KR20140038388A - 전립선암의 치료를 위한 항-클러스테린 올리고뉴클레오타이드와 hsp90 저해제의 병용 - Google Patents
전립선암의 치료를 위한 항-클러스테린 올리고뉴클레오타이드와 hsp90 저해제의 병용 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 i) 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드 및 ii) a 열 충격 단백질 90(Hsp90) 저해제를, 서로 병용할 경우 각각 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하는데 유효한 양으로 상기 포유류 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명은, 또한 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하는데 이용하기 위한, 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드, 및 Hsp90 저해제의 양을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 또 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료함에 있어서 Hsp90 저해제와 병용하기 위한 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드, 및 i) 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드 및 ii) Hsp90 저해제를, 서로 병용할 경우 각각 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하는데 유효한 양으로 포함하는, 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하기 위한 조성물이 제공된다.
Description
본 출원은 미국 특허 가출원 제61/453,102호(출원일: 2011년 3월 15일)의 우선권을 주장하며, 이 기초 출원의 내용은 참조로 본 명세서에 포함된다.
본 출원을 통하여, 괄호 속에 인용된 것을 포함하여 각종 문헌이 인용되어 있다. 괄호 속에 인용된 문헌에 대한 전체 인용은 특허청구범위 바로 앞에 있는 본 명세서의 말미에 알파벳 순서로 열거된 것을 발견할 수 있다. 모든 인용된 문헌의 그들의 전체의 개시내용은 본 발명이 속하는 기술분야의 상황을 더욱 완전히 기술하기 위하여 본 출원 내에 참조로 본 명세서에 병합된다.
발명의 분야
본 발명은 전립선암을 치료하기 위한 병용 요법에 관한 것이다.
전립선암(prostate cancer: PCa)은 가장 흔한 암이며 또한 미국에서 남성의 암 관련 사망의 가장 공통적인 원인의 세번째를 차지한다(Jemal et al., 2006). 안드로겐 절제는 여전히 진행된 PCa 환자에 대해서 표준의 효과적인 요법으로, 종양 세포의 증식을 저해하고 아폽토시스(apoptosis)를 유도한다(Kyprianou et al., 1990). 유감스럽게도, 단기 차도 후, 종양 세포의 생존은 거세 저항성 전립선암(castrate resistant prostate cancer: CRPC)으로 재발하고, 대부분의 남성에서 3년 내에 통상 사망하게 된다(Gleave et al., 1999). CRPC 진행은 안드로겐 수용체 축(Knudsen et al., 2009), 대안적인 미토겐 성장 인자 경로(Miyake et al., 2000; Culig et al., 2004), 및 스트레스-유도 생존촉진 유전자(Gleave et al., 1999; Miyake et al., 1999) 및 세포보호성 샤페론 네트워크(cytoprotective chaperone network)(Rocchi et al., 2004; Miyake et al., 2000)의 재활성화에 연유하는 기전으로부터 초래된다. PCa를 지닌 남성에서 생존율을 유의하게 향상시키기 위하여, 이 표현형의 출현을 저해하는 새로운 치료적 전략이 개발되어야만 한다. 다수의 단백질이 안드로겐 제거를 수반하는 전립선 종양 세포에 의해 증가된 양으로 발현되는 것이 관찰되었다. 이들 단백질의 적어도 일부는 안드로겐 제거 시 관찰되는 관찰된 아폽토시스 세포 사멸과 연관되는 것을 추정된다(Raffo et al., 1995; Krajewska et al., 1996; McDonnell et al., 1992). 그러나, 많은 단백질의 기능은 완전히 알려져 있지 않다. 클러스테린(clusterin)(황산화 당단백-2(SGP-2) 또는 TRPM-2로서도 알려짐)은 이 후자의 범주 내이다.
클러스테린
클러스테린은 세포 생존을 촉진시키고 암 치료에 대한 광범위 저항을 부여하는 세포보호성 샤페론 단백질이다(Chi et al. 2005). 문헌[Sensibar et al., Cancer Research 55: 2431-2437, 1995]에서, 저자는 유전자 암호화 클러스테린으로 형질주입된(transfected) LNCaP 세포를 보고하고 있으며, 이 단백질의 발현이 종양 괴사 인자 α(TNFα)의 효과를 변화시키는지의 여부를 보기 위하여 관찰되었으며, 이 인자에 대해서 LNCaP 세포는 매우 감수성이다. TNFα에 의한 형질주입된 LNCaP 세포의 치료는 수 시간의 기간 동안 클러스테린 수준의 과도적 증가를 초래하는 것으로 나타났지만, 이들 수준은 세포 사멸 전에 DNA 단편화가 관찰될 때에 소멸되었다.
미국 특허 제7,534,773호(그 전체 내용은 참조로 병합됨)에 기재된 바와 같이, 거세-유도 종양 세포 사멸의 증대 및 안드로겐-감수성 암세포의 안드로겐-비의존형으로의 진행의 지연은 세포에 의한 클러스테린의 발현을 저해시킴으로써 달성될 수 있다.
커스터센(custirsen)
커스터센은 클러스테린 발현을 저해하는 제2세대 안티센스 올리고뉴클레오타이드이다. 커스터센은 클러스테린 mRNA의 일부에 특이적으로 결합하도록 설계되어 있어, 클러스테린 단백질의 생산의 저해를 초래한다. 커스터센의 구조는, 예를 들어, 미국 특허 제6,900,187호(이 문헌의 내용은 참조로 본 명세서에 병합됨)에서 이용가능하다. 광범위한 연구는, 커스터센이 클러스테린의 발현을 강력하게 규제하고, 아폽토시스를 용이하게 하며, 암성 인간 전립선, 유방, 난소, 폐, 신장, 방광 및 흑색종 세포를 화학요법에 대해 감수성으로 하는 것으로 밝혀졌고(Miyake et al. 2005), 이에 대해서는, 미국 특허 출원 공개 제2008/0119425 A1호를 또한 참조할 수 있다. 안드로겐-의존형 전립선암에 대한 임상 시험에 있어서, 약물인 플루타마이드 및 부세렐린은 커스터센과 병용하여 함께 이용되어 전립선암 세포 아폽토시스를 증가시킨다(Chi et al. 2004; Chi et al., 2005).
Hsp90
열 충격 단백질 90(heat shock protein 90: Hsp90)은 많은 "클라이언트"(client) 단백질의 단백질 접힘, 성숙 및 입체 형태 안정화를 위해 요구되는 ATPase-의존형 분자 샤페론이다(Young et al., 2000; Kamal et al., 2003). Hsp90은 성장 인자 수용체, 세포 주기 조절제 및 Akt와 유사한 신호전달 키나제, 안드로겐 수용체(AR) 또는 Raf-1을 비롯하여, CRPC에 연루된 수개의 단백질과 상호작용한다(Whitesell et al., 2005; Takayama et al., 2003). 종양 세포는 양성 세포에 비해서 더 높은 Hsp90 수준을 발현하고(Kamal et al., 2003; Chiosis et al., 2003), Hsp90 저해는 CRPC 및 기타 암에서 여기 상태의 표적(exciting target)으로서 생긴다. 많은 Hsp90 저해제는 겔다나마이신 및 그의 유사체, 또는 합성 화합물 등과 같은 천연 화합물을 비롯하여, 그의 ATP-결합 포켓을 표적화하면서 발달하였다. 이들 제제는 Hsp90 기능을 저해하여, 결장, 유방, PCa 및 기타 암의 임상전 연구에서 아폽토시스를 유발하는 것으로 밝혀졌다(Kamal et al., 2003; Solit et al., 2003; Solit et al., 2002).
병용 요법
전립선암 등과 같은 주어진 병태를 치료하기 위하여 두 약물의 투여는 다수의 잠재적인 문제를 야기한다. 두 약물 간의 생체내 상호작용은 복잡하다. 임의의 단일 약물의 효과는 그의 흡수, 분포 및 제거와 관련된다. 두 약물이 신체 내로 도입될 경우, 각 약물은 다른 쪽 약물의 흡수, 분포 및 제거에 영향을 미칠 수 있고, 따라서, 다른 쪽 약물의 효과를 변화시킨다. 예를 들어, 하나의 약물은 다른 쪽 약물의 제거의 대사 경로에 관여된 효소의 생산을 저해, 활성화 또는 유도할 수 있다(Guidance for Industry. In vivo drug metabolism/drug interaction studies - study design, data analysis, and recommendations for dosing and labeling). 따라서, 두 약물이 동일 병태를 치료하기 위하여 투여될 경우, 각각이 인간 대상체에서 다른 쪽 약물의 치료 활성을 보완할지, 영향을 미치지 않을지 혹은 간섭할지의 여부는 예측할 수 없다.
이 두 약물 간의 상호작용이 각 약물의 의도된 치료 활성에 영향을 미칠 뿐만 아니라, 그 상호작용은 독성 대사산물의 수준을 증가시킬 수 있다(Guidance for Industry. In vivo drug metabolism/drug interaction studies - study design, data analysis, and recommendations for dosing and labeling). 상호작용은 또한 각 약물의 부작용을 고조시키거나 완화시킬 수 있다. 그러므로, 질환을 치료하기 위하여 두 약물의 투여 시, 각 약물의 프로파일에 어떠한 변화가 일어날지는 예측불가능하다
또한, 두 약물 간의 상호작용의 효과가 분명해질 경우 정확하게 예측하는 것은 곤란하다. 예를 들어, 약물들 간의 대사 상호작용은, 제2약물의 초기 투여 시, 두 약물이 정상 상태 농도에 도달한 후에 혹은 약물들 중 한쪽의 중단 시에 명백해질 수 있다(Guidance for Industry. In vivo drug metabolism/drug interaction studies - study design, data analysis, and recommendations for dosing and labeling).
이와 같이 해서, 시험관내 모델, 동물 모델 혹은 인간에서 하나의 약물 혹은 각 약물 단독의 성과는 두 약물이 인간에게 투여된 경우의 효능과 상관 관계가 없을 수도 있다.
본 발명은 i) 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드 및 ii) 하기 구조를 지니는 열 충격 단백질 90(Hsp90) 저해제 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 그의 전구체를, 서로 병용할 경우 각각 포유류 대상체를 치료하는데 유효한 양으로 포유류 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하는 방법을 제공한다:
상기 구조 중,
R1은 H, C1-C14 알킬, C1-C10 할로알킬, C3-C7 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, C1-C6 아실, 아릴 또는 헤테로아릴이되, 이때, 각각의 알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴 및 헤테로아릴기는, 독립적으로 C1-C6 알킬, C1-C6 알콕시, 할로겐, 하이드록시, 아미노, 모노- 혹은 다이-(C1-C6)알킬아미노, 나이트로, 할로(C1-C6)알킬, 할로(C1-C6)알콕시 또는 카복스아마이드인 1 내지 4개의 기로 선택적으로 치환되고,
R1이 C1-C14 알킬기인 경우, 상기 알킬기 중의 탄소 원자들 중 5개까지는 독립적으로 R4, 카보닐, 에테닐, 에티닐, 또는 N, O, S, SO2 혹은 SO로부터 선택된 모이어티로 선택적으로 치환되되, 단, 2개의 O 원자, 2개의 S 원자, 또는 O 및 S 원자는 서로 직접 인접하지 않으며,
R4는
(i) 헤테로아릴,
(ii) 아릴,
(iii) 포화 혹은 불포화 C3-C10 사이클로알킬, 또는
(iv) 포화 혹은 불포화 C2-C10 헤테로사이클로알킬이되,
이때,
각각의 아릴, 헤테로아릴, 포화 혹은 불포화 사이클로알킬, 또는 포화 혹은 불포화 헤테로사이클로알킬은, 독립적으로 하이드록시, 할로, 아미노, 사이아노, 카복시, 카복스아마이도, 나이트로, 옥소, -S-(C1-C6) 알킬, -SO2(C1-C6) 알킬, -SO2-아릴, -SO-(C1-C6)알킬, -SO-아릴, -SO2NH2, -SO2NH-(C1-C6)알킬, -SO2NH-아릴, (C1-C6)알콕시, 또는 모노- 혹은 다이-(C1-C10)알킬아미노인 적어도 하나의 기로, 독립적으로, 선택적으로 치환되며; R4는 C6-C10 아릴기, C5-C8 포화 사이클릭기 또는 C4-C10 헤테로사이클로알킬기에 선택적으로 융합되고;
R1은 C1-C10 알킬, C1-C10 할로알킬, C2-C10 알케닐, C2-C10 알키닐, 하이드록시, 카복시, 카복스아마이도, 옥소, 할로, 아미노, 사이아노, 나이트로, -SH, -S-(C1-C6)알킬, -SO2-(C1-C6)알킬, -SO2NH2, -SO2NH(C1-C6)알킬, -SO2NH-아릴, -SO2-아릴, -SO-(C1C6)알킬, -SO2-아릴, C1-C6 알콕시, C2-C10 알케닐옥시, C2-C10 알키닐옥시, 모노- 혹은 다이-(C1-C10)알킬아미노, -C1-C10 알킬-Z, -OC1-C10 알킬-Z, 또는 R5로 임의의 이용가능한 위치에 선택적으로 치환되며, 이때,
Z는 ORo 또는 -N(R6)2이고, 여기서,
각각의 R6은 독립적으로 -H 또는 C1-C6 알킬이거나, 또는 N(R6)2는 피롤리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 아제파닐, 1,3- 혹은 1,4-다이아제파닐, 또는 몰폴리닐을 나타내되, 이들 각각은 하이드록시, 아미노, 아미노알킬, C1-C6 알킬, 모노- 혹은 다이(C1-C6)알킬아미노, C1-C6 알콕시 또는 할로겐으로 선택적으로 치환되며,
Ro는 -H, -C1-C10 알킬, -C2-C10 알케닐, -C2-C10 알키닐, 아릴, 헤테로아릴 또는 -C1-C6 아실이고;
R5는
(1) 헤테로아릴,
(2) 아릴,
(3) 포화 혹은 불포화 C5-C10 사이클로알킬, 또는
(4) 포화 혹은 불포화 C5-C10 헤테로사이클로알킬이며,
R5기는, 독립적으로 하이드록시, 옥소, 할로, 아미노, 사이아노, 나이트로, -SH, -S-(C1-C6)알킬, -SO2-(C1-C6)알킬, -SO2-아릴, -SO-(C1-C6) 알킬, -SO-아릴, -SO2NH2, -SO2NH-(C1-C6) 알킬, -SO2NH-아릴, (C1-C6)알콕시, 또는 모노- 혹은 다이-(C1-C10)알킬아미노인 적어도 하나의 기로 선택적으로 치환되고;
R2는 H, Cl, 할로겐, CF3, CHF2, CH3, C1-C10 알킬 또는 할로(C1-C6)알킬이며;
X는 N 또는 CR3이되, 여기서
R3은 H, 할로겐 또는 CH3이다.
상기 구조를 지니는 Hsp90 저해제는 미국 특허 제7,928,135호에 기재되어 있으며, 이 미국 특허의 전체 내용은 참조로 본 명세서에 병합된다.
본 발명은, 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하는 방법을 제공하되, 해당 방법은 i) 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드 및 ii) Hsp90 저해제(해당 저해제는 Hsp90i-1 이외의 것임)를, 서로 병용할 경우 각각 상기 포유류 대상체를 치료하는데 유효한 양으로 상기 포유류 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
본 발명은 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하는 방법을 제공하되, 해당 방법은 i) 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드 및 ii) Ka가 50 n㏖/ℓ 미만인 Hsp90α 및 Hsp90β에 결합하는 Hsp90 저해제 또는 그의 전구체를, 서로 병용할 경우 각각 포유류 대상체를 치료하는데 유효한 양으로 상기 포유류 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
본 발명은, 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하는데 이용하기 위한, 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드, 및 하기 구조를 지니는 Hsp90 저해제 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 그의 전구체의 양을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다:
상기 구조 중,
R1은 H, C1-C14 알킬, C1-C10 할로알킬, C3-C7 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, C1-C6 아실, 아릴 또는 헤테로아릴이되, 이때, 각각의 알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴 및 헤테로아릴기는, 독립적으로 C1-C6 알킬, C1-C6 알콕시, 할로겐, 하이드록시, 아미노, 모노- 혹은 다이-(C1-C6)알킬아미노, 나이트로, 할로(C1-C6)알킬, 할로(C1-C6)알콕시 또는 카복스아마이드인 1 내지 4개의 기로 선택적으로 치환되고,
R1이 C1-C14 알킬기인 경우, 상기 알킬기 중의 탄소 원자들 중 5개까지는, 독립적으로 R4, 카보닐, 에테닐, 에티닐, 또는 N, O, S, SO2 혹은 SO로부터 선택된 모이어티로 선택적으로 치환되되, 단, 2개의 O 원자, 2개의 S 원자, 또는 O 및 S 원자는 서로 직접 인접하지 않으며,
R4는
(i) 헤테로아릴,
(ii) 아릴,
(iii) 포화 혹은 불포화 C3-C10 사이클로알킬, 또는
(iv) 포화 혹은 불포화 C2-C10 헤테로사이클로알킬이되,
이때,
각각의 아릴, 헤테로아릴, 포화 혹은 불포화 사이클로알킬, 또는 포화 혹은 불포화 헤테로사이클로알킬은, 독립적으로 하이드록시, 할로, 아미노, 사이아노, 카복시, 카복스아마이도, 나이트로, 옥소, -S-(C1-C6) 알킬, -SO2(C1-C6) 알킬, -SO2-아릴, -SO-(C1-C6)알킬, -SO-아릴, -SO2NH2, -SO2NH-(C1-C6)알킬, -SO2NH-아릴, (C1-C6)알콕시, 또는 모노- 혹은 다이-(C1-C10)알킬아미노인 적어도 하나의 기로, 독립적으로, 선택적으로 치환되며; R4는 C6-C10 아릴기, C5-C8 포화 사이클릭기 또는 C4-C10 헤테로사이클로알킬기에 선택적으로 융합되고;
R1은 C1-C10 알킬, C1-C10 할로알킬, C2-C10 알케닐, C2-C10 알키닐, 하이드록시, 카복시, 카복스아마이도, 옥소, 할로, 아미노, 사이아노, 나이트로, -SH, -S-(C1-C6)알킬, -SO2-(C1-C6)알킬, -SO2NH2, -SO2NH(C1-C6)알킬, -SO2NH-아릴, -SO2-아릴, -SO-(C1C6)알킬, -SO2-아릴, C1-C6 알콕시, C2-C10 알케닐옥시, C2-C10 알키닐옥시, 모노- 혹은 다이-(C1-C10)알킬아미노, -C1-C10 알킬-Z, -OC1-C10 알킬-Z, 또는 R5로 임의의 이용가능한 위치에 선택적으로 치환되며, 이때,
Z는 ORo 또는 -N(R6)2이고, 여기서,
각각의 R6은 독립적으로 -H 또는 C1-C6 알킬이거나, 또는 N(R6)2는 피롤리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 아제파닐, 1,3- 혹은 1,4-다이아제파닐, 또는 몰폴리닐을 나타내되, 이들 각각은 하이드록시, 아미노, 아미노알킬, C1-C6 알킬, 모노- 혹은 다이(C1-C6)알킬아미노, C1-C6 알콕시 또는 할로겐으로 선택적으로 치환되며,
Ro는 -H, -C1-C10 알킬, -C2-C10 알케닐, -C2-C10 알키닐, 아릴, 헤테로아릴 또는 -C1-C6 아실이고;
R5는
(1) 헤테로아릴,
(2) 아릴,
(3) 포화 혹은 불포화 C5-C10 사이클로알킬, 또는
(4) 포화 혹은 불포화 C5-C10 헤테로사이클로알킬이며,
R5기는, 독립적으로 하이드록시, 옥소, 할로, 아미노, 사이아노, 나이트로, -SH, -S-(C1-C6)알킬, -SO2-(C1-C6)알킬, -SO2-아릴, -SO-(C1-C6) 알킬, -SO-아릴, -SO2NH2, -SO2NH-(C1-C6) 알킬, -SO2NH-아릴, (C1-C6)알콕시, 또는 모노- 혹은 다이-(C1-C10)알킬아미노인 적어도 하나의 기로 선택적으로 치환되고;
R2는 H, Cl, 할로겐, CF3, CHF2, CH3, C1-C10 알킬 또는 할로(C1-C6)알킬이며;
X는 N 또는 CR3이되, 여기서
R3은 H, 할로겐 또는 CH3이다.
상기 구조를 지니는 Hsp90 저해제는 미국 특허 제7,928,135호에 기재되어 있으며, 이 미국 특허의 전체 내용은 참조로 본 명세서에 병합된다.
본 발명은, 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하는데 이용하기 위한, 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드, 및 Hsp90 저해제(해당 저해제는 Hsp90i-1 이외의 것임)의 양을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
본 발명은, 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하는데 이용하기 위한, 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드, 및 Ka가 50 n㏖/ℓ 미만인 Hsp90α 및 Hsp90β에 결합하는 Hsp90 저해제 또는 그의 전구체의 양을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
본 발명은, 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료함에 있어서, 하기 구조를 지니는 Hsp90 저해제 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 그의 전구체와 병용하기 위한 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드를 제공한다:
상기 구조 중,
R1은 H, C1-C14 알킬, C1-C10 할로알킬, C3-C7 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, C1-C6 아실, 아릴 또는 헤테로아릴이되, 이때, 각각의 알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴 및 헤테로아릴기는, 독립적으로 C1-C6 알킬, C1-C6 알콕시, 할로겐, 하이드록시, 아미노, 모노- 혹은 다이-(C1-C6)알킬아미노, 나이트로, 할로(C1-C6)알킬, 할로(C1-C6)알콕시 또는 카복스아마이드인 1 내지 4개의 기로 선택적으로 치환되고,
R1이 C1-C14 알킬기인 경우, 상기 알킬기 중의 탄소 원자들 중 5개까지는 독립적으로 R4, 카보닐, 에테닐, 에티닐, 또는 N, O, S, SO2 혹은 SO로부터 선택된 모이어티로 선택적으로 치환되되, 단, 2개의 O 원자, 2개의 S 원자, 또는 O 및 S 원자는 서로 직접 인접하지 않으며,
R4는
(i) 헤테로아릴,
(ii) 아릴,
(iii) 포화 혹은 불포화 C3-C10 사이클로알킬, 또는
(iv) 포화 혹은 불포화 C2-C10 헤테로사이클로알킬이되,
이때,
각각의 아릴, 헤테로아릴, 포화 혹은 불포화 사이클로알킬, 또는 포화 혹은 불포화 헤테로사이클로알킬은, 독립적으로 하이드록시, 할로, 아미노, 사이아노, 카복시, 카복스아마이도, 나이트로, 옥소, -S-(C1-C6) 알킬, -SO2(C1-C6) 알킬, -SO2-아릴, -SO-(C1-C6)알킬, -SO-아릴, -SO2NH2, -SO2NH-(C1-C6)알킬, -SO2NH-아릴, (C1-C6)알콕시, 또는 모노- 혹은 다이-(C1-C10)알킬아미노인 적어도 하나의 기로, 독립적으로, 선택적으로 치환되며; R4는 C6-C10 아릴기, C5-C8 포화 사이클릭기 또는 C4-C10 헤테로사이클로알킬기에 선택적으로 융합되고;
R1은 C1-C10 알킬, C1-C10 할로알킬, C2-C10 알케닐, C2-C10 알키닐, 하이드록시, 카복시, 카복스아마이도, 옥소, 할로, 아미노, 사이아노, 나이트로, -SH, -S-(C1-C6)알킬, -SO2-(C1-C6)알킬, -SO2NH2, -SO2NH(C1-C6)알킬, -SO2NH-아릴, -SO2-아릴, -SO-(C1C6)알킬, -SO2-아릴, C1-C6 알콕시, C2-C10 알케닐옥시, C2-C10 알키닐옥시, 모노- 혹은 다이-(C1-C10)알킬아미노, -C1-C10 알킬-Z, -OC1-C10 알킬-Z, 또는 R5로 임의의 이용가능한 위치에 선택적으로 치환되며, 이때,
Z는 ORo 또는 -N(R6)2이고, 여기서,
각각의 R6은 독립적으로 -H 또는 C1-C6 알킬이거나, 또는 N(R6)2는 피롤리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 아제파닐, 1,3- 혹은 1,4-다이아제파닐, 또는 몰폴리닐을 나타내되, 이들 각각은 하이드록시, 아미노, 아미노알킬, C1-C6 알킬, 모노- 혹은 다이(C1-C6)알킬아미노, C1-C6 알콕시 또는 할로겐으로 선택적으로 치환되며,
Ro는 -H, -C1-C10 알킬, -C2-C10 알케닐, -C2-C10 알키닐, 아릴, 헤테로아릴 또는 -C1-C6 아실이고;
R5는
(1) 헤테로아릴,
(2) 아릴,
(3) 포화 혹은 불포화 C5-C10 사이클로알킬, 또는
(4) 포화 혹은 불포화 C5-C10 헤테로사이클로알킬이며,
R5기는, 독립적으로 하이드록시, 옥소, 할로, 아미노, 사이아노, 나이트로, -SH, -S-(C1-C6)알킬, -SO2-(C1-C6)알킬, -SO2-아릴, -SO-(C1-C6) 알킬, -SO-아릴, -SO2NH2, -SO2NH-(C1-C6) 알킬, -SO2NH-아릴, (C1-C6)알콕시, 또는 모노- 혹은 다이-(C1-C10)알킬아미노인 적어도 하나의 기로 선택적으로 치환되고;
R2는 H, Cl, 할로겐, CF3, CHF2, CH3, C1-C10 알킬 또는 할로(C1-C6)알킬이며;
X는 N 또는 CR3이되, 여기서
R3은 H, 할로겐 또는 CH3이다.
상기 구조를 지니는 Hsp90 저해제는 미국 특허 제7,928,135호에 기재되어 있으며, 이 미국 특허의 전체 내용은 참조로 본 명세서에 병합된다.
본 발명은, 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료함에 있어서, Hsp90 저해제(해당 저해제는 Hsp90i-1 이외의 것임)와 병용하기 위한 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드를 제공한다.
본 발명은, 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료함에 있어서, Ka가 50 n㏖/ℓ 미만인 Hsp90α 및 Hsp90β에 결합하는 Hsp90 저해제 또는 그의 전구체와 병용하여 사용하기 위한 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드를 제공한다.
