KR20160072479A - 항 인간 노로바이러스 항체 및 그의 용도 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 인간 노로바이러스에 대한 항체 및 그의 용도에 관한 것으로, 보다 구체적으로, 본 발명에서 개발한 항 인간 노로바이러스 항체는 인간 노로바이러스 VP1 아미노산 서열을 기반으로 베큘로바이러스 발현 시스템을 이용하여 발현한 인간 노로바이러스 재조합 바이러스-유사 입자(VLP)를 항원으로 하여 발현된 항체를 이용하여, 검체중의 인간 노로바이러스 GII 타입을 면역학적 측정법에 의해 검출하기 위한 항인간 노로바이러스 GII 타입 항체 및 그의 용도에 관한 것으로, 본 발명의 항인간 노로바이러스 항체를 사용할 경우, 인간 노로바이러스 GII 타입을 신속??정확하게 진단 할 수 있다.

Description

항 인간 노로바이러스 항체 및 그의 용도{ANTI-HUMAN NOROVIRUS ANTIBODIES AND USE THEREOF}
본 발명은 인간 노로바이러스에 대한 항체 및 그의 용도에 관한 것이다. 보다 자세하게는, 검체중의 인간 노로바이러스 GII 타입을 면역학적 측정법에 의해 검출하기 위한 항인간 노로바이러스 GII 타입 항체 및 그의 용도에 관한 것이다.
인간 노로바이러스(Human Norovirus)는 비세균성 장염의 약 90% 이상의 발병원인으로 알려져 있으며, 특히 저항성이 낮은 노인이나 어린이들에게 치명적일 수 있는 노로바이러스의 검출 확인은 국민보건상 중요한 과제 중 하나이다.
뿐만 아니라, 인간에게 경구 감염하여, 십이지장부터 소장 상부에 증식하고, 감염성 위장염을 일으킨다. 십이지장 부근의 소장 상피세포를 탈락시키고, 구토, 설사, 복통 등의 증상을 일으킨다. 감염에서 발병까지의 잠복기간은 12시간 에서 72시간(평균 1-2일)이고, 증상이 가라앉은 후에도 분변으로 바이러스 배출은 1내지 3주간 정도 계속되며, 7주를 넘는 배출도 보고되어 있다.
노로바이러스는 칼리시비리대(caliciviridae)에 속하는 약 7.6 kb의 단일가닥(single stranded) RNA 바이러스 로서 3개의 ORF(open reading frame) 가 존재한다. ORF1은 바이러스의 복제에 필요한 비구조 단백질인 RdRp(RNA-dependent RNA polymerase)에 의해 전사하고, ORF2 및 ORF3는 각각 메이저와 마이너 캡시드(capsid) 단백질을 전사한다.
인간 노로바이러스 VP1(ORF2)은 shell domain(S-domain) 과 protruding domain(p-domain)으로 이루어져 있으며, S-domain 은 조립을 담당한다고 예측되고 있다. 한편, p-domain은 P1 및 P2의 영역으로 나뉘며, P1 영역은 S-domain과 상호작용에 의하여 캡시드의 물리적 안정성을 증강시키고, P2 영역은 바이러스 입자의 최 외곽에 위치하며, 뮤린 노로바이러스에서는 중화 항체의 표적이 되는 것이 보고되어 있다.
노로바이러스는 유전학적 또는 면역학적으로 매우 다양한 바이러스로 알려져 있으며, 일반적으로 노로바이러스에 대한 항체는 인체에서 흔히 발견되지만 노로바이러스에 대한 면역학적 저항성은 나타나지 않는 것으로 알려져 있다. 노로바이러스에 대한 인체의 면역학적 저항성은 바이러스의 유전자형(genotype)에 따라 다르고, 바이러스의 유전자형의 종류는 매우 다양한 것으로 알려져 있다. 노로바이러스는 5가지의 유전자군(genogroup; GI-GV)이 존재하며, 이 중 2가지의 유전자군(GI 및 GII)이 인체에서 급성 장염을 일으키는 인체의 병원성 바이러스로 알려져 있다 (Vinje, J. et al, 2000). 노로바이러스의 GI과 GII는 감염 및 분자생물학적, 역학적, 및 계통학적으로도 매우 상이하며, 현재까지 노로바이러스(GI 및 GII)의 캡시드(capsid)의 염기서열에 따라 모두 31가지의 유전자형으로 분류되고 있다 (Kageyama, T. et al, 2004).
