KR20160081358A - 식물 추출물을 포함하는 주름 개선용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 다양한 식물 추출물을 포함하는 주름 개선용 조성물에 관한 것이다.

Description

식물 추출물을 포함하는 주름 개선용 조성물{COMPOSITION FOR IMPROVING WRINKLES CONTAINING PLANT EXTRACT}

본 발명은 다양한 식물 추출물을 포함하는 주름 개선용 조성물에 관한 것이다.

최근 외모에 대한 관심이 높아지면서 피부노화를 지연시키고 예방하기 위한 연구가 활발하게 진행되고 있다. 그 중에서 주름과 미백에 대한 관심이 증가하면서 탄력있고 밝은 피부를 유지 및 개선하기 위해 후천적으로 높은 관심과 노력에 따라 개선 될수 있는 화장품의 필요성이 절실해 지고 있다.

현재, 주름 개선 화장료로는 레티노이드, 아데노신, 동물 태반 유래 단백질, 클로렐라 추출물, 빈랑자 추출물 등이 알려져 있다. 그런데, 레티놀은 콜라겐 합성을 촉진하여 엘라스타아제 효소를 저해하는 물질이지만 불안정하고 피부 적용 시 자극, 발작 등의 안전성 문제로 사용량의 제한이 있으며, 클로렐라 추출물 등은 그 효과가 미미하여 실질적으로 피부 주름 개선효과를 기대하기가 어렵다는 제한이 있다.

Wiedow, O., Schroder, J. M., E. J. Biol. Chem., 265(5), p14791, 1990

본 발명의 목적은 천연 유래의 식물 추출물을 포함하는 주름 생성의 예방, 주름 개선, 주름 완화, 주름 생성의 지연 또는 주름 생성 억제용 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위해 본 발명은 벌깨덩굴 추출물, 속새 추출물, 개회나무 추출물 및 상산 추출물로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 추출물을 유효성분으로 포함하는, 주름 생성의 억제 또는 주름 개선용 조성물을 제공한다.

본 발명의 조성물은 엘라스타제 저해 효과를 가지는 4종 추출물로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 추출물을 포함하여, 피부 주름의 효과적으로 개선하거나 또는 피부 주름의 생성을 억제 및 지연시킬 수 있다. 또한 본 발명의 조성물은 천연 식물로부터 얻어지는 추출물을 포함하여 친환경적이고, 장기간 사용시에도 내성이 적게 생기며, 저자극성이라는 장점이 있다.

도 1은 본 발명의 식물들의 지표성분 및 항산화 성분 분석을 확인하기 위해 온라인 항산화 HPLC 분석장치를 사용하여 얻어진 각각의 식물의 부위별 크로마토그램이다. 벌깨 덩굴의 잎 1, 2번 피크 벌깨덩굴의 줄기 3번 피크는 항산화 활성을 가진 단순 페놀릭 화합물로 추정되며, 벌깨덩굴의 잎 3번피크와 속새 뿌리의 2, 3, 4번 피크는 항산화 활성을 가지는 플라보노이드 화합물로 추정된다. 또한 속새의 잎과 뿌리의 1번 피크는 항산화 활성을 가지지 않는 트리터페노이드계 화합물로 추정된다.
도 2는 발명의 식물들의 지표성분 및 항산화 성분 분석을 확인하기 위해 온라인 항산화 HPLC 분석장치를 사용하여 얻어진 각각의 식물의 부위별 크로마토그램이다. 개회나무의 잎 3번 피크와 개회나무의 줄기 2번, 상산의 잎과 줄기의 2번 피크는 항산화 활성을 가진 단순 페놀릭 화합물로 추정되며, 개회나무의 잎 2번 피크와 상산 잎과 줄기의 3번으로 표시된 피크들은 항산화 활성을 가지는 플라보노이드 화합물로 추정된다. 또한 개회나무의 잎과 줄기, 그리고 상산의 줄기 1번 피크는 항산화 활성을 가지지 않는 트리터페노이드계 화합물로 추청된다.
도 3은 본 발명의 식물들과 그리고 양성 대조군으로서 선행기술 추출물인 빈랑자의 주름억제 활성 비교 그래프이다.
도 4는 본 발명의 식물들과 양성 대조군으로서 우수한 항산화 효과를 가지는 트롤록스 (Trolox) 의 농도별 DPPH 라디칼 소거능을 나타낸 그래프이다.

