KR20170139777A - 신규 미리세틴 유도체 및 이를 이용한 항염증용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 클라우세나 엑스카바타 추출물로부터 분리한 신규 미리세틴 유도체와 그 신규 미리세틴 유도체의 LPS로 자극된 마우스 대식세포주(RAW 264.7 cells)에서의 NO 생성 억제 활성에 기초하여 그 신규 미리세틴 유도체를 유효성분으로 포함하는 항염증용 조성물을 개시한다.

Description

신규 미리세틴 유도체 및 이를 이용한 항염증용 조성물{Novel Myricetin Derivative and Anti-inflammatory Composition Using the Same}

본 발명은 신규 미리세틴 유도체 및 이를 이용한 항염증용 조성물에 관한 것이다.

최근 경제가 발달함에 따라 생활환경 및 식생활의 변화로 인하여 전 세계적으로 암, 당뇨병, 고혈압, 비만 및 혈관성 질환 등의 생활습관 질환이 차지하는 비율이 지속적으로 증가하고 있다. 이와 더불어, 현대 사회의 급격한 산업 발달로 인한 환경 변화, 그리고 이에 따른 스트레스 증가 등 다양한 요인으로 인하여 면역 조절 이상으로 유발된 염증이 지속됨으로써 관련 질환의 발병이 증가하고 있다.

염증반응은 조직의 손상을 비롯하여 외부의 물리적, 화학적 자극 및 다양한 감염원에 대한 방어 반응으로서 손상된 조직을 수복하고 재생하려는 기전이다(Zamora R et al., Mol. Med. 6: 347-373 (2000); Mariathasan S and Monack DM. Nat. Rev. Immunol. 7: 31-40 (2007); Lee HN et al., Korean J. Food Sci. Technol. 43: 65-71 (2011)). 염증 반응 시에는 염증 부위에 혈장이 축적되어 세균이 분비한 독성을 희석시키며, 혈류가 증가하고, 홍반, 통증, 부종, 발열 등의 증상이 수반되게 된다. 정상적인 경우에 생체는 염증 반응을 통하여 발병 요인을 중화시키거나 제거하고 상한 조직을 재생시켜서 정상적인 구조와 기능을 회복시키지만, 지속적으로 또는 과도하게 발생된 만성 염증반응은 조직의 손상을 유발한다. 이러한 염증반응은 위, 대장, 방광 그리고 전립선암으로의 진행을 유도하며, 류마티스 관절염, 만성 감염 등 다양한 질환의 원인이 된다(Hofseth LJ and Ying L. Biochim. Biophys. Acta 1765: 74-84 (2006); Yun HY et al., Rev. Neurobiol. 10: 291-316 (1996); Stuehr DJ et al., P. Natl. Acad. Sci. USA 88: 7773-7777 (1991)).

염증반응이 일어나면 대식세포와 단핵구 등 면역세포들은 nitric oxide(NO), prostagladin E2(PGE2), tumor necrosis factor-α(TNF-α), interleukin-1β(IL-1β), IL-6, IL-8, IL-12 등의 염증 매개물질을 분비한다(Guha M and Mackman N. Cell Signal. 13: 85-94 (2001)). 염증반응의 대표적인 예로, pathogen associated molecular patterns (PAMPs)에 의한 대식세포의 toll like receptor(TLR) 신호전달체계 활성화를 들 수 있다. 그람 음성 세균의 외막(outer membrane)에 존재하는 엔도톡신(endotoxin)의 일종인 lipopolysaccharide (LPS)는, 외부 미생물에 존재하는 염증성 매개물질인 PAMPs에 속한다. 세균이 인체 내로 침투하는 경우, 대식세포 표면에서 TLR4는 MD-2 또는 CD14 등의 도움을 받아 LPS를 인식하며(Miyake K. Trends Microbiol. 12: 186-192 (2004)), 하위 신호전달체계의 활성화를 유도하며 궁극적으로 전사인자인 nuclear factor-κB(NF-κB)를 활성화한다(Youn HS. Korean. J. Food Sci. Technol. 39:481-487 (2007); Youn HS. Korean. J. Food Sci. Technol. 41: 477-482 (2009)). 핵으로 이동한 NF-κB는 염증성 cytokine(TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-8, IL-12 등), inducible nitiric oxide synthase(iNOS), cyclooxygenase-2(COX-2)의 유전자 발현을 유도하며, iNOS에 의하여 발생된 산화질소(nitric oxide; NO)는 염증발생을 심화시킨다(Noh KH et al., J. Korean Soc. Food Sci. Nutr. 40: 625-634 (2011); Weisz A et al., Biochem. J. 316: 209-215 (1996)). 대식세포에서 iNOS에 의해 과다 생성된 산화질소는 수퍼옥사이드(superoxide)와 반응하여 퍼옥시니트라이트(peroxynitrite)를 형성하고 이는 강력한 산화제로 작용하여 세포에 손상을 입힘으로써 염증과 암을 포함한 다양한 병리적 과정에 관여하는 것으로 알려져 있다(Gupta SC et al., Exp Biol Med., 236:658-671, (2011); Riehemann et al., FEBS Lett., 442:89-94(1999)).

