KR20110136558A - Cosmetic composition containing mycelial culture broth of mushrooms - Google Patents

Cosmetic composition containing mycelial culture broth of mushrooms Download PDF

Info

Publication number
KR20110136558A
KR20110136558A KR1020100056648A KR20100056648A KR20110136558A KR 20110136558 A KR20110136558 A KR 20110136558A KR 1020100056648 A KR1020100056648 A KR 1020100056648A KR 20100056648 A KR20100056648 A KR 20100056648A KR 20110136558 A KR20110136558 A KR 20110136558A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
weight
mycelium
cosmetic composition
mushroom
cordyceps sinensis
Prior art date
Application number
KR1020100056648A
Other languages
Korean (ko)
Other versions
KR101214872B1 (en
Inventor
김윤정
손지현
이현상
Original Assignee
(주)에이씨티
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by (주)에이씨티 filed Critical (주)에이씨티
Priority to KR1020100056648A priority Critical patent/KR101214872B1/en
Publication of KR20110136558A publication Critical patent/KR20110136558A/en
Application granted granted Critical
Publication of KR101214872B1 publication Critical patent/KR101214872B1/en

Links

Images

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/97Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
    • A61K8/9728Fungi, e.g. yeasts
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61QSPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00Preparations for care of the skin
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61QSPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08Anti-ageing preparations
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/80Process related aspects concerning the preparation of the cosmetic composition or the storage or application thereof
    • A61K2800/805Corresponding aspects not provided for by any of codes A61K2800/81 - A61K2800/95

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

PURPOSE: A cosmetic composition containing mushroom mycelium culture liquid is provided to promote hyaluronan synthase-3 and to improve anti-wrinkling and moisturizing. CONSTITUTION: A cosmetic composition contains 0.01-30 wt% of mixture mycelium culture liquid of red koji, Cordyceps sinensis Sacc, and Sparassis crispa Wulf.:Fr. The mycelium culture liquid is prepared by culturing the mycelium of red koji, Cordyceps sinensis Sacc, and Sparassis crispa Wulf.:Fr. in a liquid medium containing 1-3 wt% of maltose, 0.5-2 wt% of peptone, 0.01-1 wt% of calcium chloride, 1-3 wt% of magnesium chloride, 0.1-0.5 wt% of ferric chloride, 0.1-0.5 wt% of citric acid, 0.005-0.2 wt% of manganese sulfate, 0.05-0.2 wt% of sulfate zinc, 1-5 wt% of monobasic potassium phosphate, 5-10 wt% of sodium monohydrogen phosphate, and 0.5-2 wt% of sodium sulfate.

Description

버섯균사체 배양액을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물{Cosmetic composition containing Mycelial Culture Broth of Mushrooms} Cosmetic composition containing mycelial culture broth as an active ingredient {Cosmetic composition containing Mycelial Culture Broth of Mushrooms}

본 발명은 버섯 균사체 배양액을 함유하는 화장료조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 홍국, 동충하초, 꽃송이버섯의 균사체를 배지에 접종하여 배양한 버섯 균사체 배양액을 유효성분으로 함유하여 피부주름을 개선하며, 보습 및 피부재생촉진 등의 활성을 가지는 화장료조성물에 관한 것이다.  The present invention relates to a cosmetic composition containing a mushroom mycelium culture medium, more specifically, mycelium cultured by inoculating the mycelium of hongguk, Cordyceps sinensis, zinnia mushroom in the medium as an active ingredient to improve skin wrinkles, moisturizing And it relates to a cosmetic composition having an activity such as promoting skin regeneration.

인간은 성과 나이를 떠나서 청결, 미용, 피부 관리를 위해 화장품을 사용하고 있으며 더 나아가서는 아름다움을 표현하기위해 화장품을 이용하여 피부에 변화를 주고 있다. 따라서 화장품의 기능은 점차적으로 향상되고 있으며 산업이 발전함에 따라 화장품이 고급스러워지며 다양해져가고 있다. 화장품 산업이 커져가면서 인간에게 해롭지 않은 안전한 물질을 사용하고자 하였으며 특히, 천연물과 약용식물을 포함한 천연소재가 개발되고 있다. Humans are using cosmetics for cleanliness, beauty, and skin care regardless of their sex and age, and furthermore, cosmetics are used to change the skin to express beauty. Therefore, the function of cosmetics is gradually improving, and as the industry develops, cosmetics become more luxurious and diversified. As the cosmetics industry grows, it is trying to use safe materials that are not harmful to humans. In particular, natural materials including natural products and medicinal plants are being developed.

인간은 오래 전부터 버섯을 음식뿐 아니라 항생제, 비타민, 항암제 등의 다양한 분야에 사용하고 있으며 버섯의 우수한 효능은 화장품에도 적용되고 있다. 버섯 유래 다당류의 β-글루칸은 피부 화상 및 상처 치유에 필수적인 피부 세포 성장인자의 생성을 촉진해주며 피부세포 성장 인자는 콜라겐의 생합성을 촉진하여 피부재생 능력을 증가시킨다는 것이 입증되었다. 또한, 피부의 수분 보유능이 좋고, 피부의 탄력성을 유지 시켜주는 역할까지 하는 것으로 알려져 있다. 대한민국 특허출원 1999-4497호에는 치마버섯(Schizophyllum commune) 다당체인 베타-1,6-분지 베타-1,3-글루칸을 함유하는 보습화장료 조성물이 개시되어 있으며, 대한민국 특허출원 2003-73323호에는 차가버섯(Inonotus obliquus) 추출물을 함유하는 주름개선 화장료 조성물이 개시되어 있으며, 대한민국 특허출원 2001-10171호에는 상황버섯(Phellinus linteus) 추출물을 함유하는 미백화장료가 개시되어 있다. 그 외에 대한민국 특허출원 2003-24042호에는 노루궁뎅이버섯(Hericium erinaceus) 자실체 추출물을 함유하는 피부노화 방지 및 미백, 피부손상완화용 외용제 조성물이, 10-2008-0090160에는 망목주름담홍버섯 액체배양 추출물을 함유하는 주름개선 화장료 조성물이 개시되어 있다.Humans have long used mushrooms not only in food but also in various fields such as antibiotics, vitamins and anticancer drugs. The β-glucan of mushroom-derived polysaccharides has been shown to promote the production of skin cell growth factors essential for skin burns and wound healing, and skin cell growth factors promote collagen biosynthesis to increase skin regeneration ability. In addition, the skin's moisture retention ability is known to play a role in maintaining the elasticity of the skin. Korean Patent Application No. 1999-4497 discloses a moisturizing cosmetic composition containing beta-1,6-branched beta-1,3-glucan, a polysaccharide (Schizophyllum commune), and Korean Patent Application No. 2003-73323 discloses Wrinkle improvement cosmetic composition containing a mushroom (Inonotus obliquus) extract is disclosed, the Korean Patent Application No. 2001-10171 discloses a whitening cosmetics containing the extract (Phellinus linteus). In addition, Korean Patent Application No. 2003-24042 discloses an external preparation composition for skin aging prevention and whitening and skin damage alleviation containing Hericium erinaceus fruiting body extract. The wrinkle improvement cosmetic composition containing is disclosed.

그러나 자실체의 경우 배양 조건 및 서식지에 따라 그 성분이 변화하기 때문에 실제 산업화하기 위해서는 가능한 배양조건 및 생산량, 그리고 효능을 일정하게 조절할 수 있는 액체상태의 균사체 배양을 통해 주름을 억제할 수 있는 물질을 개발할 필요성이 대두되고 있다. 이에 본 발명자들은 통상적으로 알려진 버섯 이외에 국내에서 자생하고 있는 다양한 버섯류를 활용하여 산업화 가능한 물질을 탐색하던 중에 홍국, 동충하초 및 꽃송이버섯 균사체를 특정배지에서 혼합배양하는 경우에 화장료 조성물에 유용하게 사용될 수 있음을 발견하여 본 발명을 완성하였다.However, in the case of fruiting bodies, their composition changes according to the culture conditions and habitats. Therefore, in order to industrialize, it is necessary to develop a substance that can suppress wrinkles by cultivating liquid mycelium that can control the possible culture conditions, yield, and efficacy. Necessity is emerging. Therefore, the inventors of the present invention can be usefully used in cosmetic compositions in the case of mixing culture of red yeast, Cordyceps sinensis and zinnia mushroom mycelium in a specific medium while searching for industrializable materials using various mushrooms native to Korea in addition to commonly known mushrooms The present invention was completed by finding out.

본 발명은 홍국, 동충하초 및 꽃송이버섯의 균사체를 배지에 접종하여 배양한 버섯 균사체 배양액을 함유하는 화장료조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.It is an object of the present invention to provide a cosmetic composition containing a mushroom mycelium culture medium inoculated with a mycelium of red yeast rice, Cordyceps sinensis and zinnia mushroom in a medium.

