KR20160106623A - 화합물 - Google Patents

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KR20160106623A KR1020167020368A KR20167020368A KR20160106623A KR 20160106623 A KR20160106623 A KR 20160106623A KR 1020167020368 A KR1020167020368 A KR 1020167020368A KR 20167020368 A KR20167020368 A KR 20167020368A KR 20160106623 A KR20160106623 A KR 20160106623A
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Abstract

본 발명은 LRRK2 키나제 활성을 억제하는 신규한 화합물, 그의 제조 방법, 그를 함유하는 조성물 및, LRRK2 키나제 활성을 특징으로 하는 질환, 예를 들면 파킨슨병, 알츠하이머병 및 근위축성 측삭 경화증 (ALS)의 치료 또는 예방에서의 그의 용도에 관한 것이다.

Description

화합물{COMPOUNDS}
관련 출원
본원은 중국 특허청에 2014년 1월 29일자로 출원된 PCT 국제 출원 번호 PCT/CN2014/000140을 우선권주장으로 하며, 그의 전체 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
발명의 분야
본 발명은 LRRK2 키나제 활성을 억제하는 신규한 화합물, 그의 제조 방법, 그를 함유하는 조성물 및, LRRK2 키나제 활성을 특징으로 하는 질환, 예를 들면 파킨슨병, 근위축성 측삭 경화증 (ALS) 및 알츠하이머병의 치료에서의 그의 용도에 관한 것이다.
파킨슨병 (PD)은 뇌의 흑색질 영역에서의 도파민 신경세포의 선택적 변성 및 세포 사멸을 특징으로 하는 신경변성 장애이다. 파킨슨병은 일반적으로 산발성이고 미지의 병인인 것으로 간주되나, 최근 15년 이내에 상기 질환 및 관련 병원성 기전의 유전적 기초에 대한 이해의 중요한 발전이 있어 왔다. 발전의 한 분야는 류신 풍부 반복부 키나제 2 (LRRK2) 단백질의 이해이다. LRRK2 유전자에서의 다수의 미스센스 돌연변이는 가족 연구에서 보통염색체 우성 파킨슨병과 밀접하게 관련되어 있다 (WO2006068492 및 WO2006045392; Trinh and Farrer 2013, Nature Reviews in Neurology 9: 445-454; Paisan-Ruiz et al., 2013, J. Parkinson's Disease 3: 85-103 참조). LRRK2에서의 G2019S 돌연변이는 가장 흔한 미스센스 돌연변이이며, 산발성 파킨슨병과 밀접하게 유사한 임상적 표현형과 관련되어 있다. LRRK2 G2019S 돌연변이는 또한 산발성 파킨슨병 사례의 대략 1.5%에서 존재한다 (Gilks et al., 2005, Lancet, 365: 415-416 참조). LRRK2에서 알려진 병원성 코딩 돌연변이 이외에, LRRK2의 추가의 아미노산 코딩 변이체는 또한 파킨슨병의 발생 위험과 관련되어 있는 것으로 확인되었다 (Ross et al., 2011 Lancet Neurology 10: 898-908 참조). 게다가, 전 게놈 관련 분석 (GWAS)은 LRRK2를 파킨슨병 감수성 유전자좌로서 확인하였으며, 이는 LRRK2가 또한 LRRK2 단백질에서 아미노산 치환을 야기하는 돌연변이 없이 산발성 파킨슨병 사례와 관련될 수 있다는 것을 나타낸다 (Satake et al., 2009 Nature Genetics 41:1303-1307; Simon-Sanchez et al., 2009 Nature Genetics 41: 1308-1312 참조).
LRRK2는 ROCO 단백질 패밀리의 구성원이며, 상기 패밀리의 모든 구성원은 5개의 보존 도메인을 공유한다. 가장 흔한 병원성 돌연변이 G2019S는 LRRK2의 고도로 보존된 키나제 도메인에서 발생된다. 상기 돌연변이는 재조합 LRRK2 단백질의 시험관내 효소 검정 (Jaleel et al., 2007, Biochem J, 405: 307-317 참조)에서 및 G2019S PD 환자-유래 세포로부터 정제된 LRRK2 단백질 (Dzamko et al., 2010 Biochem. J. 430: 405-413 참조)에서 LRRK2 키나제 활성에서의 증가를 부여한다. 상이한 잔기, R1441에서 아미노산 치환을 부여하는 덜 흔한 LRRK2 병원성 돌연변이는 또한 LRRK2의 GTPase 도메인에 의하여 GTP 가수분해의 속도를 감소시켜 LRRK2 키나제 활성을 증가시키는 것으로 나타났다 (Guo et al., 2007 Exp Cell Res. 313: 3658-3670; West et al., 2007 Hum. Mol Gen. 16: 223-232 참조). 그러므로, 상기 증거는 LRRK2의 키나제 및 GTPase 활성이 발병기전에 대하여 중요하며, LRRK2 키나제 도메인은 전체 LRRK2 기능을 조절할 수 있다는 것을 나타낸다 (Cookson, 2010 Nat. Rev. Neurosci. 11: 791-797 참조).
증가된 LRRK2 키나제 활성은 세포 배양 모델에서 신경세포 독성과 관련되어 있으며 (Smith et al., 2006 Nature Neuroscience 9: 1231-1233 참조), 키나제 억제제 화합물은 LRRK2-매개된 세포 사멸을 방지한다 (Lee et al., 2010 Nat. Med. 16: 998-1000 참조)는 것을 나타내는 증거가 존재한다.
LRRK2 G2019S 파킨슨병 환자로부터 유래한 유도 만능성 줄기 세포 (iPSC)는 신경돌기 신장에서의 결함 및 로테논에 대한 증가된 감수성을 나타내며, 이는 G2019S 돌연변이의 유전 보정 또는 LRRK2 키나제 활성의 소분자 억제제를 사용한 세포의 처리에 의하여 개선될 수 있는 것으로 밝혀졌다 (Reinhardt et al., 2013 Cell Stem Cell 12: 354-367 참조). iSPC에서 LRRK2 G2019S 돌연변이와 관련된 증가된 미토콘드리아 손상은 또한 G2019S 돌연변이의 유전 보정에 의하여 차단된다 (Sanders et al., 2013 Neurobiol. Dis. 62: 381-386 참조).
추가의 증거는 자가포식-리소좀 경로를 갖는 LRRK2 기능 및 기능이상과 관련되어 있다 (Manzoni and Lewis, 2013 Faseb J. 27:3234-3429 참조). LRRK2 단백질은 세포가 알파-시뉴클레인을 분해하는 능력에 불리한 영향을 미치는 샤프론-매개된 자가포식에 결함을 부여한다 (Orenstein et al., 2013 Nature Neurosci. 16 394-406). 기타 세포 모델에서, 선택성 LRRK2 억제제는 대자가포식을 자극하는 것으로 나타났다 (Manzoni et al., 2013 BBA Mol . Cell Res. 1833: 2900-2910 참조). 이들 데이타는 LRRK2 키나제 활성의 소분자 억제제가 GBA 돌연변이와 관련된 파킨슨병의 형태를 비롯한 이상 자가포식/리소좀 분해 경로로부터 발생하는 세포성 단백질항상성에서의 결합을 특징을 하는 질환 (Swan and Saunders-Pullman 2013 Curr. Neurol . Neurosci Rep. 13: 368 참조), 기타 알파-시뉴클레인성 질환, 타우병증, 알츠하이머병 (Li et al., 2010 Neurodegen . Dis. 7: 265-271 참조) 및 기타 신경변성 질환 (Nixon 2013 Nat. Med . 19: 983-997 참조) 및 고셔병 (Westbroek et al., 2011 Trends. Mol . Med . 17: 485-493 참조)의 치료에서의 유용성을 가질 수 있다. 추가로, 또한 정상 대상체의 섬유모세포에 비하여 니만-피크 C형 (NPC) 질환 환자의 섬유모세포에서 유의하게 증가된 레벨의 LRRK2 mRNA가 관찰되며, 이는 이상 LRRK2 기능이 리소좀 질병에서 역할을 할 수 있는 것을 나타낸다 (Reddy et al., 2006 PLOS One 1 (1):e19 doi: 10.1371/journal.pone.0000019 - supporting information Dataset S1 참조). 이러한 관찰은 LRRK2 억제제가 NPC의 치료를 위한 유용성을 가질 수 있다는 것을 시사한다.
LRRK2의 PD-관련 G2019S 돌연변이 형태는 또한 튜불린-관련 타우(Tau)의 인산화를 향상시키는 것으로 보고되었으며 (Kawakami et al., 2012 PLoS ONE 7: e30834, doi 10.1371 참조), LRRK2가 타우 및 알파-시뉴클린의 병원성 효과의 상류에서 작용하는 질환 모델이 제안되었다 (Taymans & Cookson, 2010, BioEssays 32: 227-235 참조). 이를 뒷받침하여, LRRK2 발현은 트랜스제닉 마우스 모델에서 불용성 타우의 증가된 응집 및 증가된 타우 인산화와 관련되어 있다 (Bailey et al., 2013 Acta Neuropath. 126:809-827 참조). PD 병원성 돌연변이 단백질 LRRK2 R1441G의 과발현은 트랜스제닉 마우스 모델에서 타우의 과인산화 및 파킨슨병의 증상을 야기하는 것으로 보고되었다 (Li, Y. et al., 2009, Nature Neuroscience 12: 826-828 참조). 그러므로, 이러한 데이타는 키나제 촉매 활성의 LRRK2 억제제가 타우의 과인산화를 특징으로 하는 타우병증 질환, 예컨대 은친화입자병, 픽병, 피질기저핵 변성, 진행 핵상 마비 및, 염색체 17과 연관된 유전성 전측두엽 치매 및 파킨슨증 (FTDP-17)의 치료에 유용할 수 있다는 것을 시사한다 (Goedert, M and Jakes, R (2005) Biochemica et Biophysica Acta 1739, 240-250 참조). 게다가, LRRK2 억제제는 약화된 도파민 레벨을 특징으로 하는 기타 질환, 예컨대 약물 중독과 관련된 금단 증상/재발의 치료에서의 유용성을 가질 수 있다 (Rothman et al., 2008, Prog . Brain Res, 172: 385 참조).
기타의 연구는 LRRK2의 G2019S 돌연변이 형태의 과발현이 트랜스제닉 마우스 모델에서의 뇌실밑 구역 (SVZ) 신경조상 세포 증식 및 이동에서 결함을 부여하며 (Winner et al., 2011 Neurobiol . Dis. 41: 706-716 참조), 신경돌기 길이 및 분지 세포 배양 모델을 감소시키는 (Dachsel et al., 2010 Parkinsonism & Related Disorders 16: 650-655 참조) 것으로 밝혀졌다. 게다가, SVZ 신경조상 세포 증식 및 이동을 촉진시키는 약물은 또한 뇌졸중의 설치류 모델에서 허혈 손상 후 신경계 결과를 향상시키는 것으로 보고되었다 (Zhang et al., 2010 J. Neurosci . Res. 88: 3275-3281 참조). 상기 발견은 LRRK2의 이상 활성을 억제하는 화합물이 신경세포 손상, 예컨대 허혈 뇌졸중, 외상 뇌 손상, 척수 손상 후 CNS 기능의 복구를 자극하도록 설계된 치료를 위한 유용성을 가질 수 있다.
LRRK2에서의 돌연변이는 또한 경도 인지 장애 (MCI)로부터 알츠하이머병으로의 전이와 임상적으로 관련되어 있는 것으로 확인되었다 (WO2007149798 참조). 상기 데이타는 LRRK2 키나제 활성의 억제제가 치료 질환, 예컨대 알츠하이머병, 기타 치매 및 관련 신경변성 질병에 유용할 수 있다는 것을 시사한다.
정상 LRRK2 단백질의 이상 조절은 또한 일부 질환 조직 및 질환의 모델에서 관찰된다. miR-205에 의한 LRRK2의 번역 제어의 정상 기전은 일부 산발성 PD 사례에서 교란되며, 여기서 PD 뇌 샘플에서의 miR-205 레벨에서의 유의적인 감소는 상기 샘플에서의 증가된 LRRK2 단백질 레벨과 일치한다 (Cho et al., (2013) Hum. Mol. Gen. 22: 608-620 참조). 그러므로, LRRK2 억제제는 증가된 레벨의 정상의 LRRK2 단백질을 갖는 산발성 PD 환자의 치료에 사용될 수 있다.
마모셋에서의 파킨슨병의 실험 모델에서, LRRK2 mRNA의 증가는 L-도파 유발된 운동이상증의 레벨과 상관관계를 갖는 방식으로 관찰된다 (Hurley, M.J et al., 2007 Eur . J. Neurosci. 26: 171-177 참조). 이는 LRRK2 억제제가 상기 운동이상증의 향상에서의 유용성을 가질 수 있다는 것을 시사한다.
LRRK2 mRNA의 유의하게 증가된 레벨은 ALS 환자 근육 생검 샘플에서 보고되었다 (Shtilbans et al., 2011 Amyotrophic Lateral Sclerosis 12: 250-256 참조). 증가된 레벨의 LRRK2 키나제 활성은 ALS의 특징적인 특징이 될 수 있다는 것을 시사한다. 그러므로, 이러한 관찰은 LRRK2 억제제가 ALS의 치료에 대한 유용성을 가질 수 있다는 것을 나타냈다.
또한, LRRK2 키나제 활성은 미세아교 전염증성 반응을 매개하는 역할을 할 수 있다는 것을 나타내는 증거가 존재한다 (Moehle et al., 2012, J. Neuroscience 32: 1602-1611 참조). 이러한 관찰은 파킨슨병, 알츠하이머병, 다발성 경화증, HIV-유발된 치매, 근위축성 측삭 경화증, 허혈 뇌졸중, 외상 뇌 손상 및 척수 손상을 비롯한 다양한 신경변성 질환에 기여하는 이상 신경염증 기전의 치료를 위한 LRRK2 억제제의 가능한 유용성을 시사한다. 일부 증거는 또한 LRRK2가 시험관내 신경세포 선조 분화를 조절하는 역할을 한다는 것을 나타낸다 (Milosevic, J. et al., 2009 Mol . Neurodegen. 4: 25 참조). 상기 증거는 LRRK2의 억제제가 CNS 질병의 세포계 처리에서의 결과에 따른 치료적 적용을 위한 시험관내 신경세포 선조 세포의 생성에서의 유용성을 가질 수 있다는 것을 시사한다.
LRRK2 G2019S 돌연변이를 갖는 파킨슨병 환자는 신장암, 유방암, 폐암, 전립선암뿐 아니라, 급성 림프성 백혈병 (AML)을 비롯한 비-피부암의 증가된 빈도를 나타내는 것으로 보고되었다. LRRK2에서의 G2019S 돌연변이가 LRRK2 키나제 도메인의 촉매 활성을 증가시키는 것으로 나타난 증거가 존재하므로, LRRK2의 소분자 억제제는 암, 예를 들면 신장암, 유방암, 폐암, 전립선암 (예, 고형 종양) 및 혈액암의 치료에서의 유용성을 가질 수 있다 (AML; Saunders-Pullman et al., 2010, Movement Disorders, 25:2536-2541; Inzelberg et al., 2012 Neurology 78: 781-786 참조). LRRK2의 증폭 및 과발현은 또한 유두상 신장 및 갑상선 암종에서 LRRK2 및 MET 종양유전자 사이의 협동성이 종양 세포 성장 및 생존을 촉진시킬 수 있는 것으로 보고되었다 (Looyenga et al., 2011 PNAS 108: 1439-1444 참조).
일부 연구는 강직 척추염 (Danoy P, et al., 2010. PLoS Genet.; 6(12):e1001195 참조); 및 나병 감염 (Zhang FR, et al., 2009, N Engl J Med. 361:2609-18 참조)에 대한 감수성을 갖는 공통의 LRRK2 변형체의 유전적 관련성을 시사하였다. 상기 발견은 LRRK2의 억제제가 강직 척추염 및 나병 감염의 치료에서의 유용성을 가질 수 있다는 것을 시사한다.
크론병에 대한 3종의 전 게놈 관련 스캔의 메타-분석은 LRRK2 유전자를 함유하는 유전자좌를 비롯한 질환과 관련된 다수의 유전자좌를 확인하였다 (Barrett et al., 2008, Nature Genetics, 40: 955-962 참조). 또한, LRRK2가 크론병 발병기전과 관련된 신호전달 경로에 수반될 수 있는 IFN-γ 표적 유전자라는 증거가 대두되었다 (Gardet et al., 2010, J. Immunology, 185: 5577-5585 참조). 상기 발견은 LRRK2의 억제제가 크론병의 치료에서의 유용성을 가질 수 있다는 것을 시사한다.
IFN-γ 표적 유전자로서, LRRK2는 또한 면역계의 기타 질환, 예컨대 다발성 경화증 및 류마티스 관절염의 바탕을 이루는 T 세포 기전에서 역할할 수 있다. LRRK2 억제제의 추가의 잠재적 유용성은 B 림프구가 LRRK2 발현 세포의 주요 모집단을 구성한다는 보고된 발견으로부터 유래한다 (Maekawa et al., 2010, BBRC 392: 431-435 참조). 이는 B 세포 결핍이 질환, 예컨대 림프종, 백혈병, 다발성 경화증 (Ray et al., 2011 J. Immunol. 230: 109 참조), 류마티스 관절염, 전신 홍반 루푸스, 자가면역 용혈 빈혈, 진성 적혈구 무형성증, 특발성 혈소판감소성 자반증 (ITP), 에반스 증후군, 혈관염, 수포성 피부 장애, 제1형 당뇨병, 쇠그렌 증후군, 데빅병 및 염증성 근육병에서 유효하거나 또는 유효할 수 있는 면역계의 질환의 치료에 LRRK2 억제제가 유용할 수 있다는 것을 시사한다 (Engel et al., 2011 Pharmacol. Rev. 63: 127-156; Homam et al., 2010 J. Clin . Neuromuscular Disease 12: 91-102 참조).
본 발명은 제1의 측면에서 N-프로필-4-[[4-[3,3,3-트리스(플루오라닐)프로필]-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-일]아미노]벤즈아미드를 제외한, 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다:
<화학식 I>
Figure pct00001
(상기 식에서,
R1은 H이고,
R2는 1개 이상의 히드록실로 임의로 치환된 C1- 5알킬이거나 또는
R1 및 R2는 이들이 부착되어 있는 질소와 함께
(1) C1- 3알킬, -CH2-OCH3, 할로 및, 4 위치에서의 질소에서 C1- 3알킬로 임의로 치환된 피페라진-1-일로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환되는 질소 함유 헤테로시클릭 고리 또는
(2)
Figure pct00002
로 이루어진 군으로부터 선택된 비시클릭 고리계를 형성하며, 여기서 Ra 및 Rb의 각각의 경우는 H, CN, 할로, -CH2OCH3, C1- 3알콕실 및, 1개의 히드록시 기로 임의로 치환된 C1-3알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고;
R3 및 R6은 각각 H, C1- 3알콕실, -O-C1- 3할로알킬, -O-CH2-C3- 6시클로알킬, 할로 및 -NRxRy로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되며, 여기서 Rx 및 Ry는 각각 독립적으로 H 또는 C1-3알킬이고;
R4 및 R5는 각각 H, 할로, C1- 3알콕시 및 C1- 3알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고,
R7은 N 또는 CH이고;
R8은 H, CN, C1- 3할로알킬 및 C1- 3알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R9는 C1- 3알콕실, C1- 3할로알킬, -O-C1- 3할로알킬 및 -O-CH2-C3- 6시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택됨).
본 발명의 추가의 측면에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
본 발명의 추가의 측면은 파킨슨병 또는 알츠하이머병의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
본 발명의 상기 및 기타 측면은 본원에 제공된 설명 및 방법에 관하여 보다 구체적으로 기재될 것이다. 본 발명은 다양한 형태로 구체화될 수 있으며, 본원에 명시된 실시양태로 제한되는 것으로 간주하여서는 안 되는 것으로 이해하여야 한다. 그보다는, 이들 실시양태는 본 개시내용이 철저하며, 완전하며, 본 발명의 범주를 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 충분히 전달하도록 하기 위하여 제공된다.
본 발명의 기재에 사용된 용어는 단지 특정한 실시양태를 기재하기 위한 것이며, 본 발명을 제한하지 않는다. 본 발명 및 첨부된 청구범위의 실시양태의 기재에 사용된 바와 같이, 단수 형태는 문맥이 다른 의미로 명백하게 나타내지 않는다면 복수 형태도 마찬가지로 포함시키고자 한다. 또한, 본원에 사용된 바와 같이, "및/또는"은 관련 나열된 항목 중 하나 이상의 임의의 및 모든 가능한 조합을 지칭하며, 이를 포괄한다. 추가로, 용어 "포함하다" 및/또는 "포함하는"은 본 명세서에서 사용시 명시된 특징, 정수, 단계, 작업, 엘리먼트 및/또는 성분의 존재를 명시하지만, 그의 하나 이상의 기타 특징, 정수, 단계, 작업, 엘리먼트, 성분 및/또는 군의 존재 또는 부가를 배제하지 않는 것으로 이해될 것이다.
일반적으로, 본원에 사용된 명명법 및 본원에 기재된 유기 화학, 의약 화학, 생물학에서의 실험 절차는 관련 기술분야에서 널리 공지되며, 통상적으로 사용되는 것이다. 다른 의미로 정의되지 않는다면, 본원에 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어는 일반적으로 본 개시내용이 속하는 관련 기술분야의 통상의 기술자가 통상적으로 이해하는 바와 동일한 의미를 갖는다. 본원에 사용된 용어에 대하여 복수의 정의가 존재하는 경우, 다른 의미로 명시하지 않는다면 본 부문에서의 것이 우선한다.
본원에서 지칭된 모든 특허, 특허 출원 및 공보는 그 전문이 참조로 포함된다. 용어에서 충돌이 존재하는 경우, 본 명세서가 우세하다.
A. 정의
본원에 사용된 바와 같이, "알킬"은 명시된 수의 탄소 원자를 갖는 1가 포화 탄화수소쇄를 지칭한다. 예를 들면 C1-3 알킬은 1 내지 3개의 탄소 원자를 갖는 알킬 기를 지칭한다. C1-5 알킬은 1 내지 5개의 탄소 원자를 갖는 알킬 기를 지칭한다. 알킬 기는 직쇄형 또는 분지형일 수 있다. 일부 실시양태에서, 분지형 알킬 기는 1, 2 또는 3개의 분지를 가질 수 있다. 예시의 알킬 기는 메틸, 메틸에틸, 에틸, 프로필 (n-프로필 및 이소프로필), 메틸프로필, 부틸 (n-부틸, 이소부틸 및 t-부틸), 펜틸 (n-펜틸, 이소펜틸 및 네오펜틸) 및 헥실을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 바와 같이, "알콕시"는 기 -O-알킬을 지칭한다. 예를 들면 C1-5 알콕실 기는 1 내지 5개의 탄소 원자를 함유한다. C1-3 알콕실 기는 1 내지 3개의 탄소 원자를 함유한다. 예시의 알콕시 기로는 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 부톡실 및 펜틸옥시을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 바와 같이, "시클로알킬"은 3 내지 10개의 탄소 원자의 포화 모노시클릭 탄화수소 고리를 지칭한다. 예를 들면 C3-6 시클로알킬은 고리에서의 구성 원자로서 3 내지 6개의 탄소 원자를 함유한다. 시클로알킬의 예는 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸 및 시클로헥실을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, "할로겐"은 불소 (F), 염소 (Cl), 브로민 (Br) 또는 아이오딘 (I)을 포함한다. "할로"는 할로겐 라디칼: 플루오로 (-F), 클로로 (-Cl), 브로모 (-Br) 또는 요오도 (-I)를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, "할로알킬"은 탄소 원자에 결합된 수소 원자를 대체하여 알킬 기의 임의의 또는 모든 탄소 원자에서 치환된 F, Cl, Br 또는 I로부터 선택된 할로겐 원자 1개 이상을 갖는 상기 정의된 바와 같은 알킬 기를 지칭한다. 예를 들면 C1- 3할로알킬은 1개 이상의 할로겐 원자로 치환된 C1- 3알킬 기를 지칭한다. 일부 실시양태에서, "할로알킬"은 F 또는 Cl로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 할로겐 원자로 치환된 알킬 기를 지칭한다. 예시의 할로알킬 기는 클로로메틸, 브로모에틸, 트리플루오로메틸 및 디클로로메틸을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 바와 같이, "질소 함유 헤테로시클릭 고리"는 포화이며, 1개 이상의 질소 원자를 함유하는 5 또는 6-원 질소 함유 모노헤테로시클릭 고리를 지칭한다. 임의로, 헤테로시클릭 고리는 각각 O 또는 N으로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 헤테로 원자를 함유할 수 있다. 질소 함유 헤테로시클릭 고리의 예는 모르폴린, 피페라진, 피페리딘, 옥사졸리딘, 피롤리딘을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 바와 같이, 기에 관한 언급에서 "치환된"은 기에서 구성 원자 (예, 탄소 원자)에 결합된 하나 이상의 수소 원자가 정의된 치환기의 기로부터 선택된 치환기로 대체된다는 것을 나타낸다. 용어 "치환된"은 상기 치환이 치환된 원자 및 치환기의 허용된 원자가에 따르며, 치환이 안정한 화합물 (즉, 변환, 예컨대 재배열, 고리화 또는 제거를 자발적으로 겪지 않으며, 반응 혼합물로부터 단리를 견디기에 충분히 강한 것)을 초래하는 내포된 조항을 포함하는 것으로 이해하여야 한다. 기가 하나 이상의 치환기를 함유할 수 있는 것으로 명시될 경우, 기 내에서의 하나 이상의 (적절할 경우) 구성 원자는 치환될 수 있다. 게다가, 기에서의 단일 구성 원자는, 치환이 원자의 허용된 원자가에 따른다면 1개 초과의 치환기로 치환될 수 있다. 예시의 치환기는 알킬, 알콕실, 할로, 할로알킬, -CH2OCH3, OH 및 헤테로시클로알킬 (예, 피페라지닐)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 적절한 치환기는 각각의 치환된 또는 임의로 치환된 기에 대하여 본원에서 정의된다.
본원에 사용된 바와 같이, "임의로 치환된"은 기, 예컨대 알킬, 페닐, 피라졸-4-일 및 알콕실이 비치환될 수 있으며, 정의된 바와 같은 1개 이상의 치환기로 치환될 수 있다는 것을 나타낸다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "질환"은 기능의 수행을 차단 또는 방해하거나 및/또는 병을 앓고 있는 인간 또는 인간과 접촉하는 인간에게 증상, 예컨대 불편함, 기능장애, 고통 또는 심지어 사망을 야기하는, 신체 또는 일부 기관의 상태에서의 임의의 변경을 지칭한다. 질환은 또한 디스템퍼(distemper), 병약(ailing), 불쾌(ailment), 병(malady), 장애, 아픔(sickness), 질병(illness), 호소증상(complain), 상호소인(interdisposition) 및/또는 질병상태(affectation)를 들 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 질환에 관하여 "치료하다", "치료하는" 또는 "치료"는 (1) 질환 또는 질환의 생물학적 징후 중 하나 이상을 향상시키고, (2) (a) 질환을 초래하거나 또는 그의 원인이 되는 생물학적 캐스케이드에서의 하나 이상의 포인트 또는 (b) 질환의 생물학적 징후 중 하나 이상을 간섭하고, (3) 질환과 관련된 증상 또는 효과 중 하나 이상을 완화시키고, (4) 질환 또는 질환의 생물학적 징후 중 하나 이상의 진행을 서행화시키고 및/또는 (5) 질환 또는 질환의 생물학적 징후의 경중도의 가능성을 약화시키는 것을 의미한다.
본원에 사용된 바와 같이, "예방하다", "예방하는" 또는 "예방"은 질환 또는 질환의 생물학적 징후의 개시의 가능성을 약화시키거나 또는 그의 개시를 지연시키는 약물의 예방적 투여를 의미한다.
본원에 사용된 바와 같이, "대상체"는 포유동물 대상체 (예, 개, 고양이, 말, 소, 양, 염소, 원숭이 등) 및, 남성 및 여성 대상체 모두를 포함하며, 신생아, 유아, 청소년, 사춘기, 성인 및 노인 대상체를 포함하며, 추가로 백인, 흑인, 아시아인, 아메리카 인디안 및 히스패닉을 포함한 (이에 제한되지는 않음) 다양한 인종 및 민족을 포함한 인간 대상체를 의미한다.
본원에 사용된 바와 같이, "제약상 허용되는 염(들)"은 대상 화합물의 원하는 생물학적 활성을 보유하고, 최소의 원치않는 독성학적 효과를 나타내는 염(들)을 지칭한다. 상기 제약상 허용되는 염은 화합물의 최종 단리 및 정제 중에 계내에서 또는, 정제된 화합물을 그의 유리 산 또는 유리 염기 형태로 적절한 염기 또는 산과 각각 별도로 반응시켜 생성될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 본 발명의 화합물 또는 기타 제약상 활성제에 관한 "치료적 유효량"은 환자의 질환을 치료 또는 예방하기에는 충분하지만, 건전한 의학적 판단내에서 (타당한 유익/유해 비율에서) 심각한 부작용을 피하기에 충분히 낮은 화합물의 양을 의미한다. 화합물의 치료적 유효량은 선택된 특정한 화합물 (예를 들면 화합물의 효능, 효과 및 반감기를 고려함); 선택된 투여 경로; 치료되는 질환; 치료되는 질환의 경중도; 치료되는 환자의 연령, 크기, 체중 및 신체 질환; 치료되는 환자의 의학적 이력; 치료 기간; 동시 요법의 성질; 원하는 치료적 효과; 및 유사 요인에 따라 변경될 것이지만, 그럼에도 불구하고, 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의하여 통상적으로 결정될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "발명의 화합물(들)" 또는 "본 발명의 화합물(들)"은 상기 정의된 바와 같이 임의의 형태, 즉 임의의 염 또는 비-염 형태 (예, 유리 산 또는 염기 형태로서 또는 염, 특히 그의 제약상 허용되는 염으로서) 및 그의 임의의 물리적 형태 (예, 비-고체 형태 (예, 액체 또는 반고체 형태) 및 고체 형태 (예, 무정형 또는 결정질 형태, 특이성 다형체 형태), 수화물 (예, 일수화물, 이수화물 및 헤미수화물)을 비롯한 용매화물 형태 포함) 및 다양한 형태의 혼합의 화학식 I의 화합물을 의미한다.
B. 화합물
본 발명은 제1의 측면에서 N-프로필-4-[[4-[3,3,3-트리스(플루오라닐)프로필]-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-일]아미노]벤즈아미드를 제외한 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다:
<화학식 I>
Figure pct00003
상기 식에서,
R1은 H이고,
R2는 1개 이상의 히드록실로 임의로 치환된 C1-5알킬이거나 또는
R1 및 R2는 이들이 부착되어 있는 질소와 함께
(1) C1- 3알킬, -CH2-OCH3, 할로 및, 4 위치에서의 질소에서 C1- 3알킬로 임의로 치환된 피페라진-1-일로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환되는 질소 함유 헤테로시클릭 고리 또는
(2)
Figure pct00004
로 이루어진 군으로부터 선택된 비시클릭 고리계를 형성하며, 여기서 Ra 및 Rb의 각각의 경우는 H, CN, 할로, -CH2OCH3, C1- 3알콕실 및, 1개의 히드록시 기로 임의로 치환된 C1-3알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고;
R3 및 R6은 각각 H, C1- 3알콕실, -O-C1- 3할로알킬, -O-CH2-C3- 6시클로알킬, 할로 및 -NRxRy로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되며, 여기서 Rx 및 Ry는 각각 독립적으로 H 또는 C1-3알킬이고;
R4 및 R5는 각각 H, 할로, C1- 3알콕시 및 C1- 3알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고,
R7은 N 또는 CH이고;
R8은 H, CN, C1- 3할로알킬 및 C1- 3알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R9는 C1- 3알콕실, C1- 3할로알킬, -O-C1- 3할로알킬 및 -O-CH2-C3- 6시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다.
한 실시양태에서, 본 발명은 R1 및 R2가 이들이 부착되어 있는 질소와 함께 질소 함유 헤테로시클릭 고리를 형성하며, 여기서 헤테로시클릭 고리는 각각 C1-3알킬, -CH2-OCH3, 할로 및, 질소에서 C1- 3알킬로 임의로 치환된 피페라진으로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 치환기로 임의로 치환된 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염에 관한 것이다. 한 실시양태에서, 본 발명은 R1 및 R2가 이들이 부착되어 있는 질소와 함께 질소 함유 헤테로시클릭 고리를 형성하며, 여기서 헤테로시클릭 고리는 각각 C1- 3알킬 및 할로로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 치환기로 임의로 치환된 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염에 관한 것이다.
추가의 실시양태에서, 본 발명은 R1 및 R2가 이들이 부착되어 있는 질소와 함께 질소 함유 헤테로시클릭 고리를 형성하며, 여기서 헤테로시클릭 고리는 각각 C1-3알킬로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 치환기로 임의로 치환된 모르폴린, 피페라진 또는 피페리딘으로부터 선택된 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염에 관한 것이다. 추가의 실시양태에서, 본 발명은 R1 및 R2가 이들이 부착되어 있는 질소와 함께 질소 함유 헤테로시클릭 고리를 형성하며, 여기서 헤테로시클릭 고리는 각각 C1- 3알킬로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 치환기로 임의로 치환된 모르폴린인 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염에 관한 것이다. 추가의 실시양태에서, 본 발명은 R1 및 R2가 이들이 부착되어 있는 질소와 함께 질소 함유 헤테로시클릭 고리를 형성하며, 여기서 헤테로시클릭 고리가 치환되지 않은 모르폴리닐인 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염에 관한 것이다. 추가의 실시양태에서, 본 발명은 R1 및 R2가 이들이 부착되어 있는 질소와 함께 질소 함유 헤테로시클릭 고리를 형성하며, 여기서 헤테로시클릭 고리가 각각 C1-3알킬로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 치환기로 임의로 치환된 피페라진인 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염에 관한 것이다.
