KR20130074658A - Method for fermenting the ginseng or red ginseng and the fermented ginseng or red ginseng made thereby - Google Patents

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장준복
이건희
지윤선
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유지현
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Abstract

PURPOSE: A fermentation method is provided to have maximum effect of ginseng and red ginseng through fermentation and excellent strain screening on fermentation of ginseng or red ginseng. CONSTITUTION: A ginseng or red ginseng extract is manufactured. After filtering the ginseng or red ginseng extract, the extraction is sterilized at 80-90 degree Celsius for 25-45 minutes. After sterilized ginseng or red ginseng extract is cooled, 3-5% (v/v) ferment strain is added to ferment at 25-30 degree Celsius for 3-7 days. After filtering the ferment extract, the extractionis concentrated at 45 degree Celsius water phase by using a rotary vacuum evaporator. The condensed product is stored at a deep freezer for 10-15 hours and freeze dried from a freeze dryer. The condensed product has 38-52% of solid content. [Reference numerals] (AA) Prepare ginseng or red ginseng; (S10) Manufacture a ginseng or red ginseng extract; (S20) Filter and sterilize; (S30) Inoculate ferment strain and ferment; (S40) Filter and concentrate; (S50) Freeze-dry

Description

인삼 또는 홍삼의 발효방법 및 이로부터 제조된 발효인삼 또는 홍삼{Method for fermenting the Ginseng or red ginseng and the fermented Ginseng or red ginseng made thereby}Fermentation method of ginseng or red ginseng and fermented ginseng or red ginseng prepared therefrom {Method for fermenting the Ginseng or red ginseng and the fermented Ginseng or red ginseng made Thus}

본 발명은 인삼 또는 홍삼의 발효방법 및 이로부터 제조된 발효인삼 또는 홍삼에 관한 것으로, 보다 상세하게는 피부직삼 및 홍삼을 특정 유효발효균으로 발효시킴으로써 기존 인삼과 홍삼제품에 비해 다양한 생리활성을 갖는 진세노사이드 대사체의 함량이 증가되면서 고온처리가 없어 유효성분의 손실이나 원치않는 성분의 변성을 초래하지 않으며 전체적인 공정 또한 간편하여 생산성을 향상시킬 수 있는 인삼과 홍삼의 발효방법 및 이로부터 제조된 발효인삼과 홍삼에 관한 것이다.
The present invention relates to a fermentation method of ginseng or red ginseng and fermented ginseng or red ginseng prepared therefrom, and more specifically, by having the skin ginseng and red ginseng fermented into a specific effective fermentation bacteria, having a different physiological activity than conventional ginseng and red ginseng products Fermentation method of ginseng and red ginseng and fermentation prepared from it, which can improve productivity because the content of cenoside metabolites is increased and there is no high temperature treatment, which does not cause loss of active ingredients or degeneration of unwanted components. It is about ginseng and red ginseng.

인삼은 소련의 과학자 C.A.meyer가 1843년에 만병을 치료한다는 의미로 학명을 Panax ginseng C.A.Meyer로 명명된 식물학적으로는 오가과(Araliaceae) 인삼속(Panax)에 속하는 식물로 뿌리를 약용으로 이용하고 있다. 이러한 인삼은 자연 건강식품으로 널리 이용되고 있으며, 약리 효능의 과학적 입증과 전통의학을 임상을 근거로 인식과 신뢰가 높으며, 의약품 및 기능성 식품으로 그 수요가 증가하고 있다.Ginseng is a botanical plant belonging to the genus Araliaceae Panax ginseng, whose name is Panax ginseng CAMeyer, which means that the Soviet scientist CAmeyer treated the pandemic in 1843. . These ginseng is widely used as a natural health food, high recognition and trust based on the clinical demonstration of pharmacological efficacy and traditional medicine based on the clinical, and the demand for the drug and functional food is increasing.

한편, 세계시장에서의 인삼 점유율은 1990년 22.9%에서 2002년에는 9.6%로 대폭 감소하는 등 인삼종주국으로서의 명성을 점차 잃어가고 있는 현실이며, 1996년 이후부터 인삼농축액, 인삼차 등의 백삼류 제품의 소비는 꾸준히 감소하는 반면 농축홍삼류, 홍삼차류, 홍삼캡슐제품과 같은 홍삼가공제품의 생산과 소비는 증가하고 있는 실정이다.Meanwhile, the share of ginseng in the world market has declined significantly from 22.9% in 1990 to 9.6% in 2002, and is gradually losing its reputation as a ginseng seed country. Since 1996, the market of white ginseng products such as ginseng concentrate and ginseng tea While consumption continues to decrease, the production and consumption of red ginseng processed products such as concentrated red ginseng, red ginseng tea, and red ginseng capsule products are increasing.

이에, 유용한 미생물을 이용하여 수삼을 발효하고, 미생물의 당분해효소 등을 이용하여 인삼사포닌(ginsenoside)을 전환하여 영양학적, 기능적 가치를 높이고자 하는 진세노사이드(ginsenoside) 전환이 가능한 인삼 발효 미생물의 선별에 관한 연구가 진행된 바 있고(Kim et al ., 2007), 유산균을 이용한 발효인삼제조에 가장 적합한 유산균주 및 최적공정을 확립하여 차후 건강기능성 식품소재로서의 유산균 발효 인삼제품화 가능성을 조사한 연구가 수행된 바 있으며(Park et al ., 2006), 백삼, 홍삼과 대비하여 발효인삼의 일반성분에 대한 성분 특성에 대한 연 구가 보고된 바 있다(Kong et al ., 2008). 또한, 인삼을 비롯한 다양한 소재들을 활용하여 발효하거나 또는 첨가하여 식품의 기능성 강화, 관능적 품질을 향상시켜 발효식품으로서 개발하려는 연구가 시도되고 있으며(Kim and Han, 2005), 다양한 미생물이 존재하는 사람의 장내에서 우세균으로 분포하고 체내 유익균의 성장을 촉진하는 생균활성제(probiotics)로서 당류를 발효하여 젖산을 생성하는 세균인 락토바실리(Lactobacilli) 및 비피도박테리움(Bifidobacterium)과 같은 유산균이 보고된 바 있다(Goldin,1998).Therefore, the ginseng fermentation microorganism capable of fermenting ginseng using useful microorganisms and converting ginseng saponin (ginsenoside) using microbial glycolytic enzymes to increase nutritional and functional value Research has been conducted on the selection of (Kim et al . , 2007), Lactobacillus strains and optimal process for the production of fermented ginseng using lactic acid bacteria have been established to investigate the possibility of fermented ginseng product as a functional food material in the future (Park et. al . , 2006), studies on the component properties of the general components of fermented ginseng have been reported in comparison with white and red ginseng (Kong et. al . , 2008). In addition, research has been made to develop fermented foods by fermenting or adding various ingredients including ginseng to enhance the functional functionality and improve the sensory quality of foods (Kim and Han, 2005). is distributed in the intestine by woosegyun and by the fermentation of sugars as a live cell activator (probiotics) which promotes the growth of body yuikgyun the lactic acid bacteria such as bacteria of the Lactobacillus Bashile (Lactobacilli) and Bifidobacterium (Bifidobacterium) for generating a lactic reported. (Goldin, 1998).

발효인삼은 살아있는 유용한 미생물을 프로바이오틱스(probiotics)으로 공 급할 수 있는 장점과 배당체 구조인 진세노사이드의 당을 분해 진세노사이드의 구조를 전환하여 일반 수삼에서 섭취할 수 있는 사포닌 보다 고효율의 사포닌을 섭취할 수 있는 장점이 있다.Fermented ginseng has the advantage of supplying live microorganisms to probiotics and breaks down the glycoside glycoside sugar structure and converts the structure of ginsenoside to consume saponin of higher efficiency than saponin which can be consumed from ordinary ginseng. There is an advantage to this.

이러한 발효인삼은 미생물 혹은 효소를 이용한 발효를 통하여 특정 성분을 강화시키거나 소화흡수가 용이하도록 가공한 가공인삼으로서 최근 기능성 식품으 로서 각광받고 있다.Such fermented ginseng is a processed ginseng processed to enhance specific components or to be easily digested and absorbed through fermentation using microorganisms or enzymes.

즉, 인삼의 발효에 가장 우수한 균주를 선발(수집)하여 발효를 통하여 효능을 증진시키는 새로운 물질의 분리나 효능을 증진시키고 인체내 흡수를 최대화시킴으로써 인삼의 효과를 최대화시킬 수 있도록 제조공정을 개발할 필요가 있으며, 선발 및 수집된 발효균을 이용하여 고체 및 액체 발효한 인삼의 이화학적특성을 조사하여 기능성의 효과를 검정하고 향후 임상생화학적 효과를 토대로 하여 기능성 식품으로 개발하는데 필요한 기초자료를 확보할 필요가 있다.That is, it is necessary to develop a manufacturing process to maximize the effect of ginseng by selecting (gathering) the most excellent strains for the fermentation of ginseng and enhancing the isolation or efficacy of new substances that enhance efficacy through fermentation and maximizing absorption in the human body. Investigate the physicochemical characteristics of solid and liquid fermented ginseng using selected and collected fermented bacteria to test functional effects and secure basic data necessary to develop functional foods based on future clinical biochemical effects. There is.

또한, 발효인삼의 표준화 및 발효인삼의 제조공정 표준화로 제품의 안정성을 확보할 수 있는 방법이 필요하나, 지금까지 발효인삼이나 발효홍삼의 제조방법에 대한 표준화된 제조공정이 확보되지 않은 실정이므로 이에 대한 연구가 시급히 필요하다.
In addition, there is a need for a method of securing product stability by standardizing fermented ginseng and standardizing the manufacturing process of fermented ginseng, but until now, a standardized manufacturing process for the method of manufacturing fermented ginseng or fermented red ginseng has not been secured. Research is urgently needed.

1. 대한민국등록특허공보 제10-0789678호 "김치 유산균을 이용한 발효인삼 또는 발효홍삼의 제조방법"1. Republic of Korea Patent Publication No. 10-0789678 "Manufacturing method of fermented ginseng or fermented red ginseng using kimchi lactic acid bacteria" 2. 대한민국등록특허공보 제10-0935362호 "발효인삼 또는 홍삼의 제조방법"2. Republic of Korea Patent Publication No. 10-0935362 "Manufacturing method of fermented ginseng or red ginseng" 3. 대한민국등록특허공보 제10-0945586호 "상황버섯 균사체로 발효시켜 다양한 생리활성을 갖는 진세노사이드 대사체를 다량 함유하는 발효인삼 또는 발효홍삼의 제조방법"3. Republic of Korea Patent Publication No. 10-0945586 "Method for producing fermented ginseng or fermented red ginseng containing a large amount of ginsenoside metabolite having a variety of physiological activity by fermentation with the situation mushroom mycelium" 4. 대한민국등록특허공보 제10-0856790호 "발효인삼 또는 홍삼의 제조방법"4. Republic of Korea Patent Publication No. 10-0856790 "Manufacturing method of fermented ginseng or red ginseng" 5. 대한민국등록특허공보 제10-0945587호 "동충하초 균사체로 발효시켜 다양한 생리활성을 갖는 진세노사이드 대사체를 다량 함유하는 발효인삼 또는 발효홍삼의 제조방법"5. Republic of Korea Patent Publication No. 10-0945587 "Method of producing fermented ginseng or fermented red ginseng containing a large amount of ginsenoside metabolite having various physiological activities by fermentation with Cordyceps mycelia" 6. 대한민국등록특허공보 제10-0950978호 "발효인삼 및 그 제조방법"6. Republic of Korea Patent Publication No. 10-0950978 "fermented ginseng and its manufacturing method"

본 발명은, 인삼의 또는 홍삼의 발효에 우수한 균주를 선발(수집)하여 발효를 통하여 효능을 증진시키는 새로운 물질의 분리나 효능을 증진시키고 인체내 흡수를 최대화시킴으로써 인삼과 홍삼의 효능의 최대화가 가능한 발효방법을 제공하는 것을 그 해결과제로 한다. The present invention is capable of maximizing the efficacy of ginseng and red ginseng by selecting (gathering) excellent strains for the fermentation of ginseng or red ginseng and enhancing the isolation or efficacy of new substances that enhance efficacy through fermentation and maximizing absorption in the human body. Providing a fermentation method is a challenge.

또한, 본 발명은 발효인삼 또는 발효홍삼의 표준화 및 발효공정의 표준화로 발효인삼과 발효홍삼제품의 안정성을 확보할 수 있는 발효방법을 제공하는 것을 다른 해결과제로 한다.
In addition, the present invention is to provide a fermentation method that can ensure the stability of fermented ginseng and fermented red ginseng products by the standardization of fermented ginseng or fermented red ginseng and the standardization of the fermentation process as another problem.

상기한 과제를 해결한 본 발명의 인삼 또는 홍삼의 발효방법은 홍삼 또는 인삼 추출액을 제조하는 단계;와 상기 홍삼 또는 인삼 추출액을 여과하고난 후, 80~90℃에서 25~45분간 살균하는 살균단계;와 상기 살균단계에서 살균된 홍삼 또는 인삼 추출액을 냉각한 후, 미리 배양하여 준비된 발효균주를 3~5%(v/v) 첨가하여 25 내지 30 ℃에서 3 ~ 7일간 발효시키는 단계;와 상기 발효균주가 배양된 발효추출액을 여과한 후, 45℃ 수용액상에서 회전진공농축기(rotary vaccum evaporator)를 이용하여 농축하는 농축단계; 및 상기 농축단계의 농축물을 초저온냉동고(deep freezer)에 10~15시간 보관 후, 꺼내어 동결건조기로 동결건조하는 단계를 포함하여 이루어지는 것을 특징으로 한다. Fermentation method of the ginseng or red ginseng of the present invention to solve the above problems is to prepare a red ginseng or ginseng extract; and after filtering the red ginseng or ginseng extract, sterilization step of sterilization for 25 to 45 minutes at 80 ~ 90 ℃ And after cooling the red ginseng or ginseng extract sterilized in the sterilization step, by adding 3 ~ 5% (v / v) fermentation strain prepared by incubation in advance for 3 to 7 days at 25-30 ℃; and the Filtering the fermentation broth cultured with the fermentation strain, and then concentrating on a 45 ° C. aqueous solution using a rotary vaccum evaporator; And storing the concentrate of the concentration step in an ultra-low temperature freezer for 10-15 hours, taking out the freeze-drying with a lyophilizer.