노로바이러스의 검출은, 캡시드 구조 단백질을 항체를 이용하여 효소면역분석(EIA)법 이나, 면역 크로마토그래피법에 의해 검출이 행해지고 있다. 그러나, 현재까지 알려진 캡시드 조각을 항원으로 하여 발현된 항체를 이용한 검출 방법은 검출 민감도에 대한 한계가 있어, 새로운 항체의 개발이 요구되고 있다.
본 발명은, 인간 노로바이러스 GII 타입에 속하는 인간 노로바이러스에 반응하고, 인간 노로바이러스 GII 타입을 효과적으로 검출하는 것이 가능한 항인간 노로바이러스 항체를 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명에서는 상기와 같은 과제를 해결하기 위하여, 사람 노로바이러스 GII 타입 캡시드 구조 단백질 VP1의 아미노산 서열을 갖는 항원 펩타이드에 결합하는 항인간 노로바이러스 항체를 제공한다.
본 발명의 바람직한 실시예에 따르면, 본 발명의 항원 펩타이드는 서열 번호 2의 아미노산으로 이루어질 수 있다.
본 발명의 바람직한 실시예에 따르면, 본 발명의 항원 펩타이드는 서열번호 1의 염기 서열로부터 트렌스레이션된 아미노산으로 이루어 질 수 있다.
본 발명의 바람직한 실시예에 따르면, 본 발명의 항인간 노로바이러스 항체는 다클론 항체일 수 있다.
본 발명의 바람직한 실시예에 따르면, 본 발명의 항인간 노로바이러스 항체는 단일 클론 항체일 수 있다.
본 발명의 바람직한 실시예에 따르면, 본 발명의 항인간 노로바이러스 항체는 휴머나이즈된 것일 수 있다.
본 발명의 바람직한 실시예에 따르면, 본 발명의 항원 펩타이드는 사람 노로바이러스 GII 타입 캡시드 구조 단백질 VP1의 바이러스-유사 입자(VLP)인 것일 수 있다.
또한, 본 발명에서는 상기의 특징을 가지는 항체를 포함하는 인간 노로바이러스 검출 키트를 제공한다.
뿐만 아니라, 본 발명에서는 인간 노로바이러스 GII 타입 감염 의심 검체를 상기의 특징을 가지는 항체와 반응시켜, 면역학적 측정 방법에 따라 노로바이러스를 검출하는 것을 특징으로 하는 인간 노로바이러스 검출 방법을 제공한다.
본 발명의 항인간 노로바이러스 항체를 이용하면, 노로바이러스 GII 타입의 바이러스를 효과적으로 검출 하는 것이 가능하다. 또한, 본 발명의 항인간 노로바이러스 항체는, 기존의 노로바이러스의 부분적인 부분만을 이용하여 만들어진 노로바이러스 항체와 달리, 노로바이러스 GII 타입 캡시드 구조 단백질 VP1의 전체 영역의 아미노산 서열을 갖는 항원 펩타이드에 결합할 수 있는 점으로부터, 이를 이용한 검출 시약은 특정 부분만을 이용하여 만들어진 항체를 이용한 검출 시약과 비교하여 보다 효과적으로 노로바이러스 감염 여부를 진단 할 수 있다.
도 1은 베큘로바이러스 발현 시스템을 간단히 나타낸 도면이다.
도 2는 도너 벡터에 클로닝한 인간 노로바이러스 VP1 유전자를 PCR 방법으로 확인한 전기영동 사진이다.
도 3은 재조합 인간 노로바이러스 VLP에 대한 쿠마씨블루 염색 사진이다.
도 4는 재조합 인간 노로바이러스 VLP에 대한 웨스턴 블랏 사진이다.
도 5는 농축된 rVLP에 대한 쿠마씨 블루 염색 사진이다.
도 6은 농축된 rVLP에 대한 웨스턴 블랏 사진이다.
도 7은 농축된 rVLP에 대한 BSA 농도측정 쿠마씨 블루 염색 사진이다.
도 8은 1차 브리딩한 마우스 씨럼을 이용한 ELISA assay 결과 이다.
도 9는 2차 브리딩한 마우스 씨럼을 이용 ELISA assay 결과 이다.
도 10은 항인간 노로바이러스 항체의 민감도에 대한 ELISA assay 실험 결과이다.