염증의 치료제에는 이부프로펜과 같은 합성의약품, 항히스타민제, 스테로이드, 코티손, 면역억제제, 면역 항진제 등이 사용되고 있으나 치료효과가 일시적이거나 단순 증상완화, 과민반응, 면역체계 악화 등의 부작용이 많이 있고 염증의 근본적인 치료가 어렵다. 현재 항염증제로서 널리 사용되고 있는 비스테로이드성 소염제(non-steroidal anti-inflammatory drugs, NSAIDS)도 장기간 복용하게되면 위장관 장애, 간장애, 신장애 등의 심각한 부작용을 야기한다고 알려져 있다(Rainsford KD., Subcell biochem., 42:3-27, 2007; Guruprasad P. Aithal.,Rheumatology., 7:139-150, 2011; Praveen P. N. Rao et al.,Pharmaceuticals., 3:1530-1549, 2010).

따라서 항염 활성을 가지면서 부작용이 적고 효과가 지속적인 새로운 약물의 개발이 요구되고 있으며 독성이 적은 천연물을 활용한 기술개발이 이루어지고 있다. 한국 등록특허 제101303198호에서는 도토리 추출물의 항염증 효과를 개시하고 있으며, 한국 등록특허 제100556524호에서는 동백 추출물, 한국 등록특허 제100536857호에서는 다래 추출물, 한국 등록특허 제101310980호에서는 구기자 추출물, 한국 등록특허 제101385768호에서는 어성초 추출물의 항염증 효과를 개시하는 등 천연물을 이용한 연구가 활발하게 이루어지고 있으나 상업적으로 유용한 물질의 개발은 요원한 실정이다.

본 발명은 클라우세나 엑스카바타(Clausena excavata)로부터 분리된, 항염증 활성을 가지는 신규 미리세틴 유도체를 개시한다.

본 발명의 목적은 신규 미리세틴 유도체를 제공하는 데 있다.

본 발명의 다른 목적은 상기 신규 미리세틴 유도체를 이용한 항염증 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 또 다른 목적이나 구체적인 목적은 이하에서 제시될 것이다.

본 발명은 클라우세나 엑스카바타의 50% 에탄올 추출물과 이 50% 에탄올 추출물로부터 분리한 활성성분인 신규 미리세틴 유도체가 LPS로 자극된 마우스 대식세포주(RAW 264.7 cells)에서 NO 생성 억제 활성을 가짐을 확인함으로써 완성된 것이다. 여기서 클라우세나 엑스카바타는 방글라데시, 부탄, 캄보디아, 베트남, 인도 등에서 자생하는 Rutaceae 과에 속하는 식물이다.

전술한 바를 고려할 때, 본 발명은 일 측면에 있어서, 아래의 [화학식 1]로 표현되는 신규 미리세틴 유도체, 이의 이성질체, 이의 프로드럭, 이의 수화물, 또는 이의 용매화물에 관한 것이고, 다른 측면에 있어서는 (i) 클라우세나 엑스카바타 추출물 또는 (ii) 상기 신규 미리세틴 유도체, 이의 이성질체, 이의 프로드럭, 이의 수화물, 또는 이의 용매화물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 조성물에 관한 것이며, 또 다른 측면에 있어서는 (i) 클라우세나 엑스카바타 추출물 또는 (ii) 상기 신규 미리세틴 유도체, 이의 이성질체, 이의 프로드럭, 이의 수화물, 또는 이의 용매화물을 유효성분으로 포함하는 생체 내 일산화질소 과생성에 의한 질환의 치료 또는 예방용 조성물에 관한 것이다.

[화학식 1]

본 명세서에서, 이성질체는 광학 이성질체(optical isomers)를 포함한 입체 이성질체(essentially pure diastereomers)뿐만 아니라, 형태 이성질체(conformation isomers)(즉 하나 이상의 화학 결합의 그 각도만 다른 이성질체), 위치 이성질체(position isomers)(특히, 호변이성체(tautomers)) 또는 기하 이성질체(geometric isomers)(예컨대, 시스-트랜스 이성질체)를 포함하는 의미이다.

