KR20150047992A - Compositions for preventing and curing Scuticocilliatosis scutica in a cultivated flounder - Google Patents

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Abstract

The present invention relates to a composition for preventing and treating a scutica disease caused by scuticocilliatosis and, more specifically, to a composition for treating and preventing protozoal intestinal diseases of fish, including quaternary ammonium salt and bronopol (2-bromo-2-nitropropane-1,3-diol) as an active ingredient.

Description

넙치 양식 어류 스쿠치카병 방제용 및 치료용 조성물{Compositions for preventing and curing Scuticocilliatosis scutica in a cultivated flounder}Technical Field [0001] The present invention relates to a composition for preventing and treating scuticacid disease in flounder,

본 발명은 스쿠치카병 방제용 조성물에 관한 것으로 더 상세하게는 넙치 양식 어류 스쿠치카병 방제용 및 치료용 조성물에 관한 것이다.[0001] The present invention relates to a composition for controlling squid chicken disease, and more particularly, to a composition for controlling and treating squid chick disease of flounder.

스쿠치카증은 육상 수조에 양식하고 있는 넙치에 주로 발병하고, 1990년대 들어와 국내 넙치 양식에 있어 가장 심각한 피해를 유발하며, 원인체는 스쿠티카충으로서, 스쿠티카충이 넙치의 상피세포(하층)에 기생하여 궤양을 일으켜 주로 발생하는 질병이다. 최근 약 20여종의 스쿠치카충에 의해서 스쿠치카증이 발생 가능하고, 특히 국내 양식 넙치에서 문제시 되고 있는 종은 Philasterides dicentrarchi, Miamiensis avidus, 및 Uronema marinum등으로 알려져 있다. 감염된 넙치는 빈혈, 체중감소, 체색변화, 장염, 점액질 과다 분비, 비늘손실, 출혈 혹은 깍아진 흰색반점, 피부괴사 그리고 폐사등으로 이어진다. 감염된 넙치는 감염 장기, 즉 뇌, 눈, 근육, 아가미, 간, 신장, 장, 위 등의 장기 특이적인 병리학적인 반응을 보이다가 치사로 이어진다. 스쿠치카충은 원생동물의 섬모충 막구목에 속한다. 이 충은 물방울 모양으로써, 그 크기는 20∼40㎛로 전신에 섬모를 가지며, 수중에서 활발히 운동한다. 충체의 한쪽 끝에 세포구가 있다. 이 충은 원래 기생생활을 하는 것이 아니라 수조의 못바닥이나 벽에 상존하는 원생동물인데, 종묘생산시 먹이를 많이 투여하거나 과밀도 사육시에 대량 변식하여 넙치를 대량 폐사시킨다. 이 충은 어류의 체표와 지느러미에서 유발될 뿐만 아니라, 신장, 혈관 및 뇌조직에서도 다양하게 유발되며, 어류의 기생충과의 달리 혈관을 통하여 뇌조직까지 침입하여 기생하기 때문에 감염시 치료가 어렵다. 대부분 소성결합 조직의 파괴를 통하여 넙치를 폐사시킨다고 보고된다. 발생시기는 4월에서 6월 말까지 주로 치어기에 많이 발생한다. 감염이 발생하면, 밀식을 피하고, 유기물질이 수조 밑바닥에 남지 않도록 제거시켜 주는 것이 우선적인 대책이며, 스쿠치카충이 체표나 아가미 및 지느러미와 같은 외부에 기생했을 때는 100∼150 ppm 포르말린으로 1시간 약욕시키면 쉽게 구제시킬 수 있으나, 뇌에 기생된 것은 구제할 수 없는 것으로 알려져 있다. 또한, 포르말린의 독성 성분으로 인해 사용이 금지되었다. 상기의 질병을 막기 위해 포르말린 외에 과산화수소, 안정화 염소, 말라카이트 그린, 포름알데히드, 황상동과 같은 유독성 혹은 자극성 물질 등으로 약욕을 실시하였으나 소비자 및 어류의 안전성에 있어 문제를 일으킨다. 따라서, 최근 이러한 문제를 해결하기 위한 방안으로 독성이 약한 성분들을 이용한 스쿠티카충 살충제에 관한 연구가 이루어지고 있다. Sikuchikashi is mainly caused by the flounder that is cultured in the aquaculture tank, and it causes the most serious damage in the domestic flounder culture in the 1990s. The causative agent is Sukitika, and the Sukitika is the parasitic cell of the flounder (lower layer) It is a disease mainly caused by ulcers. Recently, about 20 species of Sukuchikaku can be caused by Sukuchikashi, especially in domestic cultured flounder species are known as Philasterides dicentrarchi, Miamiensis avidus, and Uronema marinum are known. Infected flounder leads to anemia, weight loss, body color change, enteritis, mucus hypersecretion, scaly loss, bleeding or shrinking white spots, skin necrosis and mortality. Infected flounder leads to lethal outbreaks with long term specific pathological responses such as infection organs, brain, eye, muscle, gill, liver, kidney, bowel and stomach. Sukuchaku belongs to the protozoa of the protozoa. This is a water droplet, 20 ~ 40㎛ in size, has cilia in the whole body, and actively in water. There is a cell sphere at one end of the trunk. This larvae are not original parasitic life but are protozoan that exist in the nail bottom or wall of aquarium. In the production of seedlings, it causes massive mutilation of the flounder by mass feeding or overdosing. It is not only caused by the body's flesh and fins, but also by the kidneys, blood vessels and brain tissues. Unlike fish parasites, it is invasive to the brain tissue through the blood vessels and is parasitic. It is reported that most flounder is killed by destruction of plastic connective tissue. The period of development is mainly from April to late June. When an infection occurs, it is a priority measure to avoid the smell and to remove the organic material from the bottom of the water tank. When it is parasitized on the outside such as the body surface, the gills and the fins, 100% It is easy to get rid of it, but what is parasitized in the brain is known to be irreversible. Also, its use was banned due to toxic components of formalin. In order to prevent the above diseases, formalin and other toxic or irritating substances such as hydrogen peroxide, stabilized chlorine, malachite green, formaldehyde, and sulfur are used to cause problems in safety of consumers and fishes. Therefore, in order to solve this problem, studies on the insecticidal action of Sucutica insecticides using weakly toxic components have been conducted.

종래의 방법으로는 한국등록특허 제0823558호(어류의 스쿠치카충 살충제), 한국등록특허 제0937037호(안정성 및 수용성이 향상된 비타민B1을 함유하는 항 스쿠티카충 제제 및 어병유발 미생물에 대한 항균 조성물), 한국등록특허 제0784917호(안정성 및 수용성이 향상된 비타민B1을 함유하는 항 스쿠티카충 제제 및 어병유발 미생물에 대한 항균 조성물), 일본등록특허 제4820662호(천연 식물 추출 물건을 이용한 어류 기생충 구충용 조성물), 한국등록특허 제0373147호(스쿠치카충 감염증의 치료제), 일본등록특허 제3882939호(물고기의 스크치카증 치료방법 및 예방방법) 등이 있다.Korean Patent No. 0823558 (aquatic insecticidal insecticide of fish), Korean Patent No. 0937037 (an antimicrobial composition for an antiseptic composition containing vitamin B1 with improved stability and water solubility, Korean Patent No. 0784917 (antimicrobial composition for antibacterial and microorganism-causing microorganisms containing vitamin B1 with improved stability and water solubility), Japanese Patent No. 4820662 (Japanese Patent Application No. 4820662 Korean Patent No. 0373147 (therapeutic agent for squid cichorific infections), Japanese Patent No. 3882939 (method for treating and preventing scurvy of fish), and the like.

그러나, 아직까지 스쿠치카병 방제용 및 치료용 조성물은 초기단계에 있다. 이에 본 발명은 넙치 양식 어류 스쿠치카병 방제용 및 치료용 조성물에 관한 것으로서, 넙치에 기생하여 질병을 유발하는 섬모충(ciliates)의 일종인 스쿠치카 충에 대한 방제용 조성물 및 방제방법을 제공하는 것을 목적으로 한다. 그러나 이러한 과제는 예시적인 것으로, 이에 의해 본 발명의 범위가 한정되는 것은 아니다.However, the composition for controlling and treating scurvy disease is still in an early stage. Accordingly, the present invention relates to a composition for controlling and treating squid chick diseases of the flounder, and it is intended to provide a composition for controlling a squid squid, which is a kind of ciliates causing parasitism in a flounder, and a method of controlling the same The purpose. However, these problems are exemplary and do not limit the scope of the present invention.

