KR20170084332A - Klotho 변이체 폴리펩티드를 사용하는 방법 및 조성물 - Google Patents

Klotho 변이체 폴리펩티드를 사용하는 방법 및 조성물 Download PDF

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Abstract

본 개시내용은 1 내지 최대 약 20개의 아미노산이 C-말단으로부터 결실되고, 임의로 또한 V563 및/또는 K795에서 돌연변이를 갖는 알파 sKlotho 변이체 또는 단편과 관련된 조성물 및 방법에 관한 것이다. 본 개시내용은 또한 V563 및/또는 K795에서 돌연변이를 가지며, 여기서 폴리펩티드 변이체 또는 단편은 전장이거나, 또는 임의로 1 내지 최대 약 20개의 아미노산이 C-말단으로부터 결실된 것인 알파 sKlotho 폴리펩티드 변이체 또는 단편에 관한 것이다. 본 개시내용은 또한 (a) 1 내지 최대 약 20개의 아미노산이 C-말단으로부터 결실되고, 임의로 또한 V563 및/또는 K795에서 돌연변이를 갖는 알파 sKlotho; (b) 링커; 및 (c) 임의로 R179, C206 및/또는 C244에서 돌연변이를 갖는 FGF23, 또는 (c) 혈청 알부민을 포함하는 융합 폴리펩티드에 관한 것이다.

Description

KLOTHO 변이체 폴리펩티드를 사용하는 방법 및 조성물 {METHODS AND COMPOSITIONS USING KLOTHO VARIANT POLYPEPTIDES}
1. 배경기술
섬유모세포 성장 인자 (FGF)는 많은 유기체에서 발현되는 상동 폴리펩티드 성장 인자의 패밀리를 구성한다 (Ornitz and Itoh, Genome Biol. 2: reviews, 3005.1-3005.12 (2001)). 척추동물 종 사이에서, FGF는 유전자 구조 및 아미노산 서열 둘 다에 있어서 고도로 보존되어, 서로 13-71%의 아미노산 동일성을 갖는다. 인간에 있어서, FGF 패밀리의 22개의 공지된 구성원이 존재한다 (FGF15는 인간 FGF19의 마우스 오르토로그이고, 따라서 인간 FGF15는 존재하지 않음). 초기 발생 동안, FGF는 세포 증식, 이동, 및 분화를 조절하지만, 성체 유기체에서, FGF는 항상성을 유지하고, 조직 복구에서 기능하고, 손상에 대해 반응한다.
FGF는 세포-표면 FGF 수용체에 결합하여 그를 활성화시킴으로써 성장 인자로서 기능한다. FGF 수용체 (FGFR)는 FGFR의 자가인산화, FRS2 (FGF 수용체 기질 2) 및 ERK1/2 (세포외 신호-조절된 단백질 키나제 1/2)의 인산화를 통해 신호 전달을 활성화시키고, Egr-1 (초기 성장 반응-1)을 활성화시키는 티로신 키나제 수용체이다. FGF는 또한 헤파린 술페이트 프로테오글리칸에 대해 높은 친화도를 갖는다. FGF에 결합될 때, 헤파린 술페이트는 FGFR의 활성화를 증진시킨다.
알파-Klotho 유전자는 세포외 도메인 및 짧은 세포질 도메인을 갖는 130 kDa 단일 통과 유형 I 막횡단 단백질을 코딩한다. 알파-Klotho 단백질의 세포외 도메인은 KL-D1 및 KL-D2로 불리는 2개의 서브도메인을 포함한다. 이들 2개의 서브도메인은 박테리아 및 식물의 β-글루코시다제에 대해 서열 상동성을 공유한다. 알파-Klotho 단백질의 세포외 도메인은 막횡단 도메인에 의해 세포 표면에 결합될 수 있거나, 절단되어 세포외 환경으로 방출될 수 있다. 세포외 도메인의 절단은 국부의 낮은 세포외 Ca2+ 농도에 의해 용이하게 되는 것으로 보인다.
알파-Klotho에 더하여, 알파-Klotho의 상동체인 베타-Klotho가 확인된 바 있다 (Ito et al., Mech. Dev. 98:115-9 (2000)). 베타-Klotho도 또한 세포외 KL-D1 및 KL-D2 서브도메인을 갖는 단일 통과 유형 I 막횡단 단백질이다.
알파-Klotho 발현의 조정은 포유동물에서 노화 관련 특징을 생성하는 것으로 입증된 바 있다. 알파-Klotho 유전자에서의 기능 상실 돌연변이에 동형접합인 마우스는 수명 단축, 피부 위축, 근육 소모, 동맥경화증, 폐기종 및 골다공증을 포함한 인간 노화와 유사한 특징이 발생한다 (Kuro-o et al., Nature, 390:45-51 (1997)). 대조적으로, 마우스에서 알파-Klotho 유전자의 과다발현은 야생형 마우스에 비해 수명을 연장시키고 산화성 스트레스에 대한 저항성을 증가시킨다 (Kurosu et al., Science 309:1829-1833 (2005); Yamamoto et al., J. Biol. Chem. 280:38029-38034 (2005)).
최근 연구는 FGF23-결핍 마우스 및 알파-Klotho-결핍 마우스 사이의 놀랍게도 유사한 생물학적 특징을 입증한 바 있고 (Shimada et al., J. Clin. Invest. 113:561-568 (2004); Yoshida et al. Endocrinology 143:683-689 (2002)), 이는 FGF23과 알파-Klotho 사이의 기능적 크로스토크를 나타낸다. 이들 연구는 그의 동족 FGF 수용체를 통한 결합 및 신호전달 둘 다의 측면에서 FGF23의 필연적인 파트너로서 알파-Klotho의 확인을 이끌어 냈다 (Urakawa et al., Nature 22:1524-6 (2007)). 알파-Klotho 유전자는 신장, 부갑상선 및 맥락총에서 주로 발현된다. 알파-Klotho의 조직-특이적 발현은 FGF23 신호전달의 활성화를 이들 조직에 제한하는 것으로 가정되었다.
FGF23/알파-Klotho와 유사하게, 베타-Klotho는 그의 각각의 동족 FGF 수용체를 통한 결합 및 신호전달 둘 다에서 FGF19 및 FGF21의 필연적인 파트너이다 (Ogawa et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 104:7432-7 (2007); Lin et al., J. Biol Chem. 282:27227-84 (2007); 및 Wu et al., J. Biol. Chem. 282:29069-72 (2007)). 이러한 연구는 또한 조직-특이적 대사 활성을 조절하는데 있어서 베타-Klotho의 수반을 입증한 바 있다. 베타-Klotho는 초기에 지방 조직에서 탄수화물 및 지질 대사를 조절하기 위한 보조인자로서 FGF21과 함께 작용하는 것으로 제시되었다. 베타-Klotho는 FGF19와 함께 간에서 담즙산 대사를 조절하고, 따라서 베타-Klotho 결핍 마우스에서 상승된 담즙 합성을 설명한다 (Ito et al., J Clin Invest. 2005 Aug;115(8):2202-8).
미국 특허 번호 6,579,850은 알파-Klotho 폴리펩티드를 포함하는 폴리펩티드 및 조성물을 기재한다. 인간 및 마우스 알파-Klotho 폴리펩티드가 개시되어 있다. 상기 특허는 또한 폴리펩티드를 포함하는 조성물이 조기 노화 유사 증후군을 치료하고, 성인병을 치료하고, 노화를 억제하는데 유용하다는 것을 개시한다.
미국 특허 번호 7,223,563은 FGF23 폴리펩티드 서열을 코딩하는 단리된 핵산 또는 이러한 단리된 핵산을 포함하는 재조합 세포를 기재한다. 상기 특허는 추가로 저인산혈증 및 고인산혈증 장애, 골다공증, 피부근염, 및 관상 동맥 질환을 진단 및 치료하는 방법에 관한 것이다.
미국 특허 번호 7,259,248은 FGF21 폴리펩티드 서열을 코딩하는 단리된 핵산을 기재한다. 상기 특허는 추가로 간 질환, 흉선 기능과 관련된 병태를 진단 및 치료하는 방법, 및 고환의 병태를 치료하는 방법에 관한 것이다.
여전히, 알파-Klotho, FGF23 및 이들 성분을 포함하는 융합 폴리펩티드의 신규 인공 변이체에 대한 필요가 존재한다.
2. 개시내용의 개요
본 개시내용은 폴리펩티드, 융합 폴리펩티드 또는 가용성 폴리펩티드를 사용하여 연령-관련 병태 또는 대사 장애를 예방 또는 치료하는 방법, 용도, 키트 및 조성물에 관한 것이다.
개시내용의 폴리펩티드는, 예를 들어, Klotho 변이체, 예컨대 임의로 또한 V563 및/또는 K795에서 돌연변이를 갖는, 알파 sKlotho 델타 C-20 (여기서 1 내지 약 20개의 아미노산, 약 20개의 아미노산, 또는 20개의 아미노산이 C-말단으로부터 결실됨)을 포함한다. 또 다른 예로서, 폴리펩티드는 V563 및/또는 K795에서 돌연변이를 갖고, 전장이거나, 또는 임의로 1 내지 약 20개의 아미노산, 약 20개의 아미노산 또는 20개의 아미노산이 C-말단으로부터 결실된 알파 sKlotho 변이체이다. 임의의 이러한 폴리펩티드는 Klotho C-말단 결실 변이체이다. 이러한 Klotho C-말단 결실 변이체는, 예를 들어, PEG의 부가에 의해 추가로 변형될 수 있고/거나, 다른 폴리펩티드에 융합될 수 있다. 적합한 융합 폴리펩티드는, 특히, FGF23 또는 그의 변이체, 또는 혈청 알부민 또는 그의 변이체를 포함한다. 따라서: 본 개시내용의 융합 폴리펩티드는, 비제한적 예로서, N-말단에서 C-말단으로의 순서로, (a) 임의로 또한 V563 및/또는 K795에서 돌연변이를 갖는 알파 sKlotho 델타 C-20 (여기서 1 내지 약 20개의 아미노산, 약 20개의 아미노산, 또는 20개의 아미노산이 C-말단으로부터 결실됨); 및 (b) 임의로 R179, C206 및/또는 C244에서 돌연변이를 갖는 또 다른 폴리펩티드, 예를 들어, FGF23 (FGF23 신호 펩티드 없음), 또는 (b) 혈청 알부민; 및 임의로, (c) (a)와 (b) 사이에 위치한 링커를 포함한다. 따라서: 본 개시내용의 융합 폴리펩티드는, 비제한적 예로서, N-말단에서 C-말단으로의 순서로, (a) V563 및/또는 K795에서 돌연변이를 갖고 임의로 전장이거나 또는 델타 C-20인 (여기서 1 내지 약 20개의 아미노산, 약 20개의 아미노산, 또는 20개의 아미노산이 C-말단으로부터 결실됨) 알파 sKlotho 변이체; 및 (b) 임의로 R179, C206 및/또는 C244에서 돌연변이를 갖는 또 다른 폴리펩티드, 예를 들어, FGF23 (FGF23 신호 펩티드 없음), 또는 (b) 혈청 알부민; 및 임의로, (c) (a)와 (b) 사이에 위치한 링커를 포함한다. 일부 실시양태에서, 융합 폴리펩티드는, N-말단에서 C-말단으로의 순서로, (a) 1 내지 약 20개의 아미노산, 약 20개의 아미노산, 또는 20개의 아미노산이 C-말단으로부터 결실되고, 임의로 또한 V563 및/또는 K795에서 돌연변이를 갖는 알파 sKlotho (예를 들어, 막횡단 도메인이 결여되고 임의로 신호 펩티드가 결여된 알파 Klotho); (b) 링커 (예를 들어, 약 10, 약 20, 약 30, 또는 약 40개의 아미노산 길이); 및 (c) 임의로 R179, C206 및/또는 C244에서 돌연변이를 갖는 FGF23을 포함한다. 일부 실시양태에서, FGF23 성분은 C206 및/또는 C244에서 돌연변이를 갖는다. 이들 융합의 일부 실시양태에서, 알파 sKlotho는 V563 및/또는 K795에서 돌연변이를 갖는다. 일부 실시양태에서, sKlotho 델타 C-20은 서열식별번호(SEQ ID NO): 77 또는 78에 의해 나타내어진다 (후자는 돌연변이 V563A 및 K795E를 가짐). 일부 실시양태에서, 융합 폴리펩티드는 알파 sKlotho의 N-말단에 신호 펩티드를 포함한다. 다양한 실시양태에서, 신호 펩티드는 Klotho 신호 펩티드이다. 일부 실시양태에서, 신호 펩티드는 서열식별번호: 81의 볼드체, 밑줄표시 부분에 의해 나타내어진다. 다양한 실시양태에서, 링커는 2개의 펩티드를 연결할 수 있는 관련 기술분야에 공지된 임의의 유형의 링커이다. 다양한 실시양태에서, 링커는 1개 이상의 아미노산을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 링커는 서열식별번호: 11 내지 18 중 임의의 서열, 또는 임의의 수 또는 그의 조합을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 링커는 서열식별번호: 12의 1, 2, 3개 또는 그 초과의 카피를 포함한다. 다양한 실시양태에서, 링커는 서열식별번호: 12의 3개의 카피를 포함한다. 일부 실시양태에서, 융합 폴리펩티드는 서열식별번호: 79, 80, 81 또는 82에 의해 나타내어진다.
본 개시내용의 폴리펩티드 및 융합 폴리펩티드는 FGF23-관련 또는 Klotho-관련 질환 예컨대 연령-관련 병태 (근육감소증, 피부 위축, 근육 소모, 뇌 위축, 아테롬성동맥경화증, 동맥경화증, 폐기종, 골다공증, 골관절염, 면역 부전증, 고혈압, 치매, 헌팅톤병, 알츠하이머병, 백내장, 연령-관련 황반 변성, 전립선암, 졸중, 기대 수명 감소, 기억 상실, 주름, 신장 기능 장애, 및 연령-관련 청각 상실로 이루어진 군으로부터 선택됨), 대사 장애 (제II형 당뇨병, 대사 증후군, 고혈당증, 및 비만으로 이루어진 군으로부터 선택됨), 고인산혈증, 석회증, 만성 신질환, 만성 신부전, 암, 유방암, 및/또는 근육 위축을 치료 또는 예방하는데 사용될 수 있다. 다양한 실시양태에서, 개시내용의 Klotho 변이체 폴리펩티드 및 융합 폴리펩티드는 신장 질환을 치료하는 다양한 방법에서 사용될 수 있다.
융합 폴리펩티드의 일부 실시양태에서, FGF23은 돌연변이된다. 일부 실시양태에서, 융합 폴리펩티드는 야생형 FGF23을 포함한다. 일부 실시양태에서, 융합 폴리펩티드의 FGF23 성분은 서열식별번호: 42 또는 43 또는 서열식별번호: 79 내지 82의 볼드체 부분, 또는 이들 중 임의의 것의 기능적 활성 변이체, 단편 또는 유도체에 의해 나타내어진다. 본 개시내용의 한 실시양태에서, 융합 폴리펩티드는 R179, Y154, C206, 및 C244 중 임의의 것에서 돌연변이를 갖는 FGF23의 기능적 활성 변이체를 포함하는 폴리펩티드를 포함한다. 실시예 7 및 8 및 도 13 및 14에 제시된 데이터는 이들 돌연변이가 응집을 감소시키고, 바람직하지 않은 프로테아제-유도된 절단을 감소시키고, 생성을 증가시킨다는 것을 제시한다. FGF23 R179/Y154/C206/C244 돌연변이체는 더 많은 단백질, 훨씬 더 적은 분해 산물을 생성하고, FGF23 활성을 보유한다.
다양한 실시양태에서, 융합 폴리펩티드는 Fc-감마-수용체에 대한 감소된 친화도 및/또는 증가된 혈청 반감기를 갖는 변형된 Fc 단편을 추가로 포함한다. 예를 들어, 융합 폴리펩티드는 Klotho 변이체 [임의로 또한 V563 및/또는 K795에서 돌연변이를 갖는, 예를 들어, Klotho 또는 알파 sKlotho 델타 C-20 (여기서 1 내지 약 20개의 아미노산, 약 20개의 아미노산, 또는 20개의 아미노산이 C-말단으로부터 결실됨); 또는 V563 및/또는 K795에서 돌연변이를 갖고, 전장이거나, 또는 임의로 1 내지 약 20개의 아미노산, 약 20개의 아미노산 또는 20개의 아미노산이 C-말단으로부터 결실된 Klotho 또는 알파 sKlotho 변이체] 및 Fc-감마-수용체에 대한 감소된 친화도 및/또는 증가된 혈청 반감기를 갖는 변형된 Fc 단편을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 Klotho 단백질 또는 그의 활성 단편 또는 변이체 및 섬유모세포 성장 인자 또는 그의 활성 단편 또는 변이체를 포함하는 Klotho 융합 폴리펩티드를 제공한다. 일부 실시양태에서, 융합 폴리펩티드는 Klotho 폴리펩티드, FGF (예컨대, FGF23) 및 변형된 Fc 단편을 포함한다. Fc 단편은, 예를 들어, Fc-감마-수용체에 대한 감소된 결합 및 증가된 혈청 반감기를 가질 수 있다. sKlotho, FGF23 및 FcLALA (Fc-감마-수용체에 대한 감소된 친화도 및/또는 증가된 혈청 반감기를 갖는 변형된 Fc 단편)를 포함하는 융합 단백질은 서열식별번호: 46, 47, 48 및 49에 기재되어 있다.
일부 실시양태에서, 융합 폴리펩티드 또는 단백질은 FGF (예를 들어, FGF23) 또는 그의 기능적 활성 변이체 또는 유도체 (예를 들어, 적어도 1개의 보존적 아미노산 치환 및/또는 1개의 아미노산 결실을 포함하는 변이체); 및 변형된 Fc 단편, 또는 그의 기능적 활성 변이체 또는 유도체 (예를 들어, 적어도 1개의 보존적 아미노산 치환 및/또는 1개의 아미노산 결실을 포함하는 변이체)를 포함한다. FGF23 및 FcLALA를 포함하는 융합 단백질은 서열식별번호: 50, 51, 52 및 53에 기재되어 있다. 일부 실시양태에서, 융합 폴리펩티드는 응집 및/또는 프로테아제-매개 절단을 감소시키는, FGF23에서의 1개 이상의 돌연변이를 갖는다.
제1 측면에서, 본 개시내용은 Klotho 단백질 또는 그의 활성 단편 또는 변이체의 적어도 1개의 세포외 서브도메인 및 섬유모세포 성장 인자 또는 그의 활성 단편 또는 변이체를 갖는 융합 폴리펩티드를 제공한다. 일부 실시양태에서, 융합은 Fc-감마-수용체에 대한 감소된 친화도 (예를 들어, 감소된 Ka 또는 증가된 Kd) 및/또는 증가된 혈청 반감기를 갖는 변형된 Fc 단편을 추가로 포함한다. Klotho 세포외 도메인은 알파 또는 베타 Klotho 이소형으로부터 유래될 수 있다. 추가로, Klotho 융합 폴리펩티드의 FGF 성분은 주로 섬유모세포 성장 인자-19, 섬유모세포 성장 인자-21 및 섬유모세포 성장 인자-23과 관련하여 기재되지만, 임의의 23개의 공지된 FGF가 본 개시내용을 실시하는데 사용될 수 있는 것으로 고려된다. 본 출원의 독자는, 알파 또는 베타 세포외 도메인과 각각의 인간 FGF 단백질 또는 그의 활성 단편 또는 변이체의 모든 조합이 각각 개별적이고 구체적으로 고려된다는 것을 가정할 수 있다.
본 개시내용에 따르면, Klotho 단백질의 세포외 도메인은 Klotho 단백질의 KL-D1 및 KL-D2 도메인 중 하나 또는 둘 다, 또는 그의 기능적 활성 변이체 또는 유도체 (예를 들어, 적어도 1개의 보존적 아미노산 치환 및/또는 1개의 아미노산 결실을 포함하는 변이체)를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 Klotho 융합 폴리펩티드는 Klotho 단백질의 적어도 2개의 세포외 서브도메인 또는 그의 기능적 활성 변이체 또는 유도체 (예를 들어, 적어도 1개의 보존적 아미노산 치환 및/또는 1개의 아미노산 결실을 포함하는 변이체)를 갖는다. 예를 들어, 적어도 2개의 세포외 서브도메인은 탠덤 반복되는 적어도 2개의 KL-D1 도메인, 탠덤 반복되는 적어도 2개의 KL-D2 도메인, 또는 적어도 1개의 KL-D1 도메인 및 적어도 1개의 KL-D2 도메인일 수 있다. 다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 융합 폴리펩티드는 전장 알파 Klotho 단백질의 아미노산 28-292 또는 아미노산 28-982 (서열식별번호: 7)를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용의 융합 폴리펩티드는 전장 베타 Klotho 단백질의 아미노산 52-997을 포함한다.
본 개시내용의 한 실시양태에서, 융합 폴리펩티드의 성분은 (a) 섬유모세포 성장 인자 23 (FGF23), 또는 그의 기능적 활성 변이체 또는 유도체 (예를 들어, 적어도 1개의 보존적 아미노산 치환 및/또는 1개의 아미노산 결실을 포함하는 변이체)를 포함하며, 여기서 FGF23은 위치 R179, Y154, Q156, C206 및 C244 중 1개 이상에서 돌연변이를 갖는 것인 폴리펩티드; 및 (b) Fc-감마-수용체에 대한 감소된 친화도 및/또는 증가된 혈청 반감기를 갖는 변형된 Fc 단편, 또는 Klotho 단백질의 적어도 1개의 세포외 서브도메인, 또는 그의 기능적 활성 변이체 또는 유도체 (예를 들어, 적어도 1개의 보존적 아미노산 치환 및/또는 1개의 아미노산 결실을 포함하는 변이체)를 포함하는 폴리펩티드; 및, 임의로 (c) 링커를 포함한다. 실시예 8 및 도 13 및 14에 제시된 결과는 FGF23 R179/Y154/C206/C244 돌연변이체가 더 많은 단백질, 훨씬 더 적은 분해 산물을 생성하지만, 유의한 FGF23 활성은 보유한다는 것을 제시한다.
FGF23의 돌연변이의 모든 조합이 동등하게 유효한 것은 아니다. 게다가, 특정한 부위에서의 모든 돌연변이가 동등하게 유효한 것은 아니다. S155에서의 돌연변이는 Y154에서의 돌연변이보다 훨씬 더 많은 분해 산물을 생성한다. 게다가, Y154D의 돌연변이는 Y154H 또는 Y154N의 돌연변이보다 더 적은 분해 산물을 생성한다. 따라서:
본 개시내용의 한 실시양태에서, 개시내용은 (a) R179, Y154, C206, 및 C244에서 돌연변이를 갖는 FGF23의 기능적 활성 변이체를 포함하는 폴리펩티드, 및 (b) Fc-감마-수용체에 대한 감소된 친화도 및/또는 증가된 혈청 반감기를 갖는 변형된 Fc 단편, 및, 임의로 (c) 링커를 포함하는 융합 폴리펩티드를 포함하는 조성물을 제공하며, 여기서 FGF23은 S155에서 돌연변이를 갖지 않는다.
본 개시내용의 한 실시양태에서, 개시내용은 (a) R179, Y154, C206, 및 C244에서 돌연변이를 갖는 FGF23의 기능적 활성 변이체를 포함하는 폴리펩티드, 및 (b) Fc-감마-수용체에 대한 감소된 친화도 및/또는 증가된 혈청 반감기를 갖는 변형된 Fc 단편, 및, 임의로 (c) 링커를 포함하는 융합 폴리펩티드를 포함하는 조성물을 제공하며, 여기서 Y154에서의 돌연변이는 Y154D이다.
본 개시내용의 한 실시양태에서, 개시내용은 (a) R179, Y154, C206, 및 C244에서 돌연변이를 갖는 FGF23의 기능적 활성 변이체를 포함하는 폴리펩티드, 및 (b) Fc-감마-수용체에 대한 감소된 친화도 및/또는 증가된 혈청 반감기를 갖는 변형된 Fc 단편, 및, 임의로 (c) 링커를 포함하는 융합 폴리펩티드를 포함하는 조성물을 제공하며, 여기서 Y154에서의 돌연변이는 Y154D이고, FGF23은 S155에서 돌연변이를 갖지 않는다.
추가적인 추가의 실시양태가 하기 개시된다.
본 개시내용의 한 실시양태에서, 융합 폴리펩티드의 성분은 (a) R179, Y154, C206, 및 C244에서 돌연변이를 갖는 FGF23의 기능적 활성 변이체를 포함하는 폴리펩티드; 및 (b) Fc-감마-수용체에 대한 감소된 친화도 및/또는 증가된 혈청 반감기를 갖는 변형된 Fc 단편, 또는 Klotho 단백질의 적어도 1개의 세포외 서브도메인, 또는 그의 기능적 활성 변이체 또는 유도체 (예를 들어, 적어도 1개의 보존적 아미노산 치환 및/또는 1개의 아미노산 결실을 포함하는 변이체)를 포함하는 폴리펩티드; 및, 임의로, (c) 링커를 포함한다.
본 개시내용의 한 실시양태에서, 융합 폴리펩티드의 성분은 (a) R179, Y154, C206, 및 C244에서 돌연변이를 갖는 FGF23의 기능적 활성 변이체를 포함하는 폴리펩티드; 및 (b) Fc-감마-수용체에 대한 감소된 친화도 및/또는 증가된 혈청 반감기를 갖는 변형된 Fc 단편; 및, 임의로, (c) 링커를 포함한다.
본 개시내용의 한 실시양태에서, 융합 폴리펩티드의 성분은 (a) 돌연변이 R179Q, Y154D, C206S, 및 C244S를 갖는 FGF23의 기능적 활성 변이체를 포함하는 폴리펩티드; 및 (b) Fc-감마-수용체에 대한 감소된 친화도 및/또는 증가된 혈청 반감기를 갖는 변형된 Fc 단편; 및, 임의로, (c) 링커를 포함한다. 이러한 실시양태의 예는 서열식별번호: 70 및 74에 제공된다.
본 개시내용의 한 실시양태에서, 융합 폴리펩티드의 성분은 (a) 돌연변이 R179Q, Y154C, C206S, 및 C244S를 갖는 FGF23의 기능적 활성 변이체를 포함하는 폴리펩티드; 및 (b) Fc-감마-수용체에 대한 감소된 친화도 및/또는 증가된 혈청 반감기를 갖는 변형된 Fc 단편; 및, 임의로, (c) 링커를 포함한다. 이러한 실시양태의 예는 서열식별번호: 72 및 76에 제공된다.
성분은, 예를 들어 펩티드 결합에 의해 인 프레임으로 화학적으로 연결되거나 융합될 수 있다. 이들은 또한 링커를 통해 연결될 수 있다. 폴리펩티드 링커의 비제한적 예는 서열식별번호: 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 및 18이다. 이러한 링커는 서열식별번호: 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 및 18의 적어도 1개 및 최대 약 30개의 반복을 포함할 수 있다. 또 다른 비제한적 실시양태에서, 융합은 (2) FGF 또는 그의 활성 단편 또는 변이체 및 (3) 변형된 Fc 단편을 포함한다. 융합의 다양한 성분은 임의의 순서로 작동가능하게 연결될 수 있고; 폴리펩티드 (1)은 (2) 또는 (3)에 대한 폴리펩티드의 N-말단에 작동가능하게 연결될 수 있고; (2)에 대한 폴리펩티드는 (1) 또는 (3)에 대한 폴리펩티드의 N-말단에 작동가능하게 연결될 수 있고; (3)에 대한 폴리펩티드는 (1) 또는 (2)에 대한 폴리펩티드의 N-말단에 작동가능하게 연결될 수 있다.
본 개시내용에 따르면, Klotho 단백질의 세포외 서브도메인, 섬유모세포 성장 인자, 및 Fc-감마-수용체에 대한 감소된 친화도 및/또는 증가된 혈청 반감기를 갖는 (임의적인) 변형된 Fc 단편은 다양한 배향 및 방식으로 서로 작동가능하게 연결될 수 있다. 예를 들어, Klotho 단백질의 세포외 서브도메인은 섬유모세포 성장 인자의 N-말단에 작동가능하게 연결될 수 있거나, 또는 대안적으로 섬유모세포 성장 인자는 Klotho 단백질의 세포외 서브도메인의 N-말단에 작동가능하게 연결될 수 있다.
한 실시양태에서, 본 개시내용은 Klotho 단백질의 sKlotho 및 링커를 포함하는 융합 폴리펩티드를 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 알파 Klotho 단백질의 sKlotho 및 링커를 포함하는 융합 폴리펩티드를 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 베타 Klotho 단백질의 sKlotho 및 링커를 포함하는 융합 폴리펩티드를 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 (예를 들어, 신호 펩티드가 없는) 인간 FGF 단백질 또는 그의 활성 단편 또는 변이체 및 링커를 제공한다. 한 실시양태에서, 개시내용은 요법에 사용하기 위한 또는 병리학적 장애의 치료에 사용하기 위한 의약으로서 융합 단백질, 핵산 분자 또는 제약 조성물을 제공한다. 본 개시내용의 융합 단백질을 포함하는 제약 조성물, 및 연령-관련 병태 또는 대사 장애를 치료 또는 예방하기 위한 그의 용도가 또한 본 개시내용에 포괄된다. 일부 실시양태에서, 융합 단백질은 Fc-감마-수용체에 대한 감소된 친화도 및/또는 증가된 혈청 반감기를 갖는 변형된 Fc 단편을 추가로 포함한다.
한 실시양태에서, 본 개시내용은 FGF-23에 (직접적으로 또는 링커를 통해 간접적으로) 융합된 신호 펩티드가 있는 알파 Klotho 단백질의 sKlotho를 포함하는 융합 폴리펩티드를 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 FGF-23에 (직접적으로 또는 링커를 통해 간접적으로) 융합된 신호 펩티드가 없는 알파 Klotho 단백질의 sKlotho를 포함하는 융합 폴리펩티드를 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 신호 펩티드가 없는 FGF-23에 (직접적으로 또는 링커를 통해 간접적으로) 융합된 신호 펩티드가 있는 알파 Klotho 단백질의 sKlotho를 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 신호 펩티드가 없는 FGF-23에 (직접적으로 또는 링커를 통해 간접적으로) 융합된 신호 펩티드가 없는 알파 Klotho 단백질의 sKlotho를 포함하는 융합 폴리펩티드를 제공한다. 일부 실시양태에서, 융합 단백질은 Fc-감마-수용체에 대한 감소된 친화도 및/또는 증가된 혈청 반감기를 갖는 변형된 Fc 단편을 추가로 포함한다.
한 실시양태에서, 본 개시내용은 FGF-23 (R179Q) 변이체에 (직접적으로 또는 링커를 통해 간접적으로) 융합된 신호 펩티드가 있는 알파 Klotho 단백질의 sKlotho를 포함하는 융합 폴리펩티드를 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 FGF-23 (R179Q) 변이체에 (직접적으로 또는 링커를 통해 간접적으로) 융합된 신호 펩티드가 없는 알파 Klotho 단백질의 sKlotho를 포함하는 융합 폴리펩티드를 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 신호 펩티드가 없는 FGF-23 (R179Q) 변이체에 (직접적으로 또는 링커를 통해 간접적으로) 융합된 신호 펩티드가 있는 알파 Klotho 단백질의 sKlotho를 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 신호 펩티드가 없는 FGF-23 (R179Q) 변이체에 (직접적으로 또는 링커를 통해 간접적으로) 융합된 신호 펩티드가 없는 알파 Klotho 단백질의 sKlotho를 포함하는 융합 폴리펩티드를 제공한다. 일부 실시양태에서, 융합 단백질은 Fc-감마-수용체에 대한 감소된 친화도 및/또는 증가된 혈청 반감기를 갖는 변형된 Fc 단편을 추가로 포함한다.
한 실시양태에서, 본 개시내용은 (a) 섬유모세포 성장 인자 23 (FGF23) 또는 그의 기능적 활성 변이체 또는 유도체 (예를 들어, 적어도 1개의 보존적 아미노산 치환 및/또는 1개의 아미노산 결실을 포함하는 변이체)를 포함하며, 여기서 FGF23은 위치 Y154, Q156, C206 및 C244 중 1개 이상에서 돌연변이를 갖는 것인 폴리펩티드; 및 (b) Fc-감마-수용체에 대한 감소된 친화도 및/또는 증가된 혈청 반감기를 갖는 변형된 Fc 단편, 또는 Klotho 단백질의 적어도 1개의 세포외 서브도메인, 또는 그의 기능적 활성 변이체 또는 유도체 (예를 들어, 적어도 1개의 보존적 아미노산 치환 및/또는 1개의 아미노산 결실을 포함하는 변이체)를 포함하는 폴리펩티드; 및, 임의로 (c) 링커를 포함하는 융합 폴리펩티드를 제공한다. 이러한 융합 폴리펩티드는 서열식별번호: 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67 및 68에 개시된다.
한 실시양태에서, 본 개시내용은 (1) 신호 펩티드가 있는 알파 Klotho 단백질의 sKlotho, 또는 그의 기능적 활성 변이체 또는 유도체 (예를 들어, 적어도 1개의 보존적 아미노산 치환 및/또는 1개의 아미노산 결실을 포함하는 변이체); (2) 링커; 및 (3) 신호 펩티드가 없는 FGF-23 (R179Q) 변이체, 또는 그의 기능적 활성 변이체 또는 유도체 (예를 들어, 적어도 1개의 보존적 아미노산 치환 및/또는 1개의 아미노산 결실을 포함하는 변이체)를 포함하는 융합 폴리펩티드를 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 (1) 신호 펩티드가 없는 알파 Klotho 단백질의 sKlotho, 또는 그의 기능적 활성 변이체 또는 유도체 (예를 들어, 적어도 1개의 보존적 아미노산 치환 및/또는 1개의 아미노산 결실을 포함하는 변이체); (2) 링커; 및 (3) 신호 펩티드가 없는 FGF-23 (R179Q) 변이체, 또는 그의 기능적 활성 변이체 또는 유도체 (예를 들어, 적어도 1개의 보존적 아미노산 치환 및/또는 1개의 아미노산 결실을 포함하는 변이체)를 포함하는 융합 폴리펩티드를 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 융합 폴리펩티드는 글리코실화된다. 일부 실시양태에서, 융합 단백질은 Fc-감마-수용체에 대한 감소된 친화도 및/또는 증가된 혈청 반감기를 갖는 변형된 Fc 단편을 추가로 포함한다.
한 실시양태에서, 본 개시내용은 (1) 신호 펩티드가 있는 알파 Klotho 단백질의 sKlotho (서열식별번호: 44 또는 서열식별번호: 45), 또는 그의 기능적 활성 변이체 또는 유도체 (예를 들어, 적어도 1개의 보존적 아미노산 치환 및/또는 1개의 아미노산 결실을 포함하는 변이체); (2) 서열식별번호: 11을 포함하는 링커; 및 (3) 신호 펩티드가 없는 FGF-23 (R179Q) 변이체 (서열식별번호: 43), 또는 그의 기능적 활성 변이체 또는 유도체 (예를 들어, 적어도 1개의 보존적 아미노산 치환 및/또는 1개의 아미노산 결실을 포함하는 변이체)를 포함하는 융합 폴리펩티드를 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 (1) 신호 펩티드가 없는 알파 Klotho 단백질의 sKlotho (서열식별번호: 7), 또는 그의 기능적 활성 변이체 또는 유도체 (예를 들어, 적어도 1개의 보존적 아미노산 치환 및/또는 1개의 아미노산 결실을 포함하는 변이체); (2) 서열식별번호: 11을 포함하는 링커; 및 (3) 신호 펩티드가 없는 FGF-23 (R179Q) 변이체 (서열식별번호: 43), 또는 그의 기능적 활성 변이체 또는 유도체 (예를 들어, 적어도 1개의 보존적 아미노산 치환 및/또는 1개의 아미노산 결실을 포함하는 변이체)를 포함하는 융합 폴리펩티드를 제공한다. 한 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 19, 20, 40 또는 41의 아미노산 서열을 포함하는 융합 폴리펩티드를 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 융합 폴리펩티드는 글리코실화된다.
한 실시양태에서, 본 개시내용은 신호 펩티드가 있는 알파 Klotho 단백질의 sKlotho (서열식별번호: 44 또는 서열식별번호: 45), 또는 그의 기능적 활성 변이체 또는 유도체 (예를 들어, 적어도 1개의 보존적 아미노산 치환 및/또는 1개의 아미노산 결실을 포함하는 변이체); 및 서열식별번호: 11을 포함하는 링커를 포함하는 융합 폴리펩티드를 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 신호 펩티드가 없는 알파 Klotho 단백질의 sKlotho (서열식별번호: 7); 및 서열식별번호: 11을 포함하는 링커를 포함하는 융합 폴리펩티드를 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 융합 폴리펩티드는 글리코실화된다. 일부 실시양태에서, 융합 단백질은 Fc-감마-수용체에 대한 감소된 친화도 및/또는 증가된 혈청 반감기를 갖는 변형된 Fc 단편을 추가로 포함한다.
한 실시양태에서, 본 개시내용은 (예를 들어, 신호 펩티드가 없는) 인간 FGF 단백질 또는 그의 활성 단편 또는 변이체; 및 서열식별번호: 11을 포함하는 링커를 포함하는 융합 폴리펩티드를 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 융합 폴리펩티드는 글리코실화된다. 일부 실시양태에서, 융합 단백질은 Fc-감마-수용체에 대한 감소된 친화도 및/또는 증가된 혈청 반감기를 갖는 변형된 Fc 단편을 추가로 포함한다.
한 실시양태에서, 본 개시내용은 (예를 들어, 신호 펩티드가 없는) 인간 FGF 단백질 (예를 들어, FGF23) 또는 그의 활성 단편 또는 변이체; 링커 (예를 들어, 서열식별번호: 11을 포함하는 링커); 및 (신호 펩티드가 있는 또는 없는) sKlotho, 또는 그의 기능적 활성 변이체 또는 유도체 (예를 들어, 적어도 1개의 보존적 아미노산 치환 및/또는 1개의 아미노산 결실을 포함하는 변이체) 또는 Fc-감마-수용체 (예를 들어, FcLALA)를 포함하는 융합 폴리펩티드를 제공하며; 여기서 FGF (예를 들어, FGF23)는 이들 잔기: R179, Y154, Q156, C206, 및/또는 C244에서 1개 이상의 돌연변이를 갖는다. 다양한 실시양태에서, 돌연변이는 R179Q, Y154D, Q156A, C206S, 및/또는 C244S이다. 이들 돌연변이가 인간, 레서스, 소, 마우스 및 래트 FGF23에서 보존되더라도, 이들을 돌연변이시키는 것은 FGF23 활성을 막지 않는다. 오히려, 이들 아미노산을 돌연변이시키는 것은 예상외로 응집을 감소시키고, 바람직하지 않은 프로테아제-유도된 절단을 감소시키고, 세포로부터의 단백질 생성을 증가시킴으로써 단백질의 품질을 증진시킨다. 다양한 실시양태에서, 1개 이상의 FGF23 돌연변이를 포함하는 융합 단백질은 글리코실화된다.
한 실시양태에서, 본 개시내용은 (1) 신호 펩티드가 없는 FGF-23 (R179Q) 변이체 (서열식별번호: 43), 또는 응집 및/또는 프로테아제-매개 절단을 감소시키는 추가의 돌연변이를 포함하는 변이체, 또는 그의 기능적 활성 변이체 또는 유도체 (예를 들어, 적어도 1개의 보존적 아미노산 치환 및/또는 1개의 아미노산 결실을 포함하는 변이체); (2) 임의로, 서열식별번호: 11을 포함하는 링커; 및 (3) 신호 펩티드가 있는 알파 Klotho 단백질의 sKlotho (서열식별번호: 44 또는 서열식별번호: 45), 또는 그의 기능적 활성 변이체 또는 유도체 (예를 들어, 적어도 1개의 보존적 아미노산 치환 및/또는 1개의 아미노산 결실을 포함하는 변이체) 또는 Fc-감마-수용체에 대한 감소된 친화도 및/또는 증가된 혈청 반감기를 갖는 변형된 Fc 단편을 포함하는 (예를 들어, 글리코실화된 또는 비-글리코실화된) 융합 폴리펩티드를 (예를 들어, 단독 제약 활성 성분으로서) 포함하는 (예를 들어, 근육내 투여 형태의) 제약 조성물; 및 병리학적 장애의 치료, 예를 들어 연령-관련 병태, 예컨대 근육 위축의 치료 및/또는 예방을 위한 요법에서의 또는 의약으로서의 제약 조성물의 용도를 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 (1) 신호 펩티드가 없는 FGF-23 (R179Q) 변이체 (서열식별번호: 43), 또는 응집 및/또는 프로테아제-매개 절단을 감소시키는 추가의 돌연변이를 포함하는 변이체, 또는 그의 기능적 활성 변이체 또는 유도체 (예를 들어, 적어도 1개의 보존적 아미노산 치환 및/또는 1개의 아미노산 결실을 포함하는 변이체) (2) 서열식별번호: 11을 포함하는 링커; 및 (3) 신호 펩티드가 없는 알파 Klotho 단백질의 sKlotho (서열식별번호: 7), 또는 그의 기능적 활성 변이체 또는 유도체 (예를 들어, 적어도 1개의 보존적 아미노산 치환 및/또는 1개의 아미노산 결실을 포함하는 변이체), 또는 Fc-감마-수용체에 대한 감소된 친화도 및/또는 증가된 혈청 반감기를 갖는 변형된 Fc 단편, 또는 그의 기능적 활성 변이체 또는 유도체 (예를 들어, 적어도 1개의 보존적 아미노산 치환 및/또는 1개의 아미노산 결실을 포함하는 변이체)를 포함하는 (예를 들어, 글리코실화된 또는 비-글리코실화된) 융합 폴리펩티드를 (예를 들어, 단독 제약 활성 성분으로서) 포함하는 (예를 들어, 근육내 투여 형태의) 제약 조성물; 및 병리학적 장애의 치료, 예를 들어 연령-관련 병태, 예컨대 근육 위축의 치료 및/또는 예방을 위한 요법에서의 또는 의약으로서의 제약 조성물의 용도를 제공한다. 한 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 19, 20, 40 또는 41의 아미노산 서열을 포함하는 (예를 들어, 글리코실화된 또는 비-글리코실화된) 융합 폴리펩티드를 (예를 들어, 단독 제약 활성 성분으로서) 포함하는 (예를 들어, 근육내 투여 형태의) 제약 조성물; 및 병리학적 장애의 치료, 예를 들어 연령-관련 병태, 예컨대 근육 위축의 치료 및/또는 예방을 위한 요법에서의 또는 의약으로서의 제약 조성물의 용도를 제공한다.
