KR20140024672A - Probes and dna chip for identifying place of origin of hairtails, and method for identifying place of origin of hairtails using the same - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 갈치류의 원산지를 특이적으로 판별하기 위한 프로브 조성물, 유전자 칩 그리고 이를 이용한 갈치류의 원산지 판별방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 국내산 갈치류와 중국산 갈치류를 특이적으로 판별할 수 있는 프로브 조성물, 유전자 칩 그리고 이를 이용한 갈치류의 원산지 판별방법에 관한 것이다. The present invention relates to a probe composition, a gene chip, and a method for determining the origin of a hairbrush using the same, and more particularly, to a method for discriminating between domestic and domestic hairbrushes The present invention relates to a probe composition, a gene chip, and a method for determining the origin of a hairbrush using the same.
또한, 본 발명은 추가적으로 파키스탄, 인도, 세네갈, 이란 및/또는 모로코산 갈치류를 원산지별로 판별할 수 있는 프로브 조성물, 유전자 칩 그리고 이를 이용한 갈치류의 원산지 판별방법에 관한 것이다.In addition, the present invention further relates to a probe composition, a gene chip and a method for determining the origin of a hairbrush using the probe composition, which can discriminate, by country of origin, brackish from Pakistan, India, Senegal, Iran and / or Morocco.
특히, 본 발명은 갈치류의 원산지를 간단하고 신속하면서도 정확하게 그리고 특이적으로 판별하여 수입산 갈치류, 특히 중국산 갈치류가 국내산 갈치류로 둔갑되는 것을 수입, 검역 및 유통과정에서 신속하게 차단하는 대책을 마련하게 함으로써 갈치류 유통과정의 투명성을 제고하고 국내 소비자의 이익과 건강을 보호할 수 있는 기술에 관한 것이다.In particular, the present invention provides a method of quickly, precisely and specifically discriminating the origin of the hairbrush from the origin of the imported hairbrush, in particular the Chinese domestic brassiere, to quickly cut off the importation, quarantine and distribution of the domestic brassiere To improve the transparency of the process of distributing haircuts and to protect the interests and health of domestic consumers.
갈치류는 농어목 갈치과의 바닷물고기로서, 몸길이 1m 정도로 몸은 가늘고 길며 납작한 물고기이다. 형태적으로 갈치류는 꼬리의 끝부분이 길어서 끈과 같은 모양이고, 등지느러미는 길어서 등표면을 모두 덮고 있으며 몸빛깔은 은백색인 것을 특징으로 한다. 생태적으로 갈치류는 대륙붕의 모래진흙 바닥에 서식하고, 주로 밤에 활동하며, 육식성으로 플랑크톤, 정어리, 전어, 오징어 등을 먹는 것으로 알려져 있다.The brassicae are seahorse fishes of the perennials, and they are about 1m in length and thin and long and flat. The hairbrush is shaped like a string with a long tail at the end of the tail. It has a long dorsal fin covering the entire surface of the back, and the body color is silver-white. Ecologically, the warts live on the sandy clay bottom of the continental shelf, mainly at night, and are known to eat plankton, sardines, bulgogi, and squids as carnivorous.
우리나라 해역, 특히 제주도 해역에서 잡히는 갈치는 그 맛이 한국인의 입맛에 잘 맞아 다양한 요리로서 조리되고 있고 다른 어류에 비해 상대적으로 고가에 팔리고 있는 어종이다. 그러나, 현재 유통되고 있는 갈치류는 전문가가 아니면 국내산과 수입산을 판별하기가 매우 어렵다. 수입산 갈치류에 비해 국내산 갈치는 고가에 유통되는데, 이러한 가격 차이를 악용하여 일부 수입업자, 유통업자 및 식당 등에서는 값산 수입산 갈치류, 특히 중국산 갈치류를 국내산 갈치로 둔갑시켜 소비자로부터 폭리를 취하는 경우가 비일비재하다. The seaweed caught in the waters of the Korean peninsula, especially in the sea of Jeju Island, is cooked as a variety of dishes that are well suited to the taste of Koreans and are sold at a relatively high price compared to other fish. However, it is very difficult to distinguish between domestic and imported ones, unless they are experts. Domestic horses are distributed at high prices compared to imported horses. Some of the importers, distributors, and restaurants use the price difference to import domestic horses, especially Chinese horses, into domestic horses. Is invisible.
이러한 관점에서 수입산 갈치류의 수입 및 검역 과정에서의 원산지 확인과 유통과정에서의 원산지 표시 의무화가 필요한 실정이나, 검사대상 갈치류에 대해 일일이 유전자 검사를 할 경우 소요되는 비용에 비해 갈치류의 원산지 판별이 비효율적일 뿐만아니라 신선도 유지와 신속한 유통을 요구하는 공급자와 소비자의 요구에 부응하여 신속하게 원산지 판별 및 갈치류 유통과정의 투명성을 제고하기에는 역부족인 문제가 있었다. From this point of view, it is necessary to confirm the origin in the importation and quarantine process of imported haircatcher and to require the indication of origin in the distribution process. However, it is necessary to discriminate the origin of haircrumbs from the cost of genetic testing There has been a problem that it is not possible to promptly identify the origin and to improve the transparency of the process of distributing the hairbrush in response to the demands of suppliers and consumers who demand freshness maintenance and rapid distribution as well as inefficiency.
이와 관련하여, 대한민국 공개특허공보 제10-2011-0077174호에서는 갈치류의 종 판별 또는 이를 통한 원산지 판별 방법과 이를 위한 갈치 종 판별용 폴리뉴클레오티드 프로브, DNA 칩 및 키트를 개시하고 있는데, 상기 대한민국 공개특허공보 제10-2011-0077174호는 한국/중국/일본산 갈치류는 서로에 대해 동일 종(Trichiurus japonicus)으로 판별하고, 인도네시아산 갈치류(Trichiurus lepturus)와 인도산 갈치류(Trichiurus sp.)에 대해서는 한국/중국/일본산 갈치류와는 다른 종으로 판별하는 프로브와 DNA 칩을 개시하고 있다. Korean Patent Laid-Open Publication No. 10-2011-0077174 discloses a polynucleotide probe, a DNA chip, and a kit for determining the species of the hairy species or determining the origin of the hairy breed, Patent Publication No. 10-2011-0077174 discloses that the hairy brackishes from Korea / Chinese / Japanese are distinguished from each other by the same species (Trichiurus japonicus) and distinguish them from the Indonesian brackishes (Trichiurus lepturus) and the Indian brackishes (Trichiurus sp.) , We are introducing a probe and a DNA chip that discriminate between species other than Korean, Chinese, and Japanese.
그러나, 상기 종래 기술은 중국산 농수산물의 무분별한 수입과 중국산 농수산물이 국내산으로 둔갑하는 문제점에 주목하지 않고 있고 중국산 갈치류를 국내산 갈치류와 구별하지 못하는 한계가 있어 실제 수입, 검역 및 유통과정에서 실효성이 낮은 문제가 있었다.However, the above-mentioned prior art does not pay attention to the problem of the reckless imports of Chinese agricultural products and the problem that Chinese agricultural and marine products turn into domestic ones, and it is not effective to distinguish Chinese braids from domestic warts, There was a problem.
따라서, 본 발명이 속하는 기술분야에서는 중국산 농수산물의 무분별한 수입과 중국산 농수산물이 국내산으로 둔갑하는 문제점을 감안하여 수입, 검역 및 유통과정에서 중국산 갈치류와 국내산 갈치류를 간단하고 신속하면서도 정확하게 그리고 특이적으로 판별함으로써 갈치류 유통과정의 투명성을 제고하고 국내 소비자의 이익과 건강을 보호할 수 있는 기술의 제공이 요구되고 있다고 할 수 있다.Therefore, in the technical field to which the present invention belongs, considering the unreasonable import of Chinese agricultural and marine products and the problems that the Chinese agricultural and marine products are turned into domestic products, it is possible to simply, quickly, accurately and specifically It is necessary to provide a technology that can enhance the transparency of the distribution process and protect the interests and health of domestic consumers.
본 발명은 상기와 같은 문제점을 해결하는데 그 목적으로 하는 것으로서, 갈치류의 원산지를 특이적으로 판별하기 위한 프로브 조성물, 유전자 칩 그리고 이를 이용한 갈치류의 원산지 판별방법을 제공하는데 그 목적이 있다.It is an object of the present invention to provide a probe composition, a gene chip, and a method for determining the origin of a hairbrush using the probe composition for specifically identifying the origin of the hairbrush.
구체적으로, 본 발명은 국내산 갈치류와 중국산 갈치류를 특이적으로 판별할 수 있는 프로브 조성물, 유전자 칩 그리고 이를 이용한 갈치류의 원산지 판별방법을 제공하는데 그 목적이 있다. Specifically, the present invention provides a probe composition, a gene chip, and a method for determining the origin of a hairbrush using the probe composition, which can specifically discriminate between domestic and overseas hairbirds.
또한, 본 발명은 추가적으로 파키스탄, 인도, 세네갈, 이란 및/또는 모로코산 갈치류를 원산지별로 판별할 수 있는 프로브 조성물, 유전자 칩 그리고 이를 이용한 갈치류의 원산지 판별방법을 제공하는데 그 목적이 있다. It is another object of the present invention to provide a probe composition, a gene chip, and a method for determining the origin of a hairbrush using the probe composition, which can discriminate, by country of origin, brackish from Pakistan, India, Senegal, Iran and / or Morocco.
