KR20110086137A - 저자극성 피부과학적 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 시리얼에 알레르기가 있는 환자들에게 사용될 수 있는 시리얼 또는 유사시리얼의 곡물을 제외한 지상부위 추출물을 포함한 저자극성 피부과학적 조성물에 관한 것이다.

Description

저자극성 피부과학적 조성물{HYPOALLERGENIC DERMATOLOGICAL COMPOSITION}
본 발명은 시리얼(cereal) 알레르기에 관한 것이다.
본 발명에 있어서, 시리얼은 벼과 시리얼 및 유사시리얼을 포함한다.
<시리얼>은 풍부한 녹말 성분을 가지는 음식으로 사용되는 벼과의 성숙 <곡물>을 의미한다 (Paris R.R., Moyse H. Precis de matiere medicale. II Pharmacognosie speciale. Spermaphytes (continued): Angiospermes. Monocotyledones - Dicotyledones. Apetales et Diapetales. 2nd Edition. Paris: Masson, 1981, p 16). 또한 <시리얼>은 특히 이러한 식물들 씨앗에 관한 것이다.
식물학에서, 시리얼은 벼과 (또는 화분과)에 속한다.
벼과식물은 일반적으로 초본의 외떡잎 식물이며 마디 사이 중공 줄기 (탄소질 줄기)를 가지고 2 열생 잎을 가지며 갈라진 잎혀-포함 잎집을 가진다. 꽃들은 잔이삭에 배열되고, 무리 지어져 스파이크 또는 <원추꽃차례>라고 불리는 묶음을 형성한다. 꽃은 수술 및 씨방으로 나뉘며: 두 개의 잎 포엽 또는 화영이 잔이삭을 보호하고, 두 개의 외화영 중 하나는 전방으로 기울어져 싸여있고, 송곳모양으로 꽃과 함께 배열된다. 돌출된 3 개의 수술들은 흔들리면서 등 쪽으로 붙어있다. 씨방은 두 개의 솜털 같은 형태로 한 개의 심피를 가지며, 밑씨에 감싸여 곡과 라고 불리는 소정의 열매가 된다. 풍부한 알부민은 녹말질이다.
이러한 벼과에는 약 700속 및 12000종이 존재한다.
대부분 초본은 식용으로 사용된다 (밀, 보리, 호밀, 귀리, 수수, 기장, 옥수수, 벼 등)
전통적으로 소비되는 시리얼 종들은 아래 표 1에 기재된다.
라틴명 통속명
Avena abyssinica Hochst. 　
Avena brevis Roth 　
Avena nuda L. 누드 귀리
Avena sativa L. 　
Bromus mango E. Desv. 　
Coix lacryma-jobi var. ma-yuen (Rom. Caill.) Stapf 　
Dendrocalamus strictus (Roxb.) Nees 　
Digitaria exilis (Kippist) Stapf 　
Digitaria iburua Stapf 　
Echinochloa esculenta (A. Braun) H. Scholz 일본 기장
Eleusine coracana subsp. coracana 붉은 기장
Eragrostis tef (Zuccagni) Trotter 참새그령
Hordeum vulgare subsp. vulgare 보통 보리
Oryza glaberrima Steud. 아프리카 벼
Oryza sativa L. 벼
Panicum hirticaule J. Presl 　
Panicum miliaceum subsp. miliaceum 보통 기장
Panicum sumatrense Roth 　
Paspalum scrobiculatum L. 　
Pennisetum glaucum (L.) R. Br. 진주 기장
Phalaris canariensis L. 갈풀
Secale cereale subsp. cereale 호밀
Secale strictum subsp. africanum (Stapf) K. Hammer 　
Setaria italica subsp. italica 이태리 기장, 여우꼬리 기장,
중국 기장, 헝가리 기장
Setaria palmifolia (J. Koenig) Stapf 　
Setaria pumila subsp. pumila 개꼬리풀
Sorghum bicolor subsp. bicolor 그레이트 기장
수수
xTriticosecale spp. 트리트케일
Triticum aestivum subsp. aestivum 보통 밀, 밀
Triticum aestivum subsp. spelta (L.) Thell. 스펠트 밀
Triticum aestivum subsp. sphaerococcum (Percival) Mackey 　
Triticum monococcum subsp. monococcum 스몰 스펠트, 일립 밀
Triticum timopheevii subsp. timopheevii 　
Triticum turgidum subsp. carthlicum (Nevski) A. Love & D. Love 페르시아 밀
Triticum turgidum subsp. durum (Desf.) Husn. 듀럼 밀
Triticum turgidum subsp. polonicum (L.) Thell. 폴란드 밀
Triticum zhukovskyi A. M. Menabde & Eritzjan 　
Urochloa deflexa (Schumach.) H. Scholz 　
Urochloa ramosa (L.) T. Q. Nguyen 　
Zizania palustris L. 　
