KR20150003125A - 액틴 관련 단백질 2/3 복합체 저해제를 유효성분으로 포함하는 수컷의 수태능력 억제용 약학적 조성물 - Google Patents

액틴 관련 단백질 2/3 복합체 저해제를 유효성분으로 포함하는 수컷의 수태능력 억제용 약학적 조성물 Download PDF

Info

Publication number
KR20150003125A
KR20150003125A KR20140165418A KR20140165418A KR20150003125A KR 20150003125 A KR20150003125 A KR 20150003125A KR 20140165418 A KR20140165418 A KR 20140165418A KR 20140165418 A KR20140165418 A KR 20140165418A KR 20150003125 A KR20150003125 A KR 20150003125A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
actin
related protein
sperm
present
pharmaceutical composition
Prior art date
Application number
KR20140165418A
Other languages
English (en)
Inventor
방명걸
박유진
이준섭
Original Assignee
중앙대학교 산학협력단
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 중앙대학교 산학협력단 filed Critical 중앙대학교 산학협력단
Priority to KR20140165418A priority Critical patent/KR20150003125A/ko
Publication of KR20150003125A publication Critical patent/KR20150003125A/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/425—Thiazoles
    • A61K31/426—1,3-Thiazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/403—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with carbocyclic rings, e.g. carbazole
    • A61K31/404—Indoles, e.g. pindolol
    • A61K31/4045—Indole-alkylamines; Amides thereof, e.g. serotonin, melatonin

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

본 발명은 액틴 관련 단백질 2/3 복합체(Actin-related protein 2/3 complex) 저해제를 유효성분으로 포함하는 수컷의 수태능력 억제용 약학적 조성물, 및 이를 포함하는 남성용 피임제에 관한 것이다. 본 발명은 소 정자 배양액에 다른 농도의 액틴 관련 단백질 2/3 복합체(Actin-related protein 2/3 complex) 저해제를 처리하였을 때, 농도 의존적으로 정자의 운동성 및수정능 획득을 감소시키고, 첨체 반응이 증가되어 수컷의 수태능력을 효과적으로 감소시킨다. 따라서, 본 발명의액틴 관련 단백질 2/3 복합체 저해제는 정자의 수태능력을 억제하는 효과가 우수하므로, 수컷의 수태능력 억제용 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