나아가, 본 발명은 갈치류의 원산지를 간단하고 신속하면서도 정확하게 그리고 특이적으로 판별하여 수입산 갈치류, 특히 중국산 갈치류가 국내산 갈치류로 둔갑되는 것을 수입, 검역 및 유통과정에서 신속하게 차단하는 대책을 마련하게 함으로써 갈치류 유통과정의 투명성을 제고하고 국내 소비자의 이익과 건강을 보호할 수 있는 기술을 제공하는데 그 목적이 있다. Further, the present invention can easily, quickly, accurately, and specifically discriminate the origin of the hairbrush from the imported hairbrushes, especially the Chinese domestic hairbrushes, to quickly cut off the importation, quarantine and distribution processes The purpose of this study is to provide a technology that can enhance the transparency of the hair-cutting distribution process and protect the interests and health of domestic consumers.
본 발명은 갈치류의 원산지를 간단하고 신속하면서도 정확하게 그리고 특이적으로 판별할 수 있는 프로브 조성물, 유전자 칩 그리고 이를 이용한 갈치류의 원산지 판별방법을 제공한다.The present invention provides a probe composition, a gene chip, and a method for determining the origin of a hairbrush using the probe composition, which can easily, accurately, and specifically discriminate the origin of the hairbrush.
본 발명의 일실시예의 갈치류 원산지 판별용 프로브 조성물은, 국내산 갈치류(Trichiurus japonicus) 판별용 프로브로서 서열번호 3 내지 서열번호 5의 올리고뉴클레오티드들과 이들 올리고뉴클레오티드들에 상보적인 올리고뉴클레오티드들로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 프로브와, 중국산/파키스탄산/인도산 갈치류(Trichiurus lepturus) 판별용 프로브로서 서열번호 6 내지 서열번호 7의 올리고뉴클레오티드들과 이들 올리고뉴클레오티드들에 상보적인 올리고뉴클레오티드들로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 프로브를 포함한다.The probe composition of the present invention for the identification of the source of the glutinous origin is a probe for the identification of Trichiurus japonicus in Korea, which comprises oligonucleotides of SEQ ID NOS: 3 to 5 and oligonucleotides complementary to these oligonucleotides And at least one probe selected from the group consisting of oligonucleotides of SEQ ID NO: 6 to SEQ ID NO: 7 and oligonucleotides complementary to these oligonucleotides as probes for discrimination from Chinese / Pakistani / Indian goat ( Trichiurus lepturus ) And at least one probe selected from the group.
본 발명의 일실시예의 갈치류 원산지 판별용 프로브 조성물은, 중국산/파키스탄산/인도산 갈치류 및 이란산 갈치류와 동일종인 세네갈산 갈치류를 중국산/파키스탄산/인도산 갈치류 및 이란산 갈치류와 구별하여 판별하는 세네갈산 갈치류 판별용 프로브로서 서열번호 8 내지 서열번호 9의 올리고뉴클레오티드들과 이들 올리고뉴클레오티드들에 상보적인 올리고뉴클레오티드들로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 프로브를 더 포함한다. In one embodiment of the present invention, the probe composition for determining the origin of an artificial wolf is selected from the group consisting of Chinese, Pakistani / Indian, and Iranian hairbirds, A probe for distinguishing a Senegal horseshoe crab further comprises at least one probe selected from the group consisting of oligonucleotides of SEQ ID NO: 8 to SEQ ID NO: 9 and oligonucleotides complementary to these oligonucleotides.
또한, 본 발명의 일실시예의 갈치류 원산지 판별용 프로브 조성물은, 중국산/파키스탄산/인도산 갈치류 및 세네갈산 갈치류와 동일종인 이란산 갈치류를 중국산/파키스탄산/인도산 갈치류 및 세네갈산 갈치류와 구별하여 판별하는 이란산 갈치류 판별용 프로브로서 서열번호 10 내지 서열번호 11의 올리고뉴클레오티드들과 이들 올리고뉴클레오티드들에 상보적인 올리고뉴클레오티드들로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 프로브를 더 포함한다. In addition, the probe composition for determining the origin of the hair of the present invention of the present invention can be used as a hairy product of Chinese, Pakistani / Indian, and Senegal, And at least one probe selected from the group consisting of oligonucleotides of SEQ ID NO: 10 to SEQ ID NO: 11 and oligonucleotides complementary to these oligonucleotides .
추가로, 본 발명의 일실시예의 갈치류 원산지 판별용 프로브 조성물은, 모로코산 갈치류(Lepidopus caudatus) 판별용 프로브로서 서열번호 12 내지 서열번호 13의 올리고뉴클레오티드들과 이들 올리고뉴클레오티드들에 상보적인 올리고뉴클레오티드들로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 프로브를 더 포함한다. In addition, the probe composition for identifying an origin of the horseshoe crab according to an embodiment of the present invention is a probe for the identification of a Moroccan hare ( Lepidopus caudatus ), and oligonucleotides of SEQ ID NOs: 12 to 13 and oligonucleotides complementary to these oligonucleotides And at least one probe selected from the group consisting of nucleotides.
본 발명의 일실시예의 갈치류 원산지 판별용 유전자 칩은, 국내산 갈치류(Trichiurus japonicus) 판별용 프로브로서 서열번호 3 내지 서열번호 5의 올리고뉴클레오티드들과 이들 올리고뉴클레오티드들에 상보적인 올리고뉴클레오티드들로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 프로브와, 중국산/파키스탄산/인도산 갈치류(Trichiurus lepturus) 판별용 프로브로서 서열번호 6 내지 서열번호 7의 올리고뉴클레오티드들과 이들 올리고뉴클레오티드들에 상보적인 올리고뉴클레오티드들로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 프로브를 포함한다.The gene chip for discriminating the origin of the horseshoe crab according to an embodiment of the present invention is a probe for the identification of a domestic horseshoe crab ( Trichiurus japonicus ) comprising oligonucleotides of SEQ ID NOS: 3 to 5 and oligonucleotides complementary to these oligonucleotides And at least one probe selected from the group consisting of oligonucleotides of SEQ ID NO: 6 to SEQ ID NO: 7 and oligonucleotides complementary to these oligonucleotides as probes for discrimination from Chinese / Pakistani / Indian goat ( Trichiurus lepturus ) And at least one probe selected from the group.
본 발명의 일실시예의 갈치류 원산지 판별용 유전자 칩은, 중국산/파키스탄산/인도산 갈치류 및 이란산 갈치류와 동일종인 세네갈산 갈치류를 중국산/파키스탄산/인도산 갈치류 및 이란산 갈치류와 구별하여 판별하는 세네갈산 갈치류 판별용 프로브로서 서열번호 8 내지 서열번호 9의 올리고뉴클레오티드들과 이들 올리고뉴클레오티드들에 상보적인 올리고뉴클레오티드들로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 프로브를 더 포함한다. In one embodiment of the present invention, the genetic chip for determining the origin of the hair of the origin of the warts is a genetic chip of Senegal, which is the same species as Chinese, Pakistani / Indian, and Iranian, such as Chinese, Pakistani / A probe for distinguishing a Senegal horseshoe crab further comprises at least one probe selected from the group consisting of oligonucleotides of SEQ ID NO: 8 to SEQ ID NO: 9 and oligonucleotides complementary to these oligonucleotides.
또한, 본 발명의 일실시예의 갈치류 원산지 판별용 유전자 칩은, 중국산/파키스탄산/인도산 갈치류 및 세네갈산 갈치류와 동일종인 이란산 갈치류를 중국산/파키스탄산/인도산 갈치류 및 세네갈산 갈치류와 구별하여 판별하는 이란산 갈치류 판별용 프로브로서 서열번호 10 내지 서열번호 11의 올리고뉴클레오티드들과 이들 올리고뉴클레오티드들에 상보적인 올리고뉴클레오티드들로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 프로브를 더 포함한다. In addition, the gene chip for the identification of the origin of the horses in one embodiment of the present invention is a genetic chip for discriminating the origin of horses from the Chinese, Pakistani / Indian, and Senegal horses, the Chinese horses, the Chinese horses, And at least one probe selected from the group consisting of oligonucleotides of SEQ ID NO: 10 to SEQ ID NO: 11 and oligonucleotides complementary to these oligonucleotides .
추가로, 본 발명의 일실시예의 갈치류 원산지 판별용 유전자 칩은, 모로코산 갈치류(Lepidopus caudatus) 판별용 프로브로서 서열번호 12 내지 서열번호 13의 올리고뉴클레오티드들과 이들 올리고뉴클레오티드들에 상보적인 올리고뉴클레오티드들로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 프로브를 더 포함한다. In addition, the genetic chip for the identification of the origin of the warts in one embodiment of the present invention is a probe for discriminating Moruso L. ( Lepidopus caudatus ), and oligonucleotides of SEQ ID NOs: 12 to 13 and oligonucleotides complementary to these oligonucleotides And at least one probe selected from the group consisting of nucleotides.
본 발명의 일실시예의 갈치류 원산지 판별용 유전자 칩에 있어서, 상기 국내산 갈치류(Trichiurus japonicus) 판별용 프로브, 상기 중국산/파키스탄산/인도산 갈치류 판별용 프로브, 상기 세네갈산 갈치류 판별용 프로브, 상기 이란산 갈치류 판별용 프로브 및/또는 상기 모로코산 갈치류(Lepidopus caudatus) 판별용 프로브는 유리 슬라이드와 같은 동일 기판 상에 마이크로어레이될 수 있다. 상기 기판은 유전자 칩 제작에 일반적으로 사용되는 유리기판 또는 플라스틱 기판인 것이 바람직하다. 또한, 프로브가 마이크로어레이되는 유전자 칩에는 프로브와의 혼성화 및 검출의 정확성을 높일 수 있도록 특정한 염기서열로 표시되는 위치 마커(position marker)를 추가적으로 고정시키는 것이 바람직하다.A gene chip for discriminating the origin of an artificial wisdom of an embodiment of the present invention is a gene chip for discriminating domestic worms ( Trichiurus japonicus ), a probe for discriminating Chinese / Pakistani / Indian worms, a probe for discriminating worms from Senegal, The probe for discriminating the horseshoe crab and / or the probe for discriminating the Lepidopus caudatus may be microarrayed on the same substrate such as a glass slide. It is preferable that the substrate is a glass substrate or a plastic substrate generally used for producing a gene chip. In addition, it is preferable to additionally fix a position marker indicated by a specific nucleotide sequence in the gene chip in which the probe is microarrayed, in order to enhance the hybridization and detection accuracy with the probe.