여기서, 상기 홍삼 또는 인삼추출액은 홍삼 및 인삼을 증류수에 20~50 g/ℓ포함하도록 첨가 후, 85~90℃ 온도조건하에 48~72시간 교반하여, 이것을 거즈로 1차 여과하고, 그 1차 여과액을 여과지를 이용하여 2차 여과한 열수추출액이거나, 또는 홍삼 및 인삼을 70% 에탄올에 희석비율 1~2:10(w/v)로 하여 70~75℃ 온도조건하에 20~24시간 침출한 다음, 이것을 거즈로 1차 여과하고, 그 1차 여과액을 여과지를 이용하여 2차 여과한 알콜침출액인 것을 특징으로 한다. Here, the red ginseng or ginseng extract is added to include red ginseng and ginseng 20 to 50 g / ℓ in distilled water, and then stirred for 48 to 72 hours under 85 ~ 90 ℃ temperature conditions, this is first filtered with gauze, the primary The filtrate was secondly filtered hot water extract using filter paper, or red ginseng and ginseng were leached in 70% ethanol at a dilution ratio of 1 to 2:10 (w / v) for 20 to 24 hours under 70 to 75 ° C temperature conditions. Then, this was first filtered with gauze, and the primary filtrate was characterized in that the alcohol leaching liquid was filtered secondly using filter paper.

여기서, 상기 발효균주는 사카로미세스 세레비제(Saccharomyces cerevisiae KCCM 50549) 또는 아스페르질러스 오리제(Aspergillus oryzae KCCM 60241) 중 어느 하나인 것을 특징으로 한다. Here, the fermented strains Saccharomyces ( Saccharomyces) cerevisiae KCCM 50549) or Aspergillus across the Duck's (Aspergillus oryzae KCCM 60241) is characterized in that.

여기서, 상기 인삼 또는 홍삼추출액은 인삼 또는 홍삼을 미분쇄한 다음 그 분쇄된 인삼 또는 홍삼 분말을 열수추출 또는 알콜추출한 것을 특징으로 한다. Here, the ginseng or red ginseng extract is characterized in that after grinding the ginseng or red ginseng, hot water extraction or alcohol extraction of the ground ginseng or red ginseng powder.

여기서, 상기 농축단계의 농축물은 고형분 함량 38~52%인 것을 특징으로 한다. Here, the concentrate of the concentration step is characterized in that the solid content of 38 ~ 52%.

여기서, 상기 살균처리단계 후, 증류수 100중량부에 대하여 인삼 또는 홍삼추출액 5~6중량부, 조효소 0.7~1.0중량부를 혼합한 추출액을 45~55℃의 온도조건하에 2~2.5시간 효소반응시키고, 반응이 완료된 추출액을 90~95℃에서 5~15분간 살균한 후, 상온에서 서서히 냉각시키는 효소반응단계를 더 포함하는 것을 특징으로 한다. Here, after the sterilization step, the extract mixture of 5 to 6 parts by weight of ginseng or red ginseng extract, 0.7 to 1.0 parts by weight of crude enzyme with respect to 100 parts by weight of distilled water is subjected to the enzymatic reaction under a temperature condition of 45 to 55 ℃ for 2 to 2.5 hours, After the reaction is complete sterilization for 5 to 15 minutes at 90 ~ 95 ℃, characterized in that it further comprises an enzyme reaction step of slowly cooling at room temperature.

여기서, 상기 효소는 α-허브자임(α-Herbzyme) 3 g에 증류수 100 mL를 가하고 50℃에서 2시간 침출한 다음 거즈로 1차 여과한 후 얻어진 여과액을 여과지로 2차 여과시킨 여액을 조효소액으로 사용하는 것을 특징으로 한다.
Here, the enzyme was added 100 mL of distilled water to 3 g of α-Herbzyme and leached at 50 ° C. for 2 hours, followed by primary filtration with gauze. It is characterized by using as an enzyme liquid.

본 발명에서는 상기 개시되는 발효방법 중 어느 하나의 방법에 의해 제조되며 인삼 및 홍삼의 생리활성물질이 진세노사이드 대사체의 함량이 일정 수준 이상 증가된 것을 특징으로 하는 발효인삼 또는 발효홍삼이 제공된다. In the present invention, fermented ginseng or fermented red ginseng is prepared by any one of the fermentation methods disclosed above, characterized in that the content of ginsenoside metabolites of ginseng and red ginseng is increased by a certain level or more. .

이때, 상기 발효인삼은 진세노사이드 대사체 Rg1의 함량이 16~21/g인 것을 특징으로 하며, 상기 발효홍삼은 4.3 ~ 5.5/g의 함량을 가지는 것을 특징으로 한다.
At this time, the fermented ginseng is characterized in that the content of ginsenoside metabolite Rg1 is 16 ~ 21 / g, the fermented red ginseng is characterized in that it has a content of 4.3 ~ 5.5 / g.

본 발명에 의하면, 선발 및 수집된 발효균을 이용하여 고체 및 액체 발효한 인삼의 이화학적특성을 조사하여 기능성의 효과를 검정하고 향후 임상생화학적 효과를 토대로 하여 기능성 식품으로 개발하는데 필요한 기초자료로 활용할 수 있는 효과를 기대할 수 있다.According to the present invention, by examining the physicochemical characteristics of solid and liquid fermented ginseng using the selected and collected fermentation bacteria, it is used as a basic data necessary to test the functional effect and to develop a functional food based on future clinical biochemical effects. You can expect the effect.

또한 본 발명에 의하면, 모든 계층의 소비자가 만족할 수 있는 인삼류의 신제품 및 신소재 개념의 제품개발에 필요한 자료를 제공할 수 있는 효과를 기대할 수 있다.In addition, according to the present invention, it is possible to expect the effect of providing data necessary for the development of new products and new material concept of ginseng that can satisfy all classes of consumers.

또한, 본 발명에 의하면 발효기술의 발달, 발효기기의 대량 생산 등에 따른 인삼의 부가가치 증대와 2차적인 산업 발달을 가능하게 하여 생산기반이 열악한 인삼 산업계의 변화를 가져올 수 있는 부가적인 효과를 기대할 수 있다.In addition, according to the present invention, the added value of ginseng according to the development of fermentation technology, mass production of fermentation equipment, etc. and the secondary industrial development are possible, and thus, an additional effect of bringing about changes in the ginseng industry with poor production base can be expected. have.

또한, 본 발명에 의하면, 발효인삼의 표준화 및 발효인삼의 제조공정 표준화로 제품의 안정성을 확보할 수 있는 발효방법을 제공할 수 있다. In addition, according to the present invention, it is possible to provide a fermentation method that can ensure the stability of the product by standardization of fermented ginseng and standardization of the manufacturing process of fermented ginseng.

또한, 본 발명의 방법은 발효인삼을 식품재료로 하여 제품이 있음 에도 불구하고 곧바로 체내흡수가 가능하고 여러 가지 약리활성을 가진 발효인삼제품을 개발하여 인삼의 소비 진작을 유도하고 아울러 관련 산업의 발전을 기할 수 있다.
In addition, the method of the present invention, even though there is a product using fermented ginseng as a food material, it is possible to immediately absorb the body and develop fermented ginseng products having various pharmacological activities to induce the consumption of ginseng and to develop related industries. Can be written.

도 1은 본 발명의 인삼 또는 홍삼의 발효방법의 일예를 나타낸 블럭도이다.
도 2 및 3은 본 발명의 방법에 따라 발효된 인삼과 홍삼의 폴리페놀함량을 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 4 및 5는 본 발명의 방법에 따라 발효된 인삼과 홍삼의 플라보노이드 함량을 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 6 및 7은 본 발명의 방법에 따라 발효된 인삼과 홍삼의 DPPH radical 소거활성을 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 8 및 9는 본 발명의 방법에 따라 발효된 인삼과 홍삼의 SOD 유사활성을 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 10 내지 15는 본 발명의 방법에 따라 발효된 인삼과 홍삼의 진세노사이드 함량의 변화를 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 16 은 본 발명의 방법에 따라 발효된 인삼과 홍삼을 투여한 항당뇨유발 흰쥐의 체중변화를 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 17 은 본 발명의 방법에 따라 발효된 인삼과 홍삼을 투여한 흰쥐의 혈당의 변화를 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 18 은 본 발명의 방법에 따라 발효된 인삼과 홍삼을 투여한 흰쥐의 혈청글루코스, 인슐린 및 HbA1c 의 함량 변화를 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 19 는 본 발명의 방법에 따라 발효된 인삼과 홍삼을 투여한 흰쥐의 인삼 및 발효인삼의 혈청 중성지방, 총 cholesterol 및 HDL cholesterol 함량의 변화를 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 20 은 본 발명의 방법에 따라 발효된 인삼의 진세노사이드 함량의 변화를 나타낸 HPLC측정 그래프이다.
1 is a block diagram showing an example of the fermentation method of ginseng or red ginseng of the present invention.
2 and 3 are graphs showing the results of measuring the polyphenol content of the ginseng and red ginseng fermented according to the method of the present invention.
4 and 5 are graphs showing the results of measuring the flavonoid content of ginseng and red ginseng fermented according to the method of the present invention.
6 and 7 are graphs showing the results of measuring DPPH radical scavenging activity of ginseng and red ginseng fermented according to the method of the present invention.
8 and 9 are graphs showing the results of measuring the SOD-like activity of the ginseng and red ginseng fermented according to the method of the present invention.
10 to 15 are graphs showing the results of measuring changes in ginsenoside content of ginseng and red ginseng fermented according to the method of the present invention.
Figure 16 is a graph showing the results of measuring the weight change of anti-diabetic rats administered ginseng and red ginseng fermented according to the method of the present invention.
Figure 17 is a graph showing the results of measuring the change in blood glucose of rats administered ginseng and red ginseng fermented according to the method of the present invention.
Figure 18 is a graph showing the results of measuring the changes in serum glucose, insulin and HbA1c content of rats administered ginseng and red ginseng fermented according to the method of the present invention.
19 is a graph showing the results of measuring changes in serum triglycerides, total cholesterol and HDL cholesterol content of ginseng and fermented ginseng of rats fermented ginseng and red ginseng according to the method of the present invention.
20 is a HPLC measurement graph showing the change in ginsenoside content of ginseng fermented according to the method of the present invention.

이하, 본 발명을 보다 상세히 설명하기로 한다. Hereinafter, the present invention will be described in more detail.

본 발명은 인삼 또는 홍삼의 발효방법 및 이로부터 제조된 발효인삼 또는 홍삼에 관한 것으로, 본 발명에서는 피부직삼 및 홍삼을 특정 유효발효균으로 발효시킴으로써 기존 인삼과 홍삼제품에 비해 다양한 생리활성을 갖는 진세노사이드 대사체의 함량이 증가되면서 고온처리가 없어 유효성분의 손실이나 원치않는 성분의 변성을 초래하지 않으며 전체적인 공정 또한 간편하여 생산성을 향상시킬 수 있는 인삼과 홍삼의 발효방법 및 이로부터 제조된 발효인삼과 홍삼을 제공하고자 한다. The present invention relates to a fermentation method of ginseng or red ginseng, and a fermented ginseng or red ginseng prepared therefrom. In the present invention, ginseng having various physiological activities compared to conventional ginseng and red ginseng products by fermenting skin ginseng and red ginseng with a specific effective fermentation bacterium. Fermentation method of ginseng and red ginseng and fermented ginseng prepared therefrom, which increases the content of side metabolites and therefore does not cause high temperature treatment and thus does not cause loss of active ingredients or modification of undesired components. And red ginseng.

본 발명에 따른 인삼 또는 홍삼의 발효방법의 일예는 첨부도면 도 1에 도시된 바와 같이, 홍삼 또는 인삼 추출액을 제조하는 단계(S10);와 상기 홍삼 또는 인삼 추출액을 여과하고난 후, 80~90℃에서 25~45분간 살균하는 살균단계(S20);와 상기 살균단계에서 살균된 홍삼 또는 인삼 추출액을 냉각한 후, 미리 배양하여 준비된 발효균주를 3~5%(v/v) 첨가하여 25 내지 30 ℃에서 3 ~ 7일간 발효시키는 단계(S30);와 상기 발효균주가 배양된 발효추출액을 여과한 후, 45℃ 수용액상에서 회전진공농축기(rotary vaccum evaporator)를 이용하여 농축하는 농축단계(S40); 및 상기 농축단계의 농축물을 초저온냉동고(deep freezer)에 10~15시간 보관 후, 꺼내어 동결건조기로 동결건조하는 단계(S50)를 포함하여 이루어진다. An example of the fermentation method of ginseng or red ginseng according to the present invention is shown in Figure 1, the step of preparing a red ginseng or ginseng extract (S10); and after filtering the red ginseng or ginseng extract, 80 ~ 90 Sterilization step (S20) for sterilizing 25 ~ 45 minutes at ℃; and after cooling the red ginseng or ginseng extract sterilized in the sterilization step, by adding 3 ~ 5% (v / v) fermented strain prepared in advance to 25 to 25 Fermenting at 30 ° C. for 3 to 7 days (S30); and filtering the fermentation broth cultured with the fermentation strain, and then concentrating using a rotary vacuum concentrator on a 45 ° C. aqueous solution (S40); And storing the concentrate of the concentration step in an ultra-low temperature freezer (deep freezer) for 10-15 hours, taking out the freeze-drying with a lyophilizer (S50).

이때, 상기 홍삼 또는 인삼추출액은 열수추출법을 이용한 열수 추출액 또는 알콜침출법을 이용한 알콜침출액일 수 있으며, 보다 바람직하게는 홍삼 및 인삼을 증류수에 20~50 g/ℓ포함하도록 첨가 후, 85~90℃ 온도조건하에 48~72시간 교반하여, 이것을 거즈로 1차 여과하고, 그 1차 여과액을 여과지를 이용하여 2차 여과한 열수추출액이거나, 또는 홍삼 및 인삼을 70% 에탄올에 희석비율 1~2:10(w/v)로 하여 70~75℃ 온도조건하에 20~24시간 침출한 다음, 이것을 거즈로 1차 여과하고, 그 1차 여과액을 여과지를 이용하여 2차 여과한 알콜침출액을 제조하여 사용하는 것이다. At this time, the red ginseng or ginseng extract may be a hot water extract using a hot water extraction method or an alcohol leaching solution using an alcohol leaching method, more preferably after adding red ginseng and ginseng 20 to 50 g / ℓ in distilled water, 85 ~ 90 The mixture was stirred for 48 to 72 hours under a temperature condition of 1 ° C, and this was first filtered with gauze, and the primary filtrate was a hot water extract obtained by secondary filtering using a filter paper, or diluting ratio of red ginseng and ginseng in 70% ethanol 1 ~ 2:10 (w / v) was leached under 70-75 ° C. temperature for 20 to 24 hours, and this was first filtered with gauze, and the first filtrate was filtered through a filter paper. It is manufactured and used.

