질단백질 H (아포 H)

베타-2-마이크로글로불린 (β2M)

CD 40 항원 (CD40)

보체 C3 (C3)

크레아틴 키나아제-MB (CK-MB)

에오탁신-1

에리트로포이에틴 (EPO)

인자 VII

페리틴 (FRTN)

피브리노겐

겔솔린

간세포 성장 인자 (HGF)

헤파린 결합 표피 성장 인자 (HB-EGF)

인간 융모생식선자극호르몬 베타 (hCG)

세포간 부착 분자 1 (ICAM-1)

인터류킨-1 수용체 길항제 (IL-1Ra)

인터류킨-8 (IL-8)

대식세포-유래된 케모킨 (MDC)

뉴런-특이적 에놀라아제 (NSE)

호중구 젤라틴분해효소-연관된 리포칼린 (NGAL)

태반 성장 인자 (PLGF)

플라스미노겐 활성인자 저해제 1 (PAI-1)

혈소판 유래 성장 인자 BB (PDGF-BB)

세로트랜스페린 (트랜스페린)

성호르몬 결합 글로불린 (SHBG)

줄기 세포 인자 (SCF)

T-세포-특이적 단백질 RANTES (RANTES)

티록신 결합 글로불린 (TBG)

금속단백분해효소 1의 조직 저해제 (TIMP-1)

전환 성장 인자 알파 (TGFα)

트렌스티레틴 (TTR)

혈관 내피 성장 인자 (VEGF)

혈관 내피 성장 인자 C (VEGF-C)

표 II: 본 발명의 인자 (가령, 항아폽토시스성, 친생존 및/또는 친재생 인자).

인자

암피레굴린 (AR)

가용성 Fas (sFAS) 수용체

알파-1-항트립신 (AAT)

안지오포에이틴-2 (ANG-2)

에리트로포이에틴 (EPO)

겔솔린

간세포 성장 인자 (HGF)

헤파린 결합 표피 성장 인자 (HB-EGF)

인터류킨-1 수용체 길항제 (IL-1Ra)

태반 성장 인자 (PLGF)

혈소판 유래 성장 인자 BB (PDGF-BB)

줄기 세포 인자 (SCF)

전환 성장 인자 알파 (TGFα)

혈관 내피 성장 인자 (VEGF)

혈관 내피 성장 인자 C (VEGF-C)

다양한 구체예에서, 하나 또는 그 이상의 인자는 최소한 AR 또는 sFAS를 포함한다. 한 구체예에서, 하나 또는 그 이상의 인자는 AR과 sFAS 둘 모두 및 임의선택적으로, 표 I 또는 II로부터 하나 또는 그 이상의 추가 인자, 예를 들면, 공지된 유사분열물질, 비-질환 관련된 세포에서 아폽토시스 관련된 신호전달을 저해하는 인자, 질환 관련된 세포에서 아폽토시스를 증진하는 인자 및/또는 향상된 세포 기능을 유발하는 표현형 이동을 유도하는 인자를 포함한다.

한 구체예에서, 하나 또는 그 이상의 인자는 표 I에서 진술된 것들 모두를 포함한다. 한 구체예에서, 하나 또는 그 이상의 인자는 표 II에서 진술된 것들 모두를 포함한다.

한 구체예에서, 하나 또는 그 이상의 인자는 AR, sFAS, 그리고 간세포 성장 인자 (HGF), 전환 성장 인자 알파, 헤파린 결합 표피 성장 인자, 혈소판 유래 성장 인자 BB, 혈관 내피 성장 인자, 혈관 내피 성장 인자 C, 태반 성장 인자, 안지오포이에틴2, 에리트로포이에틴, 줄기 세포 인자 또는 이들의 임의의 조합 중에서 하나 또는 그 이상을 포함한다. 구체예에서, 하나 또는 그 이상의 인자는 AR, sFAS, 간세포 성장 인자 (HGF), 전환 성장 인자 알파, 헤파린 결합 표피 성장 인자, 혈소판 유래 성장 인자 BB, 혈관 내피 성장 인자, 혈관 내피 성장 인자 C, 태반 성장 인자, 안지오포이에틴2, 에리트로포이에틴 및 줄기 세포 인자를 포함한다.

한 구체예에서, 하나 또는 그 이상의 인자는 AR, sFAS, 그리고 AAT, A2Macro, 아포 A-I, 아포 A-II, 아포 C-I, 아포 C-III, 아포 H, β2M, 암 항원 125 (CA-125), CD 40 항원 (CD40), 크레아틴 키나아제-MB (CK-MB), 에오탁신-1, 인자 VII, 페리틴 (FRTN), 피브리노겐, ICAM-1, IL-1Ra, IL-7, IL-8, IL-17, 대식세포-유래된 케모킨 (MDC), 뉴런-특이적 에놀라아제 (NSE), 플라스미노겐 활성인자 저해제 1 (PAI-1), 세로트랜스페린 (트랜스페린), 성호르몬 결합 글로불린 (SHBG), 티록신 결합 글로불린 (TBG), TIMP-1, 트렌스티레틴 (TTR), 또는 이들의 임의의 조합 중에서 하나 또는 그 이상을 포함한다. 한 구체예에서, 하나 또는 그 이상의 인자는 AR, sFAS, AAT, A2Macro, 아포 A-I, 아포 A-II, 아포 C-I, 아포 C-III, 아포 H, β2M, 암 항원 125 (CA-125), CD 40 항원 (CD40), 크레아틴 키나아제-MB (CK-MB), 에오탁신-1, 인자 VII, 페리틴 (FRTN), 피브리노겐, ICAM-1, IL-1Ra, IL-7, IL-8, IL-17, 대식세포-유래된 케모킨 (MDC), 뉴런-특이적 에놀라아제 (NSE), 플라스미노겐 활성인자 저해제 1 (PAI-1), 세로트랜스페린 (트랜스페린), 성호르몬 결합 글로불린 (SHBG), 티록신 결합 글로불린 (TBG), TIMP-1 및 트렌스티레틴 (TTR)을 포함한다.

구체예에서, 하나 또는 그 이상의 인자는 폴리펩티드, 예를 들면, 표 I에서 진술된 것들이다. 구체예에서, 조성물은 하나 또는 그 이상의 인자, 예를 들면, 폴리펩티드 및 제약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 제약학적 조성물이다. 용어 "폴리펩티드", "펩티드", 또는 "단백질"은 인접한 잔기의 알파-아미노 및 카르복시 기 사이에 펩티드 결합에 의해 서로 연결된 아미노산 잔기의 선형 연쇄를 지정하기 위해 본원에서 교체가능하게 이용된다.

구체예에서, 조성물은 표 I로부터 단일 유형의 인자, 예를 들면, AR 또는 sFAS를 포함한다. 다른 구체예에서, 제약학적 조성물은 표 I로부터 2개 또는 그 이상 인자의 조합, 예를 들면, AR 및 sFas를 포함한다. 구체예에서, 조성물은 혈액에서 발견되는 혈액 단백질 및/또는 대사산물이 실제적으로 없다. 다른 구체예에서, 조성물은 혈청 알부민 (가령, 인간 혈청 알부민)을 포함한다. 구체예에서, 조성물 내에 존재하는 임의의 폴리펩티드 인자는 재조합적으로 생산된다. 구체예에서, 조성물 내에 존재하는 임의의 폴리펩티드 인자는 개체로부터 혈액, 또는 이들의 분획물에 대한 응답으로 C3A 세포에 의해 생산된다.

조성물은 표 I에서 진술된 인자 중에서 하나 또는 그 이상의 발현 또는 활성을 증가시키는 하나 또는 그 이상의 작용제를 더욱 포함할 수 있다. 본 발명에서 유용한 작용제는 임의의 유형의 분자, 예를 들면, 폴리뉴클레오티드, 펩티드, 펩티드모방체, 펩토이드, 예를 들면, 비닐성 펩토이드, 화학적 화합물, 예를 들면, 유기 분자 또는 작은 유기 분자, 또는 기타 유사한 것일 수 있다. 다양한 구체예에서, 발현 또는 활성은 작용제와 접촉시키기에 앞서 발현 또는 활성과 비교하여, 최소한 2.0, 5.0, 10, 25, 50, 100, 250, 500, 1,000, 5,000 또는 그 이상의 인자로 증가된다.

구체예에서, 작용제는 세포에서 표 I에서 진술된 인자의 발현 및/또는 활성을 증가시키는 (직접적으로 또는 간접적으로) 폴리뉴클레오티드, 예를 들면, 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 RNA 분자이다. 다양한 양상에서, 작용제는 폴리뉴클레오티드, 예를 들면, 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 RNA 분자, 예를 들면, 마이크로RNA, dsRNA, siRNA, stRNA 및 shRNA일 수 있다.

마이크로RNA (miRNA)는 유전자 발현을 조절하는 단일 가닥 RNA 분자이다. miRNA는 그들이 전사되는 DNA를 포함하는 유전자에 의해 인코딩되지만, miRNA는 단백질로 번역되지 않는다; 그 대신에 각 일차 전사체 (프리-miRNA)는 프레-miRNA로 불리는 짧은 스템-루프 구조 및 최종적으로 기능적 miRNA로 가공된다. 성숙 miRNA 분자는 하나 또는 그 이상의 전령 RNA (mRNA) 분자에 완전히 또는 부분적으로 상보적이고, 그리고 이들의 주요 기능은 유전자 발현을 하향조절하는 것이다. 마이크로RNA는 독립된 유전자에 의해 인코딩될 수 있지만, 인트론, mRNAs의 3' UTRs, 긴 비코딩 RNAs, snoRNAs 및 트랜스포손을 비롯한 다양한 상이한 RNA 종류로부터 또한 처리될 수 있다 (효소 Dicer을 통해). 본원에서 이용된 바와 같이, 마이크로RNA는 또한, "모방" 마이크로RNA를 포함하는데, 이들은 내인성 대응물과 동일한 또는 실제적으로 동일한 기능을 갖는, 세포 내로 외인성으로 도입된 마이크로RNA를 의미하는 것으로 의도된다. 따라서, 비록 당업자가 작용제가 외인성으로 도입된 RNA일 수 있다는 점을 이해할 것이지만, 작용제는 또한, 세포에서 마이크로RNA의 발현을 증가 또는 감소시키는 화합물 또는 기타 유사한 것을 포함한다.

