KR20120054018A - 일과성 생착 ｃｔｌ을 포함하는 의약품 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은, 종래의 면역 요법용 이식 세포보다도 광범위한 환자를 대상으로 할 수 있으며, 일과적으로 생착되어 중증의 GVH병도 일으키지 않는 면역 요법용 이식 세포를 개발하는 것이다. 본 발명은 인간 조혈 줄기 세포 유래의 세포를 포함하는 의약품 조성물을 제공한다. 본 발명의 의약품 조성물에 있어서, 상기 세포의 인간 HLA 클래스 I 분자 중 어느 1개의 유전자좌는, 상기 세포의 적합형이 환자의 적합형과 일치하는 항원을 적어도 1개 포함한다. 또한, 상기 세포의 인간 HLA 클래스 I 및 II 분자의 유전자좌는, 상기 세포의 적합형이 환자의 적합형과 일치하지 않는 항원을 적어도 1개 포함하고, 상기 조혈 줄기 세포 유래의 세포는 상기 환자의 체내에서 영속적 생착도, 중증도 III 또는 IV의 급성 GVH병도 일으키지 않는다.
Description
본 발명은, 인간 조혈 줄기 세포 유래의 세포를 포함하는 의약품 조성물에 관한 것이며, 보다 구체적으로는 제대혈 유래의 세포 상해성 T 세포를 포함하는 의약품 조성물이며, 환자의 HLA 클래스 I 분자가 제시하는 질환 관련 항원을 인식할 수 있으면서도, 상기 조혈 줄기 세포 유래의 세포는 상기 환자의 체내에서 영속적 생착도, 중증도 III 또는 IV의 급성 GVH병도 일으키지 않는 의약품 조성물에 관한 것이다.
제대혈 조혈 줄기 세포 이식(Umbilical Cord Blood Hematopoietic Cell Transplantation, 이하 「UCBHCT」라고 함)은 급성 골수성 백혈병 이외의 백혈병이나, 재생 불량성 빈혈 이외의 조혈 장해나, 선천성 면역 부전증, 선천성 대사 이상, EBV 감염증 등의 소아 및 성인에 유효한 치료법이다(비특허문헌 1). 조직적 합성의 검사 데이터를 얻은 후 동결 보존하는 제대혈 뱅크 제도가 각국에서 보급되고 있기 때문에, UCBHCT는 오늘날 가장 보급된 줄기 세포 이식 요법이 되었다. UCBHCT에서는, 일반적으로 HLA-A, HLA-B 및 DRB1 유전자좌에 대하여, 이식을 받는 소아 환자의 적합형이 비혈연의 제대혈의 적합형과 일치하는 항원을 6개의 항원 중 4 내지 6개 포함하는 경우, 즉 환자의 적합형이 제대혈의 적합형과 일치하지 않는 항원을 0 내지 2개 포함하는 경우에 대개 이식이 성공한다는 것이 알려져 있다(비특허문헌 2 및 3). 이식된 세포는 영속적으로 숙주인 환자의 체내에 생착된다.
한편, 양자 면역 요법(Adoptive Cell Transfer, 이하, 「ACT」라고 함)은, 가장 치료 효과가 높은 암의 치료법으로서 최근 주목을 모으고 있다(비특허문헌 4). ACT는, 종양 조직에 침윤된 환자 자신(자가)의 림프구나, 질환 관련 항원에 시험관 내에서 감작된 환자 자신의 림프구를 인터루킨 2 존재하에 대량 배양하여, 림프구 제거를 실시한 환자에게 이식하는 치료법이다. 예를 들면 전이성 멜라노마에서는, 종양 침윤 림프구를 사용한 자가 림프구 수혈(transfusion)이 실시된 약 50 ％의 증례에서 객관적인 종양의 퇴축이 보고되어 있다.
Broxmeyer, H.E. 및 Smith, F.O., "Thomas' Hematopoietic Cell Transplantation," 4th ed., Appelbaum, F.R. 외 편, Blackwell Publishing, ISBN: 9781405153485(2009), 제39장, pp559-576
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UCBHCT는 불일치 항원이 1개 또는 2개 허용되지만, 환자의 HLA 유전자좌의 적합형에 따라서는 이식에 적합한 도너 제대혈이 발견되지 않는 경우가 있다. 또한, 도너 제대혈이 중증 GVH병과 생존에 관여하는 부적합한 HLA형의 조합에 해당하기 때문에 이식에 적합하지 않은 경우도 있다. 또한, UCBHCT로 환자에게 영속적으로 생착하는 것에 성공하여도, 이번에는 이식 편대 숙주병(이하, 「GVH병」이라고 함)이 발병하는 경우가 있다. 또한, 이식된 세포 유래의 백혈병(소위 도너 세포 백혈병)이 발병할 위험이 골수 이식이나 말초혈 줄기 세포 이식의 경우에 비해 UCBHCT의 경우는 높다.
ACT는 환자마다 이식용의 림프구를 제조할 필요가 있으며, 이 작업은 상당히 노동 집약적이고, 전문적인 기능을 필요로 한다. 또한, ACT에서도 이식된 세포 유래의 백혈병이 발병할 위험이 있다.
또한, UCBHCT에서도 ACT에서도 특정한 환자마다 이식 세포를 제조하기 때문에, 프리온과 같이 검출이 곤란한 병원체를 검출하지 못한 채로 이식함에 따른 감염증 전파의 우려가 있다.
따라서, 종래의 면역 요법용 이식 세포보다도 광범위한 환자를 대상으로 할 수 있으며, 일과적으로 생착되어 중증의 GVH병도 일으키지 않는 면역 요법용 이식 세포를 개발할 필요가 있다.
본 발명은 인간 조혈 줄기 세포 유래의 세포를 포함하는 의약품 조성물을 제공한다. 본 발명의 의약품 조성물에 있어서, 상기 세포의 인간 HLA 클래스 I 분자 중 어느 1개의 유전자좌는, 상기 세포의 적합형이 환자의 적합형과 일치하는 항원을 적어도 1개 포함한다. 또한, 상기 세포의 인간 HLA 클래스 I 및 II 분자의 유전자좌는, 상기 세포의 적합형이 환자의 적합형과 일치하지 않는 항원을 적어도 1개 포함하고, 상기 조혈 줄기 세포 유래의 세포는 상기 환자의 체내에서 영속적 생착도, 중증도 III 또는 IV의 급성 GVH병도 일으키지 않는다.
본 발명의 의약품 조성물은 상기 환자의 림프구가 제거된 후에 투여되며, 상기 환자의 체내에서 일과적으로 생착되지만, 상기 환자의 림프구가 재증식됨과 함께 소실되는 경우가 있다.
