KR20140063948A - Manufacturing method of fermented red ginseng extract with enhanced ginsenosides rg3 and antioxidant activity - Google Patents

Manufacturing method of fermented red ginseng extract with enhanced ginsenosides rg3 and antioxidant activity Download PDF

Info

Publication number
KR20140063948A
KR20140063948A KR1020120130689A KR20120130689A KR20140063948A KR 20140063948 A KR20140063948 A KR 20140063948A KR 1020120130689 A KR1020120130689 A KR 1020120130689A KR 20120130689 A KR20120130689 A KR 20120130689A KR 20140063948 A KR20140063948 A KR 20140063948A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
red ginseng
strain
ginseng concentrate
fermented red
culture
Prior art date
Application number
KR1020120130689A
Other languages
Korean (ko)
Other versions
KR101467837B1 (en
Inventor
손미례
성낙술
서정화
장영부
최경임
곽준영
Original Assignee
재단법인 금산국제인삼약초연구소
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 재단법인 금산국제인삼약초연구소 filed Critical 재단법인 금산국제인삼약초연구소
Priority to KR1020120130689A priority Critical patent/KR101467837B1/en
Publication of KR20140063948A publication Critical patent/KR20140063948A/en
Application granted granted Critical
Publication of KR101467837B1 publication Critical patent/KR101467837B1/en

Links

Images

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L2/00Non-alcoholic beverages; Dry compositions or concentrates therefor; Their preparation
    • A23L2/38Other non-alcoholic beverages
    • A23L2/382Other non-alcoholic beverages fermented
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L2/00Non-alcoholic beverages; Dry compositions or concentrates therefor; Their preparation
    • A23L2/385Concentrates of non-alcoholic beverages
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L2/00Non-alcoholic beverages; Dry compositions or concentrates therefor; Their preparation
    • A23L2/42Preservation of non-alcoholic beverages
    • A23L2/46Preservation of non-alcoholic beverages by heating
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L2/00Non-alcoholic beverages; Dry compositions or concentrates therefor; Their preparation
    • A23L2/52Adding ingredients
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23VINDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23VINDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2250/00Food ingredients
    • A23V2250/20Natural extracts
    • A23V2250/21Plant extracts
    • A23V2250/2124Ginseng

Abstract

The present invention relates to a method for preparing a fermented red ginseng concentrate, comprising the steps of: seeding a strain in a red ginseng concentrate, followed by culturing; performing aging while the pH value of the culture liquid is adjusted to 2.0-4.5; and sterilizing the aged culture liquid at 95-121°C, wherein the strain is at least one of a strain mixture of Enterococcus faecium and Lactobacillus acidophilus, Enterococcus faecium strain, Lactobacillus acidophillus strain, Aspergillus oryzae strain, Saccharomyces cerevisiae strain, and Bacillus subtillus strain. The fermented red ginseng concentrate according to the method for preparing a fermented red ginseng concentrate of the present invention has an increased content of ginsenoside Rg3 and retains an effect of improving the in vivo antioxidant activity.

Description

진세노사이드 Rg3를 증진하고 항산화 기능을 촉진하기 위한 발효 홍삼 농축액 제조 방법 {Manufacturing method of fermented red ginseng extract with enhanced ginsenosides Rg3 and antioxidant activity}Technical Field [0001] The present invention relates to a fermented red ginseng extract having enhanced ginsenoside Rg3 and antioxidant activity,

본 발명은 홍삼 농축액에 균주를 접종하여 배양하는 단계, 배양액의 pH를 2.0~4.5로 조절하여 숙성하는 단계 및 숙성한 배양액을 95~121℃에서 멸균하는 단계를 포함하되, 상기 균주는 Enterococcus faecium Lactobacillus acidophillus 의 혼합 균주, Enterococcus faecium 균주, Lactobacillus acidophillus 균주, Aspergillus oryzae 균주, Saccharomyces cerevisiae 균주, Bacillus subtillus 균주 중에서 적어도 하나 이상의 균주인 것을 특징으로 하는 발효 홍삼 농축액 제조 방법에 관한 것이다.But the present invention includes the step of sterilizing the fermentation step and a culture medium for fermentation to control the pH of the culturing by inoculating the strain on a Red Ginseng extract, culture medium from 2.0 to 4.5 eseo 95 ~ 121 ℃, the strain Enterococcus faecium And Lactobacillus acidophillus , Enterococcus faecium Strain , Lactobacillus acidophilus Strain , Aspergillus oryzae Strain , Saccharomyces cerevisiae Strain , Bacillus subtillus The present invention relates to a method for producing fermented red ginseng concentrate.

본 발명인 발효 홍삼 농축액 제조방법에 따른 발효 홍삼 농축액은 진세노사이드 Rg3 함량을 증가시키고, 체내 항산화 활성을 향상시키는 효과를 보유하고 있다.
The fermented red ginseng concentrate according to the method for producing fermented red ginseng concentrate of the present invention has an effect of increasing ginsenoside Rg3 content and enhancing the antioxidant activity in the body.

홍삼(Panax ginseng C.A. Meyer)은 오갈피나무과에 속하는 다년생 풀인 4~6년 근 수삼을 선별하여 껍질을 벗기지 않은 상태로 증기에 쪄서 말린 것이다.Ginseng (Panax ginseng CA Meyer) is a perennial grass belonging to the Acanthopagaceae family, which is selected from 4-6 years old ginseng and steamed and steamed without peeling.

한의학적으로는, 성질은 약간 따뜻하고 맛은 달고 약간 쓰며, 비, 폐, 심장으로 들어가 원기를 보충하고 진액을 만드는 등, 건강 증진과 질병 예방의 효과가 있는 대표적 한약재로 사용되어 왔다.In oriental medicine, it has been used as a typical medicinal herb which has the effect of health promotion and disease prevention, such as slightly warm, slightly sweet and taste, and enters into rain, lungs and heart,

홍삼은 증숙 후 건조하는 과정에서 유효 성분이 보다 농축되는데, 사포닌과 같은 인체에 유효한 생리활성 성분이 생성되어 소화흡수가 잘되고 면역체계 증진 및 기능강화에 도움을 준다.
Red ginseng is more concentrated in the process of drying after boiling, which is effective for the digestion and absorption of physiologically active ingredients such as saponin, which helps to improve immune system and function.

사포닌은 화학적으로 배당체(Glycoside)라 부르는 화합물의 일종이다. 식물의 뿌리, 줄기, 잎, 껍질, 씨 등에 있는데 항암, 항산화, 콜레스테롤 저하에 효과적인 생리활성물질로서, 진세노사이드(Ginsenoside)라 불린다.Saponin is a compound that is chemically called a glycoside. It is a physiologically active substance effective for anticancer, antioxidant, and cholesterol lowering. It is called ginsenoside. It is root, stem, leaf, skin and seed of plant.

홍삼에 함유되어 있는 진세노사이드의 종류는 약 30여종으로 그 중 진세노사이드 Rb1이 전체 사포닌의 약 23%를 차지할 정도로 가장 함유량이 많고 진세노사이드 Rg1이 약 19%, 진세노사이드 Re가 15%, 진세노사이드 Rb2가 11%, 진세노사이드 Rc가 12%, 진세노사이드 Rd가 약 7% 함유되어 있다고 알려져 있다.
There are about 30 types of ginsenosides contained in red ginseng. Among them, ginsenoside Rb1 is the most abundant, accounting for about 23% of the total saponins. Ginsenoside Rg1 is about 19%, ginsenoside Re is about 15% , Ginsenoside Rb2 of 11%, ginsenoside Rc of 12% and ginsenoside Rd of about 7%.

그런데 여러 종류의 진세노사이드 중 진세노사이드 Rg3는 백삼에는 없고 산삼과 홍삼에만 미량으로 존재하는 성분이다. 진세노사이드 Rg3는 혈전생성을 억제하고 혈소판의 응집을 억제하며, 혈관을 확장하여 혈액순환을 촉진하며 혈압을 떨어뜨리는 효능이 있다. 또한 암세포의 전이를 억제하고 항암제에 대한 내성의 발생을 억제하며 치매예방작용이 강한 효능이 있다.However, among the various types of ginsenosides, ginsenoside Rg3 is not present in white ginseng, and is present only in trace amounts in wild ginseng and red ginseng. Ginsenoside Rg3 is effective in inhibiting thrombus formation, inhibiting platelet aggregation, expanding blood vessels, promoting blood circulation, and lowering blood pressure. It also inhibits cancer cell metastasis, inhibits the development of resistance to anticancer drugs, and has a strong anti-dementia action.

진세노사이드 Rg3는 효과가 뛰어나지만 홍삼에만 미량으로 존재하기 때문에 홍삼내의 진세노사이드 Rg3의 함유량을 높이기 위한 연구가 진행되어 왔다.
Research on ginsenoside Rg3 has been carried out to increase the content of ginsenoside Rg3 in red ginseng since it is present only in a small amount in red ginseng although it has excellent effect.

