KR20170105107A - 항원-특이적인 t-세포 반응을 도출하는 데 사용하기 위한 면역원성 단백질 및 조합 아주반트를 포함하는 백신 조성물 - Google Patents

Abstract

증가된 항원-특이적인 T 세포-매개 면역 반응 유도가 필요한 대상체에서 증가된 항원-특이적인 T 세포-매개 면역 반응을 유도하는 데 사용하기 위한 백신 조성물이 개시된다. 조성물은 (a) 적어도 병원체의 항원을 포함하는 치료적 유효량의 면역원성 단백질; (b) GPI-0100, 퀼 A, QS-21로 이루어진 군으로부터 선택된 사포닌-기재 아주반트; (c) 모노포스포릴 지질 A(MPL), 및 CpG1826으로 이루어진 군으로부터 선택된 톨-유사 수용체(TLR) 효능제 아주반트를 포함한다.

Description

항원-특이적인 T-세포 반응을 도출하는 데 사용하기 위한 면역원성 단백질 및 조합 아주반트를 포함하는 백신 조성물

본 발명은 일반적으로 백신 제형, 보다 특별하게는 조합 아주반트(combination adjuvant)를 갖는 백신 제형에 관한 것이다.

아주반트는 다수의 백신의 주요 성분이다. 대부분의 기존 백신은 단일 아주반트를 함유한다. 이의 내재하는 제한으로 인해서, 어떤 단일 아주반트도 다수의 상이한 백신에 요구되는 보호성 면역 반응 모두를 유도할 수는 없다. 따라서, 백신에서 다수의 아주반트를 갖는 제형을 사용할 가능성을 탐구할 필요가 있다.

일 양상에서, 본 발명은,

(a) 적어도 병원체(pathogen)의 항원을 포함하는 치료적 유효량의 면역원성(immunogenic protein) 단백질;

(b) GPI-0100, 퀼(Quil) A, QS-21로 이루어진 군으로부터 선택된 사포닌-기재 아주반트; 및

(c) 모노포스포릴 지질 A(MPL), 및 CpG1826으로 이루어진 군으로부터 선택된 톨-유사 수용체(Toll-like receptor: TLR) 효능제 아주반트를 포함하는 백신 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 또 다른 실시형태에서, 조성물은 만니톨, 수크로스, 트레할로스, 히스틴딘, 글리신, 아르기닌, 소르비톨, 폴리소르베이트(Polysorbate) 80, 글루코스, 락토스, 말토스, 말토덱스트린, 시트레이트, 트리스(Tris) 및 인산나트륨으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 첨가제를 추가로 포함한다.

본 발명의 또 다른 실시형태에서, 면역원성 단백질은 융합 단백질로서, 융합 단백질은

(a) 융합 단백질의 N-말단에 위치된, 항원-제시 세포(antigen-presenting cell: APC)-결합 도메인 또는 CD91 수용체-결합 도메인;

(b) APC-결합 도메인 또는 CD91 수용체-결합 도메인의 C-말단에 위치된, 단백질 형질도입 도메인; 및

(c) 단백질 형질도입 도메인의 C-말단에 위치된, 병원체의 항원을 포함하되,

단백질 형질도입 도메인은,

(i) 융합 폴리펩타이드로서,

(1) 서열번호 31의 아미노산 서열을 포함하고, Xaa⁸은 I 또는 L이며; Xaa¹⁰은 V, F 또는 A이고, Xaa¹¹은 M 또는 L이며, Xaa¹⁷은 L 또는 I이고, 융합 폴리펩타이드의 N-말단에 위치된, 28 내지 53개의 아미노산 잔기 길이로 이루어진 T 세포 민감성 신호-형질도입 펩타이드(T cell sensitizing signal-transducing peptide);

(2) 서열번호 3, 20, 4 또는 41과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 34 내지 112개의 아미노산 잔기 길이로 이루어진 전좌(translocation) 펩타이드; 및

(3) 서열번호 15를 포함하는, T 세포 민감성 신호-형질도입 펩타이드와 전좌 펩타이드를 연결하는 링커를 포함하는, 상기 융합 폴리펩타이드;

(ii) 서열번호 31의 아미노산 서열을 포함하고, Xaa⁸은 I 또는 L이며, Xaa¹⁰은 V, F 또는 A이고, Xaa¹¹은 M 또는 L이며, Xaa¹⁷은 L 또는 I인, 28 내지 53개의 아미노산 잔기 길이로 이루어진 T 세포-민감성 신호-형질도입 펩타이드; 및

(iii) 서열번호 3, 20 또는 41과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 34 내지 61개의 아미노산 잔기 길이의 전좌 펩타이드로 이루어진 군으로부터 선택되며,

여기서 APC-결합 도메인 또는 CD91 수용체-결합 도메인은 단백질 형질도입 도메인이 (biii)에서의 전좌 펩타이드인 경우, 슈도모나스 엑소톡신(Pseudomonas exotoxin) A(PE) 결합 도메인 Ia의 아미노산 서열을 갖지 않는다.

본 발명의 또 다른 실시형태에서, 단백질 형질도입 도메인은 서열번호 30의 서열을 포함한다.

본 발명의 또 다른 실시형태에서, APC-결합 도메인 또는 CD91 수용체-결합 도메인은 서열번호 5, 9, 6, 7, 및 8로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드이다.

본 발명의 또 다른 실시형태에서, APC-결합 도메인 또는 CD91 수용체-결합 도메인은 서열번호 5, 9, 6, 7, 및 8로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.

본 발명의 또 다른 실시형태에서, APC-결합 도메인 또는 CD91 수용체-결합 도메인은 서열번호 5, 9, 6, 7, 및 8로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드이다.

대안적으로, APC-결합 도메인은 수용체-연관 단백질-1(RAP1) 도메인 III, 알파-2-마크로글로불린 수용체-연관 단백질(A2M), HIV-Tat, 및 열 충격 단백질(HSP), 및 슈도모나스 엑소톡신 A(PE) 결합 도메인 Ia로 이루어진 군으로부터 선택된다.

본 발명의 또 다른 실시형태에서, 융합 단백질은 슈도모나스 엑소톡신 A(PE) 결합 도메인 Ia의 아미노산 서열을 갖지 않는다.

본 발명의 또 다른 실시형태에서, 융합 단백질은 융합 단백질의 C-말단에 위치된 세포질 그물 보유 서열(endoplasmic reticulum retention sequence)을 추가로 포함한다.

본 발명의 또 다른 실시형태에서, 세포질 그물(ER) 보유 서열은 Lys-Asp-Glu-Leu의 아미노산 서열(서열번호 14)을 포함한다. ER 보유 서열은 서열번호 14, 16 내지 19로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함할 수 있다. 대안적으로, ER 보유 서열은 서열번호 16 내지 19로 이루어진 군으로부터 선택된 서열로 이루어질 수 있다.

본 발명의 또 다른 실시형태에서, 융합 단백질은, 항원이 10개 이상의 에피토프를 함유하는 경우, 이의 C-말단에서 세포질 그물 보유 서열을 갖지 않는다.

본 발명의 또 다른 실시형태에서, 단백질 형질도입 도메인은 (bi)의 융합 폴리펩타이드이다.

본 발명의 또 다른 실시형태에서, 단백질 형질도입 도메인은 (bii)의 T 세포-민감성 신호-형질도입 펩타이드이다.

본 발명의 또 다른 실시형태에서, 융합 단백질은 단백질 형질도입 도메인과 항원 사이에 추가 링커를 추가로 포함하고, 추가 링커는 서열번호 15를 포함한다.

본 발명의 또 다른 실시형태에서, 단백질 형질도입 도메인은 (biii)의 전좌 펩타이드이다.

본 발명의 또 다른 실시형태에서, 융합 단백질은 APC-결합 도메인 또는 CD91 수용체-결합 도메인과 전좌 펩타이드 사이에 추가 링커를 추가로 포함하고, 추가 링커는 서열번호 15를 포함한다.

본 발명의 또 다른 실시형태에서, 단백질 형질도입 도메인은 서열번호 30의 서열을 포함한다.

본 발명의 또 다른 실시형태에서, T 세포 민감성 신호-형질도입 펩타이드는 서열번호 1 또는 2와 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.

본 발명의 또 다른 실시형태에서, T 세포 민감성 신호-형질도입 펩타이드는 서열번호 1 및 2로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.

본 발명의 또 다른 실시형태에서, 전좌 펩타이드는 서열번호 3, 20, 4, 및 41로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.

본 발명의 또 다른 실시형태에서, 전좌 펩타이드는 34 내지 61개의 아미노산 잔기 길이를 갖는다.

본 발명의 또 다른 실시형태에서, 상기에 언급된 바와 같은 융합 단백질의 단백질 형질도입 도메인은 하기 특징을 갖는다: (i) T 세포-민감성 신호-형질도입 펩타이드는 서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) 전좌 펩타이드는 서열번호 3과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.

T 세포 민감성 신호-형질도입 펩타이드는 T 세포 상의 CD28 수용체의 K¹X²E³X⁴X⁵Y⁶P⁷P⁸P⁹Y¹⁰(서열번호 32)의 아미노산 서열을 인식하고, 그것에 결합하는 항체를 도출하는 특징을 나타내고, 여기서 X²는 I 또는 L이고; X⁴는 V, F 또는 A이고, X⁵는 M 또는 L이다.