본 발명의 의약품 조성물에 있어서, 상기 세포의 인간 HLA 클래스 I 분자의 유전자좌는 HLA-A 및 HLA-B이고, 상기 세포의 인간 HLA 클래스 II 분자의 유전자좌는 DRB1이고, 상기 세포의 HLA-A, HLA-B, HLA-C 및 DRB1 항원 유전자좌는 상기 세포의 적합형이 환자의 적합형과 일치하지 않는 항원을 적어도 1개 포함하고, 상기 조혈 줄기 세포 유래의 세포는 상기 환자의 체내에서 영속적 생착도, 중증도 III 또는 IV의 급성 GVH병도 일으키지 않는 경우가 있다.
본 발명의 의약품 조성물에 있어서, 상기 세포의 HLA-A, HLA-B 및 DRB1 항원유전자좌는, 상기 세포의 적합형이 환자의 적합형과 일치하지 않는 항원을 5개 내지 6개 포함하고, 상기 조혈 줄기 세포 유래의 세포는 상기 환자의 체내에서 영속적 생착도, 중증도 III 또는 IV의 급성 GVH병도 일으키지 않는 경우가 있다.
본 발명의 의약품 조성물에 있어서, 상기 인간 조혈 줄기 세포는 제대혈 줄기 세포인 경우가 있다.
본 발명의 의약품 조성물에 있어서, 상기 인간 조혈 줄기 세포 유래의 세포는 인간 HLA 클래스 I 분자 구속성 에피토프에 특이적인 세포 상해성 T 세포인 경우가 있다.
본 발명의 의약품 조성물은 암 치료용인 경우가 있다.
본 발명의 의약품 조성물은 감염증 치료용인 경우가 있다.
본 발명의 암 치료용 의약품 조성물에 있어서, 상기 인간 HLA 클래스 I 분자 구속성 에피토프에 특이적인 세포 상해성 T 세포는, 상기 인간 HLA 클래스 I 분자 구속성 에피토프에 의한 자극을 받지 않고 증폭되는 경우가 있다.
본 발명의 암 치료용 의약품 조성물에 있어서, 상기 세포의 HLA-A 유전자좌는 상기 세포의 적합형이 환자의 적합형과 일치하는 항원을 적어도 1개 포함하고, 상기 세포 상해성 T 세포는 빌름스 종양 원인 유전자 산물(WT1)에 특이적인 경우가 있다.
본 발명은 인간 제대혈 유래의 세포 상해성 T 세포를 포함하는 의약품 조성물을 제공한다. 본 발명의 세포 상해성 T 세포를 포함하는 의약품 조성물에 있어서, 상기 세포 상해성 T 세포는 HLA-A, HLA-B 및 HLA-C 중 어느 1 종류의 유전자좌의 HLA 클래스 I 분자 구속성 에피토프에 특이적이고, 상기 인간 HLA 클래스 I 분자 구속성 에피토프에 특이적인 세포 상해성 T 세포는 상기 인간 HLA 클래스 I 분자 구속성 에피토프에 의한 자극을 받지 않고 증폭되며, 상기 세포 중 어느 1 종류의 유전자좌의 HLA 클래스 I 분자는, 상기 세포의 적합형이 환자의 적합형과 일치하는 항원을 적어도 1개 포함하고, 상기 세포의 HLA-A, HLA-B 및 DRB1의 유전자좌는, 상기 세포의 적합형이 환자의 적합형과 일치하지 않는 항원을 5개 내지 6개 포함하고, 상기 조혈 줄기 세포 유래의 세포는 상기 환자의 체내에서 영속적 생착도, 중증도 III 또는 IV의 급성 GVH병도 일으키지 않는다.
본 발명은 암 치료용 의약품 조성물이며, 상기 인간 HLA 클래스 I 분자 구속성 에피토프에 특이적인 세포 상해성 T 세포는 상기 인간 HLA 클래스 I 분자 구속성 에피토프에 의한 자극을 받지 않고 증폭되는 암 치료용 의약품 조성물의 제조 방법을 제공한다. 상기 제조 방법은, 인간 제대혈을 CD3/CD28 면역 비드로 자극하는 스텝을 포함한다.
본 발명은 감염증 또는 암의 치료 방법을 제공한다. 본 발명의 감염증 또는 암의 치료 방법은, 인간 조혈 줄기 세포 유래의 세포를 준비하는 스텝과, 상기 인간 조혈 줄기 세포 유래의 세포를 환자에게 이식하는 스텝을 포함하는 것, 상기 세포의 인간 HLA 클래스 I 분자 중 어느 1개의 유전자좌는, 상기 세포의 적합형이 환자의 적합형과 일치하는 항원을 적어도 1개 포함하는 것, 및 상기 세포의 인간 HLA 클래스 I 및 II 분자의 유전자좌의 항원은, 상기 세포의 적합형이 환자의 적합형과 일치하지 않는 항원을 적어도 1개 포함하고, 상기 조혈 줄기 세포 유래의 세포는 상기 환자의 체내에서 영속적 생착도, 중증도 III 또는 IV의 급성 GVH병도 일으키지 않는 것을 특징으로 한다.
본 발명의 감염증 또는 암의 치료 방법에 있어서, 상기 세포를 환자에게 이식하는 스텝 전에 상기 환자의 림프구를 제거하는 스텝을 포함하는 것, 및 상기 인간 조혈 줄기 세포 유래의 세포는 상기 환자의 체내에서 일과적으로 생착되지만, 상기 환자의 림프구가 재증식됨과 함께 소실되는 것을 특징으로 하는 경우가 있다.
본 발명의 감염증 또는 암의 치료 방법에 있어서, 상기 조혈 줄기 세포 유래의 세포의 인간 HLA 클래스 I 분자 중 어느 1개의 유전자좌는 HLA-A, HLA-B 및 HLA-C로 이루어지는 그룹으로부터 선택되며, 상기 인간 HLA 클래스 II 분자의 유전자좌는 DRB1인 것, 및 상기 인간 HLA 클래스 I 및 II 분자의 유전자좌의 항원은, 상기 세포의 적합형이 환자의 적합형과 일치하지 않는 항원을 적어도 1개 포함하고, 상기 조혈 줄기 세포 유래의 세포는 상기 환자의 체내에서 영속적 생착도, 중증도 III 또는 IV의 급성 GVH병도 일으키지 않는 것을 특징으로 하는 경우가 있다.
본 발명의 감염증 또는 암의 치료 방법에 있어서, 상기 세포의 HLA-A, HLA-B 및 DRB1의 유전자좌의 항원은, 상기 세포의 적합형이 환자의 적합형과 일치하지 않는 항원을 5개 내지 6개 포함하고, 상기 조혈 줄기 세포 유래의 세포는 상기 환자의 체내에서 영속적 생착도, 중증도 III 또는 IV의 급성 GVH병도 일으키지 않는 것을 특징으로 하는 경우가 있다.
