KR20150023063A

KR20150023063A - 특정 시기 내에 임신중독증의 개시를 배제하기 위한 sFlt-1/PlGF 또는 엔도글린/PlGF 비의 적용 수단 및 방법

Info

Publication number: KR20150023063A
Application number: KR1020157002152A
Authority: KR
Inventors: 마르틴 훈트; 마리아 쇠들
Original assignee: 에프. 호프만-라 로슈 아게
Priority date: 2012-06-27
Filing date: 2013-06-24
Publication date: 2015-03-04
Also published as: SG11201407667UA; CA2871878C; JP2015525870A; JP5937756B2; KR20160116060A; ES2681238T3; CA2871878A1; EP2867670A1; EP2867670B1; US20150338415A1; MX356775B; BR112014029233A2; HK1208264A1; MX2014014463A; BR112014029233A8; CN104412107A; KR101996123B1; CN104412107B; AU2013283540A8; WO2014001244A1

Abstract

본 발명은 임식중독증의 산전 진단을 위한 진단 검정 분야에 관한 것이다. 특히 이는 하기 단계를 포함하는, 임신한 대상체가 단 시간 내에서 임신중독증의 위험이 없는지 여부를 진단하는 방법에 관한 것이다:
a) 상기 대상체의 시료에서 sFlt-1, 엔도글린 및 PlGF 로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 혈관신생 생체지표의 양을 측정하는 단계, 및
b) 이를 참조량과 비교하여, 이로써 대상체가 짧은 시기 내에 임신중독증으로 발전할 위험이 없는지를 진단하며 (sFlt-1 및 엔도글린의 경우에 대해서는 이의 양이 참조량과 비교하여 동일하거나 감소한 경우, PlGF 경우에 대해서는 이의 양이 참조량과 동일하거나 증가한 경우), 이때 상기 참조는 약 98% 이상의 음성예측도를 갖는 진단을 허용한다.
또한, 상기 방법을 수행하는 장치 및 키트가 고려된다.

Description

특정 시기 내에 임신중독증의 개시를 배제하기 위한 sFlt-1/PlGF 또는 엔도글린/PlGF 비의 적용 수단 및 방법{MEANS AND METHODS APPLYING sFlt-1/PlGF OR ENDOGLIN/PlGF RATIO TO RULE-OUT ONSET OF PREECLAMPSIA WITHIN A CERTAIN TIME PERIOD}

본 발명은 임식중독증의 산전 진단을 위한 진단 검정 분야에 관한 것이다. 특히 이는 하기 단계를 포함하는, 임신한 대상체가 단 시간 내에서 임신중독증의 위험이 없는지 여부를 진단하는 방법에 관한 것이다:

a) 상기 대상체의 시료에서 sFlt-1, 엔도글린 및 PlGF 로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 혈관신생 생체지표의 양을 측정하는 단계, 및

b) 이를 참조량과 비교하여, 이로써 대상체가 짧은 시기 내에 임신중독증으로 발전할 위험이 없는지를 진단하며 (sFlt-1 및 엔도글린의 경우에 대해서는 이의 양이 참조량과 비교하여 동일하거나 감소한 경우, PlGF 경우에 대해서는 이의 양이 참조량과 동일하거나 증가한 경우), 이때 상기 참조는 약 98% 이상의 음성예측도를 갖는 진단을 허용한다.

또한, 상기 방법을 수행하는 장치 및 키트가 고려된다.

임신은 복합적인 것으로, 한편으로는 임신 여성의 임신 관련 사망률과 관련되며, 다른 한편으로는 신생아의 이병율 및 사망률 증가와 관련되어 있다. 모계 사망률은 100.000 명의 생존 신생아 당 14,5 의 비율이며, 이는 39 세 이상의 산모에서 더욱 빈번하며 이는 출혈, 혈전증 폐색전, 감염, 심근증 및 심혈관 및 비심혈관성 병태 및 고혈압 장애 (임신중독증 중 가장 빈번함) 에 의해 야기될 수 있다 (Berg 2010, Obstetrics 및 Gynecology: 116: 1302 - 1309).

임신중독증은 모든 임신 중 대략 2 내지 8%를 복잡하게 만들고 이는 전세계적으로 산모 및 태아 사망률에 대한 주요 기여인자이다 (Duley 2009, Semin Perinatol: 33: 130-37). 일반적으로, 임신중독증은 임신 20 주 이후 개시되는 임신 관련 또는 임신 유도된 고혈압 및 단백뇨로서 정의된다. 본원에서 고혈압은 적어도 6 시간 이상의 시간 간격으로 떨어진 2개의 독립적인 측정에서 140 mmHg (수축기) 및/또는 90 mmHg (확장기) 의 혈압으로서 정의된다. 단백뇨는 24시간 소변 시료에서 300 mg 단백질 이상에 의해 나타난다. 그러나, 임신중독증의 정의는 논의되는 대상체에 따라 사회마다 다르게 될 수 있다. 구체적인 사항은 다양한 임상학적 가이드라인 및 의약 서적의 표준 문헌에서 확인된다 (예를 들어, ACOG Practice Bulletin, Clinical Management Guidelines for Obstetrician - Gynecologists, no.: 33, January 2002 또는 Leitlinien, Empfehlungen, Stellungnahmen of the Deutschen Gesellschaft fur Gynakologie und Geburtshilfe e.V., August 2008, NICE Clinical Guideline hypertension in Pregnancy: the management of hypertension disorders during Pregnancy, August 2010 (revised reprint January 2011).

임신중독증의 발병에 대해서는 많이 알려져 있지 않다. 그러나, 코일상 모세혈관의 손상된 리모델링과 연계된 방해받은 태반 기능에 의해 야기되는 것으로 여겨진다. 임신중독증의 발전 과정에서 발생하는 플로우 결점은 궁극적으로 sFlt-1 및 엔도글린과 같은 항-혈관신생 인자의 순환계로의 방출을 야기하는 허혈과 연계되어 있다.

현재까지 임신중독증의 유일한 치료는 미성숙한 자연분만 또는 제왕절개 수술에 의해 임신의 종결이다. 상기 논의되는 바와 같이, 산모의 위험성 및 태아의 생존 능력은 임산 34주 전의 임신중독증의 경우 현저히 손상된다. 따라서, 출산을 지연시키고 이에 따라 신생아의 생존성을 증가시키는 시도가 요구된다.

임신중독증의 초기 진단 및 신뢰할만한 진단, 특히 임신 20주 내지 40주로 초기에 발생하는 임신중독증의 배제는 상기 질병의 임상 관리에 있어서 결정적이다. 입신중독증을 앓고 있는 산모는 특별한 케어 예컨대 근접 모니터링, 지지성 치료 척도를 요하며, 중증 임신중독증으로 진행되는 경우에는 산모 태아 집중 케어 유닛 (MFICU) 을 갖는 전문 병원으로의 입원을 요하는 것으로 이해된다. 특히, 조기에 개시된 임신중독증은 심각한 부작용 및 이와 관련된 부작용 발생 측면에서 임상의에게 어려운 도전이 된다. 또한, 임신중독증의 초기 진단 및 신뢰할만한 진단 및 임신중독증의 예측은 예방 또는 치료 개입 연구 계획에 결정적이다 (Ohkuchi 2011, Hypertension 58: 859-866). 한편으로는, 특정 시점 윈도우 내에서 임신중독증에 대한 위험성이 증가된 위험 그룹에 속하는 환자를 배제할 수 있으면서, 이들은 덜 특별한 케어가 필요하고, 가장 빈번하게는 외래 치료로 치료될 수 있게 된다 (아웃 페이션트 셋팅).

도플러 초음파검사는 비정상 자궁 관류를 갖는 환자를 확인하는데 적용되며, 도플러 초음파검사에 의해 확인된 비정상 관류를 나타내는 이들 환자는 임신중독증, 자간증 및/또는 HELLP 증후군으로 발전할 위험성이 있는 것으로 나타난다 (Stepan 2007, Hypertension, 49: 818-824; Stepan 2008, Am J Obstet Gynecol 198: 175.e1-1). 그러나, 도플러 초음파검사의 단점은, 이 검사를 수행하고 결과를 평가하는데 있어서 고도로 전문화된 전문의가 요구된다는 점이다.

최근, 혈관신생 인자 및 항-혈관신생 인자는 임신중독증에 대한 지표로서 제시되어 왔다. 특히, 태반 성장 인자 (PlGF), 엔도글린 및 가용성 fsm-유사 티로신 키나아제 1 (sFlt-1) 은 임신중독증을 앓고 있는 환자에서 변하는 것으로 보고되어 있다. 건강한 개인 및 임신중독증 환자 또는 임신중독증으로 발전할 위험성이 있는 환자에서 개별 인자 및 이들의 변화는 보고되어 있으며 (참조, 예를 들어, Rana 2007, Hypertension 50: 137-142; WO2004/008946), 이외에도, sFlt-1 및 PlGF 또는 엔도글린 및 PlGF 의 비율이 진단 파라미터 또는 예후 파라미터로서 보고되어 있다 (참조, Young 2010, J Matern Fetal Neonatal Med 23(5): 366-370; Hagmann 2012, Clinical Chemistry 58(5): 1-9).

sFlt-1 및 PlGF 에 대한 단독 비율은 임신 초기 임신중독증에 대한 예후적 룰-인 (rule-in) 인자로서 보고되어 있다 (Crispi 2008, Ultrasound Obstet Gynecol 31: 303-309). 또한, 임신의 상이한 시점에서 sFlt-1 및 PlGF 의 개별 비율은 임신중독증에 대한 위험성과 개별적으로 상호관련되어 있다 (DeVivo 2008, Acta Obstetricia et Gynecologica 87: 837-842; Ohkuchi 2011, loc cit.; Kusanovic 2009, J of Maternal- Fetal and Neonatal Medicine 22(11): 1021-1038, Chaiworapongsa 2011, J Maternal- Fetal and Neonatal Medicine 24(10): 1187-1207; Benton 2011, American Journal of Obstetrics & Gynecology 205: 1.e1). 또한, 변화의 정도는 임신중독증의 임신중독증의 예후 (Kusanovic 2009, loc cit.) 또는 출산 임박에 대한 위험성 (Verlohren 2012, American Journal of Obstetrics & Gynecology 206(1): 58.e1-58.e8) 에 대해 조사되어 왔다.

그러나, 상기 언급된 종래 기술은 주로 출산 임박한 임신중독증 룰-인 진단 또는 이의 예측에 관한 것이다. 특정 시간 윈도우에서 출산 임박한 임신중독증 룰-아웃 (rule-out) 에 대해서는 덜 알려져 있다. 환자가 나타나는 날에 출산 임박한 임신중독증 룰 아웃에 대한 sFLt-1 및 PlGF 의 특정 비율에 기초한 일반적인 보고문헌이 다소 존재한다 (Stepan 2010, Z Geburtsh Neonatol 214: 234-238).

그러나, 외관상 건강한 산모에서 특정 시기 내에서 임신중독증을 룰-아웃시키기 위한 신뢰할만한 검정은 아직 시판되지 않고 있으나, 이는 매우 요망되고 있다.

본 발명에 놓인 기술적 문제가 상기 언급된 필요성에 따른 수단 및 방법의 제시로서 보여질 수 있다. 기술적 문제는 하기 본원 및 본원의 청구범위에서 특징화되는 구현예에 의해 해결된다.

본 발명은 하기를 포함하는, 임신한 대상체가 단 시간 내에서 임신중독증에 대한 위험성이 없는지 여부 (즉, 인신중독증을 룰-아웃시킴) 를 진단하는 방법에 관한 것이다 :

a) 상기 대상체의 시료에서 sFlt-1, 엔도글린 및 PlGF 로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 혈관신생 생체지표의 양을 측정함; 및

b) 상기 양을 참조량과 비교하여, 이로써 대상체가 짧은 시기 내에서 임신중독증으로 발전할 위험성이 없는지 진단함 (sFlt-1 및 엔도글린의 경우에선, 상기 양이 참조량과 비교하여 동일하거나 감소됨,그리고 PlGF 의 경우에선 상기 양이 참조량과 비교하여 동일하거나 증가됨, 이때 상기 참조는 약 98% 이상의 음성예측도를 갖는 진단을 허용함).

본 발명의 방법은 바람직하게는 생체외 방법이다. 또한, 상기 명시적으로 언급된 것 이외의 단계를 포함할 수 있다. 예를 들어, 추가 단계는 상기 방법에 의해 수득되는 결과의 평가 또는 시료의 예비-처리에 관한 것일 수 있다. 상기 방법은 자동화에 의해 전체적으로 또는 부분적으로 보조될 수 있으며, 이러한 자동화는 예를 들면 단계 (a) 에서 측정을 위한 적합한 로봇 및 센서 장치, 데이터 가공 장치 상의 컴퓨터-수행 계산 알고리즘 및/또는 단계 (b) 에서 데이터 가공 장치 상의 비교 및/또는 진단 알고리즘이다.

