KR20150067954A - Method for preparing placenta of low-molecular weight by subcritical water and high pressure enzyme process - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 아임계수 및 초고압 효소 처리를 통해 태반을 저분자화하는 방법에 관한 것이다.
The present invention relates to a method of low molecular weight placenta through sublimation factor and ultrahigh pressure enzyme treatment.
태반(placenta)은 태아와 모체의 자궁을 연결시키는 기관으로 양막, 융모막 및 탈락막(내막)으로 구성되어 있으며, 태아의 성장에 필요한 산소 및 각종 영양소를 공급하는 기능은 물론 태아에 필요한 호르몬 생성과 면역력 증강에 필요한 인자의 합성 등 태아의 성장을 위해 다양한 기능을 담당하는 것으로 알려져 있다. The placenta is composed of amniotic membrane, chorion, and decidual membrane (inner membrane) which connects fetus with maternal uterus. It also functions to supply oxygen and nutrients necessary for fetal growth, as well as hormone production It is known that it plays a variety of functions for fetal growth such as synthesis of factors necessary for immunity enhancement.
상기 태반의 막은 풍부하고 두꺼운 콜라겐 층을 가지고 있어 오래 전부터 태아가 출생하면서 모체로부터 배출되는 태반을 화상, 창상, 궤양 등의 치료에 민간용법으로 사용되었고, 질 재건, 각막 재생, 장의 유착방지 등을 위한 재료로도 사용되었다. 또한, 태반은 면역성이 적고, 항균작용 등을 가지고 있어 예로부터 동양 의학에서는 유착방지, 창상보호, 통증경감, 상피화 촉진 등의 질병치료 및 예방에 이용되어 왔다. These placenta membranes have a rich and thick collagen layer that has been used for a long time before fetal birth and is used as a private use for the treatment of burns, wounds, ulcers, and placenta released from the mother. It is used for vaginal reconstruction, corneal regeneration, It was also used as a material. In addition, the placenta has low immunity and has antimicrobial action and has been used in Oriental medicine for the treatment and prevention of diseases such as adhesion prevention, wound protection, pain relief, and promotion of epithelialization.
또한, 태반은 각종 아미노산, 활성 펩타이드, 비타민, 미네랄, 효소 및 다양한 성장인자와 같은 풍부한 유효성분을 함유하고 있어, 멜라닌 색소의 생성을 억제, 섬유아세포 증식 촉진, 피지의 분비선 기능 촉진, 피로회복, 면역증강 등의 의학적 효능이 알려지면서 보다 효과적으로 태반을 이용하기 위해 태반으로부터 유효성분만을 추출한 태반추출물이 임상에 이용되기 시작하여 백만증, 아토피, 천식, 간염, 간경화, 관절염 등의 질병치료에 이용되었고, 최근에는 미용이나 건강 유지를 목적으로 하는 화장품, 의약품 또는 건강기능식품과 같은 다양한 분야에서 활용하기 위한 시도가 이루어지고 있다. The placenta contains various active ingredients such as various amino acids, active peptides, vitamins, minerals, enzymes and various growth factors. It inhibits the production of melanin pigment, promotes fibroblast proliferation, promotes sebaceous gland function, As the medical effects such as immunity enhancement have been known, the placenta extract which extracts the effective parturient from the placenta to use the placenta more effectively began to be used in the clinic and was used for the treatment of diseases such as millionaemia, atopy, asthma, hepatitis, liver cirrhosis and arthritis In recent years, attempts have been made to utilize them in various fields such as cosmetics, medicines or health functional foods for the purpose of maintaining beauty or health.
일반적으로 태반의 추출물은 강산 또는 강알칼리로 가수분해 하거나 분해효소를 사용하여 태반을 가수분해하여 얻은 가수분해물을 이용하여 추출하여 사용되고 있다. 그러나 강산 또는 강알칼리를 이용하여 가수분해하는 방법은 장시간 고온 처리하는 과정에서 태반이 가지고 있는 각종 아미노산, 성장 촉진인자, 사이토카인, 히아루론산, 섬유아세포, 상피촉진인자 등의 생리활성물질이 비활성되거나 소멸하며, 효소를 이용한 방법은 처리시간이 오래 걸리고, 효소의 조합, 반응조건(태반 투입량, 온도, pH 등), 태반의 구성성분 및 전처리 조건 등에 따라 효소의 활성이 달라지며, 태반에 1.0% 이상으로 포함되어 있는 지질을 제거하기 위해 독성 유기용매를 사용하여 제거하는 단계가 필수적으로 요구되므로 화장료, 의약품 및 식품, 특히 식품에 사용하기에 단위 중량당 약리활성이 강하지 못하고, 안정성 등의 문제가 대두되고 있다. 따라서 태반의 유효성분을 성분변화 없이 안전하게 추출할 수 있는 방법에 대한 개발이 요구되고 있다.In general, the extract of placenta is hydrolyzed with strong acid or strong alkali or hydrolyzate obtained by hydrolyzing placenta using decomposition enzyme. However, in the method of hydrolysis using strong acid or strong alkali, physiologically active substances such as various amino acids, growth promoting factors, cytokines, hyaluronic acid, fibroblasts, and epithelial promoting factors possessed by the placenta in the process of high temperature treatment for a long time are inactivated or disappear , Enzymatic method takes a long time to process, enzyme activity varies depending on enzyme combination, reaction conditions (placental input, temperature, pH, etc.), components of placenta, and pretreatment conditions, and more than 1.0% Since it is essential to remove the lipids contained in the composition by using a toxic organic solvent in order to remove the contained lipids, the pharmacological activity per unit weight is not strong enough for use in cosmetics, medicines and foods, especially foods, have. Therefore, there is a need to develop a method for safely extracting the active ingredient of the placenta without any component change.
한편, 아임계수(subcritical water)는 압력이 가해진 열수(pressurized hot water), 압출된 열수(compressed hot water), 또는 과열된 물(superheated water)로 불리며, 물의 끓는점(100℃)과 물의 임계온도(374℃) 사이에 0.4 내지 40MPa의 압력이 가해진 상태에서 액체 상태를 유지하는 뜨거운 물로, 최근 식품가공, 고분자물질의 가수분해 등에 많이 사용되어 지고 있다.Subcritical water, on the other hand, is called the pressurized hot water, the compressed hot water, or the superheated water, and the boiling point of water (100 ° C) and the critical temperature of water 374 占 폚) in a state where a pressure of 0.4 to 40 MPa is applied and is maintained in a liquid state. Recently, it has been widely used for food processing, hydrolysis of a polymer substance, and the like.
일반적으로, 물(water)은 매우 간단한 분자 구조를 가지는 용매로써 실생활 및 모든 화학 공정에 많이 사용되고 있는 물질 중 하나로, 분자간에 수소 결합이 형성되는 관계에 따라 그 물리적 성질은 일반 유기 용매와는 다른 성질을 가지고 있다. 예를 들어, 분자량이 비슷한 다른 용매보다 끓는점 및 비열이 대단히 높은 특성을 가지고 있다. 이러한 물은 고온 및 고압 하에서 물(이하, 아임계수라 함)의 극성, 점성, 표면장력 등의 물리·화학적 성질, 특히 상대 유전상수(relative dielectric constant,ε)와 이온형성상수(ion product constant)가 변하게 된다. 예를 들어 25℃에서 물의 상대 유전상수는 80인데, 250℃의 물의 상대 유전상수는 27로 온도가 증가함에 따라 현저하게 낮아지는데, 이는 25℃의 메탄올(ε=33), 에탄올(ε=24)과 유사한 값을 가지므로, 석탄, 방향족 탄화수소를 가지는 물질 등과 같은 극성과 비극성의 성질을 동시에 가지고 있는 천연물을 회수하거나 녹여낼 수 있다. 또한, 임계온도(374℃) 및 22MPa의 압력에서의 물(이하, 초임계수라 함)의 이온형성상수는 10-11까지 상승했다가, 더 높은 온도인 390℃에서는 10-19으로, 500℃에서는 10-22까지 감소하게 된다. 즉, 아임계수 또는 초임계수는 유기물질과 반응할 수 있고, 상온, 상압에서의 물(25℃, 1atm)에 비하여 103배까지 분해상수가 증가하며, 이는 산성, 염기성 또는 산/염기성 이중촉매로서 작용하여 물질을 쉽게 분해하는 능력을 갖는다. 따라서 최근에는 아임계 상태(100℃ < T < 374℃) 또는 초임계 상태(T=374℃, P=22MPa)의 물을 이용하여 어육, 빵, 효모, 실크피브로인(silk fibroin) 등과 같은 셀룰로오스와 단백질을 함유하는 바이오매스를 가수분해하거나 폐기물, 유해물질 등을 분해하는데 많이 사용되고 있다.In general, water is a solvent having a very simple molecular structure and is widely used in real life and all chemical processes. Depending on the formation of hydrogen bonds between molecules, its physical properties are different from those of common organic solvents Lt; / RTI > For example, it has a very high boiling point and specific heat than other solvents with similar molecular weights. Such water has physical and chemical properties such as polarity, viscosity and surface tension of water (hereinafter referred to as a? -Coefficient) under high temperature and high pressure, especially relative dielectric constant (?) And ion product constant. . For example, the relative dielectric constant of water at 25 ° C is 80, and the relative dielectric constant of water at 250 ° C is 27, which is significantly lower as the temperature increases. This means that methanol at 25 ° C (ε = 33), ethanol ), So that it is possible to recover or dissolve natural materials having both polarity and non-polar properties such as coal and aromatic hydrocarbon-containing substances. The ion formation constant of water at a critical temperature (374 ° C) and a pressure of 22 MPa (hereinafter referred to as supercritical charge) increased to 10 -11, and increased to 10 -19 at a higher temperature of 390 ° C, It is reduced to 10 -22 . That is, the subcoefficient or supercriticalcoefficient can react with an organic material and the decomposition constant increases to 10 3 times that of water (25 ° C., 1 atm) at room temperature and normal pressure, which is an acidic, basic or acid / And has the ability to readily decompose the material. Recently, the use of water in the subcritical state (100 ° C. <T <374 ° C.) or the supercritical state (T = 374 ° C., P = 22 MPa) has been used to treat celluloses such as fish, bread, yeast, silk fibroin It is widely used for the hydrolysis of biomass containing proteins and the decomposition of wastes and harmful substances.
