KR20150059132A

KR20150059132A - 비관절염 포유동물의 운동으로 유발된 관절 통증을 감소시키는 방법

Info

Publication number: KR20150059132A
Application number: KR1020147010693A
Authority: KR
Inventors: 폴 디즈크스트라; 프란시스 씨. 라우; 제임스 루고; 자이눌라베딘 엠. 사이예드
Original assignee: 인터헬쓰 뉴트라슈티칼즈 인코포레이티드
Priority date: 2013-10-24
Filing date: 2014-01-13
Publication date: 2015-05-29
Also published as: MY180106A; SG11201403524RA; AR095104A1; PH12014501453A1; AU2014202041B2; MX2014002934A; CL2014001281A1; PH12014501453B1; US9066926B2; CA2846644A1; AU2014202041A1; CO7020846A2; CA2846644C; US20150119335A1; WO2015060888A1; KR101664290B1; IN2014DE00193A; AU2014202041B8; MX347669B; BR112014011741A2

Abstract

본 발명은 비변성 제2형 콜라겐을 투여하는 것에 의하여, 관절염이 없는 포유동물의 운동에 의하여 유발된 관절 통증을 치료하는 방법에 관련된다.

Description

비관절염 포유동물의 운동으로 유발된 관절 통증을 감소시키는 방법{Method of Reducing Exercise-Induced Joint Pain in Non-Arthritic Mammals}

[0001] 본 발명은 비관절염 포유동물 대상체의 관절 통증 및 관절 운동성을 치료하는 것에 관한 것이다.

[0002] 본 발명은, 콜라겐 단백질 또는 그의 생물학적으로 활성인 펩타이드 단편의 경구 투여, 장용성 투여, 또는 흡입을 경유한 투여에 의한, 자가면역 관절염을 치료하는 방법에 관한 것인 미국 특허 제5,399,347호, 트렌탐(Trentham)의 개시에 대하여 관심이 있다. 특히 트렌탐은, 콜라겐의 투여가 경구 항원 관용화 요법 수단에 의하여 자가면역 관절염을 치료하는데 효과적이라는 것을 교시하고 있다. 이 방법들에 따르면, 치료대상 포유동물의 다른 면역 기능에는 영향을 미치지 않으면서, 관절염을 일으키는 자가면역 반응을 억제하기 위하여 콜라겐 및 생물학적으로 활성인 펩타이드가 투여된다.

[0003] 종전의 연구는 변성되지 않은 제2형 콜라겐의 적은 용량이 OA 및 RA 모두에 있어 관절 건강을 조절한다는 것을 보여주었다[24-26]. 통(Tong) 등[27] 은, 콜라겐 유도된 관절염(CIA)의 인 비보 모델을 사용하여, 변성되지 않은 제2형 콜라겐의 마이크로그램 양의 섭취가, 염증성 사이토카인의 혈중 레벨을 현저하게 감소시키고, 그로 인하여 다른 연구자들[28]에 의하여 얻어진 결과와 유사하게, 관절염의 발병 및 심각성 둘 모두를 감소시킨다는 사실을 보였다. 식품 또는 항원의 섭취를 통하여 면역력을 변화시키는 능력을 경구 내성(oral tolerance)이라고 부른다. 이는 뜻밖의 면역적 손상에 대하여 소화관을 보호하는 진행중인 정상의 생리학적 과정이다[29, 30]. 그 작용 기전에 대한 연구는 수개의 구별되는 T 조절자 세포형이, IL-10 및 TGF-β를 방출하는 것에 의하여, 이 현상을 매개한다는 것을 밝혀내었다[30]. 또한 이 현상은 식품 또는 항원이 계속적으로 소비되는 것을 필요로 하는 자연 중에서, 관용적 상태를 유지하기 위하여 일시적인 것으로 밝혀졌다[30].

[0004] 또한, 류마티스 관절염 및 골관절염의 치료를 위하여 제2형 콜라겐을 투여하는 것에 관련되는 미국 특허 제5,570,144호, 제5,529,786호, 제5,637,321호 및 제5,645,851호의, 무어(Moore)의 개시도 본 발명의 추가의 관심 대상이다. 단백질의 천연의 입체배열(conformation)을 유지하고 있는 비변성된 제2형 콜라겐이 관절염의 치료에 특히 유용한 것으로 추가적으로 관찰되었다.

[0005] 류마티즘 및 골관절염 둘 모두가 염증성 상태인 반면에, 모든 관절 통증이 염증 상태와 관련되는 것은 아니다. 그와 같은 통증은 운동 또는 다른 기계적 스트레스 요인에 의하여 빈번하게 발생되며, 인간 및 다른 포유동물의 그와 같은 통증을 예방하고 치료할 수 있는 치료법에 대한 요구가 존재한다.

[0006] 본 발명은 비변성 제2형 콜라겐의 투여가, 관절염이 없는 포유동물의 운동-유발된 관절 통증을 치료하는데 효과적임을 발견한 것과 관련된다. 특히, 본 발명은 비변성 제2형 콜라겐을 그와 같은 운동 유발된 관절 통증을 감소시키는데 효과적인 양으로 투여하는 것을 포함하는, 관절염이 없는 포유동물의 운동 유발된 관절 통증을 치료하는 방법을 제공한다. 본 명세서에 사용되는 용어 "관절염이 없는 포유동물"은 관절염의 임상적 증상이 없는 포유동물을 일컫는다. 관절염이 없는 인간이란, 문헌[ACR(American College of Rheumatology) 가이드라인 Aletaha D, Neogi T, Silman AJ, et al.: 2010 류마티스성 관절염 분류 기준: 류마티스학 아메리카 컬리지/류마티스 공동 개시에 대한 유럽 리그. Arthritis Rheum 2010, 62:2569-81 및 Altman R, Asch E, Bloch D, et al.: 골관절염의 분류 및 보고를 위한 기준의 개발. 무릎 골관절염의 분류. 아메리카 류마티즘 협회의 진단 및 치료적 표준 위원회. Arthritis Rheum 1986, 29:1039-49. ]에 개설된 바와 같이, 관절염으로서 분류하기 위한 진단가능한 마커가 없거나 또는 불충분한 양으로 존재하는 사람들로서 정의된다.

[0007] 비변성 제2형 콜라겐의 투여는 관절염이 없는 대상체 중의 격렬한 운동 중의 관절 통증을 경감시키는 작용을 하는 것뿐만 아니라, 또한 비변성 제2형 콜라겐의 투여는 관절염이 없는 포유동물 내 관절 통증을 경험하기 전까지의 격렬한 운동의 기간을 연장시키는데에도 효과적인 것으로 밝혀졌다. 또한, 본 발명은 운동에 의하여 유도된 관절 통증으로부터 회복되는 것을 촉진하기에 효과적인 양으로 비변성 제2형 콜라겐을 투여하는 것을 포함하는, 관절염이 없는 포유동물 중의 운동 유발된 관절 통증으로부터 회복을 촉진시키는 방법을 제공한다.

[0008] 본 발명의 방법은 운동 유도된 무릎 통증을 치료하는데 특히 효과적인데, 무릎 통증은 통증의 주관적인 측정에 의해서뿐만 아니라, 무릎 관절 구부리기 및 무릎 관절 펼치기를 포함하는 동작 범위의 개선에 의해서도 또한 증명될 수 있다.

[0009] 보다 일반적으로, 본 발명의 방법은 기계적 스트레스 요인으로 인한 관절염이 없는 포유동물 중의 관절 통증을 치료하는 것과 관련된다. 격렬한 운동이 그와 같은 스트레스 요인 중 하나인 반면에, 관절에 기계적 힘을 가할 수 있는 다른 스트레스 요인 또한 관절염이 없는 통증을 유도할 수 있다. 따라서, 그와 같은 스트레스 요인은 사고를 통하여서와 같은, 관절에의 급성 손상 및 물리적 외상을 포함한다. 따라서 본 발명은 그와 같은 스트레스 요인들로부터 야기되는 관절 통증을 치료하는 것을 고려한다.

[0010] 본 발명의 방법은 관절염이 없는 인간의 운동 유발된 무릎 통증을 감소시키는데 있어 특히 효과적인 와중에, 비변성 제2형 콜라겐의 투여는 다른 관절 중의 운동 유발된 퉁증을 감소시킬 것이며, 개 및 말과 같은 다른 관절염이 없는 포유동물의 운동 유발된 통증을 감소시키는데에도 효과적일 것으로 여겨진다.

[0011] 비변성 제2형 콜라겐은 좋기로는 경구 형태로 투여되지만, 다른 장용성 투여 형태도 특히 효과적일 것으로 여겨진다. 특히 선호되는 투여 형태는 캡슐이지만, 비변성된 제2형 콜라겐은 음료, 식품 및 식이 보충제 내로도 용이하게 혼합될 수 있을 것이다. 따라서, 비변성된 제2형 콜라겐은 캡슐, 정제, 추어블 검, 식용 필름, 로젠게스 및 분말로 이루어지는 군으로부터 선택되는 투여 형태로서 소비될 수도 있다. 적절한 캡슐은 고체 또는 액체로 채워질 수도 있고, 적절한 정제는 설하정, 추어블정, 발포정, 서방성 정제 및 장용성 코팅정을 포함할 수 있다. 비변성 제2형 콜라겐은 음료로서, 시럽 또는 액상 현택액 중에서 소비될 수도 있고, 또한 식이 보충제의 형태로서 소비될 수도 있다. 비 장용성 투여 형태가 고려되는 반면에, 그들은 일반적으로 선호되지 않을 것이다.

[0012] 본 발명에 따라서, 비변성 제2형 콜라겐은 1일 당 0.1 mg 내지 5000 mg의 용량 또는 그 이상의 용량으로 투여될 수 있으며, 인간 투여량은 좋기로는 1일 당 1 mg 내지 200 mg 의 용량이고, 더욱 좋기로는 1일 당 5 mg 내지 40 mg의 용량이다. 대상체가 겪는 비관절염성 통증의 심각성뿐만 아니라 대상체 포유동물의 종 및 크기에 따라서, 비변성 제2형 콜라겐의 바람직한 투여량이 경험적으로 결정된다는 것은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 기술의 범위에 속한다.

