KR20120004903A - A novel strain of gluconacetobacter sp. gel sea623-2 from citrus juice and cellulose gel by using it - Google Patents

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Abstract

PURPOSE: A Gluconacetobacter sp. gel_SEA623-2 strain is provided to ensure non-toxicity and to be applied to a mask pack and functional cosmetic product. CONSTITUTION: A novel Gluconacetobacter sp. gel_SEA623-2 strain(KACC 91526P) is used for manufacturing cellulose gel. The strain is isolated from tangerine. The pH of tangerine juice is 2.5-5.0. The strain is precultured at 25-35°C and pH 2.5-5.0. The cellulose gel has 5-20 mm of thickness and 70-95 wt% of moisture. The cellulose gel is manufactured in a cosmetic cream.

Description

감귤 착즙액에서 분리된 신규의 글루콘아세토박터 속 gel_SEA623-2 균주 및 이를 이용한 셀룰로오스 겔의 제조방법{A novel strain of Gluconacetobacter sp. gel_SEA623-2 from citrus juice and cellulose gel by using it}A novel strain of Gluconacetobacter spp. Isolated from citrus juices and a method for producing a cellulose gel using the same {A novel strain of Gluconacetobacter sp. gel_SEA623-2 from citrus juice and cellulose gel by using it}

본 발명은 감귤 착즙액에서 분리되어 셀룰로오스 겔의 제조에 사용되는 신규의 글루콘아세토박터 속(Gluconacetobacter sp.) gel_SEA623-2 균주 및 이를 이용하여 셀룰로오스 겔을 제조하는 방법에 관한 것이다.
The present invention relates to a novel Gluconacetobacter sp. Gel_SEA623-2 strain isolated from citrus juice and used for the preparation of cellulose gel, and a method for producing cellulose gel using the same.

셀룰로오스는 자연계에 가장 풍부한 생체 물질 자원으로 특히, 초산균이 생성하는 셀룰로오스는 식품의 첨가제뿐만 아니라, 고부가가치의 산업용 신소재로 많은 주목을 받고 있다. Cellulose is one of the most abundant biological materials in nature. Especially, cellulose produced by acetic acid bacteria has attracted much attention not only as an additive of food but also as a new value-added industrial new material.

초산균이 셀룰로오스를 생산한다는 사실이 보고된 이래(Brown. A. J., J. Chem. Soc., vol. 49, pp. 432-439,1986), 미생물에 의해 생산되는 셀룰로오스(Bacterial Cellulose)는 신소재로서 끊임없는 연구 대상이 되어 왔다. 식물 유래의 셀룰로오스와 박테리얼 셀룰로오스(bacterial cellulose)는 구조적으로 커다란 차이를 나타내고 있다. 즉, 미생물 유래의 박테리얼 셀룰로오스는 리본형 섬유(ribbin-like bundles)로 구성되는 반면, 식물유래의 셀룰로오스는 미세섬유(microfibrils)의 묶음(bundles) 형태로 이루어진다.Since it has been reported that acetic acid bacteria produce cellulose (Brown. AJ, J. Chem. Soc., Vol. 49, pp. 432-439, 1986), microbial cellulose (Bacterial Cellulose) is a new material. Has not been studied. Plant-derived cellulose and bacterial cellulose show a great structural difference. That is, the microbial-derived bacterial cellulose is composed of ribbon-like bundles, while the plant-derived cellulose is composed of bundles of microfibrils.

특히, 초산균이 생성하는 셀룰로오스는 미세섬유(microfibrils)의 묶음(bundles) 형태로 구성되는 식물 유래의 셀룰로오스와는 달리 리그닌이나 헤미셀룰로오스가 전혀 포함되지 않은 순수상태로 생산되며, 산업용 신소재로서 다양한 용도 개발이 가능하여 균주 개량에 의한 생산성 향상, 유전자 조작, 배양조건의 확립 등에 관한 연구결과, 고강도용 공업재료, 복합섬유, 의료용 재료 및 효소 고정화 등의 첨단 소재로 이용될 수 있다.In particular, cellulose produced by acetic acid bacteria is produced in a pure state that contains no lignin or hemicellulose, unlike plant-derived cellulose composed of bundles of microfibrils. As a result of research on productivity improvement, genetic manipulation, establishment of culture conditions by improving the strain, it can be used as advanced materials such as industrial materials for high strength, composite fibers, medical materials and enzyme immobilization.

현재 셀룰로오스를 생산하는 균주로는 아세토박터 속(Acetobacter sp.), 아그로박테리움 속(Agrobacterium sp.), 리조비움 속(Rhizobium sp.), 슈도모나스 속(Pseudomonas sp.) 및 사르시나(Sarcina sp.) 속이 있으며, 특히 아세토박터 속(Acetobacter sp.) 중에 아세토박터 자이리눔(Acetobacter xylium), 아세토박터 파스테우리아누스(A. pasteurinanus) 및 아세토박터 한세니(A. hansenii)가 많이 알려져 있다. 최근 16S rRNA 염기서열을 이용하여 분자계통분류학적으로 재분류하고 있으며, 순도가 높은 셀룰로오스를 생성하는 균주의 특징은 형태학적으로 장간균이고, 내산성력이 강한 세균으로 균체에서 셀룰로오스를 분비하는 것으로 보고되어 있다.Current strains producing cellulose include Acetobacter sp., Agrobacterium sp., Rhizobium sp., Pseudomonas sp., And Sarcina sp. ) are hollow, especially acetonitrile bakteo Here Come been a lot num (Acetobacter xylium), acetonitrile bakteo wave Uriah Stephen Augustine (A. pasteurinanus) and acetonitrile bakteo century you (A. hansenii) in acetonitrile in bakteo (Acetobacter sp.). Recently, 16S rRNA sequencing has been used to reclassify the molecular system, and the strain producing high-purity cellulose is morphologically enterococci and strong acid resistance bacteria, which is reported to secrete cellulose from cells. It is.

종래의 셀룰로오스 생산에서 사용되는 탄소원은 포도당이 가장 대표적이고(Masaoka S, et al., J. Fermen. Bioeng., 75, 18-22, 1993), 다른 소재로 천연재료 중 감즙 및 감식초(Kim SY, et al., Appl Biochem Biotechnol., 129-132, 705-15, 2006), 사과즙(Lee OS, et al., J. Kor. Soc. Food Sci. Nutr., 31(4), 572-577, 2002), 포도즙(Son CJ, et al., J. Appl. Microbiol. Biotechnol., 12(5), 722-728, 2002), 맥주폐액(Park JK, et al., Kor Chem Eng Res., 44(1), 52-57, 2006) 및 코코넛 부산물(Jonas R, et al., Polym Degrad Stab., 59, 101-106, 1998) 등이 활용된 바 있다. The most common carbon source used in the production of cellulose is glucose (Masaoka S, et al., J. Fermen. Bioeng., 75, 18-22, 1993), and other materials such as citrus and persimmon vinegar (Kim SY). , et al., Appl Biochem Biotechnol., 129-132, 705-15, 2006), apple juice (Lee OS, et al., J. Kor. Soc. Food Sci. Nutr., 31 (4), 572-577 , 2002), grape juice (Son CJ, et al., J. Appl. Microbiol. Biotechnol., 12 (5), 722-728, 2002), beer waste (Park JK, et al., Kor Chem Eng Res., 44 (1), 52-57, 2006) and coconut byproducts (Jonas R, et al., Polym Degrad Stab., 59, 101-106, 1998).

한편 감귤류는 다기능성 약효 성분을 많이 함유하고 있는 과일로서 오래전부터 한방에서 생약의 재료로 사용하였고, 동시에 비타민, 식이섬유, 유기산 및 유리당 등의 영양성분 공급원의 건강식품 소재로도 활용되어 왔다. 또한 감귤류는 플라보노이드, 카로테노이드, 쿠마린, 페닐프로파노이드, 리모노이드, 펙틴, 셀룰로오스, 헤미셀룰로오스 등 다양한 생리활성물질을 함유하고 있다. 이 중 플라보노이드 류는 60여종이 알려져 있으며 대부분 당과 결합된 배당체 형태로 존재한다. 상기 플라보노이드류는 항상화 작용, 순환기계 질환의 예방, 항염증, 항알레르기, 항균, 항바이러스, 지질저하 작용, 면역증강 작용 등이 알려져 있다.Citrus fruits, on the other hand, contain a lot of multifunctional medicinal ingredients and have been used as herbal medicines for a long time. In addition, citrus fruits contain various biologically active substances such as flavonoids, carotenoids, coumarins, phenylpropanoids, limonoids, pectin, celluloses, hemicelluloses, and the like. About 60 flavonoids are known and most exist in glycosides associated with sugars. The flavonoids are known for homeostasis, prevention of circulatory diseases, anti-inflammatory, anti-allergic, antibacterial, antiviral, hypolipidemic, immune enhancing action.

