KR20130038601A - Novel swine influenza virus a h1n1 and use thereof - Google Patents

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Abstract

PURPOSE: A novel swine influenza virus A, H1N1, which is produced and attenuated using an SPF pig is provided to effectively manufacture a composition for preventing or treating swine influenza viral infection according to a manufacturing method. CONSTITUTION: A novel swine influenza virus is A/swine/Korea/GCVP-KS01/2009(H1N1)(deposit number KCTC 11848BP). A method for manufacturing a composition for preventing or treating swine influenza viral infection comprises a step of attenuating or inactivating the virus. The composition contains attenuated or inactivated influenza virus. A method for diagnosing swine influenza viral infection comprises a step of detecting the influenza virus in a sample isolated from a pig. A kit for detecting swine influenza comprises the swine influenza virus(H1N1) or an antibody which is conjugated with the virus.

Description

신규한 돼지 인플루엔자 바이러스 A H1N1 및 그의 용도{Novel swine influenza virus A H1N1 and use thereof}Novel swine influenza virus A H1N1 and use according to novel swine influenza virus AH1N1

본 발명은 돼지 인플루엔자 바이러스 A/swine/Korea/GCVP-KS01/2009 (H1N1) 및 그의 용도에 관한 것이다.The present invention relates to swine influenza virus A / swine / Korea / GCVP-KS01 / 2009 (H1N1) and its use.

"범유행 (pandemic) H1N1"으로도 알려진, 돼지 기원 게놈을 포함하는, 인간 인플루엔자 A H1N1 바이러스는 2009년 4월부터 전세계적으로 출현 (outbreaks)하고 있다. 상기 범유행 H1N1의 돼지 기원에 대한 유전적 증거가 있지만, 역학적 증거는 보고된 바 없다. 돼지 집단을 감염한 범유행 H1N1은 Alberta에서 4월 28일, Manitoba에서 5월, 2009년에 카나다에서 보고된 바 있다. 2009년 5월 2일에, 범유행 H1N1의 첫번째 한국 케이스가 2009년 4월 26일 멕시코 시티로부터 도착한 사람에서 공식적으로 확인되었다. 범유행 H1N1은 돼지 농장에 출현하였고, 상기 바이러스는 2009년 돼지로부터 분리되었다. 상기 범유행 H1N1 출현으로부터, 범유행 H1N1 인간 분리주를 사용하여 돼지에서 여러 실험적 감염 연구가 있었다. 이들 실험은 음상적 증상은 고전적 돼지 인플루엔자 바이러스 감염된 돼지의 증상과 유사하였다. The human influenza A H1N1 virus, including the swine-derived genome, also known as the "pandemic H1N1", has been outbreaks worldwide since April 2009. There is genetic evidence for the swine origin of pandemic H1N1, but no epidemiological evidence has been reported. Pandemic H1N1 infected swine populations were reported in Canada on April 28 in Alberta, May in Manitoba, and 2009. On May 2, 2009, the first Korean case of pandemic H1N1 was officially confirmed from a person arriving from Mexico City on April 26, 2009. Pandemic H1N1 appeared on pig farms and the virus was isolated from pigs in 2009. From the emergence of pandemic H1N1, there have been several experimental infection studies in pigs using pandemic H1N1 human isolates. These experiments showed that the negative symptoms were similar to those of the pigs infected with the classical swine flu virus.

본 발명에서는 종래 알려진 바 없는 새로운 인플루엔자 바이러스 H1N1을 한국 돼지 농장으로부터 분리하여 그 유전적 실체를 규명하고, 상기 분리주의 병원성이 무특정병원체 (SPF) 돼지에서 재현될 수 있다는 것을 확인하고 본 발명을 완성하기에 이르렀다. In the present invention, a novel influenza virus H1N1, which is not known in the prior art, is isolated from a Korean pig farm to identify its genetic identity, confirming that the pathogenicity of the isolate can be reproduced in SPF pigs, and completing the present invention. It came to the following.

본 발명의 구체예는 신규한 돼지 인플루엔자 바이러스를 제공하는 것이다.An embodiment of the present invention is to provide a novel swine influenza virus.

본 발명의 다른 구체예는 돼지 인플루엔자 바이러스 감염의 예방 또는 치료용 조성물을 제조하는 방법을 제공하는 것이다.Another embodiment of the present invention is to provide a method for preparing a composition for preventing or treating swine influenza virus infection.

본 발명의 다른 구체예는 시료 중의 인플루엔자 바이러스를 검출하기 위한 키트를 제공하는 것이다.Another embodiment of the present invention is to provide a kit for detecting influenza virus in a sample.

본 발명의 다른 구체예는 돼지 인플루엔자 바이러스 감염의 예방 또는 치료용 조성물을 제공하는 것이다.Another embodiment of the present invention is to provide a composition for preventing or treating swine influenza virus infection.

본 발명의 다른 구체예는 돼지의 인플루엔자 바이러스 감염 여부를 진단하는 방법을 제공하는 것이다. Another embodiment of the present invention is to provide a method for diagnosing swine influenza virus infection.

본 발명의 일 구체예는, 수탁번호 KCTC 11848BP의 돼지 인플루엔자 바이러스 A/swine/Korea/GCVP-KS01/2009 (H1N1)를 제공한다. 상기 바이러스는 한국 돼지로부터 분리된 것이며, SPF 돼지에서 그 병원성이 재생산될 수 있다. 따라서, 상기 바이러스는 SPF 돼지를 이용하여 생산 및 약독화될 수 있다. 상기 바이러스는 일부 유전자에 대하여, A/California/04/2009 스트레인과 부분적 및 완전한 유전자 서열이 99% 이상 유사하였다. One embodiment of the present invention provides swine influenza virus A / swine / Korea / GCVP-KS01 / 2009 (H1N1) of Accession No. KCTC 11848BP. The virus is isolated from Korean pigs and its pathogenicity can be reproduced in SPF pigs. Thus, the virus can be produced and attenuated using SPF pigs. The virus was at least 99% similar in partial and complete gene sequence to the A / California / 04/2009 strain for some genes.

본 발명의 다른 구체예는, 상기 바이러스를 약독화 또는 불활성화시키는 단계를 포함하는, 돼지 인플루엔자 바이러스 감염의 예방 또는 치료용 조성물을 제조하는 방법을 제공한다.Another embodiment of the present invention provides a method of preparing a composition for preventing or treating swine influenza virus infection, comprising attenuating or inactivating the virus.

상기 약독화는 당업계에 알려진 방법에 의하여 수행되는 것일 수 있다. 상기 약독화된 인플루엔자 바이러스는 화학물질 처리 예를 들면, 포르말린 처리에 의하여 약독화되거나, 자외선 조사 또는 계대배양에 의하여 약독화된 것일 수 있다. 본 발명에 있어서, "약독화"란 돼지에게 면역반응을 유도할 수 있지만 돼지에게 백신으로 사용할 수 있을 정도로 치명적이지 않은 정도의 독성을 갖는 것을 말한다. 본 명세서에 있어서,약독화는 "불활성화"와 교환가능하게 사용된다. 상기 약독화는 바이러스의 증식 능력이 약화된 것뿐만 아니라 증식능력이 완전하게 상실된 것도 포함한다. 약독화된 바이러스는 상기 바이러스의 서뷰유닛을 포함한다. 상기 "서브유닛"이란 전체 바이러스가 아닌 바이러스의 일 부분을 의미하는 것이다. 상기 서브유닛은 단백질 예를 들면, HA 또는 NA와 같은 개별 단백질 뿐만 아니라 이들의 복합체도 포함한다. 상기 복합체는 예를 들면, 바이러스 입자에 에테르를 처리하여 외피만을 분쇄 및 수득하여 얻어지는 것일 수 있다. The attenuation may be performed by a method known in the art. The attenuated influenza virus may be attenuated by chemical treatment, for example, formalin treatment, or attenuated by ultraviolet irradiation or passage. In the present invention, "attenuation" refers to a toxicity that is not fatal enough to induce an immune response in pigs but can be used as a vaccine in pigs. In this specification, attenuation is used interchangeably with "inactivation". The attenuation includes not only the virus's ability to proliferate but also its complete loss. The attenuated virus includes a surveillance unit of the virus. The "subunit" refers to a part of the virus, not the entire virus. Such subunits include proteins, for example individual proteins such as HA or NA, as well as complexes thereof. The complex may be, for example, obtained by grinding and obtaining only an envelope by treating ether with a virus particle.

약독화 바이러스는 예를 들면, (a) 상기 돼지 인플루엔자 바이러스를 MDCK 세포주에 주입하여 증식시키는 단계; (b) 상기 세포로부터 수득하여 여기에 포르말린, 베타프로피오락톤 (betapropiolactone: BPL) 또는 비나리에틸렌이민 (binary ethylenimine: BEI)를 처리하는 단계; 및 (c) 상기 처리된 혼합물로부터 불활화된 바이러스를 수득하는 단계를 포함하는 방법에 의하여 제조될 수 있다. 수득된 바이러스는 수산화알루미나 겔에 흡착시킬 수 있다. Attenuated viruses include, for example, (a) injecting the swine influenza virus into an MDCK cell line to propagate; (b) treating with formalin, betapropiolactone (BPL) or binary ethylenimine (BEI) obtained from the cells; And (c) obtaining an inactivated virus from the treated mixture. The virus obtained can be adsorbed onto alumina hydroxide gel.

본 발명의 다른 구체예는, 약독화 또는 불활성화된 상기 인플루엔자 바이러스를 포함하는, 인플루엔자 바이러스 감염의 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.Another embodiment of the present invention provides a composition for preventing or treating influenza virus infection, which comprises the attenuated or inactivated influenza virus.

상기 조성물은 당업계에 알려진 수의학적으로 허용가능한 담체를 포함할 수 있다. 상기 담체는 용매, 면역증강제, 및 부형제로 이루어진 군으로부터 선택되는 것일 수 있다. 상기 용매는 생리식염수, 증류수 또는 PBS와 같은 버퍼일 수 있다. 상기 면역증강제는 프로인트 완전 또는 불완전 어주반트, 알루미늄 히드록시드 겔 및 오일로 이루어진 군으로부터 선택되는 것일 수 있다. 상기 부형제는 알루미늄 포스페이트, 알루미늄 히드록시드 또는 알루미늄 포타슘 설페이트 (alum)일 수 있다. The composition may comprise a veterinary acceptable carrier known in the art. The carrier may be selected from the group consisting of a solvent, an adjuvant, and an excipient. The solvent may be a buffer such as saline, distilled water or PBS. The adjuvant may be selected from the group consisting of Freund's complete or incomplete adjuvant, aluminum hydroxide gel and oil. The excipient may be aluminum phosphate, aluminum hydroxide or aluminum potassium sulfate (alum).

상기 조성물은 인플루엔자 바이러스를 26 HAU (hemagglutination unit: 혈구응집 단위)로 포함하는 것일 수 있다.The composition may be one containing influenza virus as 2 6 HAU (hemagglutination unit).

상기 조성물은 경구형 또는 비경구형 제제로 제조될 수 있다. 비경구형 제제의 예로는, 주사액제를 포함한다. 상기 조성물은 진피내, 근육내, 복막내, 정맥내, 피하, 비강 또는 경막외 (eidural) 경로로 투여될 수 있는 제형을 갖는 것일 수 있다. The composition may be prepared in oral or parenteral preparation. Examples of parenteral preparations include injection solutions. The composition may be one having a formulation that can be administered by intradermal, intramuscular, intraperitoneal, intravenous, subcutaneous, nasal or epidural route.

본 발명의 다른 양상은 상기 조성물을 돼지에게 투여하는 단계를 포함하는, 돼지의 상기 인플루엔자 바이러스 감염을 예방 또는 치료하는 방법을 제공한다.Another aspect of the invention provides a method of preventing or treating said influenza virus infection in a pig comprising administering said composition to a pig.