도 1 은 상이한 임신개월수에서의 sFlt-1/PlGF 의 비율을 나타낸다. 흰색 원은 시료가 채취된 (방문) 후에 1 주 내에 임신중독증 (PE) 이 없는 것으로 결정된 경우를 나타내고, 회색 원은 임신중독증 (PE) 의 경우이다. (A) n=94, 46 의 컷-오프 미만, 검출된 PE 케이스는 없음; (B) n=269; 38 의 컷-오프 미만, 오직 약간의 PE 만 검출됨.
도 2 는 상이한 임신개월수의 sFlt-1/PlGF 비율을 나타낸다. 흰색 원은 시료가 채취된 (방문) 후에 2 주 내에 임신중독증 (PE) 이 없는 것으로 결정된 경우를 나타낸다. 회색 원은 임신중독증 (PE) 을 갖는 경우를 나타낸다. 46 의 컷-오프 미만, 검출된 PE 경우 없음. (A) n=94, 46의 컷-오프 미만, 검출된 PE 경우 없음; (B) n=269; 38의 컷-오프 미만, 오직 약간의 PE 만 검출됨.
도 3 (A) 는 sFlt-1/PlGF 비율의 이변수 분포 분석을 나타내고 임신중독증 (PE) 개시때까지의 일수를 나타냄; (B) (A) 에서와 동일하나, 더 큰 코호트를 가짐.
도 4 (A) 는 시료가 채취된 (방문) 후에 1 주 내에 임신중독증 (PE) 의 개시가 없는 ROC 곡선 및 이의 통계적 분석을 나타낸다. 1.0 의 AUC (곡선 하 영역) 는 완벽한 진단 시험의 자격이 되며, 0.5 의 AUC 는 소용이 없는 것이다. AUC 에 대한 신뢰 구간은 제시 자료를 기초로 하여 추정치의 정밀도를 반영한다; n=94; (B) (A) 와 동일하나 n=269.
도 5 (A) 는 시료가 채취된 (방문) 후에 2 주 내에 임신중독증 (PE) 의 개시가 없는 ROC 곡선 및 이의 통계적 분석을 나타낸다. 1.0 의 AUC (곡선 하 영역) 는 완벽한 진단 시험의 자격이 되며, 0.5 의 AUC 는 소용이 없는 것이다. AUC 에 대한 신뢰 구간은 제시 자료를 기초로 하여 추정치의 정밀도를 반영한다; n=94; (B) (A) 와 동일하나 n=269.
도 6 은 sFlt-1/PlGF 비 (A) 및 엔도글린/PlGF 비 (B) 를 사용한 박스 플롯 그래프를 나타낸다; n=94 (PE 1 주), n=88 (PE 4 주). 각 그래프의 좌측은 비정상 도플러 초음파 검사 결과를 갖는 환자로부터의 측정치를 나타낸다 (mPI-UtA > 95. 백분위); 우측은 정상 결과를 갖는 환자에서의 측정치를 나타낸다. 또한, 측정은 각각 1주 (좌측 그래프) 및 4주 (우측 그래프) 내에서 PE/HELLP 로 발전한 환자 (붉은색 박스) 또는 그렇지 않은 환자 (녹색 박스) 에 대해 분리하였다. 그래프는 sFlt-1/PlGF 비 및 엔도글린/PlGF 비 둘 모두가, 1주 및 4주 내 둘 다에서, 특히 비정상 도플러 초음파 검사 결과를 갖는 환자에서 환자가 PE 로 발전할 것인지 아닌지를 잠재적으로 예측한 것을 나타낸다.
sFlt-1/PlGF 비율은 특히 4주 내에서 PE/HELLP 의 예측에 대해서 엔도글린/PlGF 비율을 보다 정확하게 구분하는 것으로 보인다.
도 7 은 sFlt-1/PIGF 비율을 이용하는 박스 플롯 그래프를 나타낸다 (나타낸 박스 플롯 그래프, n=269). 각 그래프의 좌측은 비정상 도플러 초음파 검사 결과를 갖는 환자로부터의 측정을 나타내고 (mPI-UtA >95. 백분위), 우측은 정상 결과를 갖는 환자로부터의 측정을 나타낸다. 또한, 측정은 각각 1주 (A), 2주 (B) 및 4주 (C) 내에서, 환자가 PE/HELLP 로 발전하는지 아닌지에 대해서 분리해서 측정한 것이다. 그래프는 특히 비정상 도플러 초음파 검사 결과를 갖는 환자에서 환자가 PE 로 발전할 것인지 아닌지 둘 다 1주, 2주 및 4주 내에서 예측하기 위한 잠재성을 갖는 것을 보여준다.
도 8: 예후 연구를 위해 (500 명의 환자 이내), 4주 이내 임신중독증의 sFlt1-PlGF 비율 컷오프를 이러한 컷오프의 성능과 함께 측정항T다 오버핏팅을 피하기 위해, 교차-타당화 방법 즉 Monte Carlo 교차-타당화를 적용하였다. 이를 위해, 모든 데이터를 2 대 1 의 비율을 갖는 2개의 별도의 서브셋 - 트레이닝세트 및 테스트세트 - 로 스플릿하였다. 이러한 스플릿 후 모델을 트레이닝세트에 대해 측정하였고 테스트세트에 대해 예측 평가하였다. 이러한 과정을 무작위 선택된 트레이닝세트-테스트세트-스플릿에 대해 1999 회 반복하였다. 결과는 1999 컷오프를 갖는 1999 예측 모델이었고, 예를 들어 약 38 의 중간값을 갖는 박스플롯에 의해 반영하였다. 이는 1주 동안 임신중독증을 룰아웃시키기 위한 큰 코호트에서 발견되는 동일한 컷오프이다 (실시예4).

본원에 사용되는 바와 같은 요어 "임신중독증" 은 고혈압 및 단백뇨를 특징으로 하는 의학적 상태를 지칭한다. 임신중독증은 산모 대상체에서 발생하며 고혈압은 또한 임신-유도 고혈압으로서 지칭된다. 바람직하게는, 임신-유도된 고혈압은 140 mmHg (수축) 및/또는 90 mmHg (확장기) 이상이 2번의 혈압 측정에 의해 대상체에서 존재하는 것으로 확인되는 것으며, 이때 상기 2번의 측정은 적어도 6 시간의 시간 간격으로 측정된 것이다. 단백뇨는 바람직하게는 24시간 이내의 소변 시료에서 300 mg 이상의 단백질이 나타나는 것으로 확인된다. 임신중독증은 자간증으로 진행될 수 있으며, 이는 강직 간대 발작 또는 혼수 상태에 출현을 특징으로 하는 생명에 위협적인 것이다. 중증 임신중독증과 관련된 증상은 24 시간 내에 500 ml 미만의 감뇨, 뇌 또는 시각 방해, 폐 부종 또는 청색증, 상복부- 또는 우측 상부 사분원 통증, 손상괸 간 기능, 혈소판 감소증, 태아 성장 제한이다. 간 연관된 임신중독증 환자는 HELLP 증후군으로 추가로 발전될 수 있다. 따라서, 임신중독증으로 발전할 위험성이 있는 본 발명에 따른 대상체는 또한 잠재적으로 HELLP 증후군으로 발전할 위험이 있다. HELLP 증후군은 반대 결과, 예컨대 태반 박리, 신부전, 피막 간 혈종, 재발성 임신중독증, 조기 분만, 또는 심지어 산모 및/또는 태아 사망의 고위험과 관련되어 있다. 또한, 임신중독증의 상세사항 및 수반 증상 및 후속 질환 예컨대 HELLP 증후군 또는 자간증은 관련 의학 서적 또는 의학 분야의 가이드라인에서 밝혀져 있다. 구체적인 사항은 예를 들어 다음 문헌에서 밝혀져 있다: ACOG Practice Bulletin, Clinical Management Guidelines for Obstetrician - Gynecologists, no.: 33, January 2002 또는 Leitlinien, Empfehlungen, Stellungnahmen of the Deutschen Gesellschaft fur Gynakologie und Geburtshilfe e.V., August 2008, NICE Clinical Guideline Hypertension in pregnancy: the Management of Hypertension disorders during pregnency, August 2010 (revised reprint January 2011). 임신중독증은 두번째 또는 세번째 3개월에서 통상 임신 중 10% 이하에서 발생한다. 그러나, 일부 산모는 임신 20주에서와 같이 조기에 임신중독증으로 발전한다.

임신 20주 내지 34주 내에서, 임신중독증은 또한 소위 초기-개시-임신중독증이라 지칭되며, 임신 34주 이후 발생하는 임신중독증은 또한 후기-개시-임신중독증이라 지칭된다. 통상적으로, 초기-개시-임신중독증은 더욱 심각한 부작용을 수반하고 통상 상대적으로 양호한 후기-개시-임신중독증에 비해 반대 결과를 나타낸다.

어구 "임신중독증으로 발전할 위험성이 없는" 이란, 임신중독증으로 발전할 위험성이 있는 임신한 대상체에 비해, 또는 분석 대상체를 포함한 개체군 내에서 임신중독증에 대한 유병율에 비해, 통계학적으로 현저하게 증가된 가능성을 갖는 앞으로 예후적 시간 윈도우 내에서 임신중독증으로 발전하지 않을 임신한 대상체를 지칭한다.

본원에 사용되는 바와 같은 용어 "대상체" 는 동물, 바람직하게는 포유동물, 더욱 바람직하게는 인간에 관한 것이다. 본 발명에 따른 대상체는 임신한 대상체, 즉 산모이다. 바람직하게는, 본 발명에 대상체는 명백한 임신중독증, 자간증 또는 HELLP 증후군을 앓고 있다. 바람직하게는, 본 발명에 대상체는 비정상 자궁 관류로 확인된 대상체이며, 더욱 바람직하게는 다른 진단 기술에 의해 이미 임신중독증, 자간증 및/또는 HELLP 증후군으로 발전할 위험성이 있는 것으로 확인된 대상체일 수 있다. 더욱 바람직하게는, 대상체는 비정상 자궁 도플러 초음파검사 결과에 의해 임신중독증, 자간증 및/또는 HELLP 증후군으로 발전할 위험성이 있는 것으로 확인되었다. 바람직하게는, 도플러 초음파검사는 경복부 초음파검사로 수행되었다 (참조, 예를 들어, Albaiges 2000, Obstet Gynecol 96: 559-564). 특히, 자궁 동맥의 박동 지수 (PI) 는 측정될 수 있고 둘 모두의 동맥에 대한 평균치 (mPI-UtA) 가 계산되고 정상 결과와 비정상 결과 사이의 구분을 허용하는 역치와 비교할 수 있다.

더욱 바람직하게는, 본 발명에 따른 임신한 대상체는 임신 약20주 내지 임신 약40주, 바람직하게는 임신 약 24주 내지 임신 약 40주이다. 따라서, 본 발명의 방법에 의해 룰-아웃된 임신중독증은 시료가 대상체로부터 채취되었을 때의 임신 주수에 따라 초기-개시 임신중독증 또는 후기-개시 임신중독증일 수 있다.

본 발명에 따른 방법은 외관상 건강한 임신 대상체의 일상적인 스크리닝 접근법으로 사용될 수 있다. 그러나, 본 발명에 의해 고려되는 임신 대상체는 임신중독증의 더욱 높은 유병율을 갖는 위험성 그룹에 속할 수 있다. 지방 과다, 고혈압, 자가면역 질환 예컨대 홍반 루푸스, 혈전성향증 또는 진성 당뇨병을 앓고 있는 임신한 대상체는 일반적으로 임신중독증으로 발전할 유병율이 증가되어 있다. 이전에 임신중독증, 자간증 및/또는 HELLP 증후군을 앓았던 대상체에 대해서도 동일하게 적용된다. 또한, 처음으로 임신한 나이든 여성은 임신중독증으로 발전할 경향성을 또한 나타낸다. 그러나, 임신중독증으로 발전할 가능성은 임신 횟수에 따라 감소한다.

본원에 사용되는 바와 같은 용어 "진단하는" 이란 대상체가 짧은 시기 내에 임신중독증으로 발전할 위험성이 없는지 여부를 평가하는 것을 의미한다. 바람직하게는, 상기 짧은 시기는 4주 미만, 바람직하게는 약 1주 내지 약 2주이다. 당업자에게 주지되는 바와 같이, 이러한 평가는 통상 진단되는 대상체의 100% 에 대해 올바른 것으로 의도된 것이 아니다. 그러나, 상기 용어는 대상체의 특정 비율에 대해 본원에서 제시된 바와 같이 음성예측도로 교정되는 것을 요한다 (코호트 연구에서의 코호트).

앞으로 특정 시간 윈도우에서 임신중독증으로 발전하거나 발전하지 않을 위험성은 거짓 양성/음성 및 진실 양성/음성 평가에 대해 시험 성능을 기술하는 요약 통계를 이용하는 본 발명의 방법과 같은 시험에 의해 진단될 수 있다. 높은 음성예측도는 진단 시험에 의해 만들어진 음성 평가에서 신료ㅣ의 높은 수준을 나타낸다. 음성예측도는 진실 음성 결과 및 거짓 음성 결과의 합에 의해 나누어지는 진실 음성 결과의 수로서 표현될 수 있다 (즉 모든 음성 결과는 진단 시험에 의해 측정됨). 원칙적으로, 음성예측도는 특정 코호트에서 질병 또는 병태에 대한 유병율 및 진단 시험의 특이성 및 민감성에 따라 계산될 수 있다. 구체적으로, 음성예측도는 하기이다:

[(특이성)(1-유병율)]/[(특이성)(1-유병율)+(1-민감성)(유병율)].

유병율 예측은 코호트 연구로부터 수득될 수 있는 반면 대조군 케이스 연구는 시험에 대한 민감성 및/또는 특이성을 수득할 수 있다. 특히, 본 발명의 방법에 의해 수립된 진단의 음성예측도는 적어도 약 98%, 더욱 바람직하게는, 적어도 약 99% 및, 가장 바람직하게는, 100% 일 것이다. 또한, 통계학에 대한 상세설명은 하기 문헌과 같은 표준 서적에서 기술되어 있다: Dowdy 및 Wearden, Statistics for Research, John Wiley & Sons, New York 1983, 또는 다른 문헌에서도 발견된다.

용어 "시료" 는 체액의 시료를 지칭하며, 조직 또는 기관의 분리된 세포 또는 시료를 지칭한다. 체액 시료는 익히 공지된 기술에 의해 수득될 수 있으며, 이에는 바람직하게는 혈액, 혈장, 혈청, 또는 소변 시료, 더욱 바람직하게는 혈액, 혈장 또는 혈청 시료가 포함된다. 조직 또는 기관 시료는 예를 들어 생검에 의해 임의의 조직 또는 기관으로부터 수득될 수 있다. 분리된 세포는 체액 또는 조직 또는 기관으로부터 수득될 수 있거나 예컨대 원심분리 또는 세포 분류와 같은 분리 기술에 의해 수득될 수 있다. 바람직하게는, 세포-, 조직- 또는 기관 시료는 본원에 지칭되는 펩티드를 생성하거나 발현하는 이들 세포, 조직 또는 기관으로부터 수득된다.