용어 "짧은 간섭 RNA" 및 "siRNA"는 또한, 짧은 간섭 RNA 또는 침묵 RNA를 지칭하기 위해 본원에서 이용되는데, 이들은 다양한 생물학적 역할을 수행하는 한 부류의 짧은 이중 가닥 RNA 분자이다. 특히, siRNA는 RNA 간섭 (RNAi) 경로에 관련되는데, 여기서 siRNA는 특정한 유전자의 발현을 간섭한다. RNAi 경로에서 그들의 역할에 더하여, siRNAs는 또한, RNAi-관련된 경로에서 작용한다 (가령, 항바이러스성 기전으로서 또는 유전체의 염색질 구조를 성형함에 있어서).

용어 "폴리뉴클레오티드" 또는 "뉴클레오티드 서열" 또는 "핵산 분자"는 포스포디에스테르 결합에 의해 함께 연결되는 2개 또는 그 이상의 데옥시리보뉴클레오티드 또는 리보뉴클레오티드의 서열을 의미하는 것으로 본원에서 광범위하게 이용된다. 따라서, 이들 용어는 RNA 및 DNA를 포함하는데, 이들은 유전자 또는 이의 부분, cDNA, 합성 폴리데옥시리보핵산 서열, 또는 기타 유사한 것일 수 있고, 그리고 단일 가닥 또는 이중 가닥뿐만 아니라 DNA/RNA 하이브리드일 수 있다. 게다가, 이들 용어는 본원에서 이용된 바와 같이, 세포로부터 단리될 수 있는 자연발생 핵산 분자뿐만 아니라 예로서, 화학적 합성의 방법에 의해 또는 효소적 방법에 의해, 예를 들면, 중합효소 연쇄 반응 (PCR)에 의해 제조될 수 있는 합성 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 이들 상이한 용어는 예로서, 조성물의 상이한 성분을 식별하기 위한, 단지 논의의 편의를 위해 이용되는 것으로 인식되어야 한다.

본원에서 논의된 바와 같이, 본 발명의 조성물은 표 I에서 진술된 단일 인자, 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. 조성물은 표 I의 것들 이외에 단백질이 실제적으로 없을 수 있다. 조성물은 임의의 친염증성 분자가 실제적으로 없을 수 있다. 본원에서 이용된 바와 같이, 용어 "표 I의 것들 이외에 단백질이 실제적으로 없는"은 조성물의 단백질 함량의 5% 이하가 표 I에서 진술되지 않은 단백질로 구성된다는 것을 의미한다. 본원에서 이용된 바와 같이, 용어 "친염증성 분자가 실제적으로 없는"은 조성물의 함량의 5% 이하가 친염증성 분자로 구성된다는 것을 의미한다. 표 I의 것들 이외에 단백질이 실제적으로 없는 조성물은 표 I의 것들 이외에 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5%, 0.1%, 0.05%, 0.01%, 0.001%, 0.0001%, 또는 그 이하 (가령, 0.0%)보다 적은 단백질을 가질 수 있다. 친염증성 분자가 실제적으로 없는 조성물은 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5%, 0.1%, 0.05%, 0.01%, 0.001%, 0.0001% 또는 그 이하보다 적은 이런 분자를 가질 수 있다. 따라서, 조성물은 혈액 단백질, 예를 들면, 혈청 알부민, 글로불린, 피브리노겐 및 응고 인자가 실제적으로 없을 수 있다. 대안으로, 조성물은 혈청 알부민, 글로불린, 피브리노겐 및 응고 인자 중에서 하나 또는 그 이상을 포함할 수 있다.

구체예에서, 조성물의 펩티드 인자는 인간 또는 다른 포유동물 또는 동물에서 자연적으로 발견되지 않는다. 가령, 인자는 합성, 재조합 또는 기타 유사한 것일 수 있다. 하지만, 본 발명의 조성물은 인간 또는 다른 포유동물 또는 동물에서 자연적으로 발견되는 펩티드 인자를 포함할 수 있다.

구체예에서, 펩티드 인자는 비자연발생 아미노산을 포함할 수 있다. "아미노산"은 자연발생 및 합성 아미노산뿐만 아니라 자연발생 아미노산과 유사한 방식으로 기능하는 아미노산 유사체 및 아미노산 모방체를 지칭한다. 자연발생 아미노산은 유전자 코드에 의해 인코딩된 아미노산뿐만 아니라 추후 변형되는 아미노산, 예를 들면, 히드록시프롤린, .감마.-카르복시글루타메이트 및 O-포스포세린이다. "아미노산 유사체"는 자연 발생 아미노산과 동일한 기본 화학 구조, 다시 말하면, 수소에 결합된 알파 탄소, 카르복실 기, 아미노 기, 그리고 R 기를 갖는 화합물, 예를 들면, 호모세린, 노르류신, 메티오닌 술폭시드, 메티오닌 메틸 술포늄을 지칭한다. 이런 유사체는 변형된 R 기 (가령, 노르류신) 또는 변형된 펩티드 중추를 갖지만, 자연 발생 아미노산과 동일한 기본 화학 구조를 유지한다. "아미노산 모방체"는 아미노산의 일반적인 화학 구조와 상이한 구조를 갖지만, 자연발생 아미노산과 유사한 방식으로 기능하는 화학적 화합물을 지칭한다. 아미노산은 본원에서, 그들의 통상적으로 알려진 3 문자 기호에 의해 또는 IUPAC-IUB Biochemical Nomenclature Commission에 의해 권장되는 1-문자 기호에 의해 지칭될 수 있다.

구체예에서, 조성물은 표 I에서 진술된 인자의 하나 또는 그 이상의 보존성으로 변형된 변이체를 포함한다. 구체예에서, 보존성으로 변형된 변이체는 자연발생 폴리펩티드와 아미노산 수준에서 최소한 80% 서열 유사성, 종종 최소한 85% 서열 유사성, 90% 서열 유사성, 또는 최소한 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 유사성을 갖는다.

아미노산 서열에 관하여, 당업자는 인코딩된 서열 내에 단일 아미노산 또는 적은 비율의 아미노산을 변경, 부가 또는 결실하는 핵산, 펩티드, 폴리펩티드, 또는 단백질 서열에 개별 치환, 결실 또는 부가가 이런 변경이 화학적으로 유사한 아미노산으로 아미노산의 치환을 유발하는 경우에, "보존성으로 변형된 변이체"라는 것을 인지할 것이다. 기능적으로 유사한 아미노산을 제공하는 보존성 치환 표는 당업자에게 알려져 있다. 이런 보존성으로 변형된 변이체는 본 발명의 다형성 변이체, 종간 동족체, 그리고 대립유전자에 더해지고 이들을 배제하지 않는다.

가령, 지방족 아미노산 (G, A, I, L 또는 V)이 군의 다른 구성원으로 치환되는 치환, 또는 다른 극성 잔기에 대한 극성 잔기의 치환, 예를 들면, 리신에 대한 아르기닌, 아스파르트산에 대한 글루타민산, 또는 아스파라긴에 대한 글루타민의 치환과 같은 치환이 만들어질 수 있다. 다음의 8개 군 각각은 서로에 대해 보존성 치환인 다른 예시적인 아미노산을 내포한다: 1) 알라닌 (A), 글리신 (G); 2) 아스파르트산 (D), 글루타민산 (E); 3) 아스파라긴 (N), 글루타민 (Q); 4) 아르기닌 (R), 리신 (K); 5) 이소류신 (I), 류신 (L), 메티오닌 (M), 발린 (V); 6) 페닐알라닌 (F), 티로신 (Y), 트립토판 (W); 7) 세린 (S), 트레오닌 (T); 그리고 8) 시스테인 (C), 메티오닌 (M) (가령, Creighton, Proteins (1984)를 참조한다).

2개 또는 그 이상의 폴리펩티드 서열의 맥락에서 용어 "동일한," 또는 퍼센트 "동일성"은 디폴트 파라미터를 갖는 BLAST 또는 BLAST 2.0 서열 비교 알고리즘을 이용하여, 또는 수동 정렬과 시각적 검사에 의해 계측될 때 동일하거나 또는 동일한 아미노산 잔기의 특정된 백분율 (즉, 비교 윈도우 또는 지정된 영역에 걸쳐 최고 상응을 위해 비교되고 정렬될 때, 특정된 영역에 걸쳐 약 60% 동일성, 바람직하게는 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 더욱 높은 동일성)을 갖는 2개 또는 그 이상의 서열 또는 하위서열을 지칭한다. 이런 서열은 이후, "실제적으로 동일한" 것으로 일컬어진다.

구체예에서, 조성물은 생체내에서 본 발명의 하나 또는 그 이상의 인자와 연관되거나 또는 이들 인자와 동시 정제되는 생물학적 분자 (가령, 폴리펩티드, 핵산, 지질, 탄수화물 및 대사산물)가 실제적으로 없다. 본원에서 이용된 바와 같이, 용어 "생물학적 분자가 실제적으로 없는"은 조성물의 건조 중량의 5% 이하가 표 I에서 진술되지 않은 생물학적 분자로 구성된다는 것을 의미한다. 이런 생물학적 분자가 실제적으로 없는 조성물은 표 I에서 진술되지 않은, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5%, 0.1%, 0.05%, 0.01%, 또는 그 이하보다 적은 생물학적 분자를 가질 수 있다. 따라서, 예로서, 조성물은 혈액 내에 풍부한 생물학적 분자, 예를 들면, 지방산, 콜레스테롤, 비단백질 응고 인자, 대사산물, 기타 등등이 실제적으로 없을 수 있다. 이에 더하여, 조성물은 적혈구, 백혈구, 혈소판 및 세포 단편을 비롯한 세포가 실제적으로 없을 수 있다.