[0013] 도 1은 각도 측정법에 의하여 측정된 무릎 펼치기를 나타낸다. 값은 평균±SEM으로 나타내었다. *p=0.05는 베이스라인 또는 위약과 비교하여 통계학적으로 중요한 차이를 나타낸다. 완결자의 수: 비변성 제2형 콜라겐 그룹 중의 n=24 (n=3 낙오); 위약 그룹 중의 n=20 (n=6 낙오; n=2는 ROM 평가에 참가하지 않았음);
[0014] 도 2는 통증 개시에 대한 스텝밀 절차의 충격을 나타낸다. 값은 평균±SEM으로 나타내었다. *p=0.05는 베이스라인과 비교하여 통계학적으로 중요한 차이를 나타낸다. 완결자의 수: 비변성 제2형 콜라겐 그룹 중의 n=19 (n=3 낙오자; n=5은 통증이 없었음); 위약 그룹 중의 n=20 (n=6 낙오자; n=1은 통증이 없었음; n=1은 스텝밀을 사용하지 않았음); 그리고
[0015] 도 3은 통증으로부터 완전하게 회복하기까지의 시간에 대한 퍼센트 변화를 나타낸다. 값은 평균±SEM으로 나타내었다. *p=0.05는 베이스라인으로부터 통계학적으로 중요한 차이를 나타낸다. 완결자의 수: 비변성 제2형 콜라겐 그룹 중의 n=18(n=3 낙오자; n=5는 통증이 없었음; n=1은 통증으로부터 완전히 회복할 때까지의 시간이 얻어지지 않았음); 위약 그룹 중의 n=20 (n=6 낙오자; n=1은 통증이 없었음; n=1은 스텝밀을 사용하지 않았음).

[0016] 본 발명은 비변성 제2형 콜라겐의 투여가, 류마티스 관절염 및 골관절염과 같은 자가 면역 관절염 및 염증성 관절염을 앓는 대상체의 관절 통증을 치료하는데 유용할 뿐만 아니라, 관절염을 앓고 있지 않은 포유동물의 운동에 의하여 유발된 관절 통증을 치료하는데 특히 효과적이라는 것을 발견한 것에 관한 것이다. 따라서 본 발명은 비변성 제2형 콜라겐의 투여가 관절염이 없는 포유동물의 운동에 의하여 유발된 관절 통증을 치료하는데 효과적이라는 발견과 관련된다. 특히, 본 발명은 운동으로 유발된 관절 통증을 감소시키기에 유효한 양으로 비변성 제2형 콜라겐을 투여하는 것을 포함하는, 관절염이 없는 포유동물의 운동으로 유발된 관절 통증을 치료하는 방법을 제공한다. 비변성 제2형 콜라겐의 투여는 관절염이 없는 대상체의 격렬한 운동 중의 관절 통증을 감소시키는 역할을 할 뿐만 아니라, 또한 비변성 제2형 콜라겐의 투여는 관절염이 없는 포유동물에 있어서 관절 통증을 경험하기 전까지의 격렬한 운동 기간을 연장하는데 효과적인 것으로 밝혀졌다. 또한 비변성 제2형 콜라겐의 투여는 관절염이 없는 포유동물에 있어서, 운동에 의하여 유발된 관절 통증으로부터의 회복을 촉진하는 역할을 수행한다. 이러한 결과는, 그 어떠한 자가면역 질환도 없음에 비추어, 그리고 운동에 의하여 유발된 관절 통증은 일반적으로 류마티스 또는 골관절염과 같은 염증성 과정에 의한 것이 아니라 물리적 스트레스 요인의 결과로 여겨진다는 사실에 비추어 볼 때, 이와 같은 결과는 놀라운 것이다.

[0017] 그럼에도 불구하고, 무릎 관절에 대한 격렬한 운동의 영향은, 국소 통증 및 강직을 포함하는 염증성 질환의 많은 특성과 함께 나타난다[1]. 개에게 격렬한 달리기 처방을 수행시킨 경우, 관절 연골 및 글리코사미노글리칸의 현저한 손실이 나타났다[2]. 이와 같은 연구는 격렬한 운동이 관절염성 질환에서 발생하는 동일한 생리학적 과정의 몇몇을 활성화시킬 수도 있음을 제시한다[2-4]. 실제로, 인 비트로 연구는 류마티스 관절염(RA) 및 골관절염(OA) 둘 모두의 착수 및 진행에 연루되는 많은 사이토카인이, 격렬한 운동 이후에, 정상적인 무릎 세포 외 기질(ECM)의 리모델링을 또한 조절하는 것으로 나타난다는 것을 입증하였다.

[0018] 정적인 상태에서 정상적인 연골세포가 격렬한 기계적 자극을 겪는 경우, 그들의 생리학은ECM 붕괴를 향하여 이동하는데, 이는 종양 괴사 인자(TNF)-α, 인터루킨(IL)-1β, IL-6 및 다양한 아그레카나제 뿐만 아니라 MMP-13을 포함하는 수개의 금속 단백질 분해효소(MMPs)의 상향 조절에 의하여 지시된다[5, 6]. 이러한 인 비트로 이화 반응은 NF-κB, p38 MAPK, Akt 및 ERK를 포함하는 세포핵에 대한 수개의 전사 인자 인자들의 인산화, 발현 또는 전좌의 변화에 의하여 매개된다[7, 8]. 이와 대조적으로, 정상적인 연골세포는 온화하고 동적인 조건하에서 기계적으로 자극된 경우, 항-염증성 사이토카인 IL-4를 생산한다[9]. 이러한 오토크린 분자의 분비는 아그레칸 및 제2형 콜라겐의 합성을 향하여 연골세포의 대사를 이동시키는데 도움을 줄 뿐만 아니라, 산화질소(NO) 및 다양한 MMP들과 아그레카나제의 생산을 하향 조절한다[10-12]. 이러한 결론은 격렬하게 압축된 정상 연골세포에 대한 IL-4의 예비 처리가 그들의 대사적 반응 5를 약하게 한다는 발견에 의하여 뒷받침된다[11]. 이는 관절의 연골 항상성을 복원할 뿐만 아니라, 격렬한 기계적 과적을 뒤따르는 연골세포 아폽토시스를 감소시키면서, IL-4가 리모델링 기능의 하향 조절에 있어 핵심적인 역할을 수행함을 제시한다[12, 13].

[0019] 또한 기계적으로 스트레스를 받은 연골세포는 염증성 반응에 참가하는 것으로 알려진 다른 다수의 분자들을 생산한다[14]. 이는 프로스타글란딘 E₂, NO 및 맥관 내피세포 성장인자를 포함한다. 이들은 TNF-α, IL-6 및 IL-1β와 함께, 무릎 관절에서 발생하는 정상적인 회복 과정의 일부인, 국소의, 일시적인 염증-유사 반응을 야기하고, 리모델링 이벤트를 조절하는 역할을 수행하는 호염증성 분자들이다[3]. 오스트로우스키(Ostrowski) 등[15]은, 건강한 개체들이, 휴식시의 IL-10 혈중 레벨과 비교하여, 마라톤 달리기 이후에 혈중 항-염증성 사이토카인 IL-10 농도에 있어서 27-배 더 큰 발현을 나타냄을 보여주었다. 이러한 발견은 동일한 개체들이 호-염증성 사이토카인 TNF-α IL-1β 및 IL-6의 눈에 띄는 증가를 또한 나타내었다는 점을 고려할 때, 놀라운 것이 아니다. 그러므로, 격렬한 운동을 겪는 건강한 개체 중에서, 호-염증성 사이토카인의 유도는 회복 과정의 일부로서 항-염증성 제제의 합성에 의하여 상쇄되는 것으로 보인다. 이렇나 관점은 IL-10이 건강한 자원자로부터의 연골 이식에 대한 IL-1β 및 TNFα의 대사적 영향을 감소시키며, 이러한 효과는 IL-10 과 IL-4를 조합하는 것에 의하여 증진된다는 관찰에 의하여 뒷받침된다[13].

[0020] 역동적으로 압축된 연골 세포로부터 방출되는 또 다른 단백질은 형질전환 생장인자(TGF)-β이다[16-18]. 이러한 인자는 많은 세포 타입에 의하여 분비되며, 세포 주기에 관여하고, 분화를 저지하는 것으로 알려져 있다[19].

[0021] 연골 세포와 관련하여, TGF-β는 인 비트로 세포 증식을 유도하고, 비대성 세포로의 최종 분화를 늦춘다[20]. 다수의 연구는 TGF-β가 RA 및 OA 기증자로부터 수확된 연골 세포뿐만 아니라, 정상 연골 세포에 대해서도 다양한 호-염증성 사이토카인의 인 비트로 대사적 효과에 역행함을 보여주었다[21-23].

[0022] 본 발명의 방법은 특히 선호되는 조류 공급원과 함께 다양한 포유동물 공급원으로부터 유래한 비변성 제2형 콜라겐의 투여를 활용한다. 본 발명의 수행에 사용되는 동물 조직은 온혈 또는 냉혈일 수 있으며, 연어 및 상어과 같은 어류로부터 유래될 수도 있다. 그럼에도 불구하고, 칠면조 연골, 보바인 연골 및 눈의 유리액과 같은 제2형 콜라겐을 함유하는 다른 온혈 동물 조직 또한 필요하다면 채택될 수 있는 반면에, 가금류의 연골, 좋기로는 약 1년 미만 연령의 닭으로부터 취득한 닭의 연골이 비변성 제2형 콜라겐의 원천으로서 특히 유용하다.

