KR20120080675A - 마자인 추출물을 포함하는 백혈병 치료용 조성물 및 건강 기능성 식품 - Google Patents

마자인 추출물을 포함하는 백혈병 치료용 조성물 및 건강 기능성 식품 Download PDF

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Abstract

본 발명은 마자인 추출물의 신규한 용도에 관한 것에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 마자인 에탄올 추출물을 유효성분으로 함유하는 백혈병 예방 및 치료용 조성물 및 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 마자인 에탄올 추출물을 유효성분으로 함유하는 백혈병 예방용 기능성 식품에 관한 것이다. 본 발명에 따른 백혈병 치료용 조성물 및 기능성 식품은 백혈병 세포의 성장을 억제하고 세포사멸을 유도하는 효과가 있어 백혈병 치료 및 예방에 효과적으로 사용할 수 있다.

Description

마자인 추출물을 포함하는 백혈병 치료용 조성물 및 건강 기능성 식품{Composition for Treatment of Leukemia and Functional Food Comprising Extract of Cannabis Semen}
본 발명은 마자인 추출물의 신규한 용도에 관한 것이다. 구체적으로, 본 발명은 백혈병에 대해 탁월한 예방 또는 치료 효능을 나타내는 마자인 추출물을 유효성분으로 함유하는 치료용 조성물 및 기능성 식품에 관한 것이다.
우리 몸의 뼈는 몸의 체형을 유지하고 운동을 할 수 있게 하며 칼슘 조절에 관여하는 기능을 하고, 뼈의 내부에는 뼈보다는 촘촘하지 않은 골수라는 조직이 있는데, 이곳에서 백혈구, 적혈구, 혈소판 등의 혈액 세포를 만드는 기능을 한다. 백혈병이란 비정상적인 백혈구(백혈병 세포)가 과도하게 증식하여 정상적인 백혈구와 적혈구, 혈소판의 생성이 억제된다. 정상적인 백혈구 수가 감소하면 면역저하를 일으켜 세균감염에 의한 패혈증을 일으킬 수 있고, 적혈구의 감소는 빈혈 증상(어지러움, 두통, 호흡곤란)을 가져오며, 혈소판의 감소는 출혈 경향을 일으킨다. 또한, 과다 증식된 백혈병 세포 자체로 인하여 고열, 피로감, 뼈의 통증, 설사, 의식저하, 호흡곤란, 출혈 경향도 일으킬 수 있다. 백혈병 환자는 치료받지 않을 시, 이러한 증상들에 의해 생명이 위험해진다.
백혈병은 세포의 분화 정도, 즉 악화 속도에 따라 급성과 만성으로 나뉘고, 세포의 기원에 따라 골수성과 림프구성으로 나뉜다. 백혈병은 흔히 다음의 네 가지 형태로 분류한다.
- 급성 골수성 백혈병(Acute myeloid leukemia)
- 급성 림프구성 백혈병(Acute lymphocytic leukemia)
- 만성 골수성 백혈병(Chronic myeloid leukemia)
- 만성 림프구성 백혈병(Chronic lymphocytic leukemia)
마자인(Cannabis Semen)은 뽕나무과(Moraceae)의 삼(Cannabis sativa L.)의 종자를 건조한 것으로서, 그 기원식물인 삼은 중앙아시아 원산의 일년초로서 원줄기는 높이 1-2.5 m로서 곧추 자라며 둔한 사각형이고 잔털이 있으며 녹색이다. 잎은 밑부분에서는 대생하고 엽병이 길며 5-9개로 갈라진 장상복엽이지만, 윗부분에서는 3개로 갈라지거나 갈라지지 않고 엽병도 짧다. 삼의 성분으로 알려진 테트라하이드로카나비놀(tetrahydrocannabinol)은 향정신성 작용을 가지며, 중추신경, 대뇌 척수에 대하여 처음에는 쾌락, 환각을 동반하는 흥분이 오는 데, 이것이 경과되면 마비작용으로 이행된다. 동시에 감각령에 둔마가 와서 통각의 소실을 가져오고, 결국 동공산대에 이른다. 마자인은 장을 윤택하게 하며, 행인, 작약, 지실, 대황, 후박과 배합한 마자인환은 변비를 치료하는 데 사용한다. 즉 마자인은 장을 통하게 하여 변이 잘 나오게 한다. 변비에 응용할 수 있다(박종희, 이정규 공저, 상용 약용식물도감, p199-p201). 마자인은 마른 것을 윤택하게 하고, 장을 부드럽게 소통하도록 도와주며 혈액순환을 순조롭게 하는 효능이 있는 약재이다.