본 발명은 i) 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드 및 ii) 하기 구조를 지니는 Hsp90 저해제 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 그의 전구체를, 서로 병용할 경우 각각 포유류 대상체를 치료하는데 유효한 양으로 포함하는, 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하기 위한 조성물을 제공한다:
상기 구조 중,
R1은 H, C1-C14 알킬, C1-C10 할로알킬, C3-C7 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, C1-C6 아실, 아릴 또는 헤테로아릴이되, 이때, 각각의 알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴 및 헤테로아릴기는, 독립적으로 C1-C6 알킬, C1-C6 알콕시, 할로겐, 하이드록시, 아미노, 모노- 혹은 다이-(C1-C6)알킬아미노, 나이트로, 할로(C1-C6)알킬, 할로(C1-C6)알콕시 또는 카복스아마이드인 1 내지 4개의 기로 선택적으로 치환되고,
R1이 C1-C14 알킬기인 경우, 상기 알킬기 중의 탄소 원자들 중 5개까지는, 독립적으로 R4, 카보닐, 에테닐, 에티닐, 또는 N, O, S, SO2 혹은 SO로부터 선택된 모이어티로 선택적으로 치환되되, 단, 2개의 O 원자, 2개의 S 원자, 또는 O 및 S 원자는 서로 직접 인접하지 않으며,
R4는
(i) 헤테로아릴,
(ii) 아릴,
(iii) 포화 혹은 불포화 C3-C10 사이클로알킬, 또는
(iv) 포화 혹은 불포화 C2-C10 헤테로사이클로알킬이되,
이때,
각각의 아릴, 헤테로아릴, 포화 혹은 불포화 사이클로알킬, 또는 포화 혹은 불포화 헤테로사이클로알킬은, 독립적으로 하이드록시, 할로, 아미노, 사이아노, 카복시, 카복스아마이도, 나이트로, 옥소, -S-(C1-C6) 알킬, -SO2(C1-C6) 알킬, -SO2-아릴, -SO-(C1-C6)알킬, -SO-아릴, -SO2NH2, -SO2NH-(C1-C6)알킬, -SO2NH-아릴, (C1-C6)알콕시, 또는 모노- 혹은 다이-(C1-C10)알킬아미노인 적어도 하나의 기로, 독립적으로, 선택적으로 치환되며; R4는 C6-C10 아릴기, C5-C8 포화 사이클릭기 또는 C4-C10 헤테로사이클로알킬기에 선택적으로 융합되고;
R1은 C1-C10 알킬, C1-C10 할로알킬, C2-C10 알케닐, C2-C10 알키닐, 하이드록시, 카복시, 카복스아마이도, 옥소, 할로, 아미노, 사이아노, 나이트로, -SH, -S-(C1-C6)알킬, -SO2-(C1-C6)알킬, -SO2NH2, -SO2NH(C1-C6)알킬, -SO2NH-아릴, -SO2-아릴, -SO-(C1C6)알킬, -SO2-아릴, C1-C6 알콕시, C2-C10 알케닐옥시, C2-C10 알키닐옥시, 모노- 혹은 다이-(C1-C10)알킬아미노, -C1-C10 알킬-Z, -OC1-C10 알킬-Z, 또는 R5로 임의의 이용가능한 위치에 선택적으로 치환되며, 이때,
Z는 ORo 또는 -N(R6)2이고, 여기서
각각의 R6은 독립적으로 -H 또는 C1-C6 알킬이거나, 또는 N(R6)2는 피롤리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 아제파닐, 1,3- 혹은 1,4-다이아제파닐, 또는 몰폴리닐을 나타내되, 이들 각각은 하이드록시, 아미노, 아미노알킬, C1-C6 알킬, 모노- 혹은 다이(C1-C6)알킬아미노, C1-C6 알콕시 또는 할로겐으로 선택적으로 치환되며,
Ro는 -H, -C1-C10 알킬, -C2-C10 알케닐, -C2-C10 알키닐, 아릴, 헤테로아릴 또는 -C1-C6 아실이고;
R5는
(1) 헤테로아릴,
(2) 아릴,
(3) 포화 혹은 불포화 C5-C10 사이클로알킬, 또는
(4) 포화 혹은 불포화 C5-C10 헤테로사이클로알킬이며,
R5기는, 독립적으로 하이드록시, 옥소, 할로, 아미노, 사이아노, 나이트로, -SH, -S-(C1-C6)알킬, -SO2-(C1-C6)알킬, -SO2-아릴, -SO-(C1-C6) 알킬, -SO-아릴, -SO2NH2, -SO2NH-(C1-C6) 알킬, -SO2NH-아릴, (C1-C6)알콕시, 또는 모노- 혹은 다이-(C1-C10)알킬아미노인 적어도 하나의 기로 선택적으로 치환되고;
R2는 H, Cl, 할로겐, CF3, CHF2, CH3, C1-C10 알킬 또는 할로(C1-C6)알킬이며;
X는 N 또는 CR3이되, 여기서,
R3은 H, 할로겐 또는 CH3이다.
본 발명은 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하기 위한 조성물을 제공하되, 해당 조성물은 i) 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드 및 ii) Hsp90 저해제(해당 저해제는 Hsp90i-1 이외의 것임)를, 서로 병용할 경우 각각 상기 포유류 대상체를 치료하는데 유효한 양으로 포함한다.
본 발명은 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하기 위한 조성물을 제공하되, 해당 조성물은 i) 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드 및 ii) Ka가 50 n㏖/ℓ 미만인 Hsp90α 및 Hsp90β에 결합하는 Hsp90 저해제 또는 그의 전구체를, 서로 병용할 경우 각각 상기 포유류 대상체를 치료하는데 유효한 양으로 포함한다.
도 1. Hsp90i-1 및 Hsp90i-2는 시험관내에서 전립선암(PCa) 세포에 HSP와 클러스테린(CLU) 발현을 유도한다. PC-3 및 LNCaP 세포를 표시된 시점 동안 1μM Hsp90i-2(a) 또는 1μM Hsp90i-1(c)로 처리하였다. 동시에, PC-3 및 LNCaP 세포를 표시된 용량으로 Hsp90i-2로 48시간 동안 처리하였다(b). 단백질 추출물을 CLU, Hsp70, Akt 및 빈쿨린(vinculin)에 대해서 분석하였다. 종양 세포를 1μM Hsp90i-2 또는 1μM Hsp90i-1로 24시간 동안 처리하였다(d). mRNA 추출물을 CLU, Hsp90 및 Hsp70에 대해서 실시간 PCR에 의해 분석하였다. ***, p<0.001.
도 2. Hsp90i-2는 PCa 이종이식물에서 HSP 및 CLU 발현을 유도한다. 마우스를 50㎎/㎏ Hsp90i-2-PRO(Hsp90i-2의 전구체) 또는 비히클(대조군)로 6주 동안 처리하였다. a 종양을 수집하고, CLU 및 Hsp70을 면역화학적 분석에 의해 평가하였다. b 총 단백질을 이종이식물 종양으로부터 추출하고, CLU 발현을 웨스턴 블로팅에 의해 분석하였다. 상대 수준을 GAPDH로 정규화하고, 덴시오메트릭 단위(densitometric unit)로 추산하였다. ***, p<0.001.
도 3. Hsp90 저해제 처치 후의 CLU 유도는 HSF-1 활성의 증가를 통해서 세포보호성이다. a LNCaP 세포를 Hsp90i-1 또는 Hsp90i-2의 표시된 농도로 48시간 동안 처리하였다. b LNCaP 세포에 CLU-플라스미드의 표시된 농도로 48시간 동안 과도적으로 형질 주입시켰다. 형질 주입된 플라스미드 DNA의 총량은 빈 벡터의 첨가에 의해 웰당 2㎍으로 정규화시켰다. c(상부) LNCaP 세포를 20nM CLU siRNA 또는 대조군 siScr으로 형질 주입하고 나서, Hsp90i-1 또는 Hsp90i-2 처치(1μM)를 48시간 동안 수행하였다. c(하부) LNCaP 세포를 300nM 커스터센 또는 대조군 ScrB ASO로 2회 처리하였다. d LNCaP 및 PC-3 세포를 300nM 커스터센 또는 대조군 ScrB ASO에 이어서 Hsp90i-1 또는 Hsp90i-2 1μM로 48시간 동안 2회 처리하였다. 세포를 수확하고, HSE-루시페라제 활성 또는 웨스턴 블로팅 분석을 수행하였다. 적어도 3회의 독립적인 실험의 평균을 세 벌로 행하였다. ***, p<0.001; *, p<0.05; ns, 유의하지 않음.
도 4. PCa 세포에서 CLU 넉다운 및 Hsp90 저해제 병용 처치의 증가된 역가(potency). a LNCaP 세포를 300nM 커스터센 또는 대조군 ScrB ASO에 이어서 Hsp90i-1 또는 Hsp90i-2의 표시된 농도로 48시간 동안 2회 처리하였다. 세포 성장을 크리스탈 바이올렛(crystal violet)에 의해 결정하고 대조군과 비교하였다. b CalcuSyn 소프트웨어에 의해 계산된 병용 지수(combination index: CI)값 및 용량 의존적 효과를 커스터센 단독, Hsp90i-2 단독 또는 병용 처치(혹은 병용 치료)(combined treatment)로 두 약물 간의 일정 비율 설계로 표시된 농도에서 48시간 동안 처리된 LNCap 세포에서 평가하였다. ED50 및 ED75에 대한 CI는 각각 0.4 및 0.75였으며, 이는 이 병용 처치의 병용 효과를 나타낸다. c 및 d LNCaP 세포는 300nM 커스터센 또는 대조군 ScrB에 이어서 1μM Hsp90i-1 또는 Hsp90i-2로 48시간 동안 2회 처리하였다. 세포를 수확하고, 웨스턴 블로팅 분석을 수행하였다(c). 서브G1, G0-G1, S, G2-M 내의 세포의 비율을 요오드화프로피듐 염색에 의해 결정하고, 카스파제-3 활성을 세포 용해물에 대해 결정하였으며, 그 결과는 임의 단위로 표현하고, 단백질 함량에 대해서 교정하였다(d). 모든 실험은 적어도 3회 반복하였다. $$$, p<0.001; ***, p<0.001; **, p<0.01 *, p<0.05.
도 5. PC-3 이종이식물 모델에서 커스터센 + Hsp90i-1 병용의 증가된 역가. 마우스를 실시예 6에 기재된 바와 같이 종양이 300㎣에 도달한 경우에 시작하여 25㎎/㎏ Hsp90i-1 및 15㎎/㎏ 커스터센으로 복강내 처치하였다. a 마우스의 평균 종양 체적에 대해서 커스터센 + Hsp90i-1을 대조군 ScrB ASO + Hsp90i-1 ± SEM(n=7)과 비교하였다. **, p<0.01. b 카플란-마이어(Kaplan-Meier) 곡선에서, 암-특이적 생존율을 72일 기간에 걸쳐서 커스터센 + Hsp90i-1 및 대조군 ScrB ASO + Hsp90i-1로 처리된 마우들 간에 비교하였다. *, p<0.05. c 종양을 72일 후에 수집하고, CLU, Ki67 및 TUNEL을 면역화학적 분석에 의해 평가하였다(원래 배율: 200배).
도 6. LNCaP 이종이식물 모델에서의 커스터센 + Hsp90i-2-PRO 병용의 증가된 역가. 마우스를 혈청 PSA값이 거세전 수준에 대해 재발되었을 때에 시작하여 25㎎/㎏ Hsp90i-2-PRO 및 15㎎/㎏ 커스터센으로 처리하였다. 평균 종양 체적(a) 및 혈청 PSA 수준(b)을 4군 ± SEM (n=10) 간에 비교하였다. ***, p<0.001. c PSA 배가 시간(doubling time) 및 속도를 실시예 6에 기재된 바와 같이 계산하였다. *, p<0.05. d 카플란-마이어 곡선에서, 암-특이적 생존율을 62일 기간에 걸쳐서 4군 간에 비교하였다. ***, p<0.001. 무진행 생존율은 첫번째 종양 체적 배가 시간으로서 규정하였다.
도 7. CRPC LNCaP 종양에서의 커스터센 + Hsp90i-2-PRO 병용 처치 아폽토시스 수준의 증가된 역가. a 종양을 57일 후에 수집하고, CLU, Ki67, AR, AKT 및 TUNEL을 면역화학적 분석(원래 배율: 200배)에 의해 평가하였다. b 총 단백질을 이종이식물 종양으로부터 추출하고, CLU, AR, Akt 및 PSA를 웨스턴 블로팅에 의해 분석하였다. 상대 수준을 빈쿨린으로 정규화하고, 덴시오메트릭 단위 ± SEM로 추산하였다.
도 8. 클러스테린은 HSF-1의 조절을 통해서 Hsp90 저해제에 대해서 종양 세포를 보호한다. a PC-3 세포를 wt-PC-3에 비해서 CLU를 과발현하도록 형질 주입하고, Hsp90i-2의 표시된 농도로 48시간 동안 처리하였다. 세포 성장을 크리스탈 바이올렛에 의해 결정하고 대조군과 비교하였다. **, p≤0.01. b 종양 세포를 20nM HSF-1 siRNA 대 대조군 Scr siRNA로 처리하고, μM Hsp90i-2로 48시간 동안 처리하였다. 총 단백질을 추출하고, 웨스턴 블로팅 및 카스파제 3/7 활성을 수행하였다. c PC-3 세포를 20nM CLU siRNA 대 대조군 Scr siRNA로 처리하고, 1μM Hsp90i-1로 24시간 동안 처리하였다. HSF-1 국재성(localization)을 면역형광 염색에 의해 평가하였다.
도 9. LNCaP 및 PC-3 세포를 300nM 커스터센 또는 대조군 ScrB ASO에 이어서 Hsp90i-1 또는 Hsp90i-2 1μM로 48시간 동안 2회 처리하였다. 세포를 수확하고, HSE-루시페라제 활성 또는 웨스턴 블로팅 분석을 수행하였다.
도 2. Hsp90i-2는 PCa 이종이식물에서 HSP 및 CLU 발현을 유도한다. 마우스를 50㎎/㎏ Hsp90i-2-PRO(Hsp90i-2의 전구체) 또는 비히클(대조군)로 6주 동안 처리하였다. a 종양을 수집하고, CLU 및 Hsp70을 면역화학적 분석에 의해 평가하였다. b 총 단백질을 이종이식물 종양으로부터 추출하고, CLU 발현을 웨스턴 블로팅에 의해 분석하였다. 상대 수준을 GAPDH로 정규화하고, 덴시오메트릭 단위(densitometric unit)로 추산하였다. ***, p<0.001.
도 3. Hsp90 저해제 처치 후의 CLU 유도는 HSF-1 활성의 증가를 통해서 세포보호성이다. a LNCaP 세포를 Hsp90i-1 또는 Hsp90i-2의 표시된 농도로 48시간 동안 처리하였다. b LNCaP 세포에 CLU-플라스미드의 표시된 농도로 48시간 동안 과도적으로 형질 주입시켰다. 형질 주입된 플라스미드 DNA의 총량은 빈 벡터의 첨가에 의해 웰당 2㎍으로 정규화시켰다. c(상부) LNCaP 세포를 20nM CLU siRNA 또는 대조군 siScr으로 형질 주입하고 나서, Hsp90i-1 또는 Hsp90i-2 처치(1μM)를 48시간 동안 수행하였다. c(하부) LNCaP 세포를 300nM 커스터센 또는 대조군 ScrB ASO로 2회 처리하였다. d LNCaP 및 PC-3 세포를 300nM 커스터센 또는 대조군 ScrB ASO에 이어서 Hsp90i-1 또는 Hsp90i-2 1μM로 48시간 동안 2회 처리하였다. 세포를 수확하고, HSE-루시페라제 활성 또는 웨스턴 블로팅 분석을 수행하였다. 적어도 3회의 독립적인 실험의 평균을 세 벌로 행하였다. ***, p<0.001; *, p<0.05; ns, 유의하지 않음.
도 4. PCa 세포에서 CLU 넉다운 및 Hsp90 저해제 병용 처치의 증가된 역가(potency). a LNCaP 세포를 300nM 커스터센 또는 대조군 ScrB ASO에 이어서 Hsp90i-1 또는 Hsp90i-2의 표시된 농도로 48시간 동안 2회 처리하였다. 세포 성장을 크리스탈 바이올렛(crystal violet)에 의해 결정하고 대조군과 비교하였다. b CalcuSyn 소프트웨어에 의해 계산된 병용 지수(combination index: CI)값 및 용량 의존적 효과를 커스터센 단독, Hsp90i-2 단독 또는 병용 처치(혹은 병용 치료)(combined treatment)로 두 약물 간의 일정 비율 설계로 표시된 농도에서 48시간 동안 처리된 LNCap 세포에서 평가하였다. ED50 및 ED75에 대한 CI는 각각 0.4 및 0.75였으며, 이는 이 병용 처치의 병용 효과를 나타낸다. c 및 d LNCaP 세포는 300nM 커스터센 또는 대조군 ScrB에 이어서 1μM Hsp90i-1 또는 Hsp90i-2로 48시간 동안 2회 처리하였다. 세포를 수확하고, 웨스턴 블로팅 분석을 수행하였다(c). 서브G1, G0-G1, S, G2-M 내의 세포의 비율을 요오드화프로피듐 염색에 의해 결정하고, 카스파제-3 활성을 세포 용해물에 대해 결정하였으며, 그 결과는 임의 단위로 표현하고, 단백질 함량에 대해서 교정하였다(d). 모든 실험은 적어도 3회 반복하였다. $$$, p<0.001; ***, p<0.001; **, p<0.01 *, p<0.05.
도 5. PC-3 이종이식물 모델에서 커스터센 + Hsp90i-1 병용의 증가된 역가. 마우스를 실시예 6에 기재된 바와 같이 종양이 300㎣에 도달한 경우에 시작하여 25㎎/㎏ Hsp90i-1 및 15㎎/㎏ 커스터센으로 복강내 처치하였다. a 마우스의 평균 종양 체적에 대해서 커스터센 + Hsp90i-1을 대조군 ScrB ASO + Hsp90i-1 ± SEM(n=7)과 비교하였다. **, p<0.01. b 카플란-마이어(Kaplan-Meier) 곡선에서, 암-특이적 생존율을 72일 기간에 걸쳐서 커스터센 + Hsp90i-1 및 대조군 ScrB ASO + Hsp90i-1로 처리된 마우들 간에 비교하였다. *, p<0.05. c 종양을 72일 후에 수집하고, CLU, Ki67 및 TUNEL을 면역화학적 분석에 의해 평가하였다(원래 배율: 200배).
도 6. LNCaP 이종이식물 모델에서의 커스터센 + Hsp90i-2-PRO 병용의 증가된 역가. 마우스를 혈청 PSA값이 거세전 수준에 대해 재발되었을 때에 시작하여 25㎎/㎏ Hsp90i-2-PRO 및 15㎎/㎏ 커스터센으로 처리하였다. 평균 종양 체적(a) 및 혈청 PSA 수준(b)을 4군 ± SEM (n=10) 간에 비교하였다. ***, p<0.001. c PSA 배가 시간(doubling time) 및 속도를 실시예 6에 기재된 바와 같이 계산하였다. *, p<0.05. d 카플란-마이어 곡선에서, 암-특이적 생존율을 62일 기간에 걸쳐서 4군 간에 비교하였다. ***, p<0.001. 무진행 생존율은 첫번째 종양 체적 배가 시간으로서 규정하였다.
도 7. CRPC LNCaP 종양에서의 커스터센 + Hsp90i-2-PRO 병용 처치 아폽토시스 수준의 증가된 역가. a 종양을 57일 후에 수집하고, CLU, Ki67, AR, AKT 및 TUNEL을 면역화학적 분석(원래 배율: 200배)에 의해 평가하였다. b 총 단백질을 이종이식물 종양으로부터 추출하고, CLU, AR, Akt 및 PSA를 웨스턴 블로팅에 의해 분석하였다. 상대 수준을 빈쿨린으로 정규화하고, 덴시오메트릭 단위 ± SEM로 추산하였다.
도 8. 클러스테린은 HSF-1의 조절을 통해서 Hsp90 저해제에 대해서 종양 세포를 보호한다. a PC-3 세포를 wt-PC-3에 비해서 CLU를 과발현하도록 형질 주입하고, Hsp90i-2의 표시된 농도로 48시간 동안 처리하였다. 세포 성장을 크리스탈 바이올렛에 의해 결정하고 대조군과 비교하였다. **, p≤0.01. b 종양 세포를 20nM HSF-1 siRNA 대 대조군 Scr siRNA로 처리하고, μM Hsp90i-2로 48시간 동안 처리하였다. 총 단백질을 추출하고, 웨스턴 블로팅 및 카스파제 3/7 활성을 수행하였다. c PC-3 세포를 20nM CLU siRNA 대 대조군 Scr siRNA로 처리하고, 1μM Hsp90i-1로 24시간 동안 처리하였다. HSF-1 국재성(localization)을 면역형광 염색에 의해 평가하였다.
도 9. LNCaP 및 PC-3 세포를 300nM 커스터센 또는 대조군 ScrB ASO에 이어서 Hsp90i-1 또는 Hsp90i-2 1μM로 48시간 동안 2회 처리하였다. 세포를 수확하고, HSE-루시페라제 활성 또는 웨스턴 블로팅 분석을 수행하였다.
본 발명은 i) 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드 및 ii) 하기 구조를 지니는 열 충격 단백질 90(Hsp90) 저해제 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 그의 전구체를, 서로 병용할 경우 각각 포유류 대상체를 치료하는데 유효한 양으로 상기 포유류 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하는 방법을 제공한다:
상기 구조 중,
R1은 H, C1-C14 알킬, C1-C10 할로알킬, C3-C7 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, C1-C6 아실, 아릴 또는 헤테로아릴이되, 이때, 각각의 알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴 및 헤테로아릴기는, 독립적으로 C1-C6 알킬, C1-C6 알콕시, 할로겐, 하이드록시, 아미노, 모노- 혹은 다이-(C1-C6)알킬아미노, 나이트로, 할로(C1-C6)알킬, 할로(C1-C6)알콕시 또는 카복스아마이드인 1 내지 4개의 기로 선택적으로 치환되고,
R1이 C1-C14 알킬기인 경우, 상기 알킬기 중의 탄소 원자들 중 5개까지는, 독립적으로 R4, 카보닐, 에테닐, 에티닐, 또는 N, O, S, SO2 혹은 SO로부터 선택된 모이어티로 선택적으로 치환되되, 단, 2개의 O 원자, 2개의 S 원자, 또는 O 및 S 원자는 서로 직접 인접하지 않으며,
R4는
(i) 헤테로아릴,
(ii) 아릴,
(iii) 포화 혹은 불포화 C3-C10 사이클로알킬, 또는
(iv) 포화 혹은 불포화 C2-C10 헤테로사이클로알킬이되,
이때,
각각의 아릴, 헤테로아릴, 포화 혹은 불포화 사이클로알킬, 또는 포화 혹은 불포화 헤테로사이클로알킬은, 독립적으로 하이드록시, 할로, 아미노, 사이아노, 카복시, 카복스아마이도, 나이트로, 옥소, -S-(C1-C6) 알킬, -SO2(C1-C6) 알킬, -SO2-아릴, -SO-(C1-C6)알킬, -SO-아릴, -SO2NH2, -SO2NH-(C1-C6)알킬, -SO2NH-아릴, (C1-C6)알콕시, 또는 모노- 혹은 다이-(C1-C10)알킬아미노인 적어도 하나의 기로, 독립적으로, 선택적으로 치환되며; R4는 C6-C10 아릴기, C5-C8 포화 사이클릭기 또는 C4-C10 헤테로사이클로알킬기에 선택적으로 융합되고;
R1은 C1-C10 알킬, C1-C10 할로알킬, C2-C10 알케닐, C2-C10 알키닐, 하이드록시, 카복시, 카복스아마이도, 옥소, 할로, 아미노, 사이아노, 나이트로, -SH, -S-(C1-C6)알킬, -SO2-(C1-C6)알킬, -SO2NH2, -SO2NH(C1-C6)알킬, -SO2NH-아릴, -SO2-아릴, -SO-(C1C6)알킬, -SO2-아릴, C1-C6 알콕시, C2-C10 알케닐옥시, C2-C10 알키닐옥시, 모노- 혹은 다이-(C1-C10)알킬아미노, -C1-C10 알킬-Z, -OC1-C10 알킬-Z, 또는 R5로 임의의 이용가능한 위치에 선택적으로 치환되며, 이때,
Z는 ORo 또는 -N(R6)2이고, 여기서,
각각의 R6은 독립적으로 -H 또는 C1-C6 알킬이거나, 또는 N(R6)2는 피롤리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 아제파닐, 1,3- 혹은 1,4-다이아제파닐, 또는 몰폴리닐을 나타내되, 이들 각각은 하이드록시, 아미노, 아미노알킬, C1-C6 알킬, 모노- 혹은 다이(C1-C6)알킬아미노, C1-C6 알콕시 또는 할로겐으로 선택적으로 치환되며,
Ro는 -H, -C1-C10 알킬, -C2-C10 알케닐, -C2-C10 알키닐, 아릴, 헤테로아릴 또는 -C1-C6 아실이고;
R5는
(1) 헤테로아릴,
(2) 아릴,
(3) 포화 혹은 불포화 C5-C10 사이클로알킬, 또는
(4) 포화 혹은 불포화 C5-C10 헤테로사이클로알킬이며,
R5기는, 독립적으로 하이드록시, 옥소, 할로, 아미노, 사이아노, 나이트로, -SH, -S-(C1-C6)알킬, -SO2-(C1-C6)알킬, -SO2-아릴, -SO-(C1-C6) 알킬, -SO-아릴, -SO2NH2, -SO2NH-(C1-C6) 알킬, -SO2NH-아릴, (C1-C6)알콕시, 또는 모노- 혹은 다이-(C1-C10)알킬아미노인 적어도 하나의 기로 선택적으로 치환되고;
R2는 H, Cl, 할로겐, CF3, CHF2, CH3, C1-C10 알킬 또는 할로(C1-C6)알킬이며;
X는 N 또는 CR3이되, 여기서,
R3은 H, 할로겐 또는 CH3이다.