[0023] 본 발명은 비변성 제2형 콜라겐을 생산하는 바람직한 방법을 개시하고 있는 실링(Schilling)의 미국특허 제7,083,820호에 관심이 있다. 특히 바람직한 비변성 제2형 콜라겐은 인터헬쓰 뉴트라슈티칼즈(InterHealth Nutraceuticals, Benicia, CA.)로부터 UC-II®로서 상업적으로 이용가능하다. UC-II는 글리코실화된, 비변성 제2형 콜라겐을 함유하는 천연 성분이다[24].

[0024] 경구 투여를 위한 가금류 또는 온혈 동물 조직을 준비함에 있어서, 조직을 포함하는 제2형 콜라겐을 우선 주변 조직으로부터 자유롭게 절개하고, 당업계에서 알려진 수단을 이용하여 바람직하게는 1회량 보다 크지 않은 입자로 깍둑 썰기를 하거나 또는 분쇄한다. 입자화된 연골을 조직 내 제2형 콜라겐의 주요부의 구조에 영향을 미치거나 변성시키지 않는 수단을 이용하여 살균하고, 비변성 제2형 콜라겐의 약학적으로 효과적인 레벨을 함유하는 분량으로 형성시키는데, 여기서 상기 레벨은 일반적으로 하나의 분량 중에 적어도 약 0.01 그램, 좋기로는 약 0.1 내지 약 0.5 그램의 동물 조직이다. 천연 산물로서, 샘플 샘플마다 약간의 변형이 예상된다. 이러한 변형은 분쇄 후에 혼합함에 의하여 최소화될 수 있다. 혼합은 비변성 제2형 콜라겐 및 다른 항원의 양의 측정을 가능하게 하는 당업계에 알려진 분석 방법에 의하여 도움을 받을 수도 있다.

[0025] 이들 방법은 배치를 혼합하여 균일성을 얻게 하고, 몇몇 케이스에서는 상이한 원천으로부터 유래한 연골을 혼합하여 특정 항원 레벨을 증가시킴에 의하여 효능을 수정한다. 최적의 용량은 변동될 수 있으며, 당업계에 알려진 수단에 의하여 용이하게 결정될 수 있다. 단량체 화하고, 수용성 부분을 추출한 다음 제2형 프로콜라겐을 고도로 정제하기 위하여 오직 3주 연령 미만의 닭을 원칙적으로 활용한 선행기술에 비추어 볼 때, 동물 조직을 함유하는 비변성 제2형 콜라겐의 더 넓은 범위의 효과적인 사용은 놀라운 것이다. 더 성숙한 닭의 유용성은, 하나의 동물로부터 수확가능한 비변성 제2형 콜라겐의 양에 있어서, 거의 100배 증가를 가져온다. 이는 물론 원하는 산물이 보다 용이하게 약학적인 양으로 사용가능할 수 있게 하며, 상대적으로 적은 수의 동물로부터 분리하는 동안의 취급 감소로 인하여, 미생물 오염의 가능성을 크게 감소시킨다.

[0026] 비변성된 제2형 콜라겐의 제조에 있어서 결정적인 단계는 분쇄 전 또는 후에 동물 조직을 살균하는 것인 바, 따라서 동물 조직 내 물에 불용성인 제2형 콜라겐의 구조를 유지시키고, 또한 동물 조직 내 제2형 콜라겐의 변성을 일으키지 않는 살균 절차를 채택하는 것이 필수적이다. 조직을 끓는 물에 노출시키는 것과 같이, 상승된 온도에서 동물 조직을 물로 처리하는 것은 제2형 콜라겐의 변성을 일으켜서, 동물 조직의 효능을 실질적으로 감소시킨다. 산으로의 처리는 제2형 콜라겐을 보다 덜 바람직한 수용상 제2형 프로콜라겐으로 단량화시킨다. 분쇄한 조직을 살균하는 바람직한 방법은, 과산화수소 또는 하이포아염소산 나트륨과 같은 산화제로 분쇄된 제2형 콜라겐을 세척하는 것을 포함한다. 방사능에 노출시키는 것 또한 제2형 콜라겐을 살균하는 바람직한 방법이다.

[0027] 임의의 주어진 시간에 소모되는 용량 중의 비변성 제2형 콜라겐의 양은 치료를 받을 환자의 컨디션, 연령, 체중, 병력 및 일반적인 물리적 특성뿐만 아니라, 소비의 목적, 증상의 심각성에 의해서도 변화될 것이다. 그 결과, 용량, 빈도 및 그 용량이 투여되는 시간 간격은 널리 변화될 것이다. 효과적인 용량을 포함하는 단일의 용량은 비록 이것이 물론 선호되는 것일 지라도 반드시 필수적인 것은 아니며, 복수의 용량이 투여될 수도 있다. 본 발명의 비변성 제2형 콜라겐의 복용량은, 예컨대 우유와 같은 수용성 분산의 형태로, 다른 섭취가능한 성분과의 조합으로, 또는 다른 단백질성 물질, 당류 및 녹말과의 조합으로 확장될 수도 있다. 다른 섭취가능한 조성물 예컨대 식품과 함께 또는 그것 없이 슬러리로서 뿐만 아니라, 직접 분쇄된 고체로서, 캡슐화된 분쇄된 고체로서, 압축 형성된 알약으로서, 유익하게 투여될 수도 있다. 이는 살균된 방식으로 포장되거나 또는 포장 뒤에 살균될 수도 있으며, 상온 또는 감소된 온도에서 저장될 수 있다. 또는 부패를 방지하기 위하여 빙점하에서 저장될 수도 있으며, 다른 식품 물질과 함께 농축된 형태로 동결될 수도 있다.

실시예 1

[0028] 본 실시예에 따라, 이전에 관절염 질환을 앓은 적이 없고, 휴식시 관절 통증이 없으나, 물리적 활동시 관절의 불편함을 경험한 건강한 대상자에 대하여, 무작위의 이중 맹검, 위약 대조군 연구를 수행하였다.

[0029] 실험방법

[0030] UC-II^® 브랜드의 비변성 제2형 콜라겐은 닭 흉골로부터 유래한 것이다. 임상적 연구를 위하여 천연의 제2형 콜라겐 10.4 ±1.3 mg을 제공하는 UC-II^® 브랜드의 비변성 제2형 콜라겐 물질(Lot 1109006) 40 mg을 부형제와 함께 불투명한 캡슐 내에 캡술화하였다. 위약은 오직 부형제(미정질 셀룰로오스, 마그네슘 스테아레이트 및 이산화규소)만을 함유하는 동일한 캡슐 내에 분배하였다. 두 연구 물질 모두 우수의약품관리기준(GMP)-인증된 설비 중에서 제조하였으며, 인터헬쓰 뉴크라슈티칼즈 인코포레이티드(Benicia, CA)에 의하여 제공되었다. 대상자들은 매일 취침 전에 물과 함께 한 개의 캡슐을 섭취하도록 지시되었다.

[0031] 대상자의 모집

표 1에 정의된 포함-배제 기준을 사용하여, 적격성을 위하여 106명의 대상자를 스크리닝하였다. ACR(American College of Rheumatology) 가이드라인에 의하여 개요된 바와 같이 [31, 32], 휴식시 관절 통증이 없고, 활성이 있는 관절염 질환을 나타내는 진단 마커를 나타내지 않은 오직 건강한 성인만을 본 연구에 승인하였다. 이를 달성하기 위하여, 모든 잠재적인 대상자들에 대하여, 위원회가 승인한 의료진이 ACR 특화된 임상적 증상을 스크리닝하였으며, 의료 기록을 완결하였다. 휴식시 무릎 통증이 있고, 6개의 임상 분류 기준의 적어도 3개를 나타내는 대상체로서, 50세를 초과한 연령, 30분 이하로 지속되는 오전 무릎 관절의 뻣뻣함, 무릎 관절 조작시 골마찰음, 신체 압통, 골 확장, 무릎 붓기 또는 과다 체액의 존재 및 감지가능한 열감을 포함하는 자들은 제외시켰다. NSAID, 다른 통증 완화 의약 또는 항염증 보조제를 가끔 사용한다고 보고한 잠재적 대상자들은 무작위화에 앞서 2주의 세척 기간을 거쳤다.

표 1. 포함-배제 기준

[0032] 대상자들은 메디쿠스 리서치(Udani JK, unpublished observation)가 개발하고 비준한 표준화된 스텝밀 시험법을 이용한 수행 시험을 10분간 받을 것이 요구되었다. 이는 한쪽 또는 양쪽 무릎 모두가 리케르트(Likert) 스케일 [33] 11 포인트 상의 레벨 5의 불편함을 얻을 때까지, 스텝밀^® 모델 7000PT (StairMaster^®Health & Fitness Products, Inc., Kirkland, WA) 상의 레벨 4의 운동과 관련되었다. 이러한 통증 임계점은 10분 기간 이내에 얻어져야 했으며, 그렇지 않은 경우 그 대상자는 제외되었다. 일단 요구되는 통증 레벨이 얻어지면, 대상자는 스텝밀에서 내려오기 전에 얻어지는 최대 통증 레벨을 기록하기 위하여 추가의 2분 동안 계속 걸을 것을 요청받았다. 스텝밀 시험의 시작부터 다음과 같은 무릎 불편 측정수단을 기록하였다: (1) 초기 관절 통증 개시까지의 시간; (2) 최대 관절 통증의 개시까지의 시간; (3) 무릎 관절 통증 초기 개선까지의 시간; (4) 무릎 관절 통증으로부터 9의 완전한 회복까지의 시간. 스트레스 시험을 시작한지 1분 이내에 5 (또는 그 이상)의 통증 점수를 겪은 대상자는 제외시켰다. 스크리닝한 106명의 후보자들 중 55명의 대상자가 본 연구에 참여하였다. 각각의 대상자들은 IRB가 승인한 고지된 동의서 형식에 서명하였다. 등록 후에, 대상자들을 위약 그룹 또는 비변성 제2형 콜라겐 그룹으로 무작위 할당하였다.