한편 프로바이오틱스(probiotics)란 다양한 미생물이 존재하는 사람의 장내에서 우세균으로 분포하고 체내 유익균의 성장을 촉진하는 생균활성제로써, 인체의 소화계에 공생하면서 섬유질 및 복합 단백질을 분해하여 중요한 영양성분으로 만드는 역할을 담당한다. 또한 장내 pH를 산성으로 유지시켜 대장균이나 Chlostridum sp.와 같은 유해균의 번식을 억제하고 설사와 변비를 개선하며 비타민 합성, 혈중 콜레스테롤 저하 등의 역할을 한다.On the other hand, probiotics is a live bacterial activator that is distributed as a bacterium in the intestines of a person having various microorganisms and promotes the growth of beneficial bacteria in the body. It plays a role of decomposing the fibrous and complex proteins and making them important nutrients in the digestive system of the human body I am responsible. In addition, maintaining the intestinal pH acidic, it inhibits the reproduction of harmful bacteria such as E. coli and Chlostridum sp ., Improves diarrhea and constipation, plays a role of vitamin synthesis, blood cholesterol lowering.

프로바이오틱스는 특히 장의 점막과 상피 세포에 강하게 결합할 수 있는 특성이 있어 정장 작용에 많은 도움을 준다. 또한, 프로바이오틱스는 대식세포의 증식을 촉진하여 대식세포(macrophage)의 장내 유해 세균에 대한 인지능력, 살균능력을 강화시키고, 면역 관련 물질의 분비를 촉진하여 면역 증강효과를 나타내는 것으로 알려져 있다.
Probiotics, especially in the intestinal mucosa and epithelial cells can be strongly attached to the character of the suit will help a lot. In addition, probiotics are known to promote the proliferation of macrophages, thereby enhancing the cognitive and bactericidal ability of macrophages in the intestinal noxious bacteria and promoting the secretion of immune-related substances, thereby exhibiting immune enhancing effects.

프로바이오틱스에는 여러 유산균이 있을 수 있으며, Lactobacillus acidophillusEnterococcus faecium 등을 예로 들 수 있다.There are many lactic acid bacteria in probiotics, and Lactobacillus acidophillus and Enterococcus faecium And the like.

Lactobacillus acidophillus는 장내에 서식하는, 통상에 알려진 대표적 프로바이오틱스 중 하나이다. 막대기 모양의 유산간균으로 산에 강한 내산성을 가진다. Lactobacillus Acidophilus is one of the most commonly known probiotics in the intestinal tract. It is a stick-shaped lactic acid bacterium and has strong acid resistance to acid.

L. acidophillus의 기능은 여러 가지가 있다. 이 중에서 특히 장에 유익한 기능을 나열해 보자면 첫 번째로 소장 안에서 천연 항생제를 만들어 내어 20종류 이상의 유해균 성장을 억제하는 기능이 있으며, 두 번째로는 지방, 단백질 및 유제품 소화를 돕는 효소를 생성함으로써 소화를 촉진시키는 기능이 있다. 세 번째로는 장관 내에서 비타민 B·K군을 합성해 내는 기능이 있다. L. There are several functions of acidophilus . Among them, the most beneficial functions of the intestines are listed as follows. First, natural antibiotics are produced in the small intestine to inhibit the growth of more than 20 kinds of harmful bacteria. Secondly, enzymes that help digest fat, protein and dairy products are digested . The third is the ability to synthesize the vitamin B · K group in the intestinal tract.

또한 일예로 든 Enterococcus faecium는 역시 장내에 서식하는 대표적 프로바이오틱스이다. Enterococcus속의 세균으로 그람 양성이며, Catalase 음성으로 45℃에서 40% 담즙과 0.04% sodium azide에서 잘 성장하는 특성을 지닌다.
Enterococcus The faecium is also a representative probiotics in the intestines. It is a gram-positive bacterium belonging to the genus Enterococcus. It grows well in 40% bile and 0.04% sodium azide at 45 ℃ with Catalase negative.

따라서 본 발명자들은 홍삼에 미량 포함되어 있는 진세노사이드 Rg3를 증진하고 항산화 기능을 촉진하기 위하여, 유용 미생물을 이용하여 발효 홍삼 농축액을 제조하는 방법을 안출하였다.
Therefore, the inventors of the present invention have found a method for producing a fermented red ginseng concentrate using useful microorganisms in order to promote the ginsenoside Rg3 contained in the red ginseng and to promote the antioxidant function.

진세노사이드 Rg3의 함유량을 높이기 위한 종래의 기술로서, 대한민국 공개 특허공보 제10-0706111에 비타민 C를 이용한 인삼 제제 및 이의 제조방법이 개시되어 있다.As a conventional technique for increasing the content of ginsenoside Rg3, Korean Patent Laid-Open Publication No. 10-0706111 discloses a ginseng preparation using vitamin C and a method for producing the same.

개략적으로 살펴보면, 비타민 C 성분을 증류수에 일정 비율 용해하여 만든 비타민 C액을 인삼에 가한 후 1~10시간 가열하여 진세노사이드 Rg2, Rg3, Rh1, Rh2를 높은 농도로 함유하는 인삼제제 및 이의 제조방법에 관한 것이다.Briefly, a vitamin C solution prepared by dissolving a certain amount of vitamin C component in distilled water was added to ginseng and heated for 1 to 10 hours to prepare a ginseng preparation containing ginsenosides Rg2, Rg3, Rh1 and Rh2 at high concentrations, ≪ / RTI >

즉 인삼에 비타민 C액을 가한 후 가열하여 인삼엑스를 제조함으로써 홍삼에만 존재하는 진세노사이드 Rg2, Rg3, Rh1, Rh2를 인삼엑스에 존재하도록 하기 위한 제조방법에 관한 것이다.
That is, the present invention relates to a production method for allowing ginsenoside Rg2, Rg3, Rh1 and Rh2 present in ginseng extract to be present in ginseng extract by adding vitamin C solution to ginseng and heating it to prepare ginseng extract.

또한 대한민국 등록특허공보 10-0935-3620000호에는 진세노사이드 Rk1, Rg5 및 Rg3의 함량이 증진된 발효인삼 혹은 홍삼의 제조 방법에 관하여 기재되어 있으며, 초록에는 유산균을 인삼 또는 홍삼에 접종하여 배양하고, 결과물을 열처리하는 방법이 기재되어 있다.
Korean Patent Publication No. 10-0935-3620000 describes a method for producing fermented ginseng or red ginseng in which the contents of ginsenosides Rk1, Rg5 and Rg3 are enhanced. In the green, lactic acid bacteria are inoculated into ginseng or red ginseng and cultured , And a method of heat-treating the resulting product.

또한 대한민국 공개특허공보 10-2011-0105288호에는 Rh2, Rg3, C-K 등의 희유 진세노사이드 함량이 증진된 발효 홍삼의 제조 방법에 관하여 기재되어 있으며, 청구항 1에는 온도와 시간 조건을 다르게 하여 5차까지 반복 증숙하여 수삼 농축액을 제조하고 홍삼을 발효시키는 방법이 기재되어 있다.Korean Patent Laid-Open Publication No. 10-2011-0105288 discloses a method for producing fermented red ginseng in which the content of rare ginsenosides such as Rh2, Rg3, and CK is increased. In Claim 1, To prepare a concentrated ginseng extract and ferment the red ginseng.

본 발명의 목적은, 유용 미생물을 이용하여 진세노사이드 Rg3 함량을 증가시키고 체내 항산화 활성을 촉진시키기 위한 발효 홍삼 농축액을 제조하는 방법을 제공하고자 한다.
It is an object of the present invention to provide a method for producing a fermented red ginseng concentrate for increasing ginsenoside Rg3 content and promoting an antioxidant activity in the body using a useful microorganism.

본 발명은 홍삼 농축액에 균주를 접종하여 배양하는 단계, 배양액의 pH를 2.0~4.5로 조절하여 숙성하는 단계 및 숙성한 배양액을 95~121℃에서 멸균하는 단계를 포함하되, 상기 균주는 Enterococcus faecium Lactobacillus acidophillus 의 혼합 균주, Enterococcus faecium 균주, Lactobacillus acidophillus 균주, Aspergillus oryzae 균주, Saccharomyces cerevisiae 균주, Bacillus subtillus 균주 중에서 적어도 하나 이상의 균주인 것을 특징으로 하는 발효 홍삼 농축액 제조 방법을 제공함으로써, 기술적 과제를 해결하고자 한다.
But the present invention includes the step of sterilizing the fermentation step and a culture medium for fermentation to control the pH of the culturing by inoculating the strain on a Red Ginseng extract, culture medium from 2.0 to 4.5 eseo 95 ~ 121 ℃, the strain Enterococcus faecium And Lactobacillus acidophillus , Enterococcus faecium Strain , Lactobacillus acidophilus Strain , Aspergillus oryzae Strain , Saccharomyces cerevisiae Strain , Bacillus subtillus The present invention provides a method for producing fermented red ginseng concentrate, which is characterized by being at least one strain out of strains.