도 11은 항인간 노로바이러스 항체의 환자 분변 검체에 대한 ELISA assay 실험 결과이다.
이하에서는 본 발명을 보다 구체적으로 설명한다.
본 발명은 인간 노로바이러스 GII 타입 캡시드 구조 단백질 VP1의 아미노산 서열을 갖는 항원 펩타이드에 결합하는 항인간 노로바이러스 항체에 관한 것이다.
본 발명에 따른 항인간 노로바이러스 항체는 기존의 항인간 노로바이러스 항체와 다르게, 인간 노로바이러스 GII 타입의 캡시드 구조 단백질의 일부 아미노산 서열을 갖는 항원 펩타이드에 결합하는 항체가 아니라, 인간 노로바이러스 GII 타입의 캡시드 구조단백질 전체 아미노산 서열을 갖는 항원 펩타이드에 결합하는 항체를 포함한다.
본 발명에서는 인간 노로바이러스 GII 타입의 항원이 될 수 있는 단백질로서 VP1의 단백질을 타겟으로 하였는데, VP1은 인간 노로바이러스의 캡시드 구조 단백질을 형성하는 부분으로, 노로바이러스 그룹 분류에 사용되는 그룹 항원이다.
인간 노로바이러스 VP1은 shell domain(S-domain) 과 protruding domain(p-domain)으로 이루어져 있으며, S-domain 은 조립을 담당한다고 예측되고 있다. 한편, p-domain은 P1 및 P2의 영역으로 나뉘며, P1 영역은 S-domain과 상호작용에 의하여 캡시드의 물리적 안정성을 증강시키고, P2 영역은 바이러스 입자의 최 외곽에 위치하며, 뮤린 노로바이러스에서는 중화 항체의 표적이 되는 것이 보고되어 있다.
본 발명에서 '항체'는 혈청의 기능 성분을 나타내며 종종 분자의 집합(항체들 또는 면역글로불린) 또는 하나의 분자(항체 분자 또는 면역글로불린 분자)로서 언급된다. 항체 분자는 특정 항원성 결정인자(항원 또는 항원성 에피토프)에 결합되거나, 이와 반응하여 차례로 면역학적 이펙터 메커니즘을 유도할 수 있다. 개개 항체 분자는 일반적으로 특이적인 것으로 간주되며, 항체 분자의 조성물을 모노클로날(즉, 동일한 항체 분자로 구성됨) 또는 폴리클로날(즉, 동일한 항원 또는 별개의 다른 항원 상에 동일하거나 상이한 에피토프와 반응하는 상이한 항체 분자로 구성됨)일 수 있다. 각 항체 분자는 이것이 이의 상응하는 항원과 특이적으로 결합될 수 있게 하는 독특한 구조를 지니며, 모든 천연 항체 분자는 2개의 동일한 경쇄 및 2개의 동일한 중쇄의 동일한 전체 기본구조를 지닌다. 항체는 총괄하여 면역글로불린으로서도 공지되어 있다.
본 발명에서 사용되는 항체 또는 항체들이라는 용어는 가장 넓은 의미로 사용되며 본래의 항체, 키메라 항체, 인간화된 항체, 완전한 사람 및 단쇄 항체뿐만 아니라, 항체의 결합 단편을 포함한다.
본 발명의 바람직한 실시예에 따르면, 본 발명의 항원 펩타이드는 서열 번호 2의 아미노산으로 이루어질 수 있다.
상기 서열번호 2의 아미노산은 540nt의 길이를 가지는 인간 노로바이러스의 ORF2(VP1)의 아미노산을 나타내는 것으로, 인간 노로바이러스의 캡시드 구조 단백질을 형성하는 부분의 아미노산서열이다.
본 발명의 바람직한 실시예에 따르면, 본 발명의 항원 펩타이드는 서열번호 1의 염기 서열로부터 트렌스레이션된 아미노산으로 이루어 질 수 있다.
상기 서열번호 1의 염기서열은 1,620bp의 길이를 가지는 인간 노로바이러스의 ORF2(VP1)의 염기서열을 나타내는 것으로, 인간 노로바이러스의 캡시드 구조 단백질을 형성하는 부분의 염기서열이다.
또한, 본 발명의 항인간 노로바이러스 항체는 다클론 항체 또는 단일 클론 항체일 수 있다.
또한, 본 발명의 항인간 노로바이러스 항체는 휴머나이즈된 것일 수 있다.