Zea mays subsp. mays L. 옥수수
표 1은 벼과에 속하는 주요 소비 시리얼 종들이다.
식물 다른 과 일부 곡물도 상기 시리얼과 유사하며 유사시리얼로 칭한다. 이러한 종들 예시로는 벼과에 속하지는 않지만 시리얼 관련되어 소비되며 음식 알레르기와 관련되는 것들을 표 2에 나열한다.
라틴명 통속명 과
Amaranthus caudatus L. 아칼리파 히스피다
그레인 아마란스
색비름
강아지풀(foxtail) 		비름과
Amaranthus cruentus L. 붉은 아마란스 비름과
Amaranthus hypochondriacus L. 　 비름과
Chenopodium album L. 흰명아주 명아주과
Chenopodium berlandieri subsp. nuttalliae (Saff.) H. D. Wilson & Heiser 　 명아주과
Chenopodium pallidicaule Aellen 　 명아주과
Chenopodium quinoa subsp. quinoa 퀴노아, 페루 벼 명아주과
Fagopyrum esculentum Moench 보통 메밀,
비치 밀 		마디풀과
Fagopyrum tataricum (L.) Gaertn. 타타르 메밀 마디풀과
Helianthus annuus L. 해바라기 국화과
Sesamum indicum L. 참깨 참깨과
표 2는 벼과에 속하지 않는 주요 소비 시리얼 종들이다.
시리얼 및 유사시리얼 곡물(grain)은 다량의 단백질을 가진다: 구조 단백질, 생물학적 기능 단백질 및 희귀 단백질. Osborne (1907)은 이들은 용해도에 따라 분류하였다.
- 수용성 알부민
- 염류 용액 용해성 글로불린
- 에탄올 수용액 용해성 프롤라민
- 상기 용매 불용성, 요소 또는 구아니딘 용액 부분 용해성 글루텔린.
예들:
밀 귀리 보리 옥수수
알부민 루코신
글로불린 아데스틴 아베날린
프롤라민 글리아딘 글리아딘 호르데인 제인
글루텔린 글루테닌 아베닌 호르데닌 제아닌
한편, 지상부위들, 특히 잎들의 단백질 함량은 다음과 같다:
- 엽록체 막 단백질 (지질 및 색소 관련 단백질)
- 엽록체 용해성 단백질 (스트로마): RuBPCase
퀴노아, 해바라기, 귀리, 보리, 및 지자니아 팔루스트리스 (북미산 야생 벼)의 잎, 밀의 어린 싹, 참깨, 벼, 밀 및 옥수수 싹은 이미 화장품에 사용된다. 어린 녹색의 보리 싹은 예를들면 항-노화제제로 사용된다.
또한 선행기술은 다음을 기재한다:
- 항-염증 약물 특히 아토피 피부염 치료를 위한 아마란스 잎 추출물 (JP 특허 2000143524).
- 피부 염증 반응 국소용 치료를 위한 분홍 바늘 꽃 추출물과 조합된 귀리 짚 추출물을 함유한 조성물(EP1474159).
- 　뼈 배아 오일에 의한 산화 보호 화장 조성물 (EP1704898)
- 밀 싹 추출물을 포함한 화장 조성물 (WO9526183)
- 해바라기 줄기를 포함한 피부 재생 효과를 가지는 화장생성물 (FR2487674)
시리얼 가루, 특히 밀가루는 흡입을 통한 제빵업자 천식 및 알레르기성 비염의 원인으로 알려져 있다. 알부민 및 글로불린으로 가장 강한 IgE 반응이 관찰되었고 이러한 단백질은 중성 용액에서 용해성이다. 그러나, 일부 연구에 의하면 에탄올 또는 산 매체에 용해되는 단백질 (글루테닌 및 글리아딘)에 대한 반응성을 보였다. 더욱 최근에는 면역블롯 연구에 의하면 제빵업자 알레르기 환자 혈청에서 밀 및 보리 가루의 중성 분획물에 있는 대부분의 알레르기 항원은 저 분자 범위 (약 20kDa)에 있다는 것을 보였다.
