KR20160040196A

KR20160040196A - Pim 키나제 억제제 조합물

Info

Publication number: KR20160040196A
Application number: KR1020167003069A
Authority: KR
Inventors: 주 알렉산더 카오; 아브델 사치; 케이. 게리 제이. 바나스; 조셉 다니엘 그로우니
Original assignee: 노파르티스 아게
Priority date: 2013-08-08
Filing date: 2014-08-07
Publication date: 2016-04-12
Also published as: AU2019201169A1; WO2015019320A1; US20170368044A1; HK1222539A1; AU2017210520A1; CA2917936A1; BR112016002311A2; US20190290627A1; CN105611928A; MX2016001683A; RU2016107813A3; RU2016107813A; US20160175293A1; EP3030237A1; AU2014304126A1; JP2016527305A; JP2019038821A

Abstract

본 발명은 단독으로 또는 제약 조합물로 사용될 수 있는 Pim 키나제 억제제 화합물에 관한 것이다. 하나의 이러한 조합물은 동시, 개별 또는 순차적 사용을 위한, 특히 골수성 신생물 또는 백혈병의 치료를 위한 (a) JAK 억제제 화합물, (b) Pim 키나제 억제제 화합물, 및 임의로, 적어도 1종의 제약상 허용되는 담체; 이러한 조합물을 포함하는 제약 조성물; 골수성 신생물 또는 백혈병의 치료를 위한 의약의 제조를 위한 이러한 조합물의 용도; 동시, 개별 또는 순차적 사용을 위한 조합 제제로서의 이러한 조합물을 포함하는 상업용 패키지 또는 제품; 및 포유동물, 특히 인간의 치료 방법을 포함한다.

Description

PIM 키나제 억제제 조합물 {PIM KINASE INHIBITOR COMBINATIONS}

암은 미국에서 두 번째 주요 사망 원인이다. "암"은 다수의 다양한 유형의 암, 예를 들어, 유방암, 전립선암, 폐암, 결장암, 및 췌장암을 기재하는 것으로 사용되지만, 각 유형의 암은 표현형 수준 및 유전자 수준 둘 다에서 상이하다. 암의 조절되지 않는 성장 특징은 하나 이상의 유전자의 발현이 돌연변이로 인해 조절이상인 경우에 발생하고, 세포 성장은 더 이상 제어될 수 없다.

골수증식성 신생물 (MPN)은 골수에서 혈액 세포 (소판, 백혈구 및 적혈구)의 과다생산을 유발하는 질환이다. MPN은 진성 다혈구혈증 (PV), 원발성 또는 본태성 혈소판혈증 (ET), 원발성 또는 특발성 골수섬유증, 만성 골수 (골수구성) 백혈병 (CML), 만성 호중구성 백혈병 (CNL), 소아 골수단핵구성 백혈병 (JML) 및 만성 호산구성 백혈병 (CEL)/과다 호산구성 증후군 (HES)을 포함한다. 이들 장애는 하기 특징 중 일부 또는 모두를 공유하기 때문에 함께 분류된다: 다능 조혈 전구 세포의 관여, 형질전환되지 않은 조혈 전구 세포에 비해 형질전환된 클론의 우세성, 정의가능한 자극 부재 하의 1종 이상의 조혈 계통의 과다생산, 시험관내 성장 인자-비의존성 콜로니 형성, 골수 세포과다성, 거핵구 증식증 및 이형성증, 염색체 1, 8, 9, 13, 및 20에 우세하게 관여하는 이상, 혈전성 및 출혈성 소질, 과다 골수외 조혈, 및 급성 백혈병으로의 자발적 전환 또는 CML의 비율과 비교 시 낮은 비율에서의 골수 섬유증의 발생. MPN의 발병률은 CML의 경우에 매년 60세 초과의 개체 100,000명당 대략 3명으로부터, JML의 경우에 매년 출생부터 14세까지의 소아 100,000명당 0.13명까지의 범위로 매우 다양하다 (Vardiman JW et al., Blood 100 (7): 2292-302, 2002). 따라서, MPN 뿐만 아니라 고형 종양과 같은 다른 암의 새로운 치료를 위한 필요가 존재한다.

화합물 A로서 하기 제시되며 WO 2010/026124에 개시되어 있는, N-(4-((1R,3S,5S)-3-아미노-5-메틸시클로헥실)피리딘-3-일)-6-(2,6-디플루오로페닐)-5-플루오로피콜린아미드의 조합물 및 용도.

<화합물 A>

본 발명의 한 실시양태에서, JAK 억제제인 화합물 및 Pim 억제제인 화합물을 포함하는 제약 조합물, 보다 구체적으로 화합물 A 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 룩솔리티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 제약 조합물이 존재한다.

본 발명의 또 다른 유용한 조합물은 Pim 억제제 화합물 및 PI3K 억제제 화합물의 조합물이다.

화합물 A는 또한 화합물 B로서 하기 제시된 알파-이소형 특이적 포스파티딜이노시톨 3-키나제 (PI3K) 억제제와 조합될 수 있다.

<화합물 B>

화합물 B는 화학 명칭 (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드) 또는 부파를리십에 의해 공지되어 있다. 화합물 B 및 그의 제약상 허용되는 염, 그의 제조법 및 그를 함유하는 적합한 제약 제제는 WO 2010/029082에 기재되어 있으며, 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 화합물 B의 합성은 WO2010/029082에서 실시예 15로서 기재되어 있다.

화합물 A 및 조합물에 대한 다른 용도가 또한 개시되어 있다.

WO2010/029082에 제시된 바와 같이, 화합물 B는 포스파티딜이노시톨 3-키나제 (또는 PI3K)의 알파-이소형에 대한 유의한 억제 활성을 갖는 것으로 확인되었다. 화합물 B는 PI3K 억제제로서의 유리한 약리학적 특성을 가지며 베타 및/또는 델타 및/또는 감마 이소형에 비해 PI3-키나제 알파 이소형에 대해 높은 선택성을 나타낸다.

도 1은 MPN의 세포주 조작된 모델 (BA/F3-EpoR-JAK2^V617F)에서의 룩솔리티닙 및 화합물 A의 단일 작용제들 및 조합물의 발광 세포 생존율 검정을 제시한다.
도 2는 IVIS 스펙트럼 전임상 생체내 영상화 시스템 (퍼킨 엘머(Perkin Elmer))에 의한 뮤린 MPN 모델, BA/F3-EpoR-JAK2^V617F에서의 질환 부담의 감소를 제시한다.
도 3은 뮤린 MPN 모델 BA/F3-EpoR-JAK2^V617F에서의 연구 종점에서의 비장 크기의 감소를 제시한다.
도 4는 화합물 A 및 미도스타우린이 상승작용하여 AML 세포주 Molm-13에서 증가된 아폽토시스를 촉진하는 것을 제시한다.
도 5는 화합물 A 및 미도스타우린이 상승작용하여 AML 세포주 Molm-13에서 mTOR 경로를 억제하는 것을 제시한다.