한 실시양태에서, 본 개시내용은 신호 펩티드가 있는 알파 Klotho 단백질의 sKlotho (서열식별번호: 44 또는 서열식별번호: 45); 및 서열식별번호: 11을 포함하는 링커를 포함하는 (예를 들어, 글리코실화된 또는 비-글리코실화된) 융합 폴리펩티드를 (예를 들어, 단독 제약 활성 성분으로서) 포함하는 (예를 들어, 근육내 투여 형태의) 제약 조성물; 및 연령-관련 병태, 예컨대 근육 위축의 치료 및/또는 예방을 위한 제약 조성물의 용도를 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 신호 펩티드가 없는 알파 Klotho 단백질의 sKlotho (서열식별번호: 7); 및 서열식별번호: 11을 포함하는 링커를 포함하는 (예를 들어, 글리코실화된 또는 비-글리코실화된) 융합 폴리펩티드를 (예를 들어, 단독 제약 활성 성분으로서) 포함하는 (예를 들어, 근육내 투여 형태의) 제약 조성물; 및 병리학적 장애의 치료, 예를 들어 연령-관련 병태, 예컨대 근육 위축의 치료 및/또는 예방을 위한 요법에서의 또는 의약으로서의 제약 조성물의 용도를 제공한다. 일부 실시양태에서, 융합 단백질은 변형된 Fc 단편을 추가로 포함한다.
한 실시양태에서, 본 개시내용은 (예를 들어, 신호 펩티드가 없는) 인간 FGF 단백질 또는 그의 활성 단편 또는 변이체; 및 서열식별번호: 11을 포함하는 링커를 포함하는 (예를 들어, 글리코실화된 또는 비-글리코실화된) 융합 폴리펩티드를 (예를 들어, 단독 제약 활성 성분으로서) 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
개시내용의 융합 단백질을 포함하는 제약 조성물, 및 병리학적 장애의 치료, 예를 들어 연령-관련 병태 (예를 들어, 근육 위축) 또는 대사 장애 (예를 들어, 당뇨병)의 치료 또는 예방을 위한 요법에서의 또는 의약으로서의 그의 용도가 또한 본 개시내용에 포괄된다.
한 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 19와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 동일한 융합 폴리펩티드를 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 20과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 동일한 융합 폴리펩티드를 제공한다.
한 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 40과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 동일한 융합 폴리펩티드를 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 41과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 동일한 융합 폴리펩티드를 제공한다.
한 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 46과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 융합 폴리펩티드를 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 47과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 융합 폴리펩티드를 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 48과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 융합 폴리펩티드를 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 49와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 융합 폴리펩티드를 제공한다.
한 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 50과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 융합 폴리펩티드를 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 51과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 융합 폴리펩티드를 제공한다.
한 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 52와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 융합 폴리펩티드를 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 53과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 융합 폴리펩티드를 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 54와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 융합 폴리펩티드를 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 55와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 융합 폴리펩티드를 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 56과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 융합 폴리펩티드를 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 57과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 융합 폴리펩티드를 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 58과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 융합 폴리펩티드를 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 59와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 융합 폴리펩티드를 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 60과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 융합 폴리펩티드를 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 61과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 융합 폴리펩티드를 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 62와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 융합 폴리펩티드를 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 63과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 융합 폴리펩티드를 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 64와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 융합 폴리펩티드를 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 65와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 융합 폴리펩티드를 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 66과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 융합 폴리펩티드를 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 67과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 융합 폴리펩티드를 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 68과 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 융합 폴리펩티드를 제공한다.
한 실시양태에서, 본 개시내용은 FGF-19 또는 그의 활성 단편 또는 변이체에 (직접적으로 또는 링커를 통해 간접적으로) 융합된 신호 펩티드가 있는 베타 Klotho 단백질의 sKlotho를 포함하는 융합 폴리펩티드를 제공한다. 일부 실시양태에서, 융합은 Fc-감마-수용체에 대한 감소된 친화도 및/또는 증가된 혈청 반감기를 갖는 변형된 Fc 단편을 추가로 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 FGF-19 또는 그의 활성 단편 또는 변이체에 (직접적으로 또는 링커를 통해 간접적으로) 융합된 신호 펩티드가 없는 베타 Klotho 단백질의 sKlotho를 포함하는 융합 폴리펩티드를 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 FGF-21 또는 그의 활성 단편 또는 변이체에 (직접적으로 또는 링커를 통해 간접적으로) 융합된 신호 펩티드가 있는 베타 Klotho 단백질의 sKlotho를 포함하는 융합 폴리펩티드를 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 FGF-21 또는 그의 활성 단편 또는 변이체에 (직접적으로 또는 링커를 통해 간접적으로) 융합된 신호 펩티드가 없는 베타 Klotho 단백질의 sKlotho를 포함하는 융합 폴리펩티드를 제공한다.
본 개시내용은 본원에 기재된 임의의 Klotho 융합 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열 및 핵산을 함유하는 숙주 세포를 제공한다. 일부 실시양태에서, 융합은 Fc-감마-수용체에 대한 감소된 친화도 및/또는 증가된 혈청 반감기를 갖는 변형된 Fc 단편을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 개시내용은 본원에 기재된 임의의 폴리펩티드를 코딩하는 핵산을 포괄한다. 일부 실시양태에서, 개시내용은 본원에 기재된 임의의 융합 폴리펩티드를 코딩하는 핵산을 포괄한다. 일부 실시양태에서, 개시내용은 본원에 기재된 임의의 Klotho 또는 Klotho 변이체를 포괄한다. 일부 실시양태에서, 개시내용은 본원에 기재된 임의의 FGF 또는 FGF23 또는 FGF 또는 FGF23 변이체를 포괄한다.
본 개시내용은 또한 본원에서 고려되는 임의의 Klotho 융합 폴리펩티드를 갖는 조성물을 제공한다. 본 개시내용의 조성물은 헤파린을 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 융합은 Fc-감마-수용체에 대한 감소된 친화도 및/또는 증가된 혈청 반감기를 갖는 변형된 Fc 단편을 추가로 포함한다.
개시내용은 또한 Klotho의 변이체를 제공한다. 이들은 최대 약 20개의 아미노산이 C-말단으로부터 결실된 (델타 C-20 또는 ΔC20), 알파 sKlotho (가용성 Klotho, 막횡단 도메인이 결여되고 신호 펩티드가 결여되었지만, Klotho 도메인 1 및 2 (KL-D1 및 KL-D2)는 보유함)의 변이체를 포함한다. Klotho 델타 C-20 (알파 sKlotho ΔC20)의 비제한적 예는 서열식별번호: 77에 제공된다. 다양한 실시양태에서, Klotho 델타 C-20은 임의로 V563 및/또는 K795에서 돌연변이를 가질 수 있다. V563 및 K795에서 돌연변이를 갖는 Klotho 델타 C-20 (알파 sKlotho ΔC20)의 비제한적 예는 서열식별번호: 78에 제공된다. 개시내용은 또한 Klotho 델타 C-20을 포함하는 융합 폴리펩티드를 고려한다.
따라서: 개시내용의 폴리펩티드는, 예를 들어, 임의로 또한 V563 및/또는 K795에서 돌연변이를 갖는 알파 sKlotho 델타 C-20 (여기서 1 내지 약 20개의 아미노산, 약 20개의 아미노산, 또는 20개의 아미노산이 C-말단으로부터 결실됨)이다. 또 다른 예로서, 폴리펩티드는 V563 및/또는 K795에서 돌연변이를 갖고, 전장이거나, 또는 임의로 1 내지 약 20개의 아미노산, 약 20개의 아미노산, 또는 20개의 아미노산이 C-말단으로부터 결실된 알파 sKlotho 변이체이다. 임의의 이러한 폴리펩티드는 Klotho C-말단 결실 변이체이다. 이러한 Klotho C-말단 결실 변이체는 다른 폴리펩티드, 예컨대 FGF23 또는 그의 변이체, 또는 혈청 알부민 또는 그의 변이체에 융합될 수 있다.
개시내용은 또한 개체에서 연령-관련 병태를 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다. 개체 (예를 들어, 인간)에게 연령-관련 병태가 치료 또는 예방되도록 Klotho 변이체, 또는 예를 들어, Klotho 단백질 (예를 들어, 알파 Klotho 단백질) 또는 그의 활성 단편 또는 변이체의 적어도 1개의 세포외 서브도메인을 갖는 Klotho 변이체 및 섬유모세포 성장 인자 또는 그의 활성 단편 또는 변이체를 포함하는 융합 폴리펩티드를 함유하는 제약 조성물의 치료 유효 용량이 투여된다. 일부 실시양태에서, 융합은 Fc-감마-수용체에 대한 감소된 친화도 및/또는 증가된 혈청 반감기를 갖는 변형된 Fc 단편을 추가로 포함한다. 특히, 본 개시내용은 개체 (예를 들어, 인간)에게 폴리펩티드, 또는 알파 Klotho 단백질 또는 그의 활성 단편 또는 변이체의 적어도 1개의 세포외 서브도메인 및 섬유모세포 성장 인자 (또는 그의 활성 단편 또는 변이체)를 갖는 융합 폴리펩티드의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 근육 소모를 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다.
추가적으로, 개시내용은 개체에서 대사 장애를 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다. 개체에게 대사 장애가 치료되도록 폴리펩티드, 또는 예를 들어 Klotho 단백질의 적어도 1개의 세포외 서브도메인 및 섬유모세포 성장 인자 (또는 그의 활성 단편 또는 변이체)를 갖는 본 개시내용의 융합 폴리펩티드를 함유하는 제약 조성물의 치료 유효 용량이 투여된다. 일부 실시양태에서, 융합은 Fc-감마-수용체에 대한 감소된 친화도 및/또는 증가된 혈청 반감기를 갖는 변형된 Fc 단편을 추가로 포함한다. 특히, 베타-Klotho 단백질의 적어도 1개의 세포외 서브도메인 및 섬유모세포 성장 인자 21을 갖는 개시내용의 융합 폴리펩티드가 대사 장애를 치료하는데 유용하다.
개시내용의 Klotho-FGF23 융합 폴리펩티드는 개체에서 고인산혈증 또는 석회증을 치료 또는 예방하는데 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 융합은 Fc-감마-수용체에 대한 감소된 친화도 및/또는 증가된 혈청 반감기를 갖는 변형된 Fc 단편을 추가로 포함한다. Klotho 단백질의 적어도 1개의 세포외 서브도메인 및 섬유모세포 성장 인자를 갖는 개시내용의 Klotho 융합 폴리펩티드를 함유하는 제약 조성물의 약리학적 유효 용량이 고인산혈증 또는 석회증의 치료 또는 예방을 위해 투여된다. 특히, 알파 Klotho 단백질의 적어도 1개의 세포외 서브도메인 및 섬유모세포 성장 인자 23을 갖는 개시내용의 Klotho 융합 폴리펩티드가 고인산혈증 또는 석회증을 치료하는데 유용하다.
개시내용의 Klotho-FGF23 융합 폴리펩티드는 개체에서 만성 신질환 또는 만성 신부전을 치료 또는 예방하는데 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 융합은 Fc-감마-수용체에 대한 감소된 친화도 및/또는 증가된 혈청 반감기를 갖는 변형된 Fc 단편을 추가로 포함한다. Klotho 단백질 (예를 들어, 알파 Klotho 단백질)의 적어도 1개의 세포외 서브도메인 및 섬유모세포 성장 인자를 갖는 본 개시내용의 Klotho 융합 폴리펩티드를 함유하는 제약 조성물의 치료 유효 용량은 만성 신질환 또는 만성 신부전의 치료 또는 예방을 위해 투여된다.
개시내용의 Klotho-FGF23 융합 폴리펩티드는 개체에서 암 (예를 들어, 유방암)을 치료 또는 예방하는데 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 융합은 Fc-감마-수용체에 대한 감소된 친화도 및/또는 증가된 혈청 반감기를 갖는 변형된 Fc 단편을 추가로 포함한다. Klotho 단백질 (예를 들어, 알파 Klotho 단백질)의 적어도 1개의 세포외 서브도메인 및 섬유모세포 성장 인자를 갖는 개시내용의 Klotho 융합 폴리펩티드를 함유하는 제약 조성물의 치료 유효 용량은 암 또는 유방암의 치료 또는 예방을 위해 투여된다.
본 개시내용은 의약에서 사용하기 위한, Klotho 단백질 또는 그의 활성 단편 또는 변이체의 적어도 1개의 세포외 서브도메인 및 FGF 또는 그의 활성 단편 또는 변이체를 포함하는 융합 폴리펩티드를 제공한다. 일부 실시양태에서, 융합은 Fc-감마-수용체에 대한 감소된 친화도 및/또는 증가된 혈청 반감기를 갖는 변형된 Fc 단편을 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, 본 개시내용은 근육 위축을 치료 또는 예방하는데 사용하기 위한, Klotho 단백질 또는 그의 활성 단편 또는 변이체의 적어도 1개의 세포외 서브도메인 및 FGF 또는 그의 활성 단편 또는 변이체를 포함하는 융합 폴리펩티드를 제공한다. 본 개시내용은 또한 연령 관련 병태 (예를 들어, 근육 위축)의 치료 또는 예방을 필요로 하는 개체에게 개시내용의 폴리펩티드 또는 융합 폴리펩티드를 포함하는 제약 조성물, 예를 들어 가용성 Klotho 단백질 또는 그의 활성 단편 또는 변이체를 포함하는 것의 치료 유효 용량을 투여하는 것을 포함하는, 연령-관련 병태 (예를 들어, 근육 위축)를 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다.
개시내용은 요법에 사용하기 위한, 의약으로서의, 또는 개체에서 병리학적 장애, 예를 들어 연령-관련 병태, 대사 장애, 고인산혈증 또는 석회증, 만성 신질환 또는 만성 신부전을 치료하는데 또는 암 또는 유방암을 예방하는데 사용하기 위한, 상기 기재된 펩티드 및 융합 폴리펩티드, 또는 상기 펩티드를 포함하는 제약 조성물을 추가로 제공한다. 추가로, 개시내용은 병리학적 장애의 치료, 특히 상기 언급된 장애, 바람직하게는 근육 위축과 같은 연령 관련 병태의 치료를 위한 의약의 제조에서의 본 발명의 폴리펩티드, 핵산 또는 제약 조성물의 용도를 추가로 제공한다.
개시내용은 또한 개체에서 연령-관련 장애 또는 대사 장애를 치료 또는 예방하기 위한 키트를 포함한다. 키트는 사용 지침서, 및 Klotho 단백질의 적어도 1개의 세포외 서브도메인 및 섬유모세포 성장 인자를 갖는 정제된 Klotho 융합 폴리펩티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 융합은 Fc-감마-수용체에 대한 감소된 친화도 및/또는 증가된 혈청 반감기를 갖는 변형된 Fc 단편을 추가로 포함한다.
개시내용은 또한 개시내용의 Klotho 융합 폴리펩티드를 생성하기 위한 키트를 제공한다. 개시내용의 키트는 사용 지침서, 및 Klotho 단백질의 적어도 1개의 세포외 서브도메인 및 섬유모세포 성장 인자를 갖는 Klotho 융합 폴리펩티드를 코딩하는 핵산을 포함한다. 일부 실시양태에서, 융합은 Fc-감마-수용체에 대한 감소된 친화도 및/또는 증가된 혈청 반감기를 갖는 변형된 Fc 단편을 추가로 포함한다.
개시내용의 한 실시양태에서, 융합 폴리펩티드는 (a) 섬유모세포 성장 인자, 또는 그의 기능적 활성 변이체 또는 유도체 (예를 들어, 적어도 1개의 보존적 아미노산 치환 및/또는 1개의 아미노산 결실을 포함하는 변이체)를 포함하는 폴리펩티드; 및 (b) Fc-감마-수용체에 대한 감소된 친화도 및/또는 증가된 혈청 반감기를 갖는 변형된 Fc 단편, 또는 그의 기능적 활성 변이체 또는 유도체 (예를 들어, 적어도 1개의 보존적 아미노산 치환 및/또는 1개의 아미노산 결실을 포함하는 변이체)를 포함한다.
개시내용의 한 실시양태에서, (a)의 폴리펩티드 및 (b)의 폴리펩티드는 폴리펩티드 링커에 의해 연결된다. 링커는 1 내지 30회, 또는 그 초과로 반복될 수 있다.
개시내용의 한 실시양태에서, 폴리펩티드 링커는 서열식별번호: 11, 서열식별번호: 12, 서열식별번호: 13, 서열식별번호: 14, 서열식별번호: 15, 서열식별번호: 16, 서열식별번호: 17 및 서열식별번호: 18로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
개시내용의 한 실시양태에서, (a)의 폴리펩티드는 상기 폴리펩티드 링커의 N-말단에 펩티드 결합에 의해 연결되고, (b)의 폴리펩티드는 상기 폴리펩티드 링커의 C-말단에 펩티드 결합에 의해 연결된다.
개시내용의 한 실시양태에서, 융합 폴리펩티드는 신호 펩티드를 추가로 포함한다.
개시내용의 한 실시양태에서, 신호 펩티드는 IgG 신호 펩티드이다.
개시내용의 한 실시양태에서, 섬유모세포 성장 인자는 섬유모세포 성장 인자-23 또는 섬유모세포 성장 인자-23 변이체 (R179Q)이다.
개시내용의 한 실시양태에서, 섬유모세포 성장 인자는 섬유모세포 성장 인자-19 또는 섬유모세포 성장 인자-21이다.
개시내용의 한 실시양태에서, 융합 폴리펩티드는 서열식별번호: 51 또는 서열식별번호: 53의 아미노산 서열과 95% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
개시내용의 한 실시양태에서, 융합 폴리펩티드는 서열식별번호: 51 또는 서열식별번호: 53의 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시내용의 한 실시양태에서, 융합 폴리펩티드는 FcLALA를 포함한다.
3. 도면의 간단한 설명
도 1은 개시내용의 Klotho 융합 폴리펩티드의 여러 상이한 실시양태를 예시한다. 나타내어진 융합 폴리펩티드는 섬유모세포 성장 인자에 작동가능하게 연결된 1개 이상의 Klotho 세포외 서브도메인을 포함한다. 1개 이상의 Klotho 세포외 서브도메인을 함유하는 폴리펩티드는, 예를 들어, Klotho의 세포외 도메인 (예를 들어, 인간 Klotho의 aa 1 내지 982), 또는 Klotho의 활성 단편을 포함한다.
도 2는 개시내용의 여러 Klotho 융합 폴리펩티드 및 그의 성분 (예를 들어, Klotho 세포외 도메인, FGF)의 아미노산 및 핵산 서열을 예시한다. sKlotho, FGF23 및 FcLALA (Fc-감마-수용체에 대한 감소된 친화도 및/또는 증가된 혈청 반감기를 갖는 변형된 Fc 단편)를 포함하는 융합 단백질은 서열식별번호: 46, 47, 48 및 49에 기재되어 있다. FGF23 및 FcLALA를 포함하는 융합 단백질은 서열식별번호: 50, 51, 52 및 53에 기재되어 있다.
도 3a-3c는 sKlotho-FGF23 융합 단백질의 단백질 발현을 도시한다. 도 3a는 항-FGF23 항체를 사용한 웨스턴 블롯팅에 의해 sKlotho-FGF23 융합 단백질이 조건화 배지에서 검출되었음을 제시한다. 도 3b는 SDS-PAGE 및 쿠마시 블루 염색에 의해 sKlotho-FGF23 융합 단백질이 조건화 배지에서 검출되었음을 제시한다. 도 3c는 SDS-PAGE 및 쿠마시 블루 염색에 의해 분석된, 고도로 정제된 sKlotho-FGF23-6xHis 융합 단백질을 제시한다.
도 4는 헤파린 (20 μg/ml)의 부재 또는 존재 하에 Klotho 융합 폴리펩티드, FGF23 폴리펩티드 단독, 가용성 Klotho (sKlotho) 폴리펩티드 단독, 및 가용성 Klotho 폴리펩티드와 조합된 FGF23 폴리펩티드를 함유하는 조건화 배지로 처리된 세포에서 Egr-1의 활성화 수준을 비교하는 Egr-1 루시페라제 검정의 결과를 예시한다.
도 5a-5b는 헤파린의 부재 또는 존재 하에 정제된 Klotho 융합 폴리펩티드, FGF23 폴리펩티드, 또는 가용성 Klotho 폴리펩티드로 처리된 세포에서 Egr-1의 활성화 수준을 비교하는 Egr-1 루시페라제 검정의 결과를 도시한다. 도 5a는 헤파린 (20 μg/ml)의 부재 또는 존재 하에 FGF23 단독, sKlotho-His (10 nM 또는 20 nM), 및 FGF23과 sKlotho-His (10 nM 또는 20 nM)의 조합으로 처리된 세포에서 Egr-1의 활성화 수준을 비교하는 실험의 결과를 제시한다. 도 5b는 sKlotho-FGF23-His 융합 (0 nM, 0.6 nM, 1.21 nM, 2.41 nM, 4.83 nM, 9.65 nM, 및 19.3 nM)으로 처리된 세포에서의 Egr-1 루시페라제 리포터 활성을 제시한다.
도 6a-6b는 C2C12 근육 세포에 대한 정제된 sKlotho 융합 폴리펩티드에 의한 처리의 효과를 예시한다. 도 6a는 덱사메타손 (100 μM)의 부재 또는 존재 하에 IGF-1 (10 nM), FGF2 (20 ng/ml), 또는 정제된 Klotho 융합 폴리펩티드 (20 nM)로 처리된 C2C12 근육 세포에서의 근관 직경의 측정을 제시한다. 도 6b는 라파마이신 (40 nM)의 부재 또는 존재 하에 IGF-1 (10 nM), FGF2 (20 ng/ml), 또는 정제된 Klotho 융합 폴리펩티드 (20 nM)에 의한 C2C12 근육 세포에서의 신호전달 경로 단백질의 인산화를 제시한다.
도 7은 sKlotho-FGF23(R179Q)-FcLALA 융합 단백질에 의한 EGR-1-luc 리포터 유전자의 활성화를 제시한다.
도 8은 FGF23(R179Q)-FcLALA 단백질에 의한 EGR-1-luc 리포터 유전자의 활성화를 제시한다.
도 9는 FGF23(R179Q) vs FGF23(R179Q)-FcLALAv2의 약동학적 프로파일을 제시한다.
도 10a 및 10b는 덱사메타손-유도된 근육 위축 후에 근육 성장을 증진시키는데 있어서 sKlotho-FGF23 융합의 생체내 효능을 제시한다.
도 11. 이 도면은 FGF23(R179Q)-FcLALA 및 Q156A, C206S, C244S 및 C206S/C244S 돌연변이체에 의한 EGR-1-luc 리포터 유전자의 활성화를 제시한다.
도 12는 FGF23(R179Q)-FcLaLa의 WT (야생형), Q156A, C206S, C244S 및 C206S/C244S 돌연변이체의 단백질 품질 및 이량체화를 제시한다.
도 13은 FGF23(R179Q)-FcLaLa의 WT, Y154D/C206S/C244S, Y154H/C206S/C244S, Y154N/C206S/C244S, S155A/C206S/C244S, S155T/C206S/C244S의 단백질 품질을 제시한다. 본 도면에서 모든 FGF23 변이체 ("WT" 포함)는 R179Q 돌연변이를 갖는다.
도 14는 FGF23(R179Q)-FcLALA 및 FGF23(R179Q)-Y154D/C206S/C244S 돌연변이체에 의한 Egr-1-luc 리포터 유전자의 활성화를 제시한다.
도 15 a 및 b는 다양한 구축물의 구축을 제시한다. 도 15a는 약 20, 약 40, 약 60, 약 80, 약 100, 약 120, 약 140, 약 160, 약 180, 약 200, 약 220, 약 240, 약 260, 약 280, 약 300, 약 320, 약 340, 약 360, 약 380, 약 400, 약 420, 약 440, 약 460, 약 480개의 아미노산의 C-말단 결실을 갖는 sKlotho 변이체를 구축하기 위한 전략을 제시한다. 프라이머 P5 (서열식별번호: 83)를 5' 프라이머로서 사용하였다. C-20, C-40, C-60... C-480으로 지정된 임의의 일련의 24종의 프라이머 (서열식별번호: 84 내지 107)를 C-말단으로부터 약 20, 약 40, 약 60 ... 약 480개의 아미노산을 말단절단하는데 사용하였다. 모든 sKlotho 말단절단 중에서, 오직 약 20개 aa의 결실을 갖는 것 (sKlotho del c-20)만이 효과적이었고; 이러한 sKlotho 말단절단과 FGF23의 융합을 도 15b에 제시된 바와 같이 생성하였다. 도 15b는 sKlotho (del c-20)-FGF23 융합 폴리펩티드를 구축하기 위한 전략을 제시한다. P5 프라이머를 C-20 프라이머와 조합하여 PCR (폴리머라제 연쇄 반응)에서 사용하여 sKlotho 말단절단을 갖는 단편을 제조하였다. 이러한 단편을 제한 엔도뉴클레아제에 의해 절단하고 FGF23을 코딩하는 벡터에 라이게이션하여 sKlotho (del c-20)-FGF23 융합 폴리펩티드를 구축하였다.
도 16은 sKlotho 돌연변이체의 Egr-1 활성을 제시한다. 각각 sKlotho 말단절단 및 FGF23의 융합을 코딩하는 벡터를 갖는 다양한 Hek293 세포로부터 조건화 배지 (CM)를 수집하였다. 오직 유용한 양의 융합을 생성하는 세포로부터의 CM만을 사용하였다. 사용된 융합은: CM1: 약 20개의 아미노산 (aa)의 sKlotho 말단절단; CM7: 약 140개의 아미노산 (aa)의 sKlotho 말단절단; CM11: 약 220개의 아미노산 (aa)의 sKlotho 말단절단; CM12: 약 240개의 아미노산 (aa)의 sKlotho 말단절단; CM13: 약 260개의 아미노산 (aa)의 sKlotho 말단절단; CM23: 약 460개의 아미노산 (aa)의 sKlotho 말단절단. 양성 대조군: sKlotho 및 FGF23의 융합을 생성하는 세포로부터의 조건화 배지 [(+) CM]; sKlotho 및 FGF23의 정제된 융합 [(+) ctrl]. "unConc."은 더 적은 단백질이 사용된 실험을 나타낸다. 음성 대조군: (-) ctrl. RLU, 상대적 루시페라제 단위. 이 실험은 C-말단으로부터의 약 20개의 아미노산의 결실이 sKlotho의 활성을 감소시킨다는 것을 제시하였다.
도 17은 sKlotho의 C-말단으로부터 약 20개의 아미노산을 결실시키는 것이 sKlotho-FGF23 융합 폴리펩티드의 활성을 증가시킨다는 것을 제시한다. 도 17a는 sKlotho 또는 sKlotho 델타 C-20 및 FGF23을 포함하는 다양한 융합의 상대량의 웨스턴 블롯을 제시한다. 레인 1, sKlotho-FGF23 융합. 레인 2, FGF23-sKlotho 델타 C-20 (del c-20) 융합. 레인 3, sKlotho 델타 C-20 (del c-20)-FGF23 융합. 크기 마커가 또한 표시된다. Klotho에 대한 폴리클로날 항체가 사용되었다. 도 17b는 Egr-1-Luc 검정에서 이들 융합 폴리펩티드의 활성을 제시한다.
도 18은 sKlotho의 C-말단으로부터 약 20개의 아미노산을 결실시키는 것이 sKlotho-FGF23 융합 폴리펩티드의 활성을 증가시킨다는 발견을 되풀이한, 정제된 단백질을 사용한 실험을 제시한다. 도 18a는 sKlotho del c-20-FGF23 융합 (레인 2 및 3)의 순도를 제시하는 단백질 겔을 제시한다. 레인 1, 크기 마커. 도 18b는 정제된 sKlotho del c-20-FGF23 융합 (sKF-T) 및 sKlotho-FGF23 융합 (sKF)을 사용한 Egr-1 검정을 제시한다. 단백질의 EC50을 또한 제시한다. 이들 도면 및 명세서에서, 용어 sKF-T, Klotho del c-20-FGF23, sKlotho del c-20-FGF23, klotho (델타 C-20)-FGF23, 알파 sKlotho ΔC20-FGF23 등은 모두 N-말단에서 C-말단으로의 순서로, C-말단으로부터 약 20개의 아미노산의 말단절단을 갖는 알파 sKlotho, 임의적인 링커, 및 FGF23을 포함하는 융합 폴리펩티드를 나타낸다.
4. 상세한 설명
본 개시내용은 연령-관련 병태 및 대사 장애를 예방 또는 치료하는 방법, 키트 및 조성물; 요법에서, 의약으로서의, 또는 병리학적 장애의 치료에 사용하기 위한 상기 조성물의 용도에 관한 것이다. 개시내용의 폴리펩티드 및 융합 폴리펩티드는 Klotho 단백질 또는 그의 활성 단편 또는 변이체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 폴리펩티드 및 융합 폴리펩티드는 섬유모세포 성장 인자 폴리펩티드 또는 그의 활성 단편 또는 변이체에 작동가능하게 연결된 Klotho 단백질 또는 그의 활성 단편 또는 변이체를 포함한다.
본 개시내용의 융합 폴리펩티드는, 비제한적 예로서, N-말단에서 C-말단으로의 순서로, (a) 알파 sKlotho 델타 C-20 (여기서 약 20개의 아미노산, 20개의 아미노산 또는 1 내지 최대 약 20개의 아미노산이 C-말단으로부터 결실됨); 및 (b) 임의로 R179에서 돌연변이를 갖는 FGF23; 및 임의로, (c) (a) 및 (b) 사이에 위치한 링커를 포함한다. 일부 실시양태에서, 융합 폴리펩티드는, N-말단에서 C-말단으로의 순서로, (a) 약 20개의 아미노산이 C-말단으로부터 결실된 알파 sKlotho (예를 들어, 막횡단 도메인 및 신호 펩티드가 결여된 알파 Klotho); (b) 링커; 및 (c) 임의로 R179, C206 및/또는 C244에서 돌연변이를 갖는 FGF23을 포함한다. 일부 실시양태에서, FGF23 성분은 C206 및/또는 C244에서 돌연변이를 갖는다. 이들 융합의 일부 실시양태에서, 알파 sKlotho는 V563 및/또는 K795에서 돌연변이를 갖는이다. 일부 실시양태에서, sKlotho 델타 C-20은 서열식별번호: 77 또는 78에 의해 나타내어진다 (후자는 돌연변이 V563A 및 K795E를 가짐). 일부 실시양태에서, 융합 폴리펩티드는 알파 sKlotho의 N-말단에 신호 펩티드를 추가로 포함한다. 다양한 실시양태에서, 신호 펩티드는 Klotho 신호 펩티드이다. 일부 실시양태에서, 신호 펩티드는 서열식별번호: 81의 볼드체, 밑줄표시 부분에 의해 나타내어진다. 다양한 실시양태에서, 링커는 2개의 펩티드를 연결할 수 있는 관련 기술분야에 공지된 임의의 유형의 링커이다. 다양한 실시양태에서, 링커는 1개 이상의 아미노산을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 링커는 서열식별번호: 11 내지 18 중 임의의 서열, 또는 임의의 수 또는 그의 조합을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 링커는 서열식별번호: 12의 1, 2, 3개 또는 그 초과의 카피를 포함한다. 다양한 실시양태에서, 링커는 서열식별번호: 12의 3개의 카피를 포함한다. 일부 실시양태에서, 융합 폴리펩티드는 서열식별번호: 79, 80, 81 또는 82에 의해 나타내어진다.
일부 실시양태에서, 융합은 FcRn에 결합하는 감소된 능력 및/또는 혈청에서의 증가된 안정성을 갖는 변형된 Fc 단편을 추가로 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 융합 폴리펩티드는 FGF (예를 들어, FGF23), 및 FcRn에 결합하는 감소된 능력 및/또는 혈청에서의 증가된 안정성을 갖는 변형된 Fc 단편을 포함한다.
본 개시내용의 융합 단백질 또는 sKlotho는 근육감소증, 피부 위축, 근육 소모, 뇌 위축, 아테롬성동맥경화증, 동맥경화증, 폐기종, 골다공증, 골관절염, 면역 부전증, 고혈압, 치매, 헌팅톤병, 알츠하이머병, 백내장, 연령-관련 황반 변성, 전립선암, 졸중, 기대 수명 감소, 기억 상실, 주름, 신장 기능 장애 및 연령-관련 청각 상실을 포함한 다양한 연령-관련 병태; 및 제II형 당뇨병, 대사 증후군, 고혈당증 및 비만을 포함한 대사 장애의 치료 또는 예방에 유용하다.
본 개시내용은 적어도 부분적으로 물리적 제약 (예를 들어, Klotho 및 FGF 폴리펩티드 둘 다의 큰 크기)에도 불구하고, Klotho-FGF 융합 폴리펩티드가 FGF 수용체를 활성화시키는데 있어서 고도로 효과적이라는 발견에 기초한 것이다. 이들 2개의 단백질의 융합이 아마도 이종이량체화를 방해하고 따라서 단백질의 활성을 방해할 것임을 감안할 때, 이러한 발견은 예상외의 것이고; 예를 들어, 단백질의 결합 도메인은 융합에 의해 교란될 수 있거나 또는 단백질은 "시스" 형태로 함께 놓일 경우에 공간적으로 잘못-배향될 수 있다.
본원에 기재된 융합 폴리펩티드는 단독으로 또는 별개의 폴리펩티드로서 함께 투여된 Klotho 또는 FGF와 비교하여 증진된 활성을 갖는 단일 치료 단백질의 투여를 가능하게 하기 때문에 유리하다. 2개의 별개의 폴리펩티드 (즉, Klotho 폴리펩티드 및 별개의 FGF 폴리펩티드)로서보다는 단일 융합 폴리펩티드로서의 Klotho 및 FGF의 사용이 FGF 수용체를 활성화시키는데 있어서 보다 효과적이다.
본 개시내용의 융합 폴리펩티드는, 비제한적 예로서, N-말단에서 C-말단으로의 순서로, (a) 알파 sKlotho 델타 C-20 (여기서 약 20개의 아미노산, 20개의 아미노산, 또는 1 내지 최대 약 20개의 아미노산이 C-말단으로부터 결실됨); 및 (b) 임의로 R179, C206 및/또는 C244에서 돌연변이(들)를 갖는 FGF23; 및 임의로, (c) (a) 및 (b) 사이에 위치한 링커를 포함한다. 일부 실시양태에서, 융합 폴리펩티드는, N-말단에서 C-말단으로의 순서로, (a) 약 20개의 아미노산이 C-말단으로부터 결실된 알파 sKlotho (예를 들어, 막횡단 도메인 및 신호 펩티드가 결여된 알파 Klotho); (b) 링커; 및 (c) 임의로 R179, C206 및/또는 C244에서 돌연변이(들)를 갖는 FGF23을 포함한다.
본 개시내용의 융합 폴리펩티드는, 비제한적 예로서, N-말단에서 C-말단으로의 순서로, (a) 알파 sKlotho 델타 C-20 (여기서 약 20개의 아미노산, 20개의 아미노산 또는 1 내지 최대 약 20개의 아미노산이 C-말단으로부터 결실됨); 및 (b) 혈청 알부민; 및 임의로, (c) (a) 및 (b) 사이에 위치한 링커를 포함한다. 일부 실시양태에서, 융합 폴리펩티드는, N-말단에서 C-말단으로의 순서로, (a) 약 20개의 아미노산, 20개의 아미노산, 또는 1 내지 최대 약 20개의 아미노산이 C-말단으로부터 결실된 알파 sKlotho (예를 들어, 막횡단 도메인 및 신호 펩티드가 결여된 알파 Klotho); (b) 링커; 및 (c) 혈청 알부민을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 혈청 알부민은 인간, 마우스, 또는 임의의 동물 기원의 것일 수 있다. 인간 Klotho 및 마우스 혈청 알부민을 포함하는 융합의 비제한적 예는 서열식별번호: 108에 제공된다. Klotho 및 혈청 알부민을 포함하는 융합 폴리펩티드의 활성이 도 19에 제시된다. 마우스 혈청 알부민이 실험적으로 사용될 수 있는 하나의 이유는 인간 혈청 알부민이 마우스 시스템에서 재순환되지 않아서, 반감기 연장 모이어티로서 감소된 효능을 가질 수 있다는 점이다. 치료 폴리펩티드의 경우에, 인간 혈청 알부민 (또는 그의 변이체) 및 인간 Klotho 변이체 (예를 들어, 인간 Klotho C-말단 결실 변이체; 또는 V563 및/또는 K795에서 돌연변이를 갖는 인간 Klotho; 또는 C-말단 결실 및 V563 및/또는 K795에서의 돌연변이를 갖는 인간 Klotho 변이체)를 포함하는 융합 폴리펩티드를 사용하는 것이 바람직할 것이다.
실시예 9에 제시된 바와 같이, 다양한 결실이 알파 sKlotho의 C-말단에서 이루어졌다. 이들 sKlotho 돌연변이체는 C-말단으로부터 약 20, 약 40, 약 60, 약 80, 약 100, 약 120, 약 140, 약 160, 약 180, 약 200, 약 220, 약 240, 약 260, 약 280, 약 300, 약 320, 약 340, 약 360, 약 380, 약 400, 약 420, 약 440, 약 460, 약 480개가 결실되었다. 이들은 각각 델타 C-20, 델타 C-40, 델타 C-60 등으로 지정되고, 서열식별번호: 84-107에 열거된 프라이머 C-20, C-40, C-60 등을 사용하여 생성되었다. 실시예 9에 제시된 바와 같이, 많은 이들 구축물은 유용한 양의 sKlotho 돌연변이체를 발현하지 않았다. 그 중 유용한 양을 발현한 C-20 (1로도 공지됨), C-140 (7), C-220 (11), C-240 (12), C260 (13) 및 C-460 (23)을 Klotho 활성에 대해 시험하였다. 단백질을 생성하는 세포로부터의 조건화 배지를 Egr-1 검정에서 사용하고, 상대 루시페라제 활성 (RLA)을 측정하였다. C-20은 조건화 배지로부터의 야생형 Klotho 또는 정제된 야생형 Klotho보다는 낮았지만, 약간의 Klotho 활성을 제시하였다. 다른 C-말단 sKlotho 결실 (C-140, C-220, C-240, C260 및 C-460)은 유의한 Klotho 활성을 제시하지 않았다.
알파 sKlotho 델타 C-20이 야생형 sKlotho보다 낮은 활성을 제시할 지라도, 전자는 FGF23과의 융합과 관련하여 후자보다 더 활성이었다.
다시 말해서, sKlotho로부터 약 20개의 아미노산을 결실시키는 것은 sKlotho의 활성을 감소시키지만, sKlotho-FGF23 융합의 활성을 놀랍게도 증가시켰다. 이들 예상외의 결과가 실시예 9에 제시된다. 상기에 제시된 바와 같이, 알파 sKlotho 델타 C-20은 야생형 알파 sKlotho보다 더 덜 활성이었다. 그러나, 알파 sKlotho 델타 C-20-FGF23 융합은 알파 sKlotho (야생형)-FGF23 융합보다 더 활성이다. 본 도면에 제시된 데이터는 조건화 배지로부터의 폴리펩티드를 사용하였다. 이어서 알파 sKlotho 델타 C-20-FGF23 융합 폴리펩티드를 정제하여 실험을 반복하였고, 현상은 재현되었다. 정제된 폴리펩티드를 사용한 도 18은 다시 알파 sKlotho 델타 C-20-FGF23 융합이 알파 sKlotho (야생형)-FGF23 융합보다 더 활성이라는 것을 제시하였다.
따라서, 약 20개의 아미노산의 결실은 단리된 sKlotho의 활성을 놀랍게도 감소시켰지만, sKlotho-FGF23 융합 폴리펩티드의 활성은 증가시켰다.