즉, 마자인(Cannabis Semen)은 삼(cannabis sativa L.)(뽕나무과 Moraceae)의 씨로서 한방과 민간에서 윤장통변, 혈허진휴, 장조변비, 위장조결, 비약변비 등의 목적으로 사용하였다.
대한민국 공개특허공보 제2003-0059951호에는 마자인을 포함하는 생약 복합제 즉, 대황, 차전자, 욱리인, 빈랑, 마자인, 토사자, 우슬, 산약, 산수유, 지실, 방풍 및 독활로 이루어진 추출물을 포함하는 당뇨병 예방 및 치료용 조성물이 개시되어 있고, 대한민국 공개특허공보 특1999-0084271호에는 마자인을 포함하는 변비증상 개선 효과가 있는 차 및 이의 제조방법이 개시되어 있으며, 대한민국 등록특허공보 제10-0630410호에는 마자인 추출물을 함유하는 여드름 예방 및 치료를 위한 외용제 조성물이 개시되어 있다. 이 발명은 낮은 농도에서 여드름균(P. acnes)의 증식억제 효과를 보이는 귀판, 노회, 마자인, 백굴채 및 현호색의 효과를 확인하고 이러한 증식 억제능을 가진 생약추출물을 함유하는 조성물에 대한 것이다.
그러나, 아직 마자인의 백혈병 억제 효과에 대해서는 알려진 바가 없다.
이에, 본 발명자들은 마자인에 대한 생약 연구를 하던 중, 마자인 추출물이 백혈병 세포를 효과적으로 사멸시킬 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 마자인 추출물을 유효성분으로 함유하는 백혈병 치료용 조성물 및 기능성 식품을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 마자인(Cannabis Semen) 에탄올 추출물을 유효성분으로 함유하는 백혈병 예방 및 치료용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 마자인(Cannabis Semen) 에탄올 추출물을 유효성분으로 함유하는 백혈병 예방용 기능성 식품을 제공한다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 마자인(Cannabis sativa) 에탄올 추출물을 유효성분으로 함유하는 백혈병 예방 및 치료용 조성물을 제공한다. 본 발명의 조성물은 활성성분으로서 마자인 추출물을 포함하며, 추가적으로 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함할 수 있다.
본 발명의 백혈병 예방 및 치료용 조성물에 있어서, 상기 에탄올 추출물은 50℃에서 24시간 동안 추출되는 것이 바람직하고, 이때 상기 에탄올 추출물은 45℃ 감압 조건에서 건조 및 농축되는 것이 보다 바람직하며, 상기 에탄올은 95%인 것이 가장 바람직하다.
또한, 본 발명의 백혈병 예방 및 치료용 조성물에 있어서, 상기 조성물은 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함하는 것이 바람직하고, 또한, 상기 조성물은 급성 골수성 백혈병(Acute myeloid leukemia), 급성 림프구성 백혈병(Acute lymphocytic leukemia), 만성 골수성 백혈병(Chronic myeloid leukemia) 및 만성 림프구성 백혈병(Chronic lymphocytic leukemia)으로 이루어진 군중에서 선택된 백혈병에 작용하는 것이 바람직하다.