본 발명의 일 관점에 따르면, 점액제거제를 포함하는 제1조성물; 및According to one aspect of the present invention, there is provided a composition comprising: a first composition comprising a mucoadhesive agent; And

항미생물제를 포함하는 제2조성물을 포함하는 어류의 원충성 질병 치료용 키트가 제공된다.A kit for treating a prostatic disease of a fish comprising a second composition comprising an antimicrobial agent is provided.

상기 키트에 있어서, 상기 제1조성물은 상기 점액제거제가 정제수에 용해되고, 상기 제2조성물은 상기 항미생물제가 정제수에 용해된 용액인, 키트일 수 있다.In the kit, the first composition may be a kit in which the mucolage remover is dissolved in purified water, and the second composition is a solution in which the antimicrobial agent is dissolved in purified water.

상기 키트에 있어서, 상기 점액제거제는 계면활성제인, 키트일 수 있다.In the kit, the mucolytic agent may be a surfactant.

상기 키트에 있어서, 상기 계면활성제는 음이온성 계면활성제, 양이온성 계면활성제 또는 비이온성 계면활성제 일 수 있다. In the kit, the surfactant may be an anionic surfactant, a cationic surfactant, or a nonionic surfactant.

상기 키트에 있어서, 상기 양이온성 계면활성제는 4급 암모늄염일 수 있다.In the kit, the cationic surfactant may be a quaternary ammonium salt.

상기 키트에 있어서, 상기 4급 암모늄염은 벤잘코늄염 및 디알킬 디메틸 암모늄염의 혼합물일 수 있다.In the kit, the quaternary ammonium salt may be a mixture of a benzalkonium salt and a dialkyldimethylammonium salt.

상기 키트에 있어서, 상기 제2조성물은 색소를 추가적으로 포함하는, 키트일 수 있다.In the kit, the second composition may further comprise a dye.

상기 키트에 있어서, 상기 항미생물제는 항원생생물 제제(antiprotozoan agent), 항세균제(antibacterial agent) 또는 항진균제(antifungal agent)인, 키트일 수 있다.In the kit, the antimicrobial agent may be a kit that is an antiprotozoan agent, an antibacterial agent, or an antifungal agent.

상기 키트에 있어서, 상기 항원생생물 제제는 메트로니다졸(metrodinazole), 에플로르니틴(eflornithine), 푸라졸리돈(furazolidone), 멜라르소프롤(melarsoprol), 오르니다졸(ornidazole), 피리메타민(pyrimethamine), 티니다졸(tinidazole), 파로마이신 설페이트(paromycine sulfate), 히드록시클로로퀸(hydroxychloroquine), 이오도퀴놀(iodoquinol), 또는 펜타미딘(pentamidine) 일 수 있다. The kit of any preceding claim, wherein the antigenic aqueous formulation is selected from the group consisting of metrodinazole, eflornithine, furazolidone, melarsoprol, ornidazole, pyrimethamine, ), Tinidazole, paromycine sulfate, hydroxychloroquine, iodoquinol, or pentamidine.

상기 키트에 있어서, 상기 항세균제는 테트라사이클린, 페니실린, 독시사이클린, 시프로플로사신, 아지트로마이신, 에리트로마이신, 스트렙토마이신, 젠타마이신, 반코마이신, 세팔로스포린, 클로람페니콜, 또는 브로노폴(bronopol) 일 수 있다.The kit according to claim 1, wherein the antibacterial agent is selected from the group consisting of tetracycline, penicillin, doxycycline, ciprofloxacin, azithromycin, erythromycin, streptomycin, gentamicin, vancomycin, cephalosporin, chloramphenicol, .

본 발명의 일 관점에 따르면, 점액제거제를 어류 사육 수조에 처리하여 어류 아가미 및 피부 등의 점액질을 제거하는 점액질 제거단계; 및 상기 어류 사육 수조에 항미생물 제제를 처리하는 단계를 포함하는 원생생물 제거단계를 포함하는, 어류의 원충성 질병의 치료 및 예방방법을 제공한다.According to one aspect of the present invention, there is provided a method of removing mucus from a fish, such as fish gills and skin, And a step of treating the fish-breeding tank with an antimicrobial agent, wherein the step of removing the protist organism comprises the step of treating the fish-breeding tank with an antimicrobial agent.

상기 치료 및 예방방법에 있어서, 상기 점액질 제거단계 이후 상기점액질 제거제를 수조에 처리한 후 물을 교환하여 상기 점액질 제거제를 제거하는 단계가 추가되는 어류의 원충성 질병의 치료 및 예방방법일 수 있다.In the above-mentioned treatment and prevention method, the step of treating the mucolytic agent after the mucosubstance removal step and the step of removing the mucolytic agent by exchanging the water after the mucolytic agent is added to the water tank may be a treatment and prevention method of the protozoan disease of fish.

상기 치료 및 예방방법에 있어서, 상기 원생생물 제거단계 이후 물을 교환하여 상기 항미생물 제제를 제거하는 단계를 추가적으로 포함하는 어류의 원충성 질병의 치료 및 예방방법일 수 있다.In the above-mentioned treatment and prevention method, the method may further include a step of removing water after the step of removing the protist organisms to remove the antimicrobial agent.

또한 상기 치료 및 예방방법에 있어서, 상기 어류는 스쿠치카(Scutica) 원충에 감염 된 것일 수 있다.Further, in the above-mentioned treatment and prevention method, the fish may be infected with Scutica protozoa.

본 발명의 또 다른 일 관점에 따르면, 브로노폴(bronopol)을 유효성분으로 함유하는 어류의 원충성 질병의 치료 및 예방용 조성물이 제공된다.According to another aspect of the present invention, there is provided a composition for treating and preventing a prostatic disease of a fish containing bronopole as an active ingredient.

본 발명의 또 다른 일 관점에 따르면, 약학적으로 유효한 양의 브로노폴을 수조에 처리하는 단계를 포함하는 어류의 원충성 질병의 치료 및 예방방법이 제공된다.According to another aspect of the present invention, there is provided a method for treating and preventing a protozoal disease in a fish, comprising treating a pharmaceutically effective amount of bronopol in a water tank.

본 발명의 일 실시예에 따른 상기 조성물은 어류가 서식 중인 수조에 투입되거나, 감염된 어류로의 경구투여 또는 환부로의 국부투여를 통해 투여될 수 있다. The composition according to an embodiment of the present invention may be administered to a fish tank in which the fish is inhabited, orally or by local administration to the infected fish.

본 발명의 일 실시예에 따른 조성물의 약학적으로 유효한 양은 감염된 어류의 종류, 월령, 증상의 정도에 따라 달라질 수 있으나, 약 1 내지 2000 ppm일 수 있고, 10 내지 1000 ppm일 수 있으며, 50 내지 500 ppm일 수 있다.The pharmaceutically effective amount of the composition according to an embodiment of the present invention may vary from about 1 to 2000 ppm, may range from 10 to 1000 ppm, and may range from about 50 to about 1000 ppm, depending on the type of fish, age, 500 ppm.

본 발명자들은 난치성 어류 질환의 원인충인 스쿠치카의 방제가 어려운 원인이, 이들 스쿠치카 섬모충이 어류의 아가미 및 체표의 표면을 덮고 있는 점막층에 서식하여, 항미생물 제제가 이들 스쿠치카 섬모충에 제대로 전달되지 않기 때문일 것이라는 가설을 수립하였다.The present inventors have found that it is difficult to control the cause of refractory fish diseases such as squid chickens, because these squid chickens live in the mucosal layer covering the surface of the gills and the gills of fishes, and the antimicrobial agent is not properly transmitted to these squid chickens It is not possible to do so.