상기 돼지는 인플루엔자 바이러스에 감염되었거나 감염이 의심되는 돼지일 수 있다. 상기 돼지는 인플루엔자 바이러스 증상을 나타내는 것일 수 있다. 예를 들면, 부비강염, 발작적 천식, 중이염, 낭성 섬유종, 기관지염, 폐렴 및 설사로부터 선택되는 증상을 보이는 것일 수 있다.The pig may be a pig infected with or suspected of having an influenza virus. The pig may be indicative of influenza virus symptoms. For example, it may be a symptom selected from sinusitis, paroxysmal asthma, otitis media, cystic fibrosis, bronchitis, pneumonia and diarrhea.

본 발명에서 용어, "예방"이란 조성물의 투여에 의해 인플루엔자 바이러스 감염을 억제시키거나 발병을 지연시키는 것을 의미한다. 본 발명에서 용어, "치료"란 조성물의 투여에 의해 인플루엔자 바이러스 감염에 의한 증세가 호전되거나 이롭게 변경하는 모든 행위를 의미한다.As used herein, the term "prevention" means to inhibit influenza virus infection or to delay the onset by administration of the composition. As used herein, the term "treatment" means any action that improves or advantageously alters the symptoms caused by influenza virus infection by administration of the composition.

본 발명의 조성물은 약제학적으로 유효한 양으로 투여한다. 용어 "약제학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 개체 종류 및 중증도, 연령, 성별, 감염된 바이러스 종류, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 그리고 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.The composition of the present invention is administered in a pharmaceutically effective amount. The term “pharmaceutically effective amount” means an amount sufficient to treat a disease at a reasonable benefit / risk ratio applicable to medical treatment, with an effective dose level of the individual type and severity, age, sex, type of virus infected, drug Activity, sensitivity to drug, time of administration, route of administration and rate of release, duration of treatment, factors including concurrent use of drugs, and other factors well known in the medical arts. The composition of the present invention may be administered as an individual therapeutic agent or in combination with other therapeutic agents, and may be administered sequentially or simultaneously with conventional therapeutic agents. And single or multiple administrations. Taking all of the above factors into consideration, it is important to administer an amount that can obtain the maximum effect in a minimum amount without side effects, and can be easily determined by those skilled in the art.

상기 방법에 있어서, 투여는 경구 또는 비경구로 투여될 수 있다. 예를 들면, 상기 조성물은 진피내, 근육내, 복막내, 정맥내, 피하, 비강 또는 경막외 (eidural) 경로로 투여될 수 있다.In this method, administration may be administered orally or parenterally. For example, the composition can be administered by intradermal, intramuscular, intraperitoneal, intravenous, subcutaneous, nasal or epidural routes.

본 발명의 다른 구체예는, 돼지로부터 분리된 시료 중의 상기 인플루엔자 바이러스를 검출하는 단계를 포함하는, 돼지의 인플루엔자 바이러스 감염 여부를 진단하는 방법을 제공한다. 상기 검출은 상기 인플루엔자 바이러스 항원 또는 그에 결합하는 항체를 검출하는 것일 수 있다.Another embodiment of the present invention provides a method for diagnosing an influenza virus infection of a pig, comprising detecting the influenza virus in a sample isolated from the pig. The detection may be to detect the influenza virus antigen or an antibody binding thereto.

상기 돼지는 인플루엔자 바이러스에 감염된 것으로 의심되는 돼지일 수 있다. 상기 돼지는 예를 들면, 중증 호흡기질환을 앓고 있는 돼지일 수 있다. 상기 시료는 돼지로부터 분리된 것이면 어느 것이나 될 수 있다. 예를 들면, 상기 시료는 혈액, 혈청 또는 혈장일 수 있다. The pig may be a pig suspected of having an influenza virus. The pig may be, for example, a pig suffering from severe respiratory disease. The sample may be any one isolated from pigs. For example, the sample may be blood, serum or plasma.

상기 검출하는 단계는, 당업계에 알려진 바이러스 검출 방법이 사용될 수 있다. 예를 들면, 항원 항체 반응을 이용하거나, 핵산 증폭 반응을 이용하는 것일 수 있다. 상기 검출은 상기 인플루엔자 바이러스를 직접 검출하거나 간접적으로 그 존재를 검출하는 것일 수 있다. 직접 검출하는 것은 상기 인플루엔자 바이러스를 직접 분리하는 것을 포함할 수 있으며, 간접 검출하는 것은 인플루엔자 바이러스의 항원 및 그에 결합하는 항체, 또는 인플루엔자 바이러스의 게놈 서열, mRNA 또는 그로부터 발현된 산물의 존재를 검출하는 것을 포함한다. 상기 방법은 예를 들면, 돼지로부터 분리된 시료 중의 인플루엔자 바이러스 항원 또는 인플루엔자 바이러스 항원에 결합하는 항체를 검출하는 단계; 및 상기 인플루엔자 바이러스 항원 또는 인플루엔자 바이러스 항원에 결합하는 항체가 존재하는 것으로 검출된 경우, 상기 돼지가 인플루엔자 바이러스에 감염된 것으로 결정하고, 상기 인플루엔자 바이러스 H3N2 항원 또는 인플루엔자 바이러스 항원에 결합하는 항체가 존재하지 않는 것으로 검출된 경우, 상기 돼지가 인플루엔자 바이러스에 감염되지 않은 것으로 결정하는 단계를 포함하는 것일 수 있다. In the detecting step, a virus detection method known in the art may be used. For example, it may be using an antigen antibody reaction or using a nucleic acid amplification reaction. The detection may be to detect the influenza virus directly or indirectly to detect its presence. Direct detection may include directly isolating the influenza virus, and indirect detection may include detecting the presence of an antigen of the influenza virus and an antibody binding thereto, or the genomic sequence, mRNA or product expressed therefrom of the influenza virus. Include. The method comprises, for example, detecting an influenza virus antigen or an antibody that binds to an influenza virus antigen in a sample isolated from a pig; And when it is detected that there is an antibody that binds the influenza virus antigen or the influenza virus antigen, it is determined that the pig is infected with the influenza virus, and that there is no antibody that binds the influenza virus H3N2 antigen or the influenza virus antigen. If detected, the method may include determining that the pig is not infected with influenza virus.

본 발명의 다른 구체예는, 상기 인플루엔자 바이러스 항원을 돼지로부터 분리된 시료와 접촉시키는 단계; 상기 인플루엔자 바이러스 항원과 항-상기 인플루엔자 바이러스 항원의 복합체의 존재를 검출하는 단계; 및 상기 복합체가 존재하는 경우, 상기 시료는 항-상기 인플루엔자 바이러스 항원 항체를 포함하는 것으로 결정하고, 상기 복합체가 존재하지 않는 경우, 상기 시료는 항-상기 인플루엔자 바이러스 항원 항체를 포함하지 않는 것으로 결정하는 단계를 포함하는, 돼지로부터 분리된 시료 중의 항-상기 인플루엔자 바이러스 항원 항체를 검출하는 방법을 제공한다.Another embodiment of the invention, the step of contacting the influenza virus antigens with a sample isolated from pigs; Detecting the presence of a complex of said influenza virus antigen and anti- said influenza virus antigen; And if the complex is present, the sample is determined to contain an anti-the influenza virus antigen antibody, and if the complex is not present, the sample is determined to contain no anti-the influenza virus antigen antibody It provides a method for detecting an anti-influenza virus antigen antibody in a sample isolated from a pig, comprising the step.

상기 방법은 인플루엔자 바이러스 항원을 돼지로부터 분리된 시료와 접촉시키는 단계를 포함한다. 상기 접촉은 액체 매질 중에서 상기 인플루엔자 바이러스 항원과 시료를 혼합시키고 배양하는 것에 의하여 수행될 수 있다. 상기 액체 매질은 상기 인플루엔자 바이러스 항원 및 항체를 불안정화시키지 않고 항원-항체 반응을 위한 매질을 제공할 수 있는 것이면 어느 것이나 포함된다. 예를 들면, 상기 액체 매질은 PBS 버퍼와 같은, 버퍼를 포함한다. 상기 접촉은 항원과 항체의 복합체를 형성시키기 위하여 당업계에 알려진 조건이 사용될 수 있다. 예를 들면, 상기 접촉은 4 내지 37℃에서 수행될 수 있다. 또한, 상기 접촉은 교반 또는 교반 없이 수행될 수 있다. The method includes contacting the influenza virus antigen with a sample isolated from pigs. The contact can be performed by mixing and incubating the sample with the influenza virus antigen in a liquid medium. The liquid medium includes anything that can provide a medium for antigen-antibody reactions without destabilizing the influenza virus antigens and antibodies. For example, the liquid medium includes a buffer, such as a PBS buffer. The contact can be used conditions known in the art to form a complex of antigen and antibody. For example, the contact can be carried out at 4 to 37 ℃. In addition, the contact can be carried out with or without stirring.

상기 인플루엔자 바이러스 항원은 고체 기판에 고정된 것일 수 있다. 상기 고체 기판은 웰, 플레이트 및 비드 형상으로부터 선택되는 하나 이상의 형상을 갖는 것일 수 있다. 상기 웰은 마이크로 웰일 수 있다. 상기 돼지는 인플루엔자 바이러스에 감염된 것으로 의심되는 돼지일 수 있다. 상기 돼지는 예를 들면, 중증 호흡기질환을 앓고 있는 돼지일 수 있다. 상기 시료는 돼지로부터 분리된 것이면 어느 것이나 될 수 있다. 예를 들면, 상기 시료는 돼지 혈액, 혈청 또는 혈장일 수 있다.The influenza virus antigen may be immobilized on a solid substrate. The solid substrate may have one or more shapes selected from well, plate and bead shapes. The well may be a micro well. The pig may be a pig suspected of having an influenza virus. The pig may be, for example, a pig suffering from severe respiratory disease. The sample may be any one isolated from pigs. For example, the sample may be pig blood, serum or plasma.

상기 방법은 상기 인플루엔자 바이러스 항원과 항-상기 인플루엔자 바이러스 항체의 복합체의 존재를 검출하는 단계를 포함한다. 상기 검출은 당업계에 알려진 항원-항체 복합체 검출방법이 사용될 수 있다. 상기 검출은 예를 들면, 전기적 방법, 분광학적 방법 또는 이들의 조합에 의하여 이루어지는 것일 수 있다. 또한, 상기 검출은 알려진 ELISA 분석 과정에 의하여 이루어지는 것일 수 있다. 검출가능한 표지로 표지된 항-돼지 항-인플루엔자 바이러스 항체를 상기 항체와 결합시키고, 결합된 산물의 상기 표지로부터 신호를 검출함으로써 이루어질 수 있다. 검출가능한 표지는 형광표지, 전기적 표지, 방사성 물질, 기질을 분광학적으로 분석가능한 물질로 전환시키는 활성을 가진 효소 또는 이들의 조합일 수 있다. 상기 효소는 알칼리포스파타제, 호스래디쉬퍼옥시다제 및 베타-갈락토시다제로부터 선택된 하나이상을 포함할 수 있다.The method comprises detecting the presence of a complex of the influenza virus antigen and anti-the influenza virus antibody. The detection may be an antigen-antibody complex detection method known in the art. The detection may be made by, for example, an electrical method, a spectroscopic method, or a combination thereof. In addition, the detection may be made by a known ELISA analysis process. Anti-swine anti-influenza virus antibodies labeled with a detectable label can be made by binding to the antibody and detecting a signal from the label of the bound product. The detectable label can be a fluorescent label, an electrical label, a radioactive material, an enzyme having the activity of converting the substrate into a spectroscopically detectable material, or a combination thereof. The enzyme may comprise one or more selected from alkaline phosphatase, horseradish peroxidase and beta-galactosidase.