액틴 관련 단백질 2/3 복합체 저해제를 유효성분으로 포함하는 수컷의 수태능력 억제용 약학적 조성물 {Pharmaceutical composition for suppressing male fertility comprising Actin-related protein 2/3 complex inhibitor}
본 발명은 액틴 관련 단백질 2/3 복합체(Actin-related protein 2/3 complex) 저해제를 유효성분으로 포함하는 수컷의 수태능력 억제용 약학적 조성물, 및 이를 포함하는 남성용 피임제에 관한 것이다.
현재까지 개발된 피임제는 수태를 저지하기 위해 사용하는 여성용 약제로서, 외용 살정자제와 내용의 경구피임약이 있다. 살정자제는 산에 약한 정자의 성질을 이용하여 타르타르산, 젖산 등으로 산성환경을 만들어 정자를 사멸시키거나, 탄산수소나트륨을 포함하여 수분에 의해서 이산화탄소를 발생시켜 정자가 자궁구에 침입하는 것을 방지하여 임신을 방지하는 작용을 하나, 질안에서 충분히 녹아 확산되지 않으면 효과가 없다는 단점이 있다. 경구 피임제는 난소호르몬인 에스트로겐과 프로게스테론의 혼합물로 난자의 생산, 배란을 방지하여 임신을 피할 수 있으나, 오심, 구토, 위장장애, 출혈, 두통 등의 부작용이 있는 것으로 알려져 있다.
또한, 남성의 피임방법으로는 정자와 난자의 물리적인 접촉을 배제하는 방법으로써 정관수술을 하거나 콘돔을 착용하는 방법이 있으나, 정관수술은 침습적인 처치라는 단점이 있으며, 콘돔의 착용은 사용이 번거롭고 피임에 실패할 가능성을 배제할 수 없다는 단점이 있다. 따라서, 비침습적이면서도 높은 피임 성공률을 나타내는 새로운 남성용 피임제의 개발 및 연구의 필요성이 절실히 요구되고 있다.
액틴 관련 단백질 2/3 복합체(Actin-related protein 2/3 complex)는 정자세포를 구성하는 주요 세포골격 단백질로서, 정자세포의 액틴 단백질의 중합반응(polymerization)을 조절하고, 정자세포의 형태 및 운동성을 지지하는 기능을 하는 것으로 알려져 있다. 그러나, 현재까지 이러한 액틴 관련 단백질과 수컷의 수태능력(fertility)와의 관계에 대해서는 전혀 알려진 바 없으며 이에 관한 연구도 전무한 실정이다.
이에 본 발명자들은 상기와 같은 종래의 문제점이 해결된 더욱 효과적인 피임제의 개발을 위한 연구를 계속하던 중, 소유래 정자 배양액에 서로 다른 농도의 액틴 관련 단백질 2/3 복합체(Actin-related protein 2/3 complex) 저해제를 처리하였을 때, 농도의존적으로 정자의 운동성 및 수정능 획득을 감소시키고, 첨체 반응이 증가되어 수컷의 수태능력을 효과적으로 감소시키는 것을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 액틴 관련 단백질 2/3 복합체(Actin-related protein 2/3 complex) 저해제를 유효성분으로 포함하는 수컷의 수태능력 억제용 약학적 조성물을 제공하고자 한다.
또한, 본 발명은 상기 수컷의 수태능력 억제용 약학적 조성물을 포함하는 남성용 피임제를 제공하고자 한다.
본 발명은 액틴 관련 단백질 2/3 복합체(Actin-related protein 2/3 complex) 저해제를 유효성분으로 포함하는 수컷의 수태능력 억제용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 수컷의 수태능력 억제용 약학적 조성물을 포함하는 남성용 피임제를 제공한다.
본 발명은 소 정자 배양액에 다른 농도의 액틴 관련 단백질 2/3 복합체(Actin-related protein 2/3 complex) 저해제를 처리하였을 때, 농도 의존적으로 정자의 운동성 및수정능 획득을 감소시키고, 첨체반응이 증가되어 수컷의 수태능력을 효과적으로 감소시킨다. 따라서, 본 발명의액틴 관련 단백질 2/3 복합체 저해제는 정자의 수태능력을 억제하는 효과가 우수하므로, 수컷의 수태능력 억제용 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 소의 동결 융해 정액에서 얻은 소 정자에서의 ARP2/3 복합체의 위치를 나타낸 면역조직화학염색 사진이다(A: ATP 결합 부위, B: 액틴 결합 부위).
