KR20160040553A - 다발성 경화증 치료 및 예방용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 다발성 경화증 치료 및 예방용 조성물에 관한 것이다. 보다 구체적으로는 텔로머라제로부터 유래된 펩타이드를 포함하는 조성물로서 다발성 경화증 치료 및 예방에 효과적인 조성물에 관한 것이다.
추가적으로, 본 발명에 따른 서열번호의 서열을 갖는 펩티드 또는 상기 서열과 80%의 상동성을 갖는 서열을 갖는 펩티드 또는 단편인 펩티드가 다발성 경화증의 치료 및 예방에 우수한 효과를 가지는 것을 이용하여 다발성 경화증을 치료 및 예방하는 방법을 제공하는 것이다. 보다 구체적으로는 상기 펩티드를 저용량으로 투여하여 부작용 없는 다발성 경화증 치료 및 예방 방법을 제공하는 것이다.

Description

다발성 경화증 치료 및 예방용 조성물{COMPOSITION FOR TREATING AND PREVENTING MULTIPLE SCLEROSIS}

본 발명은 다발성 경화증 치료 및 예방용 조성물에 관한 것이다. 보다 구체적으로는 텔로머라제로부터 유래된 펩타이드를 포함하는 조성물로서 다발성 경화증 치료 및 예방용 조성물에 관한 것이다.

다발성 경화증(multiple sclerosis)은 자가면역성 염증성 퇴행성 신경질환 (autoimmune inflammatory neurodegenerative disease)의 대표적 질환으로 아시아계와 아프리카계 사람에게는 발생빈도가 그리 높지 않은 편이나 유럽계 사람 특히 30대 백인 여성에게서 가장 많이 발생하며, 유럽계 백인에서는 100,000명당 200명의 빈도로 발병한다.

다발성 경화증은 시각 장애, 사지의 근무력증과 이로 인한 보행장애, 통증 또는 무감각을 수반하는 피부감각 장애, 배변 및 배뇨 장애, 언어 및 청각 장애, 인지 장애 등을 수반하며 이들 장애는 완화 및 재발이 반복되면서 점차 심해지는 경우가 많다. 이러한 신경성 장애는 중추신경계 내의 염증성 반응으로 인한 신경세포의 축삭을 둘러싸고 있는 수초(myelin sheath)의 손상에 기인한다. 병변은 뇌와 척수의 백질 부위에 산재성으로 나타나며 병변부에서는 전형적 현상인 정맥주위 염증세포 침윤을 수반하는 염증성 반응과 신경섬유의 수포성 수초탈락이 관찰되며 그 외에도 희소돌기아교세포의 소실, 성상아교세포의 증식 등이 수반된다.

다발성 경화증의 원인 및 병리학적 진행과정이 아직까지 완전히 밝혀지지 않았으나, 세포성 면역계와 체액성 면역계가 모두 관여하는 자가면역 반응인 것으로 알려졌다 (Engelhardt, Clin. Exp. Neuroimmunol. 1: 79-93, 2010).

다발성 경화증은 이미 언급한 바와 같이 세포성 면역계와 체액성 면역계가 모두 관여하는 면역질환이므로 각종 면역치료법이 시도되었다: 1) 면역허용성 항원을 이용한 자가반응성 T 세포의 민감소실법, 2) T 세포 지향성 사이토카인(cytokine), B 세포 표면분자 또는 세포부착분자에 대한 단일클론항체 또는 인터페론-감마(interferon-γ) 등을 이용한 면역요법, 3) 혈장분리반출법 등이 시도되었다. 이러한 치료법은 긍정적인 결과를 가져오지만, 바람직하지 못한 부작용으로 인해 사용이 제한적이다(Steinman & Zamvil, Ann. Neurol. 60:12-21, 2006). 따라서 다발성 경화증 환자를 위해 부작용과 독성이 없는 안전한 약물의 개발이 절실한 실정이다.

KR 2013-0078395 A

ENGELHARDT, Britta, 'T cell migration into the central nervous system during health and disease: different molecular keys allow access to different central nervous system compartments', Clinical and Experimental Neuroimmunology, Vol.1, No.2, pp.79-93, (2010)

이에 본 발명자들은 부작용을 최소화하면서도 효과가 우수한 다발성 경화증 치료 및 예방용 조성물 치료 및 예방용 조성물을 개발하고자 예의 노력한 결과 본 발명을 완성하기에 이르렀다.

본 발명자들은 텔로머라제로부터 유래되는 펩티드가 다발성 경화증 치료 및 예방용 조성물 치료 및 예방에 탁월한 효과를 가질 수 있음을 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명의 목적은 다발성 경화증 치료 및 예방용 조성물 치료 및 예방에 효과를 가지는 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 일측면에 따라, 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드, 상기 아미노산 서열과 80%이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드 또는 그 단편인 펩티드를 포함하는 다발성 경화증 치료 및 예방용 조성물이 제공된다.

본 발명의 일측면에 따른 조성물에 있어서, 상기 단편은 3개 이상의 아미노산으로 구성된 단편인 일 수 있다.

본 발명의 일측면에 따른 조성물은 상기 펩티드를 저용량으로 포함하는 것일 수 있다.

본 발명의 일측면에 따른 조성물은 상기 펩티드를 10nmol/kg이하의 농도로 포함하는 것일 수 있다.

본 발명의 일측면에 따른 조성물은 상기 펩티드를 5nmol/kg 이하의 농도로 포함하는 것 일 수 있다.

본 발명의 일측면에 따른 조성물은 상기 펩티드를 1nmol/kg 이하의 농도로 포함하는 것일 수 있다.

본 발명의 일측면에 따른 조성물은 상기 펩티드를 0.2nmol/kg 이하의 농도로 포함하는 것일 수 있다.

본 발명의 일측면에 따른 조성물은 약학 조성물일 수 있다.

본 발명의 일측면에 따른 조성물은 식품 조성물일 수 있다.

본 발명의 다른 측면에 따라, 상기 언급된 조성물을 치료를 필요로 하는 대상에게 투여하는 것을 특징으로 하는 다발성 경화증을 치료 및 예방하는 방법이 제공된다.

본 발명의 일측면에 따른 다발성 경화증을 치료 및 예방하는 방법은 펩티드를 저용량으로 포함하는 조성물을 사용할 수 있다.

본 발명에 따른 서열번호 1의 서열을 갖는 펩티드(이하, 펩티드 "RIA"라 함) 또는 상기 서열과 80%의 상동성을 갖는 서열을 갖는 펩티드 또는 단편인 펩티드는 다발성 경화증의 치료 및 예방에 우수한 효과를 가지고, 특히 저용량으로 투여하였을 때 좋은 효과를 보이는 장점이 있다.