구체예에서, 본 발명의 조성물은 최소한 1 mg (가령, 최소한 5, 10, 20, 30, 40, 50, 75, 100, 150, 200, 250, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000 mg, 또는 그 이상)의 표 I에서 진술된 인자 중에서 하나 또는 그 이상을 포함한다. 따라서, 예로서, 조성물은 약 1 mg 내지 약 1000 mg에 동등한 양 (가령, 약 5 mg 내지 약 900 mg, 약 5 mg 내지 약 800 mg, 약 5 mg 내지 약 700 mg, 약 5 mg 내지 약 600 mg, 약 10 mg 내지 약 500 mg, 약 10 mg 내지 약 400 mg, 약 10 mg 내지 약 300 mg, 약 10 mg 내지 약 250 mg, 약 10 mg 내지 약 200 mg, 약 10 mg 내지 약 150 mg, 약 10 mg 내지 약 100 mg, 약 50 mg 내지 약 500 mg, 약 50 mg 내지 약 400 mg, 약 50 mg 내지 약 300 mg, 약 50 mg 내지 약 250 mg, 약 50 mg 내지 약 200 mg, 약 50 mg 내지 약 150 mg, 약 50 mg 내지 약 100 mg, 약 75 mg 내지 약 500 mg, 약 75 mg 내지 약 400 mg, 약 75 mg 내지 약 300 mg, 약 75 mg 내지 약 250 mg, 약 75 mg 내지 약 200 mg, 약 75 mg 내지 약 150 mg, 약 75 mg 내지 약 100 mg, 약 100 mg 내지 약 500 mg, 약 100 mg 내지 약 400 mg, 약 100 mg 내지 약 300 mg, 약 100 mg 내지 약 250 mg, 약 100 mg 내지 약 200 mg, 또는 전술한 종결점 중에서 2개를 내포하는 임의의 다른 범위)의 하나 또는 그 이상의 인자를 포함할 수 있다.

구체예에서, 본 발명의 조성물은 최소한 1 mg/mL (가령, 최소한 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100 mg/mL 또는 그 이상)의 표 I에서 진술된 인자 중에서 하나 또는 그 이상을 내포하는 용액을 포함할 수 있다. 따라서, 예로서, 조성물은 약 1 mg/mL 내지 약 1000 mg/mL (가령, 약 5 mg/mL 내지 약 900 mg/mL, 약 5 mg/mL 내지 약 800 mg/mL, 약 5 mg/mL 내지 약 700 mg/mL, 약 5 mg/mL 내지 약 600 mg/mL, 약 5 mg/mL 내지 약 500 mg/mL, 약 10 mg/mL 내지 약 500 mg/mL, 약 10 mg/mL 내지 약 400 mg/mL, 약 10 mg/mL 내지 약 300 mg/mL, 약 10 mg/mL 내지 약 250 mg/mL, 약 10 mg/mL 내지 약 200 mg/mL, 약 10 mg/mL 내지 약 150 mg/mL, 약 10 mg/mL 내지 약 100 mg/mL, 약 50 mg/mL 내지 약 500 mg/mL, 약 50 mg/mL 내지 약 400 mg/mL, 약 50 mg/mL 내지 약 300 mg/mL, 약 50 mg/mL 내지 약 250 mg/mL, 약 50 mg/mL 내지 약 200 mg/mL, 약 50 mg/mL 내지 약 150 mg/mL, 약 50 mg/mL 내지 약 100 mg/mL, 약 75 mg/mL 내지 약 500 mg/mL, 약 75 mg/mL 내지 약 400 mg/mL, 약 75 mg/mL 내지 약 300 mg/mL, 약 75 mg/mL 내지 약 250 mg/mL, 약 75 mg/mL 내지 약 200 mg/mL, 약 75 mg/mL 내지 약 150 mg/mL, 약 75 mg/mL 내지 약 100 mg/mL, 약 100 mg/mL 내지 약 500 mg/mL, 약 100 mg/mL 내지 약 400 mg/mL, 약 100 mg/mL 내지 약 300 mg/mL, 약 100 mg/mL 내지 약 250 mg/mL, 약 100 mg/mL 내지 약 200 mg/mL, 약 10 mg/mL 내지 약 150 mg/mL, 또는 전술한 종결점 중에서 2개를 내포하는 임의의 다른 범위)의 표 I 에서 진술된 인자 중에서 하나 또는 그 이상의 농도를 갖는 용액을 포함할 수 있다.

구체예에서, 본 발명의 조성물은 최소한 1 pg (가령, 최소한 5, 10, 20, 30, 40, 50, 75, 100, 150, 200, 250, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000 pg, 또는 그 이상)의 표 I에서 진술된 인자 중에서 하나 또는 그 이상을 포함한다. 따라서, 예로서, 조성물은 약 1 pg 내지 약 1000 pg에 동등한 양 (가령, 약 5 pg 내지 약 900 pg, 약 5 pg 내지 약 800 pg, 약 5 pg 내지 약 700 pg, 약 5 pg 내지 약 600 pg, 약 10 pg 내지 약 500 pg, 약 10 pg 내지 약 400 pg, 약 10 pg 내지 약 300 pg, 약 10 pg 내지 약 250 pg, 약 10 pg 내지 약 200 pg, 약 10 pg 내지 약 150 pg, 약 10 pg 내지 약 100 pg, 약 50 pg 내지 약 500 pg, 약 50 pg 내지 약 400 pg, 약 50 pg 내지 약 300 pg, 약 50 pg 내지 약 250 pg, 약 50 pg 내지 약 200 pg, 약 50 pg 내지 약 150 pg, 약 50 pg 내지 약 100 pg, 약 75 pg 내지 약 500 pg, 약 75 pg 내지 약 400 pg, 약 75 pg 내지 약 300 pg, 약 75 pg 내지 약 250 pg, 약 75 pg 내지 약 200 pg, 약 75 pg 내지 약 150 pg, 약 75 pg 내지 약 100 pg, 약 100 pg 내지 약 500 pg, 약 100 pg 내지 약 400 pg, 약 100 pg 내지 약 300 pg, 약 100 pg 내지 약 250 pg, 약 100 pg 내지 약 200 pg, 또는 전술한 종결점 중에서 2개를 내포하는 임의의 다른 범위)의 하나 또는 그 이상의 인자를 포함할 수 있다.

구체예에서, 본 발명의 조성물은 최소한 1 pg/mL (가령, 최소한 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100 pg/mL 또는 그 이상)의 표 I에서 진술된 인자 중에서 하나 또는 그 이상을 내포하는 용액을 포함할 수 있다. 따라서, 예로서, 조성물은 약 1 pg/ml 내지 약 1000 pg/ml (가령, 약 5 pg/ml 내지 약 900 pg/ml, 약 5 pg/ml 내지 약 800 pg/ml, 약 5 pg/ml 내지 약 700 pg/ml, 약 5 pg/ml 내지 약 600 pg/ml, 약 5 pg/ml 내지 약 500 pg/ml, 약 10 pg/ml 내지 약 500 pg/ml, 약 10 pg/ml 내지 약 400 pg/ml, 약 10 pg/ml 내지 약 300 pg/ml, 약 10 pg/ml 내지 약 250 pg/ml, 약 10 pg/ml 내지 약 200 pg/ml, 약 10 pg/ml 내지 약 150 pg/ml, 약 10 pg/ml 내지 약 100 pg/ml, 약 50 pg/ml 내지 약 500 pg/ml, 약 50 pg/ml 내지 약 400 pg/ml, 약 50 pg/ml 내지 약 300 pg/ml, 약 50 pg/ml 내지 약 250 pg/ml, 약 50 pg/ml 내지 약 200 pg/ml, 약 50 pg/ml 내지 약 150 pg/ml, 약 50 pg/ml 내지 약 100 pg/ml, 약 75 pg/ml 내지 약 500 pg/ml, 약 75 pg/ml 내지 약 400 pg/ml, 약 75 pg/ml 내지 약 300 pg/ml, 약 75 pg/ml 내지 약 250 pg/ml, 약 75 pg/ml 내지 약 200 pg/ml, 약 75 pg/ml 내지 약 150 pg/ml, 약 75 pg/ml 내지 약 100 pg/ml, 약 100 pg/ml 내지 약 500 pg/ml, 약 100 pg/ml 내지 약 400 pg/ml, 약 100 pg/ml 내지 약 300 pg/ml, 약 100 pg/ml 내지 약 250 pg/ml, 약 100 pg/ml 내지 약 200 pg/ml, 약 10 pg/ml 내지 약 150 pg/ml, 또는 전술한 종결점 중에서 2개를 내포하는 임의의 다른 범위)의 표 I에서 진술된 인자 중에서 하나 또는 그 이상의 농도를 갖는 용액을 포함할 수 있다.

본 발명의 조성물은 전형적으로 제약학적 조성물이다. 이런 제약학적 조성물은 표 I 또는 II에서 진술된 인자 중에서 하나 또는 그 이상 및 제약학적으로 허용되는 담체를 포함할 수 있다. 제약학적 조성물은 표 I 또는 II에서 진술된 바와 같은 인자 이외에 단백질을 더욱 포함할 수 있다. 다른 단백질은 치료적 작용제, 예를 들면, 치료적 폴리펩티드일 수 있다. 대안으로, 다른 단백질은 운반 단백질일 수 있다.