정의
본원에 사용된 "Klotho 폴리펩티드", "Klotho 단백질", 또는 "Klotho"는 야생형 "Klotho"의 활성 단편, 유도체, 모방체, 변이체 및 그의 화학적으로 변형된 화합물 또는 하이브리드를 포함한다. Klotho 활성 단편은 FGF 폴리펩티드에 결합하는 능력을 갖는다. 일반적으로, Klotho 활성 폴리펩티드는 적어도 Klotho 서브도메인 (예를 들어, KL-D1 및 KL-D2)을 함유한다. 야생형 Klotho는 자연에서 발견되는 것과 같은 아미노산 서열을 갖는다. 본 개시내용에서 사용하기에 적합한 Klotho 폴리펩티드의 예는 알파-Klotho (서열식별번호: 2) 및 베타-Klotho (서열식별번호: 4)를 포함한다. 알파-Klotho 및 베타-Klotho의 뉴클레오티드 및 아미노산 서열은 진뱅크 데이터베이스에서 각각 수탁 번호 NM_004795; NP_004786 및 NM_175737; NP__783864에서 발견된다. Klotho 폴리펩티드는 미국 특허 번호 6,579,850에 기재된 것을 포함하며, 그의 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. Klotho 폴리펩티드는 인간 이외의 다른 종으로부터의 것, 예를 들어 마우스 (NP_038851), 래트 (NP_112626), 토끼 (NP_001075692)로부터의 알파-Klotho 및 마우스로부터의 베타-Klotho (NP_112457)를 포함한다. 알파-Klotho를 갖는 것으로 예상되는 종은 침팬지 (XP_522655), 마카크 (XP_001101127), 말 (XP_001495662), 소 (XP_001252500), 오리너구리 (XP_001510981), 및 닭 (XP_417105)을 포함한다. 베타-Klotho를 갖는 것으로 예상되는 종은 침팬지 (XP_526550), 마카크 (XP_001091413), 말 (XP_001495248), 개 (XP_536257), 래트 (XP_001078178), 오리너구리 (XP_001512722), 및 닭 (XP_423224)을 포함한다. Klotho 폴리펩티드는 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 아미노산 서열과 실질적으로 동일한; 즉, 서열식별번호: 2 또는 서열식별번호: 4의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 초과로 동일한 아미노산 서열, 또는 그의 활성 단편 또는 변이체를 갖는다.
본원에 사용된 "융합 폴리펩티드" 또는 "융합 단백질"은 동일한 폴리펩티드 내에 자연적으로 존재하지 않는 2개 이상의 상이한 폴리펩티드 또는 그의 활성 단편을 포함하는 폴리펩티드를 의미할 것이다. 일부 실시양태에서, 2개 이상의 상이한 폴리펩티드는 공유적으로 함께 작동가능하게 연결되고, 예를 들어, 펩티드 결합에 의해 인 프레임으로 화학적으로 연결되거나 융합된다. 본원에 사용된 "Klotho 융합 폴리펩티드"는 Klotho 폴리펩티드 또는 그의 활성 단편 또는 변이체로부터의 아미노산 서열을 포함하는 융합 폴리펩티드이다. 융합 폴리펩티드는, 비제한적 예로서 Klotho (예를 들어, sKlotho), FGF (예를 들어, FG23) 및 (임의로) 변형된 Fc 단편 (예를 들어, FC-감마-수용체에 대한 감소된 결합 친화도 및/또는 증가된 혈청 반감기를 갖는 변형된 Fc 단편)을 포함할 수 있다. 이러한 유형의 융합 폴리펩티드의 예는 서열식별번호: 46 내지 49에 제시된다. 또 다른 실시양태에서, 융합 단백질은 FGF (예를 들어, FGF23) 및 변형된 Fc (예를 들어, FcLALA)를 포함한다. FGF23 및 FcLALA를 포함하는 융합 단백질은 서열식별번호: 50, 51, 52 및 53에 기재되어 있다. FcLALA는, 낮아진 효율을 갖는 ADCC를 촉발하고 약하게 인간 보체에 결합하고 이를 활성화시키는 LALA 돌연변이 (L234A, L235A)를 갖는 Fc 단편이다. 문헌 [Hessell et al. 2007 Nature 449:101-104].
"섬유모세포 성장 인자" 및 "FGF"는 본원에서 상호교환가능하게 사용되고, 인간 대상체를 포함한 동물에서 세포 증식, 이동, 분화, 항상성, 조직 복구 및 손상에 대한 반응을 조절하는 폴리펩티드를 지칭할 것이다. FGF는, 섬유모세포 성장 인자 수용체에 결합하여 FGFR의 자가인산화, FRS2 (FGF 수용체 기질 2) 및 ERK1/2 (세포외 신호-조절된 단백질 키나제 1/2)의 인산화, 및 Egr-1 (초기 성장 반응-1)을 활성화시키는 것을 포함한 그의 활성을 조절하는 능력을 갖는다. 용어 "FGF"는 예를 들어, 관련 기술분야에 공지된 바와 같이 및 미국 특허 번호 7,223,563 및 미국 특허 번호 7,259,248 (그의 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함됨)에 기재된 바와 같이 야생형 "FGF"의 활성 단편, 유도체, 모방체, 변이체 및 그의 화학적으로 변형된 화합물 또는 하이브리드를 포함한다. 야생형 FGF는 자연에서 발견되는 것과 같은 아미노산 서열을 갖는다. 본 개시내용에서 사용하기에 적합한 섬유모세포 성장 인자의 예는 섬유모세포 성장 인자-19 (FGF19; 서열식별번호: 31), 섬유모세포 성장 인자-21 (FGF21; 서열식별번호: 33), 및 섬유모세포 성장 인자-23 (FGF23; 서열식별번호: 35)을 포함한다. FGF 폴리펩티드는 인간 이외의 다른 종으로부터의 것, 예를 들어 뮤린 FGF를 포함한다. 일반적으로, FGF 폴리펩티드는 서열식별번호: 31, 서열식별번호: 33 또는 서열식별번호: 35의 아미노산 서열과 실질적으로 동일한 아미노산 서열; 즉, 서열식별번호: 31, 서열식별번호: 33 또는 서열식별번호: 35의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 초과로, 또는 100% 동일한 아미노산 서열, 또는 그의 활성 단편을 갖는다. FGF, 특히 FGF23의 추가의 비제한적 예는 서열식별번호: 47의 aa 1002-1228; 서열식별번호: 49의 aa 1002-1228; 서열식별번호: 51의 aa 1-251 및 서열식별번호: 53의 aa 1-251; 및 이들 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 초과로, 또는 100% 동일한 서열로 제공된다. 이들 서열을 코딩하는 뉴클레오티드는 서열식별번호: 46, 48, 50 및 52에 제공된다.
용어 "FGF"는 전장 폴리펩티드의 활성 단편을 포함한다. 그의 상응하는 FGF 수용체에 결합할 수 있는 활성 FGF 단편은 관련 기술분야에 공지되어 있고, 또한 본 개시내용에서 사용이 고려된다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 본원에 개시된 서열에 기초하여, FGF의 중첩 단편이 예를 들어 문헌 [Sambrook et al. (1989, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York) 및 Ausubel et al. (1997, Current Protocols in Molecular Biology, Green & Wiley, New York)]에 기재된 표준 재조합 기술을 사용하여 생성될 수 있음을 인지할 것이다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 본원에 제시된 개시내용에 기초하여 FGF 수용체에 대한 결합을 포함하는 FGF 단편의 생물학적 활성이 관련 기술분야에 널리 공지되어 있고 본원에 기재된 방법에 의해 시험될 수 있음을 인지할 것이다. 유사하게, 필수 FGF 신호 전달 기구 (즉, FGF 수용체)를 갖는 세포 배양 모델은 FGF 단편으로 형질감염되고, 후속적으로 야생형 FGF에 비해 FGF 신호전달에서 변경에 대해 시험될 수 있다.
FGF는 특히 상이한 FGF 서브패밀리 사이에서, 길이 및 1차 서열 둘 다에서 고도로 가변성인 N- 및 C-말단 서열과 플랭킹된 FGF 코어 상동 도메인 (대략 120개 아미노산 길이)의 상동성을 기초로 하여 7개의 서브패밀리로 그룹화된다 (Goetz et al., Molecular and Cellular Biology, 2007, Vol. 27, 3417-3428). FGF 활성 폴리펩티드는 일반적으로 적어도 FGF 코어 상동 도메인을 함유한다. 일부 실시양태에서, FGF 활성 폴리펩티드는 FGF 코어 상동 도메인에 더하여, FGF 수용체에 결합하는데 추가의 특이성을 부여할 수 있는 플랭킹 서열을 함유할 수 있다. FGF19, FGF21 및 FGF23은 이들 리간드의 코어 영역이 다른 FGF에 비해 높은 서열 동일성 (FGF19 v. FGF21: 38% 동일성; FGF19 v. FGF23: 36% 동일성)을 갖기 때문에 FGF19 서브패밀리로 그룹화된다. FGF19 서브패밀리는 내분비계의 신호전달 분자와 유사하게 작용하고, 전통적인 FGF에 통상적이지 않은 다양한 생리학적 과정을 조절한다 (예를 들어, FGF19: 에너지 및 담즙산 항상성; FGF21: 글루코스 및 지질 대사; 및 FGF23: 포스페이트 및 비타민 D 항상성).
본원에 사용된 "섬유모세포 성장 인자 수용체" 및 "FGFR"은 관련 기술분야에 공지된 FGFR 1-4 중 어느 하나, 또는 그의 스플라이스 변이체 (예를 들어, FGFR1c)를 지칭한다. 본 개시내용에서 사용하기에 적합한 섬유모세포 성장 인자 수용체의 예는 섬유모세포 성장 인자 수용체-19 (예를 들어, FGFR4-베타 Klotho), 섬유모세포 성장 인자 수용체-21 (예를 들어, FGFR1c-알파 Klotho), 및 섬유모세포 성장 인자 수용체-23 (예를 들어, FGFR1c-알파 Klotho, FGFR3-알파 Klotho, FGFR4-알파 Klotho)을 포함한다.
본원에 사용된 "세포외 도메인"은 세포의 외부에 존재하는 막횡단 단백질의 단편 (예를 들어, 세포내 또는 막횡단 영역을 포함하지 않음)을 지칭한다. "Klotho 단백질의 세포외 도메인", "가용성 Klotho", 또는 "sKlotho" (예를 들어, 서열식별번호: 7; 서열식별번호: 39)는 섬유모세포 성장 인자에 결합할 수 있고/거나 섬유모세포 성장 인자에 결합함으로써 섬유모세포 성장 인자 수용체에 대한 섬유모세포 성장 인자의 결합을 가능하게 할 수 있는 Klotho 폴리펩티드의 세포외 도메인을 지칭한다. Klotho 세포외 도메인은 전장 알파 Klotho 서열식별번호: (서열식별번호: 2)의 아미노산 잔기 28-982에 및 전장 베타 Klotho 서열식별번호: (서열식별번호: 4)의 아미노산 잔기 52-997에 상응한다.
"Klotho 단백질의 세포외 서브도메인" 및 "Klotho 단백질의 세포외 서브도메인"은 본원에서 상호교환가능하게 사용되고, 섬유모세포 성장 인자에 결합할 수 있고/거나 섬유모세포 성장 인자에 결합함으로써 섬유모세포 성장 인자 수용체에 대한 섬유모세포 성장 인자의 결합을 가능하게 할 수 있는 Klotho 폴리펩티드의 세포외 도메인 내의 영역을 지칭할 것이다. 다양한 실시양태에서, 융합은 Klotho 단백질의 적어도 1개의 세포외 서브도메인; 섬유모세포 성장 인자를 포함하는 폴리펩티드; 및, 임의로 Fc-감마-수용체에 대한 감소된 친화도 및/또는 증가된 혈청 반감기를 갖는 변형된 Fc 단편을 포함하는 폴리펩티드를 포함한다. Klotho 세포외 도메인은 반복되는 2개의 상동 서브도메인, 즉 KL-D1 (서열식별번호: 5) 및 KL-D2 (서열식별번호: 6)를 갖는다. KL-D1 및 KL-D2는 각각 전장 알파 Klotho 폴리펩티드 (서열식별번호: 2)의 아미노산 잔기 58-506 및 517-953에, 및 각각 전장 베타 Klotho 폴리펩티드 (서열식별번호: 4)의 아미노산 잔기 77-508 및 571-967에 상응하고, 본 개시내용에서 사용하기에 적합하다. 일반적으로, 적어도 1개의 Klotho 서브도메인을 함유하는 폴리펩티드는 Klotho 활성 폴리펩티드이다. 본 개시내용의 폴리펩티드에서 사용하기 위한 Klotho 세포외 서브도메인은 각각 서열식별번호: 5 또는 서열식별번호: 37의 아미노산 서열과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 알파 Klotho 또는 베타 Klotho KL-D1 도메인일 수 있다. 추가로, Klotho KL-D1 도메인은 서열식별번호: 5 또는 서열식별번호: 37의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 초과로 동일한 아미노산 서열을 가질 수 있다. Klotho 세포외 서브도메인은 또한 각각 서열식별번호: 6 또는 서열식별번호: 38의 아미노산 서열과 실질적으로 동일한 알파 또는 베타 Klotho 폴리펩티드 KL-D2 도메인일 수 있다. 추가 실시양태에서, KL-D2 도메인은 서열식별번호: 6 또는 서열식별번호: 38의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 초과로 동일한 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 융합은 Klotho 단백질의 적어도 2개의 세포외 서브도메인을 포함한다 (예를 들어, KL-D1 및 KL-D2; 탠덤 반복되는 KL-D1 및 KL-D1; 탠덤 반복되는 KL-D2 및 KL-D2 등).
본원에 사용된 "변형된 Fc 단편"은 변형된 서열을 포함하는 항체의 Fc 단편을 의미할 것이다. Fc 단편은 CH2, CH3 및 힌지 영역의 일부를 포함하는 항체의 일부이다. 변형된 Fc 단편은, 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4로부터 유래될 수 있다. FcLALA는 낮아진 효율을 갖는 ADCC를 촉발하고 약하게 인간 보체에 결합하고 이를 활성화시키는 LALA 돌연변이 (L234A, L235A)를 갖는 변형된 Fc 단편이다. 문헌 [Hessell et al. 2007 Nature 449:101-104]. Fc 단편에 대한 추가의 변형은, 예를 들어 미국 특허 번호 7,217,798에 기재되어 있다. 예를 들어, 다양한 변형된 Fc 단편에서: (a) 아미노산 잔기 250은 글루탐산이고, 아미노산 잔기 428은 페닐알라닌이거나; 또는 (b) 아미노산 잔기 250은 글루타민이고, 아미노산 잔기 428은 페닐알라닌이거나; 또는 (c) 아미노산 잔기 250은 글루타민이고, 아미노산 잔기 428은 류신이다. 일부 실시양태에서, 아미노산 잔기 250 및 428은 글루탐산 또는 글루타민인 아미노산 잔기 250 및 류신 또는 페닐알라닌인 아미노산 잔기 428에 의해 비변형된 Fc-융합 단백질에 존재하는 잔기와 상이하며, 여기서 아미노산 잔기는 미국 특허 번호 7,217,798에 기재된 바와 같이 EU 넘버링 시스템에 의해 넘버링된다. 일부 실시양태에서, 변형된 Fc-융합 단백질은 pH 8.0에서 보다 pH 6.0에서 FcRn에 대한 보다 높은 친화도를 갖는다. 바람직하게는, 변형된 Fc 단편은 FcRn에 대한 감소된 친화도 및/또는 증가된 혈청 반감기를 갖는다. 변형된 Fc 단편의 비제한적 예는 서열식별번호: 47의 aa (아미노산) 1234-1459; 서열식별번호: 49의 aa 1234 내지 1450; 서열식별번호: 51의 aa 257 내지 482; 및 서열식별번호: 53의 aa 257 내지 473; 및 이들 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 초과로 또는 100% 동일한 서열을 포함한다. 이들 서열을 코딩하는 뉴클레오티드는 서열식별번호: 46, 48, 50 및 52에 제공된다.
본원에 사용된 "신호 펩티드"는 세망으로의 단백질의 번역후 수송을 지시하는 펩티드 쇄 (3-60개 아미노산 길이)를 의미할 것이고, 이는 절단될 수 있다. 본 개시내용에서 사용하기에 적합한 신호 펩티드의 예는 Klotho 신호 펩티드 (서열식별번호: 19) 및 IgG 신호 펩티드 (서열식별번호: 20)를 포함한다. 생산자 세포주에 의한 분비 및 절단 시, 신호 펩티드 (예를 들어, 서열식별번호: 19 및 서열식별번호: 20에 상응하는 펩티드)가 절단된다는 것을 주목한다. 따라서, 생산자 세포주에 의한 신호 펩티드의 분비 및 절단 후에, 서열식별번호: 19의 펩티드는 서열식별번호: 41의 펩티드를 생성할 것이다.
본원에 사용된 "링커"는 2개 이상의 폴리펩티드 또는 핵산을 서로 연결되도록 공유 부착시키는 관능기 (예를 들어, 화학물질 또는 폴리펩티드)를 의미할 것이다.
본원에 사용된 "펩티드 링커"는 2개의 단백질을 함께 커플링시키는데 (예를 들어, Klotho의 세포외 도메인 및 섬유모세포 성장 인자-23을 커플링시키는데) 사용되는 1개 이상의 아미노산을 지칭한다. 본 개시내용에서 사용하기에 적합한 펩티드 링커는 서열식별번호: 8, 서열식별번호: 9, 서열식별번호: 10, 서열식별번호: 11, 서열식별번호: 12, 서열식별번호: 13, 서열식별번호: 14, 서열식별번호: 15, 서열식별번호: 16, 서열식별번호: 17 및 서열식별번호: 18로 나타내어진 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
폴리펩티드 링커는 임의의 이들 아미노산 서열의 적어도 1 내지 최대 약 30개의 반복을 포함할 수 있다.
본원에 사용된 "작동가능하게 연결된"은 생체분자와 연관된 생물학적 기능, 활성, 및/또는 구조가 적어도 보유되도록 하는 2개 이상의 생체분자의 연결을 의미할 것이다. 폴리펩티드에 관하여, 상기 용어는 2개 이상의 폴리펩티드의 연결이 각각의 폴리펩티드 성분의 각각의 개별 활성의 적어도 일부를 보유하는 융합 폴리펩티드를 생성한다는 것을 의미한다. 2개 이상의 폴리펩티드는 직접적으로 또는 링커를 통해 연결될 수 있다. 핵산에 관하여, 상기 용어는 제1 폴리뉴클레오티드가, 적절한 분자 (예를 들어, 전사 활성화 단백질)가 제2 폴리뉴클레오티드에 결합할 때, 제1 폴리뉴클레오티드의 전사를 지시하는 제2 폴리뉴클레오티드에 인접하여 위치한다는 것을 의미한다.
본원에 사용된 "특이적으로 결합하다"는 자신과 다른 표적 분자 사이의 비공유 상호작용을 형성하는데 도움이 되는 특정한 구조를 채택하는 제1 분자의 능력 때문에 그가 노출될 수 있는 많은 상이한 유형의 분자 중에서도 표적 분자에 결합하는 제1 분자의 능력을 지칭할 것이다. 제1 분자는 안정한 복합체를 형성하는 표적에 결합하는 한편, 임의의 다른 비-특이적 분자와 제1 분자의 인식, 접촉, 또는 복합체 형성은 실질적으로 적다.
본원에 사용된 "폴리펩티드 변이체" 또는 "단백질 변이체"는 1개 이상의 아미노산이 참조 서열과 상이한 아미노산으로 치환된 폴리펩티드를 지칭한다. 관련 기술분야에서는 이하에 기재된 바와 같이 일부 아미노산이 폴리펩티드의 활성의 성질을 변화시키지 않으면서 대체로 유사한 특성을 갖는 다른 것으로 치환될 수 있음이 잘 이해된다 (보존적 치환). 이들 용어는 또한 1개 이상의 아미노산이 부가되거나 결실된, 또는 상이한 아미노산으로 대체된 폴리펩티드, 예를 들어, 단백질 이소형을 포괄한다. 본 개시내용에서 사용하기에 적합한 섬유모세포 성장 인자-23의 예시적인 변이체는 섬유모세포 성장 인자-23 변이체 (R179Q)이다.
본원에 사용된 "제약 조성물"은 개체에서 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하기 위해 투여될 수 있는 화합물 (예를 들어, 본 개시내용의 융합 폴리펩티드)을 함유하는 조성물을 의미할 것이다.
본원에 사용된 "개체" 또는 "대상체"는 인간 또는 비-인간 포유동물, 예를 들어 소, 말, 개, 양, 또는 고양이를 포함하나 이에 제한되지는 않는 포유동물을 지칭할 것이다.
본원에 사용된 "치료하다"는 질환의 발생 또는 진행을 감소, 억제, 약화, 축소, 중지 또는 안정화시키는 것을 의미할 것이다. 개시내용의 문맥에서, 개시내용의 폴리펩티드의 투여는 근육감소증, 피부 위축, 근육 소모, 뇌 위축, 아테롬성동맥경화증, 동맥경화증, 폐기종, 골다공증, 골관절염, 면역 부전증, 고혈압, 치매, 헌팅톤병, 알츠하이머병, 백내장, 연령-관련 황반 변성, 전립선암, 졸중, 기대 수명 감소, 기억 상실, 주름, 신장 기능 장애 및 연령-관련 청각 상실을 포함한 연령-관련 병태; 및 제II형 당뇨병, 대사 증후군, 고혈당증 및 비만을 포함한 대사 장애를 치료하는데 사용될 수 있다.
본원에 사용된 "예방하다"는 대상체에서 장애의 발생을 감소시키는 것, 또는 장애 또는 그의 연관된 증상을 획득할 위험을 감소시키는 것을 지칭할 것이다. 개시내용의 문맥에서, 개시내용의 폴리펩티드의 투여는 근육감소증, 피부 위축, 근육 소모, 뇌 위축, 아테롬성동맥경화증, 동맥경화증, 폐기종, 골다공증, 골관절염, 면역 부전증, 고혈압, 치매, 헌팅톤병, 알츠하이머병, 백내장, 연령-관련 황반 변성, 전립선암, 졸중, 기대 수명 감소, 기억 상실, 주름, 신장 기능 장애 및 연령-관련 청각 상실을 포함한 연령-관련 병태; 및 제II형 당뇨병, 대사 증후군, 고혈당증 및 비만을 포함한 대사 장애를 예방하는데 사용될 수 있다. 예방은 완전한, 예를 들어 연령-관련 병태 또는 대사 장애의 총 부재일 수 있다. 예방은 또한 부분적일 수 있고, 따라서 대상체에서의 연령-관련 병태 또는 대사 장애의 발생 가능성은 본 개시내용이 제공되지 않은 대상체보다 아마도 덜 발생할 것이다.
본원에 사용된 "질환"은 세포, 조직, 또는 기관의 정상 기능을 손상시키거나 방해하는 임의의 병태 또는 장애를 의미할 것이다.
본원에 사용된 "연령-관련 병태"는 집단에서 그의 발생 또는 개체에서의 중증도가 노화의 진행과 상호관련되는 임의의 질환 또는 장애를 의미할 것이다. 한 실시양태에서, 연령-관련 병태는 100,000명 초과의 개체의 선택된 집단에서 60세 초과의 인간 개체 사이에서의 그의 발생이 30-40세의 인간 개체에 비해 적어도 1.5배 더 높은 질환 또는 장애이다. 본 개시내용에 관련된 연령-관련 병태는 근육감소증, 피부 위축, 근육 소모, 뇌 위축, 아테롬성동맥경화증, 동맥경화증, 폐기종, 골다공증, 골관절염, 면역 부전증, 고혈압, 치매, 헌팅톤병, 알츠하이머병, 백내장, 연령-관련 황반 변성, 전립선암, 졸중, 기대 수명 감소, 기억 상실, 주름, 신장 기능 장애 및 연령-관련 청각 상실을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 "대사 장애"는 세포에서의 에너지의 생성, 또는 세포, 조직, 기관 또는 개체에서의 독소의 축적에 영향을 미침으로써 세포, 조직 또는 기관에서 정상 기능을 손상시키거나 방해하는 임의의 질환 또는 장애를 의미할 것이다. 본 개시내용에 관련된 대사 장애는 제II형 당뇨병, 대사 증후군, 고혈당증 및 비만을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
"유효 용량" 또는 "유효량"은 유익하거나 목적하는 임상 결과를 발생시키기에 충분한 양이다. 개시내용의 문맥에서, 이는 의도된 약리학적, 치료적 또는 예방적 결과를 생성하는데 효과적인 Klotho 융합 폴리펩티드 또는 sKlotho의 양이다. 치료 유효 용량은 장애 또는 장애의 1종 이상의 증상 (예를 들어, 연령-관련 병태 또는 대사 장애)의 예방 또는 호전을 발생시킨다. 치료 유효 용량은 치료될 대상체 및 질환 상태, 대상의 체중 및 연령, 질환 상태의 중증도, 투여 방식 등에 따라 달라질 것이며, 관련 기술분야의 통상의 기술자가 용이하게 결정할 수 있다.
본원에 사용된 "Klotho 핵산 분자"는 Klotho 단백질을 코딩하는 유전자이다. 인간 Klotho 유전자의 예는 진뱅크 수탁 번호 NM_004795 (서열식별번호: 1)에 제공된다. Klotho의 추가의 비제한적 예는 서열식별번호: 47의 aa 1-982 및 서열식별번호: 49의 aa 1-982; 및 이들 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 초과, 또는 100% 동일한 서열로 제공된다.
본원에 사용된 "단편"은 폴리펩티드 또는 핵산 분자의 일부를 지칭한다. 이러한 일부는 바람직하게는 참조 핵산 분자 또는 폴리펩티드의 전체 길이의 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 그 초과를 함유한다. 단편은 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 또는 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000개, 또는 최대 3000개의 뉴클레오티드 또는 아미노산을 함유할 수 있다.
용어 "실질적으로 동일한"은 참조 아미노산 서열 (예를 들어, 본원에 기재된 아미노산 서열 중 어느 하나) 또는 핵산 서열 (예를 들어, 본원에 기재된 핵산 서열 중 어느 하나)과 적어도 50%의 동일성을 나타내는 폴리펩티드 또는 핵산 분자를 지칭한다. 바람직하게는, 이러한 서열은 비교를 위해 사용된 서열에 대해 아미노산 수준 또는 핵산에서 적어도 60%, 70%, 75%, 80% 또는 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 초과로 동일하다.
본 개시내용은 연령-관련 병태 및 대사 장애를 예방 또는 치료하는 방법, 키트 및 조성물; 및 요법에서의, 의약으로서의, 또는 병리학적 장애의 치료에 사용하기 위한 상기 조성물의 용도에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 개시내용은 폴리펩티드, 및 Klotho 단백질의 적어도 1개의 세포외 서브도메인을 갖는 융합 폴리펩티드를 제공한다. 일부 실시양태에서, 융합 폴리펩티드는 섬유모세포 성장 인자, 혈청 알부민, Fc, 또는 다른 폴리펩티드, 또는 그의 활성 단편 또는 변이체를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 융합은 Fc-감마-수용체에 대한 감소된 친화도 및/또는 증가된 혈청 반감기를 갖는 변형된 Fc 단편을 추가로 포함한다. 다른 실시양태에서, 융합은 변형된 Fc (예를 들어, FcLALA)에 융합된 FGF (예를 들어, FGF19, FGF21, FGF23 또는 FGF23 변이체 R179Q)를 포함한다. FcLALA는 낮아진 효율을 갖는 ADCC를 촉발하고 약하게 인간 보체에 결합하고 이를 활성화시키는 LALA 돌연변이 (L234A, L235A)를 갖는 Fc 단편이다. Klotho 세포외 도메인은 또한 알파 또는 베타 Klotho 이소형으로부터 유래될 수 있다. 추가로, Klotho 융합 폴리펩티드의 FGF 성분이 주로 섬유모세포 성장 인자-19, 섬유모세포 성장 인자-21 및 섬유모세포 성장 인자-23과 관련하여 기재되더라도, 임의의 23개의 공지된 FGF 또는 그의 활성 단편 또는 변이체가 개시내용을 실행하는데 사용될 수 있는 것으로 고려된다.
Klotho 단백질의 세포외 도메인은 Klotho 단백질의 KL-D1 및 KL-D2 도메인 중 하나 또는 둘 다를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, Klotho 융합 폴리펩티드는 Klotho 단백질의 적어도 2개의 세포외 서브도메인을 갖는다. 예를 들어, 적어도 2개의 세포외 서브도메인은 탠덤 반복되는 적어도 2개의 KL-D1 도메인, 탠덤 반복되는 적어도 2개의 KL-D2 도메인, 또는 적어도 1개의 KL-D1 도메인 및 적어도 1개의 KL-D2 도메인일 수 있다.
Klotho 단백질의 세포외 서브도메인 또는 그의 활성 단편 또는 변이체 및 섬유모세포 성장 인자 (또는 그의 활성 단편 또는 그의 변이체)는 다양한 배향 및 방식으로 서로 작동가능하게 연결될 수 있다. 예를 들어, Klotho 단백질의 세포외 서브도메인은 섬유모세포 성장 인자의 N-말단에 작동가능하게 연결될 수 있거나, 대안적으로 섬유모세포 성장 인자는 Klotho 단백질의 적어도 1개의 세포외 서브도메인의 N-말단에 작동가능하게 연결될 수 있다.
본 개시내용의 융합 폴리펩티드는 Klotho 세포외 도메인, 즉 KL-D1 (서열식별번호: 5) 및 KL-D2 (서열식별번호: 6) 중 하나 또는 둘 다를 포함할 수 있다. KL-D1 및 KL-D2는 각각 전장 알파 Klotho 폴리펩티드 (서열식별번호: 2)의 아미노산 잔기 58-506 및 517-953, 및 전장 베타 Klotho 폴리펩티드 (서열식별번호: 4)의 아미노산 잔기 77-508 및 571-967에 상응하며, 본 개시내용에 사용하기에 적합하다. Klotho 융합 폴리펩티드는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 알파 Klotho 폴리펩티드의, 또는 서열식별번호: 37의 아미노산 서열과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 베타 Klotho 폴리펩티드의 KL-D1 도메인을 가질 수 있다. 구체적으로, Klotho 융합 폴리펩티드는 서열식별번호: 5 또는 서열식별번호: 37과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 초과로 동일한 아미노산 서열을 가질 수 있다. Klotho 융합 폴리펩티드는 서열식별번호: 6의 아미노산 서열과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 알파 Klotho 폴리펩티드의, 또는 서열식별번호: 38의 아미노산 서열과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는 베타 Klotho 폴리펩티드의 KL-D2 도메인을 가질 수 있다. 구체적으로, Klotho 융합 폴리펩티드는 각각 서열식별번호: 6 또는 서열식별번호: 38과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 초과로 동일한 아미노산 서열을 가질 수 있다.
일부 실시양태에서, 개시내용의 Klotho 융합 폴리펩티드는 가용성이고, FGF 수용체에 결합할 수 있다.
개시내용의 Klotho 융합 폴리펩티드는 Klotho 단백질의 적어도 1개의 세포외 서브도메인 및 섬유모세포 성장 인자 및 (임의적인) 변형된 Fc 단편을 갖는 폴리펩티드를 연결하는 폴리펩티드 링커를 함유할 수 있다. 적합한 링커는 관련 기술분야에 널리 공지되어 있고, 일반적으로 여러 Gly 및 여러 Ser 잔기, 예를 들어, (Gly4 Ser)3 (서열식별번호: 11), Gly4 Ser 폴리펩티드 (서열식별번호: 12), Gly (서열식별번호: 13), Gly Gly (서열식별번호: 14), Gly Ser (서열식별번호: 15), Gly2 Ser (서열식별번호: 16), Ala (서열식별번호: 17), 및 Ala Ala (서열식별번호: 18)를 함유한다. 일부 실시양태에서, 링커는 서열식별번호: 12, 서열식별번호: 13, 서열식별번호: 14, 서열식별번호: 15, 서열식별번호: 16, 서열식별번호: 17, 또는 서열식별번호: 18 중 어느 하나에 의해 나타내어진 아미노산 서열의 적어도 2 내지 최대 약 30개의 반복부를 가질 것이다.
폴리펩티드 링커가 개시내용의 Klotho 융합 폴리펩티드 내에 존재하는 경우에, Klotho 단백질의 적어도 1개의 세포외 서브도메인을 갖는 폴리펩티드는 펩티드 결합에 의해 링커 폴리펩티드의 N-말단에 연결될 수 있고, 여기서 FGF는 펩티드 결합에 의해 폴리펩티드 링커의 C-말단에 연결된다. 대안적으로, FGF는 펩티드 결합에 의해 링커 폴리펩티드의 N-말단에 연결될 수 있고, 여기서 Klotho의 적어도 1개의 세포외 서브도메인을 갖는 폴리펩티드는 펩티드 결합에 의해 폴리펩티드 링커의 C-말단에 연결된다. 화학적 링커가 또한 2개의 폴리펩티드를 연결하는데 사용될 수 있다.
개시내용의 Klotho 융합 폴리펩티드는 신호 펩티드를 포함할 수 있다. Klotho 융합 폴리펩티드에 사용하기 위한 예시적인 신호 펩티드는 Klotho 신호 펩티드 (서열식별번호: 8) 및 IgG 신호 펩티드 (서열식별번호: 9)를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, 개시내용은 FGF (예를 들어, FGF19, FGF21, FGF23 또는 FGF23 변이체 R179Q) 및 변형된 Fc (예를 들어, FcLALA) 사이의 융합을 제공한다. 융합은 또한 FGF 및 Fc 부분 사이의 링커를 임의로 포함할 수 있다. 융합은 또한 신호 펩티드를 임의로 포함할 수 있다. 다양한 실시양태에서, 개시내용은 이들 융합 폴리펩티드를 코딩하는 핵산, 이들 핵산을 포함하는 벡터, 및 이들 핵산을 함유하는 숙주 세포를 포괄한다.
4.1. Klotho 및 섬유모세포 성장 인자 폴리펩티드
개시내용의 Klotho 융합 폴리펩티드는 성질상 FGF와 대등한 생물학적 활성, 예컨대 FGF 수용체에 결합하는 것 및 FGF 수용체, FRS2 (FGF 수용체 기질 2) 및 ERK1/2 (세포외 신호-조절된 단백질 키나제 1/2)의 인산화를 유도하는 것 및 Egr-1 (초기 성장 반응-1) 유전자를 활성화시키는 것을 나타낼 것으로 예상된다. FGF는 FGF 수용체에 결합하는 분비된 펩티드 성장 인자이다. FGF의 아미노산 및 핵산 서열은 관련 기술분야의 통상의 기술자가 용이하게 이용가능하다. 예를 들어, FGF19, FGF21, 및 FGF23에 대한 예시적인 뉴클레오티드 서열은 진뱅크 데이터베이스에서 각각 수탁 번호 NM_005117, NM_019113, 및 NM_020638로, 본원에서 각각 서열식별번호: 30, 32, 및 34로 찾을 수 있다. FGF19, FGF21, 및 FGF23에 대한 예시적인 아미노산 서열은 진뱅크 데이터베이스에서 각각 수탁 번호 NP_005108, NP_061986, 및 NP_065689로, 본원에서 각각 서열식별번호: 31, 35, 및 35로 찾을 수 있다. 추가적으로, FGF는 단백질의 발현을 돕는 1개 이상의 변경, 예를 들어, FGF23 (R179Q) 변이체 (서열식별번호: 36)를 포함할 수 있다.
Klotho 단백질은 세포외 도메인 및 짧은 세포질 도메인을 갖는 130 kDa의 단일 통과 유형 I 막횡단 단백질이다. Klotho의 아미노산 및 핵산 서열은 관련 기술분야의 통상의 기술자가 용이하게 이용가능하다. 예를 들어, 알파-Klotho 및 베타-Klotho에 대한 예시적인 뉴클레오티드 서열은 진뱅크 데이터베이스에서 각각 수탁 번호 NM_004795 및 NM_175737로, 본원에서 각각 서열식별번호: 7 및 8로 찾을 수 있다. 알파-Klotho 및 베타-Klotho에 대한 예시적인 아미노산 서열은 진뱅크 데이터베이스에서 각각 수탁 번호 NP_004786 및 NP_783864로, 본원에서 각각 서열식별번호: 2 및 4로 찾을 수 있다.
개시내용의 Klotho 융합 폴리펩티드는 섬유모세포 성장 인자 수용체에 결합할 수 있고, 섬유모세포 성장 인자-19 (서열식별번호: 31), 섬유모세포 성장 인자-21 (서열식별번호: 33), 섬유모세포 성장 인자-23 (서열식별번호: 35), 또는 그의 변이체 (섬유모세포 성장 인자-23 변이체 (R179Q) (서열식별번호: 36) 포함)에 작동가능하게 연결된 알파-Klotho 또는 베타-Klotho 세포외 도메인을 갖는다.
구체적으로, 개시내용의 Klotho 융합 폴리펩티드는 섬유모세포 성장 인자-23 (서열식별번호: 35) 또는 섬유모세포 성장 인자-23 변이체 (R179Q) (서열식별번호: 36)에 작동가능하게 커플링된 알파-Klotho (서열식별번호: 2)를 포함할 수 있다. 추가적으로, 개시내용의 Klotho 융합 폴리펩티드는 섬유모세포 성장 인자-19 (서열식별번호: 31)에 작동가능하게 커플링된 베타-Klotho (서열식별번호: 4)를 가질 수 있다. 개시내용의 Klotho 융합 폴리펩티드는 섬유모세포 성장 인자-21 (서열식별번호: 33)에 작동가능하게 커플링된 베타-Klotho (서열식별번호: 4)를 포함할 수 있다.
개시내용은 다양한 Klotho 및 FGF 유전자, 및 이들 유전자에 의해 코딩되는 단백질의 상동체를 포함한다. 유전자와 관련하여 "상동체"는 뉴클레오티드 서열이 상동체인 유전자에 의해 코딩되는 단백질과 실질적으로 동일한 활성/기능을 갖는 단백질을 코딩한다면, 유전자의 적어도 일부에 걸쳐 실질적으로 동일한 뉴클레오티드 서열, 또는 그의 상보적 가닥 또는 그의 일부를 지칭한다. 본원에 기재된 유전자의 상동체는 추정 상동체에 대한 아미노산 또는 뉴클레오티드 서열, 및 유전자 또는 그에 의해 코딩되는 단백질에 대한 서열 (예를 들어, Klotho 및 FGF를 코딩하는 유전자에 대한 뉴클레오티드 서열 또는 그의 상보적 가닥) 사이의 퍼센트 동일성에 의해 확인될 수 있다. 퍼센트 동일성은 예를 들어, 육안 검사에 의해 또는 관련 기술분야에 공지되거나 본원에 기재된 다양한 컴퓨터 프로그램을 사용함으로써 결정될 수 있다. 서열 동일성은 전형적으로 서열 분석 소프트웨어 (예를 들어, 53705 위스콘신주 매디슨 1710 유니버시티 애비뉴 소재의 제네틱스 컴퓨터 그룹(Genetics Computer Group), 유니버시티 오브 위스콘신 바이오테크놀로지 센터(University of Wisconsin Biotechnology Center)의 서열 분석 소프트웨어 패키지, BLAST, BESTFIT, GAP, 또는 PILEUP/PRETTYBOX 프로그램)를 사용하여 측정된다. 이러한 소프트웨어는 다양한 치환, 결실, 및/또는 다른 변형에 대해 상동성의 정도를 할당함으로써 동일하거나 유사한 서열을 매칭시킨다. 보존적 아미노산 치환은 전형적으로 하기 그룹 내의 치환을 포함한다:
글리신 및 알라닌;
발린, 이소류신 및 류신;
아스파르트산, 글루탐산, 아스파라긴 및 글루타민;
세린 및 트레오닌;
리신 및 아르기닌; 및
페닐알라닌 및 티로신.
따라서, 글리신을 알라닌으로 돌연변이시키는 것은 알라닌을 글리신으로 돌연변이시키는 것과 같이 보존적 아미노산 치환일 것이고; 발린을 이소류신 또는 류신으로 돌연변이시키는 것은 이소류신을 발린 또는 류신으로 대체하는 것과 같이, 류신을 발린 또는 이소류신으로 대체하는 것과 같이 보존적 아미노산 치환일 것인 등이다. 개시내용은 적어도 1개의 보존적 아미노산 치환을 갖는 본원에 개시된 모든 아미노산 서열의 변이체를 제공한다.
동일성 정도를 결정하는 예시적인 접근법에서, BLAST 프로그램이 사용될 수 있고, 여기서 e-3 내지 e-100의 확률 스코어는 밀접하게 관련된 서열을 나타낸다.
한 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 19의 융합 폴리펩티드를 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 20의 융합 폴리펩티드를 제공한다.
한 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 40의 융합 폴리펩티드를 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 41의 융합 폴리펩티드 또는 적어도 1개의 보존적 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체를 제공한다.
한 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 46의 융합 폴리펩티드를 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 47의 융합 폴리펩티드 또는 적어도 1개의 보존적 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체를 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 48의 융합 폴리펩티드를 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 49의 융합 폴리펩티드 또는 적어도 1개의 보존적 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체를 제공한다.
한 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 50의 융합 폴리펩티드를 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 51의 융합 폴리펩티드 또는 적어도 1개의 보존적 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체를 제공한다.