비록 일본등록특허 제3,341,017호 및 제4,061,661호, 한국등록특허 제405,776호 등에서 아세토박터(Acetobacter) 속 미생물을 이용한 셀룰로오스의 제조방법이 개시되어 있기는 하나, 감귤 등의 과즙으로부터 상용화 가능한 두께를 가지는 필름형태의 셀룰로오스 겔을 제조하는 방법은 아직까지 개발된 바가 없다.
Although Japanese Patent Nos. 3,341,017 and 4,061,661, Korean Patent No. 405,776 and the like disclose a method for producing cellulose using microorganisms of the genus Acetobacter , a film having a thickness that is commercially available from fruit juices such as citrus fruits. A method for producing the cellulose gel in the form has not been developed yet.

이에, 본 발명자들은 감귤의 다양한 용도에 대한 연구를 수행하여, 감귤로부터 신규 균주를 분리하고, 특정 배지로부터 상기 균주를 이용하여 생체적합성과 물성이 뛰어난 셀룰로오스 겔을 제조할 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하게 되었다. Thus, the present inventors conducted a study on the various uses of citrus fruits to isolate the new strain from the tangerine, using the strain from a specific medium to confirm that the biocompatibility and physical properties of the cellulose gel can be produced by using the strain To complete.

따라서, 본 발명은 셀룰로오스 겔을 제조하는데 사용되는 것을 특징으로 하는 신규의 균주를 제공하는데 그 목적이 있다. Accordingly, it is an object of the present invention to provide a novel strain characterized in that it is used to prepare a cellulose gel.

또한, 본 발명은 과즙 배지에 상기 신규의 균주를 접종하여 생체적합성과 물성이 우수한 셀룰로오스 겔을 제조하는 방법을 제공하는데 또다른 목적이 있다.
Another object of the present invention is to provide a method for preparing a cellulose gel having excellent biocompatibility and physical properties by inoculating the novel strain in a juice medium.

본 발명은 셀룰로오스 겔을 제조하는데 사용되는 것을 특징으로 하는 신규의 글루콘아세토박터 속(Gluconacetobacter sp.) gel_SEA623-2 균주를 그 특징으로 한다. The present invention is a novel Gluconacetobacter characterized in that it is used to prepare a cellulose gel. sp.) gel_SEA623-2 strain.

또한 본 발명은 과즙 배지에 상기 균주를 접종하여 셀룰로오스 겔을 제조하는 방법을 또다른 특징으로 한다. In another aspect, the present invention is characterized by a method for producing a cellulose gel by inoculating the strain in the juice medium.

또한 본 발명은 상기 제조방법에 의하여 제조되어 다양한 용도로 적용될 수 있는 셀룰로오스 겔을 또다른 특징으로 한다. In another aspect, the present invention is characterized by a cellulose gel that can be manufactured by the above production method can be applied for various uses.

본 발명에 의하여 제조된 셀룰로오스 겔은 강도가 소프트하면서도 수분을 다량으로 함유하고 있어 새로운 형태로의 제형이 용이하며, 유독성이 전혀 없고, 상피 세포와 형태학적 및 구조적 특징이 유사하여 마스크팩, 기능성 화장품 등 다양한 형태의 재료로 활용 가능하다.
Cellulose gel prepared according to the present invention is soft in strength and contains a large amount of moisture, so it is easy to formulate in a new form, there is no toxicity, and similar to epithelial cells in morphological and structural features, mask packs, functional cosmetics It can be used in various forms of materials.

도 1는 감귤 착즙액의 자연발효액으로부터 분리한 글루콘아세토박터 속(Gluconacetobacter sp.) gel_SEA623-2 균주를 나타낸 것이다.
도 2는 글루콘아세토박터 속 gel_SEA623-2 균주의 주사전자현미경(SEM) 사진이다.
도 3는 실시예 2에 의하여 제조된 감귤 셀룰로오스 겔의 사진이다.
도 4는 실시예 2에 의하여 제조된 감귤 셀룰로오스 겔의 SEM 사진이다.
도 5는 기준 균주가 감귤 셀룰로오스 겔을 형성할 수 있는지 여부를 확인한 사진이다.
도 6은 상용화되고 있는 코코넛 셀룰로오스 겔의 SEM 사진이다.
도 7은 과즙 배지별 셀룰로오스 겔의 제조를 확인한 사진이다.
도 8은 과즙 배지별 제조된 셀룰로오스 겔의 두께를 비교한 그래프이다.
도 9는 감귤 착즙액의 pH를 달리하여 제조된 감귤 셀룰로오스 겔을 비교한 사진이다.
도 10은 감귤 착즙액의 pH를 달리하여 제조된 감귤 셀룰로오스 겔의 두께를 비교한 그래프이다.
도 11은 감귤 착즙액의 당도를 달리하여 제조된 감귤 셀룰로오스 겔을 비교한 사진이다.
도 12는 감귤 착즙액의 당도를 달리하여 제조된 감귤 셀룰로오스 겔의 두께를 비교한 그래프이다.
도 13은 배양 온도를 달리하여 제조된 감귤 셀룰로오스 겔을 비교한 사진이다.
도 14는 배양 온도를 달리하여 제조된 감귤 셀룰로오스 겔의 두께를 비교한 그래프이다.
도 15는 감귤박 발효액을 배지로 하여 제조된 감귤 셀룰로오스 겔을 확인한 사진이다.
도 16은 감귤박 발효액의 당분해효소를 달리하여 제조된 감귤 셀룰로오스 겔의 두께를 비교한 그래프이다.
Figure 1 shows the Gluconacetobacter sp. Gel_SEA623-2 strain isolated from the natural fermentation of citrus juice.
Figure 2 is a scanning electron micrograph (SEM) of the gel_SEA623-2 strain of gluconacetobacter genus.
Figure 3 is a photograph of the citrus cellulose gel prepared by Example 2.
Figure 4 is a SEM photograph of the citrus cellulose gel prepared by Example 2.
5 is a photograph confirming whether the reference strain can form a citrus cellulose gel.
6 is a SEM photograph of a coconut cellulose gel that is commercially available.
Figure 7 is a photograph confirming the production of cellulose gel for each juice medium.
8 is a graph comparing the thickness of the prepared cellulose gel for each juice medium.
Figure 9 is a photograph comparing the citrus cellulose gel prepared by varying the pH of the citrus juice.
Figure 10 is a graph comparing the thickness of the citrus cellulose gel prepared by varying the pH of the citrus juice.
Figure 11 is a photograph comparing the citrus cellulose gel prepared by varying the sugar content of the citrus juice.
12 is a graph comparing the thicknesses of citrus cellulose gels prepared by varying the sugar content of citrus juices.
Figure 13 is a photograph comparing the citrus cellulose gel prepared by varying the incubation temperature.
14 is a graph comparing the thickness of the citrus cellulose gel prepared by varying the incubation temperature.
15 is a photograph confirming the citrus cellulose gel prepared by using the citrus fruit fermentation broth as a medium.
Figure 16 is a graph comparing the thickness of the citrus cellulose gel prepared by varying the glycolysis enzyme of the citrus fruit fermentation broth.

이와 같은 본 발명을 더욱 상세히 설명하면 다음과 같다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명의 셀룰로오스 겔을 제조하는데 사용되는 글루콘아세토박터 속(Gluconacetobacter sp.) gel_SEA623-2 균주는 감귤 착즙액으로부터 분리된 신균주로서, 농업유전자원정보센터 미생물은행에 2010년 2월 4일자로 기탁되었다(기탁번호 : KACC 91526P). Gluconacetobacter sp. Gel_SEA623-2 strain, which is used to prepare the cellulose gel of the present invention, is a new strain isolated from citrus juice, and it is dated February 4, 2010, at the Microbial Bank of Agricultural Genetic Resource Information Center. Was deposited (Accession Number: KACC 91526P).

또한 본 발명은 과즙 배지에 상기 글루콘아세토박터 속(Gluconacetobacter sp.) gel_SEA623-2 균주를 접종하는 단계를 포함하는 셀룰로오스 겔의 제조방법을 권리범위로 포함한다. 상기 글루콘아세토박터 속 gel_SEA623-2 균주를 과즙 배지에 접종하고 무균산태의 호기성조건에서 온도를 20 ~ 30 ℃로 유지시키면서 정치배양하며, 7 ~ 21일 동안 배양하는 것이 바람직하다. In another aspect, the present invention includes a method for producing a cellulose gel comprising the step of inoculating the strain Gluconacetobacter sp. Gel_SEA623-2 in the juice medium. It is preferable to inoculate the gel_SEA623-2 strain of the gluconacetobacter in the juice medium and incubate while maintaining the temperature at 20 ~ 30 ℃ in aerobic conditions of aseptic acid, and culture for 7 to 21 days.