추가의 실시양태에서, 본 발명은 R1 및 R2가 이들이 부착되어 있는 질소와 함께 질소 함유 헤테로시클릭 고리를 형성하며, 여기서 헤테로시클릭 고리가 각각 C1-3알킬로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 치환기로 임의로 치환된 옥사졸리딘 또는 피롤리딘인 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염에 관한 것이다.
한 실시양태에서, 본 발명은 R1 및 R2가 이들이 부착되어 있는 질소와 함께
Figure pct00005
을 형성하는 화학식 I의 화합물 그의 제약상 허용되는 염에 관한 것이다.
한 실시양태에서, 본 발명은 R1 및 R2가 이들이 부착되어 있는 질소와 함께
Figure pct00006
를 형성하며, 여기서 Ra 및 Rb의 각각의 경우는 H, -CH2OCH3, C1- 3알콕실 및 -CH2OH로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염에 관한 것이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 R3 및 R6이 각각 H 및 C1- 3알콕실로부터 독립적으로 선택된 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 임의의 상기 적용 가능한 실시양태에 관한 것이다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명은 R3 및 R6이 각각 C1- 3알콕실로부터 독립적으로 선택된 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 임의의 상기 적용 가능한 실시양태에 관한 것이다. 한 실시양태에서, 본 발명은 R3 및 R6이 각각 H 및 -OCH3로부터 독립적으로 선택된 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 임의의 상기 적용 가능한 실시양태에 관한 것이다. 추가의 실시양태에서, 본 발명은 R3 및 R6이 H인 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 임의의 상기 적용 가능한 실시양태에 관한 것이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 R4 및 R5가 각각 H 및 할로로부터 독립적으로 선택된 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 임의의 상기 적용 가능한 실시양태에 관한 것이다. 한 실시양태에서, 본 발명은 R4 및 R5가 각각 H 및 F로부터 독립적으로 선택된 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 임의의 상기 적용 가능한 실시양태에 관한 것이다. 추가의 실시양태에서, 본 발명은 R4 및 R5가 H인 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 임의의 상기 적용 가능한 실시양태에 관한 것이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 R7이 CH인 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 임의의 상기 적용 가능한 실시양태에 관한 것이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 R8이 H, CH3, CF3 및 CN으로 이루어진 군으로부터 선택된 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 임의의 상기 적용 가능한 실시양태에 관한 것이다. 한 실시양태에서, 본 발명은 R8이 H, CH3 및 CN으로 이루어진 군으로부터 선택된 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 임의의 상기 적용 가능한 실시양태에 관한 것이다. 추가의 실시양태에서, 본 발명은 R8이 H 및 CN으로부터 선택된 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 임의의 상기 적용 가능한 실시양태에 관한 것이다. 추가의 실시양태에서, 본 발명은 R8이 H인 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 임의의 상기 적용 가능한 실시양태에 관한 것이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 R9가 C1- 3알콕실 및 -O-CH2-C3- 6시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택된 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 임의의 상기 적용 가능한 실시양태에 관한 것이다. 한 실시양태에서, 본 발명은 R9가 C1- 3알콕실인 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 임의의 상기 적용 가능한 실시양태에 관한 것이다. 추가의 실시양태에서, 본 발명은 R9가 -OCH2CH3인 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 임의의 상기 적용 가능한 실시양태에 관한 것이다. 한 실시양태에서, 본 발명은 R9가 -O-CH2-시클로프로필인 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 임의의 상기 적용 가능한 실시양태에 관한 것이다.
한 실시양태에서, 화학식 I의 화합물은 실시예 E1 내지 E66 중 임의의 하나의 화합물, 그의 유리 염기, 유리 산 또는 염 (예, 제약상 허용되는 염)이다.
본원에 기재된 화합물의 유리 염기 형태 또는 유리 산 형태 이외에, 화합물의 염 형태도 또한 본 발명의 범주에 포함된다. 본원에 기재된 화합물의 염 또는 제약상 허용되는 염은 화합물의 최종 단리 및 정제 중에 계내에서 또는, 정제된 화합물을 그의 유리 산 또는 유리 염기 형태로 적절한 염기 또는 산과 각각 별도로 반응시켜 생성될 수 있다. 적절한 제약 염에 관한 보고의 경우, (Berge et al., J. Pharm , Sci., 66, 1-19, 1977; P L Gould, International Journal of Pharmaceutics, 33 (1986), 201-217; and Bighley et al., Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, Marcel Dekker Inc, New York 1996, Volume 13, page 453-497)을 참조한다.
특정한 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 염을 형성하기에 충분히 산성인 산성 작용기를 함유할 수 있다. 대표적인 염은 제약상 허용되는 금속 염, 예컨대 나트륨, 칼륨, 리튬, 칼슘, 마그네슘, 알루미늄 및 아연 염; 제약상 허용되는 금속 양이온, 예컨대 나트륨, 칼륨, 리튬, 칼슘, 마그네슘, 알루미늄 및 아연의 탄산염 및 중탄산염; 지방족 아민, 방향족 아민, 지방족 디아민 및 히드록시 알킬아민을 비롯한 제약상 허용되는 유기 1급, 2급 및 3급 아민, 예컨대 메틸아민, 에틸아민, 디에틸아민, 트리에틸아민, 에틸렌디아민, 에탄올아민, 디에탄올아민 및 시클로헥실아민을 포함한다.
특정한 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 염기성 기를 함유할 수 있으므로, 적절한 산으로 처리하여 제약상 허용되는 산 부가 염을 형성할 수 있다. 적절한 산은 제약상 허용되는 무기 산 및 제약상 허용되는 유기 산을 포함한다. 상기 염은 결정질 또는 무정형일 수 있다. 예시의 제약상 허용되는 산 부가 염은 히드로클로라이드, 히드로브로마이드, 니트레이트, 메틸니트레이트, 술페이트, 바이술페이트, 술파메이트, 포스페이트, 아세테이트, 히드록시아세테이트, 페닐아세테이트, 프로피오네이트, 부티레이트, 이소부티레이트, 발레레이트, 말레에이트, 히드록시말레에이트, 아크릴레이트, 푸마레이트, 말레이트, 타르트레이트, 시트레이트, 살리실레이트, p-아미노살리실레이트, 글리콜레이트, 락테이트, 헵타노에이트, 프탈레이트, 옥살레이트, 숙시네이트, 벤조에이트, o-아세톡시벤조에이트, 클로로벤조에이트, 메틸벤조에이트, 디니트로벤조에이트, 히드록시벤조에이트, 메톡시벤조에이트, 만델레이트, 탄네이트, 포르메이트, 스테아레이트, 아스코르베이트, 팔미테이트, 올레에이트, 피루베이트, 파모에이트, 말로네이트, 라우레이트, 글루타레이트, 글루타메이트, 에스톨레이트, 메탄술포네이트 (메실레이트), 에탄술포네이트 (에실레이트), 2-히드록시에탄술포네이트, 벤젠술포네이트 (베실레이트), p-아미노벤젠술포네이트, p-톨루엔술포네이트 (토실레이트) 및 나프탈렌-2-술포네이트를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제약상 허용되는 염은 L-타르트레이트, 에탄디술포네이트 (에디실레이트), 술페이트, 포스페이트, p-톨루엔술포네이트 (토실레이트), 히드로클로라이드 염, 메탄술포네이트, 시트레이트, 푸마레이트, 벤젠술포네이트, 말레에이트, 히드로브로메이트, L-락테이트, 말로네이트 및 S-캄포르-10-술포네이트를 포함한다. 특정한 실시양태에서, 상기 염의 일부는 용매화물을 형성한다. 특정한 실시양태에서, 상기 염의 일부는 결정질이다.
화학식 I의 화합물, 그의 염 (예, 제약상 허용되는 염)은 입체이성질체 형태로 존재할 수 있다 (예, 하나 이상의 비대칭 탄소 원자를 함유한다). 개개의 입체이성질체 (거울상이성질체 및 부분입체이성질체) 및 상기의 혼합물도 본 발명의 범주에 포함된다. 또한, 본 발명은 하나 이상의 키랄 중심이 역전된 그의 이성질체와의 혼합물로서 화학식 I의 화합물, 그의 염 (예, 제약상 허용되는 염)의 개개의 이성질체를 포괄한다. 마찬가지로, 화학식 I의 화합물, 그의 염 (예, 제약상 허용되는 염)은 화학식으로 제시된 것을 제외한 호변이성질체 형태로 존재할 수 있으며, 이들도 또한 본 발명의 범주내에 포함되는 것으로 이해한다. 본 발명은 상기 정의된 특정 기의 모든 조합 및 하위세트를 포함하는 것으로 이해한다. 본 발명의 범주는 입체이성질체의 혼합물뿐 아니라, 정제된 부분입체이성질체 또는 거울상이성질체/부분입체이성질체 풍부한 혼합물을 포함한다. 화학식 I의 화합물, 그의 염 (예, 제약상 허용되는 염)의 개개의 이성질체뿐 아니라, 그의 임의의 전체 또는 부분 평형화된 혼합물도 또한 본 발명의 범주에 포함된다. 또한, 본 발명은 화학식 I의 화합물, 그의 염 (예, 제약상 허용되는 염)의 개개의 이성질체뿐 아니라, 하나 이상의 키랄 중심이 역전된 그의 이성질체의 혼합물도 포함한다. 본 발명은 상기 정의된 특정한 기의 모든 조합 및 하위세트를 포함하는 것으로 이해한다. 상이한 이성질체 형태는 통상의 방법에 의하여 서로 분리 또는 분해될 수 있거나 또는 임의의 제시된 이성질체는 통상의 합성 방법에 의하여 또는 입체특이성 또는 비대칭 합성에 의하여 얻을 수 있다.
또한, 본 발명은, 하나 이상의 원자가 자연에서 가장 흔하게 발견되는 원자 질량 또는 질량수와는 상이한 원자 질량 또는 질량수를 갖는 원자에 의하여 대체된다는 사실을 제외하고, 화학식 I의 화합물 또는 그의 염과 동일한 동위원소-표지된 화합물 및 염을 포함한다. 화학식 I의 화합물 또는 그의 염에 혼입될 수 있는 동위원소의 예는 수소, 탄소, 질소, 불소의 동위원소, 예컨대 3H, 11C, 14C 및 18F을 포함한다. 화학식 I의 상기 동위원소-표지된 화합물 또는 그의 염은 약물 및/또는 기질 조직 분포 검정에서 유용하다. 예를 들면 11C 및 18F 동위원소는 PET (양전자 방사 단층 촬영)에서 유용하다. PET는 뇌 영상화에 유용하다. 화학식 I의 동위원소-표지된 화합물 및 그의 염은 일반적으로 하기 개시된 절차의 실시에 의하여, 비-동위원소 표지된 시약 대신에 입수가 용이한 동위원소-표지된 시약을 사용하여 생성될 수 있다. 한 실시양태에서, 화학식 I의 화합물 또는 그의 염은 동위원소 표지되지 않는다.
화학식 I의 특정한 화합물 또는 그의 염은 고체 또는 액체 형태로 존재할 수 있다. 고체 상태에서, 화학식 I의 화합물 또는 염은 결정질 또는 비결정질 형태로 또는 그의 혼합물로서 존재할 수 있다. 결정질 형태로 존재하는 화학식 I의 화합물 또는 염의 경우, 통상의 기술자는 용매 분자가 결정화 중에 결정질 격자로 혼입되는 제약상 허용되는 용매화물이 형성될 수 있다는 것을 숙지할 것이다. 용매화물은 비수성 용매, 예컨대 에탄올, 이소프로판올, DMSO, 아세트산, 에탄올아민 및 에틸 아세테이트를 포함할 수 있거나 또는 이들은 결정질 격자에 혼입되는 용매로서 물을 포함할 수 있다. 결정질 격자에 혼입되는 용매가 물인 용매화물을 통상적으로 "수화물"로 지칭한다. 수화물은 화학량론적 수화물뿐 아니라, 가변량의 물을 함유하는 조성물을 포함한다. 본 발명은 모든 상기 용매화물을 포함한다.
통상의 기술자는 추가로 각종 용매화물을 비롯한 결정질 형태로 존재하는 화학식 I의 특정한 화합물, 그의 제약상 허용되는 염 또는 용매화물이 다형체 (즉, 상이한 결정 구조로 존재하는 능력)를 나타낼 수 있다는 것을 인지할 것이다. 상기 상이한 결정질 형태는 통상적으로 "다형체"로 공지되어 있다. 다형체는 동일한 화학적 조성을 갖지만, 결정질 고체 상태의 패킹, 기하 배열 및 기타 기술적 성질이 상이하다. 그러므로, 다형체는 상이한 물리적 성질, 예컨대 형상, 밀도, 경도, 변형가능성, 안정성 및 용해 성질을 가질 수 있다. 다형체는 통상적으로 확인을 위하여 사용될 수 있는 상이한 융점, IR 스펙트럼 및 X선 분말 회절 패턴을 나타낸다. 통상의 기술자는 예를 들면 화합물을 생성하는데 사용된 반응 조건 또는 시약을 변경 또는 조절하여 상이한 다형체를 생성할 수 있다는 것을 숙지할 것이다. 예를 들면, 온도, 압력 또는 용매에서의 변경은 다형체를 생성할 수 있다. 게다가, 하나의 다형체는 특정한 조건 하에서 또 다른 다형체로 자발적으로 전환될 수 있다. 본 발명은 모든 상기 다형체를 포함한다.
통상의 기술자는 또한 본 발명이 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 다양한 중수소화 형태를 포함할 수 있다는 것을 숙지할 것이다. 탄소 원자에 부착된 각각의 이용 가능한 수소 원자는 독립적으로 중수소 원자로 대체될 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 중수소화 형태의 합성 방법을 알고 있다. 시판 중인 중수소화 출발 물질은 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 중수소화 형태의 제조에 사용될 수 있거나 또는 중수소화 시약 (예, 중수소화알루미늄리튬)을 사용하는 통상의 기법을 사용하여 합성될 수 있다.
본원에 기재된 화합물, 그의 염 (예, 제약상 허용되는 염), 그의 중수소화 형태, 용매화물 또는 수화물은 하나 이상의 다형체 형태로 존재할 수 있다. 그러므로, 추가의 측면에서, 본 발명은 본원에 기재된 화합물, 그의 염 (예, 제약상 허용되는 염)의 다형체 또는 본원에 기재된 화합물 또는 그의 염 (예, 제약상 허용되는 염)의 용매화물 또는 수화물의 다형체를 제공한다.
따라서, 본 발명의 화합물은 화학식 I의 화합물 또는 그의 염, 예를 들면 그의 제약상 허용되는 염을 포함한다. 본 발명의 대표적인 화합물은 기재된 특정한 화합물을 포함한다.
C. 사용 방법
화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 LRRK2 키나제 활성의 억제제이어서 신경계 질환의 치료 또는 예방에서의 잠재적 용도를 갖는 것으로 여겨진다. 예시의 신경계 질환은 파킨슨병, 알츠하이머병, 치매 (레비 소체 치매 및 혈관 치매, HIV-유발된 치매 포함), 근위축성 측삭 경화증 (ALS), 연령 관련 기억 장애, 경도 인지 장애, 은친화입자병, 픽병, 피질기저핵 변성, 진행 핵상 마비, 염색체 17과 연관된 유전성 전측두엽 치매 및 파킨슨증 (FTDP-17), 약물 중독과 관련된 금단 증상/재발, L-도파 유발된 운동이상증, 허혈 뇌졸중, 외상 뇌 손상, 척수 손상을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 기타 질환은 리소좀병 (예를 들면 니만-피크 C형 질환, 고셔병), 크론병, 갑상선, 신장 (유두상 신장 포함), 유방, 폐 및 전립선 암, 백혈병 (급성 림프성 백혈병 (AML) 포함), 림프종, 백혈병, 다발성 경화증, 류마티스 관절염, 전신 홍반 루푸스, 자가면역 용혈 빈혈, 진성 적혈구 무형성증, 특발성 혈소판감소성 자반증 (ITP), 에반스 증후군, 혈관염, 수포성 피부 장애, 제1형 당뇨병, 쇠그렌 증후군, 데빅병 및 염증성 근육병을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본 발명의 한 측면은 요법에 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다. 한 실시양태에서, 본 발명은 파킨슨병의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다. 한 실시양태에서, 본 발명은 파킨슨병의 치료에 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
본 발명의 추가의 측면은 파킨슨병의 치료 또는 예방을 위한 약제의 제조에서 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도를 제공한다. 본 발명의 추가의 측면은 파킨슨병의 치료를 위한 약제의 제조에서 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도를 제공한다.
본 발명의 추가의 측면은 파킨슨병의 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 파킨슨병의 치료 또는 예방 방법을 제공한다. 한 실시양태에서, 대상체는 인간이다.
본 발명의 문맥에서, 파킨슨병의 치료는 산발성 파킨슨병 및/또는 가족성 파킨슨병의 치료를 지칭한다. 한 실시양태에서, 가족성 파킨슨병은 G2019S 돌연변이 또는 R1441G 돌연변이를 지니는 LRRK2 키나제를 발현시키는 환자를 포함한다. 추가의 실시양태에서, 가족성 파킨슨병은 파킨슨병에 대한 G2019S 돌연변이, N1437H 돌연변이, R1441G 돌연변이, R1441C 돌연변이, R1441H 돌연변이, Y1699C 돌연변이, S1761R 돌연변이 또는 I2020T 돌연변이를 지니는 LRRK2 키나제를 발현시키는 환자를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 산발성 파킨슨병은 파킨슨병에 대한 G2019S 돌연변이, N1437H 돌연변이, R1441G 돌연변이, R1441C 돌연변이, R1441H 돌연변이, Y1699C 돌연변이, S1761R 돌연변이 또는 I2020T 돌연변이를 지니는 LRRK2 키나제를 발현시키는 환자를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 파킨슨병은 파킨슨병과 연관되어 있는 LRRK2 유전자좌에서 기타 코딩 돌연변이, 예컨대 G2385R 또는 비-코딩 단일 뉴클레오티드 다형체를 지니는 LRRK2 키나제를 발현시키는 환자를 포함한다. 한 실시양태에서, 파킨슨병의 치료는 G2019S 돌연변이를 지니는 LRRK2 키나제를 발현시키는 환자를 포함한 가족성 파킨슨병의 치료를 지칭한다. 또 다른 실시양태에서, 파킨슨병은 이상 고 레벨의 정상 LRRK2 키나제를 발현시키는 환자를 포함한다. 파킨슨병의 치료는 대증적일 수 있거나 또는 질환 조절일 수 있다. 한 실시양태에서, 파킨슨병의 치료는 대증 치료를 지칭한다. 한 실시양태에서, 파킨슨병의 치료는 질환 조절을 지칭한다.
본 발명의 화합물은 또한 질환의 진행과 관련된 하나 이상의 민감한 특징, 예컨대 가족력, 후각 결핍, 변비, 인지 결함, 보행, 또는 분자, 생화학적, 면역학적 또는 영상화 기법으로부터 얻어진 질환 진행에 대한 생물학적 지표에 의해 중증 파킨슨증으로 진행할 수 있다고 확인된 환자의 치료에서 유용할 수 있다. 본 문맥에서, 치료는 대증적이거나 또는 질환 조절일 수 있다.
본 발명의 문맥에서, 알츠하이머병의 치료는 산발성 알츠하이머병 및/또는 가족성 알츠하이머병의 치료를 지칭한다. 알츠하이머병의 치료는 대증적일 수 있거나 또는 질환 조절일 수 있다. 한 실시양태에서, 알츠하이머병의 치료는 대증 치료를 지칭한다. 유사하게, 치매 (레비 소체 치매 혈관 치매 및 HIV-유발된 치매 포함), 연령 관련 기억 장애, 경도 인지 장애, 은친화입자병, 근위축성 측삭 경화증 (ALS), 픽병, 피질기저핵 변성, 진행 핵상 마비, 염색체 17과 연관된 유전성 전측두엽 치매 및 파킨슨증 (FTDP-17), 허혈 뇌졸중, 외상 뇌 손상, 척수 손상, 리소좀병 (예를 들면 니만-피크 C형 질환, 고셔병), 크론병, 갑상선, 신장 (유두상 신장 포함), 유방, 폐 및 전립선 암, 백혈병 (급성 림프성 백혈병 (AML) 포함), 림프종, 백혈병, 다발성 경화증, 류마티스 관절염, 전신 홍반 루푸스, 자가면역 용혈 빈혈, 진성 적혈구 무형성증, 특발성 혈소판감소성 자반증 (ITP), 에반스 증후군, 혈관염, 수포성 피부 장애, 제1형 당뇨병, 쇠그렌 증후군, 데빅병 및 염증성 근육병의 치료는 대증적이거나 또는 질환 조절일 수 있다. 일부 실시양태에서, 치매 (레비 소체 치매, 혈관 치매 및 HIV-유발된 치매 포함), 연령 관련 기억 장애, 경도 인지 장애, 은친화입자병, 근위축성 측삭 경화증 (ALS), 픽병, 피질기저핵 변성, 진행 핵상 마비, 염색체 17과 연관된 유전성 전측두엽 치매 및 파킨슨증 (FTDP-17), 허혈 뇌졸중, 외상 뇌 손상, 척수 손상, 리소좀병 (예를 들면 니만-피크 C형 질환, 고셔병), 크론병, 갑상선, 신장 (유두상 신장 포함), 유방, 폐 및 전립선 암, 백혈병 (급성 림프성 백혈병 (AML) 포함), 림프종, 백혈병, 다발성 경화증, 류마티스 관절염, 전신 홍반 루푸스, 자가면역 용혈 빈혈, 진성 적혈구 무형성증, 특발성 혈소판감소성 자반증 (ITP), 에반스 증후군, 혈관염, 수포성 피부 장애, 제1형 당뇨병, 쇠그렌 증후군, 데빅병 및 염증성 근육병의 치료는 대증 치료를 지칭한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 또한 강직 척추염 및/또는 나병 감염의 치료를 필요로 하는 대상체에게 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 강직 척추염 및/또는 나병 감염의 치료 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 대상체는 인간이다.
본 발명의 문맥에서, 약물 중독과 관련된 금단 증상/재발 및 L-도파 유발된 운동이상증의 치료는 대증 치료를 지칭한다. 추가의 측면에서, 본 발명은 상기 질병, 예를 들면 파킨슨병의 치료에 사용하기 위하여 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 파킨슨병, 알츠하이머병, 치매 (레비 소체 치매 혈관 치매 및 HIV-유발된 치매 포함), 연령 관련 기억 장애, 경도 인지 장애, 은친화입자병, 근위축성 측삭 경화증 (ALS), 픽병, 피질기저핵 변성, 진행 핵상 마비, 염색체 17과 연관된 유전성 전측두엽 치매 및 파킨슨증 (FTDP-17), 리소좀병 (예, 니만-피크 C형 질환, 고셔병) 또는 신장, 유방, 폐, 전립선암뿐 아니라, 급성 림프성 백혈병 (AML)의 예방에 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다. 한 실시양태에서, 본 발명은 파킨슨병의 예방에 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
본 발명은 추가로 상기 질환, 예를 들면 파킨슨병의 치료를 필요로 하는 대상체에게 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 인간을 비롯한 포유동물에서의 상기 질환의 치료 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 상기 질병, 예를 들면 파킨슨병의 치료에 사용하기 위한 약제의 제조에서 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도를 제공한다. 본 발명은 또한 파킨슨병, 알츠하이머병, 치매 (레비 소체 치매 및 혈관 치매 포함), 연령 관련 기억 장애, 경도 인지 장애, 은친화입자병, 근위축성 측삭 경화증 (ALS), 픽병, 피질기저핵 변성, 진행 핵상 마비, 염색체 17과 연관된 유전성 전측두엽 치매 및 파킨슨증 (FTDP-17) 또는 신장, 유방, 폐, 전립선암뿐 아니라, 급성 림프성 백혈병 (AML), 리소좀병 (예를 들면 니만-피크 C형 질환, 고셔병)의 예방에 사용하기 위한 약제의 제조에서 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도를 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 발명은 파킨슨병의 예방에 사용하기 위한 약제의 제조에서 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도를 제공한다.
또한, 본 발명은 CNS 질병의 세포계 치료에서 그에 따른 치료적 적용예를 위한 시험관내 신경세포 선조 세포의 생성에서 LRRK2의 억제제의 용도를 제공한다.
본 발명은 추가로 허혈 뇌졸중, 외상 뇌 손상 및 척수 손상을 포함한 (이에 제한되지는 않음) 신경세포 손상 후 CNS 기능의 복구를 자극하기 위한 LRRK2의 억제제의 용도를 제공한다.
본 발명은 또한 파킨슨병, 알츠하이머병, 다발성 경화증, HIV-유발된 치매, 근위축성 측삭 경화증, 허혈 뇌졸중, 외상 뇌 손상 및 척수 손상을 비롯한 다양한 신경변성 질환에 기여하는 이상 신경염증 기전을 치료하기 위한 LRRK2의 억제제의 용도를 제공한다.
화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 파킨슨병의 치료에 사용하고자 할 경우, 파킨슨병의 대증 치료로서 유용한 것으로 청구된 약제와 조합하여 사용될 수 있다. 상기 기타 치료제의 적절한 예는 L-도파 및 도파민 효능제 (예, 프라미펙솔, 로피니롤)를 포함한다.
화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 알츠하이머병의 치료에 사용하고자 할 경우, 알츠하이머병의 질환 조절 또는 대증 치료로서 유용한 것으로 청구된 약제와 조합하여 사용될 수 있다. 상기 기타 치료제의 적절한 예는 대증적 작용제, 예를 들면 콜린성 전달을 변경시키는 것으로 공지된 것, 예컨대 M1 무스카린 수용체 효능제 또는 알로스테리 조정제, M2 무스카린 길항제, 아세틸콜린에스테라제 억제제 (예컨대 테트라히드로아미노아크리딘, 도네페질 염산염 및 리바스티그민), 니코틴 수용체 효능제 또는 알로스테리 조정제 (예컨대 α7 효능제 또는 알로스테리 조정제 또는 α4β2 효능제 또는 알로스테리 조정제), PPAR 효능제 (예컨대 PPARγ 효능제), 5-HT4 수용체 부분 효능제, 5-HT6 수용체 길항제 또는 5HT1A 수용체 길항제 및 NMDA 수용체 길항제 또는 조정제 또는 질환 조절제, 예컨대 β 또는 γ-세크레타제 억제제, 미토콘드리아 안정화제, 미세관 안정화제 또는 타우 병리학의 조정제, 예컨대 타우 응집 억제제 (예, 메틸렌 블루 및 렘버(REMBER)™)일 수 있다.
화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이 기타 치료제와 조합하여 사용될 경우, 화합물은 임의의 편리한 경로에 의하여 순차적으로 또는 동시에 투여될 수 있다.
또한, 본 발명은 추가의 측면에서 추가의 치료제 또는 치료제들과 함께 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 조합을 제공한다.
상기에서 지칭된 조합은 제약 제제의 형태로 사용하기 위하여 간편하게 제시될 수 있으며, 그리하여 제약상 허용되는 담체 또는 부형제와 함께 상기 정의된 바와 같은 조합을 포함하는 제약 제제는 본 발명의 추가의 측면을 포함한다. 상기 조합의 개개의 성분은 별도의 또는 조합된 제약 제제로 순차적으로 또는 동시에 투여될 수 있다.
화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이 동일한 질환 상태에 대하여 활성인 제2의 치료제와 조합하여 사용될 경우, 각각의 화합물의 투여량은 화합물이 단독으로 사용될 경우와는 상이할 수 있다. 적절한 투여량은 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의하여 용이하게 이해될 것이다.
D. 조성물
본 발명의 화합물은 대상체에게 투여 전 제약 조성물로 제제화될 수 있다. 한 측면에 의하면, 본 발명은 본 발명의 화합물 및 하나 이상의 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 또 다른 측면에 의하면, 본 발명은 화학식 I의 화합물 또는 그의 염 또는 그의 용매화물 등과 하나 이상의 제약상 허용되는 부형제를 혼합하는 것을 포함하는 제약 조성물의 제조 방법을 제공한다.
제약 조성물은 단위 투여당 미리 결정된 양의 활성 성분을 함유하는 단위 투여 형태로 제시될 수 있다. 상기 단위는 치료되는 질환, 투여 경로 및 대상체의 연령, 체중 및 병태에 의존하여 예를 들면 0.1 ㎎, 0.5 ㎎ 또는 1 ㎎ 내지 50 ㎎, 100 ㎎, 200 ㎎, 250 ㎎, 500 ㎎, 750 ㎎ 또는 1 g의 본 발명의 화합물을 함유할 수 있거나 또는 제약 조성물은 단위 투여당 미리 결정된 양의 활성 성분을 함유하는 단위 투여 형태로 제시될 수 있다. 기타 실시양태에서, 단위 투여 조성물은 본원에 기재된 바와 같은 1일 투여량 또는 하위투여량 또는 그의 적절한 분율의 활성 성분을 함유하는 것이다. 게다가, 상기 제약 조성물은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 임의의 방법에 의하여 생성될 수 있다.
본 발명의 화합물의 치료적 유효량은 예를 들면 의도하는 수용체의 연령 및 체중, 치료를 필요로 하는 정확한 병태 및 그의 경중도, 제제의 성질 및 투여의 경로를 비롯한 다수의 요인에 의존할 것이며, 궁극적으로 투약을 처방하는 주치의의 판단에 따를 것이다. 그러나, 본 발명에 기재된 질환의 치료를 위한 본 발명의 화합물의 치료적 유효량은 일반적으로 1일당 수용체 체중 1 ㎏당 0.1 내지 100 ㎎ 범위내, 보다 일반적으로 1 내지 10 ㎎ 범위내일 것이다. 그래서, 70 ㎏ 성체 포유동물의 경우, 1일당 실제량은 일반적으로 70 내지 700 ㎎이며, 상기 양은 1일당 단일 투여량으로 또는 1일당 다수의 하위 투여량으로, 예컨대 1일당 2, 3, 4, 5 또는 6회의 투여량으로 제시될 수 있다. 또는 투여는 간헐적으로, 예컨대 격일당 1회, 1주당 1회 또는 1개월당 1회로 실시될 수 있다. 치료적 유효량의 염 또는 용매화물 등은 화학식 I의 화합물 그 자체의 치료적 유효량의 비율로서 결정될 수 있다. 유사한 투여량은 상기 언급된 기타 질환의 치료에 적절한 것으로 고려된다.
본 발명의 제약 조성물은 본 발명의 하나 이상의 화합물을 함유할 수 있다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 본 발명의 1개 초과의 화합물을 함유할 수 있다. 예를 들면 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 본 발명의 2개 이상의 화합물을 함유할 수 있다. 게다가, 제약 조성물은 하나 이상의 추가의 제약상 활성 화합물을 임의로 추가로 포함할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, "제약상 허용되는 부형제"는 제약 조성물에 형태 또는 점조도를 제공하는데 관여하는 제약상 허용되는 물질, 조성물 또는 비히클을 의미한다. 각각의 부형제는 대상체에게 투여시 본 발명의 화합물의 효능을 실질적을 감소시키는 상호작용 및, 제약상 허용되지 않는 제약 조성물을 초래하는 상호작용을 방지하도록 혼합시 제약 조성물의 기타 성분과 적합성을 가질 수 있다.
본 발명의 화합물 및 제약상 허용되는 부형제 또는 부형제들은 투여의 원하는 경로에 의하여 대상체에 투여를 위하여 조정된 투여 형태로 제제화될 수 있다. 예를 들면 투여 형태는 (1) 경구 투여 (협측 또는 설하 포함), 예컨대 정제, 캡슐, 당의정, 환제, 트로키, 분말제, 시럽, 엘릭시르, 현탁제, 액제, 에멀젼, 사세제 및 카세제; (2) 비경구 투여 (피하, 근육내, 정맥내 또는 피내 포함), 예컨대 재구성을 위한 무균 액제, 현탁제 및 분말제; (3) 경피 투여, 예컨대 경피 패취; (4) 직장 투여, 예컨대 좌제; (5) 비강 흡입, 예컨대 건조 분말, 에어로졸, 현탁제 및 액제 및 (6) 국소 투여 (협측, 설하 또는 경피 포함), 예컨대 크림, 연고, 로션, 액제, 페이스트, 스프레이, 포말 및 겔에 적합한 것을 포함한다. 상기 조성물은 제약 분야에 공지된 임의의 방법, 예를 들면 화학식 I의 화합물을 담체(들) 또는 부형제(들)와 연합시켜 생성될 수 있다.
경구 투여에 적합한 제약 조성물은 불연속 단위, 예컨대 캡슐 또는 정제; 분말제 또는 과립; 수성 또는 비-수성 액제 중의 액제 또는 현탁제; 식용 포말 또는 휘핑; 또는 수중유 액체 에멀젼 또는 유중수 액체 에멀젼으로서 제시될 수 있다.
적절한 제약상 허용되는 부형제는 선택된 특정한 투여 형태에 의존하여 변동될 수 있다. 게다가, 적절한 제약상 허용되는 부형제는 조성물에 작용할 수 있는 특정한 기능에 대하여 선택될 수 있다. 예를 들면 특정한 제약상 허용되는 부형제는 단위 투여 형태의 제조를 촉진시키는 그의 능력에 대하여 선택될 수 있다. 특정한 제약상 허용되는 부형제는 안정한 투여 형태의 제조를 촉진하는 그의 능력에 대하여 선택될 수 있다. 특정한 제약상 허용되는 부형제는 신체의 기관 또는 일부로부터 신체의 또 다른 기관 또는 일부로 대상체에게 투여시 본 발명의 화합물 또는 화합물들의 이동 또는 수송을 촉진하는 그의 능력을 위하여 선택될 수 있다. 특정한 제약상 허용되는 부형제는 환자의 순응도를 향상시키는 그의 능력을 위하여 선택될 수 있다.