상기 방법은 상기 복합체가 존재하는 것으로 검출된 경우, 상기 시료는 항-인플루엔자 바이러스 항체를 포함하는 것으로 결정하고, 상기 복합체가 존재하지 않는 것으로 검출된 경우, 상기 시료는 항-인플루엔자 바이러스 항체를 포함하지 않는 것으로 결정하는 단계를 포함한다. 상기 인플루엔자 바이러스 위에서 설명한 바와 같다. The method determines that the sample contains an anti-influenza virus antibody when the complex is detected and the sample does not comprise an anti-influenza virus antibody when the complex is detected as not present. Determining not to. The influenza virus is as described above.

상기 방법에 있어서, 상기 인플루엔자 바이러스 항원은 바이러스 입자 자체 또는 그의 표면 단백질인 것일 수 있다. 상기 단백질은 고체 기판에 고정된 것일 수 있다.In the above method, the influenza virus antigen may be a virus particle itself or a surface protein thereof. The protein may be fixed to a solid substrate.

본 발명의 다른 구체예는, 항-상기 인플루엔자 바이러스 항체와 돼지로부터 분리된 시료를 접촉시키는 단계; 상기 항체와 상기 인플루엔자 바이러스 항원의 복합체를 검출하는 단계; 및 상기 복합체가 존재하는 것으로 검출된 경우, 상기 시료는 상기 돼지 인플루엔자 바이러스 항원을 포함하는 것으로 결정하고, 상기 복합체가 존재하지 않는 것으로 검출된 경우, 상기 시료는 상기 돼지 인플루엔자 바이러스 항원을 포함하지 않는 것으로 결정하는 단계를 포함하는, 돼지로부터 분리된 시료 중의 제1항의 돼지 인플루엔자 바이러스 항원을 검출하는 방법을 제공한다.Another embodiment of the present invention comprises the steps of contacting an anti-the influenza virus antibody and a sample isolated from pigs; Detecting a complex of the antibody and the influenza virus antigen; And when the complex is detected to be present, the sample is determined to contain the swine influenza virus antigen, and when the complex is detected to be absent, the sample is determined to not contain the swine influenza virus antigen. Provided is a method for detecting the swine influenza virus antigen of claim 1 in a sample isolated from a pig, comprising the step of determining.

상기 인플루엔자 바이러스 항원은 바이러스 입자 자체 또는 그의 표면 단백질인 것일 수 있다.The influenza virus antigens may be viral particles themselves or surface proteins thereof.

상기 방법은 항-인플루엔자 바이러스 항체와 돼지로부터 분리된 시료를 접촉시키는 단계를 포함한다. 항-인플루엔자 바이러스 항체는 상기한 방법에 따라 제조될 것일 수 있다. 상기 접촉은 액체 매질 중에서 상기 항-인플루엔자 바이러스 항체와 시료를 혼합시키고 배양하는 것에 의하여 수행될 수 있다. 상기 액체 매질은 상기 항-인플루엔자 바이러스 항체 및 시료를 불안정화시키지 않고 항원-항체 반응을 위한 매질을 제공할 수 있는 것이면 어느 것이나 포함된다. 예를 들면, 상기 액체 매질은 PBS 버퍼와 같은, 버퍼를 포함한다. 상기 접촉은 항원과 항원의 복합체를 형성시키기 위하여 당업계에 알려진 조건이 사용될 수 있다. 예를 들면, 상기 접촉은 4 내지 37℃에서 수행될 수 있다. 또한, 상기 접촉은 교반 또는 교반 없이 수행될 수 있다. The method comprises contacting an anti-influenza virus antibody with a sample isolated from pigs. Anti-influenza virus antibodies may be prepared according to the methods described above. The contact can be performed by mixing and incubating the sample with the anti-influenza virus antibody in a liquid medium. The liquid medium includes anything that can provide a medium for antigen-antibody reactions without destabilizing the anti-influenza virus antibody and the sample. For example, the liquid medium includes a buffer, such as a PBS buffer. The contact can be used conditions known in the art to form an antigen and a complex of antigens. For example, the contact can be carried out at 4 to 37 ℃. In addition, the contact can be carried out with or without stirring.

상기 항체는 고체 기판에 고정된 것일 수 있다. 상기 고체 기판은 웰, 플레이트 및 비드 형상으로부터 선택되는 하나 이상의 형상을 갖는 것일 수 있다. 상기 웰은 마이크로 웰일 수 있다. 상기 시료는 돼지 유래의 시료이면 어느 것이나 포함할 수 있다. 예를 들면, 상기 시료는 돼지 혈액, 혈청 또는 혈장일 수 있다.The antibody may be immobilized on a solid substrate. The solid substrate may have one or more shapes selected from well, plate and bead shapes. The well may be a micro well. The sample may include any sample derived from pigs. For example, the sample may be pig blood, serum or plasma.

상기 방법은 상기 항체와 인플루엔자 바이러스 항원의 복합체의 존재를 검출하는 단계를 포함한다. 상기 검출은 당업계에 알려진 항원-항체 복합체 검출방법이 사용될 수 있다. 상기 검출은 예를 들면, 전기적 방법, 분광학적 방법 또는 이들의 조합에 의하여 이루어지는 것일 수 있다. 또한, 상기 검출은 알려진 ELISA 분석 과정에 의하여 이루어지는 것일 수 있다. 검출가능한 표지로 표지된 항-인플루엔자 바이러스를 상기 항원과 결합시키고, 결합된 산물의 상기 표지로부터 신호를 검출함으로써 이루어질 수 있다. 검출가능한 표지는 형광표지, 전기적 표지, 방사성 물질, 기질을 분광학적으로 분석가능한 물질로 전환시키는 활성을 가진 효소 또는 이들의 조합일 수 있다. 상기 효소는 알칼리포스파타제, 호스래디쉬퍼옥시다제 및 베타-갈락토시다제로부터 선택된 하나이상을 포함할 수 있다.The method includes detecting the presence of a complex of the antibody and influenza virus antigen. The detection may be an antigen-antibody complex detection method known in the art. The detection may be made by, for example, an electrical method, a spectroscopic method, or a combination thereof. In addition, the detection may be made by a known ELISA analysis process. Anti-influenza virus labeled with a detectable label can be combined with the antigen and detecting a signal from the label of the bound product. The detectable label can be a fluorescent label, an electrical label, a radioactive material, an enzyme having the activity of converting the substrate into a spectroscopically detectable material, or a combination thereof. The enzyme may comprise one or more selected from alkaline phosphatase, horseradish peroxidase and beta-galactosidase.

상기 방법은 상기 복합체가 존재하는 것으로 검출된 경우, 상기 시료는 항-인플루엔자 바이러스 항원을 포함하는 것으로 결정하고, 상기 복합체가 존재하지 않는 것으로 검출된 경우, 상기 시료는 항-인플루엔자 바이러스 항원을 포함하지 않는 것으로 결정하는 단계를 포함한다. 상기 인플루엔자 바이러스는 위에서 설명한 바와 같다. The method determines that the sample contains an anti-influenza virus antigen when the complex is detected and wherein the sample does not comprise an anti-influenza virus antigen when the complex is detected as not present. Determining not to. The influenza virus is as described above.

본 발명의 다른 양상은 상기한 바와 같은 인플루엔자 바이러스 (influenza virus) 또는 상기 인플루엔자 바이러스에 결합하는 항체를 포함하는, 돼지 인플루엔자 바이러스를 검출하기 위한 키트를 제공한다. 상기 키트는 상기 인플루엔자 바이러스와 항-인플루엔자 바이러스 항체의 복합체를 검출할 수 있는 시약을 더 포함할 수 있다. 상기 시약은 검출가능한 표지로 표지된 항-인플루엔자 바이러스 항체 또는 항-인플루엔자 바이러스 항체에 결합하는 항체일 수 있다. 검출가능한 표지는 형광표지, 전기적 표지, 방사성 물질, 기질을 분광학적으로 분석가능한 물질로 전환시키는 활성을 가진 효소 또는 이들의 조합일 수 있다. 상기 효소는 알칼리포스파타제, 호스래디쉬퍼옥시다제 및 베타-갈락토시다제를 포함할 수 있다. 상기 키트는 표준 대조군, 희석제 및 버퍼로 이루어진 군으로부터 선택된 하나이상을 포함할 수 있다. Another aspect of the invention provides a kit for detecting swine influenza virus, comprising an influenza virus as described above or an antibody binding to said influenza virus. The kit may further include a reagent for detecting a complex of the influenza virus and an anti-influenza virus antibody. The reagent may be an anti-influenza virus antibody or an antibody that binds to an anti-influenza virus antibody labeled with a detectable label. The detectable label can be a fluorescent label, an electrical label, a radioactive material, an enzyme having the activity of converting the substrate into a spectroscopically detectable material, or a combination thereof. The enzyme may include alkaline phosphatase, horseradish peroxidase and beta-galactosidase. The kit may comprise one or more selected from the group consisting of standard controls, diluents and buffers.

본 발명에 따른 수탁번호 KCTC 11848BP의 돼지 인플루엔자 바이러스 A/swine/Korea/GCVP-KS01/2009 (H1N1)는 SPF 돼지에서 그 병원성이 재생산될 수 있다. 따라서, 상기 바이러스는 SPF 돼지를 이용하여 생산 및 약독화될 수 있다.Porcine influenza virus A / swine / Korea / GCVP-KS01 / 2009 (H1N1) of Accession No. KCTC 11848BP according to the present invention can reproduce its pathogenicity in SPF pigs. Thus, the virus can be produced and attenuated using SPF pigs.

본 발명의 돼지 인플루엔자 바이러스 감염의 예방 또는 치료용 조성물을 제조하는 방법에 따라면, 돼지 인플루엔자 바이러스 감염의 예방 또는 치료용 조성물을 효율적으로 제조할 수 있다. According to the method for producing a composition for preventing or treating swine influenza virus infection of the present invention, it is possible to efficiently prepare a composition for preventing or treating swine influenza virus infection.

본 발명의 돼지 인플루엔자 바이러스 감염의 예방 또는 치료용 조성물에 의하면, 돼지 인플루엔자 바이러스 감염의 예방 또는 치료용으로 사용될 수 있다.According to the composition for preventing or treating swine influenza virus infection of the present invention, it can be used for the prevention or treatment of swine influenza virus infection.

본 발명의 돼지의 인플루엔자 바이러스 감염 여부를 진단하는 방법에 의하면, 돼지의 인플루엔자 바이러스 감염 여부를 효율적으로 진단할 수 있다.According to the method for diagnosing influenza virus infection of swine of the present invention, it is possible to efficiently diagnose whether swine influenza virus is infected.