본 발명의 일실시예의 갈치류의 원산지 판별방법은, 원산지별 갈치류 샘플의 DNA를 PCR을 수행하여 증폭하는 단계와, 상기 PCR 증폭 산물을 전술한 바와 같은 갈치류 원산지 판별용 유전자 칩에 혼성화시키는 단계와, 상기 혼성화 여부에 따라 갈치류 원산지를 판별하는 단계를 포함한다.The method for determining the origin of the hair of the hair of the present invention comprises the steps of amplifying the DNA of the hairy sample of each country of origin by performing PCR, and hybridizing the PCR amplification product to the gene chip for discriminating the origin of the hair of origin as described above And discriminating the origin of the horses according to whether hybridization has occurred or not.
본 발명의 일실시예의 갈치류의 원산지 판별방법에 있어서, 서열번호 3 내지 서열번호 5의 올리고뉴클레오티드들과 이들 올리고뉴클레오티드들에 상보적인 올리고뉴클레오티드들로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 프로브가 상기 PCR 증폭 산물과 혼성화될 때 국내산 갈치류(Trichiurus japonicus)로 판별하고, 서열번호 6 내지 서열번호 7의 올리고뉴클레오티드들과 이들 올리고뉴클레오티드들에 상보적인 올리고뉴클레오티드들로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 프로브가 상기 PCR 증폭 산물과 혼성화될 때 중국산/파키스탄산/인도산 갈치류(Trichiurus lepturus)로 판별하는 것을 특징으로 한다.In at least one probe selected from the group consisting of oligonucleotides of SEQ ID NO: 3 to SEQ ID NO: 5 and oligonucleotides complementary to these oligonucleotides, ( Trichiurus japonicus ) when hybridized with an amplification product, and at least one probe selected from the group consisting of oligonucleotides of SEQ ID NO: 6 to SEQ ID NO: 7 and oligonucleotides complementary to these oligonucleotides When hybridized with the PCR amplification product, it is distinguished as Chinese / Pakistani / Indian ( Trichiurus lepturus ).
또한, 본 발명의 일실시예의 갈치류의 원산지 판별방법에 있어서, 서열번호 8 내지 서열번호 9의 올리고뉴클레오티드들과 이들 올리고뉴클레오티드들에 상보적인 올리고뉴클레오티드들로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 프로브가 상기 PCR 증폭 산물과 혼성화될 때 세네갈산 갈치류로 판별하고, 서열번호 10 내지 서열번호 11의 올리고뉴클레오티드들과 이들 올리고뉴클레오티드들에 상보적인 올리고뉴클레오티드들로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 프로브가 상기 PCR 증폭 산물과 혼성화될 때 이란산 갈치류로 판별하는 것을 특징으로 한다.In addition, in the method for determining the origin of the hair of the hair of the present invention, at least one probe selected from the group consisting of oligonucleotides of SEQ ID NO: 8 to SEQ ID NO: 9 and oligonucleotides complementary to these oligonucleotides When hybridizing with the PCR amplification product, the oligosaccharides of Senegal are discriminated, and at least one probe selected from the group consisting of oligonucleotides of SEQ ID NO: 10 to SEQ ID NO: 11 and oligonucleotides complementary to these oligonucleotides is identified When hybridized with the PCR amplification product, it is distinguished as a silkworm.
추가로, 본 발명의 일실시예의 갈치류의 원산지 판별방법에 있어서, 서열번호 12 내지 서열번호 13의 올리고뉴클레오티드들과 이들 올리고뉴클레오티드들에 상보적인 올리고뉴클레오티드들로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 프로브가 상기 PCR 증폭 산물과 혼성화될 때 Trichiurus japonicus 및 Trichiurus lepturus와 구별하여 모로코산 갈치류(Lepidopus caudatus)로 판별하는 것을 특징으로 한다.In addition, in the method of determining the origin of the hair of the hair of an embodiment of the present invention, at least one probe selected from the group consisting of oligonucleotides of SEQ ID NO: 12 to SEQ ID NO: 13 and oligonucleotides complementary to these oligonucleotides Is distinguished from Trichiurus japonicus and Trichiurus lepturus when it is hybridized with the PCR amplification product, and is distinguished as a Moroccan outburst ( Lepidopus caudatus ).
본 발명의 일실시예의 갈치류 원산지 판별용 키트는, 전술한 바와 같은 갈치류 원산지 판별용 유전자 칩과, 원산지별 갈치류 샘플의 미토콘드리아 COI 유전자를 증폭시키기 위한 서열번호 1 및 2의 프라이머쌍과, 상기 유전자 칩과 혼성화되는 증폭된 유전자 산물을 검출하기 위한 표지물질을 포함한다. The hairpin origin identification kit according to one embodiment of the present invention comprises a genetic chip for identifying the origin of the hair extinction as described above and a pair of primers of SEQ ID NOS: 1 and 2 for amplifying the mitochondrial COI gene of the hair- And a labeling substance for detecting an amplified gene product hybridized with the gene chip.
한편, 본 발명에 있어서, 표지물질은 특정 형광물질에 제한되지 않음은 물론이고, 형광 검출기로서 확인이 가능한 다양한 형광물질이 사용될 수 있으며 효소학적 발색반응 및 동위원소 표지도 가능하다. 예를 들어, 표지물질은 Cy5, Cy3, 비오틴-결합물질, EDANS (5-(2'-아미노에틸)아미노-1-나프탈렌 황산), 테트라메틸로다민(TMR), 테트라메틸로다민 이소시아네이트 (TMRITC), x-로다민 또는 텍사스 레드 등일 수 있으며, 형광물질인 Cy3 또는 Cy5인 것이 바람직하다. 그러나, 본 발명은 이에 제한되는 것이 아니고 당업계에 알려진 다양한 형광물질, 방사성 물질 또는 발광성 물질 등 다양한 표지물질이 사용될 수 있다. On the other hand, in the present invention, the labeling material is not limited to a specific fluorescent material, as well as a variety of fluorescent materials that can be identified as a fluorescence detector can be used, enzymatic coloration reaction and isotope labeling is also possible. For example, the label may be Cy5, Cy3, biotin-binding material, EDANS (5- (2'-aminoethyl) amino-1-naphthalene sulfate), tetramethyltamine (TMR), tetramethyltamine isocyanate (TMRITC ), x-rhodamine or Texas red and the like, and it is preferable that the phosphor is Cy3 or Cy5. However, the present invention is not limited thereto, and various labeling materials such as various fluorescent materials, radioactive materials, or luminescent materials known in the art may be used.
본 발명에 따르면 갈치류의 원산지를 특이적으로 판별할 수 있고, 국내산 갈치류와 중국산 갈치류를 특이적으로 판별할 수 있다. According to the present invention, it is possible to specifically discriminate the origin of the hairbrush, and to specifically discriminate domestic hairbrush and Chinese hairbrush.
또한, 본 발명에 따르면, 추가적으로 파키스탄, 인도, 세네갈, 이란 및/또는 모로코산 갈치류를 원산지별로 판별할 수 있다.In addition, according to the present invention, it is further possible to discriminate, by country of origin, brackish from Pakistan, India, Senegal, Iran and / or Morocco.
따라서, 본 발명은 갈치류의 원산지를 간단하고 신속하면서도 정확하게 그리고 특이적으로 판별하여 수입산 갈치류, 특히 중국산 갈치류가 국내산 갈치류로 둔갑되는 것을 수입, 검역 및 유통과정에서 신속하게 차단하는 대책을 마련하게 함으로써 갈치류 유통과정의 투명성을 제고하고 국내 소비자의 이익과 건강을 보호할 수 있는 장점이 있다.Accordingly, the present invention provides a method for quickly, accurately, and specifically discriminating the origin of the hairbrush from the origin of the imported hairbrush, particularly, the Chinese domestic brassiere, so as to promptly block the importation, quarantine and distribution of the domestic brassiere It is possible to enhance the transparency of the process of distributing haircuts and to protect the interests and health of domestic consumers.
도 1은 본 발명의 일실시예에 따른 갈치류 원산지 판별용 프로브들이 집적된 마이크로어레이 유전자 칩의 레이아웃을 나타낸 것이다.
도 2a 내지 도 2e는 표 2의 갈치류 원산지별 샘플에 대한 PCR 증폭산물을 도 1의 마이크로어레이 유전자 칩에 혼성화시킨 후 확인한 유전자 칩의 형광이미지 사진이다.
도 3a 내지 도 3e는 본 발명의 일실시예의 갈치류 원산지 판별용 프로브들(표 4)가 어레이된 도 1의 유전자 칩에 표 2의 검사대상 갈치류 샘플에 대한 PCR 증폭산물을 혼성화 반응을 시킨 후 형광을 스캐닝하여 분석한 결과(형광강도)를 나타내는 그래프이다.FIG. 1 shows a layout of a microarray gene chip on which probes for the identification of the origin of hairbrushes are integrated according to an embodiment of the present invention.
FIGS. 2A to 2E are fluorescence images of a gene chip obtained by hybridizing a PCR amplification product of a sample of each genus of the hairbrush of Table 2 to the microarray gene chip of FIG. 1.
FIGS. 3A to 3E are graphs showing the results of hybridization of the PCR amplification products of the insect hairy sample of Table 2 to the gene chip of FIG. 1 in which the probes for discriminating origin of origin (Table 4) (Fluorescence intensity) obtained by scanning and analyzing the fluorescence of the post-fluorescence.