본 발명인 발효 홍삼 농축액 제조방법에 따른 홍삼 농축액은 진세노사이드 Rg3 함량을 증가시키고, 체내 항산화 활성을 향상시키는 효과를 보유하고 있다.
The red ginseng concentrate according to the method for producing fermented red ginseng concentrate of the present invention has an effect of increasing ginsenoside Rg3 content and improving the antioxidant activity in the body.

도 1은 발효 홍삼 농축액의 DPPH 라디칼 소거능의 측정 결과를 그래프로 나타낸 것이다.
도 2는 발효 홍삼 농축액의 총 폴리페놀 함량 증진 기능 측정 결과를 그래프로 나타낸 것이다.
도 3은 발효 홍삼 농축액의 환원력 측정 결과를 그래프로 나타낸 것이다.
도 4는 발효 홍삼 농축액에 자일리톨과 포도당을 첨가했을 때, 자일리톨과 포도당의 함량차에 따른 선호도를 그래프로 나타낸 것이다.
도 5은 발효 홍삼 농축액의 함량차에 따른 선호도를 그래프로 나타낸 것이다.
도 6은 발효 홍삼 농축액에 비타민 C를 첨가했을 때, 비타민 C의 함량차에 따른 선호도를 그래프로 나타낸 것이다.
도 7은 제형에 따른 선호도를 그래프로 나타낸 것이다.
FIG. 1 is a graph showing the measurement results of the DPPH radical scavenging ability of a fermented red ginseng concentrate.
2 is a graph showing the measurement results of the total polyphenol content enhancing function of the fermented red ginseng concentrate.
FIG. 3 is a graph showing the measurement results of the reducing power of the fermented red ginseng concentrate.
FIG. 4 is a graph showing the preference according to the content of xylitol and glucose when xylitol and glucose were added to fermented red ginseng concentrate.
FIG. 5 is a graph showing the preference according to the content of the fermented red ginseng concentrate.
FIG. 6 is a graph showing the preference of vitamin C added to fermented red ginseng concentrate according to the content of vitamin C. FIG.
Figure 7 is a graphical representation of the preferences according to the formulation.

본 명세서 및 청구 범위에 사용된 용어나 단어는 통상적이거나 사전적인 의미로 한정해서 해석되어서는 안 되며, 발명자는 그 자신의 발명을 가장 최선의 방법으로 설명하기 위해 용어의 개념을 적절하게 정의할 수 있다는 원칙에 입각하여본 발명의 기술적 사상에 부합하는 의미와 개념으로 해석되어야만 한다.The terms and words used in the present specification and claims should not be construed as limited to ordinary or dictionary terms and the inventor may properly define the concept of the term in order to best describe its invention It should be construed as meaning and concept consistent with the technical idea of the present invention.

따라서 본 명세서에 기재된 실시예, 참조예 및 도면에 기술된 사항은 본 발명의 가장 바람직한 일 예에 불과할 뿐이고 본 발명의 기술적 사상을 모두 대변하는 것은 아니므로, 본 출원시점에 있어서 이들을 대체할 수 있는 다양한 균등물과 변형예들이 있을 수 있음을 이해하여야 한다.
Therefore, the embodiments described in the present specification, the reference examples, and the drawings are merely the most preferred examples of the present invention, and not all of the technical ideas of the present invention are described. Therefore, It should be understood that various equivalents and modifications may be present.

실험예Experimental Example 1. 미생물을 이용한 발효 홍삼 1. Fermented red ginseng using microorganisms of 진세노사이드Gin Senocide Rg3Rg3 증진 분석 Enhancement analysis

1-1. 1-1. 진세노사이드Gin Senocide 분석 시료 준비 Analytical sample preparation

진세노사이드 정량 분석을 위한 시료로써 홍삼 배양액은 균체를 제거하지 않은 채로 동결건조하였다. 건조된 분말은 냉동고에 동결보관하였으며, 10% 메탄올을 이용하여 10mg/mL로 녹인 후, 0.22 μm syringe filter로 여과하여 HPLC 분석에 사용하였다.
As a sample for the quantitative analysis of ginsenoside, the red ginseng culture was lyophilized without removing the microbial cells. The dried powder was stored frozen in a freezer, dissolved in 10% methanol at 10 mg / mL, and filtered through a 0.22 μm syringe filter for HPLC analysis.

1-2. 1-2. 진세노사이드Gin Senocide 정량 분석 Quantitative analysis

진세노사이드 함량은 Agilent 2690 HPLC system (Agilent Technologies, USA)를 이용하여 측정하였다. HPLC 분석은 μ-Bondapak C18(3.9 mm × 150 mm, 5μm) column을 사용하여 하기의 [표 1]과 같은 이동상의 유속과 column 온도는 각각 0.6mL/min, 43℃로 하고, UV 검출기의 검출 파장은 203 nm로 하여 분석하였다.
The ginsenoside content was determined using an Agilent 2690 HPLC system (Agilent Technologies, USA). The HPLC analysis was carried out using a μ-Bondapak C18 (3.9 mm × 150 mm, 5 μm) column. The flow rate and column temperature of the mobile phase were set at 0.6 mL / min and 43 ° C., respectively, The wavelength was analyzed at 203 nm.

시간(분)Time (minutes) Acetonitlie(18%)Acetonitlie (18%) 물(100%)Water (100%) 00 1818 8282 4242 2424 7676 4646 2929 7171 7575 4040 6060 100100 6565 3535 135135 8585 1515 150150 8585 1515 180180 1818 8282

1-3. 미생물을 이용한 1-3. Microbial 진세노사이드Gin Senocide Rg3Rg3 증진 실험 Promotion experiment

홍삼 농축액을 10 brix의 농도로 첨가한 후, 121℃에서 15분간 멸균하였다. 12개의 실험군으로 나누어 각 농축액에 다음과 같은 조성으로 균주를 첨가하였다.Red ginseng concentrate was added at a concentration of 10 brix and sterilized at 121 ° C for 15 minutes. The strains were divided into 12 experimental groups and each strain was added with the following composition.

1번: Enterococcus faecium + Lactobacillus acidophillus No. 1: Enterococcus faecium + Lactobacillus acidophilus

2번: Aspergillus oryzae No. 2: Aspergillus oryzae

3번: Saccharomyces cerevisiae No. 3: Saccharomyces cerevisiae

4번: Bacillus subtillus No.4: Bacillus subtillus

5번: Lactobacillus acidophillus No.5: Lactobacillus acidophilus

6번: Enterococcus faecium No. 6: Enterococcus faecium

7번: Enterococcus faecium + Lactobacillus acidophillus No. 7: Enterococcus faecium + Lactobacillus acidophilus

8번: Aspergillus oryzae No. 8: Aspergillus oryzae

9번: Saccharomyces cerevisiae No. 9: Saccharomyces cerevisiae

10번: Bacillus subtillus Number 10: Bacillus subtillus

11번: Lactobacillus acidophillus No. 11: Lactobacillus acidophilus

12번: Enterococcus faecium
No. 12: Enterococcus faecium

총 5일간 30℃로 온도를 설정한 Shaking incubator에서 120 rpm으로 배양하였다.
And incubated for 5 days at 30 rpm in a shaking incubator at 120 rpm.

1-4. 미생물을 이용한 발효 홍삼 농축액의 1-4. Of fermented red ginseng concentrate using microorganisms 진세노사이드Gin Senocide 분석 실험 결과 Analysis result

number
number
Fer/day
Fer / day
진세노사이드 Gin Senocide
Rb1Rb1 Rg1Rg1 RcRc Rb2Rb2 Rb3Rb3 RdRd ReRe Rg6Rg6 Rg3Rg3 F4F4 RfRf Rg5Rg5 00 00 5.145.14 0.700.70 1.991.99 177 177 0.360.36 0.910.91 4.384.38 -- 0.380.38 -- 0.920.92 0.840.84 1One 55 4.254.25 2.362.36 5.625.62 3.053.05 0.760.76 1.771.77 4.804.80 0.750.75 0.290.29 0.270.27 1.271.27 0.670.67 22 55 4.884.88 3.223.22 6.556.55 3.533.53 -- 1.501.50 6.606.60 0.730.73 -- 0.330.33 1.721.72 0.520.52 33 55 4.734.73 3.093.09 6.386.38 3.483.48 0.890.89 2.122.12 6.396.39 0.810.81 0.320.32 0.310.31 1.601.60 0.730.73 44 55 4.224.22 2.302.30 5.565.56 3.063.06 0.750.75 1.351.35 4.784.78 0.770.77 0.390.39 0.270.27 1.261.26 0.630.63 55 55 4.014.01 2.272.27 5.285.28 2.872.87 0.720.72 1.741.74 4.584.58 0.780.78 0.250.25 1.191.19 0.630.63 0.630.63 66 55 4.234.23 2.382.38 5.585.58 3.033.03 0.760.76 1.951.95 4.844.84 0.760.76 0.280.28 0.260.26 1.251.25 0.600.60 77 55 2.802.80 1.261.26 3.423.42 1.671.67 0.470.47 1.531.53 2.512.51 1.181.18 1.651.65 0.660.66 1.181.18 2.332.33 88 55 3.103.10 1.561.56 3.823.82 1.891.89 0.520.52 -- 2.872.87 1.171.17 2.002.00 0.680.68 1.441.44 2.412.41 99 55 3.493.49 1.581.58 4.524.52 2.192.19 0.610.61 2.122.12 3.443.44 1.281.28 1.841.84 0.790.79 1.511.51 2.642.64 1010 55 2.822.82 1.351.35 3.453.45 1.701.70 0.460.46 1.061.06 2.592.59 1.191.19 2.162.16 0.650.65 1.211.21 2.782.78 1111 55 3.993.99 2.252.25 5.255.25 2.882.88 0.720.72 1.761.76 4.564.56 0.850.85 0.290.29 0.250.25 1.181.18 -- 1212 55 3.003.00 1.391.39 3.703.70 1.821.82 0.500.50 1.661.66 2.712.71 1.271.27 1.661.66 0.680.68 1.271.27 2.322.32

