KR20170016921A

KR20170016921A - 항증식성 화합물로서 1h-1, 8-나프티리딘-2-원

Info

Publication number: KR20170016921A
Application number: KR1020177000113A
Authority: KR
Inventors: 아말라 콤펠라; 베누고팔라 크리쉬나 감파; 스리니파술루 강가나모니; 바라크리시나 레디 시리기레디; 칼리 사티야 부장가 라오 아디브하틀라; 벤카이아 쵸다리 난나파네니
Original assignee: 낫코 파마 리미티드
Priority date: 2014-06-06
Filing date: 2014-12-15
Publication date: 2017-02-14
Also published as: EP3152205A1; HK1231469A1; CL2016003102A1; JP2017516867A; MX2016015350A; CA2950250A1; BR112016028674A2; PH12016502432A1; US9765072B2; IL249118A0; WO2015186137A1; US20170349588A1; US10047088B2; AU2014396394A1; AP2016009604A0; CN106573929A; MA39524A1; SG11201610149YA; EA201692371A1; US20170114057A1

Abstract

본 발명은 화학식(I)의 신규한 항증식성 1H-1, 8-나프티리딘-2-원 또는 그것의 약제학적으로 허용가능한 염, 이의 제조 방법 및 온열 동물에서 타이로신 키나제의 억제와 관련된 장애의 치료에서의 용도에 관한 것이다.

화학식(I)
(상기 식에서,
다양한 치환기는 본 명세서에 정의된 바와 같다)
상기 화합물은 imatinib 유도 약물 내성을 극복할 수 있다.

Description

항증식성 화합물로서 1H-1, 8-나프티리딘-2-원{1H-1, 8-NAPHTHYRIDIN-2-ONES AS ANTIPROLIFERATIVE COMPOUNDS}

화학식(I)

(상기 식에서,

다양한 치환기는 본 명세서에 정의된 바와 같다)

단백질 타이로신 키나제는 심각한 장애의 조절, 특히 증식성 장애의 관리에서 중요한 역할을 하는 단백질의 패밀리이다. 타이로신 키나제 활성의 탈조절은 성장, 증식 및 생존의 정상적인 생리학적 제약들을 피하는 암세포에 의해 주요 기전으로 떠올랐다. 타이로신 키나제 탈조절을 이끄는 중요한 기전은 돌연변이이다. 만성 골수성 백혈병(CML)은 만성 골수이형성증 조혈 줄기세포 장애 증후군이다. CML의 95%는 필라델피아 크로모좀 중 크로모좀-9와 크로모좀-22 사이의 상호전좌(reciprocal translocation)에 의해 발생된다. 전좌상의 크로모좀-22의 BCR(Breakpoint cluster region) 염기서열은 크로모좀-9의 c-ABL 타이로신 키나제와 나란히 존재한다. 융합 유전자는 c-ABL의 첫번째 엑손이 927 또는 902 아미노산을 암호화하는, BCR 염기서열에 의해 치환되어 있는 210 KDa 돌연변이 단백질을 생산한다. c-ABL의 엑손 2-11에 융합된 엑손 1로부터 BCR 염기서열을 함유하는 185 KDa의 다른 BCR-ABL 융합 단백질은 성인 모든 환자의 10%에서 발견된다. BCR-ABL 키메라 유전자 산물은 그것의 보통의 대응물질(counterpart) 보다 몇 배 더 높은 타이로신 키나제 활성을 가지며 질환의 표현형과 상호관련 있다.

타이로신 키나제는 암 치료를 위한 가능한 표적으로 주목받고 있는 모든 종양 단백질의 중요한 부분을 형성한다. 항암 약물 Gleevec/ Glivec/ Imatinib Mesylate(Novartis STI571)는 CML 및 c-kit 양성 전이성 GIST의 치료를 위한 블록 버스터 약물이다. Gleevec은 구성적 증식성 신호전달에 관여하는, BCR-ABL 융합 단백질의 키나제 활성을 선택적이고 효과적으로 억제한다. Imatinib는 지속된 완화를 위한 시간 이상의 전망 및 질환 진행 및 전환을 완전히 억제하거나 제거할 가능성을 개선시켜 치료적으로 매우 유효하나, 일부 환자들은 Imatinib의 효과를 보지 못하거나 최적으로 반응하지 못한다. 질환 박멸은 Imatinib로 가능하지 않을 수도 있다.

내성의 구별된 패턴들이 Imatinib, 및 Imatinib 결합을 바꾸거나 Imatinib에 접근하기 힘든 키나제 형태를 선호하는 Abl 키나제 돌연변이의 사용으로 진화되어 왔고, Dasatinib 및 Nilotinib 이용가능은 Abl 키나제 억제제를 교체하여 만성 단계에서 1차 실패 또는 원하는 내성을 갖는 대다수의 환자에서 혈액학 및 세포 유전학적 완화를 회복시킨다. 후기 질환 및 필라델피아 크로모좀(Ph)+ ALL에서, 반응은 더욱 제한되고 재발이 흔하다.

ABL 키나제 돌연변이는 일반적으로 4개의 주요 카테고리로 분류되며 특정 수의 아미노산 잔기: ATP 결합 루프(p-루프), 특히 Y253 및 E255 돌연변이; T315 돌연변이; M351 돌연변이; 및 활성 루프(a-루프), 특히 H396 돌연변이와 관련된다. ABL 키나제의 촉매 영역의 결정 구조를 갖는 Imatinib 및 다른 키나제 억제제에 대한 모델링은 돌연변이가 중요한 약물 접촉 포인트를 방해하거나, 약물 결합을 감소시키거나 불가능하게 하는 Abl 키나제의 형태를 유도하거나 야기할 수 있음을 제시한다. 현재 용어 "게이트키퍼(gatekeeper)" 위치, 트레오닌 315에서의 돌연변이는 Imatinib 뿐만 아니라 "2 세대" Abl 키나제 억제제 Nilotinib 및 Dasatinib에 대한 내성을 부여한다.

따라서, T315I 돌연변이를 갖는 환자의 치료와 관련하여 미충족 욕구가 존재한다. Omacetaxine(homoharringtonine)은 2 또는 그 이상의 타이로신 키나제 억제제(TKI)에 대한 내성 및/또는 과민증을 갖는 급성기 또는 가속기 만성 골수성 백혈병(CML)을 갖는 성인 환자의 치료용으로 FDA에 의해 승인받았다. 그러나, 상기는 작용이 비-특이적 기전을 갖는 피하 주사로 투여된다. 다른 약물 후보는 rebastinib(WO 2008/046003) 및 Ponatinib(WO 2007/075869)를 포함한다. Ponatinib(ICLUSIG)는 구강 약물 후보로 승인받았으며, 만성 골수성 백혈병(CML) 및 필라델피아 크로모좀-양성(Ph+) 급성 림프구성 백혈병(ALL)의 치료용으로 Ariad 약제로 개발되었다. Ponatinib는 효과적인 치료가 존재하지 않는, 특히 T315I 돌연변이를 포함하는 현존 타이로신 키나제 억제제로의 치료에 내성일 부여하는 돌연변이가 내제된 native BCR-ABL뿐만 아니라 그것의 이소폼도 표적으로 한다. 그러나 식품 의약품 안전처는 "생명-위협 혈전 및 혈관의 심각한 축소증의 위험"을 이유로 2013년 미국내 약물의 판매를 일시적으로 중단시켰다. 상기 현탁액은 개정된 처방 정보, 새로운 "블랙 박스 경구" 및 "위험 평가 및 미티게이션 전략"으로 추후에 부분적으로 풀렸다.

따라서, 생명-위협 혈전 및 심각한 혈관 감소의 위험을 감소시키는 현존 치료 보다 구강에서 유효하고, 안전하며 T315I 돌연변이를 포함하는 키나제 돌연변이에 효과적인 더욱 새롭고 선택적인 타이로신 키나제 억제제에 대한 요구가 존재한다. 본 발명은 Abl 타이로신 키나제 및 T315I 돌연변이를 포함하는 그들의 돌연변이 형태의 강력한 억제제인 새로운 lH-1,8-나프티리딘-2-원 패밀리에 관한 것이다. 본 발명의 화합물은 현존 약물 생성물이 갖는 결함을 배제시켰다.

본 발명은 화학식(I)의 화합물 또는 그것의 약제학적으로 허용가능한 염에 관한 것으로,

화학식(I)

상기 식에서,

L1은 불포화 탄소 결합; 바람직하기는 탄소-탄소 삼중 결합 또는 탄소-탄소 이중 결합으로부터 선택되는 링커이고;

L2는 NHC(O)-, C(0)NH-로부터 선택되는 링커이고;

고리 A는 치환 5 또는 6-원 아릴 또는 헤테로아릴 고리를 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.