도 2은 헤파린이 첨가되지 않은 조건에서, 본 발명의 액틴 관련 단백질 2/3 복합체 저해제의 농도에 따른 정자의 운동성 변화를 나타낸 도이다.
도 3는 헤파린이 첨가된 조건에서, 본 발명의 액틴 관련 단백질 2/3 복합체 저해제의 농도에 따른 정자의 운동성 변화를 나타낸 도이다.
도4는 헤파린이 첨가된 조건에서, 본 발명의 액틴 관련 단백질 2/3 복합체 저해제의 농도에 따른 정자의 수정능 획득 비율을 나타낸 도이다.
도5은 헤파린이 첨가된 조건에서, 본 발명의 액틴 관련 단백질 2/3 복합체 저해제의 농도에 따른 정자의 첨체반응성을 나타낸 도이다.
도 6은 헤파린이 첨가되지 않은 조건에서, 본 발명의 액틴 관련 단백질 2/3 복합체 저해제의 농도에 따른 정자의 첨체반응성을 나타낸 도이다.
본 발명은 액틴 관련 단백질 2/3 복합체(Actin-related protein 2/3 complex) 저해제를 유효성분으로 포함하는 수컷의 수태능력 억제용 약학적 조성물 및 이를 포함하는 남성용 피임제에 관한 것이다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명의 조성물에서 유효성분인 액틴 관련 단백질 2/3 복합체 저해제는 하기 화학식 1 내지 4의 화합물(CK-636, CK-548, CK-869, CK-666) 등이 사용될 수 있으나, 바람직하게는 CK-636이다.
[화학식 1]
Figure pat00001
CK-636 (화합물명: N-([2-(2-Methyl-1H-indol-3-yl)ethyl]-2-thiophenecarboxamide, CK-0944636);
[화학식 2]
Figure pat00002
CK-548 (화합물명: 2-(3-Bromophenyl)-3-(5-chloro-2-hydroxy-phenyl)thiazolidin-4-one, CK-0993548);
[화학식 3]
Figure pat00003
CK-869(화합물명: 2-(3-Bromophenyl)-3-(2,4-dimethoxyphenyl)-4-thiazolidinone, CK-0157869);
[화학식 4]
Figure pat00004
CK-666(화합물명: 2-Fluoro-N-[2-(2-methyl-1H-indol-3-yl)ethyl]-benzamide, CK-0944666).
본 발명의 액틴 관련 단백질 2/3 복합체 저해제와 상호작용하는 ARP 2/3 복합체(Actin-related complex)를 각각 ATP 결합 부위(ATP-binding component) 특이적인 항체와, 액틴 결합 부위(actin-binding component) 특이적인 항체를 사용하여 면역조직화학법으로 염색한 결과, ATP 결합 부위가정자의 두부 전체에 위치함을 알 수 있다. 또한, 액틴 결합 부위는 정자 두부의 첨체 부분 또는 첨체 후부(post-acrosomal region)에 위치함을 알 수 있다.
본 발명의 액틴 관련 단백질 2/3 복합체 저해제는 수정능 획득 조건에 관계없이 농도 의존적으로 정자의 운동성의 감소를 유발한다.
또한, 본 발명의 액틴 관련 단백질 2/3 복합체 저해제는 용량 의존적으로 정자의 수정능 획득을 억제하는 한편, 첨체 반응은 증가시키며 특히, 고농도에서 정자의 첨체 반응을 증가시킨다.
시험관 내(in vitro) 또는 암컷의 생식 도관에 있는 난자를 수정시키기 위해서는 정자의 수정능의 획득 및 첨체 반응이 필수적이나, 본 발명의 액틴 관련 단백질 2/3 복합체 저해제는 정자의 수정능 획득을 저해하고, 특히 정자가 난자를 만나기 전부터 첨체 반응을 증가시키기 때문에, 정자가 난자를 만나기 전에 첨체막이 소진되는 결과 수컷의 수태능력을 억제하는 결과를 가져온다.