본 발명은 일 관점에서, 벌깨덩굴 추출물, 속새 추출물, 개회나무 추출물 및 상산 추출물로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 추출물을 유효성분으로 포함하는, 주름 개선용 조성물에 관한 것이다.

본 발명자는 50여종의 식물 추출물 각각에 대해 주름개선 물질 스크리닝을 위해 이용하는 엘라스타제 활성 억제율을 측정한 결과, 본원발명 조성물의 유효성분인 4종의 식물 추출물이 특히 우수하게 엘라스타제의 활성을 억제하는 것을 확인하고 본 발명을 완성하게 되었다.

본 명세서에서 상기 “추출물”은 물, C1-C6 알콜, 및 이들이 조합으로 구성된 그룹에서 선택된 용매의 조추출물일 수 있다. 상기 C1-C6 알콜은 구체적으로 메탄올 또는 에탄올일 수 있다. 각각의 식물을 용매로 추출 시, 식물의 약 5 내지 15배 정도에 해당하는 용매를 가하여 추출하는 것이 바람직하며, 구체적으로 약 10 배의 용매를 가하여 추출하는 것이 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 추출은 가열 추출, 냉침 추출, 환류냉각 추출, 또는 초음파 추출 등이 이용될 수 있으며, 당업자에게 자명한 추출법이라면 제한이 없다. 상기 추출은 실온에서 수행할 수도 있으나, 보다 효율적인 추출을 위해서는 가온 조건 하에서 수행할 수 있으며, 바람직하게는 약 40 내지 100℃, 더욱 바람직하게는 약 80℃의 온도에서 추출할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 추출시간은 바람직하게는 약 2 내지 4시간, 더욱 바람직하게는 약 3 시간 동안 수행할 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니며, 추출 용매 및 추출 온도 등의 조건에 따라 달라질 수 있다. 상기 추출은 활성성분을 보다 다량 수득하기 위해 1 회 이상 여러 번 추출할 수 있으며, 바람직하게는 1 내지 5회, 더욱 바람직하게는 3회 연속추출하여 합한 추출액을 이용할 수 있다.

본 명세서에서 상기 4종의 식물 추출물은 각각의 조추출물을 포함할 수 있고, 상기 조추출물을 극성이 낮은 유기 용매로 더욱 추출하여 얻어진 유기 용매의 가용성 분획물로서 포함할 수도 있다. 상기 유기 용매로는 헥산, 메틸렌클로라이드, 에틸 아세테이트, n-부탄올 등이 이용될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기의 방법으로 추출한 추출물 또는 그 추출물의 가용성 분획물은 그대로 사용할 수도 있으나, 여과 후 농축하여 엑기스 형태로 사용할 수 있으며, 농축 후 동결 건조하여 동결건조물의 형태로서 사용할 수 있다.

본 명세서에서 상기 “벌깨덩굴”은 메하니아 우르티시폴리아(Meehania urticifolia)일 수 있으며, 꿀풀과(Labiatae)에 속하는 다년생 초본일 수 있다.

본 명세서에서 상기 “속새”는 에퀴세툼 피에말리(Equisetum hyemale) 일 수 있으며, 속새과(Equisetaceae)에 속하는 다년생 초본일 수 있다.

본 명세서에서 상기 “개회나무”는 시링가 레티쿨라타(Syringa reticulata) 일 수 있으며, 물푸레나무과(Oleaceae)에 속할 수 있다. 구체적으로 상기 개회나무는 수개회나무(for. bracteata), 잎이 긴 타원형이고 양끝이 좁은 것을 긴잎개회나무(for. longifolia) 또는 잎 뒷면에 털이 있는 것을 털긴잎개회나무(for. koreana)를 포함할 수 있다.