도 1은 효과적인 투약경로를 확인하기 위한 실험으로서 실험적 자가면역성 뇌척수염(experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE) 유도(induction)시 (0일째) 복강 내 및 피하 주사로 각각 별도의 투여량으로 펩티드 RIA를 투여(200 nmol/kg 복강 내 주사(intraperitoneal, IP), 50nmol/kg 피하 주사(subcutaneous, SC))한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 2는 효과적인 투약경로를 확인하기 위한 실험으로서 EAE 증상이 정점(정점)에 도달 시(22일째) 복강 내 및 피하 주사로 각각 별도의 투여량으로 펩티드 RIA를 투여(200 nmol IP, 50 nmol SC)한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 3은 EAE 유도(0일째)시 RIA 50nmol/kg, RIA 25nmol/kg, RIA 10nmol/kg을 투여한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 펩티드 RIA를 증상 발생 후(22일째) RIA 50nmol/kg, RIA 25nmol/kg, RIA1 0nmol/kg, RIA 5nmol/kg 투여한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 5는 EAE 유도(0일째)시 RIA 25nmol/kg, RIA 5nmol/kg, RIA 1nmol/kg, RIA 0.2nmol/kg을 투여한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 6은 펩티드 RIA를 증상 발생 후(22일째) RIA 25nmol, RIA 5nmol, RIA 1nmol, RIA 0.2nmol을 투여한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 7은 일차 항원 자극(primary antigenic stimulation) (수초 핍지교세포 단백질, myelin oligodendroglial protein, MOG_35-45)후, 펩티드 RIA 1nmol/kg, 0.2nmol/kg 및 PBS를 투여 후, 배수 림프 절(draining lymph node)에서 분리한 세포에 체외 이차 항원 자극(in vitro secondary antigenic stimulation) 후 T세포 증식 정도를 확인한 결과를 나타낸 그래프이다.

발명의 실시를 위한 최선의 형태

본 발명은 다양한 변환을 가할 수 있고 여러 가지 실시예를 가질 수 있는 바, 이하, 본 발명을 보다 구체적으로 설명한다. 그러나, 이는 본 발명을 특정한 실시 형태에 대해 한정하려는 것이 아니며, 본 발명의 사상 및 기술 범위에 포함되는 모든 변환, 균등물 내지 대체물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 본 발명을 설명함에 있어서 관련된 공지 기술에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 흐릴 수 있다고 판단되는 경우 그 상세한 설명을 생략한다.

텔로미어(telomere)는 염색체의 말단에 반복적으로 존재하는 유전 물질로서, 해당 염색체의 손상이나 다른 염색체와의 결합을 방지한다고 알려져 있다. 세포가 분열할 때마다 텔로미어의 길이는 조금씩 짧아지는데, 일정한 횟수 이상의 세포 분열이 있게 되면 텔로미어는 매우 짧아지고, 그 세포는 분열을 멈추고 죽게 된다. 반면 텔로미어를 길게 하면 세포의 수명이 연장된다고 알려져 있으며, 그 예로 암세포에서는 텔로머라제(telomerase)라는 효소가 분비되어 텔로미어가 짧아지는 것을 막기 때문에, 암세포가 죽지 않고 계속 증식할 수 있다고 알려져 있다. 본 발명자들은 텔로머라제로부터 유래되는 펩티드가 다발성 경화증의 치료 및 예방에 효과적임을 확인하고 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명의 일측면에서, 서열 번호 1의 펩티드, 서열번호 1의 단편인 펩티드 또는 상기 펩티드 서열과 80% 이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드는 텔로머라제, 구체적으로 인간(Homo sapiens) 텔로머라제에서 유래한 펩티드를 포함한다.

본 명세서에 개시된 펩티드는 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드를 포함할 수 있다. 또한, 본 명세서에 개시된 펩티드는, 서열번호 1을 포함하는 펩티드 또는 그 단편들과 1개 이상의 아미노산, 2개 이상의 아미노산, 3개 이상의 아미노산, 4개 이상의 아미노산, 5개 이상의 아미노산, 6개 이상의 아미노산 또는 7개 이상의 아미노산이 변화된 펩티드를 포함할 수 있다.

본 발명의 일측면에서, 아미노산 변화는 펩티드의 물리화학적 특성이 변경되도록 하는 성질에 속한다. 예를 들어, 펩티드의 열안정성을 향상시키고, 기질 특이성을 변경시키고, 최적의 pH를 변화시키는 등의 아미노산 변화가 수행될 수 있다.

본 명세서에서 "아미노산"이라 함은 자연적으로 펩티드로 통합되는 22개의 표준 아미노산들 뿐만 아니라 D-아이소머 및 변형된 아미노산들을 포함한다. 이에 따라, 본 발명의 일측면에서 펩티드는 D-아미노산을 포함하는 펩티드일 수 있다. 한편, 본 발명의 다른 측면에서 펩티드는 번역 후 변형(post-translational modification)된 비표준 아미노산 등을 포함할 수 있다. 번역 후 변형의 예는 인산화(phosphorylation), 당화(glycosylation), 아실화(acylation) (예컨대, 아세틸화(acetylation), 미리스토일화(myristoylation) 및 팔미토일화(palmitoylation)를 포함), 알킬화(alkylation), 카르복실화(carboxylation), 히드록실화(hydroxylation), 당화반응(glycation), 비오티닐화(biotinylation), 유비퀴티닐화(ubiquitinylation), 화학적 성질의 변화(예컨대, 베타-제거 탈이미드화, 탈아미드화) 및 구조적 변화(예컨대, 이황화물 브릿지의 형성) 를 포함한다. 또한, 펩티드 컨쥬게이트를 형성하기 위한 가교제(crosslinker)들과의 결합과정에서 일어나는 화학 반응들에 의해 생기는 아미노산의 변화, 예컨대 아미노기, 카르복시기 또는 사이드 체인에서의 변화와 같은 아미노산의 변화를 포함한다.

본 명세서에 개시된 펩티드는 자연 그대로의 공급원으로부터 동정 및 분리된 야생형 펩티드일 수 있다. 한편, 본 명세서에 개시된 펩티드는 서열번호 1의 단편들인 펩티드와 비교하여 하나 이상의 아미노산이 치환, 결실 및/또는 삽입된 아미노산 서열을 포함하는, 인공 변이체일 수 있다. 인공 변이체에서 뿐만 아니라 야생형 폴리펩티드에서의 아미노산 변화는 단백질의 폴딩(folding) 및/또는 활성에 유의한 영향을 미치지 않는 보존성 아미노산 치환을 포함한다. 보존성 치환의 예들은 염기성 아미노산(아르기닌, 리신 및 히스티딘), 산성 아미노산(글루탐산 및 아스파르트산), 극성 아미노산(글루타민 및 아스파라긴), 소수성 아미노산(루신, 이소로이신, 발린 및 메티오닌), 방향족 아미노산(페닐알라닌, 트립토판 및 티로신), 및 작은 아미노산(글리신, 알라닌, 세린 및 트레오닌)의 군의 범위 내에 있다. 일반적으로 특이적 활성을 변경시키지 않는 아미노산 치환이 본 분야에 공지되어 있다. 가장 흔하게 발생하는 교환은 Ala/Ser, Val/Ile, Asp/Glu, Thr/Ser, Ala/Gly, Ala/Thr, Ser/Asn, Ala/Val, Ser/Gly, Tyr/Phe, Ala/Pro, Lys/Arg, Asp/Asn, Leu/Ile, Leu/Val, Ala/Glu, 및 Asp/Gly, 그리고 이들과 반대인 것들이다. 보존적 치환의 다른 예는 다음 표와 같다.

펩티드의 생물학적 특성에 있어서의 실제적인 변형은 (a) 치환 영역 내의 폴리펩티드 골격의 구조, 예를 들면 시트 또는 나선 입체 구조를 유지하는데 있어서의 이들의 효과, (b) 표적 부위에서의 상기 분자의 전하 또는 소수성을 유지하는데 있어서의 이들의 효과, 또는 (c) 측쇄의 벌크를 유지하는데 있어서의 이들의 효과가 상당히 상이한 치환부를 선택함으로써 수행된다. 천연 잔기는 통상의 측쇄 특성에 기준하여 다음 그룹으로 구분된다:

(1) 소수성: 노르루이신, met, ala, val, leu, ile;

(2) 중성 친수성: cys, ser, thr;

(3) 산성: asp, glu;

(4) 염기성: asn, gln, his, lys, arg;

(5) 쇄 배향에 영향을 미치는 잔기: gly, pro; 및

(6) 방향족: trp, tyr, phe.