항원-제시 세포(APC)는 수지상(dendritic) 세포, 마크로파지, B-세포 및 단핵구로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.

본 발명의 일 실시형태에서, APC의 세포 막은 CD91 수용체를 포함한다.

본 발명의 또 다른 실시형태에서, 병원체는 인간 파필로마바이러스(Human Papillomavirus: HPV), 돼지 재생산 및 호흡 증후군 바이러스(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus: PRRSV), 인간 면역-결핍 바이러스(Human Immuno-deficient Virus: HIV-1), 독감 바이러스(flu virus), 댕기 바이러스(dengue virus), C형 감염 바이러스(Hepatitis C virus: HCV), B형 감염 바이러스(Hepatitis B virus: HBV) 및 돼지 서코바이러스 2(Porcine Circovirus 2: PCV2)로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나이다.

본 발명의 일 실시형태에서, 병원체의 항원은 인간 파필로마바이러스(HPV) E7 단백질, B형 감염 바이러스(HBV) HBx 단백질, C형 감염 바이러스(HCV) 중심 항원, 독감 바이러스 M2 항원, 및 종양 연관 항원으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

본 발명의 일 실시형태에서, HPV E7 단백질은 서열번호 21과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.

본 발명의 또 다른 실시형태에서, 종양 연관 항원은 SSX2, MAGE-A3, NY-ESO-1, iLRP, WT12-281, RNF43(2-116 + 696-783), 및 CEA-NE3으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

본 발명의 또 다른 실시형태에서, 항원은 서열번호 21 및 22로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 HPV E7 항원이다. 본 발명의 바람직한 실시형태에서, 항원은 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 HPV E7 항원이다.

본 발명의 또 다른 실시형태에서, 융합 단백질은 융합 단백질의 C-말단에 위치된 세포질 그물 보유 서열을 추가로 포함한다.

본 발명의 일 실시형태에서, 면역원성 단백질은 서열번호 54의 서열을 포함하는 융합 단백질이다. 예를 들어, 면역원성 단백질은 융합 단백질 PE₄₀₇-E7-K3(서열번호 54)이다.

본 발명의 또 다른 실시형태에서, 면역원성 단백질은 서열번호 55의 서열을 포함하는 융합 단백질이다. 예를 들어, 면역원성 단백질은 융합 단백질 RAP1-CD28convPE_t-E7-K3(서열번호 55)이다.

본 발명의 또 다른 실시형태에서, 면역원성 단백질은,

(a) 융합 단백질의 N-말단에 위치된, 항원-제시 세포(APC)-결합 도메인 또는 CD91 수용체-결합 도메인;

(b) APC-결합 도메인 또는 CD91 수용체-결합 도메인의 C-말단에 위치된, 서열번호 3, 4, 20, 또는 41과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 34 내지 112개의 아미노산 잔기 길이의 전좌 펩타이드;

(c) 병원체의 항원;

(d) 서열번호 44의 아미노산 서열을 포함하는 핵 외수송 신호; 및

(e) 융합 단백질의 C-말단에 위치된 세포질 그물 보유 서열

을 포함하는 융합 단백질이고;

여기서 핵 외수송 신호는 항원과 세포질 그물 보유 서열 사이에, 또는 전좌 펩타이드와 항원 사이에 위치된다.

본 발명의 또 다른 실시형태에서, 면역원성 단백질은,

(a) 융합 단백질의 N-말단에 위치된, 항원-제시 세포(APC)-결합 도메인 또는 CD91 수용체-결합 도메인;

(b) APC-결합 도메인 또는 CD91 수용체-결합 도메인의 C-말단에 위치된, 서열번호 3, 20, 또는 41과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 34 내지 61개의 아미노산 잔기 길이의 전좌 펩타이드;

(c) 병원체의 항원;

(d) 서열번호 44의 아미노산 서열을 포함하는 핵 외수송 신호; 및

(e) 융합 단백질의 C-말단에 위치된 세포질 그물 보유 서열

을 포함하는 융합 단백질이고;

여기서 핵 외수송 신호는 항원과 세포질 그물 보유 서열 사이에, 또는 전좌 펩타이드와 항원 사이에 위치된다.

본 발명의 또 다른 실시형태에서, 서열번호 44의 C-말단 아미노산은 알라닌이다.

본 발명의 또 다른 실시형태에서, 핵 외수송 신호는 서열번호 45의 아미노산 서열을 포함한다.

본 발명의 또 다른 실시형태에서, 세포질 그물 보유 서열은 서열번호 14의 아미노산 서열을 포함한다.

본 발명의 또 다른 실시형태에서, 핵 외수송 신호 및 ER 보유 서열은 서열번호 43과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 융합 펩타이드를 형성한다.

본 발명의 또 다른 실시형태에서, 전좌 펩타이드는 34 내지 61개의 아미노산 잔기 길이를 갖는다.

본 발명의 또 다른 실시형태에서, 전좌 펩타이드는 34 내지 46개의 아미노산 잔기 길이를 갖는다.

본 발명의 또 다른 실시형태에서, APC-결합 도메인 또는 CD91 수용체-결합 도메인은 슈도모나스 엑소톡신 A(PE) 결합 도메인 Ia의 아미노산 서열을 갖지 않는다.

본 발명의 또 다른 실시형태에서, APC-결합 도메인 또는 CD91 수용체-결합 도메인은 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함한다.

본 발명의 또 다른 실시형태에서, APC-결합 도메인 또는 CD91 수용체-결합 도메인의 아미노산 서열은 서열번호 9이다.

본 발명의 또 다른 실시형태에서, 항원은 병원체로부터의 2개의 항원 펩타이드의 융합 항원이다.

본 발명의 또 다른 실시형태에서, ER 보유 서열은 4개 초과의 아미노산 잔기 길이를 갖는다.

본 발명의 또 다른 실시형태에서, 전좌 펩타이드는 서열번호 3, 4, 20, 또는 41과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.

본 발명의 또 다른 실시형태에서, APC-결합 도메인 또는 CD91 수용체-결합 도메인은 수지상 세포, 단핵구, B-세포 및 림프구로 이루어진 군으로부터 선택된 항원-제시 세포(APC) 상의 수용체를 인식하고, 그것에 결합하는 특징을 나타낸다.

본 발명의 또 다른 실시형태에서, 병원체는 돼지 재생산 및 호흡 증후군 바이러스(PRRSV), 돼지 서코바이러스 2(PCV2), 구제역 바이러스(Foot-and-mouth disease virus: FMDV), 돼지 콜레라 바이러스(Classical Swine Fever Virus: CSFV), 뉴캐슬병 바이러스(Newcastle disease virus: NDV), 전염성 위장염 바이러스(Transmissible gastroenteritis virus: GEV), 돼지 유행성 설사병 바이러스(Porcine epidemic diarrhea virus: PEDV), 인플루엔자 바이러스(Influenza virus), 가성 광견병 바이러스(Pseudorabies virus), 파르보바이러스(Parvovirus), 가성 광견병 바이러스, 돼지 수포병 바이러스(Swine vesicular disease virus: SVDV), 수두 바이러스(Poxvirus), 로타 바이러스(Rotavirus), 마이코플라스마 폐렴(Mycoplasma pneumonia), 헤르페스 바이러스(Herpes virus), 전염성 기관지염(Infectious bronchitis) 및 전염성 F낭병 바이러스(Infectious bursal disease virus)로 이루어진 군으로부터 선택된다.

조성물은 비경구, 예컨대 피하 또는 근육내 주사를 위한 투여 형태일 수 있다.

또 다른 양상에서, 본 발명은 증가된 항원-특이적인 T 세포-매개 면역 반응 유도가 필요한 대상체에서 증가된 항원-특이적인 T 세포-매개 면역 반응을 유도하기 위한 약제의 제조에서의, 상기에 언급된 바와 같은 조성물의 용도에 관한 것이다.

대안적으로, 또 다른 양상에서, 본 발명은 증가된 항원-특이적인 T 세포-매개 면역 반응 유도가 필요한 대상체에서 증가된 항원-특이적인 T 세포-매개 면역 반응을 유도하는 데 사용하기 위한 상기에 언급된 바와 같은 조성물에 관한 것이다.

추가로 대안적으로, 본 발명은 증가된 항원-특이적인 T 세포-매개 면역 반응의 유도가 필요한 대상체에 상기에 언급된 바와 같은 치료적 유효량의 조성물을 투여하여, 이것이 필요한 대상체에서 증가된 항원-특이적인 T 세포-매개 면역 반응을 유도하는 단계를 포함하는, 증가된 항원-특이적인 T 세포-매개 면역 반응 유도가 필요한 대상체에서 증가된 항원-특이적인 T 세포-매개 면역 반응을 유도하는 방법에 관한 것이다.

이들 및 다른 양상은 하기 도면과 함께 존재하는 바람직한 실시형태의 하기 설명으로부터 명백할 것이지만, 그 내에서의 변화 및 변경이 본 개시내용의 신규 개념의 사상 및 범주로부터 벗어나지 않으면서 수행될 수 있다.

첨부 도면은 기재된 설명과 함께 본 발명의 하나 이상의 실시형태를 설명하고, 본 발명의 원리를 제공한다. 어디에서도 가능하게는, 동일한 참조 부호가 도면 전체에서 사용되어 실시형태의 동일하거나 또는 유사한 요소를 지칭한다.