또한 본 발명은 상기 화장료 조성물에 유효성분으로 함유되는 버섯 균사체 배양액의 제조방법을 제공하는 것을 다른 목적으로 한다.In another aspect, the present invention is to provide a method for producing a mushroom mycelia culture solution contained in the cosmetic composition as an active ingredient.

상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명에 따르면, 홍국, 동충하초 및 꽃송이버섯의 균사체 배양액을 화장료조성물 전 중량에 대하여 0.01~30중량% 함유하는 화장료 조성물이 제공된다. 상기 균사체 배양액은 홍국, 동충하초 및 꽃송이버섯의 혼합 균사체를 말토우스 1 내지 3 중량%, 펩톤 0.5 내지 2 중량%, 염화칼슘 0.01 내지 1 중량%, 염화마그네슘 1 내지 3 중량%, 염화철 0.1 내지 0.5 중량%, 시트릭엑시드 0.1 내지 0.5 중량%, 황산망간 0.005 내지 0.2 중량%, 황산아연 0.05 내지 0.2 중량%, 인산이수소칼륨 1 내지 5 중량%, 인산일수소나트륨 5 내지 10 중량%, 황산나트륨 0.5 내지 2 중량%를 함유하는 액체배지에서 배양하여 얻어진 것임을 특징으로 한다.According to the present invention to achieve the above object, there is provided a cosmetic composition containing 0.01 ~ 30% by weight of the mycelium culture solution of red yeast rice, Cordyceps sinensis and blossom mushroom relative to the total weight of the cosmetic composition. The mycelium culture medium is mixed mycelium of red yeast rice, Cordyceps sinensis and zinnia mushroom 1 to 3% by weight of maltose, 0.5 to 2% by weight peptone, 0.01 to 1% by weight of calcium chloride, 1-3% by weight of magnesium chloride, 0.1 to 0.5% by weight of iron chloride , 0.1 to 0.5% by weight of citric acid, 0.005 to 0.2% by weight of manganese sulfate, 0.05 to 0.2% by weight of zinc sulfate, 1 to 5% by weight of potassium dihydrogen phosphate, 5 to 10% by weight of sodium dihydrogen phosphate, 0.5 to 2% of sodium sulfate It is characterized in that obtained by culturing in a liquid medium containing weight%.

상기 홍국, 동충하초 및 꽃송이 버섯의 균사체는 1:1~2:1~2의 중량 비율로 첨가되어 혼합 배양되는 것이며, 바람직하게는 1:1:1의 비율로 혼합 배양되는 것이다. 상기 전체 균사체는 20~40 %(v/v)로 액체 배지에 접종되어 혼합 배양 되는 것이 바람직하다.The mycelium of the hongguk, Cordyceps sinensis and blossom mushroom is added in a weight ratio of 1: 1 to 2: 1 to 2 is to be cultured mixed, preferably it is mixed and cultured in a ratio of 1: 1: 1. The total mycelium is preferably inoculated in a liquid medium at 20 to 40% (v / v) and mixed and cultured.

상기 화장료 조성물은 콜라겐의 생합성을 촉진하여 주름을 개선하고, 피부 내에서 히알루로난 생성효소-3(hyaluronan synthase-3)의 발현을 촉진하여 보습력을 증가시키며 피부를 재생하는 특징을 가진다.The cosmetic composition is characterized by promoting the biosynthesis of collagen to improve wrinkles, promote the expression of hyaluronan synthase-3 (hyaluronan synthase-3) in the skin to increase the moisturizing power and regenerates the skin.

버섯 균사체 배양액을 함유하는 상기 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지 크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징 폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 프레스파우더, 루스파우더 및 아이섀도로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형으로 적용되어질 수 있다.The cosmetic composition containing the mushroom mycelium culture medium skin lotion, skin softener, skin toner, astringent, lotion, milk lotion, moisturizing lotion, nutrition lotion, massage cream, nutrition cream, moisturizing cream, hand cream, essence, pack, soap, It can be applied in any one formulation selected from the group consisting of shampoo, cleansing foam, cleansing lotion, cleansing cream, body lotion, body cleanser, latex, press powder, loose powder and eye shadow.

상기 다른 목적을 달성하기 위하여 본 발명에 따르면, 1:1~2:1~2 중량비의 홍국, 동충하초 및 꽃송이버섯 균사체를 말토우스 1 내지 3 중량%, 펩톤 0.5 내지 2 중량%, 염화칼슘 0.01 내지 1 중량%, 염화마그네슘 1 내지 3 중량%, 염화철 0.1 내지 0.5 중량%, 시트릭엑시드 0.1 내지 0.5 중량%, 황산망간 0.005 내지 0.2 중량%, 황산아연 0.05 내지 0.2 중량%, 인산이수소칼륨 1 내지 5 중량%, 인산일수소나트륨 5 내지 10 중량%, 황산나트륨 0.5 내지 2 중량%를 함유하는 액체배지에 접종하는 단계;In order to achieve the above object, according to the present invention, 1 to 3% by weight of red yeast, Cordyceps sinensis and blossom mushroom mycelium 1 to 3% by weight, 0.5 to 2% by weight peptone, 0.01 to 1 calcium chloride % By weight, 1 to 3% by weight of magnesium chloride, 0.1 to 0.5% by weight of iron chloride, 0.1 to 0.5% by weight of citric acid, 0.005 to 0.2% by weight of manganese sulfate, 0.05 to 0.2% by weight of zinc sulfate, 1 to 5 of potassium dihydrogen phosphate Inoculating a liquid medium containing weight%, 5 to 10 weight% sodium dihydrogen phosphate, and 0.5 to 2 weight% sodium sulfate;

pH 5.7~6.0, 온도 25~30℃ 조건에서 7~15일간 배양하는 단계; 및incubation for 7-15 days at pH 5.7-6.0, temperature 25-30 ° C .; And

상기 배양액을 균질화한 후 3000rpm으로 10 내지 15분간 원심분리하는 단계를 포함하는 버섯 균사체 배양액의 제조방법이 제공된다.After homogenizing the culture solution is provided a method for producing a mushroom mycelium culture medium comprising the step of centrifugation for 10 to 15 minutes at 3000rpm.

홍국, 동충하초, 꽃송이 버섯의 균사체 배양액을 함유하는 본 발명 화장료 조성물은 콜라겐 생합성을 촉진함으로써 피부 주름을 개선하며, 수분을 보유하는 것으로 잘 알려진 히알루로난(HA)의 생합성을 진행하는 히알루로난 생성효소-3(hyaluronan synthase-3)의 발현을 촉진함으로써 피부 보습력 증진 및 피부재생을 촉진하는 효과를 나타낸다.Cosmetic composition of the present invention containing a mycelium culture of red yeast rice, Cordyceps sinensis, zinnia mushroom promotes collagen biosynthesis, improves skin wrinkles, and produces hyaluronan which proceeds with biosynthesis of hyaluronan (HA), which is well known to retain moisture By promoting the expression of hyaluronan synthase-3 (hyaluronan synthase-3) it has the effect of promoting skin moisturizing and skin regeneration.

도 1a 및 도 1b는 본 발명의 일 실시예에 따른 버섯 균사체 배양액의 최적 탄소원 및 최적 질소원을 나타내는 그래프이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 버섯 균사체 배양액의 최적 배양 온도를 나타내는 그래프이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 버섯 균사체 배양액의 최적 혼합 비율을 나타내는 그래프이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른 버섯 균사체 배양액의 최적 접종양을 나타내는 그래프이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 따른 버섯 균사체 배양액의 최적 배양 pH를 나타내는 그래프이다.
도 6은 본 발명의 일 실시예에 따른 버섯 균사체 배양액의 최적 배양 시간을 나타내는 그래프이다.
도 7은 본 발명의 일 실시예에 따른 버섯 균사체 배양액의 세포재생 효과를 나타내는 사진도이다.
1A and 1B are graphs showing an optimal carbon source and an optimal nitrogen source of a mushroom mycelium culture medium according to an embodiment of the present invention.
Figure 2 is a graph showing the optimum culture temperature of the mushroom mycelium culture medium according to an embodiment of the present invention.
Figure 3 is a graph showing the optimum mixing ratio of the mushroom mycelium culture medium according to an embodiment of the present invention.
Figure 4 is a graph showing the optimum amount of inoculation mushroom mycelium culture medium according to an embodiment of the present invention.
5 is a graph showing the optimum culture pH of the mushroom mycelium culture medium according to an embodiment of the present invention.
Figure 6 is a graph showing the optimum incubation time of the mushroom mycelium culture medium according to an embodiment of the present invention.
Figure 7 is a photograph showing the cell regeneration effect of the mushroom mycelium culture medium according to an embodiment of the present invention.

본 발명은 홍국, 동충하초 및 꽃송이버섯 균사체 배양액의 콜라겐 생성촉진, 히알루로난 생성효소-3의 발현 증진 효과를 이용한 화장료에 관한 것이다. The present invention relates to cosmetics using the collagen production promoting and hyaluronan synthase-3 expression promoting effect of the red yeast, Cordyceps sinensis and the mushroom mycelium culture.