대조군과 비교해 보면, 실험군 7~10, 12(7번: Enterococcus faecium + Lactobacillus acidophillus , 8번: Aspergillus oryzae , 9번: Saccharomyces cerevisiae, 10번: Bacillus subtillus , 12번: Enterococcus faecium에서 Rg3의 함량은 평균 4~5배가 증가하였음을 알 수 있다.
Compared with the control group, the experimental groups 7 to 10 and 12 (No. 7: Enterococcus faecium + Lactobacillus acidophillus , No. 8: Aspergillus oryzae , No. 9: Saccharomyces cerevisiae, No. 10: Bacillus subtillus , No. 12: Enterococcus The content of Rg3 in faecium increased 4 ~ 5 times on average.

참조예Reference Example 1. 항산화 실험을 위한 발효 홍삼 농축액 제조  1. Preparation of Fermented Red Ginseng Concentrate for Antioxidant Experiment

실험예 1에서 Rg3의 함량을 증진시킨 실험군 7~10, 12 균주들 중에서 Rg3 함량을 가장 적게 증진한 실험군 12번의 Enterococcus faecium 균주를 주로 활용하여 항산화 실험을 진행하였다.
Among the strains 7 to 10 and 12, which increased the content of Rg3 in Experimental Example 1, 12 strains of Enterococcus faecium Strain Antioxidant experiments were performed mainly.

1-1. 미생물 배양1-1. Microbial culture

발효에 사용한 미생물은 Enterococcus faecium Saccharomyces cerevisiae이다. 배지의 조성은 하기의 [표 3]과 같은 조성이며, 각 배지에 들어간 균주를 달리하여 실험군 A,B를 설정하였다. The microorganisms used for fermentation were Enterococcus faecium Saccharomyces cerevisiae . The composition of the medium was as shown in Table 3 below. Experimental groups A and B were set up with different strains entering each medium.

실험군 A는 E. faecium를 MRS agar 평판 배지에 접종·배양하였으며, 실험군 B는 S. cerevisiae를 YM agar 평판 배지에 접종·배양하고 E. faecium을 2차 배양하였다. 실험군 A,B 모두 배지에 계대배양한 후, incubator에서 배양하였다.
Experimental group A was E. was inoculated, incubated faecium in MRS agar plate medium, test group B, S. cerevisiae inoculation, incubation, and E for the YM agar plate medium. The faecium was secondly cultured . Both experimental groups A and B were subcultured in culture medium and incubated in an incubator.

MRS 배지
(Enterococcus faecium)
MRS badge
( Enterococcus faecium )
YM 배지
(Saccharomyces cerevisiae)
YM badge
( Saccharomyces cerevisiae )
conditioncondition amount 배양 온도 Incubation temperature pHpH conditioncondition amount 배양 온도Incubation temperature pHpH Yeast extractYeast extract 5.0 g/L5.0 g / L 37℃37 ℃ 2.0~4.5






2.0 to 4.5






Yeast extractYeast extract 3.0 g/L3.0 g / L 25℃25 ℃ 2.0~4.5






2.0 to 4.5






Beef extractBeef extract 10.0 g/L10.0 g / L Malt extractMalt extract 3.0 g/L3.0 g / L Peptone Peptone 10.0 g/L10.0 g / L PeptonePeptone 5.0 g/L5.0 g / L GlucoseGlucose 20.0 g/L20.0 g / L GlucoseGlucose 10.0 g/L10.0 g / L AgarAgar 20.0 g/L20.0 g / L AgarAgar 20.0 g/L20.0 g / L Manganeses sulfateManganeses sulfate 0.05 g/L0.05 g / L Di-potassium phosphateDi-potassium phosphate 2.0 g/L2.0 g / L Triammonium citrate Triammonium citrate 2.0 g/L2.0 g / L

1-2. 미생물을 이용한 발효 홍삼 제조1-2. Production of fermented red ginseng using microorganism

본 실험에서 사용된 홍삼은 2012년 7월 생산된 6년근으로 충남 금산 인삼도매시장에서 구입하여 무게당 8배 가수하여 3회 반복 추출하였으며, 80℃ 이하의 온도에서 농축액(65 brix)을 제조한 후 냉장고에 보관하여 실험에 사용하였다.
The red ginseng used in this experiment was purchased from the wholesale market of Ginsan ginseng in Chungnam Province in July 2012, and was extracted 8 times per weight and repeated 3 times. The concentrate (65 brix) was prepared at a temperature below 80 ℃ And stored in a refrigerator for use in experiments.

배지의 조건과 배양 균주를 다르게 한 실험군 A, B를 설정하여 농축액을 각각 다른 조건으로 2개의 군으로 발효하였으며, 실험군 A의 발효 단계는 다음과 같다.Experimental groups A and B were prepared with different culture conditions and fermented into two groups under different conditions. The fermentation stages of experimental group A were as follows.

1단계, 홍삼 농축액(10 brix)에 E. faecium을 접종하여 9일간 배양한다. In step 1, ginseng concentrate (10 brix) E. Inoculated with faecium and cultured for 9 days.

2단계, 배양 후 구연산을 이용하여 배양액의 pH를 2.0~4.5로 조절하고 2시간 숙성한다.After culturing, the pH of the culture is adjusted to 2.0 ~ 4.5 using citric acid and aged for 2 hours.

3단계, 숙성된 배양액을 95~121℃에서 멸균한다.
Step 3, the aged culture is sterilized at 95 to 121 ° C.

실험군 B의 발효 단계는 실험군 A와 동일하되, 1단계의 배양하는 균주가 다르다.The fermentation stage of Experimental Group B is the same as that of Experimental Group A, except that the strains cultivated in the first stage are different.

1단계, 홍삼 농축액에 S. cerevisiae를 접종하여 4일간 배양한 후, E. faecium을 접종하여 9일간 배양한다.In step 1, Red Ginseng extract S. After 4 days the culture was inoculated cerevisiae, E. Inoculated with faecium and cultured for 9 days.

2단계, 실험군 A의 발효 단계 2와 동일하다.Step 2, fermentation step 2 of experimental group A.

3단계, 실험군 A의 발효 단계 3과 동일하다.
Step 3, same as fermentation step 3 of experimental group A.

실험에 사용한 배지는 모두 121℃에서 15분간 멸균하였으며, 실험군 A, B 모두 9일간 shaking incubator에서 120 rpm으로 진탕배양하였다. (하기의 [표 4] 참조)
All of the media used in the experiments were sterilized at 121 ° C for 15 minutes and cultured in shaking incubator at 120 rpm for 9 days. (See Table 4 below)

그룹
group
조성Furtherance pHpH 배양 온도Incubation temperature 균주/conditionCondition
A
A
발효홍삼농축액Fermented red ginseng concentrate 2.0~4.52.0 to 4.5 25~35℃25 ~ 35 ℃ E. faecium를 접종하여 9일간 배양 E. Inoculated with faecium and incubated for 9 days
B
B
발효홍삼농축액Fermented red ginseng concentrate 2.0~4.52.0 to 4.5 25~35℃25 ~ 35 ℃ S. cerevisiae를 접종하여 4일간 배양 → E. faecium를 접종하여 9일간 2차 배양 S. inoculated cerevisiae 4 days cultivation → E. inoculated with faecium 9 days secondary culture

실험예Experimental Example 2. 발효 홍삼 농축액의  2. Fermented red ginseng concentrate DPPHDPPH 라디칼Radical 소거능Scatters 측정 Measure

2-1. 발효 홍삼 농축액의 2-1. Of fermented red ginseng concentrate DPPHDPPH 라디칼Radical 소거능Scatters 측정 준비 Preparation for measurement

DPPH radical은 ascorbic acid 및 토코페놀, polyhydroxy 방향족 화합물, 방향족 아민류에 의해 전자나 수소를 받아 환원되어 안정한 분자를 형성하게 될 때 보라색이 탈색된다. DPPH radical 소거능은 이러한 원리를 이용한 것으로, 다양한 천연소재로부터 항산화 물질을 탐색하는데 많이 이용되고 있으며, 비교적 짧은 시간 내에 항산화능을 측정할 수 있는 장점이 있다.
DPPH radicals decolor purple when ascorbic acid and tocopherol, polyhydroxy aromatic compounds, and aromatic amines cause electrons or hydrogen to be reduced to form stable molecules. The DPPH radical scavenging ability is based on this principle, and it is widely used to search for antioxidant substances from various natural materials and has an advantage of measuring antioxidant ability in a relatively short time.