본 발명은, 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하는 방법을 제공하되, 해당 방법은 i) 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드 및 ii) Hsp90 저해제(해당 저해제는 Hsp90i-1 이외의 것임)를, 서로 병용할 경우 각각 상기 포유류 대상체를 치료하는데 유효한 양으로 상기 포유류 대상체에 투여하는 단계를 포함한다.
본 발명은, 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하는 방법을 제공하되, 해당 방법은 i) 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드 및 ii) Ka가 50 n㏖/ℓ 미만인 Hsp90α 및 Hsp90β에 결합하는 Hsp90 저해제 또는 그의 전구체를, 서로 병용할 경우 각각 상기 포유류 대상체를 치료하는데 유효한 양으로 상기 포유류 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
몇몇 실시형태에 있어서, Hsp90 저해제는 Ka가 약 70, 60, 50, 40, 35, 30, 25, 20, 15, 10 또는 5 n㏖/ℓ 미만인 Hsp90α 및/또는 Hsp90β에 결합한다.
몇몇 실시형태에 있어서, 암은 안드로겐-비의존형 전립선암이다.
몇몇 실시형태에 있어서, 올리고뉴클레오타이드의 양과 Hsp90 저해제의 양은, 함께 취할 경우, 각 제제가 단독으로 투여될 경우보다 상기 대상체를 치료하는데 더 유효하다.
몇몇 실시형태에 있어서, Hsp90 저해제의 양과 병용하는 올리고뉴클레오타이드의 양은 단독으로 투여된 경우 임상적으로 유효한 것보다 적다.
몇몇 실시형태에 있어서, 올리고뉴클레오타이드의 양과 병용하는 Hsp90 저해제의 양은 단독으로 투여된 경우 임상적으로 유효한 것보다 적다.
몇몇 실시형태에 있어서, 올리고뉴클레오타이드의 양과 Hsp90 저해제의 양은, 함께 취해질 경우, 상기 대상체에서 전립선암의 임상적 증상을 저감시키는데 유효하다.
몇몇 실시형태에 있어서, 포유류 대상체는 인간이다.
몇몇 실시형태에 있어서, 올리고뉴클레오타이드는 안티센스 올리고뉴클레오타이드이다.
몇몇 실시형태에 있어서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 클러스테린-암호화 mRNA의 번역 개시 부위(translation initiation site) 혹은 종결 부위에 걸쳐 있다.
몇몇 실시형태에 있어서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 서열번호 1 내지 11에 기재된 서열 내의 뉴클레오타이드를 포함한다.
몇몇 실시형태에 있어서, the 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 서열번호 3에 기재된 서열 내의 뉴클레오타이드를 포함한다.
몇몇 실시형태에 있어서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 상기 동일 서열의 비변성 올리고뉴클레오타이드에 대하여 생체내 안정성을 증대시키기 위하여 변성되어 있다.
몇몇 실시형태에 있어서, 올리고뉴클레오타이드는 커스터센이다.
몇몇 실시형태에 있어서, 커스터센의 양은 640㎎ 미만이다.
몇몇 실시형태에 있어서, 커스터센의 양은 480㎎ 미만이다.
몇몇 실시형태에 있어서, 커스터센의 양은 7일 기간에 한번 정맥내로 투여된다.
몇몇 실시형태에 있어서, Hsp90 저해제의 양이 50㎎/㎏ 미만이다.
몇몇 실시형태에 있어서, Hsp90 저해제의 양은 25㎎/㎏ 이하이다.
몇몇 실시형태에 있어서, Hsp90 저해제는 Hsp90i-2이다.
몇몇 실시형태에 있어서, Hsp90 저해제의 전구체가 상기 포유류 대상체에 투여되며, 상기 전구체는 Hsp90i-2-PRO이다.
몇몇 실시형태에 있어서, Hsp90 저해제의 전구체가 상기 포유류 대상체에 투여되며, 상기 전구체는 Hsp90i-2-PRO2이다.
몇몇 실시형태에 있어서, 올리고뉴클레오타이드와 Hsp90 저해제의 병용은 전립선암 세포의 증식을 저해하는데 유효하다.
본 발명은, 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하는데 이용하기 위한, 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드, 및 하기 구조를 지니는 Hsp90 저해제 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 그의 전구체의 양을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다:
상기 구조 중,
R1은 H, C1-C14 알킬, C1-C10 할로알킬, C3-C7 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, C1-C6 아실, 아릴 또는 헤테로아릴이되, 이때, 각각의 알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴 및 헤테로아릴기는, 독립적으로 C1-C6 알킬, C1-C6 알콕시, 할로겐, 하이드록시, 아미노, 모노- 혹은 다이-(C1-C6)알킬아미노, 나이트로, 할로(C1-C6)알킬, 할로(C1-C6)알콕시 또는 카복스아마이드인 1 내지 4개의 기로 선택적으로 치환되고,
R1이 C1-C14 알킬기인 경우, 상기 알킬기 중의 탄소 원자들 중 5개까지는, 독립적으로 R4, 카보닐, 에테닐, 에티닐, 또는 N, O, S, SO2 혹은 SO로부터 선택된 모이어티로 선택적으로 치환되되, 단, 2개의 O 원자, 2개의 S 원자, 또는 O 및 S 원자는 서로 직접 인접하지 않으며,
R4는
(i) 헤테로아릴,
(ii) 아릴,
(iii) 포화 혹은 불포화 C3-C10 사이클로알킬, 또는
(iv) 포화 혹은 불포화 C2-C10 헤테로사이클로알킬이되,
이때,
각각의 아릴, 헤테로아릴, 포화 혹은 불포화 사이클로알킬, 또는 포화 혹은 불포화 헤테로사이클로알킬은, 독립적으로 하이드록시, 할로, 아미노, 사이아노, 카복시, 카복스아마이도, 나이트로, 옥소, -S-(C1-C6) 알킬, -SO2(C1-C6) 알킬, -SO2-아릴, -SO-(C1-C6)알킬, -SO-아릴, -SO2NH2, -SO2NH-(C1-C6)알킬, -SO2NH-아릴, (C1-C6)알콕시, 또는 모노- 혹은 다이-(C1-C10)알킬아미노인 적어도 하나의 기로, 독립적으로, 선택적으로 치환되며; R4는 C6-C10 아릴기, C5-C8 포화 사이클릭기 또는 C4-C10 헤테로사이클로알킬기에 선택적으로 융합되고;
R1은 C1-C10 알킬, C1-C10 할로알킬, C2-C10 알케닐, C2-C10 알키닐, 하이드록시, 카복시, 카복스아마이도, 옥소, 할로, 아미노, 사이아노, 나이트로, -SH, -S-(C1-C6)알킬, -SO2-(C1-C6)알킬, -SO2NH2, -SO2NH(C1-C6)알킬, -SO2NH-아릴, -SO2-아릴, -SO-(C1C6)알킬, -SO2-아릴, C1-C6 알콕시, C2-C10 알케닐옥시, C2-C10 알키닐옥시, 모노- 혹은 다이-(C1-C10)알킬아미노, -C1-C10 알킬-Z, -OC1-C10 알킬-Z, 또는 R5로 임의의 이용가능한 위치에 선택적으로 치환되며, 이때,
Z는 ORo 또는 -N(R6)2이고, 여기서,
각각의 R6은 독립적으로 -H 또는 C1-C6 알킬이거나, 또는 N(R6)2는 피롤리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 아제파닐, 1,3- 혹은 1,4-다이아제파닐, 또는 몰폴리닐을 나타내되, 이들 각각은 하이드록시, 아미노, 아미노알킬, C1-C6 알킬, 모노- 혹은 다이(C1-C6)알킬아미노, C1-C6 알콕시 또는 할로겐으로 선택적으로 치환되며,
Ro는 -H, -C1-C10 알킬, -C2-C10 알케닐, -C2-C10 알키닐, 아릴, 헤테로아릴 또는 -C1-C6 아실이고;
R5는
(1) 헤테로아릴,
(2) 아릴,
(3) 포화 혹은 불포화 C5-C10 사이클로알킬, 또는
(4) 포화 혹은 불포화 C5-C10 헤테로사이클로알킬이며,
R5기는, 독립적으로 하이드록시, 옥소, 할로, 아미노, 사이아노, 나이트로, -SH, -S-(C1-C6)알킬, -SO2-(C1-C6)알킬, -SO2-아릴, -SO-(C1-C6) 알킬, -SO-아릴, -SO2NH2, -SO2NH-(C1-C6) 알킬, -SO2NH-아릴, (C1-C6)알콕시, 또는 모노- 혹은 다이-(C1-C10)알킬아미노인 적어도 하나의 기로 선택적으로 치환되고;
R2는 H, Cl, 할로겐, CF3, CHF2, CH3, C1-C10 알킬 또는 할로(C1-C6)알킬이며;
X는 N 또는 CR3이되, 여기서,
R3은 H, 할로겐 또는 CH3이다.
본 발명은, 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하는데 이용하기 위한, 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드, 및 Hsp90 저해제(해당 저해제는 Hsp90i-1 이외의 것임)의 양을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
본 발명은, 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하는데 이용하기 위한, 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드, 및 Ka가 50 n㏖/ℓ 미만인 Hsp90α 및 Hsp90β에 결합하는 Hsp90 저해제 또는 그의 전구체의 양을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
본 발명은, 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료함에 있어서, 하기 구조를 지니는 Hsp90 저해제 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 그의 전구체와 병용하기 위한 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드를 제공한다:
상기 구조 중,
R1은 H, C1-C14 알킬, C1-C10 할로알킬, C3-C7 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, C1-C6 아실, 아릴 또는 헤테로아릴이되, 이때, 각각의 알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴 및 헤테로아릴기는, 독립적으로 C1-C6 알킬, C1-C6 알콕시, 할로겐, 하이드록시, 아미노, 모노- 혹은 다이-(C1-C6)알킬아미노, 나이트로, 할로(C1-C6)알킬, 할로(C1-C6)알콕시 또는 카복스아마이드인 1 내지 4개의 기로 선택적으로 치환되고,
R1이 C1-C14 알킬기인 경우, 상기 알킬기 중의 탄소 원자들 중 5개까지는, 독립적으로 R4, 카보닐, 에테닐, 에티닐, 또는 N, O, S, SO2 혹은 SO로부터 선택된 모이어티로 선택적으로 치환되되, 단, 2개의 O 원자, 2개의 S 원자, 또는 O 및 S 원자는 서로 직접 인접하지 않으며,
R4는
(i) 헤테로아릴,
(ii) 아릴,
(iii) 포화 혹은 불포화 C3-C10 사이클로알킬, 또는
(iv) 포화 혹은 불포화 C2-C10 헤테로사이클로알킬,
이때,
각각의 아릴, 헤테로아릴, 포화 혹은 불포화 사이클로알킬, 또는 포화 혹은 불포화 헤테로사이클로알킬은, 독립적으로 하이드록시, 할로, 아미노, 사이아노, 카복시, 카복스아마이도, 나이트로, 옥소, -S-(C1-C6) 알킬, -SO2(C1-C6) 알킬, -SO2-아릴, -SO-(C1-C6)알킬, -SO-아릴, -SO2NH2, -SO2NH-(C1-C6)알킬, -SO2NH-아릴, (C1-C6)알콕시, 또는 모노- 혹은 다이-(C1-C10)알킬아미노인 적어도 하나의 기로, 독립적으로, 선택적으로 치환되며; R4는 C6-C10 아릴기, C5-C8 포화 사이클릭기 또는 C4-C10 헤테로사이클로알킬기에 선택적으로 융합되고;
R1은 C1-C10 알킬, C1-C10 할로알킬, C2-C10 알케닐, C2-C10 알키닐, 하이드록시, 카복시, 카복스아마이도, 옥소, 할로, 아미노, 사이아노, 나이트로, -SH, -S-(C1-C6)알킬, -SO2-(C1-C6)알킬, -SO2NH2, -SO2NH(C1-C6)알킬, -SO2NH-아릴, -SO2-아릴, -SO-(C1C6)알킬, -SO2-아릴, C1-C6 알콕시, C2-C10 알케닐옥시, C2-C10 알키닐옥시, 모노- 혹은 다이-(C1-C10)알킬아미노, -C1-C10 알킬-Z, -OC1-C10 알킬-Z, 또는 R5로 임의의 이용가능한 위치에 선택적으로 치환되며, 이때,
Z는 ORo 또는 -N(R6)2이고, 여기서,
각각의 R6은 독립적으로 -H 또는 C1-C6 알킬이거나, 또는 N(R6)2는 피롤리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 아제파닐, 1,3- 혹은 1,4-다이아제파닐, 또는 몰폴리닐을 나타내되, 이들 각각은 하이드록시, 아미노, 아미노알킬, C1-C6 알킬, 모노- 혹은 다이(C1-C6)알킬아미노, C1-C6 알콕시 또는 할로겐으로 선택적으로 치환되며,
Ro는 -H, -C1-C10 알킬, -C2-C10 알케닐, -C2-C10 알키닐, 아릴, 헤테로아릴 또는 -C1-C6 아실이고;
R5는
(1) 헤테로아릴,
(2) 아릴,
(3) 포화 혹은 불포화 C5-C10 사이클로알킬, 또는
(4) 포화 혹은 불포화 C5-C10 헤테로사이클로알킬이며,
R5기는, 독립적으로 하이드록시, 옥소, 할로, 아미노, 사이아노, 나이트로, -SH, -S-(C1-C6)알킬, -SO2-(C1-C6)알킬, -SO2-아릴, -SO-(C1-C6) 알킬, -SO-아릴, -SO2NH2, -SO2NH-(C1-C6) 알킬, -SO2NH-아릴, (C1-C6)알콕시, 또는 모노- 혹은 다이-(C1-C10)알킬아미노인 적어도 하나의 기로 선택적으로 치환되고;
R2는 H, Cl, 할로겐, CF3, CHF2, CH3, C1-C10 알킬 또는 할로(C1-C6)알킬이며;
X는 N 또는 CR3이되, 여기서,
R3은 H, 할로겐 또는 CH3이다.
본 발명은, 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료함에 있어서, Hsp90 저해제(해당 저해제는 Hsp90i-1 이외의 것임)와 병용하기 위한 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드를 제공한다.
본 발명은, 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료함에 있어서, Ka가 50 n㏖/ℓ 미만인 Hsp90α 및 Hsp90β에 결합하는 Hsp90 저해제 또는 그의 전구체와 병용하기 위한 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드를 제공한다.
본 발명은, 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하기 위한 조성물로서, 해당 조성물은 i) 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드 및 ii) 하기 구조를 지니는 Hsp90 저해제를, 서로 병용할 경우 각각 포유류 대상체를 치료하는데 유효한 양으로 포함한다:
상기 구조 중,
R1은 H, C1-C14 알킬, C1-C10 할로알킬, C3-C7 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, C1-C6 아실, 아릴 또는 헤테로아릴이되, 이때, 각각의 알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴 및 헤테로아릴기는, 독립적으로 C1-C6 알킬, C1-C6 알콕시, 할로겐, 하이드록시, 아미노, 모노- 혹은 다이-(C1-C6)알킬아미노, 나이트로, 할로(C1-C6)알킬, 할로(C1-C6)알콕시 또는 카복스아마이드인 1 내지 4개의 기로 선택적으로 치환되고,
R1이 C1-C14 알킬기인 경우, 상기 알킬기 중의 탄소 원자들 중 5개까지는, 독립적으로 R4, 카보닐, 에테닐, 에티닐, 또는 N, O, S, SO2 혹은 SO로부터 선택된 모이어티로 선택적으로 치환되되, 단, 2개의 O 원자, 2개의 S 원자, 또는 O 및 S 원자는 서로 직접 인접하지 않으며,
R4는
(i) 헤테로아릴,
(ii) 아릴,
(iii) 포화 혹은 불포화 C3-C10 사이클로알킬, 또는
(iv) 포화 혹은 불포화 C2-C10 헤테로사이클로알킬이되,
이때,
각각의 아릴, 헤테로아릴, 포화 혹은 불포화 사이클로알킬, 또는 포화 혹은 불포화 헤테로사이클로알킬은, 독립적으로 하이드록시, 할로, 아미노, 사이아노, 카복시, 카복스아마이도, 나이트로, 옥소, -S-(C1-C6) 알킬, -SO2(C1-C6) 알킬, -SO2-아릴, -SO-(C1-C6)알킬, -SO-아릴, -SO2NH2, -SO2NH-(C1-C6)알킬, -SO2NH-아릴, (C1-C6)알콕시, 또는 모노- 혹은 다이-(C1-C10)알킬아미노인 적어도 하나의 기로, 독립적으로, 선택적으로 치환되며; R4는 C6-C10 아릴기, C5-C8 포화 사이클릭기 또는 C4-C10 헤테로사이클로알킬기에 선택적으로 융합되고;
R1은 C1-C10 알킬, C1-C10 할로알킬, C2-C10 알케닐, C2-C10 알키닐, 하이드록시, 카복시, 카복스아마이도, 옥소, 할로, 아미노, 사이아노, 나이트로, -SH, -S-(C1-C6)알킬, -SO2-(C1-C6)알킬, -SO2NH2, -SO2NH(C1-C6)알킬, -SO2NH-아릴, -SO2-아릴, -SO-(C1C6)알킬, -SO2-아릴, C1-C6 알콕시, C2-C10 알케닐옥시, C2-C10 알키닐옥시, 모노- 혹은 다이-(C1-C10)알킬아미노, -C1-C10 알킬-Z, -OC1-C10 알킬-Z, 또는 R5로 임의의 이용가능한 위치에 선택적으로 치환되며, 이때,
Z는 ORo 또는 -N(R6)2이고, 여기서,
각각의 R6은 독립적으로 -H 또는 C1-C6 알킬이거나, 또는 N(R6)2는 피롤리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 아제파닐, 1,3- 혹은 1,4-다이아제파닐, 또는 몰폴리닐을 나타내되, 이들 각각은 하이드록시, 아미노, 아미노알킬, C1-C6 알킬, 모노- 혹은 다이(C1-C6)알킬아미노, C1-C6 알콕시 또는 할로겐으로 선택적으로 치환되며,
Ro는 -H, -C1-C10 알킬, -C2-C10 알케닐, -C2-C10 알키닐, 아릴, 헤테로아릴 또는 -C1-C6 아실이고;
R5는
(1) 헤테로아릴,
(2) 아릴,
(3) 포화 혹은 불포화 C5-C10 사이클로알킬, 또는
(4) 포화 혹은 불포화 C5-C10 헤테로사이클로알킬이며,
R5기는, 독립적으로 하이드록시, 옥소, 할로, 아미노, 사이아노, 나이트로, -SH, -S-(C1-C6)알킬, -SO2-(C1-C6)알킬, -SO2-아릴, -SO-(C1-C6) 알킬, -SO-아릴, -SO2NH2, -SO2NH-(C1-C6) 알킬, -SO2NH-아릴, (C1-C6)알콕시, 또는 모노- 혹은 다이-(C1-C10)알킬아미노인 적어도 하나의 기로 선택적으로 치환되고;
R2는 H, Cl, 할로겐, CF3, CHF2, CH3, C1-C10 알킬 또는 할로(C1-C6)알킬이며;
X는 N 또는 CR3이되, 여기서,
R3은 H, 할로겐 또는 CH3이다.
본 발명은, 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하기 위한 조성물을 제공하되, 해당 조성물은, i) 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드 및 ii) Hsp90 저해제(해당 저해제는 Hsp90i-1 이외의 것임)를, 서로 병용할 경우 각각 상기 포유류 대상체를 치료하는데 유효한 양으로 포함한다.
본 발명은, 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하기 위한 조성물을 제공하되, 해당 조성물은, i) 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드 및 ii) Ka가 50 n㏖/ℓ 미만인 Hsp90α 및 Hsp90β에 결합하는 Hsp90 저해제 또는 그의 전구체를, 서로 병용할 경우 각각 상기 포유류 대상체를 치료하는데 유효한 양으로 포함한다.
몇몇 실시형태에 있어서, 올리고뉴클레오타이드와 Hsp90 저해제의 병용은 전립선암 세포의 증식을 저해하는데 유효하다.
몇몇 실시형태에 있어서, 클러스테린 발현의 Hsp90 저해제-매개 유도는 커스터센에 의해 약화되되, 여기서 Hsp90 저해제와 커스터센의 병용은 CRPC의 진행을 지연시킨다. 몇몇 실시형태에 있어서, Hsp90 저해제와 커스터센의 병용은 포유류 대상체에서 종양 성장을 저해한다. 몇몇 실시형태에 있어서, Hsp90 저해제와 커스터센의 병용은 포유류 대상체의 생존을 연장시킨다.
본 발명의 일 양상은 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하는데 이용하기 위한 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드 및 Hsp90 저해제의 양을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 양상은 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료함에 있어서 Hsp90 저해제와 병용하기 위한 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드를 제공한다.
본 발명의 일 양상은, i) 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드 및 ii) Hsp90 저해제를, 서로 병용할 경우 각각 상기 포유류 대상체를 치료하는데 유효한 양으로 포함하는 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하기 위한 조성물을 제공한다.
본 발명의 양상들은, 올리고뉴클레오타이드 또는 Hsp90 저해제 단일요법에 비해서 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드 및 Hsp90 저해제를 포함하는 병용 처치의 증가된 역가와 연루된다. 본 발명의 몇몇 실시형태에 있어서, 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드와 HSP90 저해제의 병용은 올리고뉴클레오타이드 또는 Hsp90 저해제 단일요법에 비해서 전립선암 세포 아폽토시스를 증가시키고/시키거나 전립선암 세포 증식을 감소시킨다. 몇몇 실시형태에 있어서, 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드와 Hsp90 저해제의 병용은 올리고뉴클레오타이드 또는 Hsp90 저해제 단일요법에 비해서 단백질 발현 및/또는 HSF-1의 기능을 감소시킨다.
본 발명의 양상들은 거세-저항성 전립선암에서의 환자 성과를 향상시키기 위하여, Hsp90 저해제와 병용하여 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드를 이용하는 표적화된 전략을 제공한다.
본 발명은 i) 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드 및 ii) 열 충격 단백질 90(Hsp90) 저해제를, 서로 병용할 경우 각각 포유류 대상체를 치료하는데 유효한 양으로 포함하는, 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이다.
몇몇 실시형태에 있어서, Hsp90 저해제는 Hsp90i-1이다.
본 명세서에 개시된 각 실시형태는 다른 개시된 실시형태의 각각에 적용가능한 것으로 상정된다. 이와 같이 해서, 본 명세서에 기재된 각종 요소의 모든 조합은 본 발명의 범위 내이다.
파라미터 범위가 제공되는 경우, 그 범위 내의 모든 정수 및 그의 십분의 일도 또한 본 발명에 의해 제공된다. 예를 들어, "0.2 내지 5 ㎎/㎏/일"은 0.2 ㎎/㎏/일, 0.3 ㎎/㎏/일, 0.4 ㎎/㎏/일, 0.5 ㎎/㎏/일, 0.6 ㎎/㎏/일 등에서 5.0 ㎎/㎏/일까지 포함한다.
용어
본 명세서에서 이용되는 바와 같이, 또한 달리 기술되어 있지 않는 한, 이하의 용어의 각각은 이하에 기재된 정의를 지닐 것이다.
본 명세서에서 이용되는 바와 같이, 수치 혹은 범위의 맥락에서 "약"이란 인용된 혹은 청구된 수치 혹은 범위의 ±10%를 의미한다.
본 출원의 본 명세서 및 특허청구범위에서 이용된 바와 같이, "클러스테린"이란 용어는, 인간, 및 인간으로 지칭되는 바와 같은 것을 포함하는 포유동물에 존재하는 당단백질을 지칭한다. 다수의 클러스테린 종의 서열이 공지되어 있다. 예를 들어, 인간 클러스테린의 서열은 문헌[Wong et al., Eur. J. Biochem. 221 (3), 917-925 (1994)]에 그리고 NCBI 서열 등록 번호 NM_001831(서열번호 43)로 기재되어 있다. 이 인간 서열에 있어서, 암호화 서열은 염기 48 내지 1397에 걸쳐 있다.
본 명세서에서 이용되는 바와 같이, "클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드"란 세포에서 클러스테린 발현을 저감시키는데 유효한 서열을 지니는 올리고뉴클레오타이드이다. 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드는, 예를 들어, 안티센스 올리고뉴클레오타이드 또는 RNA 개입 유도 분자(interference inducing molecule)일 수 있다.
본 명세서에서 이용되는 바와 같이, "안티센스 올리고뉴클레오타이드"란 클러스테린 mRNA에 상보적인 서열을 지니는 동시에 클러스테린 발현을 저감시키는 비-RNAi 올리고뉴클레오타이드를 지칭한다. 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 안티센스 올리고데옥시뉴클레오타이드(oligodeoxynucleotide: ODN)일 수 있다. 본 발명에서 안티센스 분자로서 이용될 수 있는 예시적인 서열은 PCT 특허 공개 공보 제WO 00/49937호, 미국 특허 공개 제US 2002-0128220 A1호, 및 미국 특허 제6,383,808호에 개시되어 있으며, 이들 문헌은 모두 참조로 본 명세서에 병합된다. 구체적인 안티센스 서열은 서열번호 1 내지 18로서 본 출원에 기재되며, 이하의 표 1에서 발견할 수 있다.
| 안티센스 올리고뉴클레오타이드에 대한 서열 동정 번호 | |
| 서열번호 | 서열 |
| 1 | GCACAGCAGG AGAATCTTCA T |
| 2 | TGGAGTCTTT GCACGCCTCG G |
| 3 | CAGCAGCAGA GTCTTCATCA T |
| 4 | ATTGTCTGAG ACCGTCTGGT C |
| 5 | CCTTCAGCTT TGTCTCTGAT T |
| 6 | AGCAGGGAGT CGATGCGGTC A |
| 7 | ATCAAGCTGC GGACGATGCG G |
| 8 | GCAGGCAGCC CGTGGAGTTG T |
| 9 | TTCAGCTGCT CCAGCAAGGA G |
| 10 | AATTTAGGGT TCTTCCTGGA G |
| 11 | GCTGGGCGGA GTTGGGGGCC T |
| 12 | GGTGTAGACG CCGCACG |
| 13 | GCAGCGCAGC CCCTGG |
| 14 | GCAGCAGCCG CAGCCCGGCT CC |
| 15 | AGCCGCAGCC CGGCTCCT |
| 16 | CAGCAGCCGC AGCCCGGCTC |
| 17 | CAGCAGCCGC AGCCCGGCTC |
| 18 | AGCAGCCGCA GCCCGGCTCC |
이용되는 ODN은 생체내에서 ODN의 안정성을 증가시키기 위하여 변성될 수 있다. 예를 들어, ODN은 뉴클레아제 분해(nuclease digestion)에 대한 증가된 저항성을 지니는 포스포로티오에이트 유도체(비가교 포스포릴 산소 원자를 황 원자로 치환)로서 이용될 수 있다. MOE(2'-O-(2-메톡시에틸)) 변성물(ISIS 골격)이 또한 유효하다. 이러한 변성된 ODN의 구조는 미국 특허 제6,900,187 B2호(이 문헌의 내용은 참조로 본 명세서에 병합됨)에 상세히 기재되어 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, ODN은 커스터센이다.
