KR20150134372A

KR20150134372A - 세포 배양용 배지 첨가물

Info

Publication number: KR20150134372A
Application number: KR1020157029948A
Authority: KR
Inventors: 마사히데 기도; 게이코 마토노; 히데아키 이도가키
Original assignee: 다이소 가부시키가이샤
Priority date: 2013-03-29
Filing date: 2014-03-27
Publication date: 2015-12-01
Also published as: US20160053028A1; JPWO2014157483A1; JP6323447B2; WO2014157483A1

Abstract

다당을 포함하는 세포 중에서 유용한 물질의 증강된 생산용 조성물; 다당 포함 세포 배양용 배지; 및 다당 함유 세포 배양용 배지에서 배양하는 것을 포함하는 유용한 물질의 생산 방법이 제공된다.

Description

세포 배양용 배지 첨가물{MEDIUM ADDITIVE FOR CELL CULTURE}

본 출원은, 2013년 3월 29일에 출원된 일본 특허 제2013-73019호 및 2013년 7월 9일에 출원된 일본 특허 제2013-143357호의 우선권의 이익을 주장하며, 그들의 개시 내용의 전체를 참조로서 본 명세서에 삽입한다.

본 발명은, 세포 배양용 배지 첨가물, 당해 첨가물을 포함한 세포 배양용 배지 및 당해 첨가물 및 당해 배지의 유용 물질 제조를 위한 용도에 관련된다.

재조합 기술을 이용해, 단백질, 펩티드가 인위적으로 생산되고 있다. 특히 의약 분야에 있어서는, 의약에 유용한 단백질(예를 들어, 인간화 항체, 인간 항체등)이 배양 세포로 제조되고 있다.

세포의 배양에 사용되는 배지로서는, 우혈청을 첨가한 혈청 배지가 주로 사용되어왔다. 의약품 생산에 있어서는 병원체 혼입등의 리스크도 있어 혈청을 포함하지 않는 무혈청 배지가 요구되고 있다.

그러나, 혈청에는 세포 증식과 관계되는 여러 가지의 증식 인자가 포함되어 있어 단순하게 혈청을 제거한것으로는, 세포 성장이나 단백질 생산성이 현저하게 억제된다. 그 때문에, 많은 경우에는, 혈청 대체물질로서 인슐린이나 트랜스페린, 나트륨 셀레나이트등이 사용되고 있다. 그러나, 무혈청 배지, 특히 화학 조성이 명확한 물질만으로 구성되는 배지 (즉, chemically defined medium)는, 종래의 혈청 배지에 비하면 세포 성장이나 단백질 생산성에 있어서 열등하다. 세포 성장이나 단백질 생산성 개선을 위해, 효모나 대두 가수분해물과 같은 단백 가수분해물이 사용되며, 이는 세포 성장을 매우 효과적으로 촉진하는 것이 알려져 있다(특허문헌 1). 그러나, 단백 가수분해물은 미지의 성분도 많이 존재하는 복합 소재이기 때문에, 의약 제조에 사용하는 원료로서 안전성의 면으로부터는 바람직하지 않다.

특허문헌 1 :JP 2002-520014 A

본 발명은, 세포 배양용 배지 첨가물, 당해 첨가물을 포함한 세포 배양용 배지, 및 당해 첨가물 및 당해 배지의 유용 물질 제조를 위한 용도를 제공한다.

본 발명자들은, 다당 (polysaccharide)이 세포에 있어서 단백질 등의 유용 물질의 생산을 증대시키는 것을 찾아내, 이것에 근거해 본 발명을 완성시켰다.

본 발명은, 하나의 측면으로서 다당을 포함하는 세포에 있어서의 유용 물질의 생산 증강용 조성물을 제공한다.

본 발명은, 하나의 측면으로서 다당을 포함하는 세포 배양용 배지를 제공한다.

본 발명은, 하나의 측면으로서 다당을 포함하는 세포 배양용 배지에서 세포를 배양하는 것을 포함하는, 유용 물질의 제조 방법을 제공한다.

본 발명은, 다당을 포함하는 세포에 있어서의 유용 물질의 생산 증강용 조성물；다당을 포함하는 세포 배양용 배지；다당을 포함하는 세포 배양용 배지에서 세포를 배양하는 것을 포함하는 유용 물질의 제조 방법 등을 제공한다.

본 발명에서 사용 가능한 다당은, 직쇄만으로 이루어지는 다당 또는 주쇄 및 측쇄를 가지는 다당일 수 있다. 또, 본 발명으로 사용할 수 있는 다당은, 1종의 직쇄 다당, 2종 이상의 직쇄 다당의 혼합물, 1종의 주쇄 및 측쇄를 갖는 다당, 2종 이상의 주쇄 및 측쇄를 갖는 다당의 혼합물, 또는 그들의 혼합물일 수 있다.

직쇄 다당의 경우에는, 그 직쇄는 연결된 헥소스 잔기를 포함하고, 주쇄 및 측쇄를 갖는 다당의 경우에는, 연결된 헥소스 잔기를 주쇄에 포함한다.

연결된 헥소스 잔기는, 1위의 탄소와 3위의 탄소, 1위의 탄소와 4위의 탄소, 또는 1위의 탄소와 6위의 탄소간의 임의의 결합 모드를 통해 연결가능하다.

1위의 탄소와 3위의 탄소의 결합 모드에는 β1,3 연결 및 α1,3 연결이 포함되고 1위의 탄소와 4위의 탄소의 결합모드에는 β1,4 연결 및 α1,4 연결이 포함되고 1위의 탄소와 6위의 탄소의 결합에는 β1,6 연결, 및 α1,6 결합모드가 포함된다.

이들 α1,3 연결, β1,3 연결, α1,4 연결, β1,4 연결, α1,6 연결 및 β1,6 연결은, 글리코시드 연결이며, 1위와 3위, 1위와 4위, 또는 1위와 6위의 탄소의 사이에 산소 원자가 개재해 결합이 형성된다.

연결된 헥소스 잔기를 포함하는 주쇄는, 그 2위, 3위 또는 6위에 결합한 헥소스 잔기를 포함하는 1개 이상의 측쇄를 한층 더 포함해도 된다.

이 경우, 측쇄는, 2개 이상의 헥소스 잔기가 상호 연결되어 구성되거나, 1개의 헥소스로 구성가능하고, 1종 이상의 헥소스는 측쇄를 구성가능하다.

주쇄과 측쇄의 결합모드는, α1,2 결합, α1,3 연결, α1,6 연결, β1,2 결합, β1,3 연결 및 β1,6 연결로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1개의 결합모드일 수 있다.

본 발명에서 사용할 수 있는 다당을 구성하는 헥소스는, 탄소수 6의 당이며, 예를 들어, 글루코스, 만노스, 갈락토스, 푸코스, 알로스, 알트로스, 굴로스, 이도스, 탈로스, 람노스, 푸쿨로스, 글루코사민, 갈락토사민, 글루크유론산, 갈락투론산, 만누론산, 및 그들의 유도체(염, 에스테르, 에테르, 아미드) 등을 들 수 있다.

헥소스는, 알데히드기를 갖는 당 또는 알도헥소스일 수 있다

또, 헥소스는, 데옥시당, 카르복실산을 포함하는 당 또는 아미노당일 수 있다.