PIM 단백질 (몰로니-뮤린 백혈병 바이러스에 대한 프로바이러스 통합 부위(Proviral Integration site for the Moloney-murine leukemia virus))은 그의 서열에서 조절 도메인이 없는 3종의 ser/thr 키나제의 패밀리이며, 그의 번역 시 구성적으로 활성인 것으로 간주된다 (Qian, K.C., et al. J. Biol. Chem. 2004. p6130-6137). 이들은 세포 주기, 증식, 아폽토시스 및 약물 내성의 조절에 관여하는 종양유전자이다 (Mumenthaler et al, Mol Cancer Ther. 2009; p2882). 그의 발현은 특히 조혈암에서 상승되는 것으로 밝혀졌지만, 일부 보고는 췌장암, 전립선암 및 간암에서의 PIM1의 과다-발현 뿐만 아니라 특정 고형 종양에서의 PIM3 발현을 제시하였다 (Reviewed by Alvarado et al, Expert Rev. Hematol. 2012, p81-96). PIM 키나제는 전사, 번역 및 프로테아솜 분해의 속도에 의해 조절되지만, 이들 사건을 좌우하는 인자는 여전히 불충분하게 이해된다. 널리 확립되고 PIM1/2 발현을 유도하는 것으로 공지된 하나의 경로는 JAK/STAT 신호전달 경로이다 (Miura et al, Blood. 1994, p4135-4141). STAT 단백질은 세포 표면 수용체와 그의 리간드, 예컨대 시토카인의 상호작용 시 JAK 티로신 키나제의 하류에서 활성화된 전사 인자이다. STAT3 및 STAT5 둘 다는 PIM 프로모터에 결합하여 PIM 발현을 유도하는 것으로 공지되어 있다 (Stout et al. J Immunol, 2004;173:6409-6417). JAK/STAT에 비해, VEGF 경로는 또한 난소의 혈관신생 동안의 내피 세포에서, 및 인간 제대 정맥 세포에서 PIM 발현을 상향-조절하는 것으로 제시하였다 (Zipo et al., Nat Cell Biol. 2007, p932-944).

JAK 패밀리는 면역 반응에 관여하는 세포의 증식 및 기능의 시토카인-의존성 조절에서 역할을 한다. 4종의 포유동물 JAK 패밀리 구성원은 하기이다: JAK1 (또한 야누스 키나제-1로도 공지됨), JAK2 (또한 야누스 키나제-2로도 공지됨), JAK3 (또한 야누스 키나제, 백혈구; JAKL; L-JAK 및 야누스 키나제-3으로도 공지됨) 및 TYK2 (또한 단백질-티로신 키나제 2로도 공지됨). 이상 JAK-STAT 신호전달은 다중 인간 발병기전에 연루된다. 골수증식성 신생물 (MPN)에서의 JAK2의 유전자 이상 및 STAT의 연관된 활성화는 인간 신생물에서의 이 경로의 관여의 한 예이다. 상류 트롬보포이에틴 수용체 (MPLW525L)에서의 돌연변이 및 LNK (엑손 2)에 의한 JAK 조절의 손실은 골수섬유증과 연관된다 (Vainchenker W et al., Blood 2011; 118:1723; Pikman Y et al., Plox Med. 2006, 3: e270). JAK2의 구성적 활성화를 초래하는 JAK2, 대부분 JAK2 V617F의 돌연변이는 원발성 골수섬유증을 앓는 환자의 다수에서 주목된다 (Kralovics R et al., N Engl. J Med 2005, 352: 1779; Baxter EJ et al., Lancet 2005, 365: 1054; Levine RL et al., Cancer Cell 2005, 7 : 387). JAK2 엑손 12에서의 추가의 돌연변이는 진성 다혈구혈증 및 특발성 적혈구증가증에서 확인되었다 (Scott LM et al., N Engl J Med 2007, 356: 459). 추가로, 활성화된 JAK-STAT는 인간 암에 대한 생존 메카니즘으로서 시사되었다 (Hedvat M et al., Cancer Cell 2009; 16: 487). 최근에, 데이터는 JAK2/STAT5 억제가 전이성 유방암에서 PI3K/mTOR 차단에 대한 내성을 방지하는 것을 나타내는 것으로 밝혀졌다 (Britschgi A et al., Cancer Cell 2012; 22: 796). 또한, IL-6-유발 유방암, 난소암, 및 전립선암에서의 JAK1/2 억제제의 사용은 전임상 모델에서 종양 성장의 억제를 가져왔다 (Sansone P and Bromberg J; J. Clinical Oncology 2012, 30: 1005).

포스파티딜이노시톨 (PI)은 세포 막에서 발견되는 인지질이다. 이 인지질은 세포내 신호 전달에서 또한 중요한 역할을 한다. 포스파티딜이노시톨-3 키나제 (PI3K)는 포스파티딜이노시톨의 이노시톨 고리의 3-위치를 인산화시키는 효소로서 확인되었으며, 이러한 관찰은 포스포이노시톨-3 키나제의 탈조절 및 이 신호전달 경로의 상류 및 하류 구성성분이 인간 암 및 증식성 질환과 연관된 가장 흔한 탈조절 중 하나인 것을 나타낸다 (Parsons et al., Nature 436:792(2005); Hennessey at el., Nature Rev. Drug Dis. 4:988-1004 (2005)). PI3K 억제제의 효능은, 예를 들어 PCT 국제 특허 출원 WO 2007/084786에 기재되어 있다.

본 발명의 JAK 억제제와 Pim 억제제 조합물을 투여하는 것이 혈액의 증식성 질환을 치료하기 위한 상승작용적 효과를 제공하는 것으로 발견되었으며, 이는 골수성 신생물, 백혈병, 혈액의 다른 암을 포함할 수 있으며 또한 고형 암을 치료하는데 잠재적으로 유용할 수 있다. 이러한 접근법 - 2종의 유형의 작용제의 조합 또는 공-투여 -은 현재 이용가능한 요법에 반응하거나 또는 내성인 암을 앓는 개체를 치료하는데 유용할 수 있다. 본원에 제공된 조합 요법은 또한 이러한 요법에 반응하는 개체를 위한 현재 이용가능한 암 요법의 효능을 개선시키고/거나 이의 부작용을 감소시키는데 유용하다.

본원에 사용된 특정 용어는 하기에 기재된다. 본 발명의 화합물은 표준 명명법을 사용하여 기재된다. 달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 과학 용어는 본 발명이 속한 분야의 통상의 기술자에 의해 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 본 발명의 화합물은 그의 거울상이성질체 형태를 포함한다.

본원에 사용된 용어 "제약상 허용되는 염"은 본 발명의 피리미딘 화합물의 비독성 산 또는 알칼리 토금속 염을 지칭한다. 이들 염은 피리미딘 화합물의 최종 단리 및 정제 동안, 또는 개별적으로 염기 또는 산 관능기를 각각 적합한 유기 또는 무기 산 또는 염기와 반응시킴으로써 계내 제조될 수 있다. 대표적인 염은 하기를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다: 아세테이트, 아디페이트, 알기네이트, 시트레이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 벤젠술포네이트, 비술페이트, 부티레이트, 캄포레이트, 캄포르술포네이트, 디글루코네이트, 시클로펜탄프로피오네이트, 도데실술페이트, 에탄술포네이트, 글루코헵타노에이트, 글리세로포스페이트, 헤미-술페이트, 헵타노에이트, 헥사노에이트, 푸마레이트, 히드로클로라이드, 히드로브로마이드, 히드로아이오다이드, 2-히드록시에탄술포네이트, 락테이트, 말레에이트, 메탄술포네이트, 니코티네이트, 2-나프탈렌술포네이트, 옥살레이트, 파모에이트, 펙티네이트, 퍼술페이트, 3-페닐프로피오네이트, 피크레이트, 피발레이트, 프로피오네이트, 숙시네이트, 술페이트, 타르트레이트, 티오시아네이트, p-톨루엔술포네이트, 및 운데카노에이트. 또한, 염기성 질소-함유 기는 알킬 할라이드, 예컨대 메틸, 에틸, 프로필, 및 부틸 클로라이드, 브로마이드, 및 아이오다이드; 디알킬 술페이트, 예컨대 디메틸, 디에틸, 디부틸, 및 디아밀 술페이트, 장쇄 할라이드, 예컨대 데실, 라우릴, 미리스틸, 및 스테아릴 클로라이드, 브로마이드 및 아이오다이드, 아르알킬 할라이드, 예컨대 벤질 및 페네틸 브로마이드 등과 같은 작용제를 사용하여 4급화될 수 있다. 이에 따라 수용성 또는 유용성, 또는 수분산성 또는 유분산성 생성물이 수득된다.