이에, 상기 가설을 입증하기 위해, 본 발명자들은 우선 어류의 아가미 및 체표 표면의 점막층을 제거할 수 있는 계면 활성제의 일종인 4급 암모늄 수용액(으로 스쿠치카충이 감염된 어류가 들어 있는 수조에 1차 처리하고, 일정 기간 경과 후 상기 4급 암모늄 수용액을 제거한 후(제1단계), 스쿠치카 섬모충을 제거할 수 있는 항미생물 제제의 일종인 브로노폴 수용액을 상기 수조에 처리하고, 일정 기간 경과 후 상기 브로노폴 수용액을 제거하였으며(제2단계), 이를 하루에 한 차례씩 수일간 반복한 결과, 스쿠치카충에 감염된 어류의 상처를 완치시킬 수 있음을 확인하였다.In order to prove the above hypothesis, the present inventors firstly applied a quaternary ammonium aqueous solution (a kind of a surfactant capable of removing the gills and the mucosal layer on the surface of the body surface) to primary treatment After the lapse of a predetermined period of time, the aqueous quaternary ammonium solution is removed (Step 1), the aqueous solution of bronopol that is a kind of antimicrobial agent capable of removing the squid cuculars is treated in the water tank, (Step 2), which was repeated once a day for several days. As a result, it was confirmed that the wound of the fish infected with Sukuchika can be cured.

따라서, 본 발명에 의한 점액질 제거제를 1차 처리하여 어류 아가미 및 체표 의 점액층을 제거하고, 이어 항미생물 제제를 2차 처리함으로써 감염성 원생생물을 제거하는 2단계 처치방법은 스쿠치카충을 포함한 어류의 점액층에 서식하는 감염성 미생물에 의한 질병의 치료 및 예방에 매우 효과적임을 알 수 있다. Therefore, the two-step treatment method for removing infectious protists by first treating the mucolytic agent according to the present invention to remove fish gills and the mucous layer of the body surface, and then secondarily treating the antimicrobial agent, It is very effective in the treatment and prevention of diseases caused by infectious microorganisms living in the mucous layer.

본 발명의 일 실시 예에서는 비록 상기 점액질 제거제로 염화벤잘코니움 및 염화디알킬디메틸암모늄과 같은 특정 4급 암모늄염 및 항미생물제제로 브로노폴만을 사용하였으나, 이들 외에도 점막제거제로 다른 2급 아민, 3급 아민, 4급 아민, 소디움라우릴셀페이트(SDS), Triton X-100, NP-40, 폴리옥시에틸렌 글리콜(polyoxyethylene glycol), 폴리옥시프로필렌 글리콜(polyoxypropylene glycol), 직쇄 알킬벤젠설폰산염, 알파올레핀설폰산염, 알킬황산에스테르염, 폴리옥시에칠렌 알킬에스테르황산염, 2급 알칸설폰산염, 알파설포지방산에스테르염 디알킬디메칠암모늄염, 이미다졸리움염, 알킬 디메칠벤질 암모늄염, 폴리옥시에칠렌알킬에테르, 알킬 디메칠 아민옥사이드, 지방산 알카놀아마이드, 알킬폴리글루코사이드, 리옥시에칠렌알킬폴페닐에테르, 알킬 베테인, 알킬설포베테인 등 다양한 계면활성제 그리고, 붕산, 클로로헥시딘 클루코네이트(chlorohexidine gluconate), 폴리헥사니드(polyhexanide), 비포나졸, 부토코나졸, 알바코나졸, 벤조산(benzoic acid), 시클로피록스(ciclopirox), 또는 플루시토신(flucytosine) 등의 다양한 저독성 항미생물 제제가 대체물로 사용될 수 있다. In one embodiment of the present invention, specific quaternary ammonium salts such as benzalkonium chloride and dialkyldimethylammonium chloride as the mucolytic agent and zerobronophile as an antimicrobial agent were used, but in addition to these, other secondary amines, 3 (SDS), Triton X-100, NP-40, polyoxyethylene glycol, polyoxypropylene glycol, linear alkylbenzenesulfonate, alpha-olefins, An alkyl sulfonate, an alkyl sulfonate, an alkyl sulfate ester salt, a polyoxyethylene alkyl ester sulfate, a secondary alkane sulfonate, an alpha sulfo fatty acid ester salt dialkyldimethylammonium salt, an imidazolium salt, an alkyldimethylbenzylammonium salt, Alkyldimethylamine oxide, fatty acid alkanolamide, alkylpolyglucoside, dioxyethylene alkylpolyphenyl ether, alkylbetaine, A variety of surfactants such as phobetaine and various surfactants such as boric acid, chlorohexidine gluconate, polyhexanide, nonpona azole, butoconazole, albaconazole, benzoic acid, cyclopirox ciclopirox, or flucytosine may be used as alternatives.

상기한 바와 같이 이루어진 본 발명의 일 실시예에 따르면 스쿠치카 감염 어류의 사망률을 효과적으로 감소시킬 수 있어, 본 발명은 스쿠치카 감염증의 예방 및 치료용 조성물 및 방법으로 매우 유용하다. 물론 이러한 효과에 의해 본 발명의 범위가 한정되는 것은 아니다.According to one embodiment of the present invention as described above, the mortality rate of infected squid chickens can be effectively reduced, and the present invention is very useful as a composition and method for prevention and treatment of squid chick infections. Of course, the scope of the present invention is not limited by these effects.

도 1은 벤잘코늄클로라이드을 포함하는 치료 약제 A용액에 대한 안정성시험 결과를 나타낸 그래프이다.
도 2는 브로노폴을 포함하는 치료 약제 B용액에 대한 안정성시험 결과를 나타낸 그래프이다.
도3은 브로노폴을 포함하는 치료 약제 A 및 B용액에 대한 유효성시험 결과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 브로노폴을 포함하는 치료 약제 B용액의 유효성시험에 대한 B용액 처리에 따른 스쿠치카의 형태 관찰한 사진이다.
도 5는 스쿠치카 감염 넙치를 이용한 치료 약제 A용액과 함께 치료 약제 B용액 처리에 따른 일자 경과별 스쿠치카 감염 증상이 완화된 넙치의 사진이다.
도 6은 스쿠치카 감염 넙치를 이용한 치료 약제 B용액 단독 처리에 따른 일자 경과별 시쿠치카 감염 증상이 완화된 넙치의 사진이다.
도 7은 실제로 양식장에서 스쿠치카에 감염된 벤잘코늄클로라이드을 포함하는 치료 약제 A용액 및 브로노폴을 포함하는 치료 약제 B용액을 처리한 후 11일 동안 시간 경과에 따른 사망률을 나타낸 그래프이다.
1 is a graph showing the stability test results of a therapeutic agent A solution containing benzalkonium chloride.
2 is a graph showing the stability test results of the therapeutic agent B solution containing bronopol.
FIG. 3 is a graph showing the results of the efficacy test on the therapeutic agents A and B solutions containing bronopol.
Fig. 4 is a photograph showing the appearance of scutchica according to the treatment with solution B for the efficacy test of the therapeutic agent B solution containing bronopol. Fig.
Fig. 5 is a photograph of a flounder in which the symptoms of infection with Sukuzaka were alleviated by treatment with a solution B of treatment agent B together with a treatment agent A solution using Sukikica infected flounder.
Fig. 6 is a photograph of a flounder in which the symptom of infection with Shikuchika was alleviated by a single treatment of the treatment agent B solution using a squid chick infected flounder.
7 is a graph showing the mortality rate over time for 11 days after treatment of the therapeutic agent A solution containing benzalkonium chloride infected with scutchica in a farm and the therapeutic agent B solution containing bronopolol.

용어의 정의:Definition of Terms:

4급 암모늄염(quaternary ammonium salt): 질소원자에 수소 대신 네 개의 기능기가 부착된 암모늄염(NR1R2R3R4+A-)을 의미하고(상기 식에서 R1 내지 R4는 각각 독립적으로 알킬 또는 아릴기를 의미하고 A-는 음이온을 의미한다), 상기 A- 음이온은 할로겐 이온일 수 있고, 상기 할로겐 이온은 불소이온(fluoride), 염소이온(chloride), 브롬이온(bromide) 또는 요오드이온(iiode)일 수 있다. 주로 세척제로 사용된다.Quaternary ammonium salt refers to an ammonium salt (NR1R2R3R4 + A-) in which four functional groups are attached to a nitrogen atom in place of hydrogen, wherein R1 to R4 each independently represent an alkyl or aryl group, and A- represents an anion ), The A-anion may be a halogen ion, and the halogen ion may be fluoride, chloride, bromide, or iodide. It is mainly used as a cleaning agent.