본 발명의 바람직한 실시예에 따르면, 본 발명의 항원 펩타이드는 사람 노로바이러스 GII 타입 캡시드 구조 단백질 VP1의 바이러스-유사 입자(VLP)인 것일 수 있다.
본 발명은 또한, 상기의 특징을 가지는 항체를 포함하는 인간 노로바이러스 검출 키트를 제공한다.
상기 검출 키트의 종류에는 제한이 없다. 효소 면역 측정법에 의한 노로바이러스 검출 키트의 경우, 고상체에 고정된 항체, 효소에 결합된 항체, 시료 희석 용액, 효소 기질 용액, 세척액 및 노로바이러스 표준 용액을 포함할 수 있으며, 이에 제한되는 것은 아니나, 예를 들어 상기 효소는 호스래디쉬 퍼옥시다제이며, 상기 효소 기질 용액은 오르소-페닐렌다이아민(OPD) 용액일 수 있다. 또한, 상기 시료 희석 용액은 사람 분변의 희석 용액 또는 환경 중의 토양 및 물의 희석 용액이 될 수 있다.
반면, 면역 크로마토그래피법에 의한 검출용 키트의 경우, 샘플 부재, 착색 미립자에 결합된 항체 및 상기 항체로부터 선택된 제1항체가 일시 고정된 면역 반응 부재, 항체로부터 선택된 제 2 항체 밴드와 대조용 항체 밴드를 함유하는 결과 표시 부재 및 흡수 부재를 포함할 수 있다. 상기 각 부재들은 부분적으로 겹쳐지도록 순서대로 일렬 배치될 수도 있고, 상기 제 2 항체 밴드와 대조용 항체 밴드가 일정 간격을 두고 떨어져 위치 할 수 도 있다.
또한, 상기 착색 미립자는 예를 들어 녹색 폴리스타이렌 미립자일 수 있으며, 상기 면역반응 부재는 글라스화이버 멤브레인으로 될 수 있고, 상기 결과 표시 부재는 나이트로셀룰로스 멤브레인으로 제작될 수 있다. 또한, 상기 착색 미립자는 콜로이달 골드 파티클일 수 있으며, 상기 면역 부재는 글라스화이버 멤브레인, 상기 결과 표시 부재는 나이트로셀룰로스 멤브레인으로 제작될 수 있다.
상기 키트의 형태에는 제한이 없으며, 이에 제한되는 것은 아니나, 예를 들어 스트립, 카세트, 막대 등의 형태를 가질 수 있다.
뿐만 아니라, 본 발명에서는 인간 노로바이러스 GII 타입 감염 의심 검체를 상기의 특징을 가지는 항체와 반응시켜, 면역학적 측정 방법에 따라 노로바이러스를 검출하는 것을 특징으로, 기존의 인간 노로바이러스 검출 법보다 효과적이고 민감한 인간 노로바이러스 검출 방법인 것을 확인 할 수 있다.
이하에서는 본 발명을 실시예에 의하여 더욱 상세히 설명한다. 그러나, 본 발명이 이하의 실시예에 의하여 한정되는 것은 아니다.
<실시예 1> 인간 노로바이러스 GII 타입 캡시드 구조 단백질 VP1의 재조합 바이러스-유사 입자(Recombinant Virus Like Particle)의 발현
본 연구는 물환경바이러스 소재은행으로부터 국내 분리 주 인간 노로바이러스 GII.4(GenBank No. FJ514242)의 VP1 부분의 유전자(서열번호 1)가 삽입된 재조합 플라스미드를 분양 받아 수행되었으며, 재조합 바이러스-유사입자(rVLP)는 베큘로 바이러스 단백질 발현 시스템(BaculoDirect™ Baculovirus Expression systems, invitrogen)에 적용하여 형성 하였다.
베큘로바이러스 단백질 발현 시스템은 곤충세포에서 특이적으로 외래 유전자를 발현하기 위해 광범위하게 이용되는 단백질 발현 시스템이다. 베큘로바이러스 발현 시스템은 동물세포를 이용한 단백질 발현 시스템보다 더 많은 양의 단백질을 생산할 수 있으며, 대장균을 이용한 단백질 발현 시스템보다 고품질의 목적 단백질을 생산 하는 것이 장점으로 알려져 있다.