제약상 허용되는 산 부가염을 형성하기 위해 사용될 수 있는 산의 예는 염산, 붕화수소산, 질산, 황산 및 인산과 같은 무기 산, 및 포름산, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 푸마르산, 타르타르산, 옥살산, 말레산, 메탄술폰산, 숙신산, 말산, 메탄술폰산, 벤젠술폰산, 및 p-톨루엔술폰산, 시트르산, 및 산성 아미노산, 예컨대 아스파르트산 및 글루탐산과 같은 유기 산을 포함한다.

염기성 부가염은 피리미딘 화합물의 최종 단리 및 정제 동안, 또는 개별적으로 카르복실산 모이어티를 적합한 염기, 예컨대 제약상 허용되는 금속 양이온의 히드록시드, 카르보네이트 또는 비카르보네이트와 또는 암모니아, 또는 유기 1급, 2급 또는 3급 아민과 반응시킴으로써 계내 제조될 수 있다. 제약상 허용되는 염은 알칼리 금속 및 알칼리 토금속, 예컨대 나트륨, 리튬, 칼륨, 칼슘, 마그네슘, 알루미늄 염 등을 기재로 하는 양이온, 뿐만 아니라 비독성 암모늄, 4급 암모늄, 및 아민 양이온, 예컨대 비제한적으로 암모늄, 테트라메틸암모늄, 테트라에틸암모늄, 메틸아민, 디메틸아민, 트리메틸아민, 트리에틸아민, 에틸아민 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 염기 부가염의 형성에 유용한 다른 대표적인 유기 아민은 디에틸아민, 에틸렌디아민, 에탄올아민, 디에탄올아민, 피페라진, 피리딘, 피콜린, 트리에탄올아민 등, 및 염기성 아미노산, 예컨대 아르기닌, 리신 및 오르니틴을 포함한다.

조합물의 투여는 단일 제제 또는 단위 투여 형태의 조합물의 투여, 공동으로 그러나 개별적으로의 조합물의 개별 작용제의 투여, 또는 순차적으로 임의의 적합한 경로에 의한 조합물의 개별 작용제의 투여를 포함한다. 조합물의 개별 작용제의 투여량은 조합물 중의 다른 작용제(들)와 비교하여 작용제(들) 중 1종의 보다 빈번한 투여를 필요로 할 수 있다. 따라서, 적절하게 투여될 수 있도록 하기 위해, 포장된 제약 제품은 작용제의 조합물을 함유하는 1종 이상의 투여 형태, 작용제의 조합물 중 1종은 함유하지만 조합물의 다른 작용제(들)는 함유하지 않는 1종 이상의 투여 형태를 함유할 수 있다.

본원에 사용된 용어 "단일 제제"는 환자에게 유효량의 치료제 둘 다를 전달하도록 제제화된 단일 담체 또는 비히클을 지칭한다. 단일 비히클은 임의의 제약상 허용되는 담체 또는 부형제와 함께 유효량의 각각의 작용제를 전달하도록 설계된다. 일부 실시양태에서, 비히클은 정제, 캡슐, 환제 또는 패치이다. 다른 실시양태에서, 비히클은 용액 또는 현탁액이다.

용어 "단위 용량"은 치료받는 환자에게 1종의 투여 형태로 작용제 둘 다를 함께 동시 투여하는 것을 의미하도록 본원에 사용된다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 단일 제제이다. 특정 실시양태에서, 단위 용량은 각 비히클이 유효량의 작용제 중 적어도 1종을 제약상 허용되는 담체 및 부형제와 함께 포함하도록 하는 1종 이상의 비히클을 포함한다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 환자에게 동시에 투여되는 1종 이상의 정제, 캡슐, 환제, 또는 패치이다.

용어 "치료하다"는 대상체에서 질환의 적어도 1종의 증상을 경감, 감소 또는 완화시키는 것을 의미하도록 본원에 사용된다. 본 발명의 의미 내에서, 용어 "치료하다"는 또한 발병 (즉, 질환의 임상 징후 또는 질환의 증상 전 기간)을 정지, 지연시키고/거나, 질환의 증상을 발생시키거나 악화시킬 위험을 감소시키는 것을 나타낸다.

용어 "대상체"는 동물을 포함하는 것으로 의도된다. 대상체의 예는 포유동물, 예를 들어 인간, 개, 소, 말, 돼지, 양, 염소, 고양이, 마우스, 토끼, 래트, 및 트랜스제닉 비-인간 동물을 포함한다. 특정 실시양태에서, 대상체는 인간, 예를 들어 암, 예를 들어 골수증식성 신생물 또는 고형 종양을 앓고 있거나, 앓을 위험이 있거나, 또는 잠재적으로 앓을 수 있는 인간이다.

용어 "약" 또는 "대략"은 주어진 값 또는 범위의 20% 이내, 보다 바람직하게는 10% 이내, 가장 바람직하게는 5% 이내인 것을 의미한다. 대안적으로, 특히 생물계에서 용어 "약"은 주어진 값의 약 로그 (즉, 한 자릿수) 이내, 바람직하게는 2배 이내를 의미한다.

본원에 기재된 작용제의 조합물은 상승작용적 효과를 나타낸다. 본원에 사용된 용어 "상승작용적 효과"는 그 자체로 투여된 각각의 약물의 단순 첨가의 효과보다 큰 효과를 생성하는 2종의 작용제의 작용을 지칭한다.

작용제의 조합물의 "유효량"은 조합물로 치료되는 우울 장애의 임상적으로 관찰가능한 징후 및 증상을 기준선에 비해 관찰가능한 개선을 제공하기에 충분한 양이다.

"경구 투여 형태"는 경구 투여용으로 처방되거나 또는 그를 의도로 하는 단위 투여 형태를 포함한다.

화합물 A 또는 화합물 A와 JAK 억제제, PI3K 억제제 또는 다른 억제제의 조합물을 사용하는 치료 방법

화합물 A를 단독으로 또는 조합 요법으로 사용하는, 암, 골수증식성 신생물 및 고형 종양을 치료하는 방법이 본원에 제공된다.

단독 또는 조합한 화합물 A는 암을 치료하는데 사용될 수 있다. 본원에 사용된 "암"은 부적절하게 높은 수준의 세포 분열, 부적절하게 낮은 수준의 아폽토시스, 또는 둘 다를 유발하거나 또는 초래하는 임의의 질환을 지칭한다. 암의 예는, 제한 없이, 백혈병 (예를 들어, 급성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병 (AML) (또한 급성 골수구성 백혈병으로도 지칭됨), 급성 골수모구성 백혈병, 급성 전골수구성 백혈병, 급성 골수단핵구성 백혈병, 급성 단핵구성 백혈병, 급성 적백혈병, 만성 백혈병, 만성 골수 백혈병 (CML) (또한 만성 골수구성 백혈병으로도 지칭됨), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 호산구성 백혈병, 만성 골수단핵구성 백혈병, CD19+ 백혈병, 예컨대 CD19+ ALL 및 CLL), 외투 세포 백혈병 (MCL)), 소아 골수단핵구성 백혈병, 과다호산구성 증후군, 전신 비만세포증, 공격성 전신 비만세포증 (ASM), 비정형 만성 골수 백혈병, 진성 다혈구혈증, 림프종 (호지킨병, 비-호지킨병 (또한 호지킨 림프종 또는 비-호지킨 림프종 (NHL)으로도 공지됨), 예컨대 미만성 대 B-세포 림프종 (DLBCL) (NHL에 가장 흔함) 또는 여포성 림프종 (FL)), 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 중쇄 질환, 및 고형 종양을 포함한다. 단독 또는 조합한 화합물 A는 골수이형성 증후군 (MDS)의 치료에 사용될 수 있다.