이하, 본 발명을 실시예에 기초하여 보다 상세히 기술한다. 본 발명의 하기 실시예는 본 발명을 구체화하기 위한 것일 뿐 본 발명의 권리범위를 제한하거나 한정하는 것이 아님은 물론이다. 본 발명의 상세한 설명 및 실시예로부터 본 발명이 속하는 기술분야의 전문가가 용이하게 유추할 수 있는 것은 본 발명의 권리범위에 속하는 것으로 해석된다. 본 발명에 인용된 참고문헌들은 본 발명에 참고로서 통합된다.
Hereinafter, the present invention will be described in more detail based on examples. It should be understood that the following embodiments of the present invention are only for embodying the present invention and do not limit or limit the scope of the present invention. It will be understood by those of ordinary skill in the art that various changes in form and details may be made therein without departing from the spirit and scope of the invention as defined by the appended claims. The references cited in the present invention are incorporated herein by reference.
실시예 1: 프라이머의 제작Example 1: Preparation of primer
GenBank와 선행연구에서 확보된 미토콘드리아 COI 유전자 정보를 이용하여 국내산 갈치류/일본산 갈치류(Trichiurus japonicus), 중국/파키스탄/인도산 갈치류(Trichiurus lepturus), 세네갈산 갈치류(Trichiurus lepturus), 이란산 갈치류(Trichiurus lepturus) 및 모로코산 갈치류(Lepidopus caudatus)의 샘플에서 추출한 DNA를 증폭할 수 있는 프라이머를 합성하였다. 한편, NCBI BLAST 결과에 따르면, Trichiurus lepturus의 갈치류의 경우 동일종으로 분류되지만, 원산지별(중국/파키스탄/인도산, 세네갈산, 이란산)로 염기서열에 있어 아래의 표 1과 같이 상당한 차이를 나타내었다.
Using genetic information of mitochondrial COIs obtained from GenBank and previous studies, it is possible to identify Korean domestic warts ( Trichiurus japonicus ), Chinese / Pakistani / Indian warts ( Trichiurus lepturus ), Senegalic warts ( Trichiurus lepturu s) A primer capable of amplifying the DNA extracted from the sample of the wild goose ( Trichiurus lepturus ) and the Moroccan hairtail ( Lepidopus caudatus ) was synthesized. On the other hand, according to NCBI BLAST results, Trichiurus lepturus is classified as the same species in the catch , but the nucleotide sequence of each species by origin (China / Pakistan / India, Senegal, Iran) Respectively.
표 1:Table 1:
후술하는 본 실시예에서는 하기의 프라이머들을 사용한다. 이들 프라이머는 한국의 바이오니아社(대전광역시 소재)에 의뢰하여 합성하였다.
In the present embodiment described below, the following primers are used. These primers were synthesized by a request from Korea Bioneer (Daejeon Metropolitan City).
갈치류 원산지별 판별을 위한 PCR 증폭용 프라이머Primers for PCR amplification for discrimination by hairy origin
정방향 프라이머Forward primer
VF2_t1_M13: 5'-CAACCAACCACAAAGACATTGGCAC-3' (서열번호 1)VF2_t1_M13: 5'-CAACCAACCACAAAGACATTGGCAC-3 '(SEQ ID NO: 1)
역방향 프라이머Reverse primer
FishR2_t1_M13: 5'-ACTTCAGGGTGACCGAAGAATCAGAA-3' (서열번호 2)
FishR2_t1_M13: 5'-ACTTCAGGGTGACCGAAGAATCAGAA-3 '(SEQ ID NO: 2)
또한, 대칭 또는 비대칭 중합효소 연쇄반응 (PCR)에 사용하는 서열번호 1의 정방향 프라이머 및 서열번호 2의 역방향 프라이머는 혼성화 (hybridization) 반응을 시킨 이후에 형광으로 확인할 수 있도록 말단에 로다민, cy3, 또는 cy5를 부착시켜서 제작하거나 비오틴(biotin)을 부착시켰으며, 비오틴을 부착시킨 경우에는 혼성화 반응 이후에 스트렙타비딘-사이아닌 (Streptavidin-Cyanine)과 결합하도록 하여 사용하였다. 바람직한 예는 cy3를 프라이머 말단에 부착시키는 것이다.
The forward primer of SEQ ID NO: 1 and the reverse primer of SEQ ID NO: 2 used in the symmetric or asymmetric polymerase chain reaction (PCR) were hybridized with rhodamine, cy3, Or cy5, or attached with biotin. When biotin was attached, it was combined with streptavidin-cyanine after hybridization. A preferred example is to attach cy3 to the primer terminus.
실시예 2: 갈치류 샘플로부터 추출한 DNA에 대한 PCR 증폭반응의 수행Example 2: Performing PCR amplification reaction on DNA extracted from a hairy sample
국내산 갈치류 샘플, 파키스탄산 갈치류 샘플, 세네갈산 갈치류 샘플, 이란산 갈치류 샘플, 중국산 갈치류 샘플, 일본산 갈치류 샘플, 인도산 갈치류 샘플 및 모로코산 갈치류 샘플(하기 표 2의 원산지별 갈치류 생선 자체 샘플)로부터 독일 퀴아젠사 (QIAGEN)의 DNeasy tissue kit를 사용하여 DNA를 추출하였다.
Examples of domestic wrist samples, Pakistan wrist samples, Senegal wart samples, Iran wart samples, Chinese wart samples, Japanese wart samples, Indian wart samples and Moroccan wart samples (Table 2 DNA extracted from Qingdao's Qiagen's DNeasy tissue kit.
표 2: 원산지별 갈치류 샘플 (인덱스 번호 및 원산지 표시)Table 2: Samples of warts by origin (index number and origin mark)
그리고, 아래의 표 3과 같은 PCR 조건 하에서 당업계에 알려진 방법, 예를 들어, DNA 엔진 (DNA Engine)(일본 타카라사 (Takara))을 사용하여 상기 표 2의 갈치류 샘플로부터 추출된 DNA에 대해 서열번호 1 및 서열번호 2의 프라이머 쌍을 사용하여 PCR 증폭반응을 수행하였다. 참고로, 하기 표 3에 표시된 PCR 증폭용 프리믹스는 전술한 DNA 엔진 제조사에서 제공하는 것으로서 예를 들어, PCR 버퍼, dNTP, TaKaRa Ex Taq TM으로 이루어진 것이다. Then, DNAs extracted from the hairy sample of Table 2 were subjected to PCR using the methods known in the art, for example, a DNA engine (Takara Shuzo Co., Ltd.) under PCR conditions as shown in Table 3 below. PCR amplification reaction was carried out using the primer pairs of SEQ ID NO: 1 and SEQ ID NO: 2. For reference, the PCR amplification premix shown in Table 3 below is provided by the above-mentioned DNA engine manufacturer, and includes, for example, PCR buffer, dNTP, and TaKaRa Ex Taq TM .
표 3: PCR 반응조성 및 반응조건Table 3: PCR reaction composition and reaction conditions
상기와 같은 조건 하에서 PCR 증폭반응이 끝난 후, PCR 증폭산물 3㎕에 젤 로딩 버퍼(0.2% orange G, 0.25% xylene cyanol FF, 60% glycerol) 2㎕를 넣고 1㎍/㎖ 에티듐 브로마이드(ethidium bromide)가 함유된 2% 아가로스젤에서 전기영동한 후 UV 트랜스일루미네이터 (UV transilluminator)가 부착된 이미지 애널라이저(Image analyzer)(HITACHI, 일본)에서 PCR 증폭산물의 밴드를 확인하였다.
2 μl of gel loading buffer (0.2% orange G, 0.25% xylene cyanol FF, 60% glycerol) was added to 3 μl of the PCR amplification product under the above conditions and 1 μg / ml of ethidium bromide bromide in a 2% agarose gel, and the band of the PCR amplification product was confirmed in an image analyzer (HITACHI, Japan) equipped with a UV transilluminator.
실시예 3: 갈치류 원산지 판별을 위한 프로브의 제작Example 3: Fabrication of a probe for discriminating the origin of the hairbrush
본 실시예에서는 국내산 갈치류(일본산 갈치와는 동일종 판별됨)와 중국산 갈치류를 특이적으로 판별할 수 있는 프로브들을 합성하였고, 추가로 파키스탄, 인도, 세네갈, 이란 및/또는 모로코산 갈치류를 원산지별로 판별할 수 있는 프로브들도 합성하였다. 혼성화 반응을 위한 프로브의 서열정보는 하기 표 4에 나타낸 것과 같다. 이들 프로브들은 당업계에 일반적으로 알려진 올리고뉴클레오티드 프로브 합성방법에 따라 제작하거나 올리고뉴클레오티드 합성 전문기관(예를 들어, 한국의 바이오니아社(대전광역시 소재))에 의뢰하여 제작하였는데, 알데히드가 코팅된 기판 위에 올리고뉴클레오티드를 공유결합시키기 위하여 모든 프로브의 5' 말단에 아미노 링크를 부착하였으며, 혼성화 반응 시 슬라이드 글라스 위에 집적되어 있는 프로브 간의 공간적인 방해를 최소화시키도록 10 내지 20 개의 올리고(dT)를 부가하여 본 발명의 실시예에서 사용하는 프로브들을 완성하였다.
In this example, probes capable of specifically discriminating domestic goose hair (discriminated from the same species as Japanese goose) and Chinese goat hair were synthesized, and furthermore, probes of Pakistan, India, Senegal, Iran and / or Moroccan Probes were also synthesized to identify the species by country of origin. Sequence information of the probe for the hybridization reaction is shown in Table 4 below. These probes were prepared according to a method for synthesizing oligonucleotide probes generally known in the art or were commissioned by an institute specialized in oligonucleotide synthesis (for example, Bioni Company, Daejeon, Korea). On the substrate coated with aldehyde In order to covalently bind the oligonucleotides, an amino link was attached to the 5 'end of all probes, and 10 to 20 oligos (dT) were added to minimize spatial interference between the probes integrated on the slide glass during the hybridization reaction The probes used in the embodiments of the invention were completed.