데옥시당에는, 예를 들어, D-데옥시리보스, L-푸코스, L-람노스, D-알로메틸로스, D-퀴노보스, D-안티아로스, D-탈로메틸로스, L-탈로메틸로스, D-디지탈로스, D-디지톡소스, D-시마로스, 티벨로스, 아베큐오스, 파라토스, 콜리토스, 아스카릴로스가 포함된다.

카르복실산을 포함하는 당에는, 예를 들어, 글루크유론산, 갈락투론산, 만누론산, 글루콘산, 갈락톤산, 만논산이 포함된다.

아미노당에는, 예를 들어, 글루코사민, 만노사민, 갈락토사민이 포함된다.

바람직하게는, 천연에 존재하는 D-글루코스, D-만노스, D-갈락토스, D-글루코사민, D-갈락토사민, D-굴루유론산, D-글루크유론산, D-갈락투론산, D-만누론산, L-푸코스를 본 발명에서 사용 가능한 헥소스의 예로서 들 수 있다.

보다 바람직하게, 본 발명에서 사용가능한 헥소스의 예는 D-글루코스, L-푸코스, D-글루크유론산, D-만노스, D-만누론산, D-굴루유론산 등을 들 수 있다.

유도체의 예로서는, 염, 에스테르, 에테르, 아미드를 들 수 있다.

염의 예로서는, 산부가 염 및 염기부가 염이 포함된다.

산부가 염의 예로서는, 염산, 브롬화 수소산, 요오드화 수소산, 황산, 설파믹산, 인산 및 질산 등의 무기산 유래의 염, 그리고 p-톨루엔 술폰산, 살리실산, 메탄 술폰산, 옥살산, 숙신산, 시트르산, 말산, 락트산, 푸마르산, 트리플루오로 아세트산등의 유기 산 유래의 염 등을 들 수 있다.

염기부가 염의 예로서는, 암모늄, 칼륨, 나트륨, 칼슘 유래의 것, 및 예를 들어, 수산화 테트라 메틸 암모늄등의 수산화 4급 암모늄 유래의 염을 들 수 있다.

에스테르의 예로서는, 지방족에스테르(예를 들어, 메틸에스테르, 에틸에스테르, 프로필에스테르, 이소프로필에스테르, 부틸에스테르, 이소부틸에스테르, t-부틸에스테르, 펜틸에스테르, 1-시클로프로필에틸에스테르, 및 프로필렌글리콜에스테르), 유기산 에스테르(예를 들어, 아세트산에스테르, 술폰산에스테르, 인산에스테르, 말산에스테르), 무기산에스테르(예를 들어, 황산에스테르) 등을 들 수 있.

에테르의 예로서는, 메틸에테르, 에틸에테르 등의 저급 알킬에테르(C1-6알킬에테르)를 들 수 있다.

아미드의 예로서는, 메틸 아미드, 에틸 아미드 등의 저급 알킬 아미드(C1-6 알킬 아미드)를 들 수 있다.

또, 본 발명에서 사용 가능한 다당의 중량 평균 분자량은, 통상, 다당의 중량 평균 분자량의 측정 방법으로 사용되는 방법으로 측정가능하다.

예를 들어, HPLC에 의한 젤 투과 크로마토그래피에 의해, 다당의 중량 평균 분자량을 측정할 수 있다.

또한, 측정에 사용하는 칼럼은, 측정하는 다당에 따라 적절히 선택하면 되고, 통상 시판되고 있는 분자량 측정용의 칼럼을 이용하면 되고, 측정은 통상적인 방법을 사용하며 특별히 한정되는 것은 아니다.

하나의 실시양태로서 본 발명에서 사용 가능한 당은, 화합물 또는 그 유도체 포함 다당으로, 식 (1):

(식 중,

R1는, H, OH, OSO₃H 또는 OZ₁이며；

Z₁는, 하기 식 (2)

또는, 하기 식 (3)

의 기이고；

R₂는, H 또는 OH이며；

R₃는, H, CH₃ 또는 CH₂OH이며；

R₄는, H 또는 CH₃이며；

R₅는, H이며；

R₆는, OH 또는 OSO₃H이며；

X₁ 및 Y₁는 일방이 OH이고 다른 일방은 H이며；

X₂ 및 Y₂는 일방이 OH이고 다른 일방은 H이다)로 표현되는 1종 이상의 당이, β1,3 연결, α1,3 연결, β1,4 연결, α1,4 연결, β1,6 연결 및 α1,6 연결로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1개의 결합모드에 의해 연결된다 (이하, 식 (1)의 당으로 구성되는 다당으로도 불림).

식 (1)의 당으로 구성되는 다당은, 직쇄 구조 또는 측쇄를 가질 수 있다.

또, 하나의 실시양태로서 식 (4)：

R₇는, H 또는 OH이며；

R₈는, H 또는 OH이며；

R₉는, H, COOH, CH₂OH, COOCH₂CH(OH)CH₃ 또는 COOCH(CH₃)CH₂OH이며；

R₁₀는, H, COOH, COOCH₂CH(OH)CH₃ 또는 COOCH(CH₃)CH₂OH이며；

R₁₁는, OH 또는 OZ₂이며；

Z₂는, 하기 식 (5)

의 기이고；

R₁₂는, H이며；

X₃ 및 Y₃는 일방이 OH이고 다른 일방은 H이다)로 표현되는 1종 이상의 당이, β1,3 연결, α1,3 연결, β1,4 연결, α1,4 연결, β1,6 연결 및 α1,6 연결로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1개의 결합모드에 의해 연결된, 화합물 또는 그 유도체를 포함하는 다당(이하, 식 (4)의 당으로 구성되는 다당으로도 불림)일 수 있다.

식 (4)의 당으로 구성되는 다당은, 직쇄 구조 또는 측쇄를 가질 수 있다.

또, 하나의 실시양태로서 본 발명에서 사용 가능한 다당은,

식 (6)：

(식 중,

Ra는, CH₂OH이며；

Ra'는, CH₂OH 또는 CH₂OZ₃이며,

Z₃는, 하기 식 (7)

의 기이고；

m₁ 및 n₁는, 각각 중합체의 중량 평균 분자량이 10,000~10,000,000이도록 선택되는 정수이다)로 나타내지는, 중합체 또는 그들의 유도체(이하, 식 (6)로 표현되는 중합체로도 불림)；

식 (8)：

(식 중,

Rb는, H, OH 또는 OSO₃H이며；

Rb'는, OZ₄이며；

Z₄는, 하기 식 (9)

또는, 하기 식 (10),

의 기이고；

Rc 및 Rc'는, 각각 독립적으로, H 또는 OH이며；

Rd 및 Rd'는, 각각 독립적으로, H 또는 CH₃이며；

Re 및 Re'는, 각각 독립적으로, H 또는 CH₃이며；

Rf 또는 Rf'는, 각각 독립적으로, OH 또는 OSO₃H이며；

m₂ 및 n₂는, 각각 중합체의 중량 평균 분자량이 1,000~10,000,000이도록 선택되는 정수이다)로 나타내지는, 중합체 또는 그들의 유도체(이하, 식 (8)로 표현되는 중합체로도 불림)；