도 1a 및 1b는 A/swine/Korea/ GCVP-KS01/2009(H1N1)의 HA (도 1a) 및 NA (도 1b) 유전자 서열의 발생계통적 분석을 나타낸다. 참조 스트레인은 다음과 같다: A/Gangwon/1805/2009(H1N1): CY060460/CY060461; A/California/04/2009(H1N1): GQ280797/FJ969517; A/Texas/ 44312415/2009(H1N1): CY052338/CY052340; A/Singapore/ ON355 /2009(H1N1): CY049372/CY049374; A/Australia/4/2009(H1N1): CY055067 /CY055069; A/Paris/ 2629/2009(H1N1): GQ249337 /GQ254714; A/Kobe/1/2009(H1N1): GQ219577/GQ 220733; A/Netherlands/2009(H1N1): CY039527/CY039528; A/Beijing/01/2009(H1N1): GQ 183617 /GQ183619; A/MexicoCity /MCIG01/2009(H1N1): CY054296/CY054297; A/swine /Indiana/1726/1998(H1N1): CY039925/CY039927; A/swine/Memphis/1/1990(H1N1) : CY035070/CY035072; A/ swine/Iwoa/24297/1991(H1N1): CY027155/CY027157; A/swine/ Shanghai/2/2005(H1N1): EU502885/FJ789827. A/swine/Korea/SCJ01/2009 (H1N1): HM189542/HM189430. * 스트레인: HA/NA에 대한 허가번호 (accession No.)임.
도 2a는 바이러스 접종군 (VI)과 비접종군 (NI)에서 평균 체온 (BT) 및 바이러스 흘림 (Virus)의 변화를 나타낸 도면이다. VI 군의 체온은 NI 군에 비하여 유의하게 더 높았다. VI 군에서 비 스왑은 DPI 1일로부터 바이러스 흘림이 검출된 반면, NI 군에서는 바이러스 검출이 관찰되지 않았다. 회색 막대는 VI 군의 체중을 흰색 막대는 NI 군의 체중을 나타낸다. 삼각형을 가진 대시 선(dashed line)은 VI 군에서 바이러스 흘림을, 다이아몬드는 NI 군에서 바이러스 흘림을 나타낸다.
도 2b는 중증 suppurative necrotizing bronchopneumonia를 보이는, A/swine/GCVP-KS01/2009(H1N1) 바이러스로 감염된 돼지의 폐를 나타내고 (1), 또는 감염되지 않은 돼지의 정상 상흔 (lesion)을 나타낸다. H&E 염색. 원 확대 (original magnification), x200.
1A and 1B show developmental analysis of the HA (FIG. 1A) and NA (FIG. 1B) gene sequences of A / swine / Korea / GCVP-KS01 / 2009 (H1N1). Reference strains are as follows: A / Gangwon / 1805/2009 (H1N1): CY060460 / CY060461; A / California / 04/2009 (H1N1): GQ280797 / FJ969517; A / Texas / 44312415/2009 (H1N1): CY052338 / CY052340; A / Singapore / ON355 / 2009 (H1N1): CY049372 / CY049374; A / Australia / 4/2009 (H1N1): CY055067 / CY055069; A / Paris / 2629/2009 (H1N1): GQ249337 / GQ254714; A / Kobe / 1/2009 (H1N1): GQ219577 / GQ 220733; A / Netherlands / 2009 (H1N1): CY039527 / CY039528; A / Beijing / 01/2009 (H1N1): GQ 183617 / GQ183619; A / MexicoCity / MCIG01 / 2009 (H1N1): CY054296 / CY054297; A / swine / Indiana / 1726/1998 (H1N1): CY039925 / CY039927; A / swine / Memphis / 1/1990 (H1N1): CY035070 / CY035072; A / swine / Iwoa / 24297/1991 (H1N1): CY027155 / CY027157; A / swine / Shanghai / 2/2005 (H1N1): EU502885 / FJ789827. A / swine / Korea / SCJ01 / 2009 (H1N1): HM189542 / HM189430. * Strain: Accession No. for HA / NA.
Figure 2a is a view showing the change in mean body temperature (BT) and virus shedding (Virus) in the virus inoculation group (VI) and non-vaccinated group (NI). Body temperature of group VI was significantly higher than that of NI group. In the VI group, non-swappable virus shedding was detected from DPI 1 day, whereas in the NI group no virus detection was observed. Gray bars represent the weight of group VI and white bars represent the weight of NI group. The dashed lines with triangles indicate viral shedding in group VI and diamonds shedding virus in NI group.
FIG. 2B shows lungs of pigs infected with A / swine / GCVP-KS01 / 2009 (H1N1) virus, showing severe suppurative necrotizing bronchopneumonia (1), or normal lesion of uninfected pigs. H & E dyeing. Original magnification, x200.

이하 본 발명을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples. However, these examples are for illustrative purposes only and the scope of the present invention is not limited to these examples.

실시예Example 1: 돼지 인플루엔자 A  1: Swine Influenza A H1N1H1N1 바이러스의 분리 및 서열분석 Isolation and Sequencing of Viruses

2009년 12월 중 한국 돼지 농장에서 첫번째 범유행 (pandemic) H1N1 발병 (outbreak) 후 범유행 H1N1의 모니터링한 후, 약 6000 두의 돼지를 가진 육종 농장 (breeding farm)으로부터의 표본에 대하여 범유행 H1N1에 특이적인 실시간 RT-PCR (Bionote, Hwasung, Korea)을 사용하여 범유행 H1N1 바이러스를 시험하였고 그 결과는 양성이었다. Pandemic H1N1 on samples from breeding farms with approximately 6000 pigs after monitoring pandemic H1N1 after the first pandemic H1N1 outbreak on a Korean pig farm in December 2009. The pandemic H1N1 virus was tested using real-time RT-PCR (Bionote, Hwasung, Korea) that was specific to, and the result was positive.

흥미롭게도, 감염된 돼지는 뚜렷한 호흡기 증상이 없었다. 또한 상기 농장은 돼지생식기호흡기증후군 바이러스(PRRSV)에 대하여 바이러스적으로 음성으로 알려졌다. 마딘-다르비 개 신장 (Madin-Darby canine kidney: MDCK) 세포 및 부화란 (embryonated eggs)을 이용하여 폐 시료 균질물 (homogenate)로부터 바이러스 분리를 시도하였다. 상기 바이러스는 두번째 계대 후 MDCK 세포주에서만 성공적으로 분리되었다. 분리된 바이러스를 A/swine/Korea/GCVP-KS01/2009 (H1N1) (이하 "GCVP-KS01"라고도 함)라고 명명하였다. 본 분리주는 부타페스트 조약에 따른 국제기탁기관인 한국생명공학연구소 (Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology: KRIBB)에 2011.1.21일자로 수탁번호 KCTC 11848BP로 수탁되었다. Interestingly, the infected pigs had no apparent respiratory symptoms. The farm is also known to be virally negative for Swine Respiratory Syndrome Virus (PRRSV). Virus isolation from lung sample homogenates was attempted using Madin-Darby canine kidney (MDCK) cells and embryonated eggs. The virus was successfully isolated only in MDCK cell line after the second passage. The isolated virus was named A / swine / Korea / GCVP-KS01 / 2009 (H1N1) (hereinafter also referred to as “GCVP-KS01”). This isolate was deposited with the accession number KCTC 11848BP dated January 1, 2011 to the Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology (KRIBB), an international depository under the Butafest Treaty.

분리된 범유행 H1N1의 뉴클레오티드 서열은 HA (hemagglutinin) (772 bp), NA (neuraminidase) (791 bp), NP (nucleoprotein) (1226 bp), NS (non-structural protein) (562 bp) 및 PA (RNA polymerase) (637 bp) 유전자에 대하여는 부분적으로, M (matrix protein) 유전자에 대하여는 완전하게 서열확인되었다. 확인된 HA, NA, PA, NS, NP 및 M의 서열은 각각 서열번호 1 내지 6에 나타내었다. 서열확인 분석은 분리된 바이러스의 실체를 확인하기 위하여 상업적으로 수행되었다 (Genotech, Daejon, Korea). GCVP-KS01의 뉴클레오티드 서열을 다른 범유행 H1N1 및 고전적 돼지 H1N1 바이러스의 것과 비교하였고, MEGA 4.0 프로그램의 이웃연결법 (neighbor joining method)을 사용하여 HA 및 NA 유전자에 대하여 발생계통도를 작성하였다. Nucleotide sequences of pandemic H1N1 isolated were HA (hemagglutinin) (772 bp), NA (neuraminidase) (791 bp), NP (nucleoprotein) (1226 bp), NS (non-structural protein) (562 bp) and PA ( It was partially sequenced for the RNA polymerase (637 bp) gene and partially for the M (matrix protein) gene. The identified sequences of HA, NA, PA, NS, NP and M are shown in SEQ ID NOs: 1-6, respectively. Sequencing analysis was performed commercially to identify the identity of the isolated virus (Genotech, Daejon, Korea). The nucleotide sequences of GCVP-KS01 were compared with those of other pandemic H1N1 and classical swine H1N1 viruses, and developmental maps were generated for HA and NA genes using the neighbor joining method of the MEGA 4.0 program.

GCVP-KS01의 뉴클레오티드 서열은 각각 HA, NA, M, NS, NP, 및 PA에 대하여, A/California/04/2009 스트레인에 대하여 99%, 99.3%, 99.6%, 99.1%, 99.1%, 및 99.5% 유사도(similarity)를 보였다. 상기 분리주의 NA, HA, PA, NS, NP 및 M 유전자의 대응되는 서열을 포함하는, A/California/04/2009 스트레인의 NA, HA, PA, NS, NP 및 M 유전자의 부분 서열은 서열번호 7 내지 12에 각각 나타내었다. HA 및 NA 뉴클레오티드에 대한 발생계통적 분석에 따르면, GCVP-KS01은 2009년 내지 2010년의 인간으로부터 분리된 범유행 H1N1 바이러스와 함께 분류되었다 (clustered). 흥미롭게도, 한국의 인간으로부터 분리된 범유행 H1N1 바이러스의 HA 유전자는 본 발명의 분리주 (isolate)의 그것에 밀접하게 관련되었다. 또한 돼지에서 분리된 이전에 보고된 범유행 H1N1 스트레인, A/swine/Korea/SCJ01/2009도 같은 그룹에 분류되었다 (Song MS 등, J Clin Microbiol. 2010; 48: 3204-3211). 반면, 2009년 이전에 돼지에서 분리된 고전적 돼지 H1N1 바이러스는 다른 그룹의 범유행 H1N1 바이러스에 분류되었다 (도 1). 이 연구에서 유전적 분석의 한계는 전장 게놈의 완전한 서열분석이 이용가능하지 않다는 것이다. 그러나, 인플루엔자 바이러스 타입을 확인하기 위하여는 사용되는 가장 중요한 유전자, HA 및 NA가 포함되었고, 부분적 서열분석은 거의 99% 유사도를 입증하였다. 이들 주의사항 (caveats)에도 불구하고, 뉴클레오티드 분석으로부터의 데이터는 돼지 기원의 상기 인플루엔자 H1N1 한국 분리주는 고전적 돼지 H1N1 인플루엔자 바이러스가 아닌, 범유행 H1N1에 밀접하게 관련되었다는 것을 제시한다. Nucleotide sequences of GCVP-KS01 were 99%, 99.3%, 99.6%, 99.1%, 99.1%, and 99.5 for HA, NA, M, NS, NP, and PA, respectively for the A / California / 04/2009 strain % Similarity was shown. The partial sequence of the NA, HA, PA, NS, NP and M genes of the A / California / 04/2009 strain, comprising the corresponding sequences of the NA, HA, PA, NS, NP and M genes of the isolate, is SEQ ID NO: 7-12, respectively. According to developmental analysis of HA and NA nucleotides, GCVP-KS01 was clustered with pandemic H1N1 virus isolated from humans from 2009 to 2010. Interestingly, the HA gene of pandemic H1N1 virus isolated from humans in Korea was closely related to that of the isolate of the present invention. Previously reported pandemic H1N1 strains isolated from pigs, A / swine / Korea / SCJ01 / 2009, were also grouped into the same group (Song MS et al., J Clin Microbiol. 2010; 48: 3204-3211). In contrast, the classical swine H1N1 virus isolated from pigs before 2009 was classified as a pandemic H1N1 virus of another group (FIG. 1). The limitation of genetic analysis in this study is that complete sequencing of the full length genome is not available. However, the most important genes used, HA and NA, were included to identify influenza virus types, and partial sequencing demonstrated nearly 99% similarity. Despite these caveats, the data from the nucleotide analysis suggest that the influenza H1N1 Korean isolate of swine origin was closely related to pandemic H1N1, but not the classical swine H1N1 influenza virus.