고리 A기의 예시적인 예로는 하기를 포함한다:

화학식 I의 화합물의 비제한적인 예는 하기의 구조식을 가질 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다:

화학식 I (a-u)의 화합물

본 발명은 화학식(I)의 화합물의 제조 방법으로, 6-치환 나프티리딘-2-원(II)와 아이도벤즈아미드(III)의 팔라듐 촉매화된 소노가시라 커플링 반응을 제공한다. 상기 반응식은 하기와 같다:

반응식-I

공지된 전환을 기초로 하여, 2개의 중요한 중간체 II 및 III를 제조하기 위한 여러 예시적인 전체 합성 방법은 하기의 반응식 2 내지 5에 예시되어 있다.

반응식-2는 중간체-II의 제조 방법을 나타낸다(제1세트):

반응식-3은 중간체-II의 제조 방법을 나타낸다(제2세트):

반응식-4는 중간체-III 및 화학식(I)의 화합물의 제조 방법을 나타낸다:

화학식(I)의 화합물은 상기 반응식에 따라 제조될 수 있다. 화학식(I)의 화합물은 그것의 N-옥사이드, 또는 약제학적으로 허용가능한 염으로 전환될 수 있다. 예를 들면, 적합한 무기산은 염산, 황산, 또는 인산과 같은 할로겐 산을 포함한다. 적합한 유기산은 예를 들면, 카르복시산, 포스포닌산, 술폰산 또는 술파민산, 예를 들면, 아세트산, 프로피오닌산, 옥타노인산, 데카노인산, 도데카노인산, 글리콜린산, 락트산, 푸마린산, 숙시닌산, 아디핀산, 피메린산, 수베린산, 아제라인산, 말린산, 타르타르산, 시트르산, 옥살산, 아르기닌 또는 리신과 같은 아미노산, 말레인산, 하이드록시말레인산, 메틸말레인산, 사이클로헥산카르복실산, 아다만탄카르복실산, 벤조인산, -페녹시 벤조인산, 2-아세톡시 벤조인산, 살리시린산, 4-아미노살리시린산, 프탈린산, 페닐아세트산, 만데린산, 시나민산, 메탄- 또는 에탄- 술폰산, 2-하이드록시에탄술폰산, 에탄-1,2-디술폰산, 벤젠술폰산, 2-나프탈렌술폰산, 1,5-나프탈렌-디술폰산, 2-, 3- 또는 4-메틸벤젠술폰산, 메틸술푸린산, 에틸푸린산, 도데실술푸린산, N-시클로헥실술라민산, N-메틸-, N-에틸 또는 N-프로필-술하민산, 또는 아스코르빈산과 같은 다른 유기 프로토인산을 포함한다.

분리 또는 정제 목적을 위하여, 약제학적으로 불허용가능한 염, 예를 들면 피크레이트 또는 퍼클로레이트를 사용하는 것도 가능하다. 치료적 사용을 위해서는, 약제학적으로 허용가능한 염 또는 (약제학적 제제의 형태로 적용가능한) 유리 화합물 만을 사용하는 것이 바람직하다.

화학식(I)의 화합물 또는 그것의 N-옥사이드 또는 약제학적으로 허용가능한 염은 인간 세포를 포함하는, 포유류 세포에서 성장 조절 또는 변형에 관여하는, 모든 수용체 및 비-수용체 타이로신 키나제가 변화되는 것을 억제할 수 있다. 상기 수용체 타이로신 키나제는 EGF 패밀리의 키나제, 예를 들면, ErbB2 키나제(HER-2), ErbB3 키나제, ErbB4 키나제; 인슐린-유사 성장 인자 수용체 키나제(IGF-1 키나제), 특히 PDGF-α 및 PDGF-β 수용체 키나제와 같은 PDGF-수용체 타이로신 키나제 패밀리 멤버, JAK-2, CSF-1 -수용체 키나제, 포르파티딜이노시톨 3-키나제(PI-3-키나제 또는 PI3K), AKT, CDK, mTOR, Kit-수용체 키나제, Flt-3, Flt-4, FGFR-1, FGFR-3, FGFR-4, c-Met, RON, c-Ret, ALK 및 VEGF-수용체 키나제를 포함할 수 있다. 상기 비-수용체 타이로신 키나제는 Abl/ Bcr-abl 키나제와 같은 키나제, Arg, Src 패밀리의 키나제, c-Src 키나제, c-Yes. Lck, Lyn 및 Fyn를 포함할 수 있다. 본 발명의 화합물은 특히 돌연변이 형태; Lyn 및 Lck 키나제를 포함하는, Abl/Bcr-Abl 키나제를 억제하는 것으로 발견되었다. 상기 화학식(I)의 화합물 또는 그것의 N-옥사이드 또는 약제학적으로 허용가능한 염은 키나제의 P-루프의 돌연변이, 즉 L284V, G250E, Q225H, Y253F & E255K; 키나제의 C-헬릭스 돌연변이, 즉 D276G 및 E279H; 키나제의 ATP 결합 영역 돌연변이, 즉 V299L, T315I 및 F317L; 키나제의 SH2-접촉 돌연변이, 즉 M351T; 키나제의 기질 결합 영역 돌연변이, 즉 F359V; 키나제의 A-루프 돌연변이, 즉 L384M, H395P, H396R 및 G398R; 및 키나제의 C-말단 돌연변이, 즉 F486S를 포함하는 Abl/Bcr-Abl 키나제의 돌연변이 형태의 변화를 억제한다.

본 발명의 화합물은 abl/Bcr-Abl 키나제의 중요한 변이변이, 즉 Q252H, Y253F, M351T, H396P를 억제할 수 있고, 특히 화학식(I)의 화합물은 돌변이된 키나제, 즉 T3151 변이체의 높은 내성 형태를 억제한다.

본 발명의 화합물은 또한 타이로신 키나제 의존성 신생물 질환 또는 장애, 특히 만성 골수성 백혈병(CML), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 급성 골수성 백혈병(AML), 골수형성이상 증후군, 흑색종, 생식 세포 종양, 위장관 기질 종양(GIST), 비-소세포 폐암(NSCLC), 비만세포종, 신경모세포종, 교모세포종, 성상세포종, 간세포암, 신장암, 유방암, 전신성 경화증, 전립성 및 대장암 및 다른 고형 종양, 당뇨병 관해의 치료 방법에 관한 것이다.

본 발명은 또한 단백질 키나제 활성의 억제에 반응하는 신생물 질환의 치료 방법에 관한 것으로, 화학식(I)의 화합물 또는 그것의 N-옥사이드 또는 약제학적으로 허용가능한 염을 상기 질환에 유효한 양으로 그러한 치료가 요구되는 온혈 동물에 투여하는 것을 포함한다.

특히 본 발명은 전술한 타이로신 키나제, 특히 Abl/Bcr-Abl 타이로신 키나제 및 그것의 하나 또는 그 이상의 중증 돌연변이 형태의 억제에 반응하는, 장애의 병인과 무관한, 증식성 장애, 특히 백혈병의 치료 방법에 관한 것이다. 상기 치료는 화학식(I)의 화합물 또는 그것의 N-옥사이드 또는 약제학적으로 허용가능한 염을 상기 질환에 유효한 양으로 그러한 치료가 요구되는 온혈 동물에 투여하는 것을 포함한다.

본 발명의 화합물의 생물학적 효능은 BCR-abl 양성 세포주 K562 및 돌연변이 세포주 Baf3/T315i, M351T, E255K 및 WT에서의 인비트로 효능 평가; 마트리겔 침습 검정; NRC21T의 MTD 측정; 누드 마우스내 T315I 유도된 종양에서 NRC21T의 안타고니즘 연구; SCID 마우스 내 NRC21T의 생존 시간에 대한 연구를 통해 확인되었다.

본 연구를 기초로, 본 발명에 따른 화학식(I)의 화합물은 TK에 의존적인 장애, 특히 증식성 질환에 대한 치료적 효능을 나타낸다.

본 발명은 또한 화학식(I)의 화합물 또는 그것의 N-옥사이드 또는 약제학적으로 허용가능한 염을 유효 양으로, 특히 국소, 장관, 예를 들면 구강 또는 직장, 또는 모체 투여에 적합하고 무기 또는 유기, 고체 또는 액체일 수 있는, 약제학적으로 허용가능한 담체와 함께 활성 성분을, 전술한 질환 중 하나의 예방 또는 치료에 유효한 양으로 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 활성 성분(들) 외에, 본 발명의 약제학적 조성물은 하나 또는 그 이상의 첨가제 또는 보조제를 함유할 수 있다. 상기 첨가제의 선택 및 사용량은 경험을 기초로 제형 과학자에 의해 본 분야에서의 표준 절차 및 관련 작업을 고려하여 용이하게 결정될 수 있다.