섭취될 때, 시리얼은 복강질환 및 포진 원인일 수 있다. 여러 연구에 의하면, 대부분 관련 항원은 에탄올-용해성 단백질인 글라딘 분획물이라는 것을 보였다.
사람 음식에서 시리얼이 상당한 비중을 차지함에도, 이들은 특히 아동기에 아토피 피부염 증상을 악화시키는 것으로 의심된다. 유사하게, 면역학적 연구 (특히 SPT 검사 - 피부단자검사 - RAST - 방사면역법)에 의하면 밀, 귀리, 호밀, 보리, 벼, 기장 및 옥수수에 포함된 단백질을 확인하였고 밀 및 보리 또는 호밀 간 교차반응을 보였다 (Varjonen E, Vainio E, Kalimo K, Juntunen-Backman K, Savolainen J Skin-prick test and RAST responses to cereals in children with atopic dermatitis. Characterization of IgE-binding components in wheat and oats by an immunoblotting method. Clin Exp Allergy 1995, 25:1100-1107) (Palosuo K, Alenius H, Varjonen E, Kalkkinen N, Reunala T. Rye g-70 and g-35 secalins and barley g-3 hordein cross-react with w-5 gliadin, a major allergen in wheat-dependent, exercise-induced anaphylaxis. Clin Exp Allergy, 2001, 31:466-473). 섭취 시리얼들이 아토피 피부염 원인이 될 때 최소한의 용해성 단백질 (글리아딘 및 글루테닌)이 관여되는 것으로 보인다. 많은 예비적 연구들은 식이성 과민반응은 아토피 피부염을 가진 아동들에서 중요한 역할을 하며 음식에서 알레르기 항원을 제거하면 임상적 개선을 보였다.
민감한 사람들에게서 시리얼 곡물 추출물에 기반한 화장품에서 접촉 알레르기의 일부가 보고되었다 (가수분해되거나 또는 되지 않은 특히 밀 단백질, 참깨). 알레르기 문제를 완화하기 위하여 용액일 수 있는 밀 단백질 가수분해는 오히려 더욱 민감해진다는 것을 보였고 가수분해에 의해 유도된 구조적 변화는 새로운 항원 부위를 보였다 (Pecquet C, Lauriere M. New allergens in hydrolysates of wheat proteins. Rev Fr Allerg Immunol Clin 2003, 43: 21-23).
시리얼 곡물 단백질은 특히 아동 알레르기 환자들로서는 경구 및 국소 경로 모두 회피하여야 한다고 생각된다.
시리얼 곡물에 민감한 또는 알레르기가 있는 환자들을 위한 화장품에 대한 수요 및 필요성이 있다.
예기치 못하게 놀랍게도, 본 발명자들은 바람직하게는 이삭 피기 전 수확된 시리얼 또는 유사시리얼의 지상부위 추출물을 가지는 화장조성물은 시리얼 곡물 알레르기와 관련된 단백질과 교차반응을 일으키지 않는다는 것을 알았다.
본 발명의 목적은 시리얼 곡물 단백질에 알레르기를 가지는 환자들에게 사용되기 위한, 곡물을 제외한 시리얼 및/또는 유사시리얼의 지상부위(들) 추출물을 제공하는 것이다.
시리얼 및/또는 유사시리얼의 지상부위라는 용어는 본원에서 곡물을 제외한 지상에 위치하는 임의 부위를 의미한다.
바람직하게는, <시리얼 및/또는 유사시리얼의 지상부위들>은 잎 및/또는 줄기 및/또는 잔이삭 및/또는 꽃을 포함하며 곡물은 제외한다.
바람직하게는, 본 발명에 의한 추출물은 이삭 피기 전 수확된 시리얼 및/또는 유사시리얼의 지상부위(들) 추출물이다.