도 1은 작제물의 개략도를 나타낸 도면.
도 2는 다양한 백신 조성물에 의해서 유도된 세포 매개된 면역원성을 나타낸 표.
도 3은 다양한 백신 조성물에 의해서 유도된 체액성(humoral) 면역원성을 나타낸 표.
도 4는 면역법 스케줄을 나타낸 도면.
도 5a는 면역원성 단백질 PE₄₀₇-E7-K3에 의해서 도출된 T 세포-매개된 면역 반응의 자극에 대한 사포닌-기재 아주반트 GPI-0100과 TLR 효능제 아주반트의 상호 작용을 나타낸 그래프.
도 5b는 GPI-0100(50㎍/용량)에 정규화된 도 5a의 데이터의 그래프.
도 6은 도 5a의 동물군으로부터의 항체 역가를 나타낸 그래프.
도 7a는 면역원성 단백질 PE₄₀₇-E7-K3에 의해서 도출된 T 세포-매개된 면역 반응의 자극에 대한 사포닌-기재 아주반트 QS-21과 TLR 효능제 아주반트의 상호 작용을 나타낸 그래프.
도 7b는 QS-21(10㎍/용량)에 정규화된 도 7a의 데이터의 그래프.
도 7c는 GPI-0100(100㎍/용량)에 정규화된 도 7a의 데이터의 그래프.
도 8은 도 7a의 동물군으로부터의 항체 역가를 나타낸 그래프.
도 9는 제시된 바와 같은 다양한 백신 제형에 의해서 도출된 T 세포-매개된 면역 반응을 나타낸 그래프.
도 10a는 면역원성 단백질 및 1종 또는 2종의 아주반트를 포함하는 다양한 백신 제형을 나타낸 표.
도 10b는 종양 마우스 모델에서의 면역법 스케줄을 나타낸 도면.
도 11은 다양한 아주반트(n=4)와 조합된 PE₄₀₇-E7-K3으로 백신 접종된 동물군으로부터의 종양 크기 곡선을 나타낸 그래프. 위약군을 PBS(즉, 아주반트 및 PE₄₀₇-E7-K3이 없음)로 처리하였다.

본 발명은 단지 설명으로서 의도된 하기 실시예에서 보다 특별하게 기술되는데, 그 이유는 그 내의 다수의 변형 및 변화가 관련 기술의 통상의 기술자에게 자명할 것이기 때문이다. 본 발명의 다양한 실시형태를 이제 상세하게 기술한다. 도면을 참고하여, 유사한 숫자는 도면 전체에서 유사한 성분을 나타낸다. 본 명세서의 설명 및 이어진 청구범위 전체에 걸쳐서 사용된 바와 같이, 단수의 의미는 그 문맥이 달리 명백하게 언급하지 않는 한 복수의 참조를 포함한다. 또한, 본 명세서에서 설명 및 이어진 청구범위 전체에 걸쳐서 사용된 바와 같이, "내에"는 그 문맥이 달리 명백하게 언급하지 않는 한 "내에" 그리고 "상에"를 포함한다. 또한, 제목 및 부제목은 본 발명의 범주에 영향을 주지 않고, 독자의 편의를 위해서 본 명세서에서 사용될 수 있다. 추가로, 본 명세서에서 사용된 일부 용어는 하기에 더 구체적으로 정의되어 있다.

정의

본 명세서에서 사용된 용어는 일반적으로 본 발명의 문맥 내에서 관련 기술 분야에서 그리고 각각의 용어가 사용된 특정 문맥에서의 그들의 보통 의미를 갖는다. 본 발명을 기술하는 데 사용된 특정 용어는 본 발명의 설명에 관련된 전문가에게 추가적인 안내를 제공하기 위해서 하기 또는 어딘가에 논의되어 있다. 편의를 위해서, 특정 용어는 예를 들어, 이탤릭체 및/또는 따옴표 마크를 사용하여 강조될 수 있다. 강조의 사용은 용어의 범주 및 의미에 영향을 주지 않고; 용어의 범주 및 의미는 그것이 강조되던지 강조되지 않던지 간에 동일한 문맥에서 동일하다. 동일한 것이 하나를 초과하는 방식으로 논의될 수 있다는 것이 인지될 것이다. 결론적으로, 대안 용어 및 동의어는 본 명세서에 논의된 임의의 하나 이상의 용어에 대해서 사용될 수 있고, 용어가 본 명세서에서 확대되거나 논의되던지 간에 어떠한 특별한 중요성도 갖지 않는다. 특정 용어에 대한 동의어는 제공되어 있다. 하나 이상의 동의어의 설명이 다른 동의어의 사용을 배제하는 것은 아니다. 본 명세서에서 논의된 임의의 용어의 예시를 포함하는 본 명세서의 어딘가에 있는 예의 사용은 오직 설명적이며, 어떠한 방식으로든 본 발명 및 임의의 예시된 용어의 범위 및 의미를 제한하지 않는다. 마찬가지로, 본 발명은 본 명세서에 제시된 다양한 실시형태로 제한되지 않는다.

달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에 사용된 모든 기술적 용어 및 과학적인 용어는 본 발명이 속한 관련 기술 분야의 통상의 기술자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 같은 의미를 가진다. 상충되는 경우, 정의를 비롯하여 본 문서가 통제할 것이다.

면역원성 단백질, 예컨대 항원-특이적인 T 세포 반응을 유도하기 위한 면역원성 인핸서로서 사용하기 위한 융합 단백질은 미국 특허 공개 제20140154285 A1호 및 제20140154280 A1호에 개시되어 있고, 이들 각각은 이들의 전문이 참고로 본 명세서에 포함된다.

톨 유사 수용체(TLR) 4 리간드, 특히 효능제, 예컨대 지질 A 유도체, 특히 모노포스포릴 지질 A 또는 보다 특별하게는 3 탈아세틸화 모노포스포릴 지질(deacylated monophoshoryl lipid)A(3D-MPL). 3D-MPL은 글락소스미쓰글라인 바이올로지컬스 엔.에이.(GlaxoSmithKline Biologicals N.A.)에 의해서 제품명 MPL 하에 판매되고, 본 문헌 전체에서 MPL 또는 3D-MPL이라 지칭된다.

퀼(남아메리카 나무 퀼라자 사포나리아 몰리나(Quillaja Saponaria Molina)의 수피(bark)로부터 유래) 및 이의 일부는 미국 특허 제5,057,540호 및 문헌[Saponins as vaccine adjuvants", Kensil, C. R., Crit Rev Ther Drug Carrier Syst, 1996, 12(1-2):1-55]; 및 유럽 특허 제0 362 279 B1호에 기술되어 있다.

QS-21은 퀼라자 사포나리아 몰리나의 수피로부터 유래된 천연 사포닌이다. QS-21은 퀼 A의 HPLC 정제된 비독성 부분이고, 그것은 미국 특허 제5,057,540호에 개시되어 있다.

용어 "항원-제시 세포(APC) 또는 악세사리(accessory) 세포"는 표면 상에서 주요 조직적합성 복합체(major histocompatibility complexe: MHC)와 복합체를 이루는 외부 항원을 나타내는 세포를 지칭한다. T-세포는 이들의 T-세포 수용체(TCR)를 사용하여 이들 복합체를 인식할 수 있다. 이들 세포는 항원을 처리하여 이들을 T-세포에 제시한다. 중요 유형의 전문적인 항원-제시 세포는 수지상 세포(DC), 마크로파지, 단핵구 및 특정 B-세포이다.

용어 "항원-제시 세포(APC)-결합 도메인"은 항원-제시 세포(APC)에 결합할 수 있는 도메인을 지칭한다. APC-결합 도메인은 서열번호 5, 6, 7, 8, 및 9로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드일 수 있다. APC-결합 도메인은 APC 상의 수용체를 인식하고, 그것에 결합하는 리간드이다.

분화 클러스터(cluster of differentiation) 91(CD91)는 세포의 막에서 수용체를 형성하고, 수용체-매개된 세포내섭취(endocytosis)에 관여하는 단백질이다.

용어 "단백질 형질도입 도메인"은 T-세포를 민감하게 하여 항원-특이적인 T 세포 반응을 증가시키고/시키거나 항원을 항원 제시의 제I형 주요 조직적합성 복합체(MHC-I) 경로(즉, 세포독성 T 세포 경로)를 향해서(즉 그것으로의 표적으로) 안내 또는 지향하게 하는 기능을 갖는 폴리펩타이드 또는 융합 폴리펩타이드를 지칭한다.

용어 "T 세포를 민감하게 하여"는 일반적으로 CD8+ 및 CD4+ T 세포가 민감해지고, 그 결과 항원 공격에 대한 CD8+(CTL) 및 CD4+ T 세포 반응이 증가된 것을 의미한다. 항원-특이적인 세포 매개된 면역 반응은 항원에 대한 반응에서 항원-특이적으로 유도된 γ-인터페론의 생산을 정량화함으로써 측정된다. 예를 들어, 민감화 신호가 없는 경우(즉, 단백질 형질도입 도메인이 없는 경우), 항원 단독은 세포 매개된 면역 반응을 약하게 유도하거나 전혀 유도하지 않을 수 있고, 즉 CD8+ 및 CD4+ T 세포로부터 항원-특이적인 γ-인터페론의 생산이 약하거나 없는 반면, 민감화 신호(단백질 형질도입 도메인)의 존재하에서, 항원은 증가된 세포 매개된 면역 반응을 유도할 수 있다. 따라서, 민감화 신호(단백질 형질도입 도메인)의 기능은 숙주 내에서 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 민감하게 하여, 이후에 숙주가 항원에 의해 공격되었을 때, 항원이 이전의 CD4+ 및 CD8+ T 세포 민감화로 인해서 증가된 항원-특이적인 세포 매개의 면역 반응을 유도할 수 있다.