본원에 사용되는 바와 같은 용어 "sFlt-1" 은 fms-유사 티로신 키나아제 1 의 가용성 형태인 폴리펩티드를 지칭한다. 또한, 폴리펩티드는 당업계에서 가용성 VEGF 수용체 1 (sVEGF R1) 로서 지칭된다 (참조, 예를 들어, Sunderji 2010, Am J Obstet Gynecol 202: 40e1-7). 이는 인간 제정맥 내피 세포의 조건화 배양 배지에서 확인되었다. 내인성 sFlt1 수용체는 재조합 인간 sFlt1 에 크로마토그래피적으로 및 면역학적으로 유사하며, 필적할만한 높은 친화도로 [125I] VEGF 에 결합한다. 인간 sFlt1 은 KDR/Flk-1 시험관내 세포외 도메인을 갖는 VEGF-안정화 복합체를 형성하는 것으로 보여진다. 바람직하게는, sFlt1 은 하기 문헌에 기술된 바와 같은 인간 sFlt1 을 지칭한다: Kendall 1996, Biochem Biophs Res Commun 226(2): 324-328; 아미노산 서열에 대해서는 예를 들어 하기 문헌을 참조한다: Genebank accession numbers P17948, GI: 125361 for haman and BAA24499.1, GI: 2809071 for mouse sFlt-1 (Genebank, NCBI 사제, USA, www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez). 상기 용어는 또한 상기 언급된 인간 sFlt-1 폴리펩티드의 변이체를 포함한다. 상기 변이체는 상기 언급된 sFlt-1 폴리펩티드와 적어도 동일한 필수적인 생물학적 및 면역학적 특성을 갖는다. 특히, 이들은 상기 sFlt-1 폴리펩티드를 특이적으로 인식하는 폴리클로날 또는 모노클로날 항체를 사용하는 ELISA 검정에 의해 이러한 특이성을 지칭하는 동일한 특이적 검정에 의해 검출되는 경우 동일한 필수적인 생물학적 및 면역학적 특성을 공유한다. 또한, 본 발명에 따라 지칭되는 변이체는 하나 이상의 아미노산 치환, 결손 및/도는 첨가로 인해 상이한 아미노산 서열을 갖는 것으로 이해되며, 이때 변이체의 아미노산 서열은 각각 특이적 sFlt-1 폴리펩티드의 아미노산 서열, 바람직하게는 인간 sFlt-1 의 전장에 걸쳐 바람직하게는, 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 92%, 95%, 97%, 98%, 또는 99% 상동성을 여전히 갖는다. 2개의 아미노산 서열 사이의 상동성 정도는 당업계에 익히 공지된 알고리즘에 의해 측정될 수 있다. 바람직하게는, 상동성 정도는 비교 윈도우에 대해 최적으로 정렬된 2개의 서열을 비교함으로써 측정되며, 이때 비교 윈도우에서 아미노산 서열의 단편은 최적 정렬을 위한 참조 서열 (이는 첨가 또는 결손을 포함하지 않음) 에 비해 첨가 또는 결손 (예를 들어 갭 또는 오버행) 을 포함할 수 있다. 백분율은 비교 윈도우에서 위치의 총 수의 위치에 의해 매칭된 위치의 수를 나누고, 서열 동일성을 산출하기 위해 결과에 100 을 곱하는, 매칭된 위치의 수를 산출하기 위해 둘 모두의 서열에서 동일한 아미노산 자기가 발생하는 위치의 수를 측정함으로써 계산된다. 비교를 위한 서열의 최적 정렬은 하기에 의해 수행될 수 있다: 하기 문헌에 논의되는 로컬 호모로지 알고리즘에 의해: Smith 1981, Add. APL. Math. 2:482, 하기 문헌에 논의되는 호모로지 정렬 알고리즘에 의해: Needleman 1970, J. Mol. Biol. 48:443, 유사성 방법에 대한 서치에 의해: Pearson 1988, Proc. Natl. Acad Sci. (USA) 85: 2444, 이들 알고리즘의 컴퓨터 수행에 의해 (GAP, BESTFIT, BLAST, FAST, PASTA, 및 TFASTA, Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group (GCG), 575 Science Dr., Madison, WI), 또는 가시적 검사에 의해 수행될 수 있다. 비교를 위해 2개의 확인된 서열이 주어지며, GAP 및 BESTFIT 가 이의 최적 정렬 및 따라서 상동성 정도를 측정하기 위해 사용되는 것이 바람직하다. 바람직하게는, 갭 웨이트에 대한 5.00 의 디폴트 값 및 갭 웨이트 길이에 대한 0.30 의 디폴트 값이 사용된다. 상기에서 지칭되는 변이체는 대립형질 변이체 또는 임의의 다른 종 특이적 호모로그, 파라로그 또는 오르쏘로그일 수 있다. 상기에서 지칭되는 변이체는 대립형질 변이체 또는 임의의 종 특이적 호모로그, 파라로그 또는 오르쏘로그일 수 있다. 또한, 본원에서 지칭되는 변이체는 상기 언급된 유형의 변이체는 이들 단편이 상기 지칭되는 필수적인 면역학적 및 생물학적 특성을 갖고 있는 한 특이적 sFlt-1 폴리펩티드의 단편 또는 하위단위를 포함한다. 이러한 단편은 예를 들어 sFlt-1 폴리펩티드의 분해 생성물일 수 있다. 변이체는 상기 sFlt-1 폴리펩티드를 특이적으로 인식하는 폴리클로날 또는 모노클로날 항체를 사용하는 ELISA 검정에 의해 이러한 특성화에서 지칭되는 동일한 특이적 검정에 의해 검출되는 경우 동일한 필수적인 생물학적 및 면역학적 특성을 공유한다. 바람직한 검정은 하기 실시예에서 기술된다. 또한 포함되는 것은 번역후 변형 예컨대 포스포릴화 또는 미리스틸화로 인해 상이해지는 변이체이다. sFlt-1 은 시료에서 총 sFlt-1 양으로서 또는 유리 형태로서 또는 결합 형태로서 측정될 수 있다.

본원에 사용되는 바와 같은 용어 "엔도글린" 은 이의 환원된 및 N-디글리코실화된 형태로 66 kDa 및 환원 후 95 kDa, 비환원된 180 kDa 의 분자량을 갖는 폴리펩티드를 지칭한다. 폴리펩티드는 이량체를 형성할 수 있고 TGF-β 및 TGF-β 수용체에 결합한다. 바람직하게는, 엔도글린은 인간 엔도글린을 지칭한다. 더욱 바람직하게는, 인간 엔도글린은 Genebank 어세션 넘버 AAC63386.1, GI: 3201489 에 나타내는 바와 같은 아미노산을 갖는다. 2개의 엔도글린 이소형, S-엔도글린 및 L-엔도글린은 기술되어 있다. L-엔도글린은 47 개의 아미노산의 사이토플라즈마 테일을 갖는 633 개의 아미노산으로 구성되는 반면, S-엔도글린은 14 개의 아미노산의 사이토플라스마 테일을 갖는 600개의 아미노산으로 구성된다. 바람직하게는, 본원에 사용되는 바와 같은 엔도글린은 가용성 엔도글린이다. 본원에 지칭되는 바와 같은 가용성 엔도글린은 바람직하게는 EP 1 804 836 B1 에 기술되어 있다. 또한, 본 발명에 따라 지칭되는 변이체는 하나 이상의 아미노산 치환, 결손 및/또는 첨가로 인해 상이해진 아미노산 서열을 가질 수 있는 것으로 이해되며, 이때 변이체의 아미노산 서열은 특이적 엔도글린의 아미노산 서열에 대해 바람직하게는, 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 92%, 95%, 97%, 98%, 또는 99% 상동성을 여전히 갖는다. 변이체는 대립형질 변이체, 스플라이스 변이체 또는 임의의 다른 종 특이적 호모로그, 파라로그, 또는 오르쏘로그일 수 있다. 또한, 본원에 지칭되는 변이체는, 이들 단편이 상기 지칭되는 필수적인 면역학적 및 생물학적 특성을 갖는 한 상기 언급된 유형의 변이체 또는 특이적 엔도글린의 단편을 포함한다. 이러한 단편은 예를 들어 엔도글린의 분해 생성물일 수 있다. 변이체는 상기 엔도글린 폴리펩티드를 특이적으로 인식하는 폴리클로날 또는 모노클로날 항체를 사용하는 예를 들어 ELISA 검정에 의해 이러한 특성화에서 지칭되는 동일한 특이적 검정에 의해 검출되는 경우 동일한 필수적인 생물학적 및 면역학적 특성을 공유한다. 바람직한 검정은 하기 실시예에서 기술된다. 또한 포함되는 것은 번역후 변형 예컨대 포스포릴화 또는 미리스틸화로 인해 상이해지는 변이체이다. 엔도글린은 시료에서 총 엔도글린 양으로서 또는 유리 형태로서 또는 결합 형태로서 측정될 수 있다.

본원에 사용되는 바와 같은 용어 "PlGF (태반 성장 인자)" 는 인간 혈관 내피 성장 인자 (VEGF) 의 혈소판-유래 성장 인자-유사 영역에 대해 매우 상동성이 있으며 길이는 149개의 아미노산 길이를 갖는 폴리펩티드이다. VEGF 와 같이, PlGF 는 시험관내 및 생체내 혈관신생 활성을 갖는다. 예를 들어, 트랜스펙션된 COS-1 세포로부터 유래하는 PlGF 의 생화학적 및 기능적 특성화는 시험관내 내피 세포 성장을 자극할 수 있는 글리코실화 이량체성 분비 단백질은 것으로 나타났다 (Maqlione 1993, Oncogene 8(4):925-31). 바람직하게는, PlGF 는 인간 PlGF 를 지칭하며, 더욱 바람직하게는, Genebank accession number P49763, GI: 17380553 에서 나타나는 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 인간 PlGF 을 지칭한다. 상기 용어는 상기 특이적 인간 PlGF 의 변이체를 포함한다. 이러한 변이체는 특이적 PlGF 폴리펩티드로서 적어도 동일한 필수적인 생물학적 및 면역학적 특성을 갖는다. 변이체는 상기 엔도글린 폴리펩티드를 특이적으로 인식하는 폴리클로날 또는 모노클로날 항체를 사용하는 예를 들어 ELISA 검정에 의해 이러한 특성화에서 지칭되는 동일한 특이적 검정에 의해 검출되는 경우 동일한 필수적인 생물학적 및 면역학적 특성을 공유한다. 바람직한 검정은 하기 실시예에서 기술된다. 또한, 본 발명에 따라 지칭되는 변이체는 하나 이상의 아미노산 치환, 결손 및/또는 첨가로 인해 상이해진 아미노산 서열을 가질 수 있는 것으로 이해되며, 이때 변이체의 아미노산 서열은 특이적 PlGF 폴리펩티드의 아미노산 서열에 대해 바람직하게는, 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 92%, 95%, 97%, 98%, 또는 99% 상동성을 여전히 갖는다. 2개의 아미노산 사이의 상동성 정도는 당업자에 의해 익히 공지된 알고리즘 및 본원에 기술되는 것에 의해 측정될 수 있다. 변이체는 대립형질 변이체, 스플라이스 변이체 또는 임의의 다른 종 특이적 호모로그, 파라로그, 또는 오르쏘로그일 수 있다. 또한, 본원에 지칭되는 변이체는, 이들 단편이 상기 지칭되는 필수적인 면역학적 및 생물학적 특성을 갖는 한 상기 언급된 유형의 변이체 또는 특이적 PLGF 폴리펩티드의 단편을 포함한다. 이러한 단편은 예를 들어 PLGF 폴리펩티드의 분해 생성물 또는 스플라이스 변이체일 수 있다. 또한 포함되는 것은 번역후 변형 예컨대 포스포릴화 또는 미리스틸화로 인해 상이해지는 변이체이다. PlGF은 시료에서 총 PlGF 양 으로서 또는 유리 형태로서 또는 결합 형태로서 측정될 수 있다.

구체적으로 지칭되는 임의의 펩티드 또는 폴리펩티드의 양을 측정하는 것은, 양 또는 농도 바람직하게는 절반-정량적으로 또는 화학량론적으로 이를 측정하는 것이다. 측정하는 것은 직접적으로 또는 간접적으로 수행될 수 있다. 직접적인 측정은 시료에서 존재하는 펩티드의 분자의 수와 직접적으로 상호관련된 세기 및 펩티드 또는 폴리펩티드 그 자체에서 수득되는 신호 기반의 펩티드 또는 폴리펩티드의 양 또는 농도를 측정하는 것에 관한 것이다. 이러한 신호 - 본원에 때때로 세기 신호로서 지칭됨 - 은 예를 들어 펩티드 또는 폴리펩티드의 화학적 특성 또는 물리적 특성의 특이적 강도 값을 측정함으로써 수득될 수 있다. 간접적 측정은 2차 성분 (즉 펩티드 또는 폴리펩티드 그 자체가 아닌 성분) 으로부터 수득되는 신호의 측정을 포함하거나 또는 생물학적 판독 시스템 예를 들어 측정가능한 세포성 반응, 리간드, 라벨 또는 효소 반응 생성물의 신호 측정을 포함한다.

본 발명에 따르면, 펩티드 또는 폴리펩티드의 양은 시료에서 펩티드의 양을 측정하기 위한 모든 공지된 수단에 의해 달성될 수 있다. 상기 수단은 면역검정 장치 및 다양한 샌드위치, 경쟁 또는 다른 검정 포맷에서 라벨링된 분자를 이용할 수 있는 방법을 포함한다. 상기 검정은 펩티드 또는 폴리펩티드의 존재 또는 부재에 대한 지표인 신호로 발전될 것이다. 또한, 신호 강도는 바람직하게는 시료에서 존재하는 폴리펩티드의 양에 대해 직접적으로 또는 간접적으로 (예를 들어 역-비례하여) 상관되어 있을 수 있다. 또한 적합한 방법은 이의 정확한 분자질량 또는 NMR 스펙트럼과 같은 펩티드 또는 폴리펩티드에 대해 물리적 또는 화학적 특성을 측정하는 것을 포함한다. 상기 방법은 바람직하게는 바이오센서, 면역 검정에 커플링된 광학 장치, 바이오칩, 분석 장치 예컨대 질량-스펙트로미터, NMR-분석기 또는 크로마토그래피 장치를 포함한다. 또한, 방법은 마이크로플레이트 ELISA-기반 방법, 완전 자동화 검정 또는 로봇 면역검정 (ElecsysTM 분석기 사제), CBA (효소 Cobalt 결합 검정, Roche-HitachiTM analysers 사제), 및 라텍스 응집 검정 (Roche-HitachiTM analysers 사제) 를 포함한다.

바람직하게는, 펩티드 또는 폴리펩티드의 양을 측정하는 것은 하기 단계를 포함한다:

(a) 펩티드 또는 폴리펩티드의 양의 지표인 세포 반응 세기를 명시할 수 있는 세포와 상기 펩티드 또는 폴리펩티드를 적당한 시간 동안 접촉시키는 것,

(b) 세포성 반응을 측정하는 것.

세포성 반응을 측정하기 위해, 시료 또는 가공된 시료는 바람직하게는 세포 q양에 첨가되고 내부 또는 외부 세포 반응이 측정된다.

세포 반응은 물질 예를 들어 펩티드, 폴리펩티드 또는 소분자의 분비 또는 수용체 유전자의 측정 가능한 발현을 포함할 수 있다. 발현 또는 물질은 펩티드 또는 폴리펩티드의 양과 상관관계가 있는 신호 세기를 생성할 것이다.

또한 바람직하게는, 펩티드 또는 폴리펩티드의 양을 측정하는 것은 시료에서 펩티드 또는 폴리펩티드로부터 수득될 수 있는 특이적 신호 세기를 측정하는 단계를 포함한다. 상기 기술된 바와 같이, 이러한 신호는 펩티드 또는 폴리펩티드에 대해 특이적인 질량 스펙트럼 또는 NMR 스펙트럼에서 관찰되는 펩티드 또는 폴리펩티드에 대해 가변적이고 특이적인 m/z 에서 관찰되는 신호 세기일 수 있다.

