KR20150062604A - Composition containing isoliquiritigenin for inflammatory bowl disease - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 이소리퀴리티제닌을 유효성분으로 함유하는 염증성 장질환의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
The present invention relates to a composition for the prophylaxis or treatment of inflammatory bowel disease containing isocyanuric acid as an active ingredient.
염증성 장질환은 장에 발생하는 원인불명의 만성적 염증을 뜻하며, 통상적으로 특발성 염증성 장질환인 궤양성 대장염과 크론병을 지칭한다. 궤양성 대장염은 대장의 점막 또는 점막하층에 국한된 염증으로 원인불명의 만성 염증성 장질환으로 호전과 악화가 반복되는 혈성 설사를 동반한다. 전세계적으로 발병하는 질환으로 최근에는 우리나라를 포함하는 아시아 국가, 개발도상국에도 궤양성 대장염으로 고통받는 환자는 지속적으로 증가추세에 있다. 염증성 장질환의 또 하나의 축인 크론병은 구강에서 항문까지 위장관 전체를 침범할 수 있는 만성 난치성 염증성 장질환으로 체중감소을 수반한다. 발병시 평생 지속되며 유전적 요인과 환경적 요인에 의해 복합적으로 발병하나 그 원인은 명확하지 않다. 크론병 역시 궤양성 대장염과 마찬가지로 최근 우리나를 비롯한 동양권에서의 발병률이 지속적으로 증가추세에 있다. 이처럼 발병 원인이 불분명하나, 만성적인 염증성 장질환의 발병 증가 추세는 사회, 경제적 부담이 되고 있는 추세이다. Inflammatory bowel disease refers to chronic inflammation of the unknown origin occurring in the intestine, and usually refers to ulcerative colitis and Crohn's disease, which are idiopathic inflammatory bowel diseases. Ulcerative colitis is a chronic inflammatory bowel disease of unknown origin due to inflammation localized in the mucosa or submucosa of the large intestine, accompanied by bloody diarrhea which recovers and aggravates. In recent years, Asian and developing countries including Korea have continuously increased the number of patients suffering from ulcerative colitis. Crohn's disease, another axis of inflammatory bowel disease, is a chronic intractable inflammatory bowel disease that can invade the entire gastrointestinal tract from the mouth to the anus, accompanied by weight loss. The onset of the disease is life-long and occurs in combination with genetic and environmental factors, but the cause is unclear. Crohn's disease, like ulcerative colitis, has recently been on the rise in the eastern region, including ours. Although the cause of this disease is unclear, the onset of chronic inflammatory bowel disease is becoming increasingly socially and economically burdensome.
궤양성 대장염과 크론병을 큰 축으로하는 염증성 장질환의 경우 그 병인이 불명확할 뿐만 아니라, 완치할 수 있는 방법도 뚜렷하지 않은 상태이다. 염증성 장질환의 다양한 임상 양상과 합병증에 대하여 여러가지 치료가 시도되고 있으나, 환자에 따른 개인별 치료효과의 차이가 큰 것으로 보고되고 있다. 현재 널리 쓰이는 약물요법으로는 5-아미노살리실레이트 제제, 스테로이드 제제, 면역억제제 등이 단계적으로 사용되고 있다. 설파살라진의 경우, 오랜 기간 동안 염증성 장질환에 사용되었고 스테로이드와 병용하여 사용하기도 하였다. 설파살라진의 치료효과가 5-아미노살리실레이트에서 기인함에 따라 5-아미노살리실레이트 제제가 개발되고 있다. 5-아미노살리실레이트 제제로는 대장세균에 의해 분리되어 대장에서 주로 작용하는 발살라지드(balsalazide), 올살라진(olsalazine), 회장과 대장에 주로 작용하는 지연방출형 제제 아사콜(asacol), 살로팍(salofalk), 5-아미노살리실레이트를 미소과립형태의 지속방출형으로 제조하여 시간의 경과에 따라 소장을 포함한 전 장관에 유리되는 펜타사(Pentasa)등이 있다. 이러한 약물들은 모두 5-아미노살리실레이트의 항염증성 효과에 기인한 것이나, 이 세가지 모두 실제 임상에서는 큰 차이를 보이지 않고, 특히 경구 투여를 하는 과정에서 생기는 약동학적 양상의 차이로 인하여 환자간 약효나 부작용 차이가 큰 것으로 보고되고 있다. 스테로이드 약물의 경우 5-아미노살리실레이트 제제의 치료가 불충분할 경우, 병용으로 사용될 수 있으며 병용시 치료효과는 증가하는 것으로 보고되어 있다. 그러나 염증성 장질환이 만성 질환임을 고려할 때 스테로이드 장기 투여에 따른 부작용을 고려하여야 한다. 특히 회장과 대장 질환인 염증성 장질환에서의 스테로이드 약물의 효과는 통상적인 스테로이드 약물효과대비 우월하지 않아, 병용을 재검토해야 한다는 의견들이 다수 대두되고 있다. 마지막으로 면역억제제가 사용되는 경우가 있는데 초기 부작용에 대한 우려로 사용이 적었으나, 스테로이드 저항성이나 스테로이드 의존성이 있는 염증성 장질환 환자에서는 최근 사용하는 추세이다. 그러나 면역억제제의 겨우 심각한 부작용과 효과를 내기 위해 3개월 이상의 기간이 필요함을 고려할 때, 현재의 약물 요법의 문제를 극복 또는 보완할 수 있는 약물 또는 식품의 개발이 요구된다.Inflammatory bowel disease with ulcerative colitis and Crohn 's disease as a major axis is not only unclear, but also has no clear cure method. Various treatments have been tried for various clinical manifestations and complications of inflammatory bowel disease, but it has been reported that there is a large difference in individual treatment effects according to the patients. Currently, 5-aminosalicylate formulations, steroid preparations, immunosuppressants, etc. are being used in pharmacotherapy. Sulfasalazine has long been used for inflammatory bowel disease and has been used in combination with steroids. Aminosalicylate formulations are being developed as the therapeutic effect of sulfasalazine is due to 5-aminosalicylate. 5-aminosalicylate agents include balsalazide, olsalazine, and asacol, which act primarily in the ileum and large intestine, and are mainly isolated from the large intestine by the colon bacillus. , Salofalk and 5-aminosalicylate are produced in a sustained release form in the form of microgranules, and pentasaccharide, which is liberated in all cancers including the small intestine over time, is available. These drugs are all due to the anti-inflammatory effect of 5-aminosalicylate. However, all of these drugs do not show any significant difference in clinical practice, and in particular, due to the difference in pharmacokinetic profile during oral administration, The difference in side effects is reported to be large. In the case of steroid drugs, when the 5-aminosalicylate agent is inadequately treated, it can be used in combination and it is reported that the therapeutic effect is increased in combination. However, considering the inflammatory bowel disease is a chronic disease, adverse effects of long-term administration of steroids should be considered. In particular, the efficacy of steroid drugs in patients with inflammatory bowel disease, which is a disease of the ileum and colon, is not superior to that of conventional steroid drugs, and there are many opinions that the combination should be reexamined. Finally, immunosuppressants may be used, but they have recently been used in patients with inflammatory bowel disease with steroid resistance or steroid dependence, although the use of these agents has been limited due to concerns about initial side effects. However, considering that only three or more months are needed to achieve the serious side effects and effects of immunosuppressants, development of drugs or foods that can overcome or supplement the current pharmacotherapeutic problems is required.