본 발명의 감염증 또는 암의 치료 방법에 있어서, 상기 인간 조혈 줄기 세포는 제대혈 줄기 세포인 경우가 있다.
본 발명의 감염증 또는 암의 치료 방법에 있어서, 상기 인간 조혈 줄기 세포 유래의 세포는, 인간 HLA 클래스 I 분자 구속성 에피토프에 특이적인 세포 상해성 T 세포인 경우가 있다.
본 발명의 감염증 또는 암의 치료 방법에 있어서, 상기 인간 조혈 줄기 세포 유래의 세포를 준비하는 스텝은, 상기 인간 HLA 클래스 I 분자 구속성 에피토프에 의한 자극을 받지 않고 상기 인간 HLA 클래스 I 분자 구속성 에피토프에 특이적인 세포 상해성 T 세포를 증폭하는 스텝을 포함하는 경우가 있다.
본 발명의 감염증 또는 암의 치료 방법에 있어서, 상기 인간 HLA 클래스 I 분자 구속성 에피토프에 의한 자극을 받지 않고 상기 인간 HLA 클래스 I 분자 구속성 에피토프에 특이적인 세포 상해성 T 세포를 증폭하는 스텝은, 인간 제대혈을 CD3/CD28 면역 비드로 자극하는 스텝을 포함하는 경우가 있다.
본 발명의 감염증 또는 암의 치료 방법에 있어서, 상기 조혈 줄기 세포의 HLA-A 유전자좌 중 적어도 1개의 항원의 적합형은 환자의 적합형과 일치하고, 상기 세포 상해성 T 세포는 빌름스 종양 원인 유전자 산물(WT1)에 특이적인 경우가 있다.
본 발명의 감염증 또는 암의 치료 방법에 있어서, 상기 인간 제대혈 유래의 세포 상해성 T 세포는 HLA-A, HLA-B 및 HLA-C 중 어느 1 종류의 유전자좌의 HLA 클래스 I 분자 구속성 에피토프에 특이적이고, 상기 인간 HLA 클래스 I 분자 구속성 에피토프에 특이적인 세포 상해성 T 세포는, 상기 인간 HLA 클래스 I 분자 구속성 에피토프에 의한 자극을 받지 않고 증폭되며, 상기 세포 중 어느 1 종류의 유전자좌의 HLA 클래스 I 분자는, 상기 세포의 적합형이 환자의 적합형과 일치하는 항원을 적어도 1개 포함하고, 상기 세포의 HLA-A, HLA-B 및 DRB1의 유전자좌는, 상기 세포의 적합형이 환자의 적합형과 일치하지 않는 항원을 5개 내지 6개 포함하고, 상기 조혈 줄기 세포 유래의 세포는 상기 환자의 체내에서 영속적 생착도, 중증도 III 또는 IV의 급성 GVH병도 일으키지 않는 경우가 있다.
본 발명의 기술적 범위는, 첨부된 특허청구범위의 기재에 기초하여 정해진다. 본 발명의 취지를 일탈하지 않는 것을 조건으로서, 본 발명의 변경, 예를 들면 본 발명의 구성 요건의 추가, 삭제 및 치환을 행할 수 있다.
본 발명의 인간 조혈 줄기 세포는 제대혈과, 골수와, G-CSF를 투여한 후의 말초혈을 포함하지만 이들로 한정되지 않는 조직에서 유래하는 경우가 있다. 바람직한 인간 조혈 줄기 세포의 출처는 제대혈이다. 그러나, 배성 줄기 세포, 성체 줄기 세포 및 인공 다능성 줄기(iPS) 세포로부터 생성되는 조혈 줄기 세포일 수도 있다.
본 발명의 인간 조혈 줄기 세포 유래의 세포는, T 세포, NK 세포, 수상 세포(樹狀細胞), B 세포, 마크로파지와, 호중구, 호산구 이외의 과립구를 포함한다. 본 발명의 인간 조혈 줄기 세포 유래의 세포는 제대혈과, 골수와, G-CSF를 투여한 후의 말초혈에 포함되는 조혈 줄기 세포를 분화 유도하여 생성되는 경우가 있지만, 배성 줄기 세포, 성체 줄기 세포 및 인공 다능성 줄기(iPS) 세포로부터 직접 분화 유도하여 생성되는 경우도 있다.
본 발명의 인간 조혈 줄기 세포 유래의 세포는, HLA 클래스 I 및 II 분자의 유전자좌의 항원의 적합형을 결정한 후, 제대혈 이외의 조혈 줄기 세포를 포함하는 조직을 동결 보존해두고, 환자의 HLA 클래스 I 및 II 분자의 유전자좌의 항원의 적합형이 결정된 후, 본 발명의 요건을 만족하는 적합형을 갖는 상기 조직을 해동하고, 증식 자극을 부여하여 배양함으로써 생성되는 경우가 있다. 대체책으로서, 본 발명의 인간 조혈 줄기 세포 유래의 세포는 미리 증식 자극을 부여하여 배양함으로써 생성되고, 증폭된 후에 동결 보존되는 경우가 있다. 후자의 경우에는 미리 대량 증폭되어 있기 때문에, 미리 약효를 확인할 수 있었던 세포를 환자에게 투여할 수 있다. 또한, 균일한 품질의 세포를 1명 이상의 환자에게 투여할 수 있다.
HLA 클래스 I 분자에는, HLA-A, HLA-B 및 HLA-C의 3 종류가 있다. HLA 클래스 I 분자 각각의 유전자좌의 유전자 및 그 산물은 매우 많은 다형(polymorphism)이 존재한다. HLA 클래스 I 분자는 펩티드 항원을 세포 상해성 T 세포에 제시하는 기능을 갖는 한편, 동종간에서의 조직 이식시의의 자기-비자기의 식별의 기초가 되는 면역원으로서, 숙주 세포가 이식된 세포를 공격하는 HVG 반응과, 이식된 세포가 숙주 세포를 공격하는 GVH 반응을 야기하는 역할도 행한다. 이러한 조직 적합성에 관한 면역원로서의 관점에서 보면, 인간 각각의 유전자좌에 대하여 모친과 부친에서 유래하는 2개의 염색체 각각에 인코드되는 2개의 유전자 산물이 각각의 항원으로서 구별된다. 즉, HLA 클래스 I 분자 각각의 유전자좌는 2개의 항원을 갖고, HLA 클래스 I 분자의 유전자좌는 전부 6개의 항원을 갖는다. 따라서, HLA의 적합도를 나타낼 때에는, 1개의 유전자좌의 1개의 항원의 적합형만이 상이한 경우를 「1항원 불일치」, 1개의 유전자좌의 1개 또는 2개의 항원의 적합형이 상이한 경우를「1좌 불일치」라고 표현한다. 즉 「1좌 불일치」는, 1항원 불일치 및 2항원 불일치인 경우를 포함한다. 마찬가지로 「2좌 불일치」는, 2개 내지 4개의 항원이 불일치인 경우를 포함한다. 또한, 3개의 유전자좌에 대하여 5개 또는 6개의 항원이 불일치일 때, 3좌 모두 불일치이다.
