KR20160013769A

KR20160013769A - 심비디움 추출물을 유효성분으로 함유하는 근위축 예방 또는 치료용 약학 조성물

Info

Publication number: KR20160013769A
Application number: KR1020140096035A
Authority: KR
Inventors: 김택중; 김완중
Original assignee: 연세대학교 원주산학협력단
Priority date: 2014-07-28
Filing date: 2014-07-28
Publication date: 2016-02-05
Also published as: KR101622032B1

Abstract

심비디움(Cymbidium) 추출물을 유효성분으로 함유하는 근위축 예방, 치료 또는 개선하기 위한 약학 조성물, 식품 조성물, 및 건강기능식품 조성물에 관한 것으로, 심비디움(Cymbidium) 추출물은 근세포 손상, 괴사 및 아포토시스(apoptosis)를 억제하여 항위축 효능을 나타내어 우주식품 개발에 적용할 수 있을 뿐만 아니라 근위축 예방, 치료 또는 개선하기 위한 유효성분으로서 유용하게 사용될 수 있다.

Description

심비디움 추출물을 유효성분으로 함유하는 근위축 예방 또는 치료용 약학 조성물{Pharmaceutical composition comprising Cymbidium extract for preventing or treating muscle atrophy}

본 발명은 심비디움(Cymbidium) 추출물을 유효성분으로 함유하는 근위축 예방 또는 치료용 약학 조성물 및 개선용 식품 조성물에 관한 것으로, 심비디움(Cymbidium) 추출물은 근세포 손상, 괴사 및 아포토시스(apoptosis)를 억제하여 항위축 효능을 나타내어 우주식품 개발에 적용할 수 있을 뿐만 아니라 근위축을 예방, 치료 또는 개선하기 위한 유효성분으로서 유용하게 사용될 수 있다.

근위축(atrophy)은 근육을 사용하지 않음으로써 발생하는 근육 조직의 손실 또는 근육 자체의 병 또는 근육을 지배하는 신경의 손상으로 정의할 수 있다. 일반적으로는 근육을 사용하지 않음으로써 심각한 근육 강도 손실이 발생해 점차 근위축으로 진행하게 되는 경우가 있으며, 이에 더해 중력이 없는 곳에서 생활하는 사람의 경우 또 한 칼슘과 근육 강도의 감소에 의해 근력이 저하되는 증상을 보이는 경우가 있다. 그리고 근육 자체의 병으로 인한 근위축은 중증 근무력증(myasthenia gravis), 근이영양증(dystrophy) : 진행성근이영양증, 근긴장성근이영양증, 듀센형, 베커형, 지대형, 안면견갑상완형과 근육 자체에 발생하는 염증 등이 있고, 근육을 지배하는 신경의 손상으로 인한 근위축은 척수성 근위축(spinal muscular amyotrophy) : 베라드니히-호프만형, 쿠겔베르그-벨란더병, 근위축성 측삭경화증(amyotrophic lateral sclerosis, ALS) : 루게릭병, 척수구 근위축(spinobular muscular atrophy) : 케네디병 등이 있다.

근위축의 발생 원인은 아직 명확하게 밝혀지지 않았으며, 현재까지 근위축 발병의 주원인으로 제기된 것은 산화물질 증가에 의한 근세포 손상, 스트레스 단백질 발현 감소로 인한 근단백질 생성-재생 감소, 프로테아솜 유비퀴틴화(proteosomal ubiquitination) 활성화에 따른 근단백질 분해 촉진 등을 들 수 있다.

퇴행성 근위축증과 연관된 근이영양증(Muscle dystrophy)은 미국 및 유럽에만 약 3만 명의 환자가 존재하는 희귀질환으로서 이 질병의 근본적 치료제로 현재 시장에 출시된 약물은 전무한 상태이다. 이러한 근위축 환자의 뚜렷한 치료법이 개발되지 않은 시점에서 경구용 제제로써 평생 복용하는 약물로는 천연물 추출물이 이상적이다. 또한 최첨단 기술을 기반으로 하는 고령화 시대와 우주시대가 도래함에 따라 근위축 질환의 경우 점진적으로 그 문제점이 크게 대두되고 있다. 따라서 본 발명에 따른 약학 조성물은 근위축과 신체적으로 장애가 있는 환자의 재활을 위해 유용하게 사용되어 지리라 생각되며 부작용이 없는 천연물을 통한 유효성분 물질의 규명은 연구에서의 높은 가치뿐만 아니라 의약학 발전에도 크게 도움이 되리라 생각된다.