균류(fungi)는 효모, 곰팡이, 버섯 등의 진핵 생물을 포함하는 큰 그룹으로 식물, 동물, 박테리아와 구분되어 분류되며 대부분 포자가 발아하여 균사체를 이루고 자실체로 성장하여 버섯의 모습을 갖추며 자실체는 다시 포자를 형성하는 생장과정을 되풀이 한다. 균류는 세포벽에 글루칸(β-1,3-glucan) 뿐 아니라 생체고분자 키틴(biopolymer chitin)을 포함하고 있는데, 식물의 경우 세포벽에 셀룰로즈를 포함하는 반면 균류는 키틴을 포함하고 있어 주요한 차이점 중 하나로 볼 수 있다. 이 중 생물학적으로 버섯이 가장 유사한 종에 속하며 버섯은 영양, 온도, 습도, 광선, 산소, 산도 등 여러 가지 생장조건에 따라서 증식하고 생리적 기능에 따라, 배지나 기주의 표면, 유기물, 적당한 습도와 온도 등 환경조건이 양호하면 조직을 형성한다. 버섯은 세포벽이나 세포막 안에 유효성분을 보유하고 있으며 어떠한 경우는 자실체를 형성하면서 유효성분을 세포 외부로 분비하기도 한다. 균류는 관상형 필라멘트(tubular filament) 모양으로 자라는데, 이를 균사(hyphae)라고 하며, 이러한 균사집합체(hyphae mass)를 균사체(mycelium)라고 한다. 기능상으로 볼 때, 균사체는 영양기관, 자실체는 생식기관으로 비유할 수 있고 버섯이라 부르고 있는 것은 자실체이며 균사체는 육안으로 관찰할 수 없다. 영양학적으로 볼 때 균사체는 버섯을 성장시키는 에너지를 깊이 간직하고 있는 만큼 강력한 활성물질로 자실체를 성장시키기 위한 영양소 및 활성물질을 축적하고 있다. 따라서 버섯의 에너지의 핵심은 포자와 균사체에 있다고 볼 수 있다. Fungi are large groups that contain eukaryotic organisms such as yeasts, fungi, and mushrooms. They are classified into plants, animals, and bacteria, and most of the spores germinate to form mycelium, grow to fruiting bodies, and form fruiting bodies. The process of growing spores is repeated. Fungi contain biopolymer chitin as well as glucans (β-1,3-glucan) in their cell walls. Plants contain cellulose in their cell walls, whereas fungi contain chitin, which is one of the main differences. Can be. Among the biologically similar mushrooms, mushrooms are among the most similar species. Mushrooms grow according to various growth conditions such as nutrition, temperature, humidity, light, oxygen, and acidity, and depending on the physiological function, medium, host surface, organic matter, moderate humidity and temperature. If the environmental conditions are good, a tissue is formed. Mushrooms have an active ingredient in the cell wall or in the cell membrane, and in some cases they form fruiting bodies and secrete the active ingredient outside the cell. Fungi grow in the form of tubular filaments, called hyphae, and these hyphae masses are called mycelium. In functional terms, the mycelium can be likened to the nutrient organs and the fruiting bodies to the reproductive organs, and what is called a mushroom is the fruiting body and the mycelium cannot be observed with the naked eye. In terms of nutrition, mycelium is a powerful active substance that accumulates nutrients and active substances for growing fruiting bodies as it holds deeply the energy for growing mushrooms. Therefore, the core of the mushroom's energy is in the spores and mycelium.

동충하초(Cordyceps militaris)는 항산화 및 중성지질 저하 등의 효능을 갖고 피부의 탄력성과 보습 성분을 함유하고 있으며, 홍국(Monascus pilosus)은 항염 효과와 콜레스테롤을 저해하며, 꽃송이버섯(Sparassis crispa)은 항암과 면역기능을 높여주는데 탁월한 효과를 가지며 높은 함량의 베타 글루칸을 지니고 있는 것으로 알려져 있다. Cordyceps militaris has antioxidant and hypolipidemic effects and contains skin elasticity and moisturizing ingredients. Monascus pilosus inhibits anti-inflammatory effect and cholesterol, and Sparassis crispa has anticancer activity. It is known to have a high content of beta glucan and has an excellent effect on boosting immune function.

본 발명은 홍국, 동충하초 및 꽃송이버섯 균사체를 일정 비율로 특정조성을 가지는 배지에서 혼합 배양하여 얻어지는 배양액이, 상승작용에 의하여 우수한 피부주름개선, 보습 및 피부재생촉진 등의 효과를 나타낸다는 것을 이용함을 특징으로 한다. The present invention is characterized in that the culture medium obtained by mixing and cultivating red yeast, Cordyceps sinensis and zinnia mushroom mycelium at a specific ratio in a specific composition, exhibits excellent skin wrinkle improvement, moisturizing and skin regeneration by synergy. It is done.

본 발명에 있어서, 홍국, 동충하초 및 꽃송이버섯의 균사체는 도 3에 도시한 바와 같이 1:1~2:1~2의 비율로 혼합 배양하는 경우에 우수한 효과를 나타내었으며, 1:1:1의 중량비로 혼합 배양하는 경우에 가장 우수한 효과를 나타낸다.In the present invention, the mycelium of red yeast rice, Cordyceps sinensis and blossom mushroom showed an excellent effect when mixed culture in a ratio of 1: 1 to 2: 1 to 2, as shown in Figure 3, 1: 1: 1 The best effect is obtained when mixed cultures by weight ratio.

본 발명 버섯 균사체 배양액은 피부 내에서 콜라겐의 생합성을 촉진함으로써 피부주름을 개선하는 작용기전을 가진다. 또한 히알루로난 생성효소-3(hyaluronan synthase-3)의 발현을 증진시킴으로서 피부 보습력을 증가시키는 작용기전을 가진다.The mushroom mycelium culture solution of the present invention has a mechanism of action to improve skin wrinkles by promoting the biosynthesis of collagen in the skin. In addition, by promoting the expression of hyaluronan synthase-3 (hyaluronan synthase-3) has a mechanism of action to increase the skin moisturizing power.

본 발명의 홍국, 동충하초 및 꽃송이버섯의 균사체 배양액은 다음과 같이 제조할 수 있다. 먼저 상기 버섯 균사체 배양액의 종균으로 접종되는 홍국, 동충하초, 꽃송이버섯의 균사체를 배양한다. 상기 버섯 균사체의 균 증식용 고체 배양은 PDA배지에서 25~32℃, 바람직하게는 27~30℃의 온도 및 pH 5.0~6.0, 바람직하게는 pH 5.7~6.0의 조건에서 5~10일간, 바람직하게는 7~10일간 배양하는 것이 좋다. Mycelium culture of red yeast rice, Cordyceps sinensis and blossom mushroom of the present invention can be prepared as follows. First, the mycelium of hongguk, Cordyceps sinensis, zinnia mushroom is inoculated with the spawn of the mushroom mycelia culture medium. Solid culture for bacterial growth of the mushroom mycelium is 5 ~ 10 days, preferably at a temperature of 25 ~ 32 ℃, preferably 27 ~ 30 ℃ and pH 5.0 ~ 6.0, preferably pH 5.7 ~ 6.0 in PDA medium It is recommended to incubate for 7-10 days.

얻어진 상기 버섯 균사체들을 종균으로하여 하기와 같이 액체 배양하여 배양액을 얻는다. 상기 종균을 하기의 조성을 가지는 액체배지에 20~40 %(v/v)로 접종하여 배양한다. 상기 접종량에 대한 효과는 도 4에 나타내었다. 도 4에서 확인되는 바와 같이 20%(v/v)로 접종하는 경우에 가장 우수한 효과를 나타내었다.Using the obtained mushroom mycelium as the seed, liquid culture is carried out as follows to obtain a culture solution. The seed is incubated by inoculating 20 to 40% (v / v) in a liquid medium having the following composition. The effect on the inoculation amount is shown in FIG. 4. As shown in Figure 4 showed the best effect when inoculated at 20% (v / v).

상기 버섯 균사체의 액체 배양은 말토우스 1 내지 3 중량%, 펩톤 0.5 내지 2 중량%, 염화칼슘 0.01 내지 1 중량%, 염화마그네슘 1 내지 3 중량%, 염화철 0.1 내지 0.5 중량%, 시트릭엑시드 0.1 내지 0.5 중량%, 황산망간 0.005 내지 0.2 중량%, 황산아연 0.05 내지 0.2 중량%, 인산이수소칼륨 1 내지 5 중량%, 인산일수소나트륨 5 내지 10 중량%, 황산나트륨 0.5 내지 2 중량%를 함유하는 배지에서 pH 5.7~6.0, 온도 25~30℃ 조건하에 7~15일간 배양하는 것이 좋다. Liquid culture of the mushroom mycelium is 1 to 3% by weight maltose, 0.5 to 2% by weight peptone, 0.01 to 1% by weight calcium chloride, 1-3% by weight magnesium chloride, 0.1 to 0.5% by weight iron chloride, 0.1 to 0.5 citric acid In a medium containing% by weight, 0.005 to 0.2% by weight manganese sulfate, 0.05 to 0.2% by weight zinc sulfate, 1 to 5% by weight potassium dihydrogen phosphate, 5 to 10% by weight sodium dihydrogen phosphate, 0.5 to 2% by weight sodium sulfate It is recommended to incubate for 7-15 days under the condition of pH 5.7 ~ 6.0 and 25 ~ 30 ℃.