게다가, 본원에 제공된 요법은 항종양-유효 용량의 화합물 A를 단독으로 또는 조합 요법으로 포함하는, 온혈 동물, 예컨대 인간에서의 고형 또는 액상 종양의 치료에 관한 것이다.

화합물 A는 고형 종양, 예컨대 육종 및 암종, 예컨대 섬유육종, 점액육종, 지방육종, 연골육종, 골형성 육종, 척삭종, 혈관육종, 내피육종, 림프관 육종, 림프관내피육종, 활막종, 중피종, 유잉 종양, 평활근 육종, 횡문근육종, 결장 암종, 췌장암, 유방암, 난소암, 전립선암, 편평 세포 암종, 기저 세포 암종, 선암종, 한선 암종, 피지선 암종, 유두상 암종, 유두상 선암종, 낭선암종, 수질성 암종, 기관지원성 암종, 신세포 암종, 간세포암, 담관 암종, 융모막암종, 정상피종, 배아성 암종, 윌름스 종양, 자궁경부암, 자궁암, 고환암, 폐 암종, 소세포 폐 암종, 방광 암종, 상피 암종, 신경교종, 성상세포종, 수모세포종, 두개인두종, 상의세포종, 송과체종, 혈관모세포종, 청신경종, 핍지교종, 슈반세포종, 수막종, 흑색종, 신경모세포종, 및 망막모세포종의 치료에 단독으로 또는 조합 요법으로 사용될 수 있다.

특정 실시양태에서, 본원에 제공된 단독 또는 조합한 화합물 A를 사용하여 치료될 수 있는 암은 골수증식성 장애 또는 골수성 신생물이다. 골수증식성 장애 (MPD) (이제는 골수증식성 신생물 (MPN)로 통상적으로 지칭됨)는 조혈 전구세포의 클론성 장애인 혈액 악성종양의 부류이다. 문헌 [Tefferi, A. and Vardiman, J. W., Classification and diagnosis of myeloproliferative neoplasms: The 2008 World Health Organization criteria and point-of-care diagnostic algorithms, Leukemia, September 2007, 22: 14-22]은 본원에 참조로 포함된다. 이들은 1종 이상의 성숙 골수계 세포 유형의 증진된 증식 및 생존을 특징으로 한다. 이 카테고리는 만성 골수성 백혈병 (CML), 진성 다혈구혈증 (PV), 본태성 혈소판혈증 (ET), 골수섬유증 (MF), 예컨대 원발성 골수섬유증 (PMF) 또는 특발성 골수섬유증, 만성 호중구성 백혈병, 만성 호산구성 백혈병, 만성 골수단핵구성 백혈병, 소아 골수단핵구성 백혈병, 과다호산구성 증후군, 전신 비만세포증, 및 비정형 만성 골수 백혈병을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 문헌 [Tefferi, A. and Gilliland, D. G., Oncogenes in myeloproliferative disorders, Cell Cycle. March 2007, 6(5): 550-566]은 그의 전문이 모든 목적을 위해 본원에 참조로 완전히 포함된다.

단독 또는 조합한 본 발명의 화합물 A는 불응성 또는 재발성 형태의 질환, 예컨대 재발성, 불응성 AML, 재발성, 불응성 다발성 골수종 뿐만 아니라 MDS 환자, 예컨대 고위험성 MDS 환자를 치료하는데 사용될 수 있다.

투여량

화합물 A 또는 화합물 A와의 조합물의 최적 용량은 공지된 방법을 사용하여 각각의 개체에 대해 실험적으로 결정될 수 있으며, 질환의 진행 정도; 개체의 연령, 체중, 전반적 건강, 성별 및 섭식; 투여 시간 및 경로; 및 개체가 복용하는 다른 의약을 포함하나 이에 제한되지는 않는 다양한 인자에 따라 달라질 것이다. 최적 투여량은 관련 기술분야에 널리 공지된 상용 시험 및 절차를 사용하여 확립될 수 있다. 화합물 A는 단독으로 또는 조합하여 25mg, 50mg, 70mg, 75mg, 100mg, 150mg, 200mg, 250mg, 300mg, 350mg 400mg, 450mg 또는 500mg으로 투여될 수 있다.

본 발명의 한 조합물에서, 룩솔리티닙은 25mg, 50mg, 70mg, 75mg, 100mg, 150mg, 200mg, 250mg, 300mg, 350mg 400mg, 450mg 또는 500mg으로 투여되는 화합물 A와 조합하여 5 mg, 10 mg, 15 mg, 20 mg, 25 mg으로 투여될 수 있다. 화합물 A의 조합물의 투여 범위의 경우에, 룩솔리티닙은 0.25 mg 내지 25 mg, 보다 바람직하게는 1mg 내지 25mg일 수 있고, 화합물 A는 5mg 내지 800mg, 보다 바람직하게는 20mg 내지 200mg일 수 있다. 매일 1회 투여가 바람직하다.

화합물 A 및 화합물 B의 조합물에서, 예를 들어 화합물 A는 200 mg, 300 mg, 400 mg 또는 500 mg의 표준 용량으로 제공될 수 있고, 화합물 B는 100 mg, 200 mg 또는 300 mg의 용량으로 제공될 수 있다. 임의로 환자 결과에 따라 화합물 A는 100 mg 또는 70 mg의 보다 낮은 용량으로 제공될 수 있다. 화합물 A 및 화합물 B의 조합물에 의해 보여진 전-임상 상승작용으로 인해, 함께 투여되는 각 조합물의 임상 용량과 비교하여 각 화합물의 보다 낮은 임상 용량이 투여될 수 있다. PKC412는, 예를 들어 25 - 250 mg으로 투여될 수 있으며, 여기서 100 mg이 이 범위의 구체적 예이다.

단일 투여 형태를 제공하기 위해 담체 물질과 조합될 수 있는 작용제의 조합물의 양은 치료될 개체 및 특정한 투여 방식에 따라 달라질 것이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 작용제의 조합물을 함유하는 단위 투여 형태는 작용제가 단독으로 투여되는 경우에 전형적으로 투여되는 조합물 중 각각의 작용제의 양을 함유할 것이다.

투여 빈도는 사용되는 화합물 및 치료 또는 예방할 특정한 상태에 따라 달라질 수 있다. 일반적으로, 유효 요법을 제공하기에 충분한 최소 투여량을 사용하는 것이 바람직하다. 환자는 일반적으로 치료 또는 예방할 상태에 적합한 검정을 사용하여 치료 유효성에 대해 모니터링될 수 있으며, 이는 통상의 기술자에게 익숙할 것이다.

투여 형태는 약물 제제 화학분야의 통상의 기술자에게 용이하게 자명한 다양한 통상의 혼합, 분쇄 및 제작 기술에 의해 제조될 수 있다.