본 명세서에서 이용되는 바와 같이, "커스터센"이란 서열 CAGCAGCAGAGTCTTCATCAT(서열번호 3)를 지니는 클러스테린 발현을 저감시키는 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 지칭하며, 여기서 항-클러스테린 올리고뉴클레오타이드는, 전체를 통해서 포스포로티오에이트 골격을 지니며, 2'-O-메톡시에틸 변성물을 보유하는 뉴클레오타이드 1-4 및 18-21의 당 부분을 지니고, 2'-데옥시뉴클레오타이드인 뉴클레오타이드 5-17을 지니며, 또한 뉴클레오타이드 1, 4 및 19에서 5-메틸사이토신을 지닌다. 커스터센은 또한 TV-1011, OGX-011, ISIS 112989 및 커스터센 나트륨으로도 알려져 있다.
본 명세서에서 이용되는 바와 같이, "RNA 개입 유도 분자"란 클러스테린 발현의 RNA 개입 혹은 "RNAi"를 유도할 수 있는 분자를 지칭한다. RNAi는 mRNA 분해와 관련되지만, 이 개입을 기저로 하는 생화학적 기전의 다수는 알려져 있지 않다. RNAi의 사용은 문헌[Fire et al., 1998, Carthew et al., 2001 및 Elbashir et al., 2001]에 기재되어 있으며, 이들 문헌의 내용은 참조로 본 명세서에 병합된다.
단리된 RNA 분자는 RNAi를 매개할 수 있다. 즉, 본 발명의 단리된 RNA 분자는, 표적 유전자라고도 지칭되는, 유전자의 전사 산물인 mRNA의 분해를 매개하거나 발현을 차단한다. 편의상, 이러한 mRNA는 본 명세서에서 분해될 mRNA라고도 지칭될 수 있다. RNA, RNA 분자(들), RNA 세그먼트(들) 및 RNA 단편(들)은 RNA 개입을 매개하는 RNA와 호환적으로 이용될 수 있다. 이들 용어는 이중 가닥 RNA, 소 간섭 RNA(small interfering RNA: siRNA), 헤파린 RNA, 단일 가닥 RNA, 단리된 RNA(부분적으로 정제된 RNA, 본질적으로 순수한 RNA, 합성 RNA, 재조합으로 생산된 RNA)뿐만 아니라, 하나 이상의 뉴클레오타이드의 부가, 결실, 치환 및/또는 변경에 의해 천연 발생 RNA와는 다른 변경된 RNA를 포함한다. 이러한 변경은 RNA의 말단(들)에 혹은 (RNA의 하나 이상의 뉴클레오타이드에서) 내부적으로 등과 같이 비-뉴클레오타이드 물질의 부가를 포함할 수 있다. 본 발명의 RNA 분자 내의 뉴클레오타이드는 또한 비천연 발생 뉴클레오타이드 혹은 데옥시리보뉴클레오타이드를 비롯한 비표준 뉴클레오타이드를 포함한다. 일괄적으로, 이러한 변경된 RNAi 분자는 모두 천연-발생 RNA의 유사체 혹은 유사체들이라 지칭된다. 본 발명의 RNA는 RNAi를 매개하는 능력을 지니는 천연 RNA와 충분히 유사할 필요가 있다.
본 명세서에서 이용되는 바와 같이, "RNAi를 매개하는"이란 mRNA 분자가 RNAi 기구(machinery) 혹은 공정으로 피해를 입게 되는 것과 구별하는 능력을 지칭하거나 이를 나타낸다. RNAi를 매개하는 RNA는 RNAi 기구가 특정 mRNA를 분해시키거나 혹은 다르게는 표적 단백질의 발현을 저감시키게 하도록 해당 RNAi 기구와 상호작용한다. 일 실시형태에 있어서, 본 발명은 서열이 대응하게 되는 특정 mRNA의 절단을 유도하는 RNA 분자를 지칭한다. 서열의 완전한 대응이 있을 수 있지만, 그 대응은 RNA가 표적 mRNA의 발현을 차단하거나 절단에 의해 RNAi 저해를 유도시키기에 충분해야 하는 것은 필요하지 않다.
위에서 주지된 바와 같이, 본 발명의 RNA 분자는 일반적으로 RNA 부분과 몇몇 추가적인 부분, 예를 들어, 데옥시리보뉴클레오타이드 부분을 포함한다. RNA 분자 내의 뉴클레오타이드의 총 수는 RNAi의 효과적인 매개체로 되도록 적절하게 보다 적다. 바람직한 RNA 분자에 있어서, 뉴클레오타이드의 개수는 16 내지 29개, 더욱 바람직하게는 18 내지 23개, 가장 바람직하게는 21 내지 23개이다. 적절한 서열은 서열번호 19 내지 42(표 2)로서 본 출원에 기재되어 있다.
| RNA 개입 유도 분자에 대한 서열 동정 번호 | |
| 서열번호 | 서열 |
| 19 | CCAGAGCUCG CCCUUCUACT T |
| 20 | GUAGAAGGGC GAGCUCUGGT T |
| 21 | GAUGCUCAAC ACCUCCUCCT T |
| 22 | GGAGGAGGUG UUGAGCAUCT T |
| 23 | UAAUUCAACA AAACUGUTT |
| 24 | GACAGUUUUA UUGAAUUAGT T |
| 25 | UAAUUCAACA AAACUGUTT |
| 26 | ACAGUUUUGU UGAAUUATT |
| 27 | AUGAUGAAGA CUCUGCUGCT T |
| 28 | GCAGCAGAGU CUUCAUCAUT T |
| 29 | UGAAUGAAGG GACUAACCUG TT |
| 30 | CAGGUUAGUC CCUUCAUUCA TT |
| 31 | CAGAAAUAGA CAAAGUGGGG TT |
| 32 | CCCCACUUUG UCUAUUUCUG TT |
| 33 | ACAGAGACUA AGGGACCAGA TT |
| 34 | ACAGAGACUA AGGGACCAGA TT |
| 35 | CCAGAGCUCG CCCUUCUACT T |
| 36 | GUAGAAGGGC GAGCUCUGGT T |
| 37 | GUCCCGCAUC GUCCGCAGCT T |
| 38 | GCUGCGGACG AUGCGGGACT T |
| 39 | CUAAUUCAAU AAAACUGUCT T |
| 40 | GACAGUUUUA UUGAAUUAGT T |
| 41 | AUGAUGAAGA CUCUGCUGC |
| 42 | GCAGCAGAGU CUUCAUCAU |
본 발명의 siRNA 분자는 암 또는 치료 혜택이 표적화된 단백질의 발현의 저해에 의해 얻어지는 유형의 기타 질환을 가진, 인간 환자를 비롯한 환자를 치료하는 요법에서 이용된다. 본 발명의 siRNA 분자는 표적화된 mRNA 및 단백질의 조절을 위하여 적합한 플라즈마 및 조직 농도에 도달하도록 1회 이상의 치료 주기에 대해서 하루 한번 이상의 주사(정맥내, 피하 혹은 척추강내)에 의해 또는 연속적인 정맥내 혹은 척추강내 투여에 의해 환자에게 투여된다.
본 명세서에서 이용되는 바와 같이, "전립선암을 앓고 있는 포유류 대상체"란 포유류 대상체가 전립선암으로 확정적으로 진단된 것을 의미한다.
본 명세서에서 이용되는 바와 같이, "안드로겐-비의존형 전립선암"이란 안드로겐-의존형이 아닌(안드로겐 감수성이 아닌) 세포 및 세포를 주로 포함하고 있는 종양을 망라하며; 종종 이러한 세포는 안드로겐-의존형에서 안드로겐-비의존형으로 진행한다. 부가적으로, 몇몇 실시형태에 있어서, 안드로겐-비의존형 전립선암은 성장을 위하여 전반적으로 안드로겐-의존형이 아닌(안드로겐 감수성이 아닌) 종양을 망라할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 안드로겐 비의존형 전립선암은 호르몬 절제 요법(hormone ablation therapy)의 투여 및/또는 (호르본 봉쇄 요법(hormone blockade therapy)으로서) AR 길항제의 투여로 인해 진행되었다. 몇몇 실시형태에 있어서, 안드로겐-비의존형이 아닌 전립선암에 비해서 안드로겐-비의존형 전립선암의 AR 발현의 증가가 있다.
본 명세서에서 이용되는 바와 같이, "거세-저항성 전립선암"은 호르몬 절제 요법 혹은 호르몬 봉쇄 요법에 저항성이 있는 어떠한 안드로겐-비의존형 전립선암도 망라한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 거세-저항성 전립선암은 호르몬 절제 및/또는 호르몬 봉쇄 요법의 투여로 인해 진행되었다. 몇몇 실시형태에 있어서, 거세 저항성이 아닌 전립선암에 비해서 거세-저항성 전립선암의 AR 발현의 증가가 있다.
본 명세서에서 이용되는 바와 같이, "Hsp90 저해제"란 Hsp90-단백질 상호작용, Hsp90 신호전달 또는 Hsp90 단백질 발현을 저해하는 것을 비롯하여, Hsp90의 기능을 교란 혹은 저감시키는 제제를 지칭한다. Hsp90 저해제로는 Hsp90-특이적 모노클로날 항체, Hsp90 발현을 표적화하는 올리고뉴클레오타이드(예컨대, Hsp90 표적화 안티센스 올리고뉴클레오타이드 또는 RNA 유도 분자), Hsp90에 대해서 특이적인 펩타이드 제제 및 Hsp90에 대해서 특이적인 소분자 저해제를 포함하지만, 이들로 제한되는 것은 아니다. Hsp90 저해제의 비제한적인 예는 Hsp90i-1, Hsp90i-2, Hsp90i-2-PRO 및 Hsp90i-2-PRO2이다.
Hsp90i-1은 Hsp90 저해제이다. Hsp90i-1은 또한 17-알릴아미노-17-데메톡시겔다나마이신(17-AAG), 텔라티닙(Telatinib), 타네스피마이신(Tanespimycin), NSC-330507, CNF-101, KOS-953, GLD-36 및 CP 127374로서 알려져 있다. Hsp90i-1의 CAS 등록번호는 75747-14-7이다. 본 명세서에 기재된 실험에 이용되는 Hsp90i-1은 또한 17-AAG라 지칭되며, 국립보건원(미국 매릴랜드주의 베데스타시에 소재)으로부터 입수하였다. 17-AAG는 문헌[Egorin et al., 1998] 및 문헌[Koga et al., 2009]에 논의되어 있으며, 또한 인비보젠(Invivogen)(미국 캘리포니아주의 샌디에이고시에 소재)으로부터 구입하여 이용가능하다.
Hsp90i-2는 Hsp90 저해제이다. Hsp90i-2는 또한 PF-04928473 및 SNX-2112 및 (4-(6,6-다이메틸-4-옥소-3-트라이플루오로메틸-4,5,6,7-테트라하이드로-인다졸-1-일)-2-(4-하이드록시-사이클로헥실아미노)-벤즈아마이드)로 공지되어 있다. Hsp90i-2의 CAS 등록번호는 908112-43-6이다. Hsp90i-2는 다음의 구조를 지닌다:
Hsp90i-2는 문헌[Lamoureux et al., 2011]에 논의되어 있으며, 이 문헌의 전체 내용은 참조로 본 명세서에 병합된다.
Hsp90i-2-PRO는 Hsp90 저해제이다. Hsp90i-2-PRO는 Hsp90i-2의 전구체이다. Hsp90i-2-PRO의 CAS 등록번호는 908115-27-5이다. Hsp90i-2-PRO는 또한 SNX-5422 및 PF-04929113으로서 공지되어 있다. Hsp90i-2-PRO는 이하의 구조를 지닌다:
Hsp90i-2-PRO2는 Hsp90i-2의 다른 전구체이다. Hsp90i-2-PRO2는 문헌[Chandarlapaty et al., 2008]에 논의되어 있으며, 이 문헌의 전체 내용은 참조로 본 명세서에 병합된다. Hsp90i-2-PRO2는 또한 SNX-5542로서 공지되어 있다.
Hsp90i-2, Hsp90i-2-PRO 및 Hsp90i-2-PRO2의 합성 방법은 문헌[Huang et al., J. Med Chem. 52:4288-4305 (2009)] 및 미국 특허 제7,928,135호에 기재되어 있으며, 이들 문헌의 전체 내용은 참조로 본 명세서에 병합된다. 대안적으로, Hsp90i-2, Hsp90i-2-PRO 및 Hsp90i-2-PRO2는 화이자사(Pfizer Inc.)(미국 뉴욕주의 뉴욕시에 소재) 및 세레넥스사(Serenex Inc.)(미국 노스캐롤라이나주의 더럼시에 소재)로부터 입수가능하다.
유기 합성 분야에서 통상의 기술을 가진 자라면, 이 출원의 합성 반응식에 표시된 일반적인 절차에 대한 변경을 실시하여 구조적으로 다양한 화합물을 수득할 수 있다는 것을 이해할 것이다. 예를 들어, 아릴 고리가 존재할 경우, 모든 위치 이성질체가 상정되며, 표준 방향족 치환 화학을 이용해서 합성될 수 있다. 치환기의 수 및 유형은 또한 아릴 고리 주위에서 변화될 수 있다. 또한, 알킬기가 존재할 경우, 사슬 길이는 당업자에게 충분히 공지된 방법을 이용해서 변형시킬 수 있다. 에스터 형성이 상정된다면, 락톤이 사용될 수 있으며, 여기서 락톤 고리는 친핵체, 예컨대, 위에 기재된 에스터-함유 모이어티 등과의 반응에 의해 개환된다. 적절한 유기 전환은 문헌[March's Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure (Wiley-Interscience; 6th edition, 2007)]에 기재되어 있으며, 이 문헌의 내용은 참조로 본 명세서에 병합된다.
본 발명의 화합물은 흡수 및 생체이용가능성을 최적화하기 위하여 전구체로 전환될 수 있다. 전구체의 형성은, 에스터를 형성하기 위하여 유리 하이드록실기와 카복실산의 반응, 포스페이트를 형성하기 위하여 유리 하이드록실기와 오염화인의 반응 후 가수분해, 또는 아미노산 에스터를 형성하기 위하여 유리 하이드록시와 아미노산과의 반응을 포함하지만, 이들로 제한되는 것은 아니며, 이들 과정은 WO 2005/046575에서 Chandran에 의해 이미 기술되어 있다. 치환기는 선택되며, 얻어지는 유사체는, 기계 및 약제 화학 분야에서 잘 알려진 원리, 예컨대, 구조-활성 관계의 정량화, 생물학적 활성 및 ADMET(흡수, 분배, 대사, 배설 및 독성) 특성의 정량화에 따라서 평가된다.
달리 특정된 경우를 제외하고, 본 발명의 화합물의 구조가 비대칭 탄소 원자를 포함할 경우, 이 화합물은 라세미체, 라세미 혼합물 및 단리된 단일 거울상이성질체로서 생기는 것이 이해된다. 이들 화합물의 이러한 모든 이성질체 형태는, 본 발명에 명확하게 포함된다. 달리 특정된 경우를 제외하고, 각 입체형성 탄소는, R 또는 S 배치형태일 수 있다. 따라서, 이러한 비대칭에 기인하는 이성질체(예를 들어, 모든 거울상이성질체 및 부분입체이성질체)는, 달리 표시되지 않는 한, 본 발명의 범위 내에 포함된다. 이러한 이성질체는 문헌["Enantiomers, Racemates and Resolutions", J. Jacques, A. Collet and S. Wilen, Pub. John Wiley & Sons, NY, 1981]에 기재된 것들과 같은, 고전적인 분리 수법에 의해 그리고 입체화학적으로 제어된 합성에 의해 실질적으로 순수한 형태로 얻어질 수 있다. 예를 들어, 분해는 카이럴 칼럼 상에서 분취 크로마토그래피에 의해 수행될 수 있다.
본 발명은 또한 본 명세서에 개시된 화합물에서 발견되는 원자들의 모든 동위원소를 포함하도록 의도되어 있다. 동위원소는 원자번호는 동일하지만 질량수가 다른 원자를 포함한다. 일반적인 예로서 그리고 제한없이, 수소의 동위원소는 트리튬 및 듀테륨을 포함한다. 탄소의 동위원소는 C-13 및 C-14를 포함한다.
본 출원 전체를 통해서 구조에 있어서의 탄소의 임의의 표기는, 추가의 표기 없이 이용될 경우, 탄소의 모든 동위원소, 예컨대, 12C, 13C 또는 14C를 나타내도록 의도되어 있음에 유의해야 한다. 또한, 13C 혹은 14C를 함유하는 임의의 화합물은 구체적으로 본 명세서에 개시된 화합물의 어느 하나의 구조를 지닐 수 있다.
또, 본 출원 전체를 통해서 구조에 있어서 수소의 임의의 표기는, 추가의 표기 없이 이용될 경우, 수소의 모든 동위원소, 예컨대, 1H, 2H 또는 3H를 나타내도록 의도되어 있음에 유의해야 한다. 또한, 2H 혹은 3H를 함유하는 임의의 화합물은 구체적으로 본 명세서에 개시된 화합물의 어느 하나의 구조를 지닐 수 있다.
동위원소 표지된 화합물은 일반적으로 이용되는 비표지된 시약 대신에 적절한 동위원소 표지된 시약을 이용해서 당업자에게 공지된 통상의 수법에 의해서 제조될 수 있다.
본 명세서에서 이용되는 바와 같이, "알킬"은 특정 개수의 탄소 원자를 지니는 분지쇄 및 직쇄 포화 지방족 탄화수소기를 포함하며, 비치환 또는 치환되어 있을 수 있다. 이와 같이 해서, "C1-Cn 알킬"에서처럼 C1-Cn은 직쇄 혹은 분지쇄 배열로 1, 2, ...., n-1 혹은 n개의 탄소를 지니는 기를 포함하도록 정의된다. 예를 들어, "C1-C6 알킬"에서처럼 C1-C6은 직쇄 혹은 분지쇄 배열로 1, 2, 3, 4, 5 혹은 6개의 탄소를 지니는 기를 포함하도록 정의되며, 구체적으로는 메틸, 에틸, n-프로필, 아이소프로필, n-뷰틸, t-뷰틸, 펜틸, 헥실 및 옥틸을 포함한다.
본 명세서에서 이용되는 바와 같이, "아릴"은, 각 고리에 10개까지의 원자의 임의의 안정적인 단환식, 이환식 또는 다환식 탄소 고리를 의미하도록 의도되되, 여기서 적어도 하나의 고리는 방향족이고, 비치환 또는 치환되어 있을 수 있다. 이러한 아릴 원소의 예로는 페닐, p-톨루에닐(4-메틸페닐), 나프틸, 테트라하이드로-나프틸, 인다닐, 페난트릴, 안트릴 또는 아세나프틸을 포함한다. 아릴 치환기가 이환식이고 하나의 고리가 비방향족인 경우에, 그 부착은 방향족 고리를 통해서 이루어지는 것으로 이해된다.
"헤테로아릴"이란 용어는, 본 명세서에서 이용되는 바와 같이, 각 고리에 10개까지의 원자의 안정적인 단환식, 이환식 혹은 다환식 고리를 나타내되, 여기서 적어도 하나의 고리는 방향족이고, O, N 및 S로 이루어진 군으로부터 선택된 1 내지 4개의 헤테로원자를 함유한다. 이환식 방향족 헤테로아릴기로는, 페닐, 피리딘, 피리미딘 또는 피리디진 고리를 포함하지만, 이들로 제한되는 것은 아니며, 이들은 (a) 1개의 질소 원자를 지니는 6-원(membered) 방향족 (불포화) 복소환식 고리에 융합되거나; (b) 2개의 질소 원자를 지니는 5- 혹은 6-원 방향족 (불포화) 복소환식 고리에 융합되거나; (c) 1개의 산소 혹은 1개의 황 원자와 함께 1개의 질소 원자를 지니는 5-원 방향족 (불포화) 복소환식 고리에 융합되거나; 또는 (d) O, N 또는 S로부터 선택된 1개의 헤테로원자를 지니는 5-원 방향족 (불포화) 복소환식 고리에 융합된다. 이 정의의 범위 내의 헤테로아릴기로는 벤조이미다졸릴, 벤조퓨라닐, 벤조퓨라자닐, 벤조피라졸릴, 벤조트라이아졸릴, 벤조티오페닐, 벤즈옥사졸릴, 카바졸릴, 카볼리닐, 신놀리닐, 퓨라닐, 인돌리닐, 인돌릴, 인돌라지닐, 인다졸릴, 아이소벤조퓨라닐, 아이소인돌릴, 아이소퀴놀릴, 아이소티아졸릴, 아이소옥사졸릴, 나프트피리디닐, 옥사다이아졸릴, 옥사졸릴, 옥사졸린, 아이소옥사졸린, 옥세타닐, 피라닐, 피라지닐, 피라졸릴, 피리다지닐, 피리도피리디닐, 피리다지닐, 피리딜, 피리미딜, 피롤릴, 퀴나졸리닐, 퀴놀릴, 퀴녹살리닐, 테트라졸릴, 테트라졸로피리딜, 티아다이졸릴, 티아졸릴, 티에닐, 트라이아졸릴, 아제티디닐, 아지리디닐, 1,4-다이옥사닐, 헥사하이드로아제피닐, 다이하이드로벤조이미다졸릴, 다이하이드로벤조퓨라닐, 다이하이드로벤조티오페닐, 다이하이드로벤즈옥사졸릴, 다이하이드로퓨라닐, 다이하이드로이미다졸릴, 다이하이드로인돌릴, 다이하이드로아이소옥사졸릴, 다이하이드로아이소티아졸릴, 다이하이드로옥사다이아졸릴, 다이하이드로옥사졸릴, 다이하이드로피라지닐, 다이하이드로피라졸릴, 다이하이드로피리디닐, 다이하이드로피리미디닐, 다이하이드로피롤릴, 다이하이드로퀴놀리닐, 다이하이드로테트라졸릴, 다이하이드로티아다이졸릴, 다이하이드로티아졸릴, 다이하이드로티에닐, 다이하이드로트라이아졸릴, 다이하이드로아제티디닐, 메틸렌다이옥시벤조일, 테트라하이드로퓨라닐, 테트라하이드로티에닐, 아크리디닐, 카바졸릴, 신놀리닐, 퀴녹살리닐, 피라졸릴, 인돌릴, 벤조트라이아졸릴, 벤조티아졸릴, 벤즈옥사졸릴, 아이소옥사졸릴, 아이소티아졸릴, 퓨라닐, 티에닐, 벤조티에닐, 벤조퓨라닐, 퀴놀리닐, 아이소퀴놀리닐, 옥사졸릴, 아이소옥사졸릴, 인돌릴, 피라지닐, 피리다지닐, 피리디닐, 피리미디닐, 피롤릴, 테트라하이드로퀴놀린을 포함하지만, 이들로 제한되는 것은 아니다. 헤테로아릴 치환기가 이환식이고 1개의 고리가 비방향족이거나 헤테로원자를 함유하지 않을 경우, 그 부착은 각각 방향족 고리를 통해서 혹은 헤테로원자 함유 고리를 통해서 이루어진다. 헤테로아릴이 질소 원자를 함유한다면, 그의 대응하는 N-옥사이드가 또한 이 정의에 의해 포함되는 것을 알 수 있다.
알킬, 아릴 및 헤테로아릴 치환기는, 달리 구체적으로 정의되어 있지 않는 한, 치환 혹은 비치환되어 있을 수 있다.
본 발명의 화합물은 염 형태로 있을 수 있다. 본 명세서에서 이용되는 바와 같이, "염"은 화합물의 산 혹은 염기 염을 만드는 것에 의해 변형된 본 발명의 화합물의 염이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 염은 약제학적으로 허용가능하다. 약제학적으로 허용가능한 염의 예로는, 염기성 잔기의 미네랄 혹은 유기 산염, 예컨대, 아민; 산성 잔기의 알칼리 혹은 유기 염, 예컨대, 페놀을 포함하지만, 이들로 제한되는 것은 아니다. 염은 유기 혹은 무기 산을 이용해서 제조될 수 있다. 이러한 산 염은, 클로라이드, 브로마이드, 설페이트, 나이트레이트, 포스페이트, 설포네이트, 포르메이트, 타트레이트, 말레에이트, 말레이트, 시트레이트, 벤조에이트, 살리실레이트, 아스코베이트 등이다. 페놀레이트 염은 알칼리 토금속염, 나트륨, 칼륨 혹은 리튬이다. 이와 관련하여 "약제학적으로 허용가능한 염"이란 용어는, 본 발명의 화합물의 비교적 비독성의 무기 및 유기 산 혹은 염기 부가염을 지칭한다. 이들 염은 본 발명의 화합물의 최종 단리 및 정제 동안 동소에서(in situ), 또는 개별적으로 본 발명의 정제된 화합물을 그의 유리 염기 혹은 유리 산 형태로 적절한 유기 혹은 무기 산 혹은 염기와 반응시키고, 이와 같이 형성된 염을 단리시킴으로써 제조될 수 있다. 대표적인 염으로는, 하이드로브로마이드, 하이드로클로라이드, 설페이트, 바이설페이트, 포스페이트, 나이트레이트, 아세테이트, 발레레이트, 올레에이트, 팔미테이트, 스테아레이트, 라우레이트, 벤조에이트, 락테이트, 포스페이트, 토실레이트, 시트레이트, 말레에이트, 퓨마레이트, 숙시네이트, 타트레이트, 나프틸레이트, 메실레이트, 글루코헵토네이트, 락토바이오네이트 및 라우릴설포네이트염 등을 포함한다(예를 들어, 문헌[Berge et al. (1977) "Pharmaceutical Salts", J. Pharm. Sci. 66:1-19] 참조).