본 명세서에서 적합형이란, 혈청학적 검사 또는 DNA 검사에 의해 결정되는 경우가 있다. DNA 검사에는, 형광 비드법(PCR-rsso법)과 같이 중간 정도의 분해능인 것과, SBT법과 같이 고분해능인 것이 있다. 적합형으로는 소위 4자릿수 알릴(allele)명 이외에, 번역 영역에서의 염기 치환을 고려한 6자릿수 알릴이나, 비번역 영역에서의 염기 치환을 고려한 8자릿수 알릴이 있다. 6자릿수 또는 8자릿수 알릴은 아미노산의 변화를 동반하지 않는 다형이기 때문에, 면역학적으로는 4자릿수 알릴과 동일하게 취급할 수 있다.
HLA 클래스 II 분자에는, HLA-DR, HLA-DP 및 HLA-DQ이라는 3 종류의 헤테로 이량체가 있다. 각각의 헤테로 이량체를 구성하는 알파쇄 및 베타쇄는 염색체 위에서 인접하는 유전자좌에 인코드되지만, HLA-DR의 베타쇄만 2개 존재한다. 따라서, HLA 클래스 II 분자의 유전자좌는, DRA, DRB1, DRB2, DPA, DPB, DQA 및 DQB의 7좌가 있다. HLA 클래스 II 분자는 펩티드 항원을 핼퍼 T 세포에 제시하는 기능을 갖는 한편, HLA 클래스 I 분자와 마찬가지로 동종간에서의 조직 이식시의 자기-비 자기의 식별의 기초가 되는 면역원으로서, 숙주 세포가 이식된 세포를 공격하는 HVG 반응과, 이식된 세포가 숙주 세포를 공격하는 GVH 반응을 야기하는 역할도 행한다. HLA 클래스 II 분자의 유전자좌의 유전자 및 그의 산물에도 HLA 클래스 I 분자와 마찬가지로 매우 많은 다형(polymorphism)이 존재한다.
본 명세서에서 일과성 생착이란, 이식으로부터 1개월 경과 후에도 이식된 세포가 숙주체 내, 예를 들면 말초혈 중에서 검출되지만, 3개월 후, 6개월 후, 12개월, 또는 18개월 후에는 검출할 수 없게 되는 것을 말한다. 영속적 생착이란, 숙주가 살아 있는 동안 계속 숙주체 내에서 이식된 세포를 검출할 수 있는 것을 말한다. 여기서, 이식된 세포의 검출에는, PCR법 등의 유전자 검사, FISH법이나 염색체 분석 등의 염색체 검사, 항HLA 항체를 사용한 유동 세포 분석법 등의 세포 면역 조직 화학 검사법을 이용할 수 있다.
본 명세서에서 중증도 III 또는 IV의 급성 GVH병이란, 1994년 개최된 급성 GVH병의 중증도에 관한 회의에서 제안되었으며, 문헌 [Prezepiorka, D. 외(Bone Marrow Transplant., 15: 825-855(2002))]에 기재된 중증도 분류의 4단계의 등급 중 가장 위독한 단계와 이것에 이어지는 단계를 말한다. 만일 GVH병을 발병하는 경우에는, 본 발명의 의약품 조성물을 이식하기 전에 환자로부터 채혈하여 백혈구 어페러시스(apheresis)에 의해 정제 분취하여 동결 보존된 림프구를 동결 보존해두고, 이것을 인터루킨 2 및/또는 CD3/CD28로 자극 증폭하여 환자에게 되돌림으로써(자기 림프구 수혈) 치료할 수 있다.
HLA 클래스 I 분자 및 클래스 II 분자의 유전자좌의 항원의 불일치가 조혈 줄기 세포 이식에 미치는 영향은 유전자좌에 따라 상이하다는 것이나, 이식되는 줄기 세포의 세포수, 즉 투여량에 따라서도 상이하다는 것이 알려져 있다. 일반적으로 HLA-A, HLA-B 및 DRB1 유전자좌에 대하여, 이식을 받는 소아 환자의 적합형이 비혈연의 제대혈의 적합형과 일치하는 항원을 6개의 항원 중 4 내지 6개 포함하는 경우, 즉 환자의 적합형이 제대혈의 적합형과 일치하지 않는 항원을 0 내지 2개 포함하는 경우에는, 대개 이식이 성공한다는 것이 알려져 있다(문헌 [일본 제대혈 뱅크 네트워크ㆍ이식 데이터 관리소 위원회, 「일본에서의 비혈연자간 제대혈 이식의 성적(2007년도 해석 결과)」, https://www.j-cord.gr.jp/ja/wnew/isyokuseiseki2007.pdf, Gluckman, E. 및 Rocha, V., Curr. Opin. Immunol., 18: 565-570(2006), Brunstein, C.G. 외, Br.J.Haematol., 137: 20-35(2007)]). 상기 일본 제대혈 뱅크 네트워크ㆍ이식 데이터 관리소 위원회의 보고서에는, 청년 성인 ALL 환자에게 1개 내지 4개의 항원이 불일치인 제대혈 이식을 행한 바, 수술 후 500일의 무이벤트 생존율(EFS)이 20 내지 56 ％였지만, 5개의 항원이 불일치인 제대혈 이식을 행한 2명의 환자의 수술 후 500일의 무이벤트 생존율은 0이었다는 데이터가 기재되어 있다(도 5-35). 이 결과로부터, 불일치 항원이 5개 있는 경우에는 영속적 생착도, 중증도 III 또는 IV의 급성 GVH병도 일으키지 않는다는 것을 알 수 있다. 한편, 위독한 중성자 피폭 환자에게 제대혈을 이식했을 때, DRB1 유전자좌의 1개의 항원만이 불일치인 제대혈을 이식하여도 이식 후 51일째에는 말초혈로부터도 골수로부터도 이식된 제대혈 유래의 단핵구가 소실되었다는 보고(문헌 [Nagayama, H. 외, Bone Marrow Transplant., 29: 197-204(2002)])가 있다. 이 결과로부터, 불일치 항원이 적어도 1개 있는 경우에는 영속적 생착도, 중증도 III 또는 IV의 급성 GVH병도 일으키지 않는다는 것을 알 수 있다.