단백질 형질도입 도메인은 "융합 폴리펩타이드"일 수 있고, 여기서 융합 폴리펩타이드는 T 세포 민감성 신호-형질도입 펩타이드, 링커, 및 전좌 펩타이드를 포함한다. 예를 들어, 융합 폴리펩타이드는 폴리펩타이드 "CD28convPE_t"일 수 있다.

용어 "CD28conv"는 "T 세포 민감성 신호-형질도입 펩타이드"인, CD28 보존된 영역(conserved region)을 지칭한다. 이것은 CD28 효능제 항체를 유도하기 위한 에피토프이다.

용어 "PE_t" 또는 "PE_t중심"은 34개의 아미노산 잔기 길이를 갖는 PE 전좌 도메인 중심를 지칭한다.

링커는 "CD28conv"와 "PE_t" 사이에 존재한다. 융합 폴리펩타이드 "CD28convPE_t"의 배향 또는 배열은 "CD28conv"(또는 T 세포 민감성 신호-형질도입 펩타이드)가 PE_t(또는 전좌 펩타이드)의 상류에 존재해야 하고, 즉 PE_t는 증가된 T-세포 반응을 수득하기 위해서 "CD28conv"의 C-말단에 존재해야 한다는 점에서 중요하다. "CD28convPE_t"는 역배향 융합 펩타이드 PE_tCD28conv보다 CD28conv에 대해서 특이적인 훨씬 더 높은 IgG 역가(CD28-특이적인 효능제 항체라 지칭됨)를 상승시킬 수 있다. CD28-특이적인 효능제 항체는 CD4+ 및 CD8+ T 세포 둘 모두를 민감하게 할 수 있다. 올바른 배향 융합 폴리펩타이드 CD28convPE_t는 CD28conv와 PE_t 도메인 사이에 링커(R¹X²R³X⁴K⁵R⁶)를 함유한다. 링커는 항원 제시 세포(APC)-특이적인 프로테아제(카뎁신 L) 절단 부위 Lys-Arg(KR)를 함유한다. 따라서, 융합 단백질 RAP1-CD28convPEt-항원-K3은 하기의 두 개의 단편으로 절단될 수 있다: RAP1-CD28conv 및 PEt-항원-K3. RAP1-CD28conv 단편은 리소좀에서 더 절단될 수 있고, 이어서, CD28conv의 에피토프는 MHC II 경로를 통해서 APC 세포 표면에 제시되는데, 이것이 결국 CD28 효능제 항체를 생산하는 체액성 면역 반응을 도출한다. 따라서, CD28 효능제 항체는 B 세포에 의해서 생산된다. 이러한 CD28 효능제 항체는 T 세포 표면 상의 CD28에 결합하여, T 세포(CD4+ 및 CD8+ T 세포)를 전-활성화(pre-activate)시킬 수 있다.

"T 세포-민감성 신호-형질도입 펩타이드"는 28 내지 53개의 아미노산 잔기 길이를 갖고, 서열번호 31과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 X⁸은 I 또는 L이고; X¹⁰은 V, F 또는 A이고, X¹¹은 M 또는 L이고, X¹⁷은 L 또는 I이다.

T 세포-민감성 신호-형질도입 펩타이드는 중요 영역 K¹X²E³X⁴X⁵Y⁶P⁷P⁸P⁹Y¹⁰(서열번호 32)을 포함하고, 여기서 X²는 I 또는 L이고; X⁴는 V, F 또는 A이고, X⁵는 M 또는 L이다.

마우스에 대해서 특이적인 T 세포 민감성 신호-형질도입 펩타이드(TDIYFCKIEFMYPPPYLDNEKSNGTIIH; 서열번호 31, 여기서, X⁸은 I이고, X¹⁰은 F이고, X¹¹은 M이고, X¹⁷은 L임)는 미국 특허 제20140154285 A1호에 설명되어 있다.

PE 전좌 펩타이드는 서열번호 3, 4, 20 또는 41과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 예를 들어, PE 전좌 펩타이드의 아미노산 서열은 전장 PE(서열번호 10)의 a.a. 280 내지 a.a. 313(서열번호 3), a.a. 268 내지 a.a. 313(서열번호 20), a.a. 253 내지 a.a. 313(서열번호 41), 또는 a.a. 253 내지 a.a. 364(서열번호 4)일 수 있다. 즉, PE 전좌 펩타이드의 아미노산 서열은, 그것이 a.a. 280 내지 a.a. 313(서열번호 3) 필수 단편을 포함하는 한, PE 도메인 II(a.a. 253 내지 a.a. 364; 서열번호 4)의 임의의 영역을 함유할 수 있다.

항원은 병원체에 의해서 야기된 질병에 책임이 있거나, 병원체에 의해서 감염된 숙주 내에서 면역적인 반응을 유도할 수 있는 병원체 단백질, 폴리펩타이드 또는 펩타이드, 또는 종양 세포에서 특이적으로 발현되는 폴리펩타이드인 종양-연관 항원(TAA)일 수 있다. 항원은 인간 파필로마바이러스(HPV), 돼지 재생산 및 호흡 증후군 바이러스(PRRSV), 인간 면역결핍-1(HIV-1), 독감 바이러스, 댕기 바이러스, C형 감염 바이러스(HCV), B형 감염 바이러스(HBV), 돼지 서코바이러스 2(PCV2), 돼지 콜레라 바이러스(CSFV), 구제역 바이러스(FMDV), 뉴캐슬병 바이러스(NDV), 전염성 위장염 바이러스(TGEV), 돼지 유행성 설사병 바이러스(PEDV), 인플루엔자 바이러스, 가성 광견병 바이러스, 파르보바이러스, 가성 광견병 바이러스, 돼지 수포병 바이러스(SVDV), 수두 바이러스, 로타 바이러스, 마이코플라스마 폐렴, 헤르페스 바이러스, 전염성 기관지염, 또는 전염성 F낭병 바이러스, 비-소세포 폐암, 유방 암종, 흑색종, 림프종, 결장 암종, 간세포 암종 및 이들의 임의 조합을 포함하지만, 이에 제한되지 않는 병원체 또는 암 세포로부터 선택될 수 있다. 예를 들어, HPV E7 단백질(E7), HCV 중심 단백질(HCV 중심), HBV X 단백질(HBx)은 백신 발생을 위한 항원으로서 선택될 수 있다. 항원은 하나 이상의 병원체 단백질로부터 선택된 2개 이상의 항원의 융합으로부터의 융합 항원, 예를 들어, PRRSV ORF6 및 ORF5 단편의 융합 항원 또는 PRRSV 및 PCV2 병원체로부터의 항원 단백질의 융합일 수 있다.

세포질 그물 보유 서열의 기능은 항원이 세포내이입(endocytotic) 구획으로부터 ER로 전좌하는 것을 돕고, 그것을 내강에 유지시킨다. 그것은 서열 Lys Asp Glu Leu(KDEL) 또는 RDEL을 포함한다. ER 보유 서열은 KKDLRDELKDEL(서열번호 16), KKDELRDELKDEL(서열번호 17), KKDELRVELKDEL(서열번호 18), 또는 KDELKDELKDEL(서열번호 19)의 서열을 포함하거나, 그것으로 본질적으로 이루어지거나, 그것으로 이루어질 수 있다.

39kDa의 분자량을 갖는 수용체-연관 단백질(RAP1)은 ER 상주 단백질(resident protein) 및 LDL 수용체-관련 단백질을 위한 분자 샤프론(molecular chaperone)이다. 그것은 CD91에 대해서 높은 결합 친화도(Kd 약 3nM)를 갖고, 3개의 기능 유사 도메인에 의해서 구성된다.

PE₄₀₇(서열번호 40)은 선행 특허(미국 특허 제7,335,361 B2호)에서 PE(III)로서 기술되어 있다.

핵 외수송 신호(NES)는 단백질 내의 4개의 소수성 잔기의 짧은 아미노산 서열을 지칭하며, 4개의 소수성 잔기의 짧은 아미노산 서열은 핵 수송을 사용하여 세포 핵으로부터 핵막공 복합체를 통해서 세포질로의 외수송을 위해서 그것을 표적화한다. NES는 엑스포틴(exportin)에 의해서 인식되고, 그것에 의해서 결합된다. 소수성 잔기의 가장 일반적인 간격은 L¹X²X³K⁴L⁵X⁶X⁷L⁸X⁹L¹⁰X¹¹(서열번호 44)이고, 여기서 "L"은 루신이고, "K"는 라이신이고, "X^2,3,6,7,9,11"은 임의의 자연 발생 아미노산이다. 예를 들어, 인공 NES는 서열 LeuGlnLysLysLeuGluGluLeuGluLeuAla(LQKKLEELELA; 서열번호 45)을 포함할 수 있다.