심비디움(Cymbidium)은 동남아시아, 중국, 일본, 뉴기니, 오스트레일리아 북구가 원산지로, 2개의 꽃잎, 1개의 설판, 그리고 3개의 꽃받침으로 구성된 꽃, 칼모양의 잎, 일반적으로 벌브라고 불리는 방추형의 비대한 줄기 및 굵은 끈과 같은 뿌리를 가지고 있다. 산세베리아 보다 음이온 발생량이 더 많으며 상대습도까지 높여주는 기능이 있어 공기정화와 가습 능력이 우수한 식물로 보고되고 있다. 또한 모발세력 활력, 재생기능, 항염기능이 우수해 일본에서는 모발재생제품, 모발샴푸 등으로 개발되어 판매되고 있으며, 우리나라에서도 이러한 연구결과가 보고된바 있다.

한편, 죽상동맥경화증 억제 조성물에 관한 미국등록특허 제7,732,410호 및 상처치유를 촉진하고 건선을 치료하기 위한 조성물에 관한 미국등록특허 제7,674,832호는 각각 추가적인 일부 구성성분으로 심비디움 추출물이 포함될 수 있다는 것을 기재하고 있으며, 미국공개특허 제2013-0302450호는 모발의 성장과 육성 효과 및 항백모 효과가 있는 작용물질의 유효성분으로 심비디움속 추출물을 기재하고 있다.

그러나 근 위축예방, 치료 또는 재활을 위한 용도를 위해 심비디움(Cymbidium) 추출물을 사용한 예는 여태껏 보고된 바 없다.

이에 본 발명자들은 연구를 거듭하는 과정에서, 심비디움(Cymbidium) 추출물이 근세포 손상, 괴사 및 아포토시스(apoptosis)를 억제활성을 나타낸다는 것을 실험을 통해 최초로 규명함으로써 심비디움 추출물을 근위축 예방 또는 치료용 약학 조성물, 개선용 식품 조성물, 및 건강기능식품 조성물의 주성분으로 활용할 수 있는바, 본 발명을 완성하기에 이르렀다.

미국등록특허 제7,732,410호 미국등록특허 제7,674,832호 미국공개특허 제2013-0302450호

본 발명의 목적은 심비디움(Cymbidium) 추출물이 나타내는 근세포 손상, 괴사 및 아포토시스(apoptosis) 억제활성을 입증하여 근위축 예방, 치료 또는 개선을 위한 새로운 소재로써 이의 신규 용도를 제공하는데 있다.

상기 과제를 해결하기 위해, 본 발명은 심비디움 추출물을 유효성분으로 함유하는 근위축 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 심비디움 추출물을 유효성분으로 함유하는 근위축 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 심비디움 추출물을 유효성분으로 함유하는 근위축 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.

심비디움(Cymbidium) 추출물은 근세포 손상, 괴사 및 아포토시스(apoptosis)를 억제하여 항위축 효능을 나타내어 우주식품 개발에 적용할 수 있을 뿐만 아니라 근위축 예방, 치료 또는 개선하기 위한 약학 조성물, 식품 조성물 및 건강기능식품 조성물로 제공할 수 있다.

도 1은 심비디움 추출물을 25, 50, 100, 200 μg/ml을 처리한 후 근육세포에서 배양 하였을 때 나타나는 세포독성을 보여주는 그래프이다.
도 2는 H₂O₂로 근육세포 괴사를 유도한 근육세포에서 심비디움 추출물(뿌리 및 줄기 추출물)이 근육세포 괴사를 농도 의존적으로 예방하고 회복하는 효과를 보여주는 그래프이다.
도 3은 근육세포에서 아포토시스(apoptosis)에 대한 효과를 나타내는 심비디움 줄기 추출물에 관한 그래프이다.

본 발명은 심비디움(Cymbidium) 추출물을 유효성분으로 함유하는 근위축 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 일 양태에서, 상기 심비디움 추출물은 물, 유기용매 또는 이들의 혼합물로부터 선택되는 용매로 추출한 것일 수 있다.