펩티드 또는 폴리펩티드의 양을 측정하는 것은 바람직하게는 하기 단계를 포함할 수 있다:

(a) 펩티드를 특이적 리간드와 접촉시키는 것,

(b) 바람직하게는 비결합된 리간드를 제거하는 것,

(c) 결합된 리간드의 양을 측정하는 것.

결합된 리간드는 신호 세기를 생성할 것이다. 본 발명에 따른 결합은 공유 결합 및 비공유 결합 둘 모두를 포함한다. 본 발명에 따른 리간드는 예를 들어 펩티드, 폴리펩티드, 핵산 또는 소분자 (본원에 기술된 펩티드 또는 폴리펩티드에 결합되는 것) 의 임의의 화합물일 수 있다. 바람직한 리간드는 항체, 핵산, 펩티드 또는 폴리펩티드 예컨대 수용체 또는 펩티드 또는 폴리펩티드에 대한 결합 파트너 및 이의 단편 (펩티드에 대한 결합 도메인을 포함), 및 아프타머, 예를 들어 핵산 EH는 펩티드 아프타머를 포함한다. 이러한 리간드를 제조하느 방법은 당업계에 익히 공지되어 있다. 예를 들어, 적합한 항체 또는 아프타머를 확인하고 제조하는 것은 또한 상업적 공급자에 의해 제공된다. 당업자는 높은 친화도 또는 특이성을 갖는 이러한 리간드의 유도체를 개발하는 방법에 친숙하다. 예를 들어 무작위 돌연변이는 핵산, 펩티드 또는 폴리펩티드에 도입될 수 있다. 이들 유도체는 당업계에 공지된 스크리닝 절차 예를 들어 파지 디스플레이에서 공지된 스크리닝 절차에 따르는 결합에 대해 시험될 수 있다. 본원에 지칭되는 바와 같은 항체는 항원 또는 햅텐에 결합할 수 있는 둘 모두의 폴리클로날 및 모노클로날 항체, 및 이의 단편 예컨대 Fv, Fab 및 F(ab)2 단편을 포함한다. 또한 본 발명은 단일 사슬 항체 및 인간화 하이브리드 항체를 포함하며, 이때 원하는 항원-특이성을 나타내는 비-인간 공여체 항체의 아미노산 서열은 인간 수용체 항체의 서열과 결합된다. 공여체 서열을 통상 공여체 항체의 기능적으로 및/또는 구조적으로 관련된 아미노산 잔기 또한 포함할 수 있는 적어도 항원-결합 아미노산 잔기를 포함할 것이다. 이러한 하이브리드는 당업계에 익히 공지된 여러 방법에 의해 제조될 수 있다. 바람직하게는, 리간드 또는 펩티드 또는 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 작용제이다. 본 발명에 대해 특이적으로 결합하는 이란, 리간드 또는 작용제가 분석되는 시료에서 존재하는 또다른 펩티드, 폴리펩티드 또는 물질과 실질적으로 결합하지 않는 즉 교차 반응하지 않는 것을 의미한다. 바람직하게는, 특이적으로 결합된 펩티드 또는 폴리펩티드는 임의의 다른 관련 펩티드 또는 폴리펩티드보다 적어도 3배 이상, 더욱 바람직하게는 10배 이상, 심지어 더욱 바람직하게는 50배 이상을 갖고 결합되어야 한다. 비특이적 결합은 시료에서 상대적으로 높은 풍부함에 의해 또는 웨스턴 블롯상의 이의 크기에 따라 구분되고 명백하게 측정될 수 있다. 바람직하게는, 상기 방법은 절반-정량적 또는 정량적이다. 또한 폴리펩티드 또는 펩티드의 측정에 적합한 기술은 하기에 기술되어 있다.

우선, 리간드의 결합은 예를 들어 NMR 또는 표면 플라즈몬 공명에 의해 직접 측정될 수 있다. 두번째로, 리간드가 또한 관심 펩티드 또는 폴리펩티드의 효소 활성 물질로서 제공되는 경우, 효소 반응 생성물은 측정될 수 있다 (예를 들어 프로테아제의 양은 분해된 물질의 양을 측정함으로써 측정될 수 있으며 예를 들어 ?턴 블롯에 의해 측정될 수 있음). 대안적으로는, 리간드는 효소 특서 그 자체를 나타낼 수 있고 펩티드 도는 폴리펩티드에 의해 각각 결합된 리간드 또는 "리간드/펩티드 또는 폴리페티드는 신호 강도의 생성에 의해 검침이 허용되는 적합한 물질과 접촉시킬 수 있다. 효소 반응 생성물의 측정을 위해, 바람직하게는 기질의 양을 포화시킨다. 기질은 또한 반응 전 검출가능한 라벨로 라벨링될 수 있다. 바람직하게는, 샘플은 적절한 시기 동안 기질과 접촉된다. 적절한 시기는 검출될 수 있는, 바람직하게는 측정될 수 있는 생산되는 생성물의 양에 대해 요구되는 시간을 지칭한다. 생성물의 양을 측정하는 것 대신에, 주어진 (예를 들어 검출가능한) 양의 생서물의 출현시 요구되는 시간이 측정될 수 있다. 세번째로, 리간드는 리간드의 검출 및 측정을 허용하는 라벨에 공유적으로 또는 비공유적으로 커플링될 수 있다. 라벨링은 직접적 또는 간접적 방법에 의해 수행될 수 있다. 직접적인 라벨링은 리간드로의 직접적인 (공유적으로 또는 비공유적으로) 라벨 커플링을 포함한다. 간접적 라벨링은 제 1 리간드로의 제 2 리간드의 결합 (공유적으로 또는 비공유적으로) 을 포함한다. 2차 리간드는 1차 리간드에 특이적으로 결합해야 한다. 상기 2차 리간드는 2차 리간드에 결합하는 3차 리간드의 표적 (수용체) 이고/이거나 적합한 라벨과 커플링될 수 있다. 2차 리간드, 3차 리간드 또는 심지어 고차 리간드의 사용은 신호를 증가시키기 위해 종종 사용된다.적합한 2차, 3차 및 고차 리간드는 항체, 2차 항체, 익히 공지된 스트렙탑딘-비오틴 시스템(Vector Laboratories, Inc.) 를 포함할 수 있다. 리간드 또는 기질은 또한 당업계에 공지된 하나 이상의 태그로 "태깅"될 수 있다. 이한 태그는 고차 리간드에 대한 표적이될 수 있다. 적합한 태그는 바이오틴, 디곡시게닌, His-태그, 굴루타티온-S-트랜스퍼라아제, FLAG, GFP, myc-태그, 인플루엔자 A 바이러스 헤마글루티닌 (HA), 말토오스 결합 단백질 등을 포함한다. 펩티드 또는 폴리펩티드의 경우, 택는 바람직하게는 N-말단 및/또는 C-말단이다. 적합한 라벨은 적저한 검출 방법에 의해 검출될 수 있는 임의이 라벨이다. 전형적인 라벨은 금 입자, 라텍스 비드, 아크리단 에스테르, 루미놀, 루테늄, 효소적으로 활성인 라벨, 방사선활성 라벨, 자성 라벨 (예를 들어 "자성 비드", 파라자성 초자성 비드 포함), 및 형광성 파벨을 포함한다. 효소적으로 활성인 라벨은 예를 들어 호스래디쉬 페록싣아제, 알칼리 포스파타아제, 베타-갈라가토시다아제, 루시페라제 및 이의 유도체를 포함한다. 적합한 검출용 기질은 디-아미노-벤지딘 (DAB), 3,3,',5,5'-테트라메틸벤지딘, NBT-BCIP (4-니트로 블루 테트라졸륨 클로라이ㅡ 및 5-브로모-4-클로로-3-인돌릴-포스페이스 (Roche Diagnotics 사제 레디-메이드 원액), CDP-Star TM (Amersham Biosciences), ECF TM (Amersham Biosciences) 을 포함한다. 적합한 효소-기질 조합은 착색된 반응 생성물, 형광 또는 화학발광을 생성할 수 있으며 이는 당업계에 공지된 방법 (예를 들어 감광성 필름 또는 적합한 카메라 시스템) 에 의해 측정될 수 있다. 효소 반응을 측정하는 것에 대해서, 상기 주어진 기준은 유사하게 적용된다. 저녕적인 형광성 라벨은 형광성 단백질 (예컨대 GFP 및 이의 유도체), Cy3, Cy5, Texas Red, 플루오레세이 및 Alexa 염료 (예를 들어 Alexa 568) 를 포함한다. 추가의 형광성 라벨은 예를 들어 Molecular Probes (Oregon) 로부터 시판된다. 또한 형광성 라벨로서 양지 도트의 사용이 고려돈다. 전형적인 방사선반응성 라벨은 35S, 125I, 32P, 33P 등을 포함한다. 방사성반응성 라벨은 예를 들어 감광성 필름 또는 포ㅡ포르 이미져에 의해 검출될 수 있다. 본 발명에 따른 적합한 측정 방법은 또한 침전 (특히 면역침강), 전기화학발광 (전기생성 화학발광), RIA (방사선면역검정), ELISA (효소-링크된 면역소르벤트 검정), 샌드위치 효소 면역 시험, 전기화학발광 샌드위치 면역검정 (ECLIA), 해리-증강 란타나이드 플루오로 면역 검정 (DELFIA), 신틸레이션 프록시미티 검정 (SPA), 터비디메트리, 네펠레오메트리, 라텍스-증강된 터비디메트리, 또는 네펠로메트리 도는 고체상 면역 시험을 포함한다. 또한 당업계에 공지된 방법 (예컨대 겔 전기영동 2D 겔 전기영동, SDS 폴리아크릴아미드 겔 전기영동 (SDS-PAGE), 웨스턴 블롯팅, 및 질량 스펙트로메트리) 이 단독으로 사용되거나 상기 기술된 다른 감출 방법 또는 라벨링과 조합되어 사용될 수 있다.

펩티드 또는 폴리펩티드의 양은 바람직하게는 하기에 따라 측정될 수 있다:

(a) 상기 기술된 바와 같은 펩티드 또는 폴리펩티드에 대한 리간드를 포함하는 고체 지지체를 펩티드 또는 폴리펩티드를 포함하는 샘플과 접촉시키는 것,

(b) 바람직하게는 결합되지 않은 펩티드 또는 폴리펩티드를 제거시키는 것 및 샘플 재료를 유지시키는 것,

(c) 지지체에 결합된 펩티드 또는 폴리펩티드의 양을 측저하는 것.

리간드는 바람직하게는 핵산, 펩티드, 폴리펩티드, 항체 및 아프타머로 구성된 군에서 선택되며, 고정 형태로 고체 지지체 상에 존재한다. 고체 지지체를 제조하는 재료는 공지되어 있으며 특히 시판 컬럼 물질, 폴리스티렌 비드, 라텍스 비드, 마그네틱 비드, 콜로이드 금속 입자, 유리 및/또는 규소 칩 및 표면, 니트로셀룰로오스 스트립, 막, 시트, 듀라사이트, 웰 및 반응 트레이의 월, 플라스틱 튜브 등을 포함한다. 리간드 또는 작용제는 많은 상이한 담체에 결합될 수 있다. 익히 공지된 담체의 예는 유리, 폴리스티렌, 폴리비닐 클로라이드, 폴리프로필렌, 폴리에틸렌, 폴리카르보네이트, 덱스트란, 나일론, 앙밀로오스, 천연 셀룰로오스 및 변형 셀루로오스, 폴리아크릴아미드, 아가로오스 및 마그네티트를 포함한다. 담체의 성질은 본 발명의 목적을 위해 가용성이거나 불용성일 수 있다. 상기 리간드를 고정하기 위한 적합한 방법은 익히 공지되어 있으며 이온성, 수소성, 공유 상호작용 등을 포함한다. 또한, 본 발명에 따른 어레이로서 "현탁액 어레이"를 사용하는 것이 고려된다 (Nolan 2002, Trends Biotechnol. 20(1):9-12). 이러한 현탁액 어레이에서, 담체 예를 들어 마이크로비드 또는 마이크로스피어, 가능하게는 라벨링된 상이한 리간드를 갖는 것으로 구성된다. 이러한 어레이를 제조하는 방법 (고체상 화학 및 광-불안정한 보호기에 기초함) 은 일반적으로 공지되어 있다 (US 5,744,305).

바람직한 구현예에 따르면, 리간드의 결합 측정은 본워네 개시된 시스템의 분석 단위에 의해 수행된다. 그 후, 측정된 결합의 양은 본원에 개시된 시스템의 컴퓨터 장칭 의해 계산될 수 있다.

본원에 사용되는 바와 같은 용어 "양"은, 폴리펩티드 또는 펩티드의 절대량, 상기 폴리펩티드 또는 펩티드의 상대량 또는 농도, 및 이로부터 유래될 수 있거나 이와 관련된 임의의 값 또는 파라미터를 포함한다. 이러한 값 또는 파라미터는 질량 스펙트럼 또는 NMR 스펙트럼에서 세기 값과 같은 직접적인 측정에 의해 상기 펩티드로부터 수득되는 모든 값 또는 파라미터가 포함된다. 또한, 포함되는 것은 본 명세서에서 이외에 기수뢰는 간접적 측정에 의한 수득되는 값 또는 파라미터이다 (예를 들어, 펩티드 또는 특이적으로 결합되는 리간드로부터 수득되는 신호 세기 또는 펩티드에 반응한 생물하적 판독 시스템으로부터 측정되는 반응 수준). 상기 어급된 양 또는 파라미터에 관련된 값이 모든 표준 수학적 작업에 의해 수득될 수 있는 것으로 이해된다. 본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, "양"의 측정은 본 발명의 시스템에 의해 수행되며, 이로써 상기 시스템이 하나 이상의 분석 단위에 의해 수행되는 접촉 및 측정 단계에 기초한다.

본원에 사용되는 바와 같은 용어 "비교하는" 이란 본원에서 참조로서 지칭되는 하나 이상의 혈관신생 바이오마커에 대한 측정량을 비교하는 것을 포함한다. 본원에 사용되는 바와 같은 용어 비교는, 상기 양에 대한 값과 참조값 사이의 임의의 종류의 비교를 지칭하는 것으로 이해된다. sFlt-1 및 엔도글린의 경우에 참조와 비교한 양에 대한 동일하거나 감소된 값, 및 PlGF 의 경우 동일하거나 증가된 값이 측정되는 경우, 산모는 단 시간 내에서 임신중독증으로 발전할 위험성이 없다 (임신중독증에 대하 "룰-아웃").