용어 "NESK"는 NES 및 ER 보유 신호의 융합 펩타이드(즉, ER 보유 신호에 융합된 NES)를 지칭한다. 그것은 핵 외수송 신호(NES) 및 ER 보유 서열의 기능을 보유하는 인공 펩타이드이다. 따라서, 그것은 항원을 세포 핵으로부터 핵막공 복합체를 통해서 세포질로 외수송하고, 항원이 세포질로부터 ER로 전좌하는 것을 도와서, ER의 내강에 항원을 유지시킬 수 있다. 예를 들어, NESK의 아미노산 서열은LQKKLEELELAKDEL(서열번호 43)일 수 있다.

용어 "대상체"는 인간 또는 비-인간 동물을 지칭한다.

용어　"치료하는(treating)"　또는　"치료(treatment)"는　암　또는　감염을　갖거나,　이러한　질병에　대한　증상　또는　소인(predisposition)을　갖고　있는, 유효량의 융합 단백질의 투여가 필요한 대상체에게　질환, 그것의 증상, 또는 그것에 대한 소인을 치유, 완화, 안정, 치료, 개선 또는 예방하려는 목적으로 유효량의 융합 단백질을 투여하는 것을 지칭한다. 이러한　대상체는 임의의 적합한　진단　방법으로부터의 결과에 기초하여 건강　관리　전문가에　의해　식별될　수　있다.

용어 "유효량"은 치료된 대상체에서 치료적인 효과를 부여하는 데 필요한 활성 화합물의 양을 지칭한다. 유효 용량은 투여 경로, 부형제 사용, 및 다른 치료요법 치료와의 공동 사용 가능성에 따라서 관련 기술 분야의 통상의 기술자에 의해서 인식되는 바와 같이 달라질 것이다.

약어: CD 28, 분화 클러스터 28.

실시예

본 발명의 범주를 제한할 의도 없이, 본 발명의 실시형태에 따른 예시적인 장비, 장치, 방법 및 이의 관련된 결과가 하기에 제공되어 있다. 제목 또는 부제목은 독자의 편의를 위해서 실시예에서 사용될 수 있고, 이것은 어떤 방식으로도 본 발명의 범주를 제한하지 않는 것을 주목해야 한다. 또한, 특정 이론이 본 명세서에 제안 및 개시되어 있지만; 그것이 옳고 그름에 관계없이, 본 발명이 임의의 특정 이론 또는 작용 도식에 대한 관심 없이 본 발명에 따라서 실시되는 한, 그것은 어떤 방식으로든 본 발명의 범주를 제한하지 않아야 한다.

면역원성 단백질 제조:

면역원성 단백질을 대장균 발현계에서 발현시켰다. 이것은 단지 항원 자체, 또는 PE₄₀₇-(항원)-K3 융합 단백질을 생성하기 위해서 슈도모나스 엑소톡신 A 도메인 I 및 II의 C-말단(즉, PE₄₀₇)에 융합된 항원 및 ER 보유 신호(K3), 또는 RAP1-CD28convPE_t-(항원)-K3 융합 단백질을 생성하기 위해서 RAP1-CD28convPE_t 융합 단백질의 C-말단에 융합된 항원 및 ER 보유 신호일 수 있다(도 1). 본 명세서에서 사용된 항원은 E7 항원이었고, 생산된 2개의 융합 단백질 PE₄₀₇-E7-K3(서열번호 54) 및 RAP1-CD28convPE_t-E7-K3(서열번호 55)을 하기 실험에서 사용하였다.

상이한 면역원성 조성물의 면역원성 분석:

E7 면역원성 단백질, E7 항원, PE₄₀₇-E7-K3 융합 단백질, 또는 RAP1-CD28convPE_t-E7-K3 융합 단백질을 상이한 아주반트, 예컨대 백반(alum), GPI-0100 또는 QS-21과 배합하고, 이들의 면역원성을 마우스에서 시험하였다. 모든 면역원성 단백질은 백반, GPI-0100 또는 QS-21과 배합되는 경우 중간에서 강한 E7 항원 특이적인 체액성 면역 반응을 하는 배지를 도출할 수 있었다. E7 항원 특이적인 세포 매개 면역 반응의 경우, E7 항원 또는 PE₄₀₇-E7-K3 융합 단백질이 GPI-0100 또는 QS-21과 배합되는 경우 약한 반응에서 강한 반응이 도출되었다. 다른 한편, RAP1-CD28convPE_t-E7-K3 융합 단백질은 백반, GPI-0100 및 QS-21과 배합되는 경우 중간에서 강한 세포 매개된 면역 반응을 도출할 수 있었다. 이러한 결과는 GPI-0100 및 QS-21이 체액성 면역 반응 및 세포 매개 면역 둘 모두를 자극하는 더 양호한 아주반트였음을 보여주었다. 추가로, PE₄₀₇-E7-K3 또는 RAP1-CD28convPE_t-E7-K3 융합 단백질은 사포닌 기재 아주반트, 예컨대 GPI-0100 또는 QS-21와 배합되는 경우에만 E7 항원보다 더 강한 반응을 도출할 수 있었다.

T 세포- 매개된 면역 반응에 대한 동물 연구

5주령의 암컷 마우스 C57BL/6을 바이오라스코 타이완 코., 엘티디.(BioLASCO Taiwan Co., Ltd.)로부터 구입하였다. 5마리 마우스/케이지, 12시간 낮/12시간 밤의 광 사이클. 음식 및 물에 자유롭게 접근하게 하면서, 실험 전에 마우스를 1주 동안 가둬놓고, 표준 조건하에서 유지시켰다. 설명을 위해서 사용된 면역원성 단백질은 더박스 제네틱스 백신 코., 엘티디.(TheVax Genetics Vaccine Co., Ltd.)에 의해서 제조된 동결 건조된 PE₄₀₇-E7-K3(서열번호 54)이었고, 각각의 바이알은 0.6mg 단백질을 함유하였다. 아주반트: GPI-0100(하와이 바이오테크(Hawaii Biotech)); MPL(카탈로그 번호 699800P, 아반티(Avanti)); 폴리(Poly) I:C(카탈로그 번호 tlrl-pic-5, 인비보젠(InvivoGen)); R837(카탈로그 번호 tlrl-imqs, 인비보젠); R848(카탈로그 번호 tlrl-r848, 인비보젠); CpG1826(카탈로그 번호 tlrl-1826, 인비보젠); 및 실험실 등급 QS-21(더박스).

면역법 스케줄이 도 4에 도시되어 있다. 마우스를 표 1 및 도 5a 내지 B, 7a 내지 c에서 나타내어진 바와 같이 3주 동안 주 1회 백신 제형으로 백신 접종하였다. 모든 마우스를 마지막 면역법 7일 후에 희생시키고, 비장을 수집하였다. 비장세포를 단리하였다.

아주반트 제형

면역원성 조성물을 위한 최상의 면역 반응을 연구하기 위해서, 표 1에 열거된 아주반트 제형을 평가하였다.

CD8 ⁺ 세포의 세포내 -사이토카인 염색

비장 세포(2*10⁷)를 6-웰 편평 바닥 조직 배양 플레이트에 도말하고, 1㎍/ml HPV₁₆-E7 펩타이드(전장 PE의 아미노산 49 내지 57), 브레펠딘(Brefeldin) A 및 모넨신(Monensin)과 함께 또는 그들 없이 2시간 동안 37℃에서 인큐베이션시켰고, 세포에서의 사이토카인의 증가된 축적은 사이토카인-생산 세포의 검출성을 증가시킨다. 인큐베이션 후에, 세포를 5분 동안 300xg에서 시험 튜브에 옮겼다. 상청액을 제거하고, 플레이트를 간단히 보텍싱(vortexing)하였고, 세포를 플루오레세인 아이소싸이오시아네이트-컨주케이팅된 항-마우스 CD8(클론 53-6.7, 이바이오사이언스(eBioscience)), 및 항-마우스 CD3(클론 17A2, 바이오레전드(BioLegend)) 0.2mg/샘플에서 30분 동안 표면 마커를 대해서 염색하였다. 1ml의 침투 세척 완충제(바이오레전드) 중에 재현탁시킨 후 암실에서 30분 동안 얼음 상에서 인큐베이션시킴으로써 세포를 1ml의 형광-활성화 세포 분류기(FACS) 완충제(PBS 중의 1% FBS) 및 IC 고정 용액(Fixation solution)(이바이오사이언스(eBioscience))으로 세척하였다. 세포를 펌워시(Permwash)(비디 파민젠(BD Pharmingen)) 중에서 2회 세척하고, 이어서 암실에서 얼음 상에서 30분 동안 침투 세척 완충제 중에 희석된 샘플 당 0.2 mg에서, 알로피코시아닌-컨주게이팅된 항-마우스 IFN-γ(클론 XMG1.2, 이바이오사이언스)로 세포내 IFN-γ에 대해서 염색하였다. 세포를 1ml FACS 완충제 중에 재현탁시키고, 이어서 FACS 칼리부어 유동 세포측정기(Chalibur flow cytometer) 상에서 분석하였다.

면역원성 검정법에서, 비장 세포에서 CD3+/CD8+/IFNη+ T 세포의 수를 측정함으로써 다양한 백신 제형에 의해서 유도된 항원-특이적인 T 세포-매개 면역 반응을 평가하였다. 도 5a는 다양한 백신 제형으로 치료된 동물군으로부터의 2*10⁷ 비장 세포 당 CD3+ T 세포에서의 E7-특이적인 CD8+/IFNη+ 이중 양성의 백분율을 나타낸다. 각각의 군으로부터의 데이터를 PE₄₀₇-E7-K3와 50㎍/용량의 GPI-0100의 조합물로 처리된 동물군의 데이터와 비교하였다(도 5b). 데이터는 MPL 또는 CpG1826과 조합된 GPI-0100이 면역원성 단백질에 의해서 도출된 T 세포-매개된 면역 반응을 2 내지 3배 증가시킬 수 있다는 것을 나타낸다.