희석은 고체의 약제학적 조성물의 부피를 증가시키고, 환자 및 간병인이 조성물을 함유하는 약제의 투여 형태를 다루기 용이하게 만들 수 있다. 고체 조성물용 희석제는 예를 들면, 미정질 셀룰로오스(예를 들면, Avicel®), 초미립 셀룰로오스, 락토오스, 전분, 프리젤라티나이즈드 전분, 탄산 칼슘, 황산 칼슘, 당, 덱스트레이트, 덱스트린, 덱스트로스, 제2 인산수소칼슘, 제3 인산칼슘, 카올린, 탄산 마그네슘, 산화 마그네슘, 말토덱스트린, 만니톨, 폴리메타크릴레이트(예를 들면, Eudragit®), 염화 칼륨, 분말 셀룰로오스, 염화 나트륨, 솔비톨 및 털크를 포함한다.

캡슐과 같은 투여 형태로 압축되는 고체의 약제학적 조성물은 압축 이후에 활성 성분 및 다른 첨가제와의 결합을 도와주는 첨가제를 포함할 수 있다. 고체의 약제학적 조성물용 결합제는 아카시아, 알긴산, 카르보머(예를 들면, 카르보폴), 카르복실메틸셀룰로오스 나트륨, 덱스트린, 에틸 셀룰로오스, 젤라틴, 구아 검, 하이드로제네이티드 식물성 오일, 하이드록시에틸 셀룰로오스, 하이드록시프로필 셀룰루오스(예를 들면, Klucel®), 하이드록시프로필 메틸 셀룰로오스(예를 들면, Methocel®), 액체 글루코스, 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 말토덱스트린, 메틸셀룰로오스, 폴리메틸아크릴레이트, 포비돈(예를 들면, Kollidon®, Plasdone®), 프리젤라티나이즈드 전분, 나트륨 알기네이트 및 전분을 포함한다.

환자의 위내 압축된 고체의 약제학적 조성물의 용해율은 조성물에 붕해제의 첨가에 의해 증가될 수 있다. 붕해제는 알긴산, 카복시메틸셀룰로오스 칼슘, 카르복시메틸셀룰로오스 나트륨(예를 들면, Ac-Di-Sol®, Primellose®), 콜로이달 실리콘 다이옥사이드, 크로스카르멜로스 나트륨, 크로스포비돈(예를 들면, Kollidon®, Polyplasdone®), 구아검, 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴라크리린 칼륨, 분말 셀룰로오스, 프리젤라티나이즈드 전분, 나트륨 알기네이트, 나트륨 전분 글리콜레이트(예를 들면, Explotab®) 및 전분을 포함한다.

유동화제는 비-압축된 고체의 조성물의 유동성을 증가시키고 투여의 정확성을 개선시키기 위하여 첨가될 수 있다. 유동화제로 기능을 할 수 있는 첨가제는 콜로이달 실리콘 다이옥사이드, 마그네슘 트리실리케이트, 분말 셀룰로오스, 전분, 탈크 및 제3인산칼슘을 포함한다.

캡슐과 같은 투여 형태가 분말 조성물의 압축에 의해 형성될 때, 상기 조성물은 펀치 또는 다이에 의해 압축될 수 있다. 몇몇 첨가제 및 활성 성분은 펀치 및 다이의 표면에 부착되는 경향을 나타낼 수 있고, 이로 인해 피팅 및 그밖에 표면 이상을 갖는 제품을 제조될 수 있다. 윤활제는 접착력을 줄이고 다이로부터 제품의 이탈을 용이하게 위하여 조성물에 첨가될 수 있다. 상기 윤활제는 마그네슘 스테아레이트, 칼슘 스테아레이트, 글리세릴 모노스테아레이트, 글리세릴 팔미토스테아레이트, 하이드로제네이티드 캐스터 오일, 하이드로제네이티드 식물성 오일, 미네랄 오일, 폴리에틸렌 글리콜, 나트륨 벤조에이트, 나트륨 라우릴 설페이트, 나트륨 스테아릴 푸마레이트, 스테아르산, 탈크 및 아연 스테아레이트를 포함한다.

풍미제 및 풍미 강화제는 투여 형태를 환자에게 더욱 쾌미하게 만든다. 본 발명의 조성물에 포함될 수 있는 약제학적 제품용 통상의 풍미제 및 풍미 강화제는 말톨, 바닐린, 에틸 바닐린, 멘톨, 시트린산, 푸마린산, 에틸 말톨 및 타르타르산을 포함한다. 고체의 조성물은 또한 그들의 형상을 개선시키고 및/또는 환자 식별을 용이하게 하기 위하여 임의의 약제학적으로 허용가능한 색료를 사용하여 염색될 수 있다.

도 1은 NRC 21T에 대한 x-ray 분말 회절 패턴(XRPD)을 나타낸다.
도 2는 NRC 21T 염산염에 대한 x-ray 분말 회절 패턴(XRPD)을 나타낸다.
도 3은 다양한 백혈병 세포주에서 NRC 21T의 항-증식 활성을 나타낸다.
도 4는 Baf3/T315I 세포주에서 NRC 21T의 항-침습 특성을 나타낸다.
도 5는 누드 마우스의 T315I 유도된 종양에서 NRC 21T의 안타고니즘의 연구 결과를 나타낸다. 도 5A는 누드 마우스의 T315I 유도된 종양에서 NRC 21T의 안타고니즘의 연구 결과를 나타낸다(종양의 사진). 도 5B는 누드 마우스의 T315I 유도된 종양에서 NRC 21T의 안타고니즘의 연구 결과를 나타낸다(비장의 사진).
도 6A는 NRC 21T의 생존 시간 연구를 나타낸다.
도 6B는 생존 시간 연구 하의 비장의 사진을 나타낸다.

본 발명의 상세설명은 하기의 실시예에 제공되어 있으며, 이는 오직 예시적인 목적을 위해 제공되어 있는 것이고 임의의 방법으로 본 발명의 범위를 제한하려고 의도한 것은 아니다.

실시예 :

실시예 -1

4- 메틸 -N-[4-[(4- 메틸피레라진 -l-일) 메틸 ]-3-( 트리플루오로메틸 )페닐]-3-[2-(7-옥소-8H-l,8-나프티리딘-3-일)에티닐]벤즈아미드(Development code: NRC21T)

1.1 2 -아미노-5- 브로모 -3- 아이오도 피리딘

DMF 내 2-아미노-5-브로모 피리딘 용액에 트리플루오로 아세트산(1.1 당량)을 실온에서 첨가한 다음 N-아이오도 숙신이미드(1.1 당량)를 첨가하고, 상기 반응 혼합물을 180분 동안 50℃에서 가열하였다. 반응의 종료 후, 반응물을 실온까지 냉각시키고 반응 혼합물을 물에 첨가함으로써 생성물을 침전시켰다. 나트륨 티오설페이트 및 IN NaOH를 이용한 중화반응 이후에, 90%의 수율로 브라운 고체로서 상기 본 실시예에 따른 화합물을 여과하여 수거하였다.

1.2 (E)- 터트 -부틸 3-(2-아미노-5- 브로모피리딘 -3-일) 아크릴레이트

2-아미노-5-브로모-3-아이오도 피리딘(1 당량), 터트-부틸 아크릴레이트(2 당량), 및 이소프로판올(2 당량)에 에틸 니트레이트(3 당량), 프로피오니트릴(10 당량), 및 그 다음 DMF(10 당량)을 첨가하였다. 상기 용액을 15분 동안 질소 가스로 탈-산화시켰다. 상기 혼합물을 Pd(OAc)2(O.l 당량) 및 P(0-tol)3 (0.2 당량)로 처리하고 16시간 동안 90℃에서 가열시킨 후 실리카 겔 패드를 통해 여과하였다. 상기 여과액을 농축시키고 물로 희석한 후 에틸 아세테에트로 추출한 다음 유기층을 60℃ 이하의 진공에서 농축시켰다. 용매로서 헥산을 이용하여 본 실시예에 따른 화합물을 여과하여 수거하였다(70% 수율). ESI MS m/z 299(100%).

1.3 6 - 브로모 - lH -l, 8- 나프티리딘 -2-원

무수 메탄올 내 (E)-터트-부틸 3-(2-아미노-5-브로모피리딘-3-일) 아크릴레이트(1 당량) 용액을 질소 가스 대기 하에 나트륨 메타옥사이드(4.9M, 5 당량)로 처리하였다. 상기 용액을 3시간 동안 환류 온도에서 가열한 후 실온까지 냉각시켰다. 상기 혼합물을 얼음 수조에서 냉각시키고 급속 교반 하에 물로 처리하여 침전물을 생성하였다. 고체를 여과시키고 물로 세척하였다. 감속 하에 건조시켜 오프-화이트 고체를 생성하였다(80% 수율). ESI MS m/z 225(100%).