비-보존적 치환은 이들 부류 중의 하나의 구성원을 또다른 부류로 교환함으로써 이루어질 것이다. 펩티드의 적당한 입체 구조를 유지하는 것과 관련이 없는 어떠한 시스테인 잔기도 일반적으로 세린으로 치환되어 상기 분자의 산화적 안정성을 향상시키고 이상한 가교결합을 방지할 수 있다. 역으로 말하면, 시스테인 결합(들)을 상기 펩티드에 가하여 그의 안정성을 향상시킬 수 있다

펩티드의 다른 유형의 아미노산 변이체는 항체의 글리코실화 패턴이 변화된 것이다. 변화란 의미는 펩티드에서 발견된 하나 이상의 탄수화물 잔기의 결실 및(또는) 펩티드 내에 존재하지 않는 하나 이상의 글리코실화 부위의 부가를 나타낸다.

펩티드의 글리코실화는 전형적으로 N-연결되거나 O-연결된 것이다. N-연결된이란 탄수화물 잔기가 아스파라긴 잔기의 측쇄에 부착된 것을 말한다. 트리펩티드 서열 아스파라긴-X-세린 및 아스파라긴-X-트레오닌 (여기서, X는 프롤린을 제외한 임의의 아미노산임)은 탄수화물 잔기를 아스파라긴 측쇄에 효소적 부착시키기 위한 인식 서열이다. 따라서, 이들 트리펩티드 서열 중의 하나가 폴리펩티드에 존재함으로써, 잠재적인 글리코실화 부위가 생성된다. O-연결된 글리코실화는 당 N-아세틸갈락토사민, 갈락토스 또는 크실로스 중의 하나를 히드록시아미노산, 가장 통상적으로는 세린 또는 트레오닌에 부착시키는 것을 의미하지만, 5-히드록시프롤린 또는 5-히드록시리신을 사용할 수도 있다.

펩티드로의 글리코실화 부위의 부가는 하나 이상의 상기 언급된 트리펩티드 서열을 함유하도록 아미노산 서열을 변화시킴으로써 편리하게 수행된다 (N-연결된 글리코실화 부위의 경우). 이러한 변화는 하나 이상의 세린 또는 트레오닌 잔기를 최초 항체의 서열에 부가하거나 이들 잔기로 치환함으로써 이루어질 수도 있다 (O-연결된 글리코실화 부위의 경우).

또한 본 발명의 일측면에 따른 서열 번호 1의 서열을 갖는 펩티드, 서열 번호 1의 서열의 단편인 펩티드 또는 상기 펩티드 서열과 80% 이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드는 세포 내 독성이 낮고, 생체 내 안정성이 높다는 장점을 가진다. 본 발명에서의 서열번호 1은 텔로머라제 유래 펩티드로서 하기와 같이 16개의 아미노산으로 이루어진 펩티드이다.

서열번호 1: EARPALLTSRLRFIPK

본 발명의 일측면에서는 서열번호 1 의 아미노산 서열을 포함하는(comprising) 펩티드, 상기 아미노산 서열과 80%이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드 또는 그 단편인 펩티드를 유효 성분으로 포함하는 다발성 경화증 치료 및 예방 조성물을 제공한다.

본 발명의 다른 측면에서는, 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는(comprising) 펩티드, 상기 아미노산 서열과 80%이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드 또는 그 단편인 펩티드의 용도로서, 다발성 경화증을 치료 또는 예방에의 용도일 수 있다.

본 발명의 다른 측면에서는, 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는(comprising) 펩티드, 상기 아미노산 서열과 80%이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드 또는 그 단편인 펩티드의 용도로서, 다발성 경화증 치료 또는 예방용 조성물의 제조를 위한 용도일 수 있다.

본 발명의 다른 측면에서는, 다발성 경화증을 치료 또는 예방에의 용도를 위한, 또는 다발성 경화증 치료 또는 예방용 조성물의 제조를 위한 용도의, 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는(comprising) 펩티드, 상기 아미노산 서열과 80%이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드 또는 그 단편인 펩티드가 제공된다.

본 발명의 일측면에 따른 다발성 경화증 치료 및 예방 조성물은 일측면에서는 서열번호 1 의 아미노산 서열을 포함하는(comprising) 펩티드, 상기 아미노산 서열과 80%이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드 또는 그 단편인 펩티드를 0.01g/L 내지 1kg/L, 구체적으로 0.1g/L 내지 100/L, 더 구체적으로 1g/L 내지 10g/L의 함량으로 포함할 수 있으나 용량에 따른 효과의 차이를 보이는 경우 이를 적절히 조절할 수 있다. 상기 범위 또는 그 이하의 범위로 포함하는 경우 본 발명의 의도한 효과를 나타내기에 적절할 뿐만 아니라, 조성물의 안정성 및 안전성을 모두 만족할 수 있으며, 비용 대비 효과의 측면에서도 상기 범위로 포함하는 것이 적절할 수 있다.

본 발명의 일측면에 따른 조성물은 인간, 개, 닭, 돼지, 소, 양, 기니아피그 또는 원숭이를 포함하는 모든 동물에 적용될 수 있다.

본 발명의 일측면에서 조성물은 서열번호 1 의 아미노산 서열을 포함하는(comprising) 펩티드, 상기 아미노산 서열과 80%이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드 또는 그 단편인 펩티드를 유효 성분으로 포함하는 다발성 경화증 치료 및 예방용 약학 조성물을 제공한다. 본 발명의 일측면에 따른 약학 조성물은 경구, 직장, 경피, 정맥 내, 근육 내, 복강 내, 골수 내, 경막 내 또는 피하 등으로 투여될 수 있다.

경구 투여를 위한 제형은 정제, 환제, 연질 또는 경질 캅셀제, 과립제, 산제, 액제 또는 유탁제일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 비경구 투여를 위한 제형은 주사제, 점적제, 로션, 연고, 겔, 크림, 현탁제, 유제, 좌제, 패취 또는 분무제일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 일측면에 따른 약학 조성물은 필요에 따라 희석제, 부형제, 활택제, 결합제, 붕해제, 완충제, 분산제, 계면 활성제, 착색제, 향료 또는 감미제 등의 첨가제를 포함할 수 있다. 본 발명의 일측면에 따른 약학 조성물은 당업계의 통상적인 방법에 의해 제조될 수 있다.

본 발명의 일측면에 따른 약학 조성물의 유효 성분은 투여 받을 대상의 연령, 성별, 체중, 병리 상태 및 그 심각도, 투여 경로 또는 처방자의 판단에 따라 달라질 것이다. 이러한 인자에 기초한 적용량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 이의 1회 투여 용량은 예를 들어 1ng/kg 내지 10mg/kg, 구체적으로는 10ng/kg 내지 1mg/kg, 더 구체적으로는 0.1㎍/kg 내지 100 ㎍/kg, 보다 더 구체적으로는 0.2 ㎍/kg 내지 20 ㎍/kg이 될 수 있으나, 용량에 따른 효과의 차이를 보이는 경우 이를 적절히 조절할 수 있다. 본 발명의 일측면에 따른 약학 조성물은 1일 1회 내지 3회 투여될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니며, 용량에 따른 효과의 차이를 보이는 경우 이를 적절히 조절할 수 있고, 투여하고자 하는 대상의 연령, 건강 상태, 합병증 등 다양한 요인에 따라 달라질 수 있다.