또한, 상기 인삼 및 홍삼추출액은 준비된 인삼 또는 홍삼을 충분히 건조한 다음 그 건조인삼 및 홍삼을 미분쇄여 인삼 또는 홍삼분말을 준비하고, 분쇄된 인삼분말 또는 홍삼 분말을 열수추출 또는 알콜추출한 것을 사용할 수 있다. In addition, the ginseng and red ginseng extract is sufficiently dried dried ginseng or red ginseng and then ground ginseng or red ginseng to prepare a ginseng or red ginseng powder, hot water extraction or alcohol extraction of the ground ginseng powder or red ginseng powder may be used. .

본 발명에 따르면, 사기 발효단계에서 사용되는 발효균주는 사카로미세스 세레비제(Saccharomyces cerevisiae KCCM 50549) 또는 아스페르질러스 오리제(Aspergillus oryzae KCCM 60241) 중 어느 하나를 사용하며, 보다 바람직하게는 아스페르질러스 오리제(Aspergillus oryzae KCCM 60241)를 사용하는 것이 좋다. According to the present invention, the fermentation strain used in the fraud fermentation step Saccharomyces ( Saccharomyces cerevisiae KCCM 50549) or Aspergillus across the Duck's (Aspergillus oryzae KCCM 60241), and more preferably Aspergillus orize ( Aspergillus oryzae KCCM 60241).

본 발명에 따르면, 상기 농축단계에서 얻어지는 농축액은 인삼 또는 홍삼의 고형분 함량 38~52%가 되도록 농축하는 것이 바람직하다. According to the present invention, the concentrate obtained in the concentration step is preferably concentrated to 38 ~ 52% solid content of ginseng or red ginseng.

본 발명에 따르면, 상기 살균처리단계(S20) 후, 증류수 100중량부에 대하여 인삼 또는 홍삼추출액 5~6중량부, 조효소 0.7~1.0중량부를 혼합한 추출액을 준비하고, 상기 추출액을 45~55℃의 온도조건하에 2~2.5시간 효소반응시키고, 반응이 완료된 추출액을 90~95℃에서 5~15분간 살균한 후, 상온에서 서서히 냉각시키는 효소반응단계를 더 포함할 수 있다. According to the present invention, after the sterilization treatment step (S20), 5 to 6 parts by weight of ginseng or red ginseng extract, 0.7 to 1.0 parts by weight of coenzyme is prepared with respect to 100 parts by weight of distilled water, and the extract is 45 to 55 ° C. After enzymatic reaction for 2 to 2.5 hours under the temperature conditions of the, the reaction is complete sterilized for 5 to 15 minutes at 90 ~ 95 ℃, and may further comprise an enzyme reaction step of cooling slowly at room temperature.

여기서, 상기 효소는 식품공전에서 규정하는 식품의 제조에 적합한 효소라면 어느 것을 사용하여도 무방하며, 보다 바람직하게는 α-허브자임(α-Herbzyme) 3 g에 증류수 100 mL를 가하고 50℃에서 2시간 침출한 다음 거즈로 1차 여과한 후 얻어진 여과액을 여과지로 2차 여과시킨 여액을 조효소액으로 사용하는 것이 좋다. Herein, the enzyme may be used as long as the enzyme is suitable for the preparation of foods prescribed in the Food Code. More preferably, 100 mL of distilled water is added to 3 g of α-Herbzyme and 2 at 50 ° C. After leaching for a time, the filtrate obtained by primary filtration with gauze and secondary filtrate obtained by filter paper is preferably used as a crude enzyme solution.

이상에서 설명된 바와 같은 본 발명에 따른 발효방법에 따라 인삼 및 홍삼의 생리활성물질이 진세노사이드 대사체의 함량이 일정 수준 이상 증가된 발효인삼 및 발효홍삼을 얻을 수 있으며, 상기 발효인삼 및 발효홍삼은 모든 계층의 소비자가 만족할 수 있는 인삼류의 신제품 및 신소재 개념의 제품개발에 필요한 재료로 사용되어질 수 있다. According to the fermentation method according to the present invention as described above, the ginseng and red ginseng can obtain fermented ginseng and fermented red ginseng in which the content of ginsenoside metabolite is increased by a certain level or more, and the fermented ginseng and fermented Red ginseng can be used as a material for product development of new product and new material concept of ginseng which can satisfy all classes of consumers.

특히, 상기 발효인삼과 발효홍삼은 인삼과 홍삼의 진세노사이드 대사체인 Rg1, Rg3, Rd, Rg5의 함량이 일정 수준 이상 증가된다. In particular, the fermented ginseng and fermented red ginseng is a ginsenoside metabolite of ginseng and red ginseng Rg1, Rg3, Rd, Rg5 content of more than a certain level is increased.

특히, 발효인삼의 경우 진세노사이드 대사체 Rg1의 함량이 16~21/g 정도의 증대된 함량을 가지며, 상기 발효홍삼은 진세노사이드 대사체 Rg1의 함량이 4.3 ~ 5.5/g으로 증대된 함량을 가지게 된다. 이러한 함량의 증가는 발효전 인삼 또는 홍삼 대비 발효인삼은 약 62~67%의 함량이 증대된 것이고, 발효홍삼은 14.5 ~ 31.7%의 함량이 증대된 것이다. 이러한 결과는 하기에 기술되는 실험방법의 결과에서 알 수 있다.
Particularly, in the case of fermented ginseng, the content of ginsenoside metabolite Rg1 is increased to about 16 to 21 / g, and the content of ginsenoside metabolite Rg1 is increased to 4.3 to 5.5 / g. Will have The increase in the content of the fermented ginseng compared to ginseng or red ginseng before fermentation is about 62 ~ 67% increased content, fermented red ginseng 14.5 ~ 31.7% increased content. These results can be seen from the results of the experimental method described below.

이하에서는 바람직한 실험방법을 통해 본 발명을 보다 구체적으로 설명하겠는 바, 하기의 실험예 및 그에 따른 실험결과로 본 발명이 한정되는 것은 아니며, 본 발명을 범위를 벗어나지 않는 범위내에서 얼마 든지 변형 가능한 것이다.
Hereinafter, the present invention will be described in more detail through preferred experimental methods, but the present invention is not limited to the following experimental examples and experimental results, and the present invention can be modified as much as possible without departing from the scope of the present invention. .

[실험방법]Experimental Method

가. end. 발효균주Fermented strain 및 재료 And materials

발효에 사용된 균주는 Saccharomyces cerevisiae KCCM 50549(SA), L. delbrueckii subsp. bulgaricus KCCM 35463(LD), Aspergillus niger KCCM 60381(AN), A. oryzae KCCM 60241(AO)등 4개 균주를 한국미생물 보존센터에서 분양받아 사용하였다.The strain used for fermentation was Saccharomyces cerevisiae KCCM 50549 (SA), L. delbrueckii subsp. bulgaricus KCCM 35463 (LD), Aspergillus niger KCCM 60381 (AN), A. oryzae Four strains, including KCCM 60241 (AO), were distributed at the Korea Microbial Conservation Center and used.

인삼은 충남 금산군에서 생산된 피부직삼이며, 홍삼은 상기 인삼을 통상의 홍삼제조방법에 따라 제조된 것을 준비하여 사용하였다.Ginseng is a skin ginseng produced in Geumsan-gun, Chungnam, red ginseng was prepared by using the ginseng prepared according to the conventional red ginseng manufacturing method.

나. 인삼 발효I. Ginseng Fermentation

1) 홍삼액의 조제1) Preparation of Red Ginseng Solution

액체발효를 위한 홍삼 농축액은 다음과 같이 제조하였다. 홍삼과 증류수를 희석비율을 50, 35, 20 g/L (5.0, 3.5 and 2.0%)로 각각 만든 후 85℃에서 3일 동안 교반하였다. 이것을 거즈로 1차 여과 후 여과지(Whatman No 2.)를 이용하여 2차 여과한 다음 80℃에서 30분간 살균하여 액체발효액으로 사용하였다.Red ginseng concentrate for liquid fermentation was prepared as follows. Dilutions of red ginseng and distilled water were made into 50, 35, and 20 g / L (5.0, 3.5 and 2.0%), followed by stirring at 85 ° C. for 3 days. This was first filtered with gauze, secondly filtered using a filter paper (Whatman No 2.), and sterilized at 80 ° C. for 30 minutes to use as a liquid fermentation solution.

2) 피부직삼 추출액의 조제 2) Preparation of dermal ginseng extract

피부직삼을 분말화한 다음 액체발효에 사용하였다. 액체발효를 위한 추출액은 다음과 같이 제조하였다. 피부직삼을 분말화 시킨 다음 70% EtOH을 용매로 피부직삼 분말과 용매의 희석비율을 1:10(W/V)로 하여 75℃에서 24시간 동안 침출하였다. 이것을 거즈로 1차 여과 후 여과지(Whatman No 2.)를 이용하여 2차 여과한 다음 45℃ 수욕상에서 rotary vaccum evaporator로 농축 후 농축액을 80℃에서 30분간 살균하여 액체발효 농축액으로 사용하였다.Dermal ginseng was powdered and used for liquid fermentation. Extract for liquid fermentation was prepared as follows. After the dermal ginseng was powdered, the dilution ratio of the dermal ginseng powder and the solvent was 1:10 (W / V) with 70% EtOH and leached at 75 ° C. for 24 hours. This was first filtered with gauze, secondly filtered using a filter paper (Whatman No 2.), and then concentrated on a rotary vaccum evaporator in a 45 ° C. water bath. The concentrate was sterilized at 80 ° C. for 30 minutes to be used as a liquid fermentation concentrate.

3) 조효소의 조제3) Preparation of Coenzyme

α-Herbzyme 3 g에 증류수 100 mL를 가하고 50℃에서 2시간 침출한 다음 거즈로 1차 거른 후 여과지로 여과시킨 여액을 조효소액으로 사용하였다.100 mL of distilled water was added to 3 g of α-Herbzyme, and the resultant was leached at 50 ° C. for 2 hours, first filtered with gauze, and the filtrate filtered with filter paper was used as a crude enzyme solution.

상기 α-Herbzyme은 한국효소주식회사에서 소맥피(100%)를 원재료로 하여 개발한 한방발효제(식품첨가물)이다.  The α-Herbzyme is a herbal fermentation agent (food additive) developed by Korean Enzyme Co., Ltd. as a raw material of bovine bark (100%).

4) 발효4) Fermentation

◇ 홍삼 농축액의 발효◇ Fermentation of red ginseng concentrate

4-1)홍삼 5.0%, 3.5%, 2.0% 농축액으로 각각 만든 후 95℃에서 10분간 살균 후 실온에서 서서히 식힌 다음 미리 활성화시킨 종의 발효 균주 L. delbrueckii subsp. bulgaricus KCCM 35463, Saccharomyces cerevisiae KCCM 50549, Aspergillus niger KCCM 60381, A. oryzae KCCM 60241등 4개 균주을 각각 4%씩 넣은 후 L. delbrueckii subsp . bulgaricus KCCM 35463는 37℃, S. cerevisiae KCCM 50549 30℃에서, Aspergillus niger KCCM 60381와 A. oryzae KCCM 60241는 25℃에서 3, 5, 7일 동안 각각 배양하였다. 배양 후 배양액을 여과한 후 45℃ 수욕상에서 rotary vaccum evaporator를 이용하여 농축 후 -45℃ deep freezer에 12시간 두었다가 freeze dryer에 넣고 동결건조 하였다.4-1) Made with red ginseng 5.0%, 3.5% and 2.0% concentrates, sterilized at 95 ° C for 10 minutes, cooled slowly at room temperature, and then fermented strain L. delbrueckii subsp. bulgaricus KCCM 35463, Saccharomyces Four strains of cerevisiae KCCM 50549, Aspergillus niger KCCM 60381, A. oryzae KCCM 60241, and 4% of L. delbrueckii subsp . bulgaricus KCCM 35463 is at 37 ° C, S. cerevisiae KCCM 50549 at 30 ° C., Aspergillus niger KCCM 60381 and A. oryzae KCCM 60241 was incubated at 25 ° C. for 3, 5 and 7 days, respectively. After incubation, the culture solution was filtered, concentrated using a rotary vaccum evaporator in a 45 ° C. water bath, placed in a freeze dryer for 12 hours, and then freeze-dried.

4-2) 상기 홍삼농축액 50 mL와 조효소 7 mL를 증류수 993 mL에 넣어서 피부직삼 농축액 농도를 5%로 만든 후 50℃에서 2시간 효소 반응시켰다. 이것을 95℃에서 10분간 살균 후 실온에서 서서히 식힌 것을 제외하고는 상기 방법과 동일하게 농축액을 발효시켜 준비하였다.4-2) 50 mL of the red ginseng concentrate and 7 mL of the coenzyme were added to 993 mL of distilled water to make the skin ginseng concentrate concentration 5%, followed by enzymatic reaction at 50 ° C. for 2 hours. After sterilizing this for 10 minutes at 95 ℃ was prepared by fermenting the concentrate in the same manner as above except that it was cooled slowly at room temperature.