본 명세서에서 상기 “상산”은 오리사 자포니카(Orixa japonica)일 수 있으며, 운향과(Rutaceae)의 낙엽관목일 수 있다.

상기 벌깨덩굴 추출물, 속새 추출물, 개회나무 추출물 또는 상산 추출물 각각은 피부 탄력을 유지해주는 엘라스틴을 분해하는 분해효소인 엘라스타제를 저해 또는 억제할 수 있는 능력이 우수하다. 이에 따라, 이를 포함하는 조성물은 피부의 탄력을 유지할 수 있는 능력이 뛰어나므로, 피부 주름을 개선하거나 또는 피부 주름의 생성을 억제시키거나 지연시킬 수 있다.

본 명세서에서 상기 “주름 개선”은 주름 생성의 예방, 주름 개선, 주름 완화, 주름 생성의 지연 또는 주름 생성 억제를 모두 포함하는 것이다.

아울러 본 명세서에서 사용되는 상기 벌깨덩굴 추출물, 속새 추출물, 개회나무 추출물 또는 상산 추출물 각각은 해당 식물의 지상부 또는 지하부의 일부 또는 전부, 예컨대 잎, 잔가지, 줄기, 뿌리, 꽃, 껍질 또는 종자를 이용하여 얻어질 수 있다.

구체적으로 본 발명의 일 관점인 조성물은 엘라스타제의 생성 또는 활성을 억제할 수 있어서, 주름 생성을 억제하고 이미 생성된 주름을 개선할 수 있어서, 피부 탄력 개선 및 탄력 유지에 유용하게 사용할 수 있다. 이에 따라, 본 발명은 다른 관점에서, 벌깨덩굴 추출물, 속새 추출물, 개회나무 추출물 및 상산 추출물로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 추출물을 유효성분으로 포함하는 주름 생성 억제용, 주름 생성 지연용, 주름 개선용, 피부 탄력 개선용 또는 피부 탄력 유지용 조성물을 포함할 수 있다.

본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 조성물은 엘라스타제의 생성 또는 엘라스타제의 활성을 억제할 수 있다. 엘라스타제(elastase)는 피부 탄력을 유지해주는 동물 결합조직의 불용성 탄성섬유단백질인 엘라스틴(elastin)을 분해하는 유일한 분해효소로 알려져 있다(Wiedow, O., Schroder, J. M., E. J. Biol. Chem., 265(5), p14791, 1990). 본 발명의 일 관점인 조성물은 이러한 엘라스타제의 생성량 자체를 줄이거나, 또는 정상적으로 생성된 엘라스타제의 활성을 억제하여 제 기능을 할 수 없도록 하여 노화 억제, 노화 지연 등에 유용하다. 본 발명의 일 관점인 항노화용 조성물은 또한, 상기와 같이 엘라스타제 자체에 대한 효과 뿐 아니라, 엘라스타제 의 생성 및 그 활성에 관여하는 전 단계 (up-stream)의 효소, 단백질 등의 생성량 및 활성을 조절할 수 있어서 유용하다.

본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 벌깨덩굴 추출물은 벌깨덩굴의 줄기 추출물; 상기 속새 추출물은 속새의 지상부 추출물;상기 개화나무 추출물은 개화나무의 잎 추출물이거나; 또는 상기 상산 추출물은 상산의 잎 추출물일 수 있다. 상기 4종의 식물 추출물은 해당 식물 전체 부위에서 주름 개선 등의 효과를 가질 수 있으나, 그 중에서도 특히 상기 제시한 식물 부위의 추출물에 의한 주름 개선 효과가 더 뛰어날 수 있다.

