KR20150035495A

KR20150035495A - 화농성 비부비동염 치료를 위한 티모신 알파의 용도

Info

Publication number: KR20150035495A
Application number: KR20147025896A
Authority: KR
Inventors: 헤모 에이. 드렉스해이지
Original assignee: 사이클론 파아머슈티컬 인코오퍼레이티드
Priority date: 2012-03-08
Filing date: 2013-03-08
Publication date: 2015-04-06
Also published as: US20150031617A1; WO2013134666A1; JP2015510887A; CN104507491A; EP2838551A4; HK1207008A1; EP2838551A1; CA2866159A1

Abstract

본 발명은 화농성 비부비동염을 예방 또는 치료하는 방법을 제공한다. 본 방법은 대상체에게 티모신 알파 1을 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함한다.

Description

화농성 비부비동염 치료를 위한 티모신 알파의 용도 {USE OF THYMOSIN ALPHA FOR TREATMENT OF PURULENT RHINOSINUSITIS}

관련 출원에 대한 상호 참조

본 출원은 2012년 3월 8일 출원된 미국 가출원 번호 제61/608,427호의 우선권 및 이점을 주장하며, 상기 출원은 그 전문이 본원에서 참조로 포함된다.

본 발명의 기술분야

본 발명은 화농성 비부비동염 치료를 위한 티모신 펩티드의 용도에 관한 것이다.

부비동염은 부비동의 박테리아성 및/또는 바이러스성 감염을 포함한다. 급성 부비동염은 치료할 경우, 전형적으로 4주 이내에 치유된다. 해마다 2-4 차례에 걸쳐 감염 에피소드가 발생하며, 에피소드 사이의 간격이 8주 이상일 경우, 재발 급성 (아급성) 부비동염인 것으로 진단받게 된다. 재발 급성 부비동염 에피소드는 대략 4-8주간 지속된다. 부비동 점막은 급성 및 재발, 둘 모두의 감염 사이에서는 전형적으로 정상이다. 8주 이상의 기간 동안 증상이 지속될 경우, 만성 부비동염인 것으로 진단받게 된다.

화농성 비부비동염은 급성 또는 만성일 수 있고, 전형적으로는 녹색을 띠며, 농 및/또는 혈액을 함유할 수 있는 분비물을 특징으로 한다.

부비동염은 대개 국소 두통 또는 치통을 동반한다. 안와 감염도 발생할 수 있으며, 이는 실명을 유발할 수 있고, 발열 및 중증 질병을 동반할 수 있다. 발병가능한 또 다른 합병증으로는 이마의 골 감염 (골수염) 뿐만 아니라, 다른 안면 골 감염 (포트 종창성 종양(Pott's puffy tumor))이 있다.

비부비동염 또한 안면통, 안면 압박감, 코 막힘, 분비물, 발열, 두통, 구취, 피로, 기침, 귀통/이압/이충만감, 권태감 및/또는 인후통을 비롯한, 다양한 증상을 유발할 수 있다. 부비동 감염은 또한 비강 막힘으로 인해 내이에 추가 문제를 일으킬 수 있고, 현기증, "두부 압박감 또는 졸림(heavy head)," 또는 두부 진동감을 유발할 수 있다.

뇌부터 부비동까지 매우 인접해 있기 때문에, 골 또는 혈관을 통한 혐기성 박테리아의 침입에 의해 부비동염 감염의 가장 위험한 합병증 중 하나가 뇌에서 유발될 수 있다. 농양, 수막염 및 생명을 위협하는 다른 병증은 상기 감염으로부터 유발될 수 있다. 극단적인 경우에는 경미한 인격 변화, 두통, 의식 변경, 시각상의 문제, 및 최종적으로는 발작, 코마 및 가능하게는 사망이 일어날 수도 있다.

부비동염은 대개 바이러스에 의해 유발되며, 이는 종종 항생제 없이도 치유될 수 있다. 그러나, 증상이 10여 일 이내에 치유되지 않는다면, 항생제가 사용될 수 있다. 그러나, 이러한 항생제만을 사용하는 것은 대개 효과가 없으며, 일부 경우에서는 위약과 마찬가지로 효과가 없다. 일부 연구를 통해 사람 중 60% 내지 90%가 항생제를 사용하지 않을 경우, 증상 치유를 경험하지 못한 것으로 밝혀졌다 (예컨대, 문헌 [Ian G. Williamson et al., JAMA 298 (21): 2487-96 (2007)] 및 [van Buchem, F. L.; Knottnerus, J. A., Schrijnemaekers, V. J. J., Peeters, M. F. Lancet 349 (9053): 683-7 (1997)] 참조).

현재, 만성 또는 재발 부비동염인 경우에는 이비인후과의사 전문의 진료가 필요할 수 있고, 치료 옵션은 코 수술을 포함할 수 있다. 중증 질환 또는 어떤 합병 인자도 없는 환자의 경우에는 단기간 (3-7일)의 항생제 사용도 종종 효과적일 수 있지만, 만성 또는 재발 부비동염, 및 특히 만성 또는 재발 비부비동염을 앓는 개체를 위한 추가의 치료법이 여전히 요구되고 있다.

본 발명은 화농성 비부비동염 및 특히 만성 화농성 비부비동염을 치료 및/또는 예방하는 비침습적 방법을 제공한다.

본 발명은 화농성 비부비동염을 예방, 호전, 및/또는 치료하는 방법을 제공한다. 대상체에서 화농성 비부비동염을 예방, 호전, 및/또는 치료하는 상기 방법은 대상체에게 체액 인자를 함유하지 않는 조성물 중의 유효량의 티모신 펩티드, 예컨대, 티모신 알파 1 (TA1)을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 투여되는 조성물은 티모스티뮬린 (TP-1)이 아니다. TA1은 합성일 수 있거나, 또는 재조합적으로 제조될 수 있다.

본 방법에 의해 예방되거나, 치료되는 화농성 비부비동염으로는 박테리아성, 바이러스성, 혼합형 또는 미지의 병인인, 만성 비부비동염 또는 재발성 화농성 비부비동염을 포함할 수 있다.

일부 실시양태에서, 대상체는 단핵구 또는 과립구 분극에 대해 테스트받게 되고, 여기서, 대상체가 결손 또는 비정상적인 단핵구 또는 과립구 분극을 보일 경우, 대상체는 본원에 기술된 티모신 펩티드 요법을 수행받게 된다.

그러므로, 또 다른 측면에서, 본 발명은 효과적인 또는 정상적인 분극을 유도하기 위해 대상체에게 본원에 기술된 티모신 펩티드의 요법 또는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 단핵구 또는 과립구 분극 장애를 예방 및/또는 치료하는 것을 제공한다.

본 발명은 또한 본원에 기술된 티모신 펩티드 요법에 따라 대상체를 치료할 뿐만 아니라, 상기 치료를 필요로 하는 대상체를 확인하기 위한 키트를 제공한다. 일부 실시양태에서, 키트는 1) 합성 또는 재조합 티모신 펩티드 투여 단위로 이루어진 한 세트, 및 2) 화농성 비부비동염, 또는 단핵구 또는 과립구 분극 장애를 치료, 호전 또는 예방하기 위해 티모신 펩티드를 포함하는 조성물을 투여하는 것에 관한 설명서, 및/또는 3) 단핵구 또는 과립구 분극을 검사하기 위한 하나 또는 그 이상의 시약을 포함한다.