적절한 제약상 허용되는 부형제는 하기 유형의 부형제를 포함한다: 희석제, 충전제, 결합제, 붕해제, 윤활제, 활택제, 과립화제, 코팅제, 습윤화제, 용매, 공용매, 현탁제, 유화제, 감미제, 풍미제, 냄새 차폐제, 착색제, 고화방지제, 보습제, 킬레이트화제, 가소제, 점도 증가제, 산화방지제, 방부제, 안정화제, 계면활성제 및 완충제. 통상의 기술자는 특정한 제약상 허용되는 부형제가 1개 초과의 기능을 수행할 수 있으며, 부형제가 제제 중에 얼마나 많이 존재하느냐 및 제제 중에 존재하는 기타 성분의 정체에 의존하여 대안의 기능을 수행할 수 있다는 것을 인지할 것이다.
통상의 기술자는 본 발명에 사용하기에 적절한 양으로 적절한 제약상 허용되는 부형제를 선택할 수 있도록 하는 관련 기술분야의 지식 및 기술을 지닌다. 게다가, 통상의 기술자가 제약상 허용되는 부형제를 설명하며, 적절한 제약상 허용되는 부형제를 선택하는데 유용할 수 있는 다수의 자료가 존재할 수 있다. 그의 예로는 (Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company), The Handbook of Pharmaceutical Additives (Gower Publishing Limited) 및 (The Handbook of Pharmaceutical Excipients (the American Pharmaceutical Association and the Pharmaceutical Press))을 포함한다.
본 발명의 제약 조성물은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 기술 및 방법을 사용하여 생성된다. 관련 기술분야에 통상적으로 사용된 일부 방법은 (Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company))에 기재되어 있다.
한 측면에서, 본 발명은 치료적 유효량의 본 발명의 화합물 및 희석제 또는 충전제를 포함하는 고체 경구 투여 형태, 예컨대 정제 또는 캡슐에 관한 것이다. 적절한 희석제 및 충전제는 락토스, 수크로스, 덱스트로스, 만니톨, 소르비톨, 전분 (예, 옥수수 전분, 감자 전분 및 예비젤라틴화된 전분), 셀룰로스 및 그의 유도체 (예, 미정질 셀룰로스), 황산칼슘 및 이염기성 인산칼슘을 포함한다. 경구 고체 투여 형태는 결합제를 추가로 포함할 수 있다. 적절한 결합제는 전분 (예, 옥수수 전분, 감자 전분 및 예비젤라틴화된 전분), 젤라틴, 아카시아, 알긴산나트륨, 알긴산, 트라가칸트, 구아껌, 포비돈 및 셀룰로스 및 그의 유도체 (예, 미정질 셀룰로스)를 포함한다. 경구 고체 투여 형태는 붕해제를 추가로 포함할 수 있다. 적절한 붕해제는 크로스포비돈, 소듐 전분 글리콜레이트, 크로스카르멜로스, 알긴산 및 소듐 카르복시메틸 셀룰로스를 포함한다. 경구 고체 투여 형태는 윤활제를 추가로 포함할 수 있다. 적절한 윤활제는 스테아르산, 스테아르산마그네슘, 스테아르산칼슘 및 탈크를 포함한다.
특정한 실시양태에서, 본 발명은 0.01 내지 1,000 ㎎의 본원에 기재된 하나 이상의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 0.01 내지 5 g의 하나 이상의 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다.
E. 화합물의 제조 방법
본원에 기재된 화합물의 제조에 사용하고자 하는 방법은 원하는 화합물에 의존한다. 특정한 치환기 및, 특정한 치환기의 다양한 가능한 위치의 선택으로서의 인자는 모두 본 발명의 특정한 화합물의 제조에서 수행되는 경로에 역할을 한다. 상기 요인은 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의하여 쉽게 인지된다.
일반적으로, 본 발명의 화합물은 관련 기술분야에 공지된 표준 기술에 의하여 및 이와 유사한 공지된 방법에 의하여 생성될 수 있다. 본 발명의 화합물을 생성하기 위한 일반적인 방법은 하기에 명시되어 있다. 하기 일반적인 실험 반응식에 기재된 모든 출발 물질 및 시약은 시판 중이거나 또는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 방법에 의하여 생성될 수 있다. 통상의 기술자는 본원에 기재된 치환기가 본원에 기재된 합성 방법과 적합하지 않을 경우 치환기는 반응 조건에 대하여 안정한 적절한 보호기로 보호될 수 있는 것으로 인지될 것이다. 보호기는 원하는 중간체 또는 표적 화합물을 제공하기 위한 반응 시퀀스에서 적절한 포인트에서 제거될 수 있다. 적절한 보호기 및, 상기 적절한 보호기를 사용한 상이한 치환기를 보호 및 탈보호하기 위한 방법은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있으며; 그의 예는 (T. Greene and P. Wuts, Protecting Groups in Chemical Synthesis (3rd ed.), John Wiley & Sons, NY (1999))에서 찾아볼 수 있다. 일부 경우에서, 치환기는 사용된 반응 조건 하에서 반응성이 되도록 구체적으로 선택될 수 있다. 이러한 상황 하에서, 반응 조건은 선택된 치환기를 중간체 화합물로서 유용하거나 또는 표적 화합물에서 원하는 치환기인 또 다른 치환기로 전환시킨다.
일반 반응식 1-3은 본 발명의 화합물을 생성하기 위한 합성의 예시의 방법을 제공한다.
<일반 반응식 1>
Figure pct00007
일반 반응식 1은 화합물 VIII 및 IX를 생성하기 위한 예시의 합성을 제공한다. 보호기는 임의의 적절한 보호기, 예를 들면 4-메틸벤젠-1-술포닐 (Ts)일 수 있다. 일반 반응식 1에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7 및 R9는 화학식 I에서 정의된바와 같으며, R8은 H, C1- 3할로알킬 (CF3 제외) 및 C1- 3알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다.
중간체 II는 축합 시약, 예컨대 HATU 및 적절한 염기, 예컨대 DIPEA의 존재하에서 적절한 용매, 예컨대 DMF 중에서 적절한 온도, 예컨대 실온에서 단계 (i)에서의 아민을 사용하여 중간체 I로부터의 아미노-커플링 반응에 의하여 얻을 수 있다. 중간체 IV는 단계 (ii)에서 적절한 염기, 예컨대 NaH의 존재하에서 적절한 용매, 예컨대 DMF 중에서 적절한 온도, 예컨대 약 0℃ 내지 25℃에서 화합물 II를 적절한 시약, 예컨대 EtOH와 반응시켜 얻을 수 있다. 중간체 IV는 또한 축합 시약, 예컨대 HATU 및 적절한 염기, 예컨대 DIPEA의 존재하에서 적절한 용매, 예컨대 DMF 중에서 적절한 온도, 예컨대 약 0℃ 내지 25℃하에서 단계 (iii)에서 중간체 III을 아민과 반응시켜 얻을 수 있다.
아미노 화합물 V는 적절한 촉매, 예컨대 Pd/C의 존재하에서 극성 용매, 예컨대 MeOH 중에서 적절한 온도, 약 25℃ 내지 80℃에서 단계 (iv)에서 중간체 IV를 적절한 환원 시약, 예컨대 수소와 반응시켜 얻을 수 있다.
단계 (v)는 적절한 극성 용매, 예컨대 EtOH의 존재하에서 적절한 온도, 예컨대 약 70℃ 내지 90℃에서 중간체 VI을 소듐 알콕시와 반응시켜 중간체 VII를 제공하여 실시될 수 있다.
단계 (vi)은 적절한 팔라듐 촉매, 예컨대 Pd2(dba)3을 사용하여 적절한 염기, 예컨대 K2CO3 및 적절한 리간드, 예컨대 크산포스(xantphos)의 존재하에서 적절한 용매, 예컨대 1,4-디옥산 중에서 적절한 온도, 예컨대 약 90℃ 내지 120℃에서 중간체 VII을 중간체 V와 반응시켜 화합물 VIII을 제공하는 부치왈드(Buchwald) 커플링 반응일 수 있다.
Z=PG인 경우, 화합물 IX는 적절한 용매, 예컨대 이소프로판올 중에서 적절한 온도, 예컨대 25℃ 내지 60℃에서 단계 (viii)에서 화합물 VIII을 적절한 염기, 예컨대 NaOH와 반응시켜 얻을 수 있다.
<일반 반응식 2>
Figure pct00008
일반 반응식 2는 화합물 VIII 및 IX를 생성하기 위한 또 다른 예시의 합성을 제공한다. 보호기는 임의의 적절한 보호기, 예를 들면 4-메틸벤젠-1-술포닐 (Ts)일 수 있다. 일반 반응식 2에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7 및 R9는 화학식 I에서 정의된 바와 같으며, R8은 H, C1- 3할로알킬 (CF3 제외) 및 C1- 3알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다.
중간체 XI은 단계 (viii)에서 적절한 팔라듐 촉매, 예컨대 PdCl2(dppf)를 사용하여 적절한 염기, 예컨대 K2CO3 및 적절한 리간드, 예컨대 X-Phos의 존재하에서 적절한 용매, 예컨대 2-부탄올 중에서 적절한 온도, 예컨대 약 90℃ 내지 120℃에서 중간체 VI과 중간체 X 사이의 부치왈드 커플링 반응에 의하여 얻을 수 있다.
중간체 VIII은 축합 시약, 예컨대 HATU 및 적절한 염기, 예컨대 DIPEA의 존재하에서 적절한 용매, 예컨대 DMF 중에서 적절한 온도, 예컨대 약 0℃ 내지 25℃에서 중간체 XI을 아민과 반응시켜 단계 (ix)에서 얻을 수 있다. Z=PG인 경우, 화합물 IX는 적절한 용매, 예컨대 이소프로판올 중에서 적절한 온도, 예컨대 약 25℃ 내지 60℃에서 단계 (viii)에서 화합물 VIII을 적절한 염기, 예컨대 NaOH와 반응시켜 얻을 수 있다.
<일반 반응식 3>
Figure pct00009
일반 반응식 3은 화합물 IX를 생성하기 위한 또 다른 예시의 합성을 제공한다. 보호기는 임의의 적절한 보호기, 예를 들면 4-메틸벤젠-1-술포닐 (Ts)일 수 있다. 일반 반응식 3에서, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8 및 R9는 화학식 I에서 정의된 바와 같다.
중간체 XIII은 적절한 용매, 예컨대 DMF 중에서 적절한 온도, 예컨대 약 25℃ 내지 60℃에서 중간체 XII를 적절한 시약, 예컨대 NIS와 반응시켜 단계 (xi)에서 얻을 수 있다.
단계 (xii)는 적절한 용매 중에서 적절한 온도, 예컨대 약 90℃ 내지 130℃에서 중간체 XIII 및 적절한 시약, 예컨대 시안화구리 (I) 사이의 교차-커플링 반응으로 중간체 XIV를 제공할 수 있으며, 이는 적절한 팔라듐 촉매, 예컨대 Pd2(dba)3을 사용하여 적절한 염기, 예컨대 K2CO3 및 적절한 리간드, 예컨대 X-phos의 존재하에서 적절한 용매, 예컨대 2-부탄올 중에서 적절한 온도, 예컨대 약 90℃ 내지 120℃에서 단계 (xiii)에서 중간체 V와 반응하여 화합물 IX를 제공할 수 있다.
중간체 XV는 적절한 염기, 예컨대 NaH의 존재하에서 적절한 용매, 예컨대 DMF 중에서 적절한 온도, 예컨대 약 0℃ 내지 25℃에서 중간체 XIII을 적절한 시약, 예컨대 TsCl과 반응시켜 단계 (xiv)에서 얻을 수 있다. 단계 (xv)는 적절한 구리 촉매, 예컨대 CuI의 존재하에서 적절한 용매 중에서 적절한 온도, 예컨대 약 80℃ 내지 120℃에서 중간체 XV를 적절한 시약, 예컨대 2,2-디플루오로-2-(플루오로술포닐)-아세테이트와 반응시켜 중간체 XVI를 제공할 수 있는 교차-커플링 반응일 수 있으며, 이는 단계 (xvi)에서 적절한 팔라듐 촉매, 예컨대 Pd2(dba)3을 사용하여 적절한 염기, 예컨대 K2CO3 및 적절한 리간드, 예컨대 X-Phos의 존재하에서 적절한 용매, 예컨대 2-부탄올 중에서 적절한 온도, 예컨대 약 90℃ 내지 120℃에서 중간체 V와 반응하여 화합물 IX를 제공할 수 있다.
단계 (xvii)는 적절한 팔라듐 촉매, 예컨대 Pd(PPh3)4를 사용하여 적절한 염기, 예컨대 Na2CO3의 존재하에서 적절한 용매, 예컨대 1,4-디옥산 중에서 적절한 온도, 예컨대 약 80℃ 내지 120℃에서 중간체 XV를 적절한 보론산 또는 에스테르와 반응시켜 중간체 XVII을 제공하는 스즈키(Suzuki) 커플링 반응일 수 있으며, 이는 단계 (xviii)에서 적절한 팔라듐 촉매, 예컨대 Pd2(dba)3을 사용하여 적절한 염기, 예컨대 K2CO3 및 적절한 리간드의 존재하에서 적절한 용매 중에서 적절한 온도, 예컨대 약 90℃ 내지 120℃에서 중간체 V와 반응시켜 중간체 XVIII을 제공할 수 있다.
화합물 IX는 적절한 용매, 예컨대 메탄올 중에서 적절한 온도, 예컨대 약 25℃ 내지 60℃에서 단계 (xix)에서 중간체 XVIII을 적절한 염기, 예컨대 NaOH와 반응시켜 얻을 수 있다.
상기 반응식에 기재된 출발 물질 및 시약은 시판 중이거나 또는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 절차를 사용하여 시판 중인 화합물로부터 쉽게 생성될 수 있다.
실시예
일반적인 실험 절차
하기 기재 및 실시예는 본 발명을 예시한다. 이들 실시예는 본 발명의 범주를 제한하고자 하지는 않지만, 그보다는 본 발명의 화합물, 조성물 및 방법을 제조 및 사용하기 위하여 숙련된 화학자에게 안내를 제공한다. 본 발명의 특정한 실시양태를 기재하지만, 숙련된 화학자는 다양한 변경예 및 수정예가 본 발명의 정신 및 범주로부터 벗어남이 없이 이루어질 수 있다는 것을 인지할 것이다.
마이크로파 조사를 사용한 반응 혼합물의 가열은 스미쓰 크리에이터(Smith Creator) (퍼스널 케미스트리(Personal Chemistry), 미국 매사츄세츠주 폭스버러 소재, 현재 바이오테이지(Biotage) 소유), 엠리스 옵티마이저(Emrys Optimizer) (퍼스널 케미스트리로부터 구입) 또는 익스플로러(Explorer) (씨이엠 디스커버(CEM Discover) 제공, 미국 노쓰 캐롤라이나 매튜스 소재) 마이크로파인 기기에서 실시하였다.
통상의 기법은 실시예의 반응의 워크업 및 생성물의 정제를 위하여 본원에 사용될 수 있다.
유기 층 또는 상을 건조시키는 것과 관련하여 하기 실시예에서의 언급은 통상의 기법에 의하여 황산마그네슘 또는 황산나트륨 상에서 용액을 건조시키고, 건조제를 여과 제거하는 것을 지칭할 수 있다. 생성물은 일반적으로 감압 하에서 증발에 의하여 용매를 제거하여 얻을 수 있다.
실시예에서 화합물의 정제는 통상의 방법, 예컨대 적절한 용매를 사용한 크로마토그래피 및/또는 재결정화에 의하여 실시될 수 있다. 크로마토그래피 방법은 통상의 기술자에게 공지되어 있으며, 예를 들면 컬럼 크로마토그래피, 플래쉬 크로마토그래피, HPLC (고 성능 액체 크로마토그래피) 및 MDAP (질량에 의한 자동 제조, 또한 질량에 의한 LCMS 정제로 지칭함)를 포함한다. MDAP는 예를 들면 (W. Goetzinger et al., Int . J. Mass Spectrom ., 2004, 238, 153-162)에 기재되어 있다.
아날테크(Analtech) 실리카 겔 GF 및 E. 머크(Merck) 실리카 겔 60 F-254 박층판을 박층 크로마토그래피에 사용하였다. 플래쉬 및 중력 크로마토그래피 모두를 E. 머크 키젤겔(Merck Kieselgel) 60 (230-400 메쉬) 실리카 겔에서 실시하였다. 정제용 HPLC는 10-80 구배 (아세토니트릴 중의 0.1% TFA/0.1% 수성 TFA) 또는 10-80 구배 (아세토니트릴/물)로 용출시키는 루나(Luna) 5u C18(2) 100A 역상 컬럼을 사용하는 길슨(Gilson) 정제 시스템을 사용하여 수행하였다. 본원에서 정제에 사용된 콤비플래쉬(CombiFlash) 시스템은 아이스코, 인코포레이티드(Isco, Inc.)로부터 구입하였다. 콤비플래쉬 정제는 프리팩(pre-packed) SiO2 컬럼, 254 ㎚에서의 UV 파장을 갖는 검출기 및 혼합 용매를 사용하여 실시하였다.
본원에서 사용시 용어 "콤비플래쉬", "바이오테이지®", "바이오테이지 75" 및 "바이오테이지 SP4®"는 프리팩 실리카 겔 카트리지를 사용하여 시판 중인 자동화 정제 시스템을 지칭한다.
최종 화합물은 LCMS (하기 제시된 조건) 또는 NMR을 사용하여 특징화하였다. 1H NMR 스펙트럼은 브루커 아반스(Bruker Avance) 400MHz 분광계를 사용하여 기록하였다. CDCl3은 듀테리오클로로포름이며, DMSO-d6은 헥사듀테리오디메틸술폭시드이며, CD3OD (또는 MeOD)는 테트라듀테리오메탄올이다. 화학적 이동은 백만분의 부 (ppm) 단위로 내부 표준물질 테트라메틸실란 (TMS) 또는 NMR 용매로부터 다운필드로 보고한다. NMR 데이타에 대한 약어는 하기와 같다: s = 단일선, d = 이중선, t = 삼중선, q = 사중선, m = 다중선, dd = 이중선의 이중선, dt = 삼중선의 이중선, app = 겉보기, br = 넓음. J는 헤르츠(Hertz)로 측정한 NMR 커플링 상수를 나타낸다. 질량 스펙트럼은 전기분무 (ES) 이온화 기법을 사용하여 기기에서 취하였다. 모든 온도는 섭씨로 보고한다. 모든 기타 약어는 (ACS Style Guide (American Chemical Society, Washington, DC, 1986)에 기재된 바와 같다.
절대 입체화학은 관련 기술분야에 공지된 방법, 예를 들면 X선 또는 진동 원편광 이색성 (VCD)에 의하여 측정할 수 있다.
하기 절차에서, 각각의 출발 물질 이후에, 중간체에 대한 언급이 통상적으로 제공된다. 이는 단지 숙련된 화학자를 돕기 위하여 제공된다. 출발 물질은 반드시 언급되는 배취로부터 제조되지 않을 수 있다.
LCMS 조건:
조건 1:
이동상: 0.05% TFA/0.05% 아세토니트릴을 함유하는 물
컬럼: 아질런트(Agilent) SB-C18 4.6×30 ㎜-1.8 미크론
검출: MS 및 광다이오드 어레이 검출기 (PDA)
조건 2:
이동상: 10 mmol NH4HCO3/아세토니트릴을 함유하는 물
컬럼: 엑스브리지(XBridge)™ C18 4.6×50 mm-3.5 미크론
검출: MS 및 광다이오드 어레이 검출기 (PDA)
MDAP 조건:
1) 산성 조건:
기기: 워터스(Waters) 기기
컬럼: 썬파이어 프렙(Sunfire Prep) C18 컬럼 (5 ㎛, 19×50 ㎜)
이동상: 0.05% TFA/아세토니트릴을 함유하는 물
2) 염기성 조건:
기기: 워터스 기기
컬럼: 엑스브리지 프렙 C18 컬럼 (5 ㎛, 19×50 ㎜)
이동상: 0.04% 암모니아/아세토니트릴을 함유하는 물
정제용-HPLC 조건
기기: 워터스 기기
컬럼: 엑스브리지 프렙 C18 컬럼 OBD (10 ㎛, 19×250 ㎜)
이동상: 0.08% 암모니아/아세토니트릴을 함유하는 물.
약어 및 자료원
하기 약어 및 자료를 하기에 사용한다:
Aq. - 수성
Boc2O - 디-tert-부틸 디카르보네이트
DCM - 디클로로메탄
DEA- 디에탄올아민
DIPEA - N,N-디이소프로필에틸아민
DMA - N,N-디메틸아세트아미드
DMF - 디메틸포름아미드
DMSO - 디메틸 술폭시드
EA - 에틸 아세테이트
EDC - 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드 염산염
EtOH - 에탄올
EtOAc - 에틸 아세테이트
HATU - 2-(1H-7-아자벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸 우라늄 헥사플루오로포스페이트
HOBT - 히드록시벤조트리아졸
NIS - N-요오도숙신이미드
TEA - 트리에틸아민
TFA - 트리플루오로아세트산
TFAA - 트리플루오로아세트산 무수물
THF - 테트라히드로푸란
TsCl - 4-톨루엔술포닐 클로라이드
PE - 석유 에테르
설명 D1
2- 클로로 -4- 에톡시 -7H- 피롤로 -[2,3-d]피리미딘 (D1)
Figure pct00010
2,4-디클로로-7H-피롤로-[2,3-d]피리미딘 (13 g, 69.1 mmol), 소듐 에톡시드 (5.65 g, 83 mmol) 및 에탄올 (100 ㎖)의 혼합물을 밤새 90℃에서 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시킨 후, 물 (500 ㎖)을 첨가하였다. 형성된 고체를 여과 및 건조시켜 표제 화합물 D1 (10.0 g, 50.6 mmol, 73.2% 수율)을 백색 고체로서 얻었다.
LCMS: 198 [M+1]+. tR =1.348. (LCMS 조건 2)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 12.23 (br. s., 1H), 7.38 (d, J = 3.4 Hz, 1H), 6.50 (d, J = 3.4 Hz, 1H), 4.51 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 1.39 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
설명 D2
2- 클로로 -4- 에톡시 -7-토실-7H- 피롤로 -[2,3-d]-피리미딘 (D2)
Figure pct00011
DMF (50 ㎖) 중의 2-클로로-4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]-피리미딘 (D1에 의하여 생성될 수 있음) (8 g, 40.5 mmol)의 용액에 수소화나트륨 (1.619 g, 40.5 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 5 분 동안 실온에서 교반하였다. 그 후, 이 혼합물에 4-메틸벤젠-1-술포닐 클로라이드 (7.72 g, 40.5 mmol)를 첨가하고, 반응을 추가의 1 시간 동안 실온에서 교반하에 방치하였다. 혼합물을 물 (450 ㎖)로 희석하고, 여과하였다. 여과된 고체를 물 (90 ㎖)로 세정하고, 건조시켜 표제 화합물 D2 (10g, 26.2 mmol, 64.6% 수율)를 백색 고체로서 얻었다.
LCMS: 352 [M+H]+. tR =1.871. (LCMS 조건 2)
D3-D21의 아미노-커플링 반응에 대한 일반적인 절차 1
DMF (2 ㎖) 중의 산 (1.0 eq), 아민 (1.0 eq), DIPEA (1.2 eq) 및 HATU (1.2 eq)의 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 휘발물을 진공 하에서 제거하였다. 잔류물을 DCM으로 2회 증발시키고, 에테르로 분쇄하고, 최종적으로 실리카 겔 상의 크로마토그래피 (PE:EA=1:2)에 의하여 정제하여 원하는 생성물 D3-D21을 얻었다.
Figure pct00012
Figure pct00013
Figure pct00014
Figure pct00015
Figure pct00016
설명 D22
메틸 3-( 디플루오로메톡시 )-4- 니트로벤조에이트 (D22)
Figure pct00017
DMF (15 ㎖) 중의 메틸 3-히드록시-4-니트로벤조에이트 (1 g, 5.07 mmol)의 용액에 K2CO3 (1.052 g, 7.61 mmol) 및 메틸 2-클로로-2,2-디플루오로아세테이트 (0.803 ㎖, 7.61 mmol)를 실온에서 연속적으로 첨가하였다. 그 후, 혼합물의 온도를 100℃로 승온시키고, 혼합물을 2 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물 (10 ㎖)을 첨가한 후, EA (40 ㎖)로 1회 추출하였다. 유기층을 물 (20 ㎖), 염수 (20 ㎖)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 미정제물을 실리카 겔 상의 크로마토그래피 (PE:EA=1:1)에 의하여 정제하여 표제 화합물 D22 (0.69 g, 2.62 mmol, 51.7% 수율)를 황색 오일로서 얻었다.
LCMS: 248[M+H]+. tR =3.154. (LCMS 조건 1)
1H NMR (400MHz, 메탄올-d4): δ 6.75 - 6.77 (m, 2H), 6.73 (s, 1H), 5.77 (t, 1H), 2.66 - 2.71 (m, 3H).
설명 D23
3-( 디플루오로메톡시 )-4- 니트로벤조산 (D23)
Figure pct00018
메탄올 (30 ㎖) 및 물 (30.0 ㎖) 중의 메틸 3-(디플루오로메톡시)-4-니트로벤조에이트 (D22에 의하여 생성될 수 있음) (690 ㎎, 2.79 mmol)의 용액에 수산화나트륨 (893 ㎎, 22.33 mmol)을 첨가하였다. 그 후, 혼합물을 60℃에서 2 시간 동안 교반하였다. 메탄올을 증발시키고, 2N HCl 용액을 pH=3이 될 때까지 혼합물에 첨가하였다. 형성된 고체를 여과하고, 건조시켜 표제 화합물 D23 (428 ㎎, 1.836 mmol, 65.8% 수율)을 황색 고체로서 얻었다.
LCMS: 234[M+H]+. tR =2.302. (LCMS 조건 1)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 13.93 (br. s., 1H), 8.19 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.92 - 8.02 (m, 2H), 7.30 - 7.70 (m, 1H).
설명 D24
(3-( 디플루오로메톡시 )-4- 니트로페닐 )-(4- 메틸피페라진 -1-일) 메타논 (D24)
Figure pct00019
DMF (10 ㎖) 중의 3-(디플루오로메톡시)-4-니트로벤조산 (D23에 의하여 생성될 수 있음) (318 ㎎, 1.364 mmol), DIPEA (0.357 ㎖, 2.046 mmol) 및 HATU (622 ㎎, 1.637 mmol)의 혼합물을 실온에서 30 분 동안 교반하였다. 그 후, 1-메틸피페라진 (0.206 ㎖, 2.046 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 및 물로 희석하고, 분리하였다. 유기층을 진공 하에서 농축시키고, 미정제물을 실리카 겔 상의 크로마토그래피 (PE:EA=1:1)에 의하여 정제하여 표제 화합물 D24 (150 ㎎, 0.476 mmol, 34.9% 수율)를 황색 오일로서 얻었다.
LCMS: 316[M+H]+. tR =1.845. (LCMS 조건 1)
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d): δ 7.90 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.28 - 7.40 (m, 2H), 6.34 - 6.80 (m, 1H), 3.74 (br. s., 2H), 3.33 (br. s., 2H), 2.44 (br. s., 2H), 2.30 (br. s., 2H), 2.27 (s, 3H).
설명 D25
메틸 3-( 시클로프로필메톡시 )-4- 니트로벤조에이트 (D25)
Figure pct00020
DMF (15 ㎖) 중의 메틸 3-히드록시-4-니트로벤조에이트 (1 g, 5.07 mmol)의 용액에 수소화나트륨 (0.304 g, 7.61 mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 실온에서 30 분 동안 교반한 후, (브로모메틸)시클로프로판 (0.738 ㎖, 7.61 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 혼합물을 EA로 희석하고, 물로 세정하였다. 유기층을 건조시키고, 농축시켰다. 미정제물을 실리카 겔 상의 크로마토그래피 (PE:EA=1:1)에 의하여 정제하여 표제 화합물 D25 (360 ㎎, 1.333 mmol, 26.3% 수율)를 황색 고체로서 얻었다.
LCMS: 250[M-H]-. tR =4.191. (LCMS 조건 1)
1H NMR (400MHz, 메탄올-d4): δ 7.79 - 7.87 (m, 2 H), 7.69 (dd, J = 1.5, 8.3 Hz, 1 H), 4.08 (d, J = 6.8 Hz, 2 H), 3.95 (s, 3 H), 1.27 - 1.32 (m, 1 H), 0.61 - 0.71 (m, 2 H), 0.36 - 0.45 (m, 2 H).
설명 D26
3-( 시클로프로필메톡시 )-4- 니트로벤조산 (D26)
Figure pct00021
메탄올 (30 ㎖) 및 물 (30.0 ㎖) 중의 메틸 3-(시클로프로필-메톡시)-4-니트로벤조에이트 (D25에 의하여 생성될 수 있음) (360 ㎎, 1.433 mmol)의 용액에 NaOH (459 ㎎, 11.46 mmol)를 첨가하였다. 그 후, 혼합물을 60℃에서 1.5 시간 동안 교반하였다. 메탄올을 증발시킨 후, 2N HCl 용액을 pH=3이 될 때까지 혼합물에 첨가하였다. 형성된 고체를 여과하고, 건조시켜 표제 화합물 D26 (250 ㎎, 1.054 mmol, 73.6% 수율)을 황색 고체로서 얻었다.
LCMS: 238[M+H]+. tR =2.940. (LCMS 조건 1)
1H NMR (400MHz, 메탄올-d4): δ 7.80 - 7.86 (m, 2 H), 7.72 (d, J = 1.2 Hz, 1 H), 4.09 (d, J = 6.8 Hz, 2 H), 1.32 - 1.37 (m, 1 H), 0.63 - 0.70 (m, 2 H), 0.43 (q, J = 4.9 Hz, 2 H).
설명 D27
(3-( 시클로프로필메톡시 )-4- 니트로페닐 )(4- 메틸피페라진 -1-일)- 메타논 (D27)
Figure pct00022
DMF (10 ㎖) 중의 3-(시클로프로필메톡시)-4-니트로벤조산 (D26에 의하여 생성될 수 있음) (252 ㎎, 1.062 mmol), DIPEA (0.278 ㎖, 1.594 mmol) 및 HATU (485 ㎎, 1.275 mmol)의 혼합물을 실온에서 30 분 동안 교반하였다. 그 후, 1-메틸피페라진 (0.267 ㎖, 2.66 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 물로 세정하였다. 유기층을 진공 하에서 농축시키고, 미정제물을 실리카 겔 상의 크로마토그래피 (PE:EA=1:1)에 의하여 정제하여 표제 화합물 D27 (480 ㎎, 0.812 mmol, 76% 수율)을 황색 오일로서 얻었다.
LCMS: 320.1[M+H]+. tR =2.068. (LCMS 조건 1)
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d): δ 7.76 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.03 (s, 1H), 6.84 - 6.96 (m, 1H), 3.93 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 3.74 (br. s., 2H), 3.34 (br. s., 2H), 2.46 (br. s., 2H), 2.29 - 2.35 (m, 2H), 2.29 (s, 3H), 1.60 - 1.62 (m, 1H), 1.34 - 1.45 (m, 2H), 1.14 - 1.30 (m, 2H).
설명 D28
(3- 메톡시 -4- 니트로페닐 )( 옥사졸리딘 -3-일)- 메타논 (D28)
Figure pct00023
EtOH (5 ㎖) 중의 2-아미노에탄올 (0.310 g, 5.07 mmol) 및 포름알데히드 (0.210 ㎖, 7.61 mmol)의 용액을 60℃에서 2 시간 동안 가열하였다. 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 DMF (10 ㎖) 중의 DIPEA (1.311 g, 10.14 mmol), HATU (3.86 g, 10.14 mmol) 및 3-메톡시-4-니트로벤조산 (1.0 g, 5.07 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 그 후, 반응을 밤새 실온에서 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, 정제용 HPLC에 의하여 직접 정제하여 표제 화합물 D28 (700 ㎎, 0.916 mmol, 18.06% 수율)을 황색 오일로서 얻었다.
LCMS: 253[M+H]+. tR =1.057. (LCMS 조건 2)
설명 D29
(3-(디메틸아미노)-4- 니트로페닐 )( 모르폴리노 )- 메타논 (D29)
Figure pct00024
DMF (5.0 ㎖) 중의 (3-플루오로-4-니트로페닐)(모르폴리노)메타논 (D21에 의하여 생성될 수 있음) (600 ㎎, 2.360 mmol) 및 디-메틸아민 염산염 (231 ㎎, 2.83 mmol)의 용액에 탄산세슘 (2307 ㎎, 7.08 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 밤새 90℃에서 교반하였다. 반응을 물로 켄칭시키고, DCM (20 ㎖×3)으로 추출하였다. 합한 추출물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 농축시켰다. 미정제물을 실리카 겔 상의 컬럼 크로마토그래피 (DCM:CH3OH=20:1)에 의하여 정제하여 표제 화합물 D29 (500 ㎎, 1.762 mmol, 74.7% 수율)를 황색 오일로서 얻었다.