본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 조성물은 화장료 조성물 또는 건강식품 조성물일 수 있다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 국소 적용에 적합한 모든 제형으로 제공될 수 있다. 예를 들면, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 젤, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 스프레이, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 유상에 수상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 고체, 분말, 포말(foam) 형태로, 또는 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 아이크림, 영양크림, 마사지크림, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 파우더, 에센스, 팩의 제형으로 제공될 수 있다. 이러한 제형의 조성물은 당해 분야의 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 상기한 물질 이외에 주 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서, 바람직하게는 주 효과에 상승 효과를 줄 수 있는 다른 성분들을 포함할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 화장료 조성물은 보습제, 에몰리언트제, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, pH 조정제, 유기 및 무기 안료, 향료, 냉감제 또는 제한제를 더 포함할 수 있다. 상기 성분의 배합량은 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 당업자가 용이하게 선정 가능하며, 그 배합량은 조성물 전체 중량을 기준으로 0.01 내지 5 중량%, 구체적으로 0.01 내지 3 중량%일 수 있다.

본 발명에 따른 건강식품 조성물은 이를 포함하는 드링크제, 발효유, 치즈, 요구르트, 주스, 생균제제 및 건강보조식품 등으로 가공될 수 있으며, 그 외 다양한 식품 첨가제의 형태로 사용될 수 있다.

일실시예에서 상기 조성물은, 본 발명이 목적으로 하는 주 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 주 효과에 상승 효과를 줄 수 있는 다른 성분 등을 함유할 수 있다. 예를 들어, 물성 개선을 위하여 향료, 색소, 살균제, 산화방지제, 방부제, 보습제, 점증제, 무기염류, 유화제 및 합성 고분자 물질 등의 첨가제를 더 포함할 수 있다. 그 외에도, 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당 및 해초 엑기스 등의 보조 성분을 더 포함할 수도 있다. 상기 성분들은 제형 또는 사용 목적에 따라서 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있으며, 그 첨가량은 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 선택될 수 있다.

본 발명에 따른 조성물의 제형은 용액, 유화물, 점성형 혼합물, 타블렛, 분말 등의 다양한 형태일 수 있으며, 이는 단순 음용, 주사 투여, 스프레이 방식 또는 스퀴즈 방식 등의 다양한 방법으로 투여될 수 있다.

본 발명의 일 관점이 조성물에 있어서, 상기 조성물은 벌깨덩굴 추출물, 속새 추출물, 개회나무 추출물 및 상산 추출물로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 추출물을 조성물 총 중량에 대하여 0.00001-20.0중량％로 포함할 수 있다. 본 발명의 일 관점인 조성물이 상기 추출물들을 0.00001% 미만으로 함유하면 주름 개선 등에 미치는 효과가 미미하며, 20%를 초과하여 함유하는 경우 다른 조성에 영향을 미쳐서 적절하지 않다. 상기와 같은 관점에서, 상기 조성물은 상기 추출물들을 조성물 총 중량에 대하여 0.00005 내지 18 중량%, 0.0001 내지 16 중량%, 0.0005 내지 14 중량%, 0.001 내지 12 중량%, 0.005 내지 10 중량% 또는 0.01 내지 8 중량%로 포함할 수 있다. 더 구체적으로, 상기 조성물은 벌깨덩굴 추출물, 속새 추출물, 개회나무 추출물 및 상산 추출물로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 추출물을 조성물 총 중량에 대하여 0.01 내지 10.0중량%, 또는 0.1 - 5.0 중량%로 함유할 수 있다.

본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 조성물은 약학 조성물일 수 있다.

본 발명에 따른 조성물을 의약품에 적용할 경우에는, 상기 조성물을 유효성분으로 하여 상용되는 무기 또는 유기의 담체를 가하여 고체, 반고체 또는 액상의 형태로 경구 투여제 혹은 비경구 투여제로 제제화 할 수 있다.

상기 경구 투여를 위한 제재로서는 정제, 환제, 과립제, 캡슐제, 산제, 세립제, 분제, 유탁제, 시럽제, 펠렛제 등을 들 수 있다. 또한, 상기 비경구 투여를 위한 제재로는 주사제, 점적제, 연고, 로션, 스프레이, 현탁제, 유제, 좌제 등을 들 수 있다. 본 발명의 유효성분을 제제화하기 위해서는 상법에 따라서 실시하면 용이하게 제제화할 수 있으며 계면활성제, 부형제, 착색료, 향신료, 보존료, 안정제, 완충제, 현탁제, 기타 상용하는 보조제를 적당히 사용할 수 있다.