도 1은 티모신 알파 치료를 받은 화농성 비부비동염 환자, 및 그러한 치료를 받지 않은 환자에서의 단핵구 및 과립구 분극을 보여주는 것이다.
도 2는 건강한 기증자 단핵구의 N-포르밀메티오닐-류실-페닐알라닌 (fMLP)-유도성 분극을 보여주는 것이다.

본 발명은 부분적으로는 유효량의 티모신 펩티드, 예컨대, 티모신 알파 1을 투여하는 것이 화농성 비부비동염을 치료, 예방 또는 호전시키는 데 있어 이익을 제공한다는 놀라운 발견에 기초한다. 따라서, 본 발명은 대상체에서 화농성 비부비동염을 예방, 치료 또는 호전시키는 방법을 제공한다. 상기 방법은 대상체에게 유효량의 티모신 펩티드를 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 조성물은 화농성 비부비동염을 치료, 또는 예방하기 위한 유효 농도로 티모신 펩티드를 포함하지만, 체액 인자를 함유하지 않는다.

대상체는 화농성 비부비동염을 앓는 대상체일 수 있거나, 또는 하나 또는 그 이상의 증상에 기초하여 화농성 비부비동염을 앓는 것으로 판정될 수 있다. 화농성 비부비동염은 대개 만성 또는 재발성인, 부비동 중 하나 또는 그 이상에서의 염증을 특징으로 한다. 감염은 바이러스성 감염, 박테리아성 감염 및/또는 진균성 감염으로부터 유발될 수 있다. 감염은 혼합형 감염이거나, 또는 미지의 병인 감염일 수 있다. 증상으로는 두통, 치통, 안와 감염, 발열을 포함할 수 있고, 일부 경우에는 이마의 골 감염 (골수염), 및/또는 일부 경우에 포트 종창성 종양으로 지칭되는 다른 안면 골 감염을 포함할 수 있다. 추가 증상으로 현기증, "두부 압박감 또는 졸림 및/또는 또는 두부 진동감을 동반할 수 있는, 비강 막힘에 기인하는 내이 문제를 유발할 수 있다.

화농성 비부비동염은 급성, 만성 또는 재발성 화농성 비부비동염일 수 있다. 치료 이전에, 급성 비부비동염은 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 1주, 2주, 3주, 또는 4주 이상 동안 지속될 수 있다. 만성 부비동염은 본원에 기술된 바와 같은 치료 이전에 약 8주, 약 10주, 약 12주, 약 1개월, 약 2개월, 약 6개월 또는 약 1년 이상 동안 지속될 수 있다. 이는 또한 재발 (recurrent)이라고도 지칭되는 재발성 (relapsing)은 12개월이라는 기간 동안 급성 질환이 4, 5, 6, 7, 8회 차례 이상 재발하는 것을 포함할 수 있다. 일부 경우에서, 증상은 각 에피소드 사이에 치유된다.

일부 실시양태에서, 대상체를 비정상적인 과립구 또는 단핵구 분극에 대해 테스트함으로써 상기 환자가 티모신 펩티드 요법에 대한 최적의 후보자인지 여부를 판정한다. 예를 들어, 말초 혈액 단핵구는 환자 혈액으로부터 제조될 수 있거나, 단리될 수 있고, 분극은 적절한 시약, 예컨대, N-포르밀-메티오닐-류실-페닐알라닌 (FMLP 또는 fMLP)에 대한 반응으로 테스트할 수 있다. 단핵구는 밀도 구배 원심분리에 의해 제조될 수 있거나, 단리될 수 있고, 분극은 광학 현미경법, 또는 다른 적절한 기법에 의해 검출되고, 정량화될 수 있다. 샘플이 약 20% 미만의 FMLP-유도성 분극을 보일 경우, 대상체는 분극 장애 또는 불충분한 분극을 가지는 것으로 확인되며, 이는 티모신 펩티드 치료에 대한 최적의 대상체가 된다. 일부 실시양태에서, 샘플은 약 20% 미만, 약 19% 미만, 약 18% 미만, 약 17% 미만, 약 16% 미만, 약 15% 미만, 약 14% 미만, 약 13% 미만, 약 12% 미만, 약 11 미만, 약 10% 미만, 약 9% 미만, 약 8% 미만, 약 7% 미만, 약 6% 미만, 약 5% 미만, 약 4% 미만, 약 3% 미만, 약 2% 미만, 또는 약 1% 미만의 FMLP-유도성 분극을 보인다.

본 발명에 따라, 티모신 펩티드는 유효량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 티모신 펩티드는 티모신 알파이다. 유효량은 본원에 기술된 이익을 제공하는 데 충분한, 티모신 펩티드의 임의의 양을 포함한다. 화농성 비부비동염을 앓는 대상체에게 티모신 펩티드를 투여함으로써 제공받게 되는 이익으로는 화농성 비부비동염 병증의 치료, 예방, 및/또는 호전, 및/또는 화농성 비부비동염과 관련된 증상, 예를 들어, 제한하는 것은 아니지만, 본원에 열거된 것의 호전을 포함할 수 있다. 대안적으로, 유익한 효과는 환자를 과립구 또는 단핵구 분극에 대하여 테스트함으로써 관찰될 수 있다. 의료 분야의 숙련가는 티모신 펩티드 치료에 대한 반응으로 상기와 같은 유익한 효과를 쉽게 측정할 수 있다.

티모신 펩티드는 티모신 알파 1 ("TA1"), 및 TA1과 구조상 상동성인 펩티드를 포함한다. TA1은 아미노산 서열 (N-아세틸)-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn-OH (서열 번호 1)를 가지는 펩티드이다. TA1의 아미노산 서열은 미국 특허 4,079,137 (그의 개시내용은 본원에서 참조로 포함된음)에 개시되어 있다. TA1은 분자량이 약 3,108이며, 아세틸화된 N-말단을 가지는 비-당화된 28-아미노산 펩티드이다. 합성 버전의 TA1은 자닥신(ZADAXIN)이라는 상표명하에 특정 국가에서는 상업적으로 이용가능하다. 본 발명의 티모신 알파 1은 또한 서열 번호 1 뿐만 아니라, 서열 번호 1의 티모신 알파 1과 유사한 활성을 보이는, 그의 유도체 및 변이체를 포함한다. 본 발명의 방법에 의해 고려되는 티모신 펩티드 조성물은 체액 인자를 함유하지 않는다. 본 발명의 일부 실시양태에서, 조성물은 티모스티뮬린 (TP-1)이 아니다.

TA1은 혈청 중 약 0.1 내지 1.0 ng/ml로 순환한다. 3.2 mg의 TA1 (약 40 ㎍/㎏)의 주사 후 최고 혈장 수준은 대략 100 ng/ml가 된다. 순환 중 TA1의 반감기는 약 2시간이다.