디알킬 디메틸 암모늄염(dialkyl dimethyl ammonium salt): 상기 4급 암모늄염의 일종으로 질소원자에 두 개의 메틸기와 두 개의 알킬기가 부착된 암모늄염으로서 상기 알킬기는 통상적으로 탄소수 10개를 갖는다Dialkyl dimethyl ammonium salt: a kind of the quaternary ammonium salt, an ammonium salt having two methyl groups and two alkyl groups attached to a nitrogen atom, and the alkyl group usually has 10 carbon atoms

벤잘코늄염(benzalkonium salt): 알킬 디메틸 벤질암모늄염(alkyl dimethyl benzyl ammonium salt)로서 4급 암모늄염의 일종으로서 질소원자에 벤질기 하나, 메틸기 두 개 그리고 통상 탄소수 8 내지 18개의 알킬기가 하나 부착된 형태를 띤다. 인체에 대한 독성이 적은 항균제 기능을 갖는 것으로 알려져 있다.Benzalkonium salt: An alkyl dimethyl benzyl ammonium salt, which is a kind of quaternary ammonium salt, in which one benzyl group, two methyl groups and usually eight to eighteen carbon atoms are attached to the nitrogen atom . It is known that it has antibacterial function which is less toxic to human body.

브로노폴(bronopol): C3H6BrNO4의 화학식을 갖고 하기와 같은 구조식을 갖는 화합물로서, IUPAC 명명법에 따르면 2-bromo-2-nitropropane-1,3-diol이며, 통상적으로 항균제 및 보존제로 사용되어 오고 있다:Bronopol: a compound having the formula C 3 H 6 BrNO 4 and having the formula: 2-bromo-2-nitropropane-1,3-diol according to the IUPAC nomenclature and is usually an antimicrobial agent and preservative It has been used:

Figure pat00001
.
Figure pat00001
.

발명의 구체적인 실시태양:Specific embodiments of the invention:

이하, 실시예 및 실험예를 통해 발명을 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 이하에서 개시되는 실시예 및 실험예에 한정되는 것이 아니라 서로 다른 다양한 형태로 구현될 수 있는 것으로, 이하 실시예 및 실험예는 본 발명의 개시가 완전하도록 하며, 통상의 지식을 가진 자에게 발명의 범주를 완전히 알려주기 위해 제공되는 것이다.Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to Examples and Experimental Examples. It should be understood, however, that the invention is not limited to the disclosed embodiments and examples, but may be embodied in many different forms and should not be construed as limited to the exemplary embodiments set forth herein. It is provided to fully inform the scope of the invention to the person.

실시예 1: 치료 약제의 A 및 B용액의 구성Example 1: Composition of Solutions A and B of Therapeutic Agents

본 발명에서 스쿠치카병의 치료 약제는 각각의 다른 두 약물(A 및 B 용액)을 사용하여 시너지 효과를 내면서 스쿠치카충을 사멸하도록 디자인되어 있다.In the present invention, the therapeutic agent for scutichaca disease is designed to kill the scuticaccharide while synergizing with each of the other two drugs (solutions A and B).

1-1: 치료 약제 A용액1-1: Therapeutic Agent Solution A

치료 약제 A용액은 어류의 아가미의 점액질층을 제거하기 위한 용도로 제조되었다. 상기 점액질층을 제거하기 위한 점액질 제거제로 다양한 종류의 계면활성제가 사용되는데, 본 발명의 일 실시예에서는 항균 활성(antiseptic activity)도 가지고 있는 4급 암모늄염(quaternary ammonium salt)를 포함시켰으며, 상기 4급 암모늄으로 염화디알킬디메틸 암모늄 및 염화 벤잘코늄을 사용하였다. 상기 4급 암모늄염은, 일반적으로 청소 혹은 소독제 목적으로 사용된다. 특히 Flexibacter sp., 같은 활주세균에 감염되어 발생하는 세균성 아가미 질병의 치료에 사용된다. 이 질병에 감염되면 세균은 아가미가 점액질 필름에서 증식하게 되고, 아가미 상피세포층의 이러한 자극은 점액질분비를 더 증가시키는 것으로 알려져 있다. The therapeutic agent solution A was prepared for removing the mucous layer of the gills of the fish. Various types of surfactants are used as a mucolytic agent for removing the mucus layer. In one embodiment of the present invention, a quaternary ammonium salt having an antiseptic activity is included, Dialkyldimethylammonium chloride and benzalkonium chloride were used as super ammonium. The quaternary ammonium salt is generally used for cleaning or disinfecting purposes. In particular, Flexibacter sp. , Is used to treat bacterial gill diseases caused by infection with the same sliding bacteria. When infected with this disease, the germs multiply in the mucous membrane, and this stimulation of the gill epithelium layer is known to further increase mucus secretion.

1-2: 치료 약제 B용액1-2: Therapeutic agent B solution

치료 약제 B용액은 섬모충인 스쿠치카충의 제거를 위해 고안한 것으로서, 본 발명의 일 실시예에서는 새로운 친환경적인 화학제인 브로노폴(Bronopol, 영국약전 수재)을 사용하였다. 상기 브로노폴은 종래에 그람음성 세규에 대한 억제능력이 있는 것으로 보고됐고, 상대적으로 인체에 큰 독성이 없는 것으로 알려져, 샴푸. 액셍 의약품 등의 생활용품에 대한 보존제(preservative), 곰팡이에 대한 소독제로 사용되어 왔는데, 특히, Amyloodinium ocellatum에 의한 Velvet 감염증에서 장시간 노출시켰을 경우 피낭체(tomonts)가 쌍편모자(dinospores)로 발생하는 것을 멈추게 하고, Ichthyophthirius multifiliis의 감염으로 발생하는 담수어의 백점병에서 자유 유영기의 유생[피낭체(tomonts), 낭자(cysts) 및 침입자충(theronts)]에 강력한 살충/세포독성효과를 보이는 것으로 알려져 있다. 고농도 투약농도인 20, 50 및 100 mg/L에서 단시간 처리(약 30분)하였을 때, 자유 유영기의 유생(피낭체, 낭자 및 침입자충)이 현저히 죽거나 성충으로 발생하는 경우가 현저히 늦어졌다. 반면에 저농도(e.g. 1 mg/L)로 장시간 투여 하였을 경우 감염성 유충인 침입자충(theronts)의 생존이 현저히 감소되었다. The Therapeutic Agent B solution was designed for the removal of the ciliate, Scuticaci, in one embodiment of the present invention, a new environmentally friendly chemical, Bronopol (British Pharmacopoeia) was used. The bloopol has been reported to have the ability to inhibit Gram-negative sebaceous glands in the past, and is said to be relatively non-toxic to the human body, shampoo. In particular, it has been reported that when long-term exposure to Velvet infection caused by Amyloodinium ocellatum results in the formation of dinospores as bilateral caps (dinospores) It is known that it exhibits a potent insecticidal / cytotoxic effect on free-range larvae (tomonts, cysts, and theronts) in hundreds of freshwater fish caused by infection with Ichthyophthirius multifiliis . The short - term treatment (about 30 minutes) at 20, 50 and 100 mg / L, which are high dose concentrations, markedly delayed the larvae of the free - floating stage (cones, On the other hand, survival of infectious larvae (theronts) was significantly reduced by prolonged administration at low concentration (eg 1 mg / L).

본 발명자들은 스쿠치카충의 주요 감염부위가 아가미 및 체표 이고, 아가미에 감염된 스쿠치카충의 방제가 가장 어렵다는 점으로부터 넙치 아가미 및 체표 의 점액질이 스쿠치카충을 둘러싸서 보호하는 역할을 수행할 것이라는 가설을 수립하였다. 이에, 우선 넙치 아가미의 점액질을 제거할 수 있는 상기 약제 A용액을 선처리하여 넙치 아가미에 존재하는 점액질을 제거한 후, 스쿠치카충을 사멸시키거나 성충으로의 발생을 억제할 수 있는 약제 B용액을 후처리할 경우, 스쿠치카충 감염증의 치료 및 예방이 가능할 것으로 예측하였다. 이에 상기 약제 A용액과 약제 B용액의 순차처리 방법이 실제 스쿠치카충 감염증의 치료 및 예방에 효과적인지 이후 실험예를 통해 검증하였다.The inventors of the present invention have hypothesized that the main infecting sites of Sukuchikari are the gills and scales and that the control of Sukuchakus infected with gills is the most difficult, Respectively. First, the solution of the drug A capable of removing the mucus from the flounder gill was pre-treated to remove the mucilage present in the flounder gill, and then the solution of the drug B capable of inhibiting the occurrence of adult fungi was killed It was predicted that treatment and prevention of squid cichotic infection would be possible. Therefore, it was verified through experimental examples that the sequential treatment method of the solution A and the solution B is effective for the treatment and prevention of the actual infection with scuticaccharide.