또 본 명세서에서, "프로드럭(prodrug)"은 어떤 약물을 화학적으로 변화시켜 물리적, 화학적 성질을 조절한 약물을 의미하며, 그 자체는 생리 활성을 나타내지 않지만 투여 후 체내에서 화학적 혹은 효소의 작용에 의해 원래의 약물로 바뀌어 약효를 발휘할 수 있는 약물을 의미한다.

또 본 명세서에서 "수화물(hydrate)"은 물이 결합되어 있는 화합물을 의미하며, 물과 화합물 사이에 화학적인 결합력이 없는 내포 화합물을 포함하는 의미이다.

또 본 명세서에서 "용매화물"은 용질의 분자나 이온과 용매의 분자나 이온 사이에 생긴 화합물을 의미한다.

또 본 명세서에서, "클라우세나 엑스카바타 추출물"이란 추출 대상인 클라우세나 엑스카바타 줄기, 잎, 열매, 꽃, 뿌리 등을 물, 메탄올, 에탄올, 부탄올 등의 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜, 메틸렌클로라이드, 에틸렌, 아세톤, 헥산, 에테르, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, N, N-디메틸포름아미드(DMF), 디메틸설폭사이드(DMSO), 1,3-부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 또는 이들의 혼합 용매를 사용하여 침출하여 얻어진 추출물, 이산화탄소, 펜탄 등 초임계 추출 용매를 사용하여 얻어진 추출물 또는 그 추출물을 분획하여 얻어진 분획물을 의미하며, 추출 방법은 활성물질의 극성, 추출 정도, 보존 정도를 고려하여 냉침, 환류, 가온, 초음파 방사, 초임계 추출 등 임의의 방식을 적용할 수 있다. 분획된 추출물의 경우 상기 조추출물을 특정 용매에 현탁시킨 후 극성이 다른 용매와 혼합·정치시켜 얻은 분획물, 상기 조추출물을 실리카겔 등이 충진된 칼럼에 흡착시킨 후 소수성 용매, 친수성 용매 또는 이들의 혼합 용매를 이동상으로 하여 얻은 분획물을 포함하는 의미이다. 또한 상기 추출물의 의미에는 동결건조, 진공건조, 열풍건조, 분무건조 등의 방식으로 추출 용매가 제거된 농축된 액상의 추출물 또는 고형상의 추출물이 포함된다. 바람직하게는 추출용매로서 물, 에탄올 또는 이들의 혼합 용매를 사용하여 얻어진 추출물, 더 바람직하게는 추출용매로서 물과 에탄올의 혼합 용매를 사용하여 얻어진 추출물을 의미한다.

또 본 명세서에서 "유효성분"이란 단독으로 목적하는 활성을 나타내거나 또는 그 자체는 활성이 없는 담체와 함께 활성을 나타낼 수 있는 성분을 의미한다.

또 본 명세서에서, "항염증"은 아래에서 정의되는 염증성 질환의 개선(증상의 경감), 치료, 그러한 질환의 발병 억제 또는 지연을 포함하는 의미이다.

또 본 명세서에서, 상기 "염증성 질환"이란 외부의 물리·화학적 자극 또는 박테리아, 곰팡이, 바이러스, 각종 알레르기 유발 물질 등 외부 감염원의 감염 또는 자가면역에 대한 국부적 또는 전신적 생체 방어 반응으로 특정되는 염증 반응이 일으키는 병리적 증상으로서 정의될 있다. 이러한 염증 반응은 각종 염증 매개 인자와 면역세포와 관련된 효소(예컨대 iNOS, COX-2 등) 활성화, 염증 매개 물질의 분비(예컨대, NO, TNF-α, IL-6 등의 분비), 체액 침윤, 세포 이동, 조직 파괴 등의 일련의 복합적인 생리적 반응을 수반하며, 홍반, 통증, 부종, 발열, 신체의 특정 기능의 저하 또는 상실 등의 증상에 의해 외적으로 나타난다. 상기 염증성 질환은 급성, 만성, 궤양성, 알레르기성 또는 괴사성을 띨 수 있으므로, 어떠한 질환이 상기와 같은 염증성 질환의 정의에 포함되는 한 그것이 급성이든지, 만성이든지, 궤양성이든지, 알레르기성이든지 또는 괴사성이든지를 불문한다. 구체적으로 상기 염증성 질환에는 천식, 알레르기성 및 비-알레르기성 비염, 만성 및 급성 비염, 만성 및 급성 위염 또는 장염, 궤양성 위염, 급성 및 만성 신장염, 급성 및 만성 간염, 만성 폐쇄성 폐질환, 폐섬유증, 과민성 대장 증후군, 염증성 통증, 편두통, 두통, 허리 통증, 섬유 근육통, 근막 질환, 바이러스 감염(예컨대, C형 감염), 박테리아 감염, 곰팡이 감염, 화상, 외과적 또는 치과적 수술에 의한 상처, 프로스타글라딘 E 과다 증후군, 아테롬성 동맥 경화증, 통풍, 관절염, 류머티스성 관절염, 강직성 척추염, 호지킨병, 췌장염, 결막염, 홍채염, 공막염, 포도막염, 피부염(아토피성 피부염 포함), 습진, 다발성 경화증 등이 포함될 것이다.