본 발명의 일측면에서 조성물은 서열번호 1 의 아미노산 서열을 포함하는(comprising) 펩티드, 상기 아미노산 서열과 80%이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드 또는 그 단편인 펩티드를 유효 성분으로 포함하는 다발성 경화증 치료 및 예방 식품 조성물을 제공한다.

본 발명의 일측면에 따른 식품 조성물의 제형은 특별히 한정되지 않으나, 예를 들어, 정제, 과립제, 분말제, 액제, 고형 제제 등으로 제형화될 수 있다. 각 제형은 유효 성분 이외에 해당 분야에서 통상적으로 사용되는 성분들을 제형 또는 사용 목적에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있으며, 다른 원료와 동시에 적용할 경우 상승 효과가 일어날 수 있다.

본 명세서에서 사용된 용어들은 특정 구체예들을 설명하기 위한 목적으로만 의도된 것이지 본 발명을 한정하고자 하는 의도가 아니다. 명사 앞에 개수가 생략된 용어는 수량을 제한하고자 하는 것이 아니라 언급된 명사 물품이 하나 이상 존재하는 것을 나타내는 것이다. 용어 "포함하는", "갖는", 및 "함유하는"은 열린 용어로 해석된다(즉, "포함하지만 이에 한정되지는 않는"의 의미).

수치의 범위를 언급하는 것은 단지 그 범위 내에 속하는 각각의 별개의 수치들을 개별적으로 언급하는 것을 대신하는 쉬운 방법이기 때문이며, 그것이 아님이 명시되어 있지 않는, 각 별개의 수치는 마치 개별적으로 명세서에 언급되어 있는 것처럼 본 명세서에 통합된다. 모든 범위의 끝 값들은 그 범위 내에 포함되며 독립적으로 조합 가능하다.

본 명세서에 언급된 모든 방법들은 달리 명시되어 있거나 문맥에 의해 명백히 모순되지 않는 한 적절한 순서로 수행될 수 있다. 어느 한 실시예 및 모든 실시예 또는 예시적 언어 (예컨대, "~과 같은")를 사용하는 것은, 청구범위에 포함되어 있지 않는 한, 단지 본 발명을 더 잘 기술하기 위함이지 본 발명의 범위를 제한하고자 함이 아니다. 명세서의 어떤 언어도 어떤 비청구된 구성요소를 본 발명의 실시에 필수적인 것으로 해석되어서는 아니된다. 다른 정의가 없는 한, 본 명세서에 사용되는 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 갖는 사람에 의해 통상 이해되는 것과 같은 의미를 갖는다.

본 발명의 바람직한 구체예들은 본 발명을 수행하기 위해 발명자에게 알려진 가장 최적의 모드를 포함한다. 바람직한 구체예들의 변이들이 앞선 기재를 읽으면 당업자에게 명백하게 될 수 있다. 본 발명자들은 당업자들이 그러한 변이를 적절히 이용하길 기대하고, 발명자들은 본 명세서에 기재된 것과 다른 방식으로 본 발명이 실시되기를 기대한다. 따라서, 본 발명은, 특허법에 의해 허용되는 것과 같이, 첨부된 특허청구범위에서 언급된 발명의 요지의 균등물 및 모든 변형들을 포함한다. 더욱이, 모든 가능한 변이들 내에서 상기 언급된 구성요소들의 어떤 조합이라도 여기서 반대로 명시하거나 문맥상 명백히 모순되지 않는 한 본 발명에 포함된다. 본 발명은 예시적인 구체예들을 참조하여 구체적으로 나타내어지고 기술되었지만, 당업자들은 하기 청구범위에 의해 정의되는 발명의 정신 및 범위를 벗어나지 않고서도 형태 및 디테일에서 다양한 변화가 행해질 수 있음을 잘 이해할 것이다 .

하기의 실시예에서는 EAE 마우스 모델을 통하여 펩티드 RIA의 다발성 경화증의 예방 및 치료효과를 확인하고자 하였다.

발명의 실시를 위한 형태

이하, 실시예 및 실험예를 들어 본 발명의 구성 및 효과를 보다 구체적으로 설명한다. 그러나 아래 실시예 및 실험예는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위해 예시의 목적으로만 제공된 것일 뿐 본 발명의 범주 및 범위가 그에 의해 제한되는 것은 아니다.

실시예 1: 펩티드의 합성

서열번호 1의 펩티드(이하 "RIA"라 함)를 종래에 알려진 고상 펩티드 합성법에 따라 제조하였다. 구체적으로, 펩티드들은 ASP48S(Peptron, Inc., 대한민국 대전)를 이용하여 Fmoc 고상 합성법(solid phase peptide synthesis, SPPS)을 통해 C-말단부터 아미노산 하나씩 커플링함으로써 합성하였다. 다음과 같이, 펩티드들의 C-말단의 첫번째 아미노산이 수지에 부착된 것을 사용하였다. 예컨대 다음과 같다:

NH₂-Lys(Boc)-2-chloro-Trityl Resin

NH₂-Ala-2-chloro-Trityl Resin

NH₂-Arg(Pbf)-2-chloro-Trityl Resin

펩티드 합성에 사용한 모든 아미노산 원료는 N-term이 Fmoc으로 보호(protection)되고, 잔기는 모두 산에서 제거되는 Trt, Boc, t-Bu (t-butylester), Pbf (2,2,4,6,7-pentamethyl dihydro-benzofuran-5-sulfonyl) 등으로 보호된 것을 사용하였다. 예컨대 다음과 같다:

Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Met-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Ahx-OH, Trt-Mercaptoacetic acid.

커플링 시약(Coupling reagent)으로는 HBTU[2-(1H-Benzotriazole-1-yl)-1,1,3,3-tetamethylaminium hexafluorophosphate] / HOBt [N-Hydroxxybenzotriazole] /NMM [4-Methylmorpholine] 를 사용하였다. Fmoc 제거는 20%의 DMF 중 피페리딘(piperidine in DMF)을 이용하였다. 합성된 펩티드를 레진(Resin)에서 분리 및 잔기의 보호기 제거에는 절단 칵테일(Cleavage Cocktail) [TFA (trifluoroacetic acid) /TIS (triisopropylsilane) / EDT (ethanedithiol) / H₂O=92.5/2.5/2.5/2.5] 를 사용하였다.

아미노산 보호기가 결합된 출발 아미노산이 고상 지지체에 결합되어 있는 상태를 이용하여 여기에 해당 아미노산들을 각각 반응시키고 용매로 세척한 후 탈보호하는 과정을 반복함으로써 각 펩티드를 합성하였다. 합성된 펩티드를 수지로부터 끊어낸 후 HPLC로 정제하고, 합성 여부를 MS로 확인하고 동결 건조하였다.

본 실시예에 사용된 펩티드에 대해 고성능 액체 크로마토 그래피 결과, 모든 펩티드의 순도는 95% 이상이었다.

펩티드 RIA 제조에 관한 구체적인 과정을 설명하면 다음과 같다.

1) 커플링

NH₂-Lys(Boc)-2-chloro-Trityl Resin 에 보호된 아미노산(8당량)와 커플링 시약 HBTU(8당량)/HOBt(8당량)/NMM(16당량) 을 DMF에 녹여서 첨가한 후, 상온에서 2시간 동안 반응하고 DMF, MeOH, DMF순으로 세척하였다.

2) Fmoc 탈보호

20%의 DMF 중의 피페리딘(piperidine in DMF) 을 가하고 상온에서 5분 간 2회 반응하고 DMF, MeOH, DMF순으로 세척하였다.