상기 과즙 배지는 일반적인 과일로부터 얻을 수 있는 액상의 즙이라면 특별히 한정되지 아니하나, 바람직하게는 감귤, 배, 사과, 자몽 등이 사용될 수 있으며, 더욱 바람직하게는 감귤을 사용한다. The juice medium is not particularly limited as long as it is a liquid juice that can be obtained from a general fruit, preferably citrus fruits, pears, apples, grapefruit, etc. may be used, and more preferably citrus fruits are used.

본 명세서에서, "감귤"은 하기 참고예에서 사용된 온주 밀감뿐만 아니라 유럽 남부 등지에서 재배되는 시트론(citron), 미국 캘리포니아 등지에서 재배되는 레몬(lemon), 열대 지방 등지에서 재배되는 문단이나 자몽 등의 문단류, 미국의 플로리디 등지에 재배되는 문단의 돌연변이종인 그레이프 프루트(grape fruit), 인도, 이탈리아 등지에서 재배되는 광귤(sour orange), 인도 등 세계 각지에서 재배되는 당귤, 중국이나 우리나라에서 재배되는 금귤이나 유자(柚子), 우리나라 제주도 등에서 재배되는 한라봉, 진지향, 진귤, 산귤, 청귤, 동정귤, 당유자, 홍귤, 편귤, 사두감, 주감, 탱귤 등을 모두 포함하는 의미이다. 바람직하게는 하기 실시예에서 사용된 온주밀감이나 당도가 높아 상기 효모에 의한 발효가 용이한 한라봉, 금귤 및 진지향을 의미한다.In the present specification, "citrus fruits" refers to citron grown in the south of Europe, as well as citrus grown in the south of Europe, lemon (lemon) grown in the US and the like, paragraphs or grapefruits grown in the tropics, etc. Paragraphs, grapefruits cultivated in the US, Floridi, etc., grapefruit, sour oranges, India, Italy, etc. It is meant to include all kumquat, citron (한 子), Hallabong, jinji flavor, tangerine, wild mandarin, blue mandarin orange, tangerine, sugar citrus, red mandarin orange, tangerine, soybean persimmon, persimmon, tangerine. Preferably, it means Hallabong, kumquat and true flavor that are easy to ferment by the yeast because of the high wet or sweet sugar used in the following examples.

상기 균주는 25 ~ 35℃, pH 2.5 ~ 5.0 조건에서 전배양하여 과즙 배지에 접종하는 것이 바람직하며, 더욱 바람직하게는 26 ~ 30 ℃, pH 3.0 ~ 4.0 범위에서 전배양하는 것이 좋다.  The strain is preferably inoculated in the juice medium by pre-cultivation at 25 ~ 35 ℃, pH 2.5 ~ 5.0 conditions, more preferably 26 ~ 30 ℃, pH 3.0 ~ 4.0 range.

상기 과즙 배지는 산도가 pH 2.5 ~ 5.0 범위에 있는 것이 바람직하며, 더욱 바람직하게는 pH 3.0 ~ 4.0 범위에 있는 것을 사용한다. 또한 상기 과즙 배지는 당도가 1 ~ 30 brix 범위에 있는 것을 사용하는 것이 바람직하며, 더욱 바람직하게는 5 ~ 20 brix 범위에 있는 것을 사용한다. The juice medium preferably has an acidity in the pH range of 2.5 to 5.0, more preferably in the range of pH 3.0 to 4.0. In addition, the juice medium is preferably used in the range of 1 to 30 brix sugar, more preferably in the range of 5 to 20 brix.

또한 상기 과즙 배지로서 감귤 착즙액 뿐만 아니라, 감귤의 착즙 후 생성되는 박에 당분해효소를 처리하고 발효시켜 얻은 발효액을 사용할 수 있으며, 상기 발효액 역시 산도가 pH 2.5 ~ 5.0 범위에 있는 것이 바람직하며, 더욱 바람직하게는 pH 3.0 ~ 4.0 범위에 있는 것을 사용한다. 또한 상기 발효액은 당도가 1 ~ 30 brix 범위에 있는 것을 사용하며, 바람직하게는 5 ~ 20 brix 범위에 있는 것을 사용한다. 상기 당분해효소는 당업계에 널리 알려진 효소를 사용할 수 있으며, 상업적으로 알려진 Pectinex 100L, Viscozyme L, AMG 300L, Celluclast 1.5L 등이 사용될 수 있다. 하기 표 1에는 상기 상업적 공시효소의 특성을 나타내었다. In addition, as the juice medium, not only citrus juice, but also a fermentation broth obtained by treating and fermenting a glycolysis enzyme on the gourd produced after the juice of the citrus can be used, the fermentation broth also preferably has an acidity in the pH range of 2.5 to 5.0, More preferably, those in the pH 3.0 to 4.0 range is used. In addition, the fermentation broth uses a sugar in the range of 1 to 30 brix, preferably in the range of 5 to 20 brix. The glycolysis can be used enzymes well known in the art, commercially known Pectinex 100L, Viscozyme L, AMG 300L, Celluclast 1.5L and the like can be used. Table 1 shows the characteristics of the commercial synthase.

Pectinex 100LPectinex 100L Viscozyme LViscozyme L AMG 300LAMG 300L Celluclast 1.5LCelluclast 1.5L 유래origin 아스퍼질러스 니거
(Aspergillus niger)
Aspergillus Niger
( Aspergillus niger )
아스퍼질러스 아쿨리투스
(Aspergillus
aculeatus)
Aspergillus Aculitus
( Aspergillus
aculeatus )
아스퍼질러스 니거
(Aspergillus niger)
Aspergillus Niger
( Aspergillus niger )
트리코더마 리세이
(Trichoderma reesei)
Tricoderma Reise
( Trichoderma reesei )
특성화Specialization pectolytic enzyme
(pectintranseliminase, polygalacturonase, pectinesterase)
pectolytic enzyme
(pectintranseliminase, polygalacturonase, pectinesterase)
multi-enzyme
complex(arabanase, cellulase,
β-glucanase,
hemicellulase,
xylanase)
multi-enzyme
complex (arabanase, cellulase,
β-glucanase,
hemicellulase,
xylanase)
1,4-α-D-glucosidase (glucoamylase)1,4-α-D-glucosidase (glucoamylase) cellulase(the breakdown of cellulose into glucose, cellobiose and higher glucose polymers)cellulase (the breakdown of cellulose into glucose, cellobiose and higher glucose polymers)

감귤박은 상기 당분해효소를 접종한 뒤 3 ~ 12시간 정도 발효시키는 것이 바람직하고, 각 효소마다 최적 온도에 맞게 발효시키는 것이 좋으며, 약 40 ~ 70 ℃를 유지하는 것이 좋다. Citrus gourd is preferably fermented for about 3 to 12 hours after inoculation of the glycolytic enzyme, and it is preferable to ferment each of the enzymes to an optimal temperature, and to maintain about 40 to 70 ° C.

상기 제조방법에 의하여 제조된 셀룰로오스 겔은 상용화 가능한 5 ~ 20 mm 범위의 두께를 나타내고, 5 ~ 30 N/cm2 의 인장강도를 가지므로 상대적으로 소프트한 겔을 얻을 수 있으며, 70 ~ 95 중량%의 높은 수분 함유량을 나타낼 수 있다. 특히 상기 셀룰로오스 겔은 항균성이 우수하며 천연 재료를 사용하여 경제적으로도 매우 유리할 뿐만 아니라 유독성이 전혀 없어, 기능성 화장품 등으로 유용하게 사용될 수 있다.Cellulose gel prepared by the manufacturing method shows a commercially available thickness range of 5 ~ 20 mm, and has a tensile strength of 5 ~ 30 N / cm 2 It is possible to obtain a relatively soft gel, 70 ~ 95% by weight High water content. In particular, the cellulose gel is excellent in antibacterial and economically using a natural material is not only very advantageous but also no toxic, it can be usefully used as a functional cosmetics.

상기 셀룰로오스 겔은 그 자체 또는 이를 분말화하여 화장료의 성분으로 사용될 수 있다. 상기 셀룰로오스 겔 함유 화장료는 화장품 분야에서 통상적으로 사용되는 기제, 보조제 및 첨가제를 사용하여 액체 또는 고체 형태로 제조될 수 있다. 액체 또는 고체 형태의 화장품으로는 예를 들면, 이에 한정되지는 않으나 화장수, 크림제, 로숀제 및 입욕제 등의 형태를 포함할 수 있다. 화장품 분야에서 통상적으로 사용되는 기제, 보조제 및 첨가제는 특별히 제한되지 않으며, 예를 들면, 물, 알코올, 프로필렌글리콜, 스테아르산, 글리세롤, 세틸알코올 및 유동 파라핀 등을 포함할 수 있다.
The cellulose gel can be used as a component of the cosmetic powder itself or by powdering it. The cellulose gel-containing cosmetic may be prepared in liquid or solid form using bases, adjuvants and additives commonly used in the cosmetic field. Cosmetics in liquid or solid form may include, but are not limited to, for example, cosmetics, creams, lotions, baths and the like. Bases, auxiliaries and additives commonly used in the cosmetic field are not particularly limited and may include, for example, water, alcohols, propylene glycol, stearic acid, glycerol, cetyl alcohol and liquid paraffin.