본 발명을 위한 용도가 있는 것으로 밝혀진 티모신 펩티드로는 자연적으로 발생된 TA1 (예컨대, 조직으로부터 정제되거나, 단리된 TA1) 뿐만 아니라, 합성 TA1 및 재조합 TA1을 포함한다. 일부 실시양태에서, 티모신 펩티드는 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함한다 (아실화된, 예컨대, 아세틸화된 N-말단은 임의적이음). 일부 실시양태에서, 티모신 펩티드는 TA1과 실질적으로 유사하고, TA1의 면역조절 활성을 유지하는 아미노산 서열을 포함한다. 실질적으로 유사한 서열은 TA1과 관련하여 (전체적으로) 예를 들어, 약 1 내지 약 10개의 아미노산 결실, 삽입, 및/또는 치환을 가질 수 있다. 예를 들어, 티모신 펩티드는 TA1과 관련하여 (전체적으로) 약 1 내지 약 5개 (예컨대, 1, 2, 또는 3개)의 아미노산 삽입, 결실, 및/또는 치환을 가질 수 있다.

따라서, 티모신 펩티드는 예를 들어, TA1과 관련하여 1 내지 약 10개의 아미노산, 또는 약 1 내지 약 5개의 아미노산, 또는 1, 2 또는 3개의 아미노산 결실을 가지는 단축된 TA1 서열을 포함할 수 있다. 펩티드의 활성이 실질적으로 유지되는 한, 상기 결실은 N- 또는 C-말단, 및/또는 내부에 존재할 수 있다. 대안적으로, 또는 추가로, TA1의 활성이 실질적으로 유지되는 한, 실질적으로 유사한 서열은 TA1과 관련하여 약 1 내지 약 5개의 아미노산 삽입 (예컨대, 1, 2, 또는 3개의 아미노산 삽입)을 가질 수 있다. 대안적으로, 또는 추가로, 활성이 실질적으로 유지되는 한, 실질적으로 유사한 서열은 1 내지 약 10개의 아미노산 치환을 가질 수 있다. 예를 들어, 실질적으로 유사한 서열은 1 내지 약 5개, 또는 1, 2, 또는 3개의 아미노산 치환을 가질 수 있으며, 이는 보존적 및 비-보존적 치환을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 치환은 보존적 치환이다. 일반적으로, 보존적 치환은 화학적으로 유사한 아미노산 (예컨대, 극성, 비-극성, 또는 하전된 것) 치환을 포함한다. 치환된 아미노산은 20종의 표준 아미노산으로부터 선택될 수 있거나, 또는 비-표준 아미노산 (예컨대, 보존된 비-표준 아미노산)일 수 있다.

일부 실시양태에서, 티모신 펩티드는 TA1의 활성을 유지하면서, 서열 번호 1과 70% 이상의 서열 동일성을 가지는 아미노산 서열을 포함한다. 예를 들어, 티모신 펩티드는 서열 번호 1과 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상의 서열 동일성을 가지는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 티모신 펩티드는 서열 번호 1과 100%의 서열 동일성을 가지는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 모든 경우에서, N-말단은 임의적으로 예를 들어, C1-C10 또는 C1-C7 아실 또는 알킬 기로 아실화되거나 (예컨대, 아세틸화되거나), 또는 알킬화될 수 있다.

특정 실시양태에서, 상기 기술된, 실질적으로 유사 및 상동성인 펩티드는 TA1 (서열 번호 1)과 비교하여 약 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 약 100% 이상의 수준으로 작용할 수 있다.

티모신 펩티드는 예를 들어, 고체상 합성법에 의해 합성 방식으로 제조될 수 있거나, 또는 재조합적으로 제조되고, 공지 기법에 의해 정제될 수 있다.

티모신 펩티드는 또한 수용성 중합체에 컨쥬게이트될 수 있다. 상기 수용성 중합체는 대상체에서 티모신 펩티드의 혈장 반감기를 증가시키는 작용을 한다. 수용성 중합체로는 폴리알킬렌 옥시드 동종중합체, 폴리옥시에틸렌화된 폴리올, 상기 중합체의 공중합체 뿐만 아니라, 상기 중합체의 블록 공중합체를 포함할 수 있다.

특정 실시양태에서, 티모신 펩티드는 순환 중 그의 반감기를 증가시키기 위해 페길화된다. 치료학적 단백질의 반감기를 증가시키기 위한 상기 전략법은 주지되어 있다.

티모신 펩티드의 유효량은 약 1 mg 내지 최대 약 5 mg, 또는 약 2 mg 내지 약 4 mg, 또는 약 1.6 mg 내지 약 3.2 mg 범위의 투여량을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 티모신 알파는 약 1 mg 내지 최대 약 5 mg으로 투여된다. 티모신 펩티드는 일반적으로 약 0.1 내지 20 mg의 TA1, 또는 약 1 내지 10 mg의 TA1, 또는 약 2 내지 10 mg의 TA1, 또는 약 2 내지 8 mg의 TA1, 또는 약 2 내지 7 mg의 TA1에 상응하는 범위 이내로 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 티모신 알파는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15 또는 20 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 티모신 펩티드는 약 1.6 mg의 투여량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 티모신 펩티드는 약 3.2 mg의 투여량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 티모신 펩티드는 티모신 알파 1이다. 일부 실시양태에서, 티모신 알파 1은 약 1.6 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 티모신 알파 1은 약 3.2 mg으로 투여된다. 일부 실시양태에서, TA1 용량은 환자의 크기에 따라 조정되고, 10 내지 100 ㎍/kg (예컨대, 약 20, 40, 60, 또는 80 ㎍/kg)으로 제공될 수 있다. 용량은 대상체 또는 환자의 종에 따라 조정될 수 있지만, 각 경우에서, 용량은 대략적으로 인간에 대한 TA1의 등가량 (mg/kg)에 상응할 수 있다.

티모신 펩티드는 동결건조된 형태로 제공될 수 있고, 투여 이전에 멸균 (예컨대, 수성) 희석제로 재구성될 수 있다. 티모신 펩티드 (예컨대, 티모신 알파 1, 이는 또한 TA1로도 지칭된음)는 피하 주사, 근육내 주사, 복강내 주사, 진피내 주사, 정맥내 주사 또는 주입에 의해, 설하로 또는 경구적 경로인 것을 비롯한, 임의의 효과적인 경로에 의해 투여될 수 있다. 티모신 펩티드는 동결건조된 형태로 제공될 수 있고, 투여 이전에 멸균 (예컨대, 수성) 희석제로 재구성될 수 있다. 특정 실시양태에서, 티모신 펩티드는 피하 주사에 의해, 또는 정맥내 주입에 의해 투여된다. 일부 실시양태에서, 주사 방법은 근육내 주사이다. 일반적으로, 예정된 용량의 티모신은 단일 용량으로서 투여될 수 있거나, (예컨대, 주사일 경우), 예를 들어, 연속 주입, 또는 서브용량의 반복 주사 등에 의해 24시간 이하의 기간 동안에 걸쳐 이격되어 있을 수 있다. 예정된 용량의 티모신 펩티드는 단일 주사로서 투여될 수 있다.