상기 "약제학적으로 허용가능한 담체"는 신체의 한 기관 또는 부분으로부터 신체의 다른 기관 또는 부분으로 활성 성분을 수송하는 역할을 하는 액체 또는 고체 충진제, 희석제, 부형제 또는 용매와 같은 약제학적으로 허용되는 물질, 조성물 또는 운반체(vehicle)를 의미한다.
본 발명의 백혈병 치료용 조성물은 유효성분과 함께 추가로 약제학적으로 허용되는 1종 이상의 담체를 첨가하여 약제로 제조할 수 있다. 상기 담체로는 식염수, 완충 식염수, 물, 글리세롤 및 에탄올 등이 있으나 이에 한정되지 않으며, 당해 기술 분야에 알려진 적합한 제제(Remingtons's Pharmaceutical Science(최근판), Mack Publishing Company, Easton PA)를 모두 사용 가능하다.
본 발명의 마자인 추출물을 약제화하기 위한 제제는 임상 투여시에 경구로 투여가 가능하며 일반적인 의약품 제제의 형태로 사용될 수 있으며, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 경구를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드, 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
본 발명의 조성물은 실제 임상 투여시에 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있는데, 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드, 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 구체적으로, 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(Propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다. 또한 치료제의 효능 증진을 위해 칼슘이나 비타민 D3를 첨가할 수 있다. 이러한 조성물은 단위-용량(1회분) 또는 다중-용량(수 회분) 용기, 예를 들면, 밀봉된 앰풀 및 바이알에 제시될 수 있고, 사용 직전에 멸균성 액상 담체, 예를 들면, 주사용 수의 부가 만을 요구하는 동결-건조 조건 하에 저장할 수 있다. 즉석의 주사 용제 및 현탁제는 멸균성 산제, 과립제 및 정제로부터 제조할 수 있다.
본 발명의 제제는 대상의 연령, 성별, 상태, 체내에서 활성 성분의 흡수도, 불활성율 및 배설속도, 병용되는 약물에 따라 달리 적용될 수 있다. 본 발명은 또한 투약 단위의 제형들을 포함한다. 제형은 개별 투약 형태, 예를 들면 정제, 피복 정제, 캡슐제, 환제, 좌약 및 앰플제로 존재하고, 약제 중 유효 화합물의 함량은 개별 투약량의 분율 또는 배수에 해당한다. 투약 단위는, 예를 들면 개별 투여량의 1, 2, 3 또는 4배로, 또는 1/2, 1/3 또는 1/4배를 함유할 수 있다. 개별 투여량은 바람직하기로는 유효 화합물이 1회에 투여되는 양을 함유하며, 이는 통상 1일 투여량의 전부, 1/2, 1/3 또는 1/4배에 해당한다.
본 발명에서 용어, "추출물(extract)"은 천연물로부터 분리된 활성성분을 의미한다. 추출물은 물, 유기용매, 또는 이의 혼합용매를 이용하는 추출과정으로 획득할 수 있으며, 추출액, 이의 건조 분말 또는 이를 이용하여 제형화된 모든 형태를 포함한다.
본 발명의 구체적인 실시에서, 마자인의 에탄올 추출물은 HL-60 백혈병 세포를 100 ㎍/㎖에서 75.6% 사멸시키고, EC50(half maximal effective concentration)은 54.8 ㎍/㎖이었다. 상기 결과는 본 발명의 마자인 추출물이 우수한 HL-60 세포의 사멸 활성을 가지며, 나아가 백혈병 치료 및 예방 활성을 가진다는 것을 입증하는 것이다.