상기 배양액을 균질화한 후, 3000rpm으로 10 내지 15분간 원심분리하여 얻은 배양액을 화장료로 이용한다. 상기 버섯 균사체 배양액은 농축되거나 정제되어 사용될 수 있다.
After homogenizing the culture solution, the culture solution obtained by centrifugation at 3000 rpm for 10 to 15 minutes is used as a cosmetic. The mushroom mycelium broth may be concentrated or purified.

[실시예][Example]

이하, 하기의 실시예와 시험예들을 통하여 본 발명을 상세하게 설명하지만, 본 발명이 이 예들에 의하여 한정되는 것은 아니다.
Hereinafter, the present invention will be described in detail by way of the following examples and test examples, but the present invention is not limited to these examples.

제조예 1~4:균사체 배양액의 제조Preparation Examples 1-4: Preparation of mycelia culture medium

홍국(Monascus pilosus), 동충하초(Cordyceps militaris), 꽃송이버섯(Sparassis crispa)을 균주로 하여, PDA(Potato Dextrose Agar, DIFCO, USA)평판배지에 계대 배양하여 사용하였으며, 시약은 DIFCO 社의 특급시약을 사용하였다. Monascus pilosus ), Cordyceps militaris ) and Sparassis crispa were used as strains, and passaged on PDA (Potato Dextrose Agar, DIFCO, USA) flat medium, and reagents were used by DIFCO's special reagent.

화장료용 원료를 위한 최적 배지를 선정하기 위하여, 상기 홍국(Monascus pilosus), 동충하초(Cordyceps militaris), 꽃송이버섯(Sparassis crispa) 및 이들의 동일 중량비의 혼합균사체를 하기의 표 1, 표 2와 같이 CMM 배지를 기준으로 탄소원 및 질소원을 달리하면서 30℃의 온도조건 및 pH 6.0의 조건하에서 8일 동안 배양하였다. 배양 후 3000 rpm 으로 10 내지 15분간 원심분리하여 실험에 사용하였다.In order to select the optimal medium for cosmetic raw materials, the red yeast ( Monascus pilosus ), Cordyceps militaris ), Sparassis crispa ) and mixed mycelium of the same weight ratio thereof were incubated for 8 days at 30 ° C. and pH 6.0 with different carbon and nitrogen sources based on CMM medium as shown in Table 1 and Table 2 below. After incubation, centrifugation at 3000 rpm for 10 to 15 minutes was used for the experiment.

조성Furtherance 단위unit 탄소원
(Maltose/glucose/starch/lactose/fluctose)
Carbon source
(Maltose / glucose / starch / lactose / fluctose)
10 g/L10 g / L
KNO3 KNO 3 2 g/L2 g / L Trace elementa) Trace element a) 40 ml/L40 ml / L Salt solutionb) Salt solution b) 25 ml/L25 ml / L Thiamine solution (0.1mg/ml)Thiamine solution (0.1mg / ml) 1 ml/L1 ml / L a) CaCl2 2.73 g/L
MgCl2-6H2O 10.25 g/L
FeCl3-6H2O 1.33 g/L
Citric acid 1.33 g/L
MnSO4 1.1 g/L
ZnSO4 1.0 g/L

b) Ammonium tartrate 20 g/L
KH2PO4 40 g/L
Na2HPO4 90 g/L
Na2SO4 11.2 g/L
a) 2.73 g / L CaCl 2
MgCl 2 -6H 2 O 10.25 g / L
FeCl 3 -6H 2 O 1.33 g / L
Citric acid 1.33 g / L
MnSO 4 1.1 g / L
ZnSO 4 1.0 g / L

b) Ammonium tartrate 20 g / L
KH 2 PO 4 40 g / L
Na 2 HPO 4 90 g / L
Na 2 SO 4 11.2 g / L

조성Furtherance 단위unit MaltoseMaltose 10 g/L10 g / L 질소원
(Peptone/yeast/KNO3/malt extract)
Nitrogen source
(Peptone / yeast / KNO 3 / malt extract)
2 g/L2 g / L
Trace elementa) Trace element a) 40 ml/L40 ml / L Salt solutionb) Salt solution b) 25 ml/L25 ml / L Thiamine solution (0.1mg/ml)Thiamine solution (0.1mg / ml) 1 ml/L1 ml / L a), b) 표1과 같음. a), b) as shown in Table 1.

균사체 밀도를 육안으로 관찰하고, 후술하는 시험예의 방법에 따라 콜라겐 생합성 시험, 히알루로난 생성효소-3(hyaluronan synthase-3)의 발현을 시험하였다. 탄소원과 질소원을 달리하여 배양한 후, 콜라겐 생합성 및 히알루로난 생성효소-3의 발현을 시험한 결과를 도 1a 및 도 1b에 나타내었다. Mycelium density was visually observed, and the collagen biosynthesis test and the expression of hyaluronan synthase-3 were tested according to the test method described later. After incubating with different carbon and nitrogen sources, the results of testing the collagen biosynthesis and the expression of hyaluronan synthase-3 are shown in FIGS. 1A and 1B.

도 1a 및 도 1b에서 확인되는 바와 같이, 홍국(Monascus pilosus), 동충하초(Cordyceps militaris), 꽃송이버섯(Sparassis crispa) 균사체를 탄소원으로는 말토우스(maltose), 질소원으로는 펩톤(peptone)을 사용하는 배지에서 배양하는 경우에, 대체로 가장 우수한 콜라겐 생합성 및 히알루로난 생성효소-3(hyaluronan synthase-3)의 발현결과를 나타내었으며, 상기 버섯 균사체의 혼합균주의 경우에도 말토우스(maltose), 펩톤(peptone)을 함유하는 배지에서 가장 우수한 효과를 나타내었다.As confirmed in FIGS. 1A and 1B, Monascus pilosus ), Cordyceps militaris ), Sparassis crispa ) When the mycelium is cultured in a medium using maltose as a carbon source and peptone as a nitrogen source, the most excellent collagen biosynthesis and hyaluronan synthase-3 The expression result was shown, and even in the case of the mixed strain of the mushroom mycelium, it showed the best effect in the medium containing maltose and peptone.

실시예 1:버섯 균사체 혼합 배양액의 제조Example 1 Preparation of Mushroom Mycelium Mixed Culture Solution

동일한 중량비의 상기 동충하초(Cordyceps militaris), 홍국(Monascus pilosus), 꽃송이버섯(Sparassis crispa) 혼합균주를 종균으로 하여 상기 제조예를 통하여 확립된 최적 배지, 즉 하기 표 3과 같은 조성을 가지는 배지(modified CMM)에 상기 혼합 버섯 균사체를 최적배지에 20%(v/v)비율로 접종 배양하여 배양액을 제조하였다.Optimal medium established through the preparation example using a cordyceps militaris , Cordyceps militaris , Monascus pilosus , Sparassis crispa mixed strains of the same weight ratio, that is, a medium having a composition as shown in Table 3 below (modified CMM) ) Was cultured by inoculating the mixed mushroom mycelium in an optimal medium at a ratio of 20% (v / v).

최적 생장온도조건을 확인하기 위하여 15, 20, 25, 30 및 35℃에서 배양하였으며, 다른 배양조건은 상기 제조예의 배양조건과 동일하게 하였다.
In order to determine the optimum growth temperature conditions were incubated at 15, 20, 25, 30 and 35 ℃, and the other culture conditions were the same as the culture conditions of the preparation example.

조성Furtherance 단위unit MaltoseMaltose 10 g/L10 g / L PeptoneEptone 2 g/L2 g / L Trace elementa) Trace element a) 40 ml/L40 ml / L Salt solutionb) Salt solution b) 25 ml/L25 ml / L Thiamine solution (0.1mg/ml)Thiamine solution (0.1mg / ml) 1 ml/L1 ml / L a), b) 표 1과 같음. a), b) as shown in Table 1.

상기 홍국(Monascus pilosus), 동충하초(Cordyceps militaris) 및 꽃송이버섯(Sparassis crispa) 균주를 배양하여 얻은 각 배양액을 비교예로 하였으며, 온도별 콜라겐 생합성, 히알루로난 생성효소-3(hyaluronan synthase-3)의 발현 시험결과를 도 2에 나타내었다. Monascus pilosus ), Cordyceps militaris ) and Sparassis Each culture solution obtained by culturing crispa ) strain was used as a comparative example, and collagen biosynthesis and hyaluronan synthase-3 expression test results according to temperature are shown in FIG. 2.