Blois 등의 방법을 변형하여 전자공여능(Electron donating ability, EDA)을 측정시료 0.2 mL에 2 × 10-4M DPPH 용액 0.8 mL를 가한 후, vortex mixer로 10초간 진탕하고 30분 후에 분광광도계를 이용하여 520 nm에서 흡광도를 측정하였다. 전자공여능은 시료 첨가구와 비첨가구의 흡광도 차이를 백분율(%)로 구하며, 추출물의 EDA(%) 값을 50% 감소시키는 IC50 (Inhibition concentration)로 표현하였다.
Measure the electron donating ability (EDA) by changing the method of Blois. Add 0.8 mL of 2 × 10 -4 M DPPH solution to 0.2 mL of the sample, shake it for 10 seconds with a vortex mixer, and after 30 minutes, use a spectrophotometer And the absorbance at 520 nm was measured. The electron donating ability is determined by the percentage difference between the absorbance of the sample and the non-accepting sample, and the IC 50 (Inhibition concentration).

2-2. 발효 홍삼 농축액의 2-2. Of fermented red ginseng concentrate DPPHDPPH 라디칼Radical 소거능Scatters 실험 결과 Experiment result

도 1은 발효 홍삼 농축액의 DPPH 라디칼 소거능의 측정 결과를 그래프로 나타낸 것이다. FIG. 1 is a graph showing the measurement results of the DPPH radical scavenging ability of a fermented red ginseng concentrate.

DPPH 라디칼 소거능을 측정한 결과, 홍삼 농축액(10 brix)에 E. faecium을 접종하고 pH를 2.0~4.5로 조절한 실험군 A의 경우, 배양한 날부터는 DPPH 라디칼 소거능 수치가 감소하다가 배양 3일째부터 서서히 증가하여 7일째에 최대가 되었다. As a result of measuring the DPPH radical scavenging activity, in red ginseng concentrate (10 brix) E. In the case of the experimental group A, which was inoculated with faecium and adjusted the pH to 2.0 ~ 4.5, the DPPH radical scavenging ability decreased from the day of incubation, then gradually increased from the third day of culture to the maximum at the seventh day.

홍삼 농축액에 S. cerevisiae를 접종하고 pH를 2.0~4.5로 조절한 후 E. faecium를 2차 배양한 실험군 B의 경우, 2차 배양한 날부터 수치가 큰 폭으로 증가했으며, 2차 배양 1일째에 최대가 되었다.Red Ginseng extract the S. After inoculation cerevisiae and adjusted to pH 2.0 ~ 4.5 E. In the case of the experimental group B in which the faecium was secondarily cultured, the value increased greatly from the day of the second culture and reached a maximum on the first culture day.

실험군 A와 비교해 볼 때, 실험군 B는 전반적인 수치가 실험군 A보다 높아졌으며, 수치의 증가 경향 또한 더 뚜렷해졌다. 또한, 수치가 증가하기 시작하는 날짜가 실험군 A보다 더 빨랐다.
Compared with the experimental group A, the overall value of the experimental group B was higher than that of the experimental group A, and the increasing tendency of the numerical value was also clearer. In addition, the date at which the value began to increase was faster than that of experiment group A.

따라서 E. faecium 접종한 실험군 A보다, S. cerevisiae를 접종하고 E. faecium를 2차 배양한 실험군 B에서 DPPH 라디칼 소거능 활성이 촉진되었음을 알 수 있다.
Thus, E. faecium only More than one vaccination group A, S. inoculated cerevisiae and E. The activity of DPPH radical scavenging activity was stimulated in experimental group B, which was a secondary culture of faecium .

실험예Experimental Example 3. 발효 홍삼 농축액의 총 폴리페놀 함량 증진 기능 측정 3. Measurement of total polyphenol content enhancing function of fermented red ginseng concentrate

3-1. 총 폴리페놀 함량 측정 준비3-1. Prepare to measure total polyphenol content

벤젠고리(C6H6)의 수소 중 하나가 하이드록시기(-OH)로 치환된 물질을 페놀이라고 하는데, 하이드록시기를 2개 이상 갖고 있는 물질을 '다가(多價)페놀', 즉폴리페놀이라고 통틀어 부른다. A substance in which one of the hydrogens of the benzene ring (C 6 H 6 ) is substituted with a hydroxyl group (-OH) is referred to as phenol. A substance having two or more hydroxy groups is referred to as a "polyphenol" It is called phenol.

폴리페놀은 식물의 껍질, 표피, 씨앗 등에 포함된 색소, 떫은맛, 쓴맛 성분으로써 자외선에 의해 발생하는 활성 산소 등 외부 유해 요인으로부터 식물이 스스로를 방어하기 위하여 가지고 있는 생체 방어 물질이다. 녹차에 들어 있는 카테킨, 커피에 포함되어 있는 클로로겐산, 딸기·가지·포도·검은콩·팥 등의 붉은색·자색의 안토시아닌계 색소 등이 폴리페놀의 예이다. Polyphenol is a biodegradable material possessed by plants to protect themselves from external harmful factors such as pigment, bitter taste, and bitter component contained in the skin, epidermis, and seeds of plants, and active oxygen generated by ultraviolet rays. Examples of polyphenols are catechins contained in green tea, chlorogenic acid contained in coffee, red and purple anthocyanin pigments such as strawberry, eggplant, grape, black bean, and red bean.

폴리페놀은 인체 내에서도 항산화 기능을 발하는 것으로 알려져 있어, 식품이나 의료 등에 널리 사용되고 있다.
Polyphenols are known to exert antioxidative functions in the human body, and they are widely used in foods and medical care.

총 폴리페놀 함량은 DeWanto 등의 방법에 따라 Folin-Ciocalteu reagent가 시료의 폴리페놀 화합물에 의해 환원되어 몰리브덴 청색으로 발색되는 원리로 분석하였다.The total polyphenol content was analyzed by DeWanto et al. In which the Folin-Ciocalteu reagent was reduced by the polyphenol compound of the sample and developed into molybdenum blue.

각 시료 100 L에 2% NaCO3 용액 2 mL를 가한 후 3분간 방치하여 50% Folin-ciocalteu reagent 100 L를 가하고 2% NaCO3 용액을 가한 30분 후 반응액의 흡광도 값을 750 nm에서 측정하였다.2 mL of 2% NaCO 3 solution was added to each 100 L of each sample, and the mixture was allowed to stand for 3 minutes. Then, 100 L of 50% Folin-ciocalteu reagent was added, and the absorbance of the reaction solution was measured at 750 nm 30 minutes after adding 2% NaCO 3 solution .

표준물질로 garlic acid를 사용하여 검량선을 작성하고, 총 폴리페놀 함량은 시료 g 중의 mg garlic acid 표기하였다.
Calibration curves were prepared using garlic acid as a reference material, and the total polyphenol content was expressed as mg garlic acid in the sample g.

3-2. 발효 홍삼 농축액의 총 폴리페놀 함량 증진 기능 측정 결과3-2. Measurement of Total Polyphenol Content Enhancement Function of Fermented Red Ginseng Concentrate

도 2는 발효 홍삼 농축액의 총 폴리페놀 함량 증진 기능 측정 결과를 그래프로 나타낸 것이다.2 is a graph showing the measurement results of the total polyphenol content enhancing function of the fermented red ginseng concentrate.

홍삼 농축액에 E. faecium을 접종하고 pH를 2.0~4.5로 조절한 실험군 A의 경우, 배양한 날부터 총 폴리페놀 함량 수치가 조금씩 증가하는 경향을 보여, 배양 9일째에 최대가 되었다.Red ginseng concentrate E. In the case of experimental group A, in which faecium was inoculated and the pH was adjusted to 2.0 ~ 4.5, the total polyphenol content tended to increase gradually from the day of cultivation, and reached a maximum on the ninth day of culture.

홍삼 농축액에 S. cerevisiae를 접종하고 pH를 2.0~4.5로 조절한 후 E. faecium를 2차 배양한 실험군 B의 경우, 2차 배양 전의 수치가 최대가 되었다가 점차 감소하는 경향을 보였으나, 2차 배양 7일째에 다시 최대에 가깝게 증가하는 양상을 보였다. Red Ginseng extract the S. After inoculation cerevisiae and adjusted to pH 2.0 ~ 4.5 E. In the case of the second group of faecium cultivar B, the value before the second incubation tended to be the maximum, but gradually decreased, but again increased to the maximum on the seventh day of the second incubation.