도 7a는 다양한 백신 제형으로 치료된 동물군으로부터의 2*10⁷ 비장 세포 당 CD3+ T 세포에서의 E7-특이적인 CD8+/IFNη+ 이중 활성의 백분율을 나타낸다. 각각의 군으로부터의 데이터를 PE₄₀₇-E7-K3와 QS-21(10㎍/용량; 도 7b) 또는 GPI-0100(100㎍/용량; 도 7c)의 조합물로 치료된 동물군의 데이터와 비교하였다. 데이터는 MPL(10㎍/용량) 또는 CpG1826(10㎍/용량)과 조합된 QS-21이 아주반트, QS-21(10㎍/용량) 만을 포함하는 백신 조성물과 비교할 때 면역원성 단백질 PE₄₀₇-E7-K3에 의해서 도출된 T 세포-매개된 면역 반응을 3 내지 4배 증가시킬 수 있다는 것을 나타내었다(도 7b). 또한, 조합 아주반트, QS-21과 MPL, 또는 QS-21과 CpG1826을 포함하는 백신 제형에 의해서 도출된 T 세포-매개된 면역 반응은 단일 아주반트, GPI-0100(100㎍/용량) 만을 포함하는 백신 제형으로 치료된 동물군의 8배였다(도 7c).

체액성 면역 연구

동물을 백신 접종시키고, 혈청 샘플을 상기에 기술된 바와 같이 수집하였다. 각각의 동물로부터의 그리고 각각의 수집 시간 지점에서의 혈청 샘플을 블로킹 완충제 중에서 10000배를 위해서 희석시켰다. HPV16 E7 특이적인 IgG의 수준을 ELISA 방법에 의해서 측정하였다(코팅 E7 pet32a 1㎍/웰).

도 6은 단일 TLR 효능제 아주반트가 백신 조성물에서 사용되는 경우에는, 단지 소량의 항체가 유도되지만, TLR 효능제 아주반트가 사포닌-기재 아주반트 GPI-0100(50㎍/용량)과 함께 사용되는 경우에는, 제3 면역법 후에 다량의 항체가 마우스에서 도출되었다는 것을 나타낸다.

도 8은 단일 TLR 효능제 아주반트가 백신 조성물에서 사용되는 경우에는, 단지 소량의 항체가 유도되었지만, TLR 효능제 아주반트가 사포닌-기재 아주반트 QS-21(10㎍/용량)과 함께 사용되는 경우에는, 2종의 아주반트 QS-21+MPL 또는 QS-21+CpG1826을 포함하는 제형으로 치료된 동물군이 제2 면역법 후에 다량의 항체를 생산하였음을 나타낸다(데이터는 도시되지 않음). 모든 TLR 효능제 아주반트와 조합된 QS-21은 제3 면역법 후에 다량의 항체를 생산하였다. 데이터는 QS-21과 폴리 I:C의 조합물 또는 GPI-0100과 폴리 I:C의 조합물이 QS-21 또는 GPI-0100의 효과를 증가시키지 않음을 나타낸다. 이는 GPI-100 또는 QS-21이 TLR3-관련 기전을 통해서 작용할 수 있음을 제안한다. 이미다졸퀼린 아주반트(R837, R848)는 CpG1826과 동일한 경로를 통해서 작용하지만, 완전히 상이한 T 세포-매개된 면역성을 나타낸다. 이미다졸퀼린이 K 세포 및/또는 마크로파지 세포를 통해서 작용하는지의 여부를 연구할 여지가 있다.

상이한 플랫폼의 융합 단백질에 의해서 도출된 T 세포- 매개된 면역원성 반응

본 발명자들은 상기에 기술된 바와 같이 발견된 아주반트의 최상의 조합물을 사용하여 상이한 면역원성 단백질 PE₄₀₇-E7-K3 및 RAP1-CD28convPE_t-E7-K3에 의해서 도출된 T 세포-매개된 면역원성 반응을 추가로 관찰하였고, 도 5a에 기술된 바와 같은 동일한 면역원성 검정법을 수행하였다. 5주령의 마우스 57BL/6을 바이오라스코 타이완 코., 엘티디.로부터 구입하였다. 면역법 스케줄은 도 4에서와 동일하다. 표 2는 연구에서 사용된 백신 제형을 나타낸다.

도 9는 융합 단백질 RAP1-CD28convPE_t-E7-K3이 융합 단백질 PE₄₀₇-E7-K3보다 더 강한 T 세포-매개된 면역 반응을 도출하였음을 나타낸다. 그러나, 어느 유형의 아주반트의 조합물이 사용되더라도, 두 플랫폼은 유사한 패턴의 T 세포-매개된 면역 반응을 도출하였다.

TC -1 종양 동물 모델에 대한 연구

백신: 100㎍의 PE₄₀₇-E7-K3을 상이한 아주반트 또는 이의 조합물과 제형화한다.

백신 제형을 도 10a에 나타내었다. TC-1 세포주(5*10⁴ 세포/마우스, s.c.)로 공격받게 하고 7일 후에서, 마우스를 총 3회 동안 7일마다 면역화시켰다(도 10b). 결과는, 단일 아주반트 GPI-0100(100㎍/용량) 단독과 비교할 때, 조합 아주반트 QS-21(10㎍/용량)과 MPL(10㎍/용량), QS-21(10㎍/용량)과 CpG1826(10㎍/용량), GPI-0100(50㎍/용량)과 MPL(50㎍/용량), 또는 GPI-0100(50㎍/용량)과 CpG1826(50㎍/용량)이 TC-1 종양 세포의 성장을 효과적으로 억제할 수 있음을 나타낸다(도 11).

표 3은 다양한 융합 단백질의 성분의 서열번호를 나타낸다.

표 4는 동물에서 T 세포-매개 면역 반응에 대한 효과에 대해서 시험된 융합 단백질 및 항원의 서열을 나타낸다.

실시형태 및 실시예는 고려되는 특정 용도에 따라서 적절히 변화되는 바와 같은 다양한 변형과 함께 관련 기술 분야의 통상의 기술자가 본 발명 및 다양한 실시형태를 이용하는 것을 가능하게 하기 위해서 본 발명의 원리 및 이의 실시 응용을 설명하기 위해서 선택되고 기술되었다. 대안적인 실시형태는 이의 사상 및 범주를 벗어나지 않으면서 본 발명의 속한 관련 기술 분야의 통상의 기술자에게 자명할 것이다. 본 명세서에서 언급되고 논의된 모든 문헌은 이들 각각이 참고로 개별적으로 포함된 것처럼 동일한 정도로 이들의 전문이 참고로 본 명세서에 포함된다.