실시예Example 2:  2: 무특정병원체Unspecified pathogen ( ( specificspecific pathogenpathogen freefree : : SPFSPF ) ) 돼지에서From pig 돼지 인플루엔자 A  Swine Influenza A H1N1H1N1 바이러스의  Virus 변원성Metamorphosis ( ( pathogenicitypathogenicity ). ).

A/swine/ Korea/GCVP-KS01/2010 (H1N1)로 명명된 상기 분리주를 SPF 미니어처 돼지 (miniature pigs) (Medipig, South Korea)에 비강으로 접종하였다. 3개 5주령 신클레어 미니어처 돼지들 (Sinclair miniature pigs)을 본 실시예에 사용하였다. 이들 중 2개는 바이러스 접종군 (virus inoculation: VI)에 대하여 사용하고, 한 돼지는 비접종 (no inoculation: NI) 대조군으로 사용하였다. The isolate, designated A / swine / Korea / GCVP-KS01 / 2010 (H1N1), was inoculated nasal to SPF miniature pigs (Medipig, South Korea). Three 5 week old Sinclair miniature pigs were used in this example. Two of them were used for virus inoculation (VI) and one pig was used as a no inoculation (NI) control.

2mL의 바이러스 (27HAU의 바이러스, 계대수준 4(passage level 4)을 비강 경로를 통하여 VI 군에 비강내로 접종하였다. 동일 부피의 통상 염수 (normal saline)를 대조군 돼지에 동일한 방식으로 투여하였다. 온도 및 비 분비물 (nasal discharge) 중의 바이러스 흘림(viral shedding)의 양을 포함한 임상증상을 매일 접종후 (days post-inoculation :DPI) 8일 동안 모니터링하였다. 비 스왑(nasal swab)을 양 코 트릴 (nose trills) 중의 멸균도니 면 스왑을 사용하여 수집하고, 2mL의 포스페이트 버퍼된 염수 (PBS) 중에서 현탁시키고, 실시간 RT-PCR에 사용하여 바이러스 흘림의 양 (load)을 검사하였다. DPI 9일에, 모든 실험 돼지는 안락사시키고 부검하여 병리적 분석을 수행하였다. DPI 9일에 수집된 혈액 시료의 혈청학적 분석은 마트릭스 단백질에 대한 상업적 ELISA kit (Bionote, South Korea)를 사용하여 수행하였다. 모든 실험적 과정은 독립적 동물 관리 및 사용 위원회 (independent animal care and use committee)에 의하여 승인되었고, 돼지 병리의 재생산에 대한 녹십자수의약품의 기준 (guidelines from the Green Cross Veterinary Products for the reproduction of pathogenesis in pigs)은 존중되었다.2 mL of virus (2 7 HAU virus, passage level 4) was inoculated intranasally into group VI via the nasal route. The same volume of normal saline was administered to control pigs in the same manner. Clinical symptoms, including temperature and the amount of viral shedding in nasal discharge, were monitored for 8 days post-inoculation (DPI) for 8 days. collected using sterile cotton swabs in nose trills, suspended in 2 mL of phosphate buffered saline (PBS) and used for real-time RT-PCR to check for viral load. All experimental pigs were euthanized and necropsied to perform pathological analysis Serological analysis of blood samples collected on DPI 9 was performed using a commercial ELISA kit for Matrix protein (Bionote, South Korea). All experimental procedures were approved by an independent animal care and use committee, and guidelines from the Green Cross Veterinary Products for the reproduction of pathogenesis in pigs) was respected.

바이러스로 접종된 돼지는 DPI 2일부터 기침과 나른함 (lethargy)을 보인 반면, 접종되지 않은 돼지는 실험 동안 어떠한 임상적 증상을 나타내지 않았다. VI 군의 직장 온도는 NI 군보다 유의하게 더 높았다 (P<0.01, Tukey's tes). 열성 반응 (febrile response)은 VI 군에서 DPI 1일부터 발견되었다 (>39℃). 특히, DPI 2일에 모든 접종된 돼지에서 직장 온도는 39.5℃까지 급상승하였다 (도 2). VI 군에서 바이러스 흘림은 DPI 1 내지 DPI 7에서 비강 스왑에서 관찰되었다. 부검 중 gross lesions가 조사된 경우 바이러스 접종된 돼지의 폐에서 Focal reddish consolidation가 나타났고 현미경적 상흔 (lesions) 중에서 심한 suppurative necrotizing bronchopneumonia가 발견되었다. 인플루엔자 바이러스에 대한 항체가 또한 VI 군에서 검출되었고, NI 동물에서는 항체에 대한 혈청학적 증거는 없었다 (데이터는 보이지 않음). Pigs inoculated with the virus showed coughing and lethargy from DPI 2 days, whereas unvaccinated pigs showed no clinical symptoms during the experiment. Rectal temperature in group VI was significantly higher than in NI group (P <0.01, Tukey's tes). A febrile response was found from Day 1 of DPI in group VI (> 39 ° C.). In particular, rectal temperatures spiked to 39.5 ° C. in all inoculated pigs on DPI 2 (FIG. 2). Virus spillage in group VI was observed in nasal swabs at DPI 1 to DPI 7. When gross lesions were examined during necropsy, focal reddish consolidation was observed in the lungs of the vaccinated pigs and severe suppurative necrotizing bronchopneumonia was found among the microscopic lesions. Antibodies against influenza virus were also detected in group VI and there was no serological evidence for antibodies in NI animals (data not shown).

이전의 연구에 기초하여 예측된 바와 같이, 발열 및 gross-조직병리학적 상흔 (gross-histopathological lesions)을 포함한, 임상증상은 범유행 H1N1 접종된 SPF 돼지의 폐에서 성공적으로 재생산되었다 (reproduced). 본 실시예는 돼지-분리된 범유행 H1N1 바이러스의 SPF 돼지에서의 병원성 재생산 (pathogenicity reproduction)을 검증하였고, 돼지군 (pig herds) 중에 범유행 H1N1의 바이러스 순환의 잠재적 우려 및 돼지 집단 중에서 새로운 변이체의 출현 가능성을 입증하였다.As predicted based on previous studies, clinical symptoms, including fever and gross-histopathological lesions, were successfully reproduced in the lungs of pandemic H1N1 inoculated SPF pigs. This example validates the pathogenicity reproduction of pig-isolated pandemic H1N1 virus in SPF swine, the potential concern of viral circulation of pandemic H1N1 in pig herds and the new variants of the swine population. The possibility of appearance was demonstrated.

한국생명공학연구원Korea Biotechnology Research Institute KCTC11848BPKCTC11848BP 2011012120110121