본 발명의 방법의 단계 (b) 에서 지칭되는 비교는 수동으로 또는 컴퓨터 보조로 수행될 수 있다. 양 및 참조의 값은 예를 들어 서로 비교될 수 있고 상기 비교는 비교를 위한 컴퓨터 프로그램 익스큐팅 알고리즘에 의해 자동적으로 수행될 수 있다. 상기 평가를 수행하는 컴퓨터 프로그램은 적합한 산출량 포맷에서 원하는 평가를 제공할 것이다. 바람직하게는, 본 발명의 장치의 평가 단위 또는 보 발명의 시스템의 컴퓨터 시스테머은 상기 비교를 수행하는데 사용될 수 있다. 상기 평가를 수행하는 컴퓨터 프로그램은 컴퓨터 프로그램에 의해 데이터베이스에서 저장된 적합한 참조에 상응하는 값에 비교될 수 있다. 컴퓨터 프로그램은 비교 결과를 추가로 평가할 수 있으며, 즉 적합한 산출량 포맷에서 원하는 평가를 자동적으로 제공한다. 측정량 및 참조량의 비교에 기초하여, 바람직한 평가를 만드는 것이 가능하다. 예를 들어, 비교 결과는 원료 데이터 (절대량 또는 상대량) 로서 주어질 수 있으며, 일부 경우 특정 진단의 지표로서 단어, 문구, 기호 또는 수치의 형태로 표시될 수 있다.

본원에 사용되는 바와 같은 용어 "참조"는, 약 98% 이상의 음성 예측 값을 갖는 진단을 마들기 위한 컷-오프를 나타내는 참조 양 또는 값을 지칭한다. 바람직하게는, 본원에서 음성 예층 값은 약 99% 또는, 가장 바람직하게는 100% 이다. 적합한 컷-오프 양 또는 값은 바람직하게는 조사되는 대상체의 특정 개체군에서 임신중독증에 대한 유병율 - 민감성, 특이성 및 예측된 공지된 (예를들어 문헌 참조) 또는 추정된 (가능서 코호트 연구에 기초함) 유병율에 기초하여 상기 논의되는 바와 같이 측정될 수 있다. 참조값으로서 사용되는 컷-오프 양 또는 값은 당업계에 공지된 다양한 기술에 의해 측정될 수 있다. 바람직하근, 수용자-작업 특성 (ROC) 은 컷-오프 값 도는 양을 측정하는데 사용될 수 있다 (특히 다음 문헌 참조: Zweig 1993, Clin. Chem. 39:561-577). ROC 그래프는 관측되는 전체 범위에 걸쳐 연속적으로 다양한 결정 역치 (즉, 컷-오프 값) 에서 생성되는 특이성 짝 및 민감도의 모두의 플롯이다. 진단 방법의 임상 성능은 이의 정확도에 의존적이며, 즉 특정 예후 또는 진단을 위해 대상체를 올바르게 할당된 능력에 의존적이다. ROC플롯은, 구별하는데 적합한 역치의 완전한 범위에 대해 민감도 대 1-특이성을 플롯팅함으로써 2개의 분포 (영향 받고 영향 받지 않는 서브그룹의 결과) 사이의 오버랩을 나타낸다. y-축은 민감도를 나타내거나, 진성-양성 분획을 나타내고, 이는 진성-양성 시험의 수의 비율로서 정의되며, 거짓-음성 시험 결과의 수 및 진성-양성 결과의 수의 합계를 생성한다. 이는 또한 질병 또는 병태의 존재에서 양성으로서 지칭된다. 이는 영향 받은 서브그룹으로부터 단독으로 계산된다. x-축은 거짓-양성 분획 또는 1-특이성을 나타내고, 이는 거짓-양성의 수의 비율로서 정의되며, 진성-음성의 수 및 거짓-양성의 수의 합계를 생성한다. 영향 받지 않은 서브그룹으로부터 특이성 지표가 전적으로 계산된다. 2개의 상이한 그룹으로부터 시험 결과를 사용함으로써 진성- 및 거짓-양성 분율이 계산되기 때문에, ROC 폴롯은 코호트에서 경구의 유병율에 독립적이다. ROC 플롯에 대한 각 지점은 특정 결정 역치에 상응하는 민감도 및 특이성 쌍을 나타낸다. 완벽한 식별을 갖는 시험 (결과의 2가지 분포에서 오버랩은 없음) 은 상우 좌측 코너를 통해 통과하는 ROC 플롯을 갖는 반면, 진성-양성 분유은 1.0, 또는 100% (완벽한 민감도), 및 거짓 양성 분율은 0 (완벽한 특이성) 이다. 식별을 갖지 않는 시험에 대한 이론적 플롯은 하위 좌측 코너에서 상위 우측 코너로의 대각선 45도 각도이다. 대부분의 플롯은 이들 2개의 한계치 사이에 속한다. ROC 플롯이 45도 대각선 미만으로 완전히 속하는 경우, 이는 "초과" 내지 "미만"으로부터 "양성" 에대한 기준 또는 그 역에 대한 기준을 바꿈으로써 용이하게 처리된다. 질적으로, 플롯에 근접할수록 상부 좌측 코너로 가며, 시험의 전체적인 정확도가 높아진다. 컷-오프 값은 ROC 곡선으로부터 유래될 수 있으며 이는 각각 민감도와 특이성 사이의 적절한 균형을 갖는 소정의 경우에 대한 진단 또는 예측을 허용한다. 따라서, 본 발명의 상기 언급된 방법에 사용되는 참조, 즉 대상체가 증가된 위험성이 없는지 사이의 식별을 허용하는 것오프 값은 바람직하게는 상기 기술된 바와 같은 상기 코호트에 대한 ROC 를 수립하고 이로부터 컷-오프 값을 유도함으로써 생성될 수 있다. 바람직한, 미리선택된 민감도 및 특이성 또는 진단 방법에 대한 신뢰 한계치에 따라, ROC 플롯은 적합한 컷-오프 값을 유도하게 한다. 거짓 음성 그룹은 증가된 위험성을 효율적으로하여 대상체를 배제하기 위해 최소한이 되도록 민감도 및 특이성이 조정되는 반면(즉, 룰-아웃), 거짓 양성 그룹이 민감도 및 특이성은 증가된 위험성을 효율적으로 대상체가 평가되도록 조정된다 (즉, 룰-인). 게다가, 곡선하영역 (AUC) 값은 ROC 플롯으로부터 유도될 수 있으며 이는 컷-오프의 지표는 독립적이며 바이오마커의 전체적 성능은 독립적 지표가 된다. 또한, 곡선 하 영역 (AUC) 값은 ROC 플롯으로부터유도될 수 있으며, 이는 독립적인 전체적인 바이오마커의 컷-오프 성능에 대한 지표를 제시한다. 또한, ROC 곡선의 각 지점은 트정 컷-오프 값에서 민감도 및 특이성 쌍을 나타낸다.

본 발명의 문맥에서 용어 "약"은 나타낸 파라미터 또는 값으로부터 +/-20%, +/-10%, +/-5%,+/-2% 또는 +/-1% 를 의미한다. 이는 또한 측정 기술 등에 의해 야기되는 통상적인 표준편차를 고려하는 것이다. 그러나, 상기 용어는 나타낸 파라미터 또는 값을 정확히 나타내는 것 또한 포하한다.

유리하게는, 본 발명 하의 이번 연구에서 다음이 밝혀졌다: 임신한 대상체에서 sFlt, 엔도글린 또는 PlGF 의 양 및 이의 비율(하기 참조), 즉 sFlt/PlGF 또는 엔도글린/PlGF 비율은, 조사되는 샘플이 임박한 임신중독증을 룰아웃하기 위한 지표로서 제공되는 경우 즉 임신중독증, 자간증 또는 HELLP 증후군으로의 발전이 약 1주 내지 약2주의 ?은 기간 내에 이뤄지는 경우 임상적으로 임신중독증, 자간증 또는 HELLP 증후군의 명백한 증상을 나타내지 않거나 제한된 정도로만 나타낸다. 특히, 개별 바이오마커에 대한 컷-오프 양 또는 값은 상기 언급되는 마커를 사용하는 경우 높은 음성 예측 값을 이용하여 수립될 수 있다. 게다가, 약 46 또는 심지어 약 33 이하의 sFlt/PlGF 의 비율은 특정 지표를 나타내는 것으로 밝혀졌는데 니는 거의 100% 의 본 발명의 방법의 음성 예측 값을 허용한다. 또한, 약38의 sFlt/PlGF의 비율은 하기 실시예 특히 실시예 4 및 도 8 에서 나타내는 바와 같은 특정 값으로 밝혀졌다. 따라서, 본 발명의 방법은 룰아웃 진단에 대해 높은 수준의 신뢰도를 갖는 작업이다. 게다가, 차후의 방문시 채취된 각 샘플과 대상체의 첫 방문시 채치된 샘플에 대해서 신뢰성 있게 사용되는 거스로 밝혀졌다. 또한, 본 발명에 따른 방법은 다른 진단 기술 특히 소변 도플러 초음파검사에 의해 임신중독증, 자간증 및/또는 HELLP 증후군으로 발전할 위험성이 있는지에 대해 거짓 양성으로 진단된 대상체를 확인하는데사용될 수 있다. 본 발명의 방법을, 도플러 초음파검사에 의해 임신중독증, 자간증 및/또는 HELLP 증후군으로 발전할 위험성이 있는 대상체에게 적용함으로써, 이러한 진단이 거짓 양성으로 나타난 대상체는 단 시간 내에서 효율적으로 그리고 신뢰성 있게 룰아웃될 수 있다.

본 발명 덕분에, 임박한 임신중독증에 대한 위험성을 더욱 신뢰성 있게 룰아웃시키는 것이 가능하다. 게다가, 시간 소모적이고 값비싸고 다루기 힘든 진다 측정 예컨대 현재 분류 시스템 또는 도플러 초음파검사 조사 (의학 전문의로 전문적 훈련을 받은) 는 진단을 위한 보조제로서 본 발명의 방법을 적용하는 경우 피해질 수 있다. 이러한 문맥에서, 예를 들어 도플러 초음파검사 조사와는 대조적으로, 본 발명에 따른 방법은 심지어 자동적으로 수행될 수 있거나 고도의 전문적 훈련을 받는 의학 전문의보다는 덜 전문적인 의학 스태프에 의해 수행될 수 이다. 건강 관리는 본 발명의 방법으로부터 큰 이점을 얻게 되는데, 이는 집중적이고 특별한 케어 예컨대 클로즈 모니터링 및 입원이 필요하기 때문이며, 임신중독증으로 발전할 위험성을 갖는 산모가 더욱 양호하게 추정될 수 있으며 건강 관리된다.

상기 용어의 설명 및 정의는 이하 명세서 및 청구범위에 적용되는 것으로 이해된다.

본 발명의 방법의 바람직한 구현예에 있어서, 상기 방법은 하기 단계를 포함한다:

단계 a) 에서, 상기 대상체의 시료에서 생체지표 sFlt-1 또는 엔도글린 및 PlGF의 양을 측정하는 것, 및

단계 c) 에서, 상기 대상체의 시료에서 생체지표 sFlt-1 또는 엔도글린 및 PlGF 의 양의 비율 값을 참조값과 비교하는 것, 이로써 대상체가 짧은 시기 내에서 임신중독증으로 발전할 위험성이 없는지 진단함 (비율값이 참조값에 비해 동일하거나 감소되는 경우). 더욱 바람직하게는, 상기 방법은 단계 b) 전에, 단계 a) 에서 샘플에서 측정된 sFlt-1 또는 엔도글린 및 PlGF 의 상기 양으로부터 비율을 계산하는 추가 단계를 포함한다.

본원에 지칭되는 바와 같은 용어 "비율을 계산하는 것" 이란, PlGF 의 양에 대한 sFlt-1 또는 엔도글린의 양의 상관관계를 입력하는 임의의 다른 필적할만한 수학적 계산법을 수행함으로써 또는 상기 양을 나눔으로써 PlGF 의 양 및 sFlt-1 또는 엔도글린의 양의 비율을 계산하는 것을 지칭한다. 바라직하게는, sFlt-1 또는 엔도글린의 양은 상기 비율을 계산하기 위해 PlGF 의 양에 의해 나눠지며, 즉 상기 비율은 바람직하게는 PlGF 의 양에 의해 나눠지는 sFlt-1 의 양 (또한 sFlt-1/PlGF 로도 지칭됨) 또는 PlGF 의 양에 의해 나눠지는 엔도글린의 양 (또한 엔도글린/PlGF 으로도 지칭됨) 이다.

본원에 사용되는 바와 같은 용어 "비교하는 것"이란, 상기 정의되는 바와 같은 참조에 대해 비율을 비교하는 것을 포함한다. 본원에 사용되는 비교는, 참조와 비율 사이의 임의의 종류의 비교를 지칭한다. 본 발명 하의 연구에서 감소되거나 또는 증가된 임신중독증으로 발전할 위험성은 참조 값과 비교하여 동일하거나 감소된 sFlt-1 또는 엔도글린 및 PlGF 에 대해 측정된 비율과 상호관련된 것으로 밝혀졌다. 더욱 바람직하게는, 상기 비율에 대한 상기 참조 값은 약 46, 약 45, 약 40, 또는 약 35 이하이며, 바람직하게는 이는 약 33 이하이다. 심지어 더욱 상기 비율에 대한 상기 참조 값 (sFlt-1 및 PlGF 에 대한 참조 값) 은 약 38 이하이고; 가장 바람직하게는, sFlt-1 및 PlGF 에 대한 상기 참조 값은 약 38 이다. 상기 언급된 컷오프 값은 종래 기술에서 제시 일자에 진단에 대한 다른 룰아웃 접근법 (비특이적) 에 비해 상당히 상이하고 놀랍게도 본 발명에 따른 방법에 적용될 때 예측에 대해서 높은 음성 예측값을 달성한다.

본 발명의 방법의 바람직한 추가 구현예에 있어서, 상기 방법은 진단에 기초한 환자 관리 척도를 권장하는 것을 추가로 포함한다.

본원에 사용되는 바와 같은 용어 "권장"은 대상체에 적용되지 않아야 하는 것 또는 대상체에 적용되는 것인 환자 관리 척도 또는 이의 조합을 제시하는 것을 의미한다. 그러나, 하나의 특정 구현예에 있어서, 상기 용어에 포함되지 않더라도 실제 관리 척도를 적용하는 것으로 이해된다. 환자 관리 방법은, 본원에 사용 된 바와 같이, 상기 건강 상태를 예방하거나 치료하기 위해 자간전증 앓는 대상체에 적용할 수 있는 모든 방법을 참조한다. 예를 들어, 환자 관리 조치는, 또는 라이프 스타일 권고에서 모니터링의 정도 (예를 들어, 면밀, 보통 또는 약한 모니터링), 입원 또는 보행 유지, 약물 치료 적용 또는 자제를 포함한다. 바람직하게는, 상기 환자 관리 척도는, (i) 대상체가 임신중독증으로 발전할 위험성이 없는 것으로 진단되지 않은 경우: 근접 모니터링, 입원, 혈압강하제의 투여 및 생활 방식 권장사항으로 구성된 군에서 선택되는 것, 및 (ii) 대상체가 임신중독증으로 발전할 위험성이 없는 것으로 진단된 경우 외래 모니터링이다.