본 발명에 있어서, <이삭 피기 전 수확된 시리얼 및/또는 유사시리얼의 지상 부위들>이란 발아 이후 (발아 이후 약2주 내지 2달) 줄기신장단계에서 이삭 피기 바로 직전 수확된 시리얼 및/또는 유사시리얼의 지상부위들을 의미한다
본 발명에 있어서, <줄기신장>이란 줄기가 신장하고 이삭 피기 전에 해당되는 개화 전 생장기간을 의미한다.
바람직하게는, 본 발명에 의한 추출물은 밀, 벼, 보리 또는 귀리, 특히 바람직하게는 귀리의 지상부위(들)로부터 획득된다.
소정의 곡물 단백질 알레르기 환자들에게 바람직하게 사용되는 본 발명에 의한 귀리의 지상부위(들) 추출물은 2 내지 15% 주요 플라보노이드들 및 0.2 내지 2% A 및 B 아베나코시드, 바람직하게는 5 내지 10% 이소비텍신-2"-O-아라비노피라노시드 및 이소오리엔틴-2"-O-아라비노피라노시드 플라보노이드 및/또는 1ppm 미만, 바람직하게는 0.5ppm 미만, 더욱 바람직하게는 0.3ppm 미만의 단백질을 포함한다.
사용되는 귀리 지상부위 추출물은 플라보노이드 및 사포닌 함량으로 특징되며, 이들은 고압액체크로마토그래피에 의해, 각 화합물에 적합한 다른 두 방법들로 분석된다.
이들 다양한 분자들 함량은 추출 조건에 따라 달라진다. 주요 플라보노이드는 이소비텍신-2"-O-아라비노피라노시드 및 이소오리엔틴-2"-O-아라비노피라노시드이다. A 및 B아베나코시드 는 주요 사포닌들이다. 이들은 비스데스모시드성 스테로이드 사포닌이다.
바람직하게는, 본 발명에 의한 추출물은 이삭 피기 전 수확된 밀, 벼 또는 귀리, 및 바람직하게는 귀리의 지상부위(들) 추출물이다.
바람직하게는, 본 발명에 의한 추출물은 유기용매에서 획득된 추출물이다.
본 발명에 의한 추출물은 발아 이후 (이삭 피기 전까지의 신장 단계에 있는 발아 이후 약 2주 내지 2달) 시리얼 및/또는 유사시리얼을 건조 및 분쇄한 후 유기용매 추출에 의해 제조된다. 특히, 사용되는 유기용매는 케톤, 에스테르, C1-C4 알코올, 및 이들 혼합물로 이루어진 군에서 선택된다. 바람직하게는 유기용매는 아세톤, 메틸에틸케톤, 메틸이소부틸케톤, 에틸 아세테이트, C1-C4 알코올 및 이들 혼합물에서 선택된다.
추출은 교반되거나 정치 상태에서 수행된다.
추출은 환류 또는 실온에서 수행된다.
바람직하게는, 추출은 식물/용매 비율이 1:7 내지 1:20, 바람직하게는 1:8 내지 1:12 비율에서 수행된다.
바람직하게는, 추출은 30분 내지 48 시간, 더욱 바람직하게는 60 내지 120분 수행된다.
추출은 2 또는 3회 진행될 수 있다.
추출단계에서 얻어진 찌꺼기는 원심분리 또는 여과하여 추출물로부터 분리되며 용액은 건조 추출물이 획득될 때까지 농축된다.
탈색처리는 농축, 침전 및 여과에 의한 탈지처리로 또는 농축되거나 되지 않은 추출 용액에 활성탄 또는 흡착 수지와 같은 흡착 기질을 첨가하여 수행될 수 있다.
기질은 건조 추출물에 대하여 1-75% 중량비율로 건조단계에서 첨가될 수 있다. 기질은 당 예를들면 말토덱스트린, 락토오스, 실리카 또는 임의 기타 화장품에서 허용되는 기질일 수 있다.