<110> GREEN CROSS VETERINARY PRODUCTS., LTD. <120> Method of preventing or treating the swine influenza virus infection <130> PN094818 <160> 12 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 776 <212> DNA <213> Swine influenza virus A H1N1: A/swine/Korea/GCVP-KS01/2010(H1N1) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(776) <223> partial sequence of hemagluttination (HA) gene : 730-1505 <400> 1 atggactatt actggacact agtagagccg ggagacaaaa taacattcga agcaactgga 60 aatctagtgg taccgagata tgcattcgca atggaaagaa atgctggatc tggtattatc 120 atttcagata caccagtcca cgattgcaat acaacttgtc agacacccaa gggtgctata 180 aacaccagcc tcccatttca gaatatacat ccgatcacaa ttggaaaatg tccaaaatat 240 gtaaaaagca caaaattgag actggccaca ggattgagga atgtcccttc tactcaatct 300 agaggcctat ttggggccat tgccggtttc attgaggggg ggtggacagg gatggtagat 360 ggatggtacg gttatcacca tcaaaatgag caggggtcag gatatgcagc cgacctgaag 420 agcacacaga atgccattga cgagattact aacaaagtaa attctgttat tgaaaagatg 480 aatacacagt tcacagcagt aggtaaagag ttcaaccacc tggaaaaaag 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<400> 10 atggactcca acaccatgtc aagctttcag gtagactgtt tcctttggca tatccgcaag 60 cgatttgcag acaatggatt gggtgatgcc ccattccttg atcggctccg ccgagatcaa 120 aagtccttaa aaggaagagg caacaccctt ggcctcgata tcgaaacagc cactcttgtt 180 gggaaacaaa tcgtggaatg gatcttgaaa gaggaatcca gcgagacact tagaatgaca 240 attgcatctg tacctacttc gcgctacctt tctgacatga ccctcgagga aatgtcacga 300 gactggttca tgctcatgcc taggcaaaag ataataggcc ctctttgcgt gcgattggac 360 caggcgatca tggaaaagaa catagtactg aaagcgaact tcagtgtaat ctttaaccga 420 ttagagacct tgatactact aagggctttc actgaggagg gagcaatagt tggagaaatt 480 tcaccattac cttctcttcc aggacatact tatgaggatg tcaaaaatgc agttggggtc 540 ctcatcggag gacttgaatg gaatggtaac acggttcgag tctctgaaaa tatacagaga 600 ttcgcttgga gaaactgtga tgagaatggg agaccttcac tacctccaga gcagaaatga 660 aaagtggcga gagcaattgg gacagaaatt tgaggaaata aggtggttaa ttgaagaaat 720 gcggcacaga ttgaaagcga cagagaatag tttcgaacaa ataacattta tgcaagcctt 780 acaactactg cttgaagtag aacaagagat aagagctttc tcgtttcagc ttatttaatg 840 ataaaaaaca cccttgtttc tac 863 <210> 11 <211> 1497 <212> DNA <213> A/California/04/2009(H1N1) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1497) <223> Partial sequence of NP gene <400> 11 atggcgtctc aaggcaccaa acgatcatat gaacaaatgg agactggtgg ggagcgccag 60 gatgccacag aaatcagagc atctgtcgga agaatgattg gtggaatcgg gagattctac 120 atccaaatgt gcactgaact caaactcagt gattatgatg gacgactaat ccagaatagc 180 ataacaatag agaggatggt gctttctgct tttgatgaga gaagaaataa atacctagaa 240 gagcatccca gtgctgggaa ggaccctaag aaaacaggag gacccatata tagaagagta 300 gacggaaagt ggatgagaga actcatcctt tatgacaaag aagaaataag gagagtttgg 360 cgccaagcaa acaatggcga agatgcaaca gcaggtctta ctcatatcat gatttggcat 420 tccaacctga atgatgccac atatcagaga acaagagcgc ttgttcgcac cggaatggat 480 cccagaatgt gctctctaat gcaaggttca acacttccca gaaggtctgg tgccgcaggt 540 gctgcggtga aaggagttgg aacaatagca atggagttaa tcagaatgat caaacgtgga 600 atcaatgacc gaaatttctg gaggggtgaa aatggacgaa ggacaagggt tgcttatgaa 660 agaatgtgca atatcctcaa aggaaaattt caaacagctg cccagagggc aatgatggat 720 caagtaagag aaagtcgaaa cccaggaaac gctgagattg aagacctcat tttcctggca 780 cggtcagcac tcattctgag gggatcagtt gcacataaat cctgcctgcc tgcttgtgtg 840 tatgggcttg cagtagcaag tgggcatgac tttgaaaggg aagggtactc actggtcggg 900 atagacccat tcaaattact ccaaaacagc caagtggtca gcctgatgag accaaatgaa 960 aacccagctc acaagagtca attggtgtgg atggcatgcc actctgctgc atttgaagat 1020 ttaagagtat caagtttcat aagaggaaag aaagtgattc caagaggaaa gctttccaca 1080 agaggggtcc agattgcttc aaatgagaat gtggaaacca tggactccaa taccctggaa 1140 ctgagaagca gatactgggc cataaggacc aggagtggag gaaataccaa tcaacaaaag 1200 gcatccgcag gccagatcag tgtgcagcct acattctcag tgcagcggaa tctccctttt 1260 gaaagagcaa ccgttatggc agcattcagc gggaacaatg aaggacggac atccgacatg 1320 cgaacagaag ttataagaat gatggaaagt gcaaagccag aagatttgtc cttccagggg 1380 cggggagtct tcgagctctc ggacgaaaag gcaacgaacc cgatcgtgcc ttcctttgac 1440 atgagtaatg aagggtctta tttcttcgga gacaatgcag aggagtatga cagttga 1497 <210> 12 <211> 982 <212> DNA <213> A/California/04/2009(H1N1) <220> <221> misc_feature <222> (1)..(982) <223> Partial sequence of M gene <400> 12 atgagtcttc taaccgaggt cgaaacgtac gttctttcta tcatcccgtc aggccccctc 60 aaagccgaga tcgcgcagag actggaaagt gtctttgcag gaaagaacac agatcttgag 120 gctctcatgg aatggctaaa gacaagacca atcttgtcac ctctgactaa gggaatttta 180 ggatttgtgt tcacgctcac cgtgcccagt gagcgaggac tgcagcgtag acgctttgtc 240 caaaatgccc taaatgggaa tggggacccg aacaacatgg atagagcagt taaactatac 300 aagaagctca aaagagaaat aacgttccat ggggccaagg aggtgtcact aagctattca 360 actggtgcac ttgccagttg catgggcctc atatacaaca ggatgggaac agtgaccaca 420 gaagctgctt ttggtctagt gtgtgccact tgtgaacaga ttgctgattc acagcatcgg 480 tctcacagac agatggctac taccaccaat ccactaatca ggcatgaaaa cagaatggtg 540 ctggctagca ctacggcaaa ggctatggaa cagatggctg gatcgagtga acaggcagcg 600 gaggccatgg aggttgctaa tcagactagg cagatggtac atgcaatgag aactattggg 660 actcatccta gctccagtgc tggtctgaaa gatgaccttc ttgaaaattt gcaggcctac 720 cagaagcgaa tgggagtgca gatgcagcga ttcaagtgat cctctcgtca ttgcagcaaa 780 tatcattggg atcttgcacc tgatattgtg gattactgat cgtctttttt tcaaatgtat 840 ttatcgtcgc tttaaatacg gtttgaaaag agggccttct acggaaggag tgcctgagtc 900 catgagggaa gaatatcaac aggaacagca gagtgctgtg gatgttgacg atggtcattt 960 tgtcaacata gagctagagt aa 982 <110> GREEN CROSS VETERINARY PRODUCTS., LTD. <120> Method of preventing or treating the swine influenza virus          infection <130> PN094818 <160> 12 <170> Kopatentin 2.0 <210> 1 <211> 776 <212> DNA <213> Swine influenza virus A H1N1: A / swine / Korea / GCVP-KS01 / 2010 (H1N1) <220> <221> misc_feature (222) (1) .. (776) <223> partial sequence of hemagluttination (HA) gene: 730-1505 <400> 1 atggactatt actggacact agtagagccg ggagacaaaa taacattcga agcaactgga 60 aatctagtgg taccgagata tgcattcgca atggaaagaa atgctggatc tggtattatc 120 atttcagata caccagtcca cgattgcaat acaacttgtc agacacccaa gggtgctata 180 aacaccagcc tcccatttca gaatatacat ccgatcacaa ttggaaaatg tccaaaatat 240 gtaaaaagca caaaattgag actggccaca ggattgagga atgtcccttc tactcaatct 300 agaggcctat ttggggccat tgccggtttc attgaggggg ggtggacagg gatggtagat 360 ggatggtacg gttatcacca tcaaaatgag caggggtcag gatatgcagc cgacctgaag 420 agcacacaga atgccattga cgagattact aacaaagtaa attctgttat tgaaaagatg 480 aatacacagt tcacagcagt aggtaaagag ttcaaccacc tggaaaaaag aatagagaat 540 ttaaataaaa aagttgatga tggtttcctg gacatttgga cttacaatgc cgaactgttg 600 gttctattgg aaaatgaaag aactttggac taccacgatt caaatgtgaa gaacttatat 660 gaaaaggtaa gaagccagtt gaaaaacaat gccaaggaaa ttggaaacgg ctgctttgaa 720 ttttaccaca aatgcgataa cacgtgcatg gaaagtgtca aaaatgggac ttatga 776 <210> 2 <211> 791 <212> DNA <213> Swine influenza virus A H1N1: A / swine / Korea / GCVP-KS01 / 2010 (H1N1) <220> <221> misc_feature (222) (1) .. (791) <223> Partial sequence of neuraminidase (NA) gene: 536-1326 <400> 2 ggtcagcaag cgcatgtcat gatggcatca attggctaac aattggaatt tctggcccag 60 acaatggggc agtggctgtg ttaaagtaca acggcataat aacagacact atcaagagtt 120 ggagaaacaa catattgaga acacaagagt ctgaatgtgc atgtgtaaat ggttcttgct 180 ttactgtaat gaccgatgga ccaagtgatg gacaggcctc atacaagatc ttcagaatag 240 aaaagggaaa gatagtcaaa tcagtcgaaa tgaatgcccc taattatcac tatgaggaat 300 gctcctgtta tcctgattct agtgaaatca catgtgtgtg cagggataac tggcatggct 360 cgaatcgacc gtgggtgtct ttcaaccaga atctggaata tcagatagga tacatatgca 420 gtgggatttt cggagacaat ccacgcccta atgataagac aggcagttgt ggtccagtat 480 cgtctaatgg agcaaatgga gtaaaaggat tttcattcaa atacggcaat ggtgtttgga 540 tagggagaac taaaagcatt agttcaagaa acggttttga gatgatttgg gatccgaacg 600 gatggactgg gacagacaat aacttctcaa taaagcaaga tatcgtagga ataaatgagt 660 ggtcaggata tagcgggagt tttgttcagc atccagaact aacagggctg gattgtataa 720 gaccttgctt ctgggttgaa ctaatcagag ggcgacccaa agagaacaca atctggacta 780 gcgggagcag c 791 <210> 3 <211> 661 <212> DNA <213> Swine influenza virus A H1N1: A / Korea / GCVP-KS01 / 2010 (H1N1) <220> <221> misc_feature (222) (1) .. (661) <223> Partial sequence of PA gene: <400> 3 agcgaaagca ggtactgatc caaaatggaa gactttgtgc gacaatgctt caatccaatg 60 atcgtcgagc ttgcggaaaa ggcaatgaaa gaatatgggg aagatccgaa aatcgaaact 120 aacaagcttg ctgcaatatg cacacatttg gaagtttgtt tcatgtattc ggatttccat 180 ttcatcgacg aacggggtga atcaataatt gtagaatctg gtgacccgaa tgcactattg 240 aagcaccgat ttgagataat tgaaggaaga gaccgaatca tggcctggac agtggtgaac 300 agtatatgta acacaacagg ggtagagaag cctaaatttc ttcctgattt gtatgattac 360 aaagagaacc ggttcattga aattggagta acacggaggg aagtccacat atattaccta 420 gagaaagcca acaaaataaa atctgagaag acacacattc acatcttttc attcactgga 480 gaggagatgg ccaccaaagc ggactacacc cttgacgaag agagcagggc aagaatcaaa 540 actaggcttt tcactataag acaagaaatg gccagtagga gtctatggga ttcctttcgt 600 cagtccgaaa gaggcgaaga gacaattgaa gaaaaatttg agatcacagg aaccatgcgc 660 a 661 <210> 4 <211> 562 <212> DNA <213> Swine influenza virus A H1N1: A / Korea / GCVP-KS01 / 2010 (H1N1) <220> <221> misc_feature (222) (1) .. (562) <223> Partial sequence of NS gene <400> 4 gactggttca tgctcatgcc taggcaaaag ataataggcc ctctttgcgt gcgatcggac 60 caggcggtca tgggagagaa catagtactg agagcgaact tcagtgtaat ctttaaccga 120 ttagagacct tgatactact aagggctttc actgaggagg gagcaatagt tggagaaatt 180 tcaccattac cttctcttcc aggacatact tatgaggatg tcaaaaatgc agttggggtc 240 ctcatcggag gacttgaatg gaatggtaac acggttcgag tctctgaaaa tatacagaga 300 ttcgcttgga gaaactgtga tgagaatggg agaccttcac tacctccaga gcagaaatga 360 aaagtggcga gagcaattgg gacagaaatt tgaggaaata aggtggttaa ttgaagaaat 420 gcggcacaga ttgaaagcga cagagaatag tttcgaacaa ataacattta tgcaagcctt 480 acaactactg cttgaagtag aacaagagat aagagctttc tcgtttcagc ttatttaatg 540 ataaaaaaca cccttgtttc ta 562 <210> 5 <211> 1260 <212> DNA <213> Swine influenza vrius A H1N1: A / Korea / GCVP-KS01 / 2010 (H1N1) <220> <221> misc_feature (222) (1) .. (1260) <223> Partial sequence of NP gene <400> 5 agtagaaaca ggaggaccca tatatagaag aataaacgga aagtggatga gagagctcat 60 cctttatgac aaagaagaaa taaggagagt ttggcgccaa gcaaacaatg gcgaagatgc 120 aacagcaggt cttactcata tcatgatttg gcattccaac ctgaatgatg ccacatatca 180 gagaacaaga gcgcttgttc gcaccggaat ggatcccaga atgtgctctc taatgcaagg 240 ttcaacactt cccagaaggt ctggtgccgc aggtgctgcg gtgaaaggag ttggaacaat 300 agcaatggag ttaatcagaa tgatcaaacg tggaatcaat gaccgaaatt tctggagggg 360 tgaaaatgga cgaaggacaa gggttgctta tgaaagaatg tgcaatatcc tcaaaggaaa 420 atttcaaaca gctgcccaga gggcaatgat ggatcaagta agagaaagtc gaaacccagg 480 aaacgctgag attgaagacc tcattttcct ggcacggtca gcactcattc tgagggaatc 540 agttgcacat aaatcctgcc tgcctgcttg tgtgtatggg cttgcagtag caagtgggca 600 tgactttgaa agggaagggt actcactggt tgggatagac ccattcaaat tactccaaaa 660 cagccaagtg gtcagcctga tgaggccaaa tgaaaaccca gctcacaaga gtcaattggt 720 gtggatggca tgccactctg ctgcatttga agatttaaga gtatcaagtt tcataagagg 780 aaagaaagtg attccaggag gaaagctttc cacaagaggg gtccagattg cttcaaatga 840 gaatgtggaa accatggact ccaataccct ggaactaaga agcagatact gggccataag 900 gaccaggagt ggaggaaata ccaatcaaca aaaggcatcc gcaggccaga tcagtgtgca 960 gcctacattc tcagtgcagc gaaatctccc ttttgaaaga gcaaccgtta tggcagcatt 1020 cagcgggaac aatgaaggac ggacatccga catgcgaaca gaagttataa gaatgatgga 1080 aaatgcaaag ccagaagatt tgtccttcca ggggcgggga gtcttcgagc tctcggacga 1140 aaaggcaacg aacccgatcg tgccttcctt tgacatgagt aatgaagggt cttatttctt 1200 cggagacaat gcagaggagt atgacagttg agaaaaaaca cccttgtttc tactgaccac 1260                                                                         1260 <210> 6 <211> 982 <212> DNA <213> Swine influenza virus A H1N1: A / Korea / GCVP-KS01 / 2010 (H1N1) <220> <221> misc_feature (222) (1) .. (982) <223> complete sequence of M gene <400> 6 atgagtcttc taaccgaggt cgaaacgtac gttctttcta tcatcccgtc aggccccctc 60 aaagccgaga tcgcgcagag actggaaagt gtctttgcag gaaagaacac agatcttgag 120 gctctcatgg aatggctaaa gacaagacca atcttgtcac ctctgactaa ggggatttta 180 ggatttgtgt tcacgctcac cgtgcccagt gagcgaggac tgcagcgtag acgctttgtc 240 caaaatgccc taaatgggaa tggggacccg aacaacatgg atagagcagt