따라서, 본 발명의 세포의 HLA-A, HLA-B 및 DRB1 유전자좌에 대하여, 상기 세포의 적합형이 환자의 적합형과 일치하지 않는 항원을 적어도 1개 포함하는 경우에는, 제대혈 이식 분야의 전문가는 제대혈 유래의 세포가 상기 환자의 체내에서 영속적 생착도, 중증도 III 또는 IV의 급성 GVH병도 일으키지 않는 조건을 결정할 수 있다. 본 발명의 세포의 HLA-A, HLA-B 및 DRB1 유전자좌에 대하여, 상기 세포의 적합형이 환자의 적합형과 일치하지 않는 항원을 4, 5 또는 6개 포함하는 것이 보다 바람직하다.
본 발명의 의약품 조성물은, 1명의 도너 유래의 세포여도 종래보다 각별히 광범위한 환자에게 이식할 수 있다. 또한, 약효가 있는 세포, 예를 들면 다양한 질환 관련 항원에 특이적인 세포 상해성 T 세포를 단일의 제대혈로부터 제조할 수 있다. 그 때문에, 종래의 제대혈 뱅크나 골수 뱅크에 비해 소규모의 라이브러리를 준비함으로써, 많은 다른 환자의 다양한 질환에 적용할 수 있다.
본 발명의 조혈 줄기 세포 유래의 세포는, 수상 세포 및 세포 상해성 T 세포로 분화할 수 있는 어느 하나의 세포 타입을 포함한다. 즉, 림프계 공통 전구 세포와, 수상 세포와, CD4 및 CD8 양쪽 모두 발현하지 않는 소위 이중 음성 T 세포와, CD4 및 CD8 양쪽 모두 발현하는 소위 이중 양성 T 세포와, CD8 양성 T 세포 이외에, 가츠라 및 가와모토에 의해 제창된 골수-림프계 공통 전구 세포, 골수-T 세포 공통 전구 세포 및 마크로파지-T 세포 공통 전구 세포를 포함하지만, 이들로 한정되지 않는다.
본 발명의 조혈 줄기 세포 유래의 세포를 준비하기 위해서는, 본 기술 분야의 전문가에게 알려진 다양한 절차를 이용할 수 있다. 예를 들면 제대혈로부터 백혈구를 분리할 때에는, 피콜(Ficoll) 비중 원심법을 이용할 수 있다. 상기 백혈구로부터 T 세포를 분리할 때에는, 인비트로젠사의 다이날(Dynal) 비드(상표)나, 밀테니 바이오테크사의 클리니MACS(CliniMACS)(상표)를 포함하지만 이들로 한정되지 않는 면역 자기 비드를 사용하여, 세포 표면 항원 CD3, CD14 및/또는 CD28을 발현하는 세포를 분리 정제할 수 있다. 얻어진 세포를 배양하기 위한 배지로서는, XVivo15 배지 이외의 림프구 등의 혈액계 세포의 증식에 적합한 무혈청 배지를 사용할 수 있다. 이 배지에는, 바이오위트테이커(BioWhittaker)사 이외로부터 입수 가능한 인간 AB형 혈청(0 내지 15 ％)이나, 일본 적십자사로부터 입수 가능한 헌혈 인간 혈청 알부민(0 내지 10 ％)이 첨가되는 경우가 있다. 또한, 페프로테크사 이외로부터 입수 가능한 인터루킨 2(0 내지 10,000 IU/mL), 인터루킨 15(0 내지 100 ng/mL) 및/또는 인터루킨 21(0 내지 100 ng/mL)을 포함하지만 이들로 한정되지 않는 세포 증식 인자가 첨가되는 경우가 있다.
증식 자극제는, 인비트로젠사 이외의 CD3/CD28 비드인 경우가 있다. 이 경우에는, 본 발명의 인간 조혈 줄기 세포 유래의 세포는, HLA 클래스 I 분자 구속성 에피토프에 관계없이 증식 자극을 받을 수 있다. 대체책으로서, 본 발명의 인간 조혈 줄기 세포 유래의 세포는, HLA 클래스 I 분자 구속성 에피토프에 의한 증식 자극을 받을 수 있다. 예를 들면, CMTWNQMNL(서열 번호 1)의 아미노산 서열로 이루어지는 올리고 펩티드(HLA-A*2402 구속성 WT1 유래 펩티드 단편), ADVEFCLSL(서열 번호 2) 또는 SADVEFCLSL(서열 번호 3)의 아미노산 서열로 이루어지는 올리고 펩티드(HLA-B*4002 구속성 티로시나아제 유래 펩티드 단편), 암 항원 NY-ESO-1의 제81 내지 110번째의 아미노산 서열로 이루어지는 올리고 펩티드(HLA-B*3501 또는 HLA-C*0304 구속성 펩티드 단편)와 같은 암 특이적 펩티드나, EB 바이러스, 사이토메갈로 바이러스, 에이즈 바이러스 이외의 바이러스의 단백질 또는 그의 펩티드 단편이 HLA 클래스 I 분자 구속성 에피토프로서 알려져 있다. 이러한 단백질 또는 펩티드를 첨가한 배지 중에서 본 발명의 인간 조혈 줄기 세포 유래의 세포, 예를 들면 제대혈의 백혈구로부터 정제된 세포 표면 항원 CD3, CD14 및/또는 CD28을 발현하는 세포를 배양함으로써 HLA 클래스 I 분자 구속성 에피토프에 의한 증식 자극을 행할 수 있다. HLA 클래스 I 분자 구속성 에피토프에 의한 증식 자극은, 암 세포나, 바이러스 이외의 병원체에 감염된 세포의 용해물과 공배양된 제대혈 유래 수상 세포의 공배양에 의해서도 실시할 수 있지만, 이들로 한정되지 않는다.
증식 자극된 세포는 5 내지 7 ％ CO2 존재하에 37 ℃에서 배양되는 경우가 있다. 세포는 1×106개/mL의 농도로 파종되고, 2 내지 4일 후에 배지가 교환되어, 새로운 배지에 1×106개/mL의 농도로 파종되는 경우가 있다. 총 수 1×108개 이상의 대량 배양인 경우에는, GE 헬스케어사의 웨이브 바이오리액터 2/10(상표)과 같은 장치가 사용되는 경우가 있다.
본 발명의 의약품 조성물은, 상기 인간 조혈 줄기 세포 유래의 세포 이외에, 환자의 혈관 내에 이식하기 위한 세포 제제로서 약학적으로 허용되는 어떠한 성분을 포함하는 것일 수 있다. 본 발명의 의약품 조성물이 동결 보존 상태로 수송되는 경우에는, 해동시에 이식용 세포 제제로서 충분한 양의 유효한 세포 상해성 T 세포가 얻어지는 동결 보존액을 포함하는 경우가 있다.