◇ 피부직삼 농축액의 발효◇ Fermentation of dermal ginseng concentrate

피부직삼 농축액 50 mL와 조효소 7 mL를 증류수 993 mL에 넣어서 피부직삼 농축액 농도를 5%로 만든 후 50℃에서 2시간 효소 반응시켰다. 이것을 95℃에서 10분간 살균 후 실온에서 서서히 식힌 다음 미리 활성화 시킨 2종의 발효 균주 S. cerevisiae KCCM 50549, A. oryzae KCCM 60241을 각각 4%씩 넣은 후 S. cerevisiae KCCM 50549 30℃에서, A. oryzae KCCM 60241 25℃에서 3, 5, 7일 동안 각각 배양하였다. 배양 후 배양액을 여과한 후 45℃ 수욕상에서 rotary vaccum evaporator를 이용하여 농축 후 -45℃ deep freezer에 12시간 두었다가 freeze dryer에 넣고 동결건조 하였다. 50 mL of skin ginseng concentrate and 7 mL of coenzyme were added to 993 mL of distilled water to make the concentration of the skin ginseng concentrate 5%, followed by enzymatic reaction at 50 ° C. for 2 hours. This in 95 ℃ after 10 minutes sterile gradually cooled at room temperature and then the two kinds of pre-activation which fermentation strain S. cerevisiae KCCM 50549, A. oryzae KCCM Insert respectively by 4% from the 60 241 S. cerevisiae KCCM 50549 30 ℃, A. oryzae KCCM 60241 were incubated at 25 ° C. for 3, 5 and 7 days, respectively. After incubation, the culture solution was filtered, concentrated using a rotary vaccum evaporator in a 45 ° C. water bath, placed in a freeze dryer for 12 hours, and then freeze-dried.

5) 당도, pH 측정5) sugar content, pH measurement

당도 측정은 인삼과 발효인삼 추출액을 0.3%로 조정한 다음 디지털 당도계(Refractometer PAL-1, Atago Co., Ltd, Japan)를 이용하여 측정하였으며, pH는 pH meter(Schott, Swiss)로 직접 측정하였다.The sugar content was measured by adjusting the ginseng and fermented ginseng extract to 0.3% and then using a digital sugar meter (Refractometer PAL-1, Atago Co., Ltd, Japan), and the pH was directly measured by a pH meter (Schott, Swiss). .

6) 항산화활성6) antioxidant activity

◇ Total polyphenol◇ Total polyphenol

총 폴리페놀 함량은 Folin-Denis법 (Folin and Denis, 1912)을 응용하여 측정하였다. 방법으로는 시료 추출물 1㎎을 95% 에탄올 1mL에 용해시키고 Folin-Ciocalteau 1mL를 첨가하여 27℃ 수욕조에서 혼합한다. 5분 정도 경과 후 Na2CO3 포화용액 1mL를 가하여 혼합하고 실온에서 1시간 동안 방치하고 UV/VIS spectrophotometer (Cary 500,Varian, USA)를 사용하여 725㎚에서 흡광도를 측정하였다. 이때, tannic acid를 이용한 표준곡선은 최종농도가 0, 12.25, 25, 50, 100 ㎍/mL이 되도록 작성하여 725㎚에서 흡광도를 측정하여 작성하였다.
Total polyphenol content was measured by applying the Folin-Denis method (Folin and Denis, 1912). As a method, 1 mg of sample extract is dissolved in 1 mL of 95% ethanol, and 1 mL of Folin-Ciocalteau is added and mixed in a 27 ° C. water bath. After 5 minutes, 1 mL of saturated Na 2 CO 3 solution was added thereto, mixed, left at room temperature for 1 hour, and absorbance was measured at 725 nm using a UV / VIS spectrophotometer (Cary 500, Varian, USA). At this time, the standard curve using tannic acid was prepared so that the final concentration was 0, 12.25, 25, 50, 100 ㎍ / mL and the absorbance was measured at 725 nm.

◇ DPPH free radical 소거활성 측정◇ DPPH free radical scavenging activity measurement

시료 추출물을 Choi 등의 방법(2003)에 의한 수소전자공여능에 의해 항산화활성을 측정하였다. 여러 농도의 시료를 에탄올에 용해하여, 900㎕의 DPPH 용액 (100㎛과 각 시료 100㎕를 혼합하여 교반하였다. 이 혼합 시료를 암소에서 30분간 반응시킨 후 517㎚에서 흡광도를 측정하였다. 수소전자공여능은 각 실험을 3회 반복하여 평균을 낸 다음 대조구에 대한 흡광도의 감소 정도를 다음 식에 의하여 계산하였다.The antioxidant activity of the sample extract was measured by hydrogen electron donating ability according to Choi et al. (2003). Various concentrations of samples were dissolved in ethanol, and the mixture was stirred by mixing 900 µl of DPPH solution (100 µm and 100 µl of each sample. The mixed sample was reacted in the dark for 30 minutes, and the absorbance was measured at 517 nm. The donating ability was averaged by repeating each experiment three times, and then the degree of decrease in absorbance for the control was calculated by the following equation.

An = (A0-A) / A0 × 100             An = (A0-A) / A0 × 100

An : DPPH radical 소거능에 대한 항산화 활성(%)             An: Antioxidant activity (%) on DPPH radical scavenging activity

A0 : 시료가 첨가되지 않은 DPPH 용액의 흡광도             A0: absorbance of DPPH solution without sample added

A : 반응용액중의 DPPH와 시료의 반응 흡광도
A: Absorbance of reaction between DPPH and sample in reaction solution

◇ Total flavonoid◇ Total flavonoid

시료 중 총 플라보노이드 함량은 Zhishen 등(1999)이 개발한 분광분석법을 이용하여 측정하였다. 즉, 증류수 4 mL가 들어있는 시험관에 시료 1 mL을 가하고 5분이 경과한 다음 5% NaNO2 0.3 mL와 10% AlCl3 0.3 mL를 차례로 가한다. 대조군은 시료 대신 증류수 1 mL을 가한다. 시작 시간으로부터 6분이 경과한 시간에 1 M NaOH 2mL을 가하고 증류수를 추가로 가하여 10 mL으로 만든 다음, 골고루 섞었다. 분홍색을 띄는 시료를 510nm 파장에서 흡광도를 측정하여 L당 catechin equivalent(CE)mg으로 환산하여 플라보노이드 함량을 표시하였다.
The total flavonoid content in the samples was measured using the spectroscopic method developed by Zhishen et al. (1999). That is, 1 mL of sample is added to a test tube containing 4 mL of distilled water, and after 5 minutes, 0.3 mL of 5% NaNO 2 and 0.3 mL of 10% AlCl 3 are added in that order. For the control, 1 mL of distilled water is added instead of the sample. After 6 minutes from the start time, 2 mL of 1 M NaOH was added, additional distilled water was added to make 10 mL, and the mixture was evenly mixed. The pink-colored sample was measured for absorbance at 510 nm wavelength and converted into catechin equivalent (CE) mg per L to express the flavonoid content.

◇ SOD 유사활성 측정◇ SOD-like activity measurement

SOD 유사활성 측정은 Marklund와 Marklund(1974)의 방법에 따라 과산화수소(H2O2)로 전환시키는 반응을 촉매하는 pyrogallol의 생성량을 측정하여 SOD 유사활성으로 나타냈다. 즉 일정농도의 시료 0.2 mL에 pH 8.5로 보정한 tris HCl buffer[50 mM tris (hydroxymethyl) amino-methane + 10 mM EDTA] 3 mL와 7.2mM pyrogallol 0.2 mL를 가하고 250℃에서 10분간 방치 후, 1 N HCl 1 mL를 가하여 반응을 정지시킨다. 반응액 중 산화된 pyrogallol의 양은 420 nm에서 흡광도를 측정하였다. SOD 유사활성은 시료 용액의 첨가구와 무첨가구 사이의 흡광도의 차이를 백분율(%)로 나타냈다.
SOD-like activity was determined as SOD-like activity by measuring the amount of pyrogallol catalyzing the conversion of hydrogen peroxide (H 2 O 2 ) according to the method of Marklund and Marklund (1974). That is, add 0.2 mL of tris HCl buffer [50 mM tris (hydroxymethyl) amino-methane + 10 mM EDTA] and 0.2 mL of 7.2 mM pyrogallol, adjusted to pH 8.5, in 0.2 mL of sample, and leave at 250 ° C for 10 minutes. 1 mL of N HCl is added to stop the reaction. The amount of oxidized pyrogallol in the reaction solution was measured for absorbance at 420 nm. SOD-like activity showed the difference in absorbance between the addition and no addition of the sample solution in percentage (%).

7) 발효전·후 인삼의 성분분석7) Component analysis of ginseng before and after fermentation

◇총조사포닌 분획 제조 ◇ Total Survey Ponine Fraction

시료 약 3 g을 물포화 n-부탄올 50 mL를 가하여 1시간 동안 환류냉각기를 부착하여 70~80℃로 1시간 가열추출한 다음 냉각한 후 여과하고, 남은 잔사는 물포화 n-부탄올 100 mL를 가하여 위와 같은 조작을 한 번 더 반복한 후 여과지는 물포화 n-부탄올 10 mL로 세척하였다. 여액과 세액을 60℃의 수욕 중에서 감압 농축한 후, 증류수 50 mL로 녹이고 물포화 n-부탄올 50 mL로 분액하여 부탄올층을 회수하고, 물층은 n-물포화 부탄올로 2회 더 분액하여 부탄올층을 얻었다. 물포화 n-부탄올 층을 70~80℃의 수욕중에서 감압 농축한 후, 잔류물에 에테르 50 mL를 가하고 30분간 탈지시킨 후 에테르를 완전히 제거한 것을 총조사포닌으로 하였다.
Approximately 3 g of sample was added with 50 mL of water-saturated n-butanol and attached to a reflux condenser for 1 hour, heated and extracted at 70-80 ° C. for 1 hour, cooled, and filtered. The remaining residue was added with 100 mL of water-saturated n -butanol. After repeating the above operation once more, the filter paper was washed with 10 mL of water saturated n -butanol. The filtrate and the filtrate were concentrated under reduced pressure in a water bath at 60 ° C., dissolved in 50 mL of distilled water, and separated into 50 mL of water saturated n -butanol to recover a butanol layer, and the water layer was further separated twice with n -water saturated butanol and butanol layer. Got. The water-saturated n -butanol layer was concentrated under reduced pressure in a water bath at 70 ° C. to 80 ° C., 50 mL of ether was added to the residue, and then degreased for 30 minutes.

◇ Total saponin함량◇ Total saponin content

조사포닌이 들어 있는 농축플라스크를 105℃ 건조기에 2시간 동안 건조한 후 데시케이터에서 30분간 방랭한 다음 무게를 달아, 다음식에 따라 조사포닌 함량을 구하였다. The concentrated flask containing the irradiated phonynin was dried in a 105 ° C. dryer for 2 hours, allowed to cool for 30 minutes in a desiccator, and weighed to obtain the irradiated phosphorylated content according to the following equation.

조사포닌 (mg/g) = (W1-W2)/S   Probeponin (mg / g) = (W1-W2) / S

W1: 물포화 n-부탄올층을 농축건조한 후 농축 플라스크의 무게 (mg)W1: Weight of concentrated flask after concentration of water-saturated n -butanol layer (mg)

W2: 빈 농축플라스크의 항량 무게 (mg)   W2: Weight of Empty Concentrated Flask (mg)

S: 시료 채취량 (g)
S: sample volume (g)

◇ Ginsenoside 정량분석◇ Ginsenoside quantitative analysis

홍삼 물추출물 발효물은 조사포닌 5 mg 메탄올 1 mL에 녹여 2시간 초음파추출 후, 피부직삼 및 홍삼의 에탄올 추출물 발효물은 10 mg을 메탄올 1 mL에 녹여 2 시간 초음파 추출 후 0.45㎛ membrane filter로 여과하여 HPLC (Waters. USA)에서 분석하였다. Ginsenoside 함량은 Waters-PAD (Waters 1525, detector 2998, USA)를 활용하여 water (A액)와 acetonitrile (B액)의 다음과 같은 gradient 조건으로 flow rate 1.0 mL/min으로 HPLC 분석하였다. Fermented red ginseng water extract was dissolved in 1 mL of 5 mg methanol for irradiation, and then extracted for 2 hours, and ethanol extract fermentation of dermal ginseng and red ginseng was dissolved in 1 mL of methanol for 2 hours, and filtered with 0.45㎛ membrane filter. By HPLC (Waters. USA). Ginsenoside content Waters-PAD (Waters 1525, detector 2998, USA) was used for HPLC analysis at flow rate of 1.0 mL / min under the following gradient conditions of water (A solution) and acetonitrile (B solution).

하기 표 1은 HPLC에 의한 진세노사이드 함량에 대한 용매조건(Solvent condition for ginsenoside contents by HPLC)을 나타낸 것이고, 표 2는 HPLC에 의한 진세노사이드 함량에 대한 분석조건(Analysis condition for ginsenoside contents by HPLC) 이다. Table 1 shows solvent conditions for ginsenosides content by HPLC, and Table 2 shows analysis conditions for ginsenosides content by HPLC. ) to be.

Figure pat00001
Figure pat00001

Figure pat00002
Figure pat00002

8) 항당뇨 (제1형 당뇨) 효과 검증 8) Validation of antidiabetic (type 1 diabetes) effect

◇ Wister rat의 당뇨 유발 ◇ Diabetes induction of Wister rat

수컷 Wistar rat (5 주령, 몸무게 200 g)을 오리엔트 바이오 (성남) 로부터 구입하여 표준사료 (Samtako)를 먹이면서 온도(23±2℃)와 습도 (50±10%)가 조절되는 시설 (12 h light-and-dark cycle control system)에서 사육하였다. 사육 일주일 후, overnight 금식한 Wister rat의 복강에 1 mL STZ [60 mg/kg body weight; STZ 용액은 0.01 M citrate buffer (pH 4.5)를 사용하여 사용 전에 제조하여 ice위에 보관]를 주사하였다. STZ 주사 72시간 후에 Fasting blood glucose level을 측정하여 혈당이 200 mg/dL 이상인 쥐를 STZ-induced rat으로 선발하여 실험에 사용하였다. 실험 중 흰쥐는 사료와 물을 자유롭게 먹게 하였다.  A male Wistar rat (5 weeks old, 200 g weight) purchased from Orient Bio (Seongnam) and fed a standard feed (Samtako) to control temperature (23 ± 2 ℃) and humidity (50 ± 10%) (12 h It was bred in a light-and-dark cycle control system. A week after breeding, 1 mL STZ [60 mg / kg body weight; STZ solution was prepared before use using 0.01 M citrate buffer (pH 4.5) and stored on ice]. 72 hours after STZ injection, fasting blood glucose levels were measured and mice with blood glucose levels above 200 mg / dL were selected as STZ-induced rats and used in the experiment. During the experiment, rats were allowed to eat food and water freely.