식 (11)：

(식 중,

Rg 및 Rg'는, 각각 독립적으로, H 또는 OH이며；

Rh 및 Rh'는, 각각 독립적으로, H 또는 OH이며；

Ri는, COOH, CH₂OH, COOCH₂CH(OH)CH₃ 또는 COOCH(CH₃)CH₂OH이며；

Ri'는, H 또는 CH₂OH이며；

Rj는, H이며；

Rj'는, H, COOH, COOCH₂CH(OH)CH₃ 또는 COOCH(CH₃)CH₂OH이며；

Rk는, OH 또는 OZ₅이며；

Z₅는, 하기 식 (12)

의 기이고；

Rk'는, OH이며；

Rl 및 Rl'는, 각각 독립적으로, H이며；

m₃ 및 n₃는, 각각 중합체의 중량 평균 분자량이 10,000~50,000,000이도록 선택되는 정수이다)로 나타내지는, 중합체 또는 그들의 유도체(이하, 식 (11)로 표현되는 중합체로도 불림)；

식 (13)：

(식 중, o₁, p₁ 및 q₁는, 각각 중합체의 중량 평균 분자량이 1,000~10,000,000이도록 선택되는 정수이다)로 나타내지는, 중합체 또는 그들의 유도체(이하, 식 (13)로 표현되는 중합체로도 불림)；

식 (14)：

(식 중,

o₂, p₂ 및 q₂는, 각각 중합체의 중량 평균 분자량이 1,000~10,000,000이도록 선택되는 정수이다)로 나타내지는, 중합체 또는 그들의 유도체(이하, 식 (14)로 표현되는 중합체로도 불림)；

또는 식 (15)：

(식 중,

Rm는, OH 또는 OSO₃H이며；

Rn는, H 또는 OH이고, Rn가 OH 일때, 당해 OH의 수소는 임의로 Z₆로 치환되어 있어도 되고, Z₆는 하기 식 (16)의 기이고：

R_O는, H 또는 OH이며；

m₄ 및 n₄는, 각각 중합체의 중량 평균 분자량이 1,000~300,000이도록 선택되는 정수이다)로 나타내지는, 중합체 또는 그들의 유도체(이하, 식 (15)로 표현되는 중합체로도 불림)일 수 있다.

식 (6)로 표현되는 중합체에 있어서, m₁： n₁의 비율은 특별히 제한되지 않고, m₁: n₁=100：0~0：100의 범위내에서 임의이다.

또, m₁ 및 n₁는, 식 (6)로 표현되는 중합체의 중량 평균 분자량이, 예를 들어, 10,000~2,000,000, 20,000~1,300,000이도록 선택되는 정수일 수 있다.

식 (6)로 표현되는 중합체는, 호모폴리머 또는 코폴리머일 수 있으며, 예를 들어, 블록 코폴리머 또는 랜덤 코폴리머일 수 있다.

식 (8)로 표현되는 중합체에 있어서, m₂： n₂의 비율은 특별히 제한되지 않고, m₂： n₂=100：0~0：100의 범위내에서 임의이다.

또, m₂ 및 n₂는, 식 (8)로 표현되는 중합체의 중량 평균 분자량이, 예를 들어, 1000~800,000, 20,000~400,000이도록 선택되는 정수일 수 있다.

식 (8)로 표현되는 중합체는, 호모폴리머 또는 코폴리머일 수 있으며, 예를 들어, 블록 코폴리머 또는 랜덤 코폴리머일 수 있다.

식 (11)로 표현되는 중합체에 있어서, m₃： n₃의 비율은 특별히 제한되지 않고, m₃： n₃=100：0~0：100의 범위내에서 임의이다.

또, m₃ 및 n₃는, 식 (11)로 표현되는 중합체의 중량 평균 분자량이, 예를 들어, 10,000~1,300,000, 13,000,000~50,000,000이도록 선택되는 정수일 수 있다.

식 (11)로 표현되는 중합체는, 호모폴리머 또는 코폴리머일 수 있으며, 예를 들어, 블록 코폴리머 또는 랜덤 코폴리머일 수 있다.

식 (13)로 표현되는 중합체에 있어서, o₁：p₁：q₁=100：0：0/0：100：0/0：0：100이다.

예를 들어, o₁= 0인 경우, 또한 p₁：q₁=1：2일 수 있고, q₁= 0인 경우, 또한 o₁：p₁=100：0~0：100일 수 있다.

또, o₁, p₁ 및 q₁는, 식 (13)로 표현되는 중합체의 중량 평균 분자량이, 예를 들어, 6000~1,400,000, 50,000~1,300,000이도록 선택되는 정수일 수 있다.

식 (13)로 표현되는 중합체는, 호모폴리머 또는 코폴리머일 수 있으며, 예를 들어, 블록 코폴리머 또는 랜덤 코폴리머일 수 있다.

식 (14)로 표현되는 중합체에 있어서, o₂：p₂：q₂=100：0：0/0：100：0/0：0：100이다.

예를 들어, o₂= 0인 경우, 또한 p₂：q₂=1：2일 수 있고, q₂= 0인 경우, 또한 o₂：p₂=100：0~0：100일 수 있다.

또, o₂, p₂ 및 q₂는, 식 (13)로 표현되는 중합체의 중량 평균 분자량이, 예를 들어, 6000~1,400,000, 50,000~1,300,000이도록 선택되는 정수일 수 있다.

식 (14)로 표현되는 중합체는, 호모폴리머 또는 코폴리머일 수 있으며, 예를 들어, 블록 코폴리머 또는 랜덤 코폴리머일 수 있다.

식 (15)로 표현되는 중합체에 있어서, m₄：n₄의 비율은 특별히 제한되지 않고, m₄：n₄=100：0~0：100의 범위내에서 임의이다.

또, m₄ 및 n₄는, 식 (15)로 표현되는 중합체의 중량 평균 분자량이, 예를 들어, 1,000~300,000, 1,000~200,000, 20,000~100,000이도록 선택되는 정수일 수 있다.

식 (15)로 표현되는 중합체는, 호모폴리머 또는 코폴리머일 수 있으며, 예를 들어, 블록 코폴리머 또는 랜덤 코폴리머일 수 있다.

상기식 (1) 또는 식 (4)의 당으로 구성되는 다당, 식 (6), 식 (8), 식 (11), 식 (13), 식 (14) 또는 식 (15)의 다당은 주쇄일 수 있고, β1,6 연결, α1,2 결합, β1,3 연결, α1,3 연결 및 α1,6 연결로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1개의 결합에 의해 결합한 헥소스를 포함하는 측쇄를 포함해도 된다.

측쇄의 당잔기수는 특별히 한정 되지 않고, 1, 2, 3, 4, 5 또는 그 이상일 수 있다.

또, 상기식 (1) 또는 식 (4)의 당으로 구성되는 다당, 식 (6), 식 (8), 식 (11), 식 (13), 식 (14) 또는 식 (15)의 다당은, 그 히드록실기나 카르복실기가 에스테르화 되어 있어도 된다.

예를 들어, 다당에 있는 히드록실기는, 그 전부 또는 일부가 설페이트기로 수식되어 있어도 된다.