따라서, 본 발명의 액틴 관련 단백질 2/3 복합체 저해제는정자의 운동성 감소, 첨체 반응의 증가 효과를 우수하게 나타내므로 수컷의 수태능력 억제용 조성물 또는 남성용 피임제로써 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물은 액틴 관련 단백질 2/3 복합체 저해제와 정자의 수태능력 억제효과를 갖는 공지의 유효성분을 1 종이상 함유할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물 또는 남성용 피임제는 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구 투여(예를 들어 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소에 적용) 할 수 있으며, 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 투여기간 또는 간격, 배설율, 체질 특이성, 제제의 성질 등에 따라 그 범위가 다양하다. 본 발명의 액틴관련 단백질 2/3 복합체 저해제의 일일 투여량은 약 5~1000mg/kg, 바람직하게는 약 50~200mg/kg이나, 임상실험결과에 따라 가감될 수 있으며, 하루 일회 내지 수회에 나누어 투여하는 것이 바람직하다.
본 발명의 약학적 조성물 또는 남성용 피임제는 투여를 위하여 여러 가지 제제로 제형화 될 수 있다. 상기 약학 조성물은 부형제를 첨가하여 다양한 형태로 제형화될 수 있다. 상기 부형제는 비독성이고 불활성인 약제학적으로 적합한 고상, 준고상 또는 액상의 모든 유형의 제형 보조물로서, 예를 들면, 충진제, 중량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 분산제, 계면활성제 또는 희석제 등을 들 수 있다.
본 발명의 상기 약학적 조성물 또는 남성용 피임제는 투약 단위 형태로 제형화 될 수 있다. 예를 들면, 상기 제형화된 투약 단위는 상기 유효 화합물의 1일 개별 투약량의 1, 2, 3 또는 4배로, 또는 1/2, 1/3 또는 1/4배를 포함할 수 있다. 바람직하게는 상기 개별 투약량은 유효 화합물이 1회에 투여되는 양을 함유하며, 이는 통상 1일 투여량의 전부, 1/2, 1/3 또는 1/4배에 해당한다.
본 발명의 상기 약학적 조성물 또는 남성용 피임제는 정제, 피복 정제, 캡슐제, 환제, 과립제, 좌약, 액제, 현탁액제 및 에멀전제, 페이스트제 (pastes), 연고제, 겔제, 크림제, 로션제, 산제 또는 분무제로 제형화될 수 있다. 예를 들면, 상기 약학적 조성물 또는 남성용 피임제는 경구 투여를 위하여 정제, 환제, 산제, 과립제 또는 캡슐제 등의 고형제제 또는 현탁제, 내용액제, 유제 또는 시럽제 등의 액상제제로 제형화 될 수 있다. 또는 상기 약학적 조성물 또는 남성용 피임제는 비경구투여를 위하여 주사제, 현탁제, 유제, 동결건조제 또는 좌제 등으로 제형화될 수 있다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 소의 정액의 준비
1. 배양액 및 시약의 준비
본 발명에서는 인공수정 단계에서 정상의 생식 능력을 가졌던 소의 정액을 사용하였다. 모든 실험재료는 시그마 알드리치(St Louis, MO, USA)에서 구입하였다.
기본 배양액은 락트산 나트륨(sodium lactate), 피루브산 나트륨(pyruvate lactate), 및 0.6%의 소혈청알부민(BSA, bovine serum albumin)이 포함된 TALP(Tyrode? albumin lactate pyruvate)로 하였고 배양액은 실험 하루 전에 39℃, 5% CO2 대기 하에서 미리 배양(pre-incubation)하였다.
본 발명의 액틴 관련 단백질 2/3 복합체(Actin-related protein 2/3 complex) 저해제로는 하기 화학식 1의 화합물(화합물명: N-([2-(2-Methyl-1H-indol-3-yl)ethyl]-2-thiophenecarboxamide; CK-0944636; CK-636)을 0, 1, 10, 및 100 μM의 농도별로 기본 배양액으로 희석하여 -20℃에서 저장하였다.
[화학식 1]
Figure pat00005