SEQUENCE LISTING <110> TheVax Genetics Vaccine Co., Ltd <120> A VACCINE COMPOSITION COMPRISING AN IMMUNOGENIC PROTEIN AND COMBINATION ADJUVANTS FOR USE IN ELICITING ANTIGEN-SPECIFIC T-CELL RESPONSES <130> WO 2016/138164 <140> PCT/US2016/019401 <141> 2016-02-24 <150> US 62/121,406 <151> 2015-02-26 <160> 55 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> hCD28 Core <400> 1 Thr Asp Ile Tyr Phe Cys Lys Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr 1 5 10 15 Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile Ile His 20 25 <210> 2 <211> 53 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> hCD28 Maximum <400> 2 Asn Cys Asp Gly Lys Leu Gly Asn Glu Ser Val Thr Phe Tyr Leu Gln 1 5 10 15 Asn Leu Tyr Val Asn Gln Thr Asp Ile Tyr Phe Cys Lys Ile Glu Val 20 25 30 Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn Gly Thr Ile 35 40 45 Ile His Val Lys Gly 50 <210> 3 <211> 34 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PEt Core <400> 3 Gly Trp Glu Gln Leu Glu Gln Cys Gly Tyr 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virus <400> 23 Met Ser Thr Asn Pro Lys Pro Gln Arg Lys Thr Lys Arg Asn Thr Asn 1 5 10 15 Arg Arg Pro Gln Asp Val Lys Phe Pro Gly Gly Gly Gln Ile Val Gly 20 25 30 Gly Val Tyr Leu Leu Pro Arg Arg Gly Pro Arg Leu Gly Val Arg Ala 35 40 45 Thr Arg Lys Thr Ser Glu Arg Ser Gln Pro Arg Gly Arg Arg Gln Pro 50 55 60 Ile Pro Lys Ala Arg Arg Pro Glu Gly Arg Thr Trp Ala Gln Pro Gly 65 70 75 80 Tyr Pro Trp Pro Leu Tyr Gly Asn Glu Gly Met Gly Trp Ala Gly Trp 85 90 95 Leu Leu Ser Pro Arg Gly Ser Arg Pro Asn Trp Gly Pro Thr Asp Pro 100 105 110 Arg Arg Arg Ser Arg Asn Leu Gly Lys Val Ile Asp Thr Leu Thr Cys 115 120 125 Gly Phe Ala Asp Leu Met Gly Tyr Ile Pro Leu Val Gly Ala Pro Leu 130 135 140 Gly Gly Val Ala Arg Ala Leu Ala His Gly Val Arg Val Leu Glu Asp 145 150 155 160 Gly Val Asn Tyr Ala Thr Gly Asn Leu Pro Gly Cys Ser Phe Ser Ile 165 170 175 Phe Leu Leu Ala Leu Leu Ser Cys Leu Thr Thr Pro Ala Ser 180 185 190 <210> 24 <211> 154 <212> PRT <213> Hepatitis B virus <400> 24 Met Ala Ala Arg Met Cys Cys 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any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (9)..(9) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <220> <221> misc_feature <222> (11)..(11) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 44 Leu Xaa Xaa Lys Leu Xaa Xaa Leu Xaa Leu Xaa 1 5 10 <210> 45 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> NES <400> 45 Leu Gln Lys Lys Leu Glu Glu Leu Glu Leu Ala 1 5 10 <210> 46 <211> 192 <212> PRT <213> Porcine circovirus <400> 46 Asn Gly Ile Phe Asn Thr Arg Leu Ser Arg Thr Phe Gly Tyr Thr Ile 1 5 10 15 Lys Arg Thr Thr Val Lys Thr Pro Ser Trp Ala Val Asp Met Met Arg 20 25 30 Phe Asn Ile Asn Asp Phe Leu Pro Pro Gly Gly Gly Ser Asn Pro Arg 35 40 45 Ser Val Pro Phe Glu Tyr Tyr Ser Ile Ser Lys Val Lys Val Glu Phe 50 55 60 Trp Pro Cys Ser Pro Ile Thr Gln Gly Asp Ser Gly Val Gly Ser Ser 65 70 75 80 Ala Val Ile Leu Asp Asp Asn Phe Val Thr Lys Ala Thr Ala Leu Thr 85 90 95 Tyr Asp Pro Tyr Val Asn Tyr Ser Ser Arg His Thr Ile Thr Gln Pro 100 105 110 Phe Ser Tyr His Ser Arg Tyr Phe Thr Pro Lys Pro Val Leu Asp Ser 115 120 125 Thr Ile Asp Tyr Phe Gln Pro Asn Asn Lys Arg Asn Gln Leu Trp Leu 130 135 140 Arg Leu Gln Thr Ala Gly Asn Val Asp His Val Gly Leu Gly Thr Ala 145 150 155 160 Phe Glu Asn Ser Ile Tyr Asp Gln Glu Tyr Asn Ile Arg Val Thr Met 165 170 175 Tyr Val Gln Phe Arg Glu Phe Asn Leu Lys Asp Pro Pro Leu Asn Pro 180 185 190 <210> 47 <211> 328 <212> PRT <213> classical swine fever virus <400> 47 Arg Leu Ser Cys Lys Glu Asp His Arg Tyr Ala Ile Ser Ser Thr Asn 1 5 10 15 Glu Ile Gly Pro Leu Gly Ala Glu Gly Leu Thr Thr Thr Trp Lys Glu 20 25 30 Tyr Ser His Gly Leu Gln Leu Asp Asp Gly Thr Val Arg Ala Ile Cys 35 40 45 Ile Ala Gly Ser Phe Lys Val Thr Ala Leu Asn Val Val Ser Arg Arg 50 55 60 Tyr Leu Ala Ser Leu His Lys Arg Ala Leu Pro Thr Ser Val Thr Phe 65 70 75 80 Glu Leu Leu Phe Asp Gly Thr Ser Pro Ala Ile Glu Glu Met Gly Glu 85 90 95 Asp Phe Gly Phe Gly Leu Cys Pro Phe Asp Thr Thr Pro Val Val Lys 100 105 110 Gly Lys Tyr Asn Thr Thr Leu Leu Asn Gly Ser Ala Phe Tyr Leu Val 115 120 125 Cys Pro Ile Gly Trp Thr Gly Val Ile Glu Cys Thr Ala Val Ser Pro 130 135 140 Thr Thr Leu Arg Thr Glu Val Val Lys Thr Phe Lys Arg Glu Lys Pro 145 150 155 160 Phe Pro His Arg Ala Asp Cys Val Thr Thr Ile Val Glu Lys Glu Asp 165 170 175 Leu Phe His Cys Lys Leu Gly Gly Asn Trp Thr Cys Val Lys Gly Asn 180 185 190 Pro Val Thr Tyr Thr Gly Gly Gln Val Lys Gln Cys Arg Trp Cys Gly 195 200 205 Phe Asp Phe Lys Glu Pro Asp Gly Leu Pro His Tyr Pro Ile Gly Lys 210 215 220 Cys Ile Leu Ala Asn Glu Thr Gly Tyr Arg Val Val Asp Ser Thr Asp 225 230 235 240 Cys Asn Arg Asp Gly Val Val Ile Ser Thr Glu Gly Glu His Glu Cys 245 250 255 Leu Ile Gly Asn Thr Thr Val Lys Val His Ala Leu Asp Gly Arg Leu 260 265 270 Ala Pro Met Pro Cys Arg Pro Lys Glu Ile Val Ser Ser Ala Gly Pro 275 280 285 Val Arg Lys Thr Ser Cys Thr Phe Asn Tyr Thr Lys Thr Leu Arg Asn 290 295 300 Lys Tyr Tyr Glu Pro Arg Asp Ser Tyr Phe Gln Gln Tyr Met Leu Lys 305 310 315 320 Gly Glu Tyr Gln Tyr Trp Phe Asp 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Paramyxovirus <400> 52 Pro Asp Glu Gln Asp Tyr Gln Ile Arg Met Ala 1 5 10 <210> 53 <211> 29 <212> PRT <213> Paramyxovirus <400> 53 Leu Leu Pro Asn Met Pro Lys Asp Lys Glu Gly Cys Ala Lys Ala Pro 1 5 10 15 Leu Glu Pro Asp Glu Gln Asp Tyr Gln Ile Arg Met Ala 20 25 <210> 54 <211> 525 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> fusion protein PE407-E7-K3 <400> 54 Ala Glu Glu Ala Phe Asp Leu Trp Asn Glu Cys Ala Lys Ala Cys Val 1 5 10 15 Leu Asp Leu Lys Asp Gly Val Arg Ser Ser Arg Met Ser Val Asp Pro 20 25 30 Ala Ile Ala Asp Thr Asn Gly Gln Gly Val Leu His Tyr Ser Met Val 35 40 45 Leu Glu Gly Gly Asn Asp Ala Leu Lys Leu Ala Ile Asp Asn Ala Leu 50 55 60 Ser Ile Thr Ser Asp Gly Leu Thr Ile Arg Leu Glu Gly Gly Val Glu 65 70 75 80 Pro Asn Lys Pro Val Arg Tyr Ser Tyr Thr Arg Gln Ala Arg Gly Ser 85 90 95 Trp Ser Leu Asn Trp Leu Val Pro Ile Gly His Glu Lys Pro Ser Asn 100 105 110 Ile Lys Val Phe Ile His Glu Leu Asn Ala Gly Asn Gln Leu Ser His 115 120 125 Met Ser Pro Ile Tyr Thr Ile Glu Met Gly Asp Glu Leu Leu Ala Lys 130 135 140 Leu Ala Arg Asp Ala Thr Phe Phe Val Arg Ala His Glu Ser Asn Glu 145 150 155 160 Met Gln Pro Thr Leu Ala Ile Ser His Ala Gly Val Ser Val Val Met 165 170 175 Ala Gln Thr Gln Pro Arg Arg Glu Lys Arg Trp Ser Glu Trp Ala Ser 180 185 190 Gly Lys Val Leu Cys Leu Leu Asp Pro Leu Asp Gly Val Tyr Asn Tyr 195 200 205 Leu Ala Gln Gln Arg Cys Asn Leu Asp Asp Thr Trp Glu Gly Lys Ile 210 215 220 Tyr Arg Val Leu Ala Gly Asn Pro Ala Lys His Asp Leu Asp Ile Lys 225 230 235 240 Pro Thr Val Ile Ser His Arg Leu His Phe Pro Glu Gly Gly Ser Leu 245 250 255 Ala Ala Leu Thr Ala His Gln Ala Cys His Leu Pro Leu Glu Thr Phe 260 265 270 Thr Arg His Arg Gln Pro Arg Gly Trp Glu Gln Leu Glu Gln Cys Gly 275 280 285 Tyr Pro Val Gln Arg Leu Val Ala Leu Tyr Leu Ala Ala Arg Leu Ser 290 295 300 Trp Asn Gln Val Asp Gln Val Ile Arg Asn Ala Leu Ala Ser Pro Gly 305 310 315 320 Ser Gly Gly Asp Leu Gly Glu Ala Ile Arg Glu Gln Pro Glu Gln Ala 325 330 335 Arg Leu Ala Leu Thr Leu Ala Ala Ala Glu Ser Glu Arg Phe Val Arg 340 345 350 Gln Gly Thr Gly Asn Asp Glu Ala Gly Ala Ala Asn Ala Asp Val Val 355 360 365 Ser Leu Thr Cys Pro Val Ala Ala Gly Glu Cys Ala Gly Pro Ala Asp 370 375 380 Ser Gly Asp Ala Leu Leu Glu Arg Asn Tyr Pro Thr Gly Ala Glu Phe 385 390 395 400 Leu Gly Asp Gly Gly Asp Val Glu Phe His Met Val Asp Met His Gly 405 410 415 Asp Thr Pro Thr Leu His Glu Tyr Met Leu Asp Leu Gln Pro Glu Thr 420 425 430 Thr Asp Leu Tyr Cys Tyr Glu Gln Leu Asn Asp Ser Ser Glu Glu Glu 435 440 445 Asp Glu Ile Asp Gly Pro Ala Gly Gln Ala Glu Pro Asp Arg Ala His 450 455 460 Tyr Asn Ile Val Thr Phe Cys Cys Lys Cys Asp Ser Thr Leu Arg Leu 465 470 475 480 Cys Val Gln Ser Thr His Val Asp Ile Arg Thr Leu Glu Asp Leu Leu 485 490 495 Met Gly Thr Leu Gly Ile Val Cys Pro Ile Cys Ser Gln Lys Pro Leu 500 505 510 Glu Lys Asp Glu Leu Lys Asp Glu Leu Lys Asp Glu Leu 515 520 525 <210> 55 <211> 290 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> fusion protein RAP1-CD28convPEt-E7-K3 <400> 55 Ala Glu Phe Glu 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Gly Pro Ala Gly Gln Ala Glu 210 215 220 Pro Asp Arg Ala His Tyr Asn Ile Val Thr Phe Cys Cys Lys Cys Asp 225 230 235 240 Ser Thr Leu Arg Leu Cys Val Gln Ser Thr His Val Asp Ile Arg Thr 245 250 255 Leu Glu Asp Leu Leu Met Gly Thr Leu Gly Ile Val Cys Pro Ile Cys 260 265 270 Ser Gln Lys Pro Leu Glu Lys Asp Glu Leu Lys Asp Glu Leu Lys Asp 275 280 285 Glu Leu 290