표 4: 갈치류 원산지 판별을 위한 프로브 염기서열 Table 4: Probe nucleotide sequence for the identification of the origin of the warts
후술하는 혼성화 반응 실시예에 기술된 바와 같이, 상기 표 2의 원산지별 갈치류 샘플에 대한 PCR 증폭산물과 상기 표 4의 프로브들의 혼성화 여부에 따라 갈치류의 원산지를 특이적으로 판별할 수 있고, 국내산 갈치류와 중국산 갈치류를 특이적으로 판별할 수 있다. As described in the following hybridization reaction examples, it is possible to specifically identify the origin of the haircut according to whether the PCR amplification product of the hairy originating sample of the origin of Table 2 and the hybridization of the probes of Table 4 are listed, It is possible to discriminate between domestic domestic and overseas Chinese army worms.
예를 들어, 검사 대상 갈치류 샘플의 PCR 증폭산물이 서열번호 3 내지 서열번호 5의 프로브들(국내산 갈치류 판별용 프로브들) 중 적어도 하나와 혼성화되고 서열번호 6 내지 서열번호 7의 프로브들과는 혼성화되지 않는 경우 검사대상 갈치류 샘플이 중국산 갈치류가 아니며 국내산 갈치류(Trichiurus japonicus)인 것으로 판정할 수 있게 된다. For example, when the PCR amplification product of the hairless sample to be examined is hybridized with at least one of the probes of SEQ ID NOS: 3 to 5 (domestic probes for distinguishing hairy species) and hybridized with the probes of SEQ ID NOS: 6 to 7 , It can be judged that the sample of the burrows to be inspected is not a Chinese hairbrush and is a domestic hairbrush ( Trichiurus japonicus ).
반면에, 검사 대상 갈치류 샘플의 PCR 증폭산물이 서열번호 3 내지 서열번호 5의 프로브들(국내산 갈치류 판별용 프로브들)과는 혼성화되지 않으면서 서열번호 6 내지 서열번호 7의 프로브들 중 적어도 하나와 혼성화되는 경우 검사대상 갈치류 샘플이 중국산/파키스탄산/인도산 갈치류(Trichiurus lepturus)인 것으로 판정하게 된다. On the other hand, when the PCR amplification product of the insect hairy sample is not hybridized with the probes of SEQ ID NOS: 3 to 5 (domestic hairy species discrimination probes), at least one of the probes of SEQ ID NOS: 6 to 7 In case of hybridization with one, it is judged that the sample of the burrows to be inspected is Trichurus lepturus from Chinese / Pakistani / Indian.
또한, 본 발명의 갈치류 원산지 판별용 프로브 조성물은 동일종의 갈치류인 Trichiurus lepturus에 대해 중국산/파키스탄산/인도산 갈치류와, 세네갈산 갈치류와, 이란산 갈치류를 정확하게 구별하여 판정할 수 있다. 예를 들어 검사 대상 갈치류 샘플의 PCR 증폭산물이 서열번호 6 내지 서열번호 7의 프로브들 중 적어도 하나와 혼성화되는 경우에는 검사대상 갈치류 샘플이 중국산 갈치류/파키스탄산 갈치류/인도산 갈치류(Trichiurus lepturus)인 것으로 판정하고, 검사 대상 갈치류 샘플의 PCR 증폭산물이 서열번호 8 내지 서열번호 9의 프로브들 중 적어도 하나와 혼성화되는 경우에는 검사대상 갈치류 샘플이 세네갈산 갈치류인 것으로 판정하며, 검사 대상 갈치류 샘플의 PCR 증폭산물이 서열번호 10 내지 서열번호 11의 프로브들 중 적어도 하나와 혼성화되는 경우에는 검사대상 갈치류 샘플이 이란산 갈치류인 것으로 판정함으로써 각 원산지별로 정확하게 판정할 수 있다. In addition, the probe composition for determining the origin of the burdock of the present invention can be judged by discriminating accurately from Chinese / Pakistan / Indian salmon, Senegal salmon, and Iranian salmon from the same species of Tridenturus lepturus . For example, when the PCR amplification product of the hairy sample to be tested is hybridized with at least one of the probes of SEQ ID NO: 6 to SEQ ID NO: 7, the hairy sample to be inspected is selected from the group consisting of Chinese braids / Pakistan braids / Trichiurus lepturus ), and when the PCR amplification product of the hairless sample to be tested is hybridized with at least one of the probes of SEQ ID NO: 8 to SEQ ID NO: 9, it is judged that the hairy sample to be examined is a Senegalate hair- When the PCR amplification product of the hairless sample to be examined is hybridized with at least one of the probes of SEQ ID NO: 10 to SEQ ID NO: 11, it is judged that the hairy sample to be inspected is the Iranian hair-killer, so that it can be determined accurately for each origin.
추가로, 본 발명의 갈치류 원산지 판별용 프로브 조성물은 종래기술과는 달리 모로코산 갈치류(Lepidopus caudatus)를 판정할 수 있는데, 검사 대상 갈치류 샘플의 PCR 증폭산물이 서열번호 12 내지 서열번호 13의 프로브들 중 적어도 하나와 혼성화되는 경우에는 검사대상 갈치류 샘플이 모로코산 갈치류(Lepidopus caudatus)인 것으로 판정하게 된다.In addition, the probe composition for determining the origin of the burdock of the present invention can discriminate a Moroccan hairtail ( Lepidopus caudatus ) unlike the prior art, wherein the PCR amplification product of the burdock sample to be tested comprises SEQ ID NO: 12 to SEQ ID NO: It is judged that the hair sample to be examined is a Moroccan hairbrush ( Lepidopus caudatus ).
따라서, 이러한 본 발명의 갈치류 원산지 판별용 프로브 조성물은 갈치류의 원산지를 간단하고 신속하면서도 정확하게 그리고 특이적으로 판별하여 수입산 갈치류, 특히 중국산 갈치류가 국내산 갈치류로 둔갑되는 것을 수입, 검역 및 유통과정에서 신속하게 차단할 수 있는 장점을 제공하게 된다.
Therefore, the inventive probe composition for distinguishing the origin of the hair of the present invention can be used for the purpose of easily, quickly, accurately and specifically discriminating the origin of the hairbrush from the imported hairbrush, especially the Chinese hairbrush, And provides the advantage of being able to quickly block the distribution process.
실시예 4: 마이크로어레이 칩의 제작Example 4 Fabrication of Microarray Chips
마이크로어레이된 유전자 칩의 제작은 당업자에게 널리 알려진 방법을 사용하여 수행된다. Fabrication of microarrayed gene chips is performed using methods well known to those skilled in the art.
먼저, 알데히드 작용기가 처리되어 있는 글라스 위에 실시예 3의 각각의 프로브 염기서열을 가지는 올리고뉴클레오티드의 5'-말단에 아미노 링크를 수식한 다음, 혼성화 반응 시 슬라이드 글라스 위에 집적되어 있는 프로브 간의 공간적인 방해를 최소화시키도록 10 내지 20 개의 올리고(dT)를 부가하여 본 발명의 실시예에서 사용하는 프로브들을 완성하였다. First, an aminolink was modified at the 5'-end of an oligonucleotide having a probe base sequence of Example 3 on a glass having an aldehyde functional group, and then the spatial interference between the probes integrated on the slide glass during the
그리고, 상기 제작된 올리고뉴클레오티드 프로브들이 고정된 마이크로어레이 칩을 제작하기 위하여, CSS-100 시릴화된 슬라이드[Silylated Slide, 셀 어소시에이트사(Cel Associate), 미국] 상에 50μM의 농도로 아미노 링크가 수식되어 있는 프로브와 동일한 양의 3X SSC 용액을 혼합하여 집적하였고, 이를 16시간 동안 실온에서 반응시켰다. 반응이 완료된 다음 슬라이드를 0.1% SDS로 5분 동안 1회 세척하였고, 증류수로 5분 동안 2회 세척하였다. 상기 제작된 칩을 250ml의 소디움 보로하이드리드 용액(0.625g NaBH4, PBS 187.5ml, 100% EtOH 62.5ml)과 5분 동안 반응시킨 다음, 증류수로 5분 동안 2회 세척하였고 800rpm으로 5분 동안 원심분리하였다.In order to prepare the microarray chip in which the oligonucleotide probes were immobilized, the amino link was immobilized on a CSS-100 silylated slide (Cel Associate, USA) at a concentration of 50 μM. The same amount of 3X SSC solution as that of the probe was mixed and accumulated and reacted at room temperature for 16 hours. After the reaction was completed, the slides were washed once with 0.1% SDS for 5 minutes and twice with distilled water for 5 minutes. The prepared chips were reacted with 250 ml of sodium borohydride solution (0.625 g NaBH 4 , 187.5 ml of PBS, 62.5 ml of 100% EtOH) for 5 minutes, then washed twice with distilled water for 5 minutes and then at 800 rpm for 5 minutes And centrifuged.
제작된 마이크로어레이 칩은 4개의 서브-어레이로 구분하고, 혼성화 실험에 있어서 준비된 마이크로어레이 칩이 독립적으로 반응을 진행할 수 있도록 CoverWell 관류 체임버(perfusion chamber)(Grace-Bio Labs, 미국)로 커버하였다. 상기 표 4의 갈치류 원산지 판별용 프로브들(서열번호 3 내지 서열번호 13)이 집적되어 최종적으로 제작된 마이크로어레이 칩의 구성(레이아웃)은 도 1에 도시된 바와 같다. 도 1의 마이크로어레이 칩의 구성에서 프로브 명칭 PM은 위치 마커로서 갈치류 원산지 판별을 위한 미토콘드리아 COI 유전자에 대해 비상동성 서열로 구성된다.