이하, 본 발명은 다음 실시예에 의거하여 구체적으로 설명하겠는 바, 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.
Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to the following examples, but the present invention is not limited thereto.

실시예 1 : 감귤과실로부터 겔 생산 균주 선발Example 1 Selection of Gel Production Strains from Citrus Fruits

겔 생산균주의 분리를 위하여 감귤 착즙액을 이용하여 15℃에서 정치배양하여 14 일간 자연발효한 후, 에탄올이 첨가된 글루코노박터 옥시단스 평판배지에 도말하여 알콜분해능이 우수한 단일균주를 선발하였다. 이 때 글루코노박터 옥시단스 평판배지의 조성은 10% 글루코스, 1% 효모 추출물, 2% CaCO3, 1.5% 아가, 1% EtOH(pH 6.8)이었다. In order to isolate the gel-producing strains, citrus juice was used to culture at 15 ° C. for 15 days, followed by spontaneous fermentation for 14 days. At this time, the composition of the Glunobacter oxydans plate medium was 10% glucose, 1% yeast extract, 2% CaCO 3 , 1.5% agar, 1% EtOH (pH 6.8).

상기 분리된 단일 균주의 16S rRNA의 전체 염기서열(958 bp, 서열번호 1)을 결정하여(Juke TH, Cantor CR : Evolution of protein molecules. In mammalian protein metabolism, Edited by HN, Munro p21, Academic Press. New York, 1969) 퍼센트 유사도와 계통수를 분석한 결과, 하기 표 2에서 보는 바와 같이 글루콘아세토박터 속 균주들과 99% 이상의 상동성을 나타내었다. 따라서 상기 균주를 글루콘아세토박터 속 (Gluconacetobacter sp.) gel_SEA623-2이라고 명명하였고, 농업유전자원정보센터 미생물은행에 2010년 2월 4일자로 기탁하였다(기탁번호 : KACC 91526P).The entire nucleotide sequence (958 bp, SEQ ID NO: 1) of the isolated single strain 16S rRNA was determined (Juke TH, Cantor CR: Evolution of protein molecules.In mammalian protein metabolism, Edited by HN, Munro p21, Academic Press. New York, 1969) As a result of analyzing the percent similarity and phylogenetic tree, as shown in Table 2, it showed more than 99% homology with the strains of the genus Gluconacetobacter. Therefore, the strain was named Gluconacetobacter sp. Gel_SEA623-2, and was deposited on February 4, 2010 in the Agricultural Genetic Resource Information Center Microbial Bank (Accession Number: KACC 91526P).

표준균주Standard strain 유사도Similarity Ochrobactrum sp. BB-1 Ochrobactrum sp. BB-1 99%(956/958)99% (956/958) Gluconacetobacter kombuchaeGluconacetobacter kombuchae 99%(956/958)99% (956/958) Gluconacetobacter maltiacetiGluconacetobacter maltiaceti 99%(951/958)99% (951/958) Gluconacetobacter persimmonisGluconacetobacter persimmonis 99%(951/958)99% (951/958) Gluconacetobacter entaniiGluconacetobacter entanii 99%(951/958)99% (951/958)

한편, 도 1은 감귤 착즙액의 자연발효액으로부터 분리한 글루콘아세토박터 속 (Gluconacetobacter sp.) gel_SEA623-2 균주의 사진이다. 또한, 도 2는 주사전자현미경으로 상기 균주를 관찰한 사진으로, 상기 균주는 1.5 ~ 3 ㎛ 크기의 간균임을 확인할 수 있었다.
On the other hand, Figure 1 is a photograph of the Gluconacetobacter sp. Gel_SEA623-2 strain isolated from the natural fermentation of citrus juice. In addition, Figure 2 is a photograph of the strain observed with a scanning electron microscope, the strain was confirmed to be 1.5 ~ 3 ㎛ size bacilli.

실험예Experimental Example 1 :  One : 글루콘아세토박터Gluconacetobacter 속 ( Genus ( GluconacetobacterGluconacetobacter spsp .) .) gelgel __ SEA623SEA623 -2 균주의 생화학적 특성Biochemical Properties of -2 Strains

분리 균주의 생화학적 성질을 비교하기 위하여 클루콘아세토박터 리퀘파시엔스(Gluconacetobacter liquefaciens) KACC 12360(=ATCC 14835, IFO 12388), 클루콘아세토박터 한세니(Gluconacetobacter hansenii) KACC 12359(=ATCC 35959, IFO 14820), 글루콘아세토박터 디아조트로피커스(Gluconacetobacter diazotrophicus) KACC 12358(=ATCC 49037), 글루코노박터 옥시단스(Gluconobacter oxydans) KACC 11292(=ATCC 19357, IFO 14819) 및 아세토박터 트로피커스(Acetobacter trophicus) KACC 12236(=IFO 16470)를 한국농업미생물자원센터(KACC)로부터 구입하였고, 글루콘아세토박터 자일리너스(Gluconacetobacter xylinus) subsp. 자일리너스(xylinus) KCCM 40198(=ATCC 23768, IFO 14814), 글루콘아세토박터 자일리너스(Gluconacetobacter xylinus) subsp. 자일리너스(xylinus) KCCM 40231(=ATCC 23767, IFO 15237), 글루콘아세토박터 자일리너스(Gluconacetobacter xylinus) subsp. 자일리너스(xylinus) KCCM 40216(=ATCC 10245, IFO 3173) 및 아세토박터 자일리넘(Acetobacter xylinum) KCCM 40407(=IFO 3288)을 한국종균협회(KCCM)로부터 구입하여 비교하였으며, 이들 기준 균주와 분리 균주의 생화학적 성질을 비교한 결과를 하기 표 3에 나타내었다. To compare the biochemical properties of isolated strains, Gluconacetobacter liquefaciens KACC 12360 (= ATCC 14835, IFO 12388), Gluconacetobacter hansenii KACC 12359 (= ATCC 35959, IFO 14820), Gluconacetobacter diazotrophicus KACC 12358 (= ATCC 49037), Gluconobacter oxydans ( Gluconobacter oxydans ) KACC 11292 (= ATCC 19357, IFO 14819) and Acetobacter trophicus ) KACC 12236 (= IFO 16470) was purchased from Korea Agricultural Microbial Resources Center (KACC), Gluconacetobacter xylinus ) subsp. Xylinus KCCM 40198 (= ATCC 23768, IFO 14814), Gluconacetobacter xylinus ) subsp. Xylinus KCCM 40231 (= ATCC 23767, IFO 15237), Gluconacetobacter xylinus ) subsp. Xylinus KCCM 40216 (= ATCC 10245, IFO 3173) and Acetobacter xylinum xylinum ) KCCM 40407 (= IFO 3288) was purchased from the Korean spawn association (KCCM) and compared, and the results of comparing the biochemical properties of these reference strains and isolated strains are shown in Table 3 below.