정상 및 당뇨 유발 흰쥐 (>200 mg/dL)을 16 h 금식하고 정상 대조군 (Normal control; NC), streptozotocin 당뇨 유발군 (STZ-control group; DC), 약물대조군 (glibenclamide 10 mg/kg; GBCM), 발효전 인삼 투여군 (Ginseng 100 mg/kg; G-100, 300 mg/kg; G-300), A. oryzae 발효인삼 투여군(Fermented ginseng with A. oryze 100 mg/kg; A-100, 300 mg/kg; A-300), S. cerevisiae 발효인삼 투여군 (Fermented ginseng with S. cerevisiae 100 mg/kg; S-100, 300 mg/kg; S-300) 등 9개 군으로 각 군당 8 마리씩 분류하여 1일 1회 4주간 경구투여를 실시하였고, 1주일에 1번씩 체중과 혈당 (꼬리정맥 채혈)을 측정하였다. 5주째 에틸에테르 마취 후 심장채혈하여 다음과 같은 분석을 실시하였다.
Fasting normal and diabetic rats (> 200 mg / dL) 16 h, normal control (NC), streptozotocin diabetic (STZ-control group; DC), drug control (glibenclamide 10 mg / kg; GBCM) , Ginseng 100 mg / kg before fermentation (G-100, 300 mg / kg; G-300), A. oryzae fermented ginseng (Fermented ginseng with A. oryze 100 mg / kg; A-100, 300 mg / kg; a-300), S. cerevisiae fermented ginseng group (fermented ginseng with S. cerevisiae 100 mg / kg; S-100, 300 mg / kg; classified S-300) including nine groups with 8 rats in each group Oral administration was performed once a day for 4 weeks, and body weight and blood glucose (tail vein blood collection) were measured once a week. After 5 weeks of ethyl ether anesthesia, the blood was collected and the following analysis was performed.

◇ Serum glucose 및 insulin 함량, hemoglobin A1c (HbAlc) 분석Serum glucose and insulin content, hemoglobin A1c (HbAlc) analysis

Glucose는 glucose assay kit (Asanpham, Korea), insulin은 enzyme-linked immunosorbent assay kit (TMB) (AKRIN/010S, Japan)로 제조사가 지시한 방법에 따라 분석하였다. Glucose의 흡광도는 540 nm에서 spectrophotometer를 이용하여, insulin의 흡광도는 450 nm에서 Anthos 2020 microplate autoreader를 이용하여 측정하였다. 전혈 혈당 측정은 blood glucose meter (Accu-Chek Go, Roche Diagnostics GmbH, Germany)를 사용하여 측정하였다. HbAlc는 혈액을 채취하여 한국동물의과학연구소(KAMSI)에 의뢰하여 실험하였다.
Glucose was analyzed by glucose assay kit (Asanpham, Korea) and insulin by enzyme-linked immunosorbent assay kit (TMB) (AKRIN / 010S, Japan). The absorbance of glucose was measured using a spectrophotometer at 540 nm, and the absorbance of insulin was measured using an Anthos 2020 microplate autoreader at 450 nm. Whole blood glucose was measured using a blood glucose meter (Accu-Chek Go, Roche Diagnostics GmbH, Germany). HbAlc was sampled and commissioned by the Korea Institute of Animal Science (KAMSI).

◇ 혈청 triglyceride, total cholesterol, HDL-cholesterol 측정◇ Serum triglyceride, total cholesterol, HDL-cholesterol measurement

혈청 triglyceride, total cholesterol, HDL-cholesterol 측정용 kit (Asanpham, Korea)를 이용하여 제조사의 지시한 방법에 따라 측정하였다.
Serum triglyceride, total cholesterol, and HDL-cholesterol measurement kit (Asanpham, Korea) was used in the manufacturer's instructions.

9) 통계분석9) Statistical Analysis

모든 실험 결과는 평균치와 표준 오차로 계산하였고, 각 평군치간 차이에 대한 유의성은 SPSS 19.0 프로그램을 이용하여 ANOVA를 실시한 후, Turkey multiple comparison test로 각 군의 평균차이에 대한 사후 검정을 하였으며, 통계적 유의성을 5% 수준에서 분석하였다.All the experimental results were calculated using the mean and standard error. The significance of the difference between the average group values was ANOVA using the SPSS 19.0 program, followed by the Turkey multiple comparison test. Was analyzed at the 5% level.

[실험결과][Experiment result]

1. 당도 및 1. Sugar content and pHpH 측정Measure

1) 당도1) sugar content

발효홍삼과 발효직삼을 당도계를 이용하여 측정한 결과는 표 3과 같다. 5%, 2% 발효홍삼에서 발효전보다 발효 후 조금씩 당도가 떨어지는 것을 볼 수 있었으며, 시간의 경과에 따른 당도에는 큰 차이가 없는 것으로 나타났다.The results of the measurement of fermented red ginseng and fermented ginseng using a sugar meter are shown in Table 3. In 5% and 2% fermented red ginseng, the sugar content decreased slightly after fermentation than before fermentation, and there was no significant difference in sugar content over time.

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Figure pat00003

2) 2) pHpH

발효홍삼과 발효직삼을 pH를 측정한 결과, AN과 AO, LD는 발효 후 pH가 상승하였는데, 이는 AN, AO, LD 발효균주가 잘 자라는 pH는 중성(pH 6.0-7.5)이므로 처음 pH보다 상승하였고, SC 발효균주는 약산성(pH 4.0-4.5)에서 잘 자라므로 pH가 약간 감소하였다(표 4).As a result of measuring the pH of fermented red ginseng and fermented ginseng, the pH of AN, AO, and LD increased after fermentation, which was higher than the initial pH because the pH of AN, AO, LD fermented strains grows well (pH 6.0-7.5). , The fermented strain of SC grew well in weak acidity (pH 4.0-4.5), so the pH was slightly decreased (Table 4).

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Figure pat00004

2. 항산화활성 2. Antioxidant Activity

1) One) TotalTotal polyphenolpolyphenol

페놀 화합물은 식물계에 널리 분포하는 2차 대사물질로 수산기를 가지는 방향성 화합물을 총칭하는 것이다. 대부분의 폴리페놀 화합물은 세포벽 다당류, 리그닌 등과 에스테르 결합을 이루고 있거나 중합체로 존재하며, 수산기를 통한 수소공여와 페놀 고리구조의 공명 안정화에 의하여 항산화능을 나타낸다. 즉, polyphenol류는 체내의 항산화 체계와 함께 자유기로부터 조직을 보호해 주는 역할을 한다(Choi et al., 2003).A phenol compound is a general term for the aromatic compound which has a hydroxyl group as a secondary metabolite widely distributed in a plant system. Most polyphenol compounds form ester bonds or exist as polymers in cell wall polysaccharides, lignin, etc., and exhibit antioxidant activity by hydrogen donation through hydroxyl groups and resonance stabilization of phenol ring structures. In other words, polyphenols play an important role in protecting tissues from free radicals along with the antioxidant system in the body (Choi et al. , 2003).

하기 표 5와 6은 본 발명에 따른 홍삼발효물과 피부직삼발효물의 폴리페놀 함량을 나타낸 것이며, 도 2 및 3은 폴리페놀 함량을 나타낸 그래프이다.Tables 5 and 6 show the polyphenol contents of the red ginseng fermentation product and skin ginseng fermentation product according to the present invention, and FIGS. 2 and 3 are graphs showing the polyphenol content.

표 5 및 도 2는 홍삼발효물의 폴리페놀함량을 나타낸 것이고, 표 6 및 도 3은 피부직삼발효물의 폴리페놀 함량을 나타낸 것이다.Table 5 and Figure 2 shows the polyphenol content of red ginseng fermentation, Table 6 and Figure 3 shows the polyphenol content of skin ginseng fermentation.

홍삼 발효물(표5)의 폴리페놀 함량은 A. oryzae는 농도 2%의 경우 발효시간이 길어질수록 함량이 증가하여 7일간 발효에서 77.81 mg/mL로 나타냈으며, 5% 농도의 경우는 발효시간이 길어질수록 폴리페놀 함량이 감소하였다. A. niger의 경우 2% 농도에서는 발효시간 변화에 따른 큰 변화가 없었으나 5%의 경우에는 발효시간이 길어지면 폴리페놀 함량이 증가하여 7일 발효에서 99.30 mg/mL를 나타냈다.The polyphenol content of red ginseng fermentation product (Table 5) was 77.81 mg / mL in 7 days of fermentation when A. oryzae concentration increased with longer fermentation time at 2% concentration, and fermentation time at 5% concentration. The longer the polyphenol content was reduced. In the case of A. niger , there was no significant change in fermentation time at 2% concentration, but in 5% of fermentation time, the polyphenol content increased as the fermentation time was longer, resulting in 99.30 mg / mL in 7-day fermentation.

L. delbrueckiil 의 경우 2% 농도에서는 발효시간에 따라 함량이 증가하는 경향을 나타냈으나, 5% 농도에서는 발효시간에 따른 유의차가 나타나지 않았다. S. cerevisiae는 2% 농도에서는 발효시간이 길어짐에 따라 폴리페놀 함량이 감소하였고 3.5%와 5% 농도에서는 발효시간에 따른 폴리페놀 함량의 유의차는 없었다. In the case of L. delbrueckiil , the content increased with fermentation time at 2% concentration, but no significant difference was observed with fermentation time at 5% concentration. S. cerevisiae decreased polyphenol content with increasing fermentation time at 2% concentration and no significant difference of polyphenol content with fermentation time at 3.5% and 5% concentration.

발효하지 않은 대조구와 비교하면 2% 농도에서 A. oryzae 는 5일 이상의 발효에서, A. niger는 전 발효물에서, L. delbrueckiil는 7일간 발효물에서, S. cerevisiae는 전 발효물에서 대조구 보다 높은 폴리페놀 함량을 나타냈다. 3.5% 농도에서는 S. cerevisiae 발효물 전체가 높은 함량을 나타냈으며, 5%에서는 A. niger 7일 발효물은 제외하고는 대조구보다 낮은 폴리페놀 함량을 나타냈다. Compared to the non-fermented control, at 2% concentration, A. oryzae was fermented for 5 days or more, A. niger was used for all fermentation, L. delbrueckiil was fermented for 7 days, and S. cerevisiae was used for all fermentations. High polyphenol content. S. cerevisiae at 3.5% concentration The whole fermented product showed a higher content, and at 5%, the polyphenol content was lower than the control except for the A. niger 7-day fermented product.

표 6은 5%의 농도로 발효한 피부직삼의 폴리페놀 함량을 나타낸 것으로 A. oryzae 는 발효기간에 따른 폴리페놀 함량의 유의차가 없었으며, S. cerevisiae는 발효기간이 길어질수록 폴리페놀 함량이 증가하여 7일 발효물은 143.37 mg/mL로 최고 함량을 나타냈다, 균주간에는 A. oryzae 보다 S. cerevisiae가 높은 폴리페놀 함량을 나타내 발효에 효과적인 균주로 나타났다. Table 6 shows the polyphenol content of dermis ginseng fermented at 5% concentration. A. oryzae showed no significant difference in polyphenol content according to fermentation period. S. cerevisiae increased polyphenol content as fermentation period increased. The 7-day fermentation showed the highest content of 143.37 mg / mL. Among the strains, S. cerevisiae showed higher polyphenol content than A. oryzae , which was effective for fermentation.

홍삼과 피부직삼을 비교하면 홍삼에 비해 피부직삼 발효물이 높은 폴리페놀 함량을 나타냈다. 균주별로는 A. oryzae 보다 S. cerevisiae 높은 폴리페놀 함량을 나타냈다.Compared with red ginseng and skin ginseng, the skin ginseng fermented product showed higher polyphenol content than red ginseng. S. cerevisiae than A. oryzae High polyphenol content.

식물계에 널리 분포되어 있는 페놀성 물질은 다양한 구조와 분자량을 가지며, 이것들의 페놀성 수산기가 단백질과 같은 거대분자와 결합하여 항산화, 항균, 항암 등의 생리기능을 가지는 것으로 보고되고 있다(Jung et al., 2007).Phenolic substances widely distributed in plant systems have various structures and molecular weights, and these phenolic hydroxyl groups are reported to have physiological functions such as antioxidant, antibacterial and anticancer by combining with macromolecules such as proteins (Jung et al. , 2007).

Figure pat00005
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2) 2) TotalTotal flavonoidflavonoid

식물에 다량 존재하는 플라보노이드는 항산화작용, 순화기 질환 예방, 항염, 항알러지, 항균, 항 바이러스, 면역증강, 모세혈관 강화 등 다양한 기능성 생리활성 효과를 보인다(Kawaguchi et al., 1997).Flavonoids present in large quantities in plants show various functional physiological effects, such as antioxidant activity, prevention of purifying disease, anti-inflammatory, anti-allergic, antibacterial, anti-viral, immune-enhancing, and capillary strengthening (Kawaguchi et al ., 1997).

하기 표 7과 도 4는 홍삼발효물의 플라보노이드 함량을 나타낸 것이고, 표 8과 도 5는 피부직삼발효물의 플라보노이드 함량을 나타낸 것이다. Table 7 and Figure 4 shows the flavonoid content of red ginseng fermentation, Table 8 and Figure 5 shows the flavonoid content of skin ginseng fermentation.

하기 표 7 및 도 4의 홍삼발효물에서 대조군의 플라보노이드 함량은 농도가 높아질수록 함량이 낮아진 반면 S. cerevisiae균 발효 홍삼은 3.5%에서 가장 높은 함량을 나타냈으며, 발효시간이 길어질수록 높은 함량을 나타냈다. 균주별로는 A. oryzae, A. niger , L. delbrueckii 모두 5% 보다는 2% 농도에서 높은 플라보노이드 함량을 나타냈으며, 발효시간별로는 L. delbrueckii 는 발효시간이 길어지면 함량이 감소하는 경향을 나타냈으나, A. oryzae, A. niger는 발효시간이 길어질수록 플라보노이드 함량이 증가하였다. The flavonoid content of the control group in the red ginseng fermentation of Table 7 and Figure 4 was lower as the concentration increased, while S. cerevisiae fungus fermented red ginseng showed the highest content at 3.5%, and the higher the fermentation time, the higher the content. . By strain, A. oryzae, A. niger , L. delbrueckii All of them showed higher flavonoid content at 2% concentration than 5%, and L. delbrueckii showed a tendency to decrease as fermentation time increased, but A. oryzae and A. niger showed longer fermentation time. Flavonoid content increased.