본 발명에서 사용 가능한 다당으로서는, 아밀로스, 아밀로펙틴, 글리코겐, 셀룰로오스, 전분, 키틴, 키토산, 아가로스, 카라기난, 히알루론산, 콘드로이틴 4-황산, 콘드로이틴 6-황산, 데르마탄 황산, 케라탄 황산, 헤파란 황산, 헤파린, 자일로글루칸, 글루코만난, 갈락토만난, 라미나란, 자일란, 펙틴, 레티난, 말토덱스트린, 커들런, 구아검, β-1,3-글루칸, 푸코이단, 알긴산, 알긴산에스테르, 풀루란, 잔탄 검, 덱스트란, 라미나란 등을 예시할 수 있다.

보다 구체적인 것으로, 본 발명에서 사용가능한 다당의 예는 하기의 다당을 포함한다.

(a) β-1,3-글루칸

본 발명에서 사용 가능한 β-1,3-글루칸은, β1,3 연결을 갖는 글루칸이면 되고, β1,3 연결로 연결된 글루코스잔기로 구성된 글루칸, β1,3 연결로 연결된 글루코스잔기로 구성된 주쇄 및 추가로 측쇄를 가지는 글루칸, 또는 그들의 혼합물이다.

β-1,3-글루칸은, 천연물로부터 조제할 수 있고, 예를 들어, Aureobasidium속(Aureobasidium sp) 미생물, 빵 효모(예를 들어, S. cerevisiae), 담자균(예를 들어, Lentinus edodes, Schizophyllum Commune, 및 Coriolus versicolor), 유글레노이드, 벼과 곡류 등으로부터 조제할 수 있다.

본 발명에 사용할 수 있는 β-1,3-글루칸은, 그 유래가 한정되지 않는다.

본 발명에서 사용 가능한 β-1,3-글루칸의 예에는, Aureobasidium pullulans 유래의 β-1,3-1,6-글루칸(예를 들어, 다이소 주식회사제：아쿠아 β(등록상표)로서 입수 가능), 빵 효모 유래의 β-1,3-1,6-글루칸(예를 들어, BIOTHERA사：Wellmune(등록상표)로서 입수 가능), 및 파라밀론(유글레노이드 유래 직쇄 β1,3-글루칸)을 들 수 있지만, 이들로 한정되지 않는다.

β-1,3-글루칸은, 예를 들어, 하기 식 (17)을 가진다.

상기 식 중, a 및 b는 각각 임의의 정수이다.

예를 들어, a 및 b는, 중합체의 중량 평균 분자량이 10,000~10,000,000(예를 들어, 20,000~300,000 또는 500,000~2,500,000)이며, 바람직하게는 10,000~2,000,000이며, 보다 바람직하게는 20,000~1,300,000 이 되도록 선택가능하다.

또, β-1, 3 결합/ β-1, 6 결합의 분기도(β1,3 주쇄에 대한 β1,6 측쇄의 결합비)는, Aureobasidium 유래의 글루칸은, 약 30~100%인 정수이며, 버섯(Schizophyllum commune) 유래의 글루칸은, 약 33%인 정수이며, 유글레노이드 유래의 글루칸은, 약 0%인 정수일 수 있다.

본 발명에서 사용 가능한 β-1,3-글루칸은, 글루코스잔기의 일부의 히드록실기가 설페이트화될 수 있다.

예를 들어, 식 (17)의 β-1,3-글루칸에 대해, 그 일부의 히드록실기가 OSO₃H로 전환 가능하다.

또, 본 발명에서 사용 가능한 β-1,3-글루칸은, 그 염(예를 들어, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 암모늄 염 등)일 수 있다.

(b) 푸코이단

본 발명에서 사용 가능한 푸코이단은, L-푸코스 잔기가 10부터 수십만개연결된 화합물이며, 연결된 L-푸코스 잔기로 구성되는 푸코이단, 또는 연결된 L-푸코스 잔기로 구성되는 주쇄 및 측쇄를 갖는 푸코이단, 또는 그들의 혼합물이다. 푸코이단의 유래는 한정되지 않는다.

예를 들어, 갈조류로서 모즈크 (Nemacystus decipiens), 메카브 (mekabu) 해조류, 다시마 등 (tangle weed)에서 유래하는 푸코이단을 사용할 수 있다.

이와 같은 푸코이단의 예로서는, 통가 왕국산 천연 모즈크로부터 얻어지는 푸코이단(예를 들어, 쿄오도 유업사：메이토 푸코이단 (Meito-fucoidan)으로서 입수 가능), 가고메 다시마 (Kjellmaniella crassifolia) 유래의 푸코이단(예를 들어, 다카라 바이오 주식회사：가고메 다시마 푸코이단으로서 입수 가능)을 들 수 있다.

푸코이단은, 화학 구조식중에 설페이트기를 포함한다.

예를 들어, 5당 잔기 당 2~12개, 4~12개, 5~10 또는 8~10개의 설페이트기를 포함할 수 있다. 푸코이단은 중량%로서 10~40%, 15~30% 또는 20~30%의 설페이트기를 포함할 수 있다.

푸코이단은, 예를 들어, 하기 식 (18)을 가진다.

상기 식 중, c는 임의의 정수이며, 중합체의 중량 평균 분자량 5,000이상(예를 들어, 중량 평균 분자량 1,000~300,000이며, 바람직하게는 1,000~200,000이며, 보다 바람직하게는 20,000~100,000일 수 있다.) 이 되도록 선택되는 수일 수 있다.

가고메 다시마 유래의 푸코이단은, 하기 식 (19)에 나타나는 U-푸코이단, 하기 식 (20)에 나타나는 G-푸코이단, 하기 식 (21)에 나타나는 F-푸코이단의 혼합물이다.

U-푸코이단 ...(19)

G-푸코이단 ...(20)

F-푸코이단 ...(21)

상기 식 중, d, e, f는 각각 임의의 정수이며, 혼합물의 중량 평균 분자량이 약 200,000(예를 들어, 중량 평균 분자량 1,000~10,000,000이며, 바람직하게는 20,000~800,000이며, 보다 바람직하게는 50,000~400,000일 수 있다.)이 되도록 선택되는 수일 수 있다.

또, 본 발명에서 사용 가능한 푸코이단은, 그 염(예를 들어, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 암모늄 염 등)일 수 있다.

(C) 알긴산 및 알긴산 유도체

본 발명에서 사용 가능한 알긴산은, β-D-만누론산과 그 C-5 에피머, 일례로, α1,4 연결한 α-L-굴루유론산, 의 2 종류의 블록으로 만들어지는 직쇄 폴리머이다.

본 발명에서 사용 가능한 알긴산은, 갈조류로부터 조제할 수 있으나, 유래는 한정되지 않는다.

또, 알긴산으로서 알긴산의 염(예를 들어, 알긴산나트륨, 알긴산 칼륨, 알긴산 암모늄, 알긴산칼슘 등) 을 본 발명에 사용하는 것도 가능하고, 알긴산 에스테르(예를 들어, 알긴산 프로필렌글리콜 에스테르)를 본 발명에 사용할 수도 있다.

알긴산나트륨 및 알긴산 프로필렌글리콜 에스테르는, 예를 들어, Wako Pure Chemical Industries 또는 주식회사 KIMICA로부터 입수 가능하다.

알긴산은, 하기 식 (22)을 가진다.