상기에서 준비한 TALP 배양액에 10 μg/ml 농도의 헤파린(heparin)을 첨가한 배지를 수정능 획득 조건의 배지로 사용하였으며, 헤파린을 첨가하지 않은 배양액을 수정능 획득을 유도하지 않는 조건의 배지로 사용하였다.
2. 소 정자의 준비 및 처리
동결된 소의 정액을 39℃의 물에서 20초 동안 해동시킨 후, 해동한 정액을 각각 45% 및 90%의 불연속 퍼콜(Percoll) 용액으로 처리하여 살아있는 정자를 분리하였다. 살아있는 정자를 회수한 후 퍼콜의 제거를 위하여 정자를 TALP 배양액으로 희석하여 400 x g에서 5분간 2번 원심분리 하였다.
ARP2/3 복합체의 기능을 억제하기 위해 ARP2/3 복합체의 억제제인 CK 636을 0, 1, 10, 및 100 μM의 농도별로 처리하여 39℃, 5% 이산화탄소에서, 헤파린을 처리하거나 처리 하지 않은 배지에서 배양하여 정자의 수정능 획득 양상 및 운동성을 변화를 보고자 하였다.
실시예 2. 소 정자의 ARP2/3 복합체(Actin-related protein 1/2 complex)의 면역학적 위치 확인
소 정자에서의 ARP2/3 복합체의 면역학적 위치를 확인하기 위하여, 상기 실시예 1에서 준비한 소 정자를 ARP2/3 복합체에 특이적으로 결합하는 2가지 항체(ATP 결합부위 및 액틴 결합부위)를 이용한 위치확인 실험(localization)을 수행하였다.
먼저 상기 실시예 1에서 퍼콜을 통해 회수된 살아있는 정자를 배양액으로 희석하여 400 x g에서 5분간 2번 원심분리 후, 슬라이드에 도말하여 빛이 없는 상온에서 하루정도 건조하였다. 그 다음 3.7% paraformaldehyde 용액 (pH 7.4)을 정자가 도말된 슬라이드 위에 떨어뜨려 4℃에서 30분간 고정시키고, 0.1% Tween 20가 포함된 Dulbecco's phosphate buffered saline (PBS-T)로 5분간 2번씩 슬라이드를 세척하였다.
또한, 항체의 비특정 결합부분을 제거하기 위하여 5% BSA가 첨가된 PBS-T로 39℃에서 1시간 동안 배양한 뒤, PBS-T로 2번 세척하고, ARP2/3 복합체의 면역학적 위치를 확인하기 위하여 ARP2/3 복합체의 ATP 결합관련 항체와 ARP2/3 복합체의 액틴관련 항체를 1:200의 비율로 5% BSA가 첨가된 PBS-T에 희석하여 4℃에서 6시간 이상 배양하였다.
마지막으로 PBS-T로 5분동안 3번 세척하고 각 항체들과 결합하는 이차 항체 및 정자의 첨체 위치를 알려주는 PNA 항체를 1:200의 비율로 5% BSA가 첨가된 PBS-T에 희석하여 상온에서 2시간 정도 배양한 다음, 5분 동안 3번 세척한 뒤 정자 내 각 ARP2/3 복합체의 위치를 확인하였다.
결과는 도 1에 나타내었다.
도 1A에 나타난 바와 같이, ARP2/3 복합체의 ATP 결합 부위는 소 정자 두부 전체에 위치하였고, 특히 첨체 후부(post-acrosomal region)에 위치하는 것을 확인하였다.
또한, 도 1B에 나타낸 바와 같이, ARP2/3 복합체의 액틴 결합 부위는 첨체부 또는 첨체후부(post-acrosomal region)에 위치하는 것을 확인하였다.
실시예 3. 본 발명의 화학식 1의 화합물이 정자의 운동성에 미치는 영향
본 발명의 화학식 1의 화합물이 정자의 운동성에 미치는 영향을 확인하기 위하여,실시예 1에서 준비한 헤파린을 첨가하거나, 첨가하지 않은, 본 발명의 화학식 1의 화합물을 농도별(0, 1, 10, 및 100μM)로 희석한 배양액으로 39℃ 하에서 20분간 배양하였다. 배양 종료 후,각 배양액 내 정자의 운동성을 퍼콜(Percoll) 용액에서의 살아있는 정자의 운동성, 및 동결정액을 해동한 정액에서의 정자의 운동성과 비교하였다.
정자의 운동성(%)은 CASA(computer-assisted sperm analysis) system(SAIS plus version 10.1, Medical Supply, 14 Seoul, Korea)으로 측정되었다.
구체적으로는 상기 실시예 1에서 준비된 각 처리군 내 정자 10 μL 를 마클러 챔버(Makler chamber, Makler, Israel)에 넣고, 채워진 챔버를 37℃의 가열 단계에 놓았다. 위상차 10X 대물렌즈를 이용하여, 영상을 SAIS 소프트웨어 버전으로 교체하고, 계수화하여 분석하였다. 하나의 시료에 대해 적어도 250개의 정자세포의 움직임을 랜덤 필드로부터 기록하였다(>5). 사용자-정의된 세팅을 위해 사용된 프로그램은 하기와 같았다: frames acquired, 20; frame rate, 30Hz; minimum contrast, 7;minimum size, 5; low/high size gates, 0.4-1.5; low/high intensity gates, 0.4-1.5; non-motile head size, 16; non-motile brightness.
결과는 도 2 및 도 3에 나타내었다.