taaactatac 300 aagaagctca aaagagaaat aacgttccat ggggccaagg aggtgtcact aagctattca 360 actggtgcac ttgccagttg catgggcctc atatacaaca ggatgggaac agtgaccaca 420 gaagctgctt ttggtctagt gtgtgccact tgtgaacaga ttgctgattc acagcatcgg 480 tctcacagac aaatggctac taccaccaat ccactaatca ggcatgaaaa cagaatggtg 540 ctggctagca ctacggcaaa ggctatggaa cagatggctg gatcgagtga acaggcagca 600 gaggccatgg aggttgctaa tcagactagg cagatggtac atgcaatgag aactattggg 660 actcatccta gctccagtgc tggtctgaaa gatgaccttc ttgaaaattt gcaggcctac 720 cagaagcgaa tgggagtgca gatgcagcga ttcaagtgat cctctcgtca ttgcagcaaa 780 tatcattggg atcttgcacc tgatattgtg gattactgat cgtctttttt tcaaatgtat 840 ttatcgtcgc tttaaatacg gtttgaaaag agggccttct acggaaggag tgcctgagtc 900 catgagggaa gaatatcaac aggaacagca gagtgctgtg gatgttgacg atggtcattt 960 tgtcaacata gagctagagt aa 982 <210> 7 <211> 1410 <212> DNA <213> A / California / 04/2009 (H1N1) <220> <221> misc_feature (222) (1) .. (1410) <223> sequence of NA gene <400> 7 atgaatccaa accaaaagat aataaccatt ggttcggtct gtatgacaat tggaatggct 60 aacttaatat tacaaattgg aaacataatc tcaatatgga ttagccactc aattcaactt 120 gggaatcaaa atcagattga aacatgcaat caaagcgtca ttacttatga aaacaacact 180 tgggtaaatc agacatatgt taacatcagc aacaccaact ttgctgctgg acagtcagtg 240 gtttccgtga aattagcggg caattcctct ctctgccctg ttagtggatg ggctatatac 300 agtaaagaca acagtgtaag aatcggttcc aagggggatg tgtttgtcat aagggaacca 360 ttcatatcat gctccccctt ggaatgcaga accttcttct tgactcaagg ggccttgcta 420 aatgacaaac attccaatgg aaccattaaa gacaggagcc catatcgaac cctaatgagc 480 tgtcctattg gtgaagttcc ctctccatac aactcaagat ttgagtcagt cgcttggtca 540 gcaagtgctt gtcatgatgg catcaattgg ctaacaattg gaatttctgg cccagacaat 600 ggggcagtgg ctgtgttaaa gtacaacggc ataataacag acactatcaa gagttggaga 660 aacaatatat tgagaacaca agagtctgaa tgtgcatgtg taaatggttc ttgctttact 720 gtaatgaccg atggaccaag taatggacag gcctcataca agatcttcag aatagaaaag 780 ggaaagatag tcaaatcagt cgaaatgaat gcccctaatt atcactatga ggaatgctcc 840 tgttatcctg attctagtga aatcacatgt gtgtgcaggg ataactggca tggctcgaat 900 cgaccgtggg tgtctttcaa ccagaatctg gaatatcaga taggatacat atgcagtggg 960 attttcggag acaatccacg ccctaatgat aagacaggca gttgtggtcc agtatcgtct 1020 aatggagcaa atggagtaaa agggttttca ttcaaatacg gcaatggtgt ttggataggg 1080 agaactaaaa gcattagttc aagaaacggt tttgagatga tttgggatcc gaacggatgg 1140 actgggacag acaataactt ctcaataaag caagatatcg taggaataaa tgagtggtca 1200 ggatatagcg ggagttttgt tcagcatcca gaactaacag ggctggattg tataagacct 1260 tgcttctggg ttgaactaat cagagggcga cccaaagaga acacaatctg gactagcggg 1320 agcagcatat ccttttgtgg tgtaaacagt gacactgtgg gttggtcttg gccagacggt 1380 gctgagttgc catttaccat tgacaagtaa 1410 <210> 8 <211> 1701 <212> DNA <213> A / California / 04/2009 (H1N1) <220> <221> misc_feature (222) (1) .. (1701) <223> Partial sequence of HA gene <400> 8 atgaaggcaa tactagtagt tctgctatat acatttgcaa ccgcaaatgc agacacatta 60 tgtataggtt atcatgcgaa caattcaaca gacactgtag acacagtact agaaaagaat 120 gtaacagtaa cacactctgt taaccttcta gaagacaagc ataacgggaa actatgcaaa 180 ctaagagggg tagccccatt gcatttgggt aaatgtaaca ttgctggctg gatcctggga 240 aatccagagt gtgaatcact ctccacagca agctcatggt cctacattgt ggaaacacct 300 agttcagaca atggaacgtg ttacccagga gatttcatcg attatgagga gctaagagag 360 caattgagct cagtgtcatc atttgaaagg tttgagatat tccccaagac aagttcatgg 420 cccaatcatg actcgaacaa aggtgtaacg gcagcatgtc ctcatgctgg agcaaaaagc 480 ttctacaaaa atttaatatg gctagttaaa aaaggaaatt catacccaaa gctcagcaaa 540 tcctacatta atgataaagg gaaagaagtc ctcgtgctat ggggcattca ccatccatct 600 actagtgctg accaacaaag tctctatcag aatgcagata catatgtttt tgtggggtca 660 tcaagataca gcaagaagtt caagccggaa atagcaataa gacccaaagt gagggatcaa 720 gaagggagaa tgaactatta ctggacacta gtagagccgg gagacaaaat aacattcgaa 780 gcaactggaa atctagtggt accgagatat gcattcgcaa tggaaagaaa tgctggatct 840 ggtattatca tttcagatac accagtccac gattgcaata caacttgtca aacacccaag 900 ggtgctataa acaccagcct cccatttcag aatatacatc cgatcacaat tggaaaatgt 960 ccaaaatatg taaaaagcac aaaattgaga ctggccacag gattgaggaa tatcccgtct 1020 attcaatcta gaggcctatt tggggccatt gccggtttca ttgaaggggg gtggacaggg 1080 atggtagatg gatggtacgg ttatcaccat caaaatgagc aggggtcagg atatgcagcc 1140 gacctgaaga gcacacagaa tgccattgac gagattacta acaaagtaaa ttctgttatt 1200 gaaaagatga atacacagtt cacagcagta ggtaaagagt tcaaccacct ggaaaaaaga 1260 atagagaatt taaataaaaa agttgatgat ggtttcctgg acatttggac ttacaatgcc 1320 gaactgttgg ttctattgga aaatgaaaga actttggact accacgattc aaatgtgaag 1380 aacttaatg aaaaggtaag aagccagcta aaaaacaatg ccaaggaaat tggaaacggc 1440 tgctttgaat tttaccacaa atgcgataac acgtgcatgg aaagtgtcaa aaatgggact 1500 tatgactacc caaaatactc agaggaagca aaattaaaca gagaagaaat agatggggta 1560 aagctggaat caacaaggat ttaccagatt ttggcgatct attcaactgt cgccagttca 1620 ttggtactgg tagtctccct gggggcaatc agtttctgga tgtgctctaa tgggtctcta 1680 cagtgtagaa tatgtattta a 1701 <210> 9 <211> 2151 <212> DNA <213> A / California / 04/2009 (H1N1) <220> <221> misc_feature (222) (1) ... (2151) <223> Partial sequence of PA gene <400> 9 atggaagact ttgtgcgaca atgcttcaat ccaatgatcg tcgagcttgc ggaaaaggca 60 atgaaagaat atggggaaga tccgaaaatc gaaactaaca agtttgctgc aatatgcaca 120 catttggaag tttgtttcat gtattcggat ttccatttca tcgacgaacg gggtgaatca 180 ataattgtag aatctggtga cccgaatgca ctattgaagc accgatttga gataattgaa 240 ggaagagacc gaatcatggc ctggacagtg gtgaacagta tatgtaacac aacaggggta 300 gagaagccta aatttcttcc tgatttgtat gattacaaag agaaccggtt cattgaaatt 360 ggagtaacac ggagggaagt ccacatatat tacctagaga aagccaacaa aataaaatct 420 gagaagacac acattcacat cttttcattc actggagagg agatggccac caaagcggac 480 tacacccttg acgaagagag cagggcaaga atcaaaacta ggcttttcac tataagacaa 540 gaaatggcca gtaggagtct atgggattcc tttcgtcagt ccgaaagagg cgaagagaca 600 attgaagaaa aatttgagat tacaggaact atgcgcaagc ttgccgacca aagtctccca 660 ccgaacttcc ccagccttga aaactttaga gcctatgtag atggattcga gccgaacggc 720 tgcattgagg gcaagctttc ccaaatgtca aaagaagtga acgccaaaat tgaaccattc 780 ttgaggacga caccacgccc cctcagattg cctgatgggc ctctttgcca tcagcggtca 840 aagttcctgc tgatggatgc tctgaaatta agtattgaag acccgagtca cgagggggag 900 ggaataccac tatatgatgc aatcaaatgc atgaagacat tctttggctg gaaagagcct 960 aacatagtca aaccacatga gaaaggcata aatcccaatt acctcatggc ttggaagcag 1020 gtgctagcag agctacagga cattgaaaat gaagagaaga tcccaaggac aaagaacatg 1080 aagagaacaa gccaattgaa gtgggcactc ggtgaaaata tggcaccaga aaaagtagac 1140 tttgatgact gcaaagatgt tggagacctt aaacagtatg acagtgatga gccagagccc 1200 agatctctag caagctgggt ccaaaatgaa ttcaataagg catgtgaatt gactgattca 1260 agctggatag aacttgatga aataggagaa gatgttgccc cgattgaaca tatcgcaagc 1320 atgaggagga actattttac agcagaagtg tcccactgca gggctactga atacataatg 1380 aagggagtgt acataaatac ggccttgctc aatgcatcct gtgcagccat ggatgacttt 1440 cagctgatcc caatgataag caaatgtagg accaaagaag gaagacggaa aacaaacctg 1500 tatgggttca ttataaaagg aaggtctcat ttgagaaatg atactgatgt ggtgaacttt 1560 gtaagtatgg agttctcact cactgacccg agactggagc cacacaaatg ggaaaaatac 1620 tgtgttcttg aaataggaga catgctcttg aggactgcga taggccaagt gtcgaggccc 1680 atgttcctat atgtgagaac caatggaacc tccaagatca agatgaaatg gggcatggaa 1740 atgaggcgct gccttcttca gtctcttcag cagattgaga gcatgattga ggccgagtct 1800 tctgtcaaag agaaagacat gaccaaggaa ttctttgaaa acaaatcgga aacatggcca 1860 atcggagagt cacccagggg agtggaggaa ggctctattg ggaaagtgtg caggacctta 1920 ctggcaaaat ctgtattcaa cagtctatat gcgtctccac aacttgaggg gttttcggct 1980 gaatctagaa aattgcttct cattgttcag gcacttaggg acaacctgga acctggaacc 2040 ttcgatcttg gggggctata tgaagcaatc gaggagtgcc tgattaatga tccctgggtt 2100 ttgcttaatg catcttggtt caactccttc ctcacacatg cactgaagta g 2151 <210> 10 <211> 863 <212> DNA <213> A / California / 04/2009 (H1N1) <220> <221> misc_feature (222) (1) .. (863) <223> Partial sequence of NS gene <400> 10 atggactcca acaccatgtc aagctttcag gtagactgtt tcctttggca tatccgcaag 60 cgatttgcag acaatggatt gggtgatgcc ccattccttg atcggctccg ccgagatcaa 120 aagtccttaa aaggaagagg caacaccctt ggcctcgata tcgaaacagc cactcttgtt 180 gggaaacaaa tcgtggaatg gatcttgaaa gaggaatcca gcgagacact tagaatgaca 240 attgcatctg tacctacttc gcgctacctt tctgacatga ccctcgagga aatgtcacga 300 gactggttca tgctcatgcc taggcaaaag ataataggcc ctctttgcgt gcgattggac 360 caggcgatca tggaaaagaa catagtactg aaagcgaact tcagtgtaat ctttaaccga 420 ttagagacct tgatactact aagggctttc actgaggagg gagcaatagt tggagaaatt 480 tcaccattac cttctcttcc aggacatact tatgaggatg tcaaaaatgc agttggggtc 540 ctcatcggag gacttgaatg gaatggtaac acggttcgag tctctgaaaa tatacagaga 600 ttcgcttgga gaaactgtga tgagaatggg agaccttcac tacctccaga gcagaaatga 660 aaagtggcga gagcaattgg gacagaaatt tgaggaaata aggtggttaa ttgaagaaat 720 gcggcacaga ttgaaagcga cagagaatag tttcgaacaa ataacattta tgcaagcctt 780 acaactactg cttgaagtag aacaagagat aagagctttc tcgtttcagc ttatttaatg 840 ataaaaaaca cccttgtttc tac 863 <210> 11 <211> 1497 <212> DNA <213> A / California / 04/2009 (H1N1) <220> <221> misc_feature (222) (1) .. (1497) <223> Partial sequence of NP gene <400> 11 atggcgtctc aaggcaccaa acgatcatat gaacaaatgg agactggtgg ggagcgccag 60 gatgccacag aaatcagagc atctgtcgga agaatgattg gtggaatcgg gagattctac 120 atccaaatgt gcactgaact caaactcagt gattatgatg gacgactaat ccagaatagc 180 ataacaatag agaggatggt gctttctgct tttgatgaga gaagaaataa atacctagaa 240 gagcatccca gtgctgggaa ggaccctaag aaaacaggag gacccatata tagaagagta 300 gacggaaagt ggatgagaga actcatcctt tatgacaaag aagaaataag gagagtttgg 360 cgccaagcaa acaatggcga agatgcaaca gcaggtctta ctcatatcat gatttggcat 420 tccaacctga atgatgccac atatcagaga acaagagcgc ttgttcgcac cggaatggat 480 cccagaatgt gctctctaat gcaaggttca acacttccca gaaggtctgg tgccgcaggt 540 gctgcggtga aaggagttgg aacaatagca atggagttaa tcagaatgat caaacgtgga 600 atcaatgacc gaaatttctg gaggggtgaa aatggacgaa ggacaagggt tgcttatgaa 660 agaatgtgca atatcctcaa aggaaaattt caaacagctg cccagagggc aatgatggat 720 caagtaagag aaagtcgaaa cccaggaaac gctgagattg aagacctcat tttcctggca 780 cggtcagcac tcattctgag gggatcagtt gcacataaat cctgcctgcc tgcttgtgtg 840 tatgggcttg cagtagcaag tgggcatgac tttgaaaggg aagggtactc actggtcggg 900 atagacccat tcaaattact ccaaaacagc caagtggtca gcctgatgag accaaatgaa 960 aacccagctc acaagagtca attggtgtgg atggcatgcc actctgctgc atttgaagat 1020 ttaagagtat caagtttcat aagaggaaag aaagtgattc caagaggaaa gctttccaca 1080 agaggggtcc agattgcttc aaatgagaat gtggaaacca tggactccaa taccctggaa 1140 ctgagaagca gatactgggc cataaggacc aggagtggag gaaataccaa tcaacaaaag 1200 gcatccgcag gccagatcag tgtgcagcct acattctcag tgcagcggaa tctccctttt 1260 gaaagagcaa ccgttatggc agcattcagc gggaacaatg aaggacggac atccgacatg 1320 cgaacagaag ttataagaat gatggaaagt gcaaagccag aagatttgtc cttccagggg 1380 cggggagtct tcgagctctc ggacgaaaag gcaacgaacc cgatcgtgcc ttcctttgac 1440 atgagtaatg aagggtctta tttcttcgga gacaatgcag aggagtatga cagttga 1497 <210> 12 <211> 982 <212> DNA <213> A / California / 04/2009 (H1N1) <220> <221> misc_feature (222) (1) .. (982) <223> Partial sequence of M gene <400> 12 atgagtcttc taaccgaggt cgaaacgtac gttctttcta tcatcccgtc aggccccctc 60 aaagccgaga tcgcgcagag actggaaagt gtctttgcag gaaagaacac agatcttgag 120 gctctcatgg aatggctaaa gacaagacca atcttgtcac ctctgactaa gggaatttta 180 ggatttgtgt tcacgctcac cgtgcccagt gagcgaggac tgcagcgtag acgctttgtc 240 caaaatgccc taaatgggaa tggggacccg aacaacatgg atagagcagt taaactatac 300 aagaagctca aaagagaaat aacgttccat ggggccaagg aggtgtcact aagctattca 360 actggtgcac ttgccagttg catgggcctc atatacaaca ggatgggaac agtgaccaca 420 gaagctgctt ttggtctagt gtgtgccact tgtgaacaga ttgctgattc acagcatcgg 480 tctcacagac agatggctac taccaccaat ccactaatca ggcatgaaaa cagaatggtg 540 ctggctagca ctacggcaaa ggctatggaa cagatggctg gatcgagtga acaggcagcg 600 gaggccatgg aggttgctaa tcagactagg cagatggtac atgcaatgag aactattggg 660 actcatccta gctccagtgc tggtctgaaa gatgaccttc ttgaaaattt gcaggcctac 720 cagaagcgaa tgggagtgca gatgcagcga ttcaagtgat cctctcgtca ttgcagcaaa 780 tatcattggg atcttgcacc tgatattgtg gattactgat cgtctttttt tcaaatgtat 840 ttatcgtcgc tttaaatacg gtttgaaaag agggccttct acggaaggag tgcctgagtc 900 catgagggaa gaatatcaac aggaacagca gagtgctgtg gatgttgacg atggtcattt 960 tgtcaacata gagctagagt aa 982