실험예 1: 안전성(LCt50) 시험 Experimental Example 1: Safety (LCt50) test

본 발명에서 안정성시험(LCt50, LCt: Lethal Concentration time)을 위하여 표 1에서 나타난 바와 같이 10~15 g의 체중, 8~12 cm의 체장의 질병이 발생하지 않은 건강한 넙치(Paralichthys olivaceus) 9~10 마리를 각 실험 조건에 따라 총 76미를 사용하였다. 어류의 사양조건은 동일하며, 30 L의 해수가 포함된 수조에서 수행하였다. For the stability test (LCt 50 , LCt: Lethal Concentration time) of the present invention, as shown in Table 1, a healthy flounder ( Paralichthys olivaceus ) 9 to 10 g body weight and 8-12 cm- Ten dogs were used according to each experimental condition. The specifications of the fish were the same and were carried out in a water tank containing 30 L of seawater.

안정성시험을 위한 넙치마리수 및 용액의 처치용량 Treatment capacity of flounder and solution for stability test 시험군Test group 처치 용량Treatment capacity 마리(미)수Mari (US) number
치료 약제 A용액 안전성

Therapeutic Agent A Solution Safety
30ppm30ppm 1010
50ppm50 ppm 1010 100ppm100ppm 1010 A 대조군A control group 무처치No treatment 1010
치료 약제 B용액 안전성

Therapeutic Agent B Solution Safety
300ppm300ppm 99
600ppm600ppm 99 1,000ppm1,000ppm 99 B 대조군B control 무처치No treatment 99 system 7676

표 2에서 나타난 바와 같이, 치료 약제 A용액에 대한 넙치 안정성 실험의 결과를 살펴보면, A용액은 30 ppm에서는 15시간까지 모두 살았고, 50 ppm에서는 12시간 및 13시간 경과 후에 1마리 죽었고, 14시간 및 14.5시간 경과 후에 5마리, 15시간 경과 후에는 나머지 미수 전부 죽었다. 100 ppm에서 6시간 경과 후 4마리가 죽고 8시간이 경과한 후에는 나머지 미수 모두 폐사하였다. 대조군인 A용액의 무처치군에서는 폐사가 없었다. 도 1은 치료 약제 A용액에 대한 안정성시험에 대한 결과를 나타내는 그래프로서, A 용액을 각 용량별로 처리시 시간 경과에 따른 생존 넙치의 마리수를 나타낸 그래프이다.As shown in Table 2, the results of the fluke stability test for the therapeutic agent A solution were as follows: the solution A was stored for up to 15 hours at 30 ppm, and one died at 12 hours and 13 hours after 50 ppm, After the lapse of 14.5 hours, 5 mice died and all the remaining untreated mice died after 15 hours. After 6 hours at 100 ppm, 4 animals died and after 8 hours, all the other animals died. There was no mortality in the untreated group of control A solution. FIG. 1 is a graph showing the results of the stability test for the therapeutic agent A solution, and is a graph showing the number of flounder in the flounder according to the passage of time when the solution A was treated for each dose.

A용액의 처치용량과 시간 경과에 따른 생존 넙치의 마리수A solution and survival rate of flounder 경과시간(hr)
처치농도
Elapsed time (hr)
Treatment concentration
초기
Early
2
hr
2
hr
4
hr
4
hr
6
hr
6
hr
6.5
hr
6.5
hr
7
hr
7
hr
8
hr
8
hr
12
hr
12
hr
13
hr
13
hr
14
hr
14
hr
14.5hr
14.5 hr
15
hr
15
hr
A-30 ppmA-30 ppm 1010 1010 1010 1010 1010 1010 1010 1010 1010 1010 1010 1010 A-50 ppmA-50 ppm 1010 1010 1010 1010 1010 1010 1010 99 99 55 55 00 A-100 ppmA-100 ppm 1010 1010 1010 66 66 1One 00 00 00 00 00 00 무처치No treatment 1010 1010 1010 1010 1010 1010 1010 1010 1010 1010 1010 1010

표 3에서 나타난 바와 같이, 치료 약제 B용액에 대한 넙치 안정성 실험의 결과를 살펴보면, B용액은 300 ppm에서는 28시간 경과 후에 1마리 죽었고, 600 ppm에서는 18시간 경과 후에 1마리 죽었고, 22시간 경과 후에 8마리, 26시간 경과 후에 4마리, 28시간 경과 후에 6마리 죽었다. 1000 ppm에서는 14시간 및 15시간 경과 후에 2 리 죽었고, 18시간 경과 후에 8마리 죽었고, 20시간 경과 후에 나머지 미수 전부 죽었다. 대조군인 B용액의 무처치군에서는 폐사가 없었다. 도 2는 B용액을 각 처치 용량별로 시간 경과에 따른 생존 넙치의 마리수를 나타낸 그래프이다. 폐사되는 농도의 치료 약제 A용액 및 B용액을 각각의 처치 용량군에 대하여 처치한 후 LCt50를 구한다. As shown in Table 3, the results of the flounder stability test for the therapeutic agent B solution were as follows. One solution died after 28 hours at 300 ppm, one died after 18 hours at 600 ppm, and after 22 hours 8 dogs, 4 dogs after 26 hours, and 6 dogs after 28 hours. At 1000 ppm, 2 liters died after 14 hours and 15 hours, 8 died after 18 hours, and all remaining untreated after 20 hours. There was no mortality in the untreated group of control B solution. FIG. 2 is a graph showing the number of live flounder flocks according to time for each treatment capacity of solution B; FIG. After treating the treated drug solutions A and B with the dead dose, treat each treatment dose group and obtain LCt50.

종래의 방법을 이용하여 LCt50를 확인한 결과, 치료 약제 A용액은 50 ppm에서 14시간 LCt50, 100ppm에서는 6시간 40분 LCt50으로 계산되었다(Reed et al., Am. J. Epidemiol. 27(3):493-497, 1938).LCt 50 was determined using conventional methods and the therapeutic agent A solution was calculated as LCt 50 at 50 ppm for 14 hours and LCt 50 for 6 hours and 40 minutes at 100 ppm (Reed et al., Am. J. Epidemiol. 27 3): 493-497, 1938).

B용액의 처치용량과 시간 경과에 따른 생존 넙치의 마리수B solution and survival rate of flounder 경과시간(hr)
처치농도
Elapsed time (hr)
Treatment concentration
초기Early 2hr2 hr 4hr4hr 6hr6hr 7hr7hr 8hr8hr 12hr12hr 13hr13hr 14hr14hr 15hr15hr 18hr18hr 20hr20hr 21hr21hr 22hr22hr 26hr26hr 28hr28hr
B-300 ppmB-300 ppm 1010 1010 1010 1010 1010 1010 1010 1010 1010 1010 1010 1010 1010 1010 1010 99 B-600 ppmB-600 ppm 1010 1010 1010 1010 1010 1010 1010 1010 1010 1010 99 99 99 88 66 44 B-1,000 ppmB-1,000 ppm 1010 1010 1010 1010 1010 1010 1010 1010 88 88 22 00 00 00 00 00 무처치No treatment 1010 1010 1010 1010 1010 1010 1010 1010 1010 1010 1010 1010 1010 1010 1010 1010

치료 약제 B용액은 600 ppm에서는 27시간 LCt50, 100 ppm에서는 16시간 40 분 LCt50을 보였다. Treatment agent B solution in 600 ppm in 27 hours LCt 50, 100 ppm 16 hour 40 minutes 50 showed a LCt.