여기서, g 및 h는 각각 임의의 정수이며, 예를 들어, 중합체의 중량 평균 분자량이 약 240,000 또는 380,000 (예를 들어, 중량 평균 분자량 10,000~600,000이며, 바람직하게는 10,000~500,000이며, 보다 바람직하게는 20,000~450,000일 수 있다.)이 되도록 선택되는 수일 수 있다.

알긴산 에스테르의 중량 평균 분자량은 10,000~600,000이며, 바람직하게 10,000~400,000이며, 보다 바람직하게는 20,000~200,000일 수 있다.

(d) 풀루란

본 발명에서 사용 가능한 풀루란은, 글루코스 3 분자가 α1,4 결합하여 말토트리오스 분자를 형성하고, 그 말토트리오스 분자들이 α1,6 연결로 연결되어 풀루란 분자를 형성하는 구조를 갖는다 (하기, 식 (23) 참조. 또한, 식 중 i는 임의의 정수이다).

풀루란은, Aureobasidium pullulans에 의해 수크로오스나 전분 가수분해물등에서 생성된다.

본 발명에서 사용 가능한 풀루란은, 예를 들어, SHOWA DENKO K.K：

Shodex standard P-1300 (중량 평균 분자량：약 1,330,000； 카탈로그치)이다.

또, 본 발명에서 사용 가능한 풀루란의 중량 평균 분자량은, 바람직하게는 100,000~1,400,000이며, 보다 바람직하게는 500,000~1,300,000일 수 있다.

또, 본 발명에서 사용 가능한 풀루란은, 그 염(예를 들어, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 암모늄 염 등)일 수 있다.

(e) 잔탄 검

본 발명에서 사용 가능한 잔탄 검은, 글루코스 2 분자, 만노스 2 분자, 및 글루크유론산의 반복 단위를 포함하는 화합물, 및 그 유도체이다.

예를 들어, 유니텍 푸즈 주식회사의 SATIAXANE(등록상표) CX90를 사용할 수 있고, 하기 식 (24)에 나타나듯이, 글루코스잔기가 β1,4 연결한 주쇄 및 만노스 2 분자 및 글루크유론산 1 분자의 유도체로 이루어지는 측쇄를 포함한 화합물을 사용할 수 있다.

상기 식 중, 식 중 M＋는, 예를 들어, 나트륨, 칼륨, 칼슘일 수 있다.

본 발명에서 사용 가능한 잔탄 검은, 그 염(예를 들어, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 암모늄 염 등)일 수 있다.

잔탄검의 중량 평균 분자량은, 예를 들어, 약 2,000,000 또는 13,000,000 ~ 50,000,000일 수 있다.

(f) 덱스트란

본 발명에서 사용 가능한 덱스트란은, 글루코스 분자의 반복 단위를 포함하는 화합물, 및 그 유도체이다.

예를 들어, Leuconostoc mesenteroides 가 생산하는 덱스트란을 사용할 수 있고, 하기 식 (25)에 나타나듯이, 글루코스잔기가 α1,6 연결한 주쇄 및 글루코스 1 분자의 유도체로 이루어지는 측쇄를 포함하는 화합물을 사용할 수 있다.

상기 식 중, j 및 k는 각각 임의의 정수이며, 예를 들어, 중합체의 중량 평균 분자량 1,000~10,000,000이 되도록 선택되는 수이며, 바람직하게는 6,000~800,000이며, 보다 바람직하게는 50,000~400,000일 수 있다.

(g) 라미나란

본 발명에서 사용 가능한 라미나란은, 글루코스 분자의 반복 단위를 포함하는 화합물, 및 그 유도체이다. 유래는 한정되지 않는다.

예를 들어, 갈조류(모즈크, 메카브, 다시마 등)에 유래하는 라미나란을 사용할 수 있고, 하기 식 (26)에 나타나듯이, 글루코스잔기가 β1,6 연결과 β1,3 연결로 랜덤하게 결합한 주쇄로 이루어지는 화합물을 사용할 수 있다.

(식 중,

m₅ 및 n₅는, 각각 중합체의 중량 평균 분자량이 예를 들어, 1,000~300,000이며, 바람직하게는 1,000~200,000이며, 보다 바람직하게는 20,000~100,000이도록 선택되는 정수이다).

상기에서 설명한 「본 발명에서 사용 가능한 다당」은, 더욱 공지된 방법으로 저분자화 처리를 가한 것을 사용하는 것도 가능하다.

예를 들어 저분자화의 방법으로서는, 공지인 다당의 가수분해 반응의 모두가 이용 가능하다.

예를 들어, 수용성 다당은, 산 존재하에 가압 가열에 의해 가수분해하는 것이 알려져 있어 이것을 이용해 다당을 저분자화 처리할 수 있다.

또, 효소에 의한 가수분해 반응을 이용한 저분자화할 수도 있다.

나아가서는, 초음파 처리등의 물리적인 처리를 실시하는 것에 의해도 저분자화하는 것이 가능하다.

상기로 설명한 「본 발명에서 사용 가능한 다당」은, 세포에서의 유용 물질의 생산 증강에 사용할 수 있다.

바람직하게는, in vitro로 세포를 사용한 유용 물질의 생산 증강을 위한, 「본 발명에서 사용 가능한 다당」의 용도가 제공된다.

생산 증강은, 그 메커니즘에 관계없이, 일정시간 내에 유용 물질의 생산 양이 증대하면 되고, 예를 들어, 세포 성장을 촉진함으로써 유용 물질의 생산을 증대시켜도 되고, 개개의 세포에 있어서의 유용 물질의 발현량을 증대시킴으로써 유용 물질의 생산을 증대시켜도 되고, 그 양방이라도 좋다.

따라서, 상기로 설명한 「본 발명에서 사용 가능한 다당」은, 세포 성장 촉진제로서 세포에 있어서의 유용 물질의 발현 촉진제로서 또는 그 양방으로서 사용할 수 있다.

상기로 설명한 「본 발명에서 사용 가능한 다당」은, 세포 배양용 배지에 첨가함으로써 유용 물질의 생산 증강에 사용할 수 있다.

또, 바람직한 실시양태에 있어서, 상기로 설명한 「본 발명에서 사용 가능한 다당」은, 세포 배양용 배지에 첨가함으로써, 무혈청하 또는 혈청의 농도를 저감 시킨 조건 아래(예를 들어, 5, 3, 또는 1% FBS 함유 조건 아래)에서 유용 물질의 생산을 증강시킨다.

따라서, 상기로 설명한 「본 발명에서 사용 가능한 다당」은, 단독으로 배지 첨가 인자로서 사용할 수 있거나, 유용 물질의 생산 증강에 기여하는 다른 물질(예를 들어, 단백질(예를 들어, 트랜스페린) 및/또는 저분자화합물(예를 들어, 글루코스, 인산염, 셀레니어스 산))과 함께 세포 배양용 배지 첨가제로서 사용할 수 있다.

본 발명이 제공하는 조성물(예를 들어, 유용 물질의 생산 증강용 조성물, 세포 배양용 배지 첨가제)은, 「본 발명에서 사용 가능한 다당」을, 예를 들어, 0.0001~50 중량%, 0.0001~10 중량%, 바람직하게는, 0.0005~1 중량%, 보다 바람직하게는, 0.001~0.1 중량%로 포함해도 된다.