바람직하게는 아세톤 또는 물 20%까지 사용되는 아세톤/물 추출에 의해 추출물이 얻어진다. 아세톤 또는 물 20%까지 사용되는 아세톤/물 추출물은 플라보노이드 및 사포닌을 포함하며 단백질은 거의 존재하지 않는다. 유럽약전에 기술되어 있는 단백질 측정 검정방법으로는 결과를 얻을 수 없고, 아세톤 침전 후 SDS-Page 젤 상에서의 전기영동 이동 및 쿠마시 블루 또는 질산은 염색에 의하면 단백질 존재를 표시하는 어떠한 밴드도 없다. 동일 전기영동에서 대조군을 이용하여 단백질 검출을 1 ng까지 정량할 수 있고, 본 추출물은 1 ppm 미만의 단백질 (젤에 넣은 추출물 함량에 대하여)을 가진다. 바람직하게는, 상기 단백질 함량은 0.5 ppm 미만 및 더욱 바람직하게는 0.3 ppm 미만이다.
본 발명의 다른 목적은 시리얼 곡물 단백질 알레르기 환자에 대한 시리얼 및/또는 유사시리얼의 곡물을 제외한 지상부위(들) 추출물 용도에 관한 것이다.
본 발명의 다른 목적은 시리얼 곡물 단백질 알레르기 환자에 대한 알레르기 반응을 최소화 및/또는 억제하는 저자극성 피부과학적 조성물 제조를 위한 시리얼 및/또는 유사시리얼의 곡물을 제외한 지상부위(들) 추출물 용도에 관한 것이다.
본 발명의 다른 목적은 시리얼 곡물 단백질 알레르기 환자에 대한 시리얼 및/또는 유사시리얼의 곡물을 제외한 지상부위(들) 추출물을 포함한 저자극성 화장조성물 용도에 관한 것이다.
본 발명에 의한 피부과학적 또는 화장조성물은 특히 첨가제 및 제형조제 예를들면 유화제, 증점제, 고형화제, 수분고착제, 전착제, 안정제, 착색제, 향수 및 보존제를 포함할 수 있다.
본 발명에 의한 피부과학적 또는 화장조성물은 유용한 피부학적 양립 부형제를 더욱 포함할 수 있다.
본 조성물은 유-중-수 (W/O) 유화액 또는 수-중-유 (O/W) 유화액, 다중 유화액 예를들면 수-중-유-증-수 (W/O/W) 또는 유-중-수-중-유 (O/W/O) 유화액, 미소-유화액 또는 수-분산액 또는 지-분산액, 젤 또는 연무 형태로 제조될 수 있다.
피부과학적으로 적용될 수 있는 부형제는 국소 적용용 예를들면 크림, 로션, 젤, 연고, 유화액, 미소유화액, 분무, 샴푸 등 형태 조성물을 얻기 위하여 본 분야 기술자에게 공지된 것들 중 임의 부형제일 수 있다.
바람직하게는, 본 발명에 의한 피부과학적 또는 화장조성물은, 조성물 총 중량에 대하여, 곡물을 제외한 시리얼 또는 유사시리얼의 지상부위(들) 추출물 0.1 내지 10중량%를 포함한다. 바람직하게는 본 발명에 의한 시리얼 지상부위(들) 추출물은 조성물 총 중량에 대하여 0.1 내지 5중량%를 포함한다.
도 1은 전기영동 SDS-Page (12.5% 폴리아크릴아미드 젤) 및 쿠마시 블루 염색으로 귀리 곡물 및 어린 싹에서 얻어진 총 단백질 프로파일을 비교한 것이다.
도 2는 항-지상부위 단백질 다중클론항체들을 이용한 효소 염색인 웨스턴 블롯.
도 3은 항-곡물 단백질 다중클론항체들을 이용한 효소 염색의 웨스턴 블롯.
하기 예들은 제한적이지 않지만 본 발명을 예시하는 것이다.
실시예 1: 아세톤에 의해 추출된 이삭 피기 전 수확된 귀리의 지상부위들 추출물 제조
이삭 피기 전에 수확된 건조된 귀리 지상부위들 400kg을 분쇄하고 1시간 동안 실온에서 교반하면서 10부피의 아세톤/물 혼합물이 있는 반응기에 투입하였다.