일부 실시양태에서, TA1은 연속 주입에 의해 투여될 수 있다. TA1의 연속 주입은 US 2005/0049191 (상기 특허의 전체 개시내용이 본원에서 참조로 포함된음)에 상세하게 기술되어 있다. 간략하면, 티모신 펩티드의 연속 주입이 장기간 동안 환자의 순환계에서 유효량의 티모신 펩티드를 유지시켜 준다. 피하로 주사된 TA1의 혈장 반감기는 약 2시간이고, 따라서, 특정 실시양태에 따라, 티모신 펩티드는 적어도 약 6, 10, 12시간 이상의 치료 기간 동안에 환자에게 투여될 수 있으며, 일부 실시양태에서, 이는 효능을 개선시킬 수 있다. 주입은 임의의 적합한 수단, 예컨대, 미니펌프에 의해 수행될 수 있다.

대안적으로, 장기간 동안 환자의 순환계에서 유효량의 티모신 펩티드를 유지시켜 주기 위해 티모신 펩티드는 치료 당일 복수 회에 걸친 주사 (서브용량의 티모신 펩티드)에 의해 투여될 수 있다. 티모신 치료 당일 환자의 순환계에서 유효량의 티모신 펩티드를 실질적으로 연속하여 유지시켜 주는 데 적합한 주사 요법으로는 투여 당일 매 2, 3, 4, 6, 8시간 등의 간격으로 주사 (예컨대, 2 내지 5회 주사)하는 것을 포함할 수 있다.

환자에게 티모신 펩티드를 약 0.0001-0.1 mg/hr/kg (환자 체중) 범위 이내인 속도로 투여함으로써 유효량의 티모신 펩티드 (예컨대, TA1)는 환자의 순환계에서 실질적으로 연속하여 유지될 수 있다. 예시적인 투여 속도는 약 0.0003-0.03 mg/hr/kg (환자 체중) 범위 이내이다. 연속 주입하는 경우, TA1 펩티드는 제약상 허용되는 액체 담체, 예컨대, 주사용수, 또는 염수 중에 생리학적 농도로 존재한다.

일부 실시양태에서, 치료 요법은 8주간 지속된다. 일부 실시양태에서, 치료 첫 2주 동안은 티모신을 매일 주사하는 것을 포함하였다. 일부 실시양태에서, 주사는 매주 2회 제공된다. 일부 실시양태에서, 3주째를 시작으로 주사는 매주 2회 제공된다. 일부 실시양태에서, 주사는 2주 동안 매일 제공된 후, 3주째를 시작으로 매주 2회 제공된다. 일부 실시양태에서, 주사는 2주 동안 매일 제공되고, 3 내지 5주 동안 매주 2회 제공된다. 일부 실시양태에서, 치료 요법은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10주 이상 동안 지속된다. 일부 실시양태에서, 치료 요법은 1, 2, 3, 4, 5, 6개월 이상 동안 지속된다. 일부 실시양태에서, 티모신 펩티드는 티모신 펩티드를 약 1 내지 약 4주 (예컨대, 약 2주) 동안 매일 주사한 후, 약 4 내지 8주 (예컨대, 약 6주) 동안 주당 2회 주사하는 것을 포함하는 요법으로 투여된다.

본 발명은 인간 및 동물 건강, 둘 모두에 적용될 수 있다. 따라서, 대상체는 일반적으로 포유동물, 예컨대, 인간, 가축 (예컨대, 소, 말, 돼지, 양 등), 또는 사육 포유동물 (예컨대, 고양이 또는 개)이다.

일부 실시양태에서, 대상체는 천식 또는 알레르기성 질환을 앓는다. 일부 실시양태에서, 대상체는 면역결핍이다. 면역결핍 대상체 (예컨대, 인간 대상체)는 감염성 질환과 싸울 수 있는 능력이 감소되어 있고/거나, 병원체 노출에 대해 반응할 수 있는 능력이 감소되어 있는 것으로 나타난다. 상기 면역결핍 대상체의 예로는 노인 환자, 신생아, 백혈병 또는 호중구 감소증 환자, (예컨대, 만성 신장 질환 치료를 위해) 혈액 투석 중인 환자, 면역억제제 요법을 받는 환자, AIDS 환자, 당뇨병 환자, 암 치료를 위한 화학요법 또는 방사선 요법을 받는 환자, 유전적 결함, 영양실조, 약물 남용, 알콜 중독에 의해 유발되는 면역결핍, 또는 다른 면역 손상 질병 또는 병증을 포함한다.

요법은 화농성 비부비동염에 대한 항생제 요법 또는 수술 실패 이후에 수행될 수 있다. 감염이 항생제에 대해 저항성을 띠는 것으로 간주되는 경우, 티모신 펩티드는 항생제 요법 없이 단독으로 투여될 수 있다. 대안적으로, 항생제 요법은 티모신 펩티드 요법과 함께 공동으로 수행될 수 있다.

본 발명에 따라, 티모신 펩티드는 단독으로, 또는 다른 작용제, 예컨대, 항생제, 항진균제 또는 항바이러스제와 함께 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 티모신 펩티드는 티모신 펩티드 및 하나 또는 그 이상의 항생제, 항진균제, 항바이러스제, 충혈 완화제/거담제, 스테로이드제 또는 다른 작용제를 함유하는 투여용의 단일 조성물로서 제제화될 수 있다. 다른 실시양태에서, 제약 조성물은 티모신 펩티드를 투여용의 한 조성물로서, 및 하나 또는 그 이상의 항생제, 항진균제, 항바이러스제, 충혈 완화제/거담제, 스테로이드제 또는 다른 작용제를 함유하는 투여용의 별개의 조성물로서 제제화될 수 있다. 일부 실시양태에서, 티모신 펩티드와 함께 더 많은 항생제, 항진균제, 항바이러스제, 충혈 완화제/거담제, 스테로이드제 및/또는 다른 작용제로 이루어진 조합물은 단일 투여용으로, 또는 투여용의 별개의 조성물로서 제제화될 수 있다.

항생제로는 예를 들어, 페니실린 (예컨대, 제한하는 것은 아니지만, 아목시실린 또는 아목시실린/클라부라네이트), 플루오로퀴놀론 (예컨대, 제한하는 것은 아니지만, 목시플록사신), 마크롤라이드 항생제 (예컨대, 제한하는 것은 아니지만, 클라리트로마이신 및 아지트로마이신), 테트라시클린 (예컨대, 제한하는 것은 아니지만, 독시시클린), 또는 아미노글리코시드 항생제 (예컨대, 제한하는 것은 아니지만, 젠타마이신)를 포함할 수 있지만, 이에 한정되지 않는다.

항진균제로는 예를 들어, 암포테리신 B, 이트라코나졸 및 보리코나졸을 포함할 수 있지만, 이에 한정되지 않는다.

항바이러스제로는 예를 들어, 리바비린을 포함할 수 있지만, 이에 한정되지 않는다.

충혈 완화제/거담제로는 구아이페네신, 슈도에페드린, 또는 조합물, 예컨대, 뮤시넥스 D(Mucinex D) (구아이페네신 및 슈도에페드린 HCL)를 포함할 수 있지만, 이에 한정되지 않는다.

스테로이드제로는 메틸프레드니솔론, 코르티코스테로이드제 (예컨대, 제한하는 것은 아니지만, 트리암시놀론), 프레드니손 및 글루코코르티코스테로이드제 (예컨대, 제한하는 것은 아니지만, 모메타손 푸로에이트 및 덱사메타손)를 포함할 수 있지만, 이에 한정되지 않는다.