3) 1과 2의 반응을 반복적으로 하여 펩티드 기본 골격 NH₂-E(OtBu)-A-R(Pbf)-P-A-L-L-T(tBu)-S(tBu)-R(Pbf)L-R(Pbf)-F-I-P-K(Boc)-2-chloro-Trityl Resin)을 만들었다.

4) 절단(Cleavage): 합성이 완료된 펩티드 레진에 절단 칵테일(Cleavage Cocktail) 을 가하여 펩티드를 레진에서 분리하였다.

5) 얻어진 혼합물에 냉각 디에틸 에테르(Cooling diethyl ether)를 가한 후, 원심 분리하여 얻어진 펩티드를 침전시킨다.

6) Prep-HPLC로 정제 후, LC/MS로 분자량을 확인하고 동결하여 분말(powder)로 제조하였다.

실시예 2: 마우스에서 EAE의 유도 및 평가방법

EAE 유도 방법

본 실시예에서는 다발성 경화증 동물 모델로서 EAE(실험적 자가면역성 뇌척수염, experimental autoimmune encephalomyelitis) 마우스 모델을 사용하였다. 다발성 경화증의 동물 모델로서 EAE 마우스 모델을 구축하는 방법에 관한 구체적인 내용은 다수의 선행문헌에 공지되어 있다.(Baker et al., Review article, ACNR, Volume 6, 2007; 김대승 외, Korean J Vet Res, 51(2), 139-149pp, 2011)

EAE 모델 구축을 위해 사용한 동물은 생후 6~8주령의 암컷 C57BL/6 (B6) 마우스를 사용하였다. 실험동물은 국립암센터 연구소 실험동물연구센터에서 국제실험동물관리 공인협회의 지침에 따라 사육하고 사용하였으며, 특정무병원체 (specific pathogen free, SPF) 환경에서 관리하였다.

EAE 마우스 모델은 하기의 표 2에 나타낸 바와 같이 5개의 군으로 나누어 실험하였다.

상기 분류된 5개의 군에 따라 EAE 동물 모델을 제조하는 방법은 다음과 같다. 생후 6~8주령의 암컷 C57BL/6 (B6) 마우스(Orient Bio Inc., Korea)에 완전 프로인트 애쥬번트(complete Freund's adjuvant, CFA) 250㎍ , 결핵균(Mycobacterium tuberculosis) H37Ra (Difco, Detroit, MI) 100 ㎍ , 그리고 MOG_35-55 펩티드(peptide)를 함유하고 있는 유화액을 피하 주사하고, 추가적으로 0 & 2 일에 백일해 독소(toxin) (List Biological Laboratories, Campbell, CA) 200ng을 복강 내 주사하였다. 대조군 마우스에게는 생리식염수만 실험군과 같은 방법으로 주사하였다. 펩티드 RIA 투여군에서는 RIA를 정해진 용량으로 복강 내(IP) 주사하거나 피하 주사(SC)하였다.

평가방법

EAE 마우스의 임상 증상은 매일 다음과 같은 증상 척도를 이용하여 평가하고 기록하였다.

EAE증상 척도

임상증상 평가를 위해, 마우스에게 MOG_-45 펩티드를 투여하고 10일 이후부터 매일 마우스에게 나타나는 증상을 점수로 기록하였다. 각 대조군과 실험군에서의 임상상태를 비교 분석하고 기준 날짜마다 체중을 측정하였다.

혈청 채취를 위해 케타민(Ketamin) 1000mg/kg을 복강 내 주사한 뒤 흉곽을 절개하고 좌심실을 천자하여 혈액 1-2 ml를 채취하였다. 채취한 혈액을 4℃에서 원심분리 (3000 rpm, 10분)하여 혈청을 분리하여 사용하였다.

세포 배양 및 T세포 증식 검사를 위해서는 마우스에서 혈액을 채취한 뒤 복강을 절개하여 샅고랑림프절(inguinal lymph node)과 비장을 적출하였다. 와이어-메쉬(Wire-mesh)를 이용하여 조직으로부터 단일세포 서스펜션(single-cell suspension)을 얻은 뒤 DPBS (Dulbecco's Phosphate Buffered Saline)를 사용하여 세척하고 원심분리 (1800 rpm, 3분)를 시행하였다. 이 단일세포 서스펜션을 10% FBS (Fetal Bovine Serum, Sigma-Aldrich), 1.4mM 글루타민, 20μM 2-ME(2-Hydroxyethylmercaptan, Sigma-Aldrich), 100U/ml 페니실린, 100μg/ml 스트렙토마이신(Life Technologies/BRL, Grand Island, NY)를 함유하고 있는 RPMI 배지 (Roswell Park Memorial Institute medium, Gibco, Eggenstein, Germany)에 2.5x10⁵ cells/well로 분주하였다. 배양액에 체외 이차 항원성(MOG_35-55) 및 비-항원성(plate-bound anti- CD3/soluble anti-CD28) 자극을 가한 후 37℃, 5% CO₂/air 에서 배양하였다. 배양한 T 세포에서 상층액을 제거하고 삼중수소 티미딘(3H-thymidine)을 첨가한 배양액을 넣고 18시간 더 배양한 뒤 감마-계수기(gamma-counter)로 티미딘 혼입 정도를 측정하였다.

또한, 조직병리 소견을 얻기 위해, 마우스의 척수와 뇌를 적출하여 4% 파라포름알데하이드(paraformaldehyde)에 6 시간 동안 고정하였다. 이후 30% sucrose에 4℃에서 하루 동안 유지시킨 후 파라핀 포매하였다. 조직을 절단하여 얻은 조직 절편에 대해 HE염색(Hematoxylin and eosin stain)을 시행하여 병변의 혈관주위 백혈구 침윤 정도를 평가하였으며, 룩솔 패스트 블루(Luxol fast blue, LFB) 염색을 시행하여 병변의 탈수초 정도를 평가하였다.

본 실시예에서 통계적 분석을 위하여, 모든 파라미터(parameter)들은 means +/- SD으로 표현하고, 각 그룹간의 비교는 크러스칼-왈리스 검정(Kruskal-Wallis test)를 이용하였다. 각각의 군은 만-휘트니 검정(Mann-Whitney test)를 이용하여 분석하였다.

실시예 3: EAE 마우스에 펩티드 처리 효과 확인

1. 투약 경로별 임상증상 비교

복강 내 주사(IP)와 피하 주사(SC) 중 효과적인 투약 경로를 확인하기 위하여 펩티드 RIA를 각각의 경로별 적정농도로 투여하였다. 복강 내 주사로는 RIA 200nmol (RIA 200nmol/kg), 피하 주사로는 RIA 50nmol (RIA 50nmol/kg)의 농도를 사용하였다.

피하와 복강 내 주사로 EAE 유도시 (0일째) 투여하는 군과, EAE 증상이 정점에 도달 시(22일째) 투여하는 군으로 나누어 실험을 실시하였다.

EAE 유도시 (0일째) 투여하는 군의 실험 결과 RIA를 투여한 두 군 (200nmol 복강 내 주사, 50nmol 피하 주사)에서 대조군보다 오히려 EAE 증상이 빨리 나타나고 더 오래 지속되는 현상이 확인되었다. 결과는 도 1에 도시하였다. 특히, 피하 주사 50nmol 군이 복강 내 주사 200nmol 투여군보다 증상이 심하고 더 오래 지속되었다. RIA 투여군에서 EAE 증상이 지속되는 동안 간대성 근경련(myoclonus) 양상의 비정상 운동(abnormal movement)이 부작용으로 나타나는 것이 확인되었다. 그러나 대조군에서는 간대성 근경련 양상이 나타나지 않았다.