본 발명의 일 양태에서, 상기 유기용매는 탄소수 1 내지 5의 알코올, 에틸 아세테이트, 아세톤, 에테르, 클로로포름, 벤젠, 헥산, 디클로로메탄 및 이들의 혼합용매일 수 있다.

본 발명의 일 양태에서, 심비디움 추출물은 상기 추출용매를 이용하여 추출된 1차 추출물을 극성이 다른 추출용매를 이용하여 다시 분획한 분획물을 포함한다. 예를 들어, 심비디움 추출물은 탄소 수 1 내지 5의 알코올로 추출한 후, 에테르, 벤젠, 헥산 등의 극성이 다른 용매로 다시 분획한 분획물일 수 있다.

본 발명의 일 양태에서, 상기 탄소 수 1 내지 5의 알코올은 메탄올, 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, 부탄올, 이소프로판올, 에틸렌글리콜, 글리세롤, 프로필렌글리콜일 수 있으나, 이로 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 일 양태에서, 상기 분획 시 용매는 2종 이상 사용할 수 있으며, 용매의 극성에 따라 순차적으로 사용하거나 혼합하여 사용하여, 각 용매 추출물을 제조할 수 있으나, 이에 한정되지는 않는다.

본 발명의 일 양태에서, 상기 제조된 추출물 또는 상기 분획과정을 수행하여 수득한 분획물은 이후 여과하거나 농축 또는 건조과정을 수행하여 용매를 제거할 수 있으며, 여과, 농축 및 건조를 모두 수행할 수 있다. 구체적으로 상기 여과는 여과지를 이용하거나 감압 여과기를 이용할 수 있으며, 상기 농축은 감압농축기, 일 예로 회전 증발기를 이용하여 감압 농축할 수 있으며, 상기 건조는 일 예로 동결건조법으로 수행할 수 있다.

본 발명의 일 양태에서, 상기 심비디움 추출물은 심비디움의 꽃, 잎, 줄기, 뿌리, 열매, 껍질, 또는 이들의 혼합물의 추출물일 수 있으며, 보다 바람직하게 줄기 또는 뿌리 추출물일 수 있다.

본 발명의 일 양태에서, 상기 심비디움 추출물은 근세포 손상, 괴사 또는 아포토시스(apoptosis)를 억제할 수 있다.

본 발명의 일 양태에서, 상기 근위축은 근육을 사용하지 않음으로써 발생하는 근육 조직의 손실로 인한 근 위축, 근육 자체의 병으로 인한 근 위축, 또는 근육을 지배하는 신경의 손상으로 인한 근 위축인 것일 수 있다.

본 발명의 일 양태에서, 상기 심비디움 추출물은 우주 생활로 인한 근육 노화 억제 또는 운동기능 향상용으로 포함되는 것일 수 있다.

상기 본 발명의 약학 조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함할 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 상기 조성물은 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로스 또는 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌 글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween)61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.

상기 약학 조성물은 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제, 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제 및 좌제로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형을 가질 수 있다.

상기 본 발명의 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다.

본 발명에서 용어 "약학적으로 유효한 양”은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 개체 종류 및 중증도, 연령, 성별, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 심비디움 추출물은 성인의 경우, 일 1회 내지 수회 투여 시, 0.01 내지 500 mg/kg의 용량으로 투여될 수 있다. 바람직하게는 0.1 내지 200 mg/kg, 보다 바람직하게는 0.1 내지 100 mg/kg 용량으로 일일 1 내지 3회 투여될 수 있다.

본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 근세포 손상, 괴사 및 아포토시스(apoptosis) 억제 효과를 나타내는 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고, 종래의 치료제와 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 그리고 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.

본 발명에서 용어 "개체”란 근세포 손상, 괴사 및 아포토시스(apoptosis) 억제 활성을 통해 예방 또는 치료할 수 있는 질환이 이미 발병되었거나, 발병될 수 있는 인간을 포함한 모든 동물을 의미하고 본 발명의 추출물을 포함하는 조성물을 개체에게 투여함으로써, 상기 질환을 효과적으로 예방 및 치료할 수 있다.