LCMS: 280.1[M+H]+. tR =1.07. (LCMS 조건 2)
설명 D30
(3- 에톡시 -4- 니트로페닐 )( 모르폴리노 )- 메타논 (D30)
Figure pct00025
THF (10 ㎖) 중의 (3-플루오로-4-니트로페닐)(모르폴리노)메타논 (D21에 의하여 생성될 수 있음) (600 ㎎, 2.360 mmol)의 용액에 수소화나트륨 (104 ㎎, 2.60 mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 0℃에서 30 분 동안 교반한 후, 에탄올 (120 ㎎, 2.60 mmol)을 첨가하였다. 그 후, 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 반응을 수성 NaHCO3으로 켄칭시키고, DCM (20 ㎖×3)으로 추출하였다. 합한 추출물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 농축시켰다. 미정제물을 실리카 겔 상의 컬럼 크로마토그래피 (DCM:CH3OH=20:1)에 의하여 정제하여 표제 화합물 D30 (500 ㎎, 1.701 mmol, 72.1% 수율)을 황색 오일로서 얻었다.
LCMS: 281.1[M+H]+. tR =1.09. (LCMS 조건 2)
설명 D31
(3- 이소프로폭시 -4- 니트로페닐 )( 모르폴리노 )- 메타논 (D31)
Figure pct00026
THF (10 ㎖) 중의 (3-플루오로-4-니트로페닐)(모르폴리노)메타논 (D21에 의하여 생성될 수 있음) (600 ㎎, 2.360 mmol)의 용액에 수소화나트륨 (104 ㎎, 2.60 mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 0℃에서 30 분 동안 교반한 후, 프로판-2-올 (156 ㎎, 2.60 mmol)을 첨가하였다. 그 후, 혼합물을 밤새 25℃에서 교반하였다. 반응을 수성 NaHCO3으로 켄칭시키고, DCM (20 ㎖×3)으로 추출하였다. 유기층을 합하고, Na2SO4에 의하여 건조시켰다. 용액을 여과하고, 진공 하에서 농축시켰다. 미정제물을 실리카 겔 상의 컬럼 크로마토그래피 (DCM:CH3OH=20:1)에 의하여 정제하여 표제 화합물 D31 (400 ㎎, 1.029 mmol, 43.6% 수율)을 황색 오일로서 얻었다.
LCMS: 295.1 [M+H]+. tR =1.65. (LCMS 조건 2)
설명 D32
(3- 이소프로폭시 -4- 니트로페닐 )(4- 메틸피페라진 -1-일)- 메타논 (D32)
Figure pct00027
THF (10 ㎖) 중의 (3-플루오로-4-니트로페닐)(4-메틸피페라진-1-일)메타논 (D12에 의하여 생성될 수 있음) (400 ㎎, 1.497 mmol)의 용액에 프로판-2-올 (0.228 ㎖, 2.99 mmol) 및 탄산세슘 (975 ㎎, 2.99 mmol)을 첨가하였다. 반응을 밤새 실온에서 교반하였다. 혼합물을 EtOAc (25 ㎖)에 붓고, 물 (30 ㎖×3)로 세정하였다. 유기층을 건조시키고, 진공 하에서 증발시켜 표제 화합물 D32 (500 ㎎, 0.732 mmol, 48.9% 수율)를 황색 오일로서 얻었다.
LCMS: 308 [M+H]+. tR =1.47. (LCMS 조건 2)
설명 D33
(3- 에톡시 -4- 니트로페닐 )(4- 메틸피페라진 -1-일)- 메타논 (D33)
Figure pct00028
THF (10 ㎖) 중의 (3-플루오로-4-니트로페닐)(4-메틸피페라진-1-일)메타논 (D12에 의하여 생성될 수 있음) (400 ㎎, 1.497 mmol)의 용액에 EtOH (0.874 ㎖, 14.97 mmol) 및 탄산세슘 (975 ㎎, 2.99 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc (25 ㎖)에 붓고, 물 (30 ㎖×3)로 세정하였다. 유기층을 건조시키고, 진공 하에서 증발시켜 표제 화합물 D33 (300 ㎎, 1.023 mmol, 68.3% 수율)을 황색 오일로서 얻었다.
LCMS: 294 [M+H]+. tR =1.41. (LCMS 조건 2)
설명 D34
(3-(디메틸아미노)-4- 니트로페닐 )(4- 메틸피페라진 -1-일)- 메타논 (D34)
Figure pct00029
THF (10 ㎖) 중의 (3-플루오로-4-니트로페닐)(4-메틸피페라진-1-일)메타논 (D12에 의하여 생성될 수 있음) (400 ㎎, 1.497 mmol)의 용액에 디메틸아민, 염산염 (122 ㎎, 1.497 mmol) 및 탄산세슘 (975 ㎎, 2.99 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc (25 ㎖)에 붓고, 물 (30 ㎖×3)로 세정하였다. 유기층을 Na2SO4에 의하여 건조시키고, 진공 하에서 증발시켜 표제 화합물 D34 (380 ㎎, 1.300 mmol, 87% 수율)를 황색 오일로서 얻었다.
LCMS: 293 [M+H]+. tR =1.38. (LCMS 조건 2)
설명 D35
6-카르복시-2-히드록시-3- 니트로벤젠디아조늄 (D35)
Figure pct00030
황산 (10 ㎖, 188 mmol) 중의 2-아미노-4-니트로벤조산 (5 g, 27.5 mmol)의 용액에 질산 (0.8 ㎖, 18.79 mmol)을 -10℃에서 첨가하였다. 침전물이 형성될 때까지 혼합물을 교반하였다. 혼합물을 얼음에 붓고, 에테르로 추출하였다. 에테르 용액을 물로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 증발시켜 표제 화합물 D35 (7.0 g, 24.27% 수율)를 얻고, 이를 그 다음 단계에서 직접 사용하였다.
LCMS: 211 [M+H]+. tR =0.389. (LCMS 조건 2)
설명 D36
2- 클로로 -3-히드록시-4- 니트로벤조산 (D36)
Figure pct00031
6-카르복시-2-히드록시-3-니트로벤젠디아조늄 (D35에 의하여 생성될 수 있음) (1.2 g, 5.71 mmol) 및 염화수소 (10 ㎖, 120 mmol)의 용액에 염화구리 (I) (0.594 g, 6.00 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 70℃에서 4 시간 동안 교반하였다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 바이오테이지에 의하여 정제하여 표제 화합물 D36 (400 ㎎, 1.839 mmol, 32.2% 수율)을 황색 고체로서 얻었다.
LCMS: 218 [M+H]+. tR =0.669. (LCMS 조건 2)
설명 D37
메틸 2-클로로-3-메톡시-4-니트로벤조에이트 (D37)
Figure pct00032
DMF (3 ㎖) 중의 2-클로로-3-히드록시-4-니트로벤조산 (D36에 의하여 생성될 수 있음) (150 ㎎, 0.689 mmol)의 용액에 수소화나트륨 (66.2 ㎎, 2.76 mmol)을 질소 하에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 20℃에서 0.5 시간 동안 교반하였다. 그 후, 요오도메탄 (391 ㎎, 2.76 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 추가의 3 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 및 물 사이에 분배시켰다. 유기층을 Na2SO4에 의하여 건조시키고, 증발시켜 표제 화합물 D37 (120 ㎎, 0.342 mmol, 49.6% 수율)을 얻었다.
LCMS: 246 [M+H]+. tR =1.332. (LCMS 조건 1)
설명 D38
2- 클로로 -3- 메톡시 -4- 니트로벤조산 (D38)
Figure pct00033
메탄올 (3 ㎖) 중의 메틸 2-클로로-3-메톡시-4-니트로벤조에이트 (D37에 의하여 생성될 수 있음) (130 ㎎, 0.529 mmol), 수산화나트륨 (1 ㎖, 2.0 mmol, 물 중의 2M)의 용액을 3 시간 동안 실온에서 교반하였다. 용매를 증발시키고, 미정제 생성물을 물 중에 용해시키고, 에틸 아세테이트로 세정하였다. 물 층을 pH=3으로 조절하고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 건조시키고, 증발시켜 표제 화합물 D38 (126 ㎎, 0.506 mmol, 96% 수율)을 황색 고체로서 얻었다.
LCMS: 232 [M+H]+. tR =0.857. (LCMS 조건 2)
설명 D39
(2- 클로로 -3- 메톡시 -4- 니트로페닐 )(4- 메틸피페라진 -1-일)- 메타논 (D39)
Figure pct00034
THF (5 ㎖) 중의 2-클로로-3-메톡시-4-니트로벤조산 (D38에 의하여 생성될 수 있음) (200 ㎎, 0.864 mmol), N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민 (112 ㎎, 0.864 mmol) 및 1-메틸피페라진 (86 ㎎, 0.864 mmol)의 용액에 HATU (328 ㎎, 0.864 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 바이오테이지 컬럼에 의하여 정제하여 표제 화합물 D39 (200 ㎎, 0.637 mmol, 73.8% 수율)를 백색 고체로서 얻었다.
LCMS: 314 [M+H]+. tR =0.701. (LCMS 조건 2)
설명 D40
(3- 메톡시 -4- 니트로페닐 )(2,7- 디아자스피로 -[3.5]- 노난 -7-일)- 메타논 (D40)
Figure pct00035
DCM (10 ㎖) 중의 tert-부틸 7-(3-메톡시-4-니트로벤조일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트 (D9에 의하여 생성될 수 있음) (250 ㎎, 0.617 mmol)의 용액에 TFA (0.238 ㎖, 3.08 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. DCM을 진공 하에서 제거하였다. 잔류물을 물 중에 용해시키고, 1M NaOH 용액으로 pH=9로 조절하였다. 그 후, 혼합물을 EA로 2회 추출하였다. 그 후, 합한 유기층을 물 및 염수로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 표제 화합물 D40 (157 ㎎, 0.514 mmol, 83% 수율)을 얻고, 이를 추가로 정제하지 않고 그 다음 단계에 직접 사용하였다.
LCMS: 306[M+H]+. tR =1.643. (LCMS 조건 1)
설명 D41
(3- 메톡시 -4- 니트로페닐 )(2- 메틸 -2,7- 디아자스피로 -[3.5]- 노난 -7-일) 메타논 (D41)
Figure pct00036
DMF (5 ㎖) 중의 (3-메톡시-4-니트로페닐)(2,7-디아자스피로-[3.5]-노난-7-일)-메타논 (D40에 의하여 생성될 수 있음) (157 ㎎, 0.514 mmol)의 용액에 아세트산 (0.029 ㎖, 0.514 mmol)을 첨가하였다. 반응을 실온에서 1 시간 동안 교반하였다. 그 후, 이 혼합물에 소듐 트리아세톡시보로하이드리드 (218 ㎎, 1.028 mmol)를 일부분씩 첨가하였다. 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 반응을 포화 NH4Cl 용액으로 켄칭시키고, 증발시켰다. 미정제 생성물을 역상 크로마토그래피 (바이오테이지 SNAP 카트리지, KP-C18-HS 120g, 5%~95% MeCN/H2O (0.05% 암모니아))에 의하여 직접 정제하여 표제 화합물 D41 (69 ㎎, 0.216 mmol, 42.0% 수율)을 황색 오일로서 얻었다.
LCMS: 320[M+H]+. tR =1.630. (LCMS 조건 1)
설명 D42
(S)- tert-부틸 4-(3-메톡시-4-니트로벤조일 )- 2-메틸피페라진- 1-카르복실레이트 (D42)
Figure pct00037
DMF (20 ㎖) 중의 HOBT (0.777 g, 5.07 mmol), EDC (0.972 g, 5.07 mmol), TEA (0.707 ㎖, 5.07 mmol) 및 3-메톡시-4-니트로벤조산 (1 g, 5.07 mmol)의 용액에 (S)-tert-부틸 2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.016 g, 5.07 mmol)를 첨가하였다. 반응을 실온에서 3 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (50 ㎖) 및 물 (25 ㎖) 사이에 분배시켰다. 유기층을 물 (25 ㎖), 포화 NaHCO3 (25 ㎖) 및 염수 (25 ㎖)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공 하에서 증발시켜 표제 화합물 D42 (1.78 g, 3.61 mmol, 71.2% 수율)를 오렌지색 오일로서 얻었다.
LCMS: 380[M+H]+. tR =1.325. (LCMS 조건 2)
설명 D43
(S)-(3- 메톡시 -4- 니트로페닐 )-(3- 메틸피페라진 -1-일)- 메타논 (D43)
Figure pct00038
DCM (20 ㎖) 중의 (S)-tert-부틸 4-(3-메톡시-4-니트로벤조일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (D42에 의하여 생성될 수 있음) (1.78 g, 4.69 mmol)의 용액에 TFA (2 ㎖)를 첨가하였다. 반응을 밤새 실온에서 교반하였다. 혼합물을 DCM (25 ㎖) 및 물 (20 ㎖) 사이에 분배시켰다. 유기층을 물 (20 ㎖)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공 하에서 증발시켜 표제 화합물 D43 (700 ㎎, 1.679 mmol, 75% 수율)을 백색 고체로서 얻었다.
LCMS: 280[M+H]+. tR =1.095. (LCMS 조건 1)
설명 D44
(S)-(3,4-디메틸피페라진-1-일)-(3- 메톡시 -4- 니트로페닐 )- 메타논 (D44)
Figure pct00039
아세토니트릴 (20 ㎖) 중의 K2CO3 (129 ㎎, 2.148 mmol), (S)-(3-메톡시-4-니트로페닐)-(3-메틸피페라진-1-일)-메타논 (D43에 의하여 생성될 수 있음)의 용액에 요오도메탄 (0.067 ㎖, 1.074 mmol)을 적가하였다. 반응을 실온에서 3 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 용액을 에틸 아세테이트 (25 ㎖) 및 물 (10 ㎖) 사이에 분배시켰다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공 하에서 증발시켜 표제 화합물 D44 (200 ㎎, 0.682 mmol, 63.5% 수율)를 황색 오일로서 얻었다.
LCMS: 294[M+H]+. tR =1.054. (LCMS 조건 2)
1H NMR (400MHz, 메탄올-d4): δ 7.88 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.34 (s, 1H), 7.11 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.42 (br. s., 1H), 3.99 (s, 3H), 3.49 (m, 1H), 3.35 - 3.40 (m, 1H), 2.90 - 3.22 (m, 1H), 2.79 (d, J = 11.3 Hz, 1H), 2.09 - 2.42 (m, 5H), 0.82 - 1.27 (m, 3H).
설명 D45
(R)-(3- 메톡시 -4- 니트로페닐 )-(3- 메틸피페라진 -1-일) 메타논 (D45)
Figure pct00040
메탄올 (5 ㎖) 중의 (R)-tert-부틸 4-(3-메톡시-4-니트로벤조일)-2-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (D15에 의하여 생성될 수 있음) (1.5 g, 3.95 mmol) 및 HCl (5 ㎖, 20.00 mmol, 디옥산 중의 4M)의 혼합물을 60℃에서 2 시간 동안 가열하였다. 혼합물을 농축시켜 표제 화합물 D45 (1.0 g, 3.44 mmol, 87% 수율)를 얻었다.
LCMS: 280[M+H]+. tR =1.272. (LCMS 조건 2)
설명 D46
(R)-(3,4-디메틸피페라진-1-일)-(3- 메톡시 -4- 니트로페닐 ) 메타논 (D46)
Figure pct00041
메탄올 중의 포름알데히드 (0.108 g, 3.58 mmol) 및 (R)-(3-메톡시-4-니트로페닐)-(3-메틸피페라진-1-일)메타논 (D45에 의하여 생성될 수 있음) (1.0 g, 3.58 mmol)의 혼합물을 60℃에서 1 시간 동안 교반하였다. 그 후, 혼합물을 0℃로 냉각시키고, NaCNBH4 (0.225 g, 3.58 mmol)를 첨가하였다. 반응을 밤새 실온에서 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, 정제용 HPLC에 의하여 직접 정제하여 표제 화합물 D46 (600 ㎎, 2.046 mmol, 57.1% 수율)을 오일로서 얻었다.
LCMS: 294 [M+H]+. tR =1.371. (LCMS 조건 2)
설명 D47
(±)-3- 아자비시클로 -[3.1.0]- 헥산 -1- 일메탄올 , 트리플루오로아세트산 염 (D47)
Figure pct00042
DCM (20 ㎖) 중의 tert-부틸 1-(히드록시메틸)-3-아자비시클로[3.1.0]헥산-3-카르복실레이트 (220 ㎎, 1.032 mmol) (Korean Journal of Medicinal Chemistry, 4(2), 119-25; 1994에 기재된 절차를 수행하여 생성될 수 있음)의 용액에 TFA (0.397 ㎖, 5.16 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 그 후, 혼합물을 농축시켜 표제 화합물 D47 (235 ㎎, 1.034 mmol, 100% 수율)을 황색 오일로서 얻고, 추가로 정제하지 않고 그 다음 단계에서 사용하였다.
LCMS: 114 [M+H]+. tR =0.247 (LCMS 조건 1)
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d): δ 3.80 - 3.89 (m, 1H), 3.67 - 3.73 (m, 1H), 2.86 - 3.10 (m, 4H), 1.27 - 1.34 (m, 1H), 0.65 (dd, J = 7.8, 5.1 Hz, 1H), 0.49 - 0.56 (m, 1H).
설명 D48
(±)-6- 아자스피로 -[2.5]-옥탄-5- 일메탄올 (D48)
Figure pct00043
DCM (10.0 ㎖) 중의 tert-부틸 5-(히드록시메틸)-6-아자스피로-[2.5]-옥탄-6-카르복실레이트 (450 ㎎, 1.865 mmol) (PCT 국제 출원 2011006960에 기재된 절차를 수행하여 생성될 수 있음)의 용액에 TFA (1,063 ㎎, 9.32 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3 시간 동안 교반하였다. 반응을 물로 켄칭시키고, DCM (20 ㎖×3)으로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 농축시켰다. 미정제물을 실리카 겔 상의 컬럼 크로마토그래피 (PE:EA=4:1)에 의하여 정제하여 표제 화합물 D48 (250 ㎎, 1.770 mmol, 95% 수율)을 오일로서 얻었다.
LCMS: 142 [M+H]+. tR =0.819 (LCMS 조건 2)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 4.62 (s, 1H), 3.27 (m, 3H), 2.94 (m, 1H), 2.66 (m, 2H), 1.74 (m, 1H), 1.45 (m, 1H), 0.77 (m, 2H), 0.26 (m, 4H).
설명 D49
(±)-6- 아자스피로 -[2.5]-옥탄-1- 일메탄올 (D49)
Figure pct00044
THF (3 ㎖) 중의 에틸 6-아자스피로-[2.5]-옥탄-1-카르복실레이트 (3 g, 16.37 mmol) (PCT 국제 출원 2008147314에 기재된 절차를 수행하여 생성될 수 있음)의 용액에 LiAlH4 (0.932 g, 24.56 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 교반하였다. 포화 Na2SO4 용액 (1 ㎖)을 첨가하였다. 혼합물을 여과하고, 용액을 EA로 세정하고, Na2SO4로 건조시키고, 진공 하에서 증발시켜 표제 화합물 D49 (2.5g, 10.27 mmol, 62.7% 수율)를 황색 오일로서 얻었다.
LCMS: 142.2 [M+H]+. tR =0.46 (LCMS 조건 2)
설명 D50
(±)-(1-(히드록시메틸)-6-아자스피로-[2.5]-옥탄-6-일 )-(3-메톡시-4-니트로페닐)메타논 (D50)
Figure pct00045
DMF (15 ㎖) 중의 (±)-6-아자스피로-[2.5]-옥탄-1-일메탄올 (D49에 의하여 생성될 수 있음) (2.5 g, 17.70 mmol) 및 3-메톡시-4-니트로벤조산 (3.14 g, 15.93 mmol)의 용액에 HATU (13.46 g, 35.4 mmol) 및 DIPEA (4.58 g, 35.4 mmol)를 첨가하였다. 반응을 0℃에서 1 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 (50 ㎖)에 붓고, EtOAc (40 ㎖)로 2회 추출하였다. 유기층을 합하고, 건조시키고, 진공 하에서 증발시켰다. 미정제물을 정제용-HPLC에 의하여 정제하여 표제 화합물 D50 (370 ㎎, 1.074 mmol, 6.07% 수율)을 황색 오일로서 얻었다.
LCMS: 321 [M+H]+. tR =1.466 (LCMS 조건 2)
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d): δ 7.87 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.14 (s, 1H), 7.01 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.30 (s, 1H), 3.26 - 4.10 (m, 9H), 1.67 - 1.84 (m, 1H), 1.18 - 1.51 (m, 3H), 0.54 - 0.73 (m, 1H), 0.21 - 0.39 (m, 1H).
설명 D51
(±)- (3-메톡시-4-니트로페닐)(1-(메톡시메틸) -6- 아자스피로 -[2.5]-옥탄-6-일)메타논(D51)
Figure pct00046
THF (3 ㎖) 중의 (±)-(1-(히드록시메틸)-6-아자스피로-[2.5]-옥탄-6-일)-(3-메톡시-4-니트로페닐)메타논 (D50에 의하여 생성될 수 있음) (350 ㎎, 1.093 mmol)의 용액에 수소화나트륨 (52.4 ㎎, 1.311 mmol)을 0℃에서 질소 대기 하에서 첨가하였다. 0℃에서 10 분 동안 교반한 후, 요오도메탄 (775 ㎎, 5.46 mmol)을 첨가하였다. 그 후, 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 반응을 빙수로 켄칭시키고, 에틸 아세테이트 (50 ㎖)로 희석하였다. 에틸 아세테이트 층을 물 (30 ㎖×2), 염수 (30 ㎖)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 용매를 진공 하에서 증발시켜 표제 화합물 D51 (150 ㎎, 0.426 mmol, 39.0% 수율)을 황색 오일로서 얻었다.
LCMS: 335 [M+H]+. tR =1.668 (LCMS 조건 2)
니트로 환원에 대한 일반적인 절차 2 (D52-D79)
메탄올 (20 ㎖) 중의 니트로-생성물 (1.0 eq)의 용액에 Pd/C (0.03 eq)를 첨가하고, 혼합물을 밤새 실온에서 수소 하에서 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 용액을 진공 하에서 농축시켜 미정제 생성물 아민 D52-D79를 얻고, 이를 추가로 정제하지 않고 그 다음 단계에서 사용하였다.
Figure pct00047
Figure pct00048
Figure pct00049
Figure pct00050
Figure pct00051
설명 D80
(4-아미노-3-( 디플루오로메톡시 )-페닐)(4- 메틸피페라진 -1-일)- 메타논 (D80)
Figure pct00052
아세트산 (2 ㎖) 중의 (3-(디플루오로메톡시)-4-니트로페닐)-(4-메틸피페라진-1-일)메타논 (D24에 의하여 생성될 수 있음) (150 ㎎, 0.476 mmol), 철 (80 ㎎, 1.427 mmol)의 용액을 70℃에서 2 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 EA (10 ㎖)로 희석하고, 여과하였다. 그 후, 용액을 포화 NaHCO3 용액 및 염수로 세정하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 표제 생성물 D80 (100 ㎎, 0.351 mmol, 73.7% 수율)을 황색 오일로서 얻었다.
LCMS: 286[M+H]+. tR =1.024 (LCMS 조건 1)
1H NMR (400MHz, 메탄올-d4): δ 6.97 - 7.08 (m, 2 H), 6.42 - 6.86 (m, 2 H), 3.56 (br. s., 4H), 2.40 (d, J = 4.4 Hz, 4 H), 2.24 (s, 3 H).
설명 D81
(4-아미노-3-( 시클로프로필메톡시 )-페닐)(4- 메틸피페라진 -1-일)- 메타논 (D81)
Figure pct00053
아세트산 (2 ㎖) 중의 (3-(시클로프로필메톡시)-4-니트로페닐)(4-메틸피페라진-1-일)-메타논 (D27에 의하여 생성될 수 있음) (480 ㎎, 0.812 mmol), 철 (136 ㎎, 2.435 mmol)의 용액을 70℃에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응을 EA (10 ㎖)로 희석하고, 여과하였다. 그 후, 용액을 포화 NaHCO3 용액 및 염수로 세정하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 표제 화합물 D81 (210 ㎎, 0.726 mmol, 89% 수율)을 황색 오일로서 얻었다.
LCMS: 290[M+H]+. tR =1.435 (LCMS 조건 1)
설명 D82
(R)-(4-아미노-3- 메톡시페닐 )(3- 메틸모르폴리노 )- 메타논 (D82)
Figure pct00054
에탄올 (10 ㎖) 중의 (R)-(3-메톡시-4-니트로페닐)(3-메틸모르폴리노)메타논 (D16에 의하여 생성될 수 있음) (50 ㎎, 0.178 mmol), 암모니아 염산염 (9.54 ㎎, 0.178 mmol) 및 철 (49.8 ㎎, 0.892 mmol)의 혼합물을 밤새 70℃에서 질소 하에서 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 용액을 농축시켰다. 미정제물을 실리카 겔 상의 크로마토그래피 (DCM:MeOH=10:1)에 의하여 정제하여 표제 화합물 D82 (30 ㎎, 0.120 mmol, 67.2% 수율)를 오일로서 얻었다.
LCMS: 251[M+H]+. tR =1.248 (LCMS 조건 2)
설명 D83
(4-아미노-2- 클로로 -3- 메톡시페닐 )(4- 메틸피페라진 -1-일)- 메타논 (D83)
Figure pct00055
에탄올 (2.0 ㎖) 및 물 (2.0 ㎖) 중의 (2-클로로-3-메톡시-4-니트로페닐)(4-메틸피페라진-1-일)-메타논 (D39에 의하여 생성될 수 있음) (108 ㎎, 0.344 mmol) 및 철 (96 ㎎, 1.721 mmol)의 혼합물을 밤새 65℃에서 질소 하에서 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 EtOH 중에 용해시키고, 여과하였다. 용액을 증발시켜 표제 화합물 D83 (100 ㎎, 0.247 mmol, 71.7% 수율)을 황색 오일로서 얻고, 이를 그 다음 단계에서 직접 사용하였다.
LCMS: 284[M+H]+. tR =1.24 (LCMS 조건 1)
설명 D84
2- 클로로 -4- 에톡시 -5- 요오도 -7H- 피롤로 -[2,3-d]-피리미딘 (D84)
Figure pct00056
DCM (50 ㎖) 중의 2-클로로-4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]피리미딘 (D1에 의하여 생성될 수 있음) (600 ㎎, 3.04 mmol)의 용액에 NIS (751 ㎎, 3.34 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 3 시간 동안 교반하였다. 반응을 물 (30 ㎖)로 켄칭시키고, DCM (80 ㎖)으로 추출하였다. 유기층을 10% Na2SO4 용액 (80 ㎖)으로 세정하고, 진공 하에서 농축시켜 표제 화합물 D84 (700 ㎎, 1.861 mmol, 61.3% 수율)를 황색 고체로서 얻었다.
LCMS: 324 [M+H]+. tR =1.400 (LCMS 조건 1)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 7.59 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 4.51 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 1.40 (t, 3H).
설명 D85
2- 클로로 -4- 에톡시 -5- 요오도 -7-토실-7H- 피롤로 -[2,3-d]-피리미딘 (D85)
Figure pct00057
DMF (30 ㎖) 중의 2-클로로-4-에톡시-5-요오도-7H-피롤로-[2,3-d]-피리미딘 (D84에 의하여 생성될 수 있음) (600 ㎎, 1.855 mmol)의 용액에 NaH (89 ㎎, 3.71 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 혼합물을 30 분 동안 교반한 후, TsCl (707 ㎎, 3.71 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온으로 가온시키고, 추가의 4 시간 동안 교반하였다. 반응을 물 (30 ㎖)로 켄칭시키고, EtOAc로 추출하였다. 유기층을 염수로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공 하에서 농축시켜 표제 화합물 D85 (800 ㎎, 1.574 mmol, 85% 수율)를 황색 고체로서 얻었다.
LCMS: 478 [M+H]+. tR =1.733 (LCMS 조건 2)
설명 D86
2- 클로로 -4- 에톡시 -5- 메틸 -7-토실-7H- 피롤로 -[2,3-d]-피리미딘 (D86)
Figure pct00058
1,4-디옥산 (100 ㎖) 및 물 (10.00 ㎖) 중의 2-클로로-4-에톡시-5-요오도-7-토실-7H-피롤로-[2,3-d]-피리미딘 (D85에 의하여 생성될 수 있음) (800 ㎎, 1.675 mmol), 메틸보론산 (200 ㎎, 3.35 mmol), K2CO3 (694 ㎎, 5.02 mmol)의 용액에 Pd(Ph3P)4 (194 ㎎, 0.167 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 밤새 90℃에서 질소 하에서 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, H2O (80 ㎖)를 첨가하고, EtOAc로 추출하였다. 유기층을 농축시키고, 실리카 겔 상의 컬럼 크로마토그래피 (PE:EA=5:1)에 의하여 정제하여 표제 화합물 D86 (40 ㎎, 0.109 mmol, 6.53% 수율)을 황색 고체로서 얻었다.
LCMS: 366[M+H]+. tR =1.687 (LCMS 조건 2)
설명 D87
2- 클로로 -4-( 시클로프로필메톡시 )-7H- 피롤로 -[2,3-d]-피리미딘 (D87)
Figure pct00059
THF (50 ㎖) 중의 시클로프로필메탄올 (1.151 g, 15.96 mmol)의 용액에 수소화나트륨 (0.638 g, 15.96 mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 30 분 동안 교반하였다. 그 후, 2,4-디클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (3.00 g, 15.96 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 밤새 70℃에서 교반한 후, 진공 하에서 농축시켰다. 잔류물을 물에 붓고, DCM (20 ㎖×3)으로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 농축시켰다. 미정제물을 실리카 겔 상의 컬럼 크로마토그래피 (PE:EA=4:1)에 의하여 정제하여 표제 화합물 D87 (3.2 g, 13.84 mmol, 87% 수율)을 얻었다.
LCMS: 224.2[M+H]+. tR =1.44 (LCMS 조건 2)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 12.20 (s, 1H), 7.37 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 6.51 (d, J=4.5 Hz, 1H), 4.29 (d, J=9.0 Hz, 2H), 1.29 (m, 1H), 0.57 (m, 2H), 0.40 (m, 2H).
설명 D88
2- 클로로 -4-( 시클로프로필메톡시 )-5- 요오도 -7H- 피롤로 -[2,3-d]-피리미딘 (D88)
Figure pct00060
DCM (50 ㎖) 중의 2-클로로-4-(시클로프로필메톡시)-7H-피롤로-[2,3-d]-피리미딘 (D87에 의하여 생성될 수 있음) (700 ㎎, 3.13 mmol)의 용액에 NIS (775 ㎎, 3.44 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 3 시간 동안 25℃에서 교반하였다. 혼합물을 물 (30 ㎖)로 켄칭시키고, 수성층을 DCM (80 ㎖)으로 추출하였다. 유기층을 10% Na2SO4 용액 (80 ㎖)으로 세정하고, 진공 하에서 농축시켜 표제 화합물 D88 (1 g, 2.60 mmol, 83% 수율)을 황색 고체로서 얻었다.
LCMS: 350[M+H]+. tR =1.572 (LCMS 조건 2)
설명 D89
2-클로로-4-(시클로프로필메톡시)-5-요오도-7-토실-7H-피롤로 -[2,3-d]-피리미딘 (D89)
Figure pct00061
DMF (20 ㎖) 중의 2-클로로-4-(시클로프로필메톡시)-5-요오도-7H-피롤로-[2,3-d]-피리미딘 (D88에 의하여 생성될 수 있음) (1 g, 2.86 mmol)의 빙냉 용액에 수소화나트륨 (0.137 g, 5.72 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 30 분 동안 교반한 후, TsCl (707 ㎎, 3.71 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 3 시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응을 물 (30 ㎖)로 켄칭시키고, EtOAc로 추출하였다. 유기층을 염수로 세정하고, 농축시켰다. 미정제물을 실리카 겔 상의 크로마토그래피 (PE:EA=15:1)에 의하여 정제하여 표제 화합물 D89 (600 ㎎, 1.191 mmol, 41.6% 수율)를 황색 고체로서 얻었다.
LCMS: 504[M+H]+. tR =1.815 (LCMS 조건 2)
설명 D90
2-클로로-4-(시클로프로필메톡시)-5-메틸-7-토실-7H-피롤로-[2,3-d]- 피리미딘 (D90)
Figure pct00062
1,4-디옥산 (100 ㎖) 및 물 (10.00 ㎖) 중의 2-클로로-4-(시클로프로필메톡시)-5-요오도-7-토실-7H-피롤로-[2,3-d]-피리미딘 (D89에 의하여 생성될 수 있음) (1 g, 1.985 mmol), 메틸보론산 (0.238 g, 3.97 mmol) 및 K2CO3 (0.823 g, 5.96 mmol)의 용액에 Pd(Ph3P)4 (194 ㎎, 0.167 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 밤새 90℃에서 질소 하에서 교반하였다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 실리카 겔 상의 컬럼 크로마토그래피 (PE:EA=20:1)에 의하여 정제하고, 정제용 HPLC에 의하여 추가로 정제하여 표제 화합물 D90 (28 ㎎, 0.071 mmol, 3.60% 수율)을 황색 고체로서 얻었다.
LCMS: 392[M+H]+. tR =1.795 (LCMS 조건 2)
설명 D91
6- 클로로 -4- 에톡시 -1H- 피라졸로 -[3,4-d]-피리미딘 (D91)
Figure pct00063
얼음 배쓰 내에서 THF (50 ㎖) 중의 에탄올 (100 ㎎, 2.180 mmol)의 용액에 수소화나트륨 (134 ㎎, 3.35 mmol)을 첨가하였다. 15 분 동안 교반한 후, 4,6-디클로로-1H-피라졸로-[3,4-d]-피리미딘 (317 ㎎, 1.677 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 점진적으로 실온이 되게 하고, 밤새 교반하였다. 반응을 물 (5 ㎖)로 켄칭시키고, 여과하고, 농축시켜 용매를 제거하고, 에틸 아세테이트 (80 ㎖)로 희석하고, 물 (30 ㎖)로 세정하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상의 컬럼 크로마토그래피 (PE:EA=20:1)에 의하여 정제하여 표제 화합물 D91 (229 ㎎, 52.4% 수율)을 백색 고체로서 얻었다.