구체예에서, 본 발명의 조성물은 항응고제, 예를 들면, 헤파린 또는 구연산염을 포함한다. 본원에서 이용된 바와 같이, "구연산염"은 구연산 (3개의 양성자와 복합화된 구연산염 음이온), 구연산염 음이온을 내포하는 염, 그리고 구연산염 음이온의 부분적인 캐스터를 비롯한 임의의 형태에서 구연산염 음이온을 지칭한다. 구연산염 음이온은 유기 트리카르복실산염이다. Chemical Abstracts Registry 번호 77-92-2가 배정된 구연산은 분자식 HOC(CO₂H)(CH₂CO₂H)₂ 및 192.12 g/mol의 화학식량을 갖는다. 구연산염 염 (다시 말하면, 구연산염 음이온을 내포하는 염)은 하나 또는 그 이상의 생리학적으로-허용되는 양이온과 연관된 하나 또는 그 이상의 구연산염 음이온으로 구성된다. 예시적인 생리학적으로-허용되는 양이온은 양성자, 암모늄 양이온 및 금속 양이온을 포함하지만 이들에 한정되지 않는다. 적합한 금속 양이온은 나트륨, 칼륨, 칼슘 및 마그네슘을 포함하지만 이들에 한정되지 않고, 여기서 나트륨 및 칼륨이 선호되고, 그리고 나트륨이 더욱 바람직하다. 구연산염 음이온을 내포하는 조성물은 생리학적으로-허용되는 양이온의 혼합물을 내포할 수 있다.

한 구체예에서, 조성물은 구연산나트륨을 포함한다. 구연산나트륨은 건성 화학적 분말, 결정, 펠렛 또는 정제의 형태일 수 있다. 구연산 또는 구연산나트륨의 임의의 생리학적으로 내약성 형태가 이용될 수 있다. 가령, 구연산 또는 구연산나트륨은 일수화물을 비롯한 수화물의 형태일 수 있다.

본 발명의 제약학적 조성물은 원하는 정도의 순도를 갖는 하나 또는 그 이상의 표 I에서 진술된 인자를 임의선택적 제약학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 안정제와 혼합함으로써 제조될 수 있다 (Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)). 허용되는 담체, 부형제 또는 안정제는 이용되는 용량 및 농도에서 수용자에 비독성이고, 그리고 완충액, 예를 들면, 인산염, 구연산염 및 다른 유기 산; 아스코르빈산 및 메티오닌을 비롯한 항산화제; 보존제 (가령, 옥타데실디메틸벤질 염화암모늄; 헥사메토늄 염화물; 벤잘코늄 염화물, 벤제토늄 염화물; 페놀, 부틸 또는 벤질 알코올; 알킬 파라벤, 예를 들면, 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레소르시놀; 시클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자량 (약 10개 잔기보다 적은) 폴리펩티드; 단백질, 예를 들면, 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린; 친수성 중합체, 예를 들면, 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예를 들면, 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 리신; 글루코오스, 만노오스 또는 덱스트린을 비롯한 단당류, 이당류 및 다른 탄수화물; 킬레이트화제, 예를 들면, EDTA; 당, 예를 들면, 수크로오스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨; 염-형성 반대 이온, 예를 들면, 나트륨; 금속 착물 (예로서, Zn-단백질 복합체); 및/또는 비이온성 계면활성제, 예를 들면, TWEEN^TM, PLURONICS^TM 또는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)을 포함할 수 있다.

구체예에서, 본 발명의 조성물은 생존 세포를 포함할 수 있다. 한 구체예에서, 조성물은 간세포 세포를 포함한다. 한 구체예에서, 조성물은 임의선택적으로 재조합적으로 가공된 HepG2 세포 또는 C3A 세포를 포함한다.

본 발명의 조성물은 표적 세포의 항아폽토시스, 생존 및/또는 증식을 유도하고 및/또는 질환 또는 장애, 예를 들면, 염증성 질환을 치료하기 위한 유력한 도구를 제공한다.

따라서, 본 발명은 세포를 본 발명의 조성물과 접촉시킴으로써 상기 세포에서 항아폽토시스, 항피롭토시스, 항네크롭토시스, 생존, 보호, 증식 및/또는 표현형 조정을 유도하는 방법을 제공한다. 구체예에서, 접촉된 세포의 증식은 조성물과 접촉되지 않은 필적하는 세포의 증식과 비교하여 최소한 1.1, 1.5, 2.0, 5.0, 10, 25, 50, 100 또는 그 이상의 인자로 증가된다. 관련된 구체예에서, 세포의 생존은 조성물과 접촉되지 않은 필적하는 세포의 생존과 비교하여 최소한 1.1, 1.5, 2.0, 5.0, 10, 25, 50, 100 또는 그 이상의 인자로 증가된다.

본 발명은 또한, 개체에서 질환 또는 장애를 치료하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 표 I 또는 II에서 진술된 하나 또는 그 이상의 인자 (또는, 예로서, 표 I 또는 II에서 진술된 하나 또는 그 이상의 인자를 포함하는 제약학적 조성물)을 개체에, 또는 이의 세포 또는 조직에 투여하는 것을 포함한다.

본 발명의 방법에서, 하나 또는 그 이상의 인자는 접촉된 세포 또는 조직에서 항아폽토시스, 항피롭토시스, 항네크롭토시스, 생존, 보호, 증식 및/또는 표현형 조정을 유도한다. 구체예에서, 접촉된 세포 (표적 세포로서 또한 지칭됨)는 진핵 세포, 예를 들면, 포유류 세포이다. 한 구체예에서, 접촉된 세포는 간세포이다. 한 구체예에서, 세포는 간모세포종-유래된 세포이다. 한 구체예에서, 세포는 HepG2 세포 또는 C3A 세포주의 C3A 세포이다. 한 구체예에서, 세포는 부모 C3A 세포주로부터 클론 유도체이다. 한 구체예에서, 세포는 재조합적으로 가공된 세포이다.

용어 "C3A 세포주"는 인간 간모세포종 세포주 HepG2의 하위클론을 지칭한다. C3A 세포주는 ATCC 번호 CRL-10741 하에 American Type Culture Collection에서 기탁된 유자격 세포주이다.

조성물의 투여는 예로서, 정맥내, 복막내, 비경구, 정위, 피하, 국소, 코, 경구, 설하, 안구내, 이식가능한 저장소에 의하여, 나노입자-기초된 전달 시스템을 이용하여, 미세 바늘 패치, 마이크로스피어, 비드, 삼투성 또는 기계적 펌프 및/또는 다른 기계적 수단을 비롯한 임의의 적합한 방식으로 수행될 수 있다.

다양한 구체예에서, 세포는 생체내에서 또는 시험관내에서 조성물에 의해 접촉될 수 있다. 한 구체예에서, 세포는 생체내 접촉되고, 상기 접촉된 세포는 체외 해독 시스템, 예를 들면, 본원에 전체적으로 참조로서 편입되는 U.S. 특허 번호 8,105,491에서 설명된 것에 의해 치료되는 개체 내에 있다. 이런 구체예에서, 조성물의 하나 또는 그 이상의 인자는 시스템의 능동 카트리지 (생물반응기) 내에 내포된 세포, 예를 들면, C3A 세포에 의해 생산될 수 있다. 다양한 구체예에서, 시스템은 개체, 또는 이의 세포 또는 장기, 예를 들면, 간에 유동적으로 연계될 수 있다.

도면 3에서 지시된 바와 같이, 체외 해독 시스템 10은 일반적으로, 환자에 연계되도록 설정되고, 그리고 한외여과물 발생기 (UFG) 40을 통해 환자로부터 혈액을 전달하고 환자에 되돌려주는 작동을 하는 혈액 회로 100; UFG 40에 연계되고, 그리고 UFG 40으로부터 한외여과물을 뽑아내고 혈액의 세포 성분과는 관계없이 한외여과물을 처리하는 작동을 하는 재순환 회로 50; 그리고 환자에 재도입에 앞서, 재순환 회로 50 내에 한외여과물 및 혈액 회로 100 내에 세포 성분을 재결합시키는 작동을 하는 도관 접합부 15를 포함한다. 재순환 회로 50 내에 배열된 능동 카트리지 70 및 산소공급기 60 또한 도면 3에서 도시된다. 능동 카트리지 70은 한외여과물을 처리하는데 활용된다.

용어 "능동 카트리지"는 치료적 적용 및 해독 과정에서 유용성을 갖는, 세포 (가령, 예로서, C3A 세포주의 세포)를 포함하는 중공 섬유 기초된 카트리지를 지칭한다.

용어 "혈액 회로"는 이중 내강 카테터에 연결되고, 그리고 환자로부터 혈액을 혈액 제어 장치로 순환시키고 환자로 되돌려주는 작동을 하는 배관의 회로를 지칭한다.

용어 "C3A 세포주"는 인간 간모세포종 세포주 HepG2의 하위클론을 지칭한다. 구체예에서, C3A 세포는 하나 또는 그 이상의 능동 카트리지의 모세관외 공간에서 내포된다. C3A 세포주는 ATCC 번호 CRL-10741 하에 American Type Culture Collection에서 기탁되었다.

용어 "해독 장치"는 유체 흐름으로부터 특이적 또는 비특이적 분자의 제거 수단을 제공하는 카트리지, 캐니스터 또는 다른 장치를 지칭한다. 실례는 투석 카트리지, 흡착 카트리지 또는 필터일 것이다.

용어 "모세관외 공간" (ECS)은 능동 카트리지의 중공 섬유 또는 한외여과물 발생기 외부의 공간을 지칭한다. 능동 카트리지의 ECS는 일반적으로, C3A 세포를 수용할 수 있다.

용어 "모세관내 공간" (ICS)은 능동 카트리지의 중공 섬유 또는 한외여과물 발생기 내부의 공간을 지칭한다. ICS는 전혈 또는 한외여과물 유체에 대한 유동 통로이다.