조성물은 실온으로 액체에서도 고체일 수 있다.

예를 들어, PBS등의 완충액에 「본 발명에서 사용 가능한 다당」을 상기 함량으로 용해시켜, 본 발명의 조성물을 조제할 수 있다.

상기로 설명한 「본 발명에서 사용 가능한 다당」을 첨가하는 배지는, 예를 들어, EMEM, αMEM, DMEM, Ham's medium, RPMI1640, Fisher's medium 또는 그들의 혼합물일 수 있다.

이들의 기초 배지에 상기로 설명한 「본 발명에서 사용 가능한 다당」을 첨가함으로써, 유용 물질의 제조에 유용한 무혈청 배지 또는 혈청의 농도를 저감시킨 배지(예를 들어, 5, 3 또는 1%FBS 함유 배지)를 조제할 수 있다.

또, 「본 발명에서 사용 가능한 다당」는 성장 인자나 혈청 대체물질을 첨가함으로써 혈청비함유로 사용되는 무혈청 배지, 무 단백 배지 또는 화학적으로 정의된 배지에 첨가해 사용할 수도 있다.

이들의 배지의 예로서는 SAFC Biosciences, Inc사제의 X-CELL 302, EX-CELL 325-PF, EX-CELL CD CHO 등, Life Technologies Corporation사제의 SFM II, CHO-III-PFM, CD CHO 등, 또, Irvine Scientific사제의 IS-CHO CD, BalanCD Growth A Medium 등을 들 수 있으나 이들로 한정되는 것은 아니다.

또, 「본 발명에서 사용 가능한 다당」는, 상기 무혈청 배지, 무 단백 배지, 또는 화학적으로 정의된 배지를 임의의 비율로 2종 이상을 혼합한 혼합 배지에 대해서도 첨가 가능하다.

배지 안의 「본 발명에서 사용 가능한 다당」의 함유량은, 특별히 한정 되지 않지만, 예를 들어, 1~10,000μg/ml, 바람직하게는 1~5,000μg/ml, 보다 바람직하게는 1~2,000μg/ml일 수 있다.

예를 들어, 당업자는, 상기 「본 발명에서 사용 가능한 다당」을 첨가하는 배지의 물 이외의 성분의 농도를 바꾸는 일 없이, 「본 발명에서 사용 가능한 다당」을 배지에 첨가해, 「본 발명에서 사용 가능한 다당」을 1~10,000μg/ml, 바람직하게는 1~5,000μg/ml, 보다 바람직하게는 1~2,000μg/ml 함유하는 배지를 조제할 수 있다.

「본 발명에서 사용 가능한 다당」을 포함하는 배지는, 「본 발명에서 사용 가능한 다당」에 추가해, 예를 들어, 무기염류(예를 들어, 나트륨 염, 칼륨 염, 칼슘 염), 탄수화물(예를 들어, 글루코스등의 당), 아미노산(예를 들어, 필수 아미노산), 비타민(예를 들어, 리보플라빈, 티아민), 지방산·지방질(예를 들어, 콜레스테롤등의 스테로이드), 단백질·펩티드(예를 들어, 알부민, 트랜스페린), 미량 원소(예를 들어, 아연, 구리, 셀레늄) 및 그들의 조합에서 선택되는 물질을 포함해도 된다.

하나의 실시양태에 있어서, 「본 발명에서 사용 가능한 다당」을 포함하는 액체 배지는, 「본 발명에서 사용 가능한 다당」에 추가해, 0.1에서 4.5 g/L의 글루코스, 0.1에서 0.5 g/L의 CaCl₂, 1에서 10 g/L의 NaCl, 0.001에서 0.3 g/L의 L-아르기닌·HCl, 0.001에서 0.3 g/L의 L-시스테인·2 HCl, 0.001에서 0.3 g/L의 L-히스티딘·HCl·H₂O, 0.001에서 0.3 g/L의 L-이소류신, 0.001에서 0.3 g/L의 L-류신, 0.001에서 0.3 g/L의 L-리신·HCl, 0.001에서 0.3 g/L의 L-메티오닌, 0.001에서 0.3 g/L의 L-페닐알라닌, 0.001에서 0.3 g/L의 L-트레오닌, 0.001에서 0.3 g/L의 L-트립토판, 0.001에서 0.3 g/L의 L-티로신·2 Na·2 H₂O, 및 0.001에서 0.3 g/L의 L-발린을 포함한다.

또, 하나의 실시양태로서 물에 용해했을 때에 상기의 구성이 되도록하는 분말 배지일 수 있다.

이와 같은 상기로 설명한 「본 발명에서 사용 가능한 다당」을 함유하는 배지는, 유용 물질의 제조에 사용할 수 있다.

구체적으로는, 유용 물질을 생산하는 세포를, 상기로 설명한 「본 발명에서 사용 가능한 다당」을 포함하는 배지에서 배양하고, 및 세포로부터 생산된 유용 물질을 단리 하는 것을 포함하는 방법에 의해 유용 물질을 제조할 수 있다.

당해 배지는, 무혈청 배지 또는 혈청의 농도를 저감시킨 배지(예를 들어, 5, 3 또는 1% FBS 함유 배지)일 수 있다.

예를 들어, 유용 물질로서 항체를 제조하는 경우에는, 항체 생산 세포를, 상기로 설명한 「본 발명에서 사용 가능한 다당」을 포함하는 배지로 배양하고, 항체를 정제하는 것을 포함하는 방법에 의해 항체를 제조할 수 있다.

항체의 정제 공정은, 예를 들어, protein A 친화 칼럼 크로마토그래피, 저 pH처리에 의한 바이러스 비활성화, 그 밖의 크로마토그래피 공정(양이온 교환 크로마토그래피, 음이온 교환 크로마토그래피 등), 바이러스 제거 필터에 의한 여과, 농축 공정, 최종 여과가 포함된다.

본 명세서에 있어서, 유용 물질이란, 의약, 농약, 식품, 그 외 화학 공업에 유용한 물질이면 특별히 제한은 없다.

바람직하게는, 항체, 효소(우로키나아제 등), 호르몬(인슐린 등), 사이토카인(인터페론, 인터류킨, 에리트로포이에틴, G-CSF, GM-CSF 등) 등의 생리 활성 단백질, 펩티드등을 예로서 들 수 있다.

항체는, 예를 들어, 마우스 모노클로날 항체, 인간화 모노클로날 항체 또는 인간 모노클로날 항체이다.

또, 면역 글로불린의 클래스는 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어, IgG(예를 들어, IgG1, IgG2)이다.

유용 물질은, 외래 유전자의 발현 산물인 재조합 단백질일 수 있다.

본 명세서에 있어서 사용되는 세포에 대해서는 재조합 단백질 등의 유용 물질 생산에 사용 가능한 세포이면 특별히 한정 되지 않고, CHO 세포, BHK 세포, HepG2 세포, 쥣과 미엘로마 세포(예를 들어, SP2/O세포, NSO 세포등의 마우스 골수종 세포), 하이브리도마, 곤충 세포 및 그들의 세포에 외래 유전자를 도입한 형질 전환 세포를 예로서 들 수 있다.