1.4 6 -(2- 트리메틸실릴에티닐 )- lH -l, 8- 나프티리딘 -2-원

프로피오니트릴 내 6-브로모-lH-l, 8-나프티리딘-2-원(1 당량), Pd(PPh₃)2C1₂(0.1 당량), CuI(0.15 당량), (i-Pr)₂EtN(4 당량)의 혼합물을 15분 동안 질소 가스로 탈산화시켰다. 그 다음, 트리메틸 시릴 아세틸렌(2 당량)을 첨가하고 10시간 동안 90℃에서 가열하였다. 반응 이후에, 고형물을 실온에서 실리카 겔 패드를 통해 여과하였다. 상기 여과액을 농축시키고 0-5℃에서 프로피오니트릴 용매를 이용하여 본 실시예에 따른 화합물을 여과하여 수거하였다(60% 수율).

1.5 6 - 에티닐 - lH -l, 8- 나프티리딘 -2-원

THF(lO 배) 내 6-(2-트리메틸실릴에티닐)-lH-l, 8-나프티리딘-2-원(1 당량)의 용액에 THF(1.1 당량) 내 1M TBAF 용액을 질소 가스 대기 하에 15분 동안 천천히 첨가하고 15분 동안 교반하였다. 물로 반응물을 급랭시켜 반응 형성을 관찰하였다. 생성물을 0-5℃에서 여과하여 수거하였다. 추가 정제를 위하여, 아세톤 용매에서 재결정을 수행하였다(80% 수율).

1.6 4 -니트로-2-( 트리플루오로메틸 ) 벤조인산 (SC1)

질소 가스 대기 하에, 2-트리플루오로메틸 벤조인산(1 당량) 및 Conc.H₂S0₄(22 당량)의 기계 교반 혼합물을 0-5℃까지 얼음 수조에서 냉각시켰다. 그 다음, 발연 질산(9.8 당량)을 60분 동안 0-5℃에서 점적하였다. 얼음 수조를 제거하고 실온에서 120분 동안 계속 교반하였다. 반응 종료 이후에, 반응 혼합물을 얼음에 붓고 실온에서 60분 동안 교반하였다. 현탁액을 여과하고, 냉수로 세척한 후 본 실시예에 따른 미정제 화합물을 수득하였다. 레지오 이성질체(regio isomer)를 제거하기 위하여, 상기 미정제 생성물을 물로부터 결정화하였다(45% 수율). M.P: 137-142℃

1.7 (4- 메틸피레라진 -l-일)- [4-니트로-2- ( 트리플루오로메틸 )페닐] 메탄온 (SC2)

질소 대기 하에 4-니트로-2-(트리플루오로메틸)벤조인산(1 당량), CH₂C1₂(15 배) 및 DMF(0.5 당량)의 얼음 냉각 용액에 옥살일클로라이드(2 당량)를 점적하여 첨가하였다. 4시간 이후에, 상기 생성 용액을 진공에서 농축하였다. 잔여물을 CH₂C1₂에서 용해시키고 CH₂C1₂ 내 N-메틸 피페라진(2.1 당량)의 얼음 냉각 용액에 점적하여 첨가하였다. 3시간 동안 교반한 이후에, 상기 혼합물물을 CH₂C1₂로 희석시키고 물, Na₂C0₃ 10% 용액의 3부분, 물 및 브라인으로 세척하였다. 유기상을 농축시켜 본 실시예에 따른 화합물을 오일로서 수득하였다(96% 수율).

1.8 [4-아미노-2-( 트리플루오로메틸 )페닐]- (4-메틸피페라진-l-일)메탄온(SC3)

메탄올(3 배) 내 (4-메틸피레라진-l-일)-[4-니트로-2-(트리플루오로메틸)페닐]메탄온(1 당량) 용액에 질소 대기 하에 10% Pd/C을 첨가하였다. 그 다음, 실온(발열)에서 66% aq. 포름산 암모늄을 천천히 첨가하였다. 120분 동안 교반한 이후에, 실리카 겔 패드를 통해 여과하였다. 상기 여과액을 농축시키고, 물로 희석한 후 CH₂C1₂로 추출하여 물로 세척하였다. CH₂C1₂ 농축 이후에 본 실시예에 따른 화합물을 헥산 용매로 여과하여 수거하였다(90% 수율).

1.9 4 -[(4- 메틸피레라진 -l-일) 메틸 ]-3-( 트리플루오로메틸 ) 아닐린(SC4)

질소 대기 하에 톨루엔(6 배) 내 비트리드(3 당량) 용액에 2시간 동안 실온(발열)에서 [4-아미노-2-(트리플루오로메틸)페닐]-(4-메틸피레라진-l-일)메탄온(1 당량)을 점적하여 천천히 첨가하였다. 65℃에서 4시간 동안 교반한 이후에, 실온에서 1시간 동안 8% aq. NaOH 용액(12 당량)을 천천히 첨가하였다. 생성된 용액을 30분 동안 교반하고 톨루엔으로 추출한 후 혼합 톨루엔 층을 Na₂S0₄ 상에 건조시켜 농축하였다. 결정 형성 비등 헥산은 본 실시예에 따른 화합물을 제공하였다(50% 수율).

1.10 3 - 아이오도 -4- 메틸 -N-[4-[(4- 메틸피레라진 -l-일) 메틸 ]-3-( 트리플루오로메틸 )페닐] 벤즈아미드(SC5)

질소 대기 하에 THF(4 배) 내 4-[(4-메틸피레라진-l-일)메틸]-3-(트리플루오로메틸)아닐린(0.7 당량) 용액에 30분 동안 실온에서 THF 내 3-아이오도-4-메틸 염화 벤조일(1 당량, 3-아이오도-4-메틸벤조인산과 SOCl₂의 반응으로 준비)을 첨가한 후 (i-Pr)₂EtN(2 당량) 및 4-DMAP(0.2 당량)를 점적하여 첨가하였다. 120분 동안 주변 온도에서 교반한 이후에, 반응 혼합물을 물로 급랭시키고 에틸 아세테이트로 추출하였다. Na₂S0₄ 상에서 건조시킨 후, 에틸 아세테이트 층을 농축시켜 미정제 생성물을 수득하였다. 아세톤을 상기 미정제 생성물에 첨가하고 IPA-HC1을 이용하여 HC1 염으로 전환시켰다(85% 수율).

1.11 4 - 메틸 -N-[4-[(4- 메틸피레라진 -l-일) 메틸 ]-3-( 트리플루오로메틸 )페닐]-3-[2-(7-옥소-8H-l,8-나프티리딘-3-일)에티닐]벤즈아미드(Development code: NRC21T)

질소 대기 하에 DMF 내 3-아이오도-4-메틸-N-[4-[(4-메틸피레라진-l-일)메틸]-3-(트리플루오로메틸)페닐]벤즈아미드(0.8 당량, 1, SC5에 따라 준비), 6-에티닐-lH-l,8-나프티리딘-2-온(1 당량, 1.5에 따라 준비), Pd(PPh3)₂Cl₂(0.1 당량), CuI(0.15 당량), (i-Pr)₂EtN(4 당량)의 혼합물을 30분 동안 질소 가스로 탈산화시켰다. 반응물을 5시간 동안 80℃에서 가열시켰다. 실온에서 실리카 겔 패드를 통해 여과한 후, 상기 여과액을 농축시키고 물과 및 메탄올(1:2 혼합물)로 희석하였다. 상기 화합물을 여과하여 수거하고 건조시켰다. XRD을 도 1에 나타내었다. 상기 화합물을 메탄올 배지 내 cone. HCl을 이용하여 염을 형성시켜 수화 디하이드로클로라이드 염으로서 본 실시예에 따른 화합물을 수득하였다(70% 수율). 상기 XRD를 도 2에 나타내었다.