LCMS: 199[M+H]+. tR =2.487 (LCMS 조건 1)
설명 D92
6- 클로로 -4- 에톡시 -3- 메틸 -1H- 피라졸로 -[3,4-d]-피리미딘 (D92)
Figure pct00064
얼음 배쓰 내에서 THF (60 ㎖) 중의 에탄올 (0.227 g, 4.93 mmol)의 용액에 수소화나트륨을 첨가하였다. 20 분 동안 교반한 후, 4,6-디클로로-3-메틸-1H-피라졸로 [3,4-d]피리미딘 (1 g, 4.93 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 점진적으로 실온이 되게 하고, 밤새 실온에서 교반하였다. 그 후, 혼합물을 물 (20 ㎖)로 희석하고, 농축시켜 용매를 제거하고, 에틸 아세테이트 (220 ㎖)로 희석하였다. 유기층을 물 (60 ㎖×2)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 미정제 생성물 (900 ㎎, 86% 수율)을 그 다음 단계에 직접 사용하였다.
LCMS: 213[M+H]+. tR =2.775 (LCMS 조건 1)
설명 D93
6- 클로로 -4-( 시클로프로필메톡시 )-1H- 피라졸로 -[3,4-d]-피리미딘 (D93)
Figure pct00065
얼음 배쓰 내에서 THF (200 ㎖) 중의 시클로프로필메탄올 (1.908 g, 26.5 mmol)의 용액에 수소화나트륨 (3.17 g, 79 mmol)을 첨가하였다. 30 분 동안 교반한 후, 4,6-디클로로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘 (5 g, 26.5 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 점진적으로 실온이 되게 하고, 밤새 교반하였다. 그 후, 혼합물을 물 (80 ㎖)로 희석하고, 농축시켜 용매를 제거하고, 에틸 아세테이트 (220 ㎖)로 희석하였다. 유기층을 물 (80 ㎖×2)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 미정제물 (5 g, 84% 수율)을 그 다음 단계에 직접 사용하였다.
LCMS: 225[M+H]+. tR =2.918 (LCMS 조건 1)
설명 D94
2- 클로로 -4- 에톡시 -7H- 피롤로 -[2,3-d]-피리미딘-5- 카르보니트릴 (D94)
Figure pct00066
DMA (5 ㎖) 중의 2-클로로-4-에톡시-5-요오도-7H-피롤로-[2,3-d]-피리미딘 (D84에 의하여 생성될 수 있음) (610 ㎎, 1.886 mmol)의 용액에 시안화구리 (I) (507 ㎎, 5.66 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 마이크로파에 의하여 120℃에서 2 시간 동안 조사하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 물을 첨가하였다. 유기층을 염수로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 농축시켰다. 미정제물을 실리카 겔 상의 컬럼 크로마토그래피 (PE:EA=3:2)에 의하여 정제하여 표제 화합물 D94 (200 ㎎, 0.898 mmol, 47.6% 수율)를 황색 고체로서 얻었다.
LCMS: 223[M+H]+. tR =2.777 (LCMS 조건 1)
설명 D95
2- 클로로 -4- 에톡시 -5-( 트리플루오로메틸 )-7H- 피롤로 -[2,3-d]-피리미딘 (D95)
Figure pct00067
건조 N2의 양압 하에서, 건조된 3목 둥근 바닥 플라스크에 2-클로로-4-에톡시-7-토실-7H-피롤로-[2,3-d]-피리미딘 (D2에 의하여 생성될 수 있음) (800 ㎎, 1.675 mmol) 및 DMF (20 ㎖)를 첨가하였다. 그 후, 요오드화구리 (I) (63.8 ㎎, 0.335 mmol) 및 메틸 2,2-디플루오로-2-(플루오로술포닐)아세테이트 (643 ㎎, 3.35 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 1.5 시간 동안 교반하였다. LCMS는 아무런 반응을 나타내지 않았다. 그 후, 추가의 요오드화구리 (I) (63.8 ㎎, 0.335 mmol) 및 메틸 2,2-디플루오로-2-(플루오로술포닐)-아세테이트 (643 ㎎, 3.35 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 100℃에서 2 시간 동안 교반하였다. 그 후, 추가의 요오드화구리 (I) (63.8 ㎎, 0.335 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 100℃에서 또 다른 1.5 시간 동안 교반하였다. 반응을 포화 NH4Cl 용액에 의하여 켄칭시켰다. 그 후, 물 (50 ㎖)을 혼합물에 첨가하고, EA (15 ㎖×3)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 여과 및 농축 후, 잔류물을 실리카 겔 상의 컬럼 크로마토그래피 (PE:EA=3:1)에 의하여 정제하여 표제 화합물 D95 (245.3 ㎎, 0.924 mmol, 55.1% 수율)를 백색 고체로서 얻었다.
LCMS: 266[M+H]+. tR =3.483 (LCMS 조건 1)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 12.96 (br. s., 1 H), 8.06 (s, 1 H), 4.53 (q, J = 7.1 Hz, 2 H), 1.37 (t, 3 H)
부치왈드 반응에 대한 일반적인 절차 3 (D96-D121)
1,4-디옥산 (2.0 ㎖) 및 물 (0.2 ㎖) 중의 2-클로로-4-에톡시-7-토실-7H-피롤로-[2,3-d]피리미딘 (D2에 의하여 생성될 수 있음) (1.0 eq), 아민 (1.0 eq) 및 크산포스 (0.1 eq)의 용액에 탄산칼륨 (2.0 eq) 및 PdCl2(pddf) (0.1 eq)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 90℃에서 교반하였다. 반응을 물로 켄칭시키고, EtOAc (20 ㎖×3)로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 농축시켰다. 미정제물을 실리카 겔 상의 컬럼 크로마토그래피 (DCM:MeOH=25:1)에 의하여 정제하여 원하는 생성물 D96-D121을 얻었다.
Figure pct00068
Figure pct00069
Figure pct00070
Figure pct00071
Figure pct00072
Figure pct00073
Figure pct00074
설명 D122
( 3-클로로-4-((4-에톡시-7-토실-7H-피롤로-[2,3-d]-피리미딘- 2-일)아미노)페닐)(4-메틸피페라진-1-일)-메타논 (D122)
Figure pct00075
질소 하에서 실온에서 교반된 1,4-디옥산 (3 ㎖) 및 물 (0.300 ㎖) 중의 탄산칼륨 (140 ㎎, 1.012 mmol), 2-클로로-4-에톡시-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (D2에 의하여 생성될 수 있음) (178 ㎎, 0.506 mmol) 및 4-아미노-3-클로로벤조산 (104 ㎎, 0.607 mmol)의 용액에 PdCl2(dppf)-CH2Cl2 부가물 (41.3 ㎎, 0.051 mmol) 및 크산포스 (36.2 ㎎, 0.076 mmol)를 첨가하였다. 반응 용기를 밀봉시키고, 바이오테이지 이니시에이터(Biotage Initiator) 중에서 90℃에서 2 시간 동안 가열하였다. 냉각 후, 미정제 생성물을 정제용-HPLC에 의하여 정제하여 표제 생성물 D122 (150 ㎎, 0.308 mmol, 60.9% 수율)를 황색 고체로서 얻었다.
LCMS: 487[M+H]+. tR =1.49. (LCMS 조건 2)
설명 D123
( 3-클로로-4-((4-에톡시-7-토실-7H-피롤로-[2,3-d]피리미딘- 2-일)아미노)페닐)(4-메틸피페라진-1-일)-메타논 (D123)
Figure pct00076
THF (5 ㎖) 중의 (3-클로로-4-((4-에톡시-7-토실-7H-피롤로-[2,3-d]-피리미딘-2-일)아미노)페닐)(4-메틸피페라진-1-일)-메타논 (D122에 의하여 생성될 수 있음) (200 ㎎, 0.411 mmol), DIPEA (106 ㎎, 0.821 mmol) 및 1-메틸피페라진 (49.4 ㎎, 0.493 mmol)의 용액에 HATU (187 ㎎, 0.493 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 바이오테이지로 직접 정제하여 표제 화합물 D123 (200 ㎎, 0.351 mmol, 86% 수율)을 백색 고체로서 얻었다.
LCMS: 570[M+H]+. tR =1.585. (LCMS 조건 2)
설명 D124
4-((4-에톡시-7-토실-7H-피롤로- [2, 3-d ]피리미딘- 2-일 )아미노)-3-메톡시벤조산 (D124)
Figure pct00077
1,4-디옥산 (1.5 ㎖) 및 물 (0.2 ㎖) 중의 2-클로로-4-에톡시-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (D2에 의하여 생성될 수 있음) (2.0 g, 5.68 mmol) 및 4-아미노-3-메톡시벤조산 (1.140 g, 6.82 mmol)의 용액에 크산포스 (0.493 g, 0.853 mmol), K2CO3 (2.357 g, 17.05 mmol) 및 PdCl2(dppf)-CH2Cl2 부가물 (0.464 g, 0.568 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 밤새 90℃에서 교반하였다. 반응을 물로 켄칭시키고, DCM (20 ㎖×3)으로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 농축시켰다. 미정제물을 실리카 겔 상의 컬럼 크로마토그래피 (DCM:CH3OH=20:1)에 의하여 정제하여 표제 화합물 D124 (2.60 g, 5.39 mmol, 95% 수율)를 황색 고체로서 얻었다.
LCMS: 483[M+H]+. tR =1.13. (LCMS 조건 2)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 12.74 (s, 1H), 8.64 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.69 (m, 2H), 7.69 (d, J = 12.0 Hz, 1H ), 7.53 (m, 3H), 7.38 (m, 2H), 6.66 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 4.49 (dd, J = 9.0 Hz, 2H), 3.95 (s, 3H), 2.31 (s, 3H), 1.35 (t, J = 9.0 Hz, 3H).
아미드 커플링 반응에 대한 일반적인 절차 4 (D125-D129)
DMF (3 ㎖) 중의 4-((4-에톡시-7-토실-7H-피롤로-[2,3-d]피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (D124에 의하여 생성될 수 있음) (1 eq), HATU (1 eq) 및 DIPEA (2 eq)의 용액에 아민 (2 eq)을 첨가하였다. 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 혼합물을 EA로 희석하고, 물로 세정하였다. 유기층을 건조시키고, 농축시켰다. 미정제 생성물을 실리카 겔 상의 크로마토그래피 (DCM:CH3OH=20:1)에 의하여 정제하여 원하는 생성물 D125-D129를 얻었다.
Figure pct00078
Figure pct00079
설명 D130
4-((4- 에톡시 -7H- 피롤로 -[2,3-d]-피리미딘-2-일)아미노)-3- 메톡시벤조산 (D129)
Figure pct00080
이소프로판올 (3.0 ㎖) 중의 4-((4-에톡시-7-토실-7H-피롤로-[2,3-d]피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (D124에 의하여 생성될 수 있음) (250 ㎎, 0.518 mmol)의 용액에 수산화나트륨 (0.518 ㎖, 1.036 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 60℃에서 교반하였다. 2N HCl을 pH=3까지 첨가하였다. 혼합물을 EtOAc (20 ㎖×2)로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공 하에서 농축시켰다. 미정제물을 실리카 겔 상의 크로마토그래피 (DCM:MeOH=15:1)에 의하여 정제하여 표제 화합물 E130 (166 ㎎, 0.506 mmol, 98% 수율)을 황색 고체로서 얻었다.
LCMS: 329[M+H]+. tR =1.089. (LCMS 조건 2)
설명 D131
tert-부틸-7-(4-( ( 4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]-피리미딘-2-일 )아미노)-3-메톡시벤조일)-2,7-디아자스피로-[3.5]-노난-2-카르복실레이트 (D131)
Figure pct00081
2-부탄올 (6 ㎖) 중의 2-클로로-4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]-피리미딘 (D1에 의하여 생성될 수 있음) (80 ㎎, 0.405 mmol), tert-부틸 7-(4-아미노-3-메톡시벤조일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트 (D58에 의하여 생성될 수 있음) (167 ㎎, 0.445 mmol), 디시클로헥실(2',4',6'-트리이소프로필-[1,1'-비페닐]-2-일)포스핀 (20.07 ㎎, 0.042 mmol), Pd2(dba)3 (18.53 ㎎, 0.020 mmol) 및 탄산칼륨 (168 ㎎, 1.214 mmol)의 용액을 120℃에서 마이크로파 하에서 45 분 동안 교반하였다. 혼합물을 셀라이트로 여과하고, 용액을 농축시켰다. 미정제물을 MDAP (염기 이동상)에 의하여 정제하여 표제 화합물 D131 (142 ㎎, 0.265 mmol, 65.4% 수율)을 황색 고체로서 얻었다.
LCMS: 564[M+H]+. tR =3.637. (LCMS 조건 1)
설명 D132
( 1-(히드록시메틸)-3-아자비시클로-[3.1.0]-헥산-3-일 )( 3-메톡시-4-니트로 -페닐)-메타논 (D132)
Figure pct00082
DMF (5 ㎖) 중의 3-메톡시-4-니트로벤조산 (523 ㎎, 2.65 mmol), HATU (1210 ㎎, 3.18 mmol) 및 DIPEA (0.708 ㎖, 3.98 mmol)의 용액에 (±)-3-아자비시클로-[3.1.0]-헥산-1-일메탄올, 트리플루오로아세트산 염 (D47에 의하여 생성될 수 있음) (0.097 ㎖, 2.65 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 혼합물을 EA로 희석하고, 물로 세정하였다. 유기층을 건조시키고, 농축시켰다. 미정제물을 실리카 겔 상의 크로마토그래피 (DCM:CH3OH=14:1)에 의하여 정제하여 표제 화합물 D132 (487.6 ㎎, 1.568 mmol, 59.1% 수율)를 황색 오일로서 얻었다.
LCMS: 293[M+H]+. tR =2.139. (LCMS 조건 1)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 7.96 (s, 1 H), 7.39 (d, J = 2.0 Hz, 1 H), 7.08 - 7.19 (m, 1 H), 4.56 - 4.80 (m, 1 H), 3.84 - 3.98 (m, 4 H), 3.37 - 3.72 (m, 4 H), 1.37 - 1.54 (m, 1 H), 0.68 - 0.81 (m, 1 H), 0.27 - 0.44 (m, 1 H).
설명 D133
( 3-메톡시-4-니트로페닐 )( 1-(메톡시메틸)-3-아자비시클로-[3.1.0]-헥산- 3-일)메타논 (D133)
Figure pct00083
THF (10 ㎖) 중의 (1-(히드록시메틸)-3-아자비시클로-[3.1.0]-헥산-3-일)(3-메톡시-4-니트로-페닐)-메타논 (D132에 의하여 생성될 수 있음) (483 ㎎, 1.652 mmol)의 용액에 NaH (99 ㎎, 2.479 mmol)를 첨가하였다. 30 분 동안 교반한 후, 요오도메탄 (0.310 ㎖, 4.96 mmol)을 첨가하였다. 그 후, 혼합물을 실온에서 3 시간 동안 교반하였다. 메탄올을 첨가하고, 용매를 증발시켰다. 미정제물을 EA로 희석하고, 물로 세정하였다. 유기층을 농축시키고, 실리카 겔 상의 크로마토그래피 (DCM:CH3OH=14:1)에 의하여 정제하여 표제 화합물 D133 (340 ㎎, 0.877 mmol, 53.1% 수율)을 황색 오일로서 얻었다.
LCMS: 307 [M+H]+. tR =2.662. (LCMS 조건 1)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 7.92 (dd, J = 4.0, 8.2 Hz, 1 H), 7.39 (s, 1 H), 7.15 (d, J = 8.1 Hz, 1 H), 4.10 (q, J = 5.2 Hz, 1 H), 3.95 (s, 3 H), 3.84 - 3.92 (m, 1 H), 3.58 - 3.75 (m, 1 H), 3.40 - 3.50 (m, 2 H), 3.25 (d, J = 12.0 Hz, 1 H), 3.17 (d, 3 H), 1.40 - 1.59 (m, 1 H), 0.71 - 0.81 (m, 1 H), 0.39 - 0.52 (m, 1 H).
설명 D134
( 4-아미노-3-메톡시페닐 )( 1-(메톡시메틸)-3-아자비시클로-[3.1.0]헥산- 3-일)메타논 (D134)
Figure pct00084
아세트산 (2 ㎖) 중의 (3-메톡시-4-니트로페닐)(1-(메톡시메틸)-3-아자비시클로-[3.1.0]-헥산-3-일)메타논 (D133에 의하여 생성될 수 있음) (340 ㎎, 0.877 mmol), 철 (147 ㎎, 2.63 mmol)의 용액을 70℃에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응을 EA (10 ㎖) 중에 용해시키고, 여과하였다. 그 후, 용액을 포화 NaHCO3 용액 및 염수로 추출하였다. 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 표제 화합물 D134 (240 ㎎, 0.521 mmol, 59.4% 수율)를 황색 오일로서 얻었다.
LCMS: 277 [M+H]+. tR =1.752. (LCMS 조건 1)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 6.83 - 6.93 (m, 2 H), 6.59 (d, J = 8.1 Hz, 1 H), 5.15 (s, 1 H), 3.83 - 3.98 (m, 1 H), 3.77 (s, 3 H), 3.45 - 3.54 (m, 2 H), 3.39 (m, 1 H), 3.13 - 3.28 (m, 5 H), 0.72 (dd, J = 4.9, 7.6 Hz, 1 H), 0.28 (t, J = 4.4 Hz, 1 H).
설명 D135
( 1S,3S,5S )- tert -부틸 3- 시아노 -2-아자비 시클로 -[3.1.0]- 헥산 -2-카르복실레이트 (D135)
무수 피리딘 (20 ㎖) 중의 (1S,3S,5S)-tert-부틸 3-카르바모일-2-아자비시클로[3.1.0]헥산-2-카르복실레이트 (1.6 g, 7.07 mmol)의 용액에 -20℃에서 TFAA (4.00 ㎖, 28.3 mmol)를 적가하였다. 그 후, 혼합물을 -20℃에서 약 1 시간 동안 교반하고, 실온으로 추가의 8 시간 동안 가온시켰다. 물을 첨가하고, 혼합물을 30 분 동안 교반하였다. 그 후, 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기층을 1M HCl 용액, 물 및 염수로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 표제 화합물 D136 (1.473 g, 7.07 mmol, 100% 수율)을 황색 오일로서 얻었다.
LCMS: 209 [M+H]+. tR =2.817. (LCMS 조건 1)
설명 D136
( 1S,3S,5S )-2- 아자비시클로 -[3.1.0]- 헥산 -3- 카르보니트릴 (D136)
Figure pct00086
디에틸 에테르 (14.15 ㎖, 14.15 mmol) 중의 (1S,3S,5S)-tert-부틸 3-시아노-2-아자비시클로-[3.1.0]-헥산-2-카르복실레이트 (D135에 의하여 생성될 수 있음) (1.473 g, 7.07 mmol) 및 1M 염산의 용액을 밤새 실온에서 교반하였다. 침전물이 형성되었으며, 그 후 용매를 감압 하에서 제거하였다. 잔류물을 무수 디에틸 에테르 중에 재용해시킨 후, 여과하였다. 고체를 무수 디에틸 에테르로 세정하고, 진공 하에서 건조시켜 표제 화합물 D136 (620 ㎎, 4.29 mmol, 60.6% 수율)을 백색 고체로서 얻었다.
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 5.02 (dd, J = 2.2, 9.8 Hz, 1 H), 3.42 (td, J = 2.8, 6.1 Hz, 1 H), 2.58 - 2.53 (m, 0 H), 2.30 (dd, J = 2.1, 13.8 Hz, 1 H), 1.82 - 1.97 (m, 1 H), 0.88 - 1.06 (m, 2 H).
설명 D137
( 4-((4-에톡시-7-토실-7H-피롤로- [2, 3-d ]-피리미딘- 2-일 )아미노)-3-메톡시페닐)(4-메틸피페라진-1-일)-메타논 (D137)
Figure pct00087
1,4-디옥산 (0.8 ㎖) 및 물 (0.2 ㎖) 중의 2-클로로-4-에톡시-7-토실-7H-피롤로-[2,3-d]-피리미딘 (D2에 의하여 생성될 수 있음)(200 ㎎, 0.568 mmol), 탄산칼륨 (157 ㎎, 1.137 mmol), (9,9-디메틸-9H-크산텐-4,5-디일)비스(디페닐포스핀) (49.3 ㎎, 0.085 mmol) 및 PdCl2(dppf)-CH2Cl2 부가물 (46.4 ㎎, 0.057 mmol)의 용액에 질소 하에서 (4-아미노-3-메톡시페닐)(4-메틸피페라진-1-일) 메타논 (170 ㎎, 0.682 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 90℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (25 ㎖) 및 물 (10 ㎖) 사이에 분배시켰다. 유기 상을 물, NaHCO3 용액 및 염수로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공 하에서 증발시켜 표제 화합물 D137 (100 ㎎, 0.131 mmol, 23.05% 수율)을 황색 오일로서 얻었다.
LCMS: 565 [M+H]+. tR =1.482 mins. (LCMS 조건 1)
부치왈드 반응에 대한 일반적인 절차 5
시험관에 2-클로로-4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]피리미딘 D1 (1.0 eq), 아민 (1.2 eq) 및 Xphos (0.1 eq), 2-부탄올 (3.0 ㎖), Pd2(dba)3 (0.05 eq) 및 K2CO3 (3 eq)을 첨가하였다. 시험관을 밀봉시키고, 질소로 2 분 동안 버블링시켰다. 반응 혼합물을 마이크로파 하에서 120℃에서 45 분 동안 교반하였다. 냉각 후, 혼합물을 여과하고, 농축시키고, MDAP (염기 이동상)에 의하여 정제하여 표제 생성물을 얻었다.
실시예 1
( 4-((4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]-피리미딘-2-일 )아미노)-3-메톡시페닐)(모르폴리노)메타논 (E1)
Figure pct00088
2-클로로-4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]피리미딘 (D1에 의하여 생성될 수 있음) 및 (4-아미노-3-메톡시페닐)(모르폴리노)메타돈 (PCT 국제 출원 WO2012097682에 기재된 절차를 수행하여 생성될 수 있음)을 출발 물질로 하여 부치왈드 반응에 대한 일반적인 절차 5에 의하여 표제 화합물 E1을 810 ㎎의 회백색 고체로서 생성하였다. 수율: 35.4%.
LCMS: 398 [M+H]+. tR =3.420 mins. (LCMS 조건 1)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 8.62 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.63 (s, 1H), 6.93 - 7.15 (m, 3H), 6.34 (d, J= 3.5 Hz, 1H), 4.52 (q, J= 7.0 Hz, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.45 - 3.70 (m, 8H), 1.41 (t, J= 7.0 Hz, 3H).
실시예 2
( 4-((4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]-피리미딘-2-일 )아미노)-2-플루오로-5-메톡시페닐)(모르폴리노)메타논 (E2)
Figure pct00089
2-클로로-4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]피리미딘 (D1에 의하여 생성될 수 있음) 및 (4-아미노-2-플루오로-5-메톡시페닐)(모르폴리노)메타논 (Journal of Medicinal Chemistry, 55(22), 9416-9433; 2012에 기재된 절차를 수행하여 생성될 수 있음)을 출발 물질로 하여 부치왈드 반응에 대한 일반적인 절차 5에 의하여 표제 화합물 E2를 125 ㎎의 회백색 고체로서 생성하였다. 수율: 47.1%.
LCMS: 416 [M+H]+. tR =2.999 mins. (LCMS 조건 1)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 11.50 - 11.83 (m, 1H), 8.59 (d, J= 12.5 Hz, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.10 (br. s., 1H), 7.01 (d, J= 6.1 Hz, 1H), 6.36 (br. s., 1H), 4.52 (q, J= 7.1 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.50 - 3.70 (m, 6H), 3.37 - 3.43 (m, 2H), 1.41 (t, J= 7.0 Hz, 3H).
실시예 3
( 4-((4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]-피리미딘-2-일 )아미노)-3-메톡시페닐)(4-메틸피페라진-1-일)-메타논 (E3)
Figure pct00090
이소프로판올 (5 ㎖) 중의 (4-((4-에톡시-7-토실-7H-피롤로-[2,3-d]-피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시페닐)(4-메틸피페라진-1-일)-메타논 (D137에 의하여 생성될 수 있음) (100 ㎎, 0.177 mmol) 및 수산화나트륨 (2 ㎖, 4.00 mmol, 물 중의 2M)의 용액을 밤새 60℃에서 교반하였다. 혼합물을 증발시키고, 2N HCl을 pH=7까지 첨가하였다. 혼합물을 EA로 추출하였다. 유기층을 MgSO4로 건조하고, 증발시켰다. 잔류물을 정제용-HPLC에 의하여 정제하여 표제 화합물 E3 (25 ㎎, 0.061 mmol, 34.4% 수율)을 백색 고체로서 얻었다.
LCMS: 411 [M+H]+. tR =1.259. (LCMS 조건 2)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 11.58 (br. s., 1H), 8.60 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.63 (s, 1H), 6.93 - 7.13 (m, 3H), 6.33 (br. s., 1H), 4.51 (d, J = 7.0 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.52 (br. s., 4H), 2.33 (br. s., 4H), 2.20 (s, 3H), 1.40 (t, J = 6.9 Hz, 3H).
실시예 4
(4-((4- 에톡시 -7H- 피롤로 -[2,3-d]피리미딘-2-일)아미노)-3- 메톡시페닐 )(4-(4-메틸피페라진-1-일)-피페리딘-1-일)-메타논 (E4)
Figure pct00091
2-클로로-4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]피리미딘 (D1에 의하여 생성될 수 있음) 및 (4-아미노-3-메톡시페닐)(4-(4-메틸피페라진-1-일)피페리딘-1-일)메타논 (D52에 의하여 생성될 수 있음)을 출발 물질로 하여 부치왈드 반응에 대한 일반적인 절차 5에 의하여 표제 화합물 E4를 16 ㎎의 백색 고체로서 생성하였다. 수율: 8.01%.
LCMS: 494[M+H]+. tR =2.139. (LCMS 조건 1)
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d): δ 8.62 - 8.70 (m, 1 H), 8.27 - 8.38 (m, 1 H), 7.59 -7.65 (m, 1 H), 6.97 - 7.07 (m, 2 H), 6.88 (dd, J = 2.2, 3.4 Hz, 1 H), 6.46 (dd, J = 2.2, 3.4 Hz, 1H), 4.58 (q, J = 7.1 Hz, 2 H), 3.95 (s, 3 H), 2.77 - 3.05 (m, 2 H), 2.56 - 2.72 (m, 4 H), 2.39 -2.54 (m, 4 H), 2.29 (s, 3 H), 1.78 - 2.00 (m, 2 H), 1.46 - 1.51 (m, 3 H).
실시예 5
( 4-((4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]피리미딘-2-일 )아미노)-2-플루오로-5-메톡시페닐)(4-메틸피페라진-1-일)-메타논 (E5)
Figure pct00092
2-클로로-4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]피리미딘 (D1에 의하여 생성될 수 있음) 및 (4-아미노-2-플루오로-5-메톡시페닐)(4-메틸피페라진-1-일)메타논 (D53에 의하여 생성될 수 있음)을 출발 물질로 하여 부치왈드 반응에 대한 일반적인 절차 5에 의하여 표제 화합물 E5를 39 ㎎의 백색 고체로서 생성하였다. 수율: 3.95%.
LCMS: 429[M+H]+. tR =1.148. (LCMS 조건 1)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 11.68 (br. s., 1H), 8.57 (d, J = 12.5 Hz, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.09 (br. s., 1H), 6.97 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 6.36 (br. s., 1H), 4.52 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.63 (br. s., 2H), 3.29 - 3.31 (m, 2H), 2.23 - 2.41 (m, 4H), 2.20 (s, 3H), 1.40 (t, 3H).
실시예 6
(S)-(4-((4- 에톡시 -7H- 피롤로 -[2,3-d]-피리미딘-2-일)아미노)-3- 메톡시페 닐)(헥사히드로피롤로-[1,2-a]-피라진-2(1H)-일)메타논 (E6)
Figure pct00093
2-클로로-4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]피리미딘 (D1에 의하여 생성될 수 있음) 및 (S)-(4-아미노-3-메톡시페닐)(헥사히드로피롤로[1,2-a]피라진-2(1H)-일)메타논 (D54에 의하여 생성될 수 있음)을 출발 물질로 하여 부치왈드 반응에 대한 일반적인 절차 5에 따라 표제 화합물 E6을 39 ㎎의 백색 고체로서 생성하였다. 수율: 25.2%.
LCMS: 437[M+H]+. tR =2.301. (LCMS 조건 1)
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d): δ 8.66 (d, J = 8.8 Hz, 1 H), 8.49 - 8.60 (m, 1 H), 7.67 - 7.57 (m, 1 H), 7.04 (s, 2 H), 6.86 (dd, J = 2.2, 3.4 Hz, 1 H), 6.46 (dd, J = 2.2, 3.4 Hz, 1 H), 4.58 (q, J = 7.1 Hz, 2 H), 3.95 (s, 3 H), 3.12 (t, J = 8.3 Hz, 3 H), 2.18 (d, J = 9.0 Hz, 2 H), 2.04 - 1.59 (m, 7 H), 1.49 (t, J = 7.1 Hz, 3 H), 1.31 - 1.45 (m, 1 H).
실시예 7
( 3-(디플루오로메톡시)-4-((4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]-피리미딘- 2-일)아미노)페닐)(4-메틸피페라진-1-일)-메타논 (E7)
Figure pct00094
2-클로로-4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]피리미딘 (D1에 의하여 생성될 수 있음) 및 (4-아미노-3-(디플루오로메톡시)-페닐)(4-메틸피페라진-1-일)-메타논 (D80에 의하여 생성될 수 있음)을 출발 물질로 하여 부치왈드 반응에 대한 일반적인 절차 5에 의하여 표제 화합물 E7을 41 ㎎의 백색 고체로서 생성하였다. 수율: 30.2%.
LCMS: 447[M+H]+. tR =2.519. (LCMS 조건 1)
1H NMR (400MHz, 메탄올-d4): δ 8.74 (d, J = 8.3 Hz, 1 H), 7.16 - 7.27 (m, 2 H), 6.63 - 7.07 (m, 2 H), 6.29 (d, J = 3.4 Hz, 1 H), 4.43 - 4.50 (m, 2 H), 3.47 - 3.71(m, 4 H), 2.40 (br. s., 4 H), 2.24 (s, 3 H), 1.37 (t, 3 H).
실시예 8
(3-( 시클로프로필메톡시 )-4-((4- 에톡시 -7H- 피롤로 -[2,3-d]-피리미딘-2-일)아미노)페닐)(4-메틸피페라진-1-일)-메타논 (E8)
Figure pct00095
2-클로로-4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]피리미딘 (D1에 의하여 생성될 수 있음) 및 (4-아미노-3-(시클로프로필메톡시)-페닐)(4-메틸피페라진-1-일)-메타논 (D81에 의하여 생성될 수 있음)을 출발 물질로 하여 부치왈드 반응에 대한 일반적인 절차 5에 따라 표제 화합물 E8을 41 ㎎의 백색 고체로서 생성하였다. 수율: 22.48%.
LCMS: 451[M+H]+. tR =2.710. (LCMS 조건 1)
1H NMR (400MHz, 메탄올-d4): δ 8.65 (d, J = 8.1 Hz, 1 H), 6.90 - 7.00 (m, 2 H), 6.85 (d, J = 3.7 Hz, 1 H), 6.28 (d, J = 3.4 Hz, 1 H), 4.48 (q, J = 7.1 Hz, 2 H), 3.89 (d, J= 7.1 Hz, 2 H), 3.59 (br. s., 4 H), 2.39 (br. s., 4H), 2.24 (s, 3H), 1.39 (t, J= 7.1 Hz, 3H), 1.27-1.34 (m, 1H), 0.60 (q, 2H), 0.30-0.37 (m, 2 H).
실시예 9
( 4-((4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]피리미딘-2-일 )아미노)페닐)(모르폴리노)메타논 (E9)
Figure pct00096
2-클로로-4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]피리미딘 (D1에 의하여 생성될 수 있음) 및 (4-아미노페닐)(모르폴리노)-메타논 (PCT 국제 출원 WO2008018426에 기재된 절차를 수행하여 생성될 수 있음)를 출발 물질로 하여 부치왈드 반응에 대한 일반적인 절차 5에 따라 표제 화합물 E9를 52 ㎎의 백색 고체로서 생성하였다. 수율: 20.44%.
LCMS: 368[M+H]+. tR =2.511. (LCMS 조건 1)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 9.33 (s, 1H), 7.92 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.35 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.02 (d, J = 3.4 Hz, 1H), 6.32 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 4.55 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.61 (br. s., 4H), 3.52 (br. s., 4H), 1.42 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
실시예 10
(4-((4- 에톡시 -7H- 피롤로 -[2,3-d]-피리미딘-2-일)아미노)-3- 메톡시페닐 )(2-옥사-6-아자스피로-[3.3]헵탄-6-일)메타논 (E10)
Figure pct00097
2-클로로-4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]피리미딘 (D1에 의하여 생성될 수 있음) 및 (4-아미노-3-메톡시페닐)(2-옥사-6-아자스피로[3.3]헵탄-6-일)메타논 (D55에 의하여 생성될 수 있음)을 출발 물질로 하여 부치왈드 반응에 대한 일반적인 절차 5에 따라 표제 화합물 E10을 20.4 ㎎의 백색 고체로서 생성하였다. 수율: 15.75%.