용어 "재순환 회로"는 한외여과물 유체의 여과, 해독 및 처리를 전반적으로 실시가능하게 하는 회로를 지칭한다; 일부 실행에서, 재순환 회로는 일반적으로, 저장소, 산소공급기, 그리고 하나 또는 그 이상의 능동 카트리지를 포괄한다.

용어 "한외여과물" (UF)은 한외여과물 발생기의 반투막을 교차하여 여과된 혈장 유체 및 용해된 거대분자를 지칭한다.

용어 "한외여과물 발생기" (UFG)는 "블랭크" 능동 카트리지 (다시 말하면, 치료적으로 활성 세포를 내포하지 않는 중공 섬유 카트리지)를 포함하거나 또는 이것으로서 구현되고 세포 혈액 성분으로부터 혈장 유체 (한외여과물)를 분리하는 작동을 하는 장치를 지칭한다. 중공 섬유는 일부 실행에서 예로서, 거의 100,000 달톤의 명목상 분자량 컷오프를 갖는 반투막으로 구성될 수 있다. UFG의 이용 동안, 혈액은 중공 섬유의 ICS를 통해 순환될 수 있다; 혈장 및 다양한 거대분자를 포함하는 한외여과물은 막 섬유 벽을 통과하여 재순환 회로 내로 들어가고, 여기서 이것은 하나 또는 그 이상의 능동 카트리지를 통해 순환된다.

용어 "한외여과"는 한외여과물이 UFG의 반투막을 교차하여 전혈로부터 끌어당겨지는 과정을 일반적으로 지칭한다. 아래에 설명된 일부 구체예에서, 한외여과물 펌프는 한외여과물 생산의 속도를 제어할 수 있고, 반면 UFG의 중공 섬유 막의 구멍 크기는 막을 침투하는 한외여과물의 양을 제어할 수 있다.

임상적 또는 치료적 처치 동안, UF는 능동 카트리지 70 내에 중공 섬유 카트리지의 내강 (ICS)을 통해 펌핑될 수 있고, UF로부터 독소, 영양소, 글루코오스 및 용존 산소가 막을 교차하여 ECS 내로 확산하도록 허용하고, 여기서 생존 세포는 이들을 물질대사시킬 수 있다. 세포에 의해 생산된 알부민 및 다른 단백질과 함께, 대사산물은 환자로의 복귀를 위해, 막을 교차하여 UF 내로 역으로 확산될 수 있다.

앞서 진술되고 본원에서 예기된 바와 같이, C3A 세포주는 인간 간모세포종 세포주 HepG2의 하위클론이다. 이러한 부모 세포주의 일부 하위클론, 예를 들면, C3A은 예로서, 사이토킨 IL-6 및 IL-1β를 비롯한 본 발명의 친염증성 분자에 대한 응답으로, 예로서 간-특이적 기능적 능력, 예를 들면, 높은 알부민 생산 및 α-태아단백질 (AFP) 생산뿐만 아니라 항염증성 매개체 단백질 α-1-항트립신 (AAT) 및 IL-1Ra의 발현을 전시한다. 이런 세포는 또한, 표 I 또는 II에서 진술된 하나 또는 그 이상의 인자를 생산할 수 있다.

다양한 구체예에서, 시스템은 개체, 또는 이의 세포 또는 장기, 예를 들면, 간에 유동적으로 연계될 수 있다. 본 발명의 조성물은 시스템 10의 혈액 회로 내로 도입된다. 조성물은 개체의 순환 내로 도입되거나, 또는 시스템의 혈류 통로 내로 직접적으로 도입될 수 있다. 한 구체예에서, 표 I 또는 II에서 진술된 인자 중에서 하나 또는 그 이상은 시스템 10의 능동 카트리지 70 내에 세포에 의해 산출된다. 일단 시스템 10의 혈액 회로 100 내에 있게 되면, 조성물의 인자를 포함하는 처리된 UF는 개체 내로 재도입되고, 여기서 조성물의 이들 인자는 개체의 세포, 예를 들면, 간 세포와 접촉하고, 따라서 질환 또는 장애의 치료를 조장한다.

능동 카트리지의 세포가 본 구체예에서 C3A 세포인 것으로 예시되긴 하지만, 당업자는 능동 카트리지가 수많은 상이한 질환, 예를 들면, 본원에서 개시된 바와 같은 염증성 질환을 치료하는데 유익한 수많은 적합한 세포 유형을 포함할 수 있다는 것을 이해할 것이다. 구체예에서, 능동 카트리지는 자극, 예를 들면, 치료되는 개체 내에 산출된 자극, 예를 들면, 친염증성 분자에 대한 응답으로 표 I 또는 II에서 진술된 인자 중에서 하나 또는 그 이상, 예를 들면, AR 및/또는 sFas를 생산하도록 재조합적으로 가공된 세포를 포함할 수 있다.

임의의 전술한 방법과 함께, 조성물은 매일 (또는 격일, 또는 주 1회) 투여될 수 있고, 여기서 표 I 또는 II의 하나 또는 그 이상의 인자의 양은 약 1 mg 내지 약 1000 mg (가령, 약 5 mg 내지 약 900 mg, 약 5 mg 내지 약 800 mg, 약 5 mg 내지 약 700 mg, 약 5 mg 내지 약 600 mg, 약 10 mg 내지 약 500 mg, 약 10 mg 내지 약 400 mg, 약 10 mg 내지 약 300 mg, 약 10 mg 내지 약 250 mg, 약 10 mg 내지 약 200 mg, 약 10 mg 내지 약 150 mg, 약 10 mg 내지 약 100 mg, 약 50 mg 내지 약 500 mg, 약 50 mg 내지 약 400 mg, 약 50 mg 내지 약 300 mg, 약 50 mg 내지 약 250 mg, 약 50 mg 내지 약 200 mg, 약 50 mg 내지 약 150 mg, 약 50 mg 내지 약 100 mg, 약 75 mg 내지 약 500 mg, 약 75 mg 내지 약 400 mg, 약 75 mg 내지 약 300 mg, 약 75 mg 내지 약 250 mg, 약 75 mg 내지 약 200 mg, 약 75 mg 내지 약 150 mg, 약 75 mg 내지 약 100 mg, 약 100 mg 내지 약 500 mg, 약 100 mg 내지 약 400 mg, 약 100 mg 내지 약 300 mg, 약 100 mg 내지 약 250 mg, 약 100 mg 내지 약 200 mg, 또는 전술한 종결점 중에서 2개를 내포하는 임의의 다른 범위) 사이이다.

임의의 전술한 방법과 함께, 조성물은 매일 (또는 격일, 또는 주 1회) 투여될 수 있고, 여기서 표 I 또는 II의 하나 또는 그 이상의 인자의 양은 약 1 pg 내지 약 1000 pg (가령, 약 5 pg 내지 약 900 pg, 약 5 pg 내지 약 800 pg, 약 5 pg 내지 약 700 pg, 약 5 pg 내지 약 600 pg, 약 10 pg 내지 약 500 pg, 약 10 pg 내지 약 400 pg, 약 10 pg 내지 약 300 pg, 약 10 pg 내지 약 250 pg, 약 10 pg 내지 약 200 pg, 약 10 pg 내지 약 150 pg, 약 10 pg 내지 약 100 pg, 약 50 pg 내지 약 500 pg, 약 50 pg 내지 약 400 pg, 약 50 pg 내지 약 300 pg, 약 50 pg 내지 약 250 pg, 약 50 pg 내지 약 200 pg, 약 50 pg 내지 약 150 pg, 약 50 pg 내지 약 100 pg, 약 75 pg 내지 약 500 pg, 약 75 pg 내지 약 400 pg, 약 75 pg 내지 약 300 pg, 약 75 pg 내지 약 250 pg, 약 75 pg 내지 약 200 pg, 약 75 pg 내지 약 150 pg, 약 75 pg 내지 약 100 pg, 약 100 pg 내지 약 500 pg, 약 100 pg 내지 약 400 pg, 약 100 pg 내지 약 300 pg, 약 100 pg 내지 약 250 pg, 약 100 pg 내지 약 200 pg, 또는 전술한 종결점 중에서 2개를 내포하는 임의의 다른 범위) 사이이다.

임의의 전술한 방법과 함께, 조성물은 질환 또는 장애의 치료에 유용한 약물과 합동으로 투여될 수 있다. 한 구체예에서, 조성물은 항균제와 함께 투여된다. 본 발명의 조성물과의 상승적 요법에 유용한 특정 부류의 항생제의 실례는 아미노글리코시드 (가령, 토브라마이신), 페니실린 (가령, 피페라실린), 세팔로스포린 (가령, 세프타지딤), 플루오로퀴놀론 (가령, 시프로플록사신), 카르바페넴 (가령, 이미페넴), 테트라사이클린 및 마크로라이드 (가령, 에리트로마이신 및 클라리트로마이신)를 포함한다. 상기 열거된 항생제에 더하여, 전형적인 항생제는 아미노글리코시드 (아미카신, 젠타마이신, 카나마이신, 네틸마이신, 토브라마이신, 스트렙토마이신, 아지트로마이신, 클라리트로마이신, 에리트로마이신, 에리트로마이신 에스톨레이트/에틸숙시네이트/글루셉테이트/락토비오네이트/스테아르산염), 베타 락탐, 예를 들면, 페니실린 (가령, 페니실린 G, 페니실린 V, 메티실린, 나프실린, 옥사실린, 클록사실린, 디클록사실린, 암피실린, 아목시실린, 티카르실린, 카르베니실린, 메즐로실린, 아즐로실린 및 피페라실린), 또는 세팔로스포린 (가령, 세팔로틴, 세파졸린, 세파클로르, 세파만돌, 세폭시틴, 세푸록심, 세포니시드, 세프메타졸, 세포테탄, 세프프로질, 로라카르베프, 세페타메트, 세포페라존, 세포탁심, 세프티족심, 세프트리악손, 세프타지딤, 세페파임, 세픽사임, 세프포독심 및 세프술로딘)을 포함한다. 다른 부류의 항생제는 카르바페넴 (가령, 이미페넴), 모노박탐 (가령, 아즈트레오남), 퀴놀론 (가령, 플레록사신, 날리딕식산, 노르플록사신, 시프로플록사신, 오플록사신, 에녹사신, 로메플록사신 및 시녹사신), 테트라사이클린 (가령, 독시사이클린, 미노사이클린, 테트라사이클린), 그리고 당펩티드 (가령, 반코마이신, 테이코플라닌)을 포함한다. 다른 항생제는 클로람페니콜, 클린다마이신, 트리메토프림, 술파메톡사졸, 니트로푸란토인, 리팜핀, 무피로신, 그리고 양이온성 펩티드를 포함한다.