또 본 명세서에서, "생체 내 일산화질소 과생성에 의한 질환"은 상기 열거된 염증성 질환, 천식, 알츠하이머(Alzheimer) 병, 파킨슨(Parkinson) 병, 다중 경화증, 경화증, 타가이식 거부증 등을 포함하는 의미이다. 이와 관련하여 보다 구체적인 것은 한국 공개특허 제1999-022174호 및 한국 공개특허 제1999-022174호에 인용된 문헌들을 참조할 수 있으며, 상기 한국 공개특허 제1999-022174호와 여기에 인용된 문헌들은 모두 본 명세서의 일부로서 간주된다.

본 발명의 항염증용 조성물 등은 그 유효성분을 용도, 제형, 배합 목적 등에 따라 치료를 의도하는 염증성 질환의 개선 활성 등을 나타낼 수 있는 한 임의의 양(유효량)으로 포함할 수 있는데, 통상적인 유효량은 조성물 전체 중량을 기준으로 할 때 0.001 중량 % 내지 15 중량 % 범위 내에서 결정될 것이다. 여기서 "유효량"이란 그 적용 대상인 포유동물 바람직하게는 사람에게 의료 전문가 등의 제언에 의한 투여 기간 동안 본 발명의 조성물이 투여될 때, 염증성 질환 등의 개선, 치료, 또는 그러한 병리적 증상의 발병 억제/지연 등 의도한 의료적·약리학적 효과를 나타낼 수 있는 유효성분의 양을 말한다. 이러한 유효량은 당업자의 통상의 능력 범위 내에서 실험적으로 결정될 수 있다.

본 발명의 항염증 조성물 등은 유효성분 이외에, 항염증 효과 등의 상승·보강을 위하여 이미 안전성이 검증되고 항염증 활성 등을 갖는 것으로 공지된 임의의 화합물이나 천연 추출물을 추가로 포함할 수 있다. 구체적으로 그러한 화합물 또는 추출물로서는 건강기능식품에관한법률에 따른 건강기능식품공전(식약처 고시, 건강기능식품의 기준 및 규격)상의 MSM(dimethylsulfonylmethane), N-아세틸글루코사민, 글루코사민, 그리고 개별인정을 받은 CMO 함유 FAC(Fatty acid Complex), 가시오갈피 등의 복합추출물, 강황 추출물, 닭가슴 연골 분말, 로즈힙 분말, 보스웰리아 추출물, 비즈왁스알코올, 전칠삼 추출물 등의 복합물, 지방산 복합물, 차조기 등의 복합 추출물, 초록입홍합 추출 오일, 호프 추출물, 황금 추출물 등의 복합물 등을 들 수 있다. 이러한 화합물 또는 천연 추출물은 본 발명의 항염증 조성물에 그 유효성분과 함께 하나 이상 포함될 수 있다.

본 발명의 항염증 조성물 등은 구체적인 양태에 있어서, 식품 조성물로서 파악할 수 있다.

본 발명의 식품 조성물은 어떠한 형태로도 제조될 수 있으며, 예컨대 차, 쥬스, 탄산음료, 이온음료 등의 음료류, 우유, 요구르트 등의 가공 유류, 껌류, 떡, 한과, 빵, 과자, 면 등의 식품류, 정제, 캡슐, 환, 과립, 액상, 분말, 편상, 페이스트상, 시럽, 겔, 젤리, 바 등의 건강기능식품 제제류 등으로 제조될 수 있다. 또 본 발명의 식품 조성물은 법률상·기능상의 구분에 있어서 제조·유통 시점의 시행 법규에 부합하는 한 임의의 제품 구분을 띨 수 있다. 예컨대 건강기능식품에관한법률에 따른 건강기능식품이거나, 식품위생법의 식품공전(식약처 고시, 식품의 기준 및 규격)상 각 식품유형에 따른 과자류, 두류, 두유류, 발효음료류, 특수용도식품 등일 수 있다.