작용제의 조합물, 또는 작용제의 조합물의 개별 작용제를 함유하는 경구 투여 형태는 캡슐, 예를 들어 젤라틴 캡슐 내부에 밀봉되어 있는 미세정제 형태일 수 있다. 이를 위해, 제약 제제에 사용되는 바와 같은 젤라틴 캡슐, 예컨대 화이자(Pfizer)로부터 입수가능한 캡슈겔(CAPSUGEL)로 공지된 경질 젤라틴 캡슐이 사용될 수 있다.

본원에 유용한 많은 경구 투여 형태는 작용제의 조합물, 또는 작용제의 조합물의 개별 작용제를 입자 형태로 함유한다. 이러한 입자는, 코팅된 투여 형태, 예컨대 맛-차폐된 투여 형태, 프레스 코팅된 투여 형태 또는 장용 코팅된 투여 형태의 코어 요소 중에 존재하는 정제로 압착될 수 있거나, 또는 캡슐, 삼투 펌프 투여 형태, 또는 다른 투여 형태에 함유될 수 있다.

본원에 개시된 본 조합물, 투여 형태, 제약 조성물 및 제약 제제의 약물들은 100:1 내지 1:100 범위의 비로 존재한다.

독성 없이 효능을 산출하는 약물 화합물의 최적의 비, 개별적 및 합한 투여량, 및 농도는 표적 부위로의 활성 성분의 유용성의 동역학에 기초한 것이고, 이는 통상의 기술자에게 공지된 방법을 사용하여 결정된다.

본 발명의 제약 조합물의 투여는, 본 발명의 조합물에 사용되는 제약상 활성 성분 중 1종만을 적용한 단독요법과 비교하여, 유익한 효과, 예를 들어 상승작용적 치료 효과, 예를 들어 증상의 완화, 증상의 진행의 지연 또는 증상의 억제와 관련된 치료 효과 뿐만 아니라, 추가의 놀라운 유익한 효과, 예를 들어 보다 적은 부작용, 개선된 삶의 질 또는 감소된 이환율을 가져올 수 있다.

추가의 이익은 본 발명의 조합물의 활성 성분의 보다 낮은 용량이 사용될 수 있다는 것, 예를 들어, 투여량이 종종 보다 적게 필요할 뿐만 아니라 덜 빈번하게 적용될 수 있다는 것일 수 있으며, 이는 부작용의 발생 또는 중증도를 감소시킬 수 있다. 이는 치료할 환자의 필요 및 요건에 따른다.

암, 예를 들어 골수증식성 장애를 표적화 또는 예방하는데 연합 치료상 유효할 수 있는 양을 포함하는 제약 조성물을 제공하는 것이 본 발명의 한 목적이다. 이 조성물에서, 화학식 I의 화합물 및 화학식 II의 화합물은 함께, 차례로 또는 개별적으로 1종의 조합 단위 투여 형태 또는 2종의 개별 단위 투여 형태로 투여될 수 있다. 단위 투여 형태는 또한 고정 조합물일 수 있다.

화합물 둘 다의 개별 투여를 위한 또는 고정 조합물로 투여하기 위한 제약 조성물, 즉 본 발명에 따른 화합물 둘 다를 포함하는 단일 생약 조성물은 그 자체가 공지되어 있는 방식으로 제조될 수 있고, 포유동물 (온혈 동물), 예컨대 인간에게로의 경장, 예컨대 경구 또는 직장, 및 비경구 투여에 적합한 것이며, 예를 들어 상기 나타낸 바와 같은 치료 유효량의 적어도 1종의 약리학적 활성 조합 파트너를 단독으로, 또는 특히 경장 또는 비경구 적용에 적합한 1종 이상의 제약상 허용되는 담체 또는 희석제와 조합하여 포함한다.

본원에 제공된 제약 조성물 또는 조합물 (즉, 화합물 A와 JAK 억제제, 예컨대 룩솔리티닙 또는 PI3K 억제제, 예컨대 화합물 B)은 임상 연구에서 시험될 수 있다. 적합한 임상 연구는, 예를 들어 증식성 질환을 앓는 환자에서의 개방 표지, 용량 증량 연구일 수 있다. 이러한 연구는 특히 본 발명의 조합물의 활성 성분의 상승작용을 입증한다. 증식성 질환에 대한 유익한 효과는 통상의 기술자에게 그 자체로 공지된 이들 연구의 결과를 통해 직접 결정될 수 있다. 이러한 연구는 특히 본 발명의 활성 성분 및 조합물을 사용하는 단독요법의 효과와 비교하는데 적합할 수 있다. 한 실시양태에서, 화합물 A의 용량은 최대 허용 투여량에 도달할 때까지 증가되고, 다른 화합물 (예를 들어 룩솔리티닙 또는 화합물 B)은 고정 (비-변화하는) 용량으로 투여된다. 대안적으로, 화합물 A와 조합한 다른 화합물은 비-변화하는 용량으로 투여될 수 있고, 화합물 A의 화합물의 용량은 증가될 수 있다. 각 환자는 매일 또는 간헐적으로 화합물을 투여받을 수 있다. 치료 효능은 이러한 연구에서, 예를 들어 12주, 18주 또는 24주 후에 매 6주의 증상 점수의 평가에 의해 결정될 수 있다.

다른 조합물 및 지표

화합물 A는 다른 약물 또는 치료, 예컨대 표적화 요법 약물, 레날리도미드, 탈리도미드, 포말리도미드, 프로테아제 억제제, 보르테조밉, 카르필조밉, 코르티코스테로이드, 덱사메타손, 프레드니손, 다라투무맙, 화학요법 약물, 안트라시클린, 독소루비신, 리포솜 독소루비신, 멜팔란, 비스포스포네이트, 시클로포스파미드, 에토포시드, 시스플라틴, 카르무스틴, 줄기 세포 이식 (골수 이식) 및 방사선 요법 중 1종 이상과 조합하여 본원에 개시된 다른 암 또는 지표, 예컨대 다발성 골수종 및 재발성 불응성 다발성 골수종을 치료하는데 사용될 수 있다.

화합물 A는 다른 약물 또는 치료, 예컨대 표적화 요법 약물, 미도스타우린 (PKC 412), 레날리도미드, 탈리도미드, 포말리도미드, 소라페닙, 티피파르닙, 퀴자르티닙, 데시타빈, CEP-701 (세팔론(Cephalon)), SU5416, SU11248, MLN518, L000021648 (머크(Merck)) 화학요법 약물, 데시타빈, 아자시티딘, 클로파라빈, 안트라시클린, 독소루비신, 리포솜 독소루비신, 다우노루비신, 이다루비신, 시타라빈, 올-트랜스 레티노산 (ATRA), 삼산화비소, 줄기 세포 이식 (골수 이식) 및 방사선 요법 중 1종 이상과 조합하여 본원에 개시된 다른 암 또는 지표, 예컨대 급성 골수성 백혈병 (AML) 및 재발성 불응성 AML을 치료하는데 사용될 수 있다. 수용체 티로신 키나제를 코딩하는, FMS-유사 티로신 키나제 3 (FLT3) 유전자에서의 돌연변이는 AML의 약 25%의 경우에 발생하며, 미도스타우린, 소라페닙 및 퀴자르티닙 (이들 모두가 화합물 A에 대한 잠재적 조합 파트너임)과 같은 약물을 사용하여 표적화된다. AML로 돌연변이된 다른 것은 GSK1120212 및 MSC193636B를 사용하여 표적화되는 RAS 및 룩솔리티닙을 사용하여 표적화되는 JAK2를 갖는 환자를 포함한다.