LCMS: 410[M+H]+. tR =2.38. (LCMS 조건 1)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 11.63 (br. s., 1H), 8.65 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.21 - 7.28 (m, 2H), 6.98 - 7.11 (m, 1H), 6.35 (dd, J = 3.2, 2.0 Hz, 1H), 4.67 - 4.73 (m, 4H), 4.52 (q, J = 7.1 Hz, 4H), 4.13 - 4.27 (m, 2H), 3.95 (s, 3H), 1.36 - 1.46 (m, 3H).
실시예 11
(( 2R,6S )- 2 , 6-디메틸모르폴리노 )( 4-((4-에톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘- 2-일)아미노)-3-메톡시페닐)메타논 (E11)
Figure pct00098
2-클로로-4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]피리미딘 (D1에 의하여 생성될 수 있음) 및 (4-아미노-3-메톡시페닐)((2R,6S)-2,6-디메틸모르폴리노)메타논 (D56에 의하여 생성될 수 있음)를 출발 물질로 하여 부치왈드 반응에 대한 일반적인 절차 5에 따라 표제 화합물 E11을 49 ㎎의 백색 고체로서 생성하였다. 수율: 18.97%.
LCMS: 426[M+H]+. tR =3.025. (LCMS 조건 1)
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d): δ 8.62 - 8.72 (m, 1 H), 8.41 -8.55 (m, 1 H), 7.57 - 7.70 (m, 1 H), 6.97 - 7.07 (m, 2 H), 6.90 - 6.80 (m, 1 H), 6.40 - 6.53 (m, 1 H),4.58 (q, J = 6.9 Hz, 2 H), 3.96 (s, 3 H), 3.47 - 3.71 (m, 2 H), 2.39 - 2.96 (m, 2 H), 1.61 - 1.64 (m, 2H), 1.49 (t, J = 7.1 Hz, 3 H), 0.97 - 1.35 (m, 6 H).
실시예 12
( 4-((4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]피리미딘-2-일 )아미노)-3-메톡시페닐)(2-옥사-6-아자스피로-[3.4]-옥탄-6-일)-메타논 (E12)
Figure pct00099
2-클로로-4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]피리미딘 (D1에 의하여 생성될 수 있음) 및 (4-아미노-3-메톡시페닐)(2-옥사-6-아자스피로[3.4]옥탄-6-일)메타논 (D57에 의하여 생성될 수 있음)를 출발 물질로 하여 부치왈드 반응에 대한 일반적인 절차 5에 따라 표제 화합물 E12를 15.3 ㎎의 백색 고체로서 생성하였다. 수율: 11.33%.
LCMS: 424[M+H]+. tR =2.38. (LCMS 조건 1)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 11.53 (br. s., 1H), 8.49 - 8.60 (m, 1H), 7.51 - 7.62 (m, 1H), 7.05 - 7.14 (m, 2H), 6.94 - 7.01 (m, 1H), 6.27 (br. s., 1H), 4.56 (br. s., 1H), 4.31 - 4.49 (m, 5H), 3.89 (s, 3H), 3.58 - 3.73 (m, 2H), 3.35 - 3.53 (m, 2H), 2.03 - 2.16 (m, 2H), 1.33 (t, 3H).
실시예 13
( 4-((4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]-피리미딘-2-일 )아미노)-3-메톡시페닐)(2-메틸-2,7-디아자스피로-[3.5]-노난-7-일)메타논 (E13)
Figure pct00100
2-클로로-4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]피리미딘 (D1에 의하여 생성될 수 있음) 및 tert-부틸 7-(4-아미노-3-메톡시벤조일)-2,7-디아자스피로[3.5]노난-2-카르복실레이트 (D58에 의하여 생성될 수 있음)를 출발 물질로 하여 부치왈드 반응에 대한 일반적인 절차 5에 따라 표제 화합물 E13을 24.3 ㎎의 백색 고체로서 생성하였다. 수율: 29.2%.
LCMS: 451[M+H]+. tR =2.06. (LCMS 조건 1)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 11.59 (br. s., 1H), 8.59 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.63 (s, 1H), 6.96 - 7.07 (m, 3H), 6.33 (dd, J = 3.3, 1.8 Hz, 1H), 4.51 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.40 - 3.50 (m, 4H), 3.01 (s, 4H), 2.51 (s, 8H), 2.26 (s, 3H), 1.69 (br. s., 4H), 1.40 (t, 3H).
실시예 14
4-((4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]피리미딘-2-일 )아미노)-N-(2-히드록시-2-메틸프로필)-3-메톡시벤즈아미드 (E14)
Figure pct00101
이소프로판올 (5 ㎖) 중의 4-((4-에톡시-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-일)아미노)-N-(2-히드록시-2-메틸프로필)-3-메톡시벤즈아미드 (D96에 의하여 생성될 수 있음) (150 ㎎, 0.271 mmol) 및 수산화나트륨 (0.558 ㎖, 1.116 mmol, 물 중의 2M)의 용액을 밤새 60℃에서 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, 2N HCl을 pH=7까지 첨가하였다. 그 후, 혼합물을 EA로 추출하였다. 유기층을 건조시키고, 농축시켰다. 미정제물을 정제용-HPLC에 의하여 정제하여 표제 화합물 E14 (77 ㎎, 0.193 mmol, 71.1% 수율)를 백색 고체로서 얻었다.
LCMS: 400[M+H]+. tR =1.251. (LCMS 조건 2)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 11.60 (br. s., 1H), 8.64 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.18 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.44 - 7.61 (m, 2H), 7.07 (d, J = 3.0 Hz, 1H), 6.34 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 4.60 (s, 1H), 4.52 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.98 (s, 3H), 3.27 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 1.41 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 1.12 (s, 6H).
실시예 15
( 4-((4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]-피리미딘-2-일 )아미노)페닐)(4-메틸피페라진-1-일)메타논 (E15)
Figure pct00102
이소프로판올 (5 ㎖) 중의 (4-((4-에톡시-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-일)아미노)페닐)(4-메틸피페라진-1-일)메타논 (D97에 의하여 생성될 수 있음) (250 ㎎, 0.468 mmol) 및 수산화나트륨 (0.23 ㎖, 0.47 mmol, 물 중의 2M)의 용액을 밤새 60℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에서 농축시켰다. 잔류물을 물에 붓고, DCM (20 ㎖×3)으로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 농축시켰다. 미정제물을 실리카 겔 상의 컬럼 크로마토그래피 (DCM:MeOH=20:1)에 의하여 정제하여 표제 화합물 E15 (56 ㎎, 0.147 mmol, 31.5% 수율)를 백색 고체로서 얻었다.
LCMS: 381.1[M+H]+. tR =1.148. (LCMS 조건 2)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 11.49 (s, 1H), 9.37 (s, 1H), 7.91 (d, 2H), 7.31 (d, 2H), 7.01 (d, 1H), 6.31 (d, 1H), 4.53 (dd, J = 9.0 Hz, 2H), 3.49 (s, 3H), 2.30 (s, 4H), 2.18 (s, 3H), 1.40 (t, J = 9.0 Hz, 3H).
실시예 16
( 4-((4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]-피리미딘-2-일 )아미노)-3-메톡시페닐)(6-아자스피로-[2.5]옥탄-6-일)메타논 (E16)
Figure pct00103
이소프로판올 (5 ㎖) 중의 (4-((4-에톡시-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시페닐)(6-아자스피로[2.5]옥탄-6-일)메타논 (D98에 의하여 생성될 수 있음) (150 ㎎, 0.261 mmol) 및 수산화나트륨 (0.558 ㎖, 1.116 mmol, 물 중의 2M)의 용액을 밤새 60℃에서 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, 2N HCl을 pH=7까지 첨가하였다. 그 후, 혼합물을 EA로 추출하였다. 유기층을 건조시키고, 농축시켰다. 미정제물을 정제용-HPLC에 의하여 정제하여 표제 화합물 E16 (90 ㎎, 0.214 mmol, 82% 수율)을 백색 고체로서 얻었다.
LCMS: 422[M+H]+. tR =1.456. (LCMS 조건 2)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 11.58 (br. s., 1H), 8.59 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.62 (s, 1H), 6.92 - 7.11 (m, 3H), 6.33 (s, 1H), 4.51 (d, J = 7.0 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.39 - 3.74 (m, 4H), 1.10 - 1.60 (m, 7H), 0.36 (s, 4H).
실시예 17
(4-((4- 에톡시 -7H- 피롤로 -[2,3-d]-피리미딘-2-일)아미노)-3- 메톡시페닐 )( 옥사졸리딘 -3-일) 메타논 (E17)
Figure pct00104
이소프로판올 (5 ㎖) 중의 (4-((4-에톡시-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시페닐)(옥사졸리딘-3-일)메타논 (D99에 의하여 생성될 수 있음) (200 ㎎, 0.372 mmol) 및 수산화나트륨 (0.558 ㎖, 1.116 mmol, 물 중의 2M)의 용액을 밤새 60℃에서 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, 2N HCl을 pH=7까지 첨가하였다. 그 후, 혼합물을 EA로 추출하였다. 유기층을 건조시키고, 농축시켰다. 미정제물을 정제용-HPLC에 의하여 정제하여 표제 화합물 E17 (33 ㎎, 0.082 mmol, 22.09% 수율)을 백색 고체로서 얻었다.
LCMS: 384[M+H]+. tR =1.572. (LCMS 조건 2)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 11.62 (br. s., 1H), 8.65 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.13 - 7.32 (m, 2H), 7.06 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 6.33 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 4.98 (s, 2H), 4.51 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 4.00 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.55 - 3.73 (m, 2H), 1.40 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
실시예 18
( 4-((4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]-피리미딘-2-일 )아미노)-2-메톡시페닐)(모르폴리노)메타논 (E18)
Figure pct00105
이소프로판올 (5.0 ㎖) 중의 (4-((4-에톡시-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-일)아미노)-2-메톡시페닐)(모르폴리노)메타논 (D100에 의하여 생성될 수 있음) (170 ㎎, 0.308 mmol) 및 수산화나트륨 (0.770 ㎖, 1.541 mmol, 물 중의 2M)의 용액을 밤새 60℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에서 농축시켰다. 잔류물을 물에 붓고, EtOAc (20 ㎖×3)로 추출하였다. 합한 추출물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 농축시켰다. 미정제물을 정제용-HPLC에 의하여 정제하여 표제 화합물 E18 (20 ㎎, 0.050 mmol, 16.13% 수율)을 백색 고체로서 얻었다.
LCMS: 398[M+H]+. tR =1.497. (LCMS 조건 2)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 11.47 (br. s., 1H), 9.30 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.30 - 7.49 (m, 1H), 6.94 - 7.14 (m, 2H), 6.31 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 4.55 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.60 (br. s., 6H), 3.19 (br. s., 2H), 1.40 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
실시예 19
(3-(디메틸아미노)-4- (( 4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]-피리미딘- 2-일)아미노)페닐)-(모르폴리노)메타논 (E19)
Figure pct00106
이소프로판올 (5.0 ㎖) 중의 (3-(디메틸아미노)-4-((4-에톡시-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-일)아미노)페닐)(모르폴리노)메타논 (D101에 의하여 생성될 수 있음) (250 ㎎, 0.443 mmol) 및 수산화나트륨 (0.221 ㎖, 0.442 mmol, 물 중의 2M)의 용액을 밤새 60℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭시키고, DCM (20 ㎖×3)으로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 농축시켰다. 미정제물을 실리카 겔 상의 컬럼 크로마토그래피 (DCM:CH3OH=20:1)에 의하여 정제하여 표제 화합물 E19 ((62 ㎎, 0.151 mmol, 34.1% 수율)를 백색 고체로서 얻었다.
LCMS: 411[M+H]+. tR =1.32. (LCMS 조건 2)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 11.57 (s, 1H), 8.64 (d, 1H, J = 10.5 Hz, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.28 (s, 1H), 7.19 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.04 (s, 1H), 6.33 (s, 1H), 4.51 (dd, J = 8.5 Hz, 9.0 Hz, 2H), .59 (s, 4H), 3.52 (s, 4H), 2.65 (s, 6H), 1.39 (t, J = 9.0 Hz, 3H).
실시예 20
(3- 에톡시 -4-((4- 에톡시 -7H- 피롤로 -[2,3-d]피리미딘-2-일)아미노)페닐)( 모르폴리노 )메타논 (E20)
Figure pct00107
이소프로판올 (5.0 ㎖) 중의 (3-에톡시-4-((4-에톡시-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-일)아미노)페닐)(모르폴리노)메타논 (D102에 의하여 생성될 수 있음) (250 ㎎, 0.442 mmol) 및 수산화나트륨 (0.221 ㎖, 0.442 mmol, 물 중의 2M)의 용액을 밤새 60℃ 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭시키고, DCM (20 ㎖×3)으로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 농축시켰다. 미정제물을 실리카 겔 상의 컬럼 크로마토그래피 (DCM:CH3OH=20:1)에 의하여 정제하여 표제 화합물 E20 (96 ㎎, 0.233 mmol, 52.8% 수율)을 백색 고체로서 얻었다.
LCMS: 412.1[M+H]+. tR =1.31. (LCMS 조건 2)
1H NMR(400MHz, DMSO-d6): δ 11.57 (s, 1H), 8.61 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.04 (m, 3H), 6.32 (s, 1H), 4.53 (dd, J = 8.0 Hz, 9.0 Hz, 2H), 4.17 (dd, J = 8.0 Hz, 9.0 Hz, 2H), 3.59 (s, 4H), 3.51 (s, 4H), 1.41 (m,6H).
실시예 21
( 4-((4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]-피리미딘-2-일 )아미노)-3-이소프로폭시페닐)(모르폴리노)메타논 (E21)
Figure pct00108
이소프로판올 (5.0 ㎖) 중의 (4-((4-에톡시-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-일)아미노)-3-이소프로폭시페닐)(모르폴리노)메타논 (D103에 의하여 생성될 수 있음) (200 ㎎, 0.345 mmol) 및 수산화나트륨 (0.173 ㎖, 0.345 mmol, 물 중의 2M)의 용액을 밤새 60℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭시키고, DCM (20 ㎖×3)으로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 농축시켰다. 미정제물을 실리카 겔 상의 컬럼 크로마토그래피 (DCM:CH3OH=20:1)에 의하여 정제하여 표제 화합물 E21 (67 ㎎, 0.157 mmol, 45.6% 수율)을 백색 고체로서 얻었다.
LCMS: 426.2[M+H]+. tR =1.36. (LCMS 조건 2)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 11.57 (s, 1H), 8.63 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.04 (m, 3H), 6.32 (s, 1H), 4.73 (m, 1H), 4.51(dd, J = 8.0 Hz, 9.0 Hz, 2H), 3.59 (s, 4H), 3.51 (s, 4H), 1.39 (,t, J = 8.5 Hz, 3H), 1.35 (d, J = 7.5 Hz, 6H).
실시예 22
( 4-((4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]-피리미딘-2-일 )아미노)-3-플루오로페닐)(4-메틸피페라진-1-일)메타논 (E22)
Figure pct00109
THF (10 ㎖) 중의 (4-((4-에톡시-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-일)아미노)-3-플루오로페닐)(4-메틸피페라진-1-일)메타논 (D104에 의하여 생성될 수 있음) (100 ㎎, 0.181 mmol) 및 수산화나트륨 (0.181 ㎖, 0.362 mmol, 물 중의 2M)의 용액을 밤새 50℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc (20 ㎖)에 붓고, 물 (3×30 ㎖)로 추출하였다. 유기층을 진공 하에서 증발시키고, 미정제물을 정제용-HPLC에 의하여 정제하여 표제 화합물 E22 (16 ㎎, 0.039 mmol, 21.30% 수율)를 백색 고체로서 얻었다.
LCMS: 399[M+H]+. tR =1.513. (LCMS 조건 2)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 11.51 (br. s., 1H), 8.55 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.26 (d, J = 11.3 Hz, 1H), 7.20 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.98 - 7.04 (m, 1H), 6.27 - 6.34 (m, 1H), 4.46 - 4.53 (m, 2H), 3.50 (br. s., 4H), 2.32 (br. s., 4H), 2.20 (s, 3H), 1.38 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
실시예 23
( 3-클로로-4-((4-에톡시-7H-피롤로- [2, 3-d ]피리미딘- 2-일 )아미노)페닐)(4-메틸피페라진-1-일)메타논 (E23)
Figure pct00110
메탄올 (3 ㎖) 중의 (3-클로로-4-((4-에톡시-7-토실-7H-피롤로-[2,3-d]피리미딘-2-일)아미노)페닐)(4-메틸피페라진-1-일)-메타논 (D123에 의하여 생성될 수 있음) (40 ㎎, 0.070 mmol) 및 수산화나트륨 (1 ㎖, 2.0 mmol, 물 중의 2M)의 용액을 20℃에서 2 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 Na2SO4로 건조시키고, 농축시켰다. 미정제물을 정제용-HPLC에 의하여 정제하여 표제 화합물 E23 (18 ㎎, 0.042 mmol, 59.9% 수율)을 백색 고체로서 얻었다.
LCMS: 415[M+H]+. tR =1.582. (LCMS 조건 2)
1H NMR (400MHz, 메탄올-d4): δ 8.85 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.40 (dd, J = 8.8, 1.8 Hz, 1H), 7.00 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 6.41 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 4.58 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.68 (br. s., 4H), 2.50 (br. s., 4H), 2.35 (s, 3H), 1.48 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
실시예 24
( 4-((4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]피리미딘-2-일 )아미노)-3-이소프로폭시페닐)(4-메틸피페라진-1-일)메타논 (E24)
Figure pct00111
THF (10 ㎖) 중의 (4-((4-에톡시-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-일)아미노)-3-이소프로폭시페닐)(4-메틸피페라진-1-일)메타논 (D105에 의하여 생성될 수 있음) (100 ㎎, 0.169 mmol) 및 수산화나트륨 (0.169 ㎖, 0.337 mmol, 물 중의 2M)의 용액을 밤새 50℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc (20 ㎖)에 붓고, 물 (3×30 ㎖)로 추출하였다. 유기층을 진공 하에서 증발시키고, 미정제물을 정제용-HPLC에 의하여 정제하여 표제 화합물 E24 (45 ㎎, 0.100 mmol, 59.0% 수율)을 황색 고체로서 얻었다.
LCMS: 437[M+H]+. tR =1.626. (LCMS 조건 2)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 11.57 (br. s., 1H), 8.62 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.58 (s, 1H), 6.91 - 7.10 (m, 3H), 6.34 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 4.67 - 4.82 (m, 1H), 4.52 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.51 (br. s., 4H), 2.32 (br. s., 4H), 2.20 (s, 3H), 1.41 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 1.36 (d, J = 6.0 Hz, 6H).
실시예 25
( 3-에톡시-4-((4-에톡시-7H-피롤로- [2, 3-d ]피리미딘- 2-일 )아미노)페닐)(4-메틸피페라진-1-일)메타논 (E25)
Figure pct00112
THF (10 ㎖) 중의 (3-에톡시-4-((4-에톡시-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-일)아미노)페닐)(4-메틸피페라진-1-일)메타논 (D106에 의하여 생성될 수 있음) (100 ㎎, 0.173 mmol) 및 수산화나트륨 (0.173 ㎖, 0.346 mmol, 물 중의 2M)의 용액을 밤새 60℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc (20 ㎖)에 붓고, 물 (3×30 ㎖)로 추출하였다. 유기층을 진공 하에서 증발시키고, 미정제물을 정제용-HPLC에 의하여 정제하여 표제 화합물 E25 (60 ㎎, 0.140 mmol, 81% 수율)를 황색 고체로서 얻었다.
LCMS: 425[M+H]+. tR =1.583. (LCMS 조건 2)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 11.58 (br. s., 1H), 8.61 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.61 (s, 1H), 6.92 - 7.12 (m, 3H), 6.34 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.52 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 4.19 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.52 (br. s., 4H), 2.32 (br. s., 4H), 2.20 (s, 3H), 1.42 (m, 6H).
실시예 26
( 3-(디메틸아미노)-4- (( 4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]피리미딘-2-일 )아미노)페닐)(4-메틸피페라진-1-일) 메타논 (E26)
Figure pct00113
THF (10 ㎖) 중의 (3-(디메틸아미노)-4-((4-에톡시-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-일)아미노)페닐)(4-메틸피페라진-1-일)메타논 (D107에 의하여 생성될 수 있음) (100 ㎎, 0.173 mmol)의 용액에 NaOH (0.173 ㎖, 0.346 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 60℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc (20 ㎖)에 붓고, 물 (3×30 ㎖)로 세정하였다. 유기층을 진공 하에서 증발시키고, 미정제물을 정제용-HPLC에 의하여 정제하여 표제 화합물 E26 (50 ㎎, 0.116 mmol, 66.8% 수율)을 백색 고체로서 얻었다.
LCMS: 425[M+H]+. tR =1.59. (LCMS 조건 2)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 11.58 (br. s., 1H), 8.63 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.26 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 7.12 - 7.22 (m, 1H), 6.99 - 7.10 (m, 1H), 6.34 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 4.52 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.52 (br. s., 4H), 2.66 (s, 6H), 2.32 (br. s., 4H), 2.20 (s, 3H), 1.41 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
실시예 27
(S)-(4-((4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]피리미딘-2-일 )아미노)-3-메톡시페닐)(3-메틸모르폴리노)메타논 (E27)
Figure pct00114
이소프로판올 (5.0 ㎖) 중의 (S)-(4-((4-에톡시-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시페닐)(3-메틸모르폴리노)메타논 (D108에 의하여 생성될 수 있음) (250 ㎎, 0.442 mmol) 및 수산화나트륨 (0.221 ㎖, 0.442 mmol, 물 중의 2M)의 용액을 밤새 60℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에서 농축시켰다. 잔류물을 염수에 붓고, 에틸 아세테이트 (20 ㎖×3)로 추출하였다. 그 후, 유기층을 염수 (20 ㎖×3)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 농축시켰다. 미정제물을 실리카 겔 상의 컬럼 크로마토그래피 (PE:EA=1:1)에 의하여 정제하여 표제 화합물 E27 (80 ㎎, 0.194 mmol, 44.0% 수율)을 백색 고체로서 얻었다.
LCMS: 412[M+H]+. tR =1.305. (LCMS 조건 2)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 11.57 (s, 1H), 8.60 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.00 (m, 3H), 6.32 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 4.52 (dd, J = 9.0 Hz, 2H), 4.17 (s, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.79 (m, 2H), 3.59 (2H, m), 3.42 (m,1H), 3.26 (m, 1H), 1.38 (t, J = 9.0 Hz, 3H), 1.26 (d, J = 8.0 Hz, 3H).
실시예 28
( 4-((4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]피리미딘-2-일 )아미노)-3-메톡시-2-메틸페닐)(모르폴리노)메타논 (E28)
Figure pct00115
이소프로판올 (5.0 ㎖) 중의 (4-((4-에톡시-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시-2-메틸페닐)(모르폴리노)메타논 (D109에 의하여 생성될 수 있음) (250 ㎎, 0.442 mmol) 및 수산화나트륨 (0.221 ㎖, 0.442 mmol, 물 중의 2M)의 용액을 밤새 60℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에서 농축시켰다. 잔류물을 염수에 붓고, 에틸 아세테이트 (20 ㎖×3)로 추출하였다. 그 후, 유기층을 염수 (20 ㎖×3)로 세정하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 농축시켰다. 미정제물을 실리카 겔 상의 컬럼 크로마토그래피 (PE:EA=1:1)에 의하여 정제하여 표제 화합물 E28 (125 ㎎, 0.304 mmol, 68.7% 수율)을 백색 고체로서 얻었다.
LCMS: 412[M+H]+. tR =1.248. (LCMS 조건 2)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 11.53 (s, 1H), 8.38 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.02 (m, 1H), 6.95 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 6.31 (m, 1H ), 4.51 (dd, J = 9.0 Hz, 2H), 3.73 (s, 3H), 3.63 (m, 4H), 3.49 (m, 2H), 3.18 (m, 2H), 2.16 (s, 3H), 1.38 (t, J = 9.0 Hz, 3H).
실시예 29
(R)-(3,4-디메틸피페라진-1-일 )- (4-((4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]- 피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시페닐)메타논 (E29)
Figure pct00116
이소프로판올 (5 ㎖) 중의 (R)-(3,4-디메틸피페라진-1-일)(4-((4-에톡시-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시페닐)메타논 (D110에 의하여 생성될 수 있음) (150 ㎎, 0.259 mmol) 및 수산화나트륨 (0.389 ㎖, 0.778 mmol)의 용액을 밤새 60℃에서 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, 2N HCl을 pH=7까지 첨가하였다. 그 후, 혼합물을 EA로 추출하였다. 유기층을 건조시키고, 농축시켰다. 미정제물을 정제용-HPLC에 의하여 정제하여 표제 화합물 E29 (15 ㎎, 0.035 mmol, 13.63% 수율)를 백색 고체로서 얻었다.
LCMS: 425[M+H]+. tR =1.572. (LCMS 조건 2)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 11.36 - 11.72 (m, 1H), 8.59 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.62 (br. s., 1H), 6.78 - 7.20 (m, 3H), 6.32 (br. s., 1H), 4.50 (d, J = 6.5 Hz, 2H), 3.92 (br. s., 3H), 2.61 - 2.86 (m, 1H), 2.18 (br. s., 3H), 2.07 (br. s., 2H), 1.39 (t, J = 6.4 Hz, 3H), 0.77 - 1.10 (m, 3H).
실시예 30
(R)-(4-((4-에톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-일 )아미노)-3-메톡시페닐)(3-메틸모르폴리노)메타논 (E30)
Figure pct00117
메탄올 (3 ㎖) 중의 (R)-(4-((4-에톡시-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시페닐)(3-메틸모르폴리노)메타논 (D111에 의하여 생성될 수 있음) (40 ㎎, 0.071 mmol) 및 수산화나트륨 (1 ㎖, 2.0 mmol, 물 중의 2M)의 용액을 20℃에서 2 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 Na2SO4로 건조시키고, 농축시켰다. 미정제물을 정제용-HPLC에 의하여 정제하여 표제 화합물 E30 (17 ㎎, 0.041 mmol, 58.4% 수율)을 백색 고체로서 얻었다.
LCMS: 412[M+H]+. tR =1.610. (LCMS 조건 2)
1H NMR (400MHz, 메탄올-d4): δ 8.75 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.00 - 7.11 (m, 2H), 6.95 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 6.38 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 4.57 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 4.20 - 4.46 (m, 1H), 3.99 (s, 3H), 3.80 - 3.97 (m, 2H), 3.60 - 3.76 (m, 2H), 3.38 - 3.59 (m, 2H), 1.48 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 1.40 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
실시예 31
( 4-((4-에톡시-5-메틸-7H-피롤로- [2, 3-d ]피리미딘- 2-일 )아미노)-3-메톡시페닐)(4-메틸피페라진-1-일)메타논 (E31)
Figure pct00118
이소프로판올 (5 ㎖) 중의 (4-((4-에톡시-5-메틸-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시페닐)(모르폴리노)메타논 (D112에 의하여 생성될 수 있음) (60 ㎎, 0.104 mmol) 및 수산화나트륨 (2 ㎖, 4.00 mmol, 물 중의 2M)의 용액을 밤새 60℃에서 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, 2N HCl을 pH=7까지 첨가하였다. 그 후, 혼합물을 EA로 추출하였다. 유기층을 건조시키고, 농축시켰다. 미정제물을 정제용-HPLC에 의하여 정제하여 표제 화합물 E31 (10 ㎎, 0.024 mmol, 22.72% 수율)을 백색 고체로서 얻었다.
LCMS: 425 [M+H]+. tR =1.333. (LCMS 조건 2)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 11.12 - 11.27 (m, 1H), 8.58 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.57 (s, 1H), 6.89 - 7.08 (m, 2H), 6.75 (s, 1H), 4.47 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.50 (br. s., 4H), 2.31 (br. s., 4H), 2.25 (s, 3H), 2.19 (s, 3H), 1.38 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
실시예 32
( 4-((4-에톡시-5-메틸-7H-피롤로- [2, 3-d ]피리미딘- 2-일 )아미노)-3-메톡시페닐)(모르폴리노)메타논 (E32)
Figure pct00119
이소프로판올 (5 ㎖) 중의 (4-((4-에톡시-5-메틸-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시페닐)(4-메틸피페라진-1-일)메타논 (D113에 의하여 생성될 수 있음) (150 ㎎, 0.265 mmol) 및 수산화나트륨 (2 ㎖, 4.00 mmol, 물 중의 2M)의 용액을 밤새 60℃에서 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, 2N HCl을 pH=7까지 첨가하였다. 그 후, 혼합물을 EA로 추출하였다. 유기층을 건조시키고, 농축시켰다. 미정제물을 정제용-HPLC에 의하여 정제하여 표제 화합물 E32 (9 ㎎, 0.022 mmol, 8.25% 수율)를 백색 고체로서 얻었다.
LCMS: 412 [M+H]+. tR =1.311. (LCMS 조건 2)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 11.22 (br. s., 1H), 8.45 - 8.70 (m, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.06 (s, 2H), 6.76 (s, 1H), 4.48 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.61 (br. s., 4H), 3.49 - 3.56 (m, 4H), 2.26 (s, 3H), 1.39 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
실시예 33
(4-((4-( 시클로프로필메톡시 )-7H- 피롤로 -[2,3-d]피리미딘-2-일)아미노)-3- 메톡시페닐 )(4-메틸피페라진-1-일)메타논 (E33)
Figure pct00120
2-부탄올 (2.0 ㎖) 중의 2-클로로-4-(시클로프로필메톡시)-7H-피롤로-[2,3-d]-피리미딘 (D87에 의하여 생성될 수 있음) (150 ㎎, 0.671 mmol), (4-아미노-3-메톡시페닐)(4-메틸피페라진-1-일) 메타논 (201 ㎎, 0.805 mmol), 크산포스 (39.2 ㎎, 0.068 mmol), Pd2(dba)3 (31.3 ㎎, 0.034 mmol) 및 K2CO3 (282 ㎎, 2.039 mmol)의 용액을 마이크로파에 의하여 120℃에서 45 분 동안 조사하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭시키고, EtOAc (20 ㎖×3)로 추출하였다. 합한 추출물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 농축시켰다. 미정제물을 실리카 겔 상의 컬럼 크로마토그래피 (DCM:MeOH=20:1)에 의하여 정제하여 표제 화합물 E33 (80 ㎎, 0.183 mmol, 27.3% 수율)을 백색 고체로서 얻었다.
LCMS: 437 [M+H]+. tR =1.292. (LCMS 조건 2)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 11.59 (s, 1H), 8.60 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.03 (m, 3H), 8.35 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 4.29 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.52 (m, 8H), 1.31 (m, 1H), 0.58 (m, 2H), 0.38 (m, 2H).
실시예 34
( 4-((4-(시클로프로필메톡시)-7H-피롤로-[2,3-d]피리미딘-2-일 )아미노)-3-메톡시페닐)(모르폴리노)메타논 (E34)
Figure pct00121
2-부탄올 (2.0 ㎖) 중의 2-클로로-4-(시클로프로필메톡시)-7H-피롤로-[2,3-d]-피리미딘 (D87에 의하여 생성될 수 있음) (150 ㎎, 0.671 mmol), (4-아미노-3-메톡시페닐)(모르폴리노)메타논 (190 ㎎, 0.805 mmol), 크산포스 (39.2 ㎎, 0.068 mmol), Pd2(dba)3 (31.3 ㎎, 0.034 mmol) 및 K2CO3 (282 ㎎, 2.039 mmol)의 용액을 마이크로파에 의하여 120℃에서 45 분 동안 조사하였다. 반응 혼합물을 물로 켄칭시키고, EtOAc (20 ㎖×3)로 추출하였다. 합한 추출물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 농축시켰다. 미정제물을 실리카 겔 상의 컬럼 크로마토그래피 (DCM:MeOH=20:1)에 의하여 정제하여 표제 화합물 E34 (107 ㎎, 0.253 mmol, 37.7% 수율)를 백색 고체로서 얻었다.
LCMS: 424[M+H]+. tR =1.32. (LCMS 조건 2)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 11.59 (1H, s), 8.60 (1H, d, J = 10.5 Hz), 7.62 (1H, s), 7.03 (3H, m), 8.35 (1H, d, J = 4.0 Hz), 4.29 (2H, d, J = 9.0 Hz), 3.91 (3H, s), 3.52 (8H, m), 1.31 (1H, m), 0.58 (2H, m), 0.38 (2H, s).
실시예 35
(R)-(4-((4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]피리미딘-2-일 )아미노)-3-메톡시페닐)(2-(메톡시메틸)피롤리딘-1-일)메타논 (E35)
Figure pct00122
이소프로판올 (5 ㎖) 및 물 (5.00 ㎖) 중의 (R)-(4-((4-에톡시-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시페닐)(2-(메톡시메틸)피롤리딘-1-일)메타논 (D125에 의하여 생성될 수 있음) (160 ㎎, 0.276 mmol) 및 NaOH (166 ㎎, 4.14 mmol)의 용액을 60℃에서 4 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 EA로 희석하고, 물로 세정하였다. 유기층을 건조시키고, 농축시켰다. 미정제물을 MDAP (염기성 이동상)에 의하여 정제하여 표제 화합물 E35 (51 ㎎, 0.120 mmol, 43.4% 수율)를 백색 고체로서 얻었다.