세계적 시장조사 기관인 Datamonitor의 자료에 따르면 2018년 까지의 염증성 장질환을 타겟으로 하는 의약품 시장 규모를 예상해 보면 미국, 유럽, 아시아권에서 지속적으로 확되될 것으로 예상되며 국내 염증성 장질환의 발생을 빠른 속도로 증가하고 있으나, 이에 대한 명확한 치료 약물은 아직 개발되지 못하고 있는 실정이다.According to data from Datamonitor, a global market research firm, antibiotics market targeting inflammatory bowel disease by 2018 is expected to continue to be confirmed in the US, Europe and Asia, and the incidence of inflammatory bowel disease However, a clear therapeutic drug has not been developed yet.
염증성 장질환의 원인과 치료기전이 명확하지 않고, 만성 질환임을 고려할 때 치료효과 증대와 함께 부작용을 고려하지 않을 수 없다. 이에 천연물 유래 후보물질을 발굴함으로서 부작용에 대한 우려를 줄 일 수 있을 것으로 생각되어 항염증 효과가 있는 천연물 중 감초에서의 항염증 효과를 발견하였고, 이중 감초의 주 성분인 이소리퀴리티제닌의 항염증 효과를 토대로 본 발명을 진행하게 되었다.The etiology and treatment mechanism of inflammatory bowel disease is unclear. Considering chronic diseases, it is necessary to consider side effects with increasing therapeutic effect. Therefore, it is thought that it is possible to reduce the concern about side effects by extracting candidate substances derived from natural materials. Therefore, we found anti-inflammatory effect of licorice among natural products having anti-inflammatory effect. Among them, anti-inflammatory effect of licorice quercitinin, The present invention has been advanced on the basis of the effect.
특히 기존에 1차 약물로 사용되고 있는 5-아미노살리실레이트의 다양한 제형 개발과정을 살펴보면 염증성 장질환의 발생 부위가 식도에서 대장에 이르기까지 광범위한데 경구로 약물을 투여하는 경우, 위와 소장을 거치면서 화학적, 효소적 작용에 의해서 분배 또는 대사되거나, 소장에서 흡수에 의해 대장에 까지 약물이 도달하지 못하는 사례가 빈번하였다. 이를 고려하여 5-아미노살리실레이트의 나노입자형태의 제형을 개발하였고 이 경우 다른 제형에 비하여 대장에 5-아미노살리실레이트의 도달 정도가 일정하고 많았으며, 대장에서의 항염증 효과의 증가로 염증성 장질환에 효과가 있는 것으로 전임상 연구 결과가 발표된바 있다. In particular, the development of various formulations of 5-aminosalicylate, which is currently used as a first-line drug, has a wide range of inflammatory bowel disease sites ranging from the esophagus to the large intestine. When the drug is administered orally, Chemical or enzymatic action, or the drug is unable to reach the large intestine by absorption in the small intestine. Considering this, we developed a nanoparticulate form of 5-amino salicylate. In this case, the reach of 5-aminosalicylate in the large intestine was more constant than the other formulations, and the increase in anti-inflammatory effect in the large intestine Pre-clinical studies have been published that are effective in inflammatory bowel disease.
이러한 지식을 활용하여 특히 항염증 효과가 있는 천연물 유래 물질 중 실제 in vivo에서 대장에의 분포도가 높은 후보 물질을 탐색하였고 그 결과 이소리퀴리티제닌을 설정하게 되었다. 이소리퀴리티제닌은 감초에서 추출하여 순수 분리한 칼콘 구조의 플라보노이드 화합물이다. 이소리퀴리티제닌은 항산화, 항비만, 항응고, 위 보호 등과 같은 효과를 갖는 것으로 알려져 있다.Using this knowledge, we searched for candidates with a high degree of in vivo distribution in the large intestine, especially those derived from natural products with antiinflammatory effects. As a result, they set up quesitizenin. Isorichuritigenin is a flavonoid compound with a chalcone structure that is purely isolated from licorice root. Isocyanuric acid is known to have effects such as antioxidant, anti-obesity, anticoagulation, stomach protection and the like.
상기한 바와 같이, 이소리퀴리티제닌의 다양한 약리 작용과 효과가 알려져 있으나, 염증성 장질환에 대한 예방 또는 치료 효과에 대해서는 알려져 있지 않으며, 이에 대한 연구도 전무한 상태이다.
As described above, although various pharmacological actions and effects of isorquiritigenin are known, the preventive or curative effect on inflammatory bowel disease is not known, and no studies have been conducted on it.
본 발명자들은 염증성 장질환의 예방 또는 치료 효과가 우수한 약물 또는 기능성 식품을 개발하기 위하여 천연물 및 이로부터 분리된 화합물에 대하여 연구하던 중, 이소리퀴리티제닌이 염증성 장질환 동물 모델에서 염증성 장질환 상태의 지표인 체중감소, 결장(colon) 길이 감소, 혈변, 설사의 상태를 호전시키는 효과가 우수하여, 염증성 장질환의 상태가 정상 상태로 회복됨을 확인함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.The present inventors studied natural products and compounds isolated therefrom in order to develop drugs or functional foods having excellent effects for the prevention or treatment of inflammatory bowel disease. It has been found that isorquiritizenin is effective for the treatment of inflammatory bowel disease The inventors have completed the present invention by confirming that the inflammatory bowel disease state is restored to a normal state because the effect of improving the state of weight loss, colon length reduction, stool and diarrhea is excellent.
따라서, 본 발명의 목적은 이소리퀴리티제닌을 유효성분으로 함유하는 염증성 장질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.Accordingly, an object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of inflammatory bowel disease containing isorquiritinin as an active ingredient.
본 발명의 또 다른 목적은 이소리퀴리티제닌을 유효성분으로 함유하는 염증성 장질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
It is still another object of the present invention to provide a food composition for preventing or ameliorating inflammatory bowel disease which contains isocyanuric acid as an active ingredient.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 이소리퀴리티제닌을 유효성분으로 함유하는 염증성 장질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention provides a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of inflammatory bowel disease which comprises isoriculitizenin as an active ingredient.
또한 본 발명은 이소리퀴리티제닌을 유효성분으로 함유하는 염증성 장질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.
The present invention also provides a food composition for preventing or ameliorating inflammatory bowel disease containing isocyanuric acid as an active ingredient.
본 발명의 이소리퀴리티제닌은 염증성 장질환 상태의 지표인 체중감소, 결장(colon) 길이 감소, 혈변, 설사의 상태를 호전시키는 효과가 우수하여, 염증성 장질환의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
The isoriquiritigenin of the present invention is excellent in the effect of improving the condition of the inflammatory bowel disease state such as weight loss, reduction of the colon length, blood stool and diarrhea, and is useful for prevention or treatment of inflammatory bowel disease have.
도 1은 본 발명에 따른 이소리퀴리티제닌을 처리한 각 동물군(CON: 대조군, DSS: 염증성장질환, DSS+5-ASA: 염증성장질환 + 5-아미노살리실레이트 투여, DSS+isoLQ: 염증성장질환+이소리퀴리티제닌 투여)에서 적출한 결장(colon)의 조직검경 결과를 나타낸 도이다.