유용 물질로서 항체를 생산하는 경우에는, CHO 세포, SP2/O세포 또는 NSO 세포등을 세포 융합함으로써 얻어지는 하이브리도마 등을 항체 생산 세포로서 사용할 수가 있다.

이하, 실시예에 의해 본 발명을 한층 더 설명하지만, 본 발명은 이들로 한정되는 것은 아니다.

실시예

IgG 유전자를 트랜스펙션시켜 IgG 항체를 분비 생산하는 CHO 세포주 (ATCCCRL-12445)를 ATCC로부터 구입해 사용한다.

이 CHO 세포주를 10% FBS 함유 DMEM에서 배양한 후 회수해, 1% FBS 함유 DMEM에 현탁해, 12 웰 멀티 플레이트에 4×10⁴ 세포/웰이 되도록 파종 했다.

하기의 평가 검체인 다당을 멸균 초순수에 용해해, 최종 농도 40, 200, 1000μg/ml가 되도록 각 웰에 첨가했다.

또, 컨트롤로서 검체와 등량의 멸균 초순수를 첨가했다.

3일 배양 후, IgG의 농도를 측정했다.

컨트롤 웰의 세포 상청 내의 IgG 농도(즉, 멸균 초순수만을 첨가한 웰의 세포 상청 안의 IgG 농도)를 100으로 할때, 평가 검체인 각 다당을 첨가한 웰의 세포 상청 내의 결과의 IgG의 농도를 표 1-1 내지 1-4에 나타냈다.

하기 모든 평가 검체에 대해, IgG 생산량의 증가가 인정되었다.

평가 검체：

Aureobasidium pullulans 유래 β-1,3-1,6-글루칸 (다이소 주식회사제)；분자량 800,000 및 80,000.

또한, 분자량 80,000의 β-1,3-1,6-글루칸은 분자량 800,000의 β-1,3-1,6-글루칸을 초음파 처리(온도 4℃, 4시간, 초음파 호모게나이저(SONIFIER 250. BRANSON 사제)를 이용해)함으로써 얻었다.

빵 효모 유래 β-1,3-1,6-글루칸(BIOTHERA 사제)；

파라밀론(Wako Pure Chemical Industries, Ltd.제)；

모즈크 유래 푸코이단 (쿄오도 유업 주식회사제)；

다시마 유래 푸코이단(다카라 바이오 주식회사제)；

알긴산 프로필렌글리콜 에스테르(주식회사 KIMICA제)；

알긴산나트륨 (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.제)；

풀루란(SHOWA DENKO K.K.제：Shodex standard P-1300);

잔탄 검(UNITEC FOODS CO. LTD.제：SATIAXANE CX90)；

덱스트란(Wako Pure Chemical Industries, Ltd.제)

라미나란(토쿄 화성공업 주식회사제)

평가 검체의 중량 평균 분자량의 측정 방법(유기 용매계 )

이하에 기재된 방법에 의해, 실시예에 사용한 Aureobasidium pullulans 유래 β-1,3-1,6-글루칸, 빵 효모 유래 β-1,3-1,6-글루칸, 파라밀론, 덱스트란의 각 샘플의 중량 평균 분자량을 측정했다.

측정한 중량 평균 분자량을 표 1-1 내지 1-4에 나타낸다.

장치：고속 액체 크로마토그래피(Nihon Waters K.K.제)

칼럼：SHODEX GPC KD-806 M(칼럼 사이즈 8×300 mm)(SHOWA DENKO K.K.제)

칼럼 온도：50℃

이동상：10 mMLiBr/DMSO 용액

유속：0.7 ml/min

유입량：100μl

시료 농도：0.10%(1 mg/ml)

검출기：2414 시차굴절계(RI 검출기)(Nihon Waters K.K.제)

전처리： 0.45μm 멤브레인 필터 여과 (Minisart RC 4)

분자량 마커：풀루란(중량 평균 분자량；1,330,000, 788,000, 404,000, 212,000, 112,000, 47,300, 22,800, 11,800)(SHOWA DENKO K.K.제)

평가 검체의 중량 평균 분자량의 측정 방법(수계)

이하에 기재된 방법에 의해, 실시예에 사용한 모즈크 유래 푸코이단, 다시마 유래 푸코이단, 알긴산 프로필렌글리콜 에스테르, 알긴산나트륨, 풀루란, 잔탄검, 라미나란의 각 샘플의 중량 평균 분자량을 측정했다.

측정한 중량 평균 분자량을 표 1-1 내지 1-4에 나타낸다.

또한, 칼럼은, TOSHO 가드칼럼을 탠덤으로 2개의 TSK-GEL GMPW_XL 칼럼에 직렬로 연결시켜, 중량 평균 분자량을 측정한다.

장치：고속 액체 크로마토그래피(Nihon Waters K.K.제)

칼럼：TSK-GEL GMPW_XL (칼럼 사이즈 7.5 mmI.D×30 cm)(TOSOH CORPORATION제) 2개의 TOSHO 가드 칼럼

칼럼 온도：40℃

이동상：200 mM K₂HPO₄ 수용액

유속：1.0 ml/min

유입량：100μl

시료 농도：0.20%(2 mg/ml)

검출기： 2414 시차굴절계 (RI검출기)(Nihon Waters K.K.제)

전처리：0.45μm 멤브레인 필터 여과 (Minisart RC 4)

분자량 마커：풀루란(중량 평균 분자량；1,330,000, 788,000, 212,000, 47,300, 22,800, 11,800, 5,900)(SHOWA DENKO K.K.제)

IgG 생산 의 측정 방법

Bethyl Laboratories, Inc. 제의 Human IgG ELISA 측정 키트(HHuman IgG ELISA Quantitation Set, ELISA Starter Accessory Kit)를 이용해 첨부의 취급 설명서 기재된 방법으로 세포 배양 배지 중의 IgG 농도를 측정했다.

[표 1-1]

[표 1-2]

[표 1-3]

[표 1-4]

본 발명이 제공하는 조성물, 배지 및 제조 방법은, 세포를 사용한 유용 물질의 생산에 이용할 수 있다.

하나의 실시양태에서는, 본 발명은, 다당을 유효 성분으로 포함하는 저렴하고 안전성 높은 우수한 유용 물질 생산 증강용 조성물을 제공할 수 있다.

본 발명의 다당을 포함하는 세포 배양용 배지는, 세포의 형태나 종류 등에 한정되지 않고 세포 증식을 증강시켜, 유용 물질의 생산을 증대시킬 수 있다.

즉, 하나의 실시양태에 있어서, 본 발명의 조성물, 배지 및 제조 방법은, 세포에 있어서의 유용 물질의 생산을 증대시킬 수가 있어 일례로 항체를 이용한 임상 진단약 제조, 항체 의약 생산, 재생 의료, 세포 치료등의 각종 분야에서 응용이 가능하다.