또한, 본 발명은 상기 지칭되고 상기 방법에 의해 진단이 확립된 임신 한 대상체 짧은 시간 윈도우 내 자간전증 위험 여부를 진단하기 위한 방법의 단계들을 포함하는 자간전증 앓는 의심 대상을 관리하는 방법에 관한 것이다. 바람직하게는, 상기 관리는 대상체의 외래 진료 유지, 일반 또는 약산 모니터링, 약물 투여 자제 및, 특히, 혈압강하제의 투여 또는 산전 코르티코스테로이드 (예를 들어 베타메타손) (후자의 여성에서 태아의 폐 성숙을 가속화 적용하여 조산의 위험이 있음) 를 포함한다.

상기 대상체가 단 시간 내에 임신중독증으로 발전할 위험성이 없는지 여부를 진단하기 위한, 임신한 대상체의 시료에서 하나 이상의 생체지표 sFlt-1, 엔도글린 및 PlGF 또는 이에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 검출제의 용도에 관한 것이다. 본 발명은 또한 본원에서 설정된 환자 관리 척도를 권장하기 위한, 임신한 대상체의 시료에서 하나 이상의 생체지표 sFlt-1, 엔도글린 및 PlGF 또는 이에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 검출제의 용도를 포함한다.

또한, 본 발명은 상기 대상체가 단 시간 내에 임신중독증으로 발전할 위험성이 없는지 여부를 진단하기 위한 약학적 실체 또는 조성물를 제조하기 위한, 임신한 대상체의 시료에서 하나 이상의 생체지표 sFlt-1, 엔도글린 및 PlGF 또는 이에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 검출제의 용도를 포함한다. 또한, 본 발명은 본원에 설정된 환자 관리 척도를 권장하기 위한 진단용 또는 약학적 실체 또는 조성물의 제조를 위한 임신한 대상체의 시료에서 하나 이상의 생체지표 sFlt-1, 엔도글린 및 PlGF 또는 이에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 검출제의 용도를 포함한다.

본 발명은 하기를 포함하는 본 발명의 방법을 수행함으로써 단 시간 내에 임신한 대상체가 임신중독증으로 발전할 위험성이 없는지 여부를 진단하는데 적합화된 장치에 관한 것이다:

a) sFlt-1, 엔도글린 및 PlGF 에서 선택되는 하나 이상의 혈관신생 생체지표에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 검출제를 포함하는 분석 단위 (상기 단위는 임신한 대상체의 시료에서 sFlt-1, 엔도글린 및/또는 PlGF 의 양을 측정하기 위해 적합화된 것임); 및

b) 상기 양을 참조량과 비교하기 위해 알고리즘이 수행되는 데이타 처리기를 포함하는 평가 단위 (이로써 대상체가 짧은 시기 내에서 임신중독증으로 발전할 위험성이 없는지 진단함; sFlt-1 및 엔도글린의 경우에선, 상기 양이 참조량과 비교하여 동일하거나 감소됨,그리고 PlGF 의 경우에선 상기 양이 참조량과 비교하여 동일하거나 증가됨, 이때 상기 참조는 약 98% 이상의 음성예측도를 갖는 진단을 허용함).

본원에서 사용되는 용어 "장치"는 본 발명의 방법에 따라 진단을 허용하도록 동작 가능하게 서로 연결되어 상기 장치를 포함하는 시스템에 관한 것이다. 분석 단위에 사용될 수 있는 바람직한 검출제는 본원에 개시된 바와 같다. 분석 단위, 바람직하게 상기 검출제를 포함하는 분석 단위는 측정되어야 하는 양으로 생체지표를 포함하는 시료와 접촉되는 고체 지지체에 고정된 형태로 존재한다. 또한, 분석 단위는 생체지표(들)에 특이적으로 결합하는 검출제의 양을 측정하기 위한 검출기를 또한 포함할 수 있다. 측정된 양은 평가 단위로 송신될 수 있다. 상기 평가 단위는, 구체적으로 본원에 설정된 바와 같이 본 발명의 방법의 단계를 수행하는 컴퓨터-기반 알고리즘의 이행에 의해, 비율 계산을 수행하고, 상기 계산된 비율을 비교하고, 상기 비교 결과를 평가하는 이행 알고리즘을 갖는 컴퓨터와 같은 데이터 가공 엘리먼트를 포함한다. 결과는 파라메트릭 진단 원료 데이터의 산출량으로서 주어질 수 있다. 이들 데이터는 통상적으로 임상의에 의해 이해될 필요가 있다. 그러나, 고려되는 것은 전문 시스템 장치이며, 이때 산출량은 전문 임상의를 요하지 않는 가공된 진단 원료 데이터 이해를 포함한다.

본 발명의 장치의 바람직한 구현예에 있어서, 상기 분석 단위는 상기 대상체의 시료에서 생체지표 sFlt-1 또는 엔도글린 및 PlGF 의 양을 측정하기 위한 검출제를 포함하고, 이때 평가 단위에서 시행되는 상기 알고리즘은 sFlt1 또는 엔도글린 및 PlGF 의 양의 비율값과 참조값을 비교하고, 이로써 대상체가 짧은 시기 내에서 임신중독증으로 발전할 위험성이 없는지 진단한다 (비율값이 참조값에 비해 동일하거나 감소되는 경우). 바람직하게는, 평가 단위에서 시행되는 상기 알고리즘은은 sFlt1 또는 엔도글린 및 PlGF 의 양의 비율을 추가로 계산한다.

본 발명의 또다른 바람직한 구현예에 있어서, 상기 평가 단위는 본원에 설정된 바와 같은 진단을 기초로 한 환자 관리 척도에 대한 권장사항을 만드는 이행 알고리즘을 추가 포함한다.

본 개시의 일부 구현예에 따르면, 본원에 개시된 방법 및 본원에 기술된 방법의 일부 단계의 비율은 컴퓨터 장치에 의해 수행될 수 있다. 컴퓨터 장치는 예를 들어 일반적 목적의 컴퓨터 또는 이동식 컴퓨터 장치일 수 있다. 다중 컴퓨터 장치는 본원에 개시된 방법의 하나 이상의 단계를 수행하기 위해, 전송 데이터의 네트워크 또는 다른 방법으로 함께 사용될 수 있는 것으로 이해된다. 예시적 컴퓨터 장치는 데스크탑 컴퓨터, 랩탑 컴퓨터, 개인 데이터 보조장치 ("PDA"), 예컨대 BLACKBERRY 브랜드 장치, 셀룰라 장치, 태블릿 컴퓨터, 서버 등이다. 일반적으로, 컴퓨터 장치는 복수의 지시사항을 실행할 수 있는 처리기를 포함한다 (예컨대 소프트웨어 프로그램).

컴퓨터 장치는 메모리에 접근된다. 메모리는 컴퓨터 판독형 매체이고 이는 단일 저장 장치 또는 다중 저장 장치를 포함할 수 있으며, 이는 컴퓨터 내에 로컬로 위치하거나 예를 들어 네트워크를 통한 컴퓨터 장치에 접근될 수 있게 위치할 수 있다. 컴퓨터-판독가능한 매체는 컴퓨터 장치에 의해 접근될 수 있는 임의의 시판 매체일 수 있고 둘 모두의 휘발성 및 비휘발성 매체를 포함한다. 또한, 컴퓨터 판독가능한 매체는 하나 또는 둘 모두의 제거 가능한 및 비-제거 가능한 매체일 수 있다. 예로서, 비제한적으로, 컴퓨터-판독가능한 매체는 컴퓨터 저장 매체를 포함할 수 있다. 예시적 컴퓨터 저장 매체는 RAM, ROM, EEPROM, 플래시 메모리 또는 임의의 다른 메모리 기술, CD-ROM, 디지털 버스타일 디스크 (DVD) 또는 다른 광학 디스크 저장, 자성 카세트, 자성 테이프, 자성 디스크 저장 또는 다른 자성 저장 장치, 또는 컴퓨터 장치의 처리기에 의해 실행되고 컴퓨터 장치에 의해 접근될 수 있는 복수의 지시사항을 저장하는데 사용될 수 있는 임의의 다른 매체를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

본 개시의 구현예에 따르면, 소프트웨어는 컴퓨터 장치의 처리기에 의해 실행되는 경우 본원에 개시된 방법의 하나 이상의 단계를 수행할 수 있는 지시사항을 포함할 수 있다. 이들 지시사항 중 일부는 다른 기계의 작동을 제어하는 신호를 생성하며 따라서 컴퓨터 그 자체로부터 제거되는 변형 재료에 대한 신호를 제어하는 것을 통해 작동될 수 있도록 적합화될 수 있다. 이들 기술 및 제시는 예를 들어 당업가 작업하는 물질을 가장 효율적으로 이동시키기 위해 데이터 가공 분야에 있어서 당업자아ㅔ 의해 사용되는 수단이다.

복수의 지시사항은 바람직한 결과로 이끄는 자가-일치 순서 단계로 일반적으로 고려되는 알고리즘을 포함할 수 있다. 이들 단계는 물리적 양의 물리적 조잘을 요하는 것이다. 통상, 반드시 필요한 것은 아니지만, 이들 양은 저장되고, 전송되고, 변형되고, 결합되고, 비교되고 달리 조작될 수 있는 전기적 또는 자성 펄스 또는 신호의 형태를 취한다. 이는 값, 특성, 디스플레이 데이터, 수치 또는 신호가 구동되거나 발현되는 물리적 아이템 또는 상세사항을 참조로 하여 편리한 시기에, 원칙적으로는 통상적인 사용을 이유로 제공된다. 그러나, 적절한 물리적 양과 연계된 이들 및 유사 용어의 전부는 이들 양에 적용되는 편리한 라벨로서 단지 사용되어야 한다. 본 개시의 일부 구현예에 따르면, 본원에 개시된 하나 이상의 마커의 양을 측정하는 것 및 적합한 참조 사이의 비교를 수행하는 알고리즘이 구동되며 지시사항을 실행하는 것에 의해 수행된다. 결과는 절대적 양 또는 상대적 양으로서 또는 파라메트릭 진단 원료 데이터의 산출량으로서 주어질 수 있다. 본원에 개시된 시스템의 다양한 구현예에 따르면, "진단" 은 참조 또는 역치에 대한 계산된 "양"의 비교를 기반으로 하여 본원에 개시된 시스템의 컴퓨터 장치에 의해 제공될 수 있다. 예를 들어 시스템의 컴퓨터 장치는 인디케이터를 제공할 수 있는데, 이는 특정 진단의 지표인 단어, 기호 또는 수치 값의 형태로 존재할 수 있다.

컴퓨터 장치는 산출량 장치에 접근될 수 있다. 예시적인 산출량 장치는 팩스기기, 디스플레이, 프린터, 및 파일을 포함한다. 본 발명의 일부 구현예에 따르면, 컴퓨터 장치는 본원에 개시된 방법의 하나 이상의 단계를 수행할 수 있고, 이후 산출량 장치를 통해 산출량을 제공하며, 방법의 결과, 지시, 비율 또는 다른 인자에 관련한 것이다.

본 발명은 또한 하기를 포함하는 본 방법을 수행하는 것에 의해 단 시간 내 임신한 대상체가 임신중독증으로 발전할 위험성이 없는지 여부를 진단하기 위한 보조로서 수립되는 시스템에 관한 것이다:

a) 시료로부터 하나 이상의 마커 및 상기 검출제의 복합체를 형성하는 것을 허용하는 충분한 시간 동안 sFlt-1, 엔도글린 및 PlGF 로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 마커에 특이적으로 결합하는 검출제(들)과 시료를 접촉시키는 것으로 설정된 분석 단위,

b) 형성된 복합체의 양을 측정하기 위해 설정된 분석 단위 (상기 복합체의 양이 시료에 존재하는 하나 이상의 마커의 양에 비례하여 형성됨),

c) 처리기를 갖는 컴퓨터 장치 및 상기 분석 단위와 작동 가능하게 커뮤니케이션하는 장치, 및

d) 상기 참조에 대한 상기 비교의 결과를 기반으로 하여 단 시간 내 임신중독증으로 발전할 위험성이 있는 대상체를 분류하기 위한 임상 예측 원칙을 기반으로 하여 위험성 평가를 최적으로 하기 위한 보조를 수립하고,참조 양을 비교하고, 지시사항은 샘플에 존재하는 하나 이상의 마커의 양을 반영한 하나 이상의 마커의 양으로 형성된 복합체의 양을 이동 실행하는 경우, 프로세서에 의ㅎ 실행되는 복수의 지시사항을 포함하는 비-일시적 기기 판독가능한 매체.

본 개시의 바람직한 구현예는 임신중독증으로 발전할 위험성이 있는 대상체를 분류하기 위한 임상 예측 원칙을 기반으로 하는 위험도 평가를 최적화한 시스템을 포함한다. 시스템의 예는 임상 화학적 분석기, 응고 화학 분석기, 면역화학 분석기, 소변 분석기, 핵산 분석기 (화학적 또는 생물학적 반응의 진행을 모니터링하거나 화학적 또는 생물학적 반응의 결과를 검출하는데 사용됨) 을 포함한다. 보다 구체적으로, 본 개시의 예시적 시스템은 하기를 포함할 수 있다: Roche ElecsysTM Systems 및 Cobas® e ImmunoAssay Analyzers, Abbott ArchitectTM 및 AxsymTM Analyzers, Siemens CentaurTM 및 ImmuliteTM Analyzers, 및 Beckman Coulter UniCelTM 및 AcessTM Analyzers, 등.

시스템의 구현예는 주제 개시를 실시하는데 이용되는 하나 이상의 분석기를 포함할 수 있다. 본원에 개시된 시스템의 분석 단위는 임의의 와이어 연결, 블루투쓰, LANS, 또는 와이어리스 신호를 통해 본원에 개시된 컴퓨터 장치와 작업 가능하게 커뮤니케이션되는 것으로 공지되어 있다. 또한, 본 발명에 따르면, 분석 단위는 진단 목적을 위한 시료의 검출, 질적 및/또는 양적 평가 중 하나 또는 둘 모두를 수행하는 더 큰 장치내에 단독 장치 또는 모듈을 포함할 수 있다. 예를 들어, 분석 단위는 피펫팅, 투여, 시료의 혼합 또는 시약의 혼합으로 수행되거나 보조될 수 있다. 분석 단위는 검정을 수행하기 위해 시약을 유지하는 시약 유지 단위를 포함할 수 있다. 시약은 저장 구획 또는 컨베이어 내애 적절한 리셉타클 또는 위치에서 위치한 개별 시약 또는 시약 그룹을 함유하는 용기 또는 카세트 형태로 배열될 수 있다. 검출 시약은 시료와 접촉되는 고체 지지체 상에 고정 형태로 존재할 수 있다. 또한, 분석 단위는 특이적 분석에 최적화될 수 있는 공정 및/또는 검출 성분을 포함할 수 있다.