도 2는 본 발명에 따른 이소리퀴리티제닌을 처리한 상기 도 1의 각 동물군의 결장(colon)에서의 미엘로퍼옥시다제(myeloperoxidase, MPO)의 활성도를 측정한 도이다.
도 3은 본 발명에 따른 이소리퀴리티제닌의 염증 세포 내에서의 ERK 1/2와 p38 MAP-kinase의 인산화 억제효과를 나타낸 도이다.
도 4는 본 발명에 따른 이소리퀴리티제닌의 염증 세포 내에서의 NF-кB의 발현 감소효과를 나타낸 도이다.
도 5는 본 발명에 따른 이소리퀴리티제닌을 처리한 상기 도 1의 각 동물군에서의 체중 변화와 일간 체중 변화의 비율을 나타낸 도이다.
도 6은 본 발명에 따른 이소리퀴리티제닌을 처리한 상기 도 1의 각 동물군에서 결장(colon)의 길이를 특정한 결과를 나타낸 도이다.
도 7은 본 발명에 따른 이소리퀴리티제닌을 처리한 상기 도 1의 각 동물군에서 염증성 장질환 유도 제 7일째 날에 질병 활성도 점수(disease activity index)를 나타낸 도이다.
도 8은 본 발명에 따른 이소리퀴리티제닌을 처리한 상기 도 1의 각 동물군에서 설사 항목의 점수를 측정하여 그 변화를 나타낸 도이다.
도 9는 본 발명에 따른 이소리퀴리티제닌을 처리한 상기 도 1의 각 동물군에서 혈변 항목의 점수를 측정하여 그 변화를 나타낸 도이다.FIG. 1 is a graph showing the effect of the present invention on each animal group (CON: control group, DSS: inflammatory growth disease, DSS + 5-ASA: inflammatory growth disease + 5-aminosalicylate administration, DSS + isoLQ: Inflammatory growth disease + insomnia quercitizenin administration) of the colon.
FIG. 2 is a graph showing the activity of myeloperoxidase (MPO) in the colon of each animal group of FIG. 1 treated with isorquiritigenin according to the present invention. FIG.
FIG. 3 is a graph showing the inhibitory effect of phosphorylation of ERK 1/2 and p38 MAP-kinase on the phosphorylation of isoriculitigenin according to the present invention.
4 is a graph showing the effect of reducing the expression of NF-кB in inflammatory cells of isocyanuric acid according to the present invention.
FIG. 5 is a graph showing the ratio of body weight change and daily body weight change in each animal group of FIG. 1 treated with isoriquiritigenin according to the present invention. FIG.
FIG. 6 is a graph showing the results of specific lengths of colon in each animal group of FIG. 1 treated with isorquiritigenin according to the present invention. FIG.
FIG. 7 is a graph showing the disease activity index on the 7th day of inflammatory bowel disease induction in each animal group of FIG. 1 treated with isoriquiritigenin according to the present invention. FIG.
FIG. 8 is a graph showing changes in the scores of diarrhea items in each animal group of FIG. 1 treated with isoriquiritigenin according to the present invention. FIG.
FIG. 9 is a graph showing changes in the scores of the blood-related items in each animal group of FIG. 1 treated with the isoriquiritigenin according to the present invention. FIG.
본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 이소리퀴리티제닌을 유효성분으로 함유하는 염증성 장질환의 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.The present invention provides a composition for preventing or treating inflammatory bowel disease comprising an isoleucyltigenin represented by the following general formula (1) as an active ingredient.
상기 조성물은 약학적 조성물 또는 식품 조성물을 포함한다.
The composition comprises a pharmaceutical composition or a food composition.
이하 본 발명에 관하여 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.
본 발명의 유효성분인 이소리퀴리티제닌은 통상적인 추출 및 분획방법에 의하여 얻을 수 있고, 또는 통상적인 유기합성 방법으로 합성하거나 시판되는 시약을 구입하여 사용할 수도 있다.The active ingredient of the present invention, isocyanuric acid, can be obtained by conventional extraction and fractionation methods, or synthesized by a conventional organic synthesis method or by purchasing commercially available reagents.
본 발명에서는 하기와 같은 방법으로 수득하였다.In the present invention, it was obtained by the following method.
감초를 음건하여 마쇄한 후, 건조된 감초의 중량의 약 1 내지 20배, 바람직하게는 약 5 내지 15배 분량의 물, 에탄올, 메탄올 등과 같은 C1 내지 C4 의 알콜 또는 약 1:0.1 내지 1:10, 바람직하게는 1:0.2 내지 1:5의 혼합비(Kg/L)를 갖는 이들의 혼합용매로, 실온에서 약 1 내지 24시간, 바람직하게는 2 내지 8시간 동안 열수 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출 또는 초음파 추출 등의 추출방법을 사용하여, 바람직하게는 냉침 추출한 후 감압 농축함으로써 가용 추출물인 감초 조추출물을 수득할 수 있다. 상기 감초 추출물을 극성용매로 순차 분획하고 농축한 후, 실리카겔 컬럼크로마토그래피 및 박층컬럼크로마토그래피를 이용하여 활성성분인 이소리퀴리티제닌을 분리할 수 있다.After the licorice is crushed and ground, it is mixed with about 1 to 20 times, preferably about 5 to 15 times the weight of the dried licorice, water, a C 1 to C 4 alcohol such as ethanol, methanol or the like, or about 1: (Kg / L) of 1: 10, preferably 1: 0.2 to 1: 5, at a room temperature for about 1 to 24 hours, preferably for 2 to 8 hours, , Reflux cooling extraction, ultrasonic extraction, or the like, preferably by cold extraction and concentration under reduced pressure, thereby obtaining a licorice extract which is a soluble extract. The licorice extract may be sequentially fractionated with a polar solvent and concentrated, followed by silica gel column chromatography and thin layer column chromatography to isolate the active ingredient, isocyanuric acid.
본 발명의 이소리퀴리티제닌은 생체 내 결장(colon) 조직에서 미엘로퍼옥시다제(myeloperoxidase, MPO)의 활성도를 감소시키고, MAP-kinase의 활성화를 억제하며, NF-кB의 발현을 억제하는 등의 항염증 효능으로 염증성 장질환의 증상인 체중감소, 결장(colon) 길이 감소, 혈변, 설사의 상태를 호전시키는 효과가 우수하여, 염증성 장질환의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.The isoriquiritigenin of the present invention reduces the activity of myeloperoxidase (MPO) in the in vivo colon tissue, inhibits the activation of MAP-kinase, inhibits the expression of NF-кB The anti-inflammatory effect is excellent in the effect of improving the condition of inflammatory bowel disease such as weight loss, reduction of colon length, stool and diarrhea, and thus it can be effectively used for prevention or treatment of inflammatory bowel disease.
상기 염증성 장질환은 궤양성 대장염과 크론병 등을 포함하나, 이에 한정하지 않는다.The inflammatory bowel disease includes, but is not limited to, ulcerative colitis and Crohn's disease.