한 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 52의 융합 폴리펩티드를 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 53의 융합 폴리펩티드 또는 적어도 1개의 보존적 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체를 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 54의 융합 폴리펩티드 또는 적어도 1개의 보존적 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체를 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 55의 융합 폴리펩티드 또는 적어도 1개의 보존적 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체를 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 56의 융합 폴리펩티드 또는 적어도 1개의 보존적 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체를 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 57의 융합 폴리펩티드 또는 적어도 1개의 보존적 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체를 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 58의 융합 폴리펩티드 또는 적어도 1개의 보존적 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체를 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 59의 융합 폴리펩티드 또는 적어도 1개의 보존적 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체를 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 60의 융합 폴리펩티드 또는 적어도 1개의 보존적 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체를 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 61의 융합 폴리펩티드 또는 적어도 1개의 보존적 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체를 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 62의 융합 폴리펩티드 또는 적어도 1개의 보존적 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체를 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 63의 융합 폴리펩티드 또는 적어도 1개의 보존적 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체를 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 64의 융합 폴리펩티드 또는 적어도 1개의 보존적 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체를 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 65의 융합 폴리펩티드 또는 적어도 1개의 보존적 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체를 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 66의 융합 폴리펩티드 또는 적어도 1개의 보존적 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체를 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 67의 융합 폴리펩티드 또는 적어도 1개의 보존적 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체를 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 68의 융합 폴리펩티드 또는 적어도 1개의 보존적 아미노산 치환을 포함하는 그의 변이체를 제공한다.
본원에 사용된 용어 "상동성" 및 "상동성인"은 이론적인 공통 유전적 조상을 갖는 단백질을 지정하는 것으로 제한되지 않고, 유전자적으로 비관련될 수 있고, 그럼에도 불구하고 유사한 기능을 수행하고/거나 유사한 구조를 갖도록 진화된 단백질을 포함한다. 본원에 기재된 다양한 단백질에 대한 기능적 상동성은 또한 상동체인 상응하는 단백질의 활성을 갖는 단백질을 포괄한다. 기능적 상동성을 갖는 단백질에 대해, 그의 아미노산 서열에서 유의한 동일성을 갖는 것이 요구되지 않고, 대신에, 기능적 상동성을 갖는 단백질은 유사하거나 동일한 활성을 갖는 것으로 정의된다. 예를 들어, Klotho 분자와 관련하여, 폴리펩티드는 FGF 폴리펩티드에 결합하고 FGFR에 대한 FGF의 결합을 가능하게 하는 기능적 특징을 가져야 한다. FGF 분자와 관련하여, 폴리펩티드는 FGFR에 결합하고 FGFR의 활성화 (예를 들어, 인산화)를 일으키는 기능적 특징을 가져야 한다. FGF 수용체에 대한 FGF 결합 및/또는 FGF 신호전달 경로의 활성화를 평가하기 위한 검정은 관련 기술분야에 공지되어 있고 본원에 기재되어 있다 (실시예 2 참조). Klotho 활성을 평가하기 위한 검정이 또한 관련 기술분야에 공지되어 있고 본원에 기재되어 있다 (예를 들어, FGF 폴리펩티드에 대한 결합). 구조적 상동성을 갖는 단백질은 유사한 3차 (또는 4차) 구조를 갖는 것으로서 정의되고, 반드시 이들을 코딩하는 유전자에 대한 아미노산 동일성 또는 핵산 동일성을 요구하지는 않는다. 특정 상황에서, 구조적 상동체는 단백질의 활성 부위 또는 결합 부위에서만 구조적 상동성을 유지하는 단백질을 포함할 수 있다.
구조적 및 기능적 상동성에 더하여, 본 개시내용은 본원에 기재된 다양한 Klotho 및 FGF 아미노산 서열에 대해 아미노산 동일성을 갖는 단백질을 추가로 포괄한다. 2개의 아미노산 서열의 동일성/상동성 백분율을 결정하기 위해, 서열을 최적 비교 목적을 위해 정렬시킨다 (예를 들어, 또 다른 단백질의 아미노산 서열과의 최적 정렬을 위해 하나의 단백질의 아미노산 서열 내에 갭을 도입할 수 있음). 이어서, 상응하는 아미노산 위치에서 아미노산 잔기를 비교한다. 하나의 서열 내의 위치가 다른 서열 내의 상응하는 위치와 동일한 아미노산 잔기로 점유되어 있으면, 분자들을 그 위치에서 동일하다. 2개의 서열 사이의 퍼센트 동일성은 서열이 공유하는 동일한 위치의 수의 함수이다 (즉, % 동일성= 동일한 위치의 #/위치의 총 # X 100).
본원에 기재된 개시내용의 분자의 아미노산 서열은 본원에 기재된 아미노산 서열과 적어도 약 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 초과로 동일하거나 상동성인 아미노산 서열을 갖는다.
본원에 기재된 본 개시내용의 분자의 핵산 서열은 본원에 기재된 뉴클레오티드 서열에 혼성화하거나, 그에 대해 적어도 약 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 초과로 동일하거나 상동성인 뉴클레오티드 서열을 갖는다.
개시내용의 융합 폴리펩티드에 사용하기에 적절한 핵산 분자는 엄격한 조건 하에 각각 Klotho 또는 FGF를 코딩하는 핵산 분자의 상보체에 혼성화하는 Klotho 또는 FGF 뉴클레오티드 서열을 가질 수 있다. 본원에 사용된 용어 "엄격한 조건 하에 혼성화하다"는, 서로 적어도 약 70%, 80%, 85%, 90% 또는 그 초과로 상동성인 뉴클레오티드 서열이 전형적으로 서로 혼성화되어 유지되는 혼성화 및 세척을 위한 조건을 기재하는 것으로 의도된다. 이러한 엄격한 조건은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있고, 문헌 [Ausubel et al. Current Protocols in Molecular Biology, Wiley Interscience, New York (2001), 6.3.1-6.3.6]에서 찾아볼 수 있다. 엄격한 혼성화 조건의 특정의 비제한적 예는 약 45℃에서 6X 염화나트륨/시트르산나트륨 (SSC) 내에서의 혼성화, 이어서 50-65℃에서 0.2 X SSC, 0.1% SDS 내에서 1회 이상의 세척이다.
4.2. 개시내용의 Klotho-FGF 융합 폴리펩티드
개시내용의 일부 실시양태에서, Klotho 융합 폴리펩티드는 Klotho 폴리펩티드 또는 그의 활성 단편 또는 변이체의 제1 폴리펩티드 서열, 및 FGF 또는 그의 활성 단편 또는 변이체를 코딩하는 제2 폴리펩티드 서열을 갖는 폴리펩티드 쇄를 갖는다. 일부 실시양태에서, 융합은 Fc-감마-수용체에 대한 감소된 친화도 및/또는 증가된 혈청 반감기를 갖는 변형된 Fc 단편을 추가로 포함한다.
개시내용은 서열식별번호: 19-28에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 95% 또는 그 초과로 상동성인 융합 폴리펩티드를 포함한다. 서열식별번호: 19의 아미노산 서열은 FGF23 (R179Q) 변이체 (서열식별번호: 36)에 N-말단 연결된 Klotho 세포외 도메인을 갖는 Klotho 융합 폴리펩티드를 코딩한다. 서열식별번호: 20의 아미노산 서열은 FGF23 (R179Q) 변이체에 N-말단 연결된 신호 펩티드가 결여된 Klotho 세포외 도메인에 N-말단 연결된 IgG 신호 펩티드를 갖는 Klotho 융합 폴리펩티드를 코딩한다. 서열식별번호: 21의 아미노산 서열은 FGF23 (R179Q) 변이체에 N-말단 연결된 KL-D1 세포외 서브도메인을 갖는 Klotho 융합 폴리펩티드를 코딩한다. 서열식별번호: 22의 아미노산 서열은 FGF23 (R179Q) 변이체에 N-말단 연결된 KL-D2 세포외 서브도메인을 갖는 Klotho 융합 폴리펩티드를 코딩한다. 서열식별번호: 23의 아미노산 서열은 FGF23 (R179Q) 변이체에 N-말단 연결된 2개의 KL-D1 세포외 서브도메인을 갖는 Klotho 융합 폴리펩티드를 코딩한다. 서열식별번호: 24의 아미노산 서열은 FGF23 (R179Q) 변이체에 N-말단 연결된 2개의 KL-D2 세포외 서브도메인을 갖는 Klotho 융합 폴리펩티드를 코딩한다. 서열식별번호: 25의 아미노산 서열은 Klotho 세포외 도메인에 N-말단 연결된 FGF23 (R179Q) 변이체를 갖는 Klotho 융합 폴리펩티드를 코딩한다. 서열식별번호: 26의 아미노산 서열은 KL-D1 세포외 서브도메인에 N-말단 연결된 FGF23 (R179Q) 변이체를 갖는 Klotho 융합 폴리펩티드를 코딩한다. 서열식별번호: 27의 아미노산 서열은 KL-D2 세포외 서브도메인에 N-말단 연결된 FGF23 (R179Q) 변이체를 갖는 Klotho 융합 폴리펩티드를 코딩한다. 서열식별번호: 28의 아미노산 서열은 2개의 KL-D1 세포외 서브도메인에 N-말단 연결된 FGF23 (R179Q) 변이체를 갖는 Klotho 융합 폴리펩티드를 코딩한다. 서열식별번호: 29의 아미노산 서열은 2개의 KL-D2 세포외 서브도메인에 N-말단 연결된 FGF23 (R179Q) 변이체를 갖는 Klotho 융합 폴리펩티드를 코딩한다. 일부 실시양태에서, 융합은 Fc-감마-수용체에 대한 감소된 친화도 및/또는 증가된 혈청 반감기를 갖는 변형된 Fc 단편을 추가로 포함한다.
개시내용의 Klotho 융합 폴리펩티드는 서열식별번호: 7에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 95% 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 서열식별번호: 7의 아미노산 서열은 신호 펩티드가 결여된 Klotho 세포외 도메인을 코딩한다. 일부 실시양태에서, 융합은 Fc-감마-수용체에 대한 감소된 친화도 및/또는 증가된 혈청 반감기를 갖는 변형된 Fc 단편을 추가로 포함한다.
본 개시내용의 융합 단백질은 본원에 기재되고, 관련 기술분야에 공지된 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 예를 들어, 본 개시내용의 융합 폴리펩티드는 미국 특허 번호 6,194,177에 기재된 바와 같이 구축될 수 있다. Klotho 폴리펩티드의 용도는 미국 특허 번호 6,579,850에 기재되어 있다. FGF 핵산 분자의 용도는 미국 특허 번호 7,223,563에 기재되어 있다.
일부 실시양태에서, Klotho를 코딩하는 핵산 분자를 PCR에 의해 클로닝하고, FGF를 코딩하는 핵산 분자와 인 프레임으로 라이게이션한다. 일부 실시양태에서, 융합은 Fc-감마-수용체에 대한 감소된 친화도 및/또는 증가된 혈청 반감기를 갖는 변형된 Fc 단편을 추가로 포함한다. 융합 폴리펩티드를 코딩하는 핵산은 발현이 허용되도록 프로모터에 작동가능하게 연결된다. 이어서 융합 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 분자를 발현을 위한 숙주 세포 내로 형질감염시킨다. 최종 구축물의 서열은 서열분석에 의해 확인될 수 있다.
본 개시내용의 융합 단백질을 제조할 때, Klotho의 세포외 서브도메인을 코딩하는 핵산 분자는 FGF를 코딩하는 핵산 분자, 및 (임의적인) 변형된 Fc 단편을 코딩하는 핵산에 인 프레임으로 융합될 것이다. 생성된 핵산 분자의 발현은 FGF 폴리펩티드에 대해 N-말단에 융합되는 Klotho의 세포외 서브도메인을 생성한다. Klotho의 세포외 서브도메인이 FGF 폴리펩티드에 대해 C-말단에 융합되는 융합도 가능하다. 융합 단백질을 제조하는 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다.
개시내용의 융합 폴리펩티드는 공유 연결되는 적어도 2개의 폴리펩티드를 갖고, 여기서 하나의 폴리펩티드는 하나의 단백질 서열 또는 도메인, 예를 들어, Klotho로부터 유래하고, 다른 폴리펩티드는 또 다른 단백질 서열 또는 도메인, 예를 들어 FGF로부터 유래한다. 일부 실시양태에서, 융합은 Fc-감마-수용체에 대한 감소된 친화도 및/또는 증가된 혈청 반감기를 갖는 변형된 Fc 단편을 추가로 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 개시내용은 변형된 Fc 단편에 융합된 FGF를 포함한다. 개시내용의 융합 폴리펩티드의 Klotho 및/또는 FGF 및/또는 (임의적인) 변형된 Fc 단편은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지된 방법에 의해 연결될 수 있다. 이들 방법은 화학적 및 재조합 수단 둘 다를 포함한다.
개시내용의 융합 폴리펩티드 내로 혼입되는 도메인을 코딩하는 핵산은 재조합 유전학 분야에서의 상용 기술을 사용하여 수득될 수 있다. 본 개시내용에서 유용한 일반적인 방법을 개시하는 기본적인 문서는 문헌 [Sambrook and Russell, Molecular Cloning, A Laboratory Manual (3rd ed. 2001); Kriegler, Gene Transfer and Expression: A Laboratory Manual (1990); 및 Current Protocols in Molecular Biology (Ausubel et al., eds., 1994-1999)]을 포함한다. 개시내용의 Klotho 융합 폴리펩티드를 코딩하는 핵산에서, 각각 서열식별번호: 1 및 서열식별번호: 3에 의해 나타내어지는, 알파-Klotho 또는 베타-Klotho를 코딩하는 핵산 서열이 사용될 수 있다. Klotho 융합 폴리펩티드를 코딩하는 핵산에서, 각각 서열식별번호: 30, 서열식별번호: 32 및 서열식별번호: 34에 의해 나타내어지는, FGF19, FGF21, 또는 FGF23을 코딩하는 핵산 서열이 사용될 수 있다. 본원에 기재된 본 개시내용의 분자의 핵산 서열은 서열식별번호: 1, 서열식별번호: 3, 서열식별번호: 30, 서열식별번호: 32, 또는 서열식별번호: 34에 혼성화하거나 그와 적어도 약 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 초과로 동일하거나 상동성인 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
융합의 다양한 성분 [Klotho 및/또는 FGF 펩티드 및/또는 (임의적인) 변형된 Fc 단편]을 코딩하는 핵산 서열은 임의의 다양한 방법을 사용하여 수득될 수 있다. 예를 들어, 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열은 프로브를 사용한 혼성화에 의해 cDNA 및 게놈 DNA 라이브러리로부터 클로닝되거나, 올리고뉴클레오티드 프라이머를 사용하는 증폭 기술을 사용하여 단리될 수 있다. 보다 통상적으로, DNA 또는 RNA 주형을 사용하여 Klotho 및 FGF 서열을 증폭하고 단리하기 위해 증폭 기술이 사용된다 (예를 들어, 문헌 [Dieffenfach & Dveksler, PCR Primers: A Laboratory Manual (1995)] 참조). 대안적으로, 중첩 올리고뉴클레오티드는 합성적으로 생성되고, 도메인 중 1개 이상을 생성하도록 연결될 수 있다. Klotho 또는 FGF를 코딩하는 핵산은 또한 프로브로서 항체를 사용하여 발현 라이브러리로부터 단리될 수 있다.
본 개시내용에 따라, 융합의 다양한 성분 [Klotho 및/또는 FGF 및/또는 (임의적인) 변형된 Fc 단편]은 직접적으로, 또는 아미노산 링커, 예컨대 폴리글리신 링커를 포함한 공유 링커, 또는 탄수화물 링커, 지질 링커, 지방산 링커, 폴리에테르 링커, 예컨대 PEG 등을 포함한 또 다른 유형의 화학적 링커를 통해 연결될 수 있다. (예를 들어, 문헌 [Hermanson, Bioconjugate techniques (1996)] 참조). 융합/융합 폴리펩티드를 형성하는 폴리펩티드는 전형적으로 C-말단 대 N-말단 연결되지만, 이들은 또한 C-말단 대 C-말단, N-말단 대 N-말단, 또는 N-말단 대 C-말단 연결될 수 있다. 1개 이상의 폴리펩티드 도메인이 본 개시내용의 융합 폴리펩티드 내의 내부 위치에 삽입될 수 있다. 융합 단백질의 폴리펩티드는 임의의 순서로 존재할 수 있다. 융합 폴리펩티드는 융합 단백질을 연속하여 코딩하는 재조합 폴리뉴클레오티드를 제조함으로써, 하나의 단백질 서열, 예를 들어, Klotho의 세포외 서브도메인으로부터의 아미노산의 쇄를 또 다른 단백질 서열, 예를 들어 FGF로부터의 아미노산의 쇄에 공유 연결함으로써 생성될 수 있다. 융합 단백질 내의 아미노산의 상이한 쇄는 함께 직접 스플라이싱되거나, 화학적 연결기 또는 아미노산 연결기를 통해 함께 간접적으로 스플라이싱될 수 있다. 아미노산 연결기는 약 200개 이상의 아미노산 길이, 또는 일반적으로 1 내지 100개의 아미노산일 수 있다. 일부 실시양태에서, 링커에 의한 유의한 2차 구조적 요소의 형성을 방지하기 위해 프롤린 잔기가 링커 내로 혼입된다. 링커는 종종 재조합 융합 단백질의 일부로서 합성되는 가요성 아미노산 하위서열일 수 있다. 이러한 가요성 링커는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있다.
본 개시내용에 따라, 융합 [Klotho의 세포외 서브도메인 및/또는 FGF 및/또는 (임의적인) 변형된 Fc 단편]의 아미노산 서열은 펩티드 링커를 통해 연결될 수 있다. 펩티드 링커의 예는 관련 기술분야에 널리 공지되어 있고, 본원에 기재되어 있다. 예를 들어, 펩티드 링커는 일반적으로 여러 Gly 및 여러 Ser 잔기, 예컨대 (Gly4 Ser)3 (서열식별번호: 11), Gly4 Ser 폴리펩티드 (서열식별번호: 12), Gly (서열식별번호: 13), Gly Gly (서열식별번호: 14), Gly Ser (서열식별번호: 15), Gly2 Ser (서열식별번호: 16), Ala (서열식별번호: 17), 및 Ala Ala (서열식별번호: 18)를 포함한다. 구체적으로, 개시내용의 융합 단백질에 사용하기 위한 펩티드 링커는 가요성 힌지로서 작용할 수 있다.
Klotho 또는 FGF의 신호 서열은 Klotho가 개시내용의 융합 단백질 내로 혼입되기 전에 제외될 수 있다. 융합 단백질의 Klotho 또는 FGF에 대한 신호 서열, 예를 들어 서열식별번호: 19에 의해 나타내어지는 폴리펩티드가 포함될 수 있다. 그러나, 이러한 서열은 또한 생략되거나, 상이한 단백질의 신호 서열, 예를 들어, IgG 신호 서열 (서열식별번호: 9)로 대체될 수 있다. 일반적으로, 개시내용의 제약 조성물은 Klotho 및 FGF의 성숙 형태를 함유할 것이다.
일반적으로, 인트론은 융합 폴리펩티드 내로 혼입되기 전에 Klotho 또는 FGF 모이어티 중 하나 또는 둘 다로부터 제외된다.
개시내용의 융합 폴리펩티드는 1개 이상의 반응성 아미노산 측쇄에 공유 부착된 1개 이상의 중합체를 포함할 수 있다. 예로서, 비제한적으로, 이러한 중합체는 1개 이상의 유리 시스테인 술프히드릴 잔기에 부착되어 단백질이 산화 조건에 노출될 때 디술피드 결합의 형성 및 응집을 차단할 수 있는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)을 포함한다. 또한, 개시내용의 융합 폴리펩티드의 PEG화는 증가된 반감기, 용해도, 및 프로테아제 저항성과 같은 개선된 특성을 제공하는 것으로 예상된다. 대안적으로, 개시내용의 융합 폴리펩티드는 유리 아미노 기, 예컨대 리신 엡실론 또는 N-말단 아미노 기에 중합체를 공유 부가하는 것에 의해 변형될 수 있다. 공유 변형을 위한 특정한 특정의 시스테인 및 리신은 수용체 결합, 헤파린 결합, 또는 적절한 단백질 폴딩에 수반되지 않는 것일 것이다. 특정한 아미노산 잔기의 변형이 목적하는 단백질의 활성에 영향을 미치는지 결정하기 위해, 융합 폴리펩티드의 생화학적 및/또는 생물학적 활성을 검정하는 방법이 사용될 수 있다는 것은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 명백할 것이다. 다른 유사한 적합한 변형이 고려되고 관련 기술분야에 공지되어 있다.
개시내용은 또한 서열식별번호: 19-28에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 95% 또는 그 초과로 상동성인 융합 폴리펩티드의 발현에 관한 것이다.
본 개시내용은 (a) Klotho 단백질의 적어도 1개의 세포외 서브도메인, 또는 그의 기능적 활성 변이체 또는 유도체를 포함하는 폴리펩티드; (b) 섬유모세포 성장 인자, 또는 그의 기능적 활성 변이체 또는 유도체를 포함하는 폴리펩티드; 및 (c) Fc-감마-수용체에 대한 감소된 친화도 및/또는 증가된 혈청 반감기를 갖는 변형된 Fc 단편을 포함하는 융합 폴리펩티드를 포괄한다. "그의 기능적 활성 변이체 또는 유도체"는, 생물학적 활성은 보유하면서 상응하는 야생형 폴리펩티드보다 길거나, 짧거나, 또는 변경된 아미노산 서열을 포함하는 변이체 또는 유도체를 의미한다. 따라서 Klotho 단백질의 세포외 서브도메인 또는 섬유모세포 성장 인자의 "기능적 활성 변이체 또는 유도체"는 Klotho 단백질 또는 섬유모세포 성장 인자의 야생형 세포외 서브도메인보다 적거나, 많거나, 또는 변경된 아미노산 서열을 포함하지만, 야생형 폴리펩티드 서열의 1종 이상의 생물학적 활성을 여전히 보유한다. 본원에 개시된 폴리펩티드의 기능적 활성 변이체 또는 유도체는 또한 본원에 개시된 폴리펩티드의 동일한 아미노산 서열을 포함하지만, 번역후 변형 (예를 들어, PEG화, 메틸화 및/또는 글리코실화)에서 달라질 수 있거나, 또는 그에 부가된 추가의 모이어티 또는 성분을 가질 수 있다. 다양한 실시양태에서, FGF23의 변이체 또는 유도체는 R179Q를 포함하거나, 또는 포함하지 않는다.
한 실시양태에서, 기능적 활성 변이체 또는 유도체 폴리펩티드는 본원에 개시된 서열 (예를 들어, Klotho 단백질의 적어도 1개의 세포외 도메인 또는 섬유모세포 성장 인자)과 적어도 약 60% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 바람직하게는, 폴리펩티드는 본원에 개시된 서열과 적어도 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99% 또는 그 초과로 동일하다.
본원에 사용된 2개의 아미노산 서열의 (또는 2개의 핵산 서열의) 퍼센트 동일성은 문헌 [Karlin and Altschul, PNAS USA 90:5873-5877, 1993]에서와 같이 변형된 문헌 [Karlin and Altschul (PNAS USA 87:2264-2268, 1990)]의 알고리즘을 사용하여 결정된다. 이러한 알고리즘은 문헌 [Altschul et al. (J. Mol. Biol. 215:403-410, 1990)]의 NBLAST 및 XBLAST 프로그램에 통합된다. BLAST 뉴클레오티드 검색은 NBLAST 프로그램, 스코어=100, 워드길이=12로 수행된다. BLAST 단백질 검색은 XBLAST 프로그램, 스코어=50, 워드길이=3으로 수행된다. 비교 목적을 위한 갭 정렬을 수득하기 위해, GappedBLAST가 문헌 [Altschul et al. (Nucleic Acids Res. 25:3389-3402, 1997)]에 기재된 바와 같이 사용된다. BLAST 및 GappedBLAST 프로그램을 사용할 경우, 각각의 프로그램 (예를 들어, XBLAST 및 NBLAST)의 디폴트 파라미터를 사용하여 본 발명의 핵산 분자에 상동성인 뉴클레오티드 서열을 수득한다.
동일성 또는 동일한은 아미노산 서열 (또는 핵산 서열) 유사성을 의미하고, 관련 기술분야에 인지되는 의미를 갖는다. 동일성을 갖는 서열은 동일한 또는 유사한 아미노산 (또는 핵산)을 공유한다. 따라서, 참조 서열과 85% 아미노산 서열 동일성을 공유하는 후보 서열은, 후보 서열의 참조 서열과의 정렬 후에 후보 서열 내의 아미노산의 85%가 참조 서열 내의 상응하는 아미노산과 동일하고/거나 보존적 아미노산 변화를 구축하는 것을 필요로 한다.
본원에 개시된 폴리펩티드의 기능적 활성 변이체는 원래의 폴리펩티드 또는 단편의 동일한 기능적 활성을 실질적으로 보유한다. 자연 발생 기능적 활성 변이체, 예컨대 대립유전자 변이체 및 종 변이체, 및 비-자연 발생 기능적 활성 변이체가 본 발명에 포함되며, 예를 들어 돌연변이유발 기술에 의해 또는 직접 합성에 의해 생성될 수 있다.
기능적 활성 변이체 또는 유도체는 본원에 개시된 폴리펩티드로부터 약 또는 적어도, 예를 들어 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60개 또는 그 초과의 아미노산 잔기만큼 상이하다. 이러한 비교가 정렬을 필요로 하는 경우, 서열은 최대 상동성을 위해 정렬된다. 활성이 본원에 개시된 폴리펩티드와 실질적으로 유사한 한, 변이의 부위는 폴리펩티드의 어디서든 일어날 수 있다.
표현형 침묵 아미노산 치환을 갖는 변이체 및 유도체를 제조하는 방법에 대한 지침은 문헌 [Bowie et al., Science, 247:1306-1310 (1990)]에 제공되어 있고, 이는 아미노산 서열의 변화에 대한 허용성을 연구하는 2가지의 주요 전략이 존재한다는 것을 교시한다.
제1 전략은 진화 과정 동안 자연 선택에 의한 아미노산 치환의 허용성을 이용한다. 상이한 종 내의 아미노산 서열을 비교함으로써, 종들 사이에서 보존된 아미노산 위치를 확인할 수 있다. 예를 들어, 도 5를 참조한다. 이들 보존된 아미노산은 단백질 기능에 중요할 가능성이 있다. 대조적으로, 치환이 자연 선택에 의해 허용된 아미노산 위치는 단백질 기능에 중요하지 않은 위치를 나타낸다. 따라서, 아미노산 치환을 허용하는 위치는 폴리펩티드의 특이적 결합 활성을 계속 유지하면서 변형될 수 있다.
제2 전략은 단백질 기능에 중요한 영역을 확인하기 위해 클로닝된 유전자의 특이적인 위치에서 아미노산 변화를 도입하기 위해 유전자 조작을 사용한다. 예를 들어, 부위 지정 돌연변이유발 또는 알라닌-스캐닝 돌연변이유발 (분자에서 모든 잔기에 단일 알라닌 돌연변이의 도입)이 사용될 수 있다 (Cunningham et al., Science, 244:1081-1085 (1989)).
단백질의 아미노산 내로 돌연변이를 도입하는 방법은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌 [Ausubel (ed.), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, Inc. (1994); T. Maniatis, E. F. Fritsch and J. Sambrook, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989))]을 참조한다. 또한, 상업적으로 입수가능한 키트, 예컨대 "퀵체인지(QuikChange).TM. 부위-지정 돌연변이유발 키트" (스트라타진(Stratagene))를 사용하여 돌연변이가 도입될 수 있다. 폴리펩티드의 기능에 영향을 미치지 않는 아미노산을 대체함으로써 폴리펩티드에 대한 폴리펩티드 기능적 활성 변이체 또는 유도체를 생성하는 것은 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 달성될 수 있다.
변이체 또는 유도체는 적어도 1종의 생물학적 활성을 여전히 보유하면서, 예를 들어 1개 이상의 보존적 치환을 가질 수 있다. 보존적 치환은, 펩티드 화학 분야의 통상의 기술자가 폴리펩티드의 2차 구조 및 소수친수성 성질이 실질적으로 변하지 않은 것으로 예상하도록, 아미노산이 유사한 특성을 갖는 또 다른 아미노산으로 치환된 것이다. 일반적으로, 아미노산의 하기 그룹이 보존적 변화를 나타낸다: (1) ala, pro, gly, glu, asp, gln, asn, ser, thr; (2) cys, ser, tyr, thr; (3) val, ile, leu, met, ala, phe; (4) lys, arg, his; 및 (5) phe, tyr, trp, his.
특정한 예시적인 변이체 및 유도체는 비제한적으로, 야생형 폴리펩티드의 적어도 1종의 생물학적 활성을 보유하면서, (서열식별번호: 5 또는 6에 개시된 바와 같은) 야생형 서열로부터 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60개 이하 또는 그 초과의 아미노산 잔기 차이를 갖는, Klotho 단백질의 적어도 1개의 세포외 서브도메인을 포함하는 폴리펩티드, 예를 들어 Klotho (예를 들어, 서열식별번호: 5 또는 6)의 세포외 도메인의 적어도 약 100, 150, 200, 250, 300, 350, 375, 400 또는 425개의 인접 아미노산을 포함하는 폴리펩티드의 기능적 활성 변이체 및 유도체를 포함한다. 예를 들어, Klotho 단백질의 적어도 1개의 세포외 서브도메인을 포함하는 폴리펩티드의 기능적 활성 변이체 또는 유도체는 약 100개 이하의 아미노산 잔기 차이를 갖는, 서열식별번호: 5 또는 6의 적어도 약 400개의 인접 아미노산을 포함하는 폴리펩티드를 포함한다. 예를 들어, Klotho 단백질의 적어도 1개의 세포외 서브도메인을 포함하는 폴리펩티드의 기능적 활성 변이체 또는 유도체는 약 50개 이하의 아미노산 잔기 차이를 갖는, 서열식별번호: 5 또는 6의 적어도 약 400개의 인접 아미노산을 포함하는 폴리펩티드를 포함한다. 예를 들어, Klotho 단백질의 적어도 1개의 세포외 서브도메인을 포함하는 폴리펩티드의 기능적 활성 변이체 또는 유도체는 약 25개 이하의 아미노산 잔기 차이를 갖는, 서열식별번호: 5 또는 6의 적어도 약 425개의 인접 아미노산을 포함하는 폴리펩티드를 포함한다. 예를 들어, Klotho 단백질의 적어도 1개의 세포외 서브도메인을 포함하는 폴리펩티드의 기능적 활성 변이체 또는 유도체는 약 10개 이하의 아미노산 잔기 차이를 갖는, 서열식별번호: 5 또는 6의 적어도 약 425개의 인접 아미노산을 포함하는 폴리펩티드를 포함한다. 또 다른 예에서, Klotho 단백질의 적어도 1개의 세포외 서브도메인을 포함하는 폴리펩티드의 기능적 활성 변이체 또는 유도체는 야생형 서열과 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 140, 150, 160, 170, 180, 190 또는 200개 이하의 아미노산 잔기 차이를 갖는, 서열식별번호: 7의 적어도 약 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 925, 950 또는 982개의 인접 아미노산을 포함하는 폴리펩티드를 포함한다. 예를 들어, Klotho 단백질의 적어도 1개의 세포외 서브도메인을 포함하는 폴리펩티드의 기능적 활성 변이체 또는 유도체는 약 100개 이하의 아미노산 잔기 차이를 갖는, 서열식별번호: 7의 적어도 약 500개의 인접 아미노산을 포함하는 폴리펩티드를 포함한다. 예를 들어, Klotho 단백질의 적어도 1개의 세포외 서브도메인을 포함하는 폴리펩티드의 기능적 활성 변이체 또는 유도체는 약 100개 이하의 아미노산 잔기 차이를 갖는, 서열식별번호: 7의 적어도 약 600개의 인접 아미노산을 포함하는 폴리펩티드를 포함한다. 예를 들어, Klotho 단백질의 적어도 1개의 세포외 서브도메인을 포함하는 폴리펩티드의 기능적 활성 변이체 또는 유도체는 약 100개 이하의 아미노산 잔기 차이를 갖는, 서열식별번호: 7의 적어도 약 700개의 인접 아미노산을 포함하는 폴리펩티드를 포함한다. 예를 들어, Klotho 단백질의 적어도 1개의 세포외 서브도메인을 포함하는 폴리펩티드의 기능적 활성 변이체 또는 유도체는 약 100개 이하의 아미노산 잔기 차이를 갖는, 서열식별번호: 7의 적어도 약 800개의 인접 아미노산을 포함하는 폴리펩티드를 포함한다. 예를 들어, Klotho 단백질의 적어도 1개의 세포외 서브도메인을 포함하는 폴리펩티드의 기능적 활성 변이체 또는 유도체는 약 100개 이하의 아미노산 잔기 차이를 갖는, 서열식별번호: 7의 적어도 약 900개의 인접 아미노산을 포함하는 폴리펩티드를 포함한다. 예를 들어, Klotho 단백질의 적어도 1개의 세포외 서브도메인을 포함하는 폴리펩티드의 기능적 활성 변이체 또는 유도체는 약 50개 이하의 아미노산 잔기 차이를 갖는, 서열식별번호: 7의 적어도 약 900개의 인접 아미노산을 포함하는 폴리펩티드를 포함한다.
특정한 예시적인 변이체 및 유도체는 비제한적으로, 야생형 폴리펩티드의 적어도 1종의 생물학적 활성을 보유하면서, (서열식별번호: 31, 33 또는 35에 개시된 바와 같은) 야생형 서열로부터 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60개 이하 또는 그 초과의 아미노산 잔기 차이를 갖는, 섬유모세포 성장 인자를 포함하는 폴리펩티드, 예를 들어, 섬유모세포 성장 인자, 예를 들어, FGF19 (서열식별번호: 31), FGF21 (서열식별번호: 33) 또는 FGF23 (서열식별번호: 35)의 적어도 약 100, 125, 150, 150, 175, 200, 225, 또는 250개의 인접 아미노산을 포함하는 폴리펩티드의 기능적 활성 변이체 및 유도체를 포함한다. 다양한 실시양태에서, 변이체 또는 유도체는 R179Q 변이를 포함할 수 있거나 또는 그렇지 않을 수 있다. 예를 들어, 섬유모세포 성장 인자를 포함하는 폴리펩티드의 기능적 활성 변이체 또는 유도체는 약 25개 이하의 아미노산 잔기 차이를 갖는, 서열식별번호: 31, 33 또는 35의 적어도 약 150개의 인접 아미노산을 포함하는 폴리펩티드를 포함한다. 예를 들어, 섬유모세포 성장 인자를 포함하는 폴리펩티드의 기능적 활성 변이체 또는 유도체는 약 25개 이하의 아미노산 잔기 차이를 갖는, 서열식별번호: 31, 33 또는 35의 적어도 약 175개의 인접 아미노산을 포함하는 폴리펩티드를 포함한다. 예를 들어, 섬유모세포 성장 인자를 포함하는 폴리펩티드의 기능적 활성 변이체 또는 유도체는 약 25개 이하의 아미노산 잔기 차이를 갖는, 서열식별번호: 31, 33 또는 35의 적어도 약 200개의 인접 아미노산을 포함하는 폴리펩티드를 포함한다. 예를 들어, 섬유모세포 성장 인자를 포함하는 폴리펩티드의 기능적 활성 변이체 또는 유도체는 약 50개 이하의 아미노산 잔기 차이를 갖는, 서열식별번호: 35의 적어도 약 225개의 인접 아미노산을 포함하는 폴리펩티드를 포함한다. 예를 들어, 섬유모세포 성장 인자를 포함하는 폴리펩티드의 기능적 활성 변이체 또는 유도체는 약 25개 이하의 아미노산 잔기 차이를 갖는, 서열식별번호: 35의 적어도 약 225개의 인접 아미노산을 포함하는 폴리펩티드를 포함한다.
4.3. 개시내용의 융합 폴리펩티드의 발현
개시내용의 융합 단백질을 발현하기 위해, 본원에 기재되거나 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법에 의해 수득된 DNA 분자를 관련 기술분야에 널리 공지된 기술에 의해 적절한 발현 벡터 내로 삽입할 수 있다. 예를 들어, 이중 가닥 cDNA는 단독중합체 테일링에 의해 또는 합성 DNA 링커의 사용을 수반한 제한 효소 연결에 의해 또는 평활-말단 라이게이션에 의해 적합한 벡터 내로 클로닝될 수 있다. DNA 리가제는 통상적으로 DNA 분자를 라이게이션하는데 사용되고, 바람직하지 않은 연결은 알칼리성 포스파타제를 사용한 처리에 의해 피할 수 있다.
따라서, 개시내용은 본원에 기재된 바와 같은 핵산 분자 (예를 들어, 유전자 또는 재조합 핵산 분자 코딩 유전자)를 포함하는 벡터 (예를 들어, 재조합 플라스미드 및 박테리오파지)를 포함한다. 용어 "재조합 벡터"는 재조합 벡터가 유래된 천연 또는 자연 핵산 분자 내에 포함된 것보다 더 많거나, 더 적거나, 또는 그와 상이한 핵산 서열을 함유하도록 변경, 변형 또는 조작된 벡터 (예를 들어, 플라스미드, 파지, 파스미드, 바이러스, 코스미드, 포스미드, 또는 다른 정제된 핵산 벡터)를 포함한다. 예를 들어, 재조합 벡터는 본원에 정의된 바와 같은 조절 서열, 예를 들어, 프로모터 서열, 종결인자 서열 및/또는 인공 리보솜 결합 부위 (RBS)에 작동가능하게 연결된 Klotho-FGF23 융합을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 그 안에 포함된 유전자 또는 핵산의 발현을 가능하게 하는 재조합 벡터는 "발현 벡터"로 지칭된다.
진핵 숙주의 경우에, 숙주의 성질에 따라 상이한 전사 및 번역 조절 서열이 사용될 수 있다. 이들은 바이러스 공급원, 예컨대 아데노바이러스, 소 유두종 바이러스, 원숭이 바이러스 등으로부터 유래될 수 있고, 여기서 조절 신호는 높은 수준의 발현을 갖는 특정한 유전자와 연관된다. 예는 헤르페스 바이러스의 TK 프로모터, SV40 초기 프로모터, 효모 ga14 유전자 프로모터 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 유전자의 발현이 조정될 수 있도록 억제 또는 활성화를 가능하게 하는 전사 개시 조절 신호가 선택될 수 있다.
본원에 기재된 개시내용의 일부 분자에서, 융합 폴리펩티드의 1개 이상의 폴리펩티드 쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 갖는 1개 이상의 DNA 분자는 목적하는 DNA 분자를 숙주 세포 내로 통합시킬 수 있는 1종 이상의 조절 서열에 작동가능하게 연결된다. 도입된 DNA에 의해 안정하게 형질전환된 세포는 예를 들어, 발현 벡터를 함유하는 숙주 세포의 선택을 가능하게 하는 1종 이상의 마커를 도입함으로써 선택될 수 있다. 선택 마커 유전자는 발현시킬 핵산 서열에 직접 연결되거나, 또는 공동-형질감염에 의해 동일한 세포 내로 도입될 수 있다. 본원에 기재된 단백질의 최적 합성을 위해 추가의 요소가 또한 필요할 수 있다. 어떠한 추가의 요소가 사용되는지는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 명백할 것이다.
특정한 플라스미드 또는 바이러스 벡터를 선택하는데 있어서 중요한 인자는, 벡터를 함유하는 수용자 세포를 벡터를 함유하지 않는 수용자 세포로부터 인식하고 선택하는 것의 용이함; 특정한 숙주에서 바람직한 벡터의 카피 수; 및 상이한 종의 숙주 세포 사이에서 벡터를 "셔틀"할 수 있는 것이 바람직한지 여부를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
벡터(들)가 발현을 위한 DNA 서열을 포함하도록 구축되면, 예를 들어, 형질전환, 형질감염, 접합, 원형질체 융합, 전기천공, 인산칼슘 침전, 직접 미세주사 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는 관련 기술분야에 공지된 다양한 적합한 방법 중 1종 이상에 의해 적절한 숙주 세포 내로 도입될 수 있다.
숙주 세포는 원핵 또는 진핵일 수 있다. 진핵 숙주 세포의 예는 예를 들어, 포유동물 세포, 예컨대 인간, 원숭이, 마우스, 및 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포를 포함한다. 이러한 세포는 예를 들어, 정확한 폴딩 또는 글리코실화를 포함한 단백질의 번역후 변형을 용이하게 한다. 추가적으로, 개시내용의 융합 폴리펩티드를 발현시키기 위해 효모 세포가 또한 사용될 수 있다. 대부분의 포유동물 세포와 마찬가지로, 효모 세포는 또한, 예를 들어, 글리코실화를 포함한 단백질의 번역후 변형을 가능하게 한다. 효모에서 단백질의 생성을 위해 사용될 수 있는 강력한 프로모터 서열 및 높은 카피수 플라스미드를 사용하는 수많은 재조합 DNA 전략이 존재한다. 효모 전사 및 번역 기구는 클로닝된 포유동물 유전자 생성물 상의 리더 서열을 인식하여, 리더 서열을 보유하는 펩티드 (즉, 프리-펩티드)의 분비를 가능하게 할 수 있다. 개시내용의 융합 폴리펩티드의 고수율 생성의 특정한 방법은 미국 특허 번호 4,889,803에 기재된 바와 같이 연속적으로 증가하는 수준의 메토트렉세이트의 사용에 의해 DHFR-결핍 CHO 세포에서 디히드로폴레이트 리덕타제 (DHFR) 증폭의 사용을 통하는 것이다. 수득된 폴리펩티드는 글리코실화된 형태로 존재할 수 있다.