도 2에 나타난 바와 같이, 대조군 중 퍼콜 용액에서는 약 80%의 정자가 운동성을 나타내었고, 처리군 중 헤파린을 첨가하지 않고 화학식 1의 화합물(액틴 관련 단백질 2/3 복합체 저해제)을 처리한 배양액에서는 약 50 내지 65%의 정자가 운동성을 나타내었으며, 특히 화학식 1의 화합물의 최고 농도인 100μM 배양액에서 정자의 운동성이 가장 유의적으로 감소하였다.
또한, 도 3에 나타낸 바와 같이, 처리군 중 헤파린 및 본 발명의 화학식 1의 화합물을 처리한 10 내지 100농도의 배양액에서 약 50 내지 60%의 정자가 운동성을 나타내어 정자의 운동성이 유의적으로 감소하였다.
따라서, 본 발명의 액틴 관련 단백질 2/3 복합체 저해제인 화학식 1의 화합물은 수정능 획득 조건(헤파린)의 유무에 관계없이 정자의 운동성을 감소시키는 것을 알 수 있다.
실시예4. 본 발명의 화학식 1의 화합물이 정자의 수정능 획득 상태 및 첨체 반응에 미치는 영향
본 발명의 화학식 1의 화합물이 정자의 수정능 획득 상태 및 첨체 반응에 미치는 영향을 알아보기 위하여, 헤파린을 첨가하거나, 첨가하지 않은 본 발명의 화학식 1의 화합물이 농도 별로 처리된 배양액으로 배양한 정자를 각각, UV BP 340-380/LP 425와 BP 450-490/LP 515 여기/방사 여과기(excitation/emission filters)를 사용한 형광검경법(epifluorescence illumination)하에서 Nikon microphot-FXA (Tokyo, Japan)로 관찰하여 정자의 상태를 평가하였다.
정자들은 다음과 같이 분류하였다(Maxwell and Johnson, 1999).
F pattern: 정자의 두부에 균일하게 밝은 녹색형광을 나타내고 정자의 적도부(equatorial segment)에 더 강한 형광 띠가 있거나 없는 생존 비-수정능 획득 정자(live non-capacitated sperm).
B pattern: 정자의 첨체부에 녹색형광을 나타내고, 첨체 후부는 어둡게 나타나는 생존 수정능 획득 정자(live capacitated sperm).
AR pattern: 정자 두부에 점상(mottled pattern)의 녹색형광, 첨체 후부에만 녹색형광, 또는 정자 두부에 형광을 나타내지 않는 생존 첨체반응 정자(live acrosome reactive sperm).
수정능 획득을 유도하는 헤파린을 첨가한 조건에서, 수정능 획득(B patten)을 나타내는 정자의 비율은 도 4에 나타내었고, 첨체 반응(AR pattern)을 나타내는 정자의 비율은 도 5에 나타내었다. 또한, 헤파린을 첨가하지 않은 조건에서 첨체반응을 나타내는 정자의 비율은 도 6에 나타내었다.
도 4 및 도 5에 나타낸 바와 같이, 수정능 획득 조건 하의 모든 화학식 1의 화합물처리군은 농도의존적으로 유의적으로 감소된 수정능 획득 패턴(도 4), 및 첨체 반응의 증가를 나타내었고, 특히, 고농도의 처리군(10~100μM) 에서 첨체 반응 비율이 유의적으로 증가하였다(도 5).
또한, 도 6에 나타낸 바와 같이, 수정능 획득 조건이 없는 화학식 1의 화합물의 처리군에서는 모든 농도범위에서 대조군에 비하여 증가된 첨체 반응을 나타내었다(도 6).
따라서, 본 발명의 액틴 관련 단백질 2/3 복합체 저해제인 화학식 1의 화합물은 수정능 획득을 유도하는 조건 하에서도 정자의 수정능 획득을 감소시키며, 수정능 획득 조건(헤파린)의 유무에 관계없이 정자의 첨체반응성을 증가시키는 것을 알 수 있다.
이하 본 발명의 상기 조성물을 함유하는 약학적 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명을 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
제제예 1. 산제의 제조
액틴 관련 단백질 2/3 복합체 저해제(CK-636) 20 mg
유당 100 mg
탈크 10 mg
상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.
제제예 2. 정제의 제조
액틴 관련 단백질 2/3 복합체 저해제10 mg
옥수수전분 100 mg
*유당 100 mg
스테아린산 마그네슘 2 mg
상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.
제제예 3. 캅셀제의 제조
액틴 관련 단백질 2/3 복합체 저해제10 mg
결정성 셀룰로오스 3 mg
락토오스 14.8 mg
마그네슘스테아레이트 0.2 mg
통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.
제제예 4. 주사제의 제조
액틴 관련 단백질 2/3 복합체 저해제10 mg
만니톨 180 mg
주사용 멸균 증류수 2974 mg
Na2HPO4·2H2O 26 mg
통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당 (2 ml) 상기의 성분 함량으로 제조한다.
제제예 5. 액제의 제조
액틴 관련 단백질 2/3 복합체 저해제20 mg
이성화당 10 g
만니톨 5 g
정제수 적량