[0033] 연구 디자인 및 시험 장소

[0034] 무작위, 이중 맹검, 위약 대조군의 본 연구는 캘리포니아 노스리지에 위치한 스테이웰 리서치 임상 장소에서 수행하였다. 메디커스 리서치(Agoura Hills, CA)가 기록의 계약 연구 기관(CRO)이었다. 본 연구의 프로토콜은 2012년 4월 25일에 코페르니쿠스 그룹 IRB (Cary, NC)의 승인을 받았다. 본 연구는 헬싱키 선언서(1996년 판) 중에 개요된 원칙들을 준수하였다.

[0035] 무작위화 및 맹검

[0036] 대기 노이즈 방법(www.random.org)에 기반한 소프트웨어 알고리즘을 이용한 단순한 무작위화를 채택하였다. 그룹 할당을 결정하기 위하여 일련의 배치를 사용하였다. 일단 할당되면, 맹검을 유지하기 위하여 배치를 문서화하고, 이를 개별적으로 숫자를 매긴 봉투 내에 배치하였다. 전 연구에 걸쳐, 대상자, 의료 직원 및 데이터 분석과 운영직원을 맹검 상태에 두었다.

[0037] 연구 계획

[0038] 연구 기간은 스크리닝, 베이스 라인, 7일, 30일, 60일, 90일 및 120일(마지막 방문)을 포함하는 총7개의 방문으로 이루어진 17주였다. 표 2는 연구 방문 및 활동을 요약한 것이다. 모든 대상자들은 베이스라인에 병력 10개 설문지 및 7, 30, 60, 90 및 120일 시점의 추후 평가 동안에 리포트 순응을 완수하였다. 우다니(Udani) 스텝밀 방법을 절차를 사용하여, 착수 및 통증으로부터의 회복뿐만 아니라, 인체계측 수단, 바이탈 사인, 움직임(굽힘 및 펼침)의 무릎 범위, 6분 시간 걷기에 대하여 대상자를 평가하였다. 피트비트(San Francisco, CA) 장치를 사용하여 연구 참가자들의 매일 걷는 거리, 걷는 스텝 및 평균 스텝 길이를 측정하였다. 또한 대상자들은 스탠포드 운동 스케일뿐만 아니라 KOOS 조사를 완수하도록 요청되었다.

[0039] 표 2. 프로토콜 요약

[0040] 동작 측정 무릎 범위

[0041] 무릎 펼침은 각도 측정에 의하여 측정하였다. 간략하게, 등을 곧게 편 채로 테이블 모서리 위에 꼿꼿한 자세로 앉도록 대상자들을 지시하였다(90°로 정의되는 무릎 위치). 각도 측정의 축을 무릎 관절에서 허벅지 및 정강이가 교차하는 곳에 두었다. 골반 및 요추 등뼈의 위치를 변화시키지 않고 무릎을 최대로 펼칠 것을 대상자들에게 요청하였다. 펼친 무릎 관절의 각도를 측정하고 기록하였다. 무릎 굽히기 측정을 위하여, 테이블 말단에서 정강이가 떨어지도록 엎드려 누운 자세로, 대상자들의 무릎을 활발하게 구부리도록 요청하였다. 그 다음 무릎 굽힘 동작의 범위를 측정하고 기록하였다.

[0042] 관절 불편함 시한 측정

[0043] 간략하게, 대상자가 스텝밀을 오르기 시작할 때 스탑 워치를 시작하였다. 통증의 착수 시간을 표적 무릎 내 통증의 제1 표식으로 기록하였다. 탈락자들을 고려하기 위하여 각 시점의 베이스라인을 평준화하였다. 통증으로부터 완벽하게 회복하기까지의 시간의 변화를 다음과 같이 측정하였다: 대상체가 스텝밀로부터 내려올 때, 새로운 스탑 워치를 작동시켰고, 통증으로부터 완전하게 회복하기까지의 시간을 기록하였다. 탈락자들을 고려하여 11 시점 각각의 베이스라인을 평준화하였고, 그 다음 연구 베이스라인과 7일 사이의 퍼센트 변화로 정의되는 레퍼런스 차이에 대하여 이를 비교하였다.

[0044] KOOS 무릎 조사 & 스탠포드 운동 스케일

[0045] KOOS 조사란 증상, 뻣뻣함, 통증, 매일 활동, 여가 활동 및 삶의 질과 같은 서브 스케일로 분류되는 42개 질문으로 구성되는 유효한 수단이다 [34]. 이는 대상자에게 그들의 무릎과 지난주 동안 일상 활동을 수행한 그들의 능력에 대한 의견을 평가한다. 스탠포드 운동 행동 스케일은 이전 주 동안에 운동 행동을 평가하기 위하여 디자인된 6개의 질문을 포함한다 [35].

[0046] 6분 시한 걷기

[0047] 대상자들은 고통을 유발함이 없이 가능한 한 빠른 속도로 복도를 6분 동안 오르 내리도록 지시받았다. 측정 휠(RoadRunner Wheel, Keson Industries, Aurora, IL)을 사용하여 6분 내에 오간 거리를 측정하였다.

[0048] 구제 약물

연구 과정 동안에 그 어떠한 구제 약물도 허여되지 않았다. 모든 연구 방문시에, 대상자들은 43개의 금지된 약물 및 보충제의 목록을 받았다(표 3). 그 다음, 전체 병력의 변화 또는 이들 물질의 사용을 연구 코디네이터가 기록하였다. 금지된 이들 약물 중 그 어떠한 것이라고 가진 것으로 발견된 대상자들은 프로토콜에 따라 본 연구에 더 참여하는 것으로부터 제외시켰다.

표 3. 분야별 금지된 약물*의 대표적인 목록

[0049] 통계

[0050] 정규 분포에 대한 순응에 대하여 결과 변수를 산정하고 요구되는 바에 따라 변형시켰다. 그룹 내 중요도는 비-파라미터 싸인 테스트 또는 비-파라미터 윌콕손 싸인 랭크 테스트에 의하여 분석한 반면에, 그룹 간의 중요도를 평가하기 위해서는 윌콕손 만-휘트니 테스트를 사용하였다. 피셔 정확 테스트를 사용하여 연구 코호트 간의 통증의 완전한 상실을 평가한 반면에, 바이노미알 테스트를 사용하여 각각의 방문시 통증의 완전한 상실 가능성을 평가하였다. 0.05와 같거나 적은 P-값은 통계적으로 중요하게 고려되었다. 모든 분석은 SPSS, v19 (IBM, Armonk, NY) 사용하는 퍼 프로토콜 베이시스 상에서 수행되었다. 결과를 평균±SEM으로 나타내었다.

[0051] 결과

[0052] 베이스라인 데모그래피

[0053] 총 55명의 개인이 적합성 기준을 충족시켰으며, 위약 그룹(28명) 또는 비변성 제2형 콜라겐 그룹(27명)으로 무작위화 하였다. 두 그룹 내 대상자들의 베이스라인 인구통계학적 특성은 연령, 성별, 키, 몸무게 및 BMI에 대하여 유사하였다(표 4). 총 9명의 대상자, 비변성 제2형 콜라겐 그룹에 속하는 3명 및 위약 그룹에 속하는 6명은 후속 실험에 따라오지 못하였다. 본 명세서에서 제시되는 결과는, 위약 그룹 중의 22명과 비변성 제2형 콜라겐 그룹 중의 24명의 총 46명의 대상자를 포괄한다. 본 연구 참가자들의 평균 연령은 대략 46세였는데, 이는 많은 OA 연구에서 관찰되는 평균 연령보다 약 16세가 더 낮은 연령이라는 것에 주목하여야 한다 [36-38].

표 4. 등록한 대상자들의 데모그래피 및 베이스라인 특성

[0054] 무릎 펼치기 및 굽히기

[0055] 도 2는 비변성된 제2형 콜라겐 또는 위약을 제공받은 대상자들의 시간의 경과에 따른 평균 무릎 펼치기의 변화를 요약한 것이다. 비변성 제2형 콜라겐을 보충받은 코호트는, 위약 군(81.0 ±1.3°vs 74.0 ±2.2°, p=0.011) 및 베이스라인 (81.0 ±1.3°vs 73.2 ±1.9°, p=0.002)과 비교하여, 120일에 무릎을 펼치는 능력에 있어서 통계학적으로 현저하게 큰 증가를 나타내었다. 비변성 제2형 콜라겐 그룹 13 또한, 90일에 오직 베이스라인과 비교하여 현저하게 증가된 무릎 펼치기를 나타내었다(78.8 ±1.9°vs 73.2 ±1.9°, p=0.045). 이들 데이터의 ITT(intent to treat) 분석 결과 또한 120일에 위약과 대조하여 무릎 펼치기에 있어 통계학적으로 현저한 순 증가를 나타내었다(80.0 ±1.3°vs 73.7 ±1.8°, p=0.006). 본 연구 동안에 그 어떠한 시점에서도 위약 그룹에서는 통계적으로 현저한 변화가 관찰되지 않았다. 관절 굽히기와 관련하여는, 두 그룹 모두에서 현저한 변화가 감지되지 않았다(p>0.05). 프로토콜 통계 분석 당 전자와 관련된 파워는 80%였다. 초기 관절 통증의 착수 시점은 도 2에 나타내었다. 비변성 제2형 콜라겐의 보충은, 각 방문에 대하여 1.4분이었던 베이스라인과 비교하여, 90일 (2.75 ±0.5 분, p=0.041) 및 120일 (2.8 ±0.5 분, p=0.019)에, 초기 관절 통증의 착수 시간에 있어 통계학적으로 현저한 증가를 야기하였다. 위약 군 또는 그룹 상호 간에 대해서는 그 어떠한 통계학적으로 현저한 차이도 관찰되지 않았다.

[0056] 비변성 제2형 콜라겐 그룹 중의 5명 및 위약 그룹 중의 1명은 연구가 끝날 때까지 통증의 착수를 보고하지 아니하였다(아래 및 표 3 참조).