Claims

다당을 포함하는, 세포내에서의 유용 물질 생산 증강용 조성물로서, 다당은 1위의 탄소와 3위의 탄소, 1위의 탄소와 4위의 탄소, 또는 1위의 탄소와 6위의 탄소간의 결합 모드에 따라 연결된 헥소스 잔기를 포함하는 조성물.
다당을 포함하는 세포 배양용 배지로서, 다당은 1위의 탄소와 3위의 탄소, 1위의 탄소와 4위의 탄소, 또는 1위의 탄소와 6위의 탄소간의 결합 모드에 따라 연결된 헥소스 잔기를 포함하는 배지.
제 1 항 또는 2 항에 있어서, 헥소스가 알데히드 기를 갖는 당인, 조성물 또는 배지.
제 1 항 또는 2 항에 있어서, 헥소스가 데옥시당, 카르복실산을 포함하는 당 또는 아미노당인, 조성물 또는 배지.
제 1 항 내지 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 헥소스가 알로스, 알트로스, 글루코스, 만노스, 굴로스, 이도스, 갈락토스, 탈로스, 푸코스, 람노스, 푸쿨로스 및 그들의 유도체로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1개의 당인, 조성물 또는 배지.
제 1 항 내지 5 항 중 어느 한 항에 있어서, 헥소스 잔기가, β1,3 연결, α1,3 연결, β1,4 연결, α1,4 연결, β1,6 연결 및 α1,6 연결로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1개의 결합모드에 따라 연결된, 조성물 또는 배지.
제 1 항 내지 6 항 중 어느 한 항에 있어서, 식 (1)로 표현되는 1종 이상의 당이, β1,3 연결, α1,3 연결, β1,4 연결, α1,4 연결, β1,6 연결 및 α1,6 연결로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1개의 결합모드에 따라 연결되어 다당을 형성하는, 당 또는 그 유도체를 포함하는 조성물 또는 배지:
식 (1)：

(식 중,
R₁는, H, OH, OSO₃H 또는 OZ₁이며；
Z₁는, 하기 식 (2)

또는, 하기 식 (3)의 기이고;

R₂는, H 또는 OH이며；
R₃는, H, CH₃ 또는 CH₂OH이며；
R₄는, H 또는 CH₃이며；
R₅는, H이며；
R₆는, OH 또는 OSO₃H이며；
X₁ 및 Y₁는 일방이 OH이고 다른 일방은 H이며；
X₂ 및 Y₂는 일방이 OH이고 다른 일방은 H이다).
제 1 항 내지 6 항 중 어느 한 항에 있어서, 식 (4)로 표현되는 1종 이상의 당이, β1,3 연결, α1,3 연결, β1,4 연결, α1,4 연결, β1,6 연결 및 α1,6 연결로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1개의 결합모드에 따라 연결되어 다당을 형성하는 다당 또는 그 유도체를 포함하는 조성물 또는 배지:
식 (4)：

R₇는, H 또는 OH이며；
R₈는, H 또는 OH이며；
R₉는, H, COOH, CH₂OH, COOCH₂CH(OH)CH₃ 또는 COOCH(CH₃)CH₂OH이며；
R₁₀는, H, COOH, COOCH₂CH(OH)CH₃ 또는 COOCH(CH₃)CH₂OH이며；
R₁₁는, OH 또는 OZ₂이며；
Z₂는, 하기 식 (5)의 기이고;

R₁₂는, H이며；
X₃ 및 Y₃는 일방이 OH이고 다른 일방은 H이다).
제 1 항 내지 8 항 중 어느 한 항에 있어서, 다당이 하기와 같은, 조성물 또는 배지:
식 (6):

(식 중,
Ra는, CH₂OH이며；
Ra'는, CH₂OH 또는 CH₂OZ₃이며,
Z₃는, 하기 식 (7)의 기이고;

m₁ 및 n₁는, 각각 중합체의 중량 평균 분자량이 10,000~10,000,000이도록 선택되는 정수이다)의 중합체 또는 그들의 유도체；
식 (8)：

(식 중,
Rb는, H, OH 또는 OSO₃H이며；
Rb'는, OZ₄이며；
Z₄는, 하기 식 (9)

또는, 하기 식 (10)의 기이고;

Rc 및 Rc'는, 각각 독립적으로, H 또는 OH이며；
Rd 및 Rd'는, 각각 독립적으로, H 또는 CH₃이며；
Re 및 Re'는, 각각 독립적으로, H 또는 CH₃이며；
Rf 또는 Rf'는, 각각 독립적으로, OH 또는 OSO₃H이며；
m₂ 및 n₂는, 각각 중합체의 중량 평균 분자량이 1,000~10,000,000이도록 선택되는 정수이다)의 중합체 또는 그 유도체；
식 (11)：

(식 중,
Rg 및 Rg'는, 각각 독립적으로, H 또는 OH이며；
RH 및 RH'는, 각각 독립적으로, H 또는 OH이며；
Ri는, COOH, CH₂OH, COOCH₂CH(OH)CH₃ 또는 COOCH(CH₃)CH₂OH이며；
Ri'는, H 또는 CH₂OH이며；
Rj는, H이며；
Rj'는, H, COOH, COOCH₂CH(OH)CH₃ 또는 COOCH(CH₃)CH₂OH이며；
Rk는, OH 또는 OZ₅이며；
Z₅는, 하기 식 (12)의 기이고;

Rk'는, OH이며；
Rl 및 Rl'는, 각각 독립적으로, H이며；
m₃ 및 n₃는, 각각 중합체의 중량 평균 분자량이 10,000~50,000,000이도록 선택되는 정수이다)의 중합체 또는 그 유도체；
식 (13)：

(식 중, o₁, p₁ 및 q₁는, 각각 중합체의 중량 평균 분자량이 1,000~10,000,000이도록 선택되는 정수이다)의 중합체 또는 그 유도체；
식 (14)：

(식 중,
o₂, p₂ 및 q₂는 각각 중합체의 중량 평균 분자량이 1,000~10,000,000이도록 선택되는 정수이다)의 중합체 또는 그 유도체；또는
식 (15)：

(식 중,
Rm는, OH 또는 OSO₃H이며；
Rn는, H 또는 OH이고, Rn가 OH 일때, 당해 OH의 수소는 임의로 Z₆로 치환되어 있어도 되고, Z₆는 하기 식 (16)의 기이고：

R_O는, H 또는 OH이며；
m₄ 및 n₄는, 각각 중합체의 중량 평균 분자량이 1,000~300,000이도록 선택되는 정수이다)인 중합체 또는 그 유도체.
제 1 항 내지 9 항 중 어느 한 항에 있어서, 다당이 β1,6 연결, α1,2 결합, β1,3 연결, α1,3 연결 및 α1,6 연결로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1개의 결합모드에 따라 연결된 헥소스 잔기를 추가로 포함하는, 조성물 또는 배지.
제 1 항 내지 10 항 중 어느 한 항에 있어서, 다당 히드록실기의 일부 또는 전부가 설페이트기로 추가 수식되는, 조성물 또는 배지.
제 1 항 내지 11 항 중 어느 한 항에 있어서, 유용 물질이 IgG 항체인, 조성물 또는 배지.
제 1 항 내지 12 항 중 어느 한 항에 있어서, 세포가 형질 전환 세포인, 조성물 또는 배지.
제 1 항 내지 13 항 중 어느 한 항에 기재된 배지에서 세포를 배양하는 것을 포함하는, 유용 물질의 제조 방법.
제 14 항에 있어서, 유용 물질이 IgG 항체이고/이거나 세포가 형질 전환 세포인, 방법.