고/액 분리에 의해 제1 추출액을 얻었다. 찌꺼기는 1시간 동안 실온에서 교반하면서 10 부피의 아세톤/물 혼합물로 다시 추출되었다. 제2 추출액을 고/액 분리에 의해 얻었고 제1 추출액과 합쳤다. 생성 용액은 1.33 부피/kg으로 물에서 농축하고 여과되었다. 획득된 추출물은 말토덱스트린 지지체 (qsq 25%/생 추출물) 첨가 후 마이크로파로 건조되었다.
따라서, 6% 플라보노이드들 (이소비텍신-2"-O-아라비노피라노시드 및 이소오리엔틴-2"-O-아라비노피라노시드) 및 0.6% 아베나코시드 B를 포함하는 36kg의 옅은 갈색 분말이 얻어졌고 얻어진 추출물의 단백질 함량은 0.3ppm 미만이었다.
실시예 2: 이삭 피기 전 수확된 동일 시리얼의 시리얼 곡물 추출물 및 지상부위들 추출물의 생화학적 및 면역학적 비교
생화학적 (추출 및 단백질 결정) 및 면역효소 (항체생성에 의한 단백질 존재 특이 검출) 기술을 통하여 시리얼 곡물 추출물 및 지상부위들 추출물 간 교차(cross-over)가 존재하지 않는다는 것을 보였다.
곡물 단백질 추출물은 다음과 같이 제조되었다:
곡물을 분쇄하고 pH 8에서 수산화나트륨으로 추출하였다. 여과 후, 여과액을 pH 5.4까지 염산을 첨가하여 침전시켰다. 원심분리 후, 침전물을 물로 취하여 컷-오프 한계 6-8 kDa인 투석주머니로 4℃에서 밤샘 물에 대하여 투석되었다.
지상부위들 추출물은 다음과 같이 제조되었다.
신선 재료에서:
Tris.HCl 버퍼 pH 8.0에서 가용에 의한 추출, 여과, 이어 염을 제거하기 위한 일련의 2차에 걸친 아세톤 침전
또는:
우레아 및 티오우레아를 함유한 환원성 램나이 (Laemmli) 버퍼 pH 7.5에서 가용에 의한 추출, 여과, 이어 염을 제거하기 위한 일련의 2차에 걸친 아세톤 침전.
건조재료에서:
우레아 및 티오우레아를 함유한 환원성 램나이 버퍼 pH 7.5에서 가용에 의한 27시간 추출, 여과, 이어 염을 제거하기 위한 일련의 2차에 걸친 아세톤 침전.
생화학 및 면역학적 연구
생화학적 기술
I. 전기영동
원리: 특정 단백질 검사방법은 SDS-Page 전기영동 방법이다: SDS에서 음전하 단백질은 폴리아크릴아미드 젤에서 단지 중량에만 의존하여 캐소드로 이동되며 단백질은 쿠마시 블루 또는 질산은 염색으로 검출된다.
사용되는 양성 대조군들은 상기와 같이 제조된 이삭 피기 전 귀리의 총 지상부위들 단백질 추출물 또는 총 곡물 단백질 추출물에 해당된다.
II . 예시 결과 - 도 1
쿠마시 블루로 염색되는 SDS-Page 전기영동 (12.5% 폴리아크릴아미드 젤)에 의한 귀리의 총 곡물 단백질 및 이삭 피기 전 총 지상부위들 단백질 프로파일 비교
도 1에 도시된 전기영동 프로파일은 실험된 두 추출물들 단백질 조성이 특히 주요 단백질들에 있어서 상당히 다르다는 것을 보인다. 그러나 이들 두 단백질 그룹들의 정량적 차이를 확인할 수 있는 유일한 방법은, 특이 항원-항체 인식에 의한 면역학적 기술을 적용하는 것이다.
면역화학적 기술
이들 기술은 먼저 지상부위들 또는 곡물들에 있는 총 단백질에 대한 항체를 제공할 필요가 있다. 이러한 목적으로, 지상부위들 및 곡물의 총 단백질 추출물이 토끼에게 투여하였다. 다중클론항체가 토끼 혈청에서 얻어졌다.
목적은 ELISA 및 웨스턴 블롯 기술을 적용하여 귀리의 이삭 피기 전 지상부위 단백질들 곡물 단백질들과 다르며 곡물 단백질 및 지상부위 단백질 사이 교차반응이 없다는 것을 보이는 것이다.