이와 관련된 기술로, 대한민국 공개특허 제2013-0002068호는 아임계수를 이용하여 추축된 황기 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 외용제 조성물 및 추출방법에 대하여 개시하고 있고, 대한민국 등록특허 제0984531호는 아임계수를 이용한 병풀로부터의 아시아틱산과 아시아티코사이드의 추출 및 분리방법에 대하여 개시하고 있으며, 일본 등록특허 제4664580호는 아임계수 또는 초임계수를 이용한 연속 처리장치 및 이것을 이용하여 얻어지는 유기물의 가수분해물에 대하여 개시하고 있다. 그러나 아직까지 아임계수를 이용하여 콜라겐을 가수분해하는 결과는 개시되어 있지 않다.
Korean Patent Laid-Open Publication No. 0984531 discloses a composition for external application for skin and a method for extracting the composition containing an extract of Angelica keiskei using an asymptotic factor as an active ingredient, Japanese Patent No. 4664580 discloses a continuous process apparatus using an asymptotic or supercritical water and a hydrolyzate of an organic substance obtained using the same. Lt; / RTI > However, the results of hydrolyzing collagen using the asymptotic coefficients have not yet been disclosed.
이에, 본 발명자들은 아임계수 처리 장치 및 초고압 처리 장치를 자체 제작하고, 이를 이용하여 가수분해 공정이 간단하고, 성분변화가 없으면서 저분자화된 태반의 가수분해물을 제공하고자 노력하였으며, 그 결과 본 발명을 완성하였다.
Accordingly, the inventors of the present invention have made efforts to provide a hydrolyzate of placenta which has a simple hydrolysis process and a low molecular weight without any change in composition, Completed.
본 발명의 하나의 목적은 아임계수 처리 및 초고압 효소처리에 의하여 태반을 저분자화하는 방법을 제공하는 것이다.It is an object of the present invention to provide a method of low molecular weight placenta by submergence processing and ultra high pressure enzyme treatment.
본 발명의 다른 하나의 목적은 상기 방법에 의하여 저분자화된 태반의 가수분해물을 제공하는 것이다.It is another object of the present invention to provide a hydrolyzate of a placenta which has been reduced to low molecular weight by the above method.
본 발명의 또 다른 하나의 목적은 상기 아임계 처리를 위한 아임계 장치를 제공하는 것이다.It is still another object of the present invention to provide a subcritical apparatus for subcritical processing.
본 발명의 또 다른 하나의 목적은 초고압 효소처리를 위한 초고압 장치를 제공하는 것이다.
It is another object of the present invention to provide an ultrahigh pressure apparatus for ultra high pressure enzyme treatment.
하나의 양태로서, 본 발명은 태반을 적출 후 혈액 및 태변과 같은 이물질을 제거하고 세절하여 아임계수에 3 내지 15분 동안 처리한 후 분해효소를 첨가하여 초고압 상태에서 태반을 가수분해하는 것을 특징으로 하는 태반의 저분자화 방법에 관한 것이다.In one embodiment, the present invention is characterized in that after removing the placenta, foreign substances such as blood and meconium are removed, and the placenta is hydrolyzed at an ultra-high pressure by adding a decomposing enzyme after treating it for 3 to 15 minutes with sub- Lt; RTI ID = 0.0 > placenta < / RTI >
태반은 콜라겐이 풍부한 양막, 융모막 및 탈락막(내막)으로 구성되어 있어 태반을 화장품, 의약품 또는 건강기능식품의 조성물로 사용하기 위해서는 일반적으로 태반(콜라겐)을 가수분해하여 펩타이드 형태로 사용하거나, 이로부터 유효성분을 추출하여 사용할 수 있다. The placenta is composed of amniotic membrane rich in collagen, chorionic membrane and decidual membrane (inner membrane). In order to use the placenta as a composition of cosmetics, medicines or functional foods, it is generally used as a peptide form by hydrolyzing placenta (collagen) The active ingredient can be extracted and used.
콜라겐은 글리신, 프롤린 등 약 18종의 아미노산으로 구성된 동물의 섬유성 단백질로서, 각종 아미노산이 폴리펩타이드 형태로 결합하여 삼중나선구조의 형상을 나타낸다. 이러한 콜라겐은 대략 300,000개로 매우 큰 분자량을 가지고 있어 피부나 소화기관으로 흡수되기 어렵고 콜라게나아제(collagenase) 이외에 다른 단백질 분해효소로는 분해되지 않으므로, 가열하여 콜라겐의 입체구조가 파괴된 젤라틴을 추출한 다음 분해효소를 처리하여 소화 및 흡수가 용이한 콜라겐 펩타이드 형태로 사용하는 것이 바람직하다. 이때, 상기 가열은 통상적으로 50 내지 110℃의 수용액에서 3 내지 9시간 동안 이루어지는데, 이는 처리 시간이 너무 오래 걸리고, 콜라겐이 포함하고 있는 유효성분이 변성되는 문제가 있다. Collagen is an animal fibrotic protein composed of about 18 kinds of amino acids such as glycine and proline. Various amino acids are bonded in a polypeptide form to show a triple helix structure. Since the collagen has a very high molecular weight of about 300,000, it is difficult to be absorbed into skin or digestive organs and is not decomposed by other proteases other than collagenase. Therefore, gelatin which has broken down the three-dimensional structure of collagen is extracted by heating It is preferable to use the collagen peptide in the form of a collagen peptide which is easily digested and absorbed by the treatment with a degrading enzyme. At this time, the heating is usually carried out in an aqueous solution of 50 to 110 ° C for 3 to 9 hours, which takes too long a processing time, and there is a problem that an effective ingredient contained in collagen is denatured.
한편, 아임계수(subcritical water)는 100 내지 374℃의 임계온도 범위에 있는 물로, 천연식품재료의 유효성분을 변화시키지 않으면서 먹기 쉽고, 소화흡수가 잘되며, 오래 저장할 수 있도록 처리하는데 사용되거나 쓰레기, 폐기물 등을 깨끗한 고칼로리의 분말 연료로 바꾸는데 사용되고 있다. 예를 들어, 가정용 압력밥솥은 120℃의 온도 및 2기압 부근의 아임계수를 사용해 짧은 시간에 단단한 콩을 삶기도 하고, 수육을 만들기도 한다. 또한, 200℃의 온도 및 16기압 부근의 고온 아임계수는 목재나 플라스틱 등과 같은 더 단단한 성분을 녹인 다음 분쇄기로 파쇄하여 복합 분말 연료를 제조하는데 사용되고 있다. On the other hand, subcritical water is water in a critical temperature range of 100 to 374 ° C. It is easy to eat without changing active ingredients of natural food materials, is well digested and absorbed, is used for long storage, , Wastes, etc. into clean high calorie powder fuel. For example, a domestic pressure cooker boils hard soybeans in a short period of time using a temperature of 120 ° C and an asymptotic coefficient of about 2 atmospheres, and also produces meat. In addition, the temperature elevation coefficient at about 200 ° C and around 16 atm is used to melt composite components such as wood or plastic and then crush with a crusher to produce composite powder fuel.
따라서, 본 발명의 상기 태반은 30 내지 40 MPa, 바람직하게는 35 내지 40 MPa, 보다 바람직하게는 37.5 MPa의 압력 및 150 내지 200℃, 바람직하게는 150 내지 180℃ 온도하에서 존재하는 아임계수에 침지하여 10 내지 40분, 바람직하게는 15 내지 35분 동안 처리하는 것이 바람직하다. 상기 압력이 33MPa 미만이거나 온도가 150℃ 미만인 아임계수에 처리하는 경우 콜라겐의 삼중나선구조가 완전히 분해되지 않아 추가적인 가열이 필요하며, 상기 압력이 40 MPa를 초과하거나 200℃를 초과하는 아임계수에 처리하는 경우 그 이하의 압력 및 온도의 조건에서 처리한 태반에 비하여 분해되는 효율의 증가가 미비하여 비효율적이다. 또한, 상기 아임계수 처리시간이 10분 미만인 경우 태반의 용해가 완전히 이루어지지 않아 추가적인 공정이 필요하며, 상기 아임계수 처리시간이 40분을 초과하는 경우 그 이하의 조건에서 처리한 태반의 용해도에 비하여 떨어지는 문제가 있다.Therefore, the placenta of the present invention is preferably immersed in an asymptotic ratio present at a pressure of 30 to 40 MPa, preferably 35 to 40 MPa, more preferably 37.5 MPa and a temperature of 150 to 200 DEG C, preferably 150 to 180 DEG C For 10 to 40 minutes, preferably 15 to 35 minutes. If the pressure is less than 33 MPa or the temperature is less than 150 ° C., the triple helix structure of the collagen is not fully decomposed and additional heating is required, and the pressure exceeds 40 MPa or is treated with an asymptotic coefficient exceeding 200 ° C. , The increase in the efficiency of decomposition is less than that of the placenta treated at the lower pressure and temperature conditions, which is inefficient. Further, when the sub-counting process time is less than 10 minutes, dissolution of the placenta is not completely performed and further processing is required. When the sub-counting process time exceeds 40 minutes, compared with the solubility of the placenta treated under the sub- There is a falling problem.