다음으로 피하와 복강 내 주사로 EAE 증상이 정점에 도달 시(22일째) 투여한 군의 실험 결과, RIA를 투여한 두 군 (200nmol 복강 내 주사, 50nmol 피하 주사)에서 대조군보다 EAE 증상이 심하고 훨씬 오래 지속되는 것이 확인되었다. 이러한 결과는 도 2에 도시되어 있다. 특히, 피하 주사 50nmol 군이 복강 내 주사 200nmol 투여군보다 증상이 심하고 오래 지속되었고, 0일째 RIA 투여와 마찬가지로 RIA 투여군에서 EAE 증상이 지속되는 동안 간대성 근경련(myoclonus) 양상의 비정상적 움직임이 부작용으로 나타났다. 그러나 대조군에서는 간대성 근경련 양상이 나타나지 않았다.

위와 같은 결과를 토대로, 피하 주사 투여군의 경우 복강 내 주사 투여군에 비하여 저용량의 펩티드 RIA를 투여해도 비슷한 효과를 보이는 것을 확인하고 피하 주사 투여방법만을 사용하기로 하였다.

2. 펩티드 RIA 투여 용량에 따른 2차 EAE 실험

펩티드 RIA 투여 용량에 따른 2차 EAE 실험을 실시하였다. 상기 실시예 3-1.의 결과에서 파악되는 바와 같이 피하 주사 50nmol 군이 복강 내 주사 200nmol 투여군에서 부작용이 질병경과의 악화 소견 보여, 보다 낮은 용량을 투여하는 실험을 실시하였다.

EAE 유도(0일째)시 RIA50nmol, RIA25nmol, RIA10nmol 을 투여

도 3에 도시된 바와 같이, 피하 주사로 EAE 유도(0일째)시 RIA 50nmol, RIA 25nmol, RIA 10nmol 을 투여하였는데, 이전의 실험과 마찬가지로 50nmol/kg, 25nmol/kg에서는 EAE 증상이 빠르게 발현되어 오래 지속되는 결과를 보였다. 그러나, 10nmol/kg에서는 EAE 증상이 늦게 발현되어 짧게 지속되었으며, 증상의 강도가 낮은 것을 확인할 수 있었다.

또한, 50nmol/kg, 25nmol/kg에서는 간대성 근경련 양상이 뚜렷하게 나타난 반면 10nmol/kg에서는 간대성 근경련 양상이 약하게 나타났다.

펩티드 RIA를 증상 발생 후(22일째) RIA 50nmol, RIA 25nmol, RIA 10nmol, RIA 5nmol 투여

도 4에 도시된 바와 같이, 피하 주사로 EAE 증상이 정점에 도달 시(22일째) RIA 50nmol, RIA 25nmol, RIA 10nmol, RIA 5nmol을 투여하였는데, 50nmol/kg, 25nmol/kg, 10nmol/kg에서는 EAE 증상이 오래 지속되는 것이 관찰되었으나, 5nmol/kg에서는 펩티드 RIA 투여 후 EAE 증상이 빠르게 회복되는 것이 관찰되었다. 또한, 50nmol/kg, 25nmol/kg에서는 간대성 근경련 양상이 뚜렷하게 나타난 반면, 10nmol/kg에서는 간대성 근경련 양상이 약하게 나타났다.

부작용(간대성 근경련) 확인을 위한 추가 실험

주사한 펩티드 RIA 투여 용량에 따라 쥐에서 예상치 못한 부작용이 생기는 것에 주목하여 (1) EAE 유도를 하지 않은 정상 쥐, (2) EAE 유도시 사용하는 애쥬번트만 투여한 쥐, 그리고 (3) BBB (blood-brain barrier) 투과성을 높이기 위해 EAE 유도시 사용하는 백일해 독소(pertussis toxin)만 주사 한 쥐 (BBB leaky 마우스)에 각각 50nmol/kg의 펩티드 RIA를 주사 하고 경과를 관찰하였다.

관찰결과, EAE 마우스와는 달리 아무런 이상 소견이 관찰되지 않았다. 즉, 관찰되던 간대성 근경련성 발작 운동(myoclonic jerky movement)는 중추신경계에 염증성 병변이 있는 쥐에서만 발생하는 부작용으로 판단되었다.

3. 저용량의 펩티드 RIA 투여

상기 결과를 토대로, 저용량의 펩티드 RIA에서 효과를 보일 가능성을 확인하고, 부작용이 발생하는 용량에 충분한 안전 한계(safety margin)를 가지고 임상적 효과를 보이는지 확인 위해, 처음 실험 용량의 250배까지 낮춘 농도로 확인 실험을 실시하였다.

EAE 유도(0일째)시 RIA 25nmol, RIA 5nmol, RIA 1nmol, RIA 0.2nmol 을 투여

도 5에 도시된 바와 같이, 피하 주사로 EAE 유도(0일째)시 RIA 25nmol, RIA 5nmol, RIA 1nmol, RIA 0.2nmol 을 투여하였는데(같은 조건으로 2회 실험), 25nmol/kg에서는 전 실험과 마찬가지로 증상이 빠르게 나타나고 오래 지속되었으며, 강도가 심한 것을 확인할 수 있었다.

그러나, 초기 실험용량의 1/10인 5nmol/kg 치료 마우스에서는 EAE 점수(score)의 호전이 보이기 시작했고, 1/50, 1/250인 용량인 1nmol/kg, 0.2nmol/kg 에서는 EAE 점수의 유의한 저하와 증상의 빠른 회복이 관찰되었다.

또한, 25nmol/kg에서는 역시 전 실험과 마찬가지로 간대성 근경련 양상이 뚜렷하게 나타났으나, 1nmol/kg, 0.2nmol/kg 에서는 간대성 근경련이 관찰되지 않았다.

펩티드 RIA를 증상 발생 후(22일째) RIA 25nmol, RIA 5nmol, RIA 1nmol, RIA 0.2 nmol 을 투여

도 6에 도시된 바와 같이, 피하 주사로 펩티드 RIA를 증상 발생 후(22일째) RIA 25nmol, RIA 5nmol, RIA 1nmol, RIA 0.2nmol 을 투여하였는데(같은 조건으로 2회 실험), 25nmol/kg에서는 EAE 증상이 대조군(control)에 비해 더 오래 지속되는 것이 관찰되었다. 반면, 5nmol/kg, 1nmol/kg, 0.2nmol/kg 에서는 펩티드 RIA 투여 후 EAE 증상이 빠르게 회복되었고, 저 용량일수록 오히려 효과가 더 뚜렷하였다.

25nmol/kg에서는 역시 간대성 근경련 양상이 뚜렷하게 나타났고, 1nmol/kg, 0.2nmol/kg 에서는 뚜렷한 간대성 근경련이 관찰되지 않았다.

상기 실시예 3의 결과를 통해 고농도 (10, 25, 50nmol/kg)의 펩티드 RIA 투여 시 예방적 치료와 증상 발생시 치료의 두 가지 면에서 모두 EAE 증상이 오히려 악화되는 것이 확인되었고, 저농도 (5, 1, 0.2nmol/kg)의 펩티드 RIA 투여 시, 예방적 치료와(prophylactic treatment) 증상 발생시 치료(ongoing disease treatment)의 모두에서 유의한 임상적 효과를 보였다.