The fabricated microarray chips were divided into four sub-arrays and covered with a CoverWell perfusion chamber (Grace-Bio Labs, USA) so that the microarray chips prepared in the hybridization experiment could be independently reacted. The layout (layout) of the microarray chip in which the probes for the identification of the origin of the stocks of glutinous rice (SEQ ID NO: 3 to SEQ ID NO: 13) in Table 4 are integrated is shown in FIG. In the structure of the microarray chip of Fig. 1, the probe name PM is a position marker and is composed of the non-homologous sequence to the mitochondrial COI gene for the identification of the origin of the warts.
실시예 5: 혼성화 반응Example 5: Hybridization Reaction
실시예 1 및 실시예 2에 따라 증폭되고 표지물질(예를 들어, cy3)이 결합된 PCR 증폭산물을 혼성화 용액(3X SSC, 0.3% Sarcosyl)과 1:9의 비율로 혼합하였다. 이와 같이 준비된 혼성화 용액을 도 1의 마이크로어레이 칩에 반응시켰다.PCR amplification products amplified according to Examples 1 and 2 and bound with a label (eg cy3) were mixed with a hybridization solution (3X SSC, 0.3% Sarcosyl) in a ratio of 1: 9. The thus prepared hybridization solution was reacted with the microarray chip of Fig.
즉, 상기와 같이 준비된 혼성화 용액을 실시예 4에서 제작한 도 1의 마이크로어레이 칩이 포함된 체임버에 도포하여 60℃에서 1시간 동안 반응시켰다. 그런 다음, 1X SSC, 0.1% SDS 용액에서 5분 동안 1차 세척하였고 다시 1X SSC 용액에서 5분 동안 세척하였다. 이후 추가로 0.1X SSC 용액에서 5분 동안 세척하였다. 세척된 슬라이드는 원심분리기에서 800rpm의 속도로 5분 동안 건조시켰다.That is, the hybridization solution prepared as described above was applied to a chamber containing the microarray chip of FIG. 1 prepared in Example 4, and reacted at 60 ° C for 1 hour. It was then first washed for 5 minutes in 1X SSC, 0.1% SDS solution and again for 5 minutes in 1X SSC solution. It was then further washed in 0.1X SSC solution for 5 minutes. The washed slides were dried for 5 minutes at a speed of 800 rpm in a centrifuge.
도 1의 마이크로어레이 칩에 대한 혼성화 결과를 확인하기 위하여, 반응이 완료된 마이크로어레이 칩의 혼성화 신호(형광 신호)는 GenePix 4000B (미국 액손 인스트루먼트사 (Axon Instrument))를 이용하여 PMT(Photomultiplier Tube) 550, 레이저 전력(Laser power) 100%, 5㎛ 해상도(resolution)로 스캔하여 형광 이미지를 저장한 후 각각의 프로브의 양성과 음성을 형광값으로 판단하였다(도 2a 내지 도 2e 참조). 형광 강도 데이터는 GenePix Pro 4.1 소프트웨어(Axon instrument, USA)를 사용하여 분석되었고, 국지적인 배경값은 각 스팟의 평균값에서 감산되었다. 모든 프로브들은 이중으로 스폿팅되어 타겟 프로브들의 신호 강도들은 2개의 스폿의 평균값으로부터 계산되었다(도 3a 내지 도 3e 참조).In order to confirm the hybridization result of the microarray chip of FIG. 1, the hybridization signal (fluorescence signal) of the microarray chip on which the reaction has been completed was performed using a Photomultiplier Tube (PMT) 550 using GenePix 4000B (Axon Instrument, , Laser power of 100% and resolution of 5 mu m, fluorescence images were stored, and positive and negative of each probe were judged as fluorescence values (see FIGS. 2A to 2E). Fluorescence intensity data was analyzed using GenePix Pro 4.1 software (Axon instrument, USA), and the local background value was subtracted from the mean value of each spot. All probes were spotted double and the signal intensities of the target probes were calculated from the average of the two spots (see Figures 3A-3E).
도 2a 내지 도 2e는 본 발명에 따른 갈치류 원산지 판별용 프로브들(표 4 참조)과 표 2의 검사대상 갈치류 샘플의 PCR 증폭산물을 결합시킨 결과사진이며, 도 3a 내지 도 3e는 본 발명의 일실시예의 갈치류 원산지 판별용 프로브들(표 4)이 어레이된 도 1의 유전자 칩에 표 2의 검사대상 갈치류 샘플에 대한 PCR 증폭산물을 혼성화 반응을 시킨 후 형광을 스캐닝하여 분석한 결과(형광강도)를 나타내는 그래프이다. FIGS. 2A to 2E are photographs showing the result of combining the probes for the identification of the origin of the shoots (see Table 4) according to the present invention and the PCR amplification products of the hairless hairy sample of Table 2. FIGS. 3A to 3E are photographs (Table 4) in which the probes for the identification of the origin of the glutinous rice of Example 1 were arrayed was subjected to hybridization reaction of the PCR amplification product of the glutamate samples of Table 2 to the gene chip of FIG. 1, (Fluorescence intensity).
도 2a 및 도 3a에 도시된 바와 같이, 국내산 갈치류 샘플(표 2의 인덱스 번호 1-13 샘플; 한국-1 내지 한국-13 샘플)의 경우, 유전자 칩의 형광을 스캐닝하여 분석한 결과 서열번호 3 내지 서열번호 5의 프로브들(국내산 갈치류 판별용 프로브들)이 어레이된 위치에서 형광 스팟들이 확인되었으며 이들 형광신호 강도는 다른 프로브들의 형광 신호, 특히 서열번호 6 내지 서열번호 7의 프로브들(중국산/파키스탄산/인도산 갈치류 판별용 프로브들)의 형광 신호에 비해 상대적으로 강력하게 분석되어, 본 발명의 갈치류 원산지별 판별용 프로브는 수입산 갈치류, 특히 중국산 갈치류에 대해 국내산 갈치류를 정확하게 구별하여 판정할 수 있음을 확인할 수 있었다.As shown in Figs. 2A and 3A, in the case of a domestic hair extrudate sample (index number 1-13 samples in Table 2; Korea-1 to Korea-13 samples), fluorescence of the gene chip was analyzed and analyzed. 3 to SEQ ID NO: 5 (domestic probes for discrimination), fluorescence spots were observed at positions where the fluorescent signals of the probes of SEQ ID NOS: 6 to 7 The discrimination probe of the present invention has a relatively stronger analysis than the fluorescent signal of the Chinese / Pakistani / Indian haircut discrimination probes). Thus, the discriminating probes according to the present invention can be applied to imported hairbrushes, especially Chinese brazes, It can be confirmed that it can be discriminated accurately.
반면에, 도 2b 및 도 3b에 도시된 바와 같이, 중국산 갈치류 샘플(표 2의 인덱스 번호 40-44 샘플; 중국-1 내지 중국-5 샘플)의 경우, 유전자 칩의 형광을 스캐닝하여 분석한 결과 서열번호 6 내지 서열번호 7의 프로브들(중국산/파키스탄산/인도산 갈치류 판별용 프로브들)이 어레이된 위치에서 형광 스팟들이 강력하게 확인되었으며 이들 형광신호 외에 다른 프로브들의 형광 신호, 특히 서열번호 3 내지 서열번호 5의 프로브들(국내산 갈치류 판별용 프로브들)의 형광 신호는 거의 관찰되지 않았다. On the other hand, as shown in Figs. 2B and 3B, in the case of Chinese goat hair samples (index number 40-44 samples in Table 2; China-1 to China -5 samples), fluorescence of gene chips was analyzed and analyzed Results Fluorescent spots were strongly identified at the locations where the probes of SEQ ID NOS: 6 to 7 (probes for discrimination from Chinese / Pakistan / Indian stocks) were arrayed and the fluorescence signals of other probes other than these fluorescence signals, 3 to SEQ ID NO: 5 (probes for identification of domestic hair extrudate) were hardly observed.
또한, 도 2c 및 도 3c에 도시된 바와 같이, 중국산/파키스탄산/인도산 갈치류 및 이란산 갈치류와 동일종의 갈치류인 Trichiurus lepturus로 분류되는 세네갈산 갈치류 샘플(표 2의 인덱스 번호 19-28 샘플; 세네갈-1 내지 세네갈-10 샘플)의 경우, 유전자 칩의 형광을 스캐닝하여 분석한 결과 서열번호 8 내지 서열번호 9의 프로브들(세네갈산 갈치류 판별용 프로브들)이 어레이된 위치에서 형광 스팟들이 강력하게 확인되었으며 이들 형광신호 외에 다른 프로브들의 형광 신호, 특히 서열번호 6 내지 서열번호 7의 프로브들(중국산/파키스탄산/인도산 갈치류 판별용 프로브들) 및 서열번호 10 내지 서열번호 11의 프로브들(이란산 갈치류 판별용 프로브들)의 형광 신호는 거의 관찰되지 않았다. Also, as shown in Figs. 2C and 3C, a Senegalian hairbrush sample classified as Chinese / Pakistani / Indian haircatcher and Iranian haircatcher and the same type of haircatcher Trichiurus lepturus (index numbers 19-28 in Table 2 (Senegal-1 to Senegal-10 samples), the fluorescence of the gene chip was analyzed and analyzed. As a result, it was found that when the probes of SEQ ID NO: 8 to SEQ ID NO: 9 Spots were strongly confirmed and fluorescence signals of other probes other than these fluorescence signals, particularly the probes of SEQ ID NOS: 6 to 7 (probes for discriminating Chinese / Pakistani / Indian goat species) and the probes of SEQ ID NOS: 10 to 11 The fluorescence signals of the probes (the probes for discriminating the hatchlings of an egg) were rarely observed.