본 발명의 식품 조성물에는 그 유효성분 이외에 식품첨가물이 포함될 수 있다. 식품첨가물은 일반적으로 식품을 제조, 가공 또는 보존함에 있어 식품에 첨가되어 혼합되거나 침윤되는 물질로서 이해될 수 있는데, 식품과 함께 매일 그리고 장기간 복용되므로 그 안전성이 보장되어야 한다. 식품위생법에 따른 식품첨가물공전(식약처 고시, 식품첨가물 기준 및 규격)에는 안전성이 보장된 식품첨가물이 화학적 합성품, 천연 첨가물, 혼합 제제류로 구분하여 한정적으로 규정되어 있다.

이들 식품첨가물은 기능적 측면에 있어서는 감미제, 풍미제, 보존제, 유화제, 산미료, 점증제 등으로 구분될 수 있다.

감미제는 식품에 적당한 단맛을 부여하기 위하여 사용되는 것으로, 천연의 것이거나 합성된 것을 사용할 수 있다. 바람직하게는 천연 감미제를 사용하는 경우인데, 천연 감미제로서는 옥수수 시럽 고형물, 꿀, 수크로오스, 프룩토오스, 락토오스, 말토오스 등의 당 감미제를 들 수 있다.

풍미제는 맛이나 향을 좋게 하기 위하여 사용될 수 있는데, 천연의 것과 합성된 것 모두 사용될 수 있다. 바람직하게는 천연의 것을 사용하는 경우이다. 천연의 것을 사용할 경우에 풍미 이외에 영양 강화의 목적도 병행할 수 있다. 천연 풍미제로서는 사과, 레몬, 감귤, 포도, 딸기, 복숭아 등에서 얻어진 것이거나 녹차잎, 둥굴레, 대잎, 계피, 국화 잎, 자스민 등에서 얻어진 것일 수 있다. 또 인삼(홍삼), 죽순, 알로에 베라, 은행 등에서 얻어진 것을 사용할 수 있다. 천연 풍미제는 액상의 농축액이나 고형상의 추출물일 수 있다. 경우에 따라서 합성 풍미제가 사용될 수 있는데, 합성 풍미제는 에스테르, 알콜, 알데하이드, 테르펜 등이 이용될 수 있다.

보존제로서는 소듐 소르브산칼슘, 소르브산나트륨, 소르브산칼륨, 벤조산칼슘, 벤조산나트륨, 벤조산칼륨, EDTA(에틸렌디아민테트라아세트산) 등이 사용될 수 있고, 또 유화제로서는 아카시아검, 카르복시메틸셀룰로스, 잔탄검, 펙틴 등을 들 수 있으며, 산미료로서는 연산, 말산, 푸마르산, 아디프산, 인산, 글루콘산, 타르타르산, 아스코르브산, 아세트산, 인산 등이 사용될 수 있다. 산미료는 맛을 증진시키는 목적 이외에 미생물의 증식을 억제할 목적으로 식품 조성물이 적정 산도로 되도록 첨가될 수 있다.

점증제로서는 현탁화 구현제, 침강제, 겔형성제, 팽화제 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 식품 조성물은 전술한 바의 식품첨가물 이외에, 기능성과 영양성을 보충, 보강할 목적으로 당업계에 공지되고 식품첨가물로서 안정성이 보장된 생리활성 물질이나 미네랄류를 포함할 수 있다.

그러한 생리활성 물질로서는 녹차 등에 포함된 카테킨류, 비타민 B1, 비타민 C, 비타민 E, 비타민 B12 등의 비타민류, 토코페롤, 디벤조일티아민 등을 들 수 있으며, 미네랄류로서는 구연산 칼슘 등의 칼슘 제제, 스테아린산마그네슘 등의 마그네슘 제제, 구연산철 등의 철 제제, 염화 크롬, 요오드칼륨, 셀레늄, 게르마늄, 바나듐, 아연 등을 들 수 있다.

본 발명의 식품 조성물에는 전술한 바의 식품첨가물이 제품 유형에 따라 그 첨가 목적을 달성할 수 있는 적량으로 포함될 수 있다.

본 발명의 식품 조성물에 포함될 수 있는 기타의 식품첨가물과 관련하여서는 식품공전이나 식품첨가물 공전을 참조할 수 있다.