1종 이상의 벡터(들)의 도입 후에, 숙주 세포는 통상적으로 벡터-함유 세포의 성장을 위해 선택된 선택 배지에서 성장된다. 재조합 단백질의 정제는 관련 기술분야에 공지되거나 본원에 기재된 임의의 방법, 예를 들어, 추출, 침전, 크로마토그래피 및 전기영동을 수반한 임의의 통상적인 절차에 의해 수행될 수 있다. 단백질을 정제하는데 사용될 수 있는 추가의 정제 절차는 표적 단백질에 결합하는 모노클로날 항체를 사용하는 친화성 크로마토그래피이다. 일반적으로, 재조합 단백질을 함유하는 조 제제를 적합한 모노클로날 항체가 고정된 칼럼을 통해 통과시킨다. 단백질은 통상적으로 특이적 항체를 통해 칼럼에 결합하고, 불순물은 통과한다. 칼럼을 세척한 후에, 예를 들어 pH 또는 이온 강도를 변화시킴으로써 단백질을 겔로부터 용리시킨다.
4.4. 융합 폴리펩티드 활성을 평가하기 위한 검정
본원에 기재된 검정 (실시예 2 참조) 및 관련 기술분야에 공지된 것이 개시내용의 융합 폴리펩티드의 Klotho 또는 FGF 활성을 검출하는데 사용될 수 있다. 적합한 활성 검정은 수용체 결합 검정, 세포 증식 검정 및 세포 신호전달 검정을 포함한다. 예를 들어, 융합 폴리펩티드가 Klotho 또는 FGF 활성을 갖는지 여부를 결정하는데 사용될 수 있는 결합 검정은 FGF 수용체에 대한 융합 폴리펩티드의 결합 검정을 포함한다. FGF 수용체 결합 검정은 경쟁적 및 비-경쟁적 검정 둘 다를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 예를 들어, FGF 수용체 결합은 FGF 수용체를 발현하는 세포를 표지된 FGF (예를 들어, 방사성 표지) 및 증가하는 농도의 비표지된 Klotho-FGF 융합 폴리펩티드와 접촉시킴으로써 검출될 수 있다. 동일한 수용체에 대한 결합에 대해 경쟁하는 2개의 리간드가 세포를 함유하는 반응 혼합물에 첨가된다. 이어서 세포를 세척하고, 표지된 FGF를 측정한다. 비표지된 융합 폴리펩티드의 존재 하에 그의 수용체에 대한 표지된 FGF의 양에서의 감소는 수용체에 대한 Klotho-FGF 융합 폴리펩티드의 결합을 나타낸다. 대안적으로, Klotho-FGF 융합 폴리펩티드가 표지될 수 있고, 세포에 대한 융합 폴리펩티드의 직접 결합이 검출된다.
Klotho 또는 FGF 활성은 또한 융합 폴리펩티드가 세포 반응을 유도하는지 여부를 결정함으로써 측정될 수 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, Klotho-FGF 융합 폴리펩티드의 생물학적 활성을 검출하기 위한 검정은 FGF 수용체를 발현하는 세포를 융합 폴리펩티드와 접촉시키고, 세포 반응, 예컨대 예를 들어 세포 증식 또는 Egr-1 활성화, C2C12 세포에서의 근관 직경을 검정하고, 융합 폴리펩티드의 존재 및 부재 하에 세포 반응을 비교하는 것을 수반한다. 융합 폴리펩티드 복합체의 부재 하에서에 비해 존재 하에서의 세포 반응의 증가는 융합 폴리펩티드가 생물학적 활성을 갖는다는 것을 나타낸다. 또한, 생물학적 활성의 지표로서 수용체로부터 하류 신호전달 사건의 증가가 또한 측정될 수 있다 (예를 들어, FGFR, FRS2, ERK1/2, p70S6K 등의 인산화).
4.5 제약 조성물 및 치료 방법
개시내용은 또한 개시내용의 1종 이상의 융합 폴리펩티드 및 제약상 허용되는 희석제 또는 담체를 함유하는 제약 조성물에 관한 것이다. 제약 조성물은 제약상 유효 용량의 헤파린을 추가로 포함할 수 있다. 이러한 제약 조성물은 키트 또는 용기 내에 포함될 수 있다. 이러한 키트 또는 용기는 융합 폴리펩티드의 연장된 생체내 반감기 또는 시험관내 보관 수명에 관한 지침서와 함께 패키징될 수 있다. 제약 또는 생물학적 제품의 제조, 사용 또는 판매를 규제하는 정부 기관에 의해 규정된 형태의 통지서가 이러한 키트 또는 용기(들)에 임의로 회합될 수 있고, 이러한 통지서는 인간 투여를 위한 제조, 사용 또는 판매에 대한 기관의 승인을 반영한다. 이러한 조성물은 환자, 바람직하게는 포유동물, 가장 바람직하게는 인간에게 개시내용의 폴리펩티드 또는 융합 폴리펩티드를 포함하는 제약 조성물을 투여함으로써 환자에서 질환 또는 질환 증상 (예를 들어, 연령-관련 병태 또는 대사 장애)을 치료, 예방 또는 호전시키는 방법에 사용될 수 있다.
일반적으로, 개시내용의 제약 조성물의 치료 유효량은 약 0.0001 mg/kg 내지 0.001 mg/kg; 0.001 mg/kg 내지 약 10 mg/kg 체중 또는 약 0.02 mg/kg 내지 약 5 mg/kg 체중이다. 통상적으로, 융합 폴리펩티드의 치료 유효량은 예를 들어 약 0.001 mg 내지 약 0.01 mg, 약 0.01 mg 내지 약 100 mg, 또는 약 100 mg 내지 약 1000 mg이다. 바람직하게는, 융합 폴리펩티드의 치료 유효량은 약 0.001 mg/kg 내지 2 mg/kg이다.
융합 폴리펩티드에 대한 최적 제약 제제는 투여 경로 및 목적하는 투여량에 따라 관련 기술분야의 통상의 기술자가 결정할 수 있다. (예를 들어, 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed. (1990), Mack Publishing Co., Easton, Pa.] 참조, 그의 전체 개시내용이 본원에 참조로 포함됨).
개시내용의 융합 폴리펩티드는 고체, 액체 또는 기체 (에어로졸) 형태일 수 있는 제약 조성물로서 투여될 수 있다. 전형적인 투여 경로는 비제한적으로 경구, 국소, 비경구, 설하, 직장, 질, 피내 및 비강내를 포함할 수 있다. 비경구 투여는 피하 주사, 정맥내, 근육내, 복강내, 흉강내, 흉골내 주사 또는 주입 기술을 포함한다. 바람직하게는, 조성물은 비경구로 투여된다. 보다 바람직하게는, 조성물은 정맥내로 투여된다. 개시내용의 제약 조성물은 대상체에게 조성물의 투여 시에 개시내용의 폴리펩티드가 생체이용가능하도록 제제화될 수 있다. 조성물은 1종 이상의 투여 단위 형태를 취할 수 있고, 여기서 예를 들어, 정제는 단일 투여 단위일 수 있고, 에어로졸 형태의 본 개시내용의 폴리펩티드의 용기는 복수의 투여 단위를 수용할 수 있다.
제약 조성물을 제조하는데 사용되는 물질은 사용된 양에서 비-독성일 수 있다. 제약 조성물 내의 활성 성분(들)의 최적 투여량은 다양한 인자에 따라 달라질 것임이 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 명백할 것이다. 관련 인자는 비제한적으로 대상체의 유형 (예를 들어, 인간), 대상체의 전반적 건강, 치료를 필요로 하는 대상체의 연령-관련 병태 또는 대사 장애의 유형, 다중-약물 요법의 일부로서 조성물의 사용, 개시내용의 폴리펩티드의 특정한 형태, 투여 방식, 및 사용되는 조성물을 포함한다.
제약상 허용되는 담체 또는 비히클은 미립자일 수 있고, 따라서 조성물은 예를 들어 정제 또는 분말 형태이다. 담체(들)는 액체일 수 있고, 조성물은 예를 들어, 경구 시럽 또는 주사액이다. 또한, 담체(들)는 기체상일 수 있고, 따라서 예를 들어 흡입 투여에 유용한 에어로졸 조성물을 제공한다.
용어 "담체"는 개시내용의 폴리펩티드와 함께 투여되는 희석제, 아주반트 또는 부형제를 지칭한다. 이러한 제약 담체는 액체, 예컨대 석유, 동물, 식물 또는 합성 기원의 것을 포함한 물 및 오일, 예컨대 땅콩 오일, 대두 오일, 미네랄 오일, 참깨 오일 등일 수 있다. 담체는 염수, 아카시아 검, 젤라틴, 전분 페이스트, 활석, 케라틴, 콜로이드성 실리카, 우레아 등일 수 있다. 또한, 보조제, 안정화제, 증점제, 윤활제 및 착색제가 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 대상체에게 투여되는 경우, 개시내용의 폴리펩티드 및 제약상 허용되는 담체는 멸균된다. 물은 개시내용의 폴리펩티드를 정맥내로 투여하는 경우의 특정한 담체이다. 특히 주사액을 위해, 염수 용액 및 수성 덱스트로스 및 글리세롤 용액이 또한 액체 담체로 사용될 수 있다. 적합한 제약 담체는 또한 부형제, 예컨대 전분, 글루코스, 락토스, 수크로스, 젤라틴, 맥아, 벼, 밀가루, 백악, 실리카 겔, 스테아르산나트륨, 글리세롤 모노스테아레이트, 활석, 염화나트륨, 건조 탈지유, 글리세롤, 프로필렌, 글리콜, 물, 에탄올 등을 포함한다. 본 조성물은, 목적하는 경우에, 미량의 습윤제 또는 유화제, 또는 pH 완충제를 또한 함유할 수 있다.
조성물은 경구 투여를 위해 의도될 수 있고, 이러한 경우에 조성물은 바람직하게는 고체 또는 액체 형태이고, 여기서 반고체, 반액체, 현탁액 및 겔 형태가 본원에서 고체 또는 액체로서 간주되는 형태 내에 포함된다.
경구 투여를 위한 고체 조성물로서, 조성물은 분말, 과립, 압축 정제, 환제, 캡슐, 츄잉 검, 웨이퍼 등의 형태로 제제화될 수 있다. 이러한 고체 조성물은 전형적으로 1종 이상의 불활성 희석제를 함유한다. 또한, 1종 이상의 하기 물질이 존재할 수 있다: 결합제, 예컨대 에틸 셀룰로스, 카르복시메틸셀룰로스, 미세결정질 셀룰로스, 또는 젤라틴; 부형제, 예컨대 전분, 락토스 또는 덱스트린; 붕해제, 예컨대 알긴산, 알긴산나트륨, 프리모겔, 옥수수 전분 등; 윤활제, 예컨대 스테아르산마그네슘 또는 스테로텍스; 활택제, 예컨대 콜로이드성 이산화규소; 감미제, 예컨대 수크로스 또는 사카린, 향미제, 예컨대 페퍼민트, 메틸 살리실레이트 또는 오렌지 향미제, 및 착색제.
제약 조성물이 캡슐, 예를 들어, 젤라틴 캡슐 형태로 존재하는 경우에, 상기 유형의 물질에 더하여, 액체 담체, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜, 시클로덱스트린 또는 지방 오일을 함유할 수 있다.
제약 조성물은 액체, 예를 들어, 엘릭시르, 시럽, 용액, 에멀젼 또는 현탁액의 형태일 수 있다. 액체는 경구 투여 또는 주사에 의한 전달을 위해 유용할 수 있다. 경구 투여를 위해 의도되는 경우에, 조성물은 감미제, 보존제, 염료/착색제 및 향미 증진제 중 1종 이상을 함유할 수 있다. 주사에 의한 투여를 위한 조성물에서, 계면활성제, 보존제, 습윤제, 분산제, 현탁화제, 완충제, 안정화제 및 등장화제 중 1종 이상이 또한 포함될 수 있다.
개시내용의 액체 조성물은, 이들이 용액, 현탁액 또는 다른 유사한 형태인지 여부에 관계없이 또한 하기 중 1종 이상을 포함할 수 있다: 멸균 희석제, 예컨대 주사용수, 염수 용액, 바람직하게는 생리 염수, 링거액, 등장성 염화나트륨, 고정 오일, 예컨대 합성 모노 또는 디글리세리드 (이는 용매 또는 현탁 매질로서 역할을 할 수 있음), 폴리에틸렌 글리콜, 글리세린, 시클로덱스트린, 프로필렌 글리콜 또는 다른 용매; 항박테리아제, 예컨대 벤질 알콜 또는 메틸 파라벤; 항산화제, 예컨대 아스코르브산 또는 중아황산나트륨; 킬레이트화제, 예컨대 에틸렌디아민테트라아세트산; 완충제, 예컨대 아세테이트, 시트레이트 또는 포스페이트, 및 장성 조정제, 예컨대 염화나트륨 또는 덱스트로스. 비경구 조성물은 유리, 플라스틱 또는 다른 물질로 제조된 앰플, 일회용 시린지 또는 다중-용량 바이알 내에 봉입될 수 있다. 생리 염수는 특정한 특정 아주반트이다. 주사가능한 조성물은 바람직하게는 멸균된다.
제약 조성물은 적합한 투여량이 수득되도록, 유효량의 개시내용의 화합물 (예를 들어, 융합 폴리펩티드)을 함유한다. 제약 조성물은 각각의 장애에 대해 현재 처방되는 것과 같은 공지의 유효량의 화합물을 함유할 수 있다.
연령-관련 병태 또는 대사 장애의 예방, 치료, 및/또는 관리에서 효과적일 예방 및/또는 치료 요법에 사용되는 개시내용의 폴리펩티드의 투여 경로는 관련 기술분야에 공지된 다른 치료제에 대해 현재 처방되는 투여 경로를 기초로 할 수 있다. 개시내용의 폴리펩티드는 임의의 편리한 경로에 의해, 예를 들어 주입 또는 볼루스 주사에 의해, 상피 또는 점막피부 내층 (예를 들어, 구강 점막, 직장 및 장 점막 등)을 통한 흡수에 의해 투여될 수 있다. 투여는 전신 또는 국부일 수 있다. 다양한 전달 시스템, 예를 들어 마이크로입자, 마이크로캡슐, 캡슐 등이 공지되어 있고, 개시내용의 폴리펩티드를 투여하는데 유용할 수 있다. 개시내용의 1종 초과의 폴리펩티드가 대상체에게 투여될 수 있다. 투여 방법은 경구 투여 및 비경구 투여를 포함할 수 있으나 이에 제한되지는 않으며; 비경구 투여는 피내, 근육내, 복강내, 정맥내, 피하, 비강내, 경막외, 설하, 비강내, 뇌내, 뇌실내, 척수강내, 질내, 경피, 직장으로, 흡입에 의한, 또는 귀, 코, 눈 또는 피부로의 국소 투여를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
개시내용의 폴리펩티드는 비경구로 투여될 수 있다. 특히, 개시내용의 폴리펩티드는 정맥내로 투여될 수 있다.
폐 투여는 또한, 예를 들어 흡입기 또는 네뷸라이저, 및 에어로졸화제를 함유하는 제제의 사용에 의해, 또는 플루오로카본 또는 합성 폐 계면활성제 중 관류를 통해 사용될 수 있다. 개시내용의 폴리펩티드는 또한 전통적인 결합제 및 담체, 예컨대 트리글리세리드를 사용하여 좌제로서 제제화될 수 있다.
개시내용의 폴리펩티드는 제어 방출 시스템으로 전달될 수 있다. 예를 들어, 펌프가 사용될 수 있다 (문헌 [Sefton, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 1987, 14, 201; Buchwald et al., Surgery 1980, 88: 507; Saudek et al., N. Engl. J. Med. 1989, 321: 574] 참조). 또한, 중합체 물질이 개시내용의 폴리펩티드의 제어 방출을 위해 사용될 수 있다 (문헌 [Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (eds.), CRC Pres., Boca Raton, FL, 1974; Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance, Smolen and Ball (eds.), Wiley, New York, 1984; Ranger and Peppas, J. Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 1983, 23, 61] 참조; 또한 문헌 [Levy et al., Science 1985, 228, 190; During et al., Ann. Neurol., 1989, 25, 351; Howard et al., J. Neurosurg., 1989, 71, 105] 참조). 구체적으로, 제어 방출 시스템은 개시내용의 폴리펩티드의 표적, 예를 들어 뇌에 근접하게 위치할 수 있어서, 전신 용량의 분획만을 필요로 한다 (예를 들어, 문헌 [Goodson, in Medical Applications of Controlled Release, supra, vol. 2, 1984, pp. 115-138] 참조). 란게르(Langer)에 의한 종설논문 (Science 1990, 249, 1527-1533)에서 논의된 다른 제어 방출 시스템이 사용될 수 있다.
개시내용의 폴리펩티드의 제어 또는 지속 방출을 달성하는데 사용되는 중합체 물질은, 예를 들어 미국 특허 번호 5,679,377; 미국 특허 번호 5,916,597; 미국 특허 번호 5,912,015; 미국 특허 번호 5,989,463; 미국 특허 번호 5,128,326; PCT 공개 번호 WO 99/15154; 및 PCT 공개 번호 WO 99/20253에 개시되어 있다. 지속 방출 제제에 사용되는 중합체의 예는 폴리(2-히드록시 에틸 메타크릴레이트), 폴리(메틸 메타크릴레이트), 폴리(아크릴산), 폴리(에틸렌-코-비닐 아세테이트), 폴리(메타크릴산), 폴리글리콜리드 (PLG), 폴리무수물, 폴리(N-비닐 피롤리돈), 폴리(비닐 알콜), 폴리아크릴아미드, 폴리(에틸렌 글리콜), 폴리락티드 (PLA), 폴리(락티드-코-글리콜리드) (PLGA) 및 폴리오르토에스테르를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 바람직하게는, 지속 방출 제제에 사용되는 중합체는 불활성이고, 침출성 불순물이 존재하지 않고, 저장시 안정하고, 멸균이고, 생분해성이다.
일반적으로, 개시내용의 제약 조성물의 치료 유효량은 약 0.0001 mg/kg 내지 0.001 mg/kg; 0.001 mg/kg 내지 약 10 mg/kg 체중 또는 약 0.02 mg/kg 내지 약 5 mg/kg 체중이다.
다른 실시양태에서, 예방 및/또는 치료 요법은 환자에게 개시내용의 폴리펩티드의 유효량의 하나 이상의 용량을 투여하는 것을 수반하고, 여기서 유효량의 용량은 적어도 0.01 μg/mL 내지 적어도 400 μg/mL의 개시내용의 폴리펩티드의 혈장 수준을 달성한다.
예방 및/또는 치료 요법은 환자에게 개시내용의 폴리펩티드의 유효량의 복수의 용량을 투여하는 것을 수반할 수 있고, 여기서 복수의 용량은 적어도 0.01 μg/mL 내지 400 μg/mL의 개시내용의 폴리펩티드의 혈장 수준을 유지한다. 예방 및/또는 치료 요법은 적어도 1일, 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 7개월, 8개월 또는 9개월 동안 투여될 수 있다.
예방 및/또는 치료 요법은 개시내용의 폴리펩티드를 1종 이상의 추가의 치료제와 조합하여 투여하는 것을 수반할 수 있다. 연령-관련 병태 또는 대사 장애의 예방, 치료, 및/또는 관리를 위해 현재 사용되는 1종 이상의 치료제의 권장 투여량은 그 전문이 본원에 참조로 포함되는 문헌 [Hardman et al., eds., Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis Of Basis Of Therapeutics, 10th ed., McGraw-Hill, New York, 2001; Physician's Desk Reference (60th ed., 2006)]을 포함하나 이에 제한되지는 않는 관련 기술분야의 임의의 참고문헌으로부터 수득될 수 있다.
개시내용은 Klotho 단백질 및 FGF의 효능작용 활성이 바람직한 장애의 치료 방법을 포함한다. 개시내용은 또한 Klotho 단백질 및 FGF의 효능작용 활성이 바람직한 병리학적 장애의 치료를 위한 요법에서의 또는 의약으로서의 개시된 단백질, 융합 단백질, 핵산 분자 또는 제약 조성물의 용도를 포함한다. 개시내용의 이러한 방법 또는 용도의 예는 연령-관련 병태 또는 대사 장애를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
개시내용은 개체에서 연령-관련 병태를 치료 또는 예방하는 방법; 및 개체에서 연령-관련 병태를 치료 또는 예방하기 위한 요법에서의 또는 의약으로서의 개시된 단백질 (폴리펩티드), 융합 단백질, 핵산 분자 또는 제약 조성물의 용도를 포함한다. 치료를 필요로 하는 개체에게 연령-관련 병태가 치료 또는 예방되도록, Klotho 단백질의 적어도 1개의 세포외 서브도메인 및 섬유모세포 성장 인자 및 (임의적인) 변형된 Fc 단편을 갖는 Klotho 융합 폴리펩티드를 함유하는 제약 조성물의 약리학적 유효 용량이 투여된다. 일부 실시양태에서, Klotho 융합 폴리펩티드는 약리학적 유효 용량의 헤파린과 공-투여된다. 연령-관련 병태는 근육감소증, 피부 위축, 근육 소모, 뇌 위축, 아테롬성동맥경화증, 동맥경화증, 폐기종, 골다공증, 골관절염, 면역 부전증, 고혈압, 치매, 헌팅톤병, 알츠하이머병, 백내장, 연령-관련 황반 변성, 전립선암, 졸중, 기대 수명 감소, 기억 상실, 주름, 신장 기능 장애 및 연령-관련 청각 상실을 포함한다. 일부 실시양태에서, Klotho 융합 폴리펩티드는 알파 Klotho 단백질의 적어도 1개의 세포외 도메인을 함유한다. 특정한 실시양태에서, 알파 Klotho 단백질의 적어도 1개의 세포외 도메인 및 섬유모세포 성장 인자 23을 함유하는 Klotho 융합 단백질이 근육 소모에 대한 치료를 필요로 하는 개체에게 투여된다.
개시내용은 또한 개체에서 대사 장애를 치료 또는 예방하는 방법; 및 개체에서 대사 장애를 치료 또는 예방하기 위한 요법에서의 또는 의약으로서의 개시된 단백질 (폴리펩티드), 융합 단백질 (폴리펩티드), 핵산 분자 또는 제약 조성물의 용도에 관한 것이다. 치료를 필요로 하는 개체에게 대사 장애가 치료되도록 Klotho 단백질의 적어도 1개의 세포외 서브도메인 및 섬유모세포 성장 인자를 갖고, FcRn에 대한 감소된 결합 및/또는 증가된 혈청 반감기 및/또는 안정성을 갖는 (임의적인) 변형된 Fc 단편을 갖는 Klotho 융합 폴리펩티드를 함유하는 제약 조성물의 약리학적 유효 용량이 투여된다. 일부 실시양태에서, Klotho 융합 폴리펩티드는 약리학적 유효 용량의 헤파린과 공-투여된다. 방법은 제II형 당뇨병, 대사 증후군, 고혈당증 및 비만의 치료 또는 예방에 사용될 수 있다. 특정한 실시양태에서, 베타-Klotho 단백질의 적어도 1개의 세포외 도메인 및 섬유모세포 성장 인자 21을 함유하는 Klotho 융합 단백질이 대사 장애에 대한 치료를 필요로 하는 개체에게 투여된다.
개시내용은 또한 개체에서 고인산혈증 또는 석회증을 치료 또는 예방하는 방법; 및 개체에서 고인산혈증 또는 석회증을 치료 또는 예방하기 위한 요법에서의 또는 의약으로서의 개시된 단백질, 융합 단백질, 핵산 분자 또는 제약 조성물의 용도를 제공한다. 치료를 필요로 하는 개체에게 고인산혈증 또는 석회증이 치료되도록 Klotho 단백질의 적어도 1개의 세포외 서브도메인, 섬유모세포 성장 인자 및 (임의적인) 변형된 Fc 단편을 갖는 Klotho 융합 폴리펩티드를 함유하는 제약 조성물의 약리학적 유효 용량이 투여된다. 일부 실시양태에서, Klotho 융합 폴리펩티드는 약리학적 유효 용량의 헤파린과 공-투여된다. 특정한 실시양태에서, 알파 Klotho 단백질의 적어도 1개의 세포외 도메인 및 섬유모세포 성장 인자 23 및 (임의적인) 변형된 Fc 단편을 함유하는 Klotho 융합 단백질이 고인산혈증 또는 석회증에 대한 치료를 필요로 하는 개체에게 투여된다.
개시내용은 또한 개체에서 만성 신질환 또는 만성 신부전을 치료 또는 예방하는 방법; 및 개체에서 만성 신질환 또는 만성 신부전을 치료 또는 예방하기 위한 요법에서의 또는 의약으로서의 개시된 단백질, 융합 단백질, 핵산 분자 또는 제약 조성물의 용도에 관한 것이다. 치료를 필요로 하는 개체에게 만성 신질환 또는 만성 신부전이 치료되도록 Klotho 단백질의 적어도 1개의 세포외 서브도메인, 섬유모세포 성장 인자 및 (임의적인) 변형된 Fc 단편을 갖는 Klotho 융합 폴리펩티드를 함유하는 제약 조성물의 약리학적 유효 용량이 투여된다. 일부 실시양태에서, Klotho 융합 폴리펩티드는 약리학적 유효 용량의 헤파린과 공-투여된다. 일부 실시양태에서, 알파 Klotho 단백질의 적어도 1개의 세포외 도메인을 함유하는 Klotho 융합 단백질이 만성 신질환 또는 만성 신부전에 대한 치료를 필요로 하는 개체에게 투여된다.
개시내용은 또한 개체에서 암을 치료 또는 예방하는 방법; 및 개체에서 암을 치료 또는 예방하기 위한 요법에서의 또는 의약으로서의 개시된 단백질, 융합 단백질, 핵산 분자 또는 제약 조성물의 용도를 포함한다. 치료를 필요로 하는 개체에게 암이 치료되도록 Klotho 단백질의 적어도 1개의 세포외 서브도메인, 섬유모세포 성장 인자 및 (임의적인) 변형된 Fc 단편을 갖는 Klotho 융합 폴리펩티드를 함유하는 제약 조성물의 약리학적 유효 용량이 투여된다. 방법은 유방암의 치료 또는 예방에 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, Klotho 융합 폴리펩티드는 약리학적 유효 용량의 헤파린과 공-투여된다. 일부 실시양태에서, 알파 Klotho 단백질의 적어도 1개의 세포외 도메인을 함유하는 Klotho 융합 단백질이 암에 대한 치료를 필요로 하는 개체에게 투여된다.
Klotho 변이체 또는 Klotho 융합 폴리펩티드를 함유하는 제약 조성물을 투여함으로써 장애를 치료하는 방법에서, 또는 요법에서 Klotho 변이체 또는 Klotho 융합 폴리펩티드를 함유하는 제약 조성물을 사용하는 경우에, Klotho 융합 폴리펩티드 및 (임의적인) 변형된 Fc 단편은 Klotho 단백질의 적어도 1개의 세포외 서브도메인 및 섬유모세포 성장 인자를 갖는다. 특정한 실시양태에서, Klotho 융합 단백질은 베타 Klotho 단백질의 적어도 1개의 세포외 도메인 및 섬유모세포 성장 인자 21을 함유한다.
또 다른 실시양태에서, 융합은 FGF (예를 들어, FGF19, FGF21, FGF23 또는 FGF23 변이체), 및 FcRn에 대한 감소된 결합 및/또는 증가된 혈청 안정성을 갖는 변형된 Fc 단편을 포함한다. 융합의 이러한 유형은 상기 기재한 바와 같은 다양한 질환에 사용되거나, 또는 관련 기술분야에 공지된 임의의 FGF-관련 질환을 치료 또는 예방하는데 사용될 수 있다. 융합은 그를 필요로 하는 개체에게 투여될 수 있다.
융합 폴리펩티드 조성물은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지되고 본원에 기재된 임의의 투여 방법에 따라 투여될 수 있다. 특정한 구체적인 투여 방법은 피하 또는 정맥내를 포함한다. 다른 효과적인 투여 방식이 본원에 기재되어 있다.
4.6. 치료 방법 및 효능을 평가하기 위한 검정
본원에 기재된 융합 폴리펩티드를 개체에게 투여하는 것을 제공하는 개시내용의 방법 또는 용도는 연령-관련 장애 또는 대사 장애를 포함한 다양한 장애를 치료하는데 사용될 수 있다. 어떠한 특정한 이론에 제한되지는 않지만, 융합 폴리펩티드는 Klotho 또는 FGF의 조절이상이 존재하는 장애를 치료하는데 사용될 수 있다. 장애의 예는 대사 장애 및 연령-관련 장애를 포함한다. 예를 들어, FGF23 또는 Klotho 녹아웃 마우스 둘 다는 낮은 신체 활동, 성장 지연, 근육 소모, 피부 위축, 아테롬성동맥경화증, 짧은 수명 등을 포함한 다양한 유사한 표현형을 나타낸다 (본원에 참조로 포함되는 문헌 [Razzaque and Lanske, J. of Endrocrinology, 194:1-10 (2007)] 참조).
특히, 개시내용의 융합 폴리펩티드는 근육 소모를 포함한 연령-관련 장애의 치료에 특히 유용하다. 이론에 얽매이지는 않지만, 무기질 (예를 들어, 포스페이트 및 칼슘) 및 비타민 D 항상성을 제어하는 Klotho 및 FGF23의 능력은 이들 단백질이 노화 및 근육 위축을 조정하는 수단일 수 있다.
다른 한편으로는, 개시내용의 융합 폴리펩티드는 대사 장애를 치료하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 베타-Klotho 및 FGF19는 콜레스테롤 7-α-히드록실라제 (CYP7A1)를 조절함으로써 담즙산 항상성을 제어하는 것으로 제시된 바 있다. 담즙 항상성 장애의 비제한적 예는 담즙정체이다. 베타-Klotho 및 FGF21은 지방세포에서 지질분해를 유도하고, 따라서, 지방 저장을 감소시키고 글루코스 흡수를 증가시키는 것으로 제시된 바 있다. 지질분해/지방 축적 장애의 비제한적 예는 비만 및 연관된 대사 및 심혈관 질환이다.
적어도 부분적으로는 FGF23이 소변 내의 포스페이트의 배출을 자극하여, 혈청 내의 포스페이트 수준을 감소시킬 수 있다는 발견에 기초하여, 개시내용의 Klotho-FGF23 융합 폴리펩티드는 개체에서 고인산혈증 또는 석회증을 치료 또는 예방하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 환자에서 Klotho의 결핍을 발생시키는 Klotho의 동형접합 미스센스 돌연변이는 중증 종양 석회증 및 동맥 석회화를 유발할 수 있는 것으로 제시된 바 있다 (Ichikawa et al., J. Clin. Invest. 117:2684-2691 (2007), 이는 본원에 참조로 포함됨). 개체에게 고인산혈증 또는 석회증이 치료 또는 예방되도록 Klotho 단백질의 적어도 1개의 세포외 서브도메인, 섬유모세포 성장 인자 및 (임의적인) 변형된 Fc 단편을 갖는 Klotho 융합 폴리펩티드를 함유하는 제약 조성물의 약리학적 유효 용량이 투여된다. 특히, 알파 Klotho 단백질의 적어도 1개의 세포외 도메인, 섬유모세포 성장 인자 및 (임의적인) 변형된 Fc 단편을 함유하는 Klotho 융합 폴리펩티드가 고인산혈증 또는 석회증을 치료하는데 유용하다.
개시내용의 Klotho 융합 폴리펩티드는 또한 개체에서 만성 신질환 또는 만성 신부전을 치료 또는 예방하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, Klotho 발현은 이환되지 않은 신장에 비해 만성 신부전을 갖는 환자의 신장에서 감소되는 것으로 제시된 바 있다 (Koh et al., Biochem. Biophys. Res. Comm. 280:1015-1020 (2001), 이는 본원에 참조로 포함됨). 개체에게 만성 신질환 또는 만성 신부전이 치료 또는 예방되도록 Klotho 단백질의 적어도 1개의 세포외 서브도메인, 섬유모세포 성장 인자 및 (임의적인) 변형된 Fc 단편을 갖는 Klotho 융합 폴리펩티드를 함유하는 제약 조성물의 약리학적 유효 용량이 투여된다. 특히, 알파 Klotho 단백질의 적어도 1개의 세포외 도메인 또는 그의 변이체를 함유하는 Klotho 폴리펩티드 또는 융합 폴리펩티드는 만성 신질환 또는 만성 신부전을 치료하는데 유용하다.
개시내용의 Klotho 융합 폴리펩티드는 또한 개체에서 암을 치료 또는 예방하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, Klotho 발현은 정상 유방암 조직과 비교 시 유방암 조직에서 감소되는 것으로 제시된 바 있다 (Wolf et al., Oncogene (2008) advance online publication; 이는 본원에 참조로 포함됨). 개체에게 암 또는 유방암이 치료 또는 예방되도록 Klotho 단백질의 적어도 1개의 세포외 서브도메인, 섬유모세포 성장 인자 및 (임의적인) 변형된 Fc 단편을 갖는 Klotho 융합 폴리펩티드를 함유하는 제약 조성물의 약리학적 유효 용량이 투여된다. 특히, 알파 Klotho 단백질의 적어도 1개의 세포외 도메인을 함유하는 Klotho 융합 단백질이 암 또는 유방암을 치료하는데 유용하다.
연령-관련 장애 또는 대사 장애에 대한 개시내용의 Klotho 융합 폴리펩티드의 효능의 평가 및/또는 유효 용량의 결정 방법은 예를 들어 포유동물 (예를 들어, 마우스, 래트, 영장류, 또는 일부 다른 비-인간), 또는 다른 동물 (예를 들어, 크세노푸스(Xenopus), 제브라피쉬, 또는 무척추동물, 예컨대 파리 또는 선충류)을 사용한 유기체 기반 검정을 포함한다. Klotho 융합 폴리펩티드는 유기체에게 1회 또는 요법으로서 (규칙적 또는 불규칙적) 투여될 수 있다. 이어서, 유기체의 파라미터, 예를 들어, 연령-연관 파라미터가 평가된다. 관심 대상의 Klotho 융합 폴리펩티드는 참조물, 예를 들어, 대조군 유기체의 파라미터에 비해 파라미터에서 변화를 발생시킨다. (예를 들어, 독성, 클리어런스 및 약동학과 관련된) 다른 파라미터가 또한 평가될 수 있다.
개시내용의 Klotho 융합 폴리펩티드는 특정한 장애, 예를 들어, 본원에 기재된 장애, 예를 들어 연령-관련 장애, 대사 장애를 갖는 동물을 사용하여 평가될 수 있다. 이들 장애는 또한 생리학에 대한 시험 폴리펩티드의 효과를 관찰할 수 있는 감작화된 시스템을 또한 제공할 수 있다. 예시적인 장애는 탈신경, 불사용 위축; 대사 장애 (예를 들어, 비만 및/또는 당뇨병성 동물, 예컨대 db/db 마우스 및 ob/ob 마우스의 장애); 뇌, 간 허혈; 시스플라틴/탁솔/빈크리스틴 모델; 다양한 조직 (이종이식편) 이식; 트랜스제닉 골 모델; 통증 증후군 (염증성 및 신경병증성 장애 포함); 파라쿼트, 유전자독성, 및 산화성 스트레스 모델; 및 종양 I 모델을 포함한다.
연령-관련 장애를 측정하기 위해, 동물 모델은 칼로리 제한 시 변경된 표현형을 갖는 동물일 수 있다. 예를 들어, F344 래트는 Klotho 융합 폴리펩티드를 평가하는데 유용한 검정 시스템을 제공한다. 칼로리 제한 시, F344 래트는 신병증의 0 내지 10% 발생률을 갖는다. 그러나, 자유롭게 먹이 공급 시, 이들은 신병증의 60 내지 100% 발생률을 갖는다.
개시내용의 Klotho 융합 폴리펩티드를 평가하기 위해, 이를 동물 (예를 들어, F344 래트 또는 다른 적합한 동물)에게 투여하고, 예를 들어 소정의 기간 후에 동물의 파라미터를 평가한다. 동물에게 자유롭게 또는 정상적으로 먹이를 공급할 수 있다 (예를 들어, 칼로리 제한 하에서는 그렇지 않지만, 일부 파라미터는 이러한 조건 하에 평가될 수 있음). 전형적으로, 이러한 동물의 코호트가 검정을 위해 사용된다. 일반적으로, 시험 폴리펩티드가 파라미터에 대해 유사한 동물 대상체의 표현형의 칼로리 제한 방향으로 영향을 미치면 시험 폴리펩티드는 동물에서 수명 조절을 양호하게 변경시키는 것으로 표시될 수 있다. 이러한 시험 폴리펩티드는 유기체에서 칼로리 흡수를 박탈하지 않으면서 칼로리 제한의 수명 조절 효과의 적어도 일부, 예를 들어, 이러한 효과의 하위세트를 유발할 수 있다.
시험될 파라미터는 연령-연관 또는 질환 연관 파라미터, 예를 들어, 동물 모델과 연관된 장애의 증상일 수 있다. 예를 들어, 시험 폴리펩티드는 SH 래트에게 투여될 수 있고, 혈압이 모니터링된다. 바람직하게 제시된 시험 폴리펩티드는 폴리펩티드로 처리되지 않은 유사한 참조 동물에 비해 증상의 호전을 유발할 수 있다. 장애 또는 노화에 관련된 다른 파라미터는 항산화제 수준 (예를 들어, 항산화제 효소 수준 또는 활성), 스트레스 저항성 (예를 들어, 파라쿼트 저항성), 심부 체온, 글루코스 수준, 인슐린 수준, 갑상선-자극 호르몬 수준, 프로락틴 수준, 및 황체형성 호르몬 수준을 포함할 수 있다.
연령-관련 장애의 치료에 대한 개시내용의 폴리펩티드의 유효성을 측정하기 위해, Klotho 발현이 감소된 동물, 예를 들어 돌연변이체 Klotho를 갖는 마우스가 사용될 수 있고; 둘 다 그 전문이 본원에 참조로 포함되는 문헌 [Kuroo, et al. Nature, 390; 45 (1997)] 및 미국 공보 번호 2003/0119910을 참조한다. 예를 들어, 시험 폴리펩티드를 돌연변이체 마우스에게 투여하고, 연령-관련 파라미터를 모니터링한다. 바람직하게 제시된 시험 폴리펩티드는 폴리펩티드로 처리되지 않은 유사한 참조 동물에 비해 증상의 호전을 유발할 수 있다. 대사 장애 또는 노화에 관련된 파라미터는 체중의 측정, 생식 능력의 획득에 대한 검사, 혈당 수준의 측정, 수명의 관찰, 피부의 관찰, 운동 기능, 예를 들어 보행의 관찰 등에 의해 평가될 수 있다. 평가는 또한 흉선 중량의 측정, 흉강의 내부 표면에 형성된 석회화 결절의 크기 관찰 등에 의해 이루어질 수 있다. 추가로, Klotho 유전자 또는 Klotho 단백질에 대한 mRNA의 정량적 결정이 또한 평가를 위해 유용하다.
또 다른 생체내 모델 및 유기체 검정은 동물을 대사 파라미터, 예를 들어, 인슐린 장애, 제II형 당뇨병에 관련된 파라미터에 대해 평가하는 것을 포함한다. 예시적인 대사 파라미터는 글루코스 농도, 인슐린 농도, 및 인슐린 감수성을 포함한다.
또 다른 예시적인 시스템은, 예를 들어 동물 모델에서의 종양을 특색으로 한다. 종양은 자발성이거나 유도될 수 있다. 예를 들어, 종양은 다양한 유전자 구성을 갖는 세포로부터 발생할 수 있고, 예를 들어, 이들은 p53+ 또는 p53-일 수 있다. 자가면역 장애가 있는 유기체, 예를 들어 SLE에 대한 소인이 있는 NZB 마우스를 사용하는 것이 또한 가능하다. 골 질환의 특색을 평가하기 위해, 예를 들어, 골다공증의 경우에, 예를 들어 모델로서 난소절제술을 받은 동물을 사용하는 것이 가능하다. 유사하게, 관절 질환의 경우에, 모델은 아주반트 관절염을 기초로 할 수 있고 (예를 들어, 마우스는 연골 프로테오글리칸, 고 이동성 군 단백질, 스트렙토코쿠스 세포벽 물질, 또는 콜라겐으로 면역화될 수 있음); 신장 질환의 경우에, kd/kd 마우스가 사용될 수 있다. 인지, 특히 학습 및 기억의 동물 모델이 또한 이용가능하다. 당뇨병 및 그의 합병증의 동물 모델, 예를 들어, 스트렙토조토신 모델이 또한 이용가능하다. 예를 들어 졸중 및 허혈을 평가하기 위해 개 모델이 사용될 수 있다.