<1-1> 전장(Full length)인간 노로바이러스 GII.4 의 VP1 유전자의 클로닝
물환경바이러스 소재은행으로부터 분양 받은 재조합 플라스미드를 주형으로 하기 기재된 서열을 갖는 프라이머를 이용하여 PCR을 수행 하고, 그 결과 수득된 PCR 산물을 1.5% 아가로오즈 젤에 전기 영동하고, 그로부터 얻어진 목적 크기(1,620bp)의 밴드를 정제 하여 VP1 단편(서열번호 1)을 얻었다.
프라이머 서열
VP1 positive sense primer : 5'- ATGAAGATGGCGTCGAGTGAC- 3'(서열번호 3)
VP1 negative sense primer : 5'- TAATGCACGTCTACGCCCCGT- 3'(서열번호 4)
상기에서 얻어진 VP1 유전자 단편을 베큘로바이러스 발현시스템(도 1)의 도너 벡터(pCRㄾ8/GW/TOPO vector)에 삽입한 후, 형성된 VP1 유전자 단편이 클로닝된 엔트리 클론과 베큘로바이러스 발현벡터(BaculoDirectTM Linear DNA)를 LR ClonaseTM II Enzyme Mix(Invitrogen)를 사용한 LR recombinant reaction을 통하여 재조합 베큘로바이러스 DNA를 형성하였다.
상기 형성된 재조합 베큘로바이러스 DNA는 서열번호 3과 서열번호 4의 프라이머를 사용한 PCR을 통해 확인하였다(도 2).
<1-2> 곤충세포(sf9)로의 트렌스펙션을 통한 재조합 베큘로바이러스의 제작
베큘로바이러스의 숙주세포인 sf9 곤충세포를 10% FBS 및 1% gentamycin이 포함된 Grace's insect Medium을 이용하여 27˚C 환경의 항온 배양기에서 배양한다.
배양된 sf9 세포를 6 - well 플레이트에 8 x 105 cells/well로 SF-900 II 무혈청 배지에 접종하고, 실시예 1-1 의 재조합 베큘로바이러스 DNA를 형질 도입시킨 후, CPE(cytopathic effect, 세포변성효과)가 형성될 때까지 27˚C 환경의 항온 배양기에서 배양한다.
재조합 베큘로바이러스 DNA를 형질 도입 시킨 sf9 세포에서 CPE가 형성되는 것을 확인한 후, 세포 용해물을 제조하고, 세포 내에서 발현된 재조합 VP1 단백질을 SDS-PEG 젤에 전기영동하고, 발현 패턴을 Coomassie-blue R-250으로 염색하여 분석(도 3)하였으며, 6X- His 항체를 이용한 웨스턴 블랏(도 4)을 통하여 VP1 단백질을 발현을 확인하였다. 이후, 재조합 VP1 단백질(서열번호 2)이 발현이 확인된 바이러스 스탁(stock)을 이용한 연속 감염을 통하여 바이러스를 스케일-업 하였다.
< 실시예 2> 재조합 VP1 단백질을 이용한 항체의 생산
실시예 1에서 스케일 업 한 인간 노로바이러스 VP1 재조합 바이러스 유사 입자(rVLP)를 사이즈 추출 크로마토그래피(size exclusion chromatography) 를 통하여 정제하고, 정제된 rVLP를 Millipore 사의 센트리콘(Centricon)을 이용하여 농축하였다.
농축된 rVLP는 쿠마씨 블루(Coomassie-blue) 염색(도 5) 및 웨스턴 블랏(도 6)을 통하여 확인하고, BCA protein Assay(Thermo #23227)을 통하여 농도를 확인하였다(도 7).
상기에서 정제 농축한 rVLP를 Mouse BALB/C, Female, 6주 령 3마리에 주사하여 폴리클로날 항체를 생산하였다.
Primary Injection 후 3주 후에 1st Boosting, 5주 후에 1st Bleeding ELISA test(도 8)를 통하여 항체합성 여부를 판단하였으며, 6주 후 2nd Boosting을 실시한 뒤 8주째에 2nd Bleeding ELISA test(도 9)를 통하여 최종 항체 생성 여부 및 titer를 측정하였다. 9주째에 Heart Puncture를 통하여 각각 mouse의 항 혈청 (antisera)을 채취하였다.