본 발명의 화합물은 본 명세서에 상세히 설명된 것들을 비롯하여 각종 형태로 투여될 수 있다. 화합물에 의한 처치는 병용 요법 혹은 보조 요법의 성분일 수 있고, 즉, 약물을 필요로 하는 대상체 혹은 환자는, 본 발명의 화합물의 하나 이상과 함께 질환을 위하여 다른 약물로 치료되거나 부여된다. 이 병용 요법은 환자가 하나의 약물로 처음에 처리되고, 이어서 다른 혹은 2가지 약물이 동시에 부여되는 순차 요법일 수 있다. 이들은 이용되는 투약 형태에 따라서 둘 이상의 상이한 투여 경로에 의해 혹은 동일한 경로에 의해 독립적으로 투여될 수 있다.
본 명세서에서 이용되는 바와 같이, "약제학적으로 허용가능한 담체"는 본 발명의 화합물을 동물 혹은 인간에게 전달하기 위한, 약제학적으로 허용가능한 용매, 현탁제 혹은 비히클이다. 담체는 액체 혹은 고체일 수 있고, 염두에 둔 계획된 투여 방식으로 선택된다. 리포솜은 또한 약제학적으로 허용가능한 담체이다.
치료 시 투여되는 화합물의 용량은 특정 화학치료제 및 그의 모드 및 투여 경로 등과 같은 약동학적 특성; 수용자의 연령, 성별, 대사속도, 흡수 효율, 건강 및 체중; 증상의 속성 및 정도; 투여 중인 동시 치료의 종류; 투여 빈도; 및 목적으로 하는 치료 효과 등의 인자에 따라 다양할 것이다.
본 발명의 투약 단위는 부가적인 항암제와 함께 단일 화합물 또는 그의 혼합물을 포함할 수 있다. 이 화합물은 정제, 캡슐, 환제, 과립, 엘릭시르, 팅크제, 현탁제, 시럽 및 에멀전으로서 경구 투약 형태로 투여될 수 있다. 이 화합물은 또한 정맥내(구강 혹은 주입), 복강내, 피하, 혹은 근육내 형태로 투여되거나, 또는 직접, 예컨대, 주사, 국소 적용, 또는 기타 방법에 의해 투여될 수 있고, 이들은 모두 약제학 분야의 당업자에게 충분히 공지된 투약 형태를 이용한다.
상기 화합물은 통상의 약제학적 관행에 따라서 그리고 의도된 투여 형태에 관하여 적절하게 선택된 적절한 약제학적 희석제, 증량제, 부형제 혹은 담체(일괄적으로 여기서는 약제학적으로 허용가능한 담체라 칭함)와 혼합하여 투여될 수 있다. 이 단위는 경구, 직장, 국소, 정맥내 또는 직접 주입 혹은 비경구 투여를 위한 적절한 형태일 것이다. 상기 화합물은 단독으로 혹은 약제학적으로 허용가능한 담체와 혼합하여 투여될 수 있다. 이 담체는 고체 혹은 액체일 수 있고, 담체의 유형은 일반적으로 이용 중인 투여 형태에 의거해서 채택된다. 활성제는 정제 혹은 캡슐, 리포솜의 형태로, 응집된 분말로서, 또는 액체 형태로 공동 투여될 수 있다. 적절한 고체 담체의 예로는 락토스, 수크로스, 젤라틴 및 한천을 포함한다. 캡슐 혹은 정제는 용이하게 제형화될 수 있고, 삼키거나 씹기 용이하게 만들어질 수 있으며; 그외 고체 형태로는 과립, 및 벌크 산제를 포함한다. 정제는 적절한 결착제, 윤활제, 희석제, 붕해제, 착색제, 향미제, 유동 유도제 및 용융제를 함유할 수 있다. 적절한 액체 투약 형태의 예로는, 수중 용액 혹은 현탁제, 약제학적으로 허용가능한 지방 및 오일, 알코올 및 기타 유기 용매, 예컨대, 에스터, 에멀전, 시럽 혹은 엘릭시르, 현탁제, 비발포 과립으로부터 재구성된 용액 및/또는 현탁제 및 발포 과립으로부터 재구성된 발포 제제를 포함한다. 이러한 액체 투약 형태는, 예를 들어, 적절한 용매, 방부제, 유화제, 현탁제, 희석제, 향미제, 증점제 및 용융제를 함유할 수 있다. 경구 투약 형태는 선택적으로 향료 및 착색제를 함유한다. 비경구 및 정맥내 형태는 또한 이들을 주입 형태 혹은 채택된 전달 시스템과 적합하게 하는 미네랄 및 기타 물질을 포함할 수 있다.
본 발명에 유용한 투약 형태를 제조하는 일반적인 수법 및 조성은 이하의 문헌들에 기재되어 있다: 7 Modern Pharmaceutics, Chapters 9 and 10 (Banker & Rhodes, Editors, 1979); Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets (Lieberman et al., 1981); Ansel, Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms 2nd Edition (1976); Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed. (Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985); Advances in Pharmaceutical Sciences (David Ganderton, Trevor Jones, Eds., 1992); Advances in Pharmaceutical Sciences Vol 7. (David Ganderton, Trevor Jones, James McGinity, Eds., 1995); Aqueous Polymeric Coatings for Pharmaceutical Dosage Forms (Drugs and the Pharmaceutical Sciences, Series 36 (James McGinity, Ed., 1989); Pharmaceutical Particulate Carriers: Therapeutic Applications: Drugs and the Pharmaceutical Sciences, Vol 61 (Alain Rolland, Ed., 1993); Drug Delivery to the Gastrointestinal Tract (Ellis Horwood Books in the Biological Sciences. Series in Pharmaceutical Technology; J. G. Hardy, S. S. Davis, Clive G. Wilson, Eds.); Modem Pharmaceutics Drugs and the Pharmaceutical Sciences, Vol 40 (Gilbert S. Banker, Christopher T. Rhodes, Eds.). 상기 문헌 모두는 본 명세서에 참조로 병합된다.
정제는 적절한 결착제, 윤활제, 붕해제, 착색제, 향미제, 유동 유도제 및 용융제를 함유할 수 있다. 예를 들어, 정제 혹은 캡슐의 투약 단위 형태의 경구 투여를 위하여, 활성 약물 성분이 경구, 비독성, 약제학적으로 허용가능한 비활성 담체, 예컨대, 락토스, 젤라틴, 한천, 전분, 수크로스, 글루코스, 메틸 셀룰로스, 스테아르산 마그네슘, 인산이칼슘, 황산칼슘, 만니톨, 솔비톨 등과 배합될 수 있다. 적절한 결착제로는, 전분, 천연당, 예컨대, 글로코스 혹은 베타-락토스, 옥수수 감미제, 천연 및 합성 검, 예컨대, 아카시아, 트래거캔트 혹은 알긴산나트륨, 카복시메틸셀룰로스, 폴리에틸렌 글라이콜, 왁스 등을 포함한다. 이들 투약 형태에 이용되는 윤활제로는 올레산나트륨, 스테아르산나트륨, 스테아르산마그네슘, 벤조산나트륨, 아세트산나트륨, 염화나트륨 등을 포함한다. 붕해제로는, 제한 없이, 전분, 메틸셀룰로스, 한천, 벤토나이트, 잔탄검 등을 포함한다.
상기 화합물은 또한, 예컨대, 소형 단층 소포, 대형 단층 소포 및 다층 소포 등과 같은 리포솜 전달 시스템의 형태로 투여될 수 있다. 리포솜은 콜레스테롤, 스테아릴아민 또는 포스파티딜콜린 등과 같은 각종 인지질로부터 형성될 수 있다. 이 화합물은 조직-표적화된 에멀전의 성분으로서 투여될 수 있다.
화합물은 또한 표적화 가능한 약물 담체로서 혹은 전구체로서 가용성 중합체에 결합될 수 있다. 이러한 중합체로는, 폴리비닐피롤리돈, 피란 공중합체, 폴리하이드록실프로필메타크릴아마이드-페놀, 폴리하이드록시에틸아스파타마이드페놀, 또는 팔미토일 잔기로 치환된 폴리에틸렌옥사이드-폴리라이신을 포함하지만, 이들로 제한되는 것은 아니다. 또한, 이 화합물은 약물의 제어된 방출을 달성하는데 유용한 생분해성 폴리머의 부류, 예를 들어, 폴리락트산, 폴리글라이콜산, 폴리락트산과 폴리글라이콜산의 공중합체, 폴리엡실론 카프로락톤, 폴리하이드록시 뷰티르산, 폴리오쏘에스터, 폴리아세탈, 폴리다이하이드로피란, 폴리사이아노아실레이트 및 하이드로겔의 가교된 혹은 양친매성 블록 공중합체에 커플링될 수 있다.
젤라틴 캡슐은 락토스, 전분, 셀룰로스 유도체, 스테아르산마그네슘, 스테아르산 등과 같은 활성 성분 화합물 및 분말화된 담체를 함유할 수 있다. 유사한 희석제는, 압착된 정제를 만드는데 이용될 수 있다. 정제와 캡슐 둘 모두는, 소정 시간 기간에 걸쳐서 약물의 연속 방출을 제공하기 위하여 즉시 방출 제품으로서 혹은 서방성 제품으로서 제조될 수 있다. 압착된 정제는 임의의 불쾌한 맛을 은폐하고 정제를 대기로부터 보호하기 위하여 당의정 혹은 코팅 필름, 또는 위장관에서 선택적인 분해를 위한 장용 코팅일 수 있다.
액체 투약 형태의 경구 투여를 위하여, 경구 약물 성분은 임의의 경구, 비독성, 약제학적으로 허용가능한 비활성 담체, 예컨대, 에탄올, 글라이세롤, 물 등과 배합될 수 있다. 적절한 액체 투약 형태의 예로는, 수중 용액 혹은 현탁제, 약제학적으로 허용가능한 지방 및 오일, 알코올 및 기타 유기 용매, 예컨대, 에스터, 에멀전, 시럽 혹은 엘릭시르, 현탁제, 비발포 과립으로부터 재구성된 용액 및/또는 현탁제 및 발포 과립으로부터 재구성된 발포 제제를 포함한다. 이러한 액체 투약 형태는, 예를 들어, 적절한 용매, 방부제, 유화제, 현탁제, 희석제, 향미제, 증점제 및 용융제를 함유할 수 있다.
경구 투여를 위한 액체 투약 형태는 환자의 수락을 증대시키기 위하여 착색제 및 향미제를 함유할 수 있다. 일반적으로, 물, 적절한 오일, 식염수, 수성 덱스트로스(글루코스) 및 관련된 당 용액 및 글라이콜, 예컨대, 프로필렌 글라이콜 혹은 폴리에틸렌 글라이콜은 비경구 용액용의 적절한 담체이다. 비경구 투여를 위한 용액은 바람직하게는 활성 성분의 수용성 염, 적절한 안정제, 및 필요한 경우 완충 물질을 함유한다. 아황산수소나트륨, 아황산나트륨 혹은 아스코르브산 등과 같은 산화방지제는 단독으로 혹은 조합하여, 적절한 안정제이다. 또 시트르산 및 그의 염, 그리고 나트륨 EDTA가 이용된다. 또한, 비경구 용액은 방부제, 예컨대, 염화벤잘코늄, 메틸- 또는 프로필-파라벤 및 클로로뷰탄올을 함유할 수 있다. 적절한 약제학적 담체는, 이 분야의 표준 참조 교과서인 맥 출판사(Mack Publishing Company)의 "Remington's Pharmaceutical Sciences"에 기재되어 있다.
본 발명의 화합물은, 또한 적절한 비강내 비히클의 사용을 통해서, 또는 당업자에게 충분히 공지된 경피 피부 패치의 형태를 이용해서 경피 경로를 통해서 비강내 형태로 투여될 수 있다. 경피 전달 시스템의 형태로 투여되기 위하여, 용량 투여는, 일반적으로 투약 요법을 통해서 간헐적이라기보다는 오히려 연속적일 것이다.
비경구 및 정맥내 형태는 또한 이들을 주입 형태 혹은 채택된 전달 시스템과 적합하게 하는 미네랄 및 기타 물질을 포함할 수 있다.
클러스테린 발현의 저해는 과도적(즉, 일시적)일 수 있고, 또한 Hsp90 저해제와 병용하여 일어날 수 있다. 전립선암을 가진 인간에서, 이것은 발현의 저해가 Hsp90 저해 혹은 Hsp90 저해제의 투여의 당일 혹은 2일 내에 시작되어 그후 약 3 내지 6개월 동안에 이르기까지 유효하게 되어야 하는 것을 의미한다. 이것은 달성하기 위하여 다회 용량을 필요로 할 수 있다. 그러나, 그 시간의 기간은 본 발명의 범위로부터 벗어나는 일 없이 Hsp90 저해를 개시하여 그후 상당한 시간에 이르기까지 더욱 연장될 수 있는 것임을 이해해야 할 것이다.
본 발명의 양상들은 안드로겐-비의존형 전립선암의 치료에 또한 전립선암이 안드로겐-비의존형으로 되는 것을 방지하는데 적용될 수 있다.
본 발명의 양상들은 거세-저항성 전립선암의 치료에 또는 전립선암이 거세-저항성으로 되는 것을 방지하는데 적용될 수 있다.
"병용"이란, 단일 치료 계획의 일부로서, 클러스테린 발현을 표적화하는 올리고뉴클레오타이드와 동일한 시간 및 빈도로, 또는 더욱 통상적으로, 상기 올리고뉴클레오타이드와 상이한 시간 및 빈도로 행해지는 것을 의미한다. 본 발명의 양상들은 Hsp90 저해제의 투여 전, 후 및/또는 동안 올리고뉴클레오타이드의 투여를 포함한다. 따라서, Hsp90 저해제는 본 발명에 따른 올리고뉴클레오타이드와 함께 이용될 수 있지만, 올리고뉴클레오타이드와는 상이한 시간, 상이한 용량 및 상이한 빈도로 투여될 수 있다.
본 명세서에서 이용되는 바와 같이, 밀리그램으로 측정되는 올리고뉴클레오타이드의 "양" 또는 "용량"이란, 약물 제품의 형태에 관계없이, 약물 제품에 존재하는 올리고뉴클레오타이드의 밀리그램을 지칭한다.
본 명세서에서 이용되는 바와 같이, 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드, Hsp90 저해제, 또는 그들의 임의의 조합물의 양을 지칭할 때 "유효한"이란, 본 발명의 방식에서 이용될 경우 합리적인 유익/유해비에 상응하는 과도한 부작용(독성, 자극 혹은 알레르기 반응 등) 없이 소망의 치료 반응을 수득하는데 충분한 올리고뉴클레오타이드, Hsp90 저해제, 또는 그들의 임의의 조합물의 양을 지칭한다.
본 명세서에서 이용되는 바와 같이, "치료(혹은 처치)하는"이란, 예컨대, 전립선암의 진행의 저해, 퇴행 혹은 정체를 망라한다. 치료하는은 또한 전립선암의 임의의 증상 혹은 증상들의 예방 혹은 개선을 망라한다.
본 명세서에서 이용되는 바와 같이, 대상체의 질환 진행 혹은 질환 합병증의 "저해"란 대상체의 질환 진행 및/또는 질환 합병증을 예방 혹은 저감시키는 것을 의미한다.
본 명세서에서 이용되는 바와 같이, 전립선암과 관련된 "증상"으로는, 전립선암과 관련된 임의의 임상적 혹은 실험실적 징후를 포함하며, 대상체가 느끼거나 관찰할 수 있는 것으로 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에서 이용되는 바와 같이, "약제학적으로 허용가능한 담체"란 합리적인 유익/유해비에 상응하는 과도한 부작용(독성, 자극 혹은 알레르기 반응 등) 없이 인간 및/또는 동물에 사용하기에 적합한 담체 혹은 부형제를 지칭한다. 이것은 본 발명의 화합물 및/또는 조합물을 대상체에게 전달하기 위한, 약제학적으로 허용가능한 용매, 현탁제 혹은 비히클일 수 있다.
이하의 약어가 본 명세서에서 이용된다
PCa 전립선암
CRPC 거세 저항성 전립선암
HSP 열 충격 단백질
CLU 클러스테린
PSA 전립선 특이적 항원
17-AAG 17-알릴아미노-17-데메톡시겔다나마이신
Aso 안티센스 올리고뉴클레오타이드
투약 단위(dosage unit)
클러스테린 발현을 표적으로 하는 올리고뉴클레오타이드의 투여는, 네이키드(naked) 투여 혹은 약제학적으로 허용가능한 지질 담체 중 투여를 비롯하여, 당업계에 공지된 각종 기전을 이용해서 수행될 수 있다. 예를 들어, 안티센스 전달을 위한 지질 담체는 미국 특허 제5,855,911호 및 제5,417,978호에 개시되어 있으며, 이들 공보는 참조로 본 명세서에 병합된다. 일반적으로, 올리고뉴클레오타이드는 정맥내(i.v.), 복강내(i.p.), 피하(s.c.) 혹은 경구 경로 또는 직접적인 로컬 종양 주사에 의해 투여된다. 바람직한 실시형태에 있어서, 클러스테린 발현을 표적화하는 올리고뉴클레오타이드는 정맥내 주사에 의해 투여된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 투여된 올리고뉴클레오타이드의 양은 640㎎이다.
투여된 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 양은 전립선 세포 내의 클러스테린의 발현을 저해하는데 유효한 것이다. 이 양은 이용된 올리고뉴클레오타이드의 효과 및 사용된 임의의 담체의 속성 양쪽 모두에 따라서 변화될 것이라는 것을 이해할 수 있을 것이다.
투여된 클러스테린 발현을 표적화하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 양은 40 내지 640㎎ 또는 300 내지 640㎎일 수 있다. 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 투여는 7일 기간에 1회, 1주에 3회, 또는 7일의 기간 중 1, 3 및 5일째에, 또는 3, 5 및 7일째에 행할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 투여는 7일 기간에 1회보다 적은 빈도일 수 있다. 용량은 환자 체중에 의해 산출될 수 있고, 따라서 약 1 내지 20 ㎎/㎏, 또는 약 2 내지 10 ㎎/㎏, 또는 약 3 내지 7 ㎎/㎏, 또는 약 3 내지 4 ㎎/㎏의 용량 범위가 이용될 수 있었다. 이 용량은 필요에 따라서 소정 간격으로 반복된다. 하나의 임상적 개념은 1주의 치료 동안 3회 장입 용량으로 주 1회 투약하는 것이다. 투여된 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 양은 암세포 내에서 클러스테린의 발현을 저해하기 위하여 인간 환자에 있어서 유효하게 되는 것으로 입증된 바 있다.
본 발명의 몇몇 실시형태에 있어서, 전립선암의 치료를 위하여 요구되는 클러스테린의 발현을 표적화하는 올리고뉴클레오타이드의 양은 올리고뉴클레오타이드 단일요법에서 요구되던 것보다 Hsp90 저해제와 병용 시 적어진다.
커스터센은 정맥내 투여용의 등장성의 인산염 완충 식염 용액으로서 20 ㎎/㎖의 농도로 제형화될 수 있고, 또한 단일의 바이알 중에 커스터센 나트륨 160㎎을 함유하는 8㎖ 용액으로서 공급될 수 있다.
커스터센은 0.9% 염화나트륨(정상 식염수) 250㎖에 첨가될 수 있다. 용량은 2시간에 절친 주입으로서 정맥내에 주변 혹은 중앙 유치 카테터를 이용해서 투여될 수 있다. 부가적으로, 주입 펌프가 이용될 수 있다.
Hsp90 저해제의 투여는 경구, 비강, 폐, 비경구, 정맥내, 복강내, 관절내, 경피, 피부내, 피하, 국소, 근육내, 직장, 척추강내, 안구내 및 구강내(buccal)일 수 있다. 당업자라면, 보다 높은 용량은 정맥내 주사보다는 경구 투여를 필요로 할 수 있다는 것을 인식할 것이다.
Hsp90 저해제의 용량은 60㎎/㎏, 55㎎/㎏, 45㎎/㎏, 40㎎/㎏, 35㎎/㎏, 25㎎/㎏, 20㎎/㎏, 15㎎/㎏, 10㎎/㎏, 5㎎/㎏ 또는 그 이하일 수 있다.
클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드 및 Hsp90 저해제의 투약 단위는 각각 단독의 것 혹은 이들의 혼합물을 포함할 수 있다. 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드와 Hsp90 저해제의 조합물은 정제, 캡슐, 환제, 분말, 과립, 엘릭시르, 팅크제, 현탁제, 시럽 및 에멀전으로서 경구 투약 형태로 투여될 수 있다. 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드 및/또는 Hsp90 저해제는 또한 정맥내(볼내 혹은 주입), 복강내, 피하, 혹은 근육내 형태로 투여되거나, 또는 직접, 예컨대, 주입 혹은 기타 방법에 의해, 전립선 암 병변 내로 혹은 상에 도입될 수 있고, 이들은 모두 약제학 분야의 당업자에게 충분히 공지된 투약 형태를 이용한다.
클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드 및/또는 Hsp90 저해제는 통상의 약제학적 관행에 따라서 그리고 의도된 투여 형태에 관하여 적절하게 선택된 적절한 약제학적 희석제, 증량제, 부형제 혹은 담체(일괄적으로 여기서는 약제학적으로 허용가능한 담체라 칭함)와 혼합하여 투여될 수 있다. 이 단위는 경구, 직장, 국소, 정맥내 또는 직접 주입 혹은 비경구 투여를 위한 적절한 형태일 것이다. 올리고뉴클레오타이드 및/또는 Hsp90 저해제는 단독으로 혹은 약제학적으로 허용가능한 담체와 혼합하여 투여될 수 있다. 이 담체는 고체 혹은 액체일 수 있고, 담체의 유형은 일반적으로 이용 중인 투여 형태에 의거해서 채택된다. 캡슐 혹은 정제는 용이하게 제형화될 수 있고, 삼키거나 씹기 용이하게 만들어질 수 있으며; 그외 고체 형태로는 과립, 및 벌크 산제를 포함한다. 정제는 적절한 결착제, 윤활제, 희석제, 붕해제, 착색제, 향미제, 유동 유도제 및 용융제를 함유할 수 있다. 적절한 액체 투약 형태의 예로는, 수중 용액 혹은 현탁제, 약제학적으로 허용가능한 지방 및 오일, 알코올 또는 기타 유기 용매, 예컨대, 에스터, 에멀전, 시럽 혹은 엘릭시르, 현탁제, 비발포 과립으로부터 재구성된 용액 및/또는 현탁제 및 발포 과립으로부터 재구성된 발포 제제를 포함한다. 이러한 액체 투약 형태는, 예를 들어, 적절한 용매, 방부제, 유화제, 현탁제, 희석제, 향미제, 증점제 및 용융제를 함유할 수 있다. 경구 투약 형태는 선택적으로 향료 및 착색제를 함유한다. 비경구 및 정맥내 형태는 또한 이들을 주입 형태 혹은 채택된 전달 시스템과 적합하게 하는 미네랄 및 기타 물질을 포함할 수 있다.
클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드 및/또는 Hsp90 저해제는 또한, 예컨대, 소형 단층 소포, 대형 단층 소포 및 다층 소포 등과 같은 리포솜 전달 시스템의 형태로 투여될 수 있다. 리포솜은 콜레스테롤, 스테아릴아민 또는 포스파티딜콜린 등과 같은 각종 인지질로부터 형성될 수 있다. 이 화합물은 조직-표적화된 에멀전의 성분으로서 투여될 수 있다.
액체 투약 형태의 경구 투여를 위하여, Hsp90 저해제는 임의의 경구, 비독성, 약제학적으로 허용가능한 비활성 담체, 예컨대, 에탄올, 글라이세롤, 물 등과 배합될 수 있다. 적절한 액체 투약 형태의 예로는, 수중 용액 혹은 현탁제, 약제학적으로 허용가능한 지방 및 오일, 알코올 및 기타 유기 용매, 예컨대, 에스터, 에멀전, 시럽 혹은 엘릭시르, 현탁제, 비발포 과립으로부터 재구성된 용액 및/또는 현탁제 및 발포 과립으로부터 재구성된 발포 제제를 포함한다. 이러한 액체 투약 형태는, 예를 들어, 적절한 용매, 방부제, 유화제, 현탁제, 희석제, 향미제, 증점제 및 용융제를 함유할 수 있다.
본 발명의 몇몇 실시형태에 있어서, 전립선암의 치료를 위하여 요구되는 Hsp90 저해제의 양은, Hsp90 길항제 단일요법에 요구되던 것보다, 클러스테린의 발현을 표적화하는 올리고뉴클레오타이드와 병용 시 적어진다.
투약 단위는 단일 화합물 혹은 화합물들의 혼합물을 포함할 수 있다. 투약 단위는 경구 혹은 주사 투약 형태를 위하여 제조될 수 있다.
본 발명의 일 양상에 따르면, 투약 단위 형태로 포장된 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드-함유 약제학적 조성물이 제공되되, 여기에서, 각 투약 단위 중의 올리고뉴클레오타이드의 양은 640㎎ 이하이다. 상기 약제학적 조성물은 Hsp90 저해제를 포함할 수 있고, 또한 추가로 나트륨 이온을 함유할 수도 있는, 주사 용액 혹은 현탁액일 수 있다.
본 발명의 다른 양상에 따르면, 암의 치료를 위한 약제의 제조에 있어서 클러스테린 발현을 표적화하는 올리고뉴클레오타이드 및 Hsp90 저해제의 사용을 제공하되, 여기에서, 약제는 올리고뉴클레오타이드 640㎎ 이하의 용량을 환자에게 전달하도록 제형화된다. 약제는, 나트륨 이온을 함유할 수 있고/있거나, 주사가능한 용액의 형태일 수 있다.