본 발명에 따른 상기 약학 조성물은 경구, 비경구, 직장, 국소, 경피, 정맥 내, 근육 내, 복강 내, 피하 등으로 투여될 수 있다.

본 발명의 약학 조성물의 유효 성분은 투여 받을 대상의 연령, 성별, 체중, 병리 상태 및 그 심각도, 투여 경로 또는 처방자의 판단에 따라 달라질 것이다. 이러한 인자에 기초한 적용량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 이의 1일 투여 용량은 예를 들어 0.1mg/kg/일 내지 100mg/kg/일, 보다 구체적으로는 5 mg/kg/일 내지 50 mg/kg/일이 될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

[실시예]

벌깨덩굴 추출물, 속새 추출물, 개회나무 추출물 및 상산 추출물의 제조

벌깨덩굴의 잎 및 줄기, 속새의 뿌리 및 지상부, 개회나무 추출물의 잎 및 줄기, 상산의 잎 및 줄기를 채취하고 각각의 건조 중량 100g을 플라스크에 넣고 70% 에탄올 (Ethyl alcohol) 1ℓ로 1일간 냉침하여 추출한 후, 여과하여 찌꺼기를 제거함으로써 상기 각각의 추출물을 제조하였다.

[비교예 1]

빈랑자 추출물의 제조

빈랑자(빈랑 나무의 열매)를 산지에서 채취하여 건조 중량 100g씩을 각각 플라스크에 넣고 70% 에탄올 (Ethyl alcohol) 1ℓ로 1일간 냉침하여 추출한 후, 여과하여 찌꺼기를 제거함으로써 빈랑자 추출물을 제조하였다.

[실험예 1]

ABTS 온라인항산화 HPLC를 활용한 지표성분 및 항산화 성분 분석

상기 실시예 1에서 제조한 식물 추출물은 메탄올로 용해하여 0.45 μm PVDF syringe filter(Whatman, Maidstone, England)를 통과시킨 다음 온라인 항산화 HPLC 장치 (1200 series, Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA)를 사용하여 지표성분 및 항산화 성분 분석하였다. 컬럼은 Hydrosphere C18 column (4.6 × 150 mm), 검출기는 UV(280 nm), 이동상은 HPLC grade용 아세토니트릴 (A)과 물 (B)을 0~10분, 10% A; 10~30분 10-100% A 의 조건으로 linear gradient하였으며, 유량은 1.0 mL/분 (아세토나이트릴, 물)과 0.5 mL/분 (ABTS 용액)으로 하였고, 시료주입량은 10 μL로 하였다. 이 때 식물 추출물의 지표성분 및 항산화 성분의 프로파일은 포지티브 피크로서 280nm의 크로마토그램으로 나타내었고 각 피크에대한 항산화 활성은 네거티브 피크로서 734nm에서 측정 되어 [도 1-도 2]에 나타내었다.

[실험예 2]

식물 추출물의 엘라스타제 활성 억제 실험

상기 실시예에서 수득한 8종의 식물 추출물 각각에 대해 엘라스타제 활성 저해 효과를 다음과 같이 살펴 보았다.

양성 대조군으로는 주름 개선 용도를 가지는 것으로 알려져 있는 빈랑자 추출물 (대한민국 공개특허 제10-1999-0058669호, 비교예 1)을 이용하였고, 각각의 추출물은 50ppm 의 농도로 하여 사용하였다.

먼저, 완충용액(0.267M Tris 용액을 0.267M 염산용액으로 pH 8.0이 되도록 조정) 1ml에 엘라스타아제 기질 Succ-Ala-Ala-p-nitroanilide(시그마사, 미국)을 4mg 넣어 섞었다(8.8mM 기질용액이 됨). 다음으로 효소인 돼지 췌장 엘라스타아제 (Porcine Pancreatic Elastase, 표준품; 시그마사, 미국)를 완충용액으로 10㎍/ml의 농도로 만들고, 이렇게 준비된 기질용액과 각각 의 시료를 섞은 후, 효소용액을 첨가하여 25 ℃에서 15분간 반응시켰다. 반응 후, 405nm에서 흡광도를 측정하였다. 이때 음성대조군은 시료 대신 버퍼를 사용하였고 블랭크(blank)는 버퍼와 샘플 녹인 용매만을 사용하였다. 엘라스타아제 활성 억제율은 하기 수학식 1을 이용하여 계산하였으며, 그 결과를 도 1에서 도표화하여 나타내었다.