제제

본원에 제공된 약물 조합물은 제약 제제의 통상의 기술자에게 명백한 다양한 방법에 의해 제제화될 수 있다. 상기 기재된 다양한 방출 특성은 다양한 상이한 방식으로 달성될 수 있다. 적합한 제제는, 예를 들어 정제, 캡슐, 프레스 코팅 제제, 및 다른 용이하게 투여되는 제제를 포함한다.

적합한 제약 제제는, 예를 들어 약 0.1% 내지 약 99.9%, 바람직하게는 약 1% 내지 약 60%의 활성 성분(들)을 함유할 수 있다. 경장 또는 비경구 투여용의 조합 요법을 위한 제약 제제는, 예를 들어 단위 투여 형태인 것, 예컨대 당-코팅된 정제, 정제, 캡슐 또는 좌제, 또는 앰플이다. 달리 나타내지 않는 한, 이들은 그 자체로 공지된 방식, 예를 들어 통상의 혼합, 과립화, 당-코팅, 용해 또는 동결건조 공정에 의해 제조된다. 필요 유효량이 복수의 투여 단위의 투여에 의해 도달될 수 있기 때문에, 각 투여 형태의 개별 용량에 함유된 조합 파트너의 단위 함량은 그 자체로 유효량을 구성할 필요는 없는 것으로 인지될 것이다.

특히, 치료 유효량의 본 발명의 조합물의 조합 파트너 각각은 동시에 또는 순차적으로 및 임의의 순서로 투여될 수 있고, 상기 성분은 개별적으로 또는 고정 조합물로서 투여될 수 있다. 예를 들어, 본 발명에 따라 질환을 치료하는 방법은 (i) 유리 또는 제약상 허용되는 염 형태의 제1 작용제 (a)를 투여하는 것, 및 (ii) 유리 또는 제약상 허용되는 염 형태의 작용제 (b)를 동시에 또는 순차적으로 임의의 순서로, 연합 치료 유효량으로, 바람직하게는 상승작용적 유효량으로, 예를 들어 본원에 기재된 양에 상응하는 1일 또는 간헐적 투여량으로 투여하는 것을 포함할 수 있다. 본 발명의 조합물의 개별 조합 파트너는 요법의 기간 동안 상이한 시간에 개별적으로, 또는 분할 또는 단일 조합 형태로 공동으로 투여될 수 있다. 게다가, 용어 "투여하는"은 또한 조합 파트너 그 자체로 생체내 전환되는 조합 파트너의 전구약물의 사용을 포괄한다. 따라서, 본 발명은 동시 또는 교대 치료의 이러한 요법 모두를 포괄하는 것으로 이해되어야 하며, 용어 "투여하는"은 이에 따라 해석되어야 한다.

본 발명의 조합물에 사용되는 각각의 조합 파트너의 유효 투여량은, 사용되는 특정 화합물 또는 제약 조성물, 투여 방식, 치료될 상태, 치료될 상태의 중증도에 따라 달라질 수 있다. 따라서, 본 발명의 조합물의 투여 요법은 투여 경로 및 환자의 신장 및 간 기능을 비롯한 다양한 인자에 따라 선택된다. 통상의 기술을 갖는 임상의 또는 의사는 상태의 진행을 완화, 대응 또는 저지시키기 위해 요구되는 단일 활성 성분의 유효량을 용이하게 결정하고 처방할 수 있다.

실시예 1

시험관내 검정

Ba/F3-JAK2^V617F를 10% FBS 함유 DMEM 중에서 성장시켰다. 제조업체의 프로토콜에 따라 셀타이터-글로(CELLTITER-GLO)® 발광 세포 생존율 검정 (프로메가(Promega) #G7573) ("검정")을 사용하여 세포 ATP 함량을 측정하여 세포 생존율을 결정하였다. 검정은 웰 플레이트 중에 존재하는 ATP의 양을 정량적으로 결정하였으며, 이는 대사적 활성 세포의 지표이다.

세포를 96-웰 플레이트 상에 삼중으로 및 성장 배지 중에 플레이팅하였다. 이어서, 세포를 10 포인트 용량 적정 곡선 (Ba/F3-JAK2^V617F의 경우에 2.7 uM 최상 농도 및 0.45 nM 최하 농도)에서 룩솔리티닙, 화합물 A 또는 화합물 A와 룩솔리티닙의 조합물로 처리하고, 37 도에서 인큐베이션하였다. 인큐베이션 72시간 후, 셀타이터-글로를 첨가하여 세포를 용해시키고, ATP 소모를 측정하였다. 엔비전(Envision) 플레이트 판독기 상에 기록된 발광 강도를 사용하여 신호를 측정하였다.

화합물 A와 룩솔리티닙 사이의 유의한 상승작용이 도 1에 의해 Ba/F3-JAK2^V617F에서 제시되었다. 룩솔리티닙과 화합물 A의 조합물은, 심지어 매우 저용량에서, 어느 하나의 단일 작용제 단독보다 큰 세포 성장의 억제를 유도하였다. 룩솔리티닙 (0.033 마이크로M에서)과 화합물 A (0.033 마이크로M에서)의 조합물은 세포 성장 억제 84%를 가져왔으며, 이는 본질적으로 0.3 마이크로M에서의 룩솔리티닙 단독 (87%) 또는 2.7 마이크로M에서의 화합물 A 단독 (84%)에 의해 달성되는 것과 동등하였다. 이는 룩솔리티닙 단독에 비해 거의 한 자릿수 개선 및 화합물 A 단독에 비해 한 자릿수 초과의 상승작용적 효과를 입증하였다.

MPN 세포주 SET2, UKE-1 및 AML 세포주 HEL92 및 CMK는 또한 이 조합물과 유사한 상승작용적 효과를 나타내었다. 실제로, 매우 낮은 농도의 화합물 A 및 룩솔리티닙 (33 내지 100 나노몰 범위)을 조합하는 것은 보다 높은 용량 (0.3 내지 1 마이크로M 범위 근처)에서의 단일 작용제 룩솔리티닙 단독의 사용만큼의 억제를 유도할 수 있었다. 따라서, 분자 메카니즘 분석은 2종의 화합물이 리보솜 S6 단백질의 인산화, 4eBP1, Bad, ERK1/2, MCL1 발현/분해, 및 PARP 절단을 비롯하여 시험관내 다양한 표적을 억제하는데 상승작용하는 것으로 나타내었다.

실시예 2

생체내 모델

룩솔리티닙과 화합물 A의 조합물을 MPN의 마우스 모델에서 추가로 검사하였다. 이 모델에서, Ba/F3 세포는 Epo 수용체 및 JAK2 V617F 돌연변이를 보유하였다. Ba/F3-EpoR-JAK2^V617F를 실험 영상화를 위한 루시페라제 태그를 사용하여 조작하였다. 암컷 SCID/베이지 마우스를 꼬리 정맥을 통해 1x10e6 Ba/F3-EpoR-JAK2^V617F 세포로 접종하였다. 전신 질환 부담을 IVIS 제노겐 기술을 사용하여 모니터링하였다. 질환 부담을 배측 및 복측 광자 신호의 합계로서 정의하였다. 제3일에, 질환-보유 마우스를 질환 부담을 기준으로 하여 처리 코호트 내로 무작위화하였다. 마우스를 비히클, 화합물 A (25 mg/kg에서, 경구 위관영양 (PO) 매일 (QD)에 의해), 룩솔리티닙 (60 mg/kg에서, PO, 매일 2회 (BID)) 또는 두 작용제의 조합물로 처리하였다. 연구는 처리 10일 후 종점에 도달하였다. 각각의 연구 코호트로부터의 비장 중량을 종점에서 수득하였다. 상대 비장 중량을 비히클 처리를 받은 코호트의 평균 비장 중량에 대해 개별 비장 중량을 정규화하여 계산하였다. 룩솔리티닙과 화합물 A의 조합물은 2종의 화합물의 상가적 효과로부터 단지 예상되었을 것보다 현저한 질환 부담 및 비장 중량의 감소를 가져왔다.