그 결과, 도 2에서 확인되는 바와 같이 30℃에서 배양한 버섯 균사체 배양액에 의한 콜라겐 생합성과 HAS-3 발현량이 가장 우수하였으며, 각각의 버섯 균사체 배양액에 비하여 상기 혼합균주 배양액이 더욱 우수한 효과를 나타내었다.
As a result, as shown in FIG. 2, collagen biosynthesis and HAS-3 expression amount were excellent by mushroom mycelium culture medium cultured at 30 ° C., and the mixed strain culture medium showed more excellent effect than the mushroom mycelium culture medium. .

실시예 2:버섯 균사체 혼합 배양액의 제조Example 2 Preparation of Mushroom Mycelium Mixed Culture Solution

동일 중량비의 상기 동충하초(Cordyceps militaris), 홍국(Monascus pilosus) 및 꽃송이버섯(Sparassis crispa) 혼합 균주를 상기 실시예 1의 최적 생장배지에서 pH를 달리 하면서(pH5, pH5.5, pH6, pH6.5, pH7) 배양하였다. 다른 배양조건은 상기 실시예 1의 조건과 동일하게 하였다. Cordyceps militaris , red yeast ( Monascus pilosus ) and zinnia mushroom ( Sparrassis ) in the same weight ratio crispa ) mixed strains were cultured at different pHs (pH5, pH5.5, pH6, pH6.5, pH7) in the optimal growth medium of Example 1. Other culture conditions were the same as those of Example 1 above.

상기 홍국(Monascus pilosus), 동충하초(Cordyceps militaris) 및 꽃송이버섯(Sparassis crispa) 균주를 배양하여 얻은 각 배양액을 비교예로 하였으며, pH별 콜라겐 생합성, HAS-3의 발현 시험결과를 도 5에 나타내었다. Monascus pilosus ), Cordyceps militaris ) and Sparassis crispa ) cultures obtained by culturing the strain as a comparative example, collagen biosynthesis by pH, the expression test results of HAS-3 are shown in FIG.

그 결과, 도 5에서 확인되는 바와 같이 pH 5.5에서 배양한 버섯 균사체 배양액에 의한 콜라겐 생합성과 HAS-3 발현량이 가장 우수하였으며, 상기 실시예 2의 혼합균주 배양액이 가장 우수한 효과를 나타내었다.
As a result, as shown in FIG. 5, collagen biosynthesis and HAS-3 expression amount by mushroom mycelium culture medium cultured at pH 5.5 were the best, and the mixed strain culture solution of Example 2 showed the best effect.

실시예 3:버섯 균사체 혼합 배양액의 제조Example 3: Preparation of mushroom mycelium mixed culture solution

동일 중량비의 상기 동충하초(Cordyceps militaris), 홍국(Monascus pilosus) 및 꽃송이버섯(Sparassis crispa) 혼합 균주를 상기 실시예 1의 최적 생장배지에 배양시간을 달리 하면서(5일, 10일, 15일, 20일) 배양하였다. 다른 배양조건은 상기 실시예 1의 조건과 동일하게 하였다. Cordyceps militaris of the same weight ratio, Cordyceps militaris , Monascus pilosus and Sparassis crispa mixed strain in different culture times in the optimum growth medium of Example 1 (5 days, 10 days, 15 days, 20 Work). Other culture conditions were the same as those of Example 1 above.

상기 홍국(Monascus pilosus), 동충하초(Cordyceps militaris) 및 꽃송이버섯(Sparassis crispa) 균주를 배양하여 얻은 각 배양액을 비교예로 하였으며, 배양시간별 콜라겐 생합성, 히알루로난 생성효소-3의 발현 시험결과를 도 6에 나타내었다. Monascus pilosus ), Cordyceps militaris ) and Sparassis Each culture solution obtained by culturing crispa ) strain was used as a comparative example, and collagen biosynthesis and hyaluronan synthase-3 expression test results according to culture time are shown in FIG. 6.

그 결과, 도 6에서 확인되는 바와 같이 10일간 배양한 버섯 균사체 배양액에 의한 콜라겐 생합성과 HAS-3 발현량이 가장 우수하였으며, 상기 실시예 3의 혼합균주 배양액이 가장 우수한 효과를 나타내었다.
As a result, as shown in Figure 6 collagen biosynthesis and HAS-3 expression by the mushroom mycelium culture medium cultured for 10 days was the best, the mixed strain culture solution of Example 3 showed the best effect.

시험예 1:콜라겐 생합성 촉진효과시험Test Example 1: Collagen Biosynthesis Promotion Effect Test

각질형성세포를 10% FBS를 첨가한 DMEM 배지에 1×106의 세포농도로 접종하여 37℃, 5% CO2배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 24시간 배양하여 상기 실시예 1~3에서 확립된 최적의 생장조건(30℃, pH 5.5, 10일의 배양기간)에서 배양한 홍국, 동충하초, 꽃송이 버섯 균사체 및 이들의 동일 중량 혼합균주를 각각 배양한 배양액을 최종 농도가 0.5%가 되도록 DMEM배지에 희석하여 제조한 희석용액을 첨가하여 18시간 동안 동일 조건에서 배양하였다. 이후 Trizol reagent(invitrogen, USA)를 이용하여 세포를 회수하여 mRNA를 추출하여 일련의 과정을 거쳐 cDNA를 합성하였다. 합성된 cDNA로부터 Procollagen typeⅠ유전자 부위를 증폭시켜 전기영동을 통해 유전자 발현 양을 확인하였으며, 유전자 증폭은 thermal cycler(GenePro, Hangzhou bioer tech., CHINA)를 사용하여 10x taq polymerase buffer, 10 mM dNTP, 10 pmol primer (F: AGC CAG CAG ATC GAG AAC AT, R: TCT TGT CCT TGG GGT TCT TG), taq polymerase를 혼합하고 증류수를 더하여 50 uL로 조정 후 95도 5분 1cycle/95도 1분/51도 2분/72도 1분 28 cycle 증폭, 72도에서 5분간 반응하는 조건으로 수행하였다. 생성된 procollagen의 발현율은 아래의 식에 따라 계산하였으며 대조구로는 시료를 처리하지 않은 세포를 사용하였다.
Keratinocytes were inoculated in DMEM medium with 10% FBS at a cell concentration of 1 × 10 6 and incubated in 37 ° C., 5% CO 2 incubator for 24 hours. Cultivation of red yeast rice, Cordyceps sinensis, blossom mushroom mycelium and their same weight mixed strains, which were incubated for 24 hours and cultivated under optimum growth conditions (30 ° C., pH 5.5, 10 days of incubation period) established in Examples 1 to 3, respectively. One culture solution was diluted in DMEM medium so that the final concentration was 0.5%, and the mixture was incubated under the same conditions for 18 hours. After that, cells were recovered using Trizol reagent (invitrogen, USA), mRNA was extracted, and cDNA was synthesized through a series of processes. Procollagen type I gene region was amplified from the synthesized cDNA to confirm gene expression by electrophoresis. Gene amplification was performed using thermal cycler (GenePro, Hangzhou bioer tech., CHINA) using 10x taq polymerase buffer, 10 mM dNTP, 10 pmol primer (F: AGC CAG CAG ATC GAG AAC AT, R: TCT TGT CCT TGG GGT TCT TG), mixed with taq polymerase and adjusted to 50 uL with distilled water 95 ° 5 min 1 cycle / 95 ° 1 min / 51 ° 2 minutes / 72 degrees 1 minute 28 cycles amplification, was carried out under the conditions for 5 minutes at 72 degrees. The expression rate of procollagen produced was calculated according to the following equation, and control cells were used as untreated samples.

procollagen 발현율(%) = B/A × 100(%)Procollagen Expression (%) = B / A × 100 (%)

A: 상기 대조군에서의 procollagen 발현 량A: amount of procollagen expression in the control group

B: 시료 처리 세포의 procollagen 발현 량
B: amount of procollagen expression in sample treated cells

상기 시험결과 하기의 표 4와 같은 결과를 얻었다.The test results were obtained as shown in Table 4 below.

시료 농도
(㎍/㎖)
Sample concentration
(Μg / ml)
procollagen 발현율(%)procollagen expression rate (%)
미처리Untreated 홍국Red yeast rice 동충하초Cordyceps sinensis 꽃송이버섯Blossom Mushroom 홍국+동충하초+ 꽃송이버섯Red chrysanthemum + Cordyceps sinensis + Mushroom 500500 1515 4040 6464 7171 8686

상기 표 4의 결과에서 확인되는 바와 같이, 홍국, 동충하초, 꽃송이 버섯 균사체 배양액을 단독으로 적용한 경우보다, 혼합 균주의 배양액을 적용한 경우에 피부 주름에 관련 있는 콜라겐 생합성 촉진효과가 더 높게 나타났다.
As confirmed in the results of Table 4, it was found that the collagen biosynthesis-promoting effect related to the skin wrinkles was higher when the culture medium of the mixed strains were applied than the hongguk, Cordyceps sinensis, blossom mushroom mycelium culture alone.