하나의 구체적 실시에서, 37.5 MPa의 압력하에서 150℃, 170℃ 및 200℃의 온도하에서 30분 및 50분 동안 각각의 아임계수를 처리하여 가수분해된 펩타이드의 분자량 및 유리 아미노산 함량을 측정한 결과, 온도가 증가할수록 분자량이 감소된 펩타이드 증가 하였으며, 특히 170℃ 및 200℃의 온도에서 처리한 태반의 펩타이드는 1,400 내지 4,270 Da의 펩타이드가 확인되었다. 또한, 아임계수를 상기 압력 및 온도에서 30분 동안 처리하였을 때 태반의 용해도는 77%로 가장 높은 값을 나타내는 것을 확인하였다. In one specific implementation, the molecular weight and the free amino acid content of the hydrolyzed peptide were measured by treating the respective subcodes for 30 minutes and 50 minutes at a temperature of 150 DEG C, 170 DEG C, and 200 DEG C under a pressure of 37.5 MPa, Peptides with decreased molecular weight were increased with increasing temperature. Especially, placental peptides treated at 170 ℃ and 200 ℃ showed peptides of 1,400 to 4,270 Da. In addition, the solubility of the placenta was found to be the highest at 77% when the subcodes were treated at the above pressure and temperature for 30 minutes.
본 발명에 있어서, 상기 아임계수 처리는 본 발명자들에 의하여 고안 및 제작된 장치(1)를 이용하여 이루어지는 것으로, 구체적으로 압력 및 온도를 증가시키고 유지하면서, 본 발명의 태반에 아임계수를 가하여 태반의 삼중나선구조를 분해시키는 장치를 이용하여 이루어지는 것을 특징으로 한다.In the present invention, the sub-counting process is performed by using the apparatus (1) designed and manufactured by the present inventors. Specifically, while increasing pressure and temperature, the sub- Of the triple helix structure of the triple helical structure.
본 발명의 상기 아임계수 처리 장치는 도 1에서 보는 바와 같이, 공기를 압축하는 공기압축기(air compressor, 10), 압축된 공기를 다시 증폭시키는 압력 증폭기(pressure intensifier, 20), 아임계수 및 태반을 수용하는 챔버(chamber, 30), 상기 챔버 내 온도를 조절하기 위한 온도 조절기(thermostat, 40) 및 전류의 양을 조절하여 온도를 상승시키는 저항 가열기(resistance heater, 50)로 이루어진다.As shown in FIG. 1, the apparatus of the present invention includes an
또한, 본 발명의 상기 아임계수 처리 장치(1)에 있어서, 상기 챔버(30)는 아임계수 및 태반을 수용하는 수용부(31), 상기 수용부의 내부에 위치하며 가열기(50)로부터 전달되는 전류를 태반으로 전달하는 열판 1(32), 상기 수용부의 외곽에 위치하며 가열기(50)와 연결되어 수용부(31)의 내부 온도를 유지시키는 열판 2(33) 및 수용부 내 아임계수의 온도를 측정하기 위한 센서(34)로 이루어진 것을 특징으로 한다.In the apparatus for processing asymptotic counts I of the present invention, the
본 발명에 있어서, 상기 태반은 수의사 검증을 통하여 정상 분만한 포유동물의 태반이라면 이에 제한되지 않으나, 예를 들어, 사람, 양, 소, 개, 돼지, 또는 말 등의 태반일 수 있으며, 바람직하게는 돼지의 태반이다.In the present invention, the placenta is not limited to a placenta of a normal mammal through the veterinary examination, but may be, for example, a placenta such as a human, a sheep, a dog, a pig, Is the placenta of the pig.
본 발명에 있어서, 상기 분해효소는 태반을 가수분해하는 단백질 분해효소라면 어느 것이나 사용가능하며, 바람직하게는 콜라게나아제 파파인, 트립신, 펩신, 키모트립신 및 브로멜라인 등으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 또는 2종 이상, 보다 바람직하게는 트립신, 펩신 및 키모트립신인 것을 특징으로 한다.In the present invention, the protease may be any proteinase capable of hydrolyzing the placenta, and preferably one kind selected from the group consisting of collagenase papain, trypsin, pepsin, chymotrypsin and bromelain Or two or more, more preferably trypsin, pepsin and chymotrypsin.
본 발명에 있어서, 상기 분해효소는 태반의 펩타이드 결합을 용이하게 가수분해시켜 저분자량의 펩타이드를 형성할 수 있다.In the present invention, the degrading enzyme can easily hydrolyze the peptide bond of the placenta to form a peptide having a low molecular weight.
하나의 구체적 실시에서, 열처리하여 젤리틴화 시킨 태반을 트립신, 펩신 및 키모트립신을 처리하여 37℃의 온도에서 1, 3, 6, 12 및 24시간 동안 반응시킨 결과, 상기 분해효소 모두 태반의 펩타이드를 분해하는 것으로 확인되었다.In one specific implementation, the placenta which was heat treated and treated with trypsin, pepsin and chymotrypsin was treated at 37 ° C for 1, 3, 6, 12 and 24 hours, It was confirmed to decompose.
본 발명의 분해효소는 태반 100중량부에 대하여 0.001 내지 0.01중량부, 바람직하게는 0.001 내지 0.005중량부의 함량으로 처리되는 것을 특징으로 한다. 상기 분해효소의 함량이 0.001중량부 미만인 경우 태반의 단백질 결합조직의 가수분해가 용이하게 이루어지지 않으며, 분해효소의 함량이 0.005중량부를 초과하는 경우 그 이하의 함량을 첨가하여 반응시켜 가수분해된 태반의 펩타이드 분자량의 감소가 미비하여 비효율적이다.The decomposing enzyme of the present invention is characterized by being treated in an amount of 0.001 to 0.01 part by weight, preferably 0.001 to 0.005 part by weight, based on 100 parts by weight of the placenta. When the content of the degrading enzyme is less than 0.001 part by weight, the protein binding tissue of the placenta is not easily hydrolyzed. When the content of the degrading enzyme is more than 0.005 parts by weight, The decrease in the molecular weight of the peptide of the present invention is insufficient.
본 발명에 있어서, 상기 초고압 상태는 50 내지 250MPa, 바람직하게는 100 내지 200MPa의 고압상태인 것을 특징으로 한다. 상기 범위의 압력은 태반의 단백질의 구조를 변형시키거나 단백질 분해효소의 활성을 향상시킬 수 있다.In the present invention, the ultra high pressure state is a high pressure state of 50 to 250 MPa, preferably 100 to 200 MPa. The pressure in the above range can modify the structure of the placenta protein or improve the activity of the protease.
본 발명에 있어서, 초고압 효소처리는 분해효소를 첨가한 태반을 초고압처리를 통해 분해효소의 활성을 향상시키는 것을 말한다.In the present invention, the ultrahigh pressure enzyme treatment refers to the enhancement of the activity of the degrading enzyme through ultra-high pressure treatment of the placenta containing the degrading enzyme.
구체적으로, 상기 초고압 효소처리는 50 내지 250MPa, 바람직하게는 100 내지 200MPa의 초고압상태에서 1 내지 10분, 바람직하게는 3 내지 8분 동안 이루어지는 것을 말한다. 상기 이외의 조건에서는 태반의 펩타이드를 가수분해시키는 시간이 오래걸리거나 효소의 활성이 저하되어 저분자량의 펩타이드가 형성되지 않는다.Specifically, the ultrahigh-pressure enzyme treatment is performed at an ultra-high pressure of 50 to 250 MPa, preferably 100 to 200 MPa for 1 to 10 minutes, preferably 3 to 8 minutes. In other conditions, it takes a long time to hydrolyze the placental peptide, or the activity of the enzyme is lowered, so that a peptide having a low molecular weight is not formed.
하나의 구체적 실시에서, 열처리하여 젤리틴화 시킨 태반을 트립신, 펩신 및 키모트립신을 처리하여 0.1MPa 및 100MPa의 압력에서 1시간 및 4시간 동안 배양시켜 가수분해된 펩타이드의 분자량을 측정한 결과, 배양시간이 증가함에 따라 분자량이 감소하나, 압력에 따른 분자량은 변화하지 않는 것을 확인하였다. 또한, 열처리하여 젤리틴화 시킨 태반을 트립신, 펩신 및 키모트립신을 처리하여 100MPa, 200MPa 및 300MPa의 압력에서 5분 동안 배양시켜 가수분해된 펩타이드의 분자량을 측정한 결과, 압력이 증가할수록 펩타이드의 분자량은 감소하여, 20,000 Da 미만의 펩타이드 함량이 증가 확인하였으나 300MPa 압력으로 반응시킨 태반의 펩타이드의 분자량은 20,000 Da 이상의 펩타이드 함량이 증가하는 것을 확인하였다.In one specific embodiment, the placenta which had been heat-treated and gelatinized was treated with trypsin, pepsin and chymotrypsin and cultured at 0.1 MPa and 100 MPa for 1 hour and 4 hours to measure the molecular weight of the hydrolyzed peptide. As a result, The molecular weight was decreased, but the molecular weight according to the pressure did not change. The molecular weight of the hydrolyzed peptide was measured by treating the placenta treated with trypsin, pepsin, and chymotrypsin at a pressure of 100 MPa, 200 MPa, and 300 MPa for 5 minutes. As a result, the molecular weight of the peptide increased as the pressure increased And the peptide content of less than 20,000 Da was increased. However, the molecular weight of the placental peptide reacted at 300 MPa pressure increased the peptide content of 20,000 Da or more.