도 2에서, 생물발광의 수준에 의해 측정된 질환 부담은 룩솔리티닙 처리로 감소되었으며, 이는 추가로 룩솔리티닙과 화합물 A의 조합물로 ~3배 감소되었다.

도 3은 MPN 전임상 모델에서 비장 크기 (중량)에 대한 룩솔리티닙 및 룩솔리티닙과 화합물 A의 조합물의 효과를 제시한다. 룩솔리티닙 단독요법은 비히클 대조군의 것에 비해 ~65% 비장 중량의 감소를 가져왔다. 룩솔리티닙과 화합물 A의 조합물은 비장 중량에서 추가의 4배 감소로 이어졌으며, 비히클 대조군의 것에 비해 8%의 상대 비장 중량을 가져왔다.

실시예 3

화합물 A는 그의 투여량에 대해 놀라운 PK 노출 (C_max AUC) 특성을 나타내었다. 500 mg에서 화합물 A는 제1일 투여 후 3-8시간의 범위에서 피크 약물 농도로, 70mg - 250 mg의 용량 범위에 비례하는 PK 노출 (C_max AUC)로 흡수되었다. 제14일 (정상 상태)에, PK 노출은 200mg 내지 350mg 용량에서 평탄역을 형성하는 것으로 보여졌다. 500mg (정상 상태)에서의 노출은 200mg 내지 350mg 용량에서 관찰된 것에 비해 약 2배 증가하였다.

실시예 4

16종의 다발성 골수종 세포주의 연장된 패널에서 화합물 A와 화합물 B의 조합물의 스크리닝은 시험된 모든 세포주에서 상승작용을 나타내었다. 게다가, 6종의 다발성 골수종 세포주의 하위세트를 사용하여 이 조합물을 다수의 다른 조합물과 비교하는 경우에, 이것이 가장 상승작용적 조합물인 것으로 확인되었다. 스크리닝된 다른 조합물은 화합물 A와 AUY922, CDZ173, INC424, LBH589, LEE011 또는 TKI258이었다. 이들 조합물을 스크리닝한 세포주는 KMM-1, MKS-11, KMS-26, KMS-34, MM1-S, 및 OPM-2였다. 화합물 A와 화합물 B의 조합물만이 6종의 이들 세포주 모두에서 상승작용을 나타내었다.

실시예 5

마우스 이종이식편 모델에서의 생체내 연구에서, KMS-12-BM 및 KMS-34는 추가로 조합 요법에서의 화합물 A와 화합물 B의 상승작용적 특성을 지지하였다. KMS-34 모델에서, 화합물 B 20mg/kg과 조합한 화합물 A 50 mg/kg 또는 화합물 B 1 mg/kg과 조합한 화합물 A 75mg/kg은 용량 매칭된 단독요법과 비교하여 보다 큰 항종양 활성을 가져왔다. KMS-12-BM 모델에서, 화합물 A 단독요법 (100, 75 및 50 mg/kg)은 유의한 항종양 활성을 가져왔으며, 단일 작용제 화합물 B는 항종양 활성을 입증하지 않았다. 화합물 A (75 및 50 mg/kg)와 화합물 B (20 mg/kg)의 조합물은 용량-매칭된 단독요법으로 달성된 것보다 큰 항종양 활성을 가져왔다. 조합물의 효능은 100 mg/kg에서의 화합물 A 단독요법으로 달성된 효능과 필적하였다. 결과는 조합물이 단일 작용제 PI3K 억제제에 감수성이 아닌 다발성 골수종에서 활성을 가질 수 있다는 것을 시사하였다. 이들 모델 둘 다로부터의 데이터는 또한 조합 요법이 보다 낮은 용량을 투여하도록 하여 용량 감소 또는 중단에 대한 필요를 감소시키고, 잠재적으로 환자에 대한 개선된 약물 내약성을 가져올 수 있다는 것을 시사하였다.

실시예 6

화합물 A 및 화합물 B 둘 다를 28일 주기로 투여하였다. 용량-증량을 200 mg q.d. 화합물 A 및 100 mg q.d. 화합물 B로 시작하였다. 용량 수준을 조사하였다. 두 연구 약물을 28일 주기로 투여하였다. 화합물 A 단독으로 무작위화된 환자는 화합물 B를 q.d. 연속적으로 28일 주기로 경구 투여받았다. 투여는 거의 동시에 매일 경구로 하였다. 하기 표 1은 다양한 출발 용량 수준을 제시한다.

<표 1>

하기 표 2는 다양한 용량 증량 시나리오를 제시한다.

실시예 7

96-웰 플레이트 (코스타(Costar) #3904)에서 웰당 80 μl의 배지당 10,000개 세포의 밀도로 세포를 플레이팅하고, 화합물 첨가 전에 밤새 인큐베이션하였다. 화합물 스톡을 적절한 배양 배지에서 새로이 제조하고, 플레이트에 전자 다중채널 피펫에 의해 3회 반복하여 수동으로 첨가하였다. 화합물 단독으로 또는 화합물 A와 NVP-PKC412의 조합물로 세포를 처리하였다. 제조업체의 프로토콜에 따라 셀 타이터 글로 (프로메가 #G7571)를 통해 세포 ATP 수준을 정량화하여 72시간의 처리 후 세포의 생존율을 평가하였다. 플레이트를 발광 플레이트 판독기 (빅터(Victor) X4, 퍼킨 엘머) 상에서 판독하였다. 챌리스(Chalice) 소프트웨어 (http://chalice.zalicus.com/documentation/analyzer/index.jsp)에 의해 데이터를 분석하여 성장 억제, 억제 및 HSA 초과를 계산하였다 (Zimmermann et al., Drug Discov. Today 12: 34-42 (2007); Lehar et al., Nat. Biotech 27 (7):659-666 (2009)).

화합물 A 및 NVP-PKC412의 단일 작용제 둘 다는 Molm-13 및 MV-4-11에서 활성이었지만, 중요하게는 2종의 작용제를 조합하는 것은 보다 낮은 용량에서 상가적 규모 초과의 반응을 산출하였다. 예를 들어, Molm-13 세포주에서 0.011μM의 NVP-PKC412는 66% 성장 억제를 산출하고, 0.3μM 화합물 A는 49% 성장 억제를 제공하였지만, 이들 용량에서의 2종의 작용제의 조합물은 80%의 성장 억제를 산출하였다 (표 3, 상단 좌측 패널). 이 용량 조합물은 표 4, 하단 좌측 패널에 나타낸 바와 같이 10에 대한 로에베 초과 억제 값을 나타내었다.

표 3 - 6은 FLT3 억제제 PKC412를 최좌측 칼럼에서 상단에서 하단으로 읽을 때 0.1에서 출발하고 0에서 종결하는 마이크로 mol (μM)의 농도 값으로 및 화합물 A PIM 억제제를 하단 열에서 우측에서 좌측으로 읽을 때 2.7 μM에서 출발하고 0에서 종결하여 나타내었다. 각 화합물을 3배 횟수로 희석하였으며, 하기 대시는 각 수치 사이의 3배 희석을 나타낸다.