실험예 2-2에서와 동일하게, 실험군 A와 비교해 볼 때 실험군 B의 전반적인 수치가 실험군 A보다 높았다.
As in Experimental Example 2-2, the overall value of the experimental group B was higher than that of the experimental group A, compared with the experimental group A.

따라서 E. faecium 접종한 실험군 A보다, 홍삼 농축액에 S. cerevisiae를 접종하고 E. faecium를 2차 배양한 실험군 B에서 총 폴리페놀 함량이 증진되었음을 알 수 있다.
Thus, E. faecium only Inoculated group than A, in the Red Ginseng extract S. inoculated cerevisiae and E. The total polyphenol content of the experimental group B, which was the second culture of faecium , was increased.

실험예Experimental Example 4. 발효 홍삼 농축액의 환원력 측정 4. Measurement of reducing power of fermented red ginseng concentrate

4-1. 환원력 측정 준비4-1. Prepare to measure reducing power

환원력은 항산화 작용의 여러 기작 중에서 활성 산소종 및 유리기에 전자를 공여하는 능력을 말하며, 700 nm에서 Ferric-ferricyanide(Fe3 +) 혼합물이 수소를 공여하여 유리 라디칼을 안정화시켜 Ferrous(Fe2 +)로 전환하는 환원력을 흡광도 값으로 나타내어 측정할 수 있다. Reducing power refers to the ability of donating electrons to the active oxygen species and free radicals from a number of mechanism of antioxidant action, by the at 700 nm the Ferric-ferricyanide (Fe 3 +) mixture of donating hydrogen to stabilize the free radical Ferrous (Fe 2 +) Can be measured by expressing the reducing power to be converted into the absorbance value.

환원력 측정은 Mau 등의 방법으로 실행되었다. 각각의 시료 250 μL에 0.2M sodium phosphate buffer 250 μL, 1% potassium ferricyanide 250 μL를 각각 혼합하여 50℃에서 20분 동안 반응하고 1% trichloroacic acid를 가한다. 위 반응액을 1,000 rpm에서 10분간 원심분리하여 상징액 500 μL에 증류수 500 μL를 혼합하고, 0.1% ferric chloride 100 μL를 가하여 반응액의 흡광도 값을 700 nm에서 측정하였다.
The reduction power was measured by Mau et al. 250 μL of each sample is mixed with 250 μL of 0.2 M sodium phosphate buffer and 250 μL of 1% potassium ferricyanide, reacted at 50 ° C. for 20 minutes, and 1% trichloroacic acid is added. The reaction mixture was centrifuged at 1,000 rpm for 10 minutes, 500 μL of distilled water was mixed with 100 μL of the supernatant, and 100 μL of 0.1% ferric chloride was added thereto. The absorbance of the reaction solution was measured at 700 nm.

4-2. 발효 홍삼 농축액의 환원력 측정 실험 결과4-2. Experimental results of reducing power of fermented red ginseng concentrate

도 3은 발효 홍삼 농축액의 환원력 측정 결과를 그래프로 나타낸 것이다.FIG. 3 is a graph showing the measurement results of the reducing power of the fermented red ginseng concentrate.

홍삼 농축액에 E. faecium을 접종하고 pH를 2.0~4.5로 조절한 실험군 A의 경우, O.D. 값은 배양 4일째까지는 서서히 감소하는 경향을 보였으나 5일째 이후부터 증가하는 경향을 보였다. Red ginseng concentrate E. In the case of experimental group A, in which the faecium was inoculated and the pH was adjusted to 2.0 ~ 4.5, the OD value tended to gradually decrease until the fourth day of incubation, but tended to increase after the fifth day.

홍삼 농축액에 S. cerevisiae를 접종하고 pH를 2.0~4.5로 조절한 후 E. faecium을 2차 배양한 실험군 B의 경우, O.D. 값은 2차 배양 전부터 증가하여, 간혹 작은 폭의 감소 경향을 보였으나 전반적으로 증가하는 경향을 보였다.Red Ginseng extract the S. After inoculation cerevisiae and adjusted to pH 2.0 ~ 4.5 E. In the case of the experimental group B in which the faecium was secondarily cultured, the OD value tended to increase from the second culture stage to slightly decrease, but the overall tendency to increase.

실험예 2-2, 실험예 3-2에서와 동일하게, 실험군 A와 비교해 볼 때 실험군 B의 전반적인 수치가 실험군 A보다 높았다.
As in Experimental Example 2-2 and Experimental Example 3-2, the overall value of the experimental group B was higher than that of the experimental group A, compared with the experimental group A.

따라서 E. faecium 접종한 실험군 A보다, S. cerevisiae를 접종하고 E. faecium을 2차 배양한 실험군 B에서 더욱 환원력을 효과적으로 촉진시킬 수 있음을 알 수 있다.
Thus, E. faecium only More than one vaccination group A, S. inoculated cerevisiae and E. it can be seen that the reducing power can be further effectively promoted in the experimental group B in which the faecium is cultured secondarily.

실시예Example 1. 미생물을 이용한 발효 홍삼 농축액 제조 1. Preparation of fermented red ginseng concentrate using microorganisms

실험예 1 내지 실험예 4에 기반하여, 진세노사이드 Rg3 함량을 증진하고 항산화기능을 갖도록 하기 위한 미생물을 이용한 발효 홍삼 농축액을 제조하되, 주요한 단계는 아래와 같다.
Based on Experimental Examples 1 to 4, a fermented red ginseng concentrate using microorganisms was prepared to enhance the content of ginsenoside Rg3 and to have an antioxidant function. The major steps are as follows.

제1단계로 홍삼농축액에 Enterococcus faecium Lactobacillus acidophillus 의 혼합 균주, Enterococcus faecium 균주, Lactobacillus acidophillus 균주, Aspergillus oryzae 균주, Saccharomyces cerevisiae 균주, Bacillus subtillus 균주 중에서 적어도 하나 이상의 균주를 접종하여 배양한다.In the first step, Enterococcus faecium And Lactobacillus acidophillus , Enterococcus faecium Strain , Lactobacillus acidophilus strain , Aspergillus oryzae Strain , Saccharomyces cerevisiae Strain , Bacillus subtillus At least one strain among the strains is inoculated and cultured.

여기에서, Enterococcus faecium Lactobacillus acidophillus 의 혼합 균주에서 혼합비는 임의적일 수 있으며, 각 균주의 접종 함량은 일반적인 접종 기준에 의하여 수행된다.Here, Enterococcus faecium And Lactobacillus acidophillus, the mixing ratio may be arbitrary, and the inoculum content of each strain is performed according to a general inoculation standard.

일 예로, 배지 기준으로 5~15%의 균주를 접종할 수 있다.
For example, 5 to 15% of strains can be inoculated on a medium basis.

바람직하게, 균주의 접종 후 배양 일수는 최소 5일 이상에서 9일 이내로 설정할 수 있으며 조건에 따라서 변경될 수도 있다.Preferably, the number of incubation days after inoculation of the strain can be set within a range of at least 5 days to within 9 days, and may be changed according to the conditions.

또한, 균주의 종류가 2개 이상일 경우, 각 균주마다 차례로 배양되거나 함께 배양될 수 있다.When two or more kinds of strains are used, they may be cultured successively or co-cultured for each strain.

제2단계로 균주의 배양 후에 배양액의 pH를 2.0~4.5로 조절한 후에 숙성한다.After the strain is cultured in the second step, the pH of the culture medium is adjusted to 2.0 to 4.5 and then aged.

바람직하게, 구연산을 이용하여 pH를 조절하되 조건에 따라 구연산 외에도 다른 산성 용액을 이용할 수도 있다. 또한 숙성 시간은 2~4시간 정도로 하되 조건에 따라 변경될 수도 있다.
Preferably, the pH is controlled using citric acid, but other acidic solutions besides citric acid may be used depending on the conditions. The aging time is about 2 to 4 hours, but it can be changed according to the condition.

제 3단계로 숙성된 배양액을 멸균한다.In the third step, the aged culture is sterilized.

바람직하게, 배양액의 멸균은 온도 95~121℃에서 수행하되 조건에 따라 변경될 수도 있다.
Preferably, the sterilization of the culture broth is carried out at a temperature of 95 to 121 캜, but may be varied depending on the conditions.

실시예Example 2. 발효 홍삼 농축액을 이용한 건강기능식품 제조 2. Manufacture of functional foods using fermented red ginseng concentrate

실시예 1에 따라서 제조된 발효 홍삼 농축액을 이용하여 건강기능식품을 제조하되, 하기에 서술된 참조예 2에 따른 관능평가에 기반하여 조성 중량비를 안출하였으며 이는 하기의 [표 5]와 같다. 조건에 따라서, 발효 홍삼 농축액, 자일리톨, 포도당, 비타민 C 등의 함량은 일부 조정될 수 있음은 물론이다.
The health functional foods were prepared using the fermented red ginseng concentrate prepared according to Example 1, and the composition weight ratios were calculated based on the sensory evaluation according to Reference Example 2 described below, which is shown in Table 5 below. It is needless to say that the content of the fermented red ginseng concentrate, xylitol, glucose, vitamin C and the like can be partially adjusted according to the conditions.