본 발명에 있어서, 상기 초고압 효소 처리는 본 발명자들에 의하여 고안 및 제작된 장치(2)를 이용하여 이루어지는 것으로, 구체적으로 최대 200MPa까지 압력을 증가시키고 유지하면서 정수압을 본 발명의 분해효소가 처리된 태반에 가하여 태반을 가수분해시키는 장치를 이용하여 이루어지는 것을 특징으로 한다.In the present invention, the ultrahigh pressure enzyme treatment is performed using the device (2) designed and manufactured by the present inventors. Specifically, the hydrostatic pressure is increased and maintained at a pressure of up to 200 MPa, And a device for hydrolyzing the placenta by applying to the placenta.
본 발명의 상기 초고압 효소처리 장치는 도 2에서 보는 바와 같이, 공기를 압축하는 공기압축기(air compressor, 100), 압축된 공기의 압력을 다시 증폭시키는 초고압 증압기(high pressure intensifier, 200), 분해효소가 첨가된 태반을 수용하는 챔버(chamber, 300), 상기 챔버(300)에 냉매를 공급하는 저온장치(cryostat, 400), 상기 챔버(300) 내 분해효소가 첨가된 태반의 온도를 측정하기 위한 센서(sensor, 500), 및 상기 센서로부터 측정된 온도를 기록하는 데어터기록장치(600)로 이루어진다.2, the apparatus includes an
또한, 본 발명의 상기 초고압 효소처리 장치(2)에 있어서, 상기 챔버(300)는 분해효소가 첨가된 태반을 수용하는 수용부(310), 상기 수용부(310)의 외곽에 위치하며 내부 공간에 상기 저온장치(400)로부터 유입되는 냉매를 보관하여 수용부(310) 내부 온도를 낮추는 외곽부(320), 및 상기 외곽부(320)의 외면을 둘러싸서 상기 수용부(310) 내부와 외부의 열 출입을 막아 단열 상태를 유지하는 단열부(330)로 이루어진 것을 특징으로 한다.In addition, in the ultra-high-pressure enzyme processing apparatus (2) of the present invention, the chamber (300) includes a receptacle (310) for accommodating a placenta to which a decomposition enzyme is added, An
또한, 본 발명의 상기 초고압 효소처리 장치(2)에 있어서, 상기 챔버(300)의 외곽부(320)는 상기 저온장치(400)로부터 상기 외곽부(320)의 내부 공간으로 냉매를 유입하기 위한 유입부(340)와 유입된 냉매를 상기 저온장치(400)로 유출하기 위한 유출부(350)가 구비되어 있는 것을 특징으로 한다.In the ultrahigh-pressure
또한, 본 발명의 상기 초고압 효소처리 장치(2)에 있어서, 상기 챔버(300)와 초고압 증압기(200)를 연결하는 압력관(210)에는 압력밸브(220)가 구비되어 있는 것을 특징으로 하는데, 상기 압력밸브(220)를 개방함으로써 챔버(300)의 수용부(310) 내 압력을 급속히 감소시킬 수 있다.A
또한, 본 발명의 상기 초고압 효소처리 장치(2)에 있어서, 상기 센서(500)는 열전대(thermocouple)인 것을 특징으로 한다.In the high-pressure
본 발명에 따른 저분자화된 태반은 펩타이드 분자량이 1,000Da 이하, 바람직하게는 400 내지 1,000Da의 크기를 가지는 펩타이드로 이루어진다.The low molecular weight placenta according to the present invention is composed of a peptide having a peptide molecular weight of 1,000 Da or less, preferably 400 to 1,000 Da.
하나의 구체적 실시에서, 태반을 37.5MPa의 압력, 170℃의 온도하에서 10분 동안 고압/고온 처리한 태반에 트립신 25㎍/g을 처리하여 200MPa의 압력에서 5분 동안 반응시켜 가수분해된 펩타이드 및 열처리한 태반에 트립신 25㎍/g을 처리하여 200MPa의 압력에서 5분 동안 반응시켜 가수분해된 펩타이드의 분자량을 측정한 결과, 고압/고온 처리한 후 초고압 효소 처리하여 가수분해시킨 태반은 1,000 Da 이하의 분자량을 가지는 펩타이드로 이루어져 있고, 초고압 효소 처리를 통해 가수분해시킨 태반은 50,000 Da 미만의 분자량을 가지는 펩타이드로 이루어져 있는 것으로 확인되었다.
In one specific embodiment, the placenta was treated with 25 μg / g of trypsin at a high pressure / high temperature for 10 minutes at a pressure of 37.5 MPa and a temperature of 170 ° C. for 5 minutes at a pressure of 200 MPa to form the hydrolyzed peptide The heat treated placenta was treated with
본 발명의 태반을 가수분해시키는 방법은 태반을 젤라틴화 하는 공정을 생략할 수 있으므로 종래의 태반을 가수분해하는 방법에 비하여 공정이 간단하고, 처리비용이 저렴하며, 단시간에 저분자량의 펩타이드로 가수분해가 가능하여 분리 및 추출 효율이 향상된 효과를 가지므로, 태반의 유효물질을 대량생산 할 수 있는 대량생산 시스템으로 사용할 수 있다. 하나의 예로서, 본 발명에 의하여 저분자화된 태반은 추출물의 형태로 기능성 식품, 기능성 음료, 화장품, 의약품 등에 사용할 수 있다.
The method of hydrolyzing the placenta of the present invention can omit the step of gelatinizing the placenta. Therefore, compared with the conventional method of hydrolyzing the placenta, the process is simple, the processing cost is low, and the low molecular weight peptide It can be used as a mass production system capable of mass production of an effective substance of the placenta. As one example, the low-molecular-weight placenta according to the present invention can be used as a functional food, a functional beverage, a cosmetic, a medicine or the like in the form of an extract.
본 발명에 따르면 태반을 저분자화하는 단계 중에 고압/고온을 이용하여 전처리된 태반을 이용하여 공정이 간단하고, 처리비용이 저렴한 저분자화된 태반의 펩타이드를 제공한다. 또한, 상기 고압/고온을 이용하여 전처리된 태반에 초고압 효소 처리를 통해 1,000 Da 이하의 분자량을 가지는 펩타이드로 가수분해가 가능하여 분리 및 추출 효율이 향상된 효과를 나타낸다. 아울러, 태반을 저분자량의 펩타이드로 가수분해하여 유효물질을 대규모로 생산할 수 있는 대량생산 시스템으로 활용될 수 있다.
According to the present invention, there is provided a low molecular weight placental peptide having a simple process and a low processing cost by using a placenta pretreated with a high pressure / high temperature during the step of low molecular weight of the placenta. In addition, it is possible to hydrolyze the placenta pretreated with the high pressure / high temperature to a peptide having a molecular weight of 1,000 Da or less through ultrahigh pressure enzyme treatment, thereby improving separation and extraction efficiency. In addition, the placenta can be used as a mass production system capable of hydrolyzing the placenta into a low molecular weight peptide to produce an effective substance on a large scale.
도 1은 본 발명에 따른 고압/고온 처리 장치의 모식도이다.
도 2는 본 발명에 따른 초고압 효소처리 장치의 모식도이다.
도 3은 열처리에 따른 태반의 가수분해 효율을 측정한 결과이다.
도 3은 분해효소의 종류에 따른 열처리된 태반의 가수분해 효율 및 분자량을 측정한 결과이다.
도 4는 0.1MPa 및 100MPa의 고압력에서 트립신, 펩신 및 키모트립신을 처리한 열처리된 태반을 1 시간 및 4시간 동안 처리하여 가수분해된 펩타이드 분자량을 측정한 결과이다.
도 5는 0.1MPa, 100MPa, 200MPa 및 300MPa의 고압력에서 트립신, 펩신 및 키모트립신을 처리한 열처리된 태반을 5분 동안 처리하여 가수분해된 펩타이드 분자량을 측정한 결과이다.
도 6은 0.1MPa, 100MPa, 200MPa 및 300MPa의 고압력에서 트립신, 펩신 및 키모트립신을 처리한 열처리된 태반을 5분 동안 처리하여 가수분해된 펩타이드의 조성을 분석한 것이다.
도 7은 0.1MPa, 100MPa, 200MPa 및 300MPa의 고압력에서 트립신, 펩신 및 키모트립신을 처리한 열처리된 태반을 5분 동안 처리하여 가수분해된 펩타이드의 가수분해 효율을 측정한 것이다.
도 8은 0.1MPa, 100MPa, 200MPa 및 300MPa의 고압력에서 트립신, 펩신 및 키모트립신을 처리한 열처리된 태반을 5분 동안 처리하여 가수분해된 태반의 유리 아미노산 함량을 측정한 것이다.1 is a schematic diagram of a high-pressure / high-temperature treatment apparatus according to the present invention.
2 is a schematic diagram of an ultra high pressure enzyme treatment apparatus according to the present invention.
FIG. 3 shows the result of measuring the hydrolysis efficiency of the placenta according to the heat treatment.
FIG. 3 shows the results of measurement of the hydrolysis efficiency and molecular weight of the heat-treated placenta according to the kind of the degrading enzyme.
FIG. 4 shows the result of measuring the hydrolyzed peptide molecular weight by treating heat-treated placenta treated with trypsin, pepsin and chymotrypsin at high pressures of 0.1 MPa and 100 MPa for 1 hour and 4 hours.
FIG. 5 is a result of measuring the hydrolyzed peptide molecular weight by treating heat-treated placenta treated with trypsin, pepsin and chymotrypsin at high pressures of 0.1 MPa, 100 MPa, 200 MPa and 300 MPa for 5 minutes.