상기 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 투여될 수 있다. 본 발명의 조성물은 목적하는 바에 따라 복강내 투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 경구 투여, 비내 투여, 폐내 투여, 직장내 투여될 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 또한 상기 조성물은 활성 물질이 표적 세포로 이동할 수 있는 임의의 장치에 의해 투여될 수 있다.

본 발명은 심비디움(Cymbidium) 추출물을 유효성분으로 함유하는 근위축 예방 또는 개선용 식품 조성물에 관한 것이다.

본 발명에 따른 식품은, 심비디움 추출물을 포함하되 적절한 식품보조첨가제가 포함될 수 있다.

본 발명에서 용어 "식품보조첨가제”란 식품에 보조적으로 첨가될 수 있는 구성요소를 의미하며, 각 제형의 건강기능식품을 제조하는데 첨가되는 것으로서 당업자가 적절히 선택하여 사용할 수 있다. 식품보조첨가제의 예로는 여러 가지 영양제, 비타민, 광물 (전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 충진제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등이 포함되지만, 상기 예들에 의해 본 발명의 식품보조첨가제의 종류가 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 일 양태에서, 본 발명은 심비디움(Cymbidium) 추출물을 유효성분으로 함유하는 근위축 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물에 관한 것이다.

본 발명에서 용어 "건강기능식품”이란 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상 및 환 등의 형태로 제조 및 가공한 식품을 말한다. 여기서 기능성이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건용도에 유용한 효과를 얻는 것을 의미한다. 본 발명의 건강기능식품은 당업계에서 통상적으로 사용되는 방법에 의하여 제조가능하며, 상기 제조 시에는 당업계에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있고, 휴대성이 뛰어나, 본 발명의 건강기능식품은 근세포 손상, 괴사 및 아포토시스(apoptosis) 억제 효과를 증진시키기 위한 보조제로 섭취가 가능하다.

유효성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품의 제조 시에 본 발명에 따른 심비디움 추출물은 원료 조성물 중 0.01 내지 50 중량%, 보다 바람직하게는 0.1 내지 20 중량%의 양으로 첨가된다. 또한 과립, 정제 또는 캡슐형태의 식품의 경우에는 통상 0.1 내지 100 중량%, 바람직하기로는 5 내지 100 중량%의 범위에서 첨가하면 된다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하로도 사용될 수 있다.

상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.

본 발명의 건강식품에는 통상의 식품과 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유될 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 수크로스와 같은 디사카라이드 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 g당 일반적으로 약 0.01 내지 0.04 g, 바람직하게는 약 0.02 내지 0.03 g 이다.

이하, 하기 실시예, 실험예, 및 제조예를 통하여 본 발명에 대하여 보다 상세히 설명하고자 한다. 다만 이는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위한 것이지, 본 발명의 권리범위를 이로 한정하려는 의도는 아니다.

[실시예]

실시예1: 심비디움 추출물의 제조

심비디움(Cymbidium)은 농촌진흥청(Rural Dvelopment Administration, RDA)의 우수농산물관리제도(Good Agricultural Practice, GAP)에 의해 재배되었으며, 2009년 충청북도 음성(GPS: E 128° 62´ N 36° 56´)에서 수확되었다. 시료의 추출은 다음과 같이 추출하였다. 심비디움 뿌리와 줄기 음건조 시료 50 g에 99% 에탄올 150 ml을 첨가하여 150 rpm으로 48시간 동안 반응하여 여과한 후, 감압농축하여 동결건조 한 분말을 본 실험의 시료로 사용하였다.

[실험예]

실험예 1: 근육세포 배양계에서의 심비디움( Cymbidium ) 추출물의 항산화를 통한 생존률 향상 효과

(1) 세포배양

정상근육세포(C2C12)를 우태아혈청(fetal bovine serum; FBS)이 10% 함유된 DMEM 배지에서 배양하였다. 즉, 75 ㎠ 플라스틱 플라스크 (Falcon Co., England)에 정상 골격 근육세포를 10% FBS, 7.5% NaHCO₃150 μg/ml, 글루타민 58.4 μg/ml 및 항생제(antibiotics)/항진균제(antimycotics) 4.4 μl/ml 가함유된 DMEM 배지에서 37 ℃, 5% CO₂의 조건하에서 배양 하였다. 2∼3일 마다 한번씩 2차 배양하여 세포주를 유지하였다.