<실시예 3> ELISA assay를 통한 제작한 anti-rVLP 항체의 확인
실시예 1에서 발현하고 농축한 rVLP를 1ng/ml에서 0.1pg/ml까지 순차 희석을 하고, 상기의 희석한 rVLP를 검체로 하여 이뮤론 IB 플레이트(Immulon IB plate)에 코팅하고, 4℃ 에서 오버 나잇으로 배양한 후, 세척하고, 5% non fat milk PBS 로 상온에서 3시간 동안 브록킹 하였다. 이어서, 실시예 2의 항체를 1:1,000 비율로 2% non fat milk PBS에 희석 하여, 상기에서 코팅한, rVLP와 상온에서 1시간 동안 반응 시킨 후 세척하고, 2차 항체로서 anti mouse IgG labeled HRP 를 1:10,000 비율로 2% non fat milk PBS에 희석 하여 각각의 웰에 첨가하고, 상온에서 1시간 동안 반응 시킨 후 세척하고, TMB(테트라메틸벤지딘) 기질 솔루션 100㎕ 를 각각의 웰에 첨가하고 10 내지 15분간 정치한 후, 스탑 솔루션을 넣어서 반응을 종료 시켰다. 플레이트는 450nm 흡광도 측정으로 발색 반응을 확인하였다(도 10).
<실시예 4 및 비교예 1 내지 2 > 인체 유래 검체에의 적용
물환경바이러스 소재은행으로부터 인간 노로바이러스 양성 사람 분변 검체 10종을 분양 받아 본 실험에 사용하였다.
상기 분양 받은 사람 분변 검체를 실시예 2의 항인간 노로바이러스 항체를 이용한 ELISA assay 와 현재 시판중인 사용화 노로바이러스 검출 키트 에스디 바이오라인 노로바이러스(SD BIOLINE Norovirus; Standard Diagnostics, Korea) (비교예 1) 및 퀵나비TM-노로2(QuickNaviTM Norovirus2; Denka Seiken Co., Ltd., Japen)(비교예 2)을 통하여 노로바이러스 진단 시험을 하였다(표 1, 도 11).
검체 1 검체 2 검체 3 검체 4 검체 5 검체 6 검체 7 검체 8 검체 9 검체 10
실시예 4 양성 양성 양성 양성 양성 양성 양성 양성 양성 양성
비교예 1 양성 음성 음성 음성 양성 양성 음성 양성 음성 양성
비교예 2 양성 음성 음성 음성 양성 음성 양성 양성 음성 양성
상기 표 1에 실험 결과를 나타내었다. 실시예 4에 따라 본 발명의 항인간 노로바이러스 항체를 이용한 결과에서는 10개의 검체 모두 양성 반응을 보였으며, 비교예 1 에스디 바이오라인 노로바이러스 는 10 개중 5개의 양성 반응, 비교예 2 퀵나비TM-노로2 도 10개중 5개의 양성 반응을 보였다.
상기에서는 본 발명의 바람직한 실시예를 참조하여 설명하였지만, 해당기술 분야의 숙련된 당업자는 하기의 특허 청구범위에 기재된 본 발명의 상상 및 영역으로부터 벗어나지 않는 범위 내에서 본 발명을 다양하게 수정 및 변형시킬 수 있음을 이해할 수 있을 것이다.
<110> CATHOLIC UNIVERSITY OF DAEGU INDUSTRY ACADEMIC COOPERATION FOUNDATION <120> ANTI-HUMAN NOROVIRUS ANTIBODIES AND USE THEREOF <130> DPA-0584 <160> 4 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 1620 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> HuNoV VP1 <400> 1 atgaagatgg cgtcgagtga cgccaaccca tctgatgggt ccgcagccaa cctcgtccca 60 gaggtcaaca atgaggttat ggctttggag cccgttgtcg gtgccgctat tgcggcgcct 120 gtagcgggcc aacaaaatgt gattgacccc tggattagaa ataattttgt acaagcccct 180 ggtggagagt tcacagtatc ccctagaaac gctccaggtg aaatactatg gagcgcgccc 240 ttaggccctg atctgaatcc ctacctatcc catttggcca gaatgtataa tggttatgca 300 ggtggttttg aagtgcaggt gatcctcgcg gggaacgcgt tcaccgccgg aaaaattata 360 tttgcagcag tcccaccaaa ttttccaact gaaggcttga gtcccagcca ggtcactatg 420 ttcccccaca taatagtgga tgttaggcaa ttggaacctg tgttgatccc cttacctgat 480 gttaggaata acttctacca ctataatcag tcaaatgatc ctaccattaa attgatagca 540 atgctgtata caccacttag ggctaataat gctggggagg atgtcttcac agtctcttgt 600 cgagttctca cgaggccatc ccctgatttt gattttatat ttttggtgcc acctacagtt 660 gagtcaagaa ctaaaccatt