본 발명의 조성물은 이소리퀴리티제닌과 함께 염증성 장질환에 대하여 예방 또는 치료의 효과를 갖는 공지의 유효성분을 1종 이상 더 함유할 수 있다.The composition of the present invention may contain one or more known active ingredients having an effect of preventing or treating inflammatory bowel disease together with isocyanuric acid.
본 발명의 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 또한, 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 당해 기술 분야에 알려진 적합한 제제는 문헌 (Remington's Pharmaceutical Science, 최근, Mack Publishing Company, Easton PA)에 개시되어 있는 것을 사용하는 것이 바람직 하다. 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 소르비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로 오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시 벤조에이트, 프로 필히드록시 벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등이 있다. 상기 조성물을 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해 제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제 는 상기 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트 (calcium carbonate), 수크로오스, 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경 구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜 (propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔 (witepsol), 마크로골, 트윈 (tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.The compositions of the present invention may further comprise suitable carriers, excipients and diluents conventionally used in the manufacture of pharmaceutical compositions. In addition, it can be formulated in the form of powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, oral formulations such as syrups and aerosols, external preparations, suppositories and sterilized injection solutions according to a conventional method. Suitable formulations known in the art are preferably those as disclosed in Remington ' s Pharmaceutical Science, recently, Mack Publishing Company, Easton PA. Examples of carriers, excipients and diluents which may be included include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, Microcrystalline cellulose, polyvinylpyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate, and mineral oil. When the composition is formulated, it is prepared using a diluent or excipient such as a filler, an extender, a binder, a wetting agent, a disintegrant, or a surfactant, which is usually used. Solid formulations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules and the like, which may contain at least one excipient such as starch, calcium carbonate, sucrose, lactose, Gelatin and the like. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate and talc may also be used. Liquid preparations for oral administration include suspensions, solutions, emulsions, and syrups. In addition to water and liquid paraffin, simple diluents commonly used, various excipients such as wetting agents, sweeteners, fragrances and preservatives have. Formulations for parenteral administration include sterilized aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, freeze-dried preparations, and suppositories. Examples of the suspending agent include propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, injectable ester such as ethyl oleate, and the like. Examples of the suppository base include witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin, glycerogelatin and the like.
본 발명에서 사용되는 용어 "투여"는 임의의 적절한 방법으로 개체에게 소정의 본 발명의 조성물을 제공하는 것을 의미한다.The term "administering" as used herein is meant to provide any desired composition of the invention to a subject in any suitable manner.
본 발명의 약학적 조성물의 바람직한 투여량은 개체의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 이소리퀴리티제닌은 1일 0.1 mg/kg 내지 100 mg/kg의 양으로 투여할 수 있으며, 1일 1회 또는 수 회 나누어 투여할 수 있다.The preferred dosage of the pharmaceutical composition of the present invention varies depending on the condition and the weight of the individual, the degree of disease, the type of drug, the route of administration and the period of time, but can be appropriately selected by those skilled in the art. For the desired effect, the isoriquiritigenin of the present invention may be administered in an amount of 0.1 mg / kg to 100 mg / kg per day, and may be administered once or several times a day.
본 발명의 약학적 조성물은 개체에서 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관 내 주사에 의해 투여될 수 있다.The pharmaceutical composition of the present invention may be administered in various ways in an individual. All modes of administration may be expected, for example, by oral, rectal or intravenous, intramuscular, subcutaneous, intra-uterine dural or intracerebral injection.
본 발명의 조성물은 염증성 장질환의 예방 및 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.The composition of the present invention can be used alone or in combination with methods using surgery, radiation therapy, hormone therapy, chemotherapy, and biological response modifiers for the prevention and treatment of inflammatory bowel disease.
본 발명에서, "건강기능식품"이란, 질병의 예방 및 개선, 생체방어, 면역, 병후의 회복, 노화 억제 등 생체조절 기능을 가지는 식품을 말하는 것으로, 장기적으로 복용하였을 때 인체에 무해하여야 한다.In the present invention, the term "health functional food" refers to a food having a biological control function such as prevention and improvement of disease, bio-defense, immunity, recovery after disease and aging inhibition.
본 발명의 조성물은 염증성 장질환의 예방 또는 개선을 목적으로 건강기능식품에 첨가될 수 있다. 본 발명의 이소리퀴리티제닌을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 이소리퀴리티제닌을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효성분의 혼합 양은 사용 목적 (예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조 시에 본 발명의 이소리퀴리티제닌은 원료에 대하 여 15 중량% 이하, 바람직하게는 10 중량% 이하의 양으로 첨가된다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우 에는 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효 성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.The composition of the present invention may be added to a health functional food for the purpose of preventing or improving inflammatory bowel disease. When the isoriquiritigenin of the present invention is used as a food additive, the isomericuritizenin can be used as it is or can be used together with other food or food ingredients, and can be suitably used according to a conventional method. The amount of the active ingredient to be mixed can be suitably determined according to the intended use (prevention, health or therapeutic treatment). Generally, the isocyanuric acid of the present invention is added to the raw material in an amount of not more than 15% by weight, preferably not more than 10% by weight in the production of food or beverage. However, in the case of long-term intake for the purpose of health and hygiene or for the purpose of controlling health, the amount may be less than the above range, and since there is no problem in terms of safety, the active ingredient may be used in an amount exceeding the above range.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라 면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 수프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강 식품을 모두 포함한다.There is no particular limitation on the kind of the food. Examples of foods to which the above substances can be added include meat, sausage, bread, chocolate, candy, snacks, confectionery, pizza, rice noodles, other noodles, gums, dairy products including ice cream, various soups, , An alcoholic beverage and a vitamin complex, and includes all the health foods in a conventional sense.
본 발명의 건강음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 포함할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토오스, 수크로오스와 같은 디사카라이드 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 천연 감미제나 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100ml 당 일반적으로 약 0.01 내지 10g, 바람직하게는 약 0.01 내지 0.1g 이다. The health beverage composition of the present invention may contain various flavors or natural carbohydrates as an additional ingredient such as ordinary beverages. The above-mentioned natural carbohydrates may be monosaccharides such as glucose and fructose, disaccharides such as maltose and sucrose, natural sweeteners such as dextrin and cyclodextrin, synthetic sweeteners such as saccharin and aspartame, and the like. The ratio of the natural carbohydrate is generally about 0.01 to 10 g, preferably about 0.01 to 0.1 g per 100 ml of the composition of the present invention.
상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 포함할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일주스, 과일 주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 포함할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0.01 내지 0.1 중량부의 범위에서 선택되 는 것이 일반적이다.In addition to the above, the composition of the present invention may further contain various nutrients, vitamins, electrolytes, flavors, colorants, pectic acid and salts thereof, alginic acid and salts thereof, organic acids, protective colloid thickeners, pH adjusters, stabilizers, preservatives, glycerin, A carbonating agent used in a carbonated beverage, and the like. In addition, the composition of the present invention may comprise flesh for the production of natural fruit juices, fruit juice drinks and vegetable drinks. These components may be used independently or in combination. Although the ratio of these additives is not critical, it is generally selected in the range of 0.01 to 0.1 parts by weight per 100 parts by weight of the composition of the present invention.