한편, 도 2d 및 도 3d에 도시된 바와 같이, 중국산/파키스탄산/인도산 갈치류 및 세네갈산 갈치류와 동일종의 갈치류인 Trichiurus lepturus로 분류되는 이란산 갈치류 샘플(표 2의 인덱스 번호 29-36 샘플; 이란-1 내지 이란-8 샘플)의 경우, 유전자 칩의 형광을 스캐닝하여 분석한 결과 서열번호 10 내지 서열번호 11의 프로브들(이란산 갈치류 판별용 프로브들)이 어레이된 위치에서 형광 스팟들이 강력하게 확인되었으며 이들 형광신호 외에 다른 프로브들의 형광 신호, 특히 서열번호 6 내지 서열번호 7의 프로브들(중국산/파키스탄산/인도산 갈치류 판별용 프로브들) 및 서열번호 8 내지 서열번호 9의 프로브들(세네갈산 갈치류 판별용 프로브들)의 형광 신호는 거의 관찰되지 않았다. On the other hand, as shown in Figs. 2 (d) and 3 (d), the samples of Chinese brackish / brackish and brackish silver and the brackish , Trichiurus lepturus , 10) to SEQ ID NO: 11 (probes for discriminating the anchovy horses) from the fluorescence of the gene chip, it was found that the fluorescence The spots were strongly confirmed and the fluorescence signals of other probes other than these fluorescence signals, particularly the probes of SEQ ID NOS: 6 to 7 (probes for discrimination of Chinese / Pakistan / Indian salmon) and the probes of SEQ ID NOS: 8 to 9 Fluorescence signals of the probes (probes for discrimination from the Senegal hairbrush) were scarcely observed.
따라서, 본 발명의 갈치류 원산지 판별용 프로브 조성물은 동일종의 갈치류인 Trichiurus lepturus에 대해 중국산/파키스탄산/인도산 갈치류와, 세네갈산 갈치류와, 이란산 갈치류를 정확하게 구별하여 판정할 수 있음을 확인할 수 있었다. Therefore, the probe composition for the identification of the origin of the burdock of the present invention can discriminate the Trichiurus lepturus , which is the same type of burrow , from the Chinese / Pakistan / Indian salmon, Senegal salmon and Iranian salmon I could confirm.
추가로, 도 2e 및 도 3e에 도시된 바와 같이, 모로코산 갈치류 샘플(표 2의 인덱스 번호 56-60 샘플; 모로코-1 내지 모로코-5 샘플)의 경우, 유전자 칩의 형광을 스캐닝하여 분석한 결과 서열번호 12 내지 서열번호 13의 프로브들(모로코산 갈치류 판별용 프로브들)이 어레이된 위치에서 형광 스팟들이 강력하게 확인되었으며 이들 형광신호 외에 다른 프로브들의 형광 신호는 거의 관찰되지 않았다. 따라서, 본 발명의 갈치류 원산지별 판별용 프로브 조성물은 종래기술과는 달리 Trichiurus japonicus 및 Trichiurus lepturus에 대해 모로코산 갈치류(Lepidopus caudatus)를 정확하게 구별하여 판정할 수 있음을 확인할 수 있었다.In addition, as shown in Figs. 2E and 3E, in the case of the Moroccan hair extrudate sample (index number 56-60 sample in Table 2; Morocco-1 to Morocco-5 sample), fluorescence of the gene chip was scanned As a result, fluorescence spots were strongly confirmed at the positions where the probes of SEQ ID NO: 12 to SEQ ID NO: 13 (probes for discriminating Moroccan anchovy) were arrayed, and fluorescence signals of other probes other than these fluorescence signals were hardly observed. Therefore, it was confirmed that the probe composition for the identification of the hairy origin of the present invention can accurately discriminate the Moroccan hairtail ( Lepidopus caudatus ) against Trichiurus japonicus and Trichiurus lepturus , unlike the prior art.
결국, 본 발명의 갈치류 원산지 판별용 프로브 조성물은 갈치류의 원산지를 간단하고 신속하면서도 정확하게 그리고 특이적으로 판별하여 수입산 갈치류, 특히 중국산 갈치류가 국내산 갈치류로 둔갑되는 것을 수입, 검역 및 유통과정에서 신속하게 차단할 수 있는 장점을 제공하며, 이를 활용하여 갈치류 유통과정의 투명성을 제고하고 국내 소비자의 이익과 건강을 보호할 수 있는 대책 수립을 가능케 하는 이점이 있다.As a result, the probe composition for the identification of the origin of the burdock of the present invention can distinguish the origin of the burdock from the origin of the imported burdock, especially Chinese burdock, into domestic domestic burdock by simple, fast, accurate and specific discrimination. It is advantageous to make it possible to prevent the profit and health of the domestic consumers and to establish the measures to protect the domestic consumers.
이상 본 발명을 상기 실시예를 들어 설명하였으나, 본 발명은 이에 제한되는 것이 아니다. 당업자라면 본 발명의 취지 및 범위를 벗어나지 않고 수정, 변경을 할 수 있으며 이러한 수정과 변경 또한 본 발명에 속하는 것임을 알 수 있을 것이다.
Although the present invention has been described with reference to the above embodiments, the present invention is not limited thereto. It will be understood by those skilled in the art that modifications and variations may be made without departing from the spirit and scope of the invention, and that such modifications and variations are also contemplated by the present invention.
<110> GENOCHECK CO.,LTD. REPUBLIC OF KOREA <120> Probes and DNA chip for identifying place of origin of hairtails, and method for identifying place of origin of hairtails using the same <130> P12-0294KR <160> 13 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VF2_t1_M13 Forward Primer <400> 1 caaccaacca caaagacatt ggcac 25 <210> 2 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> FishR2_t1_M13 Reverse Primer <400> 2 acttcagggt gaccgaagaa tcagaa 26 <210> 3 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Kor/Jap-4_AS Probe <400> 3 ggggtagaag tcagaagctc atatta 26 <210> 4 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Kor/Jap-6 Probe <400> 4 acaatactcc taactgaccg aaatct 26 <210> 5 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Kor/Jap-9 Probe <400> 5 cccactagct gggaatctag cac 23 <210> 6 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Pak/Ind/chi-3 Probe <400> 6 taactatctt ctccctccat ctggca 26 <210> 7 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Pak/Ind/chi-6_AS Probe <400> 7 tccaattatt agggggacga gtcagt 26 <210> 8 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> sen-3 Probe <400> 8 cttcttcttc tagcttcttc tggagt 26 <210> 9 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> sen-4_AS Probe <400> 9 ctgtaacgat aacattgtaa atttgg 26 <210> 10 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Ira-1 Probe <400> 10 gccggaatta caatgcttct aactga 26 <210> 11 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Ira-3 Probe <400> 11 tcttttccct ccatttagca ggaatt 26 <210> 12 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Mor-2 Probe <400> 12 tacagccatc cttttacttc tgtccc 26 <210> 13 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Mor-3 Probe <400> 13 cccttattcg tgtggtccgt attaat 26 <110> GENOCHECK CO., LTD. REPUBLIC OF KOREA <120> Probes and DNA chip for identifying place of origin of hairtails, and method for identifying place of origin of hairtails using the same <130> P12-0294KR <160> 13 <170> Kopatentin 1.71 <210> 1 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VF2_t1_M13 Forward Primer <400> 1 caaccaacca caaagacatt ggcac 25 <210> 2 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> FishR2_t1_M13 Reverse Primer <400> 2 acttcagggt gaccgaagaa tcagaa 26 <210> 3 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Kor / Jap-4_AS Probe <400> 3 ggggtagaag tcagaagctc atatta 26 <210> 4 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Kor / Jap-6 Probe <400> 4 acaatactcc taactgaccg aaatct 26 <210> 5 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Kor / Jap-9 Probe <400> 5 cccactagct gggaatctag cac 23 <210> 6 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Pak / Ind / chi-3 Probe <400> 6 taactatctt ctccctccat ctggca 26 <210> 7 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Pak / Ind / chi-6_AS Probe <400> 7 tccaattatt agggggacga gtcagt 26 <210> 8 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> sen-3 Probe <400> 8 cttcttcttc tagcttcttc tggagt 26 <210> 9 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> sen-4_AS Probe <400> 9 ctgtaacgat aacattgtaa atttgg 26 <210> 10 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Ira-1 Probe <400> 10 gccggaatta caatgcttct aactga 26 <210> 11 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Ira-3 Probe <400> 11 tcttttccct ccatttagca ggaatt 26 <210> 12 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Mor-2 Probe <400> 12 tacagccatc cttttacttc tgtccc 26 <210> 13 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Mor-3 Probe <400> 13 cccttattcg tgtggtccgt attaat 26
Claims (14)
중국산/파키스탄산/인도산 갈치류(Trichiurus lepturus) 판별용 프로브로서 서열번호 6 내지 서열번호 7의 올리고뉴클레오티드들과 이들 올리고뉴클레오티드들에 상보적인 올리고뉴클레오티드들로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 프로브를 포함하는 갈치류 원산지 판별용 프로브 조성물.A probe for discriminating Trichiurus japonicus in Korea, at least one probe selected from the group consisting of oligonucleotides of SEQ ID NO: 3 to SEQ ID NO: 5 and oligonucleotides complementary to these oligonucleotides,
6 to 9 and oligonucleotides complementary to these oligonucleotides as a probe for discriminating Trichurus lepturus from Chinese / Pakistani / Indian ( Trichiurus lepturus ), and at least one probe selected from the group consisting of oligonucleotides complementary to these oligonucleotides A probe composition for discriminating the origin of hair.