Claims (15)

1. 조성물로서,
   (a) 적어도 병원체(pathogen)의 항원을 포함하는 치료적 유효량의 면역원성 단백질(immunogenic protein);
   (b) GPI-0100, 퀼 A(Quil A), QS-21로 이루어진 군으로부터 선택된 사포닌-기재 아주반트(adjuvant); 및
   (c) 모노포스포릴 지질 A(MPL), 및 CpG1826으로 이루어진 군으로부터 선택된 톨-유사 수용체(Toll-like receptor: TLR) 효능제 아주반트를 포함하는, 조성물.
2. 제1항에 있어서, 만니톨, 수크로스, 트레할로스, 히스틴딘, 글리신, 아르기닌, 소르비톨, 폴리소르베이트(Polysorbate) 80, 글루코스, 락토스, 말토스, 말토덱스트린, 시트레이트, 트리스(Tris) 및 인산나트륨으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 첨가제를 더 포함하는, 조성물.
3. 제1항에 있어서, 상기 면역원성 단백질은,
   (a) 상기 융합 단백질의 N-말단에 위치된, 항원-제시 세포(antigen-presenting cell: APC)-결합 도메인 또는 CD91 수용체-결합 도메인;
   (b) 상기 APC-결합 도메인 또는 상기 CD91 수용체-결합 도메인의 C-말단에 위치된, 단백질 형질도입 도메인; 및
   (c) 상기 단백질 형질도입 도메인의 C-말단에 위치된 병원체의 항원
   을 포함하는 융합 단백질이고,
   상기 단백질 형질도입 도메인은,
   (i) 융합 폴리펩타이드로서,
   (1) 서열번호 31의 아미노산 서열을 포함하고, Xaa⁸은 I 또는 L이며; Xaa¹⁰은 V, F 또는 A이고, Xaa¹¹은 M 또는 L이며, Xaa¹⁷은 L 또는 I이고, 상기 융합 폴리펩타이드의 N-말단에 위치된, 28 내지 53개의 아미노산 잔기 길이로 이루어진 T 세포 민감성 신호-형질도입 펩타이드(T cell sensitizing signal-transducing peptide);
   (2) 서열번호 3, 20 또는 4와 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 34 내지 112개의 아미노산 잔기 길이로 이루어진 전좌(translocation) 펩타이드; 및
   (3) 서열번호 15를 포함하는, 상기 T 세포 민감성 신호-형질도입 펩타이드와 상기 전좌 펩타이드를 연결하는 링커
   를 포함하는, 상기 융합 폴리펩타이드;
   (ii) 상기 서열번호 31의 아미노산 서열을 포함하고, Xaa⁸은 I 또는 L이며, Xaa¹⁰은 V, F 또는 A이고, Xaa¹¹은 M 또는 L이며, Xaa¹⁷은 L 또는 I인, 28 내지 53개의 아미노산 잔기 길이로 이루어진 T 세포-민감성 신호-형질도입 펩타이드; 및
   (iii) 서열번호 3 또는 20과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 34 내지 46개의 아미노산 잔기 길이의 전좌 펩타이드
   로 이루어진 군으로부터 선택되며,
   상기 APC-결합 도메인 또는 상기 CD91 수용체-결합 도메인은 상기 단백질 형질도입 도메인이 (biii)에서의 34 내지 46개의 아미노산 잔기 길이의 전좌 펩타이드인 경우, 슈도모나스 엑소톡신(Pseudomonas exotoxin) A(PE) 결합 도메인 I의 아미노산 서열을 갖지 않는, 조성물.
4. 제3항에 있어서, 상기 단백질 형질도입 도메인은 서열번호 30의 서열을 포함하는, 조성물.
5. 제3항에 있어서, 상기 APC-결합 도메인 또는 상기 CD91 수용체-결합 도메인은 서열번호 5, 9, 6, 7, 및 8로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드인, 조성물.
6. 제3항에 있어서, 상기 T 세포 민감성 신호-형질도입 펩타이드는 서열번호 1 및 2로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는, 조성물.
7. 제3항에 있어서, 상기 전좌 펩타이드는 상기 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는, 조성물.
8. 제3항에 있어서, 상기 병원체는 인간 파필로마바이러스(Human Papillomavirus: HPV), 돼지 재생산 및 호흡 증후군 바이러스(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus: PRRSV), 인간 면역-결핍 바이러스(Human Immuno-deficient Virus: HIV-1), 독감 바이러스(flu virus), 댕기 바이러스(dengue virus), C형 감염 바이러스(Hepatitis C virus: HCV), B형 감염 바이러스(Hepatitis B virus: HBV) 및 돼지 서코바이러스 2(Porcine Circovirus 2: PCV2)로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 1종인, 조성물.
9. 제3항에 있어서, 상기 병원체의 항원은 인간 파필로마바이러스(HPV) E7 단백질, B형 감염 바이러스(HBV) HBx 단백질, C형 감염 바이러스(HCV) 중심 항원, 독감 바이러스 M2 항원, 및 종양 연관 항원으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 조성물.
10. 제9항에 있어서, 상기 종양 연관 항원은 SSX2, MAGE-A3, NY-ESO-1, iLRP, WT12-281, RNF43(2-116 + 696-783) 및 CEA-NE3으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 조성물.
11. 제9항에 있어서, 상기 HPV E7 단백질은 서열번호 21과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 조성물.
12. 제3항에 있어서, 상기 융합 단백질은 상기 융합 단백질의 C-말단에 위치된 세포질 그물 보유 서열(endoplasmic reticulum retention sequence)을 더 포함하는, 조성물.
13. 제1항에 있어서, 상기 면역원성 단백질은,
    (a) 상기 융합 단백질의 N-말단에 위치된, 항원-제시 세포(APC)-결합 도메인 또는 CD91 수용체-결합 도메인;
    (b) 상기 APC-결합 도메인 또는 상기 CD91 수용체-결합 도메인의 C-말단에 위치된, 서열번호 3, 4, 20, 또는 41과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 34 내지 112개의 아미노산 잔기 길이의 전좌 펩타이드;
    (c) 병원체의 항원;
    (d) 서열번호 44의 아미노산 서열을 포함하는 핵 외수송 신호; 및
    (e) 상기 융합 단백질의 C-말단에 위치된 세포질 그물 보유 서열
    을 포함하는 융합 단백질이되,
    상기 핵 외수송 신호는 상기 항원과 상기 세포질 그물 보유 서열 사이에, 또는 상기 전좌 펩타이드와 상기 항원 사이에 위치된, 조성물.
14. 제1항에 있어서, 상기 면역원성 단백질은,
    (a) 상기 융합 단백질의 N-말단에 위치된, 항원-제시 세포(APC)-결합 도메인 또는 CD91 수용체-결합 도메인;
    (b) 상기 APC-결합 도메인 또는 상기 CD91 수용체-결합 도메인의 C-말단에 위치된, 서열번호 3, 20, 또는 41과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 34 내지 61개의 아미노산 잔기 길이의 전좌 펩타이드;
    (c) 병원체의 항원;
    (d) 서열번호 44의 아미노산 서열을 포함하는 핵 외수송 신호; 및
    (e) 상기 융합 단백질의 C-말단에 위치된 세포질 그물 보유 서열을 포함하는 융합 단백질이되;
    상기 핵 외수송 신호는 상기 항원과 상기 세포질 그물 보유 서열 사이에, 또는 상기 전좌 펩타이드와 상기 항원 사이에 위치된, 조성물.
15. 병원체 항원-특이적인 T 세포-매개된 면역 반응의 도출이 필요한 대상체에서 병원체 항원-특이적인 T 세포-매개된 면역 반응을 도출하기 위한 약제의 제조에서의, 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 청구된 조성물의 용도.

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