<표 3> 용량 매트릭스 MOLM-13, 억제, N=3

<표 4> 로에베 초과 MOLM-13, 억제 부피=5.04(.25) Chi 2=140

<표 5> 용량 매트릭스 MV-4-11 억제, N=3

<표 6> 로에베 초과 MV4-11 억제 부피 4.55(.28) Chi 2=72

실시예 8

AML 세포주 Molm-13의 약물 처리 이후의 단백질 이뮤노블롯의 생화학적 프로파일을 도 4 및 도 5에 제시하였다. AML 세포를 800nM 화합물 A (PIM i), 50nM PKC412 (FLT3i), 조합된 두 화합물, 또는 DMSO 단독과 함께 인큐베이션하였다. 포스스톱(PhosStop) 포스파타제 억제제 칵테일 정제 (로슈 다이아그노스틱스(Roche Diagnostics) #04 906 837 001) 및 완전 프로테아제 억제제 칵테일 정제 (로슈 다이아그노스틱스 # 11 836 145 001)를 함유하는 M-PER 포유동물 단백질 추출 완충제 중에서 24시간의 처리 후 세포를 용해시켰다. 단백질을 4-12% 비스-트리스(Bis-Tris) NuPAGE SDS 겔 (인비트로젠(Invitrogen) #WG1403Bx10) 상에서 분리하고, 후속적으로 건조 블롯팅 시스템 (인비트로젠 iBLOT)을 사용하여 니트로셀룰로스 막으로 옮겼다. 항-p4EBP1 (셀 시그널링 테크놀로지스(Cell Signaling Technologies) #9459), 항-pBAD (셀 시그널링 테크놀로지스 # 9296), 항-절단된 Parp (셀 시그널링 테크놀로지스 # 5625), 항-MCL-1 (셀 시그널링 테크놀로지스 #5453), 항-pAKT-S473 (셀 시그널링 테크놀로지스 #4058), 항-pAKT-T308 (셀 시그널링 테크놀로지스 #4056), 항-pS6 (셀 시그널링 테크놀로지스 #4858), 항-PIM1 (노파르티스 사내 항체 배치 #NOV22-39-5) 및 항-GAPDH (셀 시그널링 테크놀로지스 #2118)의 1:1000 희석물을 사용하여 단백질을 검출하였다. 모든 단백질을 항-토끼-HRP 2차 항체를 사용하여 검출하고, 신진(Syngene) 영상화 시스템 상에서 슈퍼시그널 웨스트 듀라(SuperSignal West Dura) 화학발광 기질 (써모 사이언티픽(Thermo Scientific) # 34076)로 발색시켰다.

Molm-13 세포주에서의 아폽토시스 마커 상에서의 화합물 처리의 생화학적 효과를 도 4에서 입증하였다. 화합물 A (PIMi) 플러스 PKC412 (FLT3i)의 조합물은 어느 하나의 단일 작용제 단독과 비교하여 MCL-1 및 pBAD의 보다 많은 분해를 가져왔다. mTOR 경로 단백질에 대한 생화학적 효과를 도 5에서 입증하였다. 화합물 A 플러스 NVP-PKC412의 조합물은 p-AKT-S473, pS6 및 4EBP1을 약독화시켰다.

Claims

룩솔리티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 N-(4-((1R,3S,5S)-3-아미노-5-메틸시클로헥실)피리딘-3-일)-6-(2,6-디플루오로페닐)-5-플루오로피콜린아미드 (화합물 A) 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 제약 조합물.
골수성 신생물 또는 백혈병의 치료를 위한 제1항의 조합물의 용도.
제2항에 있어서, 골수성 신생물이 골수증식성 신생물 (MPN), 만성 골수 백혈병 (CML), 만성 호중구성 백혈병, 진성 다혈구혈증 (PV), 골수섬유증, 원발성 골수섬유증 (PM), 특발성 골수섬유증, 본태성 혈소판혈증 (ET), 만성 호산구성 급성 백혈병, 비만세포증, 백혈병, 골수이형성 증후군 (MDS), 급성 골수성 백혈병 (AML), 만성 호산구성 백혈병, 만성 골수단핵구성 백혈병, 소아 골수단핵구성 백혈병, 과다호산구성 증후군, 전신 비만세포증, 및 비정형 만성 골수 백혈병인 조합물의 용도.
제3항에 있어서, 룩솔리티닙 및 화합물 A의 공동 또는 순차적 치료를 사용한 골수성 신생물 또는 백혈병의 치료를 위한 조합물의 용도.
제1항에 있어서, 골수이형성 증후군 (MDS)의 치료를 위한 조합물의 용도.
제1항의 화합물을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 환자에서 골수성 신생물, 백혈병 또는 MDS를 치료하는 방법.
제1항에 있어서, 화합물이 화합물 A인 방법.
제7항에 있어서, 백혈병이 급성 골수성 백혈병 (AML)인 방법.
제8항에 있어서, AML이 재발성 또는 불응성인 방법.
N-(4-((1R,3S,5S)-3-아미노-5-메틸시클로헥실)피리딘-3-일)-6-(2,6-디플루오로페닐)-5-플루오로피콜린아미드 (화합물 A), 및 표적화 요법 약물, 레날리도미드, 탈리도미드, 포말리도미드, 프로테아제 억제제, 보르테조밉, 카르필조밉, 코르티코스테로이드, 덱사메타손, 프레드니손, 다라투무맙, 화학요법 약물, 안트라시클린, 독소루비신, 리포솜 독소루비신, 멜팔란, 비스포스포네이트, 시클로포스파미드, 에토포시드, 시스플라틴, 카르무스틴, 줄기 세포 이식 (골수 이식), 방사선 요법 또는 (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드) (화합물 B) 중 1종 이상을 포함하는 조합물.
제10항에 있어서, 다발성 골수종의 치료를 위한 조합물.
제11항에 있어서, 다발성 골수종이 재발성 또는 불응성인 조합물.
N-(4-((1R,3S,5S)-3-아미노-5-메틸시클로헥실)피리딘-3-일)-6-(2,6-디플루오로페닐)-5-플루오로피콜린아미드 (화합물 A), 및 표적화 요법 약물, 미도스타우린, 레날리도미드, 탈리도미드, 포말리도미드, 소라페닙, 티피파르닙, 퀴자르티닙, 데시타빈, 화학요법 약물, 데시타빈, 아자시티딘, 클로파라빈, 안트라시클린, 독소루비신, 리포솜 독소루비신, 다우노루비신, 이다루비신, 시타라빈, 올-트랜스 레티노산 (ATRA), 삼산화비소, 줄기 세포 이식 (골수 이식), 방사선 요법 또는 (S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드) 중 1종 이상을 포함하는 조합물.
제13항에 있어서, 급성 골수성 백혈병 (AML)의 치료를 위한 조합물.
제14항에 있어서, AML이 재발성 또는 불응성인 조합물.
(S)-피롤리딘-1,2-디카르복실산 2-아미드 1-({4-메틸-5-[2-(2,2,2-트리플루오로-1,1-디메틸-에틸)-피리딘-4-일]-티아졸-2-일}-아미드)를 200mg 내지 350mg의 용량으로 투여하는 것을 포함하여 PK 노출 평탄역을 형성하도록 하는 방법.
제16항에 있어서, 용량이 200mg, 250mg, 300mg, 또는 350mg인 방법.
제11항에 있어서, 화합물 A의 용량이 1일에 1회 70 내지 600 mg이고, 화합물 B의 용량이 1일에 1회 100 내지 300 mg인 조합물.