[수학식 1]

엘라스타아제 활성 억제율(%) = [(음성대조군의 흡광도 - 블랭크 흡광도)-(실험군 시료의 흡광도 - 블랭크 흡광도)] / (음성대조군의 흡광도 - 블랭크 흡광도) * 100

그 결과(도 1), 8종 추출물 모두 당업계에 엘라스타제 활성 억제 효과를 가지는 것으로 알려져 있는 비교예 1(빈랑나무 추출물)와 비슷한 수준의 엘라스타제 활성 억제율을 보였다. 그 중에서도 특히, 벌깨덩굴의 줄기 추출물; 속새의 지상부 추출물; 개화나무의 잎 추출물; 또는 상산의 잎 추출물은 동일 식물의 다른 부위에 의해 얻어지는 추출물보다 엘라스타제 활성 억제율이 더 높은 것을 확인할 수 있었다.

실험예 3. 식물 추출물의 라디칼 소거 능력 실험

(1) DPPH 라디칼 포집 실험 (DPPH radical scavenging test)

유기 용매에 녹은 DPPH(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) 라디칼은 515nm에서 최대 흡광도를 가지게 되는데, 항산화 물질은 DPPH 라디칼을 소거하여 고유의 색인 보라색을 잃고 노랗게 변화시킨다.

DPPH 라디칼 포집의 측정을 위하여 실시예 1과 같은 과정으로 추출한 식물 추출물과 양성 대조군으로 비타민E의 유도체인 트롤록스를 각각 최종농도 17.5ppm, 25ppm, 50ppm, 250ppm 씩 농도를 조절하여 항산화능을 측정하였다. 각각의 희석한 시료와 에탄올을 96-웰에 넣은 후 DPPH 라디칼을 첨가하여 30분간 반응시켰다. 그 후, 515nm에서 라디칼 소거능을 측정하여, 소거능을 %로 표시하였다. 이때 대조군은 시료 대신 샘플녹인 용매인 에탄올과 DPPH 라디칼을 첨가하여 사용하였고 블랭크(blank)는 샘플 녹인 용매인 에탄올만을 사용하였다. 상기 실험군과 대조군에 대한 흡광도 측정 후, 하기 식을 이용하여 자유라디칼 소거활성 효과를 구하여 그 결과를 하기 도 4에 기재하였다.

DPPH 라디칼소거효과(%) = [(대조군의 흡광도 - 블랭크 흡광도)-(실험군 시료의 흡광도 - 블랭크 흡광도)] / (대조군의 흡광도 - 블랭크 흡광도) * 100

실험예 4. 식물 추출물의 총 폴리페놀 함량 측정

실시예 1에 의하여 얻어진 식물 추출물 시료 (10mg)을 증류수에 희석하였다. 각각의 희석한 시료 20ul를 96-웰 플레이트에 넣고 다시 60ul의 증류수를 넣어 80ul가 되도록 희석하였다. 여기에 20ul의 폴린-치오칼텐 시약(Folin-Ciocalten reagent)을 첨가하여 5분동안 반응시킨 후, Na2CO3 100ul를 첨가하였다. 30분 후 730nm의 흡광도를 측정하고 표준물질인 갈릭산 (gallic acid)과 탄닉산 (tannic acid)의 검량곡선에 대입하여 gallic acid equivalent mg/g, tannic acid equivalent mg/g 추출물로 총 폴리페놀 함량을 측정하였다. 그 결과, 표1과 같은 결과를 얻었다.