본 발명에서 용어, "예방"이란 조성물의 투여로 백혈병 발병을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에서 용어, "치료"란 조성물의 투여로 백혈병의 증세가 호전되거나 이롭게 변경하는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에서 마자인 추출물은 물, 유기 용매, 또는 이의 혼합 용매를 사용하여 추출하여 사용할 수 있다. 바람직하게는 유기 용매, 특히 에탄올을 사용하여 추출한다. 추출한 액은 바로 사용하거나 또는 농축 및/또는 건조하여 사용할 수 있다. 유기용매를 사용하여 추출하는 경우, 메탄올, 에탄올, 이소프로판올, 부탄올, 에틸렌, 아세톤, 헥산, 에테르, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, N, N-디메틸포름아미드(DMF), 디메틸설폭사이드(DMSO), 1,3-부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 또는 이들의 혼합용매인 유기용매를 사용하며 생약의 유효 성분이 파괴되지 않거나 최소화된 조건에서 실온 또는 가온하여 추출할 수 있다. 추출하는 유기용매에 따라 약제의 유효성분의 추출정도와 손실정도가 차이가 날 수 있으므로, 알맞은 유기용매를 선택하여 사용하도록 한다. 추출 방법은 특별히 제한되지 않고, 예를 들어 냉침 추출, 초음파 추출, 환류 냉각 추출 등이 있다. 여과는 추출액으로부터 부유하는 고체 입자를 제거하는 과정으로, 면, 나일론 등을 이용하여 입자를 걸러내거나 한외여과, 냉동여과법, 원심분리법 등을 사용할 수 있으나 이에 제한되지 않는다.
추출액의 농축에는 감압농축, 역삼투압 농축 등의 방법이 사용될 수 있다. 농축 후 건조 단계는 동결건조, 진공건조, 열풍건조, 분무건조, 감압건조, 포말건조, 고주파건조, 적외선건조 등을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 경우에 따라, 최종 건조된 추출물을 분쇄하는 공정을 추가할 수 있다.
또한, 상기 추출물은 추가의 분획 공정을 수행할 수 있다. 바람직하게는 상기 추출물을 증류수에 현탁시켜 비극성 유기 용매, 예를 들어, 헥산, 에테로, 디클로로메탄, 클로로포름, 에틸아세테이드 또는 이들의 혼합 용매로 비극성용매 가용층을 추출, 분리하여 수득하도록 하고, 이를 농축 및/또는 건조하여 사용할 수 있다.
본 발명에서, 용어 "약제학적으로 허용가능한 염"이란 약리학적 또는 생리학적으로 허용되는 무기산, 유기산 및 염기로부터 유도된 염을 의미한다. 적합산 산의 예로는 염산, 브롬산, 황산, 질산, 과염소산, 푸마르산, 말레산, 인산, 글리콜산, 락트산, 살리실산, 숙신산, 톨루엔-p-설폰산, 타르타르산, 아세트산, 시트르산, 메탄설폰산, 포름산, 벤조산, 말론산, 나프탈렌-2-설폰산, 벤젠설폰산 등을 포함할 수 있다. 적합한 염기로부터 유도된 염은 알칼리 금속, 예들 들어, 나트륨, 알칼리토금속, 예들 들어, 마그네슘, 암모늄 등을 포함할 수 있다.
본 발명의 백혈병 질환 예방 및 치료용 약학조성물은 조성물 총 중량에 대하여 상기 추출물 또는 화합물을 0.1 내지 50 중량%로 포함한다. 또한, 상기 조성물은 약효를 증가시키지는 않으나 약재 조성물에 통상 사용되어 냄새, 맛, 시각 등을 향상시킬 수 있는 추가성분을 포함할 수 있다. 또한, 상기 조성물은 비타민 B1, B2, B6, C, E, 니아신, 카르니친, 베타인, 엽산 판토텐산, 비오틴, 아연, 철, 칼슘, 크롬, 마그네슘, 이들의 혼합물 등의 무기, 유기 첨가물들을 추가로 포함할 수 있다. 또한, 상기 조성물은 단독 사용하거나 기존 사용되어진 백혈병에 대한 치료 활성을 가지는 물질을 포함할 수 있다.