KACC 91526P1 ) KACC 91526P 1 ) KACC 123602) KACC 12360 2) KACC 123593) KACC 12359 3) KACC 123584) KACC 12358 4) KACC 112925) KACC 11292 5) KACC 122366) KACC 12236 6) KCCM
401987)
KCCM
40198 7)
KCCM
402318)
KCCM
40231 8)
KCCM
402169)
KCCM
40216 9)
KCCM
4040710)
KCCM
40407 10)
ONPG
(β-galactosidase)
ONPG
(β-galactosidase)
-- -- -- -- -- -- -- -- -- --
아르기닌
데하이드로라아제
Arginine
Dehydrolase
-- -- -- -- -- -- -- ++ -- --
리이신
데카르복시라아제
Lysine
Decarboxylase
-- -- -- -- -- -- -- -- -- --
오르니틴
데카르복시라아제
Ornithine
Decarboxylase
-- -- -- -- -- -- -- -- -- --
구연산 이용Citric acid use -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- H2S 생산H2S production -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- 우라아제Uraase -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- 트립토판
데아미나아제
Tryptophan
Deaminase
-- -- -- -- -- -- -- -- -- --
인돌 생산Indole production -- -- -- -- -- -- -- ++ -- -- VP 테스트VP test -- -- ++ ++ -- ++ ++ -- ++ ++ 젤라틴 액화Gelatin liquefaction -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- 글루코오스로부터 산의 생성Production of Acids from Glucose ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ 만니톨로부터 산의 생성Generation of acid from mannitol -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- 이노시톨로부터 산의 생성Generation of Acids from Inositol -- -- -- -- -- -- -- -- ++ -- 솔비톨로부터 산의 생성Generation of Acids from Sorbitol -- -- -- ++ -- -- -- -- -- -- 람노오스로부터 산의 생성Production of Acids from Rhamnose ++ -- -- ++ -- -- ++ -- ++ ++ 사카로오스로부터 산의 생성Production of acids from saccharose -- ++ -- ++ ++ -- ++ ++ ++ ++ 멜리바이오스로부터 산의 생성Generation of Acids from Melibiose ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ 아미그달린로부터 산의 생성Production of Acids from Amigdaline -- -- -- -- -- -- -- -- ++ -- 아라비노오스로부터 산의 생성Production of acids from arabinose ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ -- ++ ++ NO2 생산NO2 production -- -- -- -- -- ++ -- -- -- -- N2 가스 환원N2 gas reduction -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- cellulose 생산cellulose production ++ -- -- -- -- -- ++ -- -- -- -, 음성; +, 양성
1) Gluconacetobacter sp. gel_SEA623-2
2) Gluconacetobacter liquefaciens
3) Gluconacetobacter hansenii
4) Gluconacetobacter diazotrophicus
5) Gluconobacter oxydans
6) Acetobacter trophicus
7) Gluconacetobacter xylinus subsp. xylinus
8) Gluconacetobacter xylinus subsp. xylinus
9) Gluconacetobacter xylinus subsp. xylinus
10) Acetobacter xylinum
-, voice; +, Positive
1) Gluconacetobacter sp. gel_SEA623-2
2) Gluconacetobacter liquefaciens
3) Gluconacetobacter hansenii
4) Gluconacetobacter diazotrophicus
5) Gluconobacter oxydans
6) Acetobacter trophicus
7) Gluconacetobacter xylinus subsp. xylinus
8) Gluconacetobacter xylinus subsp. xylinus
9) Gluconacetobacter xylinus subsp. xylinus
10) Acetobacter xylinum

상기 실시예 1에서 분리된 글루콘아세토박터 속 gel_SEA623-2 균주는 글루코오스, 람노오스, 멜리바이오스 및 아라비노오스를 이용한 발효에서만 양성 반응을 나타내었으나, 글루콘아세토박터와 아세토박터 속 비교 균주 중 이와 동일한 생화학적 성질을 나타내는 균주는 확인되지 아니하였다.
Gluconacetobacter genus gel_SEA623-2 strain isolated in Example 1 showed a positive reaction only in the fermentation using glucose, rhamnose, melibiose and arabinose, among the compared strains of the genus Gluconacetobacter and acetobacter Strains showing the same biochemical properties were not identified.

실시예 2 : 감귤 착즙액으로부터 셀룰로오스 겔의 제조Example 2 Preparation of Cellulose Gel from Citrus Juices

당도 10 brix, 산도 pH 3.0의 온주밀감 착즙액(10%(v/v))에 상기 실시예 1에서 분리된 글루콘아세토박터 속 SEA623-2 균주를 1 × 105 cell/ml 로 접종하였고, 25℃에서 20일간 호기성 조건에서 정치배양하였다. 그 결과, 균주의 초기 겔 생성 속도가 매우 뛰어나서 배양 2일부터 겔 막이 형성되기 시작하였으며, 20일 경과 후 생성된 감귤 셀룰로오스 겔의 사진을 도 3에 나타내었고, 주사전자현미경으로 관찰한 사진을 도 4에 나타내었다.
Inoculated with SEA623-2 strain of Gluconacetobacter isolated in Example 1 in a sugar juice of 10 brix (10% (v / v)) of pH 10 brix, pH 3.0, 1 × 10 5 cell / ml, Incubated at 25 ° C. for 20 days under aerobic conditions. As a result, the initial gel formation rate of the strain was very excellent, and the gel membrane began to form from day 2 of the culture, and the photo of the citrus cellulose gel produced after 20 days was shown in FIG. 3, and the picture observed by the scanning electron microscope. 4 is shown.

실험예 2 : 기준 균주를 이용한 셀룰로오스 겔의 제조 Experimental Example 2 Preparation of Cellulose Gel Using a Reference Strain

상기 실험예 1에서 비교한 기준 균주를 대상으로 하여 상기 실시예 2와 동일한 조건으로 겔 생성을 유도하였으나, 총 9종의 기준 균주 중에서 오직 글루콘아세토박터 자일리너스 subsp. 자일리너스 KCCM 40198 균주만이 셀룰로오스 겔을 형성하였으며, 나머지 균주는 셀룰로오스 겔이 형성되지 아니하였다(도 5). Gel production was induced under the same conditions as in Example 2 with respect to the reference strain compared in Experimental Example 1, but only Gluconacetobacter xylus subsp. Only Xylus KCCM 40198 strain formed cellulose gel, and the remaining strains did not form cellulose gel (FIG. 5).

그러나 상기 글루콘아세토박터 자일리너스 subsp. 자일리너스 KCCM 40198 균주의 경우에도 배양 3일이 경과된 후에야 겔 막이 형성되기 시작하였으며, 20일 경과 후, 겔의 두께와 물성을 상기 실시예 2의 셀룰로오스 겔과 비교하여 하기 표 4에 나타내었다. 셀룰로오스 겔의 인장강도는 KS규격의 통칙에 따라, XT-RA Stable Micro Systems을 이용하여 25℃에서 측정하였으며, 제조된 감귤 셀룰로오스 겔을 50℃의 오븐에서 완전히 건조시킨 뒤 건조 전후의 질량을 비교하여 수분함량을 측정하였다.However, the gluconacetobacter xylinus subsp. In the case of Xylus KCCM 40198 strain, the gel membrane began to form only after 3 days of culture, and after 20 days, the thickness and physical properties of the gel were compared with those of the cellulose gel of Example 2, and are shown in Table 4 below. Tensile strength of cellulose gel was measured at 25 ° C. using XT-RA Stable Micro Systems according to the KS standard, and the prepared citrus cellulose gel was completely dried in an oven at 50 ° C., and then compared with the mass before and after drying. Moisture content was measured.

Gluconacetobacter sp. gel_SEA623-2
(KACC 91526P)
Gluconacetobacter sp. gel_SEA623-2
(KACC 91526P)
Gluconacetobacter
xylinus subsp. xylinus
(KCCM 40198)
Gluconacetobacter
xylinus subsp. xylinus
(KCCM 40198)
두께(mm)Thickness (mm) 8.08.0 2.52.5 인장강도(N/cm2)Tensile Strength (N / cm 2 ) 11.23 ± 0.3511.23 ± 0.35 18.78 ± 5.4518.78 ± 5.45 수분함량(%)Moisture content (%) 90.2090.20 88.3588.35

상기 표 4에서 보는 바와 같이 셀룰로오스 겔을 형성할 수 있느 글루코아세토박터 자일리너스 subsp. 자일리너스 KCCM 40198 균주의 경우에도 그 두께가 매우 얇고, 겔의 인장강도가 높아 그 상용성이 매우 낮은 것을 확인할 수 있었다.As shown in Table 4, the glucoacetobacter xylinus subsp. In the case of the Xylus KCCM 40198 strain, the thickness thereof was very thin, and the tensile strength of the gel was high.

비교예 : 코코넛으로부터 셀룰로오스 겔의 제조Comparative Example: Preparation of Cellulose Gel from Coconut

셀룰로오스 겔을 제조할 수 있는 균주로 널리 알려진 글루콘아세토박터 자일리너스 subsp. 자일리너스 KCCM 40198를 코코넛 쥬스 89.5 중량%, 설탕 10 중량%, 식초 0.5 중량%로 이루어진 배지조성물(10%(v/v))에 1 × 105 cell/ml 로 접종하고, 25℃에서 20일간 호기성 조건에서 배양하여 코코넛 셀룰로오스 겔을 제조하였으며, 제조된 셀룰로오스 겔을 주사전자현미경으로 관찰한 사진을 도 6에 나타내었다.
Gluconacetobacter xylinus subsp., Widely known as a strain capable of producing cellulose gels. Xylus KCCM 40198 was inoculated at 1 × 10 5 cell / ml in a medium composition (10% (v / v)) consisting of 89.5% by weight of coconut juice, 10% by weight of sugar and 0.5% by weight of vinegar, and at 25 ° C. for 20 days. Coconut cellulose gel was prepared by culturing in aerobic conditions, and the photograph of observing the prepared cellulose gel with a scanning electron microscope is shown in FIG. 6.