본 발명의 항염증용 조성물 등은 다른 구체적인 양태에 있어서는 약제학적 조성물로 파악될 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 유효성분 이외에 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하여 당업계에 공지된 통상의 방법으로 투여 경로에 따라 경구용 제형 또는 비경구용 제형으로 제조될 수 있다. 여기서 "약제학적으로 허용되는" 의미는 유효성분의 활성을 억제하지 않으면서 적용(처방) 대상이 적응 가능한 이상의 독성을 지니지 않는다는 의미이다.

본 발명의 약제학적 조성물이 경구용 제형으로 제조될 경우, 적합한 담체와 함께 당업계에 공지된 방법에 따라 분말, 과립, 정제, 환제, 당의정제, 캡슐제, 액제, 겔제, 시럽제, 현탁액, 웨이퍼 등의 제형으로 제조될 수 있다. 이때 약제학적으로 허용되는 적합한 담체의 예로서는 락토스, 글루코스, 슈크로스, 덱스트로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨 등의 당류, 옥수수 전분, 감자 전분, 밀 전분 등의 전분류, 셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 에틸셀룰로오스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필메틸셀룰로오스 등의 셀룰로오스류, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 마그네슘 스테아레이트, 광물유, 맥아, 젤라틴, 탈크, 폴리올, 식물성유 등을 들 수 있다. 제제화활 경우 필요에 따라 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 및/또는 부형제를 포함하여 제제화할 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물이 비경구용 제형으로 제조될 경우, 적합한 담체와 함께 당업계에 공지된 방법에 따라 주사제, 경피 투여제, 비강 흡입제 및 좌제의 형태로 제제화될 수 있다. 주사제로 제제화활 경우 적합한 담체로서는 멸균수, 에탄올, 글리세롤이나 프로필렌 글리콜 등의 폴리올 또는 이들의 혼합물을 들 수 있으며, 바람직하게는 링거 용액, 트리에탄올 아민이 함유된 PBS(phosphate buffered saline)나 주사용 멸균수, 5% 덱스트로스 같은 등장 용액 등을 사용할 수 있다. 경피 투여제로 제제화할 경우 연고제, 크림제, 로션제, 겔제, 외용액제, 파스타제, 리니멘트제, 에어롤제 등의 형태로 제제화될 수 있다. 비강 흡입제의 경우 디클로로플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄, 이산화탄소 등의 적합한 추진제를 사용하여 에어로졸 스프레이 형태로 제제화될 수 있으며, 좌제로 제제화할 경우 그 기제로는 위텝솔(witepsol), 트윈(tween) 61, 폴리에틸렌글리콜류, 카카오지, 라우린지, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르류, 폴리옥시에틸렌 스테아레이트류, 소르비탄 지방산 에스테르류 등이 사용될 수 있다.

약제학적 조성물의 제제화와 관련하여서는 당업계에 공지되어 있으며, 구체적으로 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences(19th ed., 1995)] 등을 참조할 수 있다. 상기 문헌은 본 명세서의 일부로서 간주 된다.

본 발명의 약제학적 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태, 체중, 성별, 연령, 환자의 중증도, 투여 경로에 따라 1일 0.001mg/kg ~ 10g/kg 범위, 바람직하게는 0.001mg/kg ~ 1g/kg 범위일 수 있다. 투여는 1일 1회 또는 수회로 나누어 이루어질 수 있다. 이러한 투여량은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 아니 된다.

본 발명의 항염증용 조성물은 다른 구체적인 양태에 있어서, 화장료 조성물로 파악할 수 있다. 본 발명의 항염증용 조성물이 화장료 조성물로 파악될 경우, 그 용도는 염증성 피부 자극의 완화로 이해될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 그 유효성분 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들, 예컨대, 안정화제, 용해화제, 계면활성제, 비타민, 색소 및 항료와 같은 통상적인 보조제, 및 담체를 포함할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 항염증 활성 등을 나타내는 그 유효성분을 포함하는 것을 제외하고는 당업계에 통상적으로 행하여지는 화장료 조성물의 제조방법에 따라 제조할 수 있다.

전술한 바와 같이, 본 발명에 따르면 신규 미리세틴 유도체와, 그 신규 미리세틴 유도체 등을 유효성분으로 포함하는 항염증용 조성물 등을 제공할 수 있으며, 더불어 신규 미리세틴 유도체 등을 유효성분으로 포함하는 생체 내 일산화질소 과생성에 의한 질환의 예방 또는 치료용 조성물을 제공할 수 있다.

본 발명의 항염증용 조성물 등은 염증성 질환의 개선 등의 용도, 염증성 피부 자극의 완화 용도 등으로 식품, 화장품, 약품 등으로 제품화될 수 있다.