LCMS: 426[M+H]+. tR =3.213. (LCMS 조건 1)
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d): δ 8.56 - 8.71 (m, 1 H), 8.32 - 8.52 (m, 1 H), 7.60 - 7.72 (m, 1 H), 7.08 - 7.24 (m, 2 H), 6.78 - 6.96 (m, 1 H), 6.33 - 6.58 (m, 1 H), 4.58 (d, J = 7.1 Hz, 2 H), 4.38 - 4.51 (m, 1 H), 3.96 (s, 3 H), 3.53 - 3.77 (m, 4 H), 3.25 -3.49 (m, 3 H), 1.88 - 2.14 (m, 3 H), 1.68 - 1.83 (m, 1 H), 1.49 (t, J = 7.1 Hz, 3 H).
실시예 36
( 4-((4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]피리미딘-2-일 )아미노)-3-메톡시페닐)(4-플루오로피페리딘-1-일)메타논 (E36)
Figure pct00123
2-부탄올 (6 ㎖) 중의 2-클로로-4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]피리미딘 (D1에 의하여 생성될 수 있음) (60 ㎎, 0.304 mmol), (4-아미노-3-메톡시페닐)(4-플루오로피페리딘-1-일)메타논 (D74에 의하여 생성될 수 있음) (122 ㎎, 0.334 mmol), Pd2(dba)3 (13.90 ㎎, 0.015 mmol), 디시클로헥실(2',4',6'-트리이소프로필-[1,1'-비페닐]-2-일)포스핀 (15.05 ㎎, 0.032 mmol) 및 탄산칼륨 (126 ㎎, 0.911 mmol)의 용액을 마이크로파에 의하여 120℃로 45 분 동안 조사하였다. 혼합물을 셀라이트로 여과하고, 용액을 농축시켰다. 미정제물을 MADP (염기성 이동상)에 의하여 정제하여 표제 화합물 E36 (30.5 ㎎, 0.070 mmol, 23.08% 수율)을 백색 고체로서 얻었다.
LCMS: 414[M+H]+. tR =3.19. (LCMS 조건 1)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 11.52 (br. s., 1H), 8.53 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.56 (s, 1H), 6.85 - 7.07 (m, 3H), 6.26 (dd, J = 3.2, 1.7 Hz, 1H), 4.72 - 5.03 (m, 1H), 4.44 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.76 - 4.00 (m, 3H), 3.54 (br. s., 4H), 1.67 (br. s., 4H), 1.33 (t, 3H).
실시예 37
(S)-(2,4-디메틸피페라진-1-일 )( 4-((4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]- 피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시페닐)메타논 (E37)
Figure pct00124
이소프로판올 (5 ㎖) 중의 (S)-(2,4-디메틸피페라진-1-일)(4-((4-에톡시-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시페닐)메타논 (D114에 의하여 생성함) (100 ㎎, 0.173 mmol) 및 수산화나트륨 (0.259 ㎖, 0.518 mmol, 물 중의 2M)의 용액을 밤새 60℃에서 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, 2N HCl을 pH=7까지 첨가하였다. 그 후, 혼합물을 EA로 추출하였다. 유기층을 건조시키고, 농축시켰다. 미정제물을 정제용-HPLC에 의하여 정제하여 표제 화합물 E37 (7 ㎎, 0.016 mmol, 9.54% 수율)을 백색 고체로서 얻었다.
LCMS: 425[M+H]+. tR =1.262. (LCMS 조건 2)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 11.58 (br. s., 1H), 8.60 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.63 (s, 1H), 6.80 - 7.17 (m, 3H), 6.10 - 6.47 (m, 1H), 4.52 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.75 - 3.92 (m, 1H), 3.19 (br. s., 1H), 2.58 - 2.83 (m, 2H), 2.17 (s, 3H), 2.04 (dd, J = 11.3, 3.5 Hz, 1H), 1.87 (d, J = 3.0 Hz, 1H), 1.41 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.29 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
실시예 38
( 2-클로로-4-((4-에톡시-7H-피롤로- [2, 3-d ]피리미딘- 2-일 )아미노)-3-메톡시페닐)(4-메틸피페라진-1-일)메타논 (E38)
Figure pct00125
메탄올 (3 ㎖) 중의 (2-클로로-4-((4-에톡시-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시페닐)(4-메틸피페라진-1-일)메타논 (D115에 의하여 생성될 수 있음) (100 ㎎, 0.167 mmol) 및 수산화나트륨 (1 ㎖, 2.000 mmol, 물 중의 2M)의 용액을 20℃에서 2 시간 동안 교반하였다. 그 후, 혼합물을 EA로 추출하였다. 유기층을 건조시키고, 농축시켰다. 미정제물을 정제용-HPLC에 의하여 정제하여 표제 화합물 E38 (6 ㎎, 0.013 mmol, 8.08% 수율)을 백색 고체로서 얻었다.
LCMS: 412[M+H]+. tR =1.564. (LCMS 조건 2)
1H NMR (400MHz, 메탄올-d4): δ 8.69 - 8.79 (m, 1H), 7.04 - 7.11 (m, 1H), 6.87 - 7.01 (m, 1H), 6.39 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 4.51 - 4.61 (m, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.80 (br. s., 2H), 3.33 - 3.39 (m, 2H), 2.37 - 2.60 (m, 4H), 2.33 (s, 3H), 1.48 (t, 3H)
실시예 39
(R)-( 4-((4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]-피리미딘-2-일 )아미노)-3-메톡시페닐)(헥사히드로피롤로[1,2-a]피라진-2(1H)-일)메타논 (E39)
Figure pct00126
이소프로판올 (5 ㎖) 중의 (R)-(4-((4-에톡시-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시페닐)(헥사히드로피롤로[1,2-a]피라진-2(1H)-일)메타논 (D116에 의하여 생성될 수 있음) (250 ㎎, 0.423 mmol) 및 수산화나트륨 (16.93 ㎎, 0.423 mmol)의 용액을 밤새 60℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에서 농축시켰다. 잔류물을 물에 붓고, DCM (20 ㎖×3)으로 추출하였다. 합한 추출물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 농축시켰다. 미정제물을 실리카 겔 상의 컬럼 크로마토그래피 (DCM:MeOH=30:1)에 의하여 정제하여 표제 화합물 E39 (60 ㎎, 0.137 mmol, 32.5% 수율)를 백색 고체로서 얻었다.
LCMS: 437[M+H]+. tR =1295. (LCMS 조건 2)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 11.45 - 11.70 (m, 1H), 8.60 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.04 (s, 3H), 6.33 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 4.51 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.33 (s, 4H), 2.99 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.06 (q, J = 8.5 Hz, 2H), 1.87 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 1.60 - 1.80 (m, 3H), 1.40 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 1.17 - 1.34 (m, 1H).
실시예 40
(R)-(2,4-디메틸피페라진-1-일 )( 4-((4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]- 피리미딘-2-일)-아미노)-3-메톡시페닐)메타논 (E40)
Figure pct00127
이소프로판올 (5 ㎖) 중의 (R)-(2,4-디메틸피페라진-1-일)(4-((4-에톡시-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시페닐)메타논 (D117에 의하여 생성될 수 있음) (150 ㎎, 0.259 mmol) 및 수산화나트륨 (0.389 ㎖, 0.778 mmol, 물 중의 2M)의 용액을 밤새 60℃에서 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, 2N HCl을 pH=7까지 첨가하였다. 그 후, 혼합물을 EA로 추출하였다. 유기층을 건조시키고, 농축시켰다. 미정제물을 정제용-HPLC에 의하여 정제하여 표제 화합물 E40 (27 ㎎, 0.064 mmol, 24.54% 수율)을 백색 고체로서 얻었다.
LCMS: 425[M+H]+. tR =1.305. (LCMS 조건 2)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 11.58 (br. s., 1H), 8.59 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.62 (s, 1H), 6.80 - 7.16 (m, 3H), 6.32 (br. s., 1H), 4.49 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 4.15 - 4.40 (m, 1H), 3.91 (s, 4H), 3.16 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 2.56 - 2.79 (m, 2H), 2.15 (s, 3H), 1.73 - 2.06 (m, 2H), 1.38 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 1.26 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
실시예 41
(S)-(3,4-디메틸피페라진-1-일 )( 4-((4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]- 피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시페닐)메타논 (E41)
Figure pct00128
이소프로판올 (5 ㎖) 중의 (S)-(3,4-디메틸피페라진-1-일)(4-((4-에톡시-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시페닐)메타논 (D118에 의하여 생성될 수 있음) (220 ㎎, 0.371 mmol) 및 수산화나트륨 (0.069 ㎖, 0.138 mmol, 물 중의 2M)의 용액을 60℃에서 3 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, 2N HCl을 pH=7까지 첨가하였다. 그 후, 혼합물을 EA로 추출하였다. 유기층을 건조시키고, 농축시켰다. 미정제물을 정제용-HPLC에 의하여 정제하여 표제 화합물 E41 (50 ㎎, 0.118 mmol, 85% 수율)을 백색 고체로서 얻었다.
LCMS: 425[M+H]+. tR =1.575. (LCMS 조건 2)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 11.59 (br. s., 1H), 8.60 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.64 (s, 1H), 6.98 - 7.09 (m, 3H), 6.33 (br. s., 1H), 4.51 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 2.60 - 2.85 (m, 1H), 2.51 - 2.55 (m, 4H), 2.19 (s, 3H), 1.40 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 0.86 - 1.10 (m, 3H).
실시예 42
( 4-((4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]-피리미딘-2-일 )아미노)-3-메톡시페닐)(4-(메톡시메틸)피페리딘-1-일)메타논 (E42)
Figure pct00129
이소프로판올 (5 ㎖) 중의 (4-((4-에톡시-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시페닐)(4-(메톡시메틸)피페리딘-1-일)메타논 (D127에 의하여 생성될 수 있음) (220 ㎎, 0.371 mmol) 및 수산화나트륨 (4 ㎖, 8.00 mmol, 물 중의 2M)의 용액을 밤새 60℃에서 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, 2N HCl을 pH=7까지 첨가하였다. 그 후, 혼합물을 EA로 추출하였다. 유기층을 건조시키고, 농축시켰다. 미정제물을 정제용-HPLC에 의하여 정제하여 표제 화합물 E42 (45 ㎎, 0.102 mmol, 27.6% 수율)를 백색 고체로서 얻었다.
LCMS: 440[M+H]+. tR =1.383. (LCMS 조건 2)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 11.58 (br. s., 1H), 8.59 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.63 (s, 1H), 6.95 - 7.09 (m, 3H), 6.33 (d, J = 3.0 Hz, 1H), 4.51 (q, J = 6.9 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.34 (s, 2H), 3.24 (s, 3H), 3.21 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 2.67 - 3.11 (m, 2H), 1.58 - 1.92 (m, 3H), 1.40 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 0.96 - 1.27 (m, 2H).
실시예 43
(S)-( 4-((4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]-피리미딘-2-일 )아미노)-3-메톡시페닐)(2-(메톡시메틸)피롤리딘-1-일)메타논 (E43)
Figure pct00130
이소프로판올 (5.0 ㎖) 및 물 (5.0 ㎖) 중의 (S)-(4-((4-에톡시-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시페닐)(2-(메톡시메틸)피롤리딘-1-일)메타논 (D126에 의하여 생성될 수 있음) (100 ㎎, 0.173 mmol) 및 수산화나트륨 (104 ㎎, 2.59 mmol)의 용액을 60℃에서 4 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 EA로 희석하고, 물로 세정하였다. 유기층을 건조시키고, 농축시켰다. 미정제물을 역상 크로마토그래피 (바이오테이지 SNAP 카트리지, KP-C18-HS 120g, 5%~95% MeCN/H2O, 0.05% 암모니아)에 의하여 정제하여 표제 화합물 E43 (41 ㎎, 0.096 mmol, 55.9% 수율)을 황색 고체로서 얻었다.
LCMS: 426[M+H]+. tR =3.213.(LCMS 조건 1)
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d): δ 8.52 - 8.81 (m, 2 H), 7.64 (s, 1 H), 7.12 - 7.23 (m, 2 H), 6.70 - 6.95 (m, 1 H), 6.29 - 6.55 (m, 1 H), 4.58 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.34- 4.53 (m, 1 H), 3.95 (s, 3 H), 3.52 - 3.77 (m, 4 H), 3.40 (s, 3 H), 2.03 - 2.14 (m, 1 H), 1.90 - 2.03 (m, 2 H), 1.75 - 1.82 (m, 1 H), 1.49 (t, J = 7.1 Hz, 3 H).
실시예 44
( 4-((4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]피리미딘-2-일 )아미노)-3-메톡시페닐)(2-옥사-6-아자스피로-[3.5]노난-6-일)메타논 (E44)
Figure pct00131
THF (10 ㎖) 중의 (4-((4-에톡시-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시페닐)(2-옥사-6-아자스피로[3.5]노난-6-일)메타논 (D129에 의하여 생성될 수 있음) (150 ㎎, 0.254 mmol) 및 수산화나트륨 (0.254 ㎖, 0.507 mmol, 물 중의 2M)의 용액을 60℃에서 18 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc (20 ㎖)에 붓고, 물 (3×30 ㎖)로 추출하였다. 유기층을 진공 하에서 증발시키고, 정제용-HPLC에 의하여 정제하여 표제 화합물 E44 (30 ㎎, 0.069 mmol, 27.0% 수율)를 백색 고체로서 얻었다.
LCMS: 437.8[M+H]+. tR =1.396.(LCMS 조건 2)
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d): δ 9.20 - 9.45 (m, 1H), 8.65 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.63 (s, 1H), 6.93 - 7.06 (m, 2H), 6.81 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.44 (br. s., 1H), 4.58 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 4.24 - 4.50 (m, 4H), 3.94 (s, 3H), 3.74 - 3.90 (m, 2H), 3.52 (br. s., 2H), 1.89 - 1.95 (m, 2H), 1.56 (br. s., 2H), 1.49 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
실시예 45
(±)-( 4-((4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]-피리미딘-2-일 )아미노)-3-메톡시페닐)(1-(히드록시메틸)-3-아자비시클로-[3.1.0]-헥산-3-일)메타논 (E45)
Figure pct00132
이소프로판올 (5 ㎖) 및 물 (5.00 ㎖) 중의 (4-((4-에톡시-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시페닐)(1-(히드록시메틸)-3-아자비시클로[3.1.0]헥산-3-일)메타논 (D128에 의하여 생성될 수 있음) (110 ㎎, 0.190 mmol) 및 수산화나트륨 (114 ㎎, 2.86 mmol)의 용액을 60℃에서 4 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 EA로 희석하고, 물로 세정하였다. 유기층을 건조시키고, 농축시켰다. 미정제물을 역상 크로마토그래피 (바이오테이지 SNAP 카트리지, KP-C18-HS 120g, 5%~95% MeCN/H2O, 0.05% 암모니아)에 의하여 정제하여 표제 화합물 E45 (71 ㎎, 0.168 mmol, 88% 수율)를 황색 고체로서 얻었다.
LCMS: 424[M+H]+. tR =2.737.(LCMS 조건 1)
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d): δ 8.57 (d, J = 8.8 Hz, 2 H), 7.56 (s, 1 H), 7.02 (s, 2 H), 6.75 - 6.84 (m, 1 H), 6.33 - 6.42 (m, 1 H), 4.51 (q, J = 7.1 Hz, 2 H), 4.11 - 4.30 (m, 1 H), 3.87 (s, 3 H), 3.37 - 3.79 (m, 5 H), 1.38 - 1.47 (m, 4 H), 0.71 (d, J = 5.4 Hz, 1 H), 0.42 (t, J = 4.6 Hz, 1 H).
실시예 46 및 47
거울상이성질체 1: (4-((4- 에톡시 -7H- 피롤로 -[2,3-d]-피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시페닐)(1-(히드록시메틸)-3-아자비시클로-[3.1.0]-헥산-3-일)메타논 (E46)
거울상이성질체 2: (4-((4- 에톡시 -7H- 피롤로 -[2,3-d]-피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시페닐)(1-(히드록시메틸)-3-아자비시클로-[3.1.0]-헥산-3-일)메타논 (E47)
Figure pct00133
표제 화합물 E46 (18.0 ㎎, 30.0% 수율) 및 E47 (20.0 ㎎, 33.3% 수율)은 E45의 키랄-분리에 의하여 회색 고체로서 얻었다. (키랄-HPLC: 공용매: MeOH; 컬럼 AS-H (4.6*250 ㎜, 5 ㎛); 이동상: n-헥산 (0.1% DEA): EtOH (0.1% DEA)=80:20; 유속: 1.0 ㎖/min; 온도: 40; 파장: 214 ㎚ & 254 ㎚)
E46: LCMS: 424[M+H]+. tR =1.18 mins. (LCMS 조건 2)
키랄 HPLC: tR =12.863 mins. (조건: 컬럼 AS-H (4.6*250 ㎜, 5 ㎛); 이동상: n-헥산 (0.1% DEA):EtOH (0.1% DEA)=80:20) 단일의 미지의 절대 입체화학
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 11.56 (1H, s), 8.58 (d, J=10.5 Hz, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.04 (m,3H), 6.32 (m, 1H), 4.63 (m, 1H), 4.49 (dd, J=10.0 Hz, 2H), 4.01 (m, 4H), 3.96 (m, 1H), 3.50 (m, 2H), 3.41 (m, 2H), 1.39 (t, J=10.0 Hz, 4H), 0.71 (m, 1H), 0.27 (m, 1H).
E47: LCMS: 424[M+H]+. tR =1.18 mins. (LCMS 조건 2)
키랄 HPLC: tR = 16.540 mins. (조건: 컬럼 AS-H (4.6*250 ㎜, 5 ㎛); 이동상: n-헥산 (0.1% DEA):EtOH (0.1% DEA)=80:20) 단일의 미지의 절대 입체화학
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 11.56 (s, 1H), 8.58 (d, J=10.5 Hz, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.07 (m, 3H), 6.32 (m, 1H), 4.64 (m, 1H), 4.49 (dd, J=10.0 Hz, 2H), 3.91 (m, 4H), 3.76 (m, 1H), 3.50 (m, 2H), 3.43 (m, 2H), 1.39 (t, J=10.0 Hz, 4H), 0.71 (m, 1H), 0.27 (m, 1H).
실시예 48
(±)-( 4-((4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]-피리미딘-2-일 )아미노)-3-메톡시페닐)(5-(히드록시메틸)-6-아자스피로-[2.5]-옥탄-6-일)메타논 (E48)
Figure pct00134
DMF (2.0 ㎖) 중의 4-((4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]-피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (D129) (D130에 의하여 생성될 수 있음) (58.1 ㎎, 0.177 mmol) 및 6-아자스피로-[2.5]-옥탄-5-일메탄올 (D48에 의하여 생성될 수 있음) (25 ㎎, 0.177 mmol)의 용액에 DIPEA (68.6 ㎎, 0.531 mmol) 및 HATU (135 ㎎, 0.354 mmol)를 첨가하였다. 반응을 실온에서 2 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물로 희석하고, DCM (20 ㎖×3)으로 추출하였다. 합한 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 농축시켰다. 미정제물을 실리카 겔 상의 컬럼 크로마토그래피 (DCM:MeOH=20:1)에 의하여 정제하여 표제 화합물 E48 (58 ㎎, 0.128 mmol, 72.6% 수율)을 백색 고체로서 얻었다.
LCMS: 452[M+H]+. tR =1.44. (LCMS 조건 2)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 11.55 (s, 1H), 8.56 (d, J=10.5 Hz, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.04 (m, 3H),6.31 (s, 1H), 4.78 (s, 1H), 4.50 (dd, J=9.0 Hz, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.77 (s, 1H), 3.59 (s, 1H), 3.01 (s, 1H), 1.85 (m, 2H), 1.38 (t, J=9.0 Hz, 3H), 1.04 (s, 1H), 0.86 (s, 1H), 0.40 (m, 2H), 0.22 (m, 2H).
실시예 49 및 50
거울상이성질체 1: (4-((4- 에톡시 -7H- 피롤로 -[2,3-d]-피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시페닐)(5-(히드록시메틸)-6-아자스피로[2.5]옥탄-6-일)메타논 (E49)
거울상이성질체 2: (4-((4- 에톡시 -7H- 피롤로 -[2,3-d]-피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시페닐)(5-(히드록시메틸)-6-아자스피로[2.5]옥탄-6-일)메타논 (E50)
Figure pct00135
표제 화합물 E49 (7.0 ㎎, 14.0% 수율) 및 E50 (7.0 ㎎, 14.0% 수율)은 E48의 키랄-분리에 의하여 백색 고체로서 얻었다. (키랄-HPLC: 공용매: MeOH; 컬럼 IC (4.6*250 ㎜, 5 ㎛); 컬럼 온도 38.3; CO2 유속 1.95; 공용매 유속 1.05; 공용매 % 35; 역압 118; 총 유속 3; PDA 출발 파장 214; PDA 중지 파장 359).
E49: LCMS: 452[M+H]+. tR =1.31 mins. (LCMS 조건 2)
키랄 HPLC: tR =8.37 mins. (조건: IC (4.6*250 ㎜, 5 ㎛); 공용매: MeOH; 공용매: 35%) 단일의 미지의 절대 입체화학
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d): δ 7.12 (m, 2H), 6.90 (s, 1H), 6.48 (s, 1H), 4.64 (dd, J=10.0 Hz, 2H), 4.13 (s, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.75 (s, 1H), 3.20 (s, 1H), 2.12 (m, 2H), 1.51 (t, 3H, J=10.0 Hz), 1.07 (m, 1H), 0.92 (m, 1H), 0.38 (m, 4H).
E50: LCMS: 452[M+H]+. tR =1.31 mins. (LCMS 조건 2)
키랄 HPLC: tR =6.66 mins. (조건: IC (4.6*250 ㎜, 5 ㎛); 공용매: MeOH; 공용매: 35%) 단일의 미지의 절대 입체화학
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d): δ 7.91 (s, 1H), 7.12 (m, 2H), 6.90 (s, 1H), 6.48 (s, 1H), 4.62 (dd, J=10.0 Hz, 2H), 4.16 (s, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.76 (s, 1H), 3.25 (s, 1H), 2.11 (m, 1H), 2.03 (m, 1H), 1.51 (t, J=10.0 Hz, 3H), 1.07 (m, 1H), 0.91 (m, 1H), 0.40 (m, 4H).
실시예 51
( 4-((4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]-피리미딘-2-일 )아미노)-3-메톡시페닐)(2,7-디아자스피로-[3.5]노난-7-일)메타논 (E51)
Figure pct00136
DCM (10 ㎖) 중의 tert-부틸-7-(4-((4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]-피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시벤조일)-2,7-디아자스피로-[3.5]-노난-2-카르복실레이트 (D131에 의하여 생성할 수 있음) (142 ㎎, 0.265 mmol)의 용액을 TFA (0.102 ㎖, 1.323 mmol)와 함께 서서히 실온에서 첨가하였다. 반응을 밤새 실온에서 교반하였다. 그 후, 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 메탄올 중에 재용해시키고, 암모니아 용액으로 pH=9로 조절하고, 역상 크로마토그래피 (바이오테이지 SNAP 카트리지, KP-C18-HS 120g, 5%~95% MeCN/H2O, 0.05% 암모니아)에 의하여 정제하여 표제 화합물 E51 (63 ㎎, 0.137 mmol, 51.8% 수율)을 백색 고체로서 얻었다.
LCMS: 437.8[M+H]+. tR =2.00.(LCMS 조건 1)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 11.28 - 11.65 (m, 1H), 8.52 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.55 (s, 1H), 6.88 - 7.00 (m, 3H), 6.26 (d, J = 3.4 Hz, 1H), 4.44 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.25 - 3.53 (m, 8H), 1.64 (br. s., 4H), 1.33 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
실시예 52 및 53
거울상이성질체 1: (4-((4- 에톡시 -7H- 피롤로 -[2,3-d]-피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시페닐)(1-(메톡시메틸)-6-아자스피로-[2.5]-옥탄-6-일)메타논 (E52)
거울상이성질체 2: (4-((4- 에톡시 -7H- 피롤로 -[2,3-d]-피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시페닐)(1-(메톡시메틸)-6-아자스피로-[2.5]-옥탄-6-일)메타논 (E53)
Figure pct00137
THF (5 ㎖) 중의 (4-((4-에톡시-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시페닐)(1-(메톡시메틸)-6-아자스피로[2.5]옥탄-6-일)메타논 (D119에 의하여 생성될 수 있음) (170 ㎎, 0.274 mmol)의 용액에 수산화나트륨 (0.274 ㎖, 0.549 mmol, 물 중의 2M)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃에서 1 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc (20 ㎖)에 붓고, 물 (3×30 ㎖)로 추출하였다. 유기층을 진공 하에서 증발시켜 미정제물을 얻고, 이를 키랄-HPLC에 의하여 정제하여 표제 화합물 E52 (30 ㎎, 0.064 mmol, 23.49% 수율) 및 E53 (30 ㎎, 0.064 mmol, 23.49% 수율)을 백색 고체로서 얻었다. (키랄-HPLC 공용매: MeOH; 컬럼 IC (4.6*250 ㎜, 5 ㎛); 컬럼 온도 39.1; CO2 유속 2.25; 공용매 유속 0.75; 공용매 % 25; 역압 119; 총 유속 3; PDA 출발 파장 214; PDA 중지 파장 359).
E52: LCMS: 466[M+H]+. (LCMS 조건 2)
tR =1.49 mins. 키랄 HPLC: tR =5.66 mins. (조건: IC (4.6*250 ㎜, 5 ㎛); 공용매: MeOH; 공용매: 25%). 단일의 미지의 절대 입체화학
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d): δ 8.65 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.38 (br. s., 1H), 7.61 (s, 1H), 6.96 - 7.09 (m, 2H), 6.87 (dd, J = 3.3, 2.0 Hz, 1H), 6.26 - 6.62 (m, 1H), 4.58 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.42 - 3.83 (m, 3H), 3.35 (s, 3H), 3.25 (t, J = 9.5 Hz, 1H), 1.40 - 1.57 (m, 9H), 1.03 (br. s., 1H), 0.63 (dd, J = 8.5, 4.8 Hz, 1H), 0.29 (t, J = 4.8 Hz, 1H).
E53: LCMS: 466[M+H]+. tR =1.49 mins. (LCMS 조건 2)
키랄 HPLC: tR =7.89 mins. (조건: IC (4.6*250 ㎜, 5 ㎛); 공용매: MeOH; 공용매: 35%). 단일의 미지의 절대 입체화학
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d): δ 8.65 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.43 (br. s., 1H), 7.61 (s, 1H), 6.93 - 7.14 (m, 2H), 6.86 (dd, J = 3.3, 2.0 Hz, 1H), 6.32 - 6.56 (m, 1H), 4.58 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.53 (dd, 3H), 3.35 (s, 3H), 3.25 (t, J = 9.4 Hz, 1H), 1.21 - 1.57 (m, 9H), 0.97 - 1.11 (m, 1H), 0.63 (dd, J = 8.4, 4.6 Hz, 1H), 0.29 (t, J = 4.9 Hz, 1H).
실시예 54
(R)-( 4-((4-(시클로프로필메톡시)-5-메틸-7H-피롤로- [2,3-d]-피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시페닐)(2,4-디메틸피페라진-1-일)메타논 (E54)
Figure pct00138
이소프로판올 (2 ㎖) 중의 (R)-(4-((4-(시클로프로필메톡시)-5-메틸-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시페닐)(2,4-디메틸피페라진-1-일)메타논 (D120에 의하여 생성될 수 있음) (20 ㎎, 0.032 mmol), 수산화나트륨 (2 ㎖, 4.00 mmol, 물 중의 2M)의 용액을 밤새 60℃에서 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, 2N HCl을 pH=7까지 첨가하였다. 그 후, 혼합물을 EA로 추출하였다. 유기층을 건조시키고, 농축시켰다. 미정제물을 정제용-HPLC에 의하여 정제하여 표제 화합물 E54 (5 ㎎, 10.76 μmol, 33.3% 수율)를 백색 고체로서 얻었다.
LCMS: 465[M+H]+. tR =1.582. (LCMS 조건 2)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 11.16 (br. s., 1H), 8.55 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.56 (s, 1H), 6.92 - 7.00 (m, 2H), 6.74 (s, 1H), 4.29 (d, J = 7.0 Hz, 2H), 3.90 (s, 3H), 3.69 (m, 1H), 3.10 - 3.23 (m, 1H), 2.56 - 2.77 (m, 3H), 2.26 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 2.02 (dd, J = 11.3, 3.5 Hz, 1H), 1.75 - 1.91 (m, 1H), 1.23 - 1.30 (m, 4H), 0.49 - 0.62 (m, 2H), 0.32 - 0.43 (m, 2H).
실시예 55
( 4-((4-(시클로프로필메톡시)-5-메틸-7H-피롤로- [2, 3-d ]-피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시페닐)(4-메틸피페라진-1-일)메타논 (E55)
Figure pct00139
이소프로판올 (2 ㎖) 중의 (4-((4-(시클로프로필메톡시)-5-메틸-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시페닐)(4-메틸피페라진-1-일)메타논 (D121에 의하여 생성될 수 있음) (30 ㎎, 0.050 mmol) 및 수산화나트륨 (2 ㎖, 4.00 mmol, 물 중의 2M)의 용액을 밤새 60℃에서 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, 2N HCl을 pH=7까지 첨가하였다. 그 후, 혼합물을 EA로 추출하였다. 유기층을 건조시키고, 농축시켰다. 미정제물을 정제용-HPLC에 의하여 정제하여 표제 화합물 E55 (3 ㎎, 6.66 μmol, 13.42% 수율)를 백색 고체로서 얻었다.
LCMS: 451[M+H]+. tR =1.511. (LCMS 조건 2)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 11.17 (br. s., 1H), 8.58 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.57 (s, 1H), 6.97 - 7.05 (m, 1H), 6.76 (s, 1H), 4.30 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.53 (br. s., 4H), 2.33 (br. s., 4H), 2.28 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 0.79 - 0.89 (m, 1H), 0.53 - 0.63 (m, 2H), 0.40 (q, J = 4.8 Hz, 2H).
실시예 56
( 4-((4-에톡시-1H-피라졸로-[3,4-d]-피리미딘-6-일 )아미노)-3-메톡시페닐)(모르폴리노)메타논 (E56)
Figure pct00140
6-클로로-4-에톡시-1H-피라졸로-[3,4-d]-피리미딘 (D91에 의하여 생성될 수 있음) (180 ㎎, 0.906 mmol), (4-아미노-3-메톡시페닐)(모르폴리노)메타논 (278 ㎎, 1.178 mmol), Pd2(dba)3 (41.5 ㎎, 0.045 mmol), 탄산칼륨 (376 ㎎, 2.72 mmol) 및 디시클로헥실(2',4',6'-트리이소프로필-[1,1'-비페닐]-2-일)포스핀 (43.2 ㎎, 0.091 mmol)의 용액을 마이크로파에 의하여 120℃에서 1 시간 동안 조사하였다. 여과 후, 여과액을 농축시키고, MDAP (염기성 이동상)에 의하여 정제하여 표제 화합물 E56을 백색 고체로서 얻었다. 수율: 26.3%.
LCMS: 399[M+H]+. tR =2.687. (LCMS 조건 1)
1H NMR (400MHz, 메탄올-d4): δ 8.62 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.80 (s, 1H), 6.89 - 7.04 (m, 2H), 4.51 (q, J = 6.9 Hz, 3H), 3.89 (s, 3H), 3.61 (br. s., 8H), 1.39 (t, 3H).
실시예 57
( 4-((4-에톡시-3-메틸-1H-피라졸로- [3, 4-d ]-피리미딘- 6-일 )아미노)-3-메톡시페닐)(모르폴리노)메타논 (E57)
Figure pct00141
2-부탄올 (12 ㎖) 중의 6-클로로-4-에톡시-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘 (D92에 의하여 생성될 수 있음) (100 ㎎, 0.470 mmol), (4-아미노-3-메톡시페닐)(모르폴리노)메타논 (111 ㎎, 0.470 mmol), Pd2(dba)3 (33 ㎎, 0.036 mmol), 디시클로헥실(2',4',6'-트리이소프로필-[1,1'-비페닐]-2-일)포스핀 (35 ㎎, 0.073 mmol) 및 탄산칼륨 (195 ㎎, 1.411 mmol)의 용액을 마이크로파에 의하여 120℃에서 1 시간 동안 조사하였다. 여과 후, 여과액을 농축시키고, MDAP (염기성 이동상)에 의하여 정제하여 표제 화합물 E57 (25 ㎎, 0.061 mmol, 12.89% 수율)을 백색 고체로서 얻었다.
LCMS: 413[M+H]+. tR =2.717. (LCMS 조건 1)
1H NMR (400MHz, 메탄올-d4): δ 8.57 (s, 1H), 6.75 - 7.08 (m, 2H), 4.32 - 4.56 (m, 2H), 3.87 (s, 3H), 3.60 (br. s., 8H), 2.37 (s, 3H), 1.37 (m, 3H).
실시예 58
( 4-((4-(시클로프로필메톡시)-1H-피라졸로-[3,4-d]피리미딘-6-일 )아미노)-3-메톡시페닐)(모르폴리노)메타논 (E58)
Figure pct00142
2-부탄올 (10 ㎖) 중의 6-클로로-4-(시클로프로필메톡시)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘 (D93에 의하여 생성될 수 있음) (100 ㎎, 0.445 mmol), (4-아미노-3-메톡시페닐)(모르폴리노)메타논 (105 ㎎, 0.445 mmol), Pd2(dba)3 (20.38 ㎎, 0.022 mmol), 탄산칼륨 (185 ㎎, 1.335 mmol) 및 디시클로헥실(2',4',6'-트리이소프로필-[1,1'-비페닐]-2-일)포스핀 (21.22 ㎎, 0.045 mmol)의 용액을 마이크로파에 의하여 120℃에서 1 시간 동안 조사하였다. 여과 후, 여과액을 농축시키고, MDAP (염기성 이동상)에 의하여 정제하여 표제 화합물 E58 (20 ㎎, 0.047 mmol, 10.59% 수율)을 백색 고체로서 얻었다.