실험예 2: 유효성시험Experimental Example 2: Effectiveness Test

2-1: 스쿠치카 충의 활성 비교2-1: Comparison of the activity of SQUICACA

본 발명에서 B용액의 유효성시험에 일환으로, 점액과 스쿠치카 혼합에 따른 B용액의 유효성을 확인하였다. 넙치의 점액(mucus)은 스쿠치카층을 쌓아서 보호할 것이므로 B용액을 통해 스쿠치카를 효과적으로 박멸하기 전에 점액이 스쿠치카충을 감싸고 있으므로 점액의 B용액에 대한 저해 효과로 인하여 스쿠치카충의 활성의 영향을 확인하였다. 24 웰 플레이트를 사용하여서 넙치에서 채취된 점액질을 해수와 1:1로 혼합하여 스쿠치카를 104/ml 되게 접종하여 검사하였다. 넙치의 점액질이 없는 처리구 및 점액질이 있는 처리구는 각각 3회씩 반복 수행하였다. B 용액을 이용하여 넙치의 점액질 처리에 따른 스쿠치카의 활성을 확인해 본 결과, 넙치의 점액질이 없는 처리구에서는 B용액 80 ppm처리에서 스쿠치카에 대한 활성을 보이는 반면에, 넙치의 점액질이 혼합된 처리구에서는 B용액을 156 ppm 처리시 스쿠치카 활성을 보이는 것으로 나타났다.As a part of the validity test of the B solution in the present invention, the effectiveness of the B solution according to the mixing of mucus and scutchica was confirmed. Since the mucus of the flounder is to protect by accumulating the Sukusaka layer, the mucus surrounds the Sukusaka area before effectively exterminating the Sukuzaka through the B solution. Therefore, the effect of the activity of the Sukusaka area Respectively. Using a 24-well plate, the mucus collected from the flounder was mixed with seawater at a ratio of 1: 1 and tested by inoculating squid chickens with 10 4 / ml. The mucus - free and mucin - treated flounder were repeated 3 times each. As a result of examining the activity of SQUUZICA according to the mucilage treatment of the flounder using the B solution, the activity of SQUUZICA in the treatment of the solution of B solution at 80 ppm was observed in the treatment without the mucilage of the flounder, Showed the activity of Sukuzaka when treated with 156 ppm of B solution.

2-2: 스쿠치카 감염 넙치를 이용한 A 및 B용액 처리에 따른 유효성 확인2-2: Validation of A and B solutions treated with Sukuchika infected flounder

본 발명의 B 용액의 유효성시험을 위하여 표 5에서 나타난 바와 같이 총 66미의 스쿠치카 감염된 넙치를 사용하였고, 10~15 g의 체중, 8~12 cm의 체장이며, 약제 처리 기간은 8일이었다. 약제 처리 방법은 하기와 같은 방법으로, 먼저 해수 30 L가 포함된 각각의 수조에서 넙치 9 마리를 넣고 6시간 안정화 후, 약제를 농도 별로 처리하고, 처리 1시간 후에 수조의 해수를 교환하였으며, 이후 대조군을 제외한 수조는 해수를 순환처리 하였으며. 8일 동안 매일 약제를 처리하였다.For the validity test of the solution B of the present invention, as shown in Table 5, a total of 66 squid chickens infected flounder were used, and they were weighed 10 to 15 g, 8 to 12 cm in length, and treated for 8 days . In the following method, 9 flounders were placed in each tank containing 30 L of seawater, and after 6 hours of stabilization, the medicines were treated for each concentration, and the seawater was exchanged after 1 hour of treatment, Except the control group, the aquarium circulated the sea water. The medication was treated daily for 8 days.

유효성시험을 위한 넙치마리수 및 용액의 처치용량 The treatment capacity of flounder flounder and solution for the efficacy test 시험군Test group 처치 용량Treatment capacity 마리(미)수Mari (US) number
A용액 유효성

A solution effectiveness
20ppm20 ppm
30ppm30ppm 1010 50ppm50 ppm 1010
B용액 유효성

B solution effectiveness
300ppm300ppm 99
500ppm500ppm 99 600ppm600ppm 99 대조군Control group 무처치No treatment 99 system 6666

본 발명에서 치료 약제 A용액 및 B용액을 각각의 처치 용량군에 대하여 처치한 후 유효성을 검증하였다. 투여당일은 투여 후 1시간에서 6시간까지는 매시간 일반상태를 관찰한다. 투여 익일부터 14일까지는 매일 1회씩 일반상태의 변화, 중독증상 및 치사동물의 유무를 관찰하였다. 행동(고아분, 선회, 무리이탈, 수명유영, 수직유영, 장지, 문지름, 섭이불량 등), 체형(복부팽만, 핀헤드, 야윔, 휘어짐 등), 체색(흑화, 백화, 점액분비 등), 안구(돌출, 함몰, 백탁, 출형 등), 아가미(빈혈, 퇴색, 출혈, 결손 등), 내장(복수, 출혈, 울혈, 농양, 결절, 백색, 위축, 비대, 변색, 염증 등)에 대한 일반검사를 실시하였다. 모든 실험동물에 대하여 투여 직전과 투여 후 7일과 14일에 체중을 측정하였다. 치사 시 아가미 및 피부 등에서 스쿠치카 검사 및 세균감염 의심 시 미생물학적 검사(병원성분리, 동정, 및 병원성)를 실시하여 시험군과 대조군을 비교한다. 부검의 경우, 관찰기간 중 사망한 넙치는 방혈치사 시켜 내부장기의 육안적 이상 유무를 상세히 관찰하였고, 육안적으로 이상이 있는 장기는 10% 중성 포르말린액에 고정하여 보관하였다. In the present invention, the therapeutic agent A solution and the solution B were treated for each treatment capacity group, and then their effectiveness was verified. On the day of administration, the general condition is observed every hour from 1 hour to 6 hours after administration. From the next day until the 14th day of the administration, the change of the general condition, the poisoning symptom and the presence of the lethal animal were observed once a day. (Abdominal distension, pinhead, yamum, flexion, etc.), body color (blackening, whitening, mucus secretion, etc.) (General anomalies, anemia, fading, bleeding, defects, etc.), visceral (multiple, bleeding, congestion, abscess, nodule, white, atrophy, hypertrophy, discoloration, . All animals were weighed immediately before dosing and at 7 and 14 days after dosing. Microbiological tests (pathogenetic isolation, identification, and pathogenicity) are carried out in case of suspected scutchica infection and bacterial infection in leprosy gills and skin, and the test group and the control group are compared. In the case of autopsy, the flounder that died during the observation period was lethally lethal and gross abnormality of the internal organs was observed in detail, and organs with gross abnormality were fixed with 10% neutral formalin solution.

유효성시험에 따른 용액의 처치용량 및 생존 넙치마리수 The treatment capacity of the solution and the survival flounder 대조군Control group 300ppm300ppm 500ppm500ppm 600ppm600ppm 초기Early 99 99 99 99 1일1 day 99 66 88 77 2일2 days 88 55 88 66 3일3 days 77 55 88 66 4일4 days 66 44 88 66 5일5 days 55 44 88 66 6일6 days 33 44 88 66 7일7 days 1One 44 88 66 8일8 days 00 44 88 66