일부 구현예에 따르면, 분석 단위는 시료를 이용하여 분석물, 예를 들어 마커의 광학 검출을 위해 설정될 수 있다. 광학 검출을 위해 설정되는 예시적 분석 단위는 단일 및 다중-엘리먼트 또는 어레이 광학 검출기 둘 모두를 포함하는 전기 신호로 전기자성 에너지를 이동시키기 위해 설정된 장치를 포함한다. 본 개시에 따르면, 광학 검출기는 광학 전기자성 신호를 모니터링할 수 있고 광학 경로에서 위치하는 시료에서 분석물의 존재 및/또는 농도의 기준 신호 지료에 대한 전기 아울렛 신호 또는 반응 신호를 제공한다. 이러한 장치는 예를 들어 광다이오드 (다량의 포토다이오드 포함), 포토트랜지스터, 광수행성 검출기, 리니어 센서 어레이, CCD 검출기, CMOS 검출기, CMOS 어레이 검출기 포함, 포토멀티플라이어 및 포토멀티플라이어 어레이를 포함할 수 있다. 특정 구현예에 따르면, 광학 검출기 예컨대 광다이오드 또는 포토멀티플라이어는 조건화 또는 가공 전기를 신호로 포함할 수 있다. 예를 들어 광학 검출기는 하나 이상의 예비증폭기, 전기 필터 또는 집적 회로를 포함할 수 있다. 적합한 예비-예비증폭기는 예를 들어 통합, 트랜심페던스 및 전류 게인 (전류 미러) 프리-앰플리피어를 포함한다.

또한, 본 발명에 따른 하나 이상의 분석 단위는 발광을 위한 광원을 포함할 수 있다.

예를 들어, 분석 단위의 광원은 하나 이상의 발광 엘리먼트 (예컨대 발광 다이오드, 전기력 방사산 원천 예컨대 백열 램프, 전기발광 램프, 가스 충전 램프, 고강도 디스차지 램프, 레이져) (에너지 이동을 가능하게 하거나 또는 시험되는 시료와 분석물 농도를 측정하기 위함, 예를 들어 형광 공명 에너지 이동 또는 효소 촉매화) 로 구성될 수 있다.

또한, 시스템의 분석 단위는 하나 이상의 인큐베이션 단위 (예를 들어, 구체적인 온도 또는 온도 범위 또는 시료를 유지하기 위한 것) 를 포함할 수 있다. 일부 구현예에 있어서, 분석기 단위는 시료를 이용한 증폭 생성물의 양에서 모니터링 변화 및 반복 온도 사이클로 시료를 처리하기 위한 실시간 써모사이클러를 포함하는 써모사이클러를 포함할 수 있다.

또한, 본원에 개시된 시스템의 분석 단위는 반응 관 또는 큐베트 공급 단위로 작동적으로 연결되거나 이를 포함할 수 있다. 예시적인 공급 단위는 액체 가공 단위 예컨대 피펫팅 단위를 포함하며, 이는 반응관으로 시료 및.또는 시약을 운반하기 위한 것이다. 피펫팅 단위는 재사용 가능한 워셔블 니들 예를 들어 스틸 니들 또는 1회용 피펫 팁을 포함할 수 있다. 분석 단위는 하나 이상의 혼합 단위 예를 들어 액체를 포함하는 큐베트를 진탕하는 진탕기, 또는 큐베트 또는 시약 용기에서 액체를 혼합하기 위한 혼합 패들을 추가로 포함할 수 있다.

또한, 본 발명은 상기 방법을 수행하기 위한 지시사항 및 sFlt-1, 엔도글린 및 PlGF 로 구성된 군에서 선택되는 혈관신생 생체지표의 양을 측정하기 위한 하나 이상의 검출제를 포함하는 본 발명의 방법을 수행하는데 적합화된 키트에 관한 것이다.

본원에 사용되는 바와 같은 "키트" 는 단일 용기 내에서 바람직하게는 별도로 제공되는 상기 언급된 성분의 선택을 지칭한다. 용기는 또한 본 발명의 방법을 수행하기 위한 지시사항을 포함한다. 이들 지시사항은 컴퓨터 또는 데이터 가공 장치상에서 애힝되는 경우 이에 따른 진단을 수립하고 본 발명의 방법에서 지칭되는 비교 및 계산을 수행할 수 있는 컴퓨터 프로그램 코드에 의해 제공될 수 있거나 수동 형태로 존재할 수 있다. 컴퓨터 프로그램은 데이타 가공 장치 또는 컴퓨터 상에 직접적으로 또는 광학 저장 매체 (예를 들어 컴팩트 디스크) 와 같은 데이터 저장 매체 또는 장치로 제공될 수 있다. 또한, 키트는 바람직하게는 교정 목적으로 본원에 기술된 바와 같은 생체지표의 표준 양을 포함할 수 있다.

본 발명의 키트의 바람직한 구현예에 있어서, 상기 키트는 임신한 대상체의 시료에서 sFlt1 및/또는 엔도글린의 양을 측정하기 위한 검출제 및 a PlGF 의 양을 측정하기 위한 검출제를 포함한다.

일부 구현예에 있어서, 본원에 개시된 키트는 개시된 방법을 실시하기 위한 하나 이상의 성분 또는 조합 포장을 포함한다. "조합 포장" 이란, 본원에 개시된 바와 같은 하나 이상의 성분, 예컨대 탐침 (예를 들어 항체), 대조군, 버퍼, 시약 (예를 들어 접합체 및/또는 기질) 의 조합을 함유하는 단일 포장을 제공하는 키트를 의미한다. 단일 용기를 포함하는 키트는 또한 "조합 포장" 의 정의 내에서 포함되는 것이다. 일부 구현예에 있어서, 키트는 하나 이상의 탐침 예를 들어 항체 (본원에 개시된 바와 같은 생체지표의 에피토프에 대해 특이적 친화도를 가짐) 을 포함한다. 예를 들어 상기 키트는 융합 단백질의 막인 형광단 또는 항체로 라벨링되는 항체를 포함할 수 있다. 키트에서, 탐침은 고정화될 수 있고 이는 특이적 형태로 고정될 수 있다. 예를 들어, 고정된 탐침은 표적 단백질에 특이적으로 결합하는 키트, 시료에서 표적 단백질을 검출하기 위한 키트 및/또는 시료로부터 표적 단백질을 제거하기 위한 키트로 제공될 수 있다.

일부 구현예에 따르면, 키트는 하나 이상의 탐침을 포함하며, 이는 하나 이상의 용기에서 고정될 수 있다. 키트는 또한 하나 이상의 용기에서 임의적으로 고정된 다중 탐침을 포함한다. 예를 들어 다중 탐침은 단일 용기 또는 별도 용기에서 존재할 수 있으며, 예를 들어 각 용기는 단일 탐침을 함유한다.

일부 구현예에 있어서, 키트는 하나 이상의 비고정화된 탐침 및 하나 이상의 고체 지지체를 포함할 수 있으며 이는 고정된 탐침을 포함하지 않는다. 일부의 이러한 구현예는 일부 또는 전부의 시약 및 고체 지지체로의 하나 이상의 탐침을 고정하기 위해 요구되는 서플라이, 또는 시료 내 특이적 단백질로의 고정화 탐짐의 결합에 필요한 시약 및 서플라이 일부 또는 전체를 포함할 수 있다.

특정 구현예에 있어서, 단일 탐침 (동일 탐침의 다중 카피 포함) 은 단일 용기에서 제공되고 단일 고체 지지체 상에 고정될 수 있다. 다른 구현예에 있어서, 2개 이상의 탐침 (이는 단일 표적 단백질 (예컨대 특이적 에피토프) 의 상이한 형태 또는 상이한 표적 단백질에 대해 각각 특이적임) 이 단일 용기 내에 제공된다. 일부 상기 구현예에 있어서, 고정화된 탐침은 다중의 상이한 용기 (예를 들어 단일 사용 형태) 또는 다중 상이한 용기에서 제공될 수 있는 다중 고정화된 탐침에서 제공될 수 있다. 추가 구현예에 있어서, 탐침은 고체 지지체의 상이한 다중 유형에 대해 고정화될 수 있다. 임의의 조합의 고정화된 탐침(들) 및 용기(들)은 본원에 개시된 키트에 대해 고려되는 것이며, 이의 임의의 조합은 바람직한 용도에 적합한 키트를 달성하기 위해 선택될 수 있다.

키트의 용기는 본원에 개시된 하나 이상의 성분을 포장하고/포장하거나 포함하는데 적합한 임의의 용기일 수 있으며, 이러한 성분은 예를 들어 탐침 (예를 들어 항체), 대조군, 버퍼 및 시약 (예를 들어 접합체 및/또는 기질) 일 수 있다. 적합한 재료는 유리, 플라스틱, 카드보드 또는 다른 페이퍼 생성물, 목재, 금속 및 임의의 이의 합금을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 일부 구현예에 있어서, 용기는 고정화된 탐침(들)을 완전하게 감쌀 수 있거나 분진, 오일 등에 의한 오염을 최소화하기 위해 탐침을 단순히 피복하고 광에 노출시킬 수 있다. 일부 추가 구현예에 있어서, 키트는 단일 용기 또는 다중 용기를 포함할 수 있고, 여기서 다중 용기가 존재하며, 각 용기는 모든 다른 용기와 동일할 수 있고, 모든 다른 용기가 아닌 일부보다 상이하거나 다른 것과 상이할 수 있다.

본 발명의 양태에 있어서, 하기를 포함하는 단 시간 내에서 임신중독증을 룰아웃하기 위한 보조제를 수립하는 방법이 고려된다:

a) 임신한 대상체의 시료에서 본원에 지칭된 하나 이상의 혈관신생 생체지표의 양을 측정하는 것으로서, 상기 측정은 하기를 포함한다:

(i) 상기 검출제 및 시료로부터의 생체지표의 복합체의 형성을 허용하는 충분한 시간 동안 상기 하나 이상의 혈관신생 생체지표에 특이적으로 결합하는 검출제와 시료를 접촉시키는 것,

(ii) 형성된 복합체의 양을 측정하는 것 (이때 형성된 복합체의 양은 시료에서 존재하는 하나 이상의 생체지표의 양에 비례함), 및

(iii) 시료에서 존재하는 하나 이상의 생체지표의 양을 반영하는 하나 이상의 생체지표의 양으로 형성된 복합체의 양을 변환하는 것;

b) 상기 양을 참조량과 비교하는 것; 및

c) 상기 단계 b) 에서의 비교 결과를 기반으로 하여 단 시간 내에 임신중독증을 룰아웃시키기 위한 보조제를 수립하는 것.

적합한 검출제는, 하나의 양태에서, 본 발명의 방법에 의해 조사되는 대상체의 시료에서 하나 이상의 혈관신생 생체지표에 특이적으로 결합하는 항체일 수 있다. 적용될 수 있는 또다른 검출제는 하나의 양태에서 시료에서 하나 이상의 혈관신생 생체지표에 특이적으로 결합하는 아프타머일 수 있다. 다른 양태에 있어서, 시료는 형성된 복합체의 양의 측정 전에 하나 이상의 혈관신생 생체지표 및 검출제 사이에서 형성되는 복합체로부터 제거된다. 따라서, 하나의 양태에서, 검출제는 고체 지지체 상에 고정될 수 있다. 하나의 양태에서, 시료는 세척액을 적용함으로써 고체 지지체 상에 형성된 복합체로부터 제거될 수 있다. 제거된 복합체는 시료에 존재하는 하나 이상의 혈관신생 생체지표의 양에 비례할 것이다. 검출제의 특이성 및/또는 민감성은 특이적으로 결합될 수 있는, 시료에서 포함되는 하나 이상의 혈관신생 생체지표의 비율 정도가 적용되는 것으로 이해될 것이다. 어떻게 측정이 수행될 수 있는지에 대한 구체적인 사항은 또한 본원에서 발견된다. 형성되는 복합체의 양은 시료에서 존재하는 양을 반영하는 하나 이상의 혈관신생 생체지표의 양으로 변환될 것이다. 이러한 양은 하나의 양태에 있어서 시료에 존재하는 양에 필수적일 수 있고 또다른 양태에 있어서 형성된 복합체와 원래 시료에서 존재하는 양 사이의 관계로 인한 이의 특정 비율이다.

상기 언급된 방법의 양태에 있어서, 단계 a) 는 분석 단위, 하나의 양태에서 본원에 정의된 바와 같은 분석 단위에 의해 수행될 수 있다. 다른 양태에 있어서, 단계 a) 내지 c) 의 임의의 단계 또는 모든 단계는 본원에 정의되는 바와 같은 분석 단위에 의해 수행될 수 있다.

본 발명의 방법의 양태에 있어서, 단계 a) 에서 측정된 양은 참조량과 비교된다. 양태에 있어서, 참조량은 본원에 정의된 바와 같은 참조이다. 또다른 양태에 있어서, 참조량은 원래 시료에서 존재하는 양 및 복합체의 측정된 양 사이의 관계에 비교하여 고려된다. 따라서, 본 발명의 방법의 양태에 적용되는 참조는 사용된 검출제의 한계를 반영하기 위해 채택되는 인공 참조량이다. 또다른 양태에 있어서, 상기 관계는 측정량 및 참조량의 값을 실제로 비교하기 전에 측정량에 대한 상관관계 계산 단계 및/또는 정상화 단계를 포함하는 비교에 의해 수행되는 경우 고려될 수 있다. 또한, 측정된 양에 대한 정상화 단계 및/또는 계산 교정 단계는 사용된 검출제의 한계가 적절하게 반영되도록 비교 단계를 채택한다. 하나의 양태에서, 비교는 예를 들어 컴퓨터 시스템 등에 의해 자동적으로 보조되어 수행된다.

진단 보조제는, 상기 그룹으로부터 모호하게 배제되거나 단 시간 내에 임신중독증으로 발전할 위험성이 없는 대상체의 그룹으로 대상체를 분명하게 할당함으로써 단계b) 에서 수행되는 비교를 기초로 한다. 본원에 논의된 바와 같이, 조사 대상체의 할당은 조사 케이스의 100% 에서 올바른 것이 아니여야만 한다. 조사 대상체가 인공 그룹으로 할당되는 대상체 그룹에서 이들은 통계적 고려사항 즉 본 방법이 작동하는 것에 기반을 둔 가능성 정도를 미리 특정하여 선택하는 것에 기반하여 수립된다. 따라서, 방법은 하나의 양태에서 다른 기술에 의해 진단의 추가 강화를 요할 수 있는 진단 보조제를 수립할 수 있다. 본 발명의 하나의 양태에서, 진단 보조제는 예를 들어 컴퓨터 시스템 등에 의해 자동적으로 보조된다.