시료	총 페놀릭함량 (mg/g)
	갈릭산에 상당하는 양	탄닉산에 상당하는 양
벌깨덩굴 잎	31.33 ± 1.2	59.26 ± 2.1
벌깨덩굴 줄기	47.64 ± 0.8	87.48 ± 1.4
속새 뿌리	28.61 ± 1.4	54.56 ± 2.4
속새 잎	13.29 ± 0.1	28.05 ± 0.1
개회나무 잎	45.62 ± 1.4	83.97 ± 2.5
개회나무 줄기	60.34 ± 1.7	109.46 ± 2.9
상산 잎	49.17 ± 4.5	90.13 ± 7.9
상산 줄기	19.27 ± 0.9	38.40 ± 1.5

실험예 4. 식물 추출물의 총 플라보노이드 함량 측정

실시예 1에 의하여 얻어진 식물 추출물 시료 (10mg)을 증류수에 희석하였다. 각각의 희석한 시료 20ul를 96-웰에 넣고 다시 80ul의 증류수를 넣어 100ul 가 되도록 희석하였다. 여기에 100ul의 AlCl36H2O를 첨가하여 5분간 반응시켰다. 그 후, 430nm의 흡광도를 측정하여 표준물질인 quercetin의 검량 선에 대입하여 총 플라보노이드 함량을 비교하였고 quercetin equivalent mg/g 추출물로 측정하였다. 그 결과, 표 2와 같은 결과를 얻었다.

시료	총 플라보노이드함량 (mg/g)
	퀘르세틴에 상당하는 양
벌깨덩굴 잎	3.33 ± 1.3
벌깨덩굴 줄기	측정 되지 않음
속새 뿌리	6.38 ± 0.6
속새 잎	0.63 ± 0.3
개회나무 잎	4.31 ± 0.7
개회나무 줄기	측정 되지 않음
상산 잎	4.14 ± 0.3
상산 줄기	0.45 ± 0.1

아래 상기 조성물의 제형예를 설명하나, 이는 본 발명을 한정하는 것이 아니라 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

[제형예 1] 연질 캡슐

벌깨덩굴 추출물 80mg, 비타민 E 9mg, 비타민 C 9mg, 팜유 2mg, 식물성 경화유 8mg, 황납 4mg 및 레시틴 9mg을 혼합하고, 통상의 방법에 따라 혼합하여 연질 캡슐 충진액을 제조한다. 1 캡슐당 400㎎씩 충진하여 연질 캡슐을 제조한다. 그리고, 상기와 별도로 젤라틴 66 중량부, 글리세린 24 중량부 및 솔비톨액 10 중량부의 비율로 연질 캡슐 시트를 제조하고 상기 충진액을 충진시켜 본 발명에 따른 조성물 400mg이 함유된 연질 캡슐을 제조한다.

[제형예 2] 정제

속새 추출물 80mg, 비타민 E 9mg, 비타민 C 9mg, 갈락토올리고당 200㎎, 유당 60㎎ 및 맥아당 140㎎을 혼합하고 유동층 건조기를 이용하여 과립한 후 당 에스테르(sugar ester) 6㎎을 첨가한다. 이들 조성물 500mg을 통상의 방법으로 타정하여 정제를 제조한다.

[제형예 3] 드링크제

개회나무 추출80mg, 비타민 E 9mg, 비타민 C 9mg, 포도당 10g, 구연산 0.6g, 및 액상 올리고당 25g을 혼합한 후, 정제수 300㎖를 가하여 각 병에 200㎖씩 되도록 충진한다. 병에 충진한 후 130℃에서 4?5초간 살균하여 드링크제를 제조한다.

[제형예 4] 과립제

상산 추출물로 80mg, 비타민 E 9mg, 비타민 C 9mg, 무수결정 포도당 250㎎ 및 전분 550㎎을 혼합하고, 유동층 과립기를 사용하여 과립으로 성형한 후 포에 충진하여 과립제를 제조한다.

본 발명이 속한 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 상기 내용을 바탕으로 본 발명의 범주 내에서 다양한 응용 및 변형을 행하는 것이 가능할 것이다.