실시예 -2:

4- 메틸 -N-[4-[(4- 메틸피페라진 -l-일) 메틸 ]-3-( 트리플루오로메틸 )페닐]-3-[(E)-2-(7-옥소-8H-l,8-나프티리딘-3-일)비닐]벤즈아미드(Development code: NRC20T)

2.1 6 -[2- 트리메틸실릴비닐 ]- lH - l,8 - 나프티리딘 -2-원

DMF(15 배) 내 6-브로모-lH-l,8-나프티리딘-2-원(1 당량, 1.3에 따라 준비), Pd(PPh₃)2Cl₂(0.1 당량), CuI(0.15 당량), (i-Pr)₂EtN(4 당량)의 혼합물을 15분 동안 질소로 탈산화시켰다. 그 다음, 비닐 트리메틸 실란(2 당량)을 첨가하고 10시간 동안 125℃에서 가열시켰다. 상기 반응을 얇은막 크로마토그래피로 관찰하였다. 실온에서 실리카 겔 패드를 통해 여과하였다. 상기 여과액을 농축시키고 잔여물을 실리카 겔 크로마토그래피(20 내지 30% 에틸 아세테이트/헥산으로 용출)로 정제시켜 고체로서 본 실시예에 따른 화합물을 수득하였다(30% 수율). ESI MS m/z -245.22(M+H)⁺.

2.2 4 - 메틸 -N-[4-[(4- 메틸피레라진 -l-일) 메틸 ]-3-( 트리플루오로메틸 )페닐]-3-[(E)-2-(7-옥소-8H-l,8-나프티리딘-3-일)비닐]벤즈아미드(Development code: NRC20T)

DMF 내 3-아이오도-4-메틸-N-[4-[(4-메틸피레라진-l-일)메틸]-3-(트리플루오로메틸)페닐]벤즈아미드(1 당량, 실시예 SC5에 따라 준비), 6-[2-트리메틸실릴비닐]-lH-l,8-나프티리딘-2-원(1 당량,), Pd(OAC)₂(0.1 당량), P(0-tol)₃(0.2 당량), (i-Pr)₂EtN(4 당량)의 혼합물을 30분 동안 질소 가스로 탈산화시켰다. 그 다음, 7시간 동안 90℃에서 가열시켰다. 실온에서 실리카 겔 패드를 통해 여과시키고, 상기 여과액을 농축시킨 후, 잔여물을 실리카 겔 크로마토그래피(10% 메탄올/메틸렌 클로라이드로 용출)로 정제하여 고체로서 본 실시예에 따른 화합물을 수득하였다. 메탄올 및 IPA-HC1을 이용하여 상기 화합물로 디하이드로클로라이드 염을 형성하였다.

실시예 -3:

N-[4- 메틸 -3-[2-(7-옥소-8H- l,8 - 나프티리딘 -3-일) 에티닐 ]페닐]-4-[(4- 메틸 피페라진-l-일)메틸]-3-(트리플루오로메틸)벤즈아미드(Development code: NRC19T)

3.1 메틸 4- 메틸 -3-( 트리플루오로메틸 ) 벤조에이트

아세톤(15 배) 내 4-메틸-3-(트리플루오로메틸)벤조인산(1 당량), K₂C0₃(1.5 당량)의 혼합물에 실온에서 Mel(1.5 당량)를 첨가하였다. 24시간 교반을 계속하였다. 상기 반응을 얇은막 크로마토그래피로 관찰하였다. 염을 여과하고 생성된 여과액을 농축하여 물로 희석한 후 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 층의 농축물로서 페일 옐로우 오일을 제공하였다(95% 수율). ESI MS m/z -219(M+H'l)⁺.

3.2 메틸 4-( 브로모메틸 )-3-( 트리플루오로메틸 ) 벤조에이트

클로로포름 내 메틸-4-메틸-3-(트리플루오로메틸)벤조에이트(1 당량) 용액에 N-브로모숙신이미드(1.1 당량) 및 벤조일 퍼옥사이드(0.01 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 하룻밤 환류(18시간)에서 가열하였다. 그 다음, 실온까지 냉각시키고 물고 세척한 후 Na₂S0 상에서 건조시켜 농축하였다. 실리카 겔 크로마토그래피(1% 에틸 아세테이트/헥산으로 용출)로 정제하여 본 실시예에 따른 화합물을 수득하였다(65% 수율). ESI MS m/z-297.

3.3 메틸 4-[(4- 메틸피레라진 -l-일) 메틸 ]-3-( 트리플루오로메틸 ) 벤조에이트

클로로포름(6 배) 내 메틸 4-(브로모메틸)-3-(트리플루오로메틸)벤조에이트(1 당량) 용액에 N-메틸피레라진(3 당량)을 실온에서 첨가하였다. 생성된 용액을 3시간 동안 교반하고, 반응물을 물로 세척한 후 클로로포름으로 농축하여 생성물을 수득하였다(95% 수율). ESI MS m/z-317(M+H)⁺.

3.4 4 -[(4- 메틸피레라진 -l-일) 메틸 ]-3-( 트리플루오로메틸 ) 벤조인산

에탄올(10 배) 내 메틸 4-[(4-메틸피레라진-l-일)메틸]-3-(트리플루오로메틸)벤조에이트(1 당량) 용액에 실온에서 2N NaOH 용액(2 당량)을 첨가하였다. 생성 용액을 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고 화이트 고체가 형성될 때까지 수성 2N HCl로 산성화하였다. 상기 화합물을 0-5℃에서 여과하여 수거하였다(85% 수율). ESI MS m/z-303.3(M+H)⁺.

3.5 N-(3- 아이오도 -4- 메틸 -페닐)-4-[(4- 메틸피레라진 -l-일) 메틸 ]-3-( 트리플 루오로 메틸)벤즈아미드

질소 가스 대기 하에 THF(lO 배) 내 3-아이오도-4-메틸 아닐린(0.7 당량) 용액에 3O분 동안 실온에서 THF(4 배) 내 4-[(4-메틸피레라진-l-일)메틸]-3-(트리플루오로메틸)염화 벤조일(1 당량, 4-[(4-메틸피레라진-l-일)메틸]-3-(트리플루오로메틸)벤조인산과 SOCl₂의 반응으로 준비)을 첨가한 후 (i-Pr)₂EtN(4 당량) 및 4-DMAP(0.2 당량)을 점적하여 첨가하였다. 주변 온도에서 120분 동안 교반시킨 후, 반응 혼합물을 물로 급량시키고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 상기 에틸 아세테이트 층을 농축시켜 미정제 생성물을 수득하였다. 아세톤을 상기 미정제 생성물에 첨가하고 IPA-HC1를 이용하여 HCl 염으로서 분리하였다(40% 수율). ESI MS m/z-518(M+H)⁺.

3.6 N-[4- 메틸 -3-[2-(7-옥소-8H- l,8 - 나프티리딘 -3-일) 에티닐 ]페닐]-4-[(4- 메 틸 피페라진-l-일) 메틸 ]-3-( 트리플루오로메틸 )벤즈아미드(Development code: NRC19T)

DMF(20 배) 내 N-(3-아이오도-4-메틸-페닐)-4-[(4-메틸피레라진-l-일)메틸]-3-(트리플루오로 메틸)벤즈아미드(0.8 당량, 3.5에 따라 준비), 6-에티닐-lH-l,8-나프티리딘-2-원(1 당량, 1.5에 따라 준비), Pd(PPh3)₂Cl₂(0.1 당량), CuI(0.15 당량), (i-Pr)₂EtN(4 당량)의 혼합물을 30분 동안 질소 가스로 탈산화하였다. 5시간 동안 80℃에서 가열하고 실온에서 실리카 겔 패드를 통해 여과하였다. 상기 여과액을 농축시키고 물로 희석한 후 1시간 동안 교반하였다. 상기 화합물을 여과하여 수거하였다. 상기 습식 화합물에 메탄올을 첨가하고 IPA-HC1를 이용하여 HC1 염으로서 생성물을 분리하였다(40% 수율).

실시예 -4:

4- 메틸 -N-[3-(4- 메틸이미다졸 -l-일)-5-( 트리플루오로메틸 )페닐]-3-[2-(7-옥소-8H-1,8-나프티리딘-3-일)에티닐]벤즈아미드 Development code: NRC18T)

4.1 3 - 아이오도 -4- 메틸 -N-[3-(4- 메틸이미다졸 -l-일)-5- 트리플루오로메틸 )페닐]벤즈아미드

질소 대기 하에 THF 내 3-(4-메틸이미다졸-l-일)-5-(트리플루오로메틸)아닐린(0.7 당량, 공지된 방법에 따라 제조) 용액에 30분 동안 실온에서 THF 내 3-아이오도-4-메틸 염화 벤조일(1 당량, 3-아이오도-4- 메틸벤조인산과 SOCl₂의 반응으로 준비)을 첨가한 후 (i-Pr)₂EtN(2 당량) 및 4-DMAP(0.2 당량)를 점적하여 첨가하였다. 3시간 이상 주변 온도에서 교반한 후, 상기 반응 혼합물로 물로 급랭하였다. 생성된 혼합물을 60분 동안 0-5℃에서 교반하였다. 화합물을 여과하여 수거하였다. 상기 화합물을 실리카 겔 크로마노트래피(2% 메탄올/ 클로로포름으로 용출)로 추가 정제하여 본 실시예에 따른 화합물을 수득하였다(85% 수율). ESI MS m/z-486.2(M+H)⁺.