[0057] 표 5. 스텝밀 시험에서 무릎 통증의 완전한 해소를 보고한 대상자들

수치는 대상자의 수를 나타내는 반면에, 괄호는 스텝 밀에서 그 어떠한 통증도 받지 않은 총 대상자의 퍼센트를 나타낸다. 지속성은 방문에 걸쳐 통증이 없는 상태가 지속된 대상자의 수를 나타낸다. *대상자가 관절 통증을 겪지 않을 가능성이 0과 동일하다는 무효 가정을 사용하여, 각 방문의 독립적인 바이노미알 테스트에 근거할 때 p=0.05에서 중요. 그룹 간에는 통계학적인 차이가 없었다. ^#R　=　반복 대상자 (즉, 종전 방문에서도 통증을 보고하지 않았던 동일한 대상자); N = 처음으로 통증이 없음을 보고한 새로운 대상자.

[0058] 이러한 예상치 못한 발견을 고려하여 추가의 분석을 수행하였는데, 여기에서는 이러한 개인들을 초기 통증 착수까지의 시간 분석에 포함시켰다. 통증 착수까지의 하향 한계로서 스텝밀 절차의 10분 한계를 사용하였다. 이러한 보수적인 가정하에, 비변성 제2형 콜라겐의 보충은, 각각의 방문에 대하여 1.4분이었던 베이스라인과 비교하여, 90일(3.65 ±0.7 분, p=0.011) 및 120일(4.31 ±0.7 분, p=0.002) 에 통계학적으로 현저하게 증가된 통증까지의 착수시간을 야기하였다. 120일의 그룹간 비교는 비변성 제2형 콜라겐 코호트를 현저하게 선호하는 통계적인 레벨에 접근하였다(p=0.051). 14 최대 관절 통증 착수까지의 시간, 그룹 간 통계학적으로 현저한 차이가, 비변성 제2형 콜라겐 코호트를 선호하면서, 60일에 관찰되었다(6.39 ±0.5 분 vs 4.78 ±0.5 분; p=0.025). 이러한 현저함은 연구의 나머지 동안에는 지속되지 않았는데, 이는 이것이 무작위 발생임을 제시하는 것이다.

[0059] 무릎 관절 통증 중의 초기 개선까지의 시간

[0060] 대상자가 스텝밀로부터 내려온 즉시 관절 통증의 소멸까지의 시간을 기록하였다. 두 그룹은 관절 통증 소멸의 개시까지의 시간에 관하여, 그룹 간에 현저한 차이를 나타내지 아니하면서, 동일한 비율로 통증으로부터 회복되기 시작하였다(p>0.05).

[0061] 무릎 관절 통증으로부터 완전한 회복까지의 시간

[0062] 관절 통증으로부터 완전한 회복까지의 시간은, 위약 그룹뿐만 아니라, 비변성 제2형 콜라겐 그룹 둘 모두에 대하여, 베이스라인과 비교하여, 60, 90 및 120일에 현저한 감소를 나타내었다(도 3). 7일까지의 베이스라인 레퍼런스 범위에 대하여 베이스라인을 평준화한 후에 시간에 있어서 퍼센트 변화를 계산하였다. 비변성 제2형 콜라겐 그룹은 60, 90 및 120일 각각에 31.9 ±11.7% (p=0.041), 51.1 ±6.1% (p=0.004) 및 51.9 ±6.0% (p=0.011) 의 평균 감소를 나타내었다. 대조적으로 위약 코호트에 대한 동일한 시점에 대한 감소는 21.9 ±10.2% (p=0.017), 22.2 ±15.5% (p=0.007) 및 30.0 ±11.8% (p=0.012), 로서, 더 낮은 크기였지만, 그럼에도 불구하고 베이스라인과 대비하여 통계학적으로 중요하였다. 이들 그룹간 차이는 그 어느 것도 통계학적으로 현저한 차이를 갖지 않았다.

[0063] 무릎 관절 통증의 완전한 소실까지의 시간

[0064] 본 연구의 과정 동안에, 위약 및 보충제 코호트 둘 모두에서, 대상자의 다수가 15 스텝밀 프로토콜 동안에 더 이상 그 어떠한 통증도 보고하지 않았음이 발견되었다. 비변성 제2형 콜라겐 그룹에 대하여, 5명의 대상자들 (21%)은 120일까지 더 이상 통증을 보고하지 않은 반면에, 위약 군의 경우는 단지 1명의 대상자(5%)만이 통증의 완전한 소실을 보고하였다(표 4). 이러한 효과는 그룹 간 통계학적으로 중요한 정도에는 미치지 않았지만, 비변성 제2형 콜라겐 코호트 중에서 통증을 상실한 대상자의 다수에 대한 데이터 중에서 명백한 경향이 존재하였다(p=0.126). 각각의 방문에서 완전한 통증의 해소에 대한 바이노미알 분석은, 통계학적인 중요함을 비변성 제2형 콜라겐 그룹에 대하여 120일까지 나타내었다(p=0.031). 무릎 통증의 완전한 해소는 무작위 사건이 아니었음을 중요하게 주목하여야 한다. 대상자들 간의 패턴은 무릎 통증의 해소가 다수 방문에 지속되는 영속적인 현상인 것으로 관찰되었음을 나타내고 있다(표 4). 임상 리포트 형식의 자세한 검토는, 이들 대상자들이 그 누구도 그들의 방문전에 진통제를 복용하지 않았음을 보여주었다.

[0065] 6분 시한 걷기 & 매일 걸음수

[0066] 6분 시한 걷기 또는 매일 걷은 걸음 수에 관하여, 연구 그룹간에 현저한 차이가 관찰되지 않았다(p>0.05). 비변성 제2형 콜라겐 그룹(범위=505 내지 522 미터) 과 위약 그룹(범위=461 내지 502 미터)이 6분 내에 걸은 거리는, 종전에 건강한 성인에 대하여 보고된 참조 범위(남성 399 내지 778 미터, 여성 310 내지 664 미터)[39]의 이내였다. 유사하게, 두 연구 그룹 모두에 대한 피트비트(Fitbit) 데이터로부터 계산된 평균 걸음 길이 또한 정상 성인에 대하여 종전에 발표된 결과[40]와 일치하였다.

[0067] KOOS 무릎 조사 & 스탠포드 운동 스케일

[0068] KOOS 조사 또는 스탠포드 운동 스케일에 대하여, 그룹 간에 그 어떠한 현저한 차이도 관찰되지 않았다(p>0.05).

[0069] 진통제 및 NSAID의 사용

[0070] 임상 보고 서식의 검토는 연구 코호트 내 그 어떠한 대상자도 43개의 금지된 의약 또는 보충제를 연구기간 동안 소비하지 않았음을 보여주었다.

[0071] 안전성 평가

[0072] 두 그룹간에 동일하게 분포된 총 8가지 부작용 사례가 관찰되었다(표 6). 이들 부작용 사례 중 그 어느 것도, 비변성된 제2형 콜라겐 보충과 관련된 것으로 여겨지지 않았다. 모든 사례는 추가의 간섭을 필요로 하지 않고 자연적으로 해소되었다. 부작용 사례로 인하여 연구로부터 탈락된 대상자는 없었다. 마지막으로 보충 17주 후에 바이탈 사인에 대하여 아무런 차이도 관찰되지 않았으며, 본 연구에 있어서 심각한 부작용 사례가 보고된 바는 없었다.

[0073] 표 6. 모든 대상자 중의 부작용 사례( AEs )의 분석 요약

[0074] 추가논의

[0075] 연구 결과, 비변성 제2형 콜라겐 보충제를 섭취한 대상자의 경우 무릎 펼치기 측각술에 의하여 측정한 결과, 베이스라인 및 위약과 대조하여 현저하게 더 앞선 운동 범위(ROM)를 경험하는 것으로 밝혀졌다. 무릎 펼치기는 일상적 기능 및 스포츠 활동에 있어 필수적이다. 무릎 펼침 손상은 더 낮은 강도의 기능에 부정적인 영향을 미치는 것으로 나타났다 [42, 43]. 예를 들어, 무릎 펼침 손상은 발목 및 엉덩이에 영향을 미치는

보행 패턴을 변경시킬 수 있는데, 이는 달리기 및 점프에 어려움을 야기할 수 있다 [42, 43]. 상기 연구는 3-5°의 영구적인 펼침 손상이 환자의 만족도 및 초기 관절염의 진행에 현저한 영향을 미칠 수 있음을 추가적으로 보여주었다[44].

[0076] 구조-기능 관점에서, 이러한 결과는 놀라운 것이 아니다. OA의 초기 특성화 단계 동안에, 무릎 굽힘 보다 무릎 펼치기에 대하여 명백하게 우선적인 손상이 존재하는데, 이러한 손상은 WOMAC 통증 점수와 상관관계를 나타내었다[45, 46]. 또한, 초기 골관절염 무릎의 MRI 영상은 무릎 구조의 초기 변화가, 무릎뼈 및 체중이 가해지는 무릎의 다른 부위에 대한 관절 연골 부식(세섬유화)에 집중되는 것으로 나타났다[47]. 그와 같은 변화는 굽힘보다 펼침에 대하여 우선적으로 영향을 미치는 무릎 ROM(운동 범위) 손상을 야기할 수 있다. 초기 무릎 골관절염의 병리학은, 그것이 무릎 펼침과 굽힘 사이의 임상적 결과의 불일치에 대한 설명을 돕는 한, 건강한 무릎의 일상적 물리 활동이 갖는 영향에 관하여 통찰을 제공하는 것으로 여겨진다.