상기 도 6에서 보는 바와 같이 본 발명의 감귤 셀룰로오스 겔은 섬유의 굵기가 가늘고, 섬유 다발이 불규칙적으로 뭉쳐져 있기 때문에 섬유 사이의 공간이 도 6의 코코넛 셀룰로오스 겔(100 ~ 250 nm)에 비하여 250 ~ 500 nm 정도로 크게 나타나는 것을 확인할 수 있었다. 이를 토대로 본 발명의 셀룰로오스 겔은 밀도가상대적으로 낮아 제형이 용이하므로 마스크팩, 로션, 크림 등의 향장 소재로 활용하기 쉬운 특징을 나타내는 것으로 확인하였다.As shown in FIG. 6, the citrus cellulose gel of the present invention has a thin fiber and irregularly bundles of fibers, so that the space between the fibers is 250 to 500 compared to the coconut cellulose gel (100 to 250 nm) of FIG. 6. It was confirmed that the appearance was large as nm. Based on this, the cellulose gel of the present invention was relatively low in density, and thus easy to formulate. Thus, it was confirmed that the cellulose gel exhibited characteristics that could be easily used as a cosmetic material such as a mask pack, lotion, or cream.

또한 코코넛 셀룰로오스 겔에는 단백질 덩어리로 보여지는 성분이 다량으로 섬유 다발에 붙어있으나, 감귤 셀룰로오스 겔에서는 이러한 성분이 거의 나타나지 아니한 바, 보다 순수한 상태의 셀룰로오스 겔을 제조할 수 있음을 확인할 수 있었다.
In addition, the coconut cellulose gel has a large amount of components shown as protein lumps attached to the fiber bundles. However, in the citrus cellulose gel, these components were hardly shown. Thus, it was confirmed that a more pure cellulose gel could be prepared.

실시예 3 : 과즙 배지로부터 셀룰로오스 겔의 제조Example 3 Preparation of Cellulose Gel from Juice Medium

한편, 당도 10 brix, 산도 pH 3.2의 오렌지 착즙액(10%(v/v)), 당도 10 brix, 산도 pH 2.7의 자몽 착즙액(10%(v/v)), 당도 10 brix, 산도 pH 3.0의 배 착즙액, 당도 10 brix, 산도 pH 3.0의 사과 착즙액에 상기 글루콘아세토박터 속 gel_SEA623-2 균주를 접종하여 동일하게 배양하여 겔을 제조하였으며(도 7), 그 20일 경과 후의 두께를 비교하여 하기 표 5 및 도 8에 나타내었다. On the other hand, orange juice (10% (v / v)) with a sugar content of 10 brix, pH 3.2, grapefruit juice (10% (v / v)) with a sugar content of 10 brix, pH 2.7, 10 brix, pH pH Inoculated with the gluconacetobacter genus gel_SEA623-2 strain in apple juice of 3.0 times, juice of 10 brix, acidity pH 3.0 was prepared in the same culture (Fig. 7), the thickness after 20 days It is shown in Table 5 and FIG.

과즙 배지Juicer badge 온주밀감Wenzhou Citrus 오렌지Orange 자몽grapefruit ship 사과Apple 두께(mm)Thickness (mm) 8.08.0 7.77.7 5.95.9 6.16.1 1.01.0

상기 표 5 및 도 8에서 보는 바와 같이 여러 과즙 배지로부터 일정 두께의 셀룰로오스 겔을 제조할 수 있었으며, 특히 온주밀감 착즙액으로부터 가장 두꺼운 셀룰로오스 겔을 제조할 수 있음을 확인할 수 있었다.
As shown in Table 5 and Figure 8 it was able to produce a cellulose gel of a certain thickness from a number of juice medium, in particular, it can be confirmed that the thickest cellulose gel can be prepared from the juice of Wenju juice.

실시예 4 : 감귤 착즙액의 pH에 따른 겔의 생성 확인Example 4: Confirmation of gel formation according to pH of citrus juice

상기 온주밀감의 착즙액의 pH를 NaOH, 아세트산으로 조절하여 pH 2.0, 2.5, 3.0, 3.5, 4.0, 5.0 으로 달리하는 것을 제외하고는 실시예 2와 동일하게 겔을 제조하여 생성되는 겔의 두께를 측정하였으며, 그 결과를 표 6 및 도 9 ~ 10에 나타내었다. The thickness of the gel produced by preparing the gel in the same manner as in Example 2, except that the pH of the juice of the Wenzhou persimmon juice is adjusted to NaOH, acetic acid to change to pH 2.0, 2.5, 3.0, 3.5, 4.0, 5.0 It measured, and the result is shown in Table 6 and FIGS.

온주밀감 착즙액의 pHPH of Wenju juice 2.02.0 2.52.5 3.03.0 3.53.5 4.04.0 5.05.0 두께(mm)Thickness (mm) 0.00.0 6.16.1 8.08.0 7.47.4 7.07.0 5.25.2

상기 표 6에서 보는 바와 같이, pH 3.0 ~ 3.5 부근에서 셀룰로오스 겔이 가장 두껍게 생성되는 것을 확인할 수 있었다.
As shown in Table 6, it was confirmed that the cellulose gel is formed thickest in the vicinity of pH 3.0 ~ 3.5.

실시예 5 : 감귤 착즙액의 당도에 따른 겔의 생성 확인Example 5: Confirmation of gel formation according to the sugar content of citrus juice

상기 온주밀감의 착즙액의 당도를 설탕으로 조절하여 1, 5, 10, 20, 30 brix로 달리하는 것을 제외하고는 실시예 2와 동일하게 겔을 제조하여 생성되는 겔의 두께를 측정하였으며, 그 결과를 표 7 및 도 11 ~ 12에 나타내었다. The thickness of the gel produced by measuring the gel was produced in the same manner as in Example 2 except that the sugar content of the juice of Wenju citrus was adjusted to 1, 5, 10, 20, 30 brix. The results are shown in Table 7 and FIGS. 11 to 12.

감귤 착즙액 배지 당도(brix)Citrus juice medium sugar 1One 55 1010 2020 3030 두께(mm)Thickness (mm) 2.12.1 5.45.4 8.08.0 5.25.2 5.45.4

상기 표 7에서 보는 바와 같이, 1 ~ 30 brix 범위에서는 셀룰로오스 겔이 잘 생성될 수 있음을 확인할 수 있었다.
As shown in Table 7, it was confirmed that the cellulose gel can be produced well in the range of 1 to 30 brix.

실시예 6 : 배양온도에 따른 겔의 생성 확인Example 6: Confirmation of gel production according to the culture temperature

배양시의 온도를 20, 30, 35, 40℃로 달리하는 것을 제외하고는 실시예 2와 동일하게 겔을 제조하여 생성되는 겔의 두께를 측정하였으며, 그 결과를 표 8 및 도 13 ~ 14에 나타내었다. Except for varying the temperature at 20, 30, 35, 40 ℃ in the culture was prepared in the same manner as in Example 2 to measure the thickness of the gel produced, the results are shown in Table 8 and 13 to 14 Indicated.

배양 온도(℃)Incubation temperature (℃) 2020 3030 3535 4040 두께(mm)Thickness (mm) 8.38.3 9.39.3 7.77.7 0.00.0

상기 표 8에서 보는 바와 같이, 20 ~ 30℃ 부근에서 셀룰로오스 겔이 가장 두껍게 생성되는 것을 확인할 수 있었다.
As shown in Table 8, it was confirmed that the cellulose gel is produced thickest in the vicinity of 20 ~ 30 ℃.

실시예 7 : 감귤박으로부터 감귤 셀룰로오스 겔의 제조Example 7 Preparation of Citrus Cellulose Gel from Citrus Foil

온주밀감의 착즙 후 부산물로 생성되는 박 50 kg에 상용중인 Pectinex 100L, Viscozyme L 효소를 각각 100 g 접종하여 50℃에서 10시간동안 발효시켜 발효액을 얻었다. 상기 발효액의 당도와 산도를 측정한 결과 각각 12 brix, pH 3.5 임을 확인하였다. 100 g of commercially available Pectinex 100L and Viscozyme L enzymes were inoculated into 50 kg of gourd produced by the juice of Wenju citrus persimmon and fermented at 50 ° C. for 10 hours to obtain a fermentation broth. As a result of measuring the sugar and acidity of the fermentation broth it was confirmed that the 12 brix, pH 3.5.

상기 발효액 10%(v/v)에 실시예 1에서 분리된 글루콘아세토박터 속gel_SEA623-2 균주를 1 × 105 cell/ml 로 접종하였고, 25℃에서 20일간 호기성 조건에서 정치배양하였다. 20일 경과 후 생성된 감귤 셀룰로오스 겔의 사진을 도 15에 나타내었으며, 시간에 따른 겔의 두께를 도 16에 나타내었다. Gluconacetobacter genus gel_SEA623-2 strain isolated in Example 1 was inoculated at 10% (v / v) of the fermentation broth at 1 × 10 5 cell / ml, and cultured at 25 ° C. for 20 days under aerobic conditions. A photo of the citrus cellulose gel produced after 20 days has been shown in FIG. 15, and the thickness of the gel over time is shown in FIG. 16.