본 발명의 임의의 전술한 방법은 치료적 처치의 효력을 사정하는 단계를 더욱 포함한다. 본 발명의 인자가 표적 세포의 항아폽토시스, 생존 및/또는 증식을 유도하는 증명가능한 능력을 갖기 때문에, 치료적 처치의 효력은 이런 경로와 연관되는 인자의 수준 (가령, 혈청에서)을 계측하는 것을 비롯하여, 개별 생물학적 경로의 양상을 계측함으로써 사정될 수 있다.

다음 실시예는 본 발명의 구체예를 더욱 예증하기 위해 제공되지만, 발명의 범위를 한정하는 것으로 의도되지 않는다. 비록 이들이 이용될 수 있을 지도 모르는 것들의 전형이긴 하지만, 당업자에게 공지된 다른 절차, 방법 또는 기술이 대안적으로 이용될 수 있다.

실시예 1

간 재생 인자의 분비

목적

본 연구의 목적은 간세포 복제 및/또는 간 재생에 대한 유익한 효과를 갖는 것으로 기존 문헌에서 보고된 인자를 분비하는, 본 발명의 시스템의 능동 카트리지 내에 존재하는 C3A 세포의 능력을 평가하는 것이었다.

재료와 방법

C3A 세포 카트리지 소모된 배지는 공지된 유사분열물질, 혈관형성 인자, 또는 간 재생과 관련되는 것으로 기존 문헌에서 증명된 다른 단백질에 대해 화학발광 멀티플렉스 어레이 검출 (Aushon) 및/또는 계약된 면역검정 멀티플렉스 서비스 (Myriad Rules Based Medicine)를 이용하여 검정되었다. 시스템 항정 상태 농도는 관류 유속 및 시간을 곱함으로써 "용량"으로 전환되고, 이후 정상적인 건강한 개체의 문헌 값과 비교되었고, 그리고 용량이 이들 수준을 초과하여 증가할 것으로 예상될 수 있는 질량이 결정되었다.

결과

표 III: 분비된 인자

인자	시스템 수준 (카트리지 마다)	용량 ¹ (4 카트리지)	정상적인 혈청 수준	정상적인 혈청 양 ²	시스템 첨가제 양 ³
HGF	50 pg/mL	1.5 μg/d	574 pg/mL	1.7 μg	0.5 ng
TGFα	400 pg/mL	11 μg/d	150 pg/mL	450 ng	3.6 ng
암피레굴린	300 pg/mL	8.5 μg/d	200 pg/mL	60 ng	2.8 ng
HB-EGF	5.5 pg/mL	167 ng/d	5 pg/mL	15 ng	0.06 ng
PDGF-BB	190 pg/mL	5.5 μg/d	8.5 ng/mL	25.5 ng	1.8 ng
VEGF	117 ng/mL	3.5 mg/d	150 pg/mL	450 ng	1,167 ng
VEGF-C	140 pg/mL	4 μg/d	2.8 ng/mL	8.4 pg	1.3 ng
PLGF	850 pg/mL	25 μg/d	8 pg/mL	24 ng	8.3 ng
ANG2	800 pg/mL	23 μg/d	1.1 mg/mL	3.3 pg	7.6 ng
SCF	75 pg/mL	2.1 μg/d	3.3 ng/mL	9.9 pg	0.7 ng
EPO	200 mlU/ml	5,760 mlU/d	4 27 mU/mL	12-81 U	1.9 mlU

¹ 실험적으로 결정된 항정 상태 성장 시스템 농도 x 카트리지 마다 유속 x 시간.

² 정상 혈청 수준 x 3L 평균 신체 혈장 용적.

³ 용량 x 3L 평균 신체 혈장 용적.

토론

이들 데이터는 C3A 세포가 성장, 혈관형성 및 조혈 인자를 비롯하여, 간 재생에 관여하는 것으로 보고된 다양한 단백질을 분비한다는 것을 증명한다.

대부분의 성장 인자, 사이토킨 및 호르몬은 세포내 신호전달 캐스케이드를 촉발하는, 세포 표면 상에서 수용체 티로신 키나아제를 통해 작용한다. 간세포의 경우에, 이들은 MET 및 EGFR을 포함한다. Fas 수용체에 작용하는 리간드는 아폽토시스성 경로를 신호할 수 있다. 이들 복수 신호전달 경로의 통합은 세포가 증식, 생존, 또는 아폽토시스를 향하여 유도되는 지를 유발한다.

HGF는 가장 폭넓게 공지된 간세포 유사분열물질이지만, 다른 유사분열물질은 전환 성장 인자 알파 (TGFα), 암피레굴린, 헤파린-결합 EGF (HB-EGF), 그리고 혈소판 유래 성장 인자 BB (PDGF-BB)를 포함한다. 이들 모든 성장 인자는 C3A 세포에 의해 계측가능한 양으로 분비되었다.

간세포 유사분열물질에 더하여, 간을 재생하는 것은 증가된 조직 질량을 뒷받침하기 위한 증가된 혈관 공급을 필요로 한다. 혈관 내피 성장 인자 (VEGF)는 가장 폭넓게 인정된 혈관형성 인자이다. 이것은 HGF를 분비하도록 사인 곡선 내피 세포를 자극한다. VEGF 및 다른 혈관형성 인자, VEGF-C, 태반 성장 인자 (PLGF), 그리고 안지오포이에틴2 (ANG2)가 C3A 세포에 의해 생산되었다.

또한, 줄기 세포 인자 (SCF) 및 에리트로포이에틴 (EPO)이 C3A 세포에 의해 분비되었다. SCF는 골수 세포의 조혈을 자극하고, GM-CSF와 상승적으로 작용하여 담관세포 및 간세포에서 증식을 유도하고, 그리고 IL-1β 노출에 대한 응답으로 C3A 세포에서 증가한다. EPO는 증가된 간 중량 및 더욱 높은 유사분열 지수로, 쥐 간절제술 모형에서 생존을 향상시킨다.

이들 단백질은 간세포 개체군에 직접적으로 작용하거나, 또는 다른 상주성 세포 개체군, 예를 들면, 내피 세포, 성상 세포 또는 면역 세포를 자극함으로써 간세포에 간접적으로 작용하여 간세포-유익한 인자를 생산할 수 있었다.

게다가, 이들 구조성으로 분비된 인자 중에서 다수는 C3A 세포가 간염을 앓는 환자 내에 존재할 수 있는 친염증성 사이토킨에 노출될 때 상향조절되는 것으로 밝혀졌다. 따라서 단백질 분비의 수준이 환자 치료 동안 더욱 증가될 수 있다.

이들 데이터는 C3A 세포가 치료적 유익성에 대한 복수 기전의 일부로서 친-간세포 매개체의 환경을 제공함으로써 간 재생에 기여한다는 것을 암시하다.

결론

C3A 세포는 간 재생에 관여하는 것으로 공지된 다양한 분비된 인자를 생산할 수 있다. 이것은 본 발명의 시스템으로 간부전 환자의 치료 동안 간세포의 직접적인 자극을 통해 직접적으로, 또는 다른 상주성 세포 개체군과의 상호작용을 통해 간접적으로 간 재생을 조장할 수 있다.

실시예 2

간 세포의 항아폽토시스, 생존 및/또는 증식 능력 증진

본 연구는 다양한 간 세포 유형의 세포 생존 및 증식 능력을 증진하는, 간 재생의 차후 시기에서 C3A 세포 분비된 인자에 대한 잠재적인 역할을 증명한다.

목적

본 연구의 목적은 간세포 생존, 복제 및/또는 간 재생에 대한 유익한 효과를 갖는 것으로 기존 문헌에서 보고된 인자를 분비하는 C3A 세포의 능력을 평가하는 것이었다. 이후, 이런 인자를 찾고 다양한 간 세포 유형에 대한 선별된 인자의 효과를 평가하는 것이었다.

재료와 방법

본 발명의 시스템은 급성 간세포성 손상 및 알코올 이용에 이차적인 간부전을 앓는 개체를 지속적으로 치료하도록 의도된, 보조적인 장치 성분 및 지지 회로망을 갖는 4개의 대사작용-활성 세포 카트리지 (C3A 세포)로 구성된 인간 간 세포-기초된 간 치료제이다. C3A 세포 카트리지 소모된 배지는 공지된 유사분열성, 혈관형성 및 다른 재생 인자에 대한 계약된 ELISA 멀티플렉스 (Myriad) 또는 화학발광 멀티플렉스 어레이 검출 (Aushon Ciraplex) 검정을 이용하여 검정되었다.

일차 인간 간세포 (PHH) 아폽토시스 모형은 Berasain et al. (J Biol Chem. 280(19):19012-20 (2005))로부터 조정되었다. 아폽토시스는 성숙 C3A 세포 카트리지에서 Williams E 배지 (w/보충물, w/o 덱사메타손, [Gibco]), 또는 Williams E 배지의 정적 배양에 의해 제조된 시스템 조건부 배지 (CM)와 함께 3 시간 배양 이후에 항-CD95 (Fas) 항체 (EOS9.1, eBioscience)를 이용하여 PHH (Gibco)에서 유도되었다. 아폽토시스는 카스파제-Glo 3/7 검정 (Promega), 아넥신 V (Roche) 및 웨스턴 면역블롯 (일차 항체, Cell Signaling)에 의해 계측되었다.