본 발명에서 용어, "환자"는 백혈병 및 이의 직, 간접적 원인에 의해 유발된 질환을 가지고, 본 발명의 조성물을 투여에 의하여 증상이 호전될 수 있는 인간과 말, 양, 돼지, 염소, 낙타, 영양, 개 등의 동물을 의미한다. 본 발명의 마자인 추출물을 포함하는 조성물을 환자에게 투여함으로써, 상기에서 언급한 백혈병을 효과적으로 예방 및 치료할 수 있다. 본 발명의 조성물을 기존의 백혈병 치료제와 병행하여 투여할 수 있다.
본 발명에서 용어, "투여"는 어떠한 적절한 방법으로 환자에게 소정의 물질을 도입하는 것을 의미하며, 본 발명의 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 경구 또는 비경구 투여될 수 있다. 또한, 조성물은 활성 물질이 표적 세포로 이동할 수 있는 임의의 장치에 의해 투여될 수 있다.
본 발명의 조성물은 약제학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에서 용어, "약제학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 환자의 성병, 연령, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 본 발명의 제조 방법에 따라 제조된 추출물 또는 화합물을 포함하는 조성물의 투여방법은 경구투여 또는 정맥투여가 바람직하고, 일반적으로 그 유효 용량은 경구투여인 경우에는 보통 성인을 기준으로 1회에 1 내지 500 ㎎/㎏이 바람직하며, 정맥투여인 경우에는 1 내지 100 ㎎/㎏이 바람직하며, 하루 2-3 회 투여될 수 있다. 특정 환자에 대한 투여용량 수준은 성별, 연령, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 약제혼합, 환자의 상태 및 신경 질환의 발병 정도에 따라 변화될 수 있다.
또한, 본 발명은 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 마자인(Cannabis Semen) 에탄올 추출물을 유효성분으로 함유하는 백혈병 예방용 기능성 식품을 제공한다.
본 발명의 기능성 식품은 에탄올 추출물을 총중량에 대해 0.1 내지 5중량% 포함하는 것이 바람직하며, 1중량%로 포함하는 것이 더욱 바람직하다.
본 발명에서는 HL-60 백혈병 세포에 본 발명의 마자인 추출물을 투입한 결과, HL-60 백혈병 세포가 사멸하는 것을 확인하였다(도 1 참조). 따라서, 마자인 추출물이 백혈병 치료 효과가 있다는 것을 새롭게 알 수 있다. 이에, 본 발명에서는 마자인 추출물을 유효성분으로 함유하는 백혈병 예방용 기능성 식품을 제조함으로써 본 발명을 완성하였다(제조예 2 참조).
상기에서 살펴본 바와 같이, 본 발명의 마자인 추출물은 백혈병 세포의 성장을 억제하고 세포사멸을 유도한다. 따라서 본 발명에 따른 백혈병 치료용 조성물은 백혈병 환자의 치료에 매우 효과적일 것이다.
도 1은 인간 백혈병 HL-60 세포에서 마자인의 도입이 백혈병 세포의 성장에 미치는 영향을 알아보기 위한 Alamar Blue 분석 결과이다. 도면의 가로축은 추출물의 농도를, 세로축은 백혈병 세포의 생존률을 나타낸다.
이하, 본 발명을 하기 실시예에 의거하여 보다 상세하게 설명하고자 한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명은 하기 실시예에 의해 한정되는 것이 아니고, 본 발명의 기술적 사상을 벗어나지 않는 범위 내에서 치환 및 균등한 타 실시예로 변경할 수 있음은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 명백할 것이다.
<실시예 1> 마자인 추출물의 제조
서울 약재상에서 구입한 마자인(중국산) 3 ㎏을 실온에서 5일간 건조하고 분쇄하였다. 상기 분쇄된 마자인을 95% 에탄올(ethanol) 30 ℓ에 침지시키고 50℃에서 24시간 동안 추출하였다. 이것을 여과지를 통하여 여과한 후 45℃ 감압 조건에서 건조 및 농축하여 총 추출물 418 g을 수득하고, -20℃에서 보관하였다.