상기 도 15에서 보는 바와 같이, 온주밀감 박의 발효액으로부터 gel_SEA623-2 균주를 이용하여 셀룰로오스 겔을 제조할 수 있으며, 그 겔의 두께도 약 8.0 mm 에 달하여, 착즙액 자체를 사용한 경우와 크게 차이가 나지 아니하였다.
As shown in FIG. 15, a cellulose gel may be prepared from the fermentation broth of Wenju's persimmon foil using gel_SEA623-2 strain, and the thickness of the gel reaches about 8.0 mm, which is significantly different from that of the juice solution itself. Not me.

실험예 3 : 셀룰로오스 겔의 물성 측정Experimental Example 3 Measurement of Physical Properties of Cellulose Gel

상기 실시예 2 및 5에 의하여 제조된 감귤 셀룰로오스 겔의 인장강도를 KS규격의 통칙에 따라, XT-RA Stable Micro Systems을 이용하여 25℃에서 측정하였다. 또한 제조된 감귤 셀룰로오스 겔을 50℃의 오븐에서 완전히 건조시킨 뒤 건조 전후의 질량을 비교하여 수분함량을 측정하였다. 각 실시예에서 제조된 겔의 물성 측정 결과를 하기 표 9 ~ 12에 나타내었다. The tensile strength of the citrus cellulose gels prepared in Examples 2 and 5 was measured at 25 ° C. using XT-RA Stable Micro Systems in accordance with the KS standard. In addition, the prepared citrus cellulose gel was completely dried in an oven at 50 ° C., and the moisture content was measured by comparing the mass before and after drying. The physical property measurement results of the gel prepared in each example are shown in Tables 9 to 12 below.

과즙 배지Juicer badge 온주밀감Wenzhou Citrus 오렌지Orange 자몽grapefruit ship 사과Apple 인장강도
(N/cm2)
The tensile strength
(N / cm 2 )
11.23±0.3511.23 ± 0.35 4.87±1.454.87 ± 1.45 3.09±0.903.09 ± 0.90 2.76±0.452.76 ± 0.45 --
수분함량(%)Moisture content (%) 90.2090.20 88.0288.02 83.2383.23 89.4389.43 --

온주밀감 착즙액의 pHPH of Wenju juice 2.02.0 2.52.5 3.03.0 3.53.5 4.04.0 5.05.0 인장강도
(N/cm2)
The tensile strength
(N / cm 2 )
-- 6.98±0.396.98 ± 0.39 11.23±0.3511.23 ± 0.35 15.25±0.3415.25 ± 0.34 17.51±0.3417.51 ± 0.34 8.94±0.228.94 ± 0.22
수분함량
(%)
Water content
(%)
-- 90.6090.60 90.2090.20 88.2088.20 87.6287.62 93.0693.06

감귤 착즙액 배지 당도(brix)Citrus juice medium sugar 55 1010 2020 3030 인장강도
(N/cm2)
The tensile strength
(N / cm 2 )
17.46±0.4417.46 ± 0.44 11.23±0.3511.23 ± 0.35 7.78±0.627.78 ± 0.62 3.82±0.603.82 ± 0.60
수분함량(%)Moisture content (%) 90.2390.23 90.2090.20 86.4286.42 85.4685.46

배양 온도(℃)Incubation temperature (℃) 2020 3030 3535 4040 인장강도
(N/cm2)
The tensile strength
(N / cm 2 )
29.48±0.4129.48 ± 0.41 13.06±0.7013.06 ± 0.70 4.687±0.594.687 ± 0.59 --
수분함량(%)Moisture content (%) 93.5893.58 90.3290.32 90.5290.52 --

상기 표 9 ~ 12에서 보는 바와 같이 본 발명의 셀룰로오스 겔은 80% 이상의 높은 수분함량을 가지는 것을 확인할 수 있으며, 상용화된 바이오 셀룰로오스 겔에 비하여 낮은 인장강도를 나타내어 소프트한 성질을 나타내고 있음을 알 수 있었다. As shown in Tables 9 to 12, it can be seen that the cellulose gel of the present invention has a high water content of 80% or more, and exhibits a soft property by showing low tensile strength as compared with commercially available bio cellulose gel. .

한편, 비교예에 의해 제조된 코코넛 셀룰로오스 겔과 실시예 6에 의한 감귤박으로부터 제조된 셀룰로오스 겔의 경우도 상기와 동일한 방법으로 인장강도와 수분함량을 측정하였으며, 그 결과를 하기 표 13에 나타내었다. On the other hand, in the case of the coconut cellulose gel prepared by the comparative example and the cellulose gel prepared from the citrus foil according to Example 6 was also measured in the same manner as above the tensile strength and water content, the results are shown in Table 13 below .

비교예Comparative example 감귤박 셀룰로오스 겔Citrus Foil Cellulose Gel pectinex
처리 발효액
pectinex
Treated Fermentation Broth
viscozyme
처리 발효액
viscozyme
Treated Fermentation Broth
인장강도
(N/cm2)
The tensile strength
(N / cm 2 )
63.87±0.2663.87 ± 0.26 8.95±1.268.95 ± 1.26 11.89±1.1111.89 ± 1.11
수분함량
(%)
Water content
(%)
88.5488.54 90.6990.69 90.1590.15

상기 표 13에서 보는 바와 같이 감귤박 발효액을 배지로 하여 겔을 제조한 경우에도 감귤 착즙액을 사용한 경우와 유사한 물성을 나타내는 셀룰로오스 겔을 제조할 수 있음을 확인할 수 있었다.
As shown in Table 13, even when the gel was prepared using the citrus fruit fermentation broth as a medium, it was confirmed that a cellulose gel having similar physical properties as in the case of using the citrus juice could be prepared.

실험예Experimental Example 4 : 셀룰로오스  4: cellulose 겔의Gel 인장강도에At tensile strength 따른  According 마쇄Grinding 물성 Properties

상기 실시예 2에서 제조된 셀룰로오스 겔과 인장강도가 20 N/cm2 를 초과하는 셀룰로오스 겔의 마쇄 후 물성을 확인하기 위하여 10,000 rpm 의 블렌더를 이용하여 30초 동안 제조된 셀룰로오스 겔을 마쇄하였으며, 그 결과를 도 17에 나타내었다. In order to check the physical properties of the cellulose gel prepared in Example 2 and the cellulose gel having a tensile strength of more than 20 N / cm 2 after grinding, the prepared cellulose gel was ground for 30 seconds using a blender of 10,000 rpm. The results are shown in FIG.

도 17에서 보는 바와 같이, 실시예 2의 셀룰로오스 겔은 45 ㎛ 이하의 입자크기로 조절되었으나, 인장강도가 20 N/cm2 를 초과하는 경우에는 이러한 입자 크기 조절이 불가능하였다. 따라서 본 발명의 감귤 셀룰로오스 겔은 ㎛ 단위의 입자로 마쇄 가능하므로 크림 형태의 향장 소재로 널리 사용될 수 있으며, 다양한 제형으로 응용될 수 있다.
As shown in FIG. 17, the cellulose gel of Example 2 was adjusted to a particle size of 45 μm or less, but when the tensile strength exceeded 20 N / cm 2 , such particle size control was impossible. Therefore, the citrus cellulose gel of the present invention can be widely used as a cosmetic material in the form of a cream because it can be ground into particles of a micrometer unit, it can be applied in various formulations.