이하 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예 및 제제예를 제시한다. 그러나 하기 실시예, 실험예 및 제제예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 실시예, 실험예 및 제제예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
Hereinafter, preferred embodiments and examples of the present invention will be described in order to facilitate understanding of the present invention. However, the following examples, experimental examples and preparation examples are provided only for the purpose of easier understanding of the present invention, and the present invention is not limited by the examples, experimental examples and preparation examples.
실시예 1. 본 발명의 이소리퀴리티제닌을 처리한 염증성 장질환이 유도된 결장조직의 조직검경 결과Example 1: Examination of tissue of inflammatory bowel disease-induced colon tissue treated with isoriquiritigenin of the present invention
1. 실험 동물의 준비1. Preparation of experimental animals
수컷 ICR 마우스를 오리엔트 바이오사(Orient Bio. Animal Inc. Seoul, Republic of Korea)로부터 구입하여 일주일간 안정화 기간을 거친 뒤, 3그룹으로 나누었다. 이후 염증성 장질환 유도과정에서 이소리퀴리티제닌 전처리 효과가 미치는 영향을 알아보기 위하여, 상기 수컷 마우스 3그룹의 각각에 대하여 본 발명의 이소리퀴리티제닌 100mg/Kg, 기존의 항염증 유효 성분인 5-아미노살리실레이트 30mg/Kg, 유효성분을 포함하지 않은 용매를 3일간 경구투여하여 전처리하였다. Male ICR mice were purchased from Orient Bio (Animal Inc. Seoul, Republic of Korea), and after stabilization for one week, they were divided into three groups. In order to investigate the effect of pretreatment with isocyanuric acid in the induction of inflammatory bowel disease, 100 mg / Kg of the islet quercitizenin of the present invention and 5 mg of 5- 30 mg / Kg of aminosalicylate, and a solvent not containing the active ingredient were orally administered orally for 3 days.
상기와 같이 준비된 마우스에 염증성 장질환을 유도하기 위하여, DSS (Dextran Sodium Sulfate)를 식용수에 4%의 농도로 용해시킨 후, 이 용액을 정상식이와 함께 준비된 마우스에 공급하였다. 실험의 대조군을 준비하기 위하여, 유효성분을 포함하지 않은 용매를 3일간 경구투여하여 전처리한 그룹의 일부 마우스들에게는 DSS에 의한 염증성 장질환을 유도하지 않았다. To induce inflammatory bowel disease in the mice prepared above, DSS (Dextran Sodium Sulfate) was dissolved in drinking water at a concentration of 4%, and the solution was supplied to a mouse prepared with a normal diet. In order to prepare a control group for the experiment, some mice in the group pretreated with the active ingredient-free solvent for 3 days did not induce DSS-induced inflammatory bowel disease.
위와 같이 실험 동물을 4그룹(CON: 대조군, DSS: 염증성장질환, DSS+5-ASA: 염증성장질환 + 5-아미노살리실레이트 투여, DSS+isoLQ: 염증성장질환+이소리퀴리티제닌 투여)으로 나누어, DSS를 투여하기 시작한 날을 1일로 하여 7일 동안 체중변화, 혈변, 설사의 상태를 관찰하였고, 7일째 되는 날 결장(colon)을 적출하여 하기의 실험들을 수행하였다.The experimental animals were divided into four groups (CON: control group, DSS: inflammatory growth disease, DSS + 5-ASA: inflammatory growth disease + 5-aminosalicylate administration, DSS + isoLQ: inflammatory growth disease plus ictericulitizenin administration) , And the body weight change, blood stain and diarrhea status were observed for 7 days on the day when DSS was started for 1 day. On the 7th day, the colon was removed and the following experiments were conducted.
2.염증성 장질환이 유도된 결장조직의 조직검경 결과2. Histopathological findings of inflammatory bowel disease-induced colon tissue
본 발명의 이소리퀴리티제닌의 염증성 장질환이 유도된 결장(colon) 조직에서의 항염증 효과를 확인하기 위하여 조직검경을 수행하였다.Histological examination was performed to confirm the antiinflammatory effect of colonic tissue of inflammatory bowel disease induced by isoriquiritigenin of the present invention.
구체적으로는, 상기 1.에서 적출하여 준비한 결장(colon) 일부를 잘라 슬라이싱하고 4% 포르말린에 고정시킨 후, H&M (Hematoxylin and Eosin) 염색을 수행하였다. 이의 결과를 도 1에 나타내었다.Specifically, a portion of the colon prepared in Section 1 above was cut and sliced and fixed in 4% formalin, followed by H & M (Hematoxylin and Eosin) staining. The results are shown in Fig.
도 1에 나타낸 바와 같이, 염증성 장질환을 유도하지 않은 동물군(CON)의 결장(colon) 조직은 조직학적 변화가 없는 건강한 점막을 확인할 수 있었고, DSS로 염증성 장질환을 유도한 동물군(DSS)에서는 결장(colon) 조직 상피 세포 구조의 붕괴와 점막하조직의 부종을 확인할 수 있었으며, 염증성 장질환을 유도하며 5-아미노살리실레이트를 투여한 군(DSS+5-ASA)에서는 점막 조직의 붕과는 감소하였으나 점막고유층(lamina propria mucosae)의 부종과 소낭선(crypt)의 손실이 확인되었다. 반면에, 염증성 장질환을 유도하며 본 발명의 이소리퀴리티제닌을 투여한 군 (DSS+isoLQ)에서는 조직학적 병변과 소낭선(crypt)의 손실 및 만성 염증의 정도가 DSS 군에 비해 감소하였음을 확인할 수 있었다.As shown in Fig. 1, the colon tissue of the animal group (CON) that did not induce inflammatory bowel disease was able to identify healthy mucous membranes with no histological changes, and animals with inflammatory bowel disease induced DSS ) Showed collapse of the colon tissue epithelium and edema of the submucosa. In the group treated with 5-aminosalicylate (DSS + 5-ASA) inducing inflammatory bowel disease, And lamina propria mucosae edema and loss of crypts were observed. On the other hand, the degree of histological lesion, loss of crypts and chronic inflammation in the group of DSS + isoLQ, which induces inflammatory bowel disease and was administered with the isocyanuric acid of the present invention, I could confirm.
따라서, 본 발명의 이소리퀴리티제닌이 장 상피세포의 조직병리학적 변화를 감소시킴으로써, 염증성 장질환에 있어 항염증 효과가 우수함을 알 수 있다.
Therefore, it can be seen that the isoriquiritigenin of the present invention is excellent in anti-inflammatory effect in inflammatory bowel disease by reducing histopathologic changes of intestinal epithelial cells.