본 발명의 방법의 양태에 있어서, 상기 방법은 본원에 설정된 바와 같은 단계 c) 에서 수립되는 진단 보조제의 결과에 따라 대상체를 치료하고/처방하고/권장하거나 관리하는 단계를 추가로 포함한다.

상기 언급된 방법의 양태에 있어서, 단계 b) 및/또는 c) 는 qhsdnkjs에 설정된 평가 단위에 의해 수행된다.

본원에 인용된 모든 참조는 본 명세서에서 언급되는 개시 내용 및 전체 개시 내용에 대해서 참조로서 본원에 포함되어 있다.

실시예

하기 실시예는 단지 본 발명을 설명하기 위함이다. 이들은 본 발명의 범주를 한정하고자 함이 아니다.

실시예 1: sFlt-1, 엔도글린 및 PlGF 의 혈액 수준의 측정

sFlt-1, PlGF 및 엔도글린의 혈액 수준을 시판되는 면역검정을 사용하여 측정하였다. 특히 하기 검정을 사용하였다.

sFlt-1 를 Roche Elecsys™- 또는 cobas e™- 시리즈로부터의 분석기를 사용하는 샌드위치 면역검정으로 측정하였다. 상기 검정은 각각의 폴리펩티드에 대해 특이적인 2개의 모노클로날 항체를 포함한다. 이들 항체 중 첫번째는 바이오틴화되고 두번째 것은 트리스(2,2'-바이피리딜)루테늄(II)-복합체로 라벨링된 것이다. 제 1 인큐베이션 단계에서 둘 모두의 항체는 시료로 인큐베이션된다. 측정되는 펩티드를 포함하는 샌드위치 복합체 및 2개의 상이한 항체가 형성된다. 다음 인큐베이션 단계에서 스트렙타비딘-코팅된 비드는 이러한 복합체에 첨가된다. 상기 비드는 샌드위치 복합체에 결합한다. 이어서 반응 혼합물은 측정 셀로 흡입되며, 여기서 비드는 전극 표면 상에 자성적으로 포획된다. 이어서 전압 적용은 포토멀티플라이어에 의해 측정되는 루테늄 복합체로부터 화학발광을 유도한다. 방출된 빛의 양은 전극상의 샌드위치 복합체의 양에 의존적이다. sFlt-1 시험은 Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Germany 으로부터 시판된다. 추가의 상세 사항은 포장 삽입물에 밝혀져 있다. sFlt-1 의 측정 범위는 10 내지 85,000 pg/ml 의 양을 포함한다.

엔도글린은 R&D Systems, Inc, Minneapolis, US 사제 Quantikine™ 인간 엔도글린/CD105 면역검정을 사용하여 측정되었다.

이러한 검정은 정량적 샌드위치 효소 면역검정 기술을 사용한다. 엔도글린에 특이적인 모노클로날 항체는 마이크로플레이트 상에 예비-코팅되었다. 표준 및 시료는 웰에 피펫팅되고 존재하는 임의의 엔도글린은 고정화된 항체에 의해 결합된다. 세척 후 임의의 결합되지 않은 기질, 엔도글린에 특이적인 효소 연결된 모노클로날 항체 시약, 웰에 첨가되는 기질액, 및 초기 단계에서 결합된 엔도글린의 양에 비례하여 발전되는 색이 제거된다. 색 발전이 중지되고 색의 강도가 측정된다. 검정에 대한 추가의 상세사항은 포장 삽입물에 밝혀져 있다. 엔도글린의 측정 범위는 0.001 ng/L 내지 10 ng/ml 의 양을 포함한다.

PlGF 는 Elecsys™- 또는 cobas e™- 시리즈 분석기 (상세사항은 상기 참조) 상에서 수행되는 샌드위치 면역검정에서 2개의 PlGF 특이적 항체를 사용하여 시험되었다. PlGF 시험은 Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Germany 로부터 상업적으로 입수된다. 검정에 대한 추가의 상세사항은 포장 삽입물에 밝혀져 있다. PlGF 의 측정 범위는 3 내지 10,000 pg/ml 의 양을 포함한다.

실시예 2: 1주 이내 결과로서 임신중독증의 분석

ROC 곡선을 생성하는데 사용되는 표에서, 표적 NPV 을 갖는 컷-오프 값을 선별하고 이러한 컷오프에서 민감성, 특이성, 및 PPV 를 추정한다. 이들 비례적 신뢰 구간 모두에 대해서 현재 시료 크기르 기반으로 하여 입수될 수 있다.

임신 24 +/-0 주 내지 40 +/-0 주의 환자에 대해, sFlt-1/PlGF 비율에 대한 45의 컷오프를 제 1 방문시에 수득된 시료에서 측정하여 100% 의 NPV 를 산출하여 (95% 미만 신뢰 한도 96.58%) 임신중독증을 예측하며, 이때 민감도 추정은 100% (LCL95 66.37%) 이고 특이성 추정은 80.92% (LCL95 73.13%) 이다. PPV 는 추정은 26.47% (LCL95 12.88%) 이다. 34 대 106의 대상체를 이러한 컷오프에서 양성/음성 시험하고 34 중 9 는 PE 로 발전하는 것으로 예측되었고 이의 비율은 106 이다.

임신 24+/- 0 주 내지 40 +/-0 주의 환자에 대해서, 다중 방문에서 수득된 시료에서 측정되는 sFlt-1/PlGF 비율에 대해 45 의 컷오프로 99.43% 의 npv 를 산출하고 (95% 미만 신뢰 한계 97.96%) 추정치는 민감도 추정치 86.67% (LCL95 63.66%) 및 특이성 추정치 80.60% (LCL95 76.56%) 이다. PPV 추정치는 13.40% (LCL95 7.33%) 이다. 97 대 351 방문에서 대상체는 이러한 컷오프에서 양성/음성 시험하고, 94 방문 중 13 은 PE 로 진행되나, 351 중 2 이다.

또한 결과를 하기 표에 요약하였다:

표 1: AUC, LCL95 및 UCL95 값

실시예 3: 단 시간 내 PE/HELLP 로 예측되는 임신 여성에서 도플러 초음파검사에 대한 sFlt-1/PlG 및 엔도글린/PlGF 의 생체지표의 비율의 진단 성능 비교

환자가 방문 1주/4주 후 이내에 PE/HELLP 증후군으로 발전하는 경우 분류기 (컷오프값 이용) 로서 mPI-UtA, sFlt-1/PlGF 비 및 엔도글린/PlGF 비율의 비교. 여기서 개체군은 이용가능한 도플러 초음파 검사 결과를 갖는 산모임:

표 2: 분류기로서 mPI-UtA, sFlt-1/PlGF 비 및 엔도글린/PlGF 비의 비교

둘 모두의 비는 도플러 초음파 검사에 대한 둘 다의 예측 임무에 대해 우수한 것으로 보인다. sFlt-1/PlGF 비는 엔도글린/PlGF 비보다 양호하게 수행되는 것으로 보인다 (선택된 컷오프 이용).

환자가 방문 1주/4주 후 이내에서 PE 로 발전하는 경우 분류기로서 (컷오프값 이용) sFlt-1/PlGF 비 및 엔도글린/PlGF 비율. 여기서 개체군은 비정성 도플러 초음파 검사 결과를 갖는 임신 여성임:

표 3: sFlt-1/PlGF 비 및 엔도글린/PlGF 비 (분류기로서)

sFlt-1/PlGF 비는 특히 4주 예측 임무에 대해 엔도글린/PlGF 비에 비해 우수한 것으로 보인다.

표 4: 도 4A 에서 나타낸 값에 대해 통계적으로 연계된 ROC

표 5: 도 5A 에서 나타낸 값에 대해 통계적으로 연계된 ROC

실시예 4: 1주 내 결과로서 임신중독증의 분석, 큰 코호트 (n=269)

하기 표에서 ROC 곡선을 생성하기 위해 표적 NPV 을 갖는 컷오프 값을 선별할 수 있고 이러한 컷오프에서 민감성, 특이성, 및 PPV 를 추정한다. 이들 모두에 대해서 비례적 신뢰 구간은 현재 시료 크기를 기반으로 하여 이용가능하다.

임신 24 +/-0 주 내지 40 +/-0 주 사이의 환자에 대해서, 제 1 방문시 수득되는 시료에서 측정된 sFlt-1/PlGF 비에 대해서 38 의 컷오프로 98.9% 의 NPV 를 산출하여 (더욱 낮은 한계의 2측 95% 신뢰 구간 (LCL95): 97.3%) 임신중독증을 예측하였고, 이때 민감성 추정는 88.2% (LCL95: 72.6%) 이고 특이성 추정치는 79.8% (LCL95: 75.9%) 이다. PPV 추정치는 24.4% (LCL95: 17.1%) 이다. 123 대 372 대상체를 이러한 컷오프에서 양성/음성 시험하고, 123 시험 양성값 중 30 은 PE 로 발전하는 것으로 예상되고, 372 중 4 는 시험 결과 음성이다. 상기 결과를 또한 하기 표에 요약하였다:

표 6: AUC, LCL95 및 UCL95 값, 큰 코호트

Claims

하기 단계를 포함하는, 임신한 대상체가 단 시간 내에서 임신중독증의 위험이 없는지 여부를 진단하는 방법:
a) 상기 대상체의 시료에서 sFlt-1, 엔도글린 및 PlGF 로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 혈관신생 생체지표의 양을 측정하는 단계, 및
b) 이를 참조량과 비교하여, 이로써 대상체가 짧은 시기 내에 임신중독증으로 발전할 위험이 없는지를 진단하는 (sFlt-1 및 엔도글린의 경우에 대해서는 이의 양이 참조량과 비교하여 동일하거나 감소한 경우, PlGF 경우에 대해서는 이의 양이 참조량과 동일하거나 증가한 경우) 단계로서, 이때 상기 참조는 약 98% 이상의 음성예측도를 갖는 진단을 허용함.
제 1 항에 있어서, 단계 a) 에서, 상기 대상체의 시료에서 생체지표 sFlt-1 또는 엔도글린 및 PlGF 의 양을 측정하는 단계, 및 단계 c) 에서, 비율값과 참조값을 비교하여, 이로써 대상체가 짧은 시기 내에서 임신중독증으로 발전할 위험성이 없는지를 진단하는 (비율값이 참조값과 비교하여 동일하거나 감소한 경우) 단계를 포함하는 방법.
제 2 항에 있어서, 단계 b) 전에, 단계 a) 에서 시료에서 측정된 sFlt-1 또는 엔도글린 및 PlGF 의 상기 양으로부터 비율을 계산하는 추가 단계를 포함하는 방법.
제 2 항 또는 제 3 항에 있어서, 상기 참조값이 약 46 이하, 바람직하게는 약 33 인 방법.
제 2 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 참조값이 약 38 이하, 바람직하게는 약 38 인 방법.
제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 짧은 시기가 약 1 내지 약 2 주의 시기인 방법.
제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 임신한 대상체가 임신 약 20 주 내지 약 40 주인 방법.
제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 시료가 혈액, 혈장, 혈청 또는 소변 시료인 방법.
제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서, 진단에 기초한 환자 관리 척도를 권장하는 것을 추가 포함하는 방법.
제 9 항에 있어서,
(i) 대상체가 임신중독증으로 발전할 위험성이 없는 것으로 진단되지 않는 경우, 상기 환자 관리 척도가 근접 모니터링, 입원, 혈압강하제의 투여 및 생활 방식 권장사항의 군에서 선택되고,
(ii) 대상체가 임신중독증으로 발전할 위험성이 없는 것으로 진단된 경우, 외래 모니터링하는, 방법.
임신한 대상체의 시료에서 이에 특이적으로 결합하는 이에 대한 하나 이상의 생체지표 sFlt-1, 엔도글린 및 PlGF 또는 하나 이상의 검출제의, 상기 대상체가 짧은 시기 내에 임신중독증으로 발전할 위험성이 없지 않는지 여부를 진단하기 위한 용도.
상기 대상체가 비정상 도플러 초음파검사 결과에 기초하여 임신중독증, 자간증 및/또는 HELLP 증후군으로 발전할 위험성이 있는 것으로 확인된, 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 따른 방법 또는 제 11 항에 따른 용도.
하기를 포함하는, 제 1 항 내지 제 10 항 또는 제 12 항 중 어느 한 항에 따른 방법을 수행하는 것에 의해 짧은 기간 내에 임신중독증으로 발전할 위험성이 없는지 여부를 진단하는데 적합화시킨 장치:
a) sFlt-1, 엔도글린 및 PlGF 로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 혈관신생 생체지표에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 검출제를 포함하는 분석 단위 (이때 상기 단위는 임신한 대상체의 시료에서 sFlt-1, 엔도글린 및/또는 PlGF 의 양을 측정하는데 적합화된 것임); 및
b) 상기 양을 참조량과 비교하기 위한 알고리즘을 이행하는 데이터 처리기를 포함하는 평가 단위 (이로써 대상체가 짧은 시기 내에서 임신중독증으로 발전할 위험성이 없는지 진단함 (sFlt-1 및 엔도글린의 경우에선, 상기 양이 참조량과 비교하여 동일하거나 감소됨, 그리고 PlGF 의 경우에선 상기 양이 참조량과 비교하여 동일하거나 증가됨, 이때 상기 참조는 약 98% 이상의 음성예측도를 갖는 진단을 허용함).
제 13 항에 있어서, 상기 분석 단위는 상기 대상체의 시료에서 생체지표 sFlt-1 또는 엔도글린 및 PlGF 의 양을 측정하기 위한 검출제를 포함하고, 이때 평가 단위에서 시행되는 상기 알고리즘은 sFlt1 또는 엔도글린 및 PlGF 의 양의 비율값과 참조값을 비교하고, 이로써 대상체가 짧은 시기 내에서 임신중독증으로 발전할 위험성이 없는지 진단함 (비율값이 참조값에 비해 동일하거나 감소되는 경우).
제 13 항 또는 제 14 항에 있어서, 평가 단위로 시행되는 상기 알고리즘이 sFlt1 또는 엔도글린 및 PlGF 의 양의 비율을 추가로 계산하는 장치.
sFlt-1, 엔도글린 및 PlGF 로 구성된 군에서 선택되는 혈관신생 생체지표의 양을 측정하기 위한 하나 이상의 검출제 및 상기 방법을 수행하기 위한 지시사항을 포함하는, 제 1 항 내지 제 10 항 또는 제 12 항 중 어느 한 항의 방법을 수행하는데 적합화된 키트.
제 16 항에 있어서, 임신한 대상체의 시료에서 sFlt1 및/또는 엔도글린의 양을 측정하기 위한 검출제 및 PlGF 의 양을 측정하기 위한 검출제를 포함하는 키트.