다른 작용제로는 도르나제 알파 (풀모자임(Pulmozyme); 폐에서 점성을 감소시키는 재조합 인간 데옥시리보뉴클레아제 I (rhDNase)), 오말리주맙 (졸레어(Xolair); 재조합 DNA-유래 인간화된 IgG1k 모노클로날), 테오필린 (이는 또한 디메틸크산틴으로도 알려져 있음), 마취제 (예컨대, 제한하는 것은 아니지만, 프로포폴 및 세보플루란) 및 오피오이드 진통제 (예컨대, 제한하는 것은 아니지만, 레미펜타닐)를 포함할 수 있지만, 이에 한정되지 않는다.

일부 실시양태에서, 티모신 펩티드는 비부비동 세척 및/또는 외과적 처치와 함께 병용하여 사용될 수 있다. 비부비동 세척은 처치, 예컨대, 염수 용액을 이용하는 세척을 포함할 수 있다. 외과적 처치는 장기 또는 만성 염증에 기인하여 유발될 수 있는 코 폴립의 제거를 포함할 수 있다.

본 발명에 따라, 대상체에서 단핵구 또는 과립구 분극 장애를 예방, 호전 또는 치료하는 방법 뿐만 아니라, 단핵구 또는 과립구 분극을 유도하는 방법 또한 제공한다. 단핵구 분극 장애는 화농성 비부비동염 뿐만 아니라, 자가면역 질환 및 병증 (그레이브스병 및 갑상샘 자가면역 질환 (TAID))을 비롯한 다양한 질환 및 병증과 관련이 있을 수 있다. 상기 방법은 (예컨대, 분극을 유도함으로써) 단핵구 또는 과립구 분극 장애를 예방, 호전 또는 치료하기 위해 티모신 알파 1을 포함하는 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 본 방법에 따라, 투여용 조성물 및 투여 요법은 상기 기술된 바와 같다. 일부 실시양태에서, 티모신 알파를 포함하는 조성물을 사용하여, 분극 장애를 앓지 않는 개체와 관련된 표준 수준과 비교하였을 때, 단핵구 분극을 정상 수준으로 증가시킬 수 있다. 분극 장애가 있는 대상체는 본원에 기술된 바와 같이 말초 혈액 단핵구 중의 FMLP-유도성 분극에 의해 확인될 수 있다.

본 발명은 또한 1) 투여 단위의 티모신 펩티드로 이루어진 한 세트, 및 2) 화농성 비부비동염, 또는 단핵구 또는 과립구 분극 장애를 치료, 호전 또는 예방하기 위해 티모신 펩티드를 포함하는 조성물을 투여하는 것에 관한 설명서, 및/또는 3) 분극을 검사하기 위한 하나 또는 그 이상의 시약을 포함하는 키트를 제공한다. 일부 실시양태에서, 조성물 중의 티모신 펩티드는 티모신 알파 1이며, 본원에 기술된 치료 요법을 수행하는 데 충분한 개수의 용량으로 제공된다. 용량은 종래 바이알로 제공될 수 있거나, 또는 개별 투여 단위 (예컨대, 피하 주사용 예비투여 펜)로서 제공될 수 있다. 분극을 검사하기 위한 시약은 밀도 구배 원심분리에 충분한 샘플 튜브 및 FMLP 중 하나 또는 그 이상을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 키트 중의 티모신 펩티드는 체액 인자를 함유하지 않는다. 일부 실시양태에서, 조성물 중의 티모신 펩티드는 티모신 알파 1이고, 조성물은 체액 인자를 함유하지 않는다.

실시예

실시예 1 :

환자 10명의 결과를 평가하였다. 환자 10명의 단핵구 및 과립구 분극을 평가하였다. 처음에, 환자 중 3 내지 4명의 환자의 경우, 분극이 감소된 상태로 시작되었다. 티모스티뮬린 (TP-1)은 시험관내에서 분극을 개선시키는 것으로 나타났다. 특히, 티모신 알파 (티말파신)는 시험관내에서 분극을 개선시키고, 회복시키는 데 있어서 탁월한 작용을 하였다 (도 1 참조). 건강한 기증자 단핵구의 N-포르밀메티오닐-류실-페닐알라닌 (fMLP)-유도성 분극이 대조군으로서의 역할을 하였다 (도 2 참조). 농도는 TP-1은 1 mg/ml, 티말파신은 0.1 mg/ml 및 fMLP는 10^-8 M이었다.

선행 연구에서는 생체내에서 단핵구 분극이 감소된 환자를 티모신 알파 1로 처리하여 생체내에서 단핵구 분극에 미치는 효과를 측정하는 것으로 하였다.

실시예 2:

화농성 비부비동염 환자를 티모신 알파 1로 처리하였다. 문헌 [Tas, et al., (Clin. Exp. Immunol. 80:304-313 (1990))]에 기술되어 있는 연구와 유사하게, 본 연구에 포함시키고자 하는 환자는 하기 기준을 사용하여 스크리닝하는 것으로 하였다 (예컨대, 문헌 [Drexhage et al., Clin. Immunol. Immunopathol. 28:218 (1983)] 및 [Recent Advances in Primary and Acquired Immunodeficiencies, vol. 28 (ed. by F. Aiuti, F. Rosen & M. D. Cooper) p. 395. Serono Symposia Publications, Raven Press, New York (1985)] 참조):

(1) (a) 이전 검사에서의 결손 단핵구 분극, 및/또는 (b) 이전 검사에서 칸디딘(Candidin), 스트렙토키나제-스트렙토도르나제 (Sk/Sd) 및/또는 H. 인플루엔자에(H. influenzae) 항원에 대한 결손 피부 테스트, 및/또는 (c) 이전 검사에서 칸디딘, Sk/Sd 및/또는 H. 인플루엔자에에 대한 결손 MIF-생산에 의해 시사되는 바와 같은, 공생 미생물에 대한 결손 세포-매개성 면역 (CMI);

(2) (a) 질환 지속 기간 적어도 18개월, (b) 1회 또는 그 이상의 경우에서 H. 인플루엔자에, S. 뉴모니아에(S. pneumoniae), 다른 스트렙토콕시(Streptococci), 또는 스타필로콕시(Staphylococci)에 대해 양성 배양, (c) 수회에 걸친 항생제 과정으로 치료받은 후에도 무반응이거나, 또는 오직 일시적인 완화만을 보인 경우, (d) 사골동 및 상악동의 배출을 개선시킴으로써 영구적으로 치유하는 수술에서의 실패, (e) 육안상 점액섬모 수송상에 교란이 없는 것에 의해 시사되는 바와 같은, 만성 화농성 비부비동염의 재발.

환자는 정상 수준의 전체 혈청 IgG, IgM 및 IgA, 정상적인 총 개수의 말초 혈액 백혈구, 및 정상적인 감별 림프구 계수를 가질 것으로 예상되었다.

티모신 알파 시험을 수행하는 동안에는 항생제 및/또는 면역계에 영향을 미치는 것으로 알려져 있는 다른 약물을 이용하는 추가 치료는 제공하지 않는 것으로 하였다. 그러나, 후속 병용 요법은 적용될 수 있었다.