(2) 세포정량

세포가 자란 75 ㎠ 플라스틱 플라스크에서 배지액을 제거하고, CMF-PBS (calcium magnesium free-phosphatebuffered saline, pH 7.2)로 세척한 후, 0.25% 트립신/EDTA를 처리하여 세포를 플라스크 바닥으로부터 떼어낸 후 세포배양액으로 중화시켜서 원심분리(1200 rpm, 5 min) 하였다. 남은 세포의 펠렛(pellet)에 배양액을 가한 다음, 멸균피펫으로 반복 흡입하여 단일세포 부유액을 만든 후 트립판블루(trypan blue)를 세포부유액과 9:1의 비율로 혼합하여 광학현미경 상에서 혈구계산판(hemocytometer)을 이용하여 측정하였다.

(3) 세포독성 측정

심비디움(Cymbidium) 추출물의 독성측정은 MTT 분석방법을 이용하였다. 즉, 정상 근육세포(C2C12)를 24웰 플레이트에 1×10⁵ cells/well이 되도록 분주하였다. 이를 37 ℃, 5% CO₂ 조건의 배양기에서 24시간 배양한 후, 0, 25, 50, 100, 200 μg/ml의 다양한 농도의 심비디움 추출물을 첨가하여 24시간 동안 배양하였다. CMF-PBS (calcium magnesium free-phosphatebuffered saline, pH 7.2) 10 ml에 0.01 g의 MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide)를 녹인 MTT용액을 각 웰마다 50 ul 분주하고, 1시간 배양기에서 반응시킨 후, 배지액을 제거하였다. 그리고 DMSO(Dimethyl sulfoxide)를 분주하고, 96웰에 각각 옮긴 후, 흡광도를 측정하여 심비디움 추출물의 세포독성을 결정하였다.

그 결과, 심비디움(Cymbidium) 추출물을 첨가하지 않았을 경우는 100%의 생존율을 보였고, 심비디움 추출물을 첨가한 첨가군에서는 첨가하지 않은 군과 비슷한 생존율을 보였다(도 1).

따라서 본 실험에 사용한 심비디움 추출물은 배양 근육세포에 독성을 나타내지 않는다는 것을 확인할 수 있었다.

(4) H ₂ O ₂ 로 유도된 근육세포 괴사에 대한 심비디움( Cymbidium ) 추출물의 농도별 효과

심비디움(Cymbidium) 추출물의 농도별 효과를 관찰하기 위하여, 먼저 24웰 플레이트에 근육세포를 1×10⁵cells/well이 되도록 넣고, CO₂배양기에서 배양하였다. 그 다음, 심비디움 추출물을 0, 25, 50, 100, 200 μg/ml의 농도로 각각 첨가한 뒤, 5% CO₂의 조건에서 24시간 배양하였다. 배양한 다음, H₂O₂를 1 mM 농도로 첨가하고 1시간 배양 후 MTT용액을 각 웰마다 50 ul분주하고, 1시간 배양기에서 반응시킨 후, 배지액을 제거하였다. 그리고 DMSO(Dimethyl sulfoxide)를 분주하고, 96웰에 각각 옮긴 후, 흡광도를 측정하여 그 효과를 결정하였다.

그 결과, 심비디움 추출물(Cymbidium)의 농도가 0 μg/ml로부터 200 μg/ml로 증가됨에 따라 세포 생존율이 회복됨을 알 수 있었다(도 2). 이에 따라 심비디움 추출물에 농도 의존적으로 근육 세포괴사 예방효과가 증가됨을 입증할 수 있었다.

(5) H ₂ O ₂ 에 의한 근육세포 아포토시스(apoptosis)에 대한 심비디움( Cymbidium ) 추출물의 효과

H₂O₂에 의한 근육세포 아포토시스(apoptosis)에 대한 심비디움(Cymbidium) 추출물의 효과를 관찰하기 위하여, 먼저 6웰에 커버글라스를 넣고 근육세포를 2×10⁵cells/well이 되도록 넣고 CO₂배양기에서 배양하였다. 그 다음, 심비디움 추출물을 0, 25, 50, 100, 200 μg/ml의 농도로 각각 첨가한 뒤, 5% CO₂의 조건에서 24시간 배양하였다. 배양 후, H₂O₂를 1 mM 농도로 첨가하고 1시간 배양시킨 다음 DAPI(4',6-diamidino-2-phenylindole) 염색한 후 그 효과를 결정하였다.