[제제예 6] 건강 음료의 제조

벌깨덩굴 추출물................................... 1000 ㎎

구연산..................................................... 1000 ㎎

올리고당..................................................... 100 g

매실농축액..................................................... 2 g

타우린............................................................ 1 g

정제수를 가하여 전체......................... 900 ㎖

통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2ℓ용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.

상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용 용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비율을 임의로 변형 실시하여도 무방하다. 본 발명이 속한 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 상기 내용을 바탕으로 본 발명의 범주 내에서 다양한 응용 및 변형을 행하는 것이 가능할 것이다.

[제형예 1] 유연화장수(스킨로션)

배합 성분	함량 (중량 %)
개회나무 추출물	속새 추출물
글리세린	3.0
부틸렌글리콜	2.0
프로필렌글리콜	2.0
카르복시비닐폴리머	0.1
피이지-12 노닐페닐에테르	0.2
폴리솔베이트 80	0.4
에탄올	10.0
트리에탄올아민	0.1
방부제, 색소, 향료	적량
정제수	잔량

[제형예 2] 영양화장수(밀크로션)

배합 성분	함량 (중량 %)
개회나무 추출물	0.1
글리세린	3.0
부틸렌글리콜	3.0
프로필렌글리콜	3.0
카르복시비닐폴리머	0.1
밀납	4.0
폴리솔베이트 60	1.5
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드	5.0
스쿠알란	5.0
솔비타세스퀴올레이트	1.5
유동파라핀	0.5
세테아릴 알코올	1.0
트리에탄올아민	0.2
방부제, 색소, 향료	적량
정제수	잔량

[제형예 3] 영양크림

배합 성분	함량(중량%)
상산 추출물	0.1
글리세린	3.0
부틸렌글리콜	3.0
유동파라핀	7.0
베타글루칸	7.0
카보머	0.1
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드	3.0
스쿠알란	5.0
세테아릴 글루코사이드	1.5
소르비탄 스테아레이트	0.4
폴리솔베이트 60	1.2
트리에탄올아민	0.1
방부제, 색소, 향료	적량
정제수	잔량

[제형예 4] 마사지 크림

배합 성분	함량(중량%)
상산 추출물	0.1
글리세린	8.0
부틸렌글리콜	4.0
유동파라핀	45.0
베타글루칸	7.0
카보머	0.1
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드	3.0
밀납	4.0
세테아릴 글루코사이드	1.5
세스퀴 올레인산 소르비탄	0.9
바세린	3.0
파라핀	1.5
방부제, 색소, 향료	적량
정제수	잔량

[제형예 5] 팩

배합 성분	함량(중량%)
개회나무 추출물	0.1
글리세린	4.0
폴리비닐알콜	15.0
히알루론산 추출물	5.0
베타글루칸	7.0
알란토인	0.1
노닐 페닐에테르	0.4
폴리솔베이트 60	1.2
에탄올 방부제	6.0적량
방부제, 색소, 향료	적량
정제수	잔량

이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시태양일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (7)

1. 벌깨덩굴 추출물, 속새 추출물, 개회나무 추출물 및 상산 추출물로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 추출물을 유효성분으로 포함하는, 주름 개선용 조성물.
   
2. 제1항에 있어서,
   상기 조성물은 엘라스타제의 생성 또는 엘라스타제의 활성을 억제하는, 조성물.
   
3. 제1항에 있어서,
   상기 벌깨덩굴 추출물은 벌깨덩굴의 줄기 추출물;
   상기 속새 추출물은 속새의 지상부 추출물;
   상기 개화나무 추출물은 개화나무의 잎 추출물; 또는
   상기 상산 추출물은 상산의 잎 추출물인, 조성물.
   
4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
   상기 조성물은 화장료 조성물 또는 건강식품 조성물인, 조성물.
   
5. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
   상기 조성물은 건강식품 조성물인, 조성물.
   
6. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
   상기 조성물은 약학 조성물인, 조성물.
   
7. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
   상기 조성물은 벌깨덩굴 추출물, 속새 추출물, 개회나무 추출물 및 상산 추출물로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 추출물을 조성물 총 중량에 대하여 0.00001-20.0중량％로 포함하는, 조성물.

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