본 발명의 의약품 조성물은, 환자의 림프구가 제거된 후에 이식되는 경우가 있다. 이것은, 일반적인 양자 면역 요법(Adoptive Cell Transfer, ACT)과 마찬가지로, 본 발명의 의약품 조성물에 포함되는 세포의 증식에 필요한 사이토카인(인터루킨 7, 인터루킨 15 등)에 관련되어 환자의 림프구와 경합하는 것을 회피하기 위해, 및 환자의 림프구와의 사이의 세포간 상호 작용에 의해 본 발명의 의약품 조성물에 포함되는 세포의 활성이 감소되는 것을 회피하기 위함이다. 환자의 림프구를 제거하는 방법은 시클로포스파미드(예를 들면, 60 mg/kg, 2일간), 플루다라빈(예를 들면, 25 mg/m2, 5일간) 등의 약제 투여 및/또는 방사선 조사(예를 들면, 2 또는 12 Gy)와, 인터루킨 2 투여(8시간마다 7.2×105 IU/kg, 2 내지 3일간)를 포함하지만, 이들로 한정되지 않는다.
이하의 실시예에 나타내는 바와 같이, 본 발명의 의약품 조성물은 제대혈 세포의 HLA-A 구속성의 암 항원 WT1 펩티드에 특이적인 세포 상해성 T 세포를 포함한다. 따라서, 본 발명의 의약품 조성물은, HLA-A 유전자좌에 대하여 제대혈과 동일한 적합형의 항원을 적어도 1개 갖는 환자에게 이식될 때, WT1을 과잉 발현하는 환자의 암 세포를 공격할 수 있다.
그 이외에도, 시험관 내에서 기타 항원에 특이적인 세포 상해성 T 세포를 증폭할 수 있다는 것, 및 이러한 세포 상해성 T 세포를 환자에게 이식하면 임상 효과가 얻어진다는 것은 종래부터 알려져 있다. 예를 들면, 고뎃, 와이(Godet, Y.) 외(문헌 [Cancer Immunol. Immunother., 58: 271-280(2009)])는, 멜라노마에 특이적인 암 항원 티로시나아제 유래의 HLA-B 구속성 펩티드에 특이적인 세포 상해성 T 세포를 얻었다. 스트라아토프, 케이.씨.엠.(Straathof, K.C.M.) 외(문헌 [Blood, 105: 1898-1904(2005)])는, EB 바이러스 관련 항원 LMP2의 HLA-B 구속성 에피토프, EB 바이러스 관련 항원 EBNA1의 HLA-B 구속성 에피토프, EB 바이러스 관련 항원 EBNA3의 HLA-B 구속성 에피토프, EB 바이러스 관련 항원 BZLF1의 HLA-B 구속성 에피토프 등에 특이적인 CTL을 EB 바이러스 관련 비인두암 환자에게 이식하여 임상 효과를 얻었다. 왈터, 이.에이.(Walter, E.A.) 외(문헌 [N. Engl. J. Med., 333: 1038-44(1995)])는, 사이토메갈로 바이러스(CMV) 특이적 CTL을, 백혈병 치료를 위해 CMV 양성 혈연자로부터 골수 이식을 받은 후, 면역 억제제가 투여되어 있는 동안에 CMV가 재활성화된 환자에게 이식하여 임상 효과를 얻었다.
또한, 바이오레이 지.(Bioley G.) 외(문헌 [Clin. Cancer Res. 15: 299-306(2009)])에 따르면, 암 항원 NY-ESO-1을 백신 접종한 환자로부터 해당 항원 유래의 HLA-B 또는 HLA-C 구속성 펩티드에 특이적인 세포 상해성 T 세포가 얻어졌다. 따라서, 세포 상해성 T 세포는, WT1 단백질 유래의 펩티드와 같은 HLA-A 구속성 에피토프에 특이적일 뿐만 아니라, HLA-B 또는 HLA-C 구속성 에피토프에 특이적인 것일 수도 있다.
본 발명의 의약품 조성물에서는, 인간 조혈 줄기 세포 유래의 세포의 인간 HLA 클래스 I 분자 중 어느 1개의 유전자좌가 상기 세포의 적합형이 환자의 적합형과 일치하는 항원을 적어도 1개 포함한다. 그 때문에, 환자의 세포가 질환 관련 항원, 예를 들면 암 항원이나 병원체 유래 항원을 발현할 때에는, 상기 질환 관련 항원이 인간 HLA 클래스 I 분자와 함께 본 발명의 의약품 조성물의 세포 상해성 T 세포에 제시된다. 즉, 본 발명의 의약품 조성물은 환자와 공통의 HLA 클래스 I 분자 유전자좌 알릴의 콘텍스트로 상기 질환 관련 항원을 인식하여, 상기 질환 관련 항원을 발현하는 환자의 세포를 특이적으로 공격한다.
환자의 세포가 발현하는 질환 관련 항원은, WT1, 티로시나아제, NY-ESO-1, CEA, NSE, PSA, gp100, MART-1 및 MAGE-3을 포함하지만, 이들로 한정되지 않는 종양 관련 항원과, EBER, LMP-1 등의 EB 바이러스 관련 항원과 같이 암 세포에서 (과잉으로) 발현하는 항원인 경우와, CMVgp65 등의 사이토메갈로 바이러스 특이 항원, HIVgp160 등의 에이즈 바이러스 특이 항원을 포함하지만, 이들로 한정되지 않는 바이러스 특이 항원과 같이 감염 세포에서 발현하는 항원인 경우가 있다. 따라서, 본 발명의 의약품 조성물은, 암 치료에 사용되는 경우와 감염증 치료에 사용되는 경우가 있다.
[도 1] 제대혈 유래 CD3 양성 세포의 증식 조건의 검토 결과를 나타내는 그래프.
[도 2] 면역 비드로 자극되며, 14일간 배양 증폭된 제대혈 유래 CD3 양성 세포를 APC 표지 항인간 CD8 마우스 모노클로날 항체와, PE 표지 HLA-A*2402 WT1(와일드) CMTWNQMNL-사량체로 이중 염색한 유동 세포 분석법 해석도.
[도 2] 면역 비드로 자극되며, 14일간 배양 증폭된 제대혈 유래 CD3 양성 세포를 APC 표지 항인간 CD8 마우스 모노클로날 항체와, PE 표지 HLA-A*2402 WT1(와일드) CMTWNQMNL-사량체로 이중 염색한 유동 세포 분석법 해석도.
이하에 설명하는 본 발명의 실시예는 예시만을 목적으로 하며, 본 발명의 기술적 범위를 한정하는 것은 아니다. 본 발명의 기술적 범위는 특허청구범위의 기재에 의해서만 한정된다. 본 명세서에서 언급되는 모든 특허문헌 및 비특허문헌은 이들의 전체가 인용에 의해 본 명세서에 수용된다.
이하의 실시예에서 설명하는 실험은, 동경 대학 의과학 연구소의 윤리 심사 위원회에 의해 승인된 후에 실시되었다.