[0077] 통증으로부터의 완전한 회복뿐만 아니라, 초기 관절 통증의 개시까지의 시간 또한 본 연구에서 측정되었다. 이들 각각은 베이스라인 상태에 대하여 비변성 제2형 콜라겐 보충된 코호트를 선호하는 임상 결과를 측정한다. 무릎 확장을 조절하는 비변성 제2형 콜라겐의 능력은 무릎 관절 통증을 조절하는 그것의 능력과 관련될 수 있다. 크로울리(Crowley) 등[26] 및 트렌탐(Trentham) 등 [25]은 비변성 제2형 콜라겐이 관절의 편한함과 유연성을 증진시키고, 그 결과 각각 OA 및 RA 대상체 모두에 삶의 질(QoL)을 개선한다는 것을 기술하였다. 이러한 효과는, 래트 및 마우스 둘 모두에서 비변성 제2형 콜라겐의 마이크로그램 양이 T 조절자 세포의 유도를 경유하여 CIA를 조절한다는 발견으로부터 기인한 것일 수 있다[27, 28, 48]. 이러한 T 조절자의 유도는 비변성된 제2형 콜라겐의 소비에 반응하여, 장간막 림프절을 포함하는 림프 티슈와 관련된 장(GALT) 내에서 발생한다[27]. 연구들은 이러한 조절자 세포가 IL-10 및 TGF-β를 생산한다는 것을 보여주었다[30, 49]. CD103 + 수지상 세포의 특별한 군은, 대부분 전적으로 GALT 중에서 발견되는데, 이러한 과정을 촉진한다[48, 50]. 일단 활성화되면, T 조절자 세포는 넓은 범위의 면역성 및 호염증성 활성을 하향 조절하여, 비변성 제2형 콜라겐에 의하여 개시되는 관절염 반응 조절을 야기하는 것으로 보인다[27]. 경구 내성 현상 또한 인간에 대하여 기술되었는데, 이는 T 조절자의 유사한 세트와 관련되는 것으로 보인다[30, 51-53].

[0078] 비변성 제2형 콜라겐이 어떻게 관절 기능을 조절할 수 있는지에 관한 상기 기술은, CIA 동물 모델이 이 질병과 가장 근접하게 닮는다는 것을 고려할 때, RA의 문맥 하에서 가장 쉽게 이해될 것이다[27, 28, 54]. 그러나, 건강한 또는 OA 무릎 관절 기능에 대한 조절 영향을 갖는 T 조절자 및 면역성 사이토카인에 대한 케이스는 덜 분명한 것으로 보인다. OA 및 정상 연골세포 둘 모두의 생물학이, 염증을 조절하는 동일한 사이토카인 및 케모카인의 몇몇에 의하여 조절되는 것으로 보임을 제시하는 증거의 증가 추세로 인하여[5, 6, 55], 최근 몇 년간 이러한 관점이 변화하였다. 예를 들어, 최근 만넬리(Mannelli) 및 그의 동료들[56]은, 천연 제2형 콜라겐(돼지)의 마이크로그램 양을 먹이는 것이 19 골관절염의 이러한 래트 모델 중에서, 통증 임계점 및 제2형 콜라겐으로부터 유래된 가교 결합된 c-텔로펩타이드의 혈중 레벨에 의하여 측정되는, 모노요오드아세테이트(monoiodoacetate)-유도된 관절 연골 손상을 예방한다는 것을 보고하였다. 이러한 발견은 골관절염 질환 중 관절의 편안함을 개선하는데 있어, 비변성된 제2형 콜라겐의 효능을 확증한다[26].

[0079] 본 연구에서, 비변성된 제2형 콜라겐은 스트레스성 물리적 운동을 하는 건강한 대상체 중의 관절 기능을 개선할 수 있다는 것이 입증되었다. 이러한 관찰은 정상 연골 세포 생리학과의 문맥에서 고려할 때, 비변성 제2형 콜라겐에 특이적인 활성화된 T 조절자 세포가 과다 스트레스를 받은 무릎 관절에 돌아오는데, 여기서, 항-염증성 사이토카인, IL-10 및 TGF-β의 방출은 스트레스를 주는 운동에 의하여 야기되는 대사적 변화에 역행한다는 것을 제시한다[13, 21, 57]. 또한, 이러한 T 조절자에 의하여 생산되는 IL-10 및 TGF-β는, T H 2 [30, 58] 반응에 대한 무릎 관절 중의 T H 균형을 기울일 수도 있는데, 이는 ECM 보충에 대하여 연골 세포 대사 중의 시프트를 더욱 발전시키는 IL-4 생산을 바람직하게 야기한다.

[0080] 본 연구에서 전체적인 관절 기능, 삶의 질 및 물리적 활동성을 평가하기 위하여 수개의 추기 시험을 사용하였다. 측정된 추가적인 파라미터 및 시험은 6분 시한 걷기와 스탠포드 운동 스케일 및 KOOS 조사를 포함하였다. KOOS 조사와 관련하여, 증상, 통증, 일상 기능, 여가 활동 및 삶의 질에 대해서는, 두 코호트 모두 베이스라인에 대하여 통계학적으로 중요하였지만, 서로에 대해서는 중요하지 않았다. 본 연구가 휴식 시 그 어떠한 관절 문제도 나타내지 않는 건강한 대상자에 대하여 수행된 것이라는 점을 고려하면, 이는 예측할 수 없었던 발견은 아니다. 대상자가 관절의 불편함을 호소한 것은 오직 스텝밀을 통하여 관절이 스트레스를 받았을 때뿐이다. 이러한 조건 하에서, 상기 지시된 바와 같이, 비변성 제2형 콜라겐 그룹은 관절 불편함이 더 적었고, 더 큰 관절 유현성을 경험하는 것으로 보여진다.

[0081] 6분 시한 걷기, 매일 걷는 거리, 또는 스탠포드 운동 스케일 설문지에 대해서는, 그룹 간 임상 결과에 있어서 차이가 없었다. 다시 한번, 이러한 결과는 이들 시험 및 질문지가 건강하지 않은 군집 중의 관절염 질환의 심각성을 평가하기 위하여 디자인되고 임상적으로 비준된 것이라는 점을 고려할 때 놀라운 것이 아니었다.

[0082] 본 연구에서는 관절염 질환과 관련되는 그 어떠한 임상적 바이오마커도 평가되지 않았다. 건강한 대상체는 그들에게 임상적 질병이 없기 때문에, 그들의 염증성 바이오마커 프로파일 중에 현저한 변화가 나타날 것으로 기대되지 않는다[59]. 또한, 본 연구에서 측정되는 관절의 불편함이란, 진행중인 염증 질환에 의한 것이 아니라, 스트레스 요인에 의하여 유도되는 급성 통증이라는 것을 주목하여야 한다. 그러므로, 이러한 건강한 대상자 중에서 발생할 수 있는 염증성 마커 중의 임의의 상승은 단순히 스트레스성 운동의 영향에서 기인한 생리학적인 충격으로 인한 것일 수 있다.

[0083] 이러한 결과를 검토할 때, 고려해야 할 두 가지 연구 제한이 있다. 첫째로, 초기 통증 개시까지의 시간은 10분 기간까지로 제한되었다. 현재 연구 디자인은 스텝밀 상에서 대상체가 통증 경험을 중단할 수 있다는 가능성을 다루지 않았다. 추가의 연구는 대상자가 통증을 호소하기 전에 운동을 얼마나 오래 할 수 있는지를 측정하기 위하여, 운동 기간을 증가시키는 것을 허여하여야 할 것이다. 이 방법에서, 비변성된 제2형 콜라겐 보충제가 스트레스성 운동으로 인한 건강한 대상체 중에서 관절 통증의 중단을 야기하는 정도에 의존하여 더 잘 정의된 파라미터들이 대체될 수 있다.

[0084] 고려할 가치가 있는 두 번째 제한은 연구 대상자들이 ACR 표준을 충족시키지 못하는 관절염의 조기 징후를 갖고 있을 가능성이다. 이 가능한 제한은, 스텝밀 사용 1분 이내에 레벨 5 또는 그 이상의 고통을 경험하는 지원자를 배제함에 의하여, 그리고 OA의 징후 및 증상에 대하여 광범위한 의학적 검사 21을 수행하는 것에 의하여 다뤄졌다.

[0085] UC-II^® 브랜드의 비변성된 제2형 콜라겐은 건강한 관절을 뒷받침하는 독특한 성분이다. 종전의 연구는 이들 성분의 OA 대상체 중에서의 효능에 대해서 초점을 맞추어 왔다. 본 연구에서 건강한 대상자들을 포함시키는 것에 의하여, 그리고 효능의 측정자로서 비-질병 종말점을 사용하는 것에 의하여, 이제 비변성 제2형 콜라겐의 사용으로부터 유래되는 유익함이, 건강한 개체를 포함하도록 확장된 것으로 여겨진다. 또한, 인 비보 및 인 비트로 독성학 연구에서의 광범위한 시리즈뿐만 아니라, 본 연구 및 종전 인간 연구[24, 26, 60]에서 그 어떠한 부작용 사례도 없었다는 것에 근거할 때, 이 성분은 인간이 소비하기에 안전한 것으로 보인다. 결론적으로, UC-II 브랜드의 비변성 제2형 콜라겐 40 mg의 매일 보충은, 더 큰 무릎 펴기에 의하여 기술된 바와 같이, 건강한 대상자에 대하여 관절 기능 및 유연성을 지지하며, 통증이 없는 운동 기간을 증가하는 능력뿐만 아니라, 스트레스성 운동으로부터 가끔 발생하는 관절 통증을 완화하는 능력을 둘 모두를 갖는다.

[0086] 표준화된 스텝밀 성능 시험에 참가한 후에 무릎 통증을 보고한 55명의 대상자들을, 120일 동안에 위약(n=28) 또는 UC-II^® 브랜드의 비변성 제2형 콜라겐 (매일 40 mg, n=27) 코호트로 무작위 분배하였다. 관절 기능은 스트레스성 스텝밀 운동 후에 따르는 관절 통증을 경험하기까지의 시간 및 그로부터 회복되는 시간뿐만 아니라, 무릎 굽힘 및 무릎 펼침을 측정하는 것에 의하여 평가하였다.