실시예 2. 본 발명의 이소리퀴리티제닌의 미엘로퍼옥시다제(MPO)의 활성 억제효과 측정Example 2 Measurement of the Inhibitory Effect of Isolicillitigenin on the Activity of Myeloperoxidase (MPO) of the Present Invention
본 발명의 이소리퀴리티제닌의 항염증 효과를 확인하기 위하여 미엘로퍼옥시다제(MPO)의 활성도를 측정하였다. 일반적으로 DSS는 장 상피세포 구조를 변화시킴으로 인해 직결장 점막 내로 여러 항원들의 침입을 유도하여 대장염을 유도할 수 있다. 이때 여러 백혈구 세포(leukocyte)들이 이 항원을 치료하기 위해 대장염부위로 이동하여 침윤되는데, 이러한 백혈구 세포중 호중성 백혈구(neutriphil)는 대장염증 부위에 침윤 후 MPO를 분비하는 것으로 알려져 있다. 따라서 염증의 정도가 심할수록 MPO의 분비가 증가되어 그 활성도가 증가하게 되므로, 본 발명의 이소리퀴리티제닌의 항염증 효과를 확인하기 위하여 MPO 활성도를 측정하였다. The activity of myeloperoxidase (MPO) was measured in order to confirm the anti-inflammatory effect of the isocyanuric acid of the present invention. In general, DSS can induce colitis by inducing the invasion of several antigens into the intestinal mucosa by changing the epithelial cell structure. Several leukocyte cells migrate to the colitis site to treat the antigen. Neutrophil neutrophils among these leukocyte cells are known to secrete MPO after infiltration into the colonic inflammatory site. Therefore, as the degree of inflammation increases, the secretion of MPO increases and the activity thereof increases. Therefore, MPO activity was measured in order to confirm the anti-inflammatory effect of the isocyanuric acid of the present invention.
구체적으로, 공지된 실험방법(Quantitative assay for acute intestinal inflammation based on myeloperoxidase activity. Assessment of inflammation in rat and hamster models, Gastroenterology, 1984 Dec;87(6):1344-50, Krawisz JE, Sharon P, Stenson WF.)을 응용하여 실험을 수행하였다. MPO 활성도를 분광광도법(Spectrophotometry)으로 측정하기 위하여 상기의 결장 세포분쇄액을 TMB 기질시약과 반응시킨 후, 분광광도계를 이용하여 460nm에서 흡광도를 측정하였다. MPO 활성 1unit는 25℃에서 1분간 물에서 과산화수소 1μM이 환원되는 수치를 의미하며 이것을 대장조직의 무게로 환산하여 계산하였다. 이의 결과를 도 2에 나타내었다.Specifically, a known experimental method (acute intestinal inflammation based on myeloperoxidase activity, assessment of inflammation in rat and hamster models, Gastroenterology, 1984 Dec; 87 (6): 1344-50, Krawisz JE, Sharon P, Stenson WF ) Were applied to the experiment. In order to measure MPO activity by spectrophotometry, the above-described colonic lysate was reacted with TMB substrate reagent, and absorbance was measured at 460 nm using a spectrophotometer. 1 unit of MPO activity means the reduction of 1 μM of hydrogen peroxide in water for 1 minute at 25 ° C. This was calculated by converting the weight of the colon tissue. The results are shown in Fig.
도 2에 나타낸 바와 같이, 유효성분의 투여 없이 DSS로 염증성 장질환을 유도한 동물군에서는 MPO 활성도가 대조군인 정상 동물군에 비해 약 6배 증가하여 호중구와 같은 염증세포의 침윤이 증가하였으나, 5-아미노살리실레이트와 본 발명의 이소리퀴리티제닌을 투여한 군에서는 DSS 군과 비교하여 MPO 활성도가 각 48.6%, 71% 감소하였음을 확인하였다. As shown in FIG. 2, MPO activity was increased about 6-fold in the animal group inducing inflammatory bowel disease by DSS without the administration of the active ingredient, compared to the control group, and the infiltration of inflammatory cells such as neutrophils was increased -Aminosalicylate and the iscrychitienin of the present invention showed 48.6% and 71% reduction in MPO activity compared to the DSS group, respectively.
따라서, 본 발명의 이소리퀴리티제닌이 염증 정도의 지표가 되는 MPO의 활성도를 억제함을 통해, 염증성 장질환에 있어 항염증 효과가 우수함을 알 수 있다.
Thus, it can be seen that the isoriquiritigenin of the present invention has an excellent anti-inflammatory effect in inflammatory bowel disease through inhibiting the activity of MPO which is an index of inflammation degree.
실시예 3. 본 발명의 이소리퀴리티제닌의 MAPKs의 인산화 억제 효과Example 3 Inhibition of Phosphorylation of MAPKs of Isoriculitigenin of the Present Invention
본 발명의 이소리퀴리티제닌의 MAPKs(Mitogen-activated rotein kinases)의 인산화 억제효과를 확인하기 위하여,웨스턴 블롯 분석(Western blot analysis)을 수행하여 단백질 발현 정도를 측정하였다.In order to confirm the inhibitory effect of phosphorylation of mitogen-activated rotein kinases (MAPKs) of isorquiritigenin of the present invention, the degree of protein expression was measured by Western blot analysis.
구체적으로, 상기 실험예 1.의 1.에서 준비한 각 동물군의 결장 조직으로부터 채취한 세포로부터 세포내 단백질을 BIO-RAPID 단백질 분석 시약으로 제조사의 권장 사용법에 따라 정량하였다. 그후 약 20-30μg 의 총단백질을 2×샘플완충액(sample buffer; 20% glycerol, 4% SDS, 10% 2-ME, 0.05% bromophenol blue, and 1.25 M Tris [pH 6.8])와 1:1로 섞은 후, 8% 혹은 15% SDS-PAGE 젤에 로딩(loading)하여 150V로 90분 동안 전기영동시켜 분리하였다. 분리된 단백질을 Bio-Rad사의 semidry transfer system을 사용하여 제조사의 권장사용방법에 따라 ImmunoBlot 폴리비닐리덴 디플루오라이드 막(polyvinylidene difluoride membrane, Bio-Rad) 에 전이시킨 후, 단백질이 전이된 상기의 막을 5%의 밀크가 첨가된 0.1% TBS-T(Tris-buffered saline with 0.1% Tween 20)에서 1차 항체(p-ERK1/2, p-p38, p-AKT, β-actin 항체, 모두 Cell Signaling Technology로부터 구입, 1:50-1:1000 으로 희석)와 하룻밤 동안 반응시켰다. 이를 0.1% TBS-T로 세 번 세척하고, 이차 항체인 anti-IgG가 결합된 HRP 항체(1:2000-1:20,000)와 한 시간 동안 반응시킨 후, 다시 0.1% TBS-T로 세 번 세척한 다음, ECL Plus (Amersham Biosciences, Piscataway, NJ)를 이용하여 밴드를 x-ray 필름에 감광시켰다. 그 결과를 도 3에 나타내었다.Specifically, intracellular proteins were quantitated from BIO-RAPID protein assay reagents according to the manufacturer's recommended usage from cells collected from the colon tissues of each animal group prepared in Experimental Example 1. 1. above. About 20-30 μg of total protein is then diluted 1: 1 with 2 × sample buffer (20% glycerol, 4% SDS, 10% 2-ME, 0.05% bromophenol blue, and 1.25 M Tris pH 6.8) And then loaded on an 8% or 15% SDS-PAGE gel and separated by electrophoresis at 150 V for 90 minutes. The separated proteins were transferred to ImmunoBlot polyvinylidene difluoride membrane (Bio-Rad) according to the manufacturer's recommended use method using Semidry transfer system of Bio-Rad, (P-ERK1 / 2, p-p38, p-AKT, β-actin antibody, all cell signaling) in 0.1% TBS-T (Tris-buffered saline with 0.1% Tween 20) Technology, diluted 1: 50-1: 1000) overnight. The cells were washed three times with 0.1% TBS-T and reacted with anti-IgG-conjugated HRP antibody (1: 2000-1: 20,000) for one hour and then washed three times with 0.1% TBS-T The band was then sensitized to x-ray film using ECL Plus (Amersham Biosciences, Piscataway, NJ). The results are shown in Fig.