LCMS: 425[M+H]+. tR =2.911. (LCMS 조건 1)
1H NMR (400MHz, 메탄올-d4): δ 8.56 - 8.65 (m, 1H), 7.83 (s, 1H), 6.90 - 7.04 (m, 2H), 4.22 - 4.33 (m, 2H), 4.00 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.90 (s, 3H), 3.61 (br. s., 8H), 1.24 - 1.36 (m, 1H), 1.14 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.50 - 0.62 (m, 1H), 0.23 - 0.40 (m, 2H).
실시예 59
4- 에톡시 -2-((2- 메톡시 -4-(모르폴린-4-카르보닐)페닐)아미노)-7H- 피롤로[2,3 -d]피리미딘-5-카르보니트릴 (E59)
Figure pct00143
2-부탄올 (2 ㎖) 중의 2-클로로-4-에톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르보니트릴 (D94에 의하여 생성될 수 있음) (100 ㎎, 0.449 mmol), (9,9-디메틸-9H-크산텐-4,5-디일)비스(디페닐포스핀) (26.0 ㎎, 0.045 mmol), 탄산칼륨 (124 ㎎, 0.898 mmol) 및 Pd2(dba)3 (20.57 ㎎, 0.022 mmol)에 (4-아미노-3-메톡시페닐)(모르폴리노)메타논 (106 ㎎, 0.449 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 마이크로파에 의하여 120℃에서 45 분 동안 조사하였다. 반응 혼합물을 EtOAc (20 ㎖)에 붓고, 물 (3×30 ㎖)로 세정하였다. 유기층을 진공 하에서 증발시키고, 정제용-HPLC에 의하여 정제하여 표제 화합물 E59 (7 ㎎, 0.013 mmol, 2.95% 수율)를 황색 고체로서 얻었다.
LCMS: 423[M+H]+. tR =1.722. (LCMS 조건 3)
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d): δ 9.14 (br. s., 1H), 8.58 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.41 (s, 1H), 6.97 - 7.10 (m, 2H), 4.61 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.72 (br. s., 8H), 1.52 (t, 3H).
실시예 60
4-에톡시-2-((2-이소프로폭시-4- (모르폴린 -4-카르보닐 )-페닐)아미노)-7H-피롤로-[2,3-d]-피리미딘-5-카르보니트릴 (E60)
Figure pct00144
2-부탄올 (5 ㎖) 중의 2-클로로-4-에톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르보니트릴 (D94에 의하여 생성될 수 있음) (50 ㎎, 0.225 mmol), (4-아미노-3-이소프로폭시페닐)(모르폴리노)메타논 (D68에 의하여 생성될 수 있음) (65.3 ㎎, 0.247 mmol), 탄산칼륨 (93 ㎎, 0.674 mmol), Pd2(dba)3 (10.28 ㎎, 0.011 mmol) 및 디시클로헥실(2',4',6'-트리이소프로필-[1,1'-비페닐]-2-일)포스핀 (10.71 ㎎, 0.022 mmol)의 용액을 마이크로파에 의하여 120℃로 1 시간 동안 조사하였다. 여과 후, 여과액을 농축시키고, MDAP (염기성 이동상)에 의하여 정제하여 표제 화합물 E60 (9 ㎎, 0.020 mmol, 8.90% 수율)을 백색 고체로서 얻었다.
LCMS: 451[M+H]+. tR =3.089. (LCMS 조건 1)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 8.41 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.02 (s, 1H), 6.95 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 4.60 - 4.74 (m, 1H), 4.50 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.50 - 3.56 (m, 8H), 1.35 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 1.28 (d, J = 6.1 Hz, 6H).
실시예 61
4-에톡시-2-((2-이소프로폭시-4-(4-메틸피페라진-1- 카르보닐)-페닐)-아미노)-7H-피롤로-[2,3-d]피리미딘-5-카르보니트릴 (E61)
Figure pct00145
2-부탄올 (5 ㎖) 중의 2-클로로-4-에톡시-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-카르보니트릴 (D94에 의하여 생성될 수 있음) (100 ㎎, 0.449 mmol), (4-아미노-3-이소프로폭시페닐)(4-메틸피페라진-1-일)메타논 (D66에 의하여 생성될 수 있음) (137 ㎎, 0.494 mmol), 탄산칼륨 (186 ㎎, 1.348 mmol), Pd2(dba)3 (20.57 ㎎, 0.022 mmol) 및 디시클로헥실(2',4',6'-트리이소프로필-[1,1'-비페닐]-2-일)포스핀 (21.41 ㎎, 0.045 mmol)의 용액을 마이크로파에 의하여 120℃에서 1 시간 동안 조사하였다. 여과 후, 여과액을 농축시키고, MDAP (염기성 이동상)에 의하여 정제하여 표제 화합물 E61 (16 ㎎, 0.035 mmol, 7.68% 수율)을 백색 고체로서 얻었다.
LCMS: 464[M+H]+. tR =2.506. (LCMS 조건 1)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 8.49 (d, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.04 (s, 1H), 6.98 (d, 1H), 4.73 (m, 1H), 4.55 (q, 2H), 3.50 (m, 4H), 2.32 (m, 4 H), 2.19 (s, 3H), 1.41 (t, 3H), 1.34 (d, 6H).
실시예 62
( 4-((4-에톡시-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로-[2,3-d]-피리미딘- 2-일)아미노)-3-메톡시페닐)(모르폴리노)메타논 (E62)
Figure pct00146
1,4-디옥산 (10 ㎖) 중의 2-클로로-4-에톡시-5-(트리플루오로메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 (D95에 의하여 생성될 수 있음) (50 ㎎, 0.188 mmol), (4-아미노-3-메톡시페닐)(모르폴리노)메타논 (66.7 ㎎, 0.282 mmol), 디시클로헥실(2',4',6'-트리이소프로필-[1,1'-비페닐]-2-일)포스핀 (17.95 ㎎, 0.038 mmol), 탄산칼륨 (78 ㎎, 0.565 mmol) 및 Pd2(dba)3 (17.24 ㎎, 0.019 mmol)의 용액을 질소 하에서 120℃에서 1 시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 물 (30 ㎖)을 첨가하고, 혼합물을 EA (15 ㎖×3)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세정한 후, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 여과 및 농축 후, 미정제물을 실리카 겔 상의 컬럼 크로마토그래피 (DCM:MeOH=4:1)에 의하여 정제하고, MDAP (염기성 이동상)에 의하여 추가로 정제하여 표제 화합물 E62 (4.2 ㎎, 9.02 μmol, 4.79% 수율)를 백색 고체로서 얻었다.
LCMS: 466[M+H]+. tR =3.555. (LCMS 조건 1)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 12.24 (br. s., 1 H), 8.49 (d, J = 8.3 Hz, 1 H), 7.85 (s, 1 H), 7.67 (s, 1 H), 7.08 (s, 1 H), 7.04 (d, J = 8.3 Hz, 1 H), 4.51 (q, J= 6.9 Hz, 2 H), 3.92 (s, 3 H), 3.61 (br. s., 4 H), 3.47 - 3.57 (m, 4 H), 1.37 (t, 3 H).
실시예 63
4-에톡시-2-((4- ( 4-플루오로피페리딘-1- 카르보닐)- 2-메톡시페닐 )-아미노)-7H-피롤로-[2,3-d]피리미딘-5-카르보니트릴 (E63)
Figure pct00147
2-부탄올 (5 ㎖) 중의 2-클로로-4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]-피리미딘-5-카르보니트릴 (D94에 의하여 생성될 수 있음) (180 ㎎, 0.809 mmol), (4-아미노-3-메톡시페닐)(4-플루오로피페리딘-1-일)메타논 (D74에 의하여 생성될 수 있음) (245 ㎎, 0.970 mmol), 탄산칼륨 (335 ㎎, 2.426 mmol), Pd2(dba)3 (37.0 ㎎, 0.040 mmol) 및 디시클로헥실(2',4',6'-트리이소프로필-[1,1'-비페닐]-2-일)포스핀 (38.5 ㎎, 0.081 mmol)의 용액을 마이크로파에 의하여 120℃에서 4 시간 동안 조사하였다. 여과 후, 여과액을 농축시키고, 미정제물을 역상 컬럼 크로마토그래피 (바이오테이지 SNAP 카트리지, KP-C18-HS 120g, 5%~95% MeCN/H2O, 0.05% 암모니아)에 의하여 정제하여 표제 화합물 E63 (42 ㎎, 0.096 mmol, 11.85% 수율)을 백색 고체로서 얻었다.
LCMS: 466[M+H]+. tR =3.315.(LCMS 조건 1)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 12.29 - 12.63 (m, 1 H), 8.34 (d, J = 8.3 Hz, 1 H), 7.94 (s, 1 H), 7.85 (s, 1 H), 7.01 (d, J = 1.5 Hz, 1 H), 6.96 (dd, J = 1.5, 8.3 Hz, 1 H), 4.73 - 4.97 (m, 1 H), 4.48 (q, J = 7.1 Hz, 2 H), 3.85 (s, 3 H), 3.30 - 3.63 (m, 4 H), 1.57 - 1.95 (m, 4 H), 1.34 (t, J = 7.0 Hz, 3 H).
실시예 64 및 65
거울상이성질체 1: (4-((4- 에톡시 -7H- 피롤로 -[2,3-d]피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시페닐)-(1-(메톡시메틸)-3-아자비시클로[3.1.0]헥산-3-일)메타논 (E64)
거울상이성질체 2: (4-((4- 에톡시 -7H- 피롤로 -[2,3-d]피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시페닐)-(1-(메톡시메틸)-3-아자비시클로[3.1.0]헥산-3-일)메타논 (E65)
Figure pct00148
2-부탄올 (6 ㎖) 중의 2-클로로-4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]피리미딘 (D1에 의하여 생성될 수 있음) (103 ㎎, 0.521 mmol), (4-아미노-3-메톡시페닐)(1-(메톡시메틸)-3-아자비시클로-[3.1.0]헥산-3-일)메타논 (D134에 의하여 생성될 수 있음) (120 ㎎, 0.434 mmol), 탄산칼륨 (180 ㎎, 1.303 mmol), Pd2(dba)3 (19.88 ㎎, 0.022 mmol) 및 크산포스 (21.53 ㎎, 0.045 mmol)의 용액을 마이크로파에 의하여 120℃에서 45 분 동안 조사하였다. 여과 후, 여과액을 농축시키고, 미정제물을 MDAP (염기성 이동상)로 정제하여 라세미 생성물을 얻고, 이를 키랄-HPLC에 의하여 추가로 정제하여 표제 화합물 E64 (11 ㎎) 및 E65 (7 ㎎)를 황색 고체로서 얻었다. (키랄-HPLC: 공용매: MeOH; 컬럼 AD-H (4.6*250 ㎜, 5 ㎛); 이동상: n-헥산 (0.1% DEA): EtOH (0.1% DEA)=80:20; 유속: 1.0 ㎖/min; 온도: 40; 파장: 214 ㎚ & 254 ㎚)
E64: LCMS: 438[M+H]+. tR =1.32 mins. (LCMS 조건 3)
키랄 HPLC: tR =4.44 mins. (조건: 컬럼 AD-H (4.6*250 ㎜, 5 ㎛); 이동상: n-헥산 (0.1% DEA): EtOH (0.1% DEA)=80:20). 단일의 미지의 절대 입체화학
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d): δ 8.64 (d, J = 8.3 Hz, 1 H), 8.42 (br. s., 1 H), 7.64 (s, 1 H), 7.08 (s, 2 H), 6.87 (dd, J = 2.1, 3.4 Hz, 1 H), 6.40 - 6.54 (m, 1 H), 4.58 (q, J = 7.0 Hz, 2 H), 4.11 - 4.35 (m, 1 H), 3.95 (s, 3 H), 3.61 - 3.84 (m, 2 H), 3.22 - 3.60 (m, 4 H), 1.53 - 1.37 (m, 4 H), 0.68 - 0.83 (m, 1 H), 0.50 (t, J = 4.4 Hz, 1 H).
E65: LCMS: 438[M+H]+. tR =1.32 mins. (LCMS 조건 3)
키랄 HPLC: tR =6.15 mins. (조건: 컬럼 AD-H (4.6*250 ㎜, 5 ㎛); 이동상: n-헥산 (0.1% DEA): EtOH (0.1% DEA)=80:20). 단일의 미지의 절대 입체화학
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d): δ 8.64 (d, J = 8.5 Hz, 1 H), 8.43 (br. s., 1 H), 7.63 (s, 1 H), 7.04 - 7.13 (m, 2 H), 6.87 (dd, J = 2.3, 3.3 Hz, 1 H), 6.42 - 6.51 (m, 1 H), 4.58 (q, J = 7.0 Hz, 2 H), 4.15 - 4.36 (m, 1 H), 3.94 (s, 3 H), 3.28 - 3.82 (m, 8 H), 1.36 - 1.53 (m, 4 H), 0.67 - 0.85 (m, 1 H), 0.50 (t, J = 4.4 Hz, 1 H).
실시예 66
(1S,3S,5S)-2-(4-( ( 4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]피리미딘-2-일 )아미노)-3-메톡시벤조일)-2-아자비시클로-[3.1.0]-헥산-3-카르보니트릴 (E66)
Figure pct00149
DMF (5 ㎖) 중의 4-((4-에톡시-7H-피롤로-[2,3-d]-피리미딘-2-일)아미노)-3-메톡시벤조산 (D129에 의하여 생성될 수 있음) (186 ㎎, 0.567 mmol), HATU (237 ㎎, 0.623 mmol) 및 DIPEA (0.297 ㎖, 1.700 mmol)의 용액에 (1S,3S,5S)-2-아자비시클로-[3.1.0]-헥산-3-카르보니트릴 염산염 (D136에 의하여 생성될 수 있음) (82 ㎎, 0.567 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 5 시간 동안 교반하였다. 용액을 EA로 희석하고, 물로 세정하였다. 유기층을 건조시키고, 농축시켰다. 미정제물을 MDAP (염기성 이동상)로 정제하여 표제 화합물 E66 (82.7 ㎎, 0.190 mmol, 33.5% 수율)을 회백색 고체로서 얻었다.
LCMS: 419[M+H]+. tR =3.307 mins. (LCMS 조건 1)
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 11.63 (br. s., 1 H), 8.73 (d, J = 8.3 Hz, 1 H), 7.72 (s, 1 H), 7.30- 7.47 (m, 2 H), 7.02 - 7.10 (m, 1 H), 6.35 (dd, J = 1.8, 3.3 Hz, 1 H), 5.34 (br. s., 1 H), 4.47 - 4.59 (m, 2 H), 3.98 (s, 3 H), 3.62 (br. s., 1 H), 2.60 - 2.72 (m, 1 H), 2.27 (dd, J = 2.9, 13.7 Hz, 1 H), 1.87 (dd, J = 5.7, 7.9 Hz, 1 H), 1.41 (t, J = 7.1 Hz, 3 H), 1.13 - 1.05 (m, 1 H), 0.89 - 0.98 (m, 1 H).
F. 생물학적 데이타
상기에서 언급된 바와 같이, 본 발명의 화합물은 LRRK2 키나제 억제제이며, LRRK2에 의하여 매개되는 질환의 치료에 유용하다. 본 발명의 화합물의 생물학적 활성은 조직 및 생체내 모델뿐 아니라, LRRK2 키나제 억제제로서 후보 화합물의 활성을 측정하기 위한 임의의 적절한 검정을 사용하여 결정될 수 있다.
6His - Tev - LRRK2 (1326- 2527)의 생성
LRRK2 cDNA 인코딩 잔기 1326-2527은 던디 대학교(Dundee University)로부터 입수하였다 (M. Jaleel et al., 2007, Biochem J, 405: 407-417에 기재됨). 상기 유전자 단편을 BamHI 및 NotI 제한 부위를 사용하여 pFB-HTb (인비트로겐(Invitrogen))로 서브클로닝하였다. LRRK2 플라스미드를 인비트로겐에 의하여 기재된 BAC-대-BAC 프로토콜에 따라 바쿨로바이러스 게놈에 재조합시켰다. 스포도프테라 프루기페르다(Spodoptera frugiperda) (Sf9) 곤충 세포로의 트랜스펙션은 P1 및 P2 바쿨로바이러스 스톡을 생성하는 제조업자의 프로토콜에 따라 셀펙틴(Cellfectin) (인비트로겐)을 사용하여 수행하였다.
Sf9 세포를 진탕 플라스크내에서 27℃, 80 rpm에서 하이클론(HyClone) SFX (써모 사이언티픽(Thermo Scientific)) 성장 배지 중에서 바이오반응기를 접종시키기에 충분한 부피가 될 때까지 성장시켰다. 세포를 20 리터 작업 부피 웨이브(Wave) 바이오반응기 (지이 헬쓰케어(GE Healthcare)) 내에서 27℃, 50% 용존 산소 및 분당 22회 요동의 진탕 속도, 10° 요동 각도, 200 ㎖/min 공기에서 약 6xe6 세포/㎖의 세포 농도로 성장시켰다. 세포를 3의 감염 다중도 (MOI)에서 P2 바쿨로바이러스로 감염시켰다. 배양은 48 시간 발현 단계 동안 지속하였다. 감염된 세포를 성장 배지로부터 2,500 g에서 20 분 동안 소발(Sorvall) RC 3C 플러스(Plus) 원심분리기를 사용하여 2,500 g에서 원심분리에 의하여 제거하였다. 세포 펠릿을 즉시 냉동시키고, 차후에 정제를 위하여 공급하였다.
260 g 펠릿을 27℃의 수조 내에서 800 ㎖ 용해 완충액/완충액 A (50 mM 트리스(Tris)-HCl pH 8.5, 300 mM NaCl, 1 mM DTT, 10% 글리세롤, 1 ㎖/ℓ 칼바이오켐(calbiochem) 완전 프로테아제 억제제 칵테일 및 벤조나제 (50 ㎕/800 ㎖))와 함께 해동시킨 후, 100 ㎖당 20회 스트로크를 사용하여 얼음 위에서 다운스 균질화시켰다. 현탁액을 얼음 내에서 패킹하고, 50% 진폭에서 3 분 10 초 온/오프 동안 ¾" 프로브를 사용하여 음파 처리하였다. 그 후, 현탁액을 100,000 g에서 90 분 동안 4℃에서 원심분리하였다.
용해물 (700 ㎖)을 불용성 펠릿으로부터 기울여 따르고, 3 시간 동안 4℃에서 10 ㎖ His 바인드(bind) Ni NTA 수지와 빙글빙글 회전시키며 혼합하여 접촉시켰다. 수지를 3,000 g, 5 분 4℃에서 원심분리에 의하여 회수하고, XK16 컬럼 내에 패킹시켰다. 그 후, 컬럼을 10 컬럼 부피의 완충액 A, 10 컬럼 부피의 완충액 B (완충액 A + 1M NaCl) 및 10 컬럼 부피의 완충액 C (완충액 A + 20 mM 이미다졸)로 세정하였다. 그 후, 컬럼을 15 컬럼 부피의 완충액 D (완충액 A + 300 mM 이미다졸)로 용출시켜 2 ㎖ 분획을 수집하였다. 모든 세정 및 용출은 4 ㎖/min에서 수행하였다.
SDS-PAGE에 의하여 관심 단백질을 함유하는 것으로 확인된 분획을 풀링하고, 완충액 E (50 mM 트리스-HCl pH 8.5, 300 mM NaCl, 10% 글리세롤, 1 mM DTT)로 예비평형화시킨 320 ㎖ SEC 수퍼덱스(Superdex) 200pg 컬럼에 직접 로딩하였다. 컬럼을 로딩하고, 1.2 컬럼 부피의 완충액 E로 2 ㎖/min에서 용출시켜 2 ㎖ 분획을 수집하였다. SDS-PAGE에 의하여 관심 단백질을 함유하는 것으로 획인된 분획을 활성에 대하여 시험하였다.
비오틴-더 긴 LRRKtide의 생성
펩티드 (비오틴-RLGRDKYKTLRQIRQGNTKQR-OH)를 0.2 mM 스케일에서 FMOC 고체상 펩티드 합성을 사용하여 ACT 357 MPS 자동화 펩티드 합성기에서 어셈블리하였다. 생성된 미정제 펩티드를 95:2.5:2.5 혼합의 트리플루오로아세트산:트리이소프로필실란:물을 사용하여 수지로부터 분해시켰다. 미정제 분해된 펩티드를 0.1% 트리플루오로아세트산/0.1% 트리플루오로아세트산 중의 아세토니트릴/물의 5-35% 구배로 용출시키는 역상 HPLC에 의하여 정제하였다.
재조합 LRRK2 효소 펩티드 기질 TR-FRET 검정
LRRK2 억제에 대한 검정은 시간 분해-형광 공명 에너지 전달 (TR-FRET) 검정을 사용하여 펩티드 '더 긴 LRRKtide' (비오틴-RLGRDKYKTLRQIRQGNTKQR-OH)의 인산화의 검출에 기초한다. 이는 항체 표지된 유로퓸 킬레이트 공여체, W-1024 (Eu) 및 스트렙타비딘-슈어라이트(Streptavidin-Surelight) APC 수용체 (APC)를 사용한다. 인접시, 330 ㎚에서의 Eu의 여기는 665 ㎚에서의 발광과 함께 APC로의 에너지 전달을 초래한다.
검정 프로토콜
1. 10 mM 테스트 화합물을 100% DMSO 중에 용해하고, 4 중의 1로 연속 희석하였다. 그 후, 컬럼 6 및 18을 제외한 384 웰 저 부피 검정 평판에 100 nL를 첨가하였다. 100 nL의 DMSO를 컬럼 6 및 18에 대조 웰로서 첨가하였다. 검정 희석은 166.67 μM의 테스트 화합물의 상부 최종 검정 농도를 산출하였다.
2. 검정 완충액 (50 mM 헤페스(Hepes) (pH 7.2), 10 mM MgCl2, 150 mM NaCl, 5% 글리세롤, 0.0025% 트리톤 X-100 및 1 mM DTT) 중의 120 nM의 정제된 재조합 6HIS-Tev-LRRK2 (1326-2527)를 함유하는 3 ㎕의 '효소 용액'은 컬럼 18을 제외한 모든 웰에 멀티드롭 콤비 디스펜서를 사용하여 첨가하여 60 nM LRRK2 효소의 최종 검정 농도를 산출하였다. 멀티드롭 콤비 디스펜서를 사용하여 3 ㎕ 검정 완충액만을 컬럼 18에 100% 억제, 효소가 없는 대조군으로서 첨가하였다. 컬럼 6 (효소 + DMSO)은 0% 억제를 산출하였다. 그 후, 테스트 평판을 30 분 동안 실온에서 배양하였다.
3. 2 μM 비오틴-더 긴 LRRKtide 펩티드 기질 및 20 μM ATP를 함유하는 3 ㎕ '기질 용액'을 멀티드롭 콤비 디스펜서를 사용하여 평판의 모든 웰에 첨가하여 최종 검정 농도의 1 μM 비오틴-더 긴 LRRKtide 및 10 μM ATP를 산출하였다. 그 후, 테스트 평판을 2 시간 동안 실온에서 배양하였다. (배양은 상이한 효소 배취를 사용한 반응의 속도 및 선형성에 의존하여 변동될 수 있다).
4. '중지' 검정 완충액 (50 mM 헤페스 (pH 7.2), 60 mM EDTA, 10 mM MgCl2, 150 mM NaCl, 5% 글리세롤 및 0.0025% 트리톤 X) 중의 200 nM 스트렙타비딘 슈어라이트® APC, 2 nM Eu-W1024 표지된 항-토끼 IgG 항체 및, 포스포-에즈린(Phospho-Ezrin) (Thr567)/라딕신(Radixin) (Thr564)/모에신(Moesin) (Thr558) 폴리클로날 항체의 1:500 희석을 함유하는 6 ㎕의 '검출 용액'을 평판의 모든 웰에 멀티드롭 콤비 디스펜서를 사용하여 첨가하였다. 그 후, 테스트 평판을 추가의 2 시간 동안 실온에서 배양한 후, 적절한 평판 판독기 (여기 330 ㎚, 발광 620 ㎚ (Eu) 및 665 ㎚ (APC))에서 판독하였다. 액티비티베이스(ActivityBase) 소프트웨어 (IDBS)를 사용하여 데이타를 분석하였다. 시약의 희석 및 농도는 배취 대 배취 기준으로 측정하였다.
재조합 세포성 LRRK2 알파스크린 ( AlphaScreen ) 검정
세포 중의 LRRK2 키나제 활성에 대한 화합물의 활성을 측정하기 위하여, LRRK2 Ser 935 인산화 (Dzamko et al., 2010, Biochem . J. 430: 405-413)의 관찰된 LRRK2 키나제-의존성 조정을 사용하여 재조합 전장 LRRK2 단백질을 과발현시키도록 조작된 인간 신경모세포종 세포주 SH-SY5Y에서 LRRK2 Ser935 인산화의 정량적 384 웰 평판계 면역검정을 개발하였다.
전장 재조합 LRRK2를 발현시키는 BacMam 바이러스는 인비트로겐으로부터 구입하고, 3% 태아 소 혈청이 보충된 Sf-900 III SFM 배지 중에서 MOI 0.3에서 4-5 일 동안 SF-9 세포의 접종에 의하여 증폭시켰다. 그 후, 감염된 세포 배양액을 2,000g에서 20 분 동안 원심분리하고, 바이러스 성청액 역가를 항-gp64 플라크 검정에 의하여 측정하고, 4℃에서 보관하였다.
친화성-정제된 항-포스포 LRRK2 Ser935 양 폴리클로날 항체 (Dzamko et al., 2010, Biochem . J. 430: 405-413)를 표준 방법 (퍼킨엘머(PerkinElmer))에 의하여 비오티닐화하였다. 항-LRRK2 토끼 폴리클로날 항체는 노부스 바이올로지칼스(Novus Biologicals)로부터 구입하였다. 알파스크린 단백질 A IgG 키트 (수용체 및 공여체 비드 포함)는 퍼킨 엘머(Perkin Elmer)로부터 구입하였다.
SH-SY5Y 세포를 10% 투석된 태아 소 혈청을 갖는 DMEM/F12 배지 내에서 성장시키고, 5 분 동안 37℃에서 0.5% 트립신-EDTA로 처리하여 수집한 후, 1,000 rpm에서 4 분 동안 원심분리하였다. 세포 펠릿을 Opti-MEM 환원 혈청 배지 (인비트로겐) 중에서 200,000 세포/㎖에서 재현탁시키고, BacMam LRRK2 바이러스와 함께 MOI=50에서 혼합하였다. 그 후, 50 ㎕ 세포 용액을 384-웰 평판의 각각의 웰에 분배시키고, 37℃, 5% CO2에서 24 시간 동안 배양하였다.
테스트 화합물의 연속 희석은 Opti-MEM 환원 혈청 배지 (인비트로겐) 중에서 생성하고, 5.6 ㎕를 화합물 평판으로부터 세포 검정 평판으로 전달하여 10 μM의 상부 최종 검정 농도를 달성하였다. DMSO를 대조군으로서 특정 웰에 사용하였다. 세포를 37℃, 5% CO2에서 60 분 동안 배양하였다. 그 후, 배지를 제거하고, 20 ㎕ 세포 용해 완충액 (셀 시그날링 테크놀로지(Cell Signaling Technology))의 첨가 및 4℃에서 20 분 동안 배양에 의하여 세포를 용해시켰다. 그 후, 10 ㎕의 항체/수용체 비드 믹스 [알파스크린 검출 완충액 (25 mM 헤페스 (pH 7.4), 0.5% 트리톤(Triton) X-100, 1 ㎎/㎖ 덱스트란(Dextran) 500 및 0.1% BSA 중의 1/1000 비오티닐화-pS935 LRRK2 항체, 1/1000 총-LRRK2 항체, 1/100 수용체 비드]를 각각의 웰에 첨가하고, 평판을 2 시간 동안 상온에서 암실 내에서 배양하였다. 그 후, 10 ㎕의 공여체 비드 용액 (알파스크린 검출 완충액 중의 1/33.3 공여체 비드)을 각각의 웰에 첨가하였다. 추가로 2 시간 동안 상온에서 암실 내에서 배양한 후, 평판을 인비젼(EnVision)™ 평판 판독기에서 발광 520-620 ㎚, 여기 680 ㎚에서 판독하였다. 용량 반응 곡선 데이타는 S자형 용량-반응 모델에 기초하였다.
약리학적 데이타
실시예 E1-E66의 화합물은 재조합 LRRK2 효소 펩티드 기질 TR-FRET 검정 및/또는 재조합 세포성 LRRK2 알파스크린 검정으로 시험하였다. E1-E66의 화합물은 검정 중 하나 또는 둘다에서 LRRK2 키나제 활성을 억제하는 것으로 밝혀졌다.
각각의 화합물에 대한 pIC50 값은 하나 이상의 실험에서 또는 복수의 실험의 평균값으로 보고하였다. 본원에 기재된 데이타는 실험을 실시하는 실험자에 의하여 사용된 특정한 조건 및 절차에 의존하여 타당한 변동을 가질 수 있는 것으로 이해한다.
실시예 E1-E66의 화합물은 재조합 세포성 LRRK2 알파스크린 검정으로 시험하고, pIC50≥5.0을 나타냈다. 실시예 E4, E6, E9, E13, E15, E18, E27, E30-E34, E40 및 E59의 화합물은 pIC50≥7.0을 나타냈다.
실시예 E1-E31, E33-E36, E39-E44, E46, E47, E51-E53, E56, E61, E63, E64 및 E66의 화합물은 재조합 LRRK2 효소 펩티드 기질 TR-FRET 검정으로 시험하고, pIC50≥5.0을 나타냈다. 실시예 E2-E9, E13, E20, E24, E25, E27, E29, E31, E35, E36, E39-E42, E44, E46, E52, E53, E64 및 E66의 화합물은 ≥8.0을 나타냈다.
예를 들면, 하기 실시예에 대한 재조합 세포성 LRRK2 알파스크린 검정 및 재조합 LRRK2 효소 펩티드 기질 TR-FRET 검정의 pIC50 값은 하기와 같다:
Figure pct00150

Claims (16)

  1. N-프로필-4-[[4-[3,3,3-트리스(플루오라닐)프로필]-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-일]아미노]벤즈아미드를 제외한 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
    <화학식 I>
    Figure pct00151

    상기 식에서,
    R1은 H이고,
    R2는 1개 이상의 히드록실로 임의로 치환된 C1- 5알킬이거나 또는
    R1 및 R2는 이들이 부착되어 있는 질소와 함께
    (1) C1- 3알킬, -CH2-OCH3, 할로 및, 4 위치에서의 질소에서 C1- 3알킬로 임의로 치환된 피페라진-1-일로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환기로 임의로 치환되는 질소 함유 헤테로시클릭 고리 또는
    (2)
    Figure pct00152
    로 이루어진 군으로부터 선택된 비시클릭 고리계를 형성하며, 여기서 Ra 및 Rb의 각각의 경우는 H, CN, 할로, -CH2OCH3, C1-3알콕실 및, 1개의 히드록시 기로 임의로 치환된 C1-3알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고;
    R3 및 R6은 각각 H, C1- 3알콕실, -O-C1- 3할로알킬, -O-CH2-C3- 6시클로알킬, 할로 및 -NRxRy로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되며, 여기서 Rx 및 Ry는 각각 독립적으로 H 또는 C1-3알킬이고;
    R4 및 R5는 각각 H, 할로, C1- 3알콕시 및 C1- 3알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고,
    R7은 N 또는 CH이고;
    R8은 H, CN, C1- 3할로알킬 및 C1- 3알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R9는 C1- 3알콕실, C1- 3할로알킬, -O-C1- 3할로알킬 및 -O-CH2-C3- 6시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다.
  2. 제1항에 있어서, R1 및 R2가 이들이 부착되어 있는 질소와 함께 질소 함유 헤테로시클릭 고리를 형성하며, 여기서 헤테로시클릭 고리가 C1- 3알킬로부터 각각 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 치환기로 임의로 치환된 모르폴리닐, 피페라지닐 또는 피페리디닐로부터 선택되는 것인 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  3. 제1항에 있어서, R1 및 R2가 이들이 부착되어 있는 질소와 함께
    Figure pct00153
    을 형성하는 것인 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  4. 제1항에 있어서, R1 및 R2가 이들이 부착되어 있는 질소와 함께
    Figure pct00154
    를 형성하며, 여기서 Ra 및 Rb의 각각의 경우가 H, -CH2OCH3, C1- 3알콕실 및 -CH2OH로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되는 것인 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, R3 및 R6이 각각 C1- 3알콕실로부터 독립적으로 선택되는 것인 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, R4 및 R5가 각각 H 또는 F로부터 독립적으로 선택되는 것인 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, R7이 CH인 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, R8이 H인 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, R9가 C1- 3알콕실인 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  10. 제1항에 있어서, 실시예 E1 내지 E66 중 어느 하나의 화합물, 그의 유리 염기 형태, 유리 산 형태 또는 제약상 허용되는 염인 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 의한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 하나 이상의 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 제약 조성물.
  12. 파킨슨병의 치료에 사용하기 위한 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 의한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  13. 파킨슨병의 치료를 위한 약제의 제조에서 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 의한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도.
  14. 파킨슨병의 치료를 필요로 하는 대상체에게 치료적 유효량의 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 의한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는 파킨슨병의 치료 방법.
  15. 제14항에 있어서, 대상체가 인간인 방법.
  16. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 의한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 하나 이상의 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 파킨슨병의 치료에 사용하기 위한 제약 조성물.
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