중국산/파키스탄산/인도산 갈치류 및 이란산 갈치류와 동일종인 세네갈산 갈치류를 중국산/파키스탄산/인도산 갈치류 및 이란산 갈치류와 구별하여 판별하는 세네갈산 갈치류 판별용 프로브로서 서열번호 8 내지 서열번호 9의 올리고뉴클레오티드들과 이들 올리고뉴클레오티드들에 상보적인 올리고뉴클레오티드들로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 프로브를 더 포함하는 갈치류 원산지 판별용 프로브 조성물.The method of claim 1,
As a probe for distinguishing Senegal hairbirds from Chinese, Pakistani and Indian hairbirds and Iranian hairbirds distinguished from Chinese, Pakistani / Indian and Brazilian hairbirds, And at least one probe selected from the group consisting of oligonucleotides of SEQ ID NO: 9 and oligonucleotides complementary to these oligonucleotides.
중국산/파키스탄산/인도산 갈치류 및 세네갈산 갈치류와 동일종인 이란산 갈치류를 중국산/파키스탄산/인도산 갈치류 및 세네갈산 갈치류와 구별하여 판별하는 이란산 갈치류 판별용 프로브로서 서열번호 10 내지 서열번호 11의 올리고뉴클레오티드들과 이들 올리고뉴클레오티드들에 상보적인 올리고뉴클레오티드들로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 프로브를 더 포함하는 갈치류 원산지 판별용 프로브 조성물.The method of claim 1,
A probe for the identification of an antelope from the Chinese, Pakistani, and Indian braids and Senegal from the Chinese, Pakistani, and Indian braids and Senegal, And at least one probe selected from the group consisting of oligonucleotides of SEQ ID NO: 11 and oligonucleotides complementary to these oligonucleotides.
모로코산 갈치류(Lepidopus caudatus) 판별용 프로브로서 서열번호 12 내지 서열번호 13의 올리고뉴클레오티드들과 이들 올리고뉴클레오티드들에 상보적인 올리고뉴클레오티드들로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 프로브를 더 포함하는 갈치류 원산지 판별용 프로브 조성물.4. The method according to any one of claims 1 to 3,
A Lepidopus caudatus discriminating probe comprising at least one probe selected from the group consisting of oligonucleotides of SEQ ID NO: 12 to SEQ ID NO: 13 and oligonucleotides complementary to these oligonucleotides, A probe composition for discriminating origin.
중국산/파키스탄산/인도산 갈치류(Trichiurus lepturus) 판별용 프로브로서 서열번호 6 내지 서열번호 7의 올리고뉴클레오티드들과 이들 올리고뉴클레오티드들에 상보적인 올리고뉴클레오티드들로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 프로브를 포함하는 갈치류 원산지 판별용 유전자 칩.A probe for discriminating Trichiurus japonicus in Korea, at least one probe selected from the group consisting of oligonucleotides of SEQ ID NO: 3 to SEQ ID NO: 5 and oligonucleotides complementary to these oligonucleotides,
6 to 9 and oligonucleotides complementary to these oligonucleotides as a probe for discriminating Trichurus lepturus from Chinese / Pakistani / Indian ( Trichiurus lepturus ), and at least one probe selected from the group consisting of oligonucleotides complementary to these oligonucleotides Genetic chip for the identification of the origin of the burdock.
중국산/파키스탄산/인도산 갈치류 및 이란산 갈치류와 동일종인 세네갈산 갈치류를 중국산/파키스탄산/인도산 갈치류 및 이란산 갈치류와 구별하여 판별하는 세네갈산 갈치류 판별용 프로브로서 서열번호 8 내지 서열번호 9의 올리고뉴클레오티드들과 이들 올리고뉴클레오티드들에 상보적인 올리고뉴클레오티드들로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 프로브를 더 포함하는 갈치류 원산지 판별용 유전자 칩.6. The method of claim 5,
As a probe for distinguishing Senegal hairbirds from Chinese, Pakistani and Indian hairbirds and Iranian hairbirds distinguished from Chinese, Pakistani / Indian and Brazilian hairbirds, And at least one probe selected from the group consisting of oligonucleotides of SEQ ID NO: 9 and oligonucleotides complementary to these oligonucleotides.
중국산/파키스탄산/인도산 갈치류 및 세네갈산 갈치류와 동일종인 이란산 갈치류를 중국산/파키스탄산/인도산 갈치류 및 세네갈산 갈치류와 구별하여 판별하는 이란산 갈치류 판별용 프로브로서 서열번호 10 내지 서열번호 11의 올리고뉴클레오티드들과 이들 올리고뉴클레오티드들에 상보적인 올리고뉴클레오티드들로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 프로브를 더 포함하는 갈치류 원산지 판별용 유전자 칩.6. The method of claim 5,
A probe for the identification of an antelope from the Chinese, Pakistani, and Indian braids and Senegal from the Chinese, Pakistani, and Indian braids and Senegal, And at least one probe selected from the group consisting of oligonucleotides of SEQ ID NO: 11 and oligonucleotides complementary to these oligonucleotides.
모로코산 갈치류(Lepidopus caudatus) 판별용 프로브로서 서열번호 12 내지 서열번호 13의 올리고뉴클레오티드들과 이들 올리고뉴클레오티드들에 상보적인 올리고뉴클레오티드들로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 프로브를 더 포함하는 갈치류 원산지 판별용 유전자 칩.6. The method of claim 5,
A Lepidopus caudatus discriminating probe comprising at least one probe selected from the group consisting of oligonucleotides of SEQ ID NO: 12 to SEQ ID NO: 13 and oligonucleotides complementary to these oligonucleotides, Genetic chip for discrimination of origin.
상기 PCR 증폭 산물을 청구항 제5항 내지 제8항 중 어느 한 항에 정의된 갈치류 원산지 판별용 유전자 칩에 혼성화시키는 단계와,
상기 혼성화 여부에 따라 갈치류 원산지를 판별하는 단계를 포함하는 갈치류의 원산지 판별방법.Amplifying the DNA of the cutlass sample by place of origin by PCR;
Hybridizing the PCR amplification product to a gene chip for identification of an origin of warts as defined in any one of claims 5 to 8,
And determining the origin of the hairbrush according to whether hybridization has occurred or not.
서열번호 3 내지 서열번호 5의 올리고뉴클레오티드들과 이들 올리고뉴클레오티드들에 상보적인 올리고뉴클레오티드들로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 프로브가 상기 PCR 증폭 산물과 혼성화될 때 국내산 갈치류(Trichiurus japonicus)로 판별하고,
서열번호 6 내지 서열번호 7의 올리고뉴클레오티드들과 이들 올리고뉴클레오티드들에 상보적인 올리고뉴클레오티드들로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 프로브가 상기 PCR 증폭 산물과 혼성화될 때 중국산/파키스탄산/인도산 갈치류(Trichiurus lepturus)로 판별하는 것을 특징으로 하는 갈치류의 원산지 판별방법.10. The method of claim 9,
When at least one probe selected from the group consisting of oligonucleotides of SEQ ID NOS: 3 to 5 and oligonucleotides complementary to these oligonucleotides is hybridized with the PCR amplification product, it is judged to be a domestic Trichurus japonicus and,
When at least one probe selected from the group consisting of oligonucleotides of SEQ ID NO: 6 to SEQ ID NO: 7 and oligonucleotides complementary to these oligonucleotides is hybridized with the PCR amplification products, Trichiurus lepturus ) to determine the origin of cutlass, characterized in that.
서열번호 8 내지 서열번호 9의 올리고뉴클레오티드들과 이들 올리고뉴클레오티드들에 상보적인 올리고뉴클레오티드들로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 프로브가 상기 PCR 증폭 산물과 혼성화될 때 세네갈산 갈치류로 판별하는 것을 특징으로 하는 갈치류의 원산지 판별방법. 10. The method of claim 9,
Characterized in that when at least one probe selected from the group consisting of oligonucleotides of SEQ ID NO: 8 to SEQ ID NO: 9 and oligonucleotides complementary to these oligonucleotides is hybridized with the PCR amplification product, To determine the origin of the hairbrush.
서열번호 10 내지 서열번호 11의 올리고뉴클레오티드들과 이들 올리고뉴클레오티드들에 상보적인 올리고뉴클레오티드들로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 프로브가 상기 PCR 증폭 산물과 혼성화될 때 이란산 갈치류로 판별하는 것을 특징으로 하는 갈치류의 원산지 판별방법.10. The method of claim 9,
Characterized in that when at least one probe selected from the group consisting of oligonucleotides of SEQ ID NOS: 10 to 11 and oligonucleotides complementary to these oligonucleotides is hybridized with the PCR amplification product, To determine the origin of the hairbrush.
서열번호 12 내지 서열번호 13의 올리고뉴클레오티드들과 이들 올리고뉴클레오티드들에 상보적인 올리고뉴클레오티드들로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 프로브가 상기 PCR 증폭 산물과 혼성화될 때 Trichiurus japonicus 및 Trichiurus lepturus와 구별하여 모로코산 갈치류(Lepidopus caudatus)로 판별하는 것을 특징으로 하는 갈치류의 원산지 판별방법.10. The method of claim 9,
When at least one probe selected from the group consisting of oligonucleotides of SEQ ID NOS: 12 to 13 and oligonucleotides complementary to these oligonucleotides is hybridized with the PCR amplification product, it is distinguished from Trichiurus japonicus and Trichiurus lepturus , ( Lepidopus caudatus ). ≪ / RTI >
원산지별 갈치류 샘플의 미토콘드리아 COI 유전자를 증폭시키기 위한 서열번호 1 및 2의 프라이머쌍과,
상기 유전자 칩과 혼성화되는 증폭된 유전자 산물을 검출하기 위한 표지물질을 포함하는 갈치류 원산지 판별용 키트.A gene chip for discriminating the origin of the warts as defined in any one of claims 5 to 8,
1 and 2 for amplifying the mitochondrial COI gene of the wild-type hairy sample,
And a labeling substance for detecting an amplified gene product hybridized with the gene chip.
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