실시예 1
인간 제대혈
인간 제대혈 시료는, 모친의 사전 동의 서명을 얻은 후에 채혈되었으며, 리가가꾸 겡뀨쇼 바이오자원 센터 내의 액체 질소 시스템으로 동결 보존되었다. 채혈 방법은 문헌 [Rubinstein, P. 외, Blood, 81: 1679-1690(1993)]에 의해 설명되고, 동결 보존 방법은 문헌 [Rubinstein, P. 외, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 92: 10119-10122(1995)]에 의해 설명된다.
배지 및 시약
배지로서 X-Vivo15(상표, 다까라 바이오, 시가)가 사용되었다. 일부의 실험에서는 최종 농도 0 내지 5 ％의 인간 AB형 혈청(Lonza)이 첨가되었다. 페프로테크(록키 힐, 뉴저지주) 제조의 재조합 인간 인터루킨-2(IL-2)가 최종 농도 0 내지 1,500 IU/mL 첨가되었다.
제대혈 유래 CD3 양성 세포의 정제
리가가꾸 겡뀨쇼로부터 입수한 제대혈 25 mL는 37 ℃의 온수욕에서 해동되고, 피콜-파큐(Ficoll-Paque)(상표, GE 헬스케어) 위에 중층되어, 실온에서 1,500 rpm, 30분간 원심분리되었다. 연막이 회수되고, PBS 중에 재부유된 얻어진 백혈구는 PBS로 3회 더 세정되었다. 그 후, 상기 백혈구 현탁액에 세포 107개당 25 μL의 다이날(상표) 면역 자기 비드 CD14(인비트로젠)가 첨가되어, 빙상 또는 4 ℃에서 30분 이상 교반되었다. CD14 양성 세포와, 비드를 탐식한 단구 마크로파지가 자기 입자 분리기(MPC-1, 다이날)를 사용하여 제거되었다. 나머지 세포는 PBS 중에 재부유되어, 세포 107개당 25 μL의 다이날(상표) 면역 자기 비드 CD3(인비트로젠)가 첨가되고, 빙상 또는 4 ℃에서 30분 이상 교반되었다. CD3 양성 세포가 자기 입자 분리기(MPC-1, 다이날)를 사용하여 분리되었다.
제대혈 유래 CD3 양성 세포의 배양
상기 CD3 양성 세포는 5 ％ 인간 AB형 혈청을 첨가한 XVivo15 배지에 106개/mL의 농도로 부유되어, 다이나비드(Dynabeads) CD3/CD28 T 셀 익스팬더(인비트로젠)와, 재조합 IL-2를 첨가하여 배양되었다. 배양 4, 7, 9, 12 및 14일째에 트리판 블루 염색을 이용하여 생세포수가 측정되었다. 재조합 IL-2를 포함하는 5 ％ 인간 AB형 혈청을 첨가한 ExVivo15 배지에서 106개/mL의 세포 농도가 되도록 희석되었다.
결과
도 1에 제대혈 유래 CD3 양성 세포의 증식 조건의 검토 결과를 나타낸다. 도 1의 종축은 배양 개시시의 CD3 양성 세포의 총수를 1로 하는 증식 배율을 나타내고, 횡축은 배양 개시 후의 일수를 나타낸다. 자극에 사용하는 CD3/CD28 면역 비드는 세포 1개당 비드 약 2개의 비율로 사용되었다. 배지에 첨가되는 재조합 IL-2 및 인간 혈청의 농도에 관계없이, 어떠한 배양 조건에서도 제대혈 유래 CD3 양성 세포는 배양 9일째까지 거의 동일한 속도로 증식되었다. 그러나, 배양 12일째가 되면 IL-2 농도가 1,500 IU/mL, 인간 혈청이 5 ％인 배양 조건의 세포만이 증식 속도를 유지하고, 다른 배양 조건의 세포는 증식 속도의 저하나 세포수의 감소가 관찰되었다. 배양 14일째가 되면, IL-2 농도가 1,500 IU/mL의 조건으로 배양된 세포만이 동일한 속도로 증식되었다. 이상에 나타낸 바와 같이, 제대혈 유래의 백혈구로부터 CD3 양성의 T 세포만을 정제하고, 이것에 분열 자극을 부여하여 선택적으로 증식하는 것이 가능해졌다.
실시예 2
암 항원 특이적 세포 상해성 T 세포의 증폭
CD3/CD28 면역 비드로 자극되고, 5 ％ 인간 AB형 혈청 및 1,500 IU/mL의 IL-2를 첨가한 ExVivo15 배지에서 배양 증폭된 제대혈 유래 CD3 양성 세포를 배양 14일째에 회수하고, APC 표지 항인간 CD8 마우스 모노클로날 항체와 PE 표지 HLA-A*2402 WT1(와일드) CMTWNQMNL-사량체로 이중 염색하여, 유동 세포 분석법 해석을 행하였다.
결과
도 2에 상기 유동 세포 분석법 해석 결과를 나타낸다. 도면의 종축은 PE의 형광 강도이며, HLA-A*2402 WT1(와일드) CMTWNQMNL-사량체와의 반응을 나타내고, 횡축은 APC의 형광 강도이며, 항CD8 항체와의 반응을 나타낸다. 도 2에 나타낸 바와 같이, 증폭된 제대혈 유래 CD3 양성 세포 중 CD8 양성 세포, 즉 세포 상해성 T 세포의 약 11.6 ％는 HLA-A*2402 알릴의 콘텍스트로 암 항원인 WT1 유래 펩티드를 특이적으로 인식하였다. WT1 특이적인 세포 상해성 T 세포는, 림프종 이외의 WT1을 과잉 발현하는 악성 세포와는 반응하지만, WT1을 비교적 소량밖에 발현하지 않는 정상 세포를 공격하지 않는다는 것이 알려져 있다(문헌 [Gao, L. 외, Blood, 95: 2198-2203(2000), Oka, Y. 외, Curr. Op. in Immunol., 20: 211-220(2008)]).
도 2의 결과로부터 제대혈 유래의 백혈구를 특정한 표면 항원에 기초하여 선별하고, 적절한 조건으로 자극 및 증폭을 행하면, 특정 알릴의 HLA-A 구속성으로 암 항원을 특이적으로 인식하는 세포 상해성 T 세포가 대량으로 얻어진다는 것이 증명되었다.