시험 폴리펩티드가 수명 조절을 변경시킬 수 있는지 평가하는데 있어서, 수많은 연령-연관 파라미터 또는 바이오마커가 모니터링 또는 평가될 수 있다. 예시적인 연령-연관 파라미터는 (i) 세포 또는 유기체의 수명; (ii) 생물학적 연령 의존성 발현 패턴을 갖는 세포 또는 유기체 내의 유전자 전사체 또는 유전자 생성물의 존재 또는 존재비; (iii) 스트레스에 대한 세포 또는 유기체의 저항성; (iv) 세포 또는 유기체의 1종 이상의 대사 파라미터 (예시적인 파라미터는 순환 인슐린 수준, 혈액 글루코스 수준; 지방 함량; 심부 체온 등을 포함함); (v) 유기체 내에 존재하는 세포 또는 세포의 세트의 증식 능력; 및 (vi) 세포 또는 유기체의 물리적 외관 또는 거동을 포함한다.
용어 "평균 수명"은 유기체의 코호트의 사망 연령의 평균을 지칭한다. 일부 경우에, "평균 수명"은 제어된 환경 조건 하에 유전자적으로 동일한 유기체의 코호트를 사용하여 평가된다. 사고로 인한 사망은 제외된다. 제어된 환경 조건 하에 평균 수명을 결정할 수 없는 경우에 (예를 들어, 인간의 경우), 충분히 큰 집단에 대한 신뢰가능한 통계학적 정보 (예를 들어, 보험통계표로부터)를 평균 수명으로서 사용할 수 있다.
2종의 이러한 유기체, 예를 들어, 1종의 참조 유기체 및 Klotho 융합 폴리펩티드로 처리된 1종의 유기체 사이의 분자 차이의 특징화는 유기체의 생리학적 상태의 차이를 밝힐 수 있다. 참조 유기체 및 처리된 유기체는 전형적으로 동일한 생활 연령이다. 본원에 사용된 용어 "생활 연령"은 미리 선택된 사건, 예컨대 수정, 규정된 발생학적 또는 태아 단계, 또는 보다 바람직하게는 출생 이후에 경과된 시간을 지칭한다. 비교 분석을 위해 유기체가 "동일한" 생활 연령인지를 결정하기 위해 다양한 기준이 사용될 수 있다. 전형적으로, 요구되는 정확도는 야생형 유기체의 평균 수명의 함수이다. 예를 들어, 실험실 야생형 계통 N2가 일부 제어된 조건 하에 평균 약 16일까지 사는 선충류 씨. 엘레간스(C. elegans)의 경우에, 동일한 연령의 유기체는 동일한 일수 동안 살 수 있다. 마우스의 경우에, 동일한 연령의 유기체는 동일한 주수 또는 개월수 동안 살 수 있고; 영장류 또는 인간의 경우에, 동일한 년수 (또는 2, 3, 또는 5년 이내) 동안 살 수 있는 등이다. 일반적으로, 동일한 생활 연령의 유기체는 그 종의 야생형 유기체의 평균 수명의 15, 10, 5, 3, 2 또는 1% 이내의 시간 동안 살아 왔을 수 있다. 바람직하게는, 유기체는 성체 유기체이고, 예를 들어, 유기체는 적어도 평균 야생형 유기체가 생식에 적격인 나이로 성숙하는 시간 동안 살아 왔다.
유기체 스크리닝 검정은 유기체가 노화의 명백한 물리적 특색을 나타내기 전에 수행될 수 있다. 예를 들어, 유기체는 동일한 종의 야생형 유기체의 평균 수명의 단지 10, 30, 40, 50, 60, 또는 70%만 살아온 성체일 수 있다. 대사, 면역 적격, 및 염색체 구조에서의 연령-연관 변화가 보고된 바 있다. 임의의 이들 변화를 시험 대상체 (예를 들어, 유기체 기반 검정의 경우), 또는 환자 (예를 들어, 본원에 기재된 치료제를 사용한 치료 전, 그 동안 또는 그 후에)에 대해 평가할 수 있다.
칼로리 제한과 연관된 마커를 또한 스크리닝 검정의 대상 유기체 (또는 치료된 대상체)에서 평가할 수 있다. 이들 마커는 연령-연관되지 않을 수 있지만, Klotho 경로가 조정되는 경우에 변경되는 생리학적 상태를 나타낼 수 있다. 마커는 칼로리 제한된 동물에서 존재비가 변화하는 mRNA 또는 단백질일 수 있다. WO01/12851 및 미국 특허 번호 6,406,853은 마커의 예를 기재한다. 본원에 기재된 동물의 세포로부터 유래하거나 본원에 기재된 동물 모델에 유사한 세포 모델을 세포-기반 검정을 위해 사용할 수 있다.
근육 위축에 대한 시험 폴리펩티드의 효과를 평가하기 위한 모델은 1) 예를 들어, 중간-넓적다리에서 우측 좌골 신경을 절단하는 것에 의한 탈신경으로 인해 발생하는 래트 내측 비복근 근육 질량 손실; 2) 예를 들어, 우측 발목 관절을 90도 굽혀 고정시킴으로써 고정화로 인해 발생하는 래트 내측 비복근 근육 질량 손실; 3) 뒷다리 매달기로 인해 발생하는 래트 내측 비복근 근육 질량 손실 (예를 들어, U.S. 2003-0129686 참조); 4) 악액질성 시토카인, 인터류킨-1 (IL-1)로의 처리로 인해 발생하는 골격근 위축 (R. N. Cooney, S. R. Kimball, T. C. Vary, Shock 7, 1-16 (1997)); 및 5) 글루코코르티코이드, 덱사메타손으로의 처리로 인해 발생하는 골격근 위축 (A. L. Goldberg, J. Biol. Chem. 244, 3223-9 (1969))을 포함한다.
AMD에 대한 예시적인 동물 모델은 삼출성 (습성) 황반 변성을 시뮬레이션하는 레이저-유도된 마우스 모델 (Bora et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U S A., 100:2679-84 (2003)); AMD의 "지도형 위축" 형태와 연관된 특색을 발생시키는 돌연변이된 형태의 카텝신 D를 발현하는 트랜스제닉 마우스 (Rakoczy et al., Am. J. Pathol., 161:1515-24 (2002)); 및 CNV를 발생시키는 망막 색소 상피에서 VEGF를 과다발현하는 트랜스제닉 마우스 (Schwesinger et al., Am. J. Pathol. 158:1161-72 (2001))를 포함한다.
파킨슨병의 예시적인 동물 모델은 도파민성 신경독소 1-메틸-4 페닐 1,2,3,6-테트라히드로피리딘 (MPTP) 처리에 의해 파킨슨병이 생긴 영장류 (예를 들어, 미국 특허 공개 번호 20030055231 및 문헌 [Wichmann et al., Ann. N.Y. Acad. Sci., 991:199-213 (2003)] 참조); 6-히드록시도파민-병변 래트 (예를 들어, 문헌 [Lab. Anim. Sci.,49:363-71 (1999)]); 및 트랜스제닉 무척추동물 모델 (예를 들어, 문헌 [Lakso et al., J. Neurochem. 86:165-72 (2003)] 및 [Link, Mech. Ageing Dev., 122:1639-49 (2001)])을 포함한다.
제II형 당뇨병의 예시적인 분자 모델은 결함있는 Nkx-2.2 또는 Nkx-6.1을 갖는 트랜스제닉 마우스 (미국 특허 번호 6,127,598); 주커 당뇨병성 지방 fa/fa (ZDF) 래트 (미국 특허 번호 6,569,832); 및 자발적으로 비만이 발생하고 후속적으로 빈번하게 현성 제2형 당뇨병으로 진행하는 레서스 원숭이 (Hotta et al., Diabetes, 50:1126-33 (2001)); 및 제2형 당뇨병-유사 인슐린 저항성을 갖는 우성-음성 IGF-I 수용체 (KR-IGF-IR)를 갖는 트랜스제닉 마우스를 포함한다.
신경병증에 대한 예시적인 동물 및 세포 모델은 마우스 (미국 특허 번호 5,420,112) 또는 토끼 (Ogawa et al., Neurotoxicology, 21:501-11 (2000))에서의 빈크리스틴 유도된 감각-운동 신경병증; 자율 신경병증의 연구를 위한 스트렙토조토신 (STZ)-당뇨병성 래트 (Schmidt et al., Am. J. Pathol., 163:21-8 (2003)); 및 진행성 운동 신경병증 (pmn) 마우스 (Martin et al., Genomics, 75:9-16 (2001))를 포함한다.
고인산혈증 또는 종양 석회증의 예시적인 동물 모델은 Klotho 녹아웃 마우스 및 FGF23 녹아웃 마우스를 포함한다 (Yoshida et al., Endocrinology 143:683-689 (2002)).
만성 신질환 또는 만성 신부전의 예시적인 동물 모델은 COL4A3+/-마우스를 포함한다 (Beirowski et al., J. Am. Soc. Nephrol. 17:1986-1994 (2006)).
암의 예시적인 동물 모델은 관련 기술분야에 공지된 바와 같은 누드 마우스 내로의 암 세포 또는 조직의 이식 또는 삽입을 포함한다 (Giovanella et al., Adv. Cancer Res. 44:69-120 (1985)). 예를 들어, 유방암의 동물 모델은 유방암 세포 또는 조직이 이식 또는 삽입된 누드 마우스를 포함한다 (예를 들어, 문헌 [Yue et al., Cancer Res. 54:5092-5095 (1994); Glinsky et al., Cancer Res. 56:5319-5324 (1996); Visonneau Am. J. Path. 152:1299-1311 (1998)]).
조성물은 대상체, 예를 들어, 성인 대상체, 특히 건강한 성인 대상체 또는 연령-관련 질환을 갖는 대상체에게 투여될 수 있다. 후자의 경우에, 방법은 예를 들어, 연령-관련 질환의 증상 또는 다른 질환 마커를 특징화하기 위해 대상체를 평가하고, 그에 의해 신경변성 질환, 예를 들어, 알츠하이머병 또는 연령-관련 질환을 갖거나 이러한 질환에 소인이 있는 것으로서 대상체를 확인하는 것을 포함할 수 있다.
골격근 위축
Klotho 폴리펩티드 또는 융합 폴리펩티드를 개체에게 투여하는 것을 제공하는 개시내용의 방법 또는 용도는 골격근 위축을 치료하는데 사용될 수 있다. 근육 위축은 수많은 신경근육, 대사, 면역 및 신경계 장애 및 질환 뿐만 아니라 기아, 영양 결핍, 대사성 스트레스, 당뇨병, 노화, 근육 이영양증 또는 근병증을 포함한다. 근육 위축은 노화 과정 동안 일어난다. 근육 위축은 또한 근육의 사용 감소 또는 불사용으로 인해 발생한다. 증상은 골격근 조직 질량의 저하를 포함한다. 인간 남성에서, 50세 및 80세 사이에 근육 질량이 1/3만큼 저하한다. 근육 위축의 일부 분자 특색은 유비퀴틴 리가제의 상향조절, 및 근원섬유성 단백질의 손실을 포함한다 (Furuno et al., J. Biol. Chem., 265:8550-8557, 1990). 이들 단백질의 파괴는 예를 들어 액틴, 및 특정 근육에서 미오신의 특정 구성성분인 3-메틸-히스티딘 생성을 측정함으로써 추적될 수 있다 (Goodman, Biochem. J. 241:121-12, 1987 및 Lowell, et al., Metabolism, 35:1121-112, 1986; Stein and Schluter, Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 272: E688-E696, 1997). 크레아틴 키나제 (세포 손상 마커) (Jackson, et al., Neurology, 41:101 104, 1991)의 방출이 또한 지표가 될 수 있다.
비-인슐린-의존성 당뇨병
Klotho 폴리펩티드 또는 융합 폴리펩티드를 개체에게 투여하는 것을 제공하는 개시내용의 방법 또는 용도는 비-인슐린-의존성 당뇨병을 치료하는데 사용될 수 있다. 비-인슐린-의존성 당뇨병은 또한 "성인 발병" 당뇨병 및 제2형 당뇨병으로도 불린다. 제2형 당뇨병은 또한 "비-비만 제2형" 및 "비만 제2형"을 포함한다. 제II형 당뇨병은 (1) 혈액 글루코스 수준을 균형상태로 유지하기 위해 필요량 미만의 인슐린이 생성되도록 하는 인슐린의 감소된 췌장-베타-섬-세포 분비 및/또는 (2) 신체가 인슐린에 대해 정상적으로 반응하는 것에 실패한 "인슐린 저항성"을 특징으로 할 수 있다. (미국 특허 번호 5,266,561 및 미국 특허 번호 6,518,069). 예를 들어, 글루코스-자극된 인슐린 수준은 전형적으로 4.0 nmol/L 초과로 상승하는데 실패한다. (미국 특허 번호 5,266,561). 제II형 당뇨병의 예시적인 증상은 공복시 고혈당증 (미국 특허 번호 5,266,561); 피로; 과도한 갈증; 빈뇨; 흐린 시각; 및 증가된 감염률을 포함한다. 제II형 당뇨병의 분자 지표는 판크레아제에서의 섬 아밀로이드 침착을 포함한다.
신경병증
신경병증은 운동, 감각, 감각운동 또는 자율 신경에 영향을 미치는 전신 질환, 유전성 병태 또는 독성제에 의해 유발되는 중추 및/또는 말초 신경 기능장애를 포함할 수 있다 (예를 들어, 미국 특허 출원 번호 20030013771 참조). 증상은 신경 손상의 원인 및 이환된 특정한 유형의 신경에 따라 달라질 수 있다. 예를 들어, 운동 신경병증의 증상은 신체적 과제를 수행하는데 있어서 또는 근육 약화로 인한 서투름, 경도의 운동 후의 소진, 기립 또는 보행 곤란, 및 신경근육 반사의 감쇠 또는 부재를 포함하고 (미국 특허 출원 번호 20030013771), 자율 신경병증의 증상은 변비, 심장 불규칙성 및 체위성 저혈압성 반사의 감쇠를 포함하고 (미국 특허 출원 번호 20030013771), 감각 신경병증의 증상은 통증 및 무감각; 손, 하지 또는 발의 자통; 및 극도의 접촉 감수성을 포함하고, 망막병증의 증상은 흐린 시각, 돌발 시각 상실, 흑색 반점 및 섬광을 포함한다.
알츠하이머병
Klotho 폴리펩티드 또는 융합 폴리펩티드를 개체에게 투여하는 것을 제공하는 개시내용의 방법 또는 용도는 알츠하이머병 (AD)을 치료하는데 사용될 수 있다. 알츠하이머병은 비가역적인 뉴런 손실을 발생시키는 복잡한 신경변성 질환이다. 이는 단지, 또한 연령-관련 병태인 신경변성 질환의 하나의 예만을 제공한다. 알츠하이머병의 임상 특징은 기억, 판단, 물리적 주변부에 대한 방향감각, 및 언어에서의 진행성 장애를 포함한다. AD의 신경병리학적 특징은 영역-특이적 뉴런 손실, 아밀로이드 플라크, 및 신경원섬유 엉킴을 포함한다. 아밀로이드 플라크는 8-아밀로이드 전구체 단백질 (APP로도 공지됨)의 절단 생성물인 아밀로이드 펩티드 (Ap, 또는 Ap42로도 공지됨)를 함유하는 세포외 플라크이다. 신경원섬유 엉킴은 비정상적으로 과인산화된 미세관-연관 단백질의 필라멘트로 구성된 불용성 세포내 응집체이고, 팽팽한 아밀로이드 플라크 및 신경원섬유 엉킴은 아폽토시스에 의한 뉴런 손실로 이어지는 2차 사건에 기여할 수 있다 (Clark and Karlawish, Ann. Intern. Med. 138(5):400-410 (2003)). 예를 들어, p-아밀로이드는 배양된 뉴런에서 카스파제-2-의존성 아폽토시스를 유도한다 (Troy et al. J Neurosci. 20(4):1386-1392). 생체내 플라크의 침착은 유사한 방식으로 근위 뉴런의 아폽토시스를 촉발할 수 있다.
대상체에서 AD를 평가하기 위해 유전학, 생화학, 생리학, 및 인지 기준을 포함한 다양한 기준이 사용될 수 있다. AD의 증상 및 진단은 의료 진료의에게 공지되어 있다. AD의 일부 예시적인 증상 및 마커를 하기에 제시한다. 이들 지표 및 AD와 연관된 것으로 공지된 다른 지표에 대한 정보가 "AD-관련 파라미터"로서 사용될 수 있다. AD 관련 파라미터는 정성적 또는 정량적 정보를 포함할 수 있다. 정량적 정보의 예는 1개 이상의 치수, 예를 들어, 단백질의 농도 또는 단층촬영 지도의 수치이다. 정성적 정보는 평가, 예를 들어, 의사의 해설 또는 2진 ("예"/"아니오") 등을 포함할 수 있다. AD-관련 파라미터는 대상체가 AD로 진단되지 않거나 AD의 특정한 지표를 갖지 않음을 나타내는 정보, 예를 들어, AD의 전형적이지 않은 인지 시험 결과 또는 AD와 연관되지 않은 유전적 APOE 다형성을 포함한다.
진행성 인지 장애가 AD의 특징이다. 이러한 장애는 기억, 판단, 결정, 물리적 주변부에 대한 방향감각, 및 언어에서의 저하로서 제시될 수 있다 (Nussbaum and Ellis, New Eng J. Med. 348(14):1356 35 1364 (2003)). 다른 형태의 치매를 배제하는 것이 AD 진단을 도울 수 있다. 뉴런 사멸은 AD 환자에서 진행성 뇌 위축으로 이어진다. 영상화 기술 (예를 들어, 자기 공명 영상화, 또는 컴퓨터 보조 단층촬영)이 뇌에서의 AD-연관 병변 및/또는 뇌 위축을 검출하는데 사용될 수 있다.
AD 환자는 질환의 병리상태로부터 기인하는 생화학적 이상을 나타낼 수 있다. 예를 들어, AD 환자에서는 뇌척수액 내의 tan 단백질 수준이 상승한다 (Andreasen, N. et al. Arch Neurol. 58:349-350 (2001)).
아밀로이드 베타 42 (A,B42) 펩티드의 수준은 AD 환자의 CSF에서 감소될 수 있다. Ap42의 수준은 AD 환자의 혈장에서 증가될 수 있다 (Ertekein-Taner, N., et al. Science 290:2303 2304 (2000)). 대상체로부터의 샘플에서 생화학적 이상을 검출하는 기술은 관련 기술분야에 공지된 세포적, 면역학적, 및 다른 생물학적 방법을 포함한다. 일반적인 지침으로서, 예를 들어, 문헌 [Sambrook & Russell, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3r Edition, Cold Spring Harbor Laboratory, N.Y. (2001)], [Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology (Greene Publishing Associates and Wiley Interscience, N.Y. (1989))], [Harrow, E. and Lane, D. (1988) Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY], 및 그의 최신판에 기재된 기술을 참조한다.
예를 들어, 항체, 다른 이뮤노글로불린, 및 다른 특이적 결합 리간드가 AD와 연관된 생체분자, 예를 들어, 단백질 또는 다른 항원을 검출하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 1종 이상의 특이적 항체가 샘플을 프로빙하는데 사용될 수 있다. 다양한 포맷, 예를 들어, ELISA, 형광-기반 검정, 웨스턴 블롯, 및 단백질 어레이가 가능하다. 폴리펩티드 어레이의 생성 방법은 관련 기술분야, 예를 들어, 문헌 [De Wildt et al. (2000). Nature Biotech. 18, 989-994; Lucking et al. (1999). Anal. Biochem. 270, 103-111; Ge, H. (2000). Nucleic Acids Res. 28, e3, I-VII; MacBeath, G., and Schreiber, S.L. (2000). Science 289, 1760 to 1 763]; 및 WO 99/5 1 773A1에 기재되어 있다.
한 검정에서, 예를 들어, 폴리펩티드 또는 치료 요법을 평가하기 위해 AD의 비-인간 동물 모델 (예를 들어, 마우스 모델)이 사용된다. 예를 들어, 미국 특허 번호 6,509,515는 학습 및 기억 시험에 자연적으로 사용될 수 있는 하나의 이러한 모델 동물을 기재한다. 동물은 뇌 조직 내의 수준에서 아밀로이드 전구체 단백질 (APP) 서열을 발현하고, 이로써 동물은 출생으로부터 단기간 내에, 일반적으로 출생으로부터 1년 내에, 바람직하게는 출생으로부터 2 내지 6개월 내에 진행성 신경계 장애가 발생한다. APP 단백질 서열은 동물 또는 동물의 조상에 배아 단계, 바람직하게는 1개의 세포, 또는 수정된 난모세포, 단계, 및 일반적으로 약 8-세포 단계를 넘기 전에 도입된다. 이어서, 접합체 또는 배아는 수양 암컷으로서 가-임신 기간까지 발생된다. 아밀로이드 전구체 단백질 유전자는 AD와 같은 진행성 신경계 질환 상태로 현저하게 이환되는 뇌의 구역인 뇌의 피질-변연 구역에서 아밀로이드 전구체 단백질의 초 내인성 발현 및 진행성 신경계 질환의 발생을 발생시키는 상태로 염색체 혼입되도록 동물 배아 내로 도입된다. 이환된 트랜스제닉 동물에서의 신경교증 및 임상 징후는 신경계 질환을 모델링한다. 신경계 질환의 진행성 측면은 감소된 탐색 및/또는 운동 거동 및 감소된 데옥시글루코스 흡수/이용 및 뇌의 피질-변연 영역에서의 비대성 신경교증을 특징으로 한다. 추가로, 관찰되는 변화는 일부 노화 동물에서 관찰되는 것과 유사하다. 다른 동물 모델이 또한 US 5,387,742; 5,877,399; 6,358,752; 및 6,187,992에 기재되어 있다.
파킨슨병
Klotho 폴리펩티드 또는 융합 폴리펩티드를 개체에게 투여하는 것을 제공하는 개시내용의 방법 또는 용도는 파킨슨병을 치료하는데 사용될 수 있다. 파킨슨병은 운동 기능을 조절하는 흑질선조체 도파민 시스템의 변성을 발생시키는, 흑색질에서의 도파민성 뉴런의 신경변성을 포함한다. 이러한 병리상태는, 이어서, 운동 기능장애로 이어진다 (예를 들어, 문헌 [Lotharius et al., Nat. Rev. Neurosci., 3:932-42 (2002)] 참조). 예시적인 운동 증상은 무운동증, 구부정한 자세, 보행 곤란, 자세 불안정성, 강경증, 근육 강성 및 진전을 포함한다. 예시적인 비-운동 증상은 우울증, 동기의 결여, 수동성, 치매 및 위장 기능장애를 포함한다 (예를 들어, 문헌 [Fahn, Ann. N.Y. Acad. Sci., 991:1-14 (2003) 및 Pfeiffer, Lancet Neurol., 2:107-16 (2003)] 참조). 파킨슨병은 65 내지 69세의 사람 중 0.5 내지 1 퍼센트에서, 및 80세 이상의 사람 중 1 내지 3 퍼센트에서 관찰된 바 있다 (예를 들어, 문헌 [Nussbaum et al., N. Engl. J. Med., 348:1356-64 (2003)] 참조). 파킨슨병의 분자 마커는 방향족 L 아미노산 데카르복실라제 (AADC)의 감소 (예를 들어, US App.. No. 20020172664 참조); 및 흑질선조체 뉴런에서 도파민 함량의 손실 (예를 들어, 문헌 [Fahn, Ann. N.Y. Acad. Sci., 991:1-14 (2003) 및 Lotharius et al., Nat. Rev. Neurosci., 3:932-42 (2002)] 참조)을 포함한다. 일부 가족성 사례에서, PD는 알파-시뉴클레인 및 파르킨 (E3 유비퀴틴 리가제) 단백질을 코딩하는 단일 유전자에서의 돌연변이와 관련된다 (예를 들어, 문헌 [Riess et al., J. Neurol. 250 Suppl 1:I3 10 (2003) 및 Nussbaum et al., N. Engl. J. Med., 348:1356-64 (2003)]). 뉴런-특이적 C-말단 유비퀴틴 히드롤라제 유전자에서의 미스센스 돌연변이가 또한 파킨슨병과 연관된다 (예를 들어, 문헌 [Nussbaum et al., N. Engl. J. Med., 348:1356-64 (2003)]).
헌팅톤병
Klotho 폴리펩티드 또는 융합 폴리펩티드를 개체에게 투여하는 것을 제공하는 개시내용의 방법 또는 용도는 헌팅톤병을 치료하는데 사용될 수 있다. 헌팅톤병에 대한 Klotho 융합 폴리펩티드의 효능을 평가하고/거나 그의 유효 용량을 결정하는 방법은 예를 들어 포유동물 (예를 들어, 마우스, 래트, 영장류, 또는 일부 다른 비-인간), 또는 다른 동물 (예를 들어, 크세노푸스, 제브라피쉬, 또는 무척추동물, 예컨대 파리 또는 선충류)을 사용한 유기체 기반 검정을 포함한다. 헌팅톤병에 대한 수많은 동물 모델 시스템이 이용가능하다. 예를 들어, 문헌 [Brouillet, Functional Neurology 15(4): 239-251 (2000); Ona et al. Nature 399: 263-267 (1999), Bates et al. Hum Mol Genet. 6(10):1633-7 (1997); Hansson et al. J. of Neurochemistry 78: 694-703; 및 Rubinsztein, D. C., Trends in Genetics, Vol. 1S, No. 4, pp. 202-209] (HD의 다양한 동물 및 비-인간 모델에 대한 검토)을 참조한다.
이러한 동물 모델의 예는 트랜스제닉 마우스 계통 R6/2 라인이다 (Mangiarini et al. Cell 87: 493-506 (1996)). R6/2 마우스는 (내인성 프로모터의 제어 하에) 인간 HD 유전자의 엑손 1을 과다발현하는 트랜스제닉 헌팅톤병 마우스이다. R6/2 인간 HD 유전자의 엑손 1은 연장된 CAG/폴리글루타민 반복부 길이 (평균 150개의 CAG 반복부)를 갖는다. 이들 마우스는 인간 헌팅톤병의 많은 특색을 갖는 진행성의, 궁극적으로 치명적인 신경계 질환이 발생한다. 부분적으로 헌팅틴 (HD 엑손 1에 의해 코딩됨)의 N 말단 부분에 의해 구성되는 비정상적 응집체가 R6/2 마우스에서 세포의 세포질 및 핵 둘 다에서 (45) 관찰된다 (Davies et al. Cell 90: 537-548 (1997)). 예를 들어, 트랜스제닉 동물 내의 인간 헌팅틴 단백질은 적어도 55개의 CAG 반복부, 보다 바람직하게는 약 150개의 CAG 반복부를 포함하는 유전자에 의해 코딩된다. 이들 트랜스제닉 동물은 헌팅톤병-유사 표현형이 발생할 수 있다.
이들 트랜스제닉 마우스는 출생 후 8주에서 10주까지 감소된 체중 증가, 감소된 수명, 및 비정상적 보행, 안정시 진전, 뒷다리 고정 및 과다활동을 특징으로 하는 운동 장애를 특징으로 한다 (예를 들어 R6/2 계통; 문헌 [Mangiarini et al. Cell 87: 493-506 (1996)] 참조). 표현형은 과소운동증으로 점진적으로 악화된다. 이들 트랜스제닉 마우스의 뇌는 또한 신경화학적 및 조직학적 이상, 예컨대 신경전달물질 수용체 (글루타메이트, 도파민성)에서 변화, N-아세틸아스파르테이트 (뉴런 완전성의 마커)의 농도 감소, 및 선조체 및 뇌 크기 감소를 입증한다. 따라서, 평가는 신경전달물질 수준, 신경전달물질 수용체 수준, 뇌 크기 및 선조체 크기에 관련된 파라미터를 평가하는 것을 포함할 수 있다. 또한, 전장 인간 헌팅틴 단백질 또는 그의 트랜스제닉 부분을 함유하는 비정상적 응집체가 이들 동물 (예를 들어, R6/2 트랜스제닉 마우스 계통)의 뇌 조직 내에 존재한다. 예를 들어, 문헌 [Mangiarini et al. Cell 87: 493-506 (1996), Davies et al. Cell 90: 537-548 (1997), Brouillet, Functional Neurology 15(4): 239-251 (2000) 및 Cha et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95: 6480-6485 (1998)]을 참조한다.
동물 모델에서 본 출원에 기재된 시험 폴리펩티드 또는 공지된 폴리펩티드의 효과를 시험하기 위해, 예를 들어, 시험 폴리펩티드를 동물의 순환 내로 주사함으로써 상이한 농도의 시험 폴리펩티드를 트랜스제닉 동물에게 투여한다. 헌팅톤병-유사 증상을 동물에서 평가할 수 있다. 이어서, 예를 들어, 마우스 모델에 대해 상기 기재된 바와 같이 헌팅톤병-유사 증상의 진행을 모니터링하여 시험 폴리펩티드에 의한 처리가 증상의 감소 또는 지연을 발생시키는지 결정한다. 또 다른 검정에서, 이들 동물에서 헌팅틴 단백질 응집체의 분해를 모니터링한다. 이어서, 동물을 희생시킬 수 있고, 뇌 슬라이스를 수득한다. 이어서, 뇌 슬라이스를 트랜스제닉 인간 헌팅틴 단백질, 그의 부분, 또는 인간 헌팅틴 단백질 또는 그의 부분을 포함하는 융합 단백질을 함유하는 응집체의 존재에 대해 분석한다. 이러한 분석은 예를 들어 뇌 조직의 슬라이스를 항-헌팅톤 항체로 염색하고, 항-헌팅톤 항체를 인식하는 FITC와 접합된 2차 항체를 첨가하고 (예를 들어, 항-헌팅틴 항체는 마우스 항-인간 항체이고, 2차 항체는 인간 항체에 특이적임), 단백질 응집체를 형광 현미경검사에 의해 가시화하는 것을 포함할 수 있다.
헌팅톤병을 평가 및/또는 모니터링하기 위해 다양한 방법이 이용가능하다. 질환에 대한 다양한 임상 증상 및 지표가 공지되어 있다. 헌팅톤병은 운동 장애, 정신 곤란 및 인지 변화를 유발한다. 이들 증상의 정도, 발병 연령, 및 징후는 달라질 수 있다. 운동 장애는 무도병으로 불리는 빠르고 무작위의 춤-유사 운동을 포함할 수 있다.
예시적인 운동 평가는 안구 추적, 홱보기 개시, 홱보기 속도, 구음장애, 혀 내밀기, 손가락 두드림 능력, 내전/외전, 주먹-손-손바닥 순서, 팔의 강성, 운동완만, 최대 이상긴장증 (몸통, 상부 및 하지), 최대 무도병 (예를 들어, 몸통, 얼굴, 상부 및 하지), 보행, 탠덤 보행, 및 후방돌진을 포함한다. 예시적인 처리는 예를 들어, 1-년 기간에 걸쳐 UHDRS의 하위스케일인 총 운동 스코어 4 (TMS-4)에서 변화를 유발할 수 있다.
암
Klotho 폴리펩티드 또는 융합 폴리펩티드를 개체에게 투여하는 것을 제공하는 개시내용의 방법 또는 용도는 암을 치료하는데 사용될 수 있다. 암은 부적절하게 높은 수준의 세포 분열, 부적절하게 낮은 수준의 아폽토시스, 또는 둘 다에 의해 유발되거나 그를 발생시키는 임의의 질환을 포함한다. 암의 예는 비제한적으로 백혈병 (예를 들어, 급성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 급성 골수구성 백혈병, 급성 골수모구성 백혈병, 급성 전골수구성 백혈병, 급성 골수단핵구성 백혈병, 급성 단핵구성 백혈병, 급성 적백혈병, 만성 백혈병, 만성 골수구성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병), 진성 다혈구혈증, 림프종 (호지킨병, 비-호지킨병), 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 중쇄 질환, 및 고형 종양 예컨대 육종 및 암종 (예를 들어, 섬유육종, 점액육종, 지방육종, 연골육종, 골원성 육종, 척삭종, 혈관육종, 내피육종, 림프관육종, 림프관내피육종, 활막종, 중피종, 유잉 종양, 평활근육종, 횡문근육종, 결장 암종, 췌장암, 유방암, 난소암, 전립선암, 편평 세포 암종, 기저 세포 암종, 선암종, 한선 암종, 피지선 암종, 유두상 암종, 유두상 선암종, 낭선암종, 수질성 암종, 기관지원성 암종, 신세포 암종, 간세포암, 담관 암종, 융모막암종, 정상피종, 배아성 암종, 윌름 종양, 자궁경부암, 자궁암, 고환암, 폐 암종, 소세포 폐 암종, 방광 암종, 상피 암종, 신경교종, 성상세포종, 수모세포종, 두개인두종, 상의세포종, 송과체종, 혈관모세포종, 청신경종, 핍지교종, 슈반세포종, 수막종, 흑색종, 신경모세포종 및 망막모세포종)을 포함한다. 림프증식성 장애는 또한 증식성 질환인 것으로 간주된다.
실시양태
한 실시양태에서, 개시내용은 N-말단에서 C-말단으로의 순서로, (a) 약 20개의 아미노산이 C-말단으로부터 결실되고, 임의로 또한 V563 및/또는 K795에서 돌연변이를 갖는 알파 sKlotho; (b) 링커; 및 (c) 임의로 R179, C206 및/또는 C244에서 돌연변이를 갖는 FGF23을 포함하는 융합 폴리펩티드를 포함하는 조성물에 관한 것이다.
한 실시양태에서, (a) 약 20개의 아미노산이 C-말단으로부터 결실된 알파 sKlotho는 V563에서 돌연변이를 갖는다.
한 실시양태에서, (a) 약 20개의 아미노산이 C-말단으로부터 결실된 알파 sKlotho는 K795에서 돌연변이를 갖는다.
한 실시양태에서, (a) 약 20개의 아미노산이 C-말단으로부터 결실된 알파 sKlotho는 V563 및 K795에서 돌연변이를 갖는다.
한 실시양태에서, (a) 약 20개의 아미노산이 C-말단으로부터 결실된 알파 sKlotho는 서열식별번호: 77의 서열을 갖는다.
한 실시양태에서, (a) 약 20개의 아미노산이 C-말단으로부터 결실된 알파 sKlotho는 서열식별번호: 78의 서열을 갖는다.
한 실시양태에서, (c) FGF23은 R179에서 돌연변이를 갖는다.
한 실시양태에서, (c) FGF23은 C206에서 돌연변이를 갖는다.
한 실시양태에서, (c) FGF23은 C244에서 돌연변이를 갖는다.
한 실시양태에서, (c) FGF23은 R179에서의 돌연변이 및 C206 또는 C244에서의 돌연변이를 갖는다.
한 실시양태에서, (c) FGF23은 R179, C206, 및 C244에서 돌연변이를 갖는다.
한 실시양태에서, (c) FGF23은 YPNASPLLGSSWGGLIHLYTATARNSYHLQIHKNGHVDGAPHQTIYSALMIRSEDAGFVVITGVMSRRYLCMDFRGNIFGSHYFDPENCRFQHQTLENGYDVYHSPQYHFLVSLGRAKRAFLPGMNPPPYSQFLSRRNEIPLIHFNTPIPRRHTQSAEDDSERDPLNVLKPRARMTPAPASCSQELPSAEDNSPMASDPLGVVRGGRVNTHAGGTGPEGCRPFAKFI의 서열 (서열식별번호: 80의 부분)을 갖는다.
한 실시양태에서, (a) 약 20개의 아미노산이 C-말단으로부터 결실된 알파 sKlotho는 서열식별번호: 77 또는 78의 서열을 갖는다.
한 실시양태에서, (a) 약 20개의 아미노산이 C-말단으로부터 결실된 알파 sKlotho는 서열식별번호: 77의 서열을 갖는다.
한 실시양태에서, (a) 약 20개의 아미노산이 C-말단으로부터 결실된 알파 sKlotho는 서열식별번호: 78의 서열을 갖는다.
한 실시양태에서, 링커는 폴리펩티드 링커이다.
한 실시양태에서, 폴리펩티드 링커는 서열식별번호: 11, 서열식별번호: 12, 서열식별번호: 13, 서열식별번호: 14, 서열식별번호: 15, 서열식별번호: 16, 서열식별번호: 17, 및 서열식별번호: 18로 이루어진 군으로부터 선택된 링커의 1개 이상의 카피를 포함하는 아미노산 서열을 포함한다.
한 실시양태에서, 융합 폴리펩티드는 신호 펩티드를 추가로 포함한다.
한 실시양태에서, 융합 폴리펩티드는 서열식별번호: 80 또는 서열식별번호: 82의 아미노산 서열을 포함한다.
한 실시양태에서, 조성물은 제약상 허용되는 담체를 추가로 포함한다.
한 실시양태에서, 개시내용은 본원에 기재된 임의의 실시양태의 융합 폴리펩티드를 코딩하는 서열을 포함하는 핵산에 관한 것이다.
한 실시양태에서, 숙주 세포는 본원에 기재된 임의의 실시양태의 핵산을 포함한다.
한 실시양태에서, 벡터는 본원에 기재된 임의의 실시양태의 핵산을 포함한다.
한 실시양태에서, 개시내용은 FGF23-관련 질환의 치료 또는 예방을 필요로 하는 개체에게, N-말단에서 C-말단으로의 순서로, (a) 약 20개의 아미노산이 C-말단으로부터 결실되고, 임의로 또한 V563 및/또는 K795에서 돌연변이를 갖는 알파 sKlotho; (b) 링커; 및 (c) 임의로 R179, C206 및/또는 C244에서 돌연변이를 갖는 FGF23을 포함하는 융합 폴리펩티드를 포함하는 조성물의 치료 유효 용량을 투여하는 단계를 포함하는, FGF23-관련 질환을 치료 또는 예방하는 방법에 관한 것이다.
한 실시양태에서, 개시내용은 FGF23-관련 질환의 치료 또는 예방을 필요로 하는 개체에게 본원에 기재된 임의의 실시양태의 조성물의 치료 유효 용량을 투여하는 단계를 포함하는, FGF23-관련 질환을 치료 또는 예방하는 방법에 관한 것이다.
한 실시양태에서, FGF23-관련 질환은 연령-관련 병태, 대사 장애, 고인산혈증, 석회증, 만성 신질환, 만성 신부전, 암, 유방암, 및 근육 위축으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
한 실시양태에서, 연령-관련 병태는 근육감소증, 피부 위축, 근육 소모, 뇌 위축, 아테롬성동맥경화증, 동맥경화증, 폐기종, 골다공증, 골관절염, 면역 부전증, 고혈압, 치매, 헌팅턴병, 알츠하이머병, 백내장, 연령-관련 황반 변성, 전립선암, 졸중, 기대 수명 감소, 기억 상실, 주름, 신장 기능 장애, 및 연령-관련 청각 상실로 이루어진 군으로부터 선택된다.
한 실시양태에서, 대사 장애는 제II형 당뇨병, 대사 증후군, 고혈당증, 및 비만으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본원에 인용된 모든 특허, 특허 출원, 및 공개된 참고문헌은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 본 개시내용은 특히 그의 실시양태를 참조하여 제시되고 기재되었지만, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 첨부된 청구범위에 포괄된 개시내용의 범주를 벗어나지 않으면서 형태 및 세부사항에 다양한 변화가 이루어질 수 있다는 것을 이해할 것이다.
5. 실시예
실시예 1. Klotho 융합 폴리펩티드의 발현 및 정제
Klotho 융합 폴리펩티드의 발현
개시내용의 폴리펩티드를 알파 Klotho의 세포외 도메인 및 FGF23 (R179Q) 변이체를 갖는 Klotho 융합 폴리펩티드를 코딩하는 발현 벡터로 HEK293T 세포를 일시적으로 형질감염시켜 제조하였다. 발현된 폴리펩티드를 함유하는 조건화 배지를 Klotho, FGF23, 및 Klotho-FGF23(R179Q) 융합 단백질에 대한 각각의 발현 플라스미드의 일시적인 형질감염에 의해 생성하였다. 형질감염을 리포펙타민 2000 (인비트로젠(Invitrogen), Cat # 11668-019)을 사용하여 6-웰 플레이트에서 수행하였다. 형질감염 5시간 후에, 형질감염 믹스를 3 ml DMEM 플러스 1% FBS로 대체하였다. 3 ml DMEM 플러스 1% FBS 첨가 72시간 후에, 조건화 배지를 수집하였다. 다양한 일시적으로 형질감염된 HEK293T 세포로부터의 조건화 배지의 샘플을 SDS-폴리아크릴아미드 겔 전기영동 (SDS-PAGE)에 의해 분리하고, 웨스턴 블롯 (도 3a)으로 분석하거나 또는 쿠마시 블루 (도 3b)로 염색하였다.