도 1은 신규 미리세틴 유도체의 분리 도식도이다.
도 2는 신규 미리세틴 유도체의 ¹H NMR 데이터이다.
도 3은 신규 미리세틴 유도체의 ¹³C NMR 데이터이다.
도 4는 신규 미리세틴 유도체의 COSY-NMR 스펙트럼이다.
도 5는 신규 미리세틴 유도체의 HMBC-NMR 데이터이다.
도 6은 신규 미리세틴 유도체의 HSQC-NMR 데이터이다.
도 7은 신규 미리세틴 유도체의 ESI-MS 데이터이다.
도 8 및 9는 클라우세나 엑스카바타 추출물과 신규 미리세틴 유도체가 LPS로 자극된 마우스 대식세포주(RAW 264.7 cells)에서 NO 생성 억제 활성을 가짐을 보여주는 결과이다.
도 10 및 11은 클라우세나 엑스카바타 추출물과 신규 미리세틴 유도체의 LPS로 자극된 마우스 대식세포주(RAW 264.7 cells)에서의 세포독성 결과를 보여주는 결과이다.

이하 본 발명을 실시예 및 실험예를 참조하여 설명한다. 그러나 본 발명의 범위가 이러한 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.

< 실시예 > 클라우세나 엑스카바타 추출물의 제조와 활성 화합물 분리 및 동정

< 실시예 1> 클라우세나 엑스카바타 추출물의 제조

건조된 클라우세나 엑스카바타(Clausena excavata) 잎과 줄기 분쇄물 200g에 50% 에탄올 1L를 가하여 상온에서 24시간 2회 침지 반복추출 후 여과지로 여과하였다. 얻어진 50% 에탄올 여액을 가압 농축 후 동결건조하여 분말 상의 추출물을 얻었다.

< 실시예 2> 활성 화합물 분리

상기 얻어진 추출물을 증류수에 현탁시킨 후 헥산, 디클로로메탄, 에틸아세테이트, 부탄올로 순차적으로 용매 분획한 후, 상기 추출물과 이들 분획물의 항염증 활성(LPS로 자극된 대식세포에서의 NO 생성 억제 활성)을 평가하여 가장 활성이 우수한 것으로 나타난 부탄올 분획물에 대하여, 이동상 아세토니트릴-물을 기울기 용리법(0분; 15% 아세토니트릴, 15분; 15% 아세토니트릴, 35분; 30% 아세토니트릴, 40분; 100% 아세토니트릴)으로 역상 컬럼 (RP-C₁₈) 분취 고성능액체크로마토그래피를 수행하여 4개의 소분획(#120-B-1 내지 #120-B-4)의 얻었고, 2번 소분획(#120-B-2)에 대해서 동일한 이동상으로 기울기 용리법으로 역상 컬럼 (RP-C₁₈) 분취 고성능액체크로마토그래피를 수행하여 4개의 소분획으로 나누고(#120-B-2-1 내지 #120-B-2-4), 1번 소분획(#120-B-2-1)으로부터 활성 화합물을 분리하였다. 도 1에 활성 화합물 분리 도식도가 나타나 있다.

< 실시예 3> 활성 화합물 동정

상기 분리한 활성 화합물에 대해 물리화학적 및 분광학적 분석을 실시하였다.

노란색의 무정형 고체;

¹H-NMR (700 MHz, methanol-d ₄ ) δ 7.53 (2H, s, H-2', 6'), 6.38 (1H, d, J = 2.1 Hz, H-8), 6.24 (1H, d, J = 2.1 Hz, H-6), 5.43 (1H, d, J = 1.4 Hz, H-1"), 5.42 (2H, d, J = 1.4 Hz, H-1''', 1""), 4.21 (1H, dd, J = 3.5, 1.4 Hz, H-2"), 4.20 (2H, dd, J = 3.5, 1.4 Hz, H-2''', 2""), 3.98 (2H, dd, J = 9.8, 3.5 Hz, H-3''', 3""), 3.91 (2H, dq, J = 9.8, 6.3 Hz, H-5''', 5""), 3.71 (1H, dd, J = 9.8, 3.5 Hz, H-3"), 3.52 (2H, t, J = 9.8 Hz, H-4''', 4""), 3.37 (1H, dq, J = 9.8, 6.3Hz, H-5"), 3.35 (1H, t, J = 9.8 Hz, H-4"), 1.35 (6H, d, J = 6.3 Hz, H-6''', 6""), 0.99 (3H, d, J = 6.3 Hz, H-6");