FIG. 6 is a graph showing the composition of the hydrolyzed peptide by treating the heat-treated placenta treated with trypsin, pepsin and chymotrypsin at high pressures of 0.1 MPa, 100 MPa, 200 MPa and 300 MPa for 5 minutes.
FIG. 7 shows the hydrolysis efficiency of the hydrolyzed peptide by treating the heat-treated placenta treated with trypsin, pepsin and chymotrypsin at high pressures of 0.1 MPa, 100 MPa, 200 MPa and 300 MPa for 5 minutes.
FIG. 8 is a graph showing the free amino acid content of the hydrolyzed placenta by treating the heat-treated placenta treated with trypsin, pepsin and chymotrypsin at high pressures of 0.1 MPa, 100 MPa, 200 MPa and 300 MPa for 5 minutes.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples. It is to be understood that the scope of the present invention is not limited by these examples in accordance with the gist of the present invention, and it is to be understood by those skilled in the art that the present invention is not limited thereto It will be obvious.
실시예 1 : 돼지 태반 준비Example 1: Preparation of porcine placenta
분만 후 바로 수거하여 동결 보관한 돼지 태반을 삼우축산에서 제공받았다. 상기 동결된 태반을 유수해동 후 혈액 및 태변과 같은 이물질을 제거하고, 약 5 cm 간격으로 절단하여 가성소다를 이용하여 세척한 후 4℃에서 24시간 동안 물에 침지하여 여분의 혈액을 제거하여 동결하였다. 그 다음 동결된 태반을 해동하여 믹서기(KTLSU07053-7002, PHILIPS, Netherlands)를 이용하여 10분 동안 세절하여 돼지 태반을 준비하였다.
After the delivery, pigs were collected from Samwoo Livestock. After freezing the frozen placenta, foreign substances such as blood and meconium were removed, and they were cut at intervals of about 5 cm, washed with caustic soda, and then dipped in water at 4 ° C for 24 hours to remove excess blood. Respectively. The frozen placenta was then thawed and plated for 10 minutes using a blender (KTLSU07053-7002, PHILIPS, Netherlands) to prepare a porcine placenta.
실시예 2 : 태반의 가수분해를 위한 아임계수 조건 확립Example 2: Establishment of subconditioning conditions for hydrolysis of placenta
2-1. 온도에 따른 아임계수의 태반 용해도 측정2-1. Determination of placental solubility of subcritical water by temperature
37.5 MPa의 압력에서 각각 150℃, 170℃ 및 200℃의 온도에서 존재하는 아임계수를 형성하였다. 또한, 상기 실시예 1의 태반을 폴리아마이드 필름으로 포장하였다. 그 다음 자체 제작된 도 1의 아임계수 처리 장치의 챔버에 상기 아임계수 및 상기 폴리아마이드 필름으로 포장된 태반을 넣고 37.5 MPa의 압력 및 150℃, 170℃ 및 200℃의 온도하에서 각각 30분 동안 처리하였다. 그 다음 40℃로 냉각시킨 다음 태반을 꺼내어 1,000 x g로 15분 동안 원심분리하여 용해도를 측정하였다. 대조군으로 상기 실시예 1의 태반을 사용하였다. 그 결과를 도 3에 나타내었다.170 DEG C and 200 DEG C at a pressure of 37.5 MPa, respectively. In addition, the placenta of Example 1 was packed with a polyamide film. Then, the subclaimed coefficient and the placenta packed with the polyamide film were placed in the chamber of the self-produced subcounting processor of Fig. 1, and the resulting mixture was processed for 30 minutes at a pressure of 37.5 MPa and a temperature of 150 DEG C, 170 DEG C and 200 DEG C, Respectively. After cooling to 40 ° C, the placenta was removed and the solubility was measured by centrifugation at 1,000 x g for 15 minutes. The placenta of Example 1 was used as a control. The results are shown in Fig.
도 3에서 보는 바와 같이, 온도가 증가함에 따라 태반의 용해도는 증가하였나, 200℃에서는 급격히 감소하는 것을 확인하였다.
As shown in FIG. 3, as the temperature increased, the solubility of the placenta increased, but it was found to decrease rapidly at 200 ° C.
2-2. 온도에 따른 아임계수의 태반 유리 아미노산 조성 분석2-2. Composition analysis of placenta free amino acid by submergence factor according to temperature
상기 실시예 2-1의 조건으로 아임계수 처리한 태반을 원심분리한 후 상등액을 0.2125 M 인산 나트륨 용액(pH 8.2) 2mL와 0.01% 2,4,6-트리니트로벤젠술폰산(2,4,6-trinitrobenzenesulfonic acid; TNBS) 1mL에 넣은 후 50℃에서 30분 간 가열하였다. 이 후 실온에 방냉하여 온도를 낮춘 후 0.1 M 아황산나트륨 1mL과 반응시켜 420 nm에서 흡광도를 측정하였다. 유리 아미노산 함량의 기준은 L-류신(L-leucine)을 이용하였다. 그 결과를 도 4에 나타내었다.After centrifuging the subcritical placenta under the conditions of Example 2-1, the supernatant was dissolved in 2 mL of 0.2125 M sodium phosphate solution (pH 8.2) and 0.01 mL of 0.01% 2,4,6-trinitrobenzenesulfonic acid (2,4,6- trinitrobenzenesulfonic acid (TNBS), and the mixture was heated at 50 ° C for 30 minutes. After cooling, the mixture was allowed to cool to room temperature, and the mixture was reacted with 1 mL of 0.1 M sodium sulfite and absorbance was measured at 420 nm. L-leucine was used as a standard for free amino acid content. The results are shown in Fig.
도 4에서 보는 바와 같이, 170℃의 아임계수에서 가장 높은 유리 아미노산기 함량을 포함하였으며, 실험 결과에는 나타내지 않았지만 100MPa의 압력 및 170℃의 온도의 아임계수에서 30분 동안 처리한 태반의 유리 아미노산기 함량은 37.5MPa의 압력 및 170℃의 온도의 아임계수에서 30분 동안 처리한 태반의 유리 아미노산기 함량과 유사하였다. 또한, 도 5에서 보는 바와 같이, 온도와 관계없이 아임계수 처리한 태반의 아미노산 조성은 글리신(glycine, Gly), 알라닌(alanin, Ala), 하이드록프롤린(hydroxyproline, Hyp)과 프롤린(proline, Pro)의 비율이 증가하였다.
As shown in Fig. 4, the highest free amino acid group content in the subcondition of 170 DEG C was included, and the free amino acid group of the placenta, which was not shown in the experimental results but was treated for 30 minutes at a sublimation coefficient of 100 MPa and a temperature of 170 DEG C The content was similar to the free amino acid group content of the placenta treated at a pressure of 37.5 MPa and an asymptotic coefficient of 170 캜 for 30 minutes. As shown in FIG. 5, the amino acid composition of the placenta treated with the subconditioned irrespective of temperature was glycine (Gly), alanine (Ala), hydroxyproline (Hyp) and proline ) Was increased.
2-3. 온도에 따른 아임계수의 태반 가수분해 효율 측정2-3. Determination of placental hydrolysis efficiency of subcycle by temperature
상기 실시예 2-1의 조건으로 아임계수 처리한 태반을 겔 투과 크로마토그래피를 이용하여 분자량을 측정하였다. 그 결과를 도 5에 나타내었다.The placenta subjected to the asymmetry treatment under the conditions of Example 2-1 was measured for its molecular weight using gel permeation chromatography. The results are shown in Fig.
도 5에서 보는 바와 같이, 150℃의 아임계수로 처리한 태반은 20.1 KDa의 분자량을 가지는 펩타이드가 주를 이루었으며, 170℃ 및 200℃의 아임계수로 처리한 태반은 1,400 내지 4,270 Da의 분자량을 가지는 펩타이드가 확인되었다.
As shown in FIG. 5, the placenta treated with the subliming factor of 150 ° C was mainly composed of peptides having a molecular weight of 20.1 KDa. The placenta treated with the sublimation coefficients of 170 ° C and 200 ° C had a molecular weight of 1,400 to 4,270 Da Peptides were identified.
2-4. 아임계수 처리에 따른 태반의 용해도 측정2-4. Determination of placental solubility by asymptotic counting
37.5 MPa의 압력 및 170℃의 온도에서 존재하는 아임계수를 형성하였다. 또한, 상기 실시예 1의 태반을 폴리아마이드 필름으로 포장하였다. 그 다음 자체 제작된 도 1의 아임계수 처리 장치의 챔버에 상기 아임계수 및 상기 폴리아마이드 필름으로 포장된 태반을 넣고 37.5 MPa의 압력 및 170℃의 온도하에서 30분 및 60분 동안 처리하였다. 그 다음 40℃로 냉각시킨 다음 태반을 꺼내어 1,000 x g로 15분 동안 원심분리하여 용해도를 측정하였다. 대조군으로 상기 실시예 1의 태반을 사용하였다. 그 결과를 도 6에 나타내었다.The subcoordinates present at a pressure of 37.5 MPa and at a temperature of 170 < 0 > C were established. In addition, the placenta of Example 1 was packed with a polyamide film. Then, the subcounts of the subcount and the polyamide film-containing placenta were placed in the chamber of the self-produced subcount processor of FIG. 1, and treated at a pressure of 37.5 MPa and a temperature of 170 DEG C for 30 minutes and 60 minutes. After cooling to 40 ° C, the placenta was removed and the solubility was measured by centrifugation at 1,000 x g for 15 minutes. The placenta of Example 1 was used as a control. The results are shown in Fig.