원료Raw material 배합비(%)Formulation ratio (%) 발효홍삼농축액Fermented red ginseng concentrate 22 비타민 CVitamin C 55 멀티 비타민Multi vitamins 1One 아세설팜Acesulfame 0.10.1 자일리톨Xylitol 2020 구연산Citric acid 0.10.1 레몬향 분말Lemon fragrance powder 0.50.5 치자황색소Gardenia yellow 0.70.7 포도당glucose 69.669.6 피쉬콜라겐Fish Collagen 1One

도 7은 제형에 따른 선호도를 그래프로 나타낸 것으로서, 이를 반영하여 발효 홍삼 농축액을 이용한 건강기능식품의 제형은 주로 과립 형태로 제조하되 조건에 따라 액상, 분말로 제조할 수도 있다.
FIG. 7 is a graph showing the preference according to the formulation. Reflecting this, the formulation of the health functional food using the fermented red ginseng concentrate is mainly prepared in the form of granules, and may be prepared as a liquid or powder according to the conditions.

참조예Reference Example 2. 발효 홍삼 농축액을 이용한 건강기능식품의 관능 평가 2. Sensory Evaluation of Health Functional Foods Using Fermented Red Ginseng Concentrate

발효 홍삼 농축액을 이용한 건강기능식품의 관능 평가를 위하여, 자일리톨 및 포도당, 발효 홍삼 농축액, 비타민 C의 함량차에 따른 선호도를 조사하였다.For the sensory evaluation of health functional foods using fermented red ginseng concentrate, preference of xylitol, glucose, fermented red ginseng concentrate and vitamin C was investigated.

[표 6]은 자일리톨과 포도당의 함량차에 따른 평가군이며 이에 대한 선호도 결과는 도 4에 도시되어 있다. 배합비 C가 가장 맛이 있다고 평가되었다.
[Table 6] is an evaluation group according to the content of xylitol and glucose, and the result of preference is shown in FIG. The mixing ratio C was evaluated as the most delicious.

종류Kinds 배합비 A(%)Compounding ratio A (%) 배합비 B(%)Compounding ratio B (%) 배합비 C(%)Compounding ratio C (%) 배합비 D(%)Compounding ratio D (%) 배합비 E(%)Compounding ratio E (%) 발효홍삼농축액Fermented red ginseng concentrate 33 33 33 33 33 비타민 CVitamin C 33 33 33 33 33 멀티 비타민Multi vitamins 1One 1One 1One 1One 1One 아세설팜Acesulfame 0.10.1 0.10.1 0.10.1 0.10.1 0.10.10.10.1 자일리톨Xylitol 1010 1515 2020 2525 3030 구연산Citric acid 0.10.1 0.10.1 0.10.1 0.10.1 0.10.1 레몬향 분말Lemon fragrance powder 0.50.5 0.50.5 0.50.5 0.50.5 0.50.5 치자황색소Gardenia yellow 0.70.7 0.70.7 0.70.7 0.70.7 0.70.7 포도당glucose 80.680.6 75.675.6 70.670.6 65.665.6 60.660.6 피쉬콜라겐Fish Collagen 1One 1One 1One 1One 1One

[표 7]은 발효 홍삼 농축액의 함량차에 따른 평가군이며 이에 대한 선호도 결과는 도 5에 도시되어 있다. 배합비 A를 선택한 사람이 가장 많았으며 홍삼 농축액이 다소 적더라도 충분히 홍삼의 맛과 향을 느낄 수 있었다고 응답하였다.
[Table 7] is an evaluation group according to the difference in content of the fermented red ginseng concentrate, and the preference results thereof are shown in FIG. And the ratio of the mixture ratio A was the highest, and even though the concentration of the red ginseng was somewhat small, it could sufficiently feel the taste and aroma of the red ginseng.

종류Kinds 배합비 A(%)Compounding ratio A (%) 배합비 B(%)Compounding ratio B (%) 배합비 C(%)Compounding ratio C (%) 배합비 D(%)Compounding ratio D (%) 발효 홍삼농축액Fermented red ginseng concentrate 22 33 44 55 비타민 CVitamin C 33 33 33 33 멀티 비타민Multi vitamins 1One 1One 1One 1One 아세설팜Acesulfame 0.10.1 0.10.1 0.10.1 0.10.1 자일리톨Xylitol 2020 2020 2020 2020 구연산Citric acid 0.10.1 0.10.1 0.10.1 0.10.1 레몬향 분말Lemon fragrance powder 0.50.5 0.50.5 0.50.5 0.50.5 치자황색소Gardenia yellow 0.70.7 0.70.7 0.70.7 0.70.7 포도당glucose 71.671.6 70.670.6 69.669.6 68.668.6 피쉬콜라겐Fish Collagen 1One 1One 1One 1One

[표 8]은 비타민 C 함량차에 따른 평가군이며 이에 대한 선호도 결과는 도 6에 도시되어 있다. 배합비 A가 많이 선택되었는데 신맛이 강한 배합비보다는 적당히 신맛이 나는 배합비를 선호한다는 것을 알 수 있다.
[Table 8] is an evaluation group according to the difference in vitamin C content, and the preference results thereof are shown in FIG. It can be seen that the compounding ratio A is selected a lot, but the compounding ratio which is sour taste rather than the compounding ratio which is the sour taste is preferred.

원료Raw material 배합비 A(%)Compounding ratio A (%) 배합비 B(%)Compounding ratio B (%) 배합비 C(%)Compounding ratio C (%) 배합비 D(%)Compounding ratio D (%) 발효 홍삼농축액Fermented red ginseng concentrate 22 22 22 22 비타민 CVitamin C 33 44 55 66 멀티 비타민Multi vitamins 1One 1One 1One 1One 아세설팜Acesulfame 0.10.1 0.10.1 0.10.1 0.10.1 자일리톨Xylitol 2020 2020 2020 2020 구연산Citric acid 0.10.1 0.10.1 0.10.1 0.10.1 레몬향 분말Lemon fragrance powder 0.50.5 0.50.5 0.50.5 0.50.5 치자황색소Gardenia yellow 0.70.7 0.70.7 0.70.7 0.70.7 포도당glucose 71.671.6 70.670.6 69.669.6 68.668.6 피쉬콜라겐Fish Collagen 1One 1One 1One 1One

Claims (7)

홍삼 농축액에 균주를 접종하여 배양하는 단계;
배양액의 pH를 2.0~4.5로 조절하여 숙성하는 단계;
숙성한 배양액을 95~121℃에서 멸균하는 단계;를 포함하되,
상기 균주는 Enterococcus faecium Lactobacillus acidophillus 의 혼합 균주, Enterococcus faecium 균주, Lactobacillus acidophillus 균주, Aspergillus oryzae 균주, Saccharomyces cerevisiae 균주, Bacillus subtillus 균주 중에서 적어도 하나 이상의 균주인 것을 특징으로 하는 발효 홍삼 농축액 제조 방법.
Inoculating and culturing the strain in a red ginseng concentrate;
Adjusting the pH of the culture medium to 2.0 to 4.5;
Sterilizing the aged culture at 95 to 121 DEG C,
The strain was Enterococcus faecium And Lactobacillus acidophillus , Enterococcus faecium Strain , Lactobacillus acidophilus Strain , Aspergillus oryzae strain , Saccharomyces cerevisiae Strain , Bacillus subtillus Wherein the fermented red ginseng concentrate is at least one strain of the strain.
청구항 1에 있어서,
상기 균주의 접종 후 배양 일수는 5~9일이고,
상기 pH의 조절은 구연산을 이용하며,
상기 숙성 시간은 2~4시간 정도인 것을 특징으로 하는 발효 홍삼 농축액 제조 방법.
The method according to claim 1,
The number of days of culture after inoculation of the strain is 5 to 9 days,
The pH is controlled using citric acid,
Wherein the fermentation time of the fermented red ginseng concentrate is about 2 to 4 hours.
청구항 1에 있어서,
상기 균주가 2개 이상일 경우,
상기 배양은 각 균주마다 차례로 배양되거나 함께 배양되는 것을 특징으로 하는 발효 홍삼 농축액 제조 방법.
The method according to claim 1,
When the number of the strains is two or more,
Wherein the culture is cultivated successively or co-cultured for each strain.
청구항 1 내지 청구항 3 중 어느 한 항에 기재된 방법을 이용하여 제조된 발효 홍삼 농축액을 유효성분으로 함유하는 조성물.
A composition containing, as an active ingredient, fermented red ginseng concentrate prepared by the method according to any one of claims 1 to 3.
청구항 4에 있어서,
상기 발효 홍삼 농축액은, 발효전 홍삼 농축액보다 진세노사이드 Rg3가 3~5배 증진되고, 항산화 기능을 보유하고 있는 것을 특징으로 하는 조성물.
The method of claim 4,
Wherein the fermented red ginseng concentrate has ginsenoside Rg3 3 to 5 times more potent than the red ginseng concentrate before fermentation and has an antioxidative function.
청구항 4에 기재된 조성물에 식품학적으로 허용 가능한 첨가제를 추가한 건강기능식품.
A health functional food in which a food additive is added to the composition according to claim 4.
청구항 6에 있어서,
상기 건강기능식품 총 중량에 대하여, 발효 홍삼 농축액 2~5 중량%, 자일리톨 10~30 중량%, 포도당 60~80 중량%, 비타민C 3~5 중량%가 포함되는 것을 특징으로 하는 건강기능식품.
The method of claim 6,
Wherein the health functional food comprises 2 to 5% by weight of fermented red ginseng concentrate, 10 to 30% by weight of xylitol, 60 to 80% by weight of glucose, and 3 to 5% by weight of vitamin C based on the total weight of the health functional food.
KR1020120130689A 2012-11-19 2012-11-19 Manufacturing method of fermented red ginseng extract with enhanced ginsenosides Rg3 and antioxidant activity KR101467837B1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020120130689A KR101467837B1 (en) 2012-11-19 2012-11-19 Manufacturing method of fermented red ginseng extract with enhanced ginsenosides Rg3 and antioxidant activity