인간 대동맥 내피 세포 (HAEC) 혈관형성 인자 모형은 트랜스웰에서 C3A 세포와의 공동배양에 의해 간 사인 곡선 EC (LSEC)에 대한 대용물로서 개발되거나, 또는 성숙 카트리지에서 EGM-2 배지 (Lonza)의 정적 배양에 의해 제조된 CM으로 처리되었다. 선별된 혈관형성 인자의 누적 발현은 24, 48 및 72 시간에 Aushon Ciraplex에 의해 상층액에서 계측되었다.

결과

C3A 세포 카트리지 소모된 배지.

시스템 소모된 배지 (성숙 카트리지로부터 수집되고, 유동 하에 항정 상태 조건에서 유지된 배지)의 평가는 C3A 세포가 다수의 인정된 성장 및 혈관형성 인자를 생산한다는 것을 증명하였다 (실시예 1의 표 III).

간의 다양한 세포에 대한 이들 인자의 잠재력 효과를 사정하기 위해, 일련의 세포-기초된 모형이 개발되었다.

PHH 아폽토시스 모형.

Fas-효현제 항체로 PHH 배양액의 공격 접종에 앞서 3 시간에 투여된 CM은 카스파제 활성에 의해 계측될 때, Fas 매개된 아폽토시스를 유의미하게 감소시켰다 (도면 1). CM은 또한, 처리되지 않은 간세포에서 자발적 아폽토시스를 감소시켰다. CM-처리된 PHH는 아넥신 V 염색에 의해 가시화될 때, Fas-효현제-처리된 PHH와 대비하여 더욱 정상적인 크기 및 조약돌 형태를 유지하였다 (데이터 제시되지 않음).

웨스턴 면역블롯은 CM 또는 CM 플러스 Fas-효현제로 처리된 세포로부터 용해물에서 EGFR과 연관된 신호전달 단백질 (AKT, ERK1/2 및 STAT3)의 인산화를 보여주었다. 하지만, 처리되지 않은 대조 및 변하는 정도에서 Fas-처리된 세포에서도 이들 동일한 신호전달 단백질의 인산화가 관찰되었다 (데이터 제시되지 않음).

HAEC 혈관형성 인자 모형.

72 시간에 걸쳐 매일 투여된 CM은 HAEC에 의한 PLGF 분비를 시간-의존성 방식으로 유의미하게 증가시켰다 (도면 2).

도면 범례

도면 1: CM은 PHH에서 아폽토시스를 감소시키고, 카스파제 활성은 CM의 3n 존재에서, 처리되지 않은 및 Fas 효현제-처리된 PHH 배양액 둘 모두에서 감소되었다. 오차는 96-웰 형식에서 n=8 웰의 SD이다 (2 CM- 처리된 대 서로를 제외하고 모든 비교에 대해 ^***p<0.001. Tukey 사후 검증과 함께 일원 변량분석 (ANOVA)).

도면 2: CM은 HAEC에 의한 PLGF 분비를 증가시킨다. HAEC 배양액은 EGM-2 배지보다 CM의 존재에서 훨씬 많은 PLGF를 분비한다. 오차 막대는 24-웰 형식에서 n=2 복제물의 SD이다.

토론

간 재생은 복수 경로 및 세포 유형을 수반하는 고도로 조직화된 사건이다. 대사작용-활성 C3A 세포는 비세포 기초된 요법이 달성할 가능성이 낮은 방식으로 이들 복수 세포 유형 및 경로에 충격을 줌으로써 간 재생에 기여하는 잠재력을 제공한다.

본 연구는 세포 성장, 생존, 재생 및 조혈에서 인정된 역할을 갖는 C3A 세포에 의해 분비된 11개 인자를 강조한다. 제조 동안 4개의 능동 카트리지에 의해 생산된 각 인자의 항정 상태 양은 표 III에서 정상적인 혈청 값과 비교된다. 치료된 개체에서 예상된 혈장 농도의 약동학적 모형화는 여기에서 제공되지 않는다.

간의 세포에 대한 이들 인자의 잠재력 효과의 사정을 시작하고 시스템의 작용 기전을 더욱 잘 이해하기 위해, CM이 배양 중인 PHH에 투여되었다. CM은 처리되지 않은 세포 및 Fas-효현제 항체에 의해 아폽토시스를 향하여 유도된 세포 둘 모두에서 생존을 증진하는 것으로 밝혀졌다 (도면 1).

유사한 모형이 부분적인 간절제술 후 간 재생에 가장 필요한 EGFR 리간드인 AR에 의존하는 것으로 밝혀졌다. 하지만, AR은 이러한 모형에서 20 nM에서 방어적이지 않았다 (데이터 제시되지 않음). CM의 친생존 효과가 EGFR 활성화에 의해 매개되는 지를 결정하기 위해, 처리되지 않은 세포 및 CM과 함께 및 이것 없이 Fas-효현제-처리된 C3A 세포로부터 세포 용해물이 웨스턴 면역블롯에 의해 평가되었다. AKT, ERK1/2 및 STAT3의 인산화가 밝혀졌는데, 이것은 EGFR의 활성화를 암시하였다. C3A 세포는 다수의 EGFR 리간드 (TGFα, AR, HB-EGF)를 분비한다. CM의 친-PHH 생존 효과는 HepG2 세포 (C3A 세포의 부모 세포주)로부터 CM이 배양 중인 인간 태아 간세포 성장을 뒷받침하는 필수적인 인자를 내포한다는 것을 보여주는 데이터와 일치한다.

LSEC 및 LSEC의 골수 선조체 세포 (BMSPC)는 간 VEGF에 대한 응답으로 HGF의 증가된 생산에 의해 간 재생에 참여하는 것으로 나타났다. C3A 세포 분비된 VEGF의 효과는 LSEC의 HAEC 공동배양 대용 모형에서 평가되었다 (HAEC의 더욱 큰 이용가능성으로 인해). 비록 HGF가 유의미하게 증가되진 않았지만 (DNS), PLGF의 분비는 CM의 투여 후 24 시간에, 처리되지 않은 HAEC에 비하여 5-배 증가하였다. HAEC는 상기 모형의 72-시간 길이 동안 CM의 존재에서 증가된 PLGF를 지속적으로 산출하였다 (도면 2). PLGF는 기관형성을 위해 골수로부터 VEGFR1+ 줄기 세포를 모집하는 것으로 주장된다.

SCF 및 EPO 둘 모두 G-CSF와 상승적으로 작용한다; SCF는 담관세포 및 간세포에서 증식을 유도하고, 그리고 EPO는 비대상성 간경변을 앓는 환자에서 생존을 증가시킨다. G-CSF 분비가 IL-1β 및 IL-6에 대한 응답으로 C3A 세포에서 증가한다 (데이터 제시되지 않음).

결론

본 발명의 C3A 세포는 세포 성장, 생존, 재생 및 조혈에서 충분히 확립된 역할을 갖는 다양한 분비된 인자를 생산한다. 이들 세포-기초된 모형은 PHH 아폽토시스를 예방하고 HAEC PLGF 분비를 증강시켰다. 이것은 치료 동안 간세포의 자극에 의해 직접적으로, 또는 다른 상주성 세포 개체군과의 상호작용에 의해 간접적으로 간 재생을 조장할 수 있다.

실시예 3

C3A 세포는 가용성 Fas (sFAS)의 표피 성장 인자 수용체 (EGFR) 활성화 및 분비를 통해 일차 인간 간세포에서 Fas-유도된 아폽토시스를 저해한다

알코올 간염 (AH)의 홀마크는 증가된 간세포 사멸, 증가된 간 기능장애 및 죽어가는 세포가 효과적으로 제거되지 않으면 추가의 염증 반응이다. 본 발명자들은 심각한 급성 AH (sAAH)의 치료에서 본 발명의 C3A 세포를 이용하여 본 발명의 시스템을 임상적으로 평가한다. 본 발명자들은 3차원 생물반응기에서 성장된 C3A 세포로부터 조건부 배지 (CM)가 간세포 유사분열물질 (암피레굴린, TGFα, HGF, HB-EGF 및 PDGF-BB)을 내포하고, 그리고 카스파제 3/7 활성 및 아넥신 V 염색에 의해 계측될 때, 일차 인간 간세포 (PHH) 배양액에서 Fas-유도된 아폽토시스를 저해할 수 있다는 것을 앞서 보여주었다 (실시예 2); 하지만, 기전은 이전에 알려지지 않았다.

CM에서 리간드에 의한 표피 성장 인자 수용체 (EGFR) 활성화가 관찰된 간보호 효과를 주도할 수 있는 것으로 가정되었다. 본 연구의 목적은 CM이 Fas-유도된 아폽토시스의 모형에서 간세포 생존을 증진하는 기전을 결정하는 것이었다.

아폽토시스는 항-Fas 효현제 항체에 의해 시험관내에서 PHH에서 유도되었다. CM의 첨가는 카스파제-3/7 활성 및 아넥신 V 염색에 의해 계측될 때 아폽토시스를 유의미하게 저해하였는데, 이것은 앞서 보고된 결과를 확증하였다. 아폽토시스의 척도로서 카스파제-8 개열 산물을 검출하는 웨스턴 면역블롯팅을 이용한 새로운 데이터는 CM에 의한 EGFR의 활성화와 일치하는 패턴을 보여주었다. Fas 효현제-처리된 PHH 용해물은 증가된 개열 산물을 보여주었고, 반면 CM의 존재에서 Fas 효현제로 처리된 PHH로부터 용해물은 대조와 비교하여 개열 산물의 감소를 보여주었다. 게다가, Fas 효현제/CM-처리된 PHH에 EGFR-저해제 카넬티니브의 첨가는 Fas 효현제 단독과 유사한 개열 산물 수준을 산출하였다.