시험예 2: Hyaluronan synthase-3의 발현 촉진 효과시험Test Example 2: Expression promoting effect test of Hyaluronan synthase-3

각질형성세포를 10% FBS를 첨가한 DMDM 배지에 1×106의 세포농도로 접종하여 37℃, 5% CO2배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 24시간 배양하여 상기 실시예 1~3에서 확립된 최적의 생장조건(30℃, pH 5.5, 10일의 배양기간)에서 배양한 홍국, 동충하초, 꽃송이 버섯 균사체 및 이들의 동일 중량 혼합균주를 각각 배양한 배양액을 최종 농도가 0.5%가 되도록 DMEM배지에 희석하여 제조한 희석용액을 첨가하여 18시간 동안 동일 조건에서 배양하였다. 상기 시험예 1과 같은 방법으로 mRNA를 추출하여 일련의 과정을 거쳐 cDNA를 합성하였다. 합성된 cDNA로부터 hyaluronan synthase-3 유전자 부위를 증폭시켜 전기영동을 통해 유전자 발현 양을 확인하였으며, 유전자 증폭은 시험 예 1과 같다. 10x taq polymerase buffer, 10 mM dNTP, 10 pmol primer (F: GAG GAC TGG TAC CAT CAG AA , R: GCC AGA TTT GTT GAT GGT AGC), taq polymerase를 혼합하고 증류수를 더하여 50 uL로 조정 후 94도 5분 1cycle/94도 30초/50도 30초/72도 1분 28 cycle 증폭, 72도에서 5분간 반응하는 조건으로 수행하였다. 생성된 hyaluronan synthase-3의 발현율은 아래식에 따라 계산하였으며 대조구로는 시료를 처리하지 않은 세포를 사용하였다. 그 결과를 하기의 표 5에 나타내었다.
Keratinocytes were inoculated at a concentration of 1 × 10 6 in DMDM medium containing 10% FBS and incubated for 24 hours in a 37 ° C., 5% CO 2 incubator. Cultivation of red yeast rice, Cordyceps sinensis, blossom mushroom mycelium and their same weight mixed strains, which were incubated for 24 hours and cultivated under optimum growth conditions (30 ° C., pH 5.5, 10 days of incubation period) established in Examples 1 to 3, respectively. One culture solution was diluted in DMEM medium so that the final concentration was 0.5%, and the mixture was incubated under the same conditions for 18 hours. MRNA was extracted in the same manner as in Test Example 1, and cDNA was synthesized through a series of processes. The amount of gene expression was confirmed by electrophoresis by amplifying the hyaluronan synthase-3 gene region from the synthesized cDNA, and gene amplification is the same as in Test Example 1. 10x taq polymerase buffer, 10 mM dNTP, 10 pmol primer (F: GAG GAC TGG TAC CAT CAG AA, R: GCC AGA TTT GTT GAT GGT AGC), taq polymerase was mixed and adjusted to 50 uL by distilled water 94 Minute 1cycle / 94 degrees 30 seconds / 50 degrees 30 seconds / 72 degrees 1 minute 28 cycles amplification, was carried out under the conditions of reacting for 5 minutes at 72 degrees. The expression rate of the generated hyaluronan synthase-3 was calculated according to the following equation, and the control group was used as a sample untreated cells. The results are shown in Table 5 below.

HAS-3 발현율(%) = B/A × 100(%)HAS-3 expression rate (%) = B / A × 100 (%)

A: 상기 대조군에서의 hyaluronan synthase-3 발현 량A: hyaluronan synthase-3 expression in the control group

B: 시료 처리 세포의 hyaluronan synthase-3 발현 량B: Hyaluronan synthase-3 expression level in sample treated cells

시료 농도
(㎍/㎖)
Sample concentration
(Μg / ml)
hyaluronan synthase-3 발현율(%)hyaluronan synthase-3 expression rate (%)
미처리Untreated 홍국Red yeast rice 동충하초Cordyceps sinensis 꽃송이버섯Blossom Mushroom 홍국+동충하초+ 꽃송이버섯Red chrysanthemum + Cordyceps sinensis + Mushroom 500500 1313 6969 4747 6666 8888

상기 표 5의 결과에서 확인되는 바와 같이, 홍국, 동충하초, 꽃송이 버섯 균사체 배양액을 단독으로 적용한 경우보다 혼합 균주의 배양액을 적용한 경우에 피부 보습에 관련 있는 hyaluronan synthase-3 발현 촉진 효과가 더 높게 나타났다.
As confirmed in the results of Table 5, the hyaluronan synthase-3 expression promoting effect was related to the skin moisturizing effect when the culture medium of the mixed strains was applied than when the red yeast, Cordyceps sinensis, and the mycelium mushroom mycelium cultures were applied alone.

시험예 3:피부재생 효과시험Test Example 3 Skin Regeneration Effect Test

각질형성세포를 10% FBS를 첨가한 DMDM 배지에 1×106의 세포농도로 접종하여 37℃, 5% CO2배양기에서 12시간 동안 배양하였다. 12시간 배양하여 세포에 스크래치를 낸 후 상기 실시예 1~3에서 확립된 최적의 생장조건(30℃, pH 5.5, 10일의 배양기간)에서 배양한 홍국, 동충하초, 꽃송이버섯 균사체의 동일 중량 혼합균주를 배양한 배양액을 최종 농도가 0.5%가 되도록 DMEM배지에 희석하여 제조한 희석용액을 첨가하여 4시간 간격으로 세포 재생율을 확인하였다. 대조구로는 시료를 처리하지 않은 세포를 사용하였으며, 그 결과를 도 7 및 하기의 표 6에 나타내었다. Keratinocytes were inoculated at a concentration of 1 × 10 6 in DMDM medium containing 10% FBS and incubated for 12 hours at 37 ° C. in a 5% CO 2 incubator. Scratch the cells by incubation for 12 hours, and mix the same weight of red yeast, Cordyceps sinensis, and mushroom mycelium cultured under optimal growth conditions (30 ℃, pH 5.5, 10 days incubation period) established in Examples 1 to 3. Dilution solution prepared by diluting the culture medium in which the strain was cultured to a final concentration of 0.5% DMEM medium was added to check the cell regeneration rate at 4 hour intervals. As a control, cells that were not treated with the sample were used, and the results are shown in FIG. 7 and Table 6 below.

시료sample 피부 재생율 (%)Skin regeneration rate (%) 홍국+동충하초+ 꽃송이버섯 혼합균주 배양액Hongkuk + Cordyceps sinensis + Mixed mushroom culture 8282 대조구Control 3030

상기 표 6의 결과에서 확인되는 바와 같이, 홍국, 동충하초, 꽃송이 버섯 균사체 혼합 배양액을 적용하는 경우에 우수한 세포 재생 촉진효과를 나타내었다.
As confirmed in the results of Table 6, when the red yeast, Cordyceps sinensis, blossom mushroom mycelium mixed culture solution was applied, it showed an excellent cell regeneration promoting effect.

실시예 4:영양크림제조Example 4 Preparation of Nutritional Cream

본 발명의 상기 실시예 1~3에서 확립된 최적의 생장조건(30℃, pH 5.5, 10일의 배양기간)에서 배양한 홍국, 동충하초, 꽃송이버섯 균사체의 동일 중량 혼합균주를 배양한 배양액을 함유하는 화장료의 피부 보습력 증진효과와 피부안전성에 대한 임상시험을 위해 하기 표 7의 조성에 따라 영양 크림을 제조하였다.Contains culture medium in which the same weight mixed strains of red yeast rice, Cordyceps sinensis, and blossom mushroom mycelium were cultivated under optimum growth conditions (30 ° C., pH 5.5, 10 days incubation period) established in Examples 1 to 3 of the present invention. Nutritional creams were prepared according to the composition of Table 7 for the clinical test on the skin moisturizing effect and skin safety of the cosmetics.

본 발명의 버섯 균사체 배양액을 함유하지 않는 영양 크림을 제조하여 비교예 1로 하였다.A nutritious cream containing no mushroom mycelium culture medium of the present invention was prepared as Comparative Example 1.