SDS-폴리아크릴아미드 겔 전기영동을 다양한 샘플에 대해 수행하였다 (레인 1, 대조군; 레인 2, FGF23; 레인 3, sKlotho; 레인 4-6, sKlotho-FGF23). 쿠마시 블루 염색은, Klotho 융합 폴리펩티드를 코딩하는 벡터로 형질감염되지 않은 샘플을 함유하는 레인 1-3에는 존재하지 않는, 높은, > 180 kDa 밴드 (도 3b, 우측에 화살표로 표시됨)의 발현을 밝혀내었다. 배지 내로 분비된 Klotho 융합 폴리펩티드의 품질을 웨스턴 블롯으로 평가하였다 (도 3a). 항-FGF23 래트 모노클로날 IgG2A (알앤디 시스템즈(R&D Systems), Cat# MAB26291)를 웨스턴 블롯에 의해 Klotho 융합 폴리펩티드를 검출하기 위한 1차 항체로서 사용하였다. 웨스턴 블롯은 쿠마시 염색된 겔에서 관찰된 추가의 밴드가 Klotho 융합 폴리펩티드임을 확인시켜주었다. 웨스턴 블롯은 Klotho 융합 폴리펩티드가 Klotho 융합 폴리펩티드에 대해 예상되는 분자량을 갖는다는 것을 확인시켜주었다. 이러한 분석은 Klotho-FGF23(R179Q) 융합 단백질의 발현을 제시한다.
Klotho 융합 폴리펩티드의 정제
개시내용의 폴리펩티드를 알파 Klotho의 세포외 도메인 및 FGF23 R179Q 변이체를 갖는 Klotho 융합 폴리펩티드를 코딩하는 발현 벡터로 일시적으로 형질감염시킨 HEK293T 세포 배양물로부터의 조건화 배지로부터 정제하였다. 조건화 배지를 생성하기 위해, sKlotho-FGF23-6xHis를 코딩하는 발현 벡터로 형질감염시켰다 (18 ml 2 μg/ml 폴리에틸렌이민 (PEI)과 혼합된 18 ml OptiMEM 1 (깁코(GIBCO), Cat #11058) 중의 500 μg DNA를 발현 배지 중의 현탁액에서 성장시킨 HEK293 세포 (프리스타입 293 발현 배지 (깁코, Cat #12338) 중 106개 세포/ml의 464 ml HEK293T 세포) 내로). 형질감염 후에, 배양이 성장되도록 하였다 (120시간; 5% CO2 인큐베이터에서 37℃; 125 rpm에서 진탕). 인큐베이션 종료 시, 조건화 배지를 원심분리 (5분 동안 1000 rpm)에 의해 수확하였다. 이어서, 조건화 배지를 니켈-아가로스 칼럼에 적용하였다. sKlotho-FGF23-6xHis는 칼럼에 치밀하게 결합하였고, 50 mM 이미다졸로 용리시켰다. 이어서, 생성된 정제된 물질을 PBS에서 투석하여 이미다졸을 제거하였다. 정제된 sKlotho-FGF23-6xHis의 샘플을 SDS-PAGE에 의해 분리하고 (레인 1, 정제된 sKlotho-FGF23-6xHis; 레인 2, 분자량 마커), 쿠마시 블루로 염색하여 분석하였다 (도 3c). 염색된 SDS-PAGE 겔은 정제된 sKlotho-FGF23-6xHis가 예상된 분자량을 갖는다는 것이 확인시켜주었다. 정제된 물질이 로딩된 레인에서 전장 sKlotho-FGF23-6xHis 이외의 단백질에 상응하는 밴드를 검출할 수 없다는 것은 또한 sKlotho-FGF23-6xHis가 정제되었음을 제시하였다.
실시예 2. Klotho 융합 폴리펩티드의 활성을 평가하는 시험관내 검정.
Egr-1-루시페라제
발현된 알파 Klotho 융합 폴리펩티드의 생물학적 활성을 Egr-1-루시페라제 리포터 검정에서 시험하였다. FGF23 수용체에 대한 Klotho 융합 폴리펩티드의 결합은 Egr-1의 하류 활성화 및 Egr-1 프로모터에 의해 조절되는 루시페라제 리포터의 발현을 발생시켰다. Egr-1-루시페라제 리포터 유전자는 문헌 [Urakawa et al. (Nature, 2006, Vol 444, 770-774)]에 보고된 것에 기초하여 구축하였다. 48-웰 폴리-D-리신 플레이트에 시딩한 HEK293T 세포를 형질감염 정규화 리포터 유전자 (레닐라 루시페라제)와 함께 Egr-1-루시페라제 리포터 유전자로 형질감염시켰다. Egr-1 루시페라제 리포터 유전자의 형질감염 5시간 후에, 형질감염 믹스를 3 ml DMEM 플러스 1% FBS로 대체하였다. 3 ml DMEM 플러스 1% FBS 첨가 72시간 후에, 조건화 배지를 수집하였다. 5시간 후에, 형질감염 믹스를 활성에 대해 시험할 샘플로 대체하였다. 초기 실험에서, 50% 조건화 배지 (단독 또는 Klotho, FGF23, Klotho 및 FGF23, 및 Klotho-FGF23(R179Q) 융합 단백질 함유) 및 20 μg/ml 헤파린의 존재 또는 부재 하의 1% FBS 함유 50% DMEM (시그마(Sigma), Cat#H8537; 2 mg/ml 원액으로서 DMEM에 용해됨)을 Egr-1-루시페라제 리포터 검정에서 시험하였다 (도 4). 추가의 실험은 규정된 양의 정제된 폴리펩티드를 사용하였다 (도 5a 및 5b). 세포를 20시간 후에 수동 용해 완충제 (프로메가(Promega), Cat #E194A) 중에서 용해시키고, 듀얼-글로(Dual-Glo) 루시페라제 검정 시스템 (프로메가, Cat #E2940)을 사용하여 루시페라제 활성을 결정하였다.
초기 실험에서, Klotho 융합 폴리펩티드 활성을 미분획 조건화 배지에서 입증하였다. Egr-1-루시페라제 리포터 유전자를 사용하여 (도 4), 이들 실험은 루시페라제 리포터 발현에서의 배수 변화를 정량화하였다. FGF23 및 Klotho 단백질의 세포외 도메인의 조합을 함유하는 조건화 배지는 Egr-1-루시페라제를 활성화시켰지만, FGF23만을 함유하는 조건화 배지 또는 Klotho의 세포외 도메인만을 함유하는 조건화 배지는 Egr-1-루시페라제를 활성화시키지 않았다. FGF23 또는 Klotho만을 함유하는 조건화 배지와 대조적으로, 융합 단백질 sKlotho-FGF23(R179Q)을 함유하는 조건화 배지는 Egr-1-루시페라제 리포터 유전자를 활성화시켰다. 이들 실험에서, 융합 단백질 sKlotho-FGF23(R179Q)을 함유하는 조건화 배지는 FGF23 및 Klotho의 조합을 함유하는 조건화 배지보다 유의하게 우수하게 Egr-1-루시페라제 리포터 유전자를 활성화시켰다. 헤파린의 존재 하에, 융합 단백질 sKlotho-FGF23(R179Q)을 함유하는 조건화 배지 및 FGF23 및 Klotho의 조합을 함유하는 조건화 배지에 의한 유도가 유의하게 증진되었다. 표 1은 Egr-1-루시페라제 리포터 검정에서 조건화 배지 중에서의 다양한 FGF-Klotho 융합 폴리펩티드의 상대 발현 및 다양한 FGF-Klotho 융합 폴리펩티드에 상응하는 미분획 조건화 배지의 상대 활성을 열거한다.
표 1. sKlotho-FGF23 융합 변이체의 발현 및 활성
Figure pct00001
* 활성의 결여는 낮은 발현의 결과일 수 있음
또한 실시예 1에 기재된 정제 절차를 사용하여, Egr-1-루시페라제 리포터 검정을 조건화 배지로부터 정제된 규정된 양의 단백질을 사용하여 수행하였다. 발현된 폴리펩티드를 함유하는 미분획 조건화 배지를 사용한 이전의 결과와 일치하게, 정제된 FGF23 및 sKlotho의 조합에 의한 처리는 루시페라제 리포터 활성을 발생시켰지만, 정제된 FGF23 단독에 의한 처리는 그렇지 않았다 (도 5a). 정제된 FGF23 및 sKlotho의 조합으로부터의 루시페라제 리포터 활성은 추가로 정제된 sKlotho의 용량에 의존하였고, 효과는 헤파린 (20 μg/ml)의 존재에 의해 증진될 수 있었다. 루시페라제 활성에 대한 sKlotho-FGF23-6xHis 융합 폴리펩티드의 효과는 Egr-1-루시페라제 리포터 검정에서 약 1.21 nM (1.2배 변화)만큼 낮은 농도 및 적어도 최대 약 19.3 nM (2.4배 변화)의 농도에서 검출될 수 있었다 (도 5b). 루시페라제 활성에 대한 sKlotho-FGF23-6xHis 융합 폴리펩티드의 활성은 헤파린 (20 μg/ml)의 존재에 의해 유의하게 증진되었다. 헤파린의 존재 하에, 루시페라제 활성에 대한 sKlotho-FGF23-6xHis 융합 폴리펩티드의 효과는 약 0.6 nM (2.0배 변화)만큼 낮은 농도에서 검출될 수 있었다. 결과는 정제된 sKlotho-FGF23-6xHis가 EGR-1-luc 리포터 유전자를 용량-의존적으로 유도하였다는 것, 및 sKlotho-FGF23-6xHis에 의한 처리를 제시하였다.
실시예 3. 근육 세포에 대한 Klotho 융합 폴리펩티드의 효과를 평가하는 시험관내 검정.
발현된 Klotho 융합 폴리펩티드의 생물학적 효과를 C2C12 근모세포에 대해 시험하였다. C2C12 근모세포의 IGF-1, FGF2, 또는 sKlotho-FGF23에 의한 처리는 근관 성장 및 신호전달 단백질의 인산화를 발생시켰다. C2C12 근모세포를 6-웰 폴리-D-리신 및 피브로넥틴 코팅 플레이트 내의 성장 배지 (3부의 DMEM 및 1부의 F12), 10% FBS, 1% Glut; 1% P/S; 1% 리놀산; 0.1% ITS: [인슐린 (10 mg/ml), 트랜스페린 (5.5 mg/ml), 및 셀레늄 (5 ng/ml)] 중 40,000개 세포/웰의 밀도로 시딩하였다. 근모세포가 전면생장률에 도달한 후 (3일), 배지를 분화 배지 (2% 말 혈청; 1% Glut; 1% P/S를 함유하는 DMED)로 바꾸었다.
근관 직경 실험을 위해, 전면생장 배지를 분화 배지로 바꾸고 3일 후에, 세포를 분화 배지에서 24시간 동안 덱사메타손 (100 μM)의 부재 또는 존재 하에 IGF-1 (10 nM), FGF2 (20 ng/ml) 또는 sKlotho-FGF23 (20 nM)으로 처리하였다. 처리 종료 시, 세포를 글루타르알데히드 (PBS 중 5%)로 고정하고, 다중 형광 영상을 수집하였다. 파이프라인 파일럿 프로그램을 사용하여 근관 직경을 측정하여 비대 또는 위축을 결정하였다.
신호전달 단백질 인산화 실험을 위해, 전면생장 배지를 분화 배지로 바꾸고 3일 후에, 세포를 FBS 무함유 DMEM으로 4시간 동안 고갈시킨 다음, 라파마이신 (40 nM)의 부재 또는 존재 하에 30분 동안 IGF-1 (10 nM), FGF2 (20 ng/ml) 또는 sKlotho-FGF23 (20 nM)으로 처리하였다. 세포를 프로테아제 및 포스파타제 억제제의 존재 하에 RIPA 완충제 중에서 용해시켰다. 웨스턴 블롯 분석을 수행하고, 막을 도면에 나타낸 바와 같은 상이한 항체로 프로빙하고, X선 필름 상에 현상하고, 이를 스캐닝하였다.
이러한 연구의 결과는 sKlotho-FGF23이 IGF-1 및 FGF2에 대한 결과와 유사하게 대조군과 비교 시 근관 직경을 증가시키고 C2C12 근관 비대를 유도한다는 것을 제시하였다 (도 5a). 또한, sKlotho-FGF23, IGF-1, 및 FGF2에 의한 처리는 근관 직경의 측정에 기초하여, 덱사메타손에 의해 유도된 근관 위축을 부분적으로 역전시킬 수 있었다. 덱사메타손의 부재 또는 존재 하에 근관 형태 (근관의 두께에 의해 측정됨)에 대해 sKlotho-FGF23과 FGF2 사이에 어떠한 차이도 관찰되지 않았다. sKlotho-FGF23, IGF-1, 및 FGF2의 영양 효과는 통계학적으로 유의하였다.
C2C12 근관에 대한 효과와 일치하게, sKlotho-FGF23 융합 단백질 신호전달은 C2C12 근관에서 p70S6K 및 ERK의 인산화로 이어졌지만, AKT 또는 FoxO의 인산화로는 이어지지 않았다 (도 5b). 신호전달에 대한 sKlotho-FGF23의 효과는 FGF2의 것과 유사하였지만, IGF-1의 것과는 별개였다. sKlotho-FGF23에 의한 ERK 인산화의 정도는 IGF-1 또는 FGF2의 것보다 적은 것으로 관찰되었다. sKlotho-FGF23에 의한 p70S6K의 인산화는 라파마이신 감수성이었다. C2C12 세포 수반 실험에서, 헤파린은 신호전달의 활성화를 위해 필요하지 않았다. 이들 결과는 sKlotho-FGF23 융합 폴리펩티드가 C2C12 근관에서 신호전달을 활성화시킨다는 것을 제시하였다.
실시예 4. sKlotho, FGF23 및 FcLALA를 포함하는 융합 폴리펩티드
다양한 융합 폴리펩티드를 sKlotho, FGF23 및 항체의 변형된 Fc 단편을 사용하여 구축하였다. 이들 변형된 Fc 분자는 FcRn에 대한 변경된 (감소된) 결합 및 이에 따른 증가된 혈청 반감기를 가졌다. 이들은 또한 신체에서 변형된 생체이용률 및 점막 표면 및 다른 표적으로의 변경된 수송을 가졌다. 본 실시예에서, FGF23 및 sKlotho를 미국 특허 번호 7,217,798 및 문헌 [Hessell et al. 2007 Nature 449:101-104]에 기재된 FcLALA에 융합시켰고, 이들 융합 폴리펩티드의 다양한 성분 사이를 개재하는 것은 문헌 [Lode et al. 1998 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95: 2475-2480]에 기재된 바와 같은 링커였다. 이들 융합을 구축물, 예를 들어 pcDNA3.1 (인비트로젠, 캘리포니아주 칼스배드) 내에 삽입하고, HEK293 세포에서 발현시켰다.
A. sKlotho-FGF23-FcLALA v1
sKlotho, 링커, FGF23, 또 다른 링커, 및 FcLALA를 포함하는 융합을 구축하였다. 이러한 실시양태에서, 지정된 sKlotho-FGF23-FcLALA v1은 서열식별번호: 46 및 47로 하기 제시된다.
sKlotho-FGF23-FcLALA v1의 뉴클레오티드 서열 (여기서, 1로서 개시 A TG)은 서열식별번호: 46으로서 제시된다.
sKlotho-FGF23-FcLALA v1의 아미노산 서열은 서열식별번호: 47로서 하기 제시된다.
이러한 서열에서, 융합의 다양한 성분은 하기와 같다:
sKlotho: 1-982; 링커1: 983-1001; FGF23: 1002-1228; 링커 2; 1229-1233; FcLALA: 1234-1459.
B. sKlotho-FGF23-FcLALA v2
sKlotho, 링커, FGF23, 또 다른 링커 및 FcLALA를 포함하는 융합을 구축하였다. 이러한 실시양태는 sKlotho-FGF23-FcLALA v2로 지정되었고, 이는 서열식별번호: 48 및 49로서 하기 제시된다.
sKlotho-FGF23-FcLALA v2의 뉴클레오티드 서열 (여기서, 1로서 개시 A TG)은 서열식별번호: 48로서 제시된다.
sKlotho-FGF23-FcLALA v2의 아미노산 서열은 서열식별번호: 49로서 하기 제시된다.
이러한 서열에서, 융합의 다양한 성분은 하기와 같다:
sKlotho: (aa 또는 아미노산) 1-982; 링커 1: 983-1001; FGF23 :1002-1228; 링커 2; 1229-1233; FcLALA :1234-1450.
본원에 기재되거나 관련 기술분야에 공지된 바와 같이, FGF, Klotho, 변형된 Fc 단편 및 (임의로) 링커 서열, 및 그의 변이체 및 유도체를 다양한 조합으로 조합하여 다른 융합 폴리펩티드를 구축할 수 있었다.
실시예 5. FGF23 및 FcLALA를 포함하는 융합 폴리펩티드.
다양한 융합 폴리펩티드를 미국 특허 번호 7,217,798에 기재된 바와 같이, FGF23 및 항체의 변형된 Fc 단편을 사용하여 구축하였다. 이들 변형된 Fc 분자는 FcRn에 대한 변경된 (감소된) 결합 및 이에 따른 증가된 혈청 반감기를 가졌다. 이들은 또한 신체에서 변형된 생체이용률 및 점막 표면 및 다른 표적으로의 변경된 수송을 가졌다. 본 실시예에서, FGF23을 FcLALA에 융합시켰고, 이들 융합 폴리펩티드의 다양한 성분 사이를 개재하는 것은 문헌 [Lode et al. 1998 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95: 2475-2480]에 기재된 바와 같은 링커였다. 이들 융합을 구축물, 예를 들어 pcDNA3.1 (인비트로젠, 캘리포니아주 칼스배드) 내에 삽입하고, HEK293 세포에서 발현시켰다.
C. FGF23-FcLALA v1
FGF23, 링커 및 FcLALA를 포함하는 융합을 구축하였다. 이러한 구축물은 FGF23-FcLALA v1로 지정되었고, 이는 하기 서열식별번호: 50 및 51로서 제시된다.
FGF23-FcLALA v1의 뉴클레오티드 서열 (여기서, 1로서 개시 A TG)은 서열식별번호: 50으로서 하기 제시된다.
FGF23(R179Q)-FcLALAv1의 아미노산 서열은 서열식별번호: 51로서 하기 제시된다.
이러한 서열에서, 융합의 다양한 성분은 하기와 같다:
FGF23: (aa) 1-251; 링커: 252-256; FcLALA: 257-482.
D. FGF23-FcLALA v2
FGF23 및 FcLALA를 포함하는 FGF23-FcLALA v2를 포함하는 융합을 구축하였다.
FGF23-FcLALA v2의 뉴클레오티드 서열 (여기서, 1로서 개시 A TG)은 서열식별번호: 52로서 하기 제시된다.
FGF23(R179Q)-FcLALAv2의 아미노산 서열은 서열식별번호: 53으로서 하기 제시된다.
이러한 서열에서, 융합의 다양한 성분은 하기와 같다:
FGF23: 1-251; 링커: 252-256; FcLALA: 257-473.
본원에 기재되거나 관련 기술분야에 공지된 바와 같이, FGF 서열, 변형된 Fc 단편 및 (임의로) 링커, 및 그의 변이체 및 유도체를 다양한 조합으로 조합하여 다른 융합 폴리펩티드를 구축할 수 있었다.
E. sKlotho-FGF23(R179Q)-FcLALA 융합 단백질에 의한 Egr-1-luc 리포터 유전자의 활성화; FGF23(R179Q)-FcLALA 단백질에 의한 Egr-1-luc 리포터 유전자의 활성화; 및 FGF23(R179Q) 대 FGF23(R179Q)-FcLaLav2의 약동학적 프로파일을 결정하였다.
도 7은 sKlotho-FGF23(R179Q)-FcLALA 융합 단백질에 의한 Egr-1-luc 리포터 유전자의 활성화를 제시한다. HEK293T 세포를 Egr-1-luc 리포터 유전자로 일시적으로 형질감염시키고, 20 μg/ml 헤파린의 부재 또는 존재 하에 표시된 조건화 배지와 함께 인큐베이션하였다. 이어서, 18시간 후에 루시페라제 활성을 결정하였다. 결과는 sklotho-FGF23-FcLALA 융합 단백질이 리포터 유전자 활성을 유도한다는 것을 제시하였다. 이들 유도는 헤파린의 존재 하에 유의하게 증진되었다. sKF-Fcv1: sKlotho-FGF23-FcLALAv1; sKF-Fcv2: sKlotho-FGF23-FcLALAv2
도 8은 FGF23(R179Q)-FcLALA 단백질에 의한 Egr-1-luc 리포터 유전자의 활성화를 제시한다. HEK293T 세포를 전장 막횡단 형태의 Klotho와 함께 Egr-1-luc 리포터 유전자로 일시적으로 형질감염시키고, 표시된 30% 조건화 배지와 함께 인큐베이션하였다. 이어서, 18시간 후에 루시페라제 활성을 결정하였다. 결과는 FGF23-FcLALA 융합 단백질이 FGF23과 유사한 방식으로 리포터 유전자 활성을 유도한다는 것을 제시하였다.
도 9는 FGF23(R179Q) vs FGF23(R179Q)-FcLALAv2의 약동학적 프로파일을 제시한다. 군당 4마리의 마우스에게 FGF23(R179Q)-6xHis 또는 FGF23(R179Q)-FcLALAv2를 2 mg/kg으로 피하로 주사하였다. 표시된 시점에, 혈청 샘플을 수집하고, ELISA에 의해 FGF23에 대해 분석하였다. 혈청 중 FGF23(R179Q)-FcLALA 농도는 24시간 시점에 상승된 채 유지되었으나, FGF23(R179Q)-6xHis는 기저 수준으로 되돌아갔다. 이러한 결과는 FcLALA의 부가에 의해 FGF23(R179Q)의 생체내 반감기가 유의하게 개선된다는 것을 나타내었다.
실시예 6. 덱사메타손-유도된 근육 위축 후에 근육 성장을 증진시키는데 있어서의 sKlotho-FGF23 융합의 생체내 효능
실험 데이터는 sKlotho-FGF23의 근육내 주사가 덱사메타손-유도된 근육 위축 후에 근육 질량의 성장을 유의하게 증진시킨다는 것을 제시하였다. 이 실험에서, 서열식별번호: 41의 것에 상응하는 펩티드를 사용하였다.
도 10은 덱사메타손 (DEX)-유도된 근육 위축 후에 sKlotho (sKLO) 또는 포스페이트 완충 염수 (PBS)의 근육내 주사와 비교 시 sKlotho-FGF23 (KLOFGF)의 근육내 주사가 근육 질량의 재성장을 유의하게 증진시킨다는 것을 제시하는 비복근-가자미근-족저근 (GSP) 근육의 절대 중량 (a) 및 퍼센트 중량 변화 (b)를 제시한다.
15주령의 80마리의 수컷 C57BL/6 마우스를 체중에 의해 8개의 군, 각각 10마리의 마우스로 무작위화하였다. 4개의 군에게 DEX 무함유 물을 제공하고 (W21d), 다른 4개의 군에게는 음용수 중 DEX를 3주 동안 2.4 mg/kg/일로 제공하였다 (D21d). 3주 후, DEX 처리를 정지하고, 1개의 W21d 및 1개의 D21d 군을 즉시 안락사시켜 DEX 처리에 의해 유도된 근육 위축의 정도를 확립하였다. W21d 또는 D21d 마우스의 나머지 3개의 군을 추가의 14일 동안 회복되도록 하고 (R14d), 이 기간 동안 이들에게 각각 2x50 μl의 PBS, sKlotho-FGF23 (KLOFGF; 1.6 mg/ml) 또는 sKlotho (sKLO; 1.6 mg/ml)를 격일에 우측 비복근-가자미근-족저근 근육 복합체 내로 근육내 주사를 제공하였다. 마지막 근육내 주사 24시간 후에 마우스를 안락사시키고, 근육 중량을 결정하고, 절대 중량 (a) 또는 W21d+PBS 군과 비교 시 퍼센트 변화로서 표현하였다.
이들 데이터는 덱사메타손-유도된 근육 위축 후에 근육 성장을 증진시키는데 있어서 sKlotho-FGF23 융합의 생체내 효능을 제시하였다.
실시예 7. 응집을 감소시키고, 바람직하지 않은 프로테아제-유도된 절단을 감소시키고, 생성을 증가시키는 융합 단백질의 FGF23 부분에서의 추가의 돌연변이
sKlotho-FGF23 및 FGF23-FcLaLa 융합 폴리펩티드의 FGF23 부분 내에서 여러 돌연변이를 조사하였다. 이들은 Q156, C206 및 C244 (여기서 숫자는 FGF23 아미노산 서열을 기초로 함)를 포함하였다. 예시적인 개별 돌연변이는 Q156A, C206S 및 C244S를 포함하고, 임의의 이들 부위에서의 돌연변이는 R179에서의 돌연변이 (예를 들어, R179Q)와 조합될 수 있었다. 예시적인 서열을 도 2의 서열식별번호: 54 내지 68에 제공한다.
C206 및 C244는 이량체화에 수반되는 것으로 추측되고; Q156은 프로테아제 감수성 부위로서 본 발명자들에 의해 확인된 부위였다. 이들 아미노산을 임의의 아미노산으로 돌연변이시키는 것은 FGF23 활성을 방해하지 않으면서 응집을 감소시키고, 바람직하지 않은 프로테아제-유도된 절단을 감소시키고, 세포로부터의 단백질 생성을 증가시킴으로써, 단백질의 품질을 증진시켰다. 이들 3개의 위치는 인간, 레서스, 소, 마우스 및 래트에서 발견된 FGF23 단백질에서 보존되어 있기 때문에, 이것은 예상외의 결과였다. 이러한 보존은 하기 서열식별번호: 35, 109, 110, 111 및 112 사이의 비교에서 제시되고, Q156, C206 및 C244는 밑줄표시된 볼드체이다.
Figure pct00002
이들 3개의 돌연변이가 FGF23 활성을 막지 않는다는 사실이 도 11에 제시되어 있다. 이 도면은 FGF23(R179Q)-FcLALA 및 Q156A, C206S, C244S 및 C206S/C244S 돌연변이체에 의한 Egr-1-luc 리포터 유전자의 활성화를 제시한다.
HEK293T 세포를 전장 막횡단 형태의 Klotho와 함께 EGR-1-luc 리포터 유전자로 일시적으로 형질감염시켰고, FGF23-FcLaLa 돌연변이체가 나타났다. 이어서, 18시간 후에 루시페라제 활성을 결정하였다. 결과는 C206S, C244S, C206S/C244S (3개의 독립적 클론) 및 Q156A (3개의 독립적 클론) 돌연변이체가 EGR-1-Luc 리포터 유전자 활성을 활성화시키는데 있어서 FGF23-FcLALA 융합 단백질과 동등하게 효과적이라는 것을 제시하였다.
C244 및 C206을 돌연변이시키는 것이 이량체화 및 FGF23의 응집을 변경시킨다는 것을 제시하는 데이터가 도 12에 제시되어 있다. 이 도면은 FGF23(R179Q)-FcLaLa의 WT, Q156A, C206S, C244S 및 C206S/C244S 돌연변이체의 단백질 품질을 제시한다. 표시된 FGF23-FcLaLa 발현 벡터로 일시적으로 형질감염시킨 HEK293T 세포로부터의 조건화 배지를 FGF23 항체를 사용하여 웨스턴 블롯에 의해 분석하였다. 결과는 C206S/C244S 돌연변이가 단백질 이량체화를 막고 Q156A 돌연변이가 감소된 단백질분해 단편을 갖는다는 것을 제시하였다.
따라서, 놀랍게도, 이들 Q156, C206 및 C244 잔기가 종에 걸쳐 보존되어 있더라도, 이들은 FGF23 활성을 감소시키지 않으면서 돌연변이될 수 있고, 응집 및 절단을 감소시키고 생성을 개선시킴으로써 단백질의 품질을 증진시킬 수 있었다.
실시예 8. 더 많은 단백질, 더 적은 분해 산물을 생성하고, FGF23 활성을 허용하는 융합 단백질의 FGF23 부분에서의 추가의 돌연변이
FGF23-FcLaLa 융합 폴리펩티드의 FGF23 부분 내에서 여러 추가의 돌연변이를 조사하였다. 이들은 Y154 및 S155 (여기서 숫자는 FGF23 아미노산 서열을 기초로 함)를 포함하였다. 예시적인 개별 돌연변이는 Y154D, Y154H, S155A, S155T, C206S, 및 C244S를 포함하고, 임의의 이들 부위에서의 돌연변이는 R179에서의 돌연변이 (예를 들어, R179Q)와 조합될 수 있다. 예시적인 서열을 서열식별번호: 69 내지 76에 제공한다.
도 13은 FGF23(R179Q)-FcLaLa의 WT (R179Q), Y154D/C206S/C244S, Y154H/C206S/C244S, Y154N/C206S/C244S, S155A/C206S/C244S, S155T/C206S/C244S의 단백질 품질을 제시한다. 표시된 FGF23-FcLaLa 발현 벡터로 표시된 시간 동안 일시적으로 형질감염시킨 HEK293 세포로부터의 조건화 배지를 FGF23 항체를 사용하여 웨스턴 블롯에 의해 분석하였다. 결과는 FGF23 R179Q/Y154D/C206S/C244S 돌연변이체가 더 많은 단백질, 훨씬 더 적은 분해 산물을 생성한다는 것을 제시하였다. ("WT"를 포함하여) 이 실험에 사용된 모든 FGF23 변이체는 R179Q 돌연변이를 갖는다.
따라서, R179/Y154/C206/C244에서 돌연변이를 갖는 FGF23을 R179/S155/C206/C244에서 돌연변이를 갖는 FGF23과 비교할 경우에, Y154에서의 돌연변이는 S155에서의 돌연변이보다 훨씬 더 적은 분해 산물을 생성하였다. 또한, 이와 관련하여, Y154D의 돌연변이는 Y154H 또는 Y154N의 돌연변이보다 훨씬 더 적은 분해 산물을 생성하였다.
도 14는 FGF23(R179Q)-FcLALA 및 FGF23(R179Q)-Y154D/C206S/C244S 돌연변이체에 의한 Egr-1-luc 리포터 유전자의 활성화를 제시한다. HEK293T 세포를 전장 막횡단 형태의 Klotho와 함께 Egr-1-luc 리포터 유전자로 일시적으로 형질감염시켰다. 형질감염 5시간 후에, 각각의 정제된 단백질을 첨가하였다. 이어서, 18시간 후에 루시페라제 활성을 결정하였다. 결과는 FGF23(R179Q)-Y154D/C206S/C244S 돌연변이체가 부분적 (~50%) 활성을 보유한다는 것을 제시하였다. "WT"는 R179Q 돌연변이를 갖는 FGF23을 나타낸다.
실시예 9. sKlotho의 C-말단으로부터의 약 20개의 아미노산의 결실은 sKlotho의 활성을 감소시키지만, sKlotho-FGF23 융합 폴리펩티드의 활성을 증가시킨다.
sKlotho의 C-말단 단부로부터 다양한 말단절단을 생성하였다. 도 15a 및 b는 다양한 구축물의 구축을 제시한다. 도 15a는 약 20, 약 40, 약 60, 약 80, 약 100, 약 120, 약 140, 약 160, 약 180, 약 200, 약 220, 약 240, 약 260, 약 280, 약 300, 약 320, 약 340, 약 360, 약 380, 약 400, 약 420, 약 440, 약 460, 약 480개의 아미노산의 C-말단 결실을 갖는 sKlotho 변이체를 구축하기 위한 전략을 제시한다. 프라이머 P5 (서열식별번호: 83)를 5' 프라이머로서 사용하였다. C-20, C-40, C-60 ... C-480으로 지정된 임의의 일련의 24종의 프라이머 (서열식별번호: 84 내지 107)를 C-말단으로부터 약 20, 약 40, 약 60 ... 약 480개의 아미노산을 말단절단하는데 사용하였다. 모든 sKlotho 말단절단 중에서, 오직 약 20개 aa의 결실을 갖는 것 (sKlotho del c-20)만이 효과적이었고; 이러한 sKlotho 말단절단과 FGF23의 융합을 도 15b에 제시된 바와 같이 생성하였다. 도 15b는 sKlotho (del c-20)-FGF23 융합 폴리펩티드를 구축하기 위한 전략을 제시한다. P5 프라이머를 C-20 프라이머와 조합하여 PCR (폴리머라제 연쇄 반응)에서 사용하여 sKlotho 말단절단을 갖는 단편을 제조하였다. 이러한 단편을 제한 엔도뉴클레아제에 의해 절단하고 FGF23을 코딩하는 벡터에 라이게이션하여 sKlotho (del c-20)-FGF23 융합 폴리펩티드를 구축하였다.
sKlotho의 C-말단으로부터의 다양한 말단절단의 활성을 시험하였다. C-말단으로부터의 약 20개의 아미노산의 결실은 sKlotho의 활성을 감소시켰지만, 이러한 구축물은 일부 활성을 보유하였다. 도 16은 sKlotho 돌연변이체의 Egr-1 활성을 제시한다. 각각 sKlotho 말단절단 및 FGF23의 융합을 코딩하는 벡터를 갖는 다양한 Hek293 세포로부터 조건화 배지 (CM)를 수집하였다. 오직 유용한 양의 융합을 생성하는 세포로부터의 CM만을 사용하였다. 사용된 융합은: CM1: 약 20개의 아미노산 (aa)의 sKlotho 말단절단; CM7: 약 140개의 아미노산 (aa)의 sKlotho 말단절단; CM11: 약 220개의 아미노산 (aa)의 sKlotho 말단절단; CM12: 약 240개의 아미노산 (aa)의 sKlotho 말단절단; CM13: 약 260개의 아미노산 (aa)의 sKlotho 말단절단; CM23: 약 460개의 아미노산 (aa)의 sKlotho 말단절단. 양성 대조군: sKlotho 및 FGF23의 융합을 생성하는 세포로부터의 조건화 배지 [(+) CM]; sKlotho 및 FGF23의 정제된 융합 [(+) ctrl]. "unConc."은 더 적은 단백질이 사용된 실험을 나타낸다. 음성 대조군: (-) ctrl. RLU, 상대적 루시페라제 단위. 이 실험은 C-말단으로부터의 약 20개의 아미노산의 결실이 sKlotho의 활성을 감소시킨다는 것을 제시하였다.
sKlotho의 C-말단으로부터의 약 20개의 아미노산의 결실이 sKlotho 활성을 감소시키더라도, 이러한 결실은 sKlotho-FGF23 융합 폴리펩티드의 활성을 증가시켰다. 도 17은 sKlotho의 C-말단으로부터 약 20개의 아미노산을 결실시키는 것이 sKlotho-FGF23 융합 폴리펩티드의 활성을 증가시킨다는 것을 제시한다. 도 17a는 sKlotho 또는 sKlotho 델타 C-20 및 FGF23을 포함하는 다양한 융합의 상대량의 웨스턴 블롯을 제시한다. 레인 1, sKlotho-FGF23 융합. 레인 2, FGF23-sKlotho 델타 C-20 (del c-20) 융합. 레인 3, sKlotho 델타 C-20 (del c-20)-FGF23 융합. 크기 마커가 또한 표시된다. Klotho에 대한 폴리클로날 항체를 사용하였다. 도 17b는 Egr-1-Luc 검정에서 이들 융합 폴리펩티드의 활성을 제시한다.
도 18은 sKlotho의 C-말단으로부터 약 20개의 아미노산을 결실시키는 것이 sKlotho-FGF23 융합 폴리펩티드의 활성을 증가시킨다는 발견을 되풀이한, 정제된 단백질을 사용한 실험을 제시한다. 도 18a는 sKlotho del c-20-FGF23 융합 (레인 2 및 3)의 순도를 제시하는 단백질 겔을 제시한다. 레인 1, 크기 마커. 도 18b는 정제된 sKlotho del c-20-FGF23 융합 (sKF-T) 및 sKlotho-FGF23 융합 (sKF)을 사용한 Egr-1 검정을 제시한다. 단백질의 EC50을 또한 제시한다. 이들 도면 및 명세서에서, 용어 sKF-T, Klotho del c-20-FGF23, sKlotho del c-20-FGF23, klotho (델타 C-20)-FGF23, 알파 sKlotho ΔC20-FGF23 등은 모두 N-말단에서 C-말단으로의 순서로, C-말단으로부터 약 20개의 아미노산의 말단절단을 갖는 알파 sKlotho, 링커, 및 FGF23을 포함하는 융합 폴리펩티드를 나타낸다.
도 19는 sKlotho del (결실) C-20 및 마우스 혈청 알부민을 포함하는 융합 폴리펩티드가 Egr-1 검정에서 효능을 갖는다는 것을 제시한다. 융합 폴리펩티드는 융합 폴리펩티드를 코딩하는 발현 플라스미드로 형질감염된 HEK293 세포에서 발현되었다.
도 17 및 18에 예시된 실험에 사용된 sKlotho 델타 C-20 (del c-20)-FGF23 융합은 서열식별번호: 80의 아미노산 서열을 갖는 것으로 예측되는 한편, 융합의 아미노산 서열분석은 그것이 PCR 단계에 의해 비의도적으로 도입된 2개의 돌연변이, 즉, V563A 및 K795E를 갖는 서열식별번호: 82의 아미노산 서열을 갖는다는 것을 제시한다는 것이 주목되었다. 이들 2개의 돌연변이는 결실 외에는 야생형 sKlotho 서열을 갖는 sKlotho 델타 C-20 (del c-20)에는 존재하지 않는다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 기술 과학 용어는 개시내용이 속하는 분야에 친숙한 전문가에 의해 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다.
달리 나타내지 않는 한, 통상의 기술자에게 명백할 바와 같이, 구체적으로 상세히 기재되지 않은 모든 방법, 단계, 기술 및 조작은 공지되어 있는 방식 그 자체로 수행될 수 있고, 수행되었다. 예를 들어, 본원에 언급된 표준 핸드북 및 일반적 배경 기술, 및 그에 인용된 추가의 참고문헌을 다시 참조한다.
본 발명에 대한 청구범위는 비제한적이고, 하기 제공된다.
특정한 실시양태 및 청구범위가 본원에 상세하게 개시되어 있지만, 이는 단지 예시의 목적을 위해 예로서 이루어진 것이고, 첨부된 청구범위의 범주, 또는 임의의 상응하는 미래 출원의 청구범위의 주제의 범주와 관련하여 제한하는 것으로 의도되는 것은 아니다. 특히, 본 발명자들은 청구범위에 의해 규정된 바와 같은 개시내용의 취지 및 범주를 벗어나지 않으면서, 개시내용에 다양한 치환, 변경 및 변형이 이루어질 수 있다는 것을 고려한다. 핵산 출발 물질 또는 관심 클론의 선택은 본원에 기재된 실시양태의 지식을 갖는 관련 기술분야의 통상의 기술자에 있어서 상용 대상인 것으로 여겨진다. 다른 측면, 이점 및 변형이 하기 청구범위의 범주 내인 것으로 간주된다. 다양한 국가의 특허법에 의한 제한으로 인해 이후 출원되는 상응하는 출원의 청구범위 범주가 재작성될 수 있으며, 이것을 청구범위의 주제를 포기하는 것으로서 해석해서는 안된다.
서열 목록
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하기 서열에서, FGF23에서의 특정 돌연변이 (예를 들어, Y154D, Y154C, C206S, C244S)는 밑줄표시한다.