도 6에서 보는 바와 같이, 아임계수를 30분 동안 처리하였을 때 용해도는 77%로 가장 높은 값을 나타냈다.
As shown in FIG. 6, the solubility was 77%, which was the highest when the submixture was treated for 30 minutes.
2-5. 아임계수 처리에 따른 태반의 유리 아미노산 함량 측정 2-5. Determination of Free Amino Acid Content of Placenta by Means of Submixing
상기 실시예 2-4의 조건으로 아임계수 처리한 태반을 상기 실시예 2-2와 동일한 방법으로 유리 아미노산 함량 및 조성을 분석하였다. 그 결과를 도 7 및 도 8에 나타내었다.The amount of free amino acid and the composition of the placenta undergo the asymmetry treatment under the conditions of Example 2-4 were analyzed in the same manner as in Example 2-2. The results are shown in Fig. 7 and Fig.
도 7에서 보는 바와 같이, 처리 시간이 증가할수록 유리 아미노산의 함량은 증가하였으며, 도 8에서 보는 바와 같이, 아임계수 처리한 태반의 아미노산 조성은 글리신(glycine, Gly), 알라닌(alanin, Ala), 하이드록프롤린(hydroxyproline, Hyp)과 프롤린(proline, Pro)의 비율이 증가하였다.
As shown in FIG. 7, as the treatment time increased, the content of free amino acid increased. As shown in FIG. 8, the amino acid composition of the placenta treated with the asymmetry was glycine (Gly), alanine (alanin, Ala) The ratio of hydroxyproline (Hyp) to proline (Pro) was increased.
2-6. 아임계수 처리에 따른 태반의 가수분해 효율 측정2-6. Measurement of the hydrolysis efficiency of placenta according to the asymptotic count treatment
상기 실시예 2-4의 조건으로 아임계수 처리한 태반을 겔 투과 크로마토그래피를 이용하여 분자량을 측정하였다. 그 결과를 도 9에 나타내었다.The placenta subjected to the asymmetry treatment under the conditions of Example 2-4 was measured for its molecular weight using gel permeation chromatography. The results are shown in Fig.
도 9에서 보는 바와 같이, 아임계수를 처리하는 시간이 증가할수록 태반의 펩타이드 분자량은 감소하는 것을 확인하였다.As shown in FIG. 9, it was confirmed that the peptide molecular weight of the placenta decreased as the time to process the sub-coagulation increased.
따라서, 본 발명에서는 37.5MPa의 압력 및 170℃의 온도하에서 존재하는 아임계수를 처리하는 경우 태반의 저분자화에 적합하다고 판단하였다.
Therefore, in the present invention, it was judged that the present invention is suitable for the low molecular weight of the placenta when treating the sublingual factors present at a pressure of 37.5 MPa and a temperature of 170 캜.
실시예 3 : 태반의 효소적 가수분해를 위한 최적 조건 확립Example 3: Establishment of optimal conditions for enzymatic hydrolysis of the placenta
3-1. 분해효소 종류에 따른 태반의 가수분해3-1. The hydrolysis of the placenta according to the type of degrading enzyme
상기 실시예 1에서 준비한 돼지 태반을 90℃의 워터베스(water bath, PRECISION water bath, YuYu scientific MFG., Korea)에 60분 동안 열처리 하여 젤라틴화 시켰다. 그 다음 상기 전처리한 돼지 태반에 하기 표 1에 나타낸 특성을 가진 트립신(trypsin, Trypsion solution 10X, sigma-aldrich Co., USA)을 0. 0.25, 12.5, 18.8 및 25 ㎍/g의 농도로, 펩신(pepsin, Pepsin from porcine gastric mucosa, sigma-aldrich Co., USA) 10, 20, 30, 40 unit/mg 및 키모트립신(chymotrypsin, α-chymotrypsin from bovine pancreas, sigma-aldrich Co., USA) 10, 20, 30, 40 unit/mg의 농도로 처리한 후 37℃의 온도가 유지되는 배양기에서 1, 3, 6, 12, 24시간 동안 반응시켰다. 그 다음 상기 태반에 남아 있는 효소의 활성을 불활성화 시킨 후 전기영동 및 겔 투과 크로마토그래피(gel permeation chromatography, YL 9100 HPLC system, 7.8ㅧ3,000mm Ultrahydrogel 120 columns)를 이용하여 가수분해 효율, 펩타이드 생성 및 분자량을 측정하였다. 그 결과를 도 10에 나타내었다.
The porcine placenta prepared in Example 1 was heat treated for 60 minutes in a water bath (PRECISION water bath, YuYu scientific MFG., Korea) at 90 ° C for gelatinization. Then, trypsin (Trypsion solution 10X, Sigma-Aldrich Co., USA) having the characteristics shown in the following Table 1 was added to the pre-treated porcine placenta at a concentration of 0.25, 12.5, 18.8 and 25 ㎍ / 10, 20, 30, 40 unit / mg and chymotrypsin (α-chymotrypsin from bovine pancreas, Sigma-Aldrich Co., USA) 20, 30, 40 unit / mg, and incubated at 37 ℃ for 1, 3, 6, 12, and 24 hours. Then, the enzymes remaining in the placenta were inactivated, and the hydrolysis efficiency, peptide production and the like were measured using gel permeation chromatography (YL 9100 HPLC system, 7.8 ㅧ 3,000 mm Ultrahydrogel 120 columns) The molecular weight was measured. The results are shown in Fig.
도 10에서 보는 바와 같이, 트립신(Trypsin)을 처리한 태반은 농도에 상관없이 배양 1시간만에 모든 펩타이드 밴드가 사라진 것으로 확인되었다. 한편, 펩타이드의 분자량은 배양 3시간까지는 20 kDa 이상의 펩타이드가 확인되었지만, 배양 6시간 이후에는 대부분의 펩타이드 분자량이 20,000 Da 미만의 펩타이드가 확인되었다. 특히, 배양 12시간 이후에 펩타이드 분자량은 대부분이 5,000 Da 이하로 확인되었다.As shown in Fig. 10, it was confirmed that all the peptide bands disappeared in trypsin-treated placenta in 1 hour after culturing regardless of the concentration. On the other hand, peptides having a molecular weight of 20 kDa or more were identified up to 3 hours after culturing, but peptides having a molecular weight of 20,000 Da or less were confirmed after 6 hours of culture. In particular, after 12 hours of culture, the peptide molecular weight was found to be below 5,000 Da in most cases.
펩신(Pepsin)을 처리한 태반은 배양 12시간 이후에 약 20.1 kDa 및 36.5 kDa 크기의 펩타이드를 확인하였다. 한편, 펩신에 의해 가수분해된 태반은 주로 20,000 Da 이상의 펩타이드가 확인되었다. 특히, 배양 24시간에는 분자량이 큰 폭으로 저하된 7,000 Da의 펩타이드들이 확인되었지만, 일부 펩타이드만이 확인되었으며, 펩신의 농도가 감소할수록 펩타이드의 분자량이 증가하는 것을 확인하였다.The placenta treated with pepsin identified peptides approximately 20.1 kDa and 36.5 kDa in size after 12 hours of culture. On the other hand, the placenta hydrolyzed by pepsin mainly identified peptides of 20,000 Da or more. In particular, at 24 hours of culture, 7,000 Da of peptides with a large decrease in molecular weight were identified, but only some peptides were identified, and the molecular weight of the peptides increased as the concentration of pepsin decreased.
키모트립신(Chymotrypsin)을 처리한 태반은 배양 1시간에 키모트립신의 베타-체인(β-chain, ~205 kDa)의 밴드가 확인되지 않았고, 배양 6시간 이후에 키모트립신의 알파-체인(α-chain, ~116 kDa)의 밴드가 확인되지 않았다. 또한, 배양 24시간 이후에는 모든 펩타이드 밴드가 확인되지 않은 것으로 보아 모두 가수분해 된 것으로 판단되었다. 키모트립신을 10 및 20 unit/mg 농도로 처리한 태반은 배양 24시간 이후에도 일부 펩타이드(20~37 kDa) 밴드가 확인되었으나 30 unit/mg 이상의 농도로 처리한 태반은 배양 24시간 이후에 펩타이드 밴드가 확인되지 않았다. 한편, 키모트립신을 처리한 태반은 배양 12시간까지 대부분이 20,000 Da 이상의 분자량을 가지는 것으로 확인되었으며, 배양 24시간에서는 12,600 Da, 1,400 Da 및 626 Da 미만의 저분자 펩타이드를 확인하였다.
The placenta treated with chymotrypsin did not have a band of β-chain (~ 205 kDa) of chymotrypsin at 1 hour after culture, and the alpha-chain of chymotrypsin (α- chain, ~ 116 kDa) were not identified. In addition, after 24 hours of incubation, all peptide bands were not confirmed and all of them were hydrolyzed. The placenta treated with chymotrypsin at a concentration of 10 and 20 unit / mg showed some peptides (20-37 kDa) bands even after 24 hours of culture, but the placenta treated with 30 units / mg or more had a peptide band Not confirmed. On the other hand, the placenta treated with chymotrypsin was confirmed to have a molecular weight of 20,000 Da or more up to 12 hours of culture, and a low molecular peptide having a molecular weight of less than 12,600 Da, 1,400 Da and 626 Da was observed for 24 hours.