4.2 4 - 메틸 -N-[3-(4- 메틸이미다졸 -l-일)-5-( 트리플루오로메틸 )페닐]-3-[2-(7-옥소-8H-1,8-나프티리딘-3-일)에티닐]벤즈아미드(Development code: NRC18T)

DMF(20 배) 내 3-아이오도-4-메틸-N-[3-(4-메틸이미다졸-l-일)-5-(트리플루오로메틸)페닐]벤즈아미드(0.8 당량, 4.1에 따라 준비), 6-에티닐-lH-l,8-나프티리딘-2-원(1 당량, 1.5에 따라 준비), Pd(PPh3)₂Cl₂(0.1 당량), CuI(0.15 당량), (i-Pr)₂EtN(4 당량)의 혼합물을 30분 동안 질소 가스로 탈산화시켰다. 5시간 동안 80℃에서 가열시키고 실온에서 실리카 겔 패드를 통해 여과하였다. 상기 여과액을 농축시키고 물로 희석한 후 1시간 동안 교반하여 여과하였다. 상기 습식 화합물에 아세톤을 첨가하고 IPA-HC1를 이용하여 HC1 염으로서 생성물을 분리하였다(20% 수율).

실시예 -5:

4- 메틸 -N-[3-[(4- 메틸피레라진 -l-일) 메틸 ]-5-( 트리플루오로메틸 )페닐]-3-[2-(7-옥소-8H-1,8-나프티리딘-3-일)에티닐]벤즈아미드(Development code: NRC17T)

5.1 3 - 아이오도 -4- 메틸 -N-[3-[(4- 메틸피페라진 -l-일) 메틸 ]-5-( 트리플루오로메틸 )페닐]벤즈아미드

THF 내 3-[(4-메틸피레라진-l-일)메틸]-5-(트리플루오로메틸)아닐린(0.7 당량, 공지된 방법에 따라 준비) 용액에 30분 동안 실온에서 THF 내 3-아이오도-4-메틸 염화 벤조일(1 당량, 3-아이오도-4-메틸벤조인산과 SOCl₂의 반응으로 준비)을 첨가한 후 (i-Pr)₂EtN(2 당량) 및 4-DMAP(0.2 당량)을 점적하여 첨가하였다. 3시간 동안 주변 온도에서 교반한 후, 반응 혼합물을 물로 급랭시켰다. 생성된 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하고 형성된 생성물을 아세톤 내 HC1 염으로 분리하였다. ESI MS m/z-(M+l)⁺.

5.2 4 - 메틸 -N-[3-[(4- 메틸피레라진 -l-일) 메틸 ]-5-( 트리플루오로메틸 )페닐]-3-[2-(7-옥소-8H-l,8-나프티리딘-3-일)에티닐]벤즈아미드(Development code: NRC17T

DMF(20 배) 내 3-아이오도-4-메틸-N-[3-[(4-메틸피레라진-l-일)메틸]-5-(트리플루오로메틸) 페닐벤즈아미드(0.8 당량, 5.1)에 따라 준비), 6-에티닐-lH-l,8-나프티리딘-2-원(1 당량, 1.5에 따라 준비), Pd(PPh3)₂Cl₂(0.1 당량), CuI(0.15 당량), (i-Pr)₂EtN(4 당량) 혼합물을 30분 동안 질소 가스로 탈산화시켰다. 5시간 동안 80℃에서 가열하고, 실온에서 실리카 겔 패드를 통해 여과하였다. 상기 여과액을 농축시키고 물로 희석한 후 1시간 동안 교반하여 여과하였다. 메탄올을 첨가하고 IPA-HC1을 이용하여 HC1 염으로서 생성물을 분리하였다(25% 수율).

실시예 -6:

N-[3,5- 비스(트리플루오로메틸)페닐 ]-4- 메틸 -3-[2-(7-옥소-8H- l,8 - 나프티리딘 -3-일)에티닐]벤즈아미드 벤즈아미드(Development code: NRC16T )

6.1 N-[3,5- 비스(트리플루오로메틸)페닐 ]-3- 아이오도 -4- 메틸 -벤즈아미드

질소 가스 대기 하에 THF(6 배) 내 3,5-비스 트리플루오로 메틸 아닐린(0.7 당량) 용액에 30분 동안 실온에서 THF 내 3-아이오도-4-메틸 염화 벤조일(1 당량, 3-아이오도-4-메틸벤조인산과 SOCl₂의 반응으로 준비)을 첨가한 후 (i-Pr)₂EtN(2 당량) 및 4-DMAP(0.2 당량)을 점적하여 첨가하였다. 3시간 동안 주변 온도에서 교반한 이후에, 상기 반응 혼합물을 물로 급랭하였다. 생성된 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출한 후 농축시켰다. 아세톤을 상기 생성된 잔여물에 첨가하고 IPA-HC1을 이용하여 HC1 염을 형성하였다(85% 수율). ESI MS m/z-474(M+H)⁺.

6.2 N-[3,5- 비스(트리플루오로메틸)페닐 ]-4- 메틸 -3-[2-(7-옥소-8H- l,8 - 나프티리딘 -3-일)에티닐]벤즈아미드(Development code: NRC16T)

DMF 내 N-[3,5-비스(트리플루오로메틸)페닐]-3-아이오도-4-메틸벤즈아미드(0.8 당량, 6.1에 따라 준비), 6-에티닐-lH-l,8-나프티리딘-2-원(1 당량, 1.5에 따라 준비), Pd(PPh3)₂Cl₂(0.1 당량), CuI(0.15 당량), (i-Pr)₂EtN(4 당량)의 혼합물을 30분 동안 질소 가스로 탈산화시켰다. 9시간 동안 80℃에서 가열하고 실온에서 실리카 겔 패드를 통해 여과하였다. 상기 여과액을 농축시키고 물로 희석한 후 1시간 동안 교반하여 여과하였다. 메탄올을 첨가하고 상기 화합물을 IPA-HC1로 처리하여 HCl 염으로 여과하였다(60% 수율).

실시예 -7:

N-[4- 메틸 -3-[2-(7-옥소-8H- l,8 - 나프티리딘 -3-일) 에티닐 ]페닐]-3,5- 비스(트리플루오로 메틸)벤즈아미드 벤즈아미드(Development code: NRC15T )

7.1 N-(3- 아이오도 -4- 메틸 -페닐)-3,5- 비스(트리플루오로메틸)벤즈아미드

질소 대기 하에 THF(6 배) 내 3-아이오도-4-메틸 아닐린(0.7 당량) 용액에 30분 동안 실온에서 THF 내 3,5-비스 트리플루오로메틸염화 벤조일(1 당량, 3,5-비스 트리플루오로메틸벤조인산과 SOCl₂의 반응으로 준비)를 첨가한 후 (i-Pr)₂EtN(4 당량) 및 4-DMAP(0.2 당량)를 점적하여 첨가하였다. 3시간 동안 주변 온도에서 교반한 후, 상기 반응 혼합물을 물로 급랭하였다. 생성된 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하고 농축시킨 후 상기 혼합물을 헥산을 첨가하여 수거하고 여과하였다(44% 수율).

7.2 N-[4- 메틸 -3-[2-(7-옥소-8H- l,8 - 나프티리딘 -3-일) 에티닐 ]페닐]-3,5- 비스(트리플루오로 메틸)벤즈아미드 (Development code: NRC15T )

DMF 내 N-(3-아이오도-4-메틸-페닐)-3,5-비스(트리플루오로메틸)벤즈아미드(0.8 당량, 7.1에 따라 준비), 6-에티닐-lH-l,8-나프티리딘-2-원(1 당량, 실시예 1.5에 따라 준비), Pd(PPh3)₂Cl₂(0.1 당량), CuI(0.15 당량), (i-Pr)₂EtN(4 당량)의 혼합물을 30분 동안 질소 가스로 탈산화하였다. 3시간 동안 65℃에서 가열시키고 실온에서 실리카 겔 패드를 통해 여과하였다. 상기 여과액을 물로 희석시키고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 에틸 아세테이트 층을 농축시키고 아세톤 용매에서 HCl 염을 형성하였다.