농업생명공학연구원Institute of Agricultural Biotechnology KACC91526KACC91526 2010020420100204

<110> REPUBLIC OF KOREA(MANAGEMENT: RURAL DEVELOPMENT ADMINISTRATION) <120> A novel strain of Gluconacetobacter sp. gel_SEA623-2 from citrus juice and cellulose gel by using it <160> 1 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 958 <212> DNA <213> Gluconacetobacter sp. gel_SEA623-2 <400> 1 tgggtggggg ataactttgg gaaactgaag ctaataccgc atgacacctg agggtcaaag 60 gcgcgagtcg cctgtggagg aacctgcgtt cgattagcta gttggtgggg taaaggccta 120 ccaaggcgat gatcgatagc tggtctgaga ggatgatcag ccacactggg actgagacac 180 ggcccagact cctacgggag gcagcagtgg ggaatattgg acaatgggcg caagcctgat 240 ccagcaatgc cgcgtgtgtg aagaaggttt tcggattgta aagcactttc agcggggacg 300 atgatgacgg tacccgcaga agaagccccg gctaacttcg tgccagcagc cgcggtaata 360 cgaagggggc aagcgttgct cggaatgact gggcgtaaag ggcgcgtagg cggttgttac 420 agtcagatgt gaaattcccg ggcttaacct gggggctgca tttgatacgt gacgactaga 480 gtgtgagaga gggttgtgga attcccagtg tagaggtgaa attcgtagat attgggaaga 540 acaccggtgg cgaaggcggc aacctggctc atgactgacg ctgaggcgcg aaagcgtggg 600 gagcaaacag gattagatac cctggtagtc cacgctgtaa acgatgtgtg ctggatgttg 660 gatggcttgg ccattcagtg tcgtagttaa cgcgataagc acaccgcctg gggagtacgg 720 ccgcaaggtt gaaactcaaa ggaattgacg ggggcccgca caagcggtgg agcatgtggt 780 ttaattcgaa gcaacgcgca gaaccttacc aggacttgac atgcggaggc tgtgtccaga 840 gatgggcatt tctcgcaaga gacctccagc acaggtgctg catggctgtc gtcagctcgt 900 gtcgtgagat gttgggttaa gtcccgcaac gagcgcaacc ctcgccttta gttgccag 958 <110> REPUBLIC OF KOREA (MANAGEMENT: RURAL DEVELOPMENT ADMINISTRATION) <120> A novel strain of Gluconacetobacter sp. gel_SEA623-2 from citrus          juice and cellulose gel by using it <160> 1 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 958 <212> DNA <213> Gluconacetobacter sp. gel_SEA623-2 <400> 1 tgggtggggg ataactttgg gaaactgaag ctaataccgc atgacacctg agggtcaaag 60 gcgcgagtcg cctgtggagg aacctgcgtt cgattagcta gttggtgggg taaaggccta 120 ccaaggcgat gatcgatagc tggtctgaga ggatgatcag ccacactggg actgagacac 180 ggcccagact cctacgggag gcagcagtgg ggaatattgg acaatgggcg caagcctgat 240 ccagcaatgc cgcgtgtgtg aagaaggttt tcggattgta aagcactttc agcggggacg 300 atgatgacgg tacccgcaga agaagccccg gctaacttcg tgccagcagc cgcggtaata 360 cgaagggggc aagcgttgct cggaatgact gggcgtaaag ggcgcgtagg cggttgttac 420 agtcagatgt gaaattcccg ggcttaacct gggggctgca tttgatacgt gacgactaga 480 gtgtgagaga gggttgtgga attcccagtg tagaggtgaa attcgtagat attgggaaga 540 acaccggtgg cgaaggcggc aacctggctc atgactgacg ctgaggcgcg aaagcgtggg 600 gagcaaacag gattagatac cctggtagtc cacgctgtaa acgatgtgtg ctggatgttg 660 gatggcttgg ccattcagtg tcgtagttaa cgcgataagc acaccgcctg gggagtacgg 720 ccgcaaggtt gaaactcaaa ggaattgacg ggggcccgca caagcggtgg agcatgtggt 780 ttaattcgaa gcaacgcgca gaaccttacc aggacttgac atgcggaggc tgtgtccaga 840 gatgggcatt tctcgcaaga gacctccagc acaggtgctg catggctgtc gtcagctcgt 900 gtcgtgagat gttgggttaa gtcccgcaac gagcgcaacc ctcgccttta gttgccag 958

Claims (18)

셀룰로오스 겔을 제조하는데 사용되는 것을 특징으로 하는 신규의 글루콘아세토박터 속(Gluconacetobacter sp.) gel_SEA623-2 균주(KACC 91526P).
Novel Gluconacetobacter, characterized in that it is used to make cellulose gels sp.) gel_SEA623-2 strain (KACC 91526P).
제 1 항에 있어서, 상기 균주는 감귤로부터 분리된 것을 특징으로 하는 글루콘아세토박터 속 gel_SEA623-2 균주.
The method of claim 1, wherein the strain Gluconacetobacter genus gel_SEA623-2, characterized in that isolated from citrus fruits.
제 1 항에 있어서, 상기 균주는 과즙으로부터 셀룰로오스 겔을 생산하는 것을 특징으로 하는 글루콘아세토박터 속 gel_SEA623-2 균주.
The method of claim 1, wherein the strain is gluconacetobacter genus gel_SEA623-2, characterized in that for producing cellulose gel from the juice.
제 3 항에 있어서, 상기 과즙은 감귤 착즙액 또는 감귤박 발효액인 것을 특징으로 하는 글루콘아세토박터 속 gel_SEA623-2 균주.
According to claim 3, wherein the juice is Gluconacetobacter genus gel_SEA623-2 strain, characterized in that the citrus juice or citrus gourd fermentation.
과즙 배지에 제 1 항의 균주를 접종하여 셀룰로오스 겔을 제조하는 것을 특징으로 하는 셀룰로오스 겔의 제조방법.
A method for producing a cellulose gel, comprising inoculating the strain of claim 1 in a juice medium to prepare a cellulose gel.
제 5 항에 있어서, 상기 과즙 배지는 pH 2.5 ~ 5.0 범위에 있는 것을 특징으로 하는 셀룰로오스 겔의 제조방법.
The method of claim 5, wherein the juice medium is a method of producing a cellulose gel, characterized in that in the range of pH 2.5 ~ 5.0.
제 6 항에 있어서, 상기 과즙 배지는 pH 3.0 ~ 4.0 범위에 있는 것을 특징으로 하는 셀룰로오스 겔의 제조방법.
The method of claim 6, wherein the juice medium is a method for producing a cellulose gel, characterized in that in the range of pH 3.0 ~ 4.0.
제 5 항에 있어서, 상기 과즙 배지는 당도가 1 ~ 30 brix 범위에 있는 것을 특징으로 하는 셀룰로오스 겔의 제조방법.
6. The method of claim 5, wherein the juice medium has a sugar content in the range of 1 to 30 brix.
제 5 항에 있어서, 상기 과즙 배지는 감귤 착즙액인 것을 특징으로 하는 셀룰로오스 겔의 제조방법.
6. The method of claim 5, wherein the juice medium is a citrus juice.
제 5 항에 있어서, 상기 과즙 배지는 감귤의 착즙 후 생성되는 박에 당분해효소를 처리하고 발효시켜 얻은 발효액인 것을 특징으로 하는 셀룰로오스 겔의 제조방법.
6. The method of claim 5, wherein the juice medium is a fermentation broth obtained by treating and fermenting a glycolytic enzyme on a gourd produced after the tangerine juice.
제 5 항에 있어서, 상기 균주는 25 ~ 35℃, pH 2.5 ~ 5.0 조건에서 전배양된 것을 사용하는 것을 특징으로 하는 셀룰로오스 겔의 제조방법.
The method of claim 5, wherein the strain is a method for producing a cellulose gel, characterized in that using the pre-cultured at 25 ~ 35 ℃, pH 2.5 ~ 5.0 conditions.
제 5 항에 있어서, 상기 균주를 배지에 접종하고 20 ~ 30 ℃에서 7 ~ 21일 동안 배양하는 것을 특징으로 하는 셀룰로오스 겔의 제조방법.
6. The method of claim 5, wherein the strain is inoculated into the medium and cultured for 7 to 21 days at 20 to 30 ℃.
제 9 항 또는 제 10 항에 있어서, 상기 감귤은 온주밀감, 한라봉, 금귤 및 진지향 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 셀룰로오스 겔의 제조방법.
The method of claim 9 or 10, wherein the tangerine is a method of producing a cellulose gel, characterized in that selected from Wenzhou persimmon, Hallabong, kumquat and true flavor.
제 5 항 내지 제 12 항 중에서 선택된 어느 한 항의 제조방법에 의하여 제조된 셀룰로오스 겔.
A cellulose gel prepared by the method of any one of claims 5 to 12.
제 14 항에 있어서, 상기 셀룰로오스 겔은 그 두께가 5 ~ 20 mm 범위에 있는 것을 특징으로 하는 셀룰로오스 겔.
15. The cellulose gel of claim 14, wherein the cellulose gel has a thickness in the range of 5-20 mm.
제 14 항에 있어서, 상기 셀룰로오스 겔은 인장강도가 5 ~ 30 N/cm2 범위에 있는 것을 특징으로 하는 셀룰로오스 겔.
15. The cellulose gel of claim 14, wherein the cellulose gel has a tensile strength in the range of 5 to 30 N / cm 2 .
제 14 항에 있어서, 상기 셀룰로오스 겔은 70 ~ 95 중량%의 수분을 함유하는 것을 특징으로 하는 셀룰로오스 겔.
15. The cellulose gel of claim 14, wherein the cellulose gel contains 70 to 95 weight percent moisture.
제 14 항에 있어서, 상기 셀룰로오스 겔은 향장용 크림으로 제조되는 것을 특징으로 하는 셀룰로오스 겔.15. The cellulose gel of claim 14, wherein the cellulose gel is made of a cosmetic cream.
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