- 귀리의 이삭 피기 전 지상부위 단백질들에 대한 항체들 대 (versus) 곡물 단백질들
- 귀리의 곡물 단백질들에 대한 항체들 대 귀리 이삭 피기 전 지상부위 단백질들
I. 직접 ELISA
ELISA (효소결합면역흡착검사)는 용해 중 항원 존재 검출을 위한 면역화학적 기술이다. 원리는 검사 용액에 있는 단백질을 웰에 부착시키고 항-단백질 다중클론항체와 접촉시킨다. 세척 후, 효소에 결합되는 2차 항-토끼 IgG 항체는 간단한 비색 반응으로 웰에 있는 항원 존재를 보인다.
II . 웨스턴 블롯
원리: 웨스턴 블롯은 단백질 혼합물의 SDS-Page 전기영동 이어 특이적 항원-항체 반응으로 이루어진다. 다중클론항체에 의해 인식되는 단백질만이 보여진다: 일차 항체는 알칼린 포스파타아제와 같은 효소와 결합하는 제2 항체 (본원에서는 항-토끼 IgG 항체)에 의해 인식된다.
예시적 결과 - 도 2 및 3
곡물 단백질 및 귀리 이삭 피기 전 지상부위들 단백질에 대한 항체 간 교차 (도 2) 및 귀리 이삭 피기 전 지상부위들 단백질 및 곡물 단백질 에 대한 항체 간 교차 (도 3).
웨스턴 블롯 기술은 ELISA에 의해 얻어진 결과들 즉 귀리 이삭 피기 전 지상부위들 단백질들은 곡물 단백질들과 다르며 이들 간 교차는 없다는 것을 확인하여 주었다.
따라서 식이요법을 통하여 귀리 곡물 단백질들에 대하여 면역을 가지는 환자는 단백질들이 포함되어 있더라도 지상부위 (곡물 제외) 추출물에 반응하지 않을 것이다.

Claims (10)

  1. 시리얼 곡물 단백질에 알레르기가 있는 환자들에게 사용하기 위한, 시리얼 또는 유사시리얼의 곡물을 제외한 지상부위(들) 추출물.
  2. 제1항에 있어서, 지상부위(들)은 이삭 피기 전 수확되는, 시리얼 또는 유사시리얼의 곡물을 제외한 지상부위(들) 추출물.
  3. 선행 항들 중 어느 하나의 항에 있어서, 시리얼은 밀, 벼, 보리 또는 귀리인, 시리얼 또는 유사시리얼의 곡물을 제외한 지상부위(들) 추출물.
  4. 제3항에 있어서, 시리얼은 귀리인, 시리얼 또는 유사시리얼의 곡물을 제외한 지상부위(들) 추출물.
  5. 제4항에 있어서, 2 내지 15%의 플라보노이드 및 0.2 내지 2%의 A 및 B의 아베나코시드로 구성되는, 시리얼 또는 유사시리얼의 곡물을 제외한 지상부위(들) 추출물.
  6. 제4항 또는 제5항에 있어서, 5 내지 10% 수준의 이소비텍신-2"-O-아라비노피라노시드 및 이소오리엔틴-2"-O-아라비노피라노시드인 것을 특징으로 하는, 시리얼 또는 유사시리얼의 곡물을 제외한 지상부위(들) 추출물.
  7. 제4항 내지 제6항 중 어느 하나의 항에 있어서, 1ppm 미만의 단백질을 포함하는, 시리얼 또는 유사시리얼의 곡물을 제외한 지상부위(들) 추출물.
  8. 제1항 내지 제3항 중 어느 하나의 항에 있어서, 유사시리얼은 메밀, 퀴노아 또는 참깨인, 시리얼 또는 유사시리얼의 곡물을 제외한 지상부위(들) 추출물.
  9. 시리얼 곡물 단백질에 알레르기가 있는 환자들을 위한, 시리얼 또는 유사시리얼의 곡물을 제외한 지상부위(들) 추출물을 포함한 저자극성 화장조성물의 용도.
  10. 시리얼 곡물 단백질 알레르기 환자에 대한 알레르기 반응을 최소화 및/또는 억제하는 저자극성 피부과학적 조성물 제조를 위한 시리얼 및/또는 유사시리얼의 곡물을 제외한 지상부위(들) 추출물의 용도.
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