tactgtccca atcctaactg ttgaagaaat gaccaattca 720 agattcccca ttcctttgga aaaattgttt acgggtccca gcagtgcctt tgttgttcaa 780 ccacaaaatg gcagatgcac gactgatggc gtgctcttag gcaccaccca actgtctcct 840 gtcaacatct gcaccttcag aggggatgtc acccacattg caggttctcg taattacaca 900 atgaatttgg cttctctaaa ttggaacaat tatgacccaa cagaagaagt tccagcccct 960 ctaggaactc cagatttcgt gggaaagatc caaggtgtgc tcactcaaac cacaaaggga 1020 gatggttcga cccgtggcca taaagctaca gtttacactg ggagtgcccc ctttactcca 1080 aagctgggca gtgttcaatt cagtactgat acagaaaatg attttgaaac tcaccaaaac 1140 acaaaattca ccccagtcgg tgtcatccag gatggtagca ccacccaccg aaatgaaccc 1200 caacaatggg tgctcccaag ttattcaggt agaaatgtcc aaaatgtaca cctagcccct 1260 gctgtagccc ccacttttcc gggtgaacaa cttcttttct ttaggtccac tatgcccgga 1320 tgcagcgggt atcccaacat ggatttggat tgcctactcc cccaggagtg ggtgcagcac 1380 ttctaccaag aggcagctcc agcacaatct gatgtggctc tattgagatt tgtgaatcca 1440 gacacgggta gggtcctgtt tgagtgcaag cttcataaat caggctatgt cacagtggct 1500 cacaccggcc agcatgattt ggtcatcccc cccaatggtt attttaggtt tgattcctgg 1560 gttaatcaat tctacacact tgcccccatg ggaaatggaa cggggcgtag acgtgcatta 1620 1620 <210> 2 <211> 540 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HuNoV VP1 <400> 2 Met Lys Met Ala Ser Ser Asp Ala Asn Pro Ser Asp Gly Ser Ala Ala 1 5 10 15 Asn Leu Val Pro Glu Val Asn Asn Glu Val Met Ala Leu Glu Pro Val 20 25 30 Val Gly Ala Ala Ile Ala Ala Pro Val Ala Gly Gln Gln Asn Val Ile 35 40 45 Asp Pro Trp Ile Arg Asn Asn Phe Val Gln Ala Pro Gly Gly Glu Phe 50 55 60 Thr Val Ser Pro Arg Asn Ala Pro Gly Glu Ile Leu Trp Ser Ala Pro 65 70 75 80 Leu Gly Pro Asp Leu Asn Pro Tyr Leu Ser His Leu Ala Arg Met Tyr 85 90 95 Asn Gly Tyr Ala Gly Gly Phe Glu Val Gln Val Ile Leu Ala Gly Asn 100 105 110 Ala Phe Thr Ala Gly Lys Ile Ile Phe Ala Ala Val Pro Pro Asn Phe 115 120 125 Pro Thr Glu Gly Leu Ser Pro Ser Gln Val Thr Met Phe Pro His Ile 130 135 140 Ile Val Asp Val Arg Gln Leu Glu Pro Val Leu Ile Pro Leu Pro Asp 145 150 155 160 Val Arg Asn Asn Phe Tyr His Tyr Asn Gln Ser Asn Asp Pro Thr Ile 165 170 175 Lys Leu Ile Ala Met Leu Tyr Thr Pro Leu Arg Ala Asn Asn Ala Gly 180 185 190 Glu Asp Val Phe Thr Val Ser Cys Arg Val Leu Thr Arg Pro Ser Pro 195 200 205 Asp Phe Asp Phe Ile Phe Leu Val Pro Pro Thr Val Glu Ser Arg Thr 210 215 220 Lys Pro Phe Thr Val Pro Ile Leu Thr Val Glu Glu Met Thr Asn Ser 225 230 235 240 Arg Phe Pro Ile Pro Leu Glu Lys Leu Phe Thr Gly Pro Ser Ser Ala 245 250 255 Phe Val Val Gln Pro Gln Asn Gly Arg Cys Thr Thr Asp Gly Val Leu 260 