Claims (4)

  1. 하기 화학식 2 내지 4의 화합물(CK-548, CK-869 및 CK-666)로 이루어진 군에서 선택되는 액틴 관련 단백질 2/3 복합체(Actin-related protein 2/3 complex) 저해제를 유효성분으로 포함하는 정자의 수태능력 억제용 약학적 조성물:
    [화학식 2]
    Figure pat00006

    CK-548 (화합물명: 2-(3-Bromophenyl)-3-(5-chloro-2-hydroxy-phenyl)thiazolidin-4-one, CK-0993548);

    [화학식 3]
    Figure pat00007

    CK-869 (화합물명: 2-(3-Bromophenyl)-3-(2,4-dimethoxyphenyl)-4-thiazolidinone, CK-0157869);

    [화학식 4]
    Figure pat00008

    CK-666 (화합물명: 2-Fluoro-N-[2-(2-methyl-1H-indol-3-yl)ethyl]-benzamide, CK-0944666).
  2. 제1항에 있어서, 상기 액틴 관련 단백질 2/3 복합체 저해제는 정자세포의 운동성을 감소시키는 것을 특징으로 하는, 정자의 수태능력 억제용 약학적 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 액틴 관련 단백질 2/3 복합체 저해제는 정자세포의 첨체반응을 증가시키는 것을 특징으로 하는, 정자의 수태능력 억제용 약학적 조성물.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항의 약학적 조성물을 포함하는 남성용 피임제.