Claims (12)

수탁번호 KCTC 11848BP의 돼지 인플루엔자 바이러스 A/swine/Korea/GCVP-KS01/2009 (H1N1).Porcine influenza virus A / swine / Korea / GCVP-KS01 / 2009 (H1N1) of accession no. KCTC 11848BP. 제1항의 바이러스를 약독화 또는 불활성화시키는 단계를 포함하는, 돼지 인플루엔자 바이러스 감염의 예방 또는 치료용 조성물을 제조하는 방법. A method of preparing a composition for preventing or treating swine influenza virus infection, comprising attenuating or inactivating the virus of claim 1. 약독화 또는 불활성화된 제1항의 인플루엔자 바이러스를 포함하는, 인플루엔자 바이러스 감염의 예방 또는 치료용 조성물.Attenuated or inactivated influenza virus of claim 1, comprising the composition for the prevention or treatment of influenza virus infection. 돼지로부터 분리된 시료 중의 제1항의 인플루엔자 바이러스를 검출하는 단계를 포함하는, 돼지의 인플루엔자 바이러스 감염 여부를 진단하는 방법.A method for diagnosing swine influenza virus infection, comprising detecting the influenza virus of claim 1 in a sample isolated from pigs. 제4항에 있어서, 상기 검출은 제1항의 인플루엔자 바이러스 항원 또는 그에 결합하는 항체를 검출하는 것인 방법.The method of claim 4, wherein said detecting detects the influenza virus antigen of claim 1 or an antibody binding thereto. 제1항의 인플루엔자 바이러스 항원을 돼지로부터 분리된 시료와 접촉시키는 단계;
제1항의 인플루엔자 바이러스 항원과 항-제1항의 인플루엔자 바이러스 항원의 복합체의 존재를 검출하는 단계; 및
상기 복합체가 존재하는 경우, 상기 시료는 항-제1항의 인플루엔자 바이러스 항원 항체를 포함하는 것으로 결정하고, 상기 복합체가 존재하지 않는 경우, 상기 시료는 항-제1항의 인플루엔자 바이러스 항원 항체를 포함하지 않는 것으로 결정하는 단계를 포함하는, 돼지로부터 분리된 시료 중의 항-제1항의 인플루엔자 바이러스 항원 항체를 검출하는 방법.
Contacting the influenza virus antigen of claim 1 with a sample isolated from a pig;
Detecting the presence of a complex of the influenza virus antigen of claim 1 and the influenza virus antigen of claim 1; And
If the complex is present, the sample is determined to contain the anti-influenza virus antigen antibody of claim 1, and if the complex is not present, the sample does not contain the influenza virus antigen antibody of claim 1 A method for detecting the influenza virus antigen antibody of claim 1 in a sample isolated from a pig, comprising the step of determining that it is.
제6항에 있어서, 제1항의 인플루엔자 바이러스 항원은 바이러스 입자 자체 또는 그의 표면 단백질인 것인 방법.The method of claim 6, wherein the influenza virus antigen of claim 1 is the virus particle itself or a surface protein thereof. 제7항에 있어서, 상기 단백질은 고체 기판에 고정된 것인 방법.8. The method of claim 7, wherein the protein is immobilized on a solid substrate. 제6항에 있어서, 상기 시료는 돼지 혈액, 혈청 또는 혈장인 것인 방법. The method of claim 6, wherein the sample is pig blood, serum or plasma. 항-제1항의 인플루엔자 바이러스 항체와 돼지로부터 분리된 시료를 접촉시키는 단계;
상기 항체와 제1항의 인플루엔자 바이러스 항원의 복합체를 검출하는 단계; 및
상기 복합체가 존재하는 것으로 검출된 경우, 상기 시료는 제1항의 돼지 인플루엔자 바이러스 항원을 포함하는 것으로 결정하고, 상기 복합체가 존재하지 않는 것으로 검출된 경우, 상기 시료는 제1항의 돼지 인플루엔자 바이러스 항원을 포함하지 않는 것으로 결정하는 단계를 포함하는, 돼지로부터 분리된 시료 중의 제1항의 돼지 인플루엔자 바이러스 항원을 검출하는 방법.
Contacting the influenza virus antibody of claim 1 with a sample isolated from a pig;
Detecting a complex of the antibody with the influenza virus antigen of claim 1; And
If the complex is detected, the sample is determined to contain the swine influenza virus antigen of claim 1, and if the complex is detected to be absent, the sample comprises the swine influenza virus antigen of claim 1 A method for detecting a swine influenza virus antigen of claim 1 in a sample isolated from a pig, comprising determining not to.
제11항에 있어서, 제1항의 인플루엔자 바이러스 항원은 바이러스 입자 자체 또는 그의 표면 단백질인 것인 방법.The method of claim 11, wherein the influenza virus antigen of claim 1 is the virus particle itself or a surface protein thereof. 수탁번호 KCTC 11848BP의 돼지 인플루엔자 바이러스 A/swine/Korea/GCVP-KS01/2009 (H1N1) 또는 그에 결합하는 항체를 포함하는, 돼지 인플루엔자를 검출하기 위한 키트.A kit for detecting swine influenza comprising swine influenza virus A / swine / Korea / GCVP-KS01 / 2009 (H1N1) of Accession No. KCTC 11848BP or an antibody binding thereto.
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