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020120130689A KR101467837B1 (en) 2012-11-19 2012-11-19 Manufacturing method of fermented red ginseng extract with enhanced ginsenosides Rg3 and antioxidant activity

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20140063948A true KR20140063948A (en) 2014-05-28
KR101467837B1 KR101467837B1 (en) 2014-12-02

Family

ID=50891488

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020120130689A KR101467837B1 (en) 2012-11-19 2012-11-19 Manufacturing method of fermented red ginseng extract with enhanced ginsenosides Rg3 and antioxidant activity

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR101467837B1 (en)

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20160019988A (en) * 2014-08-12 2016-02-23 재단법인 전주농생명소재연구원 Method for producing fermented red ginseng with enhanced specific ginsenoside content
KR20160077285A (en) * 2014-12-22 2016-07-04 재단법인 전주농생명소재연구원 Method for producing fermented red ginseng with enhanced ginsenoside Rg3 content
KR20160086498A (en) * 2015-01-09 2016-07-20 대전대학교 산학협력단 Strain having ginsenoside bioconversion activity and manufacturing method of fermented red ginseng extract using the same
JP2017536093A (en) * 2014-09-30 2017-12-07 アールエヌエー インコーポレイテッドRna Inc. Method for producing microbial preparation and microbial preparation produced thereby
CN108402367A (en) * 2018-04-24 2018-08-17 吉林大学 A kind of preparation method of fermented ginseng vitamin carbonated drink
KR20180126302A (en) * 2017-05-17 2018-11-27 주식회사 한국인삼공사 Method of Preparing Red-Ginseng Vinegar
KR102001386B1 (en) * 2018-12-14 2019-07-18 주식회사 신우코퍼레이션 Composition for anti-hyperlipidemia and antioxidant comprising red ginseng extract
KR102052530B1 (en) * 2019-06-10 2019-12-06 주식회사 네이처셀 Manufacturing Method of Fermented Red Ginseng Using Steamed Ginseng and Microorganism

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101863694B1 (en) 2015-08-04 2018-06-01 주식회사 한국인삼공사 Cosmetic Composion for Anti-oxidation Containing Purified Extract of Red Ginseng Ethanol Extract

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20040034350A (en) * 2003-05-23 2004-04-28 (주)바이오피아 Method of the efficient production of vital-G improved immunity and anticancer from ginseng extracts
KR101006831B1 (en) * 2010-04-09 2011-01-12 한국식품연구원 Sarcodon aspratus mycelia beverage
KR101346627B1 (en) * 2011-02-08 2014-01-07 김재광 Red ginseng liquid using complex fermentation of lactic acid bacteria and enzyme

Cited By (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20160019988A (en) * 2014-08-12 2016-02-23 재단법인 전주농생명소재연구원 Method for producing fermented red ginseng with enhanced specific ginsenoside content
JP2017536093A (en) * 2014-09-30 2017-12-07 アールエヌエー インコーポレイテッドRna Inc. Method for producing microbial preparation and microbial preparation produced thereby
US10676708B2 (en) 2014-09-30 2020-06-09 Rna Inc. Method for preparing microbial preparation and microbial preparation produced by the same
JP2020120657A (en) * 2014-09-30 2020-08-13 アールエヌエー インコーポレイテッドRna Inc. Method of preparing microbial preparation in which aglycone accumulates in cells, and microbial preparation prepared thereby
KR20160077285A (en) * 2014-12-22 2016-07-04 재단법인 전주농생명소재연구원 Method for producing fermented red ginseng with enhanced ginsenoside Rg3 content
KR20160086498A (en) * 2015-01-09 2016-07-20 대전대학교 산학협력단 Strain having ginsenoside bioconversion activity and manufacturing method of fermented red ginseng extract using the same
KR20180126302A (en) * 2017-05-17 2018-11-27 주식회사 한국인삼공사 Method of Preparing Red-Ginseng Vinegar
CN108402367A (en) * 2018-04-24 2018-08-17 吉林大学 A kind of preparation method of fermented ginseng vitamin carbonated drink
KR102001386B1 (en) * 2018-12-14 2019-07-18 주식회사 신우코퍼레이션 Composition for anti-hyperlipidemia and antioxidant comprising red ginseng extract
KR102052530B1 (en) * 2019-06-10 2019-12-06 주식회사 네이처셀 Manufacturing Method of Fermented Red Ginseng Using Steamed Ginseng and Microorganism

Also Published As

Publication number Publication date
KR101467837B1 (en) 2014-12-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101467837B1 (en) Manufacturing method of fermented red ginseng extract with enhanced ginsenosides Rg3 and antioxidant activity
CN104982928B (en) A kind of japanese yew fruit health care ferment and preparation method thereof
KR101365917B1 (en) Making method for fermentation beverage of rubus coreanus
KR101705545B1 (en) Composition for preventing respiratorydisease, immune-enhancing, anti-obesity containing fermented Platycodon grandiflorum
KR20160058389A (en) Method of Manufacturing Volumizing Antocyanine Probiotics Metabolite and Pharmetics, cosmetics and Juice and food complex
KR102214532B1 (en) health food composition using pomegranate fermented by lactic acid bacteria and manufacturing method thereof
KR20220025679A (en) Method for producing fermented apple postbiotics with increased effective component content using lactic acid bacteria
KR20150075598A (en) A method for preparation of mixed composition with fermented medical plants extracts
KR20220136107A (en) Method for producing fermented product by lactic acid bacteria of Aloe with increased effective component content and postbioics products containing the same
KR20220025680A (en) Method for producing fermented balloon flower postbiotics with increased effective component content using lactic acid bacteria
KR101690779B1 (en) A method for manufacturing fermented composition comprising red gingseng and rubus coreanus and the fermented composition by the method
KR101945770B1 (en) A Manufacturing Method of Concentrate having Blueberry and Aronia
KR20160126591A (en) Method of producing ginseng fermented extract, Ginseng fermented extract produced by the same and Health functional foods comprising the same
KR102168192B1 (en) Healthful mixed tea development using fermented herbs, fruits and shiitake
KR102298700B1 (en) Facturing method of functional liquefied healthfoods using Gastroia elata Blume and Polygonum multiflorum Thunberg
KR101091833B1 (en) Methods for preparing high quantity of S-allyl-L-cysteine to fermented products of garlic using lactic acid bacteria
KR101814941B1 (en) Food composition for anti-oxidation comprising cockscomb flower extract short-term fermented by lactic acid bacteria and the method of preparation thereof
KR20230129136A (en) Composition for antibacterial, antioxidant, or anti-inflammatory comprising fermented extracts of Canavalia gladiata leaf as an active ingredient
KR20190072923A (en) Antioxidant and Immune-enhancing functional beverage and food composition comprising the extract of edible flowers fermented by lactic acid bacteria and preparation method of the same
KR101650255B1 (en) persimmon beverage product fortified polyphenol ingredient and preparation method thereof
CN111296606A (en) Ecological dragon fruit juice herbal tea beverage
KR20070034801A (en) Preparation of Chaga Fermented Beverage with High Hazardous Oxygen Removal Capacity
KR102365198B1 (en) Facturing method of functional liquefied healthfoods using Gastroia elata Blume, Polygonum multiflorum Thunberg and mountain ginseng
KR102545583B1 (en) Method for producing double-coating red ginseng granule with enhanced ginsenoside content and improved preservability
KR20140050889A (en) Manufacturing method of sunsik with fermented grain and water soluble propolis

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
AMND Amendment
E601 Decision to refuse application
AMND Amendment
X701 Decision to grant (after re-examination)
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20171107

Year of fee payment: 4

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20181112

Year of fee payment: 5