그 결과, H₂O₂에 의해 근육세포의 아포토시스(apoptosis)가 유도됨을 알 수 있었고, 심비디움 추출물(Cymbidium) 첨가군이 아포토시스(apoptosis)를 예방함을 확인할 수 있었다(도 3).

[제조예]

제조예 1. 산제의 제조

심비디움 추출물.................. 10 mg

수크로스......................... 100 mg

탈크............................. 10 mg

상기 성분들을 분말화하여 혼합한 후 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.

제조예2. 정제의 제조

심비디움 추출물................... 20 mg

유당.............................. 100 mg

전분.............................. 100 mg

스테아린산 마그네슘............... 정량

상기의 성분을 혼합하고 통상의 정제의 제조 방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.

제조예 3. 캡슐제의 제조

심비디움 추출물.................... 10 mg

유당............................... 50 mg

전분............................... 50 mg

탈크............................... 2 mg

스테아린산마그네슘................. 적량

상기의 성분을 혼합하고 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.

제조예 4. 과립제의 제조

심비디움 추출물.................... 10 mg

대두 추출물........................ 50 mg

포도당............................. 200 mg

전분............................... 500 mg

상기 성분들을 혼합한 후 30% 에탄올 100 mL를 첨가하여 60 ℃에서 건조시켜 과립을 형성한 후 포에 충진하여 과립제를 제조한다.

제조예 5. 환제의 제조

심비디움 추출물.................... 20 mg

유당............................... 1,500 mg

글리세린........................... 1,500 mg

전분............................... 980 mg

상기 성분들을 혼합한 후 통상의 환제의 제조방법에 따라 1환 당 4 g이 되도록 제조한다.

제조예 6. 액제의 제조

심비디움 추출물..................... 100 mg

설탕................................ 20 g

이성화당............................ 20 g

레몬향.............................. 적량

정제수를 가하여 전체................ 100 ml

상기의 성분을 통상의 액제의 제조방법에 따라서 혼합하고 100 ml의 갈색병에 충전하고 멸균시켜서 액제를 제조한다.

제조예 7. 주사제의 제조

심비디움 추출물..................... 1.0 mg

소디움 메타비설파이트............... 0.5 mg

메틸파라벤.......................... 0.8 mg

프로필파라벤........................ 0.1 mg

주사용 멸균증류수................... 적량

상기의 성분을 혼합하고 통상의 방법으로 3 ml로 한 후, 3 ml 용량의 앰플에 충전하고 멸균하여 주사제를 제조한다.

제조예 8. 건강 기능 식품의 제조

심비디움 추출물 20 ㎎, 비타민 혼합물 적량, 비타민 A 아세테이트 70 ㎍, 비타민 E 1.0 ㎎, 비타민 B1 0.13 ㎎, 비타민 B2 0.15 ㎎, 비타민 B6 0.5 ㎎, 비타민 B12 0.2 ㎍, 비타민 C 10 ㎎, 비오틴 10 ㎍, 니코틴산아미드 1.7 ㎎, 엽산 50 ㎍, 판토텐산 칼슘 0.5 ㎎, 무기질 혼합물 적량, 황산제 1철 1.75 ㎎, 산화아연 0.82 ㎎, 탄산마그네슘 25.3 ㎎, 제1인산칼륨 15 ㎎, 제2인산칼슘 55 ㎎, 구연산칼륨 90 ㎎, 탄산칼슘 100 ㎎, 염화마그네슘 24.8 ㎎을 혼합하여 통상의 건강식품 제조방법에 따라 제조한다.

제조예 9. 건강 음료의 제조

심비디움 추출물 20 ㎎, 구연산 1000 ㎎, 올리고당 100 g, 매실농축액 2 g, 타우린 1 g, 정제수 적량을 혼합하여 통상의 건강 음료의 제조방법에 따라 제조한다.