EGFR 활성화와 연관되는 것으로 알려진 단백질 (가령, MEK 1/2, ERK 1/2 및 STAT3)의 인산화는 CM-처리된 PHH의 용해물에서 증가되었고 카넬티니브로 처리된 표본에서 감소되었다.

재조합 인간 암피레굴린으로 처리는 PHH 아폽토시스를 감소시켰는데, 이러한 효과는 카넬티니브가 처리에 추가될 때 차단되었다. 하지만, 암피레굴린의 간보호 효과는 CM의 것보다 적었는데, 이것은 추가 기전 및/또는 EGFR 리간드가 관련될 수 있다는 것을 암시한다.

C3A 세포는 가용성 Fas (sFas)를 생산하는 것으로 밝혀졌다. 재조합 인간 sFas는 PHH에서 아폽토시스를 감소시키는데 효과적이었는데, 이것은 이러한 Fas-유도된 아폽토시스 모형에서 PHH의 생존에 기여하는 추가 및 신규한 인자로서 C3A 세포에 의한 sFas의 분비를 뒷받침한다.

이들 결과는 C3A 세포가 복수 기전을 통해 간세포 생존을 증진한다는 것을 증명하고, 그리고 본 발명 시스템으로 치료가 sAAH 개체에 유익성을 제공할 수 있는 가능성 있는 수단을 암시한다.

비록 본 발명이 상기 실시예에 관하여 설명되었지만, 변형과 변이는 본 발명의 사상과 범위 내에 포괄되는 것으로 이해될 것이다. 따라서, 본 발명은 다음 청구항에 의해서만 한정된다.

Claims

표적 세포의 항아폽토시스, 항피롭토시스, 항네크롭토시스, 보호, 생존, 및/또는 증식, 및/또는 표현형 조정을 유도하기 위한 조성물에 있어서, 상기 조성물은 하나 또는 그 이상의 항아폽토시스성, 친생존 및/또는 친재생 인자를 포함하고, 여기서 하나 또는 그 이상의 인자는 표 I, II 또는 III에서 진술된 것들에서 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
청구항 1에 있어서, 인자는 공급원 세포로부터 분비되는 것을 특징으로 하는 조성물.
청구항 2에 있어서, 공급원 세포는 진핵 세포인 것을 특징으로 하는 조성물.
청구항 1에 있어서, 공급원 세포는 포유류 세포인 것을 특징으로 하는 조성물.
청구항 4에 있어서, 공급원 세포는 인간 세포인 것을 특징으로 하는 조성물.
청구항 1에 있어서, 공급원 세포는 간세포인 것을 특징으로 하는 조성물.
청구항 1에 있어서, 공급원 세포는 재조합적으로 가공된 세포인 것을 특징으로 하는 조성물.
청구항 1에 있어서, 공급원 세포는 간모세포종-유래된 세포인 것을 특징으로 하는 조성물.
청구항 1에 있어서, 공급원 세포는 HepG2 세포 또는 C3A 세포인 것을 특징으로 하는 조성물.
청구항 9에 있어서, 공급원 세포는 부모 C3A 세포주로부터 클론 유도체인 것을 특징으로 하는 조성물.
청구항 1에 있어서, 표적 세포는 포유류 세포인 것을 특징으로 하는 조성물.
청구항 11에 있어서, 표적 세포는 인간 세포인 것을 특징으로 하는 조성물.
청구항 1에 있어서, 표적 세포는 간-유래된 세포인 것을 특징으로 하는 조성물.
청구항 1에 있어서, 표적 세포는 간모세포종-유래된 세포인 것을 특징으로 하는 조성물.
청구항 1에 있어서, 표적 세포는 병든 간의 세포인 것을 특징으로 하는 조성물.
청구항 15에 있어서, 질환은 간경변, 간염 또는 지방간 질환인 것을 특징으로 하는 조성물.
청구항 1에 있어서, 인자는 최소한 암피레굴린 (AR) 또는 가용성 Fas 수용체를 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
청구항 17에 있어서, 인자는 최소한 암피레굴린 (AR) 및 가용성 가용성 Fas (sFas)를 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
청구항 18에 있어서, 인자는 표 1에서 열거된 것들에서 선택되는 하나 또는 그 이상의 추가 인자를 더욱 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
청구항 1에 있어서, 인자는 표 1에서 열거된 것들에서 선택되는 하나 또는 그 이상의 유사분열물질을 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
청구항 1에 있어서, 인자는 표 1에서 열거된 것들에서 선택되는, 비-질환 관련된 세포에서 아폽토시스 관련된 신호전달을 저해하는 하나 또는 그 이상의 인자를 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
청구항 1에 있어서, 인자는 표 1에서 열거된 것들에서 선택되는, 질환 관련된 세포에서 아폽토시스를 증진하는 하나 또는 그 이상의 인자를 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
청구항 1에 있어서, 인자는 표 1에서 열거된 것들에서 선택되는, 향상된 세포 기능을 유발하는 표현형 이동을 유도하는 하나 또는 그 이상의 인자를 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
청구항 1에 있어서, 복수의 인자 각각은 최소한 1, 10, 100, 1,000, 10,000, 100,000, 1,000,000 pg/ml 또는 그 이상의 농도에서 존재하는 것을 특징으로 하는 조성물.
청구항 1에 있어서, 인자는 활성화된 성상 세포에서는 아폽토시스를 유도하지만 비활성화된 성상 세포에서는 그렇지 않은 것을 특징으로 하는 조성물.
청구항 1에 있어서, 조성물은 진핵 세포를 더욱 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
청구항 26에 있어서, 진핵 세포는 간세포 또는 간모세포종-유래된 세포인 것을 특징으로 하는 조성물.
청구항 26에 있어서, 진핵 세포는 재조합적으로 가공된 세포인 것을 특징으로 하는 조성물.
청구항 26에 있어서, 진핵 세포는 HepG2 세포, C3A 세포, 또는 부모 C3A 세포주로부터 클론 유도체인 것을 특징으로 하는 조성물.
표적 세포의 항아폽토시스, 항피롭토시스, 항네크롭토시스, 보호, 생존, 및/또는 증식, 및/또는 표현형 조정을 유도하는 방법에 있어서, 표적 세포를 청구항 1 내지 29 중에서 어느 한 항에 따른 조성물과 접촉시키고, 따라서 표적 세포의 항아폽토시스, 항피롭토시스, 항네크롭토시스, 보호, 생존, 및/또는 증식, 및/또는 표현형 조정을 유도하는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 30에 있어서, 표적 세포는 진핵 세포인 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 30에 있어서, 표적 세포는 포유류 세포인 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 32에 있어서, 표적 세포는 인간 세포인 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 30에 있어서, 표적 세포는 간세포인 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 30에 있어서, 세포는 간모세포종-유래된 세포인 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 30에 있어서, 세포는 병든 간의 세포인 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 36에 있어서, 질환은 간경변, 간염 또는 지방간 질환인 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 30에 있어서, 표적 세포는 시험관내에서 접촉되는 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 38에 있어서, 표적 세포는 고체 기질에 부착된 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 38에 있어서, 표적 세포는 반고체 기질에서 임베드된 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 30에 있어서, 표적 세포는 생체내에서 접촉되는 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 41에 있어서, 복수의 인자는 표적 세포를 내포하는 개체에 연계된 체외 혈액 해독 시스템의 능동 카트리지에서 산출되는 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 30에 있어서, 복수의 인자를 검출하는 것을 더욱 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 30에 있어서, 표적 세포는 1, 6, 24, 48, 60, 72 또는 84 시간 이상 동안 연속적으로 접촉되는 것을 특징으로 하는 방법.
개체에서 질환 또는 장애를 치료하는 방법에 있어서, 청구항 1 내지 29 중에서 어느 한 항에 따른 조성물을 개체에 투여하고, 따라서 상기 질환 또는 장애를 치료하는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 45에 있어서, 질환 또는 장애는 염증성 질환인 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 46에 있어서, 질환은 자가면역 질환 또는 자가염증성 질환인 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 47에 있어서, 질환은 간경변, 간염 및 지방간 질환으로 구성된 군에서 선택되는 간 질환인 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 45에 있어서, 조성물은 개체의 순환계에 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 49에 있어서, 조성물은 개체에 연계된 체외 혈액 해독 시스템을 통해 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 50에 있어서, 조성물은 혈액 해독 시스템의 능동 카트리지 내에 세포에 의해 산출되는 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 51에 있어서, 혈액 해독 시스템은 다음을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법:
a) 개체의 순환계에 연계되고, 그리고 한외여과물 발생기를 통해 개체로부터 혈액을 전달하고 환자에 되돌려주는 작동을 하는 혈액 회로;
b) 한외여과물 발생기에 연계되고, 그리고 한외여과물 발생기로부터 한외여과물을 뽑아내고 혈액의 세포 성분과는 관계없이 한외여과물을 처리하는 작동을 하는 재순환 회로, 여기서 처리는 복수의 인자를 포함하는 조성물을 산출하는 세포를 포함하는 능동 카트리지를 통해 한외여과물을 통과시키고, 그리고 이들 인자를 한외여과물 내로 도입하는 것을 포함하고; 그리고
c) 개체에 재도입에 앞서, 재순환 회로 내에 한외여과물 및 혈액 회로 내에 세포 성분을 재결합시키는 작동을 하는 도관 접합부.
청구항 52에 있어서, 복수의 인자를 검출하는 것을 더욱 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
청구항 49에 있어서, 조성물은 1, 6, 24, 48, 60, 72 또는 84 시간 이상 동안 연속적으로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
부모 C3A 세포주로부터 유래된 유자격 C3A 세포주에 있어서, 상기 세포주의 세포는 표 1에서 진술된 바와 같은 복수의 인자를 발현하는 것을 특징으로 하는 유자격 C3A 세포주.