본 발명에 유용한 투약 형태를 제조하는 일반적인 수법 및 조성은 이하의 문헌들에 기재되어 있다: 7 Modern Pharmaceutics, Chapters 9 and 10 (Banker & Rhodes, Editors, 1979); Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets (Lieberman et al., 1981); Ansel, Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms 2nd Edition (1976); Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed. (Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985); Advances in Pharmaceutical Sciences (David Ganderton, Trevor Jones, Eds., 1992); Advances in Pharmaceutical Sciences Vol 7. (David Ganderton, Trevor Jones, James McGinity, Eds., 1995); Aqueous Polymeric Coatings for Pharmaceutical Dosage Forms (Drugs and the Pharmaceutical Sciences, Series 36 (James McGinity, Ed., 1989); Pharmaceutical Particulate Carriers: Therapeutic Applications: Drugs and the Pharmaceutical Sciences, Vol 61 (Alain Rolland, Ed., 1993); Drug Delivery to the Gastrointestinal Tract (Ellis Horwood Books in the Biological Sciences. Series in Pharmaceutical Technology; J. G. Hardy, S. S. Davis, Clive G. Wilson, Eds.); Modern Pharmaceutics Drugs and the Pharmaceutical Sciences, Vol. 40 (Gilbert S. Banker, Christopher T. Rhodes, Eds.). 이들 문헌은 그들의 전체로서 본 명세서에서 본 출원 내에 참조로 병합된다.
본 발명은 이하의 실험 상세를 참조하여 더욱 잘 이해될 것이지만, 당업자라면, 구체적인 실험 상세는 본 발명을 단지 예시한 것에 불과하며 이는 후술하는 특허청구범위에 더욱 충분히 기재되어 있음을 용이하게 이해할 것이다.
실험 상세
실시예 1. Hsp90 저해제는 시험관내 및 생체내에서 전립선암(PCa) 세포내 HSP의 발현을 유도한다.
CLU, Hsp90, Hsp70 및 Akt 단백질의 발현 및 mRNA 수준에 대한 Hsp90i-1 또는 Hsp90i-2의 용량- 및 시간-의존적 효과를 LNCaP 및 PC-3 세포에서 평가하였다. Hsp90i-1 및 Hsp90i-2 둘 모두는, 용량- 및 시간-의존적 방식으로 3배까지 Hsp70 및 CLU 단백질 수준을 증가시켰다(도 1a, b 및 c). Hsp90 저해는, 앞서 보고된 바와 같이(Lamoureux et al., 2011) Akt 발현의 용량- 및 시간 의존적 감소를 유도하였다. CLU, Hsp70 및 Hsp90의 mRNA 수준은 또한 Hsp90 저해제 처치 후 증가하였다(도 1d).
다음에, CLU 발현에 대한 Hsp90i-2 처치의 효과는 면역조직화학 및 웨스턴 블롯을 이용해서 CRPC LNCaP 이종이식물에서 생체내에서 평가되었다(도 2). CLU 발현은 비히클 처리된 종양에 비해서 Hsp90i-2-PRO로 처리 후 4배 증가하였다(***, p<0.001)(도 2a 및 도 2b). 마찬가지로, Hsp90 저해의 약동학적 척도로 고려되는(Solit et al., 2003; Eccles et al., 2008) Hsp70은, Hsp90i-2-PRO에 의한 처리 후 2.3배 증가하였다(***, p<0.001)(도 2a).
실시예 2. CLU 및 HSF-1 활성과 연루된 처치-유도 순방향 공급 루프(treatment-induced feed forward loop).
HSF-1은 열 충격 반응의 우세한 조절제이므로(Banerji et al., 2008; Workman et al., 2007), HSF-1-활성 및 HSP의 발현에 대한 Hsp90 저해의 효과가 평가되었다. Hsp90i-1 또는 Hsp90i-2는 용량-의존적 방식으로 HSF-1 활성뿐만 아니라(***, p≤0.001; 도 3a) CLU를 유의하게 유도하였다(도 1). CLU 과발현은 Hsp90i-2-유도 아폽토시스로부터 PC-3 종양 세포를 보호하였다(**, p≤0.01; 도 8a). 게다가, siRNA를 이용하는 HSF-1 넉다운은 CLU 발현을 감소시키고, Hsp90i-2에 의한 아폽토시스-유도에 대해 종양 세포를 감수성으로 하였으며(도 8b), 이것은 CLU의 보호 효과가 HSF-1에 의해 매개되는 것을 확인해준다. 놀랍게도, CLU의 과발현은 또한 HSF-1 활성을 증가시키는 한편(***, p≤0.001, 도 3b), siRNA 혹은 커스터센을 이용하는 CLU 넉다운은 HSF-1 활성을 유의하게 감소시켰으며(*, p≤0.05; ***, p≤0.001; 도 3c); 이것은 CLU에 의한 HSF-1의 신규한 순방향 공급 조절을 확인해준다. 실제로, CLU의 침묵(silencing)은 Hsp90i-1 또는 Hsp90i-2에 의한 HSF-1 전사 활성-유도를 저해할 뿐만 아니라(도 3c), Hsp27 및 Hsp70 등과 같은 HSF-1 조절된 유전자를 저해한다(도 3d). 이 효과는 세포질에서 HSF-1을 봉쇄하는 CLU 넉다운의 능력에 의해 설명될 수 있다(도 8b).
실시예 3. 단일요법에 비해서 전립선 종양 세포주에서 아폽토시스 증가 시 커스터센 및 Hsp90 저해제를 포함하는 병용 처치의 증가된 역가
Hsp90 저해제는 CLU의 상향 조절을 유도하고 처치 저항(treatment resistance)의 매개체로서 기능하므로(Zoubeidi et al. 2010; Gleave et al., 2005; Zellweger et al., 2003), Hsp90 저해와 조합된 CLU 넉다운이 처치 유효성을 증가시켰는지의 여부를 다음에 평가하였다. LNCaP 세포를 커스터센으로 처리하고, 이어서 Hsp90i-1 또는 Hsp90i-2의 표시된 농도로 처리하였다. 이 조합(즉, 병용)은 Hsp90i-1 또는 Hsp90i-2 유효성을 유의하게 증가시켰으며, 따라서, 대조군 ScrB ASO 및 Hsp90 저해제에 의해 처리된 세포에 비해서 100nM 및 1000nM에서 세포 생존능(viability)을 20%만큼 저감시켰다(*, p<0.05)(도 4a). 이 효과가 부가 혹은 병용 효과인지를 결정하기 위하여, 일정 비율 설계 및 병용 지수(CI) 값을 지니는 용량-의존적 효과를, Chou 및 Talalay의 중앙 효과 원리(Chou et al., 1984)에 따라서 수행하고 산출하였다. 도 4b는 용량 반응 곡선(병용 처치, 커스터센 또는 HSP90i-2 단일요법) 및 병용 지수 플롯을 표시하며, 이는 커스터센 및 HSP90i-2가 커스터센 혹은 Hsp90i-2 저해제 단일요법에 비해서 종양 세포 성장에 대한 조합된 역가를 증대시킨 것을 나타낸다.
게다가, OGX-011은 아폽토시스를 유발하는 Hsp90 저해제의 효과를 강화시킨다(도 4c 및 도 4d). 유세포 분석은, 커스터센이 Hsp90i-1(53%) 혹은 Hsp90i-2(65.4%)와 병용된 경우, 대조군 ScrB ASO(4.2%), 커스터센 단독(17.4%), 대조군 ScrB ASO+Hsp90i-1(18.3%) 또는 대조군 ScrB ASO+Hsp90i-2(24.8%; 도 4c)에 비해서, 아폽토시스 속도(서브G1 분율)가 유의하게 증가한 것(p<0.001)을 나타내었다. 또한, Hsp90i-1 또는 Hsp90i-2와 커스터센의 병용은, 절단된 PARP 및 카스파제-3 발현(도 4c)에 의해 표시된 바와 같이, Hsp90 저해제- 또는 커스터센 단일요법에 비해서, 더욱 카스파제-의존적 아폽토시스를 유발하였다. 카스파제-3 활성의 유의한 증가는, 커스터센이 아폽토시스 속도 증가에 따라 Hsp90 저해에 대해 세포를 감수성으로 하는 것을 확인해준다(도 4d). 병용된 CLU + Hsp90 저해로부터의 감소된 세포 생존능은, 부분적으로는, PC-3과 LNCaP 세포 양쪽에서의 p-Akt 수준뿐만 아니라, LNCaP 세포에서의 AR(및 PSA) 발현(도 4c)의 감소로부터 기인된다.
실시예 4. 생체내 PC-3 이종이식물에서의 커스터센과 Hsp90i-1의 강력한 병용 요법.
Hsp90i-1과 커스터센의 병용 효과는 생체내에서 PC-3 종양에서 평가되었다. PC-3 이종이식물을 보유하는 수컷 누드 마우스를 처치용(커스터센 + Hsp90i-1 대 대조군 ScrB + Hsp90i-1; n=7)으로 무작위로 선택하였다. 커스터센 + Hsp90i-1은 생체내에서 ScrB + Hsp90i-1에 비해서 항종양 효과를 유의하게 증대시켰고, 이는 평균 종양 체적을 대조군 ScrB에 비해서 68일 후 2935.3㎣에서 1176.9㎣로 감소시켰다(**; p≤0.01)(도 5a). 암 특이적 생존율은 커스터센 + Hsp90i-1 병용 대조군에 비해서 유의하게 연장되었다(각각 72일에 71.4% 대 14.3%; *; p≤0.05; 도 5b). 면역화학적 분석은 다른 군에 비해서 커스터센 + Hsp90i-1에 의한 처리 후 CLU, Ki67 및 Akt 발현 감소를 보였다(도 5c). 또한, 커스터센 + Hsp90i-1 처리된 종양은 다른 군에 비해서 증가된 TUNEL 염색에 의해 나타낸 바와 같이 보다 높은 아폽토시스를 지녔다(도 5c).
실시예 5. 생체내에서 LNCaP CRPC 이종이식물에서 커스터센과 Hsp90i-2-PRO의 강력한 병용 요법.
다음에, 커스터센과 Hsp90i-2-PRO의 병용 처치 효과는, 거세 저항성 LNCaP 종양에서 평가되었다. LNCaP 종양을 보유하는 마우스는, PSA값이 50ng/㎖를 초과한 경우에 거세시켰다. 일단 PSA 수준이 거세전 수준 이상 경과하면, 마우스를 비히클 대조군, Hsp90i-2-PRO 단독, Hsp90i-2-PRO + 대조군 ScrB, 또는 Hsp90i-2-PRO + 커스터센(각 군에서 n=10)에 무작위로 할당하였다. Hsp90i-2-PRO + 커스터센으로 처리된 마우스는 다른 모든 군에 비해서 종양 성장에서 유의한 지연을 지녔다(도 6a)(10일에, 각각 대조군에 대해서 265.3㎣ 및 892.7㎣, Hsp90i-2-PRO 단독에 대해서 646.4㎣ 및 Hsp90i-2-PRO + 대조군 ScrB에 대해서 551.56㎣). 처리 후 7주에, 대조군의 모든 마우스를 안락사시키고; Hsp90i-2-PRO + 커스터센 군의 종양 체적은 HSP90i-2-PRO 단독에 대한 것 2483.6㎣ 및 Hsp90i-2-PRO + 대조군 ScrB에 대한 것 2176.4㎣에 비해서 r517.4㎣였다(***, p<0.001; 도 6a).
혈청 PSA 수준은 또한 다른 군에 비해서 커스터센 + Hsp90i-2-PRO를 공급받은 마우스에서 유의하게 낮았다(대략 4배)(***, p<0.001; 도 6B). 병용 커스터센 + Hsp90i-2-PRO군은 비히클 군의 418.7ng/㎖, Hsp90i-2-PRO 단독의 527ng/㎖ 또는 scrB + Hsp90i-2-PRO 군의 480.3ng/㎖에 비해서 42일 후에 120ng/㎖의 평균 PSA 수준을 지녔다. 커스터센 + Hsp90i-2-PRO 병용 군은 다른 군에 비해서 유의하게 증가된 PSA 배가 시간을 지녔고(33.6주; *, p<0.05), 또한 감소된 PSA 속도(13.78ng/㎖/주; *, p<0.05)를 지녔다(PSA 배가 시간: ~2.4주; 속도: ~85ng/㎖/주; 도 6c).
총 생존율은 또한 커스터센 + Hsp90i-2-PRO 병용에 의해 처리된 마우스에서 유의하게 길었다(도 6d). 57일째에, 모든 마우스는, 커스터센 + Hsp90i-2-PRO 병용 군(모든 마우스가 62일 후에 여전히 살아 있었음(p<0.001))에 비해서 대조군, Hsp90i-2-PRO 단독, 혹은 대조군 ScrB + Hsp90i-2-PRO 군에서 높은 종양 부담으로 인해 사망하거나 안락사되었다. 이들 데이터는, HSP90i-2-PRO와 병용하여 커스터센을 이용하여 CLU를 표적화하는 것이 종양 성장을 저해하고 생존율을 단일요법보다 인간 CRPC 이종이식물 모델에서 더욱 유의하게 연장시키는 것을 입증한다.
시험관내 지견과 일치하여, 면역화학적 분석은 다른 군에 비해서 커스터센 + Hsp90i-2-PRO 병용으로 처리 후 감소된 CLU, Ki67, Akt 및 AR 발현을 보였다(도 7a). 면역염색 결과는 웨스턴 블로팅에 의해 입증되었다(도 7b). 또한, 병용 커스터센 + Hsp90i-2-PRO에 의해 처리된 종양은 증가된 TUNEL 염색에 의해 표시된 바와 같이(도 7a) 다른 군에 비해서 보다 높은 아폽토시스 속도를 지녔다. 이들 데이터는, 커스터센 + Hsp90i-2-PRO 처리된 종양의 종양 진행 감소가 저감된 증식 속도뿐만 아니라 증가된 아폽토시스 속도 양쪽 모두에 기인하는 것을 시사한다.
실시예 6. 실시예 1 내지 5에 대한 물질 및 방법.
종양 세포주 및 시약:
인간 PCa 세포주 PC-3은 ATCC(American Type Culture Collection)(2008, 동종효소 분석에 의한 ATCC-인증)에서 구입하고, 5% 소 태아 혈청 및 2m㏖/ℓ L-글루타민으로 보충한 DMEM(인비트로젠 라이프 테크놀로지즈사(Invitrogen-Life Technologies, Inc.)) 중에 유지시켰다. LNCaP 세포는 Leland W.K. Chung 박사(1992, MDACC, 텍사스주의 휴스턴시에 소재)에 의해 호의적으로 제공되었으며, 2009년 7월에 일루미나 게놈 어날라이저 IIx 플랫폼(Illumina Genome Analyzer IIx platform) 상에서 전체-게놈 및 전체-전사체 서열결정에 의해 테스트되고 증명되었다. LNCaP 세포는 5% 소 태아 혈청 및 2m㏖/ℓ L-글루타민으로 보충한 RPMI 1640(인비트로젠 라이프 테크놀로지즈사)에 유지하였다. 모든 세포주를 37℃에서 가습된 5% CO2/대기 분위기에서 배양하였다. 모든 세포주를 소생(resurrection) 후 3개월 미만 동안 계대접종(passage)하였다. LNCaP 세포가 소생되된 각 시각에 AR 및 PSA에 대해서 웨스턴 블로팅 및/또는 실시간 PCR을 수행하였다.
치료제:
Hsp90 저해제인, HSP90i-2(4-(6,6-다이메틸-4-옥소-3-트라이플루오로메틸-4,5,6,7-테트라하이드로-인다졸-1-일)-2-(4-하이드록시-사이클로헥실아미노)-벤즈아마이드) 및 그의 전구체 HSP90i-2-PRO를 각각 시험관내 및 생체내 연구를 위하여 각각 이용하였다. 이들 화합물은, Hsp90의 N-말단 아데노신 트라이포스페이트 결합 부위에 결합하는 새로운 합성 소분자 저해제이며, Hsp90i-2-PRO는 경구적으로 생물학적으로 이용가능하다. 시험관내 연구를 위하여, HSP90i-2를 10mM 스톡 용액(stock solution)에서 다이메틸 설폭사이드(DMSO) 중에 용해시키고, -20℃에서 보존하였다. 생체내 연구를 위하여, HSP90i-2-PRO를 PBS 1% 카복시메틸셀룰로스 및 0.5% 트윈(Tween) 80(인비트로젠 라이프 테크놀로지즈사) 중에서 15mg/㎖로 용해시키고 4℃에서 보존하였다.
HSP90i-1(17-알릴아미노-17-데메톡시겔다나마이신(17-AAG))을 시험관내 및 생체내 연구를 위하여 이용하였다. 이들 연구를 위하여, 17-AAG를 10mM 스톡 용액에서 다이메틸 설폭사이드(DMSO) 중에 용해시키고 -20℃에서 보존하였다.
클러스테린 siRNA 및 안티센스 올리고뉴클레오타이드
siRNA는 앞서 기재된 바와 같이(Sowery et al., 2008) 스크램블 대조군 및 엑손 2에서 인간 CLU 개시 부위에 대응하는 siRNA 서열을 이용하는 다마콘 리서치사(Dharmacon Research, Inc.)(콜로라도주의 라파예트시에 소재)로부터 구입하였다. 2'-O-(2-메톡시)에틸 변성을 지니는 제2세대 안티센스(커스터센) 및 스크램블링된(ScrB) 올리고뉴클레오타이드 및 는 온코제넥스 파마슈티컬즈(OncoGenex Pharmaceuticals)로부터 공급되었다. 커스터센 서열(5'CAGCAGCAGAGTCTTCATCAT-3'; 서열번호 3)은 인간 CLU의 엑손 II에서 개시 부위에 상당한다. ScrB 대조 서열은 5'-CAGCGCTGACAACAGTTTCAT-3'(서열번호 44)였다. 전립선 세포는, 앞서 기재된 프로토콜(Sowery et al., 2008)을 이용해서 siRNA 혹은 올리고뉴클레오타이드로 처리하였다.
세포 증식 및 아폽토시스 검정법:
전립선 세포주를 5% FBS를 지니는 적절한 배지(DMEM 또는 RPMI)에서 평판배양하고, 표시된 농도 및 시간에서 Hsp90i-2-PRO 또는 Hsp90i-1에서 처리하고, 세포 성장은 앞서 기재된 바와 같이(Leung et al., 2000) 크리스탈 바이올렛 검정법을 이용해서 측정하였다. 아폽토시스 세포의 검출 및 정량화는 유세포분석(이하에 기재됨) 및 웨스턴 블로팅 분석에 의해 행하였다. 각 검정법은 세 벌로 반복하였다.
병용 지수(CI)는 CalcuSyn 용량 효과 분석 소프트웨어(바이오소프트사(Biosoft), 영국 캠브리지에 소재)를 이용해서 분석하였다. Chou-Talalay의 다재 약물 효과 방정식(Chou et al., 1984)에 기초한 이 방법은, 광범위한 성장 저해에 걸쳐서 조합된 약물 활성을 계산하는데 적합하다: CI=1, 가성성(additivity); CI>1, 길항작용; CI <1, 병용 효과. CI는 ED50 및 ED75에서 산출되었다.
카스파제-3 활성은 키트 CaspACE 검정 시스템, 형광분석기(Fluorometric)(프로메가사(Promega), 미국 위스콘신주의 메디슨시에 소재)를 이용해서 처리 후 3일에 평가하였다. 총 세포 용해물 50㎍을 실온에서 4시간 동안 카스파제-3 기질 AC-DEVD-AMC에서 인큐베이팅하고, 카스파제-3 활성을 360㎚의 여기 및 460㎚에서의 방출을 지니는 형광계에서 정량하였다.
세포 주기 분석:
전립선암 세포주를 1μM HSP90i-2 또는 HSP90i-1의 부재 혹은 존재에서 72시간 동안 인큐베이팅하고, 트립신화하고 나서, 2회 세척하고, 0.12% 트리톤(Triton) X-100, 0.12mM EDTA 및 100㎍/㎖ 리보뉴클레아제를 함유하는 PBS에서 인큐베이팅하였으며; 각 샘플에 4℃에서 20분 동안 50㎍/㎖ 요오드화프로피듐을 첨가하였다. 세포 주기 분포를, 2N 및 4N DNA 함량에 의거해서, 유세포분석기(베크만 콜터 에픽스 엘리트(Beckman Coulter Epics Elite), 베크만사(Beckman, Inc.), 플로리다주의 마이에미시에 소재)에 의해 분석하였다. 각 검정법은 세 벌로 수행하였다.
웨스턴 블로팅 분석:
배양된 종양 전립선 세포주의 용해물로부터 등량의 단백질(항체에 따름, 5 내지 50㎍)을 함유하는 샘플을 SDS-폴리아크릴아마이드 상에서 전기영동을 실시하고, 나이트로셀룰로스 필터로 옮겼다. 이 필터는 실온에서 1시간 동안 오딧세이 블로킹 버퍼(Odyssey Blocking Buffer)(LI-COR 바이오사이언스즈사(Biosciences))에서 차단하고, 블롯을 4℃에서 1차 항체로 하룻밤 프로빙하여 관심대상 단백질을 검출하였다. 인큐베이션 후, 필터를 세척 버퍼(0.1% 트윈(Tween)을 함유하는 PBS)로 5분 동안 3회 세척하였다. 필터를 이어서 실온에서 1:5,000 희석된 알렉사 플루오르 2차 항체(인비트로젠)로 1시간 동안 인큐베이팅하였다. 특정 단백질을 세척 후 오딧세이 IR 이미징 시스템(ODYSSEY IR imaging system)(LI-COR 바이오사이언스즈사)을 이용해서 검출하였다.
정량적 역전사-PCR:
총 RNA는 배양된 세포로부터 TRIzol 시약(인비트로젠 라이프 테크놀로지즈사(Invitrogen Life Technologies, Inc.))을 이용해서 48시간 처리 후 전체 RNA를 추출하였다. 총 RNA 2㎍은 트랜스크립터 퍼스트 스트랜드 cDNA 합성 키트(Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit)(로슈 어플라이드 사이언스사(Roche Applied Science))를 이용해서 역 전사시켰다. 상보적 DNA(cDNA)의 PCR 증폭의 실시간 모니터링은, SYBR PCR 매스터 믹스(Master Mix)(어플라이드 바이오시스템즈사)를 구비한 ABI PRISM 7900 HT 서열 검출 시스템(어플라이드 바이오시스템즈) 상에서 DNA 프라이머(보충 테이블 S1)를 이용해서 수행하였다. 표적 유전자 발현은 내부 표준으로서 각각의 샘플에서 GAPDH 수준으로 정규화시키고, 비교 주기 역치(cycle threshold: Ct) 방법을 이용해서 표적 mRNA의 상대 정량화를 산출하였다. 각 검정법은 세벌로 수행하였다.
루시페라제 검정법:
LNCaP 및 C4-2 세포(2.5×105)를 6-플레이트 상에 평판배양하고, 리포펙틴(lipofectin)(웰당 6㎕; 인비트로젠 라이프 테크놀로지즈사)를 이용해서 형질주입시켰다. 이용된 총량의 HSE 플라스미드 DNA를 대조군 플라스미드의 첨가에 의해 웰당 1㎍로 정규화시켰다. 형질 주입 후 4시간째에 그리고 48시간 동안 1μM HSP90i-2 또는 HSP90i-1을 첨가하였다. 마이크로플레이트 루미노메터(microplate luminometer)(EG&G Berthold)의 원조로 듀얼-루시페라제 레포터 검정 시스템(Dual-Luciferase Reporter Assay System)(프로메가사(Promega))을 이용해서 HSE-루시페라제 활성을 측정하였다. 모든 실험은 세 벌의 웰에서 수행하였고, 상이한 플라스미드 제제를 이용해서 3회 반복하였다.
면역형광법:
종양 세포를 커버슬립 상에서 성장시키고, 상이한 농도의 HSP90i-2 또는 HSP90i-1로 48시간 동안 처리하였다. 처리 후, 세포를 3% 아세톤으로 보완된 빙냉 메탄올 중에서 -20℃에서 10분 동안 고정시켰다. 세포를 PBS로 3회 세척하고, 0.2% 트리톤(Triton)/PBS로 10분 동안 인큐베이팅하고 나서, 세척하고 30분 동안 3% 무지방 우유 중에서 차단시킨 후 항체를 하룻밤 첨가하여 HSF-1(1:250)을 검출하였다. 항원은 FITC에 결합된 항-마우스 항체(1:500; 30분)를 이용해서 가시화하였다. 현미경사진은 제이스 액시오플란 II 형광 현미경(Zeiss Axioplan II fluorescence microscope)을 이용해서 20배 배율로 촬영한 후, 이미징 소프트웨어(imaging software)(노던 이크립스(Northern Eclipse), 엠픽스 이미징사(Empix Imaging, Inc.))로 분석하였다.
동물 치료:
수컷 무흉선 누드 마우스(할란 스프라그-다우리사(Harlan Sprague-Dawley, Inc.))에 2×106 LNCaP 세포(0.1㎖ 마트리겔 중에 현탁됨; BD 바이오사이언스즈사)를 피하 주사하였다. 일단 종양이 300 내지 500㎣로 성장하거나 PSA 수준이 50ng/㎖ 이상으로 증가하면, 마우스를 거세시켰다. 일단 종양이 거세 저항성으로 진행하면, 마우스를 비히클, Hsp90i-2-PRO 단독, Hsp90i-2-PRO + ScrB ASO 또는 Hsp90i-2-PRO + 커스터센에 무작위로 할당하였다. Hsp90i-2-PRO(전구체, 25㎎/㎏; 0.5% CMC+0.5% 트윈(Tween)-80 중에 조제)를 주당 3회 경구 투여하고, 커스터센 또는 ScrB ASO(15㎎/㎏)를 첫주 동안 1일 1회 이어서 주당 3회 복강내 주입하였다. 각 실험군은 10마리의 마우스로 구성되었다. 종양 체적을 주당 2회 측정하였다(길이×폭×깊이×0.5432). 혈청 PSA를 효소 면역검정법(Abbott IMX, 캐나다 퀘벡주 몬트리올시에 소재)에 의해 결정하였다. PSA 배가 시간(PSAdt)과 속도를 로그-슬로프 방법(log-slope method)(PSAt - PSA초기 × emt)에 의해 계산하였다. 데이터 점은 평균 종양 체적 ± SEM 또는 평균 PSA 농도 ± SEM으로서 표현하였다.