도 3에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 이소리퀴리티제닌을 처리한 동물군의 p-ERK1/2 와 p-P38의 밴드의 강도가 DSS로 염증성 장질환이 유도된 대조군의 밴드보다 감소하였으므로, 본 발명의 이소리퀴리티제닌이 ERK1/2 와 P38의 인산화를 억제하였음을 확인하였다. ERK1/2 와 P38의 신호전달 경로는 염증반응에 관여하고 있으므로 이들의 활성화가 억제되는 것은 염증반응의 억제를 의미한다.As shown in Fig. 3, since the intensity of the band of p-ERK1 / 2 and p-P38 of the animal group treated with isorquiritigenin of the present invention was lower than that of the control group in which inflammatory bowel disease was induced by DSS, It was confirmed that the inventive isoleriquiritigenin inhibited phosphorylation of ERK1 / 2 and P38. Since the signaling pathways of ERK1 / 2 and P38 are involved in the inflammatory response, their inhibition of activation implies inhibition of the inflammatory response.
따라서, 본 발명의 이소리퀴리티제닌은 DSS로 염증성 장질환이 유도된 결장 조직에서 ERK1/2 와 p38의 활성화를 억제하여, 염증성 장질환에 있어 항염증 효과가 우수함을 확인하였다.
Thus, the inventive isoliquiritigenin inhibits the activation of ERK1 / 2 and p38 in colon tissues induced by inflammatory bowel disease by DSS, thus confirming the excellent anti-inflammatory effect in inflammatory bowel disease.
실시예 4. 본 발명의 이소리퀴리티제닌의 NF-кB의 발현 억제 효과Example 4 Inhibitory Effect of Isocyanichuritigenin on Expression of NF-кB of the Present Invention
본 발명의 이소리퀴리티제닌의 NF-кB의 발현 억제 효과를 확인하기 위하여,웨스턴 블롯 분석(Western blot analysis)을 수행하여 단백질 발현 정도를 측정하였다.In order to confirm the inhibitory effect of the isoriquiritigenin of the present invention on the expression of NF-кB, the degree of protein expression was measured by performing Western blot analysis.
구체적으로는, 상기 실험예 3.과 동일하게 웨스턴 블롯 분석을 수행하였으며, 단지 1차 항체로 NF-кB와 IкBα의 항체를 이용하였다. 그 결과를 도 4에 나타내었다.Specifically, Western blot analysis was performed in the same manner as in Experimental Example 3, except that NF-кB and IкBα antibodies were used as primary antibodies. The results are shown in Fig.
도 4에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 이소리퀴리티제닌을 처리한 동물군의 NF-кB(p65)의 밴드의 강도가 DSS로 염증성 장질환이 유도된 대조군의 밴드보다 감소하였으므로, 본 발명의 이소리퀴리티제닌이 NF-кB(p65)의 발현을 억제하였음을 확인하였다. NF-кB는 염증매개전구물질이므로 NF-кB의 발현이 억제되는 것은 염증반응의 억제를 의미한다.As shown in FIG. 4, since the band intensity of NF-кB (p65) in the animal group treated with isorquiritigenin of the present invention was lower than that of the control group in which inflammatory bowel disease was induced by DSS, It was confirmed that quiritigenin inhibited the expression of NF-кB (p65). Since NF-кB is an inflammation-mediated precursor, inhibition of NF-кB expression implies inhibition of the inflammatory response.
따라서, 본 발명의 이소리퀴리티제닌은 DSS로 염증성 장질환이 유도된 결장 조직에서 NF-кB의 발현을 억제하여, 염증성 장질환에 있어 항염증 효과가 우수함을 확인하였다.
Therefore, it was confirmed that the isoriquiritigenin of the present invention inhibits the expression of NF-кB in colon tissues in which inflammatory bowel disease is induced by DSS, and thus has excellent anti-inflammatory effect in inflammatory bowel disease.
실시예 5. 본 발명의 이소리퀴리티제닌의 염증성 장질환의 치료 효과Example 5: Therapeutic effect of inflammatory bowel disease of isoriculiidinin of the present invention
본 발명의 이소리퀴리티제닌의 염증성 장질환의 치료 효과를 확인하기 위하여, 상기 실시예 1.의 1.과 같이 실험 동물을 4그룹(CON: 대조군, DSS: 염증성장질환, DSS+5-ASA: 염증성장질환 + 5-아미노살리실레이트 투여, DSS+isoLQ: 염증성장질환+아이소리퀴리티제닌 투여)으로 나누어, DSS를 투여하기 시작한 날을 1일로 하여 7일 동안 체중변화, 혈변, 설사의 상태를 관찰하였고, 7일째 되는 날 결장(colon)을 적출하여 결장(colon)의 길이를 측정하였다. 그 결과를 도 5 내지 도 9에 나타내었다.In order to confirm the therapeutic effect of the isoriquiritigenin of the present invention on inflammatory bowel disease, experimental animals were divided into 4 groups (CON: control group, DSS: inflammation growth disease, DSS + 5-ASA : Inflammatory growth disease + 5-aminosalicylate administration, DSS + isoLQ: Inflammatory growth disease + eye sickle titinenine administration) And on the 7th day, the colon was removed and the length of the colon was measured. The results are shown in Figs. 5 to 9. Fig.
도 5에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 이소리퀴리티제닌을 처리한 동물군의 체중감소는 없었으나, DSS로 염증성 장질환이 유도된 DSS군에서는 체중 감소가 현저함을 확인할 수 있었고, 도 6에서는, 본 발명의 이소리퀴리티제닌을 처리한 동물군에서 결장(colon)의 길이 감소가 DSS군에 비하여 약화되었음을 확인할 수 있었다. 도 7에서는 염증성 장질환 유도 7일째에 각군에서 체중변화, 혈변, 설사의 세 가지 항목의 점수를 측정하여 그 합을 나타낸 염증성 장질환의 질병 활성도의 점수를 나타내었는바, 이를 통해 본 발명의 이소리퀴리티제닌의 염증성 장질환의 질병 활성도 점수가 DSS군에 비해 현저히 낮아졌음을 확인하였다. 또한 도 8에서는 염증성 장질환의 증상 중 설사 항목의 질병 점수가 DSS군에 비하여 감소하였고, 도 9에서는 혈변 항목의 질병 점수가 DSS군에 비하여 감소하였음을 확인하였다. As shown in Fig. 5, there was no weight loss in the animal group treated with the isoriquiritigenin of the present invention, but it was confirmed that weight loss was remarkable in the DSS group in which inflammatory bowel disease was induced by DSS, , It was confirmed that the decrease in the length of the colon in the animal group treated with the isoriquiritigenin of the present invention was attenuated as compared with that of the DSS group. In FIG. 7, the score of disease activity of inflammatory bowel disease showing the sum of weight change, blood loss and diarrhea in each group on the 7th day after induction of inflammatory bowel disease was shown, And the disease activity score of inflammatory bowel disease of quuritizenin was significantly lower than that of DSS group. In FIG. 8, the disease score of the diarrhea item in the symptom of inflammatory bowel disease was decreased as compared with that of the DSS group, and in FIG. 9, it was confirmed that the disease score of the stool item was decreased as compared with the DSS group.