실시예 -8:

4- 메틸 -3-[2-(7-옥소-8H- l,8 - 나프티리딘 -3-일) 에티닐 ]-N-[3-( 트리플루오로메틸 )페닐]벤즈아미드 벤즈아미드(Development code: NRC14T)

8.1 3 - 아이오도 -4- 메틸 -N-[3-( 트리플루오로메틸 ) 페닐] 벤즈아미드

질소 대기 하에 THF 내 3-트리플루오로메틸 아닐린(0.7 당량) 용액에 30분 동안 실온에서 THF 내 3-아이오도-4-메틸 염화 벤조일(1 당량, 3-아이오도-4-메틸벤조인산과 SOCl₂의 반응으로 준비)를 첨가한 후 (i-Pr)₂EtN(2 당량) 및 4-DMAP(0.2 당량)를 점적하여 첨가하였다. 3시간 동안 주변 온도에서 교반한 이후에, 상기 반응 혼합물을 물에서 급랭시켰다. 생성된 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하고 농축시켰다. 헥산 용매를 사용하여 여과를 통해 본 실시예에 따른 화합물을 수거하였다(49.2% 수율). ESI MS m/z-(M+l)⁺.

8.2 4 - 메틸 -3-[2-(7-옥소-8H- l,8 - 나프티리딘 -3-일) 에티닐 ]-N-[3-( 트리플루오로메틸 )페닐]벤즈아미드(Development code: NRC14T)

DMF(20 배) 내 3-아이오도-4-메틸-N-[3-(트리플루오로메틸)페닐]벤즈아미드(0.8 당량, 8.1에 따라 준비), 6-에티닐-lH-l,8-나프티리딘-2-원(1 당량, 1.5에 따라 준비), Pd(PPh3)₂Cl₂(0.1 당량), CuI(0.15 당량), (i-Pr)₂EtN(4 당량)의 혼합물을 30분 동안 질소 가스로 탈산화시켰다. 3시간 동안 65℃에서 가열하고, 실온에서 실리카 겔 패드를 통해 여과한 후 상기 여과액을 물로 희석하였다. 여과 및 HC1 염 형성에 의해 본 실시예에 따른 화합물을 수거하였다.

실시예 -9:

N-[4- 메틸 -3-[2-(7-옥소-8H- l,8 - 나프티리딘 -3-일) 에티닐 ]-3-( 트리플루오로메틸 )벤즈아미드 벤즈아미드(Development code: NRC13T)

9.1 N-(3- 아이오도 -4- 메틸 -페닐)-3-( 트리플루오로메틸 )벤즈아미드

질소 대기 하에 THF 내 3-아이오도-4-메틸 아닐린(0.7 당량) 용액에 30분 동안 실온에서 THF 내 3-트리플루오로 메틸 염화 벤조일(1 당량, 3-트리플루오로메틸 벤조인산과 SOCl₂의 반응으로 준비)를 첨가한 후 (i-Pr)₂EtN(4 당량) 및 4-DMAP(0.2 당량)를 점적하여 첨가하였다. 3시간 동안 주변 온도에서 교반한 후, 상기 반응 혼합물을 물로 급랭시켰다. 생성된 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하고 농축시킨 후, n-헥산을 첨가하여 본 실시예에 따른 화합물을 분리하였다.

9.2 N-[4- 메틸 -3-[2-(7-옥소-8H- l,8 - 나프티리딘 -3-일) 에티닐 ]페닐]-3-( 트리 플루오로 메틸)벤즈아미드(Development code: NRC13T )

DMF 내 N-(3-아이오도-4-메틸-페닐)-3-(트리플루오로메틸)벤즈아미드(0.8 당량, 9.1에 따라 준비), 6-에티닐-lH-l,8-나프티리딘-2-원(1 당량, 1.5에 따라 준비), Pd(PPh3)₂CI₂(0.1 당량), CuI(0.15 당량), (i-Pr)₂EtN(4 당량)를 30분 동안 질소 가스로 탈산화시켰다. 3시간 동안 65℃에서 가열시키고 실온에서 실리카 겔 패드를 통해 여과시킨 후 상기 여과액을 물로 희석하였다. 생성된 혼합물을 1시간 동안 교반하고 여과 및 IPA-HC1을 이용한 HCl 염에 의해 본 실시예에 따른 화합물을 수거하였다.

Example-10:

인비트로 ( In vitro ) 효능 평가:

모든 실험 화합물들에 대하여 항-암 화합물의 스크리닝을 위해 사용되는 표준 세포주를 이용하여 인비트로 효능을 평가하였다.

Ponatinib을 비교 효능 및 안전성 평가를 위한 참조 약물 후보로 사용하였다. 약물 물질 Ponatinib의 실험 시료는 US8114874에 개시된 절차에 따라 하우스에서 합성하였다.

BCR - abl 양성 세포주 K562 및 돌연변이 세포주 Baf3 / T315i , M351T , E255K 및 WT에서의 NRC-21T의 인비트로 연구

인비트로 연구를 위해 실험 화합물 및 표준 참조 약물(Ponatinib)을 lOmM의 농도로 세포 배양 배지 및 DMSO에 용해시켰다. 상기 저장 용액을 동일한 세포 배양 배지에 추가 희석시켜 0.1nm 내지 10μm의 농도로 사용하였다. MTT 분석법에 의한 세포 증식은 하기와 같이 수행하였다. 1000 내지 10,000 세포를 96-웰 플레이트에 웰마다 시딩하고 Pon-21T의 농도를 10μm 내지 0.1nM로 달리하여 3회 첨가하였다. 필요한 시간인 24-72시간 동안 NRC-21T를 배양하고, 5mg/ml MTT를 15μl 첨가하여 37℃ 및 5% C0₂에서 추가 4시간 동안 배양한 이후에, 포르마잔 결정을 가용화 완충용액에서 37℃에서 하룻밤 용해시켰다. 570-630-nm 이중 파장에서 Elisa 리더기를 이용하여 흡광도를 측정하였다. MTT 분석법을 통해, NRC21T의 IC₅₀ 값을 자동화하였다. MTT 분석법을 통해 얻은 IC₅₀ 값을 표-1A & 표-1B에 나타내고, 대조 Ponatinib 및 NRC21T의 세포를 도립 현미경으로 촬영하여 이를 도-3에 나타내었다.

표-1A: MTT 분석법으로 획득한 IC ₅₀ 값

표- IB : MTT 분석법으로 획득한 IC ₅₀ 값

실시예 -11:

마트리겔 침습 검정법:

특정 농도의 NRC21T의 존재 하에 BaF3/를 T315i 돌연변이 백혈병 암 세포의 인비트로 침습을 평가하였다. T315i 세포(3X10⁵)를 무-혈청 배지 300μ1에 부유하고 마트리겔(Millipore, Catalog No. ECM550, USA)로 사전-코팅된 트랜스웰 챔버의 상부에 두었다. 상기 챔버의 하부를 500μl 혈청-배지(10% FBS)로 채우고, 상기 세포들이 72시간 동안 이동하도록 두었다. 배양 이후에, 상기 세포들을 고정시키고 상기 키트와 함께 제공된 염료로 염색한 후 560nm에서 Elisa 플레이트 리더기를 이용하여 정량화하였다. 특정 농도의 NRC-21T의 존재 하에 T315i 세포에 대한 인비트로 마트리겔 분석 결과를 표 2 및 도 4에 나타내었다.

표 2: T315i 세포주 상에서 NRC-21T의 항-침습 특성

실시예 -12

NRC21T의 MTD 측정[ MTD 연구는 OECD 가이드라인 420에 따라 수행됨]

본 연구는 5마리의(2 수컷 + 3 암컷) 18-30 그람의 체중을 갖는 스위스 알비노 마우스를 이용하여 수행하였다. 약물을 구강 투여하기 전에 3시간 동안 모든 동물을 금식시켰다. 상기 시료를 그들의 체중에 따라 모든 동물에게 즉시 투여하였다. 실험 약물의 투여 이후에, 모든 동물을 ½시간, 1시간, 2시간, 4시간 동안 관찰하고 14일 동안 사망을 관찰하였다. 14일 이후에, 모든 생존 동물을 해부하여 위를 절개하고 GIT를 통핸 얄물의 흡수를 관찰하였다.

> NRC21T : MTD > 2000 mg .kg, p.o(단일 투여어 14일 관찰)

> Ponatinib : MTD = 50 mg /kg, p.o(단일 투여 14일 관찰)

결과 : NRC21T의 MTD가 ICH 가이드라인에 따른 2000 mg/kg, p.o 보다 크기 때문에, NRC21T는 Ponatinib 보다 안전한 실험 약물이라고 유추할 수 있다. 또한, NRC21T는 Ponatinib와 대등한 IC₅₀ 값을 갖는다. 따라서, 본 발명에 따른 실험 약물 NRC21T는 안전성 및 효능에 있어서 우수한 후보로서 연구될 수 있다.