PC-3 종양을 확립시키기 위하여, 2×106 PC-3 세포를 6 내지 8주령의 수컷 무흉선 마우스(할란 스프라그-다우리사)의 옆구리 영역에 피하 접종하였다. 종양이 주입 후 통상 3 내지 4주에 100㎣에 도달하면, 마우스를 Hsp90i-1(25㎎/㎏) + 대조군 ScrB ASO(15㎎/㎏) 또는 Hsp90i-1 + 커스터센(15㎎/㎏)에 의한 처리를 위하여 무작위로 선택하였다. Hsp90i-1을 주당 3회 복강내 주입하고, 커스터센 혹은 ScrB를 첫주 동안 1회/일, 이어서 주당 3회 복강내 주입하였다. 7마리의 마우스로 구성된 각 실험군에 대해서, 종양 체적을 주당 2회 측정하였다. 데이터 점은 평균 종양 체적 ± SEM으로서 표현하였다.
종양 체적이 체중의 10% 이상에 도달하면, 마우스를 희생시키고, 웨스턴 블로팅 분석 및 면역조직화학에 의한 단백질 발현의 평가를 위하여 종양을 수확하였다. 모든 동물 절차는, 적절한 기관 인증 및 동물 보호에 대한 캐나다 협회의 지침에 따라서 수행하였다.
면역조직화학:
면역조직화학 염색은, 적절한 1차 항체를 이용한 종양 샘플의 포르말린-고정되고 파라핀-포매된 4㎛ 절편에 대해서, 효소 표지된 바이오틴 트트렙타비딘 시스템 및 용매 저항성 3,3'-다이아미노베니이딘 맵 키트를 구비한 벤타나 오토스테이너 디스커버 XT(Ventana autostainer Discover XT)(벤타나 메디칼 시스템(Ventana Medical System))를 이용해서 수행되었다. 염색 강도의 모든 비교는 200배 배율에서 행하였다.
통계학적 분석:
모든 시험관내 데이터는 스튜던트 t 테스트(Student t test) 및 만-위트니 테스트(Mann-Whitney test)를 이용해서 평가하였다. 마우스의 종양 체적은 크루스칼-왈리스 테스트(Kruskal-Wallis test)를 이용해서 비교되었다. 총 생존율은 카플란-마이어 곡선을 이용해서 분석되었고, 군들 간의 통계학적 유의성은 로그-랭크 테스트(log-rank test)(Graphpad Prism)를 이용해서 평가되었다. 통계학적 유의성의 수준은 P<0.05에서 설정되었다.
웨스턴 블로팅에 이용된 항체:
PARP(1/1000) 카스파제 3(1/1000), Akt(1/1000), p-Akt(1/500)는 세포 신호전달로부터 기인된다. 사이클린(Cyclin) D1(1/1000), HSP90(1/1000), HSP70(1/1000), 클러스테린(1/1000), AR(1/1000), PSA(1/1000), 및 HSF-1(1/1000)는 산타 크루즈사(Santa Cruz)로부터 입수하였다. HSP27(1/5000)은 어세이즈 디자인즈사(Assays Designs)로부터 입수하였다.
| 정량적 실시간 PCT에 이용된 프라이머 | ||
| 서열명 |
서열 5' 내지 3'
순방향 |
서열 5' 내지 3'
역방향 |
| 클러스테린 | GAGCAGCTGAACGAGCAGTTT (서열번호 45) |
CTTCGCCTTGCGTGAGGT (서열번호 46) |
| Hsp70 | TGCCCTATCCAGATCCTGCTA (서열번호 47) |
GAGCCATCAGACTGAGGAGTGA (서열번호 48) |
| Hsp90 | TTCAGGCCCTTCCCGAAT (서열번호 49) |
TCACTCCTTCCTTGGCAACAT (서열번호 50) |
논의
전립선암은 초기에 항-안드로겐 요법에 반응하지만, 그러나, 거세 저항성 질환의 진행이 번번하게 일어난다. Hsp90의 소분자 저해제는 거세-저항성 전립선암(CRPC) 및 기타 암의 처치에서 유망성을 보이지만, 그러나, 이들 저해제는 약물 유효성을 약화시키는 열 충격 반응을 촉발시킨다. 전립선암에서, 처치 저항은 열 충격 인자 1(HSF-1)의 활성화와 연루된 상보적 기전으로 인해 조기에 나타난다. Hsp90으로부터 일단 방출되면, HSF-1은 핵으로 전좌(translocation)되어, Hsp 유전자의 열 충격 요소(heat shock element: HSE)에 결합하고, Hsp 전사 활성을 증가시킨다(Whitesell et al., 2005). 따라서, Hsp90 저해는 Hsp90, Hsp70, Hsp27 및 클러스테린(CLU)을 포함하는 수개의 Hsp의 발현 증가와 함께 열 충격 반응을 유도하며, 이는 종양 세포 생존 및 처치 저항을 증대시킨다. 이들 분자 샤페론의 상향 조절은 단백질 항상성을 회복시켜 열 내성, 세포 생존, 및 처치 저항을 촉진시킴으로써 스트레스로부터의 세포 회복 역할을 하는 것으로 보고되어 있다(Takayama et al., 2003; Zoubeidi et al., 2010). 여기에서의 데이터는, 이 반응에서의 CLU, 유도를 방지하는 것이 시험관내 및 생체내에서 Hsp90 저해제-유발 CRPC 세포 사멸을 증대시키는 것을 보여준다. 본 명세서에 개시된 바와 같이, CRPC는 커스터센, 및 CLU를 표적화하는 안티센스 약물의 존재 혹은 부재에 있어서 Hsp90 저해제 HSP90i-2-PRO 또는 HSP90i-1로 처리되었다. Hsp90 저해제 단독에 의한 처리는, 열 충격 인자 HSF-1의 핵 전좌 및 전사 활성을 증가시키고, 특히 CLU 발현을 포함하는 열 충격 단백질 발현에서 용량- 및 시간-의존적 증가를 자극시킨다. CLU에서의 처치-유도 증가는 커스터센에 의해 차단되므로, 커스터센과 어느 하나의 Hsp90 저해제의 병용은 커스터센 혹은 Hsp90 저해제 단일요법에 비해서 CRPC 세포 성장 및 아폽토시스에 대한 저해 활성을 증가시켰다. 이들 효과에 수반해서, HSP, Akt, PSA 및 안드로겐 수용체의 발현뿐만 아니라 HSF-1 전사 활성의 감소가 있었다. 인간 CRPC의 이종이식물 모델에서 커스터센을 이용한 Hsp90 저해제의 생체내 평가는, 커스터센이 항종양 효능을 현저하게 강화시켜, Hsp90 저해제 단일요법에 비해서 연장된 생존과 함께 종양 성장의 80% 저해를 초래한 것을 입증한다. 종합하면, 여기에서의 지견은 열 충격 반응 및 CLU의 Hsp90 저해제-유발 활성화가 커스터센에 의해 약화되고, 병용 요법이 CRPC 진행을 지연시키는 동시에 역가를 증가시킨 것을 나타내고 있다.
처치 저항의 발달은 대부분의 암 사망에 대한 하부 토대이고 가장 악성이라는 공통 특성을 지닌다. 처치 저항은, 부분적으로는, 암세포의 아폽토시스 레오스탯(apoptotic rheostat)을 일괄적으로 증가시키는 선택적 치료 압력으로부터 발달한다. 처치 스트레스 후에 상향 조절된 생존 단백질은, bcl-2 단백질 패밀리, 서비딘, 그리고 CLU 및 기타 HSP와 같은 분자 샤페론의 항아폽토시스 멤버를 포함한다(Zellweger et al. 2003).
분자 샤페론은 세포가 스트레스-유도 단백질 응집에 대처하도록 돕고, 또한 세포 신호전달 및 전사 조절 네트워크에서 현저한 역할을 한다. 샤페론은 환경 스트레스가 있을 때 각종 세포 및 유기체의 표현형을 안정화시키는 유전자 버퍼로서 작용하고, 암 진행 및 처치 저항 동안 세포의 다윈 적응도를 증대시킨다(Whitesell et al., 2005). 열 충격 샤페론은 종양원성 변형 및 열-내성과 또한 관련된 고도로 보존된 스트레스 활성화 보호 기전인 열 충격 반응의 주된 성분이다(Dai et al., 2007). 샤페론은, 처치 스트레스 및 저항에서의 관심 대상 발병 영역에서, 잘못 접힌 단백질 및 세포질 세망(endoplasmic reticular: ER) 스트레스 반응을 조절하는데 특히 중요하다. 이 단백질 항상성 네트워크의 치료 조절에 대한 성장 열정은, 암 진행 및 처치 저항과 관련된 신호전달 및 전사 네트워크에서 그들의 다작용적 역할 때문에 합리적인 표적으로서 Hsp 및 CLU를 강조한다. 암세포는 보다 높은 수준의 분자 샤페론을 표현하고, 그들의 변형을 뒷받침하기 위하여 HSF1의 보호적 기능을 불법 복제한다(Dai et al., 2007). 실제로, Hsp90, Hsp70, Hsp27 또는 CLU의 저해제는 모두 암세포 사멸을 유도하고 화학요법을 민감화하는 것으로 보고되어 있었다(Lamoureux et al., 2011; Guo et al., 2005).
클러스테린(CLU)의 증대된 발현은 약제저항, 방사선저항 및 호르몬 저항과 연관되어 있었다(Zellweger et al., 2003; July et al., 2004). CLU는 작은 HSP와 유사한 방식으로 단백질 응집을 저해하는 스트레스-유도 세포보호성 샤페론이고, 그의 프로모터는 전사 인자 HSF-1에 의해 인정된 14-bp 요소를 함유한다(Humphreys et al., 1999). 인간 PCa에서, CLU 수준은 글리슨 등급(Gleason grade) 3 미처치 호르몬-나이브 조직에서 낮지만, 글리슨 점수가 높아짐에 따라서(Steinberg et al., 1997) 그리고 안드로겐 결핍 후 수주 내에 증가한다(July et al., 2002). CLU 발현은 Nkx3.1 넉아웃 마우스에서 전립선 종양 생성의 초기 단계 동안 종양 억제 유전자 Nkx3.1의 소실과 상관관계가 있다(Song et al., 2009). 실험적 및 임상 연구는 CLU를 처치 저항의 발달과 연관시키고, 이때 CLU는 안드로겐 제거, 화학요법 혹은 방사선에 대한 반응에서 처치-유도 세포 사멸을 억제한다(Miyake et al., 2000a; July et al., 2002; Miyake et al., 2000b; Miyake et al., 2000c). 인간 전립선 LNCaP 세포에서의 CLU의 과발현은 호르몬- 또는 화학-요법 후 진행을 촉진시키며(Miyake et al., 2000a; Miyake et al., 2000c), 이는 치료적 저항을 부여하는 처치 스트레스에 의해 상향조절된 항아폽토시스 유전자로서 CLU를 확인해준다. 커스터센은 CLU 발현을 잠재적으로 저해하고 PCa를 포함하는 각종 인간암에서 항암치료의 효능을 증대시키는 현재 최종 단계의 임상 전개에서 제2세대 포스포로티오에이트 안티센스 올리고뉴클레오타이드이다(Zoubeidi et al., 2010, Gleave et al., 2005). CLU를 표적화하는 것은 PCa를 포함하는 각종 인간 암에서 화학요법의 세포독성 효과를 증대시키고 종양 성장을 지연시키지만(Miyake et al., 2005), CLU에 대한 역할은 Hsp90 저해제 처치 및 저항의 맥락에서 특성규명되어 있지 않았다. 본 명세서에 나타나 있는 바와 같이, Hsp90 저해는 증대된 HSF-1 활성 및 CLU 발현과 함께 열 충격 반응을 유도하며, 이는 처치-유도 아폽토시스를 저해하고 처치 저항의 발생을 증대시키는 기능을 한다. 커스터센을 이용하는 CLU의 넉다운은 CRPC에서 Hsp90 저해제의 효과를 강화시킨다.
본 발명의 양상들은, Hsp90 저해제와 함께, 커스터센 등과 같은 클러스테린 발현을 표적화하는 올리고뉴클레오타이드가 전립선암의 치료를 위한 강력한 병용물이라고 하는 예기치 않은 발견에 관한 것이다. Hsp90와 병용된 항클러스테린 요법이 그렇게 강력하다는 발견은, Hsp90가 다수의 세포보호 단백질의 발현을 증가시키는 것으로 알려져 있기 때문에 특히 놀라운 것이다.
HSP90i-2를 포함하는 수개의 Hsp90 저해제는, 각종 임상전 모델에서 강력한 항종양 활성을 지니고(Lamoureux et al., 2001; Chandarlapaty et al., 2008; Okawa et al., 2009) 또한 임상 시험 중에 있다(Lamoureux et al., 2011; Sydor et al., 2006). 종래의 보고와 일치하여(Lamoureux et al., 2011; Cervantes-Gomez et al., 2009), 여기에서의 데이터는 Hsp90 저해제가 전사 인자 HSF-1의 활성화에 의한 스트레스 반응 및 Hsp90 자체, Hsp70 및 CLU의 후속의 증가된 수준을 유도하는 것을 나타낸다. 이 열 충격 반응은 마찬가지로 악티노마이신 D를 이용한 전자 저해가 HSP90i-1-매개 Hsp70 및 Hsp27 발현을 약화시키고 시험관내 HSP90i-1의 효과를 강화시킴에 따라서, 처치 저항의 발생을 증대시킨다(Cervantes-Gomez et al., 2009). 부가적으로, HSF-1을 침묵시키는 것에 의한 스트레스 반응의 저해는, 또한 Hsp90 저해제의 활성을 증가시킨다(Bagatell et al., 2000). 본 명세서에 개시된 실험은, CLU가 Hsp90 저해제 처치에 의해 극적으로 유도되고 CLU 저해제가 최종 단계의 임상 전개 중에 있으므로 이 열 충격 반응에서의 CLU의 역할을 평가하였다.
CLU는 재생, 지방 수송, 보체 조절 및 아폽토시스를 포함하는 많은 다양한 병리생리학 프로세스와 연관되어 있다(Zoubeidi et al. 2010; Rosenberg et al., 1995). CLU 발현은, 호르몬 제거 후의 정상 및 악성 전립선 및 유방 조직 등을 비롯하여, 아폽토시스를 겪고 있는 각종 조직에서 신속하게 상향 조절된다.(Kyprianou et al., 1990; Kyprianou et al., 1991). 이전의 연구는 또한 CRPC를 포함하는 많은 암의 유도 및 진행과 CLU 발현을 연관시키고 있었다(Zoubeidi et al., 2010). 또한, 이종이식물 종양 모델에서의 안드로겐 절제 후의 CLU 상향 조절은 거세 저항성으로의 진행을 촉진시키고, 탁산 화학요법을 비롯하여, 기타 아폽토시스 자극에 대해서 세포 저항을 부여한다(Miyake et al., 2000; Miyake et al., 2001). 이들 축적된 지견과 일치하여(Miyake et al., 2001), 커스터센을 이용하는 CLU의 저해는 PCa 임상전 모델에서 종래뿐만 아니라 분자 표적화 요법을 상승작용적으로 증대시킨다(Sowery et al., 2008). 실제로, 커스터센은, 제II상 연구가 OGX-011이 CRPC 중 도세탁셀과 병용된 경우 인간 전립선암 조직에서 CLU의 90% 초과 저해(Chi et al., 2005)와 7개월 연장된 생존 을 보고함에 따라서(Chi et al., 2008; Chi et al., 2010), 이제 제III상 시험 중에 있다.
여기에서의 데이터는, Hsp90 저해제가 시험관내와 생체내 양쪽 모두에서 CLU 수준을 증가시키는 한편, 클러스테린은 HSP90i-2 또는 HSP90i-1 유도 CLU를 억제하는 것을 나타낸다. 예상되는 바와 같이(Cervantes-Gomez et al., 2009; Bagatell et al., 2000), HSP90i-2 또는 HSP90i-1은 HSP 발현의 상향 조절을 초래하는 HSF-1 전사 활성을 유도한다. 놀랍게도, 본 명세서에 기재된 실험은, CLU 침묵을 제거하는 한편, CLU 과발현이 Hsp90 저해제-유발 HSF-1 전사 활성을 증대시켜, 열 충격 반응 자체 및 HSF-1의 조절에서의 CLU에 대한 역할을 확인하는 것을 밝혀냈다. CLU 넉다운은 Hsp90 저해제에 의한 처리 후에 핵으로의 HSF-1에 대한 전좌를 차단한다. HSF-1 활성에 대한 CLU의 이 효과는, CLU 과발현이 보호되는 한편 CLU 침묵이 Hsp90 저해제의 세포독성을 증대시키므로 생물학적으로 관련있다. 이들 시험관내 결과와 일치하여, 상승효과는 또한 커스터센이 Hsp90 저해제와 병용되는 경우 PC-3 및 LNCaP 모델에서 생체내에서 관찰되었다. 병용 커스터센 + Hsp90 저해제는 PC-3 및 LNCaP 모델에서 CRPC 종양 성장을 유의하게 지연시키고 생존율을 연장시킨다. Hsp90와 CLU 저해의 병용에 의한 아폽토시스 속도의 증가는, 지연된 종양 진행이 처치-유도 아폽토시스의 증대에 연유하는 것을 시사한다. 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드 + Hsp90 저해제의 전신 투여는, PC-3 모델 및 LNCaP 거세-저항성 전립선암에서 각각 대조군 ScrB ASO + Hsp90 저해제에 비해서 종양 성장을 감소시킨다. 이 종양 진행의 저해는 두 전립선암 모델에서의 생존율의 연장을 수반한다. 면역조직화학을 이용하는 TUNEL의 검출에 의한 클러스테린 + Hsp90 저해의 병용 후의 증가된 아폽토시스의 검출은, 병용 요법 후의 지연된 종양 진행이 Hsp90 저해제-유발 아폽토시스의 증대에 연유하는 것을 시사한다. 총괄적으로, 이들 결과는, 처음으로, 열 충격 반응 및 HSF-1에 대한 CLU의 생물학적으로 관련된 순방향 공급 조절 루프를 강조한다.
PSA 수준에 대한 Hsp90 저해제와 병용한 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드의 효과는 본 명세서에서 위에서 개시된 바와 같은 LNCaP 거세-저항성 전립선암 모델에서 조사되었다. 여기에 나타낸 바와 같이, siRNA 혹은 안티센스 약물인 커스터센을 이용해서 CLU를 표적화하는 것은, 전립선암 세포에서 처치-유도 CLU 유도를 억제시키고, Hsp90 저해제-유발 세포 사멸을 증가시켰다. 혈청 PSA 수준은, 안드로겐의 존재 하에 안드로겐 수용체(AR)에 의해 조절된 확립된 유용한 바이오마커(Magklara et al., 2002), 및 화학요법의 효능을 평가하기 위하여 환자의귀중한 추적 툴(tool)이다. 열 충격 반응에 대한 CLU 저해 효과에 부가해서, 거세-감수성, AR-양성 LNCaP 모델의 관찰은 AR 활성 연루 Hsp90 억제 및 병용된 CLU의 다른 가능한 유익을 강조한다. Hsp90 저해는 PSA 발현 감소와 함께 AR을 탈안정화 및 분해시키는 것으로 알려져 있다(Solit et al., 2002; Georget et al., 2002). 생체내에서, 혈청 PSA 수준뿐만 아니라, PSA 배가 시간 및 속도는, PF-04929113 단일요법에 비해서 OGX-011 병용 요법에 의해 유의하게 저감되었다. 혈청 PSA 수준은 화학요법의 효능 평가에 있어서 귀중한 툴인 동시에 확립되고 유용한 AR-조절 바이오마커(Kim et al., 2004)이다. 흥미롭게도, 이 생체내 연구에 이용되는 Hsp90 저해제의 낮은 용량에서, 혈청 PSA 수준에 대한 효과는 명확하지 않다. 병용 요법에 의한 보다 낮은 PAS 수준은 보다 낮은 AR 수준과 상관 관계에 있다. CLU 저해와 보다 낮은 AR 수준 간의 이 상관관계는 다른 AR 샤페론(예컨대, Hsp27, Hsp70, Hsp90, FKBP5.2)의 발현을 조절함에 있어서 HSF-1의 역할 및 HSF-1에 대한 CLU의 조절 루프와 연루될 수 있고, 본 발명자들은 진행중인 실험에서의 분자 기초를 활발하게 탐구하고 있다. CLU가 HSF-1에 의해 전사 활성화되는 것으로 공지되어 있지만(Zoubeidi et al., 2010), 여기에서의 데이터는 또한 CLU가 순방향 공급 루프를 작용시키고 이어서 HSF-1을 활성화시키는 것을 보여준다. CLU 넉다운은 HSF-1 전사 활성을 감소시키고, 그의 핵 전좌를 제거하며, 이어서 HSF-1 넉다운 후에 관찰되던 것과 유사하게, Hsp27, Hsp70 및 Hsp90 발현의 감소를 초래한다(Rossi et al., 2006). 따라서, AR 안정성은 낮아진 샤페론 수준 때문에 저감된다.
항종양 활성의 증가된 역가에 부가해서, 병용 요법은 또한 용량 저감 전략이 독성을 저감시킬 수 있게 한다. 예를 들어, HSP90i-1은 60㎎/㎏/일에서 단일요법으로서 간독성을 유도하는 한편(Glaze et al., 2005), HSP90i-2-PRO는 50㎎/㎏/일에서 체중 소실을 초래하였다. 이전의 연구에서, 단일요법으로서의 50㎎/㎏ HSP90i-2-PRO는 LNCaP CRPC 종양 진행을 저해하였다(Lamoureux et al., 2011). 본 연구에서 이용된 25 ㎎/㎏/일의 하위 치료 용량에서, HSP90i-2-PRO 단일요법은, 종양 체적의 한계적인 유의하지 않은 감소를 보였으며 혈청 PSA 수준에 대한 효과는 없었지만; 그러나, 종양 진행에서의 유의한 지연은 HSP90i-2-PRO가 커스터센과 병용된 경우 이 보다 낮은 용량에서 보였으며, 독성은 관찰되지 않았다.
여기에 개시된 데이터는 Hsp90 저해제에 의해 유도된 스트레스가 HSF-1 활성의 유도에 의해 CLU를 어떻게 조절하는지, 이어서 CLU가 HSF-1 활성, 세포 생존 및 처치 저항을 어떻게 조절하는지 정의하는 것을 돕는다. 본 명세서에서 입증되는 바와 같이, 처음에, 그 CLU 저해는 열 충격 반응 유도 Hsp90 저해제를 제거한다. 이들 관찰은 CLU 저해제가 제III상 임상시험 중에 있으므로 임상적으로 관련이 있고, 약물 저항을 극복하기 위하여 기전-기반 개입(mechanism-based intervention)에 기초하여 새로운 약물 병용을 구축하기 위한 프레임워크를 제공한다. 본 발명은 CRPC에서 환자 성과를 향상시키기 위하여 Hsp90 저해제와 병용하여 커스터센을 이용하는 표적화된 전략의 개발에 관한 것이다.
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caggtcctgg gggaccagac ggtctcagac aatgagctcc aggaaatgtc caatcaggga 300
agtaagtacg tcaataagga aattcaaaat gctgtcaacg gggtgaaaca gataaagact 360
ctcatagaaa aaacaaacga agagcgcaag acactgctca gcaacctaga agaagccaag 420
aagaagaaag aggatgccct aaatgagacc agggaatcag agacaaagct gaaggagctc 480
ccaggagtgt gcaatgagac catgatggcc ctctgggaag agtgtaagcc ctgcctgaaa 540
cagacctgca tgaagttcta cgcacgcgtc tgcagaagtg gctcaggcct ggttggccgc 600
cagcttgagg agttcctgaa ccagagctcg cccttctact tctggatgaa tggtgaccgc 660
atcgactccc tgctggagaa cgaccggcag cagacgcaca tgctggatgt catgcaggac 720
cacttcagcc gcgcgtccag catcatagac gagctcttcc aggacaggtt cttcacccgg 780
gagccccagg atacctacca ctacctgccc ttcagcctgc cccaccggag gcctcacttc 840
ttctttccca agtcccgcat cgtccgcagc ttgatgccct tctctccgta cgagcccctg 900
aacttccacg ccatgttcca gcccttcctt gagatgatac acgaggctca gcaggccatg 960
gacatccact tccatagccc ggccttccag cacccgccaa cagaattcat acgagaaggc 1020
gacgatgacc ggactgtgtg ccgggagatc cgccacaact ccacgggctg cctgcggatg 1080
aaggaccagt gtgacaagtg ccgggagatc ttgtctgtgg actgttccac caacaacccc 1140
tcccaggcta agctgcggcg ggagctcgac gaatccctcc aggtcgctga gaggttgacc 1200
aggaaataca acgagctgct aaagtcctac cagtggaaga tgctcaacac ctcctccttg 1260
ctggagcagc tgaacgagca gtttaactgg gtgtcccggc tggcaaacct cacgcaaggc 1320
gaagaccagt actatctgcg ggtcaccacg gtggcttccc acacttctga ctcggacgtt 1380
ccttccggtg tcactgaggt ggtcgtgaag ctctttgact ctgatcccat cactgtgacg 1440
gtccctgtag aagtctccag gaagaaccct aaatttatgg agaccgtggc ggagaaagcg 1500
ctgcaggaat accgcaaaaa gcaccgggag gagtgagatg tggatgttgc ttttgcacct 1560
acgggggcat ctgagtccag ctccccccaa gatgagctgc agccccccag agagagctct 1620
gcacgtcacc aagtaaccag gccccagcct ccaggccccc aactccgccc agcctctccc 1680
cgctctggat cctgcactct aacactcgac tctgctgctc atgggaagaa cagaattgct 1740
cctgcatgca actaattcaa taaaactgtc ttgtgagctg atcgcttgga gggtcctctt 1800
tttatgttga gttgctgctt cccggcatgc cttcattttg ctatgggggg caggcagggg 1860
ggatggaaaa taagtagaaa caaaaaagca gtggctaaga tggtataggg actgtcatac 1920
cagtgaagaa taaaagggtg aagaataaaa gggatatgat gacaaggttg atccacttca 1980
agaattgctt gctttcagga agagagatgt gtttcaacaa gccaactaaa atatattgct 2040
gcaaatggaa gcttttctgt tctattataa aactgtcgat gtattctgac caaggtgcga 2100
caatctccta aaggaataca ctgaaagtta aggagaagaa tcagtaagtg taaggtgtac 2160
ttggtattat aatgcataat tgatgttttc gttatgaaaa catttggtgc ccagaagtcc 2220
aaattatcag ttttatttgt aagagctatt gcttttgcag cggttttatt tgtaaaagct 2280
gttgatttcg agttgtaaga gctcagcatc ccaggggcat cttcttgact gtggcatttc 2340
ctgtccaccg ccggtttata tgatcttcat acctttccct ggaccacagg cgtttctcgg 2400
cttttagtct gaaccatagc tgggctgcag taccctacgc tgccagcagg tggccatgac 2460
tacccgtggt accaatctca gtcttaaagc tcaggctttt cgttcattaa cattctctga 2520
tagaattctg gtcatcagat gtactgcaat ggaacaaaac tcatctggct gcatcccagg 2580
tgtgtagcaa agtccacatg taaatttata gcttagaata ttcttaagtc actgtccctt 2640
gtctctcttt gaagttataa acaacaaact taaagcttag cttatgtcca aggtaagtat 2700
tttagcatgg ctgtcaagga aattcagagt aaagtcagtg tgattcactt aatgatatac 2760
attaattaga attatggggt cagaggtatt tgcttaagtg atcataattg taaagtatat 2820
gtcacattgt cacattaatg tcacactgtt tcaaaagtta aaaaaaaaaa aaaaaaa 2877
<210> 44
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> Control antisense oligonucleotide sequence.