이는 저농도 펩티드 RIA 투여를 통해 EAE 증상의 발현을 예방할 수 있을 뿐 아니라 이미 진행된 증상의 빠른 회복에도 유의한 효과를 보이는, 즉 질환 변환 치료(disease modifying treatment)와 급성 재발 치료(acute relapse treatment)두 가지 역할을 모두 할 수 있음을 시사한다고 할 수 있다. 특히, 진행중 질환 치료(ongoing disease treatment)에 대한 실험은 증상 발현과 동시에 치료를 시작하는 일반적 방법 대신, 증상이 정점에 이를 정도로 진행된 후에 치료를 시작했음에도 불구하고 유의한 효과를 보여 현재 고용량 스테로이드 치료 밖에 없는 급성기 치료에 새로운 대안(option)이 될 가능성을 보여주었다고 할 수 있다.

다만 고용량의 펩티드 RIA 투여 시 간대성 근경련성 발작 운동(myoclonic jerky movement)이 부작용으로 나타났으며, 이는 일반적인 EAE 모델에서는 나타나지 않는 증상이었다. 특히, 펩티드 RIA고농도 투여 시에는 간대성 근경련 양상이 뚜렷하였고, 저농도 투여 시에도 일정농도 (5nmol/kg)까지는 간대성 근경련 양상이 약하게 나타났다. 는 펩티드 RIA가 EAE 모델에서 뇌 혈관 장벽(Blood-Brain Barrier, BBB)를 통과하여 이미 염증이 있는 마우스의 뇌에 직접 작용할 가능성을 시사한다고 할 수 있다. 따라서 충분한 안전 한계(safety margin)만 확보된다면, 기존 대부분의 다발성경화증 치료제가 중추신경계 밖인 말초에서 면역조정 및 림프구의 중추신경계 유입을 줄임으로써 역할을 하는 것과는 달리, 펩티드 RIA는 중추신경계 병변에 직접 영향을 미칠 가능성이 있어 급성기 치료로 향후 유용한 약물이 될 수 있음을 기대할 수 있다.

실시예 4. T 세포 증식 실험

도 7에 도시된 바와 같이, EAE 유도와 마찬가지 조건으로 일차적 항원 자극(MOG_35-45)후, 펩티드 RIA 1nmol/kg, 0.2nmo/kg 혹은 PBS를 투여 후, 배수 림프 절(draining lymph node)에서 분리한 세포에 체외 2차적 항원 자극(in vitro secondary antigenic stimulation) 후 T세포 증식 정도를 확인한 결과, 펩티드 RIA 1nmol/kg, 0.2nmol/kg 투여군에서 대조군에 비하여 유의하게 T 세포 증식이 감소하였고, 펩티드 RIA 1nmol/kg, 0.2nmol/kg 용량간 차이는 없었다.

따라서, 본 발명에 따른 펩티드 RIA를 저용량(1nmol/kg, 0.2nmol/kg)으로 투여하는 것은 T세포 증식을 감소시켜 다발성 경화증을 포함한 중추신경계 병변의 자가면역성 질환 치료에 유의한 효과를 나타내며, 항후 해당 질환 치료에 유용한 약물로 개발 가능성이 있음을 기대할 수 있다.

상기 실험결과들로 미루어 볼 때, 본 발명에 따른 펩티드 RIA를 저용량으로 투여할 때, 고용량 투여시와 달리 간대성 근경련 부작용도 나타나지 않으면서, 중추신경계 병변에 직접 영향을 주어 급성기 치료에 적합한 효과를 나타내며, 여기에 더하여 T세포 증식을 감소시켜 자가면역성 질환 치료에 유의한 효과를 나타내므로, 다발성 경화증을 포함한 중추신경계 병변의 치료에 유용한 약물로 사용가능하고 또한 추후 개발 가능성이 있음을 알 수 있다.

서열번호 2: 인간 텔로머라제 전장 단백질 [1-1132aa]