환자는 사전 동의서에 동의하는 것으로 하였고, 본 시험에 착수하는 병원의 윤리 위원회는 시험을 승인하는 것으로 하였다.

처리는 (1 mg/kg (체중)의) 티모신 알파 1, 또는 그의 위약 [용매 (발열원 무함유 염화나트륨 용액) + 담체 (만닛톨); 구체적으로, 세로노(Serono) 제조]을 근육내 주사하는 것으로 구성되었다. 환자를 2개의 군: 티모신 알파 1 주사로 시작하는 하나의 군, 위약 주사를 받는 다른 나머지 군으로 무작위로 배정하는 것으로 하였다.

처리는 8주 동안 제공되는 것으로 하였다. 첫 2주 동안은 매일 주사를 제공하고, 이어서, 6주 동안 주당 2회 주사하는 것으로 하였다. 9주째, 환자의 세포-매개성 면역을 테스트하기 위해 어떤 처리도 하지 않는 것으로 하였다.

이후, 스케줄을 "교차시키는 것으로 하였다"; 앞서 위약을 제공받은 환자에게는 티모신 알파 1을 제공하는 것으로 하고, 앞서 티모신 알파 1을 제공받은 환자에게는 위약을 제공하는 것으로 하였다. 처리는 8주 이상 동안 제공되는 것으로 하였다.

본 시험 전 주에, 각 환자에 대하여 하기 테스트를 수행하는 것으로 하였다 (각 기법에 대해서는 하기 참조): (1) 코 검사, (2) 코로부터의 박테리아성 배양물, (3) BSR, (4) 박테리아성 항원을 이용한 DTH 피부 테스트, (5) 말초 혈액 중 림프구 서브세트 측정, (6) MIF 검정, (7) 말초 혈액 단핵구를 이용한 분극 검정, (8) 혈청 중 P15E-유사 인자 측정.

테스트 1, 2, 3, 7 및 8은 4, 8, 13 및 17주째에 (시험 종료시에) 반복하는 것으로 하였다. 테스트 4, 5 및 6은 8주째 (교차 이전) 및 17주째에 (시험 종료시에)만 반복하는 것으로 하였다.

모든 환자에서 간 기능 (빌리루빈, ALAT, ASAT) 및 신장 기능 (크레아티닌, 단백뇨)과 관련 파라미터는 처리하는 동안 체크하는 것으로 하였다.

DTH 피부 테스트. 하기 피부 테스트 항원을 사용하는 것으로 하였다 (문헌 [Drexhage et al., Recent Advances in Primary and Aquired Immunodeficiencies , vol. 28 (ed. by F. Aiuti, F. Rosen & M. D. Cooper) p. 395. Serono Symposia Publications, Raven Press, New York (1985)] 참조): (1) 문헌 [Drexhage et al., 1983; van der Plassche-Boers et al., J. Immunol. Methods, 83:353 (1985)]에 기술되어 있는 바와 같이 제조된, 250 pg/ml의 체세포 H. 인플루엔자에 항원; (2) 2개의 상업적으로 이용가능한 제제; 즉, 1% 칸디다성 항원 (HAL 알레르겐, 하를렘(Haarlem: 네덜란드)); 및 100 U/ml Sk 및 50 U/ml Sd (배리다제(Varidase), 리덜(Lederle: 미국 미시간주 웨인)).

0.1 ml의 각 항원 제제 현탁액을 팔뚝 진피내 주사함으로써 지연성 반응을 테스트하는 것으로 하였다. 30분, 6시간, 24시간 및 48시간째에 피부 반응을 판독하고, 직각을 이루는 두 측정부의 측정치의 평균값으로 표현되는, 경화부 직경을 기록하는 것으로 하였다.

전체 말초 혈액 림프구 및 림프구 서브세트 계산

피콜-이소파크(Ficoll-Isopaque) 밀도 구배 원심분리 (파마시아(Pharmacia: 스웨덴 웁살라))에 의해 단리된 말초 혈액 림프구를, 제조사에 의해 지시된 바와 같이, T 세포에 대한 CD3+ 항체 (Leu 4; 벡톤 디킨슨(Becton Dickinson: 미국 캘리포니아주 마운틴 뷰)), T 세포에 대한 CD2+ 항체 (OKT I 1; 오르토클론 오르토(Orthoclone Ortho: 미국 뉴저지주 라리탄)), CD4+ 헬퍼/유도인자 T 세포 (Leu 3a), CD8+ 억제인자/세포독성 T 세포 (Leu 2a), 및 CD24+ B 세포 (BA-1; 하이브리테크(Hybritech: 미국 캘리포니아주 샌디에고))와 함께 반응시킴으로써 림프구 및 림프구 서브세트의 비율(%)을 측정하는 것으로 하였다. 대략 200여 개의 세포가 계수될 것으로 예측되었다; 테스트는 이중으로 수행하는 것으로 하였다. 전체 말초 림프구 계수로부터 곱셈을 실시하여 T 세포 및 T 세포 서브세트의 절대 개수를 계산하는 것으로 하였다.

대식세포 이동 억제 인자 테스트. 간접 미적 아가로스 검정법 (상세한 설명에 대해서는 문헌 [van der Plassche-Boers et al., Clin. Exp. Immunol. 66:516 (1986)] 참조)을 이용하여 대식세포 억제 인자 (MIF) 생산을 추정하는 것으로 하였다. 간략하면, 말초 혈액 단핵 세포 (대략 2.5 x 10⁶개)를 H. 인플루엔자에, 칸디딘 및 Sk/Sd 항원과 함께 배양하는 것으로 하였다. 미토겐 콘카나발린 A(Concanavalin A) (Con A, 시그마(Sigma: 미국 미주리주 세인트루이스))를 사용하여 상청액을 제조하는 것으로 하였다. 또한, 3일 동안 배양 (37℃, 대기 중 5% CO₂)한 후, 상청액을 수집하는 것으로 하고, MIF 활성에 대하여 테스트할 때까지 -20℃에서 보관할 수 있었다.

문헌 [Thurman et al., (1983)]에 따라 지표 세포로서 인간 단핵구 모양 U937을 사용하여 인간 미적 아가로스 검정법을 수행하는 것으로 하였다 (문헌 [Singh & Khan, J. Clin. Hemat. Oncol. 12:29 (1982)]). 0.2% 아가로스 중의 세포 (대략 2 x 10⁷개의 세포/ml) (마린 콜로이드즈(Marine Colloids: 미국 록랜드))로부터 1 ㎕의 소적을, 0.05 mL 기밀 시린지가 장착된 해밀턴 리피팅 디스펜서(Hamilton Repeating Dispenser) (해밀턴(Hamilton: 미국 아칸소주 리노))를 이용하여 바닥이 평평한 마이크로타이터 플레이트 (눈크(Nunc: 덴마크))의 웰 중앙에 배치시키는 것으로 하였다. 소적을 4℃에서 10-20분 동안 그대로 방치하여 고형화시키고, 새 배지를 이용하여 1:1로 희석된, 0.1 ml의 해동된 상청액을 이용하여 주의를 기울여 오버레이시키는 것으로 하였다. 각 상청액마다 5회에 걸쳐 테스트하는 것으로 하였다.