표 8과 도 5는 피부직삼 발효물의 플라보노이드 함량을 나타낸 것으로 5% 농도에서 A. oryzaeS. cerevisiae 균주 발효물 모두 발효시간이 길어질수록 플라보노이드 함량이 감소하였고, 균주별로는 A. oryzae 보다는 S. cerevisiae 균주 발효물에서 높은 플라보노이드 함량을 나타냈다. Table 8 and FIG. 5 show the flavonoid content of the dermal ginseng fermentation, and the flavonoid content of both A. oryzae and S. cerevisiae strains fermented at 5% concentration decreased with increasing fermentation time, and S. cerevisiae rather than A. oryzae . Higher flavonoid content was seen in the strain fermentation.

시료별로는 S. cerevisiae 균주 발효물을 비교하면 홍삼보다 피부직삼 발효물의 플라보노이드 함량이 높게 나타났다. In comparison of the fermented S. cerevisiae strains, the flavonoids content of skin ginseng fermentation was higher than that of red ginseng.

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3) 3) DPPHDPPH radicalradical 소거활성 Scavenging activity

전자공여능을 측정하는 방법에는 여러 가지가 있으나 그 중에서 DPPH가 항산화물질에 의해 탈색되는 원리를 이용하는 방법은 비교적 간단하면서도 대량으로 측정이 가능한 방법이다. 전자공여능은 활성라디칼에 전자를 공여하여 지방질 산화를 억제시키는 척도로 사용되고 있을 뿐만 아니라 인체 내에서 활성라디칼에 의한 노화를 억제하는 작용의 척도로 이용되고 있다(Choi and Oh, 1985).There are various methods of measuring electron donating ability, but among them, the method of using DPPH deoxidized by antioxidants is relatively simple and can be measured in large quantities. Electron donating ability is used not only as a measure of inhibiting lipid oxidation by donating electrons to active radicals, but also as a measure of action of inhibiting aging by active radicals in the human body (Choi and Oh, 1985).

하기 표 9 와 10은 홍삼 발효물(표 9)과 피부직삼 발효물(표10)의 DPPH radical 소거활성을 나타낸 것으로, 표 9 및 도 6은 홍삼발효물의 DPPH radical 소거활성으로 S. cerevisiae균주 발효물의 경우 대조구에 비해 소거활성이 높게 나타났으며 홍삼 농도별로는 2%에서 높은 소거활성을 나타냈다. 균주별로는 A. niger 2% 발효물에서 높은 소거활성을 나타냈으나 기타 균주에서는 소거활성의 큰 차이가 없었다. 처리농도에서도 2%와 5%의 농도차이에 따른 소거활성 차이는 나타나지 않았으며, 발효처리 기간에서도 처리기간 변화에 따른 소거활성은 큰 차이가 없었다. 전체적으로는 발효처리하지 않은 대조군에 비해 발효 균주를 처리한 발효물에서 DPPH radical 소거활성이 높게 나타났다.Tables 9 and 10 show DPPH radical scavenging activity of red ginseng fermented product (Table 9) and skin ginseng fermented product (Table 10). Table 9 and FIG. 6 show the DPPH radical scavenging activity of red ginseng fermented S. cerevisiae strain. Water scavenging activity was higher than that of control and red ginseng showed high scavenging activity at 2%. By strain, A. niger The high scavenging activity was shown in 2% fermentation, but there was no significant difference in scavenging activity in other strains. There was no difference in the scavenging activity according to the difference in concentration between 2% and 5% in the treatment concentration. Overall, DPPH radical scavenging activity was higher in the fermented product treated with the fermentation strain than the control without the fermentation.

표 10 및 도 7 은 피부직삼 발효물의 DPPH radical 소거활성을 나타낸 것으로 A. oryzae 와 S. cerevisiae 균주 발효물 모두 발효기간 길어질수록 소거활성이 감소하는 경향을 나타냈으며. 균주간에는 따른 소거활성의 큰 차이는 나타나지 않았으면 홍삼에 비해 피부직삼 발효물이 높은 소거활성을 나타냈다. Table 10 and Figure 7 shows the DPPH radical scavenging activity of the dermis ginseng fermentation A. oryzae and S. cerevisiae Strain fermentation products showed a tendency to decrease as the fermentation period increased. If there was no significant difference in scavenging activity among the strains, skin ginseng fermented products showed higher scavenging activity than red ginseng.

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4) 4) SOD유사활성SOD-like activity

Superoxide는 산소가 전자 하나를 받아 환원된 형태로 체내 산화적 손상을 야기할 수 있으며 이것을 산소로 전환시키는 것이 SOD이다. SOD 유사물질이란 SOD와 같이 superoxide를 정상의 산소로 전환시킬 수는 없으나 superoxide의 반응성을 억제하여 생체를 산화적 손상으로부터 보호할 수 있는 주로 phytochemical의 저분자 물질을 의미한다(Han and Kim, 1994).Superoxide is a reduced form of oxygen that accepts an electron and can cause oxidative damage in the body, which is converted to oxygen. SOD analogues, like SOD, cannot convert superoxide to normal oxygen, but are mainly phytochemical low-molecular substances that can inhibit the reactivity of superoxide and protect the body from oxidative damage (Han and Kim, 1994).

하기 표 11 및 도 8은 홍삼 발효물의 SOD 유사활성을 나타낸 것으로 발효하지 않은 홍삼 대조구에 비해 S. cerevisiae 균주 발효물은 매우 높은 활성을 나타냈으며, 대조구에서는 농도가 높아지면 활성이 높아졌으나, S. cerevisiae 균주 발효물에서는 농도및 발효기간에 따른 활성의 차이는 크지 않았다. A. oryzae L. delbrueckii 균주 처리 발효물은 대조구에 비해 활성이 동일하거나 낮게 나타났다. Table 11 and Figure 8 shows the SOD-like activity of the red ginseng fermentation S. cerevisiae compared to the non-fermented red ginseng control Strain fermented products showed very high activity, and the higher the concentration in the control, the higher the activity, but S. cerevisiae In strain fermentation, there was no significant difference in activity according to concentration and fermentation period. Fermented A. oryzae and L. delbrueckii strains showed the same or lower activity than the control.

A. niger 균주 발효물도 대조구에 비해 높은 활성을 나타냈으며, 2% 보다 5% 발효물에서, 발효기간이 길어질수록 활성이 높게 나타났다. 홍삼 발효물의 SOD 유사활성 검토결과 A. niger S. cerevisiae 균주 발효물에서 대조구보다 높은 소거활성을 나타냈으며 A. niger에서는 5% 농도에서 3일간, S. cerevisiae 에서는 5% 농도에서 3일간 처리한 발효물에서 각각 25.15% 및 24.86%의 높은 활성을 나타냈다. A. niger The strain fermented product also showed higher activity than the control, and 5% fermented product than 2%, the higher the fermentation period was higher activity. SOD-like activity of red ginseng fermentation showed higher scavenging activity in A. niger and S. cerevisiae strain fermentation than control, and 3 days at 5% concentration in A. niger and 5% concentration in S. cerevisiae. The fermentation showed high activities of 25.15% and 24.86%, respectively.

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하기 표 12 및 도 9는 피부직삼 발효물의 SOD 유사활성을 나타낸 것으로 A. oryzae 발효물과 S. cerevisiae 발효물은 각각 13.72%~21.27% 및 62.04%~ 83.46%로 발효기간이 길어짐에 따라 활성이 높아졌고, S. cerevisiae 발효물은 매우 높은 활성을 나타내 7일간 발효물은 83.46%로 가장 높은 활성을 나타냈다. Table 12 and Figure 9 shows the SOD-like activity of the dermis ginseng fermentation A. oryzae fermentation and S. cerevisiae fermentation is 13.72% ~ 21.27% and 62.04% ~ 83.46%, respectively, the activity is increased as the fermentation period is longer S. cerevisiae fermentation showed a very high activity and the fermentation showed the highest activity of 83.46% for 7 days.

홍삼 발효물보다 피부직삼 발효물에서 매우 높은 SOD 유사활성을 나타냈다.The skin ginseng fermented product showed much higher SOD-like activity than the red ginseng fermented product.

SOD는 사람과 동물의 장기와 혈액 내에 존재하는 생리활성 효소로 유해 산소를 제거하는 역할을 하며 SOD 유사활성물질은 phytochemical에 속하는 물질이 SOD와 유사한 역할을 하여 superoxide radical의 반응성을 억제하여 생체를 보호한다(Murakami et al., 2003). SOD는superoxide (O2·-)를 전상상태의 산소로 환원시킴으로써 superoxide가 관여하는 각종 질병이나 노화를 억제할 수 있는 효소는 아니지만 SOD와 유사한 역할을 하는 저분자 물질로 주로 phytochemical에 속하며, superoxide의 반응성을 억제하고 superoxide로부터 생체를 보호하는 것으로 보고되고 있으며, 이를 제거함으로써 산화적 장애를 방어하고 노화억제의 효과를 기대할 수 있을 것으로 보고 있다(Kweon et al., 2007).SOD is a physiologically active enzyme present in organs and blood of humans and animals that removes harmful oxygen. SOD-like active substances protect substances by inhibiting the reactivity of superoxide radicals because substances belonging to phytochemicals play a role similar to SOD. Murakami et al ., 2003). SOD is a small molecule that plays a role similar to SOD, although it is not an enzyme capable of inhibiting various diseases or aging related to superoxide by reducing superoxide (O2 ·-) to phase oxygen, and belongs to phytochemical. It has been reported to inhibit and protect the living body from superoxide, and by removing it, the oxidative disorder can be defended and anti-aging effect can be expected (Kweon et al ., 2007).

Figure pat00012
Figure pat00012

3. 3. GinsenosideGinsenoside 분석 결과 Analysis

1) One) 발효전후의Before and after fermentation 조사포닌Crude saponin 함량분석 Content analysis

인삼의 발효전후의 조사포닌 함량은 하기 표 13에서 나타난 바와 같이, 발효 전보다 발효 후의 조사포닌 함량이 줄어들었는데 발효농도가 진할수록 감소폭이 컸다. As shown in Table 13 below, the irradiated ponponin content of ginseng was decreased after fermentation than before fermentation.

S. cerevisiae 는 모든 농도에서 발효기간이 늘어날수록 조사포닌의 함량이 감소하는 경향을 보였고, 2%에서는 L. delbrueckii가 5%에서는 A. niger에서 감소폭이 가장 컸다. S. cerevisiae As the fermentation period increased at all concentrations, the content of irradiated saponin was decreased, with L. delbrueckii at 2% and A. niger at 5%.

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2) 2) 발효전후의Before and after fermentation ginsenosideginsenoside 함량분석  Content analysis

홍삼의 발효는 피부직삼의 발효보다 발효속도가 느린 경향이 있었고, 홍삼에서도 균주만 이용한 발효에 비하여 효소를 같이 처리 했을 때 발효가 현저히 많이 진행된 것을 확인할 수 있었다[표 14-17]. Fermentation rate of red ginseng tended to be slower than fermentation of dermal ginseng, and it was confirmed that fermentation proceeded remarkably when red ginseng was treated with enzyme as compared to fermentation using only strain [Table 14-17].

2% 홍삼 물추출액에서 A. nigerL. delbrueckii에서는 PPT 계열 사포닌의 주요성분인 ginsenoside Rg1, Re, Rf가 시간이 갈수록 감소하는 경향을 보였으나 ginsenoside Rh1, Rg2, Rh4의 함량 증가는 확인되지 않았다. PPD 계열의 주요 사포닌인 ginsenoside Rb1, Rb2, Rb3, Rc 및 Rd 역시 발효가 진행됨에 따라 ginsenoside Rg3, compound K, Rk1 및 Rg5 값이 크게 늘어나는 경향을 보이지는 않았다. A. oryzaeS. cerevisiae는 사포닌 함량이 줄어들거나 늘어나는 경향을 보이지는 않았으나 S. cerevisiae에서 Rg3의 함량이 다소 늘어나는 경향을 보였다(표 14, 도 10 및 11). 3.5% 홍삼 물추액의 S. cerevisiae에 의한 발효에서도 ginsenoside의 함량이 줄어드는 경향을 보였으나 상대적으로 Rg3의 감소폭이 낮았다(표 15). 5% 홍삼 추출물에서는 발효함에 따라 전체적으로 ginsenoside의 함량이 감소하는 경향을 보였는데, A. oryzae와는 PPT계열의 주요 ginsenoside의 함량 폭이 PPD계열의 주요 ginsenoside의 함량 폭 보다 크게 나타났다(표16). In 2% red ginseng extract, ginsenosides Rg1, Re, and Rf, which are the major constituents of PPT-type saponins, tended to decrease over time in A. niger and L. delbrueckii , but no increase in ginsenoside Rh1, Rg2, Rh4 contents was observed. . The ginsenosides Rb1, Rb2, Rb3, Rc and Rd, which are the major saponins of the PPD family, also showed no significant increase in ginsenoside Rg3, compound K, Rk1 and Rg5 values as the fermentation progressed. A. oryzae and S. cerevisiae did not show a tendency to decrease or increase saponin content, but Rg3 content tended to increase slightly in S. cerevisiae (Table 14, FIGS. 10 and 11). In the fermentation of 3.5% red ginseng extract with S. cerevisiae , the content of ginsenoside tended to decrease, but the decrease of Rg3 was relatively low (Table 15). 5% in the red ginseng extract was beams tend to reduce overall the amount of ginsenoside as fermentation, A. oryzae content than the width of the main ginsenoside of PPT series is shown larger than the width of the main ginsenoside content of PPD series (Table 16).