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Figure pct00037
SEQUENCE LISTING <110> NOVARTIS AG <120> METHODS AND COMPOSITIONS USING KLOTHO VARIANT POLYPEPTIDES <130> PAT056577-WO-PCT <140> PCT/IB2015/059294 <141> 2015-12-02 <150> 62/087,516 <151> 2014-12-04 <160> 117 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 5003 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 cgcgcagcat gcccgccagc gccccgccgc gccgcccgcg gccgccgccg ccgtcgctgt 60 cgctgctgct ggtgctgctg ggcctgggcg gccgccgcct gcgtgcggag ccgggcgacg 120 gcgcgcagac ctgggcccgt ttctcgcggc ctcctgcccc cgaggccgcg ggcctcttcc 180 agggcacctt ccccgacggc ttcctctggg ccgtgggcag cgccgcctac cagaccgagg 240 gcggctggca gcagcacggc aagggtgcgt ccatctggga tacgttcacc caccaccccc 300 tggcaccccc gggagactcc cggaacgcca gtctgccgtt gggcgccccg tcgccgctgc 360 agcccgccac cggggacgta gccagcgaca gctacaacaa cgtcttccgc gacacggagg 420 cgctgcgcga gctcggggtc actcactacc gcttctccat ctcgtgggcg cgagtgctcc 480 ccaatggcag cgcgggcgtc cccaaccgcg aggggctgcg ctactaccgg cgcctgctgg 540 agcggctgcg ggagctgggc gtgcagcccg tggtcaccct gtaccactgg gacctgcccc 600 agcgcctgca 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gacaagatgt tgttgccaaa gtcttcagcc ttgttctacc 1500 aaaagctgat agagaaaaat ggcttccctc ctttacctga aaatcagccc ctagaaggga 1560 catttccctg tgactttgct tggggagttg ttgacaacta cattcaagta gataccactc 1620 tgtctcagtt taccgacctg aatgtttacc tgtgggatgt ccaccacagt aaaaggctta 1680 ttaaagtgga tggggttgtg accaagaaga ggaaatccta ctgtgttgac tttgctgcca 1740 tccagcccca gatcgcttta ctccaggaaa tgcacgttac acattttcgc ttctccctgg 1800 actgggccct gattctccct ctgggtaacc agtcccaggt gaaccacacc atcctgcagt 1860 actatcgctg catggccagc gagcttgtcc gtgtcaacat caccccagtg gtggccctgt 1920 ggcagcctat ggccccgaac caaggactgc cgcgcctcct ggccaggcag ggcgcctggg 1980 agaaccccta cactgccctg gcctttgcag agtatgcccg actgtgcttt caagagctcg 2040 gccatcacgt caagctttgg ataacgatga atgagccgta tacaaggaat atgacataca 2100 gtgctggcca caaccttctg aaggcccatg ccctggcttg gcatgtgtac aatgaaaagt 2160 ttaggcatgc tcagaatggg aaaatatcca tagccttgca ggctgattgg atagaacctg 2220 cctgcccttt ctcccaaaag gacaaagagg tggccgagag agttttggaa tttgacattg 2280 gctggctggc tgagcccatt ttcggctctg gagattatcc atgggtgatg agggactggc 2340 tgaaccaaag aaacaatttt cttcttcctt atttcactga agatgaaaaa aagctaatcc 2400 agggtacctt tgactttttg gctttaagcc attataccac catccttgta gactcagaaa 2460 aagaagatcc aataaaatac aatgattacc tagaagtgca agaaatgacc gacatcacgt 2520 ggctcaactc ccccagtcag gtggcggtag tgccctgggg gttgcgcaaa gtgctgaact 2580 ggctgaagtt caagtacgga gacctcccca tgtacataat atccaacgga atcgatgacg 2640 ggctgcatgc tgaggacgac cagctgaggg tgtattatat gcagaattac ataaacgaag 2700 ctctcaaagc ccacatactg gatggtatca atctttgcgg atactttgct tattcgttta 2760 acgaccgcac agctccgagg tttggcctct atcgttatgc tgcagatcag tttgagccca 2820 aggcatccat gaaacattac aggaaaatta ttgacagcaa tggtttcccg ggcccagaaa 2880 ctctggaaag attttgtcca gaagaattca ccgtgtgtac tgagtgcagt ttttttcaca 2940 cccgaaagtc tttactggct ttcatagctt ttctattttt tgcttctatt atttctctct 3000 cccttatatt ttactactcg aagaaaggca gaagaagtta caaatagttc tgaacatttt 3060 tctattcatt cattttgaaa taattatgca gacacatcag ctgttaacca tttgcacctc 3120 taagtgttgt gaaactgtaa atttcataca tttgacttct agaaaacatt tttgtggctt 3180 atgacagagg ttttgaaatg ggcataggtg atcgtaaaat attgaataat gcgaatagtg 3240 cctgaatttg ttctcttttt gggtgattaa aaaactgaca ggcactataa tttctgtaac 3300 acactaacaa aagcatgaaa aataggaacc acaccaatgc aacatttgtg cagaaatttg 3360 aatgacaaga ttaggaatat tttcttctgc acccacttct aaatttaatg tttttctgga 3420 agtagtaatt gcaagagttc gaatagaaag ttatgtacca agtaaccatt tctcagctgc 3480 cataataatg cctagtggct tcccctctgt caaatctagt ttcctatgga aaagaagatg 3540 gcagatacag gagagacgac agagggtcct aggctggaat gttcctttcg aaagcaatgc 3600 ttctatcaaa tactagtatt aatttatgta tctggttaat gacatacttg gagagcaaat 3660 tatggaaatg tgtattttat atgatttttg aggtcctgtc taaaccctgt gtccctgagg 3720 gatctgtctc actggcatct tgttgagggc cttgcacata ggaaactttt gataagtatc 3780 tgcggaaaaa caaacatgaa tcctgtgata ttgggctctt caggaagcat aaagcaattg 3840 tgaaatacag tataccgcag tggctctagg tggaggaaag gaggaaaaag tgcttattat 3900 gtgcaacatt atgattaatc tgattataca ccatttttga gcagatcttg gaatgaatga 3960 catgaccttt ccctagagaa taaggatgaa ataatcactc attctatgaa cagtgacact 4020 actttctatt ctttagctgt actgtaattt ctttgagttg atagttttac aaattcttaa 4080 taggttcaaa agcaatctgg tctgaataac actggatttg tttctgtgat ctctgaggtc 4140 tattttatgt ttttgctgct acttctgtgg aagtagcttt gaactagttt tactttgaac 4200 tttcacgctg aaacatgcta gtgatatcta gaaagggcta attaggtctc atcctttaat 4260 gccccttaaa taagtcttgc tgattttcag acagggaagt ctctctatta cactggagct 4320 gttttataga taagtcaata ttgtatcagg caagataaac caatgtcata acaggcattg 4380 ccaacctcac tgacacaggg tcatagtgta taataatata ctgtactata taatatatca 4440 tctttagagg tatgattttt tcatgaaaga taagcttttg gtaatattca ttttaaagtg 4500 gacttattaa aattggatgc tagagaatca agtttatttt atgtatatat ttttctgatt 4560 ataagagtaa tatatgttca ttgtaaaaat ttttaaaaca cagaaactat atgcaaagaa 4620 aaaataaaaa ttatctataa tctcagaacc cagaaatagc cactattaac atttcctacg 4680 tattttattt tacatagatc atattgtata tagttagtat ctttattaat ttttattatg 4740 aaactttcct ttgtcattat tagtcttcaa aagcatgatt tttaatagtt gttgagtatt 4800 ccaccacagg aatgtatcac 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aatatggggg 720 gtggaaaaat gataccataa tagatatctt caatgactat gccacatact gtttccagat 780 gtttggggac cgtgtcaaat attggattac aattcacaac ccatatctag tggcttggca 840 tgggtatggg acaggtatgc atgcccctgg agagaaggga aatttagcag ctgtctacac 900 tgtgggacac aacttgatca aggctcactc gaaagtttgg cataactaca acacacattt 960 ccgcccacat cagaagggtt ggttatcgat cacgttggga tctcattgga tcgagccaaa 1020 ccggtcggaa aacacgatgg atatattcaa atgtcaacaa tccatggttt ctgtgcttgg 1080 atggtttgcc aaccctatcc atggggatgg cgactatcca gaggggatga gaaagaagtt 1140 gttctccgtt ctacccattt tctctgaagc agagaagcat gagatgagag gcacagctga 1200 tttctttgcc ttttcttttg gacccaacaa cttcaagccc ctaaacacca tggctaaaat 1260 gggacaaaat gtttcactta atttaagaga agcgctgaac tggattaaac tggaatacaa 1320 caaccctcga atcttgattg ctgagaatgg ctggttcaca gacagtcgtg tgaaaacaga 1380 agacaccacg gccatctaca tgatgaagaa tttcctcagc caggtgcttc aagcaataag 1440 gttagatgaa atacgagtgt ttggttatac tgcctggtct ctcctggatg gctttgaatg 1500 gcaggatgct tacaccatcc gccgaggatt attttatgtg gattttaaca gtaaacagaa 1560 agagcggaaa cctaagtctt cagcacacta ctacaaacag atcatacgag aaaatggttt 1620 ttctttaaaa gagtccacgc cagatgtgca gggccagttt ccctgtgact tctcctgggg 1680 tgtcactgaa tctgttctta agcccgagtc tgtggcttcg tccccacagt tcagcgatcc 1740 tcatctgtac gtgtggaacg ccactggcaa cagactgttg caccgagtgg aaggggtgag 1800 gctgaaaaca cgacccgctc aatgcacaga ttttgtaaac atcaaaaaac aacttgagat 1860 gttggcaaga atgaaagtca cccactaccg gtttgctctg gattgggcct cggtccttcc 1920 cactggcaac ctgtccgcgg tgaaccgaca ggccctgagg tactacaggt gcgtggtcag 1980 tgaggggctg aagcttggca tctccgcgat ggtcaccctg tattatccga cccacgccca 2040 cctaggcctc cccgagcctc tgttgcatgc cgacgggtgg ctgaacccat cgacggccga 2100 ggccttccag gcctacgctg ggctgtgctt ccaggagctg ggggacctgg tgaagctctg 2160 gatcaccatc aacgagccta accggctaag tgacatctac aaccgctctg gcaacgacac 2220 ctacggggcg gcgcacaacc tgctggtggc ccacgccctg gcctggcgcc tctacgaccg 2280 gcagttcagg ccctcacagc gcggggccgt gtcgctgtcg ctgcacgcgg actgggcgga 2340 acccgccaac ccctatgctg actcgcactg gagggcggcc gagcgcttcc tgcagttcga 2400 gatcgcctgg ttcgccgagc cgctcttcaa gaccggggac taccccgcgg ccatgaggga 2460 atacattgcc tccaagcacc gacgggggct ttccagctcg gccctgccgc gcctcaccga 2520 ggccgaaagg aggctgctca agggcacggt cgacttctgc gcgctcaacc acttcaccac 2580 taggttcgtg atgcacgagc agctggccgg cagccgctac gactcggaca gggacatcca 2640 gtttctgcag gacatcaccc gcctgagctc ccccacgcgc ctggctgtga ttccctgggg 2700 ggtgcgcaag ctgctgcggt gggtccggag gaactacggc gacatggaca tttacatcac 2760 cgccagtggc atcgacgacc aggctctgga ggatgaccgg ctccggaagt actacctagg 2820 gaagtacctt caggaggtgc tgaaagcata cctgattgat aaagtcagaa tcaaaggcta 2880 ttatgcattc aaactggctg aagagaaatc taaacccaga tttggattct tcacatctga 2940 ttttaaagct aaatcctcaa tacaatttta caacaaagtg atcagcagca ggggcttccc 3000 ttttgagaac agtagttcta gatgcagtca gacccaagaa aatacagagt gcactgtctg 3060 cttattcctt gtgcagaaga aaccactgat attcctgggt tgttgcttct tctccaccct 3120 ggttctactc ttatcaattg ccatttttca aaggcagaag agaagaaagt tttggaaagc 3180 aaaaaactta caacacatac cattaaagaa aggcaagaga gttgttagct aaactgatct 3240 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Thr 785 790 795 800 Phe Asp Phe Leu Ala Leu Ser His Tyr Thr Thr Ile Leu Val Asp Ser 805 810 815 Glu Lys Glu Asp Pro Ile Lys Tyr Asn Asp Tyr Leu Glu Val Gln Glu 820 825 830 Met Thr Asp Ile Thr Trp Leu Asn Ser Pro Ser Gln Val Ala Val Val 835 840 845 Pro Trp Gly Leu Arg Lys Val Leu Asn Trp Leu Lys Phe Lys Tyr Gly 850 855 860 Asp Leu Pro Met Tyr Ile Ile Ser Asn Gly Ile Asp Asp Gly Leu His 865 870 875 880 Ala Glu Asp Asp Gln Leu Arg Val Tyr Tyr Met Gln Asn Tyr Ile Asn 885 890 895 Glu Ala Leu Lys Ala His Ile Leu Asp Gly Ile Asn Leu Cys Gly Tyr 900 905 910 Phe Ala Tyr Ser Phe Asn Asp Arg Thr Ala Pro Arg Phe Gly Leu Tyr 915 920 925 Arg Tyr Ala Ala Asp Gln Phe Glu Pro Lys Ala Ser Met Lys His Tyr 930 935 940 Arg Lys Ile Ile Asp Ser Asn Gly Phe Pro Gly Pro Glu Thr Leu Glu 945 950 955 960 Arg Phe Cys Pro Glu Glu Phe Thr Val Cys Thr Glu Cys Ser Phe Phe 965 970 975 His Thr Arg Lys Ser Leu Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly 980 985 990 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Lys Glu Ala His Lys Ser Glu Ile 995 1000 1005 Ala His Arg Tyr Asn Ala Leu Gly Glu Gln His Phe Lys Gly Leu 1010 1015 1020 Val Leu Ile Ala Phe Ser Gln Tyr Leu Gln Lys Ala Ser Tyr Asp 1025 1030 1035 Glu His Ala Lys Leu Val Gln Glu Val Thr Asp Phe Ala Lys Thr 1040 1045 1050 Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Ala Asn Cys Asp Lys Ser Leu His 1055 1060 1065 Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Ala Ile Pro Asn Leu Arg Glu 1070 1075 1080 Asn Tyr Gly Glu Leu Ala Asp Cys Cys Thr Lys Gln Glu Pro Glu 1085 1090 1095 Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Ser Leu 1100 1105 1110 Pro Pro Phe Glu Arg Pro Glu Ala Glu Ala Met Cys Thr Ser Phe 1115 1120 1125 Lys Glu Asn Pro Thr Thr Phe Met Gly His Tyr Leu His Glu Val 1130 1135 1140 Ala Arg Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Tyr Tyr 1145 1150 1155 Ala Glu Gln Tyr Asn Glu Ile Leu Thr Gln Cys Cys Ala Glu Ala 1160 1165 1170 Asp Lys Glu Ser Cys Leu Thr Pro Lys Leu Asp Gly Val Lys Glu 1175 1180 1185 Lys Ala Leu Val Ser Ser Val Arg Gln Arg Met Lys Cys Ser Ser 1190 1195 1200 Met Gln Lys Phe Gly Glu Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala 1205 1210 1215 Arg Leu Ser Gln Thr Phe Pro Asn Ala Asp Phe Ala Glu Ile Thr 1220 1225 1230 Lys Leu Ala Thr Asp Leu Thr Lys Val Asn Lys Glu Cys Cys His 1235 1240 1245 Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp Arg Ala Glu Leu Ala Lys 1250 1255 1260 Tyr Met Cys Glu Asn Gln Ala Thr Ile Ser Ser Lys Leu Gln Thr 1265 1270 1275 Cys Cys Asp Lys Pro Leu Leu Lys Lys Ala His Cys Leu Ser Glu 1280 1285 1290 Val Glu His Asp Thr Met Pro Ala Asp Leu Pro Ala Ile Ala Ala 1295 1300 1305 Asp Phe Val Glu Asp Gln Glu Val Cys Lys Asn Tyr Ala Glu Ala 1310 1315 1320 Lys Asp Val Phe Leu Gly Thr Phe Leu Tyr Glu Tyr Ser Arg Arg 1325 1330 1335 His Pro Asp Tyr Ser Val Ser Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Lys 1340 1345 1350 Tyr Glu Ala Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Glu Ala Asn Pro Pro 1355 1360 1365 Ala Cys Tyr Gly Thr Val Leu Ala Glu Phe Gln Pro Leu Val Glu 1370 1375 1380 Glu Pro Lys Asn Leu Val Lys Thr Asn Cys Asp Leu Tyr Glu Lys 1385 1390 1395 Leu Gly Glu Tyr Gly Phe Gln Asn Ala Ile Leu Val Arg Tyr Thr 1400 1405 1410 Gln Lys Ala Pro Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Ala Ala 1415 1420 1425 Arg Asn Leu Gly Arg Val Gly Thr Lys Cys Cys Thr Leu Pro Glu 1430 1435 1440 Asp Gln Arg Leu Pro Cys Val Glu Asp Tyr Leu Ser Ala Ile Leu 1445 1450 1455 Asn Arg Val Cys Leu Leu His Glu Lys Thr Pro Val Ser Glu His 1460 1465 1470 Val Thr Lys Cys Cys Ser Gly Ser Leu Val Glu Arg Arg Pro Cys 1475 1480 1485 Phe Ser Ala Leu Thr Val Asp Glu Thr Tyr Val Pro Lys Glu Phe 1490 1495 1500 Lys Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ser Asp Ile Cys Thr Leu Pro 1505 1510 1515 Glu Lys Glu Lys Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala Leu Ala Glu Leu 1520 1525 1530 Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Ala Glu Gln Leu Lys Thr Val 1535 1540 1545 Met Asp Asp Phe Ala Gln Phe Leu Asp Thr Cys Cys Lys Ala Ala 1550 1555 1560 Asp Lys Asp Thr Cys Phe Ser Thr Glu Gly Pro Asn Leu Val Thr 1565 1570 1575 Arg Ala Lys Asp Ala Leu Ala 1580 1585 <210> 109 <211> 251 <212> PRT <213> Macaca mulatta <400> 109 Met Leu Gly Ala Arg Leu Arg Leu Trp Val Cys Ala Leu Cys Ser Val 1 5 10 15 Cys Ser Met Ser Val Ile Arg Ala Tyr Pro Asn Ala Ser Pro Leu Leu 20 25 30 Gly Ser Ser Trp Gly Gly Leu Ile His Leu Tyr Thr Ala Thr Ala Arg 35 40 45 Asn Ser Tyr His Leu Gln Ile His Lys Asn Gly His Val Asp Gly Ala 50 55 60 Pro His Gln Thr Ile Tyr Ser Ala Leu Met Ile Arg Ser Glu Asp Ala 65 70 75 80 Gly Phe Val Val Ile Thr Gly Val Met Ser Arg Arg Tyr Leu Cys Met 85 90 95 Asp Phe Arg Gly Asn Ile Phe Gly Ser His Tyr Phe Asn Pro Glu Asn 100 105 110 Cys Arg Phe Arg His Trp Thr Leu Glu Asn Gly Tyr Asp Val Tyr His 115 120 125 Ser Pro Gln His His Phe Leu Val Ser Leu Gly Arg Ala Lys Arg Ala 130 135 140 Phe Leu Pro Gly Met Asn Pro Pro Pro Tyr Ser Gln Phe Leu Ser Arg 145 150 155 160 Arg Asn Glu Ile Pro Leu Ile His Phe Asn Thr Pro Arg Pro Arg Arg 165 170 175 His Thr Arg Ser Ala Glu Asp Asp Ser Glu Arg Asp Pro Leu Asn Val 180 185 190 Leu Lys Pro Arg Ala Arg Met Thr Pro Ala Pro Ala Ser Cys Ser Gln 195 200 205 Glu Leu Pro Ser Ala Glu Asp Asn Ser Pro Val Ala Ser Asp Pro Leu 210 215 220 Gly Val Val Arg Gly Gly Arg Val Asn Thr His Ala Gly Gly Thr Gly 225 230 235 240 Pro Glu Ala Cys Arg Pro Phe Pro Lys Phe Ile 245 250 <210> 110 <211> 245 <212> PRT <213> Bos sp. <400> 110 Met Leu Gly Ala Arg Leu Gly Leu Trp Val Cys Thr Leu Ser Cys Val 1 5 10 15 Val Gln Ala Tyr Pro Asn Ser Ser Pro Leu Leu Gly Ser Ser Trp Gly 20 25 30 Gly Leu Thr His Leu Tyr Thr Ala Thr Ala Arg Asn Ser Tyr His Leu 35 40 45 Gln Ile His Gly Asp Gly His Val Asp Gly Ser Pro Gln Gln Thr Val 50 55 60 Tyr Ser Ala Leu Met Ile Arg Ser Glu Asp Ala Gly Phe Val Val Ile 65 70 75 80 Thr Gly Val Met Ser Arg Arg Tyr Leu Cys Met Asp Phe Thr Gly Asn 85 90 95 Ile Phe Gly Ser His His Phe Ser Pro Glu Ser Cys Arg Phe Arg Gln 100 105 110 Arg Thr Leu Glu Asn Gly Tyr Asp Val Tyr His Ser Pro Gln His Arg 115 120 125 Phe Leu Val Ser Leu Gly Arg Ala Lys Arg Ala Phe Leu Pro Gly Thr 130 135 140 Asn Pro Pro Pro Tyr Ala Gln Phe Leu Ser Arg Arg Asn Glu Ile Pro 145 150 155 160 Leu Pro His Phe Ala Ala Thr Ala Arg Pro Arg Arg His Thr Arg Ser 165 170 175 Ala His Asp Ser Gly Asp Pro Leu Ser Val Leu Lys Pro Arg Ala Arg 180 185 190 Ala Thr Pro Val Pro Ala Ala Cys Ser Gln Glu Leu Pro Ser Ala Glu 195 200 205 Asp Ser Gly Pro Ala Ala Ser Asp Pro Leu Gly Val Leu Arg Gly His 210 215 220 Arg Leu Asp Val Arg Ala Gly Ser Ala Gly Ala Glu Arg Cys Arg Pro 225 230 235 240 Phe Pro Gly Phe Ala 245 <210> 111 <211> 251 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 111 Met Leu Gly Thr Cys Leu Arg Leu Leu Val Gly Val Leu Cys Thr Val 1 5 10 15 Cys Ser Leu Gly Thr Ala Arg Ala Tyr Pro Asp Thr Ser Pro Leu Leu 20 25 30 Gly Ser Asn Trp Gly Ser Leu Thr His Leu Tyr Thr Ala Thr Ala Arg 35 40 45 Thr Ser Tyr His Leu Gln Ile His Arg Asp Gly His Val Asp Gly Thr 50 55 60 Pro His Gln Thr Ile Tyr Ser Ala Leu Met Ile Thr Ser Glu Asp Ala 65 70 75 80 Gly Ser Val Val Ile Thr Gly Ala Met Thr Arg Arg Phe Leu Cys Met 85 90 95 Asp Leu His Gly Asn Ile Phe Gly Ser Leu His Phe Ser Pro Glu Asn 100 105 110 Cys Lys Phe Arg Gln Trp Thr Leu Glu Asn Gly Tyr Asp Val Tyr Leu 115 120 125 Ser Gln Lys His His Tyr Leu Val Ser Leu Gly Arg Ala Lys Arg Ile 130 135 140 Phe Gln Pro Gly Thr Asn Pro Pro Pro Phe Ser Gln Phe Leu Ala Arg 145 150 155 160 Arg Asn Glu Val Pro Leu Leu His Phe Tyr Thr Val Arg Pro Arg Arg 165 170 175 His Thr Arg Ser Ala Glu Asp Pro Pro Glu Arg Asp Pro Leu Asn Val 180 185 190 Leu Lys Pro Arg Pro Arg Ala Thr Pro Val Pro Val Ser Cys Ser Arg 195 200 205 Glu Leu Pro Ser Ala Glu Glu Gly Gly Pro Ala Ala Ser Asp Pro Leu 210 215 220 Gly Val Leu Arg Arg Gly Arg Gly Asp Ala Arg Gly Gly Ala Gly Gly 225 230 235 240 Ala Asp Arg Cys Arg Pro Phe Pro Arg Phe Val 245 250 <210> 112 <211> 251 <212> PRT <213> Rattus sp. <400> 112 Met Leu Gly Ala Cys Leu Arg Leu Leu Val Gly Ala Leu Cys Thr Val 1 5 10 15 Cys Ser Leu Gly Thr Ala Arg Ala Tyr Ser Asp Thr Ser Pro Leu Leu 20 25 30 Gly Ser Asn Trp Gly Ser Leu Thr His Leu Tyr Thr Ala Thr Ala Arg 35 40 45 Asn Ser Tyr His Leu Gln Ile His Arg Asp Gly His Val Asp Gly Thr 50 55 60 Pro His Gln Thr Ile Tyr Ser Ala Leu Met Ile Thr Ser Glu Asp Ala 65 70 75 80 Gly Ser Val Val Ile Ile Gly Ala Met Thr Arg Arg Phe Leu Cys Met 85 90 95 Asp Leu Arg Gly Asn Ile Phe Gly Ser Tyr His Phe Ser Pro Glu Asn 100 105 110 Cys Arg Phe Arg Gln Trp Thr Leu Glu Asn Gly Tyr Asp Val Tyr Leu 115 120 125 Ser Pro Lys His His Tyr Leu Val Ser Leu Gly Arg Ser Lys Arg Ile 130 135 140 Phe Gln Pro Gly Thr Asn Pro Pro Pro Phe Ser Gln Phe Leu Ala Arg 145 150 155 160 Arg Asn Glu Val Pro Leu Leu His Phe Tyr Thr Ala Arg Pro Arg Arg 165 170 175 His Thr Arg Ser Ala Glu Asp Pro Pro Glu Arg Asp Pro Leu Asn Val 180 185 190 Leu Lys Pro Arg Pro Arg Ala Thr Pro Ile Pro Val Ser Cys Ser Arg 195 200 205 Glu Leu Pro Ser Ala Glu Glu Gly Gly Pro Ala Ala Ser Asp Pro Leu 210 215 220 Gly Val Leu Arg Arg Gly Arg Gly Asp Ala Arg Arg Gly Ala Gly Gly 225 230 235 240 Thr Asp Arg Cys Arg Pro Phe Pro Arg Phe Val 245 250 <210> 113 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 113 Gly Ser Gly Gly 1 <210> 114 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 114 Leu Lys Glu Ala 1 <210> 115 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic 6xHis tag" <400> 115 His His His His His His 1 5 <210> 116 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 116 Met Pro Ala Ser 1 <210> 117 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 117 Glu Pro Gly Asp 1

Claims (39)

  1. N-말단에서 C-말단으로의 순서로, (a) 약 20개의 아미노산이 C-말단으로부터 결실되고, 임의로 또한 V563 및/또는 K795에서 돌연변이를 갖는 알파 sKlotho; (b) 링커; 및 (c) 임의로 R179, C206 및/또는 C244에서 돌연변이를 갖는 FGF23, 또는 (c) 혈청 알부민을 포함하는 융합 폴리펩티드를 포함하는 조성물.
  2. 제1항에 있어서, (a) 약 20개의 아미노산이 C-말단으로부터 결실된 알파 sKlotho가 V563에서 돌연변이를 갖는 것인 조성물.
  3. 제1항에 있어서, (a) 약 20개의 아미노산이 C-말단으로부터 결실된 알파 sKlotho가 K795에서 돌연변이를 갖는 것인 조성물.
  4. 제1항에 있어서, (a) 약 20개의 아미노산이 C-말단으로부터 결실된 알파 sKlotho가 V563 및 K795에서 돌연변이를 갖는 것인 조성물.
  5. 제1항에 있어서, (a) 약 20개의 아미노산이 C-말단으로부터 결실된 알파 sKlotho가 서열식별번호: 77의 서열을 갖는 것인 조성물.
  6. 제1항에 있어서, (a) 약 20개의 아미노산이 C-말단으로부터 결실된 알파 sKlotho가 서열식별번호: 78의 서열을 갖는 것인 조성물.
  7. 제1항에 있어서, (c) FGF23이 R179에서 돌연변이를 갖는 것인 조성물.
  8. 제1항에 있어서, (c) FGF23이 C206에서 돌연변이를 갖는 것인 조성물.
  9. 제1항에 있어서, (c) FGF23이 C244에서 돌연변이를 갖는 것인 조성물.
  10. 제1항에 있어서, (c) FGF23이 R179에서의 돌연변이 및 C206 또는 C244에서의 돌연변이를 갖는 것인 조성물.
  11. 제1항에 있어서, (c) FGF23이 R179, C206 및 C244에서 돌연변이를 갖는 것인 조성물.
  12. 제1항에 있어서, (c) FGF23이
    Figure pct00038

    의 서열을 갖는 것인 조성물.
  13. 제12항에 있어서, (a) 약 20개의 아미노산이 C-말단으로부터 결실된 알파 sKlotho가 서열식별번호: 77 또는 78의 서열을 갖는 것인 조성물.
  14. 제12항에 있어서, (a) 약 20개의 아미노산이 C-말단으로부터 결실된 알파 sKlotho가 서열식별번호: 77의 서열을 갖는 것인 조성물.
  15. 제12항에 있어서, (a) 약 20개의 아미노산이 C-말단으로부터 결실된 알파 sKlotho가 서열식별번호: 78의 서열을 갖는 것인 조성물.
  16. 제1항에 있어서, 링커가 폴리펩티드 링커인 조성물.
  17. 제18항에 있어서, 폴리펩티드 링커가 서열식별번호: 11, 서열식별번호: 12, 서열식별번호: 13, 서열식별번호: 14, 서열식별번호: 15, 서열식별번호: 16, 서열식별번호: 17, 및 서열식별번호: 18로 이루어진 군으로부터 선택된 링커의 1개 이상의 카피를 포함하는 아미노산 서열을 포함하는 것인 조성물.
  18. 제1항에 있어서, 융합 폴리펩티드가 신호 펩티드를 추가로 포함하는 것인 조성물.
  19. 제1항에 있어서, 융합 폴리펩티드가 서열식별번호: 80 또는 서열식별번호: 82의 아미노산 서열을 포함하는 것인 조성물.
  20. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 제약상 허용되는 담체를 추가로 포함하는 조성물.
  21. 제1항의 융합 폴리펩티드를 코딩하는 서열을 포함하는 핵산.
  22. 제21항의 핵산을 포함하는 숙주 세포.
  23. 제21항의 핵산을 포함하는 벡터.
  24. Klotho-관련 질환의 치료 또는 예방을 필요로 하는 개체에게, N-말단에서 C-말단으로의 순서로, (a) 약 20개의 아미노산이 C-말단으로부터 결실되고, 임의로 또한 V563 및/또는 K795에서 돌연변이를 갖는 알파 sKlotho; (b) 링커; 및 (c) 임의로 R179, C206 및/또는 C244에서 돌연변이를 갖는 FGF23을 포함하는 융합 폴리펩티드를 포함하는 조성물의 치료 유효 용량을 투여하는 단계를 포함하는, Klotho-관련 질환을 치료 또는 예방하는 방법.
  25. Klotho-관련 질환의 치료 또는 예방을 필요로 하는 개체에게 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항의 조성물의 치료 유효 용량을 투여하는 단계를 포함하는, Klotho-관련 질환을 치료 또는 예방하는 방법.
  26. 제24항 또는 제25항에 있어서, Klotho-관련 질환이 연령-관련 병태, 대사 장애, 고인산혈증, 석회증, 만성 신질환, 만성 신부전, 암, 유방암, 및 근육 위축으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  27. 제26항에 있어서, 연령-관련 병태가 근육감소증, 피부 위축, 근육 소모, 뇌 위축, 아테롬성동맥경화증, 동맥경화증, 폐기종, 골다공증, 골관절염, 면역 부전증, 고혈압, 치매, 헌팅톤병, 알츠하이머병, 백내장, 연령-관련 황반 변성, 전립선암, 졸중, 기대 수명 감소, 기억 상실, 주름, 신장 기능 장애, 및 연령-관련 청각 상실로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  28. 제26항에 있어서, 대사 장애가 제II형 당뇨병, 대사 증후군, 고혈당증, 및 비만으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  29. 약 20개의 아미노산이 C-말단으로부터 결실되고, 임의로 또한 V563 및/또는 K795에서 돌연변이를 갖는 알파 sKlotho를 포함하는 조성물.
  30. 제29항에 있어서, 약 20개의 아미노산이 C-말단으로부터 결실된 알파 sKlotho가 V563에서 돌연변이를 갖는 것인 조성물.
  31. 제29항에 있어서, 약 20개의 아미노산이 C-말단으로부터 결실된 알파 sKlotho가 K795에서 돌연변이를 갖는 것인 조성물.
  32. 제29항에 있어서, 약 20개의 아미노산이 C-말단으로부터 결실된 알파 sKlotho가 V563 및 K795에서 돌연변이를 갖는 것인 조성물.
  33. 제29항에 있어서, 약 20개의 아미노산이 C-말단으로부터 결실된 알파 sKlotho가 서열식별번호: 77의 서열을 갖는 것인 조성물.
  34. 제29항에 있어서, 약 20개의 아미노산이 C-말단으로부터 결실된 알파 sKlotho가 서열식별번호: 78의 서열을 갖는 것인 조성물.
  35. Klotho-관련 질환의 치료 또는 예방을 필요로 하는 개체에게 약 20개의 아미노산이 C-말단으로부터 결실되고, 임의로 또한 V563 및/또는 K795에서 돌연변이를 갖는 알파 sKlotho를 포함하는 조성물의 치료 유효 용량을 투여하는 단계를 포함하는, Klotho-관련 질환을 치료 또는 예방하는 방법.
  36. Klotho-관련 질환의 치료 또는 예방을 필요로 하는 개체에게 제29항 내지 제34항 중 어느 한 항의 조성물의 치료 유효 용량을 투여하는 단계를 포함하는, Klotho-관련 질환을 치료 또는 예방하는 방법.
  37. 제35항 또는 제36항에 있어서, Klotho-관련 질환이 연령-관련 병태, 대사 장애, 고인산혈증, 석회증, 만성 신질환, 만성 신부전, 암, 유방암, 및 근육 위축으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  38. 제37항에 있어서, 연령-관련 병태가 근육감소증, 피부 위축, 근육 소모, 뇌 위축, 아테롬성동맥경화증, 동맥경화증, 폐기종, 골다공증, 골관절염, 면역 부전증, 고혈압, 치매, 헌팅톤병, 알츠하이머병, 백내장, 연령-관련 황반 변성, 전립선암, 졸중, 기대 수명 감소, 기억 상실, 주름, 신장 기능 장애, 및 연령-관련 청각 상실로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  39. 제38항에 있어서, 대사 장애가 제II형 당뇨병, 대사 증후군, 고혈당증, 및 비만으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
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FR3031839B1 (fr) 2015-01-19 2020-03-13 Areva Stockage D'energie Systeme electrique comprenant un empilement de cellules electrochimiques et procede de pilotage de ce systeme
US10632180B2 (en) 2015-02-06 2020-04-28 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for improved cognition
KR20230093531A (ko) * 2016-11-22 2023-06-27 클로토 테라퓨틱스, 아이엔씨. 신규한 재조합 클로토 단백질 및 이를 수반하는 조성물 및 방법
US11365228B2 (en) 2017-07-06 2022-06-21 Yale University Mutant FGF21 polypeptide compositions
EP3724230A4 (en) * 2017-12-13 2022-01-19 Yale University COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING OR PREVENTING ENDOCRINE FGF RELATED DISEASES
US20210054355A1 (en) * 2018-01-12 2021-02-25 New York University Soluble alpha-klotho proteins, protein fragments, and uses thereof
CA3120701A1 (en) * 2018-11-21 2020-05-28 University Of Pittsburgh - Of The Commonwealth System Of Higher Education Methods and materials for reducing age-related striated muscle and cognitive decline
CN112695049A (zh) * 2020-08-20 2021-04-23 山东兴瑞生物科技有限公司 修饰间充质干细胞的融合基因、质粒、修饰得到干细胞及制备方法
CN112915192B (zh) * 2021-03-05 2022-10-25 南方医科大学南方医院 Kp-1在制备治疗慢性肝病的药物中的用途
CN112915193B (zh) * 2021-03-05 2022-09-13 南方医科大学南方医院 Kp-1在制备治疗慢性肺病的药物中的用途
WO2023035014A2 (en) * 2021-09-03 2023-03-09 The Uab Research Foundation Uab Osp Fibroblast growth factor 23 modulating compounds

Family Cites Families (50)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL71691A (en) 1984-04-27 1991-04-15 Yeda Res & Dev Production of interferon-ypsilon
US5128326A (en) 1984-12-06 1992-07-07 Biomatrix, Inc. Drug delivery systems based on hyaluronans derivatives thereof and their salts and methods of producing same
US5266561A (en) 1988-01-11 1993-11-30 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Treatment of type 2 diabetes mellitus
SE509359C2 (sv) * 1989-08-01 1999-01-18 Cemu Bioteknik Ab Användning av stabiliserade protein- eller peptidkonjugat för framställning av ett läkemedel
CA2071867A1 (en) 1989-11-06 1991-05-07 Edith Mathiowitz Method for producing protein microspheres
AU646877B2 (en) 1990-06-15 1994-03-10 Scios Nova Inc. Transgenic non-human mammal displaying the amyloid-forming pathology of alzheimer's disease
US5408038A (en) 1991-10-09 1995-04-18 The Scripps Research Institute Nonnatural apolipoprotein B-100 peptides and apolipoprotein B-100-apolipoprotein A-I fusion peptides
FR2686899B1 (fr) * 1992-01-31 1995-09-01 Rhone Poulenc Rorer Sa Nouveaux polypeptides biologiquement actifs, leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant.
US5912015A (en) 1992-03-12 1999-06-15 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Modulated release from biocompatible polymers
US5420112A (en) 1992-06-12 1995-05-30 Lewis; Michael E. Prevention and treatment of peripheral neuropathy
US5541094A (en) 1992-09-25 1996-07-30 E. I. Du Pont De Nemours And Company Glyoxylic acid/aminomethylphosphonic acid mixtures prepared using a microbial transformant
US5877399A (en) 1994-01-27 1999-03-02 Johns Hopkins University Transgenic mice expressing APP-Swedish mutation develop progressive neurologic disease
US6187992B1 (en) 1994-12-05 2001-02-13 Merck & Co., Inc. Transgenic mouse having a disrupted amyloid precursor protein gene
CA2230494A1 (en) 1995-08-31 1997-03-06 Alkermes Controlled Therapeutics Inc. Composition for sustained release of an agent
US6194177B1 (en) 1996-02-20 2001-02-27 Applied Research Systems Ars Holding N.V. DNA encoding a hybrid heterodimeric protein
EP0906090A1 (en) 1996-03-15 1999-04-07 Somerset Pharmaceuticals, Inc. Method for preventing and treating peripheral neurophathy by administering selegiline
US6358752B1 (en) 1996-09-27 2002-03-19 Cornell Research Foundation, Inc. Liposome-enhanced test device and method
CN1167795C (zh) 1996-12-26 2004-09-22 协和发酵工业株式会社 肽、dna及抗体
US6127598A (en) 1997-07-25 2000-10-03 The Regents Of The University Of California NKX-2.2 and NKX-6.1 transgenic mouse models for diabetes, depression, and obesity
US5989463A (en) 1997-09-24 1999-11-23 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Methods for fabricating polymer-based controlled release devices
SE512663C2 (sv) 1997-10-23 2000-04-17 Biogram Ab Inkapslingsförfarande för aktiv substans i en bionedbrytbar polymer
IL138668A0 (en) 1998-04-03 2001-10-31 Phylos Inc Addressable protein arrays
US7060479B2 (en) 1999-12-08 2006-06-13 Serono Genetics Institute, S.A. Full-length human cDNAs encoding potentially secreted proteins
US20030055231A1 (en) 1998-10-28 2003-03-20 Jian Ni 12 human secreted proteins
WO2000065366A1 (en) 1999-04-22 2000-11-02 Lipomed, Inc. Nmr-method for determining the risk of developing type 2 diabetes
JP2003503793A (ja) 1999-06-30 2003-01-28 マイクロソフト コーポレイション 共用システムファイルを保護するシステム及び方法
US6569832B1 (en) 1999-11-12 2003-05-27 Novo Nordisk A/S Inhibition of beta cell degeneration
US6716626B1 (en) 1999-11-18 2004-04-06 Chiron Corporation Human FGF-21 nucleic acids
US6406853B1 (en) 1999-12-23 2002-06-18 The Regents Of The University Of California Interventions to mimic the effects of calorie restriction
AU3976701A (en) 2000-02-15 2001-08-27 Amgen, Inc. Fibroblast growth factor-23 molecules and uses thereof
US20060160181A1 (en) 2000-02-15 2006-07-20 Amgen Inc. Fibroblast Growth Factor-23 molecules and uses thereof
JP2006238894A (ja) 2000-02-15 2006-09-14 Amgen Inc 線維芽細胞成長因子−２３分子およびその使用
US20020082205A1 (en) 2000-03-08 2002-06-27 Nobuyuki Itoh Human FGF-23 gene and gene expression products
US7223563B2 (en) 2000-07-19 2007-05-29 Advanced Research And Technology Institute Fibroblast growth factor (FGF23) nucleic acids
AU2002243750A1 (en) 2001-01-30 2002-08-12 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Novel nucleic acid and polypeptide molecules
US7588757B2 (en) 2001-03-14 2009-09-15 Genzyme Corporation Methods of treating Parkinson's disease using recombinant adeno-associated virus virions
JP2004527253A (ja) 2001-04-26 2004-09-09 ジーンプロット・インコーポレイテッド 線維芽細胞成長因子−２３分子およびその使用
EP1327443A1 (en) 2001-12-21 2003-07-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Therapeutic or preventing agent for the diseases caused by a decrease in the expression level of the klotho protein
US20050004348A1 (en) 2002-12-23 2005-01-06 Miyamoto Ken-Ichi Novel type II Na/Pi cotransporters and type II Na/Pi cotransporter expression regulatory factors
JP2007531707A (ja) 2003-10-15 2007-11-08 ピーディーエル バイオファーマ， インコーポレイテッド ＩＧの重鎖定常領域の位置２５０、３１４および／または４２８の変異誘発によるＦｃ融合タンパク質血清半減期の改変
US8420088B2 (en) 2008-01-28 2013-04-16 Novartis Ag Methods and compositions using FGF23 fusion polypeptides
US20170233446A1 (en) 2008-01-28 2017-08-17 Novartis Ag Methods and compositions using klotho-fgf fusion polypeptides
TW200936156A (en) * 2008-01-28 2009-09-01 Novartis Ag Methods and compositions using Klotho-FGF fusion polypeptides
US20110015345A1 (en) 2008-03-19 2011-01-20 Ambrx, Inc. Modified FGF-23 Polypeptides and Their Uses
EP2358749B1 (en) 2008-10-10 2018-07-18 Amgen, Inc Fgf21 mutants and uses thereof
US8461111B2 (en) 2009-05-20 2013-06-11 Florida State University Research Foundation Fibroblast growth factor mutants having improved functional half-life and methods of their use
US20110195077A1 (en) 2010-01-29 2011-08-11 Novartis Ag Methods and compositions using fgf23 fusion ppolypeptides
WO2013027191A1 (en) * 2011-08-25 2013-02-28 Novartis Ag Methods and compositions using fgf23 fusion polypeptides
DK2583680T1 (da) 2011-10-21 2015-01-19 Abbvie Inc Mono (PSI-7977) eller kombinationsbehandling af DAA til anvendelse ved behandling af HCV
US10588980B2 (en) 2014-06-23 2020-03-17 Novartis Ag Fatty acids and their use in conjugation to biomolecules

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