커버가 부착된 플레이트를 대기 중 5% CO₂에서 37℃하에 21시간 동안 인큐베이션시킨 후, 이동 면적 (세포 이동 면적 - 아가로스 소적 면적)을 산출하는 것으로 하였다. MIF 생산은 이동 억제율(%)로서 표현하는 것으로 하였다:

MI = 100 - ((항원으로 자극을 받은 배양물 중에서의 평균 이동 면적)/(배지 중에서의 평균 이동 면적)) x 100%.

말초 혈액 단핵구 단리 및 분극 검정.

피콜-이소파크 밀도 구배 원심분리에 단리된 말초 혈액 단핵 세포 (20 x 10⁶개)를, 0.5% 우혈청 알부민 (BSA)을 함유하는 포스페이트 완충처리된 염수 (PBS) (pH 7.4)로 2회에 걸쳐 세척하는 것으로 하고, 비-특이 에스터라제를 이용하는 양성 염색법을 사용하여 현탁액 중에서 계수하는 것으로 하였다 (문헌 [Mullink et al., J. Immunol. Methods, 29: 133 (1979)]). NSE 양성 세포의 비율(%)은 5-25%로 다양하였다. 퍼콜(Percoll) 구배 원심분리 (문헌 [Pertoft et al., J. Immunol. Methods 33:22 (1980)])에 의해 피콜-파크(Ficoll-Paque) 단리된 분획 중 단핵구 농축물을 수득하는 것으로 하였다. 세척 후, 단핵구를 함유하는 펠릿을 상기 언급된 배지 중에 재현탁시키고, 동량의 퍼콜 1.063 (파마시아: 스웨덴 웁살라)을 이용하여 주의를 기울여 언더레이시키는 것으로 하였다. 원심분리 후 (40 분, 450 g), 세포를 계면으로부터 수집하고, 배지 중에서 2회에 걸쳐 세척하고 (10분, 500 x g), 계수하는 것으로 하였으며; 이에 현탁액은 70-95%의 NSE 양성 세포를 함유하였다.

단핵구 분극에 대한 시안시올로 & 스나이더맨(Cianciolo & Snyderman) 검정을 약간 변형시켜 수행하는 것으로 하였다 (예컨대, 문헌 [Tan et al., Arch. Otolaryngol. Head Neck Surg. 112:541 (1986)] 참조); 0.2 x 10⁶개의 단핵구를 함유하는, 0.2 ml 분취량의 퍼콜- 또는 일렉티케이터(electicator)-정제된 현탁액을, 0.05 mL의, 배지 또는 배지 중 N-포르밀-메티오닐-류실-페닐알라닌 (FMLP)을 함유하는 12-75 mm 폴리프로필렌 튜브 (팔콘 랩웨어 디비젼 오브 벡톤 디킨슨 컴퍼니(Falcon Labware Division of Becton Dickinson Co.: 미국 캘리포니아주 옥스나드))에 첨가하여 최종 농도가 10 nM에 도달하게 하는 것으로 하였다. 모든 실험은 이중으로 수행하는 것으로 하였다. 튜브를 37℃ 수조에서 15분 동안 인큐베이션시키는 것으로 하였다. 0.05% PBS (pH 7.2) 중 0.25 ml 빙냉 10% 포름알데히드를 첨가함으로써 인큐베이션을 종결시키는 것으로 하였다. 일반 광학 현미경 (확대 배율 250 x)을 이용하여 혈구계로 계수할 때까지 세포 현탁액을 4℃에서 보관하는 것으로 하였다. 테스트는 2명의 사람이 '맹검 방식으로' 판독하는 것으로 하였고, 각 튜브로부터 200개의 세포가 계수될 것으로 예측되었다. 하기 중 임의의 것이 발생할 경우, 세포는 '분극화된 것'으로 간주되는 것으로 하였다: (1) 신장형 또는 삼각형 형상, (2) 확장된 라멜로포디아(lamellopodia), (3) 막 주름짓기.

분극화된 단핵구의 비율(%)은 하기와 같이 계산하는 것으로 하였다:

(분극화된 총 세포의 비율(%) x 100%)/(NSE 양성 세포의 비율(%)) x 100%. 림프구는 본 검정에서 어떤 분극 활성도 보이지 않는 것으로 예측되었다 (문헌 [Cianiolo & Snyderman, J. Clin. Invest. 67:60-68 (1981)]).

단핵구 집단의 화학주성 반응을 FMLP 존재하의 분극화된 단핵구의 비율(%)-FMLP 부재하의 분극화된 단핵구의 비율(%)로 표현하였다. 본 검정은 단핵구 화학주성을 테스트할 수 있는 신속한 방법인 것으로 입증되었고, 본 검정의 결과는 화학주성을 측정하는 종래의 보이덴(Boyden) 챔버 검정의 결과와 밀접한 상관관계가 있는 것으로 나타났다 (문헌 [Tan et al., Arch. Otolaryngol. Head Neck Surg. 112:541 (1986)]). FMLP-유도성 분극 값이 20% 미만인 경우, 이는 비정상적인 것으로 간주되는 것으로 하였다.

환자 혈청 중 단핵구 분극을 억제하는 저분자량 인자 ( LMWF )의 측정. 정맥천자에 의해 환자로부터 혈청을 수집하고, 염수 중에 1:1로 희석하는 것으로 하였다. 상기 희석액을 15분 동안 700 g으로 한외여과시키는 것으로 하였다 (분자량 '컷 오프 점'은 25 kD인 것으로 하였음). 잔류물을 재현탁시키고, 추가로 사용할 때까지, -70℃에서 보관하는 것으로 하였다.

단핵구 (1 x 10⁶개/ml)를 FMLP 단독으로 그와 함께, 또는 혈청 분획과 함께 조합하여 FMLP와 함께 (최종 희석률 1:60) 37℃에서 15분 동안 인큐베이션시킴으로써 건강한 기증자 단핵구의 FMLP 유도성 분극을 억제시킬 수 있는 혈청 분획의 능력을 측정하는 것으로 하였다.

기증자 단핵구에 혈청 분획만을 단독으로 첨가하였을 때에는 분극에는 어떤 영향도 없는 것으로 예측되었다. 혈청 분획 첨가에 의해 유발되는, FMLP 유도성 분극 - 자발성 분극의 억제율(%)을 계산하는 것으로 하였다.

항-PiSE 모노클로날 항체 및 티모신 알파 1이 혈청 LMWF의 활성에 미치는 시험관내 효과. 일련의 본 실험에서, 세정기로 정제된, 건강한 기증자 1명의 단핵구 (문헌 [de Boer & Roos, J. Immunol. 136:3447 (1986)])를 지표계로서 사용하는 것으로 하였다. 간략하면, 퍼콜 원심분리 (20 분, 1,000 g, 실온)를 통해 450 ml 전혈로부터 단핵 세포를 분리하는 것으로 하였다. 이후, 단핵 세포를 세정 원심분리 시스템 (JE-6 세정 회전자가 장착된 베크만(Beckman) J21 원심분리기) 내로 주사하는 것으로 하였다. 세정 매질은 13 mM 시트르산삼나트륨 및 5 mg의 인간 알부민/ml를 함유하는 PBS인 것으로 하였다. 상이한 세포 집단을 분리하기 위해, 회전자 속도는 4,000 rev/분에서 0 rev/분으로 감소시키면서, 유속은 20 ml/분으로 일정하게 유지시키는 것으로 하였다. 2,500 rev/분으로 분획을 수집하였다. 퍼콜 구배 원심분리 후, 상기 분획은, 비-특이 에스터라제 활성에 대해 양성인 것으로 판정되는 바, 93-97%의 단핵구를 함유하였다. 단핵구를 사용할 때까지 액체 질소 중에 보관하는 것으로 하였다.