실시예 -12 누드 마우스 내 T315I 유도된 종양에서 NRC21T의 안타고니즘의 연구[Clackson etal. 2009, cancer cells November6; 16(5): 401-412]:

본 연구는 18 마리의 누드 마우스(9 수컷 + 9 암컷)으로 수행되었다. 누드 마우스의 중량을 세포주의 접종 직전에 측정하고 하기와 같이 그룹으로 분류하였다:

그룹 - 1: 양성 대조(3 수컷 + 3 암컷)

그룹 - II: NRC21T(3 수컷 + 3 암컷)

그룹 - III: Ponatinib(3 수컷 + 3 암컷)

상기 세포주를 누드 마우스의 오른쪽 사지 측면에 1 X 10⁶ 세포/0.2 ml의 강도로 피하 접종시켰다. 종양의 외관을 위해 동물을 매일 관찰하였다. 종양 부피를 화학식 ½ 1 X w²(1 = 종양의 길이 & w = 종양의 너비)를 사용하여 측정하였다. 평균 종량 부피가 400 mm 이상으로 기록될 때, 상기 약물로 처리하기 시작하였다. 상기 약물을 30일 동안 매일 구강 투여하였다. 누드 마우스의 중량을 투여 전에 매일 측정하고 디지털 Vernier 캘리퍼를 이용하여 이틀에 한번 측정하였다. 30일 동안의 투여가 완료된 이후에 생존 동물을 희생시키고 기관(피부 및 비장의 종양)을 수거하였다.

본 연구의 결과를 도-5, 도-5A 및 도-5B에 나타내었다.

실시예 -13 SCID 마우스 내 NRC21T의 생존 시간 연구[ Clackson etal . 2009, cancer cells November 6; 16(5): 401 -412]

본 연구는 30 마리의 SCID 마우스(15 수컷 + 15 암컷)으로 수행되었다. 모든 SCID 마우스의 꼬리 정맥에 T315I 세포주를 1 X 10⁶ 세포/0.1 ml의 강도로 정맥 주사하였다. 하기와 같이 그룹으로 나누었다:

Group - 1 : 양성 대조(5 수컷 + 5 암컷)(운반체 처리)

Group - II : NRC21T(5 수컷 + 5 암컷)(200 mg/kg, p.o)

Group - III : Ponatinib(5 수컷 + 5 암컷)(10 mg/kg, p.o)

주사 72시간 이후에, 각각의 그룹에 약물을 투여하기 시작하였다. 그룹 내 모든 동물에 30일 동안 각각 약물을 투여하였다. 본 연구 동안 사망한 경우, 비장 및 간을 수거하여 조직병리학 검사를 수행하였다. 빈사 상태의 동물을 희생시키고 비장 및 간을 수거하여 조직학 검사를 수행하였다. 본 연구의 결과를 도-6A 및 도- 6B에 나타내었다.

결과:

생존 시간

Claims

화학식 I의 화합물 또는 그것의 N-옥사이드 또는 약제학적으로 허용가능한 염으로서,

화학식(I)
상기 식에서,
L1은 불포화 탄소 결합; 바람직하기는 탄소-탄소 삼중 결합 또는 탄소-탄소 이중 결합으로부터 선택되는 링커이고;
L2은 NHC(O)-, C(0)NH-로부터 선택되는 링커이고;
고리 A는 치환 5 또는 6-원 아릴 또는 헤테로아릴 고리를 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니고,
상기 고리 A는 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 화합물.
제1항에 있어서,
상기 화합물은 하기의 군으로부터 선택되는 것인, 화합물:
a. 4-메틸-N-[4-[(4-메틸피레라진-1-일)메틸]-3-(트리플루오로메틸)페닐]3-[2-(7-옥소-8H-l,8-나프티리딘-3-일)에티닐]벤즈아미드 또는 그것의 약제학적으로 허용가능한 염,
b. 4-메틸-N-[4-[(4-메틸피레라진-1-일)메틸]-3-(트리플루오로메틸)페닐]3-[(E)-2-(7-옥소-8H-l,8-나프티리딘-3-일)비닐] 벤즈아미드 또는 그것의 약제학적으로 허용가능한 염,
c. N-[4-메틸-3-[2-(7-옥소-8H-l,8-나프티리딘-3-일)에티닐]페닐]-4-[(4-메틸피레라진-l-일)메틸]-3-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 또는 그것의 약제학적으로 허용가능한 염,
d. 4-메틸-N-[3-(4-메틸이미다졸-l-일)-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3-[2-(7-옥소-8H-l,8-나프티리딘-3-일)에티닐]벤즈아미드 또는 그것의 약제학적으로 허용가능한 염,
e. 4-메틸-N-[3-[(4-메틸피레라진-1-일)메틸]-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3-[2-(7-옥소-8H-l,8-나프티리딘-3-일)에티닐]벤즈아미드 또는 그것의 약제학적으로 허용가능한 염,
f. N-[3,5-비스(트리플루오로메틸)페닐]-4-메틸-3-[2-(7-옥소-8H-l,8-나프티리딘-3-일)에티닐]벤즈아미드 벤즈아미드 또는 그것의 약제학적으로 허용가능한 염,
g. N-[4-메틸-3-[2-(7-옥소-8H-l,8-나프티리딘-3-일)에티닐]페닐]-3,5-비스(트리플루오로메틸)벤즈아미드 벤즈아미드 또는 그것의 약제학적으로 허용가능한 염,
h. 4-메틸-3-[2-(7-옥소-8H-l,8-나프티리딘-3-일)에티닐]-N-[3-(트리플루오로메틸)페닐] 벤즈아미드 벤즈아미드 또는 그것의 약제학적으로 허용가능한 염,
i. N-[4-메틸-3-[2-(7-옥소-8H-l,8-나프티리딘-3-일)에티닐]페닐]-3-(트리플루오로메틸)벤즈아미드 벤즈아미드 또는 그것의 약제학적으로 허용가능한 염.
화합물, 4-메틸-N-[4-[(4-메틸피레라진-l-일)메틸]-3-(트리플루오로메틸)페닐]-3-[2-(7-옥소-8H-l,8-나프티리딘-3-일)에티닐]벤즈아미드 또는 그것의 약제학적으로 허용가능한 염.
화학식 I의 화합물 또는 그것의 N-옥사이드 또는 약제학적으로 허용가능한 염의 합성 방법으로,

화학식(I)
(상기 식에서,
L1, L2 및 고리 A는 청구항 1에서 정의한 바와 같다)
화학식 II의 화합물을

(상기 식에서,
Ll은 화학식 I의 화합물에서 정의한 바와 같다)
화학식 III의 화합물과

(상기 식에서,
L2 및 A는 화학식 I의 화합물에서 정의한 바와 같다)
반응시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 것인, 방법.
4-메틸-N-[4-[(4-메틸피레라진-l-일)메틸]-3-(트리플루오로메틸)페닐]-3-[2-(7-옥소-8H-l,8-나프티리딘-3-일)에티닐]벤즈아미드 또는 그것의 약제학적으로 허용가능한 염의 제조 방법으로,
3-할로-4-메틸-N-[4-[(4-메틸피레라진-1-일)메틸]-3-(트리플루오로메틸)페닐]벤즈아미드를 적합한 촉매 및 용매의 존재 하에 6-에티닐-lH-1,8-나프티리딘-2-원과 반응시키는 단계, 및
임의적으로 상기 화합물을 약제학적으로 허용가능한 염으로 전환시키는 단계를 포함하는 것인, 방법.
약제학적으로 허용가능한 담체와 함께 제1항에 따른 화학식 I의 화합물 또는 그것의 N-옥사이드 또는 약제학적으로 허용가능한 염을 포함하는 약제학적 조성물.
약제학적으로 허용가능한 담체와 함께 제2항에 따른 화학식의 화합물 또는 그것의 N-옥사이드 또는 약제학적으로 허용가능한 염을 포함하는 약제학적 조성물.
약제학적으로 허용가능한 담체와 함께 4-메틸-N-[4-[(4-메틸피레라진-l-일)메틸]-3-(트리플루오로메틸)페닐]-3-[2-(7-옥소-8H-l,8-나프티리딘-3-일)에티닐] 벤즈아미드 또는 그것의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함하는 약제학적 조성물.
제1항에 따른 화학식 I의 화합물 또는 그것의 N-옥사이드 또는 약제학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는 백혈병의 치료 방법.
4-메틸-N-[4-[(4-메틸피레라진-1-일) 메틸]-3-(트리플루오로메틸)페닐]-3-[2-(7-옥소-8H-l,8-나프티리딘-3-일)에티닐] 벤즈아미드 또는 그것의 약제학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는 백혈병의 치료 방법.