<실시예 2> 마자인 추출물이 백혈병 세포의 성장에 미치는 영향
상기 실시예 1에서 추출한 마자인 추출물이 백혈병 세포의 성장에 미치는 영향을 알아보기 위하여, 사람 백혈병 세포인 HL-60에 대하여 Alamar Blue 분석을 시행하였다. Alamar Blue 분석은 MTT 분석의 변형된 형태인데, 특정 효소에 의해서 분해되는 화합물을 살아있는 세포에 처리한 후 화합물이 분해되면서 나오는 생성물의 형광 세기를 측정함으로써 약물을 처리한 후 살아있는 세포의 상대적인 숫자를 알아내는 실험방법이다. 하기에서 보다 상세히 설명한다.
<2-1> 인간 백혈병 세포주의 준비 및 처리
본 발명에 사용된 백혈병 세포주인 HL-60 세포는 한국세포주은행(Korean Cell Line Bank, KCLB)으로부터 분양받아 실험에 이용하였다. 상기 HL-60 백혈병 세포를 20% FBS(fetal bovine serum, 소태아혈청)(Welgene)와 25 mM HEPES (4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid )를 포함하는 RPMI(Roswell Park Memorial Institute medium) 1640 배지에서 배양하였다. 상기 세포를 37℃, 5% CO2의 수분이 있는 상태로 유지하고, 2-3일 정도 계대배양하였다.
<2-2> HL-60 세포의 세포 성장 억제 측정
상기 실시예 1에서 추출한 마자인 추출물이 백혈병 세포인 HL-60에 대한 세포 성장 억제효과를 확인하였다. 구체적으로, 96 웰 플레이트에 각 웰 당 5.0×104 개의 HL-60 세포를 주입(seeding)하고 DMSO(Dimethyl sulfoxide)에 녹인 상기 마자인 에탄올 추출물을 각각 0 내지 100 ㎍/㎖ 농도(구체적으로, 각각 0, 3.125, 6.25, 12.5, 25, 50 및 100 ㎍/㎖ 농도)로 48시간 동안 처리하였을 때, 세포 성장을 저해하는 정도를 확인하였다(표 1). 각 농도의 추출물을 처리한 후, 96-웰 플레이트에서 각 웰에 채워진 0.2 ㎖의 세포 배양액에 20 ㎕의 Alamar Blue 시약을 첨가한 후 플레이트를 인큐베이터에서 2시간 동안 배양하였다. 각 웰의 세포를 고르게 반응시키기 위하여 플레이트를 천천히 흔들고, 544 ㎚의 파장에서 조사광을 조사하면서 590 ㎚에서 형광의 세기를 형광광도계(Fluorescence Microplate Reader; Molecular Devices Corp.)로 흡광도를 측정하였고, 백혈병 세포의 생존율을 도 1에 나타내었다.
마자인 농도 백혈병 세포 생존율 (평균) 표준편차
0 ㎍/㎖ 1.000 0.000
3.125 ㎍/㎖ 0.924 0.053
6.25 ㎍/㎖ 0.960 0.037
12.5 ㎍/㎖ 0.952 0.097
25 ㎍/㎖ 1.026 0.016
50 ㎍/㎖ 0.927 0.068
100 ㎍/㎖ 0.244 0.020
그 결과, 표 1 및 도 1에서 나타난 바와 같이, 마자인의 처리 농도가 높을수록 백혈병 세포의 성장이 감소하였으며, 이로부터 마자인이 백혈병 치료 효과를 가짐을 알 수 있었다. 즉, 3.125 ㎍/㎖에서 7.6%, 100 ㎍/㎖에서 75.6%로 백혈병 세포를 사멸시켰다. 아울러, EC50(half maximal effective concentration)은 54.8 ㎍/㎖로 측정되었다. 상기 표 1에서 마자인을 처리하지 않은 대조군의 백혈병 세포의 생존율 수를 1을 기준으로 하여 각각의 마자인 처리 농도에 따른 48시간 후의 백혈병 세포의 상대적 세포수를 기재하였다. 이와 같이, 본 발명의 마자인 추출물은 우수한 HL-60 세포 사멸 활성을 가지며, 나아가 백혈병 치료 및 예방 활성을 가진다는 것을 입증한다.