<400> 44
cagcgctgac aacagtttca t 21
<210> 45
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> Forward primer sequence for clusterin.
<400> 45
gagcagctga acgagcagtt t 21
<210> 46
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> Reverse primer sequence for clusterin
<400> 46
cttcgccttg cgtgaggt 18
<210> 47
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> Forward primer for Hsp70
<400> 47
tgccctatcc agatcctgct a 21
<210> 48
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> Reverse primer sequence for Hsp70
<400> 48
gagccatcag actgaggagt ga 22
<210> 49
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> Forward primer for Hsp90
<400> 49
ttcaggccct tcccgaat 18
<210> 50
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> Reverse primer for Hsp90
<400> 50
tcactccttc cttggcaaca t 21
Claims (33)
- i) 클러스테린 발현(clusterin expression)을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드 및 ii) 하기 구조를 지니는 열 충격 단백질 90(Heat Shock Protein 90: Hsp90) 저해제 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 그의 전구체를, 서로 병용할 경우 각각 포유류 대상체를 치료하는데 유효한 양으로 상기 포유류 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하는 방법:
상기 구조 중,
R1은 H, C1-C14 알킬, C1-C10 할로알킬, C3-C7 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, C1-C6 아실, 아릴 또는 헤테로아릴이되, 각각의 알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴 및 헤테로아릴기는, 독립적으로 C1-C6 알킬, C1-C6 알콕시, 할로겐, 하이드록시, 아미노, 모노- 혹은 다이-(C1-C6)알킬아미노, 나이트로, 할로(C1-C6)알킬, 할로(C1-C6)알콕시 또는 카복스아마이드인 1 내지 4개의 기로 선택적으로 치환되고,
R1이 C1-C14 알킬기인 경우, 상기 알킬기 중의 탄소 원자들 중 5개까지는, 독립적으로 R4, 카보닐, 에테닐, 에티닐, 또는 N, O, S, SO2 혹은 SO로부터 선택된 모이어티로 선택적으로 치환되되, 단, 2개의 O 원자, 2개의 S 원자, 또는 O 및 S 원자는 서로 직접 인접하지 않으며,
R4는
(i) 헤테로아릴,
(ii) 아릴,
(iii) 포화 혹은 불포화 C3-C10 사이클로알킬, 또는
(iv) 포화 혹은 불포화 C2-C10 헤테로사이클로알킬이되,
각각의 아릴, 헤테로아릴, 포화 혹은 불포화 사이클로알킬, 또는 포화 혹은 불포화 헤테로사이클로알킬은, 독립적으로 하이드록시, 할로, 아미노, 사이아노, 카복시, 카복스아마이도, 나이트로, 옥소, -S-(C1-C6) 알킬, -SO2(C1-C6) 알킬, -SO2-아릴, -SO-(C1-C6)알킬, -SO-아릴, -SO2NH2, -SO2NH-(C1-C6)알킬, -SO2NH-아릴, (C1-C6)알콕시, 또는 모노- 혹은 다이-(C1-C10)알킬아미노인 적어도 하나의 기로, 독립적으로, 선택적으로 치환되며; R4는 C6-C10 아릴기, C5-C8 포화 사이클릭기 또는 C4-C10 헤테로사이클로알킬기에 선택적으로 융합되고;
R1은 C1-C10 알킬, C1-C10 할로알킬, C2-C10 알케닐, C2-C10 알키닐, 하이드록시, 카복시, 카복스아마이도, 옥소, 할로, 아미노, 사이아노, 나이트로, -SH, -S-(C1-C6)알킬, -SO2-(C1-C6)알킬, -SO2NH2, -SO2NH(C1-C6)알킬, -SO2NH-아릴, -SO2-아릴, -SO-(C1C6)알킬, -SO2-아릴, C1-C6 알콕시, C2-C10 알케닐옥시, C2-C10 알키닐옥시, 모노- 혹은 다이-(C1-C10)알킬아미노, -C1-C10 알킬-Z, -OC1-C10 알킬-Z, 또는 R5로 임의의 이용가능한 위치에 선택적으로 치환되며,
Z는 ORo 또는 -N(R6)2이고,
각각의 R6은 독립적으로 -H 또는 C1-C6 알킬이거나, 또는 N(R6)2는 피롤리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 아제파닐, 1,3- 혹은 1,4-다이아제파닐, 또는 몰폴리닐을 나타내되, 이들 각각은 하이드록시, 아미노, 아미노알킬, C1-C6 알킬, 모노- 혹은 다이(C1-C6)알킬아미노, C1-C6 알콕시 또는 할로겐으로 선택적으로 치환되며,
Ro는 -H, -C1-C10 알킬, -C2-C10 알케닐, -C2-C10 알키닐, 아릴, 헤테로아릴 또는 -C1-C6 아실이고;
R5는
(1) 헤테로아릴,
(2) 아릴,
(3) 포화 혹은 불포화 C5-C10 사이클로알킬, 또는
(4) 포화 혹은 불포화 C5-C10 헤테로사이클로알킬이며,
R5기는, 독립적으로 하이드록시, 옥소, 할로, 아미노, 사이아노, 나이트로, -SH, -S-(C1-C6)알킬, -SO2-(C1-C6)알킬, -SO2-아릴, -SO-(C1-C6) 알킬, -SO-아릴, -SO2NH2, -SO2NH-(C1-C6) 알킬, -SO2NH-아릴, (C1-C6)알콕시, 또는 모노- 혹은 다이-(C1-C10)알킬아미노인 적어도 하나의 기로 선택적으로 치환되고;
R2는 H, Cl, 할로겐, CF3, CHF2, CH3, C1-C10 알킬 또는 할로(C1-C6)알킬이며;
X는 N 또는 CR3이되,
R3은 H, 할로겐 또는 CH3이다. - 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하는 방법으로서, i) 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드 및 ii) Hsp90i-1 이외의 Hsp90 저해제를, 서로 병용할 경우 각각 상기 포유류 대상체를 치료하는데 유효한 양으로 상기 포유류 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하는 방법.
- 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하는 방법으로서, i) 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드 및 ii) Ka가 50 n㏖/ℓ 미만인 Hsp90α 및 Hsp90β에 결합하는 Hsp90 저해제 또는 그의 전구체를, 서로 병용할 경우 각각 상기 포유류 대상체를 치료하는데 유효한 양으로 상기 포유류 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하는 방법.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암은 안드로겐-비의존형 전립선암인 것인, 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하는 방법.
- 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 올리고뉴클레오타이드의 양과 상기 Hsp90 저해제의 양은, 함께 취할 경우, 각 제제가 단독으로 투여될 경우보다 상기 대상체를 치료하는데 더 유효한 것인, 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하는 방법.
- 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Hsp90 저해제의 양과 병용하는 상기 올리고뉴클레오타이드의 양은 단독으로 투여된 경우 임상적으로 유효한 것보다 적은 것인, 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하는 방법.
- 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 올리고뉴클레오타이드의 양과 병용하는 상기 Hsp90 저해제의 양은 단독으로 투여된 경우 임상적으로 유효한 것보다 적은 것인, 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하는 방법.
- 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 올리고뉴클레오타이드의 양과 상기 Hsp90 저해제의 양은, 함께 취해질 경우, 상기 대상체에서 전립선암의 임상적 증상을 저감시키는데 유효한 것인, 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하는 방법.
- 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 포유류 대상체는 인간인 것인, 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하는 방법.
- 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 올리고뉴클레오타이드는 안티센스 올리고뉴클레오타이드인 것인, 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하는 방법.
- 제10항에 있어서, 상기 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 클러스테린-암호화 mRNA의 번역 개시 부위(translation initiation site) 혹은 종결 부위에 걸쳐 있는 것인, 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하는 방법.
- 제10항에 있어서, 상기 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 서열번호 1 내지 11에 기재된 서열 내의 뉴클레오타이드를 포함하는 것인, 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하는 방법.
- 제11항에 있어서, 상기 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 서열번호 3에 기재된 서열 내의 뉴클레오타이드를 포함하는 것인, 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하는 방법.
- 제13항에 있어서, 상기 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 상기 동일 서열의 비변성 올리고뉴클레오타이드에 대하여 생체내 안정성을 증대시키기 위하여 변성된 것인, 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하는 방법.
- 제14항에 있어서, 상기 올리고뉴클레오타이드는 커스터센(custirsen)인 것인, 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하는 방법.
- 제15항에 있어서, 상기 커스터센의 양이 640㎎ 미만인 것인, 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하는 방법.
- 제16항에 있어서, 상기 커스터센의 양은 480㎎ 미만인 것인, 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하는 방법.
- 제15항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 커스터센의 양은 7일 기간에 한번 정맥내로 투여되는 것인, 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하는 방법.
- 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Hsp90 저해제의 양이 50㎎/㎏ 미만인 것인, 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하는 방법.
- 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Hsp90 저해제의 양이 25㎎/㎏ 이하인 것인, 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하는 방법.
- 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Hsp90 저해제는 Hsp90i-2인 것인, 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하는 방법.
- 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Hsp90 저해제의 전구체가 상기 포유류 대상체에 투여되며, 상기 전구체는 Hsp90i-2-PRO인 것인, 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하는 방법.
- 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Hsp90 저해제의 전구체가 상기 포유류 대상체에 투여되며, 상기 전구체는 Hsp90i-2-PRO2인 것인, 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하는 방법.
- 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 올리고뉴클레오타이드와 상기 Hsp90 저해제의 병용은 전립선암 세포의 증식을 저해하는데 유효한 것인, 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하는 방법.
- 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하는데 이용하기 위한, 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드, 및 하기 구조를 지니는 Hsp90 저해제 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 또는 그의 전구체의 양을 포함하는 약제학적 조성물:
상기 구조 중,
R1은 H, C1-C14 알킬, C1-C10 할로알킬, C3-C7 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, C1-C6 아실, 아릴 또는 헤테로아릴이되, 각각의 알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴 및 헤테로아릴기는, 독립적으로 C1-C6 알킬, C1-C6 알콕시, 할로겐, 하이드록시, 아미노, 모노- 혹은 다이-(C1-C6)알킬아미노, 나이트로, 할로(C1-C6)알킬, 할로(C1-C6)알콕시 또는 카복스아마이드인 1 내지 4개의 기로 선택적으로 치환되고,
R1이 C1-C14 알킬기인 경우, 상기 알킬기 중의 탄소 원자들 중 5개까지는, 독립적으로 R4, 카보닐, 에테닐, 에티닐, 또는 N, O, S, SO2 혹은 SO로부터 선택된 모이어티로 선택적으로 치환되되, 단, 2개의 O 원자, 2개의 S 원자, 또는 O 및 S 원자는 서로 직접 인접하지 않으며,
R4는
(i) 헤테로아릴,
(ii) 아릴,
(iii) 포화 혹은 불포화 C3-C10 사이클로알킬, 또는
(iv) 포화 혹은 불포화 C2-C10 헤테로사이클로알킬이되,
각각의 아릴, 헤테로아릴, 포화 혹은 불포화 사이클로알킬, 또는 포화 혹은 불포화 헤테로사이클로알킬은, 독립적으로 하이드록시, 할로, 아미노, 사이아노, 카복시, 카복스아마이도, 나이트로, 옥소, -S-(C1-C6) 알킬, -SO2(C1-C6) 알킬, -SO2-아릴, -SO-(C1-C6)알킬, -SO-아릴, -SO2NH2, -SO2NH-(C1-C6)알킬, -SO2NH-아릴, (C1-C6)알콕시, 또는 모노- 혹은 다이-(C1-C10)알킬아미노인 적어도 하나의 기로, 독립적으로, 선택적으로 치환되며; R4는 C6-C10 아릴기, C5-C8 포화 사이클릭기 또는 C4-C10 헤테로사이클로알킬기에 선택적으로 융합되고;
R1은 C1-C10 알킬, C1-C10 할로알킬, C2-C10 알케닐, C2-C10 알키닐, 하이드록시, 카복시, 카복스아마이도, 옥소, 할로, 아미노, 사이아노, 나이트로, -SH, -S-(C1-C6)알킬, -SO2-(C1-C6)알킬, -SO2NH2, -SO2NH(C1-C6)알킬, -SO2NH-아릴, -SO2-아릴, -SO-(C1C6)알킬, -SO2-아릴, C1-C6 알콕시, C2-C10 알케닐옥시, C2-C10 알키닐옥시, 모노- 혹은 다이-(C1-C10)알킬아미노, -C1-C10 알킬-Z, -OC1-C10 알킬-Z, 또는 R5로 임의의 이용가능한 위치에 선택적으로 치환되며,
Z는 ORo 또는 -N(R6)2이고,
각각의 R6은 독립적으로 -H 또는 C1-C6 알킬이거나, 또는 N(R6)2는 피롤리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 아제파닐, 1,3- 혹은 1,4-다이아제파닐, 또는 몰폴리닐을 나타내되, 이들 각각은 하이드록시, 아미노, 아미노알킬, C1-C6 알킬, 모노- 혹은 다이(C1-C6)알킬아미노, C1-C6 알콕시 또는 할로겐으로 선택적으로 치환되며,
Ro는 -H, -C1-C10 알킬, -C2-C10 알케닐, -C2-C10 알키닐, 아릴, 헤테로아릴 또는 -C1-C6 아실이고;
R5는
(1) 헤테로아릴,
(2) 아릴,
(3) 포화 혹은 불포화 C5-C10 사이클로알킬, 또는
(4) 포화 혹은 불포화 C5-C10 헤테로사이클로알킬이며,
R5기는, 독립적으로 하이드록시, 옥소, 할로, 아미노, 사이아노, 나이트로, -SH, -S-(C1-C6)알킬, -SO2-(C1-C6)알킬, -SO2-아릴, -SO-(C1-C6) 알킬, -SO-아릴, -SO2NH2, -SO2NH-(C1-C6) 알킬, -SO2NH-아릴, (C1-C6)알콕시, 또는 모노- 혹은 다이-(C1-C10)알킬아미노인 적어도 하나의 기로 선택적으로 치환되고;
R2는 H, Cl, 할로겐, CF3, CHF2, CH3, C1-C10 알킬 또는 할로(C1-C6)알킬이며;
X는 N 또는 CR3이되,
R3은 H, 할로겐 또는 CH3이다. - 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하는데 이용하기 위한, 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드, 및 Hsp90i-1 이외의 Hsp90 저해제의 양을 포함하는 약제학적 조성물.
- 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하는데 이용하기 위한, 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드, 및 Ka가 50 n㏖/ℓ 미만인 Hsp90α 및 Hsp90β에 결합하는 Hsp90 저해제 또는 그의 전구체의 양을 포함하는 약제학적 조성물.
- 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료함에 있어서, 하기 구조를 지니는 Hsp90 저해제 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 그의 전구체와 병용하기 위한 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드:
상기 구조 중,
R1은 H, C1-C14 알킬, C1-C10 할로알킬, C3-C7 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, C1-C6 아실, 아릴 또는 헤테로아릴이되, 각각의 알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴 및 헤테로아릴기는, 독립적으로 C1-C6 알킬, C1-C6 알콕시, 할로겐, 하이드록시, 아미노, 모노- 혹은 다이-(C1-C6)알킬아미노, 나이트로, 할로(C1-C6)알킬, 할로(C1-C6)알콕시 또는 카복스아마이드인 1 내지 4개의 기로 선택적으로 치환되고,
R1이 C1-C14 알킬기인 경우, 상기 알킬기 중의 탄소 원자들 중 5개까지는, 독립적으로 R4, 카보닐, 에테닐, 에티닐, 또는 N, O, S, SO2 혹은 SO로부터 선택된 모이어티로 선택적으로 치환되되, 단, 2개의 O 원자, 2개의 S 원자, 또는 O 및 S 원자는 서로 직접 인접하지 않으며,
R4는
(i) 헤테로아릴,
(ii) 아릴,
(iii) 포화 혹은 불포화 C3-C10 사이클로알킬, 또는
(iv) 포화 혹은 불포화 C2-C10 헤테로사이클로알킬이되,
각각의 아릴, 헤테로아릴, 포화 혹은 불포화 사이클로알킬, 또는 포화 혹은 불포화 헤테로사이클로알킬은, 독립적으로 하이드록시, 할로, 아미노, 사이아노, 카복시, 카복스아마이도, 나이트로, 옥소, -S-(C1-C6) 알킬, -SO2(C1-C6) 알킬, -SO2-아릴, -SO-(C1-C6)알킬, -SO-아릴, -SO2NH2, -SO2NH-(C1-C6)알킬, -SO2NH-아릴, (C1-C6)알콕시, 또는 모노- 혹은 다이-(C1-C10)알킬아미노인 적어도 하나의 기로, 독립적으로, 선택적으로 치환되며; R4는 C6-C10 아릴기, C5-C8 포화 사이클릭기 또는 C4-C10 헤테로사이클로알킬기에 선택적으로 융합되고;
R1은 C1-C10 알킬, C1-C10 할로알킬, C2-C10 알케닐, C2-C10 알키닐, 하이드록시, 카복시, 카복스아마이도, 옥소, 할로, 아미노, 사이아노, 나이트로, -SH, -S-(C1-C6)알킬, -SO2-(C1-C6)알킬, -SO2NH2, -SO2NH(C1-C6)알킬, -SO2NH-아릴, -SO2-아릴, -SO-(C1C6)알킬, -SO2-아릴, C1-C6 알콕시, C2-C10 알케닐옥시, C2-C10 알키닐옥시, 모노- 혹은 다이-(C1-C10)알킬아미노, -C1-C10 알킬-Z, -OC1-C10 알킬-Z, 또는 R5로 임의의 이용가능한 위치에 선택적으로 치환되며,
Z는 ORo 또는 -N(R6)2이고,
각각의 R6은 독립적으로 -H 또는 C1-C6 알킬이거나, 또는 N(R6)2는 피롤리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 아제파닐, 1,3- 혹은 1,4-다이아제파닐, 또는 몰폴리닐을 나타내되, 이들 각각은 하이드록시, 아미노, 아미노알킬, C1-C6 알킬, 모노- 혹은 다이(C1-C6)알킬아미노, C1-C6 알콕시 또는 할로겐으로 선택적으로 치환되며,
Ro는 -H, -C1-C10 알킬, -C2-C10 알케닐, -C2-C10 알키닐, 아릴, 헤테로아릴 또는 -C1-C6 아실이고;
R5는
(1) 헤테로아릴,
(2) 아릴,
(3) 포화 혹은 불포화 C5-C10 사이클로알킬, 또는
(4) 포화 혹은 불포화 C5-C10 헤테로사이클로알킬이며,
R5기는, 독립적으로 하이드록시, 옥소, 할로, 아미노, 사이아노, 나이트로, -SH, -S-(C1-C6)알킬, -SO2-(C1-C6)알킬, -SO2-아릴, -SO-(C1-C6) 알킬, -SO-아릴, -SO2NH2, -SO2NH-(C1-C6) 알킬, -SO2NH-아릴, (C1-C6)알콕시, 또는 모노- 혹은 다이-(C1-C10)알킬아미노인 적어도 하나의 기로 선택적으로 치환되고;
R2는 H, Cl, 할로겐, CF3, CHF2, CH3, C1-C10 알킬 또는 할로(C1-C6)알킬이며;
X는 N 또는 CR3이되,
R3은 H, 할로겐 또는 CH3이다. - 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료함에 있어서, Hsp90i-1 이외의 Hsp90 저해제와 병용하기 위한 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드.
- 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료함에 있어서, Ka가 50 n㏖/ℓ 미만인 Hsp90α 및 Hsp90β에 결합하는 Hsp90 저해제 또는 그의 전구체와 병용하기 위한 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드.
- 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하기 위한 약제학적 조성물로서, i) 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드 및 ii) 하기 구조를 지니는 Hsp90 저해제 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 그의 전구체를, 서로 병용할 경우 각각 상기 포유류 대상체를 치료하는데 유효한 양으로 포함하는, 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하기 위한 약제학적 조성물:
상기 구조 중,
R1은 H, C1-C14 알킬, C1-C10 할로알킬, C3-C7 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, C1-C6 아실, 아릴 또는 헤테로아릴이되, 각각의 알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴 및 헤테로아릴기는, 독립적으로 C1-C6 알킬, C1-C6 알콕시, 할로겐, 하이드록시, 아미노, 모노- 혹은 다이-(C1-C6)알킬아미노, 나이트로, 할로(C1-C6)알킬, 할로(C1-C6)알콕시 또는 카복스아마이드인 1 내지 4개의 기로 선택적으로 치환되고,
R1이 C1-C14 알킬기인 경우, 상기 알킬기 중의 탄소 원자들 중 5개까지는, 독립적으로 R4, 카보닐, 에테닐, 에티닐, 또는 N, O, S, SO2 혹은 SO로부터 선택된 모이어티로 선택적으로 치환되되, 단, 2개의 O 원자, 2개의 S 원자, 또는 O 및 S 원자는 서로 직접 인접하지 않으며,
R4는
(i) 헤테로아릴,
(ii) 아릴,
(iii) 포화 혹은 불포화 C3-C10 사이클로알킬, 또는
(iv) 포화 혹은 불포화 C2-C10 헤테로사이클로알킬이되,
각각의 아릴, 헤테로아릴, 포화 혹은 불포화 사이클로알킬, 또는 포화 혹은 불포화 헤테로사이클로알킬은, 독립적으로 하이드록시, 할로, 아미노, 사이아노, 카복시, 카복스아마이도, 나이트로, 옥소, -S-(C1-C6) 알킬, -SO2(C1-C6) 알킬, -SO2-아릴, -SO-(C1-C6)알킬, -SO-아릴, -SO2NH2, -SO2NH-(C1-C6)알킬, -SO2NH-아릴, (C1-C6)알콕시, 또는 모노- 혹은 다이-(C1-C10)알킬아미노인 적어도 하나의 기로, 독립적으로, 선택적으로 치환되며; R4는 C6-C10 아릴기, C5-C8 포화 사이클릭기 또는 C4-C10 헤테로사이클로알킬기에 선택적으로 융합되고;
R1은 C1-C10 알킬, C1-C10 할로알킬, C2-C10 알케닐, C2-C10 알키닐, 하이드록시, 카복시, 카복스아마이도, 옥소, 할로, 아미노, 사이아노, 나이트로, -SH, -S-(C1-C6)알킬, -SO2-(C1-C6)알킬, -SO2NH2, -SO2NH(C1-C6)알킬, -SO2NH-아릴, -SO2-아릴, -SO-(C1C6)알킬, -SO2-아릴, C1-C6 알콕시, C2-C10 알케닐옥시, C2-C10 알키닐옥시, 모노- 혹은 다이-(C1-C10)알킬아미노, -C1-C10 알킬-Z, -OC1-C10 알킬-Z, 또는 R5로 임의의 이용가능한 위치에 선택적으로 치환되며,
Z는 ORo 또는 -N(R6)2이고,
각각의 R6은 독립적으로 -H 또는 C1-C6 알킬이거나, 또는 N(R6)2는, 피롤리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 아제파닐, 1,3- 혹은 1,4-다이아제파닐, 또는 몰폴리닐을 나타내되, 이들 각각은 하이드록시, 아미노, 아미노알킬, C1-C6 알킬, 모노- 혹은 다이(C1-C6)알킬아미노, C1-C6 알콕시 또는 할로겐으로 선택적으로 치환되며,
Ro는 -H, -C1-C10 알킬, -C2-C10 알케닐, -C2-C10 알키닐, 아릴, 헤테로아릴 또는 -C1-C6 아실이고;
R5는
(1) 헤테로아릴,
(2) 아릴,
(3) 포화 혹은 불포화 C5-C10 사이클로알킬, 또는
(4) 포화 혹은 불포화 C5-C10 헤테로사이클로알킬이며,
R5기는, 독립적으로 하이드록시, 옥소, 할로, 아미노, 사이아노, 나이트로, -SH, -S-(C1-C6)알킬, -SO2-(C1-C6)알킬, -SO2-아릴, -SO-(C1-C6) 알킬, -SO-아릴, -SO2NH2, -SO2NH-(C1-C6) 알킬, -SO2NH-아릴, (C1-C6)알콕시, 또는 모노- 혹은 다이-(C1-C10)알킬아미노인 적어도 하나의 기로 선택적으로 치환되고;
R2는 H, Cl, 할로겐, CF3, CHF2, CH3, C1-C10 알킬 또는 할로(C1-C6)알킬이며;
X는 N 또는 CR3이되,
R3은 H, 할로겐 또는 CH3이다. - 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하기 위한 조성물로서, i) 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드 및 ii) Hsp90i-1 이외의 Hsp90 저해제를, 서로 병용할 경우 각각 상기 포유류 대상체를 치료하는데 유효한 양으로 포함하는, 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하기 위한 조성물.
- 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하기 위한 조성물로서, i) 클러스테린 발현을 저감시키는 올리고뉴클레오타이드 및 ii) Ka가 50 n㏖/ℓ 미만인 Hsp90α 및 Hsp90β에 결합하는 Hsp90 저해제, 또는 그의 전구체를, 서로 병용할 경우 각각 상기 포유류 대상체를 치료하는데 유효한 양으로 포함하는, 전립선암에 걸린 포유류 대상체를 치료하기 위한 조성물.
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