¹³C-NMR (175 MHz, methanol-d ₄ ) δ 179.6 (C-4), 166.0 (C-7), 163.3 (C-5), 158.5 (C-2, 9), 146.8 (C-3', 5'), 143.1 (C-4'), 136.3 (C-3), 122.1 (C-1'), 115.2 (C-2', 6'), 106.0 (C-10), 103.3 (C-1'), 102.4 (C-1''', 1""), 100.0 (C-6), 94.7 (C-8), 73.9 (C-4''', 4""), 73.2 (C-4"), 72.1 (C-3''', 3""), 72.2 (C-3", 5"), 71.9 (C-2''', 2""), 71.8 (C-2"), 71.1 (C-5''', 5""), 18.2 (C-6''', 6""), 17.8 (C-6");

상기 활성 화합물은 ESI-MS (757 [M+H]⁺)로부터 분자식이 C₃₃H₄₀O₂₀임을 알 수 있었고, 상기 ¹H-NMR 데이터 및 ¹³C-NMR 데이터 그리고 도 4 내지 6의 COSY-NMR 데이터, HMBC-NMR 데이터, HSQC-NMR 데이터로부터 활성 화합물은 상기 [화학식 1]의 구조를 가지는 것으로 확인하고 기존 문헌을 검색한 결과 기존에 보고되지 아니한 신규 화합물로 동정하였으며, 미리세틴 3,3',5'-트리-알파-엘-람노피라노시드(Myricetin 3,3'5'-tri-α-L-rhamnopyranside)로 명명하였다.

< 실험예 > 항염증 활성 실험

마우스 대식세포인 RAW264.7 cell에서 상기 실시예의 클라우세나 엑스카바타 추출물과 상기 분리·동정한 활성 화합물(#120-B-2-1)에 대한 세포 내 항염 활성을 평가하기 위해 96 well plate에 5×10⁴cells/well의 세포 수로 분주하고 37℃, 5% CO₂의 조건에서 24시간 동안 배양하였다. 96 well plate에 시료를 농도별로 1시간 동안 처리한 뒤, LPS (Lipopolysacharide) 1㎍/ml를 처리하고 24시간 동안 배양하여 항염 활성 평가에 활용하였다. NO assay를 통한 항염 활성 평가는 griess A, B reagent를 이용한 방법으로, 1% sulfanilamide, 0.1% N-(1-naphtyl)ethylenediamine dihydrochloride reagent를 1:1 비율로 혼합하여 사용하였다. 96 well plate에서 시료 처리 후 37℃, 5% CO₂의 조건에서 24시간 동안 배양된 배지의 상등액을 griess (A+B) reagent와 1:1 비율로 각각 50㎕씩 혼합하여 10분간 상온에서 보관한 후 540nm에서 ELISA 측정을 통해 대조군 대비 NO 생성 억제능을 측정하였다.

세포독성은 MTT법으로 측정하였다. 구체적으로 96 well plate 내에 남아있는 배지를 제거하고 5mg/ml MTT solution이 10% 포함된 serum free 배지를 well당 각각 100ul씩 넣고 37℃, 5% CO₂ incubator에 넣어 2시간 동안 반응시켰다. 배지를 제거하고 난 뒤, DMSO를 100㎕/well로 넣어 Shaker에서 15분간 용해시켜 ELlSA reader를 이용해 540nm에서 흡광도를 측정하여 세포 생존율을 구하여 시료의 독성 유무를 확인하였다.

클라우세나 엑스카바타 추출물과 상기 활성 화합물의 NO 생성 억제능에 대한 결과를 도 8 및 도 9에, 그 세포독성 결과를 도 10 및 도 11에 나타내었다.

상기 클라우세나 엑스카바타 추출물과 상기 활성 화합물은 대체로 농도 의존적으로 NO 생성을 억제하였으며, IC₅₀은 각각 63.74 ㎍/ml 및 281.24μM로 나타났으며 그리고 특별한 세포독성을 나타내지 않았다.

Claims (5)

1. 아래의 [화학식 1]의 미리세틴 유도체, 이의 이성질체, 이의 프로드럭, 이의 수화물, 또는 이의 용매화물.
   [화학식 1]
   

   

   
   
2. (i) 제1항의 미리세틴 유도체, 이의 이성질체, 이의 프로드럭, 이의 수화물, 또는 이의 용매화물, 또는 (ii) 클라우세나 엑스카바타 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 조성물.
   
3. 제1항에 있어서,
   상기 조성물은 식품 조성물인 것을 특징으로 하는 조성물.
   
4. 제1항에 있어서,
   상기 조성물은 약제학적 조성물인 것을 특징으로 하는 조성물.
   
5. 제1항에 있어서,
   상기 조성물은 화장료 조성물인 것을 특징으로 하는 조성물.
   

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