<실시예 3> 마자인 추출물에 의한 급성독성 시험
본 발명에 이용된 마자인은 널리 약재로 이용되고 있어서 안정성에 문제가 없을 것으로 판단하였으나, 경구 투여시 및 복강내 투여시의 독성 실험을 수행하여 이를 확인하고자 하였다.
6주령의 특정병원부재(SPF) SD계 랫트를 사용하여 급성독성실험을 실시하였다. 군당 2 마리씩의 동물에 본 발명의 실시예 1의 마자인 추출물을 각각 0.5% 메틸셀룰로즈 용액에 현탁하여 5 g/㎏의 용량으로 단회 경구투여하였다. 시험물질 투여후 동물의 폐사여부, 임상증상, 체중변화를 관찰하고 혈액학적 검사와 혈액생화학적검사를 실시하였으며, 부검하여 육안으로 복강장기와 흉강장기의 이상여부를 관찰하였다.
시험결과, 시험물질을 투여한 모든 동물에서 특기할 만한 임상증상이나 폐사된 동물은 없었으며, 체중변화, 혈액검사, 혈액생화학 검사, 부검소견 등에서도 독성변화는 관찰되지 않았다. 이상의 결과 마자인 추출물은 모두 랫트에서 5 g/㎏까지 독성변화를 나타내지 않으며 경구 투여 최소치사량 (LD50)은 5 g/㎏이상인 안전한 물질로 판단되었다.
<제조예 1> 마자인 추출물을 유효성분으로 함유하는 백혈병 치료제의 제조
본 발명자들은 상기 실시예를 통해 마자인 추출물의 백혈병 치료 효능이 뛰어남을 확인하여 마자인 추출물을 유효성분으로 함유하는 백혈병 치료제를 하기와 같이 제조하였다. 또한, 하기 치료제의 제조예는 치료제 뿐만 아니라 건강식품의 제조에도 응용하여 사용될 수 있다.
<1-1> 마자인 추출물을 함유하는 연질캅셀(soft gelatin capsules)
마자인 추출물 20%
비타민 C 4.5%
비타민 D3 0.001%
황산망간 0.1%
밀납 10%
팜유 25%
홍화씨유 30.399%
<1-2> 마자인 추출물을 함유하는 정맥주사용 제제의 제조
마자인 추출물 0.2%
만니톨 0.3%
생리식염수 9.5%
<1-3> 마자인 추출물을 함유하는 정제(tablet)
마자인 추출물 35%
비타민 C 10%
비타민 D3 0.001%
황산망간 0.1%
결정셀룰로오즈 25.0%
유당 17.999%
스테아린산마그네슘 2%
<제조예 2> 마자인 추출물을 유효성분으로 함유하는 기능성 식품의 제조
본 발명자들은 상기 실시예를 통해 마자인 추출물이 백혈병 치료 활성이 뛰어남을 확인하여 이를 유효성분으로 함유하는 기능성 식품을 하기와 같이 제조하였다.
<2-1> 음료의 제조
꿀 522 ㎎
치옥토산아미드 5 ㎎
니코틴산아미드 10 ㎎
염산리보플라빈나트륨 3 ㎎
염산피리독신 2 ㎎
이노시톨 30 ㎎
오르트산 50 ㎎
마자인 추출물 0.48 ~ 1.28 ㎎
물 200 ㎖
상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 음료를 제조하였다.