성분ingredient 중량%weight% 실시예 4Example 4 비교예 1Comparative Example 1 버섯균사체 배양액Mushroom mycelium broth 5.00 5.00 -- 글리세린glycerin 2.00 2.00 2.00 2.00 부틸렌글라이콜Butylene Glycol 5.00 5.00 7.50 7.50 아라키딜알코올/베헤닐알코올/
아라키딜글루코사이드
Arakidil Alcohol / Behenyl Alcohol /
Arachidil Glucoside
2.00 2.00 2.00 2.00
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드Caprylic / capric triglyceride 6.00 6.00 6.00 6.00 마이크로크리스탈린왁스Microcrystalline Wax 1.00 1.00 1.00 1.00 세테아릴알코올Cetearyl Alcohol 3.00 3.00 3.00 3.00 미네랄오일Mineral oil 4.00 4.00 4.00 4.00 카보머Carbomer 0.15 0.15 0.15 0.15 트리에탄올아민Triethanolamine 0.15 0.15 0.15 0.15 프로필파라벤Propylparaben 0.05 0.05 0.05 0.05 부틸파라벤Butyl Paraben 0.05 0.05 0.05 0.05 메칠파라벤Methylparaben 0.20 0.20 0.20 0.20 incense 적량Quantity 적량Quantity 정제수Purified water to 100to 100 to 100to 100

시험예 4:피부보습력 증진 효과Test Example 4 Skin Moisturizing Enhancement Effect

본 발명의 홍국, 동충하초, 꽃송이 버섯 균사체 배양액을 함유하는 상기 실시예 4의 화장료 조성물의 피부 보습력 증진 효과를 건강한 25세에서 50세의 여성 20명을 대상으로 측정하였다. 먼저, 두 그룹으로 나누고, A 그룹에는 실시예 4, B 그룹에는 비교예 1의 제형을 안면부에 하루 2회씩(아침 및 저녁) 3개월간 도포하도록 하였다. 3개월 후 피부 보습력 정도를 피험자의 설문 및 보습의 영상 분석을 통해 평가하였다. 피험자의 설문은 사용전과 비교하여 개선 없음, 약간의 개선, 중등도의 개선, 상당한 개선의 4단계로 판단하였으며 결과를 하기의 표 8에 나타내었다.The skin moisturizing enhancement effect of the cosmetic composition of Example 4 containing the red yeast, Cordyceps sinensis, zinnia mushroom mycelium culture medium of the present invention was measured in 20 healthy women aged 25 to 50 years. First, it was divided into two groups, and the formulation of Example 4 in Group A and Comparative Example 1 in Group B was applied to the face twice a day (morning and evening) for 3 months. Three months later, the degree of skin moisturizing was evaluated through a questionnaire and image analysis of the moisturizing. The subject's questionnaire was judged as four stages of no improvement, slight improvement, moderate improvement, and significant improvement compared to before use, and the results are shown in Table 8 below.

시료sample 개선없음No improvement 약간의 개선Minor improvements 중등도의 개선Moderate improvement 상당한 개선A significant improvement 실시예 4Example 4 1One 22 44 33 비교예 1Comparative Example 1 44 44 1One 1One

보습의 영상분석에 의한 평가는 실험이 시작되기 전 눈 밑 부분을 아라모티에스(ARAMO-TS)를 이용하여 피부표면의 정전용량을 이용해서 수분값을 측정하였으며 실험이 종료된 직후, 눈 밑의 동일 부위를 측정하였다. 영상분석에 의한 피부 보습력 측정 결과는 사용 전과 비교한 수분값에 대한 감소율로 하기의 표 9에 나타내었다.In the evaluation of moisturizing by image analysis, the lower part of the eye was measured by using ARAMO-TS, and the moisture value was measured by using the capacitance of the skin surface. The same site was measured. Skin moisture measurement results by image analysis is shown in Table 9 below as a reduction rate for the moisture value compared to before use.

시료sample 피부 보습력 증가율 (%)Skin Moisturizing Growth Rate (%) 실시예 4Example 4 7878 비교예 1Comparative Example 1 2020

상기 표 8, 9로부터, 본 발명 실시예 4의 피부 보습력 증진 효과가 매우 우수함을 알 수 있다.
From Tables 8 and 9, it can be seen that the skin moisturizing enhancement effect of Example 4 of the present invention is very excellent.

시험예 5:제형 안정성 시험Test Example 5: Formulation Stability Test

본 발명의 홍국, 동충하초, 꽃송이 버섯 균사체 배양액을 함유한 화장료에 대한 안정성 시험을 하기의 방법으로 실시하였다. 화장료의 안정성을 시험하기 위해 상기 실시예 4 및 비교예 1을 45℃로 일정하게 유지되는 항온조에서 불투명 초자 용기에 담아 12주 동안 보관하고 또한 4℃로 일정하게 유지되는 완전히 차광된 냉장고 내에서 불투명 초자 용기에 담아 12주 동안 보관한 후, 변색 및 변취, 분리정도를 비교 측정하여 그 결과를 하기 표 10에 나타내었다. 이 때 제품 변색 및 변취, 분리정도를 다음의 6등급으로 분류하여 평가하였다.The stability test for the cosmetics containing the red yeast rice, Cordyceps sinensis, and blossom mushroom mycelium culture of the present invention was carried out by the following method. In order to test the stability of the cosmetic Example 4 and Comparative Example 1 in an opaque glass container kept in a constant temperature maintained at 45 ℃ constant storage for 12 weeks and also opaque in a fully shaded refrigerator kept constant at 4 ℃ After storing for 12 weeks in a glass container, discoloration and odor, and the degree of separation is measured and the results are shown in Table 10 below. At this time, the product discoloration, odor and separation degree was classified into six grades and evaluated.

0:변화없음 1:극히 조금 분리(변색, 변취)0: No change 1: Very little separation (color change, odor)

2:조금 분리(변색, 변취) 3:조금 심하게 분리(변색, 변취)2: Slightly separated (discolored, decolored) 3: Slightly separated (discolored, decolored)

4:심하게 분리(변색, 변취) 5:극히 심하게 분리(변색, 변취)4: Severe separation (discoloration, odor) 5: Extremely severe separation (discoloration, odor)

구 분division 제형의 안정성Formulation Stability 실시예 4Example 4 비교예 1Comparative Example 1 45℃45 4℃4 ℃ 45℃45 4℃4 변색discoloration 00 00 00 00 변취Deodorant 00 00 00 00 분리detach 00 00 00 00

상기의 표 10으로 부터 확인되는 바와 같이, 실시예 4 및 비교예 1의 경우에 45℃와 4℃에서 변색이나 변취, 분리 현상이 거의 없이 안정하게 나타났다.As can be seen from Table 10, in the case of Example 4 and Comparative Example 1, it was stable at almost 45 ° C. and 4 ° C. without discoloration, odor, and separation.

Claims (7)