따라서, 본 발명의 이소리퀴리티제닌은 염증성 장질환의 증상인 체중감소, 결장(colon) 길이의 감소, 설사, 혈변의 모든 항목에서 DSS군에 비하여 증상이 완화되었으므로, 염증성 장질환에 있어 그 치료효과가 우수함을 확인하였다.
Therefore, the present inventors have found that isocyanuric acid of the present invention reduces the symptoms of inflammatory bowel disease, such as weight loss, decrease of colon length, diarrhea, and stool, compared to the DSS group, It was confirmed that the effect was excellent.
이하 본 발명의 이소리퀴리티제닌을 유효성분으로 함유하는 염증성 장질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 예방 또는 개선용 식품 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명을 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
Hereinafter, a pharmaceutical composition for preventing or treating inflammatory bowel disease containing the isomericuritizenin of the present invention as an active ingredient, and a preparation example of a food composition for prevention or improvement are described, but the present invention is not limited thereto, I want to explain.
제제예 1. 약학적 제제의 제조Formulation Example 1. Preparation of pharmaceutical preparations
1. 산제의 제조 1. Manufacturing of powder
이소리퀴리티제닌 20 mgIsocyanuric acid 20 mg
유당
100 mg
탈크
10 mg
상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.
The above components are mixed and filled in airtight bags to prepare powders.
2. 정제의 제조2. Preparation of tablets
이소리퀴리티제닌 10 mgIsocyanuric acid 10 mg
옥수수전분
100 mg
유당
100 mg
스테아린산 마그네슘
2 mg
상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.
After mixing the above components, tablets are prepared by tableting according to the usual preparation method of tablets.
3. 캡슐제의 제조3. Preparation of capsules
이소리퀴리티제닌 10 mgIsocyanuric acid 10 mg
결정성 셀룰로오스 3 mgCrystalline cellulose 3 mg
락토오스 14.8 mgLactose 14.8 mg
마그네슘 스테아레이트 0.2 mgMagnesium stearate 0.2 mg
통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.
The above components are mixed according to a conventional capsule preparation method and filled in gelatin capsules to prepare capsules.
4. 주사제의 제조4. Preparation of injections
이소리퀴리티제닌 10 mgIsocyanuric acid 10 mg
만니톨 180 mgMannitol 180 mg
주사용 멸균 증류수 2974 mgSterile sterilized water for injection 2974 mg
Na2HPO4·2H2O 26 mgNa 2 HPO 4 .2H 2 O 26 mg
통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당 (2 ml) 상기의 성분 함량으로 제조한다.
(2 ml) per 1 ampoule in accordance with the usual injection preparation method.
5. 액제의 제조5. Manufacture of liquids
이소리퀴리티제닌 20 mgIsocyanuric acid 20 mg
이성화당 10 gIsomer 10 g
만니톨 5 gMannitol 5 g
정제수 적량Purified water Suitable amount
통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100 ml로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한다.Each component was added and dissolved in purified water according to the usual liquid preparation method, and the lemon flavor was added in an appropriate amount. Then, the above components were mixed, and purified water was added thereto. The whole was added with purified water to adjust the total volume to 100 ml, And sterilized to prepare a liquid preparation.
제제예 2. 식품 제제의 제조Formulation Example 2. Preparation of food preparation
1. 건강식품의 제조1. Manufacture of health food
이소리퀴리티제닌
100 mg
비타민 혼합물 적량Vitamin mixture Suitable amount
비타민 A 아세테이트 70 g Vitamin A acetate 70 g
비타민 E 1.0 mgVitamin E 1.0 mg
비타민 B1 0.13 mgVitamin B1 0.13 mg
비타민 B2 0.15 mgVitamin B2 0.15 mg
비타민 B6 0.5 mgVitamin B6 0.5 mg
비타민 B12 0.2 g Vitamin B12 0.2 g
비타민 C
10 mg
비오틴 10 g Biotin 10 g
니코틴산아미드 1.7 mgNicotinic acid amide 1.7 mg
엽산 50 g Folic acid 50 g
판토텐산 칼슘 0.5 mgCalcium pantothenate 0.5 mg
무기질 혼합물 적량Mineral mixture Suitable amount
황산제1철 1.75 mgFerrous sulfate 1.75 mg
산화아연 0.82 mgZinc oxide 0.82 mg
탄산마그네슘 25.3 mgMagnesium carbonate 25.3 mg
제1인산칼륨 15 mgPotassium monophosphate 15 mg
제2인산칼슘 55 mgDicalcium phosphate 55 mg
구연산칼륨 90 mgPotassium citrate 90 mg
탄산칼슘
100 mg
염화마그네슘
24.8 mg
Magnesium chloride 24.8 mg
상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
Although the composition ratio of the above-mentioned vitamin and mineral mixture is comparatively mixed with a composition suitable for health food as a preferred embodiment, the compounding ratio may be arbitrarily modified, and the above ingredients are mixed according to a conventional method for producing healthy foods , Granules can be prepared and used in the manufacture of health food compositions according to conventional methods.
2. 건강음료의 제조2. Manufacture of health drinks
이소리퀴리티제닌
100 mg
비타민 C 15 gVitamin C 15 g
비타민 E(분말) 100 gVitamin E (powder) 100 g
젖산철 19.75 gIron lactate 19.75 g
산화아연 3.5 gZinc oxide 3.5 g
니코틴산아미드 3.5 gNicotinic acid amide 3.5 g
비타민 A 0.2 gVitamin A 0.2 g
비타민 B1 0.25 gVitamin B1 0.25 g
비타민 B2 0.3gVitamin B2 0.3 g
물
정량
Water quantification
통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2L 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.The above components were mixed according to a conventional health drink manufacturing method, and the mixture was stirred and heated at 85 DEG C for about 1 hour. The resulting solution was filtered and sterilized in a sterilized 2 L container, ≪ / RTI >
상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.Although the compositional ratio is relatively mixed with a component suitable for a favorite drink, it is also possible to arbitrarily modify the compounding ratio according to the regional or national preference such as the demand class, the demanding country, and the use purpose.
Claims (6)
[화학식 1]
1. A pharmaceutical composition for preventing or treating inflammatory bowel disease, comprising an isoleucyltigenin represented by the following formula (1) as an active ingredient.
[Chemical Formula 1]
[화학식 1]
1. A food composition for preventing or improving inflammatory bowel disease comprising isoleucyltigenin represented by the following formula (1) as an active ingredient.
[Chemical Formula 1]
The food composition according to claim 4, wherein the inflammatory bowel disease is Crohn's disease or ulcerative colitis.
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|---|---|---|---|---|
| CN109481424A (en) * | 2018-11-08 | 2019-03-19 | 温州医科大学附属第医院 | Isoliquiritigenin, pharmaceutical composition and its application in treatment diabetic nephropathy |
| WO2021010690A1 (en) * | 2019-07-12 | 2021-01-21 | (주)퓨젠바이오 | Composition for treating or preventing inflammatory bowel disease |
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