<2-2> 츄잉껌의 제조
껌베이스 20 %
설탕 76.36 ~ 76.76 %
마자인 추출물 0.24 ~ 0.64 %
후르츠향 1 %
물 2 %
상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 츄잉껌을 제조하였다.
<2-3> 캔디의 제조
설탕 50 ~ 60 %
물엿 39.26 ~ 49.66 %
마자인 추출물 0.24 ~ 0.64 %
오렌지향 0.1 %
상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 캔디를 제조하였다.
<2-4> 비스켓의 제조
박력1급 88 ㎏
중력1급 76.4 ㎏
정백당 16.5 ㎏
식염 2.5 ㎏
포도당 2.7 ㎏
팜쇼트닝 40.5 ㎏
암모 5.3 ㎏
중조 0.6 ㎏
중아황산나트륨 0.55 ㎏
쌀가루 5.0 ㎏
비타민 B1 0.003 ㎏
비타민 B2 0.003 ㎏
밀크향 0.16 ㎏
물 71.1 ㎏
전지분유 4 ㎏
대용분유 1 ㎏
제일인산칼슘 0.1 ㎏
살포염 1 ㎏
분무유 25 ㎏
마자인 추출물 0.2 ~ 0.5 ㎏
상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 비스켓을 제조하였다.
<2-5> 아이스크림의 제조
유지방 10.0 %
무지유고형분 10.8 %
설탕 12.0 %
물엿 3.0 %
유화안정제(스팬, span) 0.5 %
향료(스트로베리) 0.15 %
물 63.31 ~ 62.91 %
마자인 추출물 0.24 ~ 0.64 %
상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 아이스크림을 제조하였다.
<2-6> 쵸코렛의 제조
설탕 34.36 ~ 34.76 %
코코아 버터 34 %
코코아 매스 15 %
코코아 파우다 15 %
레시틴 0.5 %
바닐라향 0.5 %
마자인 추출물 0.24 ~ 0.64 %
상기 조성 및 함량으로 하여 통상적인 방법을 사용하여 초코렛을 제조하였다.
한편, 본 발명의 구체적 범위는 상기 기술한 실시예 보다는 특허청구범위에 의하여 한정지어지며, 특허청구 범위의 의미와 범위 및 그 등가적 개념으로 도출되는 모든 변경 및 변형된 형태를 본 발명의 범위로 포함하여 해석하여야 한다.

Claims (7)

  1. 마자인(Cannabis Semen) 에탄올 추출물을 유효성분으로 함유하는 백혈병 예방 및 치료용 조성물.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 에탄올 추출물은 50℃에서 24시간 동안 추출되는 것을 특징으로 하는 백혈병 예방 및 치료용 조성물.
  3. 제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 에탄올 추출물은 45℃ 감압 조건에서 건조 및 농축되는 것을 특징으로 하는 백혈병 예방 및 치료용 조성물.
  4. 제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 에탄올은 95%인 것을 특징으로 하는 백혈병 예방 및 치료용 조성물.
  5. 제 1항에 있어서, 상기 조성물은 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함하는 것을 특징으로 하는 백혈병 예방 및 치료용 조성물.
  6. 제 1항에 있어서, 상기 조성물은 급성 골수성 백혈병(Acute myeloid leukemia), 급성 림프구성 백혈병(Acute lymphocytic leukemia), 만성 골수성 백혈병(Chronic myeloid leukemia) 및 만성 림프구성 백혈병(Chronic lymphocytic leukemia)으로 이루어진 군중에서 선택된 백혈병에 작용하는 것을 특징으로 하는 백혈병 예방 및 치료용 조성물.
  7. 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 마자인(Cannabis Semen) 에탄올 추출물을 유효성분으로 함유하는 백혈병 예방용 기능성 식품.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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