PPT계 및 PPD계 사포닌의 함량이 많이 줄어들지 않았으나 는 발효기간이 길어질수록 PPD계와 PPT계가 감소하는 경향을 나타내는 반면에 5% 홍삼 물추출액 A. niger에서는 PPD계와 PPT계가 발효기간이 길어질수록 증가하였다. 5% 홍삼 물추출액 S. cerevisiae에서는 발효기간이 길어질수록 PPT계가 감소하였다(표 16 및 도 12 및 13). 3.5% 홍삼 물추출액에서는 PPD계 증가하였다(표 15). 홍삼 물추출액을 이용한 발효에서 compound K 함량이 늘어난 경우는 L. delbrueckii에 의한 3일 발효에서는 약간 늘어났다.PPT-based and PPD-based decrease the content of saponin Although longer the fermentation lots of 5% red ginseng water extract on the other hand indicates a tendency to decrease with the PPD-based PPT boundaries A. niger The increase the longer the PPD and PPT-based boundaries fermentation It was. In 5% red ginseng water extract S. cerevisiae , the PPT system decreased as the fermentation period increased (Table 16 and FIGS. 12 and 13). In 3.5% red ginseng extract, PPD was increased (Table 15). The increase of compound K content in fermentation with red ginseng water extract slightly increased in 3 days fermentation by L. delbrueckii .

5% 피부직삼 에탄올 추출액을 효소와 같이 발효했을 때 A. oryzae ginsenoside Re가 5일과 7일에서는 검출되지 않는 대신 Rg1의 함량이 상당히 증가 하였다. Rf의 함량 역시 시간에 따라 줄어 들었고, 3일에서 Rh1함량이 늘었다가 점차 줄어 들었다. Ginsenoside Rb1은 3일에 줄어들었다가 5일과 7일에는 나타나지 않았으며 Rb2와 Rb3 역시 시간에 따라 줄어 들었으나 Rc와 Rd는 3일 발효에 함량이 늘었다가 시간이 늘어남에 따라 줄어들었고, compound K가 검출되지 않았다. 피부직삼의 S. Cerevisiae에서는 PPT계열 값에 변동이 없었고, PPD계열은 주요 ginsenoside Rb1, Rb2 및 Rb3 함량이 확 줄어든 반면 Rd 값이 많이 늘어났고, compound K가 시간에 따라 늘어나는 경향을 보였다. 홍삼의 효소 및 균주 발효는 피부직삼 만큼 현저한 ginsenoside 변화가 관찰되지 않았으나 S. Cerevisiae에서 ginsenoside Rd값이 늘어났고, 5일과 7일에서 compound K 나타났다(표 17, 도 14 및 15). When the fermentation as a 5% ethanol jiksam skin extract and an enzyme A. oryzae is the content of ginsenoside Rg1 instead Re is not detected in the 5 and 7 days it was significantly increased. The content of Rf also decreased with time, and gradually increased and decreased with increasing Rh1 content at 3 days. Ginsenoside Rb1 decreased on day 3, but did not appear on days 5 and 7, and Rb2 and Rb3 also decreased over time, but Rc and Rd increased over 3 days of fermentation and then decreased over time. It was not detected. The S. Cerevisiae skin jiksam there was no change in the PPT family values, PPD series was a major ginsenoside Rb1, Rb2 and Rb3 while the content is reduced expansion Rd got a lot of value increases, the tendency to compound K increasing with time. Enzyme and strain fermentation of red ginseng showed no significant changes in ginsenosides, but increased ginsenoside Rd values in S. Cerevisiae and compound K on days 5 and 7 (Table 17, Figures 14 and 15).

한편, 표 17과 도 14 및 15에 도시된 바와 같은 결과에 따라, 피부직삼의 ginsenoside Rg1의 함량 변화를 관찰하기 위하여 HPLC로 측정한 결과, 첨부도면 도 20에 도시된 바와 같이 발효전 인삼과 발효 후의 인삼의 Rg1의 함량이 현저히 증가하였음을 알 수 있었다.
On the other hand, according to the results as shown in Table 17 and 14 and 15, as measured by HPLC to observe the change in the content of ginsenoside Rg1 of skin ginseng, as shown in Figure 20 attached to the fermentation ginseng and fermentation It was found that the content of Rg1 in later ginseng was significantly increased.

Figure pat00014
Figure pat00014

● Ginsenoside content of red ginseng and fermented red ginseng (2% water extract)Ginsenoside content of red ginseng and fermented red ginseng (2% water extract)

Figure pat00015
Figure pat00015

● Ginsenoside content of red ginseng and fermented red ginseng (3.5% water extract)
Ginsenoside content of red ginseng and fermented red ginseng (3.5% water extract)

Figure pat00016
Figure pat00016

● Ginsenoside content of red ginseng and fermented red ginseng (5% water extract)Ginsenoside content of red ginseng and fermented red ginseng (5% water extract)

Figure pat00017
Figure pat00017

● Ginsenoside content of fermented dried ginseng with skin and red ginseng (5% ethanol extract)-조효소처리Ginsenoside content of fermented dried ginseng with skin and red ginseng (5% ethanol extract)

4. 4. 항당뇨Anti-diabetic 효과 effect

1) 체중의 변화1) change in weight

실험초기의 체중은 정상군과 당뇨유발군과의 차이가 없었으나 시간이 갈수록 정상군의 체중 증가율이 당뇨유발군에 비해 유의하게 커지는 것을 확인할 수 있었다 (p<0.05). 인삼투여군이나 A. oryzae 또는 S. cerevisiae 로 발효된 인삼투여군은 모든 투여농도에서 당뇨유발군에 비해 체중증가율이 높게 나타났으나 통계적인 유의성은 없었다[표 18, 도 16].At the beginning of the experiment, there was no difference between the normal group and the diabetic group, but the weight gain rate of the normal group was significantly increased as compared with the diabetic group (p <0.05). Ginseng administration group or A. oryzae Ginseng administration group fermented with S. cerevisiae showed a higher weight gain rate than the diabetes-induced group at all concentrations, but there was no statistical significance [Table 18, FIG. 16].

하기 표 18의 단위는 'g'이다.The unit of Table 18 is 'g'.

Figure pat00018
Figure pat00018

● Change of body weight of normal and STZ-induced rat fed with ginseng for 4 weeks.● Change of body weight of normal and STZ-induced rat fed with ginseng for 4 weeks.

2) 혈당의 변화2) changes in blood sugar

혈당의 변화는 흰쥐의 꼬리에서 채혈하여 전혈을 이용하여 측정하였다. 정상군의 혈당은 4주간의 실험기간 동안 일정한 수준을 유지하였으나 당뇨유발군은 streptozotocin 유도 2일 (326 mg/dL)에 측정한 혈당값보다 시간이 갈수록 증가하여 3주째에 최고 (576 mg/dL)에 도달하여 유지되는 것을 관찰 할 수 있었다. 양성대조군으로 사용한 glibenclamide투여군은 당뇨유발 1주일째에는 유의하게 혈당상승을 억제하였으나 2주와 3주에는 억제 폭이 감소하였다가 4주째 다시 유의한 차이를 나타냈다. 발효전 인삼투여군은 투여 1주와 2주까지는 혈당상승을 유의하게 억제하지 않았으나 3주와 4주부터는 유의한 차이를 보였고, 100 mg/kg으로 투여한 군보다 300 mg/kg으로 투여한 군에서 혈당상승을 크게 억제함을 관찰할 수 있었다[표 19, 도 17].Changes in blood glucose were measured in the tail of rats using whole blood. The blood sugar level of the normal group was maintained at a constant level during the 4-week experiment, but the diabetes-induced group increased with time over the blood glucose value measured on the 2nd day of streptozotocin induction (326 mg / dL) and peaked at 3 weeks (576 mg / dL). Was observed to be maintained. The glibenclamide group used as a positive control group significantly inhibited the increase in blood glucose at 1 week of diabetes-induced treatment, but decreased at 2 and 3 weeks, but showed a significant difference again at 4 weeks. Ginseng administration group before fermentation did not significantly suppress blood glucose increase until 1 and 2 weeks of administration but showed significant difference from 3 and 4 weeks, and 300 mg / kg group than 100 mg / kg group. It was observed that the blood sugar rise is greatly suppressed (Table 19, Fig. 17).

이에 반해 A. oryzae 또는 S. cerevisiae로 발효된 인삼을 투여한 군은 투여 1주부터 혈당상승을 유의하게 억제하는 것을 관찰할 수 있었으며, 특히 A. oryzae 로 발효한 인삼 투여군은 시간이 지날수록 크게 증가하는 혈당 상승을 크게 억제하는 것을 관찰 할 수 있었고, 투여농도는 높을수록 더 큰 억제를 보였으나 농도에 따른 유의한 차이는 보이지 않았다. S. cerevisiae로 발효된 인삼을 투여한 군은 농도와 관계없이 투여 1주와 2주에는 혈당상승을 유의하게 억제하였으나 3주째는 유의한 차이를 보이지 않다가 4주째에 고농도에서 유의한 혈당억제를 보였다. 이상의 결과를 종합하여 볼 때 인삼의 투여는 3주째부터 혈당상승을 억제하였고, A. oryzae로 발효한 인삼 투여군은 투여초기부터 혈당상승을 효과적으로 억제하여 시간이 지나더라도 지속적인 효과를 보였으며, S. cerevisiae로 발효된 인삼을 투여군은 초기에는 효과를 보이다가 3주정도의 시간이 지났을 때는 혈당상승 억제능력이 다소 둔화되는 것을 확인할 수 있었다. 일반적으로 인삼을 발효하였을 때 생물전환되어 나타나는 compound K는 S. cerevisiae로 발효하였을 때 높게 나타나고, A. oryzae로 발효하였을 때는 나타나지 않았는데도 A. oryzae로 발효한 인삼투여군에서 혈당상승억제효과가 높게 나타나는 것을 보면 인삼의 항당뇨 효과는 compound K가 아닌 다른 물질에 기인할 것으로 사료되었다. In contrast to A. oryzae Or ginseng fermented with S. cerevisiae significantly inhibited blood glucose increase from 1 week of administration, especially A. oryzae The fermented ginseng treated group significantly inhibited the increase in blood glucose, which significantly increased with time, and the higher the concentration, the greater the inhibition, but no significant difference according to the concentration. Ginseng fermented with S. cerevisiae significantly inhibited blood glucose increase at 1 and 2 weeks of administration regardless of the concentration, but showed no significant difference at 3 weeks, but significantly suppressed blood glucose at high concentrations at 4 weeks. Seemed. In conclusion, ginseng administration inhibited the blood glucose increase from the 3rd week. Ginseng-administered group fermented with A. oryzae effectively suppressed the blood glucose increase from the beginning of the administration and showed a continuous effect even over time . Ginseng fermented with cerevisiae showed an initial effect, but after 3 weeks, blood glucose suppression ability was slowed slightly. Compound K represented by the general organisms is switched when hayeoteul fermented ginseng is to appear appears high when hayeoteul fermentation, A. even though appear when hayeoteul fermentation with A. oryzae suppressed rise in blood glucose levels in the treated ginseng fermented by oryzae highly effective as S. cerevisiae The antidiabetic effect of ginseng may be due to a substance other than compound K.

하기 표 19의 단위는 '㎎/dL'이다.In Table 19, the unit is 'mg / dL'.

Figure pat00019
Figure pat00019

● Change of blood glucose of normal and STZ-induced rat fed with ginseng for 4 weeks.Change of blood glucose of normal and STZ-induced rat fed with ginseng for 4 weeks.

3) 혈청 3) serum glucoseglucose 농도 density

4주 동안 경구투여하며 전혈을 이용하여 혈당의 변화율을 관찰한 후, 부검하여 혈액을 채취하여 혈청으로부터 혈당을 측정하였다. 정상군의 혈당 119 mg/dL보다 당뇨유발군의 혈당은 635 mg/dL로 크게 상승한 상태였으나 인삼투여군은 저농도 (100 mg/kg)와 고농도 (300 mg/kg)에서 각각 405 mg/dL와 384 mg/dL의 혈당을 보였고, S. cerevisiae로 발효한 인삼투여군도 저농도와 고농도에서 각각 405 mg/dL와 365 mg/dL로 인삼투여군과 비슷한 수준으로 유의하게 혈당상승을 억제하였다. 반면에 A. oryzae로 발효한 인삼투여군에서는 저농도와 고농도에서 각각 376 mg/dL과 333 mg/dL으로 가장 현저한 혈당상승 억제효과를 보였다. 약물대조군으로 사용한 glibenclamide 10 mg/kg 투여군의 혈당은 555 mg/dL으로 나타나 혈당상승억제효과가 나타났으나 상승억제 정도는 인삼 및 발효한 인삼투여군에 비하여 미약한 수준이었다[표 20, 도 18의 A]. After oral administration for 4 weeks, the change in blood glucose was observed using whole blood, and blood was collected by autopsy to measure blood glucose from serum. The blood sugar level of the diabetic group was significantly increased to 635 mg / dL, compared to the normal blood sugar level of 119 mg / dL, but the ginseng administration group was 405 mg / dL and 384 at low concentration (100 mg / kg) and high concentration (300 mg / kg), respectively. The blood glucose level of mg / dL was shown, and Ginseng administration group fermented with S. cerevisiae also significantly suppressed blood glucose increase at low and high concentrations, similar to that of ginseng administration group at 405 mg / dL and 365 mg / dL, respectively. On the other hand, the ginseng administration group fermented with A. oryzae showed the most significant inhibitory effect on blood glucose levels at low and high concentrations of 376 mg / dL and 333 mg / dL, respectively. The blood glucose level of the glibenclamide 10 mg / kg administration group used as a drug control group was 555 mg / dL, indicating a synergistic inhibitory effect, but the degree of inhibition was weaker than that of the ginseng and fermented ginseng administration groups [Table 20, Figure 18 A].

4) 혈청 4) serum insulininsulin 농도 density

경구투여 4주 후의 혈청 인슐린은 정상군이 0.348 ng/mL이었고, 당뇨유발군이 0.222 ng/mL로 유의하게 낮았다. 양성대조군인 glibenclamide 10 mg/kg 투여군은 0.294 ng/mL로 인슐린의 감소를 유의하게 억제하였으나 인삼과 발효인삼투여군의 인슐린 0.319 ng/mL에서 0.333 ng/mL보다는 미약한 수준이었다[표 20, 도 18의 B].
The serum insulin at 4 weeks after oral administration was 0.348 ng / mL in the normal group and significantly lower in the diabetes-induced group (0.222 ng / mL). The positive control group, glibenclamide 10 mg / kg, significantly inhibited the decrease of insulin at 0.294 ng / mL, but was less than 0.333 ng / mL at 0.319 ng / mL of the ginseng and fermented ginseng-administered groups [Table 20, FIG. 18. B].