3-2. 초고압 처리 시간에 따른 태반의 가수분해 활성 측정3-2. Measurement of hydrolytic activity of placenta according to time of ultrahigh pressure treatment
상기 실시예 1에서 준비한 돼지 태반을 90℃의 워터베스(water bath, PRECISION water bath, YuYu scientific MFG., Korea)에 60분 동안 열처리 하여 젤라틴화 시켰다. 그 다음 상기 전처리한 태반에 트립신 25㎍/g, 펩신 30 unit/mg 및 키모트립신 40 unit/mg를 처리한 후 동결하였다. 그 후 동결된 태반을 20분 동안 유수 해동한 다음 0.1 MPa 및 100MPa의 각각의 압력하에서 자체 제작된 도 1의 초고압 효소처리 장치의 챔버에 넣고 1시간 및 4시간 동안 처리하였다. 그 후 4℃의 온도에서 2시간 동안 배양한 다음 70℃의 온도에서 15분 동안 열처리하여 분해효소를 불활성화시켜 겔 투과 크로마토그래피를 이용하여 분자량을 측정하였다. 그 결과를 도 11에 나타내었다.The porcine placenta prepared in Example 1 was heat treated for 60 minutes in a water bath (PRECISION water bath, YuYu scientific MFG., Korea) at 90 ° C for gelatinization. The pretreated placenta was then treated with
도 11에서 보는 바와 같이, 트립신을 처리하여 가수분해된 태반 펩타이드의 분자량은 압력 및 효소처리 시간이 증가함에 따라 분자량이 감소하기는 하나 대부분 20,000 Da 이상의 분자량을 가지고 있었다. As shown in FIG. 11, the molecular weight of the hydrolyzed placental peptide treated with trypsin was 20,000 Da or more, although the molecular weight decreased with increasing pressure and enzyme treatment time.
펩신을 처리하여 가수분해된 태반 펩타이드의 분자량은 압력 및 효소처리 시간에 따른 효과가 확인되지 않았다. The molecular weight of hydrolyzed placental peptides treated with pepsin was not affected by pressure and time of enzyme treatment.
키모트립신을 처리하여 가수분해된 태반 펩타이드의 분자량은 효소처리 시간이 증가함에 따라 분자량이 감소하나 압력에 따른 분자량의 변화는 관찰되지 않았다.
The hydrolyzed placental peptide treated with chymotrypsin showed a decrease in molecular weight with increasing enzyme treatment time but no change in molecular weight with pressure.
3-3. 초고압력에 따른 태반의 가수분해 활성 측정3-3. Measurement of hydrolytic activity of placenta according to ultrahigh pressure
상기 비교예 1에서 전처리한 태반에 트립신 25㎍/g, 펩신 30 unit/mg 및 키모트립신 40 unit/mg를 처리한 후 동결하였다. 그 후 동결된 태반을 20분 동안 유수해동한 다음 0.1MPa, 100MPa, 200MPa 및 300MPa의 압력하에서 자체 제작된 도 2의 초고압 효소처리 장치의 챔버에 넣고 5분 동안 처리하였다. 그 후 4℃의 온도에서 2시간 동안 배양한 다음 70℃의 온도에서 15분 동안 열처리하여 분해효소를 불활성화시켜 전기영동 및 겔 투과 크로마토그래피를 이용하여 가수분해 및 분자량을 측정하였다. 그 결과를 도 12에 나타내었다.The placenta pretreated in Comparative Example 1 was treated with
도 12에서 보는 바와 같이, 트립신을 처리한 태반은 전기영동 결과 펩타이드 밴드가 확인되지 않았고, 초고압력이 증가함에 따라 효소의 활성이 향상되어 저분자의 펩타이드가 확인되었으나 300MPa의 압력에서는 효소의 활성이 저하되어 고분자의 펩타이드가 확인되었다.As shown in FIG. 12, the placenta treated with trypsin showed no peptide bands as a result of electrophoresis. As the ultrahigh pressure increased, the activity of the enzyme was improved and low-molecular peptides were confirmed. However, at a pressure of 300 MPa, And the peptide of the polymer was confirmed.
펩신을 처리한 태반은 전기영동 결과 고분자 크기의 밴드가 확인되었고, 초고압력이 증가함에 따라 효소 활성 향상으로 인한 태반의 가수분해정도가 증가하여 저분자량을 갖는 펩타이드를 확인하였다. 특히, 200MPa의 압력으로 처리한 태반의 분자량은 모두 20,000 Da 미만을 가지는 것으로 확인되었다. 또한, 펩신 역시 300MPa의 압력에서는 효소의 활성이 저하되어 고분자의 펩타이드가 확인되었다.The placenta treated with pepsin showed a band of high molecular weight as a result of electrophoresis. As the ultrahigh pressure increased, the degree of hydrolysis of the placenta due to the enhancement of enzyme activity was increased to confirm a peptide having a low molecular weight. Especially, it was confirmed that the molecular weight of the placenta treated at a pressure of 200 MPa was less than 20,000 Da. In addition, the activity of the enzyme decreased at the pressure of 300 MPa of pepsin, and the peptide of the polymer was confirmed.
키모트립신을 처리한 태반은 전기영동 결과 고분자의 밴드(119 kDa 및 205 kDa)가 사라지기는 하였으나 55 kDa 미만의 밴드는 확인되었다. 또한, 초고압력이 증가함에 따라 저분자량을 가지는 펩타이드가 증가하였으나 키모트립신 역시 300MPa의 압력에서는 효소의 활성이 저하되어 고분자의 펩타이드가 확인되었다.
The platelets treated with chymotrypsin showed a band of less than 55 kDa although the band of the polymer (119 kDa and 205 kDa) disappeared as a result of electrophoresis. In addition, as the ultrahigh pressure increased, the peptide having a low molecular weight was increased, but the activity of the enzyme was decreased at a pressure of 300 MPa for the chymotrypsin, and the peptide of the polymer was confirmed.
3-4. 초고압력 및 분해효소에 따른 태반의 아미노산 조성 분석3-4. Analysis of Amino Acid Composition of Placenta by Ultra High Pressure and Degradation Enzymes
상기 실시예 3-3에서 초고압력 및 분해효소 종류에 따라 가수분해된 태반을 각각 원심분리한 후 상등액에 6 M HCl 30 mL을 가하여 130℃에서 24시간동안 가수분해하였다. 가수분해 후, 샘플을 증류 및 탈이온화수를 이용하여 100 mL까지 희석하여 DISMIC-13CP 0.45 미크론 실린저 필터(micron syringe filter, Advantec Co., Japan)로 여과하였다. 이동상으로는 20 mM 인산나트륨 용액(pH 7.8)과 45%(v/v) 아세토니트릴/45%(v/v) 메탄올 용액을 사용하였다. 시료의 아미노산 정량 및 정성 분석은 형광검출기(fluorescence detector)를 이용하여 오르토-프탈알데이드(o-phthalaldehyde, OPA) 유도체(emission 450 nm, exitation 340 nm) 및 9- 플루오레닐메틸 클로로포르메이트(9-fluorenylmethyl chloroformate; FMOC) 유도체(emission 305 nm, exitation 266 nm)의 스펙트럼을 분석하였고, 일부 아미노산은 UV 검출기를 이용하여 338nm에서의 흡광도를 측정하여 분석하였다. 이때 표준물질은 Agilent 5061-3330(Agilent Technologies Inc., CA)를 기준으로 사용하였다. 그 다음 가수분해된 태반의 펩타이드를 농축 및 정제하여 수율을 측정 하였다. 그 결과를 도 13 및 도 14에 나타내었다. In Example 3-3, the hydrolyzed placenta was centrifuged according to the ultrahigh pressure and decomposition enzyme, and 30 mL of 6 M HCl was added to the supernatant, followed by hydrolysis at 130 ° C for 24 hours. After hydrolysis, the sample was diluted to 100 mL with distilled and deionized water and filtered through a DISMIC-13CP 0.45 micron syringe filter (Advantec Co., Japan). 20 mM sodium phosphate solution (pH 7.8) and 45% (v / v) acetonitrile / 45% (v / v) methanol solution were used as mobile phases. Amino quantitative and qualitative analysis of the sample in o using a fluorescence detector (fluorescence detector) - phthalic aldehyde Id (o -phthalaldehyde, OPA) derivatives (emission 450 nm, exitation 340 nm ) and 9-fluorenyl methyl chloroformate ( The spectrum of 9-fluorenylmethyl chloroformate (FMOC) derivative (emission 305 nm, exitation 266 nm) was analyzed and some amino acids were analyzed by measuring the absorbance at 338 nm using a UV detector. At this time, the reference material was used based on Agilent 5061-3330 (Agilent Technologies Inc., CA). The hydrolyzed placental peptides were then concentrated and purified to yield. The results are shown in Fig. 13 and Fig.
도 13에서 보는 바와 같이, 분해효소를 처리한 태반의 아미노산 조성은 글리신(glycine, Gly)과 알라닌(alanin, Ala)이 가장 높은 조성비를 보이고, 하이드록프롤린(hydroxyproline, Hyp)과 프롤린(proline, Pro)의 비율은 분해효소에 따라 다른 경향을 보였다. 초고압력에 따른 아미노산 조성은 트립신과 키모트립신은 매우 큰 차이를 보이나 펩신을 처리한 태반의 아미노산 조성은 큰 변화가 나타나지 않았다.As shown in FIG. 13, the amino acid compositions of the placenta treated with the degrading enzyme showed the highest composition ratios of glycine (Gly) and alanine (Alanin, Ala), hydroxyproline (Hyp) and proline Pro) were different according to the enzymes. The composition of amino acids by ultra high pressure showed a great difference between trypsin and chymotrypsin, but the amino acid composition of pepsin - treated placenta did not show any significant change.
한편, 도 14에서 보는 바와 같이, 초고압력이 증가함에 따라 트립신과 펩신을 처리한 태반의 펩타이드 회수율은 감소하는 반면에 키모트립신을 100MPa의 압력으로 처리하였을 때 가장 높은 회수율을 보였다.