본 실시예에서는, WT1 펩티드는 세포 상해성 T 세포의 증식 자극에는 사용되지 않았으나, WT1 유래 펩티드를 특이적으로 인식하는 세포 상해성 T 세포가 얻어졌으며, 이것은 WT1이 제대혈 백혈구에서 발현되고 있고, 배양에 사용된 림프구에는 수상 세포로 분화되는 것이 포함되기 때문에, 배양하에 수상 세포로부터 세포 상해성 T 세포에 WT1이 항원으로서 제시되었을 가능성이 있다. 제대혈에서는 성인 말초혈에는 존재하지 않는 흉선 선택을 받기 전의 유약한 CD4 양성 CD8 양성 T 세포 집단이 존재하지만, 이것은 제대혈에 특이적인 세포 집단이다. 나이브(naive) T 세포를 항원 특이적으로 활성화(프라이밍)하기 위해서는 수상 세포가 필수적이지만, WT1과 같은 정상 세포에서도 발현하고 있는 자기 단백의 경우, 이미 흉선 선택을 받기 전의 유약한 CD4 양성 CD8 양성의 자기 반응성 메모리 세포가 제대혈 중에 존재하고 있기 때문에, 이들 세포 집단으로부터 WT1 특이적 세포 상해성 T 세포가 증폭되어 있을 가능성이 있다. 성인에게서 이들 세포 집단은 자기 반응성 클론으로서 이미 흉선 선택의 단계에서 제거되어 있기 때문에, 성인 말초혈의 증폭으로는 얻을 수 없고, 제대혈로부터만 조정 가능하다. 본 실시예의 실험은, 제대혈로부터만 이 세포 집단이 조정 가능하다는 것을 세계 최초로 나타낸 것이다.
SEQUENCE LISTING
<110> University of Tokyo
<120> Pharmaceutical Composition Comprising Transiently Engrafted CTL
<130> ushiki 38270
<160> 3
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial
<220>
<223> HLA-A*2402 restricted peptide epitope derived from human Wilm's
tumor responsible gene product (WT1)
<400> 1
Cys Met Thr Trp Asn Gln Met Asn Leu
1 5
<210> 2
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial
<220>
<223> HLA-B*4002 restricted peptide epitope derived from human
tyrosinase
<400> 2
Ala Asp Val Glu Phe Cys Leu Ser Leu
1 5
<210> 3
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial
<220>
<223> HLA-B*4002 restricted peptide epitope derived from human
tyrosinase
<400> 3
Ser Ala Asp Val Glu Phe Cys Leu Ser Leu
1 5 10
Claims (12)
- 인간 조혈 줄기 세포 유래의 세포를 포함하는 의약품 조성물이며,
상기 세포의 인간 HLA 클래스 I 분자 중 어느 1개의 유전자좌는 상기 세포의 적합형이 환자의 적합형과 일치하는 항원을 적어도 1개 포함하는 것, 및
상기 세포의 인간 HLA 클래스 I 및 II 분자의 유전자좌의 항원은, 상기 세포의 적합형이 환자의 적합형과 일치하지 않는 항원을 적어도 1개 포함하고, 상기 조혈 줄기 세포 유래의 세포는 상기 환자의 체내에서 영속적 생착도, 중증도 III 또는 IV의 급성 GVH병도 일으키지 않는 것을 특징으로 하는 의약품 조성물. - 제1항에 있어서, 상기 의약품 조성물은 상기 환자의 림프구가 제거된 후에 투여되며,
상기 의약품 조성물은 상기 환자의 체내에서 일과적으로 생착되지만 상기 환자의 림프구가 재증식됨과 함께 소실되는 것을 특징으로 하는 의약품 조성물. - 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 세포의 인간 HLA 클래스 I 분자 중 어느 1개의 유전자좌는 HLA-A, HLA-B 및 HLA-C로 이루어지는 그룹으로부터 선택되며, 상기 세포의 인간 HLA 클래스 II 분자의 유전자좌는 DRB1인 것, 및
상기 세포의 인간 HLA 클래스 I 및 II 분자의 유전자좌의 항원은, 상기 세포의 적합형이 환자의 적합형과 일치하지 않는 항원을 적어도 1개 포함하고, 상기 조혈 줄기 세포 유래의 세포는 상기 환자의 체내에서 영속적 생착도, 중증도 III 또는 IV의 급성 GVH병도 일으키지 않는 것을 특징으로 하는 의약품 조성물. - 제3항에 있어서, 상기 세포의 HLA-A, HLA-B 및 DRB1의 유전자좌의 항원은, 상기 세포의 적합형이 환자의 적합형과 일치하지 않는 항원을 5개 내지 6개 포함하고, 상기 조혈 줄기 세포 유래의 세포는 상기 환자의 체내에서 영속적 생착도, 중증도 III 또는 IV의 급성 GVH병도 일으키지 않는 것을 특징으로 하는 의약품 조성물.
- 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인간 조혈 줄기 세포는 제대혈 줄기 세포인 것을 특징으로 하는 의약품 조성물.
- 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인간 조혈 줄기 세포 유래의 세포는, 인간 HLA 클래스 I 분자 구속성 에피토프에 특이적인 세포 상해성 T 세포인 것을 특징으로 하는 의약품 조성물.
- 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 암 치료용인 것을 특징으로 하는 의약품 조성물.
- 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 감염증 치료용인 것을 특징으로 하는 의약품 조성물.
- 제8항에 있어서, 상기 인간 HLA 클래스 I 분자 구속성 에피토프에 특이적인 세포 상해성 T 세포는 상기 인간 HLA 클래스 I 분자 구속성 에피토프에 의한 자극을 받지 않고 증폭되는 것을 특징으로 하는 의약품 조성물.
- 제9항에 있어서, 상기 세포의 HLA-A 유전자좌는 상기 세포의 적합형이 환자의 적합형과 일치하는 항원을 적어도 1개 포함하는 것, 및
상기 세포 상해성 T 세포는 빌름스 종양 원인 유전자 산물(WT1)에 특이적인 것을 특징으로 하는 의약품 조성물. - 인간 제대혈 유래의 세포 상해성 T 세포를 포함하는 의약품 조성물이며,
상기 세포 상해성 T 세포는 HLA-A, HLA-B 및 HLA-C 중 어느 1 종류의 유전자좌의 HLA 클래스 I 분자 구속성 에피토프에 특이적인 것,
상기 인간 HLA 클래스 I 분자 구속성 에피토프에 특이적인 세포 상해성 T 세포는 상기 인간 HLA 클래스 I 분자 구속성 에피토프에 의한 자극을 받지 않고 증폭되는 것,
상기 세포 중 어느 1 종류의 유전자좌의 HLA 클래스 I 분자는, 상기 세포의 적합형이 환자의 적합형과 일치하는 항원을 적어도 1개 포함하는 것, 및
상기 세포의 HLA-A, HLA-B 및 DRB1의 유전자좌는, 상기 세포의 적합형이 환자의 적합형과 일치하지 않는 항원을 5개 내지 6개 포함하고, 상기 조혈 줄기 세포 유래의 세포는 상기 환자의 체내에서 영속적 생착도, 중증도 III 또는 IV의 급성 GVH병도 일으키지 않는 것을 특징으로 하는 의약품 조성물. - 인간 제대혈을 CD3/CD28 면역 비드로 자극하는 스텝을 포함하는 것을 특징으로 하는, 제9항에 기재된 의약품 조성물의 제조 방법.
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