[0087] 보충 120일 후에, 비변성 제2형 콜라겐을 투여받은 그룹 내 대상자들은, 위약(81.0 ±1.3°vs 74.0 ±2.2°; p=0.011) 및 베이스라인(81.0 ±1.3°vs 73.2 ±1.9°; p=0.002)과 비교하여, 평균 무릎 펼침에 대해 통계학적으로 현저한 개선을 나타내었다. 비변성된 제2형 콜라겐 코호트는 또한 90일에 베이스라인에 대하여 평균 무릎 펼침에 있어 통계적으로 현저한 변화를 나타내었다(78.8 ±1.9°vs 73.2 ±1.9°; p=0.045). 위약 군의 경우는 그 어떠한 시간에서도 무릎 펼침에 대한 현저한 변화가 관찰되지 않았다. 또한 비변성 제2형 콜라겐 그룹은, 120일에 베이스라인(1.4 ±0.2 분)과 비교하여, 초기 관절 불편함을 겪을 때까지 더 오래 운동하는 것으로 관찰되었다(2.8 ±0.5 분, p=0.019). 반면에, 위약 그룹에 대해서는 그 어떠한 중요한 변화도 관찰되지 않았다. 본 연구 동안에 제품 관련된 부작용 사례는 관찰되지 않았다. 연구 결론에서, 위약 군에서는 1명의 대상자인 것에 비교하여, 비변성 제2형 콜라겐 코호트에서는 5명이 스텝밀 프로토콜 중에 또는 그 이후에도 아무런 통증도 보고하지 않았다(p=0.031, 방문 이내).

[0088] 이에 따라, 천연 제2형 콜라겐을 10.4 ±1.3 mg 포함하는 UC-II^® 브랜드의 비변성된 제2형 콜라겐 40 mg의 매일 보충은 잘 관용되었으며, 건강한 대상자에 대하여 개선된 무릎 관절 펼치기를 야기하는 것으로 결론내려졌다. 또한 UC-II는 통증이 없는 스트레스성 운동의 기간을 연장하고, 그와 같은 활동 중에 가끔 발생하는 관절 통증을 완화하는 능력을 가지는 것으로 나타났다.

[0089] 본 발명의 선호되는 구현예를 고려함에 따라, 발명을 실시함에 있어 다양한 수정 및 변형이 당업계에서 숙련된 자들에게 발생할 것으로 기대된다. 따라서, 본 발명의 범위에 가해질 수 있는 유일한 제한은 부가된 청구항에 보여지는 것들 뿐이다.

[0090] 약자

[0091] RA = 류마티스성 관절염; OA = 골관절염; ECM = 세포외 기질; TNF-α= 종양괴사인자-알파; IL-1β= 인터루킨-1 베타; IL-6 = 인터루킨-6; IL-4 = 인터루킨 4; IL-10 = 인터루킨-10; MMP = 기질 금속 단백질 분해효소; NF-κB = 활성화된 B 세포의 핵 인자-카파-경쇄 인헨서; MAPK = 미토겐 활성화된 단백질 키나아제; ERK = 세포외 수용체 키나아제; NO = 산화질소; TGF-β= 형질전환 생장 인자-베타; CIA = 콜라겐 유도된 관절염; KOOS = 무릎 손상 및 골관절염 결과 점수; ROM = 동작의 범위; MRI = 자기 공명 영상; GALT = 장 관련된 림프 조직; QoL = 삶의 질; MIP-1β= 대식세포 염증 단백질-1 베타; IP-10 = 인터페론 감마-유도된 단백질 10; T H = T 헬퍼 세포; WOMAC = 웨스턴 온타리오 및 맥마스터 대학 골관절염 인덱스; ACR = 류마티스학의 아메리카 컬리지.

[0092] 참조문헌

[0093] 1. Shek PN and Shephard RJ: Physical exercise as a human model of limited inflammatory response. Can J Physiol Pharmacol 1998, 76:589-97.

[0094] 2. Kiviranta I, Tammi M, Jurvelin J, et al.: Articular cartilage thickness and glycosaminoglycan distribution in the canine knee joint after strenuous running exercise. Clin Orthop Relat Res 1992:302-8.

[0095] 3. Guilak F: Biomechanical factors in osteoarthritis. Best Pract Res Clin Rheumatol 2011, 25:815-23.

[0096] 4. Kawamura S, Lotito K, and Rodeo SA: Biomechanics and healing response of the meniscus. Oper Tech Sports Med 2003, 11:68-76.

[0097] 5. Ramage L, Nuki G, and Salter DM: Signalling cascades in mechanotransduction: Cell-matrix interactions and mechanical loading. Scand J Med Sci Sports 2009, 19:457-69.

[0098] 6. Honda K, Ohno S, Tanimoto K, et al.: The effects of high magnitude cyclic tensile load on cartilage matrix metabolism in cultured chondrocytes. Eur J Cell Biol 2000, 79:601-9.

[0099] 7. Agarwal S, Deschner J, Long P, et al.: Role of NF-kappab transcription factors in antiinflammatory and proinflammatory actions of mechanical signals. Arthritis Rheum 2004, 50:3541-8. 25

[00100] 8. Berg V, Sveinbjornsson B, Bendiksen S, et al.: Human articular chondrocytes express chemR23 and chemerin; chemR23 promotes inflammatory signalling upon binding the ligand chemerin(21-157). Arthritis Res Ther 2010, 12:R228.

[00101] 9. Millward-Sadler SJ, Wright MO, Lee H, et al.: Integrin-regulated secretion of interleukin 4: A novel pathway of mechanotransduction in human articular chondrocytes. J Cell Biol 1999, 145:183-9.

[00102] 10. Millward-Sadler SJ, Wright MO, Davies LW, et al.: Mechanotransduction via integrins and interleukin-4 results in altered aggrecan and matrix metalloproteinase 3 gene expression in normal, but not osteoarthritic, human articular chondrocytes. Arthritis Rheum 2000, 43:2091-9.

[00103] 11. Doi H, Nishida K, Yorimitsu M, et al.: Interleukin-4 downregulates the cyclic tensile stress-induced matrix metalloproteinases-13 and cathepsin b expression by rat normal chondrocytes. Acta Med Okayama 2008, 62:119-26.

[00104] 12. Yorimitsu M, Nishida K, Shimizu A, et al.: Intra-articular injection of interleukin-4 decreases nitric oxide production by chondrocytes and ameliorates subsequent destruction of cartilage in instability-induced osteoarthritis in rat knee joints. Osteoarthritis Cartilage 2008, 16:764-71.

[00105] 13. van Meegeren ME, Roosendaal G, Jansen NW, et al.: IL-4 alone and in combination with IL-10 protects against blood-induced cartilage damage. Osteoarthritis Cartilage 2012, 20:764-72. 26

[00106] 14. Pufe T, Lemke A, Kurz B, et al.: Mechanical overload induces VEGF in cartilage discs via hypoxia-inducible factor. Am J Pathol 2004, 164:185-92.

[00107] 15. Ostrowski K, Rohde T, Asp S, et al.: Pro- and anti-inflammatory cytokine balance in strenuous exercise in humans. J Physiol 1999, 515 ( Pt 1):287-91.

[00108] 16. Allen JL, Cooke ME, and Alliston T: ECM stiffness primes the TGFbeta pathway to promote chondrocyte differentiation. Mol Biol Cell 2012, 23:3731-42.

[00109] 17. Bougault C, Aubert-Foucher E, Paumier A, et al.: Dynamic compression of chondrocyte-agarose constructs reveals new candidate mechanosensitive genes. PLoS One 2012, 7:e36964.

[00110] 18. Li TF, O'Keefe RJ, and Chen D: TGF-beta signaling in chondrocytes. Front Biosci 2005, 10:681-8.

[00111] 19. Donovan J and Slingerland J: Transforming growth factor-beta and breast cancer: Cell cycle arrest by transforming growth factor-beta and its disruption in cancer. Breast Cancer Res 2000, 2:116-24.

[00112] 20. Rosier RN, O'Keefe RJ, Crabb ID, et al.: Transforming growth factor beta: An autocrine regulator of chondrocytes. Connect Tissue Res 1989, 20:295-301.

[00113] 21. Roman-Blas JA, Stokes DG, and Jimenez SA: Modulation of TGF-beta signaling by proinflammatory cytokines in articular chondrocytes. Osteoarthritis Cartilage 2007, 15:1367-77. 27

[00114] 22. Loeser RF: Aging and osteoarthritis: The role of chondrocyte senescence and aging changes in the cartilage matrix. Osteoarthritis Cartilage 2009, 17:971-9.

[00115] 23. van Beuningen HM, van der Kraan PM, Arntz OJ, et al.: Protection from interleukin 1 induced destruction of articular cartilage by transforming growth factor beta: tudies in anatomically intact cartilage in vitro and in vivo. Ann Rheum Dis 1993, 52:185-91.

[00116] 24. Bagchi D, Misner B, Bagchi M, et al.: Effects of orally administered undenatured type II collagen against arthritic inflammatory diseases: A mechanistic exploration. Int J Clin Pharmacol Res 2002, 22:101-10.

[00117] 25. Trentham DE, Dynesius-Trentham RA, Orav EJ, et al.: Effects of oral administration of type II collagen on rheumatoid arthritis. Science 1993, 261:1727-30.

[00118] 26. Crowley DC, Lau FC, Sharma P, et al.: Safety and efficacy of undenatured type II collagen in the treatment of osteoarthritis of the knee: A clinical trial. Int J Med Sci 2009, 6:312-21.

[00119] 27. Tong T, Zhao W, Wu YQ, et al.: Chicken type II collagen induced immune balance of main subtype of helper T cells in mesenteric lymph node lymphocytes in rats with collagen-induced arthritis. Inflamm Res 2010, 59:369-77.