<110> KAEL-GEMVAX CO., LTD. KIM, Sangjae <120> COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING AND PREVENTING MULTIPLE SCLEROSIS <130> OF14P140/PCT <150> KR 10-2013-0096777 <151> 2013-08-14 <160> 2 <170> PatentIn version 3.2 <210> 1 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Glu Ala Arg Pro Ala Leu Leu Thr Ser Arg Leu Arg Phe Ile Pro Lys 1 5 10 15 <210> 2 <211> 1132 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Pro Arg Ala Pro Arg Cys Arg Ala Val Arg Ser Leu Leu Arg Ser 1 5 10 15 His Tyr Arg Glu Val Leu Pro Leu Ala Thr Phe Val Arg Arg Leu Gly 20 25 30 Pro Gln Gly Trp Arg Leu Val Gln Arg Gly Asp Pro Ala Ala Phe Arg 35 40 45 Ala Leu Val Ala Gln Cys Leu Val Cys Val Pro Trp Asp Ala Arg Pro 50 55 60 Pro Pro Ala Ala Pro Ser Phe Arg Gln Val Ser Cys Leu Lys Glu Leu 65 70 75 80 Val Ala Arg Val Leu Gln Arg Leu Cys Glu Arg Gly Ala Lys Asn Val 85 90 95 Leu Ala Phe Gly Phe Ala Leu Leu Asp Gly Ala Arg Gly Gly Pro Pro 100 105 110 Glu Ala Phe Thr Thr Ser Val Arg Ser Tyr Leu Pro Asn Thr Val Thr 115 120 125 Asp Ala Leu Arg Gly Ser Gly Ala Trp Gly Leu Leu Leu Arg Arg Val 130 135 140 Gly Asp Asp Val Leu Val His Leu Leu Ala Arg Cys Ala Leu Phe Val 145 150 155 160 Leu Val Ala Pro Ser Cys Ala Tyr Gln Val Cys Gly Pro Pro Leu Tyr 165 170 175 Gln Leu Gly Ala Ala Thr Gln Ala Arg Pro Pro Pro His Ala Ser Gly 180 185 190 Pro Arg Arg Arg Leu Gly Cys Glu Arg Ala Trp Asn His Ser Val Arg 195 200 205 Glu Ala Gly Val Pro Leu Gly Leu Pro Ala Pro Gly Ala Arg Arg Arg 210 215 220 Gly Gly Ser Ala Ser Arg Ser Leu Pro Leu Pro Lys Arg Pro Arg Arg 225 230 235 240 Gly Ala Ala Pro Glu Pro Glu Arg Thr Pro Val Gly Gln Gly Ser Trp 245 250 255 Ala His Pro Gly Arg Thr Arg Gly Pro Ser Asp Arg Gly Phe Cys Val 260 265 270 Val Ser Pro Ala Arg Pro Ala Glu Glu Ala Thr Ser Leu Glu Gly Ala 275 280 285 Leu Ser Gly Thr Arg His Ser His Pro Ser Val Gly Arg Gln His His 290 295 300 Ala Gly Pro Pro Ser Thr Ser Arg Pro Pro Arg Pro Trp Asp Thr Pro 305 310 315 320 Cys Pro Pro Val Tyr Ala Glu Thr Lys His Phe Leu Tyr Ser Ser Gly 325 330 335 Asp Lys Glu Gln Leu Arg Pro Ser Phe Leu Leu Ser Ser Leu Arg Pro 340 345 350 Ser Leu Thr Gly Ala Arg Arg Leu Val Glu Thr Ile Phe Leu Gly Ser 355 360 365 Arg Pro Trp Met Pro Gly Thr Pro Arg Arg Leu Pro Arg Leu Pro Gln 370 375 380 Arg Tyr Trp Gln Met Arg Pro Leu Phe Leu Glu Leu Leu Gly Asn His 385 390 395 400 Ala Gln Cys Pro Tyr Gly Val Leu Leu Lys Thr His Cys Pro Leu Arg 405 410 415 Ala Ala Val Thr Pro Ala Ala Gly Val Cys Ala Arg Glu Lys Pro Gln 420 425 430 Gly Ser Val Ala Ala Pro Glu Glu Glu Asp Thr Asp Pro Arg Arg Leu 435 440 445 Val Gln Leu Leu Arg Gln His Ser Ser Pro Trp Gln Val Tyr Gly Phe 450 455 460 Val Arg Ala Cys Leu Arg Arg Leu Val Pro Pro Gly Leu Trp Gly Ser 465 470 475 480 Arg His Asn Glu Arg Arg Phe Leu Arg Asn Thr Lys Lys Phe Ile Ser 485 490 495 Leu Gly Lys His Ala Lys Leu Ser Leu Gln Glu Leu Thr Trp Lys Met 500 505 510 Ser Val Arg Asp Cys Ala Trp Leu Arg Arg Ser Pro Gly Val Gly Cys 515 520 525 Val Pro Ala Ala Glu His Arg Leu Arg Glu Glu Ile Leu Ala Lys Phe 530 535 540 Leu His Trp Leu Met Ser Val Tyr Val Val Glu Leu Leu Arg Ser Phe 545 550 555 560 Phe Tyr Val Thr Glu Thr Thr Phe Gln Lys Asn Arg Leu Phe Phe Tyr 565 570 575 Arg Lys Ser Val Trp Ser Lys Leu Gln Ser Ile Gly Ile Arg Gln His 580 585 590 Leu Lys Arg Val Gln Leu Arg Glu Leu Ser Glu Ala Glu Val Arg Gln 595 600 605 His Arg Glu Ala Arg Pro Ala Leu Leu Thr Ser Arg Leu Arg Phe Ile 610 615 620 Pro Lys Pro Asp Gly Leu Arg Pro Ile Val Asn Met Asp Tyr Val Val 625 630 635 640 Gly Ala Arg Thr Phe Arg Arg Glu Lys Arg Ala Glu Arg Leu Thr Ser 645 650 655 Arg Val Lys Ala Leu Phe Ser Val Leu Asn Tyr Glu Arg Ala Arg Arg 660 665 670 Pro Gly Leu Leu Gly Ala Ser Val Leu Gly Leu Asp Asp Ile His Arg 675 680 685 Ala Trp Arg Thr Phe Val Leu Arg Val Arg Ala Gln Asp Pro Pro Pro 690 695 700 Glu Leu Tyr Phe Val Lys Val Asp Val Thr Gly Ala Tyr Asp Thr Ile 705 710 715 720 Pro Gln Asp Arg Leu Thr Glu Val Ile Ala Ser Ile Ile Lys Pro Gln 725 730 735 Asn Thr Tyr Cys Val Arg Arg Tyr Ala Val Val Gln Lys Ala Ala His 740 745 750 Gly His Val Arg Lys Ala Phe Lys Ser His Val Ser Thr Leu Thr Asp 755 760 765 Leu Gln Pro Tyr Met Arg Gln Phe Val Ala His Leu Gln Glu Thr Ser 770 775 780 Pro Leu Arg Asp Ala Val Val Ile Glu Gln Ser Ser Ser Leu Asn Glu 785 790 795 800 Ala Ser Ser Gly Leu Phe Asp Val Phe Leu Arg Phe Met Cys His His 805 810 815 Ala Val Arg Ile Arg Gly Lys Ser Tyr Val Gln Cys Gln Gly Ile Pro 820 825 830 Gln Gly Ser Ile Leu Ser Thr Leu Leu Cys Ser Leu Cys Tyr Gly Asp 835 840 845 Met Glu Asn Lys Leu Phe Ala Gly Ile Arg Arg Asp Gly Leu Leu Leu 850 855 860 Arg Leu Val Asp Asp Phe Leu Leu Val Thr Pro His Leu Thr His Ala 865 870 875 880 Lys Thr Phe Leu Arg Thr Leu Val Arg Gly Val Pro Glu Tyr Gly Cys 885 890 895 Val Val Asn Leu Arg Lys Thr Val Val Asn Phe Pro Val Glu Asp Glu 900 905 910 Ala Leu Gly Gly Thr Ala Phe Val Gln Met Pro Ala His Gly Leu Phe 915 920 925 Pro Trp Cys Gly Leu Leu Leu Asp Thr Arg Thr Leu Glu Val Gln Ser 930 935 940 Asp Tyr Ser Ser Tyr Ala Arg Thr Ser Ile Arg Ala Ser Leu Thr Phe 945 950 955 960 Asn Arg Gly Phe Lys Ala Gly Arg Asn Met Arg Arg Lys Leu Phe Gly 965 970 975 Val Leu Arg Leu Lys Cys His Ser Leu Phe Leu Asp Leu Gln Val Asn 980 985 990 Ser Leu Gln Thr Val Cys Thr Asn Ile Tyr Lys Ile Leu Leu Leu Gln 995 1000 1005 Ala Tyr Arg Phe His Ala Cys Val Leu Gln Leu Pro Phe His Gln Gln 1010 1015 1020 Val Trp Lys Asn Pro Thr Phe Phe Leu Arg Val Ile Ser Asp Thr Ala 1025 1030 1035 1040 Ser Leu Cys Tyr Ser Ile Leu Lys Ala Lys Asn Ala Gly Met Ser Leu 1045 1050 1055 Gly Ala Lys Gly Ala Ala Gly Pro Leu Pro Ser Glu Ala Val Gln Trp 1060 1065 1070 Leu Cys His Gln Ala Phe Leu Leu Lys Leu Thr Arg His Arg Val Thr 1075 1080 1085 Tyr Val Pro Leu Leu Gly Ser Leu Arg Thr Ala Gln Thr Gln Leu Ser 1090 1095 1100 Arg Lys Leu Pro Gly Thr Thr Leu Thr Ala Leu Glu Ala Ala Ala Asn 1105 1110 1115 1120 Pro Ala Leu Pro Ser Asp Phe Lys Thr Ile Leu Asp 1125 1130

Claims (11)

1. 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드, 상기 아미노산 서열과 80%이상의 서열 상동성을 갖는 펩티드 또는 그 단편인 펩티드를 포함하는 다발성 경화증 치료 및 예방용 조성물.
2. 제1항에 있어서, 상기 단편은 3개 이상의 아미노산으로 구성된 단편인 다발성 경화증 치료 및 예방용 조성물.
3. 제1항에 있어서, 상기 펩티드를 저용량으로 포함하는 다발성 경화증 치료 및 예방용 조성물.
4. 제3항에 있어서, 상기 펩티드를 10nmol/kg이하의 농도로 포함하는 다발성 경화증 치료 및 예방용 조성물.
5. 제3항에 있어서, 상기 펩티드를 5nmol/kg 이하의 농도로 포함하는 다발성 경화증 치료 및 예방용 조성물.
6. 제3항에 있어서. 상기 펩티드를 1nmol/kg 이하의 농도로 포함하는 다발성 경화증 치료 및 예방용 조성물.
7. 제3항에 있어서. 상기 펩티드를 0.2nmol/kg 이하의 농도로 포함하는 다발성 경화증 치료 및 예방용 조성물.
8. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 약학 조성물인 다발성 경화증 치료 및 예방용 조성물.
9. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 식품 조성물인 다발성 경화증 치료 및 예방용 조성물.
10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 치료를 필요로 하는 대상에게 투여하는 것을 특징으로 하는 다발성 경화증을 치료 및 예방하는 방법.
11. 제10항에 있어서, 상기 조성물은 펩티드를 저용량으로 포함하는 것을 특징으로 하는 다발성 경화증을 치료 및 예방하는 방법.

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