홍국, 동충하초 및 꽃송이버섯의 혼합 균사체 배양액을 화장료조성물 전 중량에 대하여 0.01~30 중량% 함유하는 화장료조성물.A cosmetic composition containing 0.01 to 30% by weight of the mixed mycelium culture medium of red yeast rice, Cordyceps sinensis and flower mushroom, based on the total weight of the cosmetic composition. 제 1항에 있어서, 상기 균사체 배양액은 홍국, 동충하초 및 꽃송이버섯의 균사체를 말토우스 1 내지 3 중량%, 펩톤 0.5 내지 2 중량%, 염화칼슘 0.01 내지 1 중량%, 염화마그네슘 1 내지 3 중량%, 염화철 0.1 내지 0.5 중량%, 시트릭엑시드 0.1 내지 0.5 중량%, 황산망간 0.005 내지 0.2 중량%, 황산아연 0.05 내지 0.2 중량%, 인산이수소칼륨 1 내지 5 중량%, 인산일수소나트륨 5 내지 10 중량%, 황산나트륨 0.5 내지 2 중량%를 함유하는 액체배지에서 배양하여 얻어진 것임을 특징으로 하는 화장료조성물.According to claim 1, wherein the mycelium culture medium of the mycelium of red yeast, Cordyceps sinensis and zinnia mushroom maltose 1 to 3%, peptone 0.5 to 2% by weight, calcium chloride 0.01 to 1% by weight, magnesium chloride 1 to 3% by weight, iron chloride 0.1 to 0.5% by weight, citric acid 0.1 to 0.5% by weight, manganese sulfate 0.005 to 0.2% by weight, zinc sulfate 0.05 to 0.2% by weight, potassium dihydrogen phosphate 1 to 5% by weight, sodium dihydrogen phosphate 5 to 10% by weight , Cosmetic composition characterized in that obtained by culturing in a liquid medium containing 0.5 to 2% by weight of sodium sulfate. 제 1항 또는 제2항에 있어서, 상기 홍국, 동충하초 및 꽃송이 버섯의 균사체는 1:1~2:1~2의 중량 비율로 첨가되어 혼합 배양되는 것임을 특징으로 하는 화장료조성물.The cosmetic composition according to claim 1 or 2, wherein the mycelium of the red yeast rice, Cordyceps sinensis and the blossom mushroom is added and mixed in a weight ratio of 1: 1 to 2: 1 to 2. 제 1항에 있어서, 상기 균사체 배양액은 콜라겐의 생합성을 촉진하고, 히알루로난 생성효소-3(hyaluronan synthase-3)의 발현을 촉진하는 것임을 특징으로 하는 화장료조성물.The cosmetic composition according to claim 1, wherein the mycelia culture medium promotes biosynthesis of collagen and promotes expression of hyaluronan synthase-3. 제 1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지 크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징 폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 프레스파우더, 루스파우더 및 아이섀도로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형으로 적용되는 것임을 특징으로 하는 화장료조성물.According to claim 1, wherein the cosmetic composition is a skin lotion, skin softener, skin toner, astringent, lotion, milk lotion, moisture lotion, nutrition lotion, massage cream, nutrition cream, moisture cream, hand cream, essence, pack, soap, Cosmetic composition, characterized in that applied to any one formulation selected from the group consisting of shampoo, cleansing foam, cleansing lotion, cleansing cream, body lotion, body cleanser, latex, press powder, loose powder and eye shadow. 1:1~2:1~2 중량비의 홍국, 동충하초 및 꽃송이버섯 균사체를 말토우스 1 내지 3 중량%, 펩톤 0.5 내지 2 중량%, 염화칼슘 0.01 내지 1 중량%, 염화마그네슘 1 내지 3 중량%, 염화철 0.1 내지 0.5 중량%, 시트릭엑시드 0.1 내지 0.5 중량%, 황산망간 0.005 내지 0.2 중량%, 황산아연 0.05 내지 0.2 중량%, 인산이수소칼륨 1 내지 5 중량%, 인산일수소나트륨 5 내지 10 중량%, 황산나트륨 0.5 내지 2 중량%를 함유하는 액체배지에 접종하는 단계;
pH 5.7~6.0, 온도 25~30℃ 조건에서 7~15일간 배양하는 단계; 및
상기 배양액을 균질화한 후 3000 rpm 으로 10 내지 15분간 원심분리 단계를 포함하는 버섯 균사체 배양액의 제조방법.
1 to 3% by weight of red yeast, Cordyceps sinensis and flower mushroom mycelium in a ratio of 1: 1 to 2: 1 to 2 by weight, 0.5 to 2% by weight of peptone, 0.01 to 1% by weight of calcium chloride, 1-3% by weight of magnesium chloride, iron chloride 0.1 to 0.5% by weight, citric acid 0.1 to 0.5% by weight, manganese sulfate 0.005 to 0.2% by weight, zinc sulfate 0.05 to 0.2% by weight, potassium dihydrogen phosphate 1 to 5% by weight, sodium dihydrogen phosphate 5 to 10% by weight Inoculating a liquid medium containing 0.5 to 2% by weight of sodium sulfate;
incubation for 7-15 days at pH 5.7-6.0, temperature 25-30 ° C .; And
Method for producing a mushroom mycelium culture medium comprising the step of centrifugation for 10 to 15 minutes at 3000 rpm after homogenizing the culture solution.
제6항에 있어서, 상기 버섯 균사체를 20~40%(v/v)로 액체 배지에 접종하여 배양하는 것임을 특징으로 하는 버섯 균사체 배양액의 제조방법.The method according to claim 6, wherein the mushroom mycelium is inoculated in a liquid medium at 20 to 40% (v / v) to incubate.
KR1020100056648A 2010-06-15 2010-06-15 Cosmetic composition containing Mycelial Culture Broth of Mushrooms KR101214872B1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020100056648A KR101214872B1 (en) 2010-06-15 2010-06-15 Cosmetic composition containing Mycelial Culture Broth of Mushrooms

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020100056648A KR101214872B1 (en) 2010-06-15 2010-06-15 Cosmetic composition containing Mycelial Culture Broth of Mushrooms

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20110136558A true KR20110136558A (en) 2011-12-21
KR101214872B1 KR101214872B1 (en) 2012-12-24

Family

ID=45503192

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020100056648A KR101214872B1 (en) 2010-06-15 2010-06-15 Cosmetic composition containing Mycelial Culture Broth of Mushrooms

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR101214872B1 (en)

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101366472B1 (en) * 2012-01-12 2014-02-24 계명대학교 산학협력단 Natural Anti-biotics Containing Mycelial Culture Broth of Sparassis crispa, Composition of Food, Cosmetic or Feed Comprising the Same
KR101480318B1 (en) * 2014-08-13 2015-01-08 이재찬 Mask pack sheet and method for producing thereof
CN108938474A (en) * 2018-09-28 2018-12-07 西藏大元草生物科技有限公司厦门分公司 A kind of facial mask and preparation method thereof containing metallothionein of cordyceps sinensis
CN110101595A (en) * 2019-06-20 2019-08-09 福清市火麒麟食用菌技术开发有限公司 A kind of preparation method of silk ball fungin facial mask
WO2021141192A1 (en) * 2020-01-09 2021-07-15 주식회사 엘지생활건강 Composition for preventing or treating dry eye syndrome, containing sparassis crispa extract

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20220059611A (en) 2020-11-03 2022-05-10 농업회사법인 주식회사 네이처포스 Wild ginseng root by co-cultivating with ectomycorrhizal fungi and wood decay fungi and production method of the same

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2004307437A (en) * 2003-04-10 2004-11-04 Unitika Ltd Skin care preparation for external use for preventing aging

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101366472B1 (en) * 2012-01-12 2014-02-24 계명대학교 산학협력단 Natural Anti-biotics Containing Mycelial Culture Broth of Sparassis crispa, Composition of Food, Cosmetic or Feed Comprising the Same
KR101480318B1 (en) * 2014-08-13 2015-01-08 이재찬 Mask pack sheet and method for producing thereof
CN108938474A (en) * 2018-09-28 2018-12-07 西藏大元草生物科技有限公司厦门分公司 A kind of facial mask and preparation method thereof containing metallothionein of cordyceps sinensis
CN110101595A (en) * 2019-06-20 2019-08-09 福清市火麒麟食用菌技术开发有限公司 A kind of preparation method of silk ball fungin facial mask
WO2021141192A1 (en) * 2020-01-09 2021-07-15 주식회사 엘지생활건강 Composition for preventing or treating dry eye syndrome, containing sparassis crispa extract
KR20210089875A (en) * 2020-01-09 2021-07-19 주식회사 엘지생활건강 Composition for prevention or treatment of dry eye syndrome comprising Sparassis crispa extract

Also Published As

Publication number Publication date
KR101214872B1 (en) 2012-12-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101214872B1 (en) Cosmetic composition containing Mycelial Culture Broth of Mushrooms
KR101353054B1 (en) fermented product and manufacturing method thereof, food composition cosmetic and compositon
KR101625163B1 (en) Cosmetic composition comprising fermented extract of inonotus obliquus under natural cave
WO2021158179A1 (en) SCHIZOPHYLLUM COMMUNE STRAIN PLNP13 AND β-GLUCAN OBTAINED FROM CO-CULTURING THE STRAIN WITH GANODERMA LUCIDUM
KR101768026B1 (en) Cosmetic Composition for Improving Skin Wrinkle Comprising the Fermented Extract of Morinda citrifolia as Active Ingredient
KR102060832B1 (en) Methods for preparing bioconversion products of asparagus cochinchinensis and soybean embryoas using liquid cultivation of basidiomycetes mycelium and use thereof
KR101127271B1 (en) Method of cultivating cordyceps sinensis and use of culture thereof
KR20150124258A (en) Kombucha fermentated composition
CN109939059B (en) Rice germ five-bacterium fermentation slow-release cosmetic and preparation method and application thereof
KR20070058782A (en) Natural sap and its production methods
KR20190045455A (en) Cosmetic composition comprising Phragmites Communis Ferment Extract
KR101778853B1 (en) Preparation method of osmotic enzyme fermentation product using mushroom, the fermentation product prepared thereby and cosmetic, food or pharmaceutical composition comprising the same
Aminuddin et al. Effects of pH on mycelial growth and amino acid composition of Lentinula edodes in submerged cultures.
KR100706696B1 (en) Method for conversing saponins in ginsaeng
KR20180114578A (en) Rose wine extract and manufacturing method thereof
KR20170114574A (en) The soap composition containing Ceriporia lacerata for improving atopic dematitis
KR101715194B1 (en) The method for expression and concentration of kojic acid form nuruk
KR20170005534A (en) The Cosmetic composition containing the culture medium of mycelium from Elfvingia applanata using natural medium
KR102364556B1 (en) Strain of Polyporus parvovarius having anti-antioxidant activity, and uses thereof
KR20200108748A (en) The cultivation method of sang hwang mushroom mycelium with high content of beta-glucan
KR20160087507A (en) cosmetic composition containing Phaseolus Radiatus Seed, Phaseolus Vulgaris (Kidney Bean) Seed and Black Soybean extracts by fermentation and enzyme treatment
KR102310691B1 (en) Fermented extract of wild plants, manufacturing method thereof, and use thereof
KR20180125354A (en) The ointment treating composition containing Natural complex mushroom for improving atopic dematitis
KR101408088B1 (en) Method for increasing funtional component of opuntia humifusa by complex fermentation of yeast
KR20140084502A (en) For improving liver function with aloe and Curcuma longa and A method of manufacturing the same and Using the formulations for improving liver function

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20151008

Year of fee payment: 4

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20161027

Year of fee payment: 5

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20181129

Year of fee payment: 7

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20191202

Year of fee payment: 8