265 270 Leu Gly Thr Thr Gln Leu Ser Pro Val Asn Ile Cys Thr Phe Arg Gly 275 280 285 Asp Val Thr His Ile Ala Gly Ser Arg Asn Tyr Thr Met Asn Leu Ala 290 295 300 Ser Leu Asn Trp Asn Asn Tyr Asp Pro Thr Glu Glu Val Pro Ala Pro 305 310 315 320 Leu Gly Thr Pro Asp Phe Val Gly Lys Ile Gln Gly Val Leu Thr Gln 325 330 335 Thr Thr Lys Gly Asp Gly Ser Thr Arg Gly His Lys Ala Thr Val Tyr 340 345 350 Thr Gly Ser Ala Pro Phe Thr Pro Lys Leu Gly Ser Val Gln Phe Ser 355 360 365 Thr Asp Thr Glu Asn Asp Phe Glu Thr His Gln Asn Thr Lys Phe Thr 370 375 380 Pro Val Gly Val Ile Gln Asp Gly Ser Thr Thr His Arg Asn Glu Pro 385 390 395 400 Gln Gln Trp Val Leu Pro Ser Tyr Ser Gly Arg Asn Val Gln Asn Val 405 410 415 His Leu Ala Pro Ala Val Ala Pro Thr Phe Pro Gly Glu Gln Leu Leu 420 425 430 Phe Phe Arg Ser Thr Met Pro Gly Cys Ser Gly Tyr Pro Asn Met Asp 435 440 445 Leu Asp Cys Leu Leu Pro Gln Glu Trp Val Gln His Phe Tyr Gln Glu 450 455 460 Ala Ala Pro Ala Gln Ser Asp Val Ala Leu Leu Arg Phe Val Asn Pro 465 470 475 480 Asp Thr Gly Arg Val Leu Phe Glu Cys Lys Leu His Lys Ser Gly Tyr 485 490 495 Val Thr Val Ala His Thr Gly Gln His Asp Leu Val Ile Pro Pro Asn 500 505 510 Gly Tyr Phe Arg Phe Asp Ser Trp Val Asn Gln Phe Tyr Thr Leu Ala 515 520 525 Pro Met Gly Asn Gly Thr Gly Arg Arg Arg Ala Leu 530 535 540 <210> 3 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VP1 positive sense primer <400> 3 atgaagatgg cgtcgagtga c 21 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VP1 negative sense primer <400> 4 taatgcacgt ctacgccccg 20

Claims (10)

  1. 사람 노로바이러스 GII 타입 캡시드 구조 단백질 VP1의 전체 아미노산 서열을 포함하는 항원 펩타이드에 결합하는 항인간 노로바이러스 항체.
  2. 제 1항에 있어서,
    상기 항원 펩타이드는 서열 번호 2의 아미노산으로 이루어진 것을 특징으로 하는, 항인간 노로바이러스 항체.
  3. 제 1항에 있어서,
    상기 항원 펩타이드는 서열번호 1의 염기 서열로부터 트렌스레이션된 아미노산으로 이루어 진 것을 특징으로 하는, 항인간 노로바이러스 항체.
  4. 제 1항에 있어서,
    상기 항체는 다클론 항체인, 항인간 노로바이러스 항체.
  5. 제 1항에 있어서,
    상기 항체는 단일 클론 항체인, 항인간 노로바이러스 항체.
  6. 제 1항에 있어서,
    상기 항체는 휴머나이즈된, 항인간 노로바이러스 항체.
  7. 제 1항에 있어서,
    상기 항원 펩타이드는 사람 노로바이러스 GII 타입 캡시드 구조 단백질 VP1의 바이러스-유사 입자(VLP)인, 항인간 노로바이러스 항체.
  8. 제 1항 내지 제 7항 중 어느 한 항에 기재된 항체를 포함하는 인간 노로바이러스 검출 키트.
  9. 제 8항에 있어서,
    상기 검출 키트는 스트립, 카세트, 막대 형태인 인간 노로바이러스 검출 키트.
  10. 인간 노로바이러스 GII 타입 감염 의심 검체를 제 1항 내지 제 7항 중 어느 한 항에 기재된 항체와 반응시켜, 면역학적 측정 방법에 따라 노로바이러스를 검출하는 것을 특징으로 하는 인간 노로바이러스 검출 방법.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20200020857A (ko) * 2017-07-31 2020-02-26 닛폰세이테츠 가부시키가이샤 용융 아연 도금 강판

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