5) 5) HemoglobinHemoglobin A1c ( A1c ( HbA1cHbA1c ) 함량) content

HbA1c는 정상군에서 1.10%였고, 당뇨유발군에서 5.03%로 나타나 유의한 차이를 나타냈으나, 약물대조군, 인삼 및 발효인삼 투여군의 HbA1c는 당뇨유발군에서보다는 모두 낮게 나타났으나 유의한 차이를 나타내지는 않았다[표 20, 도 18의 C]. 이것은 HbA1c가 혈당의 과거력을 판단하는 지표인 만큼 4주간의 단기적인 투여에 의해서 효과가 크게 나타나지 않았음을 미루어 추측할 수 있었다.HbA1c was 1.10% in the normal group and 5.03% in the diabetic group. However, HbA1c in the drug control group, ginseng and fermented ginseng group was lower than in the diabetic group, but there was a significant difference. It is not shown [Table 20, FIG. 18C]. This could be inferred from the fact that HbA1c is an indicator for determining the past history of blood glucose, and thus the effect was not shown by the short-term administration for 4 weeks.

Figure pat00020
Figure pat00020

● Serum glucose, insulin, and HbA1c levels of normal and STZ-induced rat fed with ginseng for 4 weeks.
Serum glucose, insulin, and HbA1c levels of normal and STZ-induced rat fed with ginseng for 4 weeks.

6) 혈청 중성지방, 총 6) serum triglycerides, total cholesterolcholesterol  And HDLHDL cholesterolcholesterol 함량 content

중성지방은 정상군 50.7 mg/dL에 비해 당뇨유발군이 108.7 mg/dL로 크게 상승하였으며, 300 mg/kg의 고농도 인삼투여군은 76.9 mg/dL, S. cerevisiae 발효인삼 저농도와 고농도 투여군은 각각 78.5 mg/dL와 71.7 mg/dL, A. oryzae로 발효한 인삼투여군에서는 저농도와 고농도에서 각각 66.3 mg/dL과 64.5 mg/dL로 나타나 약물대조군 79.9 mg/dL보다 중성지방 상승을 유의하게 억제하였다[표 21, 도 19의 A]. Triglycerides were diabetic group was significantly increased to 108.7 mg / dL compared to the normal group, 50.7 mg / dL, 300 mg / kg of the high concentration ginseng group is 76.9 mg / dL, S. cerevisiae fermented ginseng low concentration and high dose group were 78.5 The ginseng group fermented with mg / dL, 71.7 mg / dL and A. oryzae showed 66.3 mg / dL and 64.5 mg / dL at low and high concentrations, respectively, which significantly inhibited the elevation of triglycerides than the 79.9 mg / dL drug control group [ Table 21, A of FIG. 19.

총콜레스테롤은 정상군이 93 mg/dL이었고, 당뇨유발군이 150 mg/dL으로 유의하게 상승하였으며, 약물투여군을 비롯한 인삼 및 발효인삼 전 투여군에서 비슷한 수준으로 총콜레스테롤의 상승을 유의하게 억제함을 관찰할 수 있었다[표 21, 도 19의 B].The total cholesterol level was 93 mg / dL in the normal group, and the diabetes-induced group was significantly increased to 150 mg / dL. It could be observed (Table 21, B of FIG. 19).

HDL-cholesterol은 당뇨유발군 48.3 mg/dl보다 정상군에서 52.7 mg/dL로 높게 나타났으나 통계적인 유의한 차가 나타나지 않았다[표 21, 도 19의 C]. HDL-cholesterol은 약물투여군 < 인삼투여군 < A. oryzae 발효인삼투여군 < S. cerevisiae 발효인삼투여군 순으로 당뇨유발군 및 정상군보다 모두 높게 나타났으나 통계적인 유의성은 보이지 않았다.
HDL-cholesterol was 52.7 mg / dL higher in the normal group than 48.3 mg / dl in the diabetic group, but there was no statistically significant difference [Table 21, FIG. 19C]. HDL-cholesterol was administered in drug group <ginseng group < A. oryzae Fermented ginseng group < S. cerevisiae Fermented ginseng group was higher than diabetic group and normal group, but there was no statistical significance.

Figure pat00021
Figure pat00021

● Triglyceride, total cholesterol and HDL-cholesterol levels of normal and STZ-induced rat fed with ginseng for 4 weeks
Triglyceride, total cholesterol and HDL-cholesterol levels of normal and STZ-induced rat fed with ginseng for 4 weeks

이상에서 설명된 바와 같은 본 발명에 따른 인삼 또는 홍삼의 발효방법은 선택성 있는 인삼성분 전환 균주 선발로 특정 성분 인삼발효의 최적화를 기할 수 있을 것으로 판단된다. Fermentation method of ginseng or red ginseng according to the present invention as described above is determined to be able to optimize the ginseng fermentation of a specific component by selecting a selective ginseng component conversion strain.

또한, 본 발명의 방법에 따라 제조된 발효인삼 또는 발효홍삼은 특정 발효균주에 의해 발효 후 특정생리활성물질의 함량증가로 그 증가된 특정 성분 중심의 인삼의 2차 가공품인 고기능성 식품 개발에 활용할 수 있을 것으로 판단된다.
In addition, the fermented ginseng or fermented red ginseng prepared according to the method of the present invention can be utilized in the development of high functional foods, which are secondary processed products of ginseng centered on specific components, increased by the increase in the content of specific bioactive substances after fermentation by a specific fermentation strain. I think you can.

이상에서 설명한 본 발명은 전술한 실험방법 및 첨부된 도면에 의해 한정되는 것이 아니고, 본 발명의 기술적 사상을 벗어나지 않는 범위 내에서 여러 가지 치환, 변형 및 변경이 가능함은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 명백할 것이다.
The present invention described above is not limited to the above-described test method and the accompanying drawings, and various substitutions, modifications, and changes are possible within the scope without departing from the technical spirit of the present invention. It will be evident to those who have knowledge of.

도 16 내지 19에 사용된 약어는 다음과 같다.
NC: not induced diabetic rat
DC: sterptozotocoin(STZ)-induced diabetic rats
G-100: ginseng 100 mg/kg-administrated rats
GBCM: gilbenclamide 10 mg/kg-administrated rats
G-300: ginseng 300 mg/kg-administrated rats
A-100: fermented ginseng with A. oryzae 100 mg/kg-administrated rats
A-300: fermented ginseng with A. oryzae 300 mg/kg-administrated rats
S-100: fermented ginseng with S. cerevisiae 100 mg/kg-administrated rats
S-300: fermented ginseng with S. cerevisiae 300 mg/kg-administrated rats.
Abbreviations used in FIGS. 16 to 19 are as follows.
NC: not induced diabetic rat
DC: sterptozotocoin (STZ) -induced diabetic rats
G-100: ginseng 100 mg / kg-administrated rats
GBCM: gilbenclamide 10 mg / kg-administrated rats
G-300: ginseng 300 mg / kg-administrated rats
A-100: fermented ginseng with A. oryzae 100 mg / kg-administrated rats
A-300: fermented ginseng with A. oryzae 300 mg / kg-administrated rats
S-100: fermented ginseng with S. cerevisiae 100 mg / kg-administrated rats
S-300: fermented ginseng with S. cerevisiae 300 mg / kg-administrated rats.

Claims (11)

홍삼 또는 인삼 추출액을 제조하는 단계;
상기 홍삼 또는 인삼 추출액을 여과하고난 후, 80~90℃에서 25~45분간 살균하는 살균단계;
상기 살균단계에서 살균된 홍삼 또는 인삼 추출액을 냉각한 후, 미리 배양하여 준비된 발효균주를 3~5%(v/v) 첨가하여 25 내지 30 ℃에서 3 ~ 7일간 발효시키는 단계;
상기 발효균주가 배양된 발효추출액을 여과한 후, 45℃ 수용액상에서 회전진공농축기(rotary vaccum evaporator)를 이용하여 농축하는 농축단계; 및
상기 농축단계의 농축물을 초저온냉동고(deep freezer)에 10~15시간 보관 후, 꺼내어 동결건조기로 동결건조하는 단계를 포함하여 이루어지는 것을 특징으로 하는 인삼 또는 홍삼의 발효방법.
Preparing red ginseng or ginseng extract;
After sterilizing the red ginseng or ginseng extract, sterilization step for 25 to 45 minutes at 80 ~ 90 ℃;
After cooling the red ginseng or ginseng extract sterilized in the sterilization step, by adding 3 ~ 5% (v / v) of the fermentation strain prepared by incubation in advance for 3 to 7 days at 25 to 30 ℃;
Filtering the fermentation broth cultured with the fermentation strain, and then concentrating on a 45 ° C. aqueous solution using a rotary vaccum evaporator; And
Fermentation method of ginseng or red ginseng, characterized in that comprising the step of storing the concentrate of the concentration step in an ultra-low temperature freezer (deep freezer) for 10 to 15 hours, take out and freeze-dried with a freeze dryer.
제 1 항에 있어서,
상기 홍삼 또는 인삼추출액은 홍삼 및 인삼을 증류수에 20~50 g/ℓ포함하도록 첨가 후, 85~90℃ 온도조건하에 48~72시간 교반하여, 이것을 거즈로 1차 여과하고, 그 1차 여과액을 여과지를 이용하여 2차 여과한 열수추출액이거나, 또는 홍삼 및 인삼을 70% 에탄올에 희석비율 1~2:10(w/v)로 하여 70~75℃ 온도조건하에 20~24시간 침출한 다음, 이것을 거즈로 1차 여과하고, 그 1차 여과액을 여과지를 이용하여 2차 여과한 알콜침출액인 것을 특징으로 하는 인삼 또는 홍삼의 발효방법.
The method of claim 1,
The red ginseng or ginseng extract is added to include red ginseng and ginseng 20 to 50 g / ℓ in distilled water, and then stirred for 48 to 72 hours under 85 ~ 90 ℃ temperature conditions, this is first filtered with gauze, the primary filtrate Was filtered through the filter paper or the hot water extract or red ginseng and ginseng in 70% ethanol at a dilution ratio of 1 to 2:10 (w / v) and leached at 70 to 75 ° C. for 20 to 24 hours. This is a fermentation method of ginseng or red ginseng, characterized in that the first filtration with gauze, and the primary filtrate is an alcohol leaching solution secondary filtered using filter paper.
제 1 항에 있어서,
상기 발효균주는 사카로미세스 세레비제(Saccharomyces cerevisiae KCCM 50549) 또는 아스페르질러스 오리제(Aspergillus oryzae KCCM 60241) 중 어느 하나인 것을 특징으로 하는 인삼 또는 홍삼의 발효방법.
The method of claim 1,
The fermented strains are Saccharomyces ( Saccharomyces) cerevisiae KCCM 50549) or Aspergillus across the Duck's (Aspergillus oryzae KCCM 60241) any one of ginseng or red ginseng characterized in that the fermentation method.
제 1 또는 2 항에 있어서,
상기 인삼 또는 홍삼추출액은 인삼 또는 홍삼을 미분쇄한 다음 그 분쇄된 인삼 또는 홍삼 분말을 열수추출 또는 알콜추출한 것을 특징으로 하는 인삼 또는 홍삼의 발효방법.
The method according to claim 1 or 2,
The ginseng or red ginseng extract is finely pulverized ginseng or red ginseng and then the ground ginseng or red ginseng powder, hot water extraction or alcohol extraction, characterized in that fermentation method.
제 1 항에 있어서,
상기 농축단계의 농축물은 고형분 함량 38~52%인 것을 특징으로 하는 인삼 또는 홍삼의 발효방법.
The method of claim 1,
The concentrate of the concentration step is a fermentation method of ginseng or red ginseng, characterized in that the solid content of 38 ~ 52%.
제 1 항에 있어서,
상기 살균처리단계 후, 증류수 100중량부에 대하여 인삼 또는 홍삼추출액 5~6중량부, 조효소 0.7~1.0중량부를 혼합한 추출액을 45~55℃의 온도조건하에 2~2.5시간 효소반응시키고, 반응이 완료된 추출액을 90~95℃에서 5~15분간 살균한 후, 상온에서 서서히 냉각시키는 효소반응단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 인삼 또는 홍삼의 발효방법.
The method of claim 1,
After the sterilization step, 5-6 parts by weight of ginseng or red ginseng extract and 0.7-1.0 parts by weight of coenzyme were enzymatically reacted under a temperature condition of 45-55 ° C. for 2 to 2.5 hours with respect to 100 parts by weight of distilled water. After sterilization of the completed extract for 5 to 15 minutes at 90 ~ 95 ℃, fermentation method of ginseng or red ginseng, characterized in that it further comprises an enzyme reaction step of slowly cooling at room temperature.
제 6 항에 있어서,
상기 효소는 α-허브자임(α-Herbzyme) 3 g에 증류수 100 mL를 가하고 50℃에서 2시간 침출한 다음 거즈로 1차 여과한 후 얻어진 여과액을 여과지로 2차 여과시킨 여액을 조효소액으로 사용하는 것을 특징으로 하는 인삼 또는 홍삼의 발효방법.
The method according to claim 6,
The enzyme was added 100 mL of distilled water to 3 g of α-Herbzyme and leached at 50 ° C. for 2 hours, followed by primary filtration with gauze. The filtrate obtained by secondary filtration with filter paper was used as a crude enzyme solution. Fermentation method of ginseng or red ginseng, characterized in that used.
청구항 1 내지 4 중에서 선택된 어느 한 항에 의하여 제조된 발효인삼.


Fermented ginseng prepared by any one of claims 1 to 4.


제 8 항에 있어서, 상기 발효인삼은 진세노사이드 대사체 Rg1의 함량이 16 ~ 21㎎/g인 것을 특징으로 하는 발효인삼.
9. The fermented ginseng of claim 8, wherein the fermented ginseng has a content of ginsenoside metabolite Rg1 of 16-21 mg / g.
청구항 1 내지 4 중에서 선택된 어느 한 항에 의하여 제조된 발효홍삼.
Fermented red ginseng prepared by any one of claims 1 to 4.
제 10 항에 있어서,
상기 발효홍삼은 진세노사이드 대사체 Rg1의 함량이 4.3 ~ 5.5㎎/g인 것을 특징으로 하는 발효홍삼.
11. The method of claim 10,
The fermented red ginseng is fermented red ginseng, characterized in that the content of ginsenoside metabolite Rg1 is 4.3 ~ 5.5mg / g.
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