[00120] 28. Nagler-Anderson C, Bober LA, Robinson ME, et al.: Suppression of type II collagen-induced arthritis by intragastric administration of soluble type II collagen. Proc Natl Acad Sci U S A 1986, 83:7443-6. 28

[00121] 29. Brandtzaeg P: 'ABC' of mucosal immunology. Nestle Nutr Workshop Ser Pediatr Program 2009, 64:23-38; discussion 38-43, 251-7.

[00122] 30. Weiner HL, da Cunha AP, Quintana F, et al.: Oral tolerance. Immunol Rev 2011, 241:241-59.

[00123] 31. Aletaha D, Neogi T, Silman AJ, et al.: 2010 rheumatoid arthritis classification criteria: An american college of rheumatology/european league against rheumatism collaborative initiative. Arthritis Rheum 2010, 62:2569-81.

[00124] 32. Altman R, Asch E, Bloch D, et al.: Development of criteria for the classification and reporting of osteoarthritis. Classification of osteoarthritis of the knee. Diagnostic and therapeutic criteria committee of the american rheumatism association. Arthritis Rheum 1986, 29:1039-49.

[00125] 33. Likert R: A technique for the measurement of attitudes. Arch Psychol 1932, 22:1-55.

[00126] 34. Roos EM, Roos HP, Ekdahl C, et al.: Knee injury and osteoarthritis outcome score (KOOS)--validation of a swedish version. Scand J Med Sci Sports 1998, 8:439-48.

[00127] 35. Lorig K, Stewart A, Ritter P, et al.: Outcome measures for health education and other health care interventions. Outcome measures for health education and other health care interventions. Thousand Oaks, CA: SAGE Publications, Inc.; 1996.

[00128] 36. Hawkey C, Laine L, Simon T, et al.: Comparison of the effect of rofecoxib (a cyclooxygenase 2 inhibitor), ibuprofen, and placebo on the gastroduodenal mucosa of patients with osteoarthritis: A randomized, double-blind, placebo-29 controlled trial. The rofecoxib osteoarthritis endoscopy multinational study group. Arthritis Rheum 2000, 43:370-7.

[00129] 37. Pincus T, Koch GG, Sokka T, et al.: A randomized, double-blind, rossover clinical trial of diclofenac plus misoprostol versus acetaminophen in patients with osteoarthritis of the hip or knee. Arthritis Rheum 2001, 44:1587-98.

[00130] 38. Petrella RJ, DiSilvestro MD, and Hildebrand C: Effects of hyaluronate sodium on pain and physical functioning in osteoarthritis of the knee: A randomized, double-blind, placebo-controlled clinical trial. Arch Intern Med 2002, 162:292-8.

[00131] 39. Enright PL and Sherrill DL: Reference equations for the six-minute walk in healthy adults. Am J Respir Crit Care Med 1998, 158:1384-7.

[00132] 40. Perry J: Gait analysis: Normal and pathological function. Thorofare: SLACK Inc.; 1992.

[00133] 41. Viera AJ: Predisease: When does it make sense? Epidemiol Rev 2011, 33:122-34.

[00134] 42. Norkin CC and Levangie PK: Joint structure & function: A comprehensive analysis Philadelphia: F.A. Davis; 1992.

[00135] 43. Shah N: Increasing knee range of motion using a unique sustained method. N Am J Sports Phys Ther 2008, 3:110-3.

[00136] 44. Shelbourne KD, Biggs A, and Gray T: Deconditioned knee: The effectiveness of a rehabilitation program that restores normal knee motion to improve symptoms and function. N Am J Sports Phys Ther 2007, 2:81-9. 30

[00137] 45. Serrao PR, Gramani-Say K, Lessi GC, et al.: Knee extensor torque of men withearly degrees of osteoarthritis is associated with pain, stiffness and function. Rev Bras Fisioter 2012, 16:289-94.

[00138] 46. Heiden TL, Lloyd DG, and Ackland TR: Knee extension and flexion weakness in people with knee osteoarthritis: Is antagonist cocontraction a factor? J Orthop Sports Phys Ther 2009, 39:807-15.

[00139] 47. Karantanas AH, Magnetic resonance imaging findings in early osteoarthritis of the knee, in Touch Brief. 2007. p. 37-40.

[00140] 48. Park MJ, Park KS, Park HS, et al.: A distinct tolerogenic subset of splenic IDO(+)CD11b(+) dendritic cells from orally tolerized mice is responsible for induction of systemic immune tolerance and suppression of collagen-induced arthritis. Cell Immunol 2012, 278:45-54.

[00141] 49. Li MO and Flavell RA: TGF-beta: A master of all T cell trades. Cell 2008, 134:392-404.

[00142] 50. Coombes JL, Siddiqui KR, Arancibia-Carcamo CV, et al.: A functionally specialized population of mucosal CD103+ dcs induces Foxp3+ regulatory t cells via a TGF-beta and retinoic acid-dependent mechanism. J Exp Med 2007, 204:1757-64.

[00143] 51. Ilan Y, Zigmond E, Lalazar G, et al.: Oral administration of OKT3 monoclonal antibody to human subjects induces a dose-dependent immunologic effect in T cells and dendritic cells. J Clin Immunol 2010, 30:167-77. 31

[00144] 52. Caminiti L, Passalacqua G, Barberi S, et al.: A new protocol for specific oral tolerance induction in children with ige-mediated cow's milk allergy. Allergy Asthma Proc 2009, 30:443-8.

[00145] 53. Ben Ahmed M, Belhadj Hmida N, Moes N, et al.: IL-15 renders conventional lymphocytes resistant to suppressive functions of regulatory T cells through activation of the phosphatidylinositol 3-kinase pathway. J Immunol 2009, 182:6763-70.

[00146] 54. Courtenay JS, Dallman MJ, Dayan AD, et al.: Immunisation against heterologous type II collagen induces arthritis in mice. Nature 1980, 283:666-8.

[00147] 55. Pelletier JP, Martel-Pelletier J, and Abramson SB: Osteoarthritis, an inflammatory disease: Potential implication for the selection of new therapeutic targets. Arthritis Rheum 2001, 44:1237-47.

[00148] 56. Di Cesare Mannelli L, Micheli L, Zanardelli M, et al.: Low dose native type II collagen prevents pain in a rat osteoarthritis model. BMC Musculoskelet Disord 2013, 14:228.

[00149] 57. Muller RD, John T, Kohl B, et al.: IL-10 overexpression differentially affects cartilage matrix gene expression in response to TNF-alpha in human articular chondrocytes in vitro. Cytokine 2008, 44:377-85.

[00150] 58. Zouali M: Immunological tolerance: Mechanisms. eLS: John Wiley & Sons, Ltd; 2001. 32

[00151] 59. Chu CR, Williams AA, Coyle CH, et al.: Early diagnosis to enable early treatment of pre-osteoarthritis. Arthritis Res Ther 2012, 14:212.

[00152] 60. Marone PA, Lau FC, Gupta RC, et al.: Safety and toxicological evaluation of undenatured type ii collagen. Toxicol Mech Methods 2010, 20:175-89.

Claims

운동으로 유발된 관절 통증을 감소시키기에 유효한 양으로 비변성 제2형 콜라겐을 투여하는 것을 포함하는, 관절염이 없는 포유동물의 운동으로 유발된 관절 통증을 치료하는 방법.
관절 통증을 경험하기 전까지의 격렬한 운동의 기간을 연장시키기에 유효한 양으로 비변성 제2형 콜라겐을 투여하는 것을 포함하는, 관절염이 없는 포유동물의 관절 통증이 없는 격렬한 운동 기간을 연장하는 방법.
운동으로 유발된 관절 통증을 감소시키기에 유효한 양으로 비변성 제2형 콜라겐을 투여하는 것을 포함하는, 관절염이 없는 포유동물의 격렬한 운동 중의 관절 통증을 감소시키는 방법.
운동으로 유발된 관절 통증으로부터의 회복을 촉진하기에 유효한 양으로 비변성 제2형 콜라겐을 투여하는 것을 포함하는, 관절염이 없는 포유동물의 운동으로 유발된 관절 통증으로부터의 회복을 촉진하는 방법.
관절 통증을 감소시키기에 유효한 양으로 비변성 제2형 콜라겐을 투여하는 것을 포함하는, 관절염이 없는 포유동물의 기계적 스트레스 요인으로 인한 관절 통증을 치료하는 방법.
제5항에 있어서, 상기 기계적 스트레스 요인은 갑작스러운 부상인 것인 방법.
제5항에 있어서, 상기 기계적 스트레스 요인은 격렬한 운동인 것인 방법.
제1항 내지 제5항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 관절 통증은 무릎 통증인 것인 방법.
제8항에 있어서, 무릎 관절 통증의 감소는 동작 범위의 개선에 의하여 입증되는 것인 방법.
제8항에 있어서, 무릎 관절 통증의 감소는 무릎 관절 펼침의 개선에 의하여 입증되는 것인 방법.
제1항 내지 제5항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 포유동물은 인간인 것인 방법.
제1항 내지 제5항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 비변성 제2형 콜라겐은 1일 당 0.1 mg 내지 5000 mg의 용량으로 투여되는 것인 방법.
제1항 내지 제5항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 비변성 제2형 콜라겐은 1일 당 1 mg 내지 200 mg의 용량으로 투여되는 것인 방법.
제1항 내지 제5항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 비변성 제2형 콜라겐은 1일 당 5 mg 내지 40 mg의 용량으로 투여되는 것인 방법.
제1항 내지 제5항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 비변성 제2형 콜라겐은 경구 투여되는 것인 방법.
제1항 내지 제5항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 비변성 제2형 콜라겐은 캡슐, 정제, 추어블 검, 로젠게스, 분말로 이루어진 군으로부터 선택되는 투여 형태로 투여되는 것인 방법.
제1항 내지 제5항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 비변성 제2형 콜라겐은 시럽 또는 액상 현탁액으로 투여되는 것인 방법.
제1항 내지 제5항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 비변성 제2형 콜라겐은 식용 보충제의 형태로 투여되는 것인 방법.