제조예 10. 과자의 제조

본 발명의 심비디움 추출물 10 mL을 버터 5 g, 우유 10 mL를 밀가루 100 g에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 쿠키, 크래커 및 스낵류를 제조한다.

Claims

심비디움(Cymbidium) 추출물을 유효성분으로 함유하는 근위축 예방 또는 치료용 약학 조성물.
제1항에 있어서,
상기 심비디움 추출물은 물, 유기용매 또는 이들의 혼합물로부터 선택되는 용매로 추출한 것을 특징으로 하는 근위축 예방 또는 치료용 약학 조성물.
제1항에 있어서,
상기 유기용매는 탄소수 1 내지 5의 알코올, 에틸 아세테이트, 아세톤, 에테르, 클로로포름, 벤젠, 헥산, 디클로로메탄 및 이들의 혼합용매인 것을 특징으로 하는 근위축 예방 또는 치료용 약학 조성물.
제1항에 있어서,
상기 심비디움 추출물은 심비디움의 꽃, 잎, 줄기, 뿌리, 열매, 껍질, 또는 이들의 혼합물의 추출물인 것을 특징으로 하는 근위축 예방 또는 치료용 약학 조성물.
제1항에 있어서,
상기 심비디움 추출물은 심비디움의 줄기 또는 뿌리의 추출물인 것을 특징으로 하는 근위축 예방 또는 치료용 약학 조성물.
제1항에 있어서,
상기 심비디움 추출물은 근세포 손상, 괴사 또는 아포토시스(apoptosis)를 억제하는 것을 특징으로 하는 근위축 예방 또는 치료용 약학 조성물.
제1항에 있어서,
상기 근위축은 근육을 사용하지 않음으로써 발생하는 근육 조직의 손실로 인한 근 위축, 근육 자체의 병으로 인한 근 위축, 또는 근육을 지배하는 신경의 손상으로 인한 근 위축인 것을 특징으로 하는, 근위축 예방 또는 치료용 약학 조성물.
제1항에 있어서,
상기 심비디움 추출물은 우주 생활로 인한 근육 노화 억제 또는 운동기능 향상용으로 포함되는 것을 특징으로 하는, 근위축 예방 또는 치료용 약학 조성물.
심비디움(Cymbidium) 추출물을 유효성분으로 함유하는 근위축 예방 또는 개선용 식품 조성물.
제9항에 있어서,
상기 심비디움 추출물은 물, 유기용매 또는 이들의 혼합물로부터 선택되는 용매로 추출한 것을 특징으로 하는 근위축 예방 또는 개선용 식품 조성물.
제9항에 있어서,
상기 유기용매는 탄소수 1 내지 5의 알코올, 에틸 아세테이트, 아세톤, 에테르, 클로로포름, 벤젠, 헥산, 디클로로메탄 및 이들의 혼합용매인 것을 특징으로 하는 근위축 예방 또는 개선용 식품 조성물.
제9항에 있어서,
상기 심비디움 추출물은 심비디움의 꽃, 잎, 줄기, 뿌리, 열매, 껍질, 또는 이들의 혼합물의 추출물인 것을 특징으로 하는 근위축 예방 또는 개선용 식품 조성물.
제9항에 있어서,
상기 심비디움 추출물은 심비디움의 줄기 또는 뿌리의 추출물인 것을 특징으로 하는 근위축 예방 또는 개선용 식품 조성물.
제9항에 있어서,
상기 심비디움 추출물은 근세포 손상, 괴사 또는 아포토시스(apoptosis)를 억제하는 것을 특징으로 하는 근위축 예방 또는 개선용 식품 조성물.
제9항에 있어서,
상기 근위축은 근육을 사용하지 않음으로써 발생하는 근육 조직의 손실로 인한 근 위축, 근육 자체의 병으로 인한 근 위축, 또는 근육을 지배하는 신경의 손상으로 인한 근 위축인 것을 특징으로 하는, 근위축 예방 또는 개선용 식품 조성물.
제9항에 있어서,
상기 심비디움 추출물은 우주 생활로 인한 근육 노화 억제 또는 운동기능 향상용으로 포함되는 것을 특징으로 하는, 근위축 예방 또는 개선용 식품 조성물.
심비디움(Cymbidium) 추출물을 유효성분으로 함유하는 근위축 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.