도 3에 나타난 바와 같이, 대조군은 실험 1일째 후에는 매일 폐사가 발생하여 실험 8일째 모두 폐사하였고, 300 ppm 처리군에서는 실험 1일째 3마리, 실험 2 및 3일째 1마리, 실험 4일째 1마리 폐사 후, 살아남은 4마리는 치유되었다. 500 ppm 처리군에서는 실험 1일째 1 마리 폐사 후, 전부 살아남아 치유되었다. 600 ppm 처리군에서는 실험 1일째 2마리, 실험 2일째 1 마리 폐사 후, 6 마리가 살아남아 치유되었다. 도 4는 치료 약제 B용액의 유효성시험에 대한 B용액 처리에 따른 스쿠치카의 형태 관찰한 사진이다. 스쿠치카에 치료 약제 B용액 처리 후 형태를 관찰한 결과, 처리 초기에는 움직임의 둔화를 보이다가(A) 시간이 경과되면 스쿠치카 표면에서 수포(화살표①)가 관찰되거나, 모양이 둥글게 변형되면서 수포(화살표②)가 관찰되어진다. 이렇게 형태가 변형된 스쿠치카는 처리 30분이 지나면 막이 완전이 터진 상태(변형되지 않은 상태로 죽음-화살표③, 변형된 상태로 죽음 -화살표④)로 죽게 된다. 도 5는 스쿠치카 감염 넙치를 이용한 치료 약제 B용액 처리에 따른 유효성 확인을 나타내는 넙치의 사진이다. 도 5에 나타난 바와 같이, 300 ppm 처리 어체는 중정도 괘양을 보였으나 처리 후 26일째 완전 치유가 되었음을 보이고, 500 ppm 처리 어체는 상당히 심한 괘양을 보였으나, 처리 후 26일 괘양이 사라지고 거의 완전치유가 되고 있음을 보이고, 600 ppm 처리 어체는 300 ppm 어체와 비슷한 정도 괘양을 보였으나, 처리후 14일부터 거의 완전 치유가 되었음을 보였다. 스쿠치카 감염 넙치를 이용한 B용액 처리에 따른 유효성 확인을 위하여,넙치의 폐사 및 폐사 넙치의 스쿠치카 감염을 조사하였다. 본 발명의 일실험예에 따른 스쿠치카 감염 넙치를 이용한 B용액 처리에 따른 유효성 확인 결과는 하기와 같다. 치료 약제 B용액 처리 후, 넙치의 폐사 및 폐사 넙치의 스쿠치카 감염을 조사하였다. 치료 약제 B용액 처리 1일째 폐사한 넙치의 스쿠치카 감염을 확인해본 결과, 대조군을 포함한 모든 실험구에서 아가미, 지느러미 및 피부/근육에서 스쿠치카의 감염을 확인할 수 있었으며, 지느러미 및 근육괴사가 심한 일부 넙치에서는 뇌에서도 스쿠치카의 감염을 확인할 수 있었다. 처리 2일째에는 대조군과 300 ppm 처리구에서 스쿠치카 감염을 확인할 수 있었으며, 500 ppm과 600 ppm 처리구에서는 스쿠치카 감염이 확인되지 않았다. 대조군의 경우 처리 8일째 모두 폐사하였으며, 스쿠치카 감염을 확인할 수 있었다. 300 ppm 처리구의 경우 처리 4일째 폐사한 넙치에서 지느러미 및 근육괴사는 관찰되었으나, 스쿠치카 감염은 확인되지 않았다. 유효성시험에 대한 평가 방법은 감염부위를 긁어 살아 있거나 죽어있는 스쿠치카 충체 유의성 있는 감소, 체중측정 및 폐사 미수 측정함으로 확인하였다(표3, 도 4, 도 5).As shown in Fig. 3, in the control group, dead animals died on day 1 after the first day of experiment, and all animals died on the eighth day of experiment. In the 300 ppm treatment group, three animals on the first day of experiment, one animal on the second and third day of experiment, After our death, the four surviving were healed. In the 500 ppm treatment group, one mouse died after the first day of experiment, and all survived and were healed. In the 600 ppm treatment group, 2 mice were observed on the first day and 6 mice died after 1 day on the second day of the experiment. Fig. 4 is a photograph showing the appearance of squid chick according to the B solution treatment for the efficacy test of the therapeutic agent B solution. After observing the shape after treatment with the therapeutic agent B for Sukuzaka, the movement slowed at the beginning of treatment (A) when the time passed, the blister (arrow ①) was observed on the surface of Sukuzaka, (Arrow 2) is observed. In this type of deformed Sukikica, after 30 minutes of treatment, the membrane will die in its complete state (death without modification - arrow ③, death in a deformed state - arrow ④). Fig. 5 is a photograph of a flounder showing validation according to treatment with a therapeutic agent B using a squid chick infected flounder. As shown in Fig. 5, the 300 ppm treated fish showed mild mucinage, but showed complete healing at 26 days after treatment. The 500 ppm treated mushroom showed considerably mucinous mucosa, . The 600 ppm treated fish body was similar to the 300 ppm fish body, but showed almost complete healing from 14 days after treatment. In order to confirm the validity of the treatment with B solution using the infected flounder with squid, we investigated the infection of squid chickens in flounder and dead flounder. The results of the validation according to the B solution treatment using the squid chick infected flounder according to one experimental example of the present invention are as follows. After treatment with Solution B, the infection of squid chickens in flounder and dead flounder was investigated. On the first day after treatment with solution B of the therapeutic agent B, the infection of squid chickens was confirmed in the gills, the fins and the skin / muscle in all experimental specimens including the control group. As a result, In the flounder, it was possible to confirm the infection of the squirrel in the brain. On the second day of treatment, S. aureus infections were detected in the control and 300 ppm treatments, and Sukuzaka infection was not observed in 500 ppm and 600 ppm treatments. In the control group, all of the mice died on the 8th day of treatment, and the infection with Scuccica was confirmed. In the case of 300 ppm treatment, fin and muscle necrosis were observed in dead flounder at 4th day of treatment, but no squid chick infection was observed. The evaluation method for the efficacy test was confirmed by scraping the infected area and decreasing the number of live or dead squirrel in a significant manner, measuring the body weight and measuring the mortality (Table 3, Fig. 4, Fig. 5).

2-3: 스쿠치카 감염 넙치를 이용한 B용액 단독 처리에 따른 유효성 확인2-3: Validation by treatment of B solution with squid chick infected flounder

본 발명의 B 용액을 단독투여한 후 유효성시험을 위하여 10~15 g의 체중, 8~12 cm의 체장의 스쿠치카 감염된 넙치를 사용하였다. 해수 30 L가 포함된 각각의 수조에서 넙치 9 마리를 넣고 6 시간 안정화 후, 치료 약제 B용액을 600 ppm로 처리하고, 처리 1시간 후에 수조의 해수를 교환하였으며, 이후 대조군을 제외한 수조는 해수를 순환처리 하였으며. 8일 동안 매일 약제를 처리하였다. 도 6에 나타난 바와 같이, 상기와 같이 자연 감염된 넙치에 치료 약제 B용액을 단독으로 투여하여 스쿠치카 감염이 치유됨을 보였다. 그러나 치료 약제 B용액을 단독처리한 경우 치료 약제 A용액 및 치료 약제 B용액을 순차 처리한 경우에 비해 회복 속도가 더디게 나타났다.After the B solution of the present invention was administered alone, a Sucucica infected flounder of 10 to 15 g body weight and 8 to 12 cm in length was used for the efficacy test. In each tank containing 30 L of seawater, 9 flounders were added and after stabilization for 6 hours, the treatment solution B was treated at 600 ppm, and after 1 hour of treatment, the seawater was exchanged. After that, Respectively. The medication was treated daily for 8 days. As shown in FIG. 6, it was shown that the Sucucica infection was healed by administering the therapeutic agent B solution alone to the naturally infected flounder as described above. However, in the case of treatment with the therapeutic agent B alone, the recovery rate was slower than in the case of the sequential treatment of the therapeutic agent A solution and the therapeutic agent B solution.

실험예 3: 현장 효능시험Experimental Example 3: Field efficacy test

본 발명의 현장 효능시험은 2012년 8월 7일부터 23일까지 올레수산(제주, 한국)에서 이루어졌으며, 100-150 g 크기의 넙치에 치료 약제 A용액은 50 ppm, 30분을 처리하였고, B용액은 500 ppm, 1시간 ~ 1시간 30분을 처리하였다. 넙치사양 현장시험에서는 자연 감염된 평균체중 30∼200 g의 넙치(Paralichthys olivaceus), 시험군(임상투여용량 n=10000미)과 대조군(n=10000미)을 공시동물로 사용하였다. 투여방법은 다음과 같다. 치료 약제 A용액과 B용액을 순서대로 1일 1회, 5일간 처리하였다. 즉, 수조에서 A용액을 최대 50 ppm 이내로 약 30분 이내로 처치 후 물을 교환하였다. 그 후, 연속적으로 동일한 수조에서 B용액을 최대 500∼600 ppm 이내로 약 2∼3 시간 동안 처치 후 물을 교환한다. 관찰 기간은 2주 동안 하였다. 투여 후 유효성 평가는, 투여당일은 투여 후 1시간에서 6시간까지는 매시간 일반 상태를 관찰한다. 투여 익일부터 14일까지는 매일 1회씩 일반상태의 변화, 중독증상 및 사망동물 유무를 대조군과 시험군 간에 관찰하였다. 관찰기간 중 치사한 넙치는 미생물학적인 검사와 방혈치사 시켜 내부장기의 육안적 이상 유무를 상세히 관찰하였고, 육안적으로 이상이 있는 장기는 10% 중성 포르말린액에 고정하여 보관하였다. 평가 종료 후에는 모두 살처분한 후 장기무게를 측정하였다. 본 발명의 일실험예의 결과는, 스쿠치카에 감염된 어류만 모아 놓은 병어수조에서 실험을 실시한 결과 치료 기간에는 치료 약제 A와 B 용액을 모두 처리한 수조에서 초기 일주일 동안에 많은 폐사가 발생하였으나, 약제 처리 이후에는 약제처리 수조가 대조군으로 처리하지 않은 수조에 비교하여 페사미수가 적음을 알 수 있다. 이는 약욕 기간 동안 약욕 제재가 스트레스를 유발하여 약화된 개체를 초기 폐사시키는 결과를 초래하는 것으로 보인다. 그러나 약욕제재 후 7일이 지난 시점부터 폐사가 현격하게 감소함을 보이는 것을 확인하였다. 도 7의 경우 치료 약제 A 및 B 용액을 처리한 후 11일 동안 시간 경과에 따른 사망률을 나타낸 그래프이다. 도 7의 그래프에서 빨간색선은 약제를 처리한 군을 나타내며, 파란색선은 약제를 처리하지 않은 군을 나타낸다. 도 7 에 나타난 바와 같이, 치료 약제 A와 B 용액을 모두 처리한 경우, 스쿠치카의 감염기간을 줄이는 데 일조할 수 있음을 기대한다.
The field efficacy test of the present invention was carried out on oleic acid (Jeju, Korea) from August 7 to 23, 2012. The treatment solution A was treated with 50 ppm for 30 minutes in flounder of 100-150 g size, B solution was treated at 500 ppm for 1 hour to 1 hour 30 minutes. In field tests, flounder (Paralichthys olivaceus), a test group (n = 10000), and a control group (n = 10000) were used as wild-type animals. The method of administration is as follows. Therapeutic agents Solution A and Solution B were treated once a day for 5 days. In other words, the solution was treated within a maximum of 50 ppm within a period of about 30 minutes and the water was exchanged. Subsequently, the B solution is continuously treated in the same water tank at a maximum of 500 to 600 ppm for about 2 to 3 hours, and the water is exchanged. The observation period was 2 weeks. After the administration, the general condition is observed every hour from 1 hour to 6 hours after the administration on the day of administration. From the next day of dosing to 14 days, changes in general condition, poisoning symptoms, and the presence of dead animals were observed once daily between the control and test groups. During the observation period, the flounder was examined by microbiological test and hemorrhagic lethality, and gross abnormality of the internal organs was examined in detail. Organs with gross abnormality were fixed with 10% neutral formalin solution. After the end of the evaluation, all the weights were measured after disposal. As a result of the experiment of the present invention, the experiment was carried out in a fish tank containing only the fish infected with SQUUZICA. In the treatment period, a lot of fish died during the first week in the tank treated with both the therapeutic agent A and the B solution, Thereafter, it can be seen that the number of pessimists is smaller than that of the water treatment tank not treated with the control treatment tank. This appears to be the result of the stressfulness of the bathing agent during the bathing period, resulting in premature death of the weakened individuals. However, we confirmed that our company showed a significant decrease from 7 days after the battle. FIG. 7 is a graph showing the mortality rate over time for 11 days after treatment with the therapeutic agents A and B solutions. FIG. In the graph of FIG. 7, the red line indicates the group treated with the drug, and the blue line indicates the group not treated with the drug. As shown in Fig. 7, it is expected that the treatment of both the therapeutic agent A and the solution B can help reduce the period of infection of the scutchica.

Claims (16)

점액제거제를 포함하는 제1조성물; 및
항미생물제를 포함하는 제2조성물을 포함하는 어류의 원충성 질병 치료용 키트.
A first composition comprising a mucoadhesive agent; And
A kit for treating a prostatic disease of fish, comprising a second composition comprising an antimicrobial agent.
제1항에 있어서, 상기 제1조성물은 상기 점액제거제가 정제수에 용해되고, 상기 제2조성물은 상기 항미생물제가 정제수에 용해된 용액인, 키트.The kit according to claim 1, wherein the first composition is a solution in which the mucolytic agent is dissolved in purified water, and the second composition is a solution in which the antimicrobial agent is dissolved in purified water. 제1항에 있어서,
상기 점액제거제는 계면활성제인, 키트.
The method according to claim 1,
Wherein the mucolytic agent is a surfactant.
제3항에 있어서, 상기 계면활성제는 음이온성 계면활성제 또는 양이온성 계면활성제인, 키트.4. The kit of claim 3, wherein the surfactant is an anionic surfactant or a cationic surfactant. 제4항에 있어서,
상기 양이온성 계면활성제는 4급 암모늄염인, 키트.
5. The method of claim 4,
Wherein the cationic surfactant is a quaternary ammonium salt.
제5항에 있어서, 상기 4급 암모늄염은 벤잘코늄염 및 디알킬 디메틸 암모늄염의 혼합물인, 키트.6. The kit according to claim 5, wherein the quaternary ammonium salt is a mixture of a benzalkonium salt and a dialkyldimethylammonium salt. 제1항에 있어서,
상기 제2조성물은 색소를 추가적으로 포함하는, 키트.
The method according to claim 1,
Wherein the second composition further comprises a pigment.
제1항에 있어서,
상기 항미생물제는 항원생생물 제제(antiprotozoan agent), 항세균제(antibacterial agent) 또는 항진균제(antifungal agent)인, 키트.
The method according to claim 1,
Wherein the antimicrobial agent is an antiprotozoan agent, an antibacterial agent or an antifungal agent.
제8항에 있어서,
상기 항원생생물 제제는 메트로니다졸(metrodinazole), 에플로르니틴(eflornithine), 푸라졸리돈(furazolidone), 멜라르소프롤(melarsoprol), 오르니다졸(ornidazole), 피리메타민(pyrimethamine), 티니다졸(tinidazole), 파로마이신 설페이트(paromycine sulfate), 히드록시클로로퀸(hydroxychloroquine), 이오도퀴놀(iodoquinol), 또는 펜타미딘(pentamidine)인, 키트.
9. The method of claim 8,
The antigenic veterinary preparation may be selected from the group consisting of metrodinazole, eflornithine, furazolidone, melarsoprol, ornidazole, pyrimethamine, wherein the kit is a tinidazole, paromycine sulfate, hydroxychloroquine, iodoquinol, or pentamidine.
제8항에 있어서,
상기 항세균제는 테트라사이클린, 페니실린, 독시사이클린, 시프로플로사신, 아지트로마이신, 에리트로마이신, 스트렙토마이신, 젠타마이신, 반코마이신, 세팔로스포린, 클로람페니콜, 또는 브로노폴(bronopol)인, 키트.
9. The method of claim 8,
Wherein the anti-bacterial agent is tetracycline, penicillin, doxycycline, ciprofloxacin, azithromycin, erythromycin, streptomycin, gentamicin, vancomycin, cephalosporin, chloramphenicol, or bronopol.
점액제거제를 어류 사육 수조에 처리하여 어류 아가미의 점액질을 제거하는 점액질 제거단계; 및
상기 어류 사육 수조에 항미생물 제제를 처리하는 단계를 포함하는 원생생물 제거단계를 포함하는, 어류의 원충성 질병의 치료 및 예방방법.
Removing the mucus from the fish gill by treating the mucolytic agent in a fish rearing tank; And
A method for the treatment and prevention of a protozoal disease of fish, comprising a step of treating the fish rearing tank with an antimicrobial agent.
제11항에 있어서,
상기 점액질 제거단계 이후 상기점액질 제거제를 수조에 처리한 후 물을 교환하여 상기 점액질 제거제를 제거하는 단계가 추가되는, 어류의 원충성 질병의 치료 및 예방방법.
12. The method of claim 11,
And removing the mucolytic agent by exchanging water after treating the mucolytic agent in the water tank after the mucolytic removal step.
제11항에 있어서,
상기 원생생물 제거단계 이후 물을 교환하여 상기 항미생물 제제를 제거하는 단계를 추가적으로 포함하는, 어류의 원충성 질병의 치료 및 예방방법.
12. The method of claim 11,
Further comprising the step of removing the antimicrobial agent by exchanging water after the step of removing the protist organism.
상기 어류는 수쿠치카(Scutica) 원충에 감염 된 것인, 어류의 원충성 질병의 치료 및 예방방법.Wherein said fish is infected with a Scutica protozoa. 브로노폴(bronopol)을 유효성분으로 함유하는 어류의 원충성 질병의 치료 및 예방용 조성물.A composition for treating and preventing a prostatic disease of fish containing bronopol as an active ingredient. 약학적으로 유효한 양의 브로노폴을 수조에 처리하는 단계를 포함하는 어류의 원충성 질병의 치료 및 예방방법.

















A method for treating and preventing a prophylactic disease in a fish, comprising treating a pharmaceutically effective amount of bronopol in a water tank.

















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