On the other hand, as shown in FIG. 14, as the ultrahigh pressure increases, the recovery rate of the placental peptide treated with trypsin and pepsin decreased, whereas the recovery of chymotrypsin at 100 MPa showed the highest recovery.
3-5. 초고압력 및 분해효소 종류에 따른 태반의 유리 아미노산 조성 분석3-5. Analysis of Free Amino Acid Composition of Placenta by Ultra High Pressure and Degradation Enzyme Type
상기 실시예 3-3에서 초고압력 및 분해효소 종류에 따라 가수분해된 태반을 상기 실시예 2-2의 방법과 동일한 방법으로 유리 아미노산 조성을 분석하였다. 그 결과를 도 15에 나타내었다.The free amino acids composition of the placenta hydrolyzed according to the ultrahigh pressure and the type of decomposing enzyme was analyzed in the same manner as in Example 2-2. The results are shown in Fig.
도 15에서 보는 바와 같이, 펩신과 키모트립신을 처리하여 가수분해된 태반은 낮은 가수분해 효율에도 불구하고 트립신에 비하여 높은 유리아미노산이 생성되었고, 이는 초고압력이 증가함에 따라 생성량도 증가하는 것이 확인되었다. 이는 효소적 가수분해가 작용하는 위치의 차이에 기인한 것으로 판단되는데, 구체적으로 트립신은 중쇄 펩타이드 형성에 기여하며, 펩신과 키모트립신은 고분자 펩타이드와 일부 유리 아미노산을 형성하는데 기여하는 것으로 추정된다.As shown in FIG. 15, it was confirmed that the hydrolyzed placenta treated with pepsin and chymotrypsin produced a higher free amino acid than trypsin in spite of its low hydrolysis efficiency, which was increased as the ultrahigh pressure was increased . It is believed that trypsin contributes to the formation of heavy chain peptides, and pepsin and chymotrypsin are thought to contribute to the formation of some free amino acids with polymer peptides.
따라서, 본 발명에서는 트립신을 가수분해효소로 사용하고, 200MPa의 압력으로 단시간에 처리하는 경우 태반의 저분자화에 가장 적합한 것으로 판단하였다.
Therefore, in the present invention, when trypsin is used as a hydrolyzing enzyme and treated at a pressure of 200 MPa for a short time, it was judged to be most suitable for low molecular weight of the placenta.
실시예 4 : 초고압 효소 처리 및 아임계 처리 공정 통합화를 위한 조건 확립Example 4 Establishment Conditions for Integration of Ultra High Pressure Enzyme Treatment and Subcritical Treatment Process
4-1. 초고압 효소처리 후 아임계 처리를 통한 태반의 가수분해물4-1. Hydrolyzate of placenta through sub-critical treatment after ultra high pressure enzyme treatment
상기 실시예 1에서 준비된 돼지의 태반을 90℃의 워터베스(water bath, PRECISION water bath, YuYu scientific MFG., Korea)에 60분 동안 열처리 하여 젤라틴화 시켰다. 그 다음 상기 젤라틴화된 태반에 트립신 25㎍/g을 처리한 후 37℃에서 24시간 동안 반응시켰다. 그 후 상기 효소처리된 태반을 37.5 MPa의 압력 및 170℃의 온도하에서 자체 제작된 도 1의 아임계수 처리 장치의 챔버에 넣고 10분 동안 처리하였다. 그 다음 상기 태반에 남아 있는 트립신의 활성을 불활성화 시킨 후 전기영동 및 겔 투과 크로마토그래피(gel permeation chromatography, YL 9100 HPLC system, 7.8ㅧ3,000mm Ultrahydrogel 120 columns)를 이용하여 가수분해 효율, 펩타이드 생성 및 분자량을 측정하였다. 그 결과를 도 16에 나타내었다.
The porcine placenta prepared in Example 1 was heat-treated for 60 minutes in a water bath (PRECISION water bath, YuYu scientific MFG., Korea) at 90 ° C for gelatinization. Then, the gelatinized placenta was treated with 25 μg / g of trypsin and reacted at 37 ° C. for 24 hours. Then, the enzyme-treated placenta was placed in a chamber of the self-processing apparatus shown in Fig. 1, which was manufactured at a pressure of 37.5 MPa and a temperature of 170 DEG C for 10 minutes. Then, the activity of trypsin remaining in the placenta was inactivated, and then hydrolysis efficiency, peptide production, and the like were measured using electrophoresis and gel permeation chromatography (YL 9100 HPLC system, 7.8 ㅧ 3,000 mm Ultrahydrogel 120 columns) The molecular weight was measured. The results are shown in Fig.
4-2. 아임계 처리 후 초고압 효소처리를 통한 태반의 가수분해물4-2. Hydrolyzate of placenta by ultra high pressure enzyme treatment after subcritical treatment
상기 실시예 1에서 준비된 돼지의 태반을 37.5 MPa의 압력 및 170℃의 온도하에서 자체 제작된 도 1의 아임계 처리 장치의 챔버에 넣고 10분 동안 처리하였다. 그 다음 상기 아임계 장치를 통해 처리된 돼지의 태반에 트립신 25㎍/g을 처리한 후 37℃에서 24시간 동안 반응시켰다. 그 후 상기 태반에 남아 있는 트립신의 활성을 불활성화 시킨 후 전기영동 및 겔 투과 크로마토그래피(gel permeation chromatography, YL 9100 HPLC system, 7.8×3,000mm Ultrahydrogel 120 columns)를 이용하여 가수분해 효율, 펩타이드 생성 및 분자량을 측정하였다. 그 결과를 도 16에 나타내었다.The porcine placenta prepared in Example 1 was placed in the chamber of the subcritical treatment apparatus of Fig. 1, which was manufactured under the pressure of 37.5 MPa and the temperature of 170 DEG C, and was treated for 10 minutes. The placenta of the pigs treated with the subcritical device was then treated with 25 μg / g of trypsin and reacted at 37 ° C. for 24 hours. After that, the activity of trypsin remaining in the placenta was inactivated, and the hydrolysis efficiency, peptide production, and the like were measured using electrophoresis and gel permeation chromatography (YL 9100 HPLC system, 7.8 × 3,000 mm Ultrahydrogel 120 columns) The molecular weight was measured. The results are shown in Fig.
도 16에서 보는 바와 같이, 공정 순서에 상관없이 트립신에 의해 큰 분자량의 펩타이드가 모두 가수분해 되어 겔 상에 밴드가 확인되지 않았다. As shown in FIG. 16, regardless of the order of the steps, all the peptides having a large molecular weight were hydrolyzed by trypsin, and no band was found on the gel.
한편, 실시예 4-1에서 열처리하여 젤리틴화된 태반에 효소 반응 후 아임계 처리를 한 태반은 5,000 Da 미만의 펩타이드가 확인되었고, 실시예 4-2에서 아임계 처리 후 효소 반응시킨 태반은 1,000 Da 이하의 펩타이드가 확인되었다.On the other hand, in the case of the placenta which was heat-treated in Example 4-1 and subjected to enzyme treatment in the jellitinated placenta and subcritical treatment, peptides less than 5,000 Da were identified, and in Example 4-2, Da or less peptides were identified.
따라서, 아임계 처리 후 효소 반응을 통하여 가수분해하는 공정이 효소 반응 후 아임계 처리하는 공정에 비하여 공정이 간단하고, 저분자량의 펩타이드로 가수분해하므로, 태반의 저분자화에 가장 적합한 것으로 판단된다.
Therefore, the hydrolysis process through the enzymatic reaction after the subcritical treatment is simpler than the subcritical process after the enzymatic reaction, and hydrolysis is carried out with a low molecular weight peptide, which is considered to be most suitable for the low molecular weight of the placenta.
1 ; 아임계수 처리 장치
10 ; 공기압축기
20 ; 증압기
30 ; 챔버
31 ; 수용부
32 ; 열선 1
33 ; 열선 2
34 ; 센서
40 ; 온도 조절기
50 ; 저항 가열기
51 ; 전류관
2 ; 초고압 효소처리 장치
100 ; 공기압축기
200 ; 초고압 증압기
210 ; 압력관
220 ; 압력밸브
300 ; 챔버
310 ; 수용부
320 ; 외곽부
330 ; 단열부
340 ; 유입부
350 ; 유출부
400 ; 저온장치
500 ; 센서
600 ; 데이터기록장치One ; A
20; A
31; Receiving
33;
40; A
51; Current tube
2 ; An ultra high pressure
200; An
220;
310; Receiving
330; A
350;
500;
Claims (7)
The placenta is removed, the blood and meconium are removed, and the placenta is subse- quently immersed in an asymptomatic counting solution for 10 to 40 minutes, followed by hydrolysis of the placenta at an ultra-high pressure by adding a degrading enzyme. .
The method according to claim 1, wherein the submerged factor is water present at a pressure of 30 to 40 MPa and a temperature of 150 to 200 캜.
The method according to claim 1, wherein the placenta is a human, a sheep, a cow, a dog, a pig, or a horse placenta.
The method according to claim 1, wherein the degrading enzyme is at least one selected from the group consisting of trypsin, pepsin and chymotrypsin.
The method according to claim 1, wherein the degrading enzyme is added in an amount of 0.001 to 0.01 part by weight based on 100 parts by weight of the placenta.
The method according to claim 1, wherein the ultra high pressure enzyme treatment is performed at a high pressure of 50 to 250 MPa for 1 to 10 minutes.
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2013
- 2013-12-11 KR KR1020130153592A patent/KR101560906B1/en active IP Right Grant
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