지표 시스템을 이용하여 LMWF의 P15E-유사 특징을 입증하는 것으로 하였다. 4℃에서 16 h 동안 1:200의 최종 희석률로 두 P15E-특이 모노클로날 항체 (하기 참조)의 조합물과 함께 혈청 분획을 인큐베이션시킨 후, 아미콘(Amicon) 한외여과를 수행하여 형성된 복합체를 제거함으로써 흡착 실험을 수행하는 것으로 하였다; 상기 흡착 절차는 2회에 걸쳐 수행하는 것으로 하였다 (문헌 [Tan et al., Arch. Otolaryngol. Head Neck Surg. 112:541 (1986)] 및 [Tan et al., Arch. Otolaryngol. Head Neck Surg. 112:942 (1986)]). 사용된 모노클로날 항체는 4F5 및 19F8 (항-PI SE 이소형 IgG2a 및 IgG2b; G. J. 시안시올로(G. J. Cianciolo) 박사, 제넨테크 인코퍼레이티드(Genentech Inc.), 파마콜로지컬 사이언시즈(Pharmacological Sciences: 미국 캘리포니아주 사우쓰 샌프란시스코)에 의해 기증받음)의 조합물인 것으로 하였다. 항-인간 IgG (타고(Tago: 미국 캘리포니아주 벌링게임))를 대조군 항체로 사용하는 것으로 하였다.

배양액 중 희석되거나, 티모신과 함께 인큐베이션된 < 25 kDa의 환자의 혈청 분획 (최종 희석액 67 ㎍/ml), 및 모노클로날 항체를 이용한 흡착 이후의 혈청 분획을 단핵구 분극 검정으로 테스트하는 것으로 하였다. 티모신 알파 1이 단핵구 분극을 증가시키는 것으로 예측되었다.

본원에서 논의되고, 인용된 모든 문헌은 그의 전문이 본원에 참조로 포함된다. 방법, 프로토콜 및 물질은 달라질 수 있는 바, 개시된 발명은 본원에 기술된 특정 방법, 프로토콜 및 물질로 제한되지 않는 것으로 이해된다. 본원에서 사용된 용어는 단지 특정 실시양태를 기술하기 위한 목적이며, 오직 첨부된 특허청구범위로 제한되는 본 발명의 범주를 제한하고자 하는 것이 아닌 것으로 이해된다.

당업자는 단지 통상의 실험만을 사용한 경우에도 본원에 기술된 본원의 구체적인 실시양태에 대한 다수의 균등물을 이해하거나, 확인할 수 있을 것이다. 이러한 균등물은 첨부된 특허청구범위에 포함시키고자 한다.

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<110> SciClone Pharmaceuticals, Inc. <120> USE OF THYMOSIN ALPHA FOR TREATMENT OF PURULENT RHINOSINUSITIS <130> IPA140918-US <150> US 61/608,427 <151> 2012-03-08 <160> 1 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> THYMOSIN ALPHA 1 (TA1) <400> 1 Ser Asp Ala Ala Val Asp Thr Ser Ser Glu Ile Thr Thr Lys Asp Leu 1 5 10 15 Lys Glu Lys Lys Glu Val Val Glu Glu Ala Glu Asn 20 25

Claims

화농성 비부비동염을 치료, 호전, 또는 예방하기 위해 대상체에게 유효량의 티모신 펩티드를 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하며,
여기서, 상기 조성물은 체액 인자를 함유하지 않는 것인, 대상체에서 화농성 비부비동염을 예방, 호전 또는 치료하는 방법.
제1항에 있어서, 티모신 펩티드가 티모신 알파 1 (TA1)인 방법.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 조성물이 티모스티뮬린 (TP-1)이 아닌 것인 방법.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, TA1이 합성 또는 재조합인 방법.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 만성 또는 재발성 화농성 비부비동염을 앓는 것인 방법.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 화농성 비부비동염이 박테리아성, 바이러스성, 혼합형 또는 미지의 병인인 방법.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 티모신 펩티드 투여 이전에 비정상적인 단핵구 분극에 대하여 양성으로 검사되었던 것인 방법.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 티모신 펩티드 투여를 통해 단핵구 분극이 증가되는 것인 방법.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 화농성 비부비동염에 대한 수술 및/또는 항생제로 성공적으로 치료되지 못했던 것인 방법.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 티모신 펩티드를 화농성 비부비동염에 대한 수술 이후에 및/또는 항생제와 함께 투여하는 것인 방법.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 항생제를 투여받지 않는 것인 방법.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 티모신 펩티드를 약 1 mg 내지 최대 약 5 mg까지의 용량으로 투여하는 것인 방법.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 티모신 펩티드를 약 1.6 mg의 용량으로 투여하는 것인 방법.
제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 티모신 펩티드를 약 3.2 mg의 용량으로 투여하는 것인 방법.
제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 티모신 펩티드를 주사 또는 주입에 의해 투여하는 것인 방법.
제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 티모신 펩티드를 근육내 또는 피하 주사에 의해 투여하는 것인 방법.
제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체에서의 티모신 펩티드의 혈장 반감기를 증가시키기 위해 티모신 펩티드를 수용성 중합체에 컨쥬게이트시키는 것인 방법.
제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 티모신 펩티드를 약 2주 동안 매일 주사한 후, 약 6주 동안 주당 2회 주사함으로써 투여하는 것인 방법.
단핵구 또는 과립구 분극을 유도하기 위해 대상체에게 유효량의 티모신 펩티드를 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하며,
여기서, 상기 조성물은 체액 인자를 함유하지 않는 것인, 대상체에서 단핵구 또는 과립구 분극 장애를 예방, 호전 또는 치료하는 방법.
단핵구 또는 과립구 분극을 증가시키기 위해 단핵구 또는 과립구 분극 장애를 앓는 대상체에게 유효량의 티모신 펩티드를 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하며,
여기서, 상기 조성물은 체액 인자를 함유하지 않는 것인, 단핵구 또는 과립구 분극 장애를 앓는 대상체에서 단핵구 또는 과립구 분극을 증가시키는 방법.
제19항 또는 제20항에 있어서, 대상체가 티모신 펩티드 투여 이전에 단핵구 또는 과립구 분극 장애에 대하여 양성으로 검사된 것인 방법.
1) 한 세트의 합성 또는 재조합 티모신 펩티드 투여 단위, 및 2) 화농성 비부비동염, 또는 단핵구 또는 과립구 분극 장애를 치료, 호전 또는 예방하기 위해 티모신 펩티드를 포함하는 조성물을 투여하는 것에 관한 설명서, 및/또는 3) 단핵구 또는 과립구 분극을 검사하기 위한 하나 또는 그 이상의 시약을 포함하는 키트.