KR20140165418A 2014-11-25 2014-11-25 액틴 관련 단백질 2/3 복합체 저해제를 유효성분으로 포함하는 수컷의 수태능력 억제용 약학적 조성물 KR20150003125A (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR20140165418A KR20150003125A (ko) 2014-11-25 2014-11-25 액틴 관련 단백질 2/3 복합체 저해제를 유효성분으로 포함하는 수컷의 수태능력 억제용 약학적 조성물

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR20140165418A KR20150003125A (ko) 2014-11-25 2014-11-25 액틴 관련 단백질 2/3 복합체 저해제를 유효성분으로 포함하는 수컷의 수태능력 억제용 약학적 조성물

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020120118634A Division KR101501211B1 (ko) 2012-10-24 2012-10-24 액틴 관련 단백질 2/3 복합체 저해제를 유효성분으로 포함하는 수컷의 수태능력 억제용 약학적 조성물

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20150003125A true KR20150003125A (ko) 2015-01-08

Family

ID=52476071

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR20140165418A KR20150003125A (ko) 2014-11-25 2014-11-25 액틴 관련 단백질 2/3 복합체 저해제를 유효성분으로 포함하는 수컷의 수태능력 억제용 약학적 조성물

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR20150003125A (ko)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Shah et al. Effect of reduced glutathione supplementation in semen extender on tyrosine phosphorylation and apoptosis like changes in frozen thawed Hariana bull spermatozoa
KR102452866B1 (ko) 이식편 대 숙주 질환의 치료 및 예방 방법
US9732050B2 (en) Modulators of sperm hypermotility and uses thereof
RU2419426C1 (ru) Лекарственное средство на основе дииндолилметана (dim) с повышенной биодоступностью и его использование в лечении гиперпластических и воспалительных заболеваний человека
JP2016536286A (ja) ヒストンデアセチラーゼ阻害剤とＨｅｒ２阻害剤またはＰＩ３Ｋ阻害剤のいずれかの組み合わせ
WO2004006916A1 (en) Use of compounds for increasing spermatozoa motility
JP6441345B2 (ja) 雌の受胎能を促進するために有用な組成物
EP2852388A2 (en) Compounds and methods of use thereof for treating neurodegenerative disorders
MX2010013269A (es) Inhibidores de molecula pequeña para el tratamiento o prevencion de infeccion de virus del dengue.
KR20040078663A (ko) 난청의 치료 방법
KR101501211B1 (ko) 액틴 관련 단백질 2/3 복합체 저해제를 유효성분으로 포함하는 수컷의 수태능력 억제용 약학적 조성물
KR100985449B1 (ko) 옥시톡신 및/또는 바소프레신 길항제의 용도
SK281949B6 (sk) Derivát benzamidu, farmaceutický prostriedok, ktorý ho obsahuje, a použitie
KR20150003125A (ko) 액틴 관련 단백질 2/3 복합체 저해제를 유효성분으로 포함하는 수컷의 수태능력 억제용 약학적 조성물
KR20210091758A (ko) Mcl-1 억제제와 미도스타우린의 조합물, 이의 용도 및 약학적 조성물
KR101847173B1 (ko) 퀴잘티닙을 유효성분으로 포함하는 피임용 약학적 조성물
Moser et al. Effect of preoperative interventions on outcome following liver resection in a rat model of cirrhosis
Huang et al. Andrographolide induce human embryonic stem cell apoptosis by oxidative stress response
KR20170065447A (ko) Conoidin A를 유효성분으로 포함하는 피임용 약학적 조성물
KR101938981B1 (ko) 류히스틴을 유효성분으로 포함하는 피임용 약학적 조성물
Aitken et al. Bridging the gap between male and female fertility control; contraception-on-demand
TWI672138B (zh) 用於選擇性殺死口腔癌細胞之醫藥組合物及其活性成分之用途
EP2478900A1 (fr) Créatines monohydrate destiné a régulariser les sécrétions hormonales et l'infertillité du cycle, fécondation in vitro, et d'insémination artificielle
Azu et al. Vitamin E and Testicular Damage Protection in Highly Active Antiretroviral Therapy
KR101583777B1 (ko) 아크틴의 신규 용도

Legal Events

Date Code Title Description
A107 Divisional application of patent
WITN Application